JP4039466B2 - 新規アンスラサイクリン系化合物誘導体及びそれを含む医薬製剤 - Google Patents

Description

技術分野
本発明は、新規アンスラサイクリン系化合物誘導体およびそれを含有する高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤に関する。
背景技術
アンスラサイクリン系抗癌剤としては、放線菌の培養液より得られるダウノマイシン（英国特許第１００３３８３号、米国特許第３６１６２４２号）やアドリアマイシン（米国特許第３５９００２８号、米国特許第３８０３１２４号）などが知られ、実験腫瘍に対して広い抗癌スペクトルを有するのみならず、癌化学療法剤として臨床的に広く使用されている。しかしながら、その反面、しばしば白血球減少、脱毛、心筋障害等の重篤な副作用を伴うことが知られている。
この問題点を解決するために、種々の誘導体が提案されている。例えば、ピラルビシン（一般名）はアドリアマイシンの糖部分の４’位にテトラヒドロピラニル基を導入し、毒性の低減を図っている。
またエピルビシン（一般名）はアドリアマイシンの糖部分の４’位の水酸基をα位に結合させた化合物であり、毒性の低減を図っている。
しかしながらこれらの薬剤も、アドリアマイシンにくらべれば毒性は低いが、総投与量が制限されているなど、根本的な問題の解決には至っていない。
一方、ブロックコポリマーから形成される高分子ミセルを用いて水に難溶性の薬剤の溶解性を高める技術は公知であり、特開平２−３００１３３、特開平６−１０７５６５、特開平５−９５５、特開平５−１２４９６９、特開平５−１１７３８５、特開平６−２０６８３０、特開平７−６９９００、特開平６−２０６８１５で得られる高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤はアドリアマイシン以上の抗腫瘍効果を有することが確認されている。
発明の開示
本発明者らは、これまでの高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤に比べ、より強い効果と低い毒性を兼ね備えた高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤について鋭意検討した結果、本発明を完成させた。
即ち本発明は、
（１） 抗癌活性を有するアンスラサイクリン系化合物をアルカリ処理により直接化学結合させることにより得ることができる、アンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体，
（２） アンスラサイクリン系化合物がアドリアマイシン、ダウノマイシン、ピラルビシン、エピルビシン及びそれらの酸塩から選ばれる１種以上である上記（１）記載のアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体，
（３） アドリアマイシンまたはその酸塩を、又は、アドリアマイシンまたはその酸塩とダウノマイシンまたはその酸塩をアルカリ処理により直接化学結合させることにより得ることができる、アンスラサイクリン系化合物の２量体，
（４） アンスラサイクリン系化合物同士の結合様式がシッフベース結合である上記（１）、（２）または（３）記載のアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体，
（５） 下記式（ＡＡ）の構造を有するアドリアマイシンの２量体，

（６） アドリアマイシンまたはその酸塩をアルカリ処理により直接化学結合させることにより得ることができ、図７に示すマススペクトルを有するアドリアマイシンの３量体，
（７） 親水性高分子構造部分と疎水性高分子構造部分とを有する高分子ブロック共重合体が親水性部分を外殻としたミセルを形成し、疎水性の内核にアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体を、必要により他の薬剤と共に、含有することを特徴とする高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤，
（８） アンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体が上記（１），（２），（３），（４），（５）又は（６）に記載のアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体である上記（７）記載の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤，
（９） 高分子ブロック共重合体が下記式（１）または（２）の構造を有する上記（７）又は（８）記載の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤，

［式中、Ｒ₁は水素原子または低級アルキル基を表し、Ｒ₂は結合基を表し、Ｒ₃はメチレン基またはエチレン基を表し、Ｒ₄はそれぞれ独立して水酸基または抗癌活性を有するアンスラサイクリン系化合物の残基を表し、Ｒ₅は水素原子または保護基を表し、ｎは５〜１，０００、ｍは２〜３００、ｘは０〜３００の整数を示すが、ｘはｍより大きくないものとする。］
（10） 抗癌活性を有するアンスラサイクリン系化合物の残基が、下記式（３）

［式中、Ｙは−ＣＨ₂ＯＨ又は−ＣＨ₃を、ＺはＨ又は

を示す。］
で示される基である上記（９）に記載の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤，
（11） 高分子ブロック共重合体が形成するミセルの内核に、高分子ブロック共重合体に対して２〜６０重量％のアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体を含有する上記（７），（８），（９）又は（10）記載の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤，
（12） アンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体がアドリアマイシンの２量体である上記（７），（８），（９），（10）又は（11）記載の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤，
（13） 高分子ブロック共重合体が形成するミセルの内核にアンスラサイクリン系抗癌剤とアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体を１：０．５〜２０の重量比で含有する上記（７），（８），（９），（10），（11）又は（12）記載の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤，
（14） アンスラサイクリン系抗癌剤とアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体を１：０．７〜１０の重量比で含有する上記（13）記載の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤，
（15） アンスラサイクリン系抗癌剤とアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体を１：１〜５の重量比で含有する上記（13）記載の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤，
（16） アンスラサイクリン系抗癌剤がアドリアマイシン、ダウノマイシン、ピラルビシン、エピルビシン及びそれらの酸塩から選ばれる１種以上である上記（13），（14）又は（15）記載の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤，
（17） 親水性高分子構造部分と疎水性高分子構造部分とを有する高分子ブロック共重合体が親水性部分を外殻としたミセルを形成し、疎水性の内核にアンスラサイクリン系抗癌剤を含有する高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤であって、これを７〜９週齢のＣＤＦ１マウスに静脈内投与した場合、投与した製剤中のアンスラサイクリン系抗癌剤の量を１００とした時の１時間後のマウス血漿１ｍｌ中のアンスラサイクリン系抗癌剤の量（％ ｏｆ Ｄｏｓｅ／ｍｌ）が１０以上となる医薬製剤，
（18） １時間後のマウス血漿１ｍｌ中のアンスラサイクリン系抗癌剤の量（％ ｏｆ Ｄｏｓｅ／ｍｌ）が２０〜６０となる上記（17）記載の医薬製剤，
（19） アンスラサイクリン系抗癌剤が、アドリアマイシン、ダウノマイシン、ピラルビシン、エピルビシン及びそれらの酸塩から選ばれる１種以上である上記（17）又は（18）記載の医薬製剤，
（20） 固形癌治療用の上記（７）〜（19）のいずれかに記載の医薬製剤，
に関する。
【図面の簡単な説明】
図１はアドリアマイシンの２量体の赤外吸収スペクトルを示す図である。
図２はアドリアマイシンの２量体の紫外吸収スペクトルを示す図である。
図３はアドリアマイシンの２量体のマススペクトルを示す図である。
図４はアドリアマイシンの２量体を酸処理した際にアドリアマイシンと同時に生成する式（４）の構造を有すると予想される化合物の赤外吸収スペクトルを示す図である。
図５はアドリアマイシンの２量体を酸処理した際にアドリアマイシンと同時に生成する式（４）の構造を有すると予想される化合物の紫外吸収スペクトルを示す図である。
図６はアドリアマイシンの２量体を酸処理した際にアドリアマイシンと同時に生成する式（４）の構造を有すると予想される化合物のマスクロマトグラム（ｍ／ｚ＝５６０）を示す図である。
図７はアドリアマイシンの３量体のマススペクトルを示す図である。
図８，９，１０，１１はそれぞれ実施例１（２）における分取成分のＮＭＲ分析の¹Ｈの１次元スペクトル、¹³Ｃの１次元スペクトル、ＣＯＳＹスペクトル、ＣＨ ＣＯＳＹスペクトルを示す図である。
図１２はダウノマイシンとアドリアマイシンの２量体のマススペクトルを示す図である。
図１３は実施例３で得られた医薬製剤のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
図１４は実施例４で得られた医薬製剤のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
図１５は実施例５で得られた医薬製剤のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
図１６は応用例１における、アドリアマイシン塩酸塩を投与した場合の、マウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ ２６の腫瘍増殖曲線を示す図である。
図１７は応用例１における、実施例３の医薬製剤を投与した場合の、マウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ ２６の腫瘍増殖曲線を示す図である。
図１８は、実施例６で得られた医薬製剤のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
図１９は、実施例７で得られた医薬製剤のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
図２０は、実施例８で得られた医薬製剤のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
図２１は、実施例９で得られた医薬製剤のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
図２２は、実施例１０で得られた医薬製剤のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
図２３は、実施例１１で得られた医薬製剤のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
図２４は、実施例１２で得られた医薬製剤のＨＰＬＣクロマトグラムを示す図である。
図２５，２６，２７はそれぞれ、応用例３における、アドリアマイシン塩酸塩、実施例８の医薬製剤、実施例１２の医薬製剤を投与した場合の、マウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ ２６の腫瘍増殖曲線を示す図である。
発明を実施するための最良の形態
以下に、本発明を詳細に説明する。
本発明によれば、従来のアンスラサイクリン系抗癌剤または高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤と比較して高い効果と低い毒性を有する医薬製剤を得ることができる。
本発明に用いられる抗癌活性を有するアンスラサイクリン系化合物としては、アドリアマイシン、ダウノマイシン、ピラルビシン、エピルビシンまたはそれらの酸塩等が挙げられる。
本発明のアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体を得る方法は特に限定されず、例えば、抗癌活性を有するアンスラサイクリン系化合物をアルカリ処理することにより得ることができる。アルカリ処理することにより、アンスラサイクリン系化合物同志が直接化学結合して（即ち架橋剤を用いこれを介して化学結合するのではなく、アンスラサイクリン系化合物の官能基間で反応して結合し）、その２，３又は４量体が得られる。
アンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体は、同種のもの同士が結合したものであってもよく、又、異種のものが結合したものであってもよい。
アルカリ処理としては、アンスラサイクリン系化合物を溶媒に溶解し、これに塩基を加える方法が挙げられる。用いる溶媒としては、該化合物を溶解できれば特に限定されず、例えば水、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、メタノール、アセトニトリルおよびそれらの混合溶媒が使用できる。
加える塩基としては、該溶液に溶解でき、塩基を加えた後のｐＨが７を越える１４までの値となるものであれば無機塩基、有機塩基およびそれらの塩のいずれも使用でき、特に限定されない。又、塩基の濃度も特に限定されない。好ましい塩基としては、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素カリウム、リン酸ナトリウム、リン酸１水素２ナトリウム、リン酸２水素１ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸１水素２カリウム、リン酸２水素１カリウム、炭素数２〜２０の２級アミン、３級アミンまたはそれらの酸塩付加物が挙げられる。アルカリ処理する際のｐＨは７を越える１４までの値であるが好ましくは８〜１０である。
アルカリ処理の温度は、溶液が凍結または沸騰しなければ、特に限定されないが、好ましくは、０〜５０℃、より好ましくは０〜４０℃である。処理の時間は１分〜１２０時間、好ましくは、１０分〜２４時間である。
得られたアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体は公知の精製方法により精製が可能である。例えば、凍結乾燥、沈析等により固形分を得、または透析、限外濾過により溶媒を置換し、凍結乾燥、沈析等により固形分が得られる。この固形分を更に精製するには、薄層クロマトグラフィーや液体クロマトグラフィー等の方法が利用できる。
アンスラサイクリン系化合物として、カルボニル構造を持つ置換基とアミノ基を有する化合物を用いた場合、又は、カルボニル構造を持つ置換基を有する化合物とアミノ基を有する化合物を併用した場合は、上記アルカリ処理により、アンスラサイクリン系化合物同士がシッフベース結合により化学結合した２，３又は４量体が得られる。従って、アンスラサイクリン系化合物としては、カルボニル構造を持つ置換基とアミノ基を有する化合物を使用するのが好ましく、又は、カルボニル構造を持つ置換基を有する化合物とアミノ基を有する化合物を併用するのが好ましい。ここで、カルボニル構造を持つ置換基としては、水酸基、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等ハロゲン原子などで置換されていてもよい炭素数２〜５のアシル基もしくは水酸基、ハロゲン原子などで置換されていてもよい炭素数３〜１０までのアシルアルキル基が挙げられる。
アンスラサイクリン系化合物同士がシッフベース結合で結合した２，３又は４量体は、酸処理すると少なくとも原料として用いたアンスラサイクリン系化合物を生成する。このアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体を酸処理する方法としては、これを溶媒に溶解し、酸を加える方法が挙げられる。ここで用いる溶媒は、該化合物を溶解できれば、特に限定されないが、水、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、メタノール、アセトニトリルおよびそれらの混合溶媒等が使用できる。加える酸としては、塩酸、硝酸、硫酸、燐酸等の無機酸、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸等の有機酸など何れも用いることが可能である。
酸処理のｐＨは２〜４が好ましく、処理温度は溶液が凍結または沸騰しなければ、特に限定されず好ましくは０〜５０℃、特に好ましくは２０〜４０℃である。処理の時間は１分〜１２０時間、好ましくは２４〜７２時間である。
上記のアルカリ処理により直接化学結合させることにより得ることができる本発明のアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体の一例としては、図１に示す赤外吸収スペクトルを有し、図２に示す紫外吸収スペクトルを有するアドリアマイシンの２量体が挙げられる。このアドリアマイシンの２量体は、更に図３に示すマススペクトルを有す。このアドリアマイシンの２量体は、前記式（ＡＡ）の構造を有する。
赤外吸収スペクトル：１６７６、１４１７、１２１７、１１５８ｃｍ^-1
紫外吸収スペクトル：λｍａｓ＝４８６ｎｍ
マススペクトル（ＥＳＩ）、ｍ／ｚ（％）：
１０６７（１００）、９６４（１０）、９３８（１５）、９２１（１３）、６５３（２０）、５２４（２０）、５０６（５０）、４８８（９８）。
なお上記スペクトルを測定するために使用した機器および測定条件は次の通りである。赤外吸収スペクトル測定には、パーキンエルマー社製システム２０００型を用い、ＫＢｒ錠剤法にて測定した。紫外吸収スペクトル測定には、日立社製Ｕ３２００型分光光度計を用い、メタノール溶液にて測定を行った。マススペクトルの測定には、ＶＧ社製ＱＵＡＴＴＲＯ２型質量分析計を用い、エレクトロスプレー方式にて測定を行った。
このアドリアマイシンの２量体は、酸処理するとアドリアマイシンを生成するが、その際、下記式（４）

で表される構造式を有すると推定される化合物も生成する。この式（４）の構造を有すると推定される化合物の赤外吸収スペクトルを図４に、紫外吸収スペクトルを図５に、ＬＣ／ＭＳによるｍ／ｚ＝５６０でのマスクロマトグラムを図６に示す。
なおこのスペクトルおよびクロマトグラムを測定するために使用した機器および測定条件は次の通りである。赤外吸収スペクトルの測定は図１のスペクトルの測定と同一の装置および条件にて測定を行った。紫外吸収スペクトルの測定には、日立社製Ｕ３２００型を用い、ベンジルアルコール溶液にて測定を行った。ＬＣ／ＭＳによるマスクロマトグラム測定の機器および測定条件は以下に示した通りである。
ＬＣ：
カラム：ウォーターズ製Ｃ４・３００オングストローム／５μｍ
溶離液：アセトニリトル／0.1％ トリフルオロ酢酸＋0.05％
ＭＳ７（ＭＳ７：ガスクロ工業製）

ＭＳ：ＶＧ社製ＱＵＡＴＴＲＯ２（エレクトロスプレー法）
また上記のアルカリ処理により直接化学結合させることにより得ることができる本発明のアンスラサイクリン系化合物の２、３又は４量体の他の例としては、図７に示すマススペクトルを有し、酸処理した場合アドリアマイシンを生成するアドリアマイシンの３量体が挙げられる。
本発明の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤に用いられる高分子ブロック共重合体の親水性高分子構造部分の構造としては、例えばポリエチレングリコール、ポリサッカライド、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、キトサン等の構造が挙げられるが、親水性高分子構造であれば特に限定されない。特に好ましい構造は、ポリエチレングリコール構造である。
疎水性高分子構造部分としては、例えばポリスチレン、ポリアミノ酸（ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、ポリリジン等）、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリマレイン酸、それらの誘導体またはそれらの塩等が挙げられるが、疎水性高分子構造であれば特に限定されない。好ましくはポリアミノ酸、その誘導体またはそれらの塩であり、特に好ましくは、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸、その誘導体またはそれらの塩であ。塩としてはナトリウム塩、カリウム塩等が挙げられるが、特に限定されるものではない。
ポリアミノ酸構造の誘導体としては、例えばその側鎖に芳香族アミン、脂肪族アミン、芳香族アルコール、脂肪族アルコール、芳香族チオール、脂肪族チオール、等の疎水性化合物を結合させた誘導体が挙げられるが、側鎖に結合する疎水性基は、側鎖に結合でき、ポリアミノ酸部分を疎水性にできれば特に限定されない。好ましくは、芳香環を有するアミンを側鎖に結合したポリアスパラギン酸誘導体またはポリグルタミン酸誘導体である。
高分子ブロック共重合体の好ましいものとしては、前記式（１）又は（２）の構造を有するものが挙げられる。
前記式（１）および（２）において、Ｒ₁は水素原子または低級アルキル基を表し、低級アルキル基としては例えば炭素数１〜３のアルキル基が挙げられ、好ましくはメチル基である。
Ｒ₂で表される結合基としてはポリエチレングリコール構造部分の末端に、ポリアミノ酸構造部分を形成させる際、ポリエチレングリコール構造部分を形成することになる化合物の末端を該形成に適した構造に変換させるために使用した方法及び化合物に対応した構造をとる。例えばメチレン基、エチレン基、プロピレン基、トリメチレン基、イソブチレン基等の炭素数１〜８のアルキレン基が挙げられるが、好ましくはトリメチレン基である。
Ｒ₃はメチレン基またはエチレン基を表し、好ましくはメチレン基である。
Ｒ₄はそれぞれ独立して水酸基または抗癌活性を有するアンスラサイクリン系化合物の残基を表す。抗癌活性を有するアンスラサイクリン系化合物の残基としては種々のものが使用でき、特に限定されないが、好ましくは式（３）で表される基である。式（３）で表される基の具体的な例としては、アドリアマイシン、ダウノマイシン、ピラルビシン、エピルビシンの残基が挙げられる。
Ｒ₄はそれぞれ独立して水酸基または抗癌活性を有するアンスラサイクリン系化合物を示すが、高分子ブロック共重合体中に存在するＲ₄の総数のうちの少なくとも一部特に５〜８０％が抗癌活性を有するアンスラサイクリン系化合物の残基であることが好ましく、その中でも２０〜６０％が該アンスラサイクリン系化合物の残基であることが好ましい。
Ｒ₄はそれぞれ独立して水酸基または抗癌活性を有するアンスラサイクリン系化合物の残基を示すが、該アンスラサイクリン系化合物の残基の代りにアントラセン骨格又はアントラキノン骨格を有する基例えば特開平６−２０６８３０号公報に記載されているアントラセン骨格又はアントラキノン骨格を有する置換基を用いてもよい。
Ｒ₅は水素原子または保護基を表すが、保護基としては、例えば脂肪族アシル基または芳香族アシル基が挙げられる。保護基の導入法としては、公知の方法、例えば酸無水物による方法や、酸ハロゲン化物による方法などが挙げられるが、特に限定されるものではない。Ｒ₅の好ましいものとしては、水素原子、またはアセチル基である。
又、ｎは５〜１，０００であるが、好ましくは１５〜４００であり、ｍは２〜３００であるが、好ましくは１０〜１００であり、ｘは０〜３００であるが、好ましくは０〜１００である。
高分子ブロック共重合体は、水溶性であるかぎりその分子量は特に限定されないが、好ましくは１０００〜１０００００、特に好ましくは５０００〜５００００である。高分子ブロック共重合体中の親水性高分子構造部分と疎水性高分子構造部分の割合は、本発明の医薬製剤の水溶性が保たれる限り特に限定されないが、好ましくは１：０．１〜１０（重量比）、特に好ましくは１：０．１〜５（重量比）である。
高分子ブロック共重合体のミセルの内核に含有させる、アンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体でない他の薬剤は、必ずしも必須成分ではないが、この薬剤としては、例えば、アドリアマイシン、ダウノマイシン、ピラルビシン、エピルビシン、メトトレキセート、マイトマイシンＣ、エトポシド、シスプラチン及びその誘導体等の抗癌剤が挙げられ、好ましくはアンスラサイクリン系抗癌剤であり、特に好ましくはアドリアマイシン、ダウノマイシン、ピラルビシン、エピルビシンまたはその酸塩である。
高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤中のアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体の含有量は高分子ブロック共重合体に対して、好ましくは１−１００重量％であり、特に好ましくは２〜６０重量％である。しかしながら、高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤のミセル形成性を損なわない限り、可能な限り多く含有させることに何等問題はない。
高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤中のアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体でない他の薬剤の含有量は高分子ブロック共重合体に対して、好ましくは０〜１００重量％であり、特に好ましくは２〜６０重量％である。しかしながら、高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤のミセル形成性を損なわない限り、可能な限り多く含有させることに何等問題はない。
高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤が「アンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体でない他の薬剤」を含む場合、該医薬製剤中に含まれる「アンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体でない他の薬剤」と「アンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体」の割合は通常重量比で１：０．０５〜１００であるが、好ましくは重量比で１：０．５〜２０であり、より好ましくは重量比で１：０．７〜１０であり、特に好ましくは重量比で１：１〜５である。
なお、高分子ブロック共重合体のミセルの内核に含有せしめるアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体は特に限定されないが、前記（１）〜（６）に記載したアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体が好ましい。これら２，３又は４量体は、これらの一種のみをミセルの内核に含有せしめてもよいが、二種以上をミセルの内核に含有せしめてもよい。
高分子ブロック共重合体の製法は公知であり、例えば次のようにして製造することができる。即ち、親水性高分子構造部分を構成することになる化合物（例えば、ポリエチレングリコール、ポリサッカライド、ポリアクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、キトサンあるいはこれらの誘導体）またはその末端を変性したものに、疎水性高分子構造部分を構成することになる高分子化合物を反応させることにより、または、親水性高分子構造部分を構成することになる化合物またはその末端を変性したものと重合性のモノマーを反応させ、必要に応じさらに誘導体化する等の化学反応を行うことにより得ることができる。
誘導体化の例としては、疎水性高分子構造部分が高分子カルボン酸構造を有する場合、その疎水性を高めるために、疎水性化合物を反応させることが挙げられる。疎水性化合物はエステル結合又はアミド結合等を形成することにより高分子ブロック共重合体に結合する。これらの反応は公知のエステル化又はアミド化等の常法に従って行うことができる。例えば、親水性高分子構造部分と高分子カルボン酸部分を有する高分子ブロック共重合体（原料共重合体）にアミド結合で疎水性化合物を結合させる際、反応はペプチド結合生成法として知られる常法に準じて行うことができる。例えば、酸ハロゲン化物法、酸無水物法、カップリング法等が使用できるが、縮合剤を使用するカップリング法が望ましい。縮合剤としては１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）、１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ．ＨＣｌ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、カルボニルイミダゾール（ＣＤＩ）、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキシキノリン（ＥＥＤＱ）、ジフェニルホスホリルアジド（ＤＰＰＡ）等が使用できる。縮合剤は、疎水性化合物に対して０．５〜２０倍モル用いるのが好ましく、特に１〜１０倍モル用いるのが好ましい。またこの際、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド（ＨＯＮＳｕ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボン酸イミド（ＨＯＮＢ）等を共存させてもよい。
原料共重合体に疎水性化合物を結合させる反応を行なう際に、疎水性化合物の使用量は特に限定されないが、通常原料共重合体のカルボキシル基１当量に対し、０．１〜２モル用いる。
縮合反応は溶媒中で行うのが好ましく、溶媒としては、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、水及びそれらの混合溶媒等種々のものが使用でき、特に限定されない。溶媒の使用量は、特に限定されないが、通常原料共重合体に対して１〜５００重量倍用いる。
縮合反応は、−１０〜５０℃で行うのが好ましく、特に、−５〜４０℃で行うのが好ましい。反応は２〜４８時間行えば十分である。
本発明の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤は、例えば、次のような方法で製造が可能である。第１法として、得られた高分子ブロック共重合体を溶媒に溶解する。この溶媒は、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、水及びそれらの混合溶媒等種々のものが使用できるが、好ましくＤＭＦまたはＤＭＦと水の混合溶媒である。この溶液にアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体を、高分子ブロック共重合体に対して１〜２００％（重量比）加え、撹拌する。この混合溶液を、透析、限外濾過等で水に溶媒置換することにより、目的の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤が得られる。他の薬剤も含有させる場合は、アンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体と共に他の薬剤を高分子ブロック共重合体に対して１〜２００重量％加えればよい。
第２法として、アンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体の合成を高分子ブロック共重合体への含有と同時に行い、高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤を製造することもできる。例えば、高分子ブロック共重合体を溶媒に溶解する。この溶媒としては例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジオキサン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、水及びそれらの混合溶媒等種々のものが使用できるが、好ましくはＤＭＦまたはＤＭＦと水の混合溶媒である。ここにアンスラサイクリン系化合物またはその塩（例えば前記のアンスラサイクリン系抗癌剤）を溶解し、塩基を加え、撹拌する。この混合溶液を、透析、限外濾過等で水に溶媒置換することにより、目的の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤が得られる。
第２法において、高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤中のアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体と他の薬剤の組成比は、次のような方法で制御できる。例えば、アンスラサイクリン系化合物またはその塩（アンスラサイクリン系抗癌剤）の仕込量を、用いる高分子ブロック共重合体に対して変化させることにより、又はｐＨを変化させることにより、得られる高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤中のアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体とアンスラサイクリン系化合物（アンスラサイクリン系抗癌剤）の組成比を制御できる。
又、本発明は、親水性高分子構造部分と疎水性高分子構造部分とを有する高分子ブロック共重合体が親水性部分を外殻としたミセルを形成し、疎水性の内核にアンスラサイクリン系抗癌剤を含有する高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤であって、これを７〜９週齢のＣＤＦ１マウスに静脈内投与した場合、投与した製剤中のアンスラサイクリン系抗癌剤の量を１００とした時の１時間後のマウス血漿１ｍｌ中のアンスラサイクリン系抗癌剤の量（％ ｏｆ Ｄｏｓｅ／ｍｌ）が１０以上、好ましくは２０〜６０となる医薬製剤に関する。
このような医薬製剤としては、前記の、ミセルの内核にアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体をアンスラサイクリン系抗癌剤と共に含有する高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤が挙げられる。
従来市販されている抗癌剤、例えばアドリアマイシンを人体に静脈投与した場合、その血中濃度は極めて短時間のうちに低下してしまう。ところが、本発明の医薬製剤を静脈投与した場合、その血中濃度は長時間高く保持されるため、アンスラサイクリン系抗癌剤を腫瘍組織に多量にとりこませることが可能となり、癌の治療を効果的に行なうことができる。
本発明の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤の薬理効果は高く、例えば抗癌剤とした場合の抗癌活性は、アドリアマイシンと投与量においてあまり差がないにもかかわらず画期的に高いものである。特に、従来の抗癌剤を用いた場合には困難であった固形癌の消失という極めて顕著な効果が得られる。従って、肺癌、消化器癌、乳がん、膀胱癌、骨肉腫、等の固形癌の患者に対しても特に有効である。又、本発明の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤は、毒性が低いという優れた効果も有する。
本発明の医薬製剤は、一般的に使用される種々の剤型例えば、担体、賦形剤、希釈剤、溶解補助剤等の製薬上許容し得る添加剤と混合した固形剤、軟膏、液剤などの形で使用し得るが、抗癌剤として使用する場合は通常注射剤として使用され、添加剤の割合は全体の９９．９９〜１％であることが好ましい。その投与量は、通常、アンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体とその他の薬剤の合計量に換算して、１週間あたり１〜３回投与で、１０〜２００ｍｇ／ｍ²週程度である。
実施例
次に実施例により本発明を具体的に説明する。
実施例１
（１） アドリアマイシン塩酸塩１０ｍｇをＤＭＦ３ｍｌ、水１ｍｌ、トリエチルアミン１０μｌからなる混合溶媒に溶解し、遮光下２８℃にて１２時間反応させた。反応液を分画分子量１０００の透析膜を用いて、水に対して透析し、溶媒を水に置換した。これをＨＰＬＣにて分取精製し、アドリアマイシンの２量体の水溶液を得た。これを凍結乾燥し、式（ＡＡ）の構造を有するアドリアマイシンの２量体の固形分を得た。
このアドリアマイシンの２量体は前に示した赤外吸収スペクトル、紫外吸収スペクトル、ＬＣ／ＭＳによるマススペクトルを有していた。得られたアドリアマイシンの２量体を１％酢酸にて酸処理し、得られる生成物のマスクロマトグラムを図６に示した。
なお分取精製に用いたＨＰＬＣ、スペクトル及びクロマトグラム測定は、前に示した機器および測定条件等と同一である。
（２）アドリアマイシン塩酸塩５００ｍｇをＤＭＦ４０ｍｌ、メタノール４０ｍｌからなる混合溶媒に溶解し、更にトリエチルアミン１．２ｍｌ加え、これを２５℃にて１２時間反応させた。この反応液を、内径２６ｍｍ、長さ６５ｃｍのガラス管にＬＨ−２０（ファルマシア製）を３５０ｍｌ充填したカラムにて精製した。このカラム精製における移動相にはメタノールを用い、５ｍｌ／ｍｉｎの流速で送液した。フラクションを５ｍｌずつとり、１１〜２５番目のフラクションを集め、蒸発乾固し、質量分析計により分析し、アドリアマイシンの２量体の生成を確認した。また高分解能マススペクトルによる分析の結果、分子式はＣ₅₄Ｈ₅₄Ｎ₂Ｏ₂₁であった。
得られたアドリアマイシンの２量体のうち１０ｍｇをメタノール２ｍｌに溶解し、ＮａＢＨ₃ＣＮを１ｍｇ加え、室温で１２時間反応させた後、１Ｎ塩酸を３ｍｌ加え、１２時間反応させた。この反応液をＬＣ／ＭＳにより分析し、ｍ／ｚ５２４のピークを分取し、ＮＭＲにより分析を行った。ＮＭＲ分析の結果、図８に示す¹Ｈの１次元スペクトル、図９に示す¹³Ｃの１次元スペクトル、図１０に示すＣＯＳＹスペクトル、図１１に示すＣＨ ＣＯＳＹスペクトルが得られた。
これらの結果より、式（ＡＡ）の構造を有するアドリアマイシンの２量体であることを確認した。
（３）アドリアマイシン塩酸塩５００ｍｇをＤＭＦ４０ｍｌ、メタノール４０ｍｌからなる混合溶媒に溶解し、更にトリエチルアミン１．２ｍｌ加え、これを２５℃にて１２時間反応させた。この反応液を、内径２６ｍｍ、長さ６５ｃｍのガラス管にＬＨ−２０（ファルマシア製）を３５０ｍｌ充填したカラムにて精製した。このカラム精製における移動相にはメタノールを用い、５ｍｌ／ｍｉｎの流速で送液した。フラクションを５ｍｌずつとり、５〜９番目のフラクションを集め、蒸発乾固し、質量分析計により分析し、図７に示したマススペクトルを得た。この結果によりアドリアマイシンの３量体の生成を確認した。
実施例２
アドリアマイシン塩酸塩５ｍｇとダウノマイシン塩酸塩５ｍｇとをＤＭＦ３ｍｌ、水１ｍｌ、トリエチルアミン１０μｌからなる混合溶媒に溶解し、遮光下２８℃にて１２時間反応させた。未精製のままの反応液についてＬＣ／ＭＳによるマススペクトル分析を行い、アドリアマイシンの２量体の生成とダウノマイシンとアドリアマイシンの２量体の生成を確認した。
生成物のうち、アドリアマイシンの２量体のマススペクトルは前に示したものと同じであった。ダウノマイシンとアドリアマイシンの２量体のマススペクトルを図１２に示した。この反応条件では、ダウノマイシンの２量体は生成しなかった。なお、これらのスペクトルを得るための機器及び条件は前に示した方法と同一である。
ダウノマイシンとアドリアマイシンの２量体のマススペクトル（ＥＳＩ）、ｍ／ｚ（％）、：１０５１（９０）、９４８（１５）、９２２（２０）、９０４（１０）、６５３（２０）、５２４（３０）、５０６（５０）、４８８（１００）。
実施例３
片末端メトキシ基片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＮＨ₂）（分子量１３，９００）２０．０ｇをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１００ｍｌに溶解した。その溶液にβ−ベンジル−Ｌ−アスパルテート−Ｎ−カルボン酸無水物（ＢＬＡ−ＮＣＡ）１５．０ｇを加えた。３５℃の温浴上撹拌しながら２４時間重合反応を行った。次いで、氷浴上撹拌しながら、重合液を０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液中に加え、２０分間撹拌した。次いで、２Ｎ塩酸を加えｐＨをほぼ４とし、蒸留水を加え全量を２０リットルに希釈した後ｐＨを４に調整した。次いで、ホローファイバー型限外濾過装置（アミコンＣＨ２、限外濾過後の分画分子量＝１０，０００）を用いて、濃縮、水洗を繰り返した。次いで、濃縮液をスルホン酸型イオン交換樹脂（アンバーライトＩＲ−１２０Ｂ）カラムを用いて精製した。溶出液を減圧濃縮、さらに凍結乾燥して、ポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体（ＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．））１９．５８ｇを得た。このＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）５．００８ｇをＤＭＦ８３ｍｌに溶解しさらにアセトニトリル８３ｍｌを加えた。これにジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）８．９７９ｇを加え５分間撹拌後、アドリアマイシン塩酸塩２．５２８ｇをＤＭＦ１６７ｍｌに溶解しトリエチルアミン７８６μｌを添加した溶液を加えた。次いで、室温で撹拌しながら４時間反応させた。反応後１％燐酸水溶液１６．７ｍｌを加え５分間撹拌した。透析膜（分画分子量＝１２，０００〜１４，０００）を用いて透析した後、濾過によりＤＣＣ由来の沈殿を除去した。濾液をホローファイバー型限外濾過装置（アミコンＣＨ２、限外濾過膜の分画分子量＝１０，０００）を用いて精製した。さらにＡＤＶＡＮＴＥＣ ＵＫ−５０（分画分子量＝５０，０００）の限外濾過膜で限外濾過することにより濃縮し、アドリアマイシン換算で１２ｍｇ／ｍｌ（紫外分光光度計で４８５ｎｍの吸収より算出）の水溶液１７７ｍｌを得た。得られたＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）ＡＤＲは前記式（２）の構造を有し、Ｒ₁はメチル基、Ｒ₂はトリメチレン基、Ｒ₃はメチレン基、Ｒ₄の一部は水酸基で残りは前記残基式（３）［ＹはＣＨ₂ＯＨ、ＺはＨ］、Ｒ₅は水素を表し、ｎ＝３１５、ｍ＝３０、ｘ＝８である。アドリアマイシン含有率は３２．３重量％あるが良好な水溶性を示した。このＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）ＡＤＲの１２ｍｇ／ｍｌ（アドリアマイシン換算）の水溶液２０ｍｌと、アドリアマイシン塩酸塩２５８．８ｍｇをＤＭＦ６０ｍｌに溶解しトリエチルアミン１００μｌを添加した溶液とを混合し遮光下室温で２時間撹拌した。透析膜（分画分子量＝１２，０００〜１４，０００）を用いて透析した後内液を凍結乾燥した。水に再溶解しＡＤＶＡＮＴＥＣ ＵＫ−５０（分画分子量＝５０，０００）の限外濾過膜で限外濾過することにより精製、濃縮した。さらに０．４５μｍのフィルターを用いて濾過してブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤の水溶液２５．３ｍｌを得た。得られた水溶液は図１３に示すＨＰＬＣのクロマトグラムを有していた。図中▲１▼のピークはアドリアマイシンであり、▲２▼のピークはアドリアマイシンの２量体であり、▲３▼のブロードなピークはポリマーに結合したアドリアマイシンである。アドリアマイシン（▲１▼ピーク）の濃度は３．０６ｍｇ／ｍｌであり、アドリアマイシンの２量体（▲２▼ピーク）の濃度は３．１８ｍｇ／ｍｌであった。アドリアマイシンとアドリアマイシンの２量体の重量比は１：１．０４であった。
ＨＰＬＣの測定条件は以下の通りである。
カラム：ウォーターズ製Ｃ４・３００オングストローム／５μｍ
溶離液：アセトニトリル／１％酢酸＋４０ｍＭドデシル硫酸ナトリウム

実施例４
実施例３で作成したＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）ＡＤＲの１２ｍｇ／ｍｌ（アドリアマイシン換算）の水溶液２０ｍｌと、アドリアマイシン塩酸塩１０２．４ｍｇをＤＭＦ６０ｍｌに溶解しトリエチルアミン３２μｌを添加した溶液とを混合し遮光下室温で２時間撹拌した。透析膜（分画分子量＝１２，０００〜１４，０００）を用いて透析した後内液を凍結乾燥した。水に再溶解しＡＤＶＡＮＴＥＣ ＵＫ−５０（分画分子量＝５０，０００）の限外濾過膜で限外濾過することにより精製、濃縮した。さらに０．４５μｍのフィルターを用いて濾過してブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤の水溶液２０．４ｍｌを得た。得られた水溶液は図１４に示すＨＰＬＣのクロマトグラムを有していた。図中▲１▼のピークはアドリアマイシンであり、▲２▼のピークはアドリアマイシンの２量体であり、▲３▼のブロードなピークはポリマーに結合したアドリアマイシンである。アドリアマイシン（▲１▼ピーク）の濃度は３．０１ｍｇ／ｍｌであり、アドリアマイシンの２量体（▲２▼ピーク）の濃度は０．３９ｍｇ／ｍｌであった。アドリアマイシンとアドリアマイシンの２量体の重量比は１：０．１３であった。ＨＰＬＣの測定条件は実施例３と同一である。
実施例５
実施例３で作成したＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）ＡＤＲの１２ｍｇ／ｍｌ（アドリアマイシン換算）の水溶液２０ｍｌに水２０ｍｌを加えて希釈し、その後凍結乾燥した。水２０ｍｌに再溶解し、さらに酢酸及び酢酸ナトリウム水溶液でｐＨを調整し最終的に３０ｍＭ酢酸バッファー（ｐＨ５．０）溶液４０ｍｌとなるようにした。アドリアマイシン塩酸塩１２８．０ｍｇを加え遮光下室温で２日間撹拌した。透析膜（分画分子量＝１２，０００〜１４，０００）を用いて透析し、さらにＡＤＶＡＮＴＥＣ ＵＫ−５０（分画分子量＝５０，０００）の限外濾過膜で限外濾過することにより精製、濃縮し、ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤の水溶液１６．７ｍｌを得た。得られた水溶液は図１５に示すＨＰＬＣのクロマトグラムを有していた。図中▲１▼のピークはアドリアマイシンであり、▲２▼のピークはアドリアマイシンの２量体であり、▲３▼のブロードなピークはポリマーに結合したアドリアマイシンである。アドリアマイシン（▲１▼ピーク）の濃度は２．９９ｍｇ／ｍｌであり、アドリアマイシンの２量体（▲２▼ピーク）の濃度は０．２７ｍｇ／ｍｌであった。アドリアマイシンとアドリアマイシンの２量体の重量比は１：０．０９であった。ＨＰＬＣの測定条件は実施例３と同一である。
応用例１
ＣＤＦ１メスのマウスの背側部皮下にマウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ ２６細胞を移植し、腫瘍の体積が１００ｍｍ³前後に達した時点から実施例３、４または５で合成したブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤、またはアドリアマイシン塩酸塩を１日１回、４日間隔、計３回静脈内に投与（図中、矢印で示す）し、抗腫瘍効果を検討した。各薬剤は生理食塩水に用時溶解して用いた。また投与量はすべてＨＰＬＣクロマトグラムにおける▲１▼のピークのアドリアマイシン量に換算して用いた。薬剤の抗腫瘍効果は、腫瘍増殖曲線、腫瘍消失マウス数及び化学療法係数から判定した。結果を表１、２と図１６、１７に示す。アドリアマイシン塩酸塩を投与した場合に比べ実施例３〜５のブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤を投与した場合にはより幅広い投与量においてより多くの腫瘍消失マウスが観察された。特にアドリアマイシンの２量体の含量の多い実施例３の医薬製剤が完全治癒率、化学療法係数とも最も良い結果であった。

実施例６
片末端メトキシ基片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＮＨ₂）（分子量１４，２００）２０．０ｇをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１００ｍｌに溶解した。その溶液にβ−ベンジル−Ｌ−アスパルテート−Ｎ−カルボン酸無水物（ＢＬＡ−ＮＣＡ）１５．０ｇを加え、３５℃の温浴上攪拌しながら２４時間重合反応を行った。次いで氷浴上攪拌しながら、重合液を０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液中に加え、２０分間撹拌した。これに２Ｎ塩酸を加えｐＨをほぼ４とし、蒸留水を加え全量を２０リットルに希釈した後ｐＨを４に調整した。ホローファイバー型限外濾過装置（アミコンＣＨ２、限外濾過膜の分画分子量＝１０，０００）を用いて、濃縮、水洗を繰り返した。次いで、濃縮液をスルホン酸型イオン交換樹脂（アンバーライトＩＲ−１２０Ｂ）カラムを用いて精製した。溶出液を減圧濃縮、さらに凍結乾燥して、ポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体（ＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．））２１．２６ｇを得た。このＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）７．５０１ｇをＤＭＦ１２５ｍｌに溶解しさらにアセトニトリル１２５ｍｌを加えた。次いで、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）１２．９９２ｇを加え５分間攪拌後、アドリアマイシン塩酸塩３．６５４ｇをＤＭＦ２５０ｍｌに溶解しトリエチルアミン１．１４ｍｌを添加した溶液を加えた。次いで、室温で攪拌しながら４時間反応させた。反応後１％燐酸水溶液２５ｍｌを加え５分間攪拌した。透析膜（分画分子量＝１２，０００〜１４，０００）を用いて透析した後、濾過によりＤＣＣ由来の沈殿を除去した。濾液をホローファイバー型限外濾過装置（アミコンＣＨ２、限外濾過膜の分画分子量＝１０，０００）を用いて精製し、さらにＡＤＶＡＮＴＥＣ ＵＫ−５０（分画分子量＝５０，０００）の限外濾過膜で限外濾過することにより濃縮し、アドリアマイシン換算で１２ｍｇ／ｍｌ（紫外分光光度計で４８５ｎｍの吸収より算出）の水溶液２７０ｍｌを得た。得られたＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）ＡＤＲは前記式（２）の構造を有し、Ｒ₁はメチル基、Ｒ₂はトリメチレン基、Ｒ₃はメチレン基、Ｒ₄の一部は水酸基で残りは前記残基式（３）［ＹはＣＨ₂ＯＨ、ＺはＨ］、Ｒ₅は水素を表し、ｎ＝３２５、ｍ＝３０、ｘ＝８である。アドリアマイシン含有率は３２．４％であるが良好な水溶性を示した。このＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）ＡＤＲの１２ｍｇ／ｍｌ（アドリアマイシン換算）の水溶液１ｍｌと、¹⁴Ｃ標識したアドリアマイシン塩酸塩１１．９３ｍｇをＤＭＦ３ｍｌに溶解しトリエチルアミン４．９μｌを添加した溶液とを混合し遮光下室温で２時間攪拌した。透析膜（分画分子量＝１２，０００〜１４，０００）を用いて透析した後ＡＤＶＡＮＴＥＣ ＵＫ−５０（分画分子量５０，０００）の限外濾過膜で限外濾過することにより精製、濃縮してブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤の水溶液３．０ｍｌを得た。得られた水溶液は図１８に示すＨＰＬＣのクロマトグラムを有していた。図中▲１▼のピークはアドリアマイシンであり、▲２▼のピークはアドリアマイシンの２量体であり、▲３▼のブロードなピークはポリマーに結合したアドリアマイシンである。アドリアマイシン（▲１▼ピーク）の濃度は１．２９ｍｇ／ｍｌであり、アドリアマイシンの２量体（▲２▼ピーク）の濃度は１．３６ｍｇ／ｍｌであった。アドリアマイシンとアドリアマイシンの２量体の重量比は１：１．０５であった。ＨＰＬＣの測定条件は実施例３と同一である。
実施例７
実施例６で作成したＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）ＡＤＲの１２ｍｇ／ｍｌ（アドリアマイシン換算）の水溶液２．０８ｍｌと、¹⁴Ｃ標識したアドリアマイシン塩酸塩９．８６ｍｇをＤＭＦ６．２５ｍｌに溶解しトリエチルアミン３．３μｌを添加した溶液とを混合し遮光下室温で２時間攪拌した。透析膜（分画分子量＝１２，０００〜１４，０００）を用いて透析した後ＡＤＶＡＮＴＥＣ ＵＫ−５０（分画分子量＝５０，０００）の限外濾過膜で限外濾過することにより精製、濃縮してブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤の水溶液２．３ｍｌを得た。得られた水溶液は図１９に示すＨＰＬＣのクロマトグラムを有していた。図中▲１▼のピークはアドリアマイシンであり、▲２▼のピークはアドリアマイシンの２量体であり、▲３▼のブロードなピークはポリマーに結合したアドリアマイシンである。アドリアマイシン（▲１▼ピーク）の濃度は３．４１ｍｇ／ｍｌであり、アドリアマイシンの２量体（▲２▼ピーク）の濃度は０．９５ｍｇ／ｍｌであった。アドリアマイシンとアドリアマイシンの２量体の重量比は１：０．２８であった。ＨＰＬＣの測定条件は実施例３と同一である。
実施例８
片末端メトキシ基片末端３−アミノプロピル基のポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＮＨ₂）（分子量１４，５００）２０．０ｇをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）１００ｍｌに溶解した。その溶液にβ−ベンジル−Ｌ−アスパルテート−Ｎ−カルボン酸無水物（ＢＬＡ−ＮＣＡ）１５．０ｇを加え、３５℃の温浴上攪拌しながら２４時間重合反応を行った。次いで、氷浴上攪拌しながら、重合液を０．５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液中に加え、２０分間攪拌した。これに２Ｎ塩酸を加えｐＨをほぼ４とし、蒸留水を加え全量を２０リットルに希釈した後ｐＨを４に調整した。ホローファイバー型限外濾過装置（アミコンＣＨ２、限外濾過膜の分画分子量＝１０，０００）を用いて、濃縮、水洗を繰り返した。次いで、濃縮液をスルホン酸型イオン交換樹脂（アンバーライトＩＲ−１２０Ｂ）カラムを用いて精製した。溶出液を減圧濃縮、さらに凍結乾燥して、ポリエチレングリコール−ポリアスパラギン酸ブロック共重合体（ＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．））１９．０１ｇを得た。このＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）５．０１０ｇをＤＭＦ８３ｍｌに溶解しさらにアセトニトリル８３ｍｌを加えた。次いで、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）８．６９３ｇを加え５分間攪拌後、アドリアマイシン塩酸塩２．４４５ｇをＤＭＦ１６７ｍｌに溶解しトリエチルアミン７５９μｌを添加した溶液を加えた。次いで、室温で攪拌しながら４時間反応させた。反応後０．５％燐酸水溶液１６．７ｍｌを加え５分間攪拌した。透析膜（分画分子量＝１２，０００〜１４，０００）を用いて透析した後、濾過によりＤＣＣ由来の沈殿を除去した。濾液をＡＤＶＡＮＴＥＣ ＵＫ−５０（分画分子量＝５０，０００）の限外濾過膜で限外濾過することにより濃縮し、アドリアマイシン換算で１２ｍｇ／ｍｌ（紫外分光光度計で４８５ｎｍの吸収より算出）の水溶液１８５ｍｌを得た。得られたＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）ＡＤＲは前記式（２）の構造を有し、Ｒ₁はメチル基、Ｒ₂はトリメチレン基、Ｒ₃はメチレン基、Ｒ₄の一部は水酸基で残りは前記残基式（３）［ＹはＣＨ₂ＯＨ、ＺはＨ］、Ｒ₅は水素を表し、ｎ＝３５０、ｍ＝３２、ｘ＝８である。アドリアマイシン含有率は３０．２％であるが良好な水溶性をし示した。このＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）ＡＤＲの１２ｍｇ／ｍｌ（アドリアマイシン換算）の水溶液２０ｍｌと、アドリアマイシン塩酸塩５６４．０ｍｇをＤＭＦ６０ｍｌに溶解しトリエチルアミン１７６μｌを添加した溶液とを混合し遮光下室温で２時間攪拌した。透析膜（分画分子量１２，０００〜１４，０００）を用いて透析した後内液を凍結乾燥した。水に再溶解しＡＤＶＡＮＴＥＣ ＵＫ−５０（分画分子量５０，０００）の限外濾過膜で限外濾過することにより精製、濃縮した。さらに０．４５μのフィルターを用いて濾過してブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤の水溶液５９．４ｍｌを得た。得られた水溶液は図２０に示すＨＰＬＣのクロマトグラムを有していた。図中▲１▼のピークはアドリアマイシンであり、▲２▼のピークはアドリアマイシンの２量体であり、▲３▼のブロードなピークはポリマーに結合したアドリアマイシンである。アドリアマイシン（▲１▼ピーク）の濃度は１．１０ｍｇ／ｍｌであり、アドリアマイシンの２量体（▲２▼ピーク）の濃度は３．０７ｍｇ／ｍｌであった。アドリアマイシンとアドリアマイシンの２量体の重量比は１：２．７９であった。ＨＰＬＣの測定条件は実施例３と同一である。
実施例９
実施例８で作成したＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）ＡＤＲの１２ｍｇ／ｍｌ（アドリアマイシン換算）の水溶液１０ｍｌと、アドリアマイシン塩酸塩３２．０ｍｇをＤＭＦ３０ｍｌに溶解しトリエチルアミン１０．０μｌを添加した溶液とを混合し遮光下室温で２時間撹拌した。透析膜（分画分子量＝１２，０００〜１４，０００）を用いて透析した後内液を凍結乾燥した。水に再溶解しＡＤＶＡＮＴＥＣ ＵＫ−５０（分画分子量＝５０，０００）の限外濾過膜で限外濾過することにより精製、濃縮した。さらに０．４５μのフィルターを用いて濾過してブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤の水溶液９．１ｍｌを得た。得られた水溶液は図２１に示すＨＰＬＣのクロマトグラムを有していた。図中▲１▼のピークはアドリアマイシンであり、▲２▼のピークはアドリアマイシンの２量体であり、▲３▼のブロードなピークはポリマーに結合したアドリアマイシンである。アドリアマイシン（▲１▼ピーク）の濃度は１．９８ｍｇ／ｍｌであり、アドリアマイシンの２量体（▲２▼ピーク）の濃度は０．１２ｍｇ／ｍｌであった。アドリアマイシンとアドリアマイシンの２量体の重量比は１：０．０６であった。ＨＰＬＣの測定条件は実施例３と同一である。
実施例１０
実施例８で作成したＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）ＡＤＲの１２ｍｇ／ｍｌ（アドリアマイシン換算）の水溶液５ｍｌとアドリアマイシン塩酸塩５１．４ｍｇをＤＭＦ１５ｍｌに溶解しトリエチルアミン１６．０μｌを添加した溶液とを混合し遮光下室温で２時間撹拌した。透析膜（分画分子量１２，０００〜１４，０００）を用いて透析した後内液を凍結乾燥した。水に再溶解しＡＤＶＡＮＴＥＣ ＵＫ−５０（分画分子量５０，０００）の限外濾過膜で限外濾過することにより精製、濃縮した。さらに０．４５μのフィルターを用いて濾過してブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤の水溶液１５．２ｍｌを得た。得られた水溶液は図２２に示すＨＰＬＣのクロマトグラムを有していた。図中▲１▼のピークはアドリアマイシンであり、▲２▼のピークはアドリアマイシンの２量体であり、▲３▼のブロードなピークはポリマーに結合したアドリアマイシンである。アドリアマイシン（▲１▼ピーク）の濃度は１．０４ｍｇ／ｍｌであり、アドリアマイシンの２量体（▲２▼ピーク）の濃度は０．８８ｍｇ／ｍｌであった。アドリアマイシンとアドリアマイシンの２量体の重量比は１：０．８５であった。ＨＰＬＣの測定条件は実施例３と同一である。
実施例１１
実施例１（２）で作成したアドリアマイシンの２量体１０３．５ｍｇとアドリアマイシン塩酸塩４９．１ｍｇをＤＭＦ６５ｍｌに溶解した溶液と、実施例８で作成したＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）ＡＤＲの１２ｍｇ／ｍｌ（アドリアマイシン換算）の水溶液２３ｍｌとを混合し遮光下室温で２時間撹拌した。透析膜（分画分子量＝１２，０００〜１４，０００）を用いて透析した後ＡＤＶＡＮＴＥＣ ＵＫ−５０（分画分子量＝５０，０００）の限外濾過膜で限外濾過することにより精製、濃縮した。さらに０．４５μのフィルターを用いて濾過してブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤の水溶液１４．９ｍｌを得た。得られた水溶液は図２３に示すＨＰＬＣのクロマトグラムを有していた。図中▲１▼のピークはアドリアマイシンであり、▲２▼のピークはアドリアマイシンの２量体であり、▲３▼のブロードなピークはポリマーに結合したアドリアマイシンである。アドリアマイシン（▲１▼ピーク）の濃度は１．１３ｍｇ／ｍｌであり、アドリアマイシンの２量体（▲２▼ピーク）の濃度は２．７６ｍｇ／ｍｌであった。アドリアマイシンとアドリアマイシンの２量体の重量比は１：２．４４であった。ＨＰＬＣの測定条件は実施例３と同一である。
実施例１２
実施例８で作成したＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）１．００３４ｇをＤＭＦ１６．７ｍｌに溶解しさらにアセトニトリル１６．７ｍｌを加えた。ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）１．７５０４ｇを加え５分間撹拌後、ダウノマイシン塩酸塩４７４．４ｍｇをＤＭＦ３３．３ｍｌに溶解しトリエチルアミン１５２μｌを添加した溶液を加え、室温で４時間反応させた。反応後０．５％燐酸水溶液３．３ｍｌを加え５分間撹拌した。透析膜（分画分子量＝１２，０００〜１４，０００）を用いて透析した後、濾過によりＤＣＣ由来の沈殿を除去した。濾液をＡＤＶＡＮＴＥＣ ＵＫ−５０（分画分子量＝５０，０００）の限外濾過膜で限外濾過することにより濃縮し、ダウノマイシン換算で１２ｍｇ／ｍｌ（紫外分光光度計で４８５ｎｍの吸収より算出）の水溶液３６ｍｌを得た。得られたＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）ＤＡＭは前記式（２）の構造を有し、Ｒ₁はメチル基、Ｒ₂はトリメチレン基、Ｒ₃はメチル基、Ｒ₄の一部は水酸基で残りは前記残基式（３）［ＹはＣＨ₃、ＺはＨ］、Ｒ₅は水素を表し、ｎ＝３５０、ｍ＝３２，ｘ＝８である。ダウノマイシン含有率は３０．３％であるが良好な水溶性を示した。このＰＥＧ−Ｐ（Ａｓｐ．）ＤＡＭの１２ｍｇ／ｍｌ（ダウノマイシン換算）の水溶液７ｍｌと、アドリアマイシン塩酸塩１７９．８ｍｇをＤＭＦ２１ｍｌに溶解しトリエチルアミン５５．９μｌを添加した溶液とを混合遮光下室温で２時間撹拌した。透析膜（分画分子量１２，０００〜１４，０００）を用いて透析した後内液を凍結乾燥した。これを水に再溶解しＡＤＶＡＮＴＥＣ ＵＫ−５０（分画分子量＝５０，０００）の限外濾過膜で限外濾過することにより精製、濃縮し、さらに０．４５μのフィルターを用いて濾過してブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤の水溶液１６．５ｍｌを得た。得られた水溶液は図２４に示すＨＰＬＣのクロマトグラムを有していた。図中▲１▼のピークはアドリアマイシンであり、▲２▼のピークはアドリアマイシンの２量体であり、▲３▼のブロードなピークはポリマーに結合したダウノマイシンである。アドリアマイシン（▲１▼ピーク）の濃度は１．０７ｍｇ／ｍｌであり、アドリアマイシンの２量体（▲２▼ピーク）の濃度は３．２６ｍｇ／ｍｌであった。アドリアマイシンとアドリアマイシンの２量体の重量比は１：３．０５であった。ＨＰＬＣの測定条件は実施例３と同一である。
応用例２
ＣＤＦ１メスのマウスの背側部皮下にマウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ ２６細胞を移植し、１２日後に実施例６または７で作成したブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤、または¹⁴Ｃ標識したアドリアマイシン塩酸塩を静脈内に投与した。各薬剤は生理食塩水に用時溶解して用いた。投与後１５分、１、４、２４、４８時間後に血液及び各種臓器を摘出した。液体シンチレーションカウンターを用いて放射能を測定することにより、血漿及び各臓器中の薬剤濃度を求めた。本実験ではアドリアマイシンとアドリアマイシンの２量体が共に¹⁴Ｃ標識されている。投与した薬剤中のアドリアマイシン及びアドリアマイシンの２量体の合計量を１００としたときの血漿１ｍｌ中のアドリアマイシン及びアドリアマイシンの２量体の合計量（％ ｏｆ Ｄｏｓｅ／ｍｌ）の経時変化を表３に示す。単剤のアドリアマイシン塩酸塩を投与した場合、薬剤が投与後すみやかに血漿中から消失するのに対し、本発明の医薬製剤では血漿中に長時間にわたり高濃度の薬剤が滞留していた。特にアドリアマイシンの２量体の比率が高い実施例６の医薬製剤で滞留性の向上がより顕著であった。投与した薬剤中のアドリアマイシン及びアドリアマイシンの２量体の合計量を１００としたときの腫瘍組織１ｇ中のアドリアマイシン及びアドリアマイシンの２量体の合計量（％ ｏｆ Ｄｏｓｅ／ｇ）の経時変化を表４に示す。また心臓における該合計量（％ ｏｆ Ｄｏｓｅ／ｇ）の経時変化を表５に示す。心臓においては本発明の医薬製剤は初期濃度が単剤のアドリアマイシン塩酸塩を投与した場合に比べ若干低く経時的に減少していくのに対し、腫瘍部分には数倍の濃度の薬剤が集積し、経時的に増加していく傾向がみられた。特にアドリアマイシンの２量体の比率が高い実施例６の医薬製剤で腫瘍集積性がより顕著であった。
応用例３
ＣＤＦ１メスのマウスの背側部皮下にマウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ ２６細胞を移植し、腫瘍の体積が１００ｍｍ³前後に達した時点から実施例８または１２で作成したブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤、またはアドリアマイシン塩酸塩を１日１回４日間隔、計３回静脈内に投与（図中、矢印で示す）し、抗腫瘍効果を検討した。実施例８の医薬製剤に関しては初回の１回だけの投与でも検討した。各薬剤は生理食塩水に用時溶解して用いた。また投与量はすべてＨＰＬＣクロマトグラムにおける▲１▼のピークのアドリアマイシン量に換算して用いた。薬剤の抗腫瘍効果は、腫瘍増殖曲線、腫瘍消失マウス数から判定した。結果を表６と図２５、２６、２７に示す。アドリアマイシン塩酸塩を投与した場合に比べ実施例８、１２の医薬製剤を投与した場合にはより幅広い投与量においてより多くの腫瘍消失マウスが観察された。
応用例４
ＣＤＦ１メスのマウスの背側部皮下にマウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ ２６細胞を移植し、８日後に実施例８または９で作成したブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤を静脈内に投与した。各薬剤は生理食塩水に用時溶解して用いた。投与後１５分、１、４、２４、４８時間後に血液及び各種臓器を摘出した。有機溶媒を用いて薬剤を抽出しＨＰＬＣで測定することにより血漿及び腫瘍中のアドリアマイシン及びアドリアマイシンの２量体の濃度を求めた。投与した薬剤中のアドリアマイシンの量を１００としたときの血漿１ｍｌ中のアドリアマイシンの量（％ ｏｆ Ｄｏｓｅ／ｍｌ）、投与した薬剤中のアドリアマイシンの２量体の量を１００としたときの血漿１ｍｌ中のアドリアマイシンの２量体の濃度（％ ｏｆ Ｄｏｓｅ／ｍｌ）の経時変化を表７に示す。アドリアマイシンの２量体の比率が高い実施例８の医薬製剤では血中滞留性が著しく向上していた。投与した薬剤中のアドリアマイシンの量を１００としたときの腫瘍組織１ｇ中のアドリアマイシンの量（％ ｏｆ Ｄｏｓｅ／ｇ）、投与した薬剤中のアドリアマイシンの２量体の量を１００としたときの腫瘍組織１ｇ中のアドリアマイシンの２量体の量（％ ｏｆ Ｄｏｓｅ／ｇ）の経時変化を表８に示す。アドリアマイシンの２量体の比率が高い実施例８の医薬製剤では腫瘍集積性が著しく向上していた。
応用例５
ＣＤＦ１メスのマウスの背側部皮下にマウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ ２６細胞を移植し、１１日後に実施例８、１０または１２で作成したブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤を静脈内投与した。各薬剤は生理食塩水に用時溶解して用いた。投与後１、２４時間後に血液及び各種臓器を摘出した。有機溶媒を用いて薬剤を抽出しＨＰＬＣで測定することにより、血漿及び腫瘍中のアドリアマイシン及びアドリアマイシンの２量体の濃度を求めた。投与した薬剤中のアドリアマイシンの量を１００としたときの血漿１ｍｌ中のアドリアマイシンの量（％ ｏｆ Ｄｏｓｅ／ｍｌ）、投与した薬剤中のアドリアマイシンの２量体の量を１００としたときの血漿１ｍｌ中のアドリアマイシンの２量体の量（％ ｏｆ Ｄｏｓｅ／ｍｌ）の経時変化を表９に示す。実施例８の医薬製剤については応用例４とほぼ再現性のある結果となった。アドリアマイシンの２量体の比率が実施例８の医薬製剤より低い実施例１０の医薬製剤では血中滞留性がやや低くなっていた。投与した薬剤中のアドリアマイシン量を１００としたときの腫瘍１ｇ中のアドリアマイシンの量（％ ｏｆ Ｄｏｓｅ／ｇ）、投与した薬剤中のアドリアマイシンの２量体の量を１００としたときの腫瘍１ｇ中のアドリアマイシンの２量体の量（％ ｏｆ Ｄｏｓｅ／ｇ）の経時変化を表１０に示す。実施例８の医薬製剤については応用例４とほぼ再現性のある結果が得られた。アドリアマイシンの２量体の比率が実施例８の医薬製剤より低い実施例１０の医薬製剤では腫瘍集積性もやや低くなっていた。

発明の効果
本発明の２，３又は４量体を含む高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤は、抗癌剤等の薬剤をミセル内核に取り込ませることにより、高い薬効と低い毒性を付与することに成功し、本発明によりきわめて有用な医薬製剤を提供できるものである。

Claims (10)

1. 抗癌活性を有するアンスラサイクリン系化合物であるアドリアマイシン、ダウノマイシン、ピラルビシン、エピルビシン及びそれらの酸塩から選ばれる１種以上をアルカリ処理により直接化学結合させることにより得ることができ、結合様式がシッフベース結合であるアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体。
2. アドリアマイシンまたはその酸塩を、又は、アドリアマイシンまたはその酸塩とダウノマイシンまたはその酸塩をアルカリ処理により直接化学結合させることにより得ることができる請求項１記載のアンスラサイクリン系化合物の２量体。
3. 請求項２記載のアンスラサイクリン系化合物の２量体が下記式（ＡＡ）の構造を有するアドリアマイシンの２量体。
   

   
4. アドリアマイシンまたはその酸塩をアルカリ処理により直接化学結合させることにより得ることができ、図７に示すマススペクトルを有する請求項１記載のアドリアマイシンの３量体。
5. 親水性高分子構造部分と疎水性高分子構造部分とを有する下記式（１）または（２）の構造の高分子ブロック共重合体が親水性部分を外殻としたミセルを形成し、疎水性の内核に請求項１〜４のいずれか一項に記載のアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体を、アドリアマイシン、ダウノマイシン、ピラルビシン、エピルビシン及びそれらの酸塩から選ばれる１種以上であるアンスラサイクリン系抗癌剤と共に含有することを特徴とする高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤。
   

   

   ［式中、Ｒ₁は水素原子または低級アルキル基を表し、Ｒ₂は結合基を表し、Ｒ₃はメチレン基またはエチレン基を表し、Ｒ₄はそれぞれ独立して水酸基または下記式（３）で示される抗癌活性を有するアンスラサイクリン系化合物の残基を表し、Ｒ₅は水素原子または保護基を表し、ｎは５〜１，０００、ｍは２〜３００、ｘは０〜３００の整数を示すが、ｘはｍより大きくないものとする。
   

   

   式中、Ｙは−ＣＨ₂ＯＨ又は−ＣＨ₃を、ＺはＨ又は
   

   

   を示す。］
6. 高分子ブロック共重合体が形成するミセルの内核に、該高分子ブロック共重合体に対して２〜６０重量％のアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体を含有する請求項５記載の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤。
7. アンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体が請求項３記載のアドリアマイシンの２量体である請求項５記載の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤。
8. 高分子ブロック共重合体が形成するミセルの内核にアンスラサイクリン系抗癌剤とアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体を１：０．５〜２０の重量比で含有する請求項５〜７のいずれか一項に記載の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤。
9. アンスラサイクリン系抗癌剤とアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体を１：０．７〜１０の重量比で含有する請求項５〜７のいずれか一項に記載の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤。
10. アンスラサイクリン系抗癌剤とアンスラサイクリン系化合物の２，３又は４量体を１：１〜５の重量比で含有する請求項５〜７のいずれか一項に記載の高分子ブロック共重合体−薬剤複合体医薬製剤。

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