JP4046446B2 - Particle analyzer - Google Patents
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
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Description
【0001】
【発明の属する技術分野】
この発明は粒子分析装置に関し、特に各粒子から複数のパラメータを得て、分布図を作成する粒子分析装置に関する。
【0002】
【従来の技術】
活性炭のような吸着粒子に代表される可反応粒子(化学反応を利用する粒子)においては、粒子の表面積の大きさが反応のし易さに影響を与える。つまり粒子の表面に凹凸が多いほど表面積が大きくなり反応が有利になる。
従って、このような粒子に関する分野においては、粒子の表面状態を分析するためにSEM(走査型電子顕微鏡)を用いる方法が知られている。
また、フローサイトメトリー方式を用いて、粒子含有液をフローセルに流しその粒子を撮像して得られた粒子画像を観察して各粒子の形態を分析するようにした装置も知られている(例えば、特開平8−178826号公報参照)。
【0003】
【発明が解決しようとする課題】
ところで、SEMで粒子を観察するためには対象粒子が導電体でなければならないため、絶縁物の粒子については金蒸着を行った後に観察するようにしている。従って、真の表面状態が観察できないばかりでなく、多量の粒子を短時間で分析することが難しいという問題がある。
さらに、フローサイトメトリー方式で粒子を撮像して分析する場合にも、撮像された粒子画像を作業者の目視で観察する必要があるため、分析に時間を要するという問題がある。
【0004】
この発明は、このような事情を考慮してなされたもので、従来法では知ることが困難であった粒子情報、例えば粒子の表面状態というような情報を効率よく知ることができるようにした粒子分析装置を提供するものである。
【0005】
【課題を解決するための手段】
この発明は、粒子を含む試料液を細い試料液流にして流すフローセルと、試料液流の第1流域において各粒子が発する光を検出する光検出部と、試料液流の第2流域において上記各粒子の粒子像を撮像する撮像部と、上記検出された光から第1特徴パラメータを求める第1特徴パラメータ生成部と、上記撮像された粒子像から第2特徴パラメータを求める第2特徴パラメータ生成部と、第1および第2特徴パラメータによる粒子の分布図を作成してその分布図を解析する解析部と、その解析結果を出力する出力部とを備え、第1特徴パラメータが散乱光強度を反映したパラメータであり、第2特徴パラメータが投影面積を反映したパラメータである粒子分析装置を提供するものである。
【0006】
【発明の実施の形態】
この発明のフローセルとして、粒子を含む試料液をシース液で包んで流すことにより流体力学的効果によって細い試料液の流れを形成させることのできるフローセルを用いることが好ましい。
【0007】
この発明の粒子分析装置が対象とする粒子は、例えば活性炭,顔料,トナーなどの工業用粉体でもよく、血液や尿に含まれる血球や細胞等の粒子成分を測定対象としてもよい。また、対象粒子は粒径が一例として0.1〜100μm程度のものを含む。
【0008】
第1流域において各粒子が発する光を検出する光検出部としては、試料流の第1流域において光源(例えばレーザやハロゲンランプ又はタングステンランプのような連続的に光を照射する連続光源)によって照明された粒子からの散乱光や蛍光などの光の強度を出力する光検出器(例えばフォトダイオード、フォトトランジスタ又はフォトマルチプライヤ)で構成することができる。
【0009】
画像撮像のために試料流の第2流域に光を照射する光源を備えるのが好ましいが、これには、レーザ、ハロゲンランプ又はタングステンランプのような連続的に光を照射する連続光源、又はパルスレーザ(例えば、Spectra-Physics 社製、7000シリーズ)やマルチストロボ(例えば、(株)菅原研究所製、DSXシリーズ)のような断続的に光を照射する継続光源を用いることができる。連続光源には、通常、光シャッターを組合せて継続光源として用いることが好ましい。そして、光シャッターとしては、公知の音響光学効果素子(acounsto-optic modulator) 又は電気光学効果素子(electro-optic modulator)などを用いることができる。
【0010】
粒子像を撮像する撮像部には、一般的な2次元画像を撮像するビデオカメラを使用してよいが、光像の光量が微弱な場合には、その微弱な光像を増強するイメージインテンシファイアを備えたものを用いることが好ましい。さらに、そのイメージインテンシファイアにはシャッター手段を備えてもよい。第2流域は第1流域の下流にあってもよいし、同じような位置にあってもよい。
なお、同一粒子に対して散乱光などの光検出と画像撮像を行うために、上記光検出器での光検出に基づき撮像部で画像撮像することが好ましい。
【0011】
出力部には、CRTや液晶ディスプレイあるいはプリンターなどの表示装置を用いることができる。第1および第2特徴パラメータ生成部はA/D変換器やロジック回路等を含む信号処理装置によって構成できる。解析部は、CPU、ROMおよびRAMからなるマイクロコンピュータやパーソナルコンピュータによって構成できる。分布図とは、特徴パラメータによって粒子の分布状態を表すものの総称であり、好適な例は2次元スキャッタグラムである。
【0012】
この発明においては、第1特徴パラメータとして、前方散乱光強度、側方散乱光強度又は蛍光強度などを用いることができる。また、第2特徴パラメータとしては、粒子像から得られる投影面積や円相当径や円形度などを用いることができる。
【0013】
【実施例】
この発明の実施例における光学系を図1および図2に示す。この実施例では、前方散乱光を検出するための連続発光レーザ光源1と、粒子像を撮像するためのパルス光源2との2つの光源を設けている。この2つの光源1、2からの光L1、L2は、図2に示すように角型のシースフローセル3(図1では紙面に直角方向に試料流が流れる)に対して互に直交するように90°交差させて照射している。また、この実施例では、粒子像を撮像するためのパルス光は、シースフローセル3内の試料液流に対して、連続発光レーザ光源1の照射位置より下流側(例えば0.5mm程下流)を照射するようにしている。このように照射位置をずらすことによって、光の相互干渉の影響を少なくすることができる。
【0014】
粒子を含む試料液は、シースフローセル3に導かれ、シース液によって細く絞られた試料液流が形成される。連続発光レーザ光は、コンデンサレンズ4によって細く絞られて試料液流に照射され、各粒子による前方散乱光が集光レンズ5によって集められ、フォトダイオード7で受光される。
【0015】
フォトダイオード7によって検出された散乱光信号(ここでは前方散乱光信号)S1は、図3に示す信号処理装置100に渡され、そこで信号のパルスの高さ情報及び幅情報がそれぞれA/D変換された後、第1特徴パラメータとしてそれぞれ前方散乱光強度FSC及び前方散乱光幅FSWがデータ処理装置300へ渡される。
【0016】
図3に示す撮像制御回路200は、前方散乱光信号S1を受けて、その粒子を撮像するための発光トリガ信号Tsをパルス光源2に対して供給する。
【0017】
パルス光源2は、発光トリガ信号Tsによって一瞬だけ(数十ナノ秒程度)発光するタイプの光源であり、試料流の流速が数m/秒と高速であっても、流れる粒子をブレ無く撮像することができる。パルス光は図1に示すように、光ファイバー12でフローセル3へ導かれ、コンデンサレンズ13によって細く絞られて試料流に照射される。
【0018】
光ファイバー12を介して照射することにより、パルス光のコヒーレンシーを低下させ、回折縞の少ない粒子像を撮像することができる。試料流を透過したパルス光は、投影レンズ14によってビデオカメラ15の受光面に結像され、粒子の投影像が撮像される。粒子を撮像したビデオカメラ15からのビデオ信号Vsは図3に示す信号処理装置100に渡されてディジタル画像データに変換されてデータ処理装置300へ渡される。データ処理装置300は各粒子について得られた画像データと第1特徴パラメータとを関連付けて内部メモリに記憶、保存する。
【0019】
データ処理装置300は、各粒子の投影像から投影面積S、円相等径L及び円形度Cを第2特徴パラメータとして算出し、前記第1特徴パラメータと前記第2特徴パラメータによる2次元スキャッタグラムを作成し表示装置500に表示させるようになっている。
【0020】
図3の入力装置400はキーボードやマウスからなり、作業者は入力装置400を操作してデータ処理装置300に対し各種データ処理項目、データ処理条件、表示装置500への表示項目などについての指示を行うことができる。例えば、表示装置500に表示された2次元スキャッタグラム中の任意の粒子が入力装置400により指定されると、データ処理装置300はその粒子の投影像を表示装置500に表示させる。なお、表示装置500はCRTで構成され、信号処理装置100、撮像制御回路200およびデータ処理装置300は、パーソナルコンピュータにより構成される。
【0021】
このような構成において、図1に示すシースフローセル3に被験粒子を含有する試料液が供給されると、図2に示すように試料液流中を粒子P1,P2,P3……が順次流れる。予め入力装置400によって設定されたn個の粒子つまり、粒子P1,P2,P3……Pnの各々について第1特徴パラメータと第2特徴パラメータが得られると表示装置500はそれらに基づいて2次元スキャッタグラムを表示する。
【0022】
表示装置500の表示例を図4〜図6に示す。
いずれも縦軸を第1特徴パラメータとし横軸を第2特徴パラメータとするスキャッタグラムである。本実施例では特徴パラメータとして複数の特徴パラメータを求め記憶している。そして、入力装置400を操作することによりスキャッタグラム作成に用いるパラメータを選択できるようになっている。すなわち、縦軸として前方散乱光強度FSC及び前方散乱光幅FSWの2つのいずれかを選択でき、横軸として投影面積S、粒径L及び円形度Cの3つのいずれかを選択できるように構成されている。そして、選択されたパラメータについて作成されたスキャッタグラムを表示することができる。
このようにパラメータを選択できるようにすると、スキャッタグラム表示スペースに限りがあるときでも多数のスキャッタグラムを表示することができるというメリットがある。本実施例の場合、2×3=6種類のスキャッタグラムを1つのスキャッタグラム表示エリアに選択的に表示させることができる。
本実施例では粒子の表面状態を知ろうとする観点から、第1パラメータとして前方散乱光強度FSCを、第2パラメータとして投影面積Sを選択した。
図4は、被験粒子として標準的な球状のラテックス粒子を用いたもので、0.1〜2.0μmの粒径の粒子からなり、その表面状態が均一で滑らかであることが予め確認されていたものである。
この場合には粒子はほぼ直線(イ)に沿って分布し、投影面積Sと前方散乱光強度FSCがほぼ比例関係にあることが分かる。
【0023】
図5は、被験粒子として、表面状態も粒径も未知の活性炭の粉末を用いたものである。
この場合には、粒子は直線(イ)よりも上側に分布し、図4に示すラテックス粒子よりも前方散乱光強度が大きい、つまり、表面の凹凸が多いことを示している。
【0024】
図6は、被験粒子として表面状態も粒径も未知のファインセラミックス粒子を用いたものである。
この場合には、粒子は直線(イ)よりも下側に広く分布し、図4に示すラテックス粒子よりも前方散乱光強度が小さい、つまり表面がさらに滑らかで、かつ粒径のばらつき範囲が広いことを示している。なお、図4〜図6に示される粒子の代表的なものについては、その座標を入力装置400により指示(サンプリング)して、それぞれの投影像を表示装置500に表示させることにより、その表面状態を目視によっても確認している。
以上のようにして、粒子の表面状態を効率よく知ることができる。
【0025】
【発明の効果】
この発明によれば、粒子ごとに光検出信号を基礎とするパラメータと撮像画像を基礎とするパラメータを求め分布図を生成しているので、従来知ることが困難であった粒子情報を簡単に知ることができる。
【図面の簡単な説明】
【図1】この発明の実施例の光学系の構成を示す説明図である。
【図2】図1の要部斜視図である。
【図3】実施例の制御系の構成を示すブロック図である。
【図4】実施例によって得られる分布図の一例である。
【図5】実施例によって得られる分布図の一例である。
【図6】実施例によって得られる分布図の一例である。
【符号の説明】
1 連続発光レーザ
2 パルス光源
3 シースフローセル
4 コンデンサレンズ
5 集光レンズ
7 フォトダイオード
12 光ファイバー
13 コンデンサレンズ
14 投影レンズ
15 ビデオカメラ[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a particle analyzer, and more particularly to a particle analyzer that obtains a plurality of parameters from each particle and creates a distribution map.
[0002]
[Prior art]
In reactive particles (particles using a chemical reaction) typified by adsorbed particles such as activated carbon, the size of the surface area of the particles affects the ease of reaction. That is, the more uneven the particle surface, the larger the surface area and the more advantageous the reaction.
Therefore, in the field concerning such particles, a method using an SEM (scanning electron microscope) is known for analyzing the surface state of the particles.
Also known is an apparatus that analyzes the morphology of each particle by observing a particle image obtained by flowing a particle-containing liquid into a flow cell using a flow cytometry method and imaging the particle (for example, JP-A-8-178826).
[0003]
[Problems to be solved by the invention]
By the way, in order to observe the particles with the SEM, the target particles must be conductors. Therefore, the insulator particles are observed after gold vapor deposition. Therefore, there is a problem that not only the true surface state cannot be observed but also it is difficult to analyze a large amount of particles in a short time.
Furthermore, even when particles are imaged and analyzed by the flow cytometry method, it is necessary to observe the imaged particle image with an operator's visual observation, and thus there is a problem that analysis takes time.
[0004]
The present invention has been made in consideration of such circumstances, and particle information that has been difficult to know by a conventional method, for example, information such as particle surface state can be efficiently known. An analyzer is provided.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
The present invention provides a flow cell for flowing a sample liquid containing particles in a thin sample liquid flow, a light detection unit for detecting light emitted from each particle in the first flow region of the sample liquid flow, and the above in the second flow region of the sample liquid flow. An imaging unit that captures a particle image of each particle, a first feature parameter generation unit that determines a first feature parameter from the detected light, and a second feature parameter generation that calculates a second feature parameter from the captured particle image An analysis unit that creates a particle distribution map based on the first and second characteristic parameters and analyzes the distribution map, and an output unit that outputs the analysis result . The first characteristic parameter indicates the scattered light intensity. is a parameter that reflects, in which the second characteristic parameter providing Oh Ru particle analyzer with a parameter which reflects the projected area.
[0006]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
As the flow cell of the present invention, it is preferable to use a flow cell capable of forming a thin sample liquid flow by a hydrodynamic effect by wrapping and flowing a sample liquid containing particles in a sheath liquid.
[0007]
The particles targeted by the particle analyzer of the present invention may be industrial powders such as activated carbon, pigments and toners, and particle components such as blood cells and cells contained in blood and urine may be measured. The target particles include those having a particle size of about 0.1 to 100 μm as an example.
[0008]
The light detection unit for detecting the light emitted by each particle in the first flow region is illuminated by a light source (for example, a continuous light source that continuously emits light such as a laser, a halogen lamp, or a tungsten lamp) in the first flow region of the sample flow. It can be constituted by a photodetector (for example, a photodiode, a phototransistor, or a photomultiplier) that outputs the intensity of light such as scattered light or fluorescence from the particles.
[0009]
It is preferable to provide a light source that irradiates light to the second flow area of the sample flow for imaging, which includes a continuous light source that continuously emits light, such as a laser, a halogen lamp or a tungsten lamp, or a pulse. A continuous light source that irradiates light intermittently, such as a laser (for example, 7000 series manufactured by Spectra-Physics) or a multi-strobe (for example, DSX series manufactured by Ebara Laboratories, Inc.) can be used. In general, it is preferable to use a continuous light source as a continuous light source in combination with an optical shutter. As the optical shutter, a known acousto-optic modulator, electro-optic modulator, or the like can be used.
[0010]
A video camera that captures a general two-dimensional image may be used for the imaging unit that captures the particle image. However, when the light amount of the optical image is weak, image intensity that enhances the weak optical image is used. It is preferable to use one provided with a fire. Further, the image intensifier may be provided with shutter means. The second basin may be downstream of the first basin or in a similar position.
In order to detect light such as scattered light and capture an image with respect to the same particle, it is preferable to capture an image with an imaging unit based on the light detection with the photodetector.
[0011]
A display device such as a CRT, a liquid crystal display, or a printer can be used for the output unit. The first and second feature parameter generation units can be configured by a signal processing device including an A / D converter and a logic circuit. The analysis unit can be configured by a microcomputer or personal computer including a CPU, a ROM, and a RAM. The distribution map is a general term for what expresses the distribution state of particles by a characteristic parameter, and a suitable example is a two-dimensional scattergram.
[0012]
In the present invention, the forward scattered light intensity, the side scattered light intensity, the fluorescence intensity, or the like can be used as the first characteristic parameter. Further, as the second feature parameter, a projected area, a circle equivalent diameter, a circularity, or the like obtained from the particle image can be used.
[0013]
【Example】
An optical system according to an embodiment of the present invention is shown in FIGS. In this embodiment, two light sources, a continuous light emitting
[0014]
The sample liquid containing the particles is guided to the sheath flow cell 3, and a sample liquid flow narrowed by the sheath liquid is formed. The continuous-emitting laser light is narrowed down by the condenser lens 4 and applied to the sample liquid flow, and the forward scattered light from each particle is collected by the condenser lens 5 and received by the
[0015]
The scattered light signal (here, forward scattered light signal) S1 detected by the
[0016]
The
[0017]
The pulsed
[0018]
By irradiating via the
[0019]
The
[0020]
The
[0021]
In such a configuration, when the sample liquid containing the test particles is supplied to the sheath flow cell 3 shown in FIG. 1, the particles P1, P2, P3,... Sequentially flow in the sample liquid flow as shown in FIG. When the first feature parameter and the second feature parameter are obtained for each of n particles set in advance by the
[0022]
Display examples of the
Both are scattergrams with the vertical axis as the first feature parameter and the horizontal axis as the second feature parameter. In this embodiment, a plurality of feature parameters are obtained and stored as feature parameters. Then, by operating the
When the parameters can be selected in this way, there is an advantage that a large number of scattergrams can be displayed even when the scattergram display space is limited. In the case of this embodiment, 2 × 3 = 6 types of scattergrams can be selectively displayed in one scattergram display area.
In the present embodiment, from the viewpoint of knowing the surface state of the particles, the forward scattered light intensity FSC is selected as the first parameter, and the projection area S is selected as the second parameter.
FIG. 4 shows a standard spherical latex particle as a test particle, which is composed of particles having a particle diameter of 0.1 to 2.0 μm, and has been confirmed in advance to have a uniform and smooth surface state. It is a thing.
In this case, the particles are distributed substantially along a straight line (A), and it can be seen that the projected area S and the forward scattered light intensity FSC are in a substantially proportional relationship.
[0023]
FIG. 5 shows an activated carbon powder whose surface state and particle size are unknown as test particles.
In this case, the particles are distributed above the straight line (A), indicating that the forward scattered light intensity is higher than that of the latex particles shown in FIG. 4, that is, the surface has many irregularities.
[0024]
FIG. 6 shows fine ceramic particles whose surface state and particle size are unknown as test particles.
In this case, the particles are widely distributed below the straight line (A), and the forward scattered light intensity is smaller than the latex particles shown in FIG. 4, that is, the surface is smoother and the variation range of the particle diameter is wide. It is shown that. In addition, about the typical thing of the particle | grains shown by FIGS. 4-6, the coordinate is instruct | indicated (sampling) with the
As described above, the surface state of the particles can be known efficiently.
[0025]
【The invention's effect】
According to the present invention, for each particle, a parameter based on a photodetection signal and a parameter based on a captured image are obtained to generate a distribution map, so that it is easy to know particle information that has been difficult to know in the past. be able to.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is an explanatory diagram showing a configuration of an optical system according to an embodiment of the present invention.
FIG. 2 is a perspective view of the main part of FIG.
FIG. 3 is a block diagram illustrating a configuration of a control system according to the embodiment.
FIG. 4 is an example of a distribution diagram obtained by an example.
FIG. 5 is an example of a distribution diagram obtained by an example.
FIG. 6 is an example of a distribution diagram obtained by an example.
[Explanation of symbols]
DESCRIPTION OF
Claims (2)
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1999
- 1999-08-31 JP JP24570199A patent/JP4046446B2/en not_active Expired - Fee Related
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