JP4061877B2

JP4061877B2 - Method for producing antioxidant

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Publication number: JP4061877B2
Application number: JP2001302197A
Authority: JP
Inventors: 出得丸; 明彦豊澤
Original assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Current assignee: Mitsubishi Chemical Corp
Priority date: 2001-09-28
Filing date: 2001-09-28
Publication date: 2008-03-19
Anticipated expiration: 2021-09-28
Also published as: JP2003105337A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、高活性の抗酸化剤の製造方法に関する。更に詳しくは、ローズマリー等のシソ科植物の抽出物を精製し、高活性の抗酸化成分を高濃度で含む天然抗酸化剤を製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ローズマリー等のシソ科植物が、抗酸化成分を含有することは既知であり、また、その抽出物が高い抗酸化能を持つことはよく知られている。さらに、該抽出物は抗酸化能以外にも皮膚の美白効果（特開平７−１８７９８９号公報）、抗潰瘍効果（特開２０００−７２６８５）等の機能を有することが開示されており、食品、化粧品、医薬等の分野での有効利用が期待される。
【０００３】
該抽出物の抗酸化成分の精製方法に関しては、種々検討されており、例えば、活性炭、珪藻土、酸性白色土等の吸着剤を用いた精製処理（特開昭５５−１８４３５、特開昭５５−１０２５０８号公報、特開昭５７−２０３４４５号公報等）が知られている。
また、特開２０００−２５６３４５には、植物原料を低温で水抽出した残さをアルカリで再抽出した抽出液と、先の低温水抽出液を吸着剤処理した液とから、抗酸化作用のあるポリフェノール類を高純度で得る方法が開示されている。さらに特開２０００−７２６８５には、吸着剤処理することにより、ローズマリー中のロスマリン酸成分を高含有する画分を得る方法が開示されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、これらの精製方法で得られた抗酸化剤の活性は、十分満足できるものではなく、更なる改良が求められていた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、シソ科植物を低級アルコール水溶液で抽出して得た抽出物を水溶液として吸着剤処理するに際し、吸着剤と接触させる溶液のｐＨおよび組成を調整することで、高活性の抗酸化成分を選択的に高濃度で回収できることを見出し、本発明に到達した。即ち本発明の要旨は、アルコール濃度１０〜８０重量％の低級アルコール水溶液でシソ科植物を抽出し、得られた抽出物を低級アルコールを１５体積％以下の濃度で含有していてもよい水溶液として合成吸着剤と接触させて抽出物中の抗酸化剤成分を合成吸着剤に吸着させ、次いで該合成吸着剤を低級アルコールを１５体積％以下の濃度で含有していてもよいｐＨ７．５以上の水で洗浄したのち、該合成吸着剤に吸着している抗酸化剤成分をアルコール濃度が２０体積％以上の低級アルコール水溶液で脱着させて回収することを特徴とする抗酸化剤の製造方法に存する。
【０００６】
別の要旨は、アルコール濃度１０〜８０重量％の低級アルコール水溶液でシソ科植物を抽出し、得られた抽出物を低級アルコールを１５体積％以下の濃度で含有していてもよいｐＨ６．５以上の水溶液として合成吸着剤と接触させて抽出物中の抗酸化剤成分を合成吸着剤に吸着させ、次いで該合成吸着剤に吸着している抗酸化剤成分を、アルコール濃度が２０体積％以上の低級アルコール水溶液で脱着させて回収することを特徴とする抗酸化剤の製造方法に存する。
【０００７】
更に別の要旨は、下記条件でＨＰＬＣ分析した場合、分子量が４７８の成分のピークの面積％が、２０％以上であることを特徴とするローズマリー抽出物からなる抗酸化剤に存する。
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
カラム：Inertsil ODS 80A(５μｍ４．６mm I.D.×250mm, GL Sciences Inc.)
カラム温度：４０℃
移動相：Ａ−４重量％リン酸水溶液、Ｂ−アセトニトリル
流量：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器、波長２８０ｎｍ
注入量：２５μＬ
分析時間：３５分
Gradient条件：０分（Ａ９０体積％、Ｂ１０体積％）→３０分（Ａ６０体積％、Ｂ４０体積％）→３５分（Ａ６０体積％、Ｂ４０体積％）。
【０００８】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の抗酸化剤の製造方法を、詳細に説明する。
次に、この抗酸化剤の製造方法を説明する。この製造方法は、シソ科植物抽出物に含まれる成分のうち、高活性な抗酸化成分（メトキシルテオリン配糖体と推定）を選択的に高濃度で回収する方法である。
［製造方法１］
本方法は、低級アルコール濃度１５体積％以下のシソ科植物抽出物水溶液を、合成吸着剤と接触させて、抗酸化成分を合成吸着剤に吸着させ（第１工程）、
次いで、該合成吸着剤を、ｐＨ７．５以上の水、またはｐＨ７．５以上かつ低級アルコール濃度１５体積％以下の低級アルコール水溶液で洗浄し（第２工程）、
その後、抗酸化成分を、低級アルコール濃度２０体積％以上の低級アルコール水溶液からなる脱着液により、合成吸着剤より脱着させる（第３工程）。
（１）第１工程
▲１▼シソ科植物抽出液の調製
本発明に用いられるシソ科植物原料は、特に限定されるものではなく、例えばシソ、アオジソ、チリメンジソ、ローズマリー（マンネンロウ）等が挙げられるが、なかでもローズマリーが好ましい。
【０００９】
抽出物の抽出に用いられる植物原料の形態としては、全草、各植物部位または該部位の２種以上を混合したものを用いることができるが、好ましくは葉もしくは全草が用いられる。これら植物原料は、生でも乾燥物でもよいが、好ましくは乾燥物である。粉砕程度は特に制限されないが、例えば粗切り状態が好ましい。上記植物原料から抗酸化成分を抽出するに際し、抽出溶媒としては、水、低級アルコール、または低級アルコール水溶液が用いられるが、好ましくは低級アルコール水溶液である。尚、本明細書において、低級アルコールとは、炭素数１〜４のアルコールを意味する。低級アルコールとしては、直鎖状、分岐鎖状のいずれのも用いることができる。具体的には、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−ブタノール等が挙げられ、これらの中でも、メタノール、エタノールが好ましい。アルコール水溶液のアルコール濃度は、通常１０〜８０重量％、好ましくは３０〜６０重量％、更に好ましくは４０〜６０重量％である。抽出溶媒の量は、植物原料の重量に対して、通常１〜１００倍量、好ましくは２〜１０倍量使用される。抽出溶液中の固形分濃度が、０．１〜３０重量％、好ましくは１〜１０重量％の範囲となるように抽出溶媒の量を調節すると、抽出効率が高く好ましい。
【００１０】
抽出時の温度は、植物原料の種類等にもよるが、通常室温〜９０℃、好ましくは５０〜８０℃の範囲である。更に好ましくは、常圧にてアルコール水溶液が還流する程度の温度である。このとき、抽出器は解放系でも閉鎖系でもよい。抽出時間は、原料及び抽出温度等にもよるが、通常０．５〜１０時間、好ましくは１〜４時間である。
【００１１】
抽出処理の後、抽出溶液と植物原料残渣を分ける手段は、濾過等の公知の方法が用いられる。抽出処理後の植物原料残渣に対し、更に抽出操作を１〜３回、好ましくは２回程度行ない、最初の抽出溶液と合わせて用いてもよい。
▲２▼シソ科植物抽出液の前処理
上記方法で得られた抽出液中の低級アルコール濃度が１５体積％を越える場合には、吸着剤処理の前に、抽出液中の低級アルコールの濃度を１５体積％以下に下げる必要がある。低級アルコール濃度が１５体積％を越えると、抗酸化剤成分が、吸着剤に十分吸着しないので好ましくない。低級アルコール濃度は低い方がよく、好ましくは１０体積％以下であり、更に好ましくは５体積％以下であり、０であることが最も好ましい。
【００１２】
アルコール濃度を下げる方法としては、蒸留等によるアルコール留去や水添加、あるいはそれらの組み合わせ等が考えられる。あるいは、アルコールと共に水も完全に留去し、固体状の抽出物を得た後、水またはアルコール濃度１５体積％以下のアルコール水溶液に溶解しても良い。
このアルコール濃度を下げる操作において、アルコール濃度の低下に伴い、沈殿物が析出することがある。以後の合成吸着剤処理工程への負荷を小さくするために、該沈殿物は濾過等の手段により分離した方が望ましい。なお、この沈殿物には油溶性の抗酸化成分が多く含有されているので、油脂の酸化防止等へ利用できる。
▲３▼抽出物水溶液を合成吸着剤と接触
低級アルコール濃度１５体積％以下の抽出物水溶液を合成吸着剤に接触させ、抽出物中の抗酸化成分を合成吸着剤に吸着させる。
【００１３】
本発明で用いられる合成吸着剤としては、特に限定されないが、例えば、比表面積が３００〜１５００ｍ²／ｇ程度、細孔容積が０．３〜２．５ｍＬ／ｇ程度、最頻度半径が２０〜７００Å程度が好ましい。このような合成樹脂の具体例としては、ダイヤイオン^TMＨＰ２０ＳＳ、ＨＰ２０、ＨＰ２１等のＨＰ樹脂、セパビーズ^TMＳＰ８２５、ＳＰ８５０、ＳＰ２０７等のＳＰ樹脂（以上、三菱化学社製）、アンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４、ＸＡＤ−１６（以上、ロームアンドハース社製）等のスチレン−ジビニルベンゼン系樹脂；ダイアイオン^TMＨＰ２ＭＧ（三菱化学社製）、アンバーライトＸＡＤ−７、ＸＡＤ−８（以上、ロームアンドハース社製）等のアクリル系樹脂等が挙げられる。
【００１４】
合成吸着剤は、通常カラムに充填される。カラムの形状は特に制限無いが、通常円筒型のカラムが用いられる。合成吸着剤は、カラムに充填後、通常、エタノール、水で順次洗浄してから、抽出物の分画に使用される。合成吸着剤に抽出物溶液を通液して、抽出物中の抗酸化成分を吸着剤に吸着させる。吸着剤処理に供する１回あたりの抽出物溶液量は任意だが、用いる合成吸着剤量に対して抽出物溶液量が少ないと１回あたりの処理量が少なくなり、非効率的であるし、多すぎると抽出物中の抗酸化成分の合成吸着剤への吸着が飽和し、吸着できない分が生じ、目的抗酸化成分のロスが大きくなる。よって、抽出物溶液中の目的抗酸化成分の樹脂への吸着が完全に飽和しない程度の量の抽出物溶液を処理するのが効率的で好ましい。例えば、合成吸着剤１００ｍＬに対し、乾燥重量で１〜１０重量％の抽出物を含む水溶液５０〜５０００ｍＬを通液させる。
（２）第２工程
合成吸着剤に、ｐＨ７．５以上の水またはｐＨ７．５以上かつ低級アルコール濃度１５体積％以下の低級アルコール水溶液（以下、「アルカリ洗浄液」という）を、洗浄液として通液して、合成吸着剤を洗浄する。
【００１５】
このアルカリ洗浄液で合成吸着剤を洗浄することにより、合成吸着剤に吸着されていた成分のうち、不活性成分または／及び低活性成分は脱着し除去される。これに対し、本発明で回収を目的とする高活性成分は脱着しない。洗浄液のｐＨは８以上が好ましく、９以上が更に好ましく、通常１２以下である。１２を越えると、抗酸化成分が分解する可能性がある。
【００１６】
水または低級アルコール水溶液のｐＨ調整剤としては、特に制限はないが、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、リン酸水素２ナトリウム、リン酸水素２カリウム、珪酸ナトリウム、炭酸ナトリウム等があげられるが、中でもリン酸水素２ナトリウムが好ましい。また、一般的に知られる緩衝液すなわちリン酸緩衝液、トリス緩衝液、Ｍａｃｌｌｖａｉｎ氏緩衝液等を利用してｐＨを調整してもよい。
【００１７】
アルカリ洗浄液中のアルコール濃度は、１５体積％を越えると、高活性成分も脱着するので好ましくなく、好ましくは１２体積％以下であり、通常５体積％以上である。
アルカリ洗浄液は、合成吸着剤１００ｍＬに対し、通常５０〜５００ｍＬ、好ましくは１００〜３００ｍＬ使用する。
アルカリ洗浄液で洗浄後、水、または低級アルコール濃度２０体積％未満の低級アルコール水溶液（以下、「洗浄用アルコール水溶液」という）で、合成吸着剤を洗浄し、ｐＨ調節剤を除去することが好ましい。この洗浄用アルコール水溶液中の低級アルコール濃度が２０％以上になると、目的とする高活性成分が脱着し、収率が低下し好ましくない。低級アルコール濃度は、好ましくは１７〜１９体積％、更に好ましくは１５〜１８体積％である。洗浄用アルコール水溶液は、通常、合成吸着剤１００ｍＬに対し５０〜３００ｍＬ、好ましくは１００〜２００ｍＬ使用する。
（３）第３工程
洗浄後の合成吸着剤に、低級アルコール濃度２０体積％以上の低級アルコール水溶液からなる脱着液を通液し、高活性成分を脱着させる。脱着液中の低級アルコール濃度は、２５体積％以上であることが好ましく、３０体積％以上であることが更に好ましい。脱着液の低級アルコール濃度は、通常６０体積％以下、好ましくは５０体積％以下である。６０体積％を越えると不活性成分または／及び低活性成分が脱着してきて好ましくない。脱着液は、通常、合成樹脂１００ｍＬに対し、１００〜５００ｍＬ通液する。
【００１８】
尚、上記第１工程〜第３工程における、カラムの通液速度としては、通常、ＳＶ（１時間当たりの通液量／樹脂の見掛け体積）で０．１〜２０、好ましくは０．５〜１０、更に好ましくは１〜５の範囲である。また、その際の温度としては、通常５〜４０℃で実施される。
［製造方法２］
本方法は、ｐＨ６．５以上かつ低級アルコール濃度１５体積％以下のシソ科植物抽出物水溶液を、合成吸着剤と接触させて、抗酸化成分を合成吸着剤に吸着させ（第１工程）、
次いで、抗酸化成分を、低級アルコール濃度２０体積％以上の低級アルコール水溶液からなる脱着液で、合成吸着剤より脱着させる（第２工程）。
【００１９】
本方法は、製造方法１における第１工程と第２工程を、１つの工程にまとめて簡略化したものである。即ち、製造方法１では、第１工程で、抽出物中に不活性成分または／及び低活性成分、高活性成分を一旦合成吸着剤に吸着させたのち、第２工程で、不活性成分または／及び低活性成分をアルカリ洗浄液で除去している。しかし、本方法では、第１工程では、不活性成分または／及び低活性成分を、最初から合成吸着剤に吸着させず、高活性成分のみ吸着させている。本方法は、製造方法１の方法と比較し、処理方法が簡略化されているので、製造上好ましい。
（１）第１工程
▲１▼前処理
製造方法１と同様の方法で、シソ科植物抽出液を製造した後、抽出液中の低級アルコール濃度を１５体積％以下に調整すると共に、ｐＨを６．５以上に調整する。ｐＨの調整は、製造方法１の第２工程で使用したｐＨ調節方法が使用できる。ｐＨは７以上が好ましく、通常１１以下である。１１を越えると、抗酸化成分が分解する可能性がある。
【００２０】
製造方法２では抽出液のｐＨを６．５以上に調整するのに対し、製造方法１のアルカリ洗浄液のｐＨを７．５以上に調整している。この理由は、本発明で除去したい不活性成分または／及び低活性成分が、本来アルコール濃度１５体積％以下では、ｐＨ６．５以上で吸着剤から脱着するものであり、また製造方法１では、吸着剤に接触させる抽出物溶液は通常ｐＨ４〜５の酸性なので、それを中和する分が必要になるからと考えられる。
低級アルコール濃度を１５体積％以下にする方法、好ましい低級アルコール濃度は製造方法１の第１工程の前処理と同様である。
▲２▼抽出物水溶液を合成吸着剤と接触
製造方法１と同様に、合成吸着剤をカラムに充填し、前述の前処理をした抽出物水溶液を、合成吸着剤に通液する。例えば、合成吸着剤１００ｍＬに対し、乾燥重量で１〜１０重量％の抽出物を含む抽出液を５０〜５０００ｍＬを通液させる。
【００２１】
この後、水、または低級アルコール濃度２０％未満の低級アルコール水溶液（洗浄用アルコール水溶液）で、合成吸着剤を洗浄し、ｐＨ調節剤を除去することが好ましい。この洗浄用アルコール水溶液中の低級アルコール濃度が２０％以上になると、目的とする高活性成分が脱着し、収率が低下し好ましくない。低級アルコール濃度は、好ましくは１７〜１９体積％、更に好ましくは１５〜１８体積％である。洗浄用アルコール水溶液は、合成吸着剤１００ｍＬに対し、通常５０〜３００ｍＬ、好ましくは１００〜２００ｍＬである。
（３）第２工程
製造方法１の第３工程と同様に、低級アルコール濃度２０体積％以上の低級アルコール水溶液からなる脱着液を通液し、高活性成分を脱着させる。脱着液中の低級アルコール濃度は、３０体積％以上であることが好ましい。脱着液の低級アルコール濃度は、通常６０体積％以下、好ましくは５０体積％以下である。６０体積％を越えると不活性成分が脱着してきて好ましくない。脱着液は、通常、合成樹脂１００ｍＬに対し、１００〜５００ｍＬ通液する。
【００２２】
尚、製造方法２の第１工程及び第２工程のカラムの通液速度、カラム処理時の温度は、製造方法１と同様である。又、製造方法１及び製造方法２において、低級アルコールとして、エタノールを使用することが特に好ましい。
製造方法１及び製造方法２で得られる回収液は、溶媒を一部濃縮して使用してもよいし、溶媒の全部を除去して固体として使用してもよい。
また、上述では、合成吸着剤をカラムに充填して精製する方法を例にとり説明したが、本発明の製造方法１及び製造方法２はこれに限定されるものではなく、合成吸着剤をカラムに充填せずに、バッチ式で精製してもよい。例えば、製造方法１では、シソ科植物抽出物水溶液と合成吸着剤を混合したのち溶液をろ過し、次いで合成吸着剤とアルカリ洗浄液を混合したのち溶液をろ過し、次いで合成吸着剤と脱着液を混合し、ろ過して濾液を回収してもよい。同様に、製造方法２では、ｐＨ調整した抽出液を合成吸着剤とを混合し、溶液をろ過し、次いで合成吸着剤と脱着液を混合し、ろ過して濾液を回収してもよい。
【００２３】
本発明の製造方法により、下記条件でＨＰＬＣ分析した場合、分子量が４７８の成分のピークの面積％が、２０％以上の抗酸化剤を製造することができる。
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
カラム：Inertsil ODS 80A(５μｍ４．６mm I.D.×250mm, GL Sciences Inc.)
カラム温度：４０℃
移動相：Ａ−４重量％リン酸水溶液、Ｂ−アセトニトリル
流量：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器、波長２８０ｎｍ
注入量：２５μＬ
分析時間：３５分
Gradient条件：０分（Ａ９０体積％、Ｂ１０体積％）→３０分（Ａ６０体積％、Ｂ４０体積％）→３５分（Ａ６０体積％、Ｂ４０体積％）
該分子量４７８成分、Ｃ₂₂Ｈ₂₂Ｏ₁₂の化学式で表わされる化合物である。その構造は、フラボンの一種であるルテオリンと類似した構造の物質で、フラボン骨格のＢ環の４’位と５’位およびＡ環の５位にＯＨ基を有し、Ａ環の６位と７位のいずれか一方に酸素原子を介した単糖を、他方にメトキシ基を有する構造（本明細書では、「メトキシルテオリン配糖体」と称する）と推定される。その構造式を下記に示す。ただし、糖の構造は、現時点で不明である。このものは上記の分析条件下では、ロスマリン酸のリテンションタイムを基準にして−２．６±１分のリテンションタイムを有する。
【００２４】
【化１】

（上記式中、Ｒ₁とＲ₂のいずれか一方がメチル基、他方が糖（Ｃ₆Ｈ₁₁Ｏ₅）を表す。）
抗酸化剤中の該分子量４７８成分の含有量は高い方が好ましく、好ましくは、上記分析条件において、該ピーク面積％が３０％以上であることが好ましく、４０％以上であることが好ましい。
【００２５】
本発明の製造方法で得られる抗酸化剤は、メトキシルテオリン配糖体の含有量が高く、かつ、従来の精製方法により得られた抗酸化剤より高活性であること、およびメトキシルテオリン配糖体は抗酸化成分として知られているルテオリン配糖体の誘導体であることから、このメトキシルテオリン配糖体こそが、非常に高活性な抗酸化成分であると考えられる。
【００２６】
本製造方法で得られる抗酸化剤は、高い抗酸化活性を有し、そのまま飲食品や化粧品などの抗酸化剤として使用できる。また、該抗酸化剤は、特に活性酸素消去能に優れるため、体内に取り込まれる飲食品、医薬品、医薬部外品に使用した場合、体内の活性酸素除去効果が期待される。また、皮膚や毛髪用の化粧品に使用された場合、皮膚や毛髪の活性酸素除去効果が期待される。
【００２７】
【実施例】
以下に実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、下記の実施例及び比較例において、抗酸化能評価及びＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）分析は次の通り行った。
＜抗酸化能評価＞
抗酸化能評価は、ＳＯＤ様活性をＳＯＤテストワコー（和光純約工業株式会社製）により測定し、活性酸素消去能を相対比較することにより行った。具体的な測定方法は以下の通りである。
【００２８】
各抗酸化成分を濃度０．０２５重量％となるように水に溶解し、これをＳＯＤ様活性測定用原液とした。各ＳＯＤ様活性測定用原液０．１ｍＬと酵素液（酵素原液を酵素希釈液と混合したもの。キサンチンオキシダーゼ０．０４９単位／ｍＬ）１ｍＬと発色試薬１ｍＬを混合後、３７Ｃで２０分間インキュベートし反応させた。２０分後、反応停止液２ｍＬを添加、混合して反応を停止させた。そして、反応停止後の液の５６０ｎｍにおける吸光度（Ｅ_S）を測定した。さらに、ＳＯＤ様活性測定用原液の代わりに水０．１を用いて同様に反応、反応停止させた液の吸光度（Ｅ_BL）、および、酵素液の代わりにブランク液１ｍＬを用いて同様に反応、反応停止させた液の吸光度（Ｅ_S-BL）、および、ＳＯＤ様活性測定用原液の代わり水０．１ｍＬを用い、かつ酵素液の代わりにブランク液１ｍＬを用いて同様に反応、反応停止させた液の吸光度（Ｅ_BL-BL）を測定し、次式より阻害率％を求めた。阻害率％が高いものほどＳＯＤ様活性が高いと言える。
【００２９】
【数１】
阻害率％＝｛（Ｅ_BL−Ｅ_BL-BL）−（Ｅ_S−Ｅ_S-BL）｝／（Ｅ_BL−Ｅ_BL-BL）×100
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
カラム：Inertsil ODS 80A（５μｍ４．６mm I．D．×250mm，GL Sciences Inc.）
カラム温度：４０℃
移動相：Ａ−４重量％リン酸水溶液、Ｂ−アセトニトリル
流量：１ｍＬ／ｍｉｎ
検出器：ＵＶ検出器、波長２８０ｎｍ
注入量：２５μＬ
分析時間：３５分
Gradient条件：
０分（Ａ９０体積％、Ｂ１０体積％）→３０分（Ａ６０体積％、Ｂ４０体積％）→３５分（Ａ６０体積％、Ｂ４０体積％）
実施例１
ローズマリー乾燥葉（粗切り）１００ｇに４５体積％エタノール水溶液を１０００ｍＬ加えて３時間７０℃にて還流し、その後ろ紙でろ過して抽出液を得た。ろ紙上のローズマリー抽出残さを、さらに１０００ｍＬの４５体積％エタノール水溶液にて上記と同様に、抽出操作を更に２回繰り返して抽出液を得た。これらの抽出液を合わせ約２７００ｍＬのローズマリー抽出液を得た。これを、エバポレータを用いて減圧下（約５０ｍｍＨｇ）、約５５℃にて溶媒留去し、水添加することにより、沈殿物を含むエタノール含有量１重量％以下の濃縮抽出液５００ｍＬを得た。これを、平均孔径１．６μｍのガラス繊維フィルターでろ過してろ液と沈殿物とに分けた。
【００３０】
得られたろ液より、エバポレータを用いてさらに溶媒を完全留去し、２２ｇの抗酸化成分を含む固形分を得た。この固形分を抗酸化剤原体として、以下の合成吸着剤による分画に供した。
この５重量％の抗酸化剤原体水溶液６０ｍＬをガラス製カラム（径１２．５ｍｍφ）にスチレン−ジビニルベンゼン系樹脂（三菱化学社製：ダイヤイオン^TMＨＰ２０ＳＳ）を３０ｍＬ込んだ装置に、ＳＶ＝約３の通液速度で通液し、続いてｐＨ調整剤として０．５重量％のリン酸水素２ナトリウムを添加した１０体積％エタノール水溶液（ｐＨ９．５）からなる洗浄液を６０ｍＬ通液し、その後さらに６０ｍＬの１８％エタノール水溶液（ｐＨ調整剤無添加）を通液し、合成吸着剤を洗浄した。その後、脱着液として３０体積％エタノール水溶液を９０ｍＬ通液して、カラム出口で抗酸化成分を含む脱着液９０ｍＬを回収した。この抗酸化成分を含む脱着液よりエバポレータにて溶媒を完全に留去し、０．２ｇの固体の抗酸化剤Ａを得た。該抗酸化剤の０．０２５重量％水溶液を調製し、それをＳＯＤ様活性測定用原液としてＳＯＤ様活性を測定すると同時にＨＰＬＣ分析を行い、分子量４７８の高活性抗酸化成分のピーク面積％を求めた。
【００３１】
ＳＯＤ様活性測定とＨＰＬＣ分析結果を表−１に示した。
実施例２
実施例１で得た抗酸化剤原体を、ｐＨ調整剤として１重量％のリン酸水素２ナトリウムを含む１０体積％エタノール水溶液に５重量％になるように溶解した。該溶解液のｐＨは７．０であった。該溶解液６０ｍＬをガラス製カラム（径１２．５ｍｍφ）にスチレン−ジビニルベンゼン系樹脂（三菱化学社製：ダイヤイオン^TMＨＰ２０）を３０ｍＬ込んだ装置に、ＳＶ＝約３の通液速度で通液した。続いて６０ｍＬの１８％エタノール水溶液を通液し、合成吸着剤を洗浄した。その後、脱着液として３０体積％エタノール水溶液を９０ｍＬ通液して、カラム出口で抗酸化成分を含む脱着液９０ｍＬを回収した。この抗酸化成分を含む脱着液よりエバポレータにて溶媒を完全に留去し、約０．２ｇの固体状の抗酸化剤Ｂを得た。該抗酸化剤の０．０２５重量％水溶液を調製し、それをＳＯＤ様活性測定用原液としてＳＯＤ様活性を測定すると同時にＨＰＬＣ分析を行い、分子量４７８の高活性抗酸化成分のピーク面積％を求めた。
【００３２】
ＳＯＤ様活性測定とＨＰＬＣ分析結果を表−１に示した。
比較例１
実施例１で得た抗酸化剤原体の０．０２５重量％の水溶液を調製し、それをＳＯＤ様活性測定用原液としてＳＯＤ様活性を測定すると同時にHPLC分析を行い、分子量４７８の高活性抗酸化成分のピーク面積％を求めた。
比較例２
実施例１で得た抗酸化剤原体の５重量％水溶液６０ｍＬをガラス製カラム（径１２．５ｍｍφ）にスチレン−ジビニルベンゼン系樹脂（三菱化学社製：ダイヤイオン^TMＨＰ２０ＳＳ）を３０ｍＬ込んだ装置に、ＳＶ＝約３の通液速度で通液し、続いてｐＨ調整剤として０．５重量％のリン酸を添加した１０体積％エタノール水溶液（ｐＨ２．３）からなる洗浄液を６０ｍＬ通液し、その後さらに６０ｍＬの１８％エタノール水溶液を通液し、合成吸着剤を洗浄した。その後、脱着液として３０体積％エタノール水溶液を９０ｍＬ通液して、カラム出口で抗酸化成分を含む脱着液９０ｍＬを回収した。この抗酸化成分を含む脱着液よりエバポレータにて溶媒を完全に留去し、約０．４ｇの固体状の抗酸化剤Ｃを得た。該抗酸化剤の０．０２５重量％水溶液を調製し、それをＳＯＤ様活性測定用原液としてＳＯＤ様活性を測定すると同時にＨＰＬＣ分析を行い、分子量４７８の高活性抗酸化成分のピーク面積％を求めた。
【００３３】
ＳＯＤ様活性測定とＨＰＬＣ分析結果を表−１に示した。
【００３４】
【表１】

【００３５】
【本発明の効果】
本発明の製造方法によれば、高活性抗酸化成分を高濃度に含有する抗酸化剤を製造することができる。この抗酸化剤は、食品、化粧品等の分野に特に有用であり、特に肌の美白効果が期待される。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a method for producing a highly active antioxidant. More specifically, the present invention relates to a method for producing a natural antioxidant containing a highly active antioxidant component at a high concentration by purifying an extract of a Lamiaceae plant such as rosemary.
[0002]
[Prior art]
Lamiaceae plants such as rosemary are known to contain antioxidant components, and it is well known that their extracts have a high antioxidant capacity. Furthermore, it is disclosed that the extract has functions such as skin whitening effect (Japanese Patent Laid-Open No. 7-18789) and anti-ulcer effect (Japanese Patent Laid-Open No. 2000-72685) in addition to antioxidant ability, Effective use is expected in the fields of cosmetics and medicine.
[0003]
Various methods for purifying the antioxidant component of the extract have been studied. For example, a purification treatment using an adsorbent such as activated carbon, diatomaceous earth, or acidic white earth (JP 55-18435, JP 55-55). No. 102508, JP-A-57-203445, etc.) are known.
Japanese Patent Laid-Open No. 2000-256345 discloses a polyphenol having an antioxidant action from an extract obtained by reextracting a residue obtained by extracting a plant raw material with water at low temperature with an alkali and a solution obtained by treating the previous low-temperature water extract with an adsorbent. A method is disclosed for obtaining a product in high purity. Furthermore, JP-A-2000-72685 discloses a method for obtaining a fraction containing a high content of rosmarinic acid component in rosemary by treating with an adsorbent.
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
However, the activity of the antioxidants obtained by these purification methods is not fully satisfactory, and further improvement has been demanded.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
The present inventors have made intensive studies to solve the above problems, when handling adsorbent an extract obtained by extracting the Labiatae plants with lower alcohol solution as an aqueous solution, solvent solution is contacted with an adsorbent By adjusting the pH and the composition, it was found that a highly active antioxidant component can be selectively recovered at a high concentration, and the present invention has been achieved. That is, the gist of the present invention is that a Labiatae plant is extracted with a lower alcohol aqueous solution having an alcohol concentration of 10 to 80% by weight, and the obtained extract is an aqueous solution that may contain a lower alcohol at a concentration of 15% by volume or less. The antioxidant component in the extract is adsorbed to the synthetic adsorbent by contacting with the synthetic adsorbent, and then the synthetic adsorbent may contain a lower alcohol at a concentration of 15% by volume or less. After washing with water, it consists in the production method of the antioxidant and recovering by the antioxidant component adsorbed on the synthetic adsorbent was the alcohol concentration is desorbed with 20 vol% or more of the lower alcohol solution .
[0006]
Another gist is that a Labiatae plant is extracted with a lower alcohol aqueous solution having an alcohol concentration of 10 to 80% by weight, and the obtained extract may contain a lower alcohol at a concentration of 15% by volume or less at pH 6.5 or higher. The antioxidant component in the extract is adsorbed on the synthetic adsorbent by contacting with the synthetic adsorbent as an aqueous solution , and then the antioxidant component adsorbed on the synthetic adsorbent has an alcohol concentration of 20% by volume or more. The present invention resides in a method for producing an antioxidant characterized by desorbing and recovering with a lower alcohol aqueous solution.
[0007]
Still another subject matter is, if you HPLC analysis under the following conditions, the area% of the peak component of the molecular weight is 478, resides in antioxidants consisting of rosemary extract, characterized in that at least 20% .
<HPLC analysis conditions>
Column: Inertsil ODS 80A (5 μm 4.6 mm ID × 250 mm, GL Sciences Inc.)
Column temperature: 40 ° C
Mobile phase: A-4 wt% phosphoric acid aqueous solution, B-acetonitrile Flow rate: 1 mL / min
Detector: UV detector, wavelength 280 nm
Injection volume: 25 μL
Analysis time: 35 minutes
Gradient condition: 0 minute (A 90 volume%, B 10 volume%) → 30 minutes (A 60 volume%, B 40 volume%) → 35 minutes (A 60 volume%, B 40 volume%).
[0008]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Hereinafter, the manufacturing method of the antioxidant of this invention is demonstrated in detail.
Next, the manufacturing method of this antioxidant is demonstrated. This production method is a method for selectively recovering a highly active antioxidant component (estimated to be methoxyltheolin glycoside) at a high concentration among the components contained in the Lamiaceae plant extract.
[Production Method 1]
In this method, an aqueous extract of Lamiaceae plant having a lower alcohol concentration of 15% by volume or less is brought into contact with a synthetic adsorbent to adsorb an antioxidant component to the synthetic adsorbent (first step),
Next, the synthetic adsorbent is washed with water having a pH of 7.5 or more, or a lower alcohol aqueous solution having a pH of 7.5 or more and a lower alcohol concentration of 15% by volume or less (second step),
Thereafter, the antioxidant component is desorbed from the synthetic adsorbent with a desorbing solution composed of a lower alcohol aqueous solution having a lower alcohol concentration of 20% by volume or more (third step).
(1) First Step {circle around (1)} Preparation of Lamiaceae Plant Extract The Lamiaceae plant raw material used in the present invention is not particularly limited, and examples thereof include perilla, blue mushroom, chimmento, rosemary (mannen wax) and the like. Among them, rosemary is preferable.
[0009]
As the form of the plant raw material used for the extraction of the extract, whole grass, each plant part or a mixture of two or more of these parts can be used, but preferably leaves or whole grasses are used. These plant materials may be raw or dried, but are preferably dried. The degree of pulverization is not particularly limited, but for example, a rough cut state is preferable. In extracting the antioxidant component from the plant material, water, a lower alcohol, or a lower alcohol aqueous solution is used as an extraction solvent, and a lower alcohol aqueous solution is preferable. In addition, in this specification, a lower alcohol means a C1-C4 alcohol. As the lower alcohol, either linear or branched can be used. Specifically, methanol, ethanol, n-butanol, etc. are mentioned, for example, Among these, methanol and ethanol are preferable. The alcohol concentration of the aqueous alcohol solution is usually 10 to 80% by weight, preferably 30 to 60% by weight, and more preferably 40 to 60% by weight. The amount of the extraction solvent is usually 1 to 100 times, preferably 2 to 10 times the weight of the plant material. When the amount of the extraction solvent is adjusted so that the solid concentration in the extraction solution is in the range of 0.1 to 30% by weight, preferably 1 to 10% by weight, the extraction efficiency is preferably high.
[0010]
Although the temperature at the time of extraction depends on the kind of plant material, etc., it is usually in the range of room temperature to 90 ° C, preferably 50 to 80 ° C. More preferably, the temperature is such that the aqueous alcohol solution is refluxed at normal pressure. At this time, the extractor may be an open system or a closed system. The extraction time is usually 0.5 to 10 hours, preferably 1 to 4 hours, although it depends on the raw materials and the extraction temperature.
[0011]
After the extraction treatment, a known method such as filtration is used as a means for separating the extraction solution and the plant raw material residue. The plant raw material residue after the extraction treatment may be further extracted 1 to 3 times, preferably about 2 times, and used together with the first extraction solution.
(2) Pretreatment of Labiatae plant extract When the lower alcohol concentration in the extract obtained by the above method exceeds 15% by volume, the concentration of the lower alcohol in the extract is set before the adsorbent treatment. It is necessary to lower it to 15% by volume or less. A lower alcohol concentration exceeding 15% by volume is not preferable because the antioxidant component is not sufficiently adsorbed by the adsorbent. The lower alcohol concentration should be low, preferably 10% by volume or less, more preferably 5% by volume or less, and most preferably 0.
[0012]
As a method for lowering the alcohol concentration, alcohol distillation by distillation or the like, addition of water, or a combination thereof can be considered. Alternatively, water may be completely distilled off together with alcohol to obtain a solid extract, which may be dissolved in water or an alcohol aqueous solution having an alcohol concentration of 15% by volume or less.
In the operation of lowering the alcohol concentration, a precipitate may precipitate as the alcohol concentration decreases. In order to reduce the load on the subsequent synthetic adsorbent treatment step, it is desirable to separate the precipitate by means such as filtration. In addition, since many oil-soluble antioxidant components are contained in the precipitate, it can be used for preventing oxidation of fats and oils.
(3) Contacting the aqueous extract solution with the synthetic adsorbent The aqueous extract solution having a lower alcohol concentration of 15% by volume or less is brought into contact with the synthetic adsorbent to adsorb the antioxidant component in the extract onto the synthetic adsorbent.
[0013]
The synthetic adsorbent used in the present invention is not particularly limited. For example, the specific surface area is about 300 to 1500 m ² / g, the pore volume is about 0.3 to 2.5 mL / g, and the most frequent radius is 20 to. About 700 mm is preferable. Specific examples of such synthetic resins include Diaion ^™ HP20SS, HP20, HP21 and other HP resins, Sepabeads ^™ SP825, SP850, SP207 and other SP resins (above, manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation), Amberlite XAD-2, Styrene-divinylbenzene resins such as XAD-4 and XAD-16 (above, manufactured by Rohm and Haas); Diaion ^™ HP2MG (produced by Mitsubishi Chemical), Amberlite XAD-7, XAD-8 (above, Rohm and Haas) Acrylic resins such as those manufactured by Hearth).
[0014]
The synthetic adsorbent is usually packed in a column. The column shape is not particularly limited, but a cylindrical column is usually used. A synthetic adsorbent is usually used for fractionation of an extract after being sequentially washed with ethanol and water after being packed in a column. The extract solution is passed through the synthetic adsorbent to adsorb the antioxidant component in the extract onto the adsorbent. The amount of the extract solution per one time used for the adsorbent treatment is arbitrary, but if the amount of the extract solution is small relative to the amount of the synthetic adsorbent used, the amount of treatment per one time will be small, which is inefficient, If it is too much, the adsorption of the antioxidant component in the extract to the synthetic adsorbent is saturated, resulting in a portion that cannot be adsorbed, and the loss of the target antioxidant component increases. Therefore, it is efficient and preferable to treat the extract solution in such an amount that the adsorption of the target antioxidant component in the extract solution to the resin is not completely saturated. For example, 50 to 5000 mL of an aqueous solution containing 1 to 10% by weight of an extract by dry weight is passed through 100 mL of the synthetic adsorbent.
(2) Passing water of pH 7.5 or higher or lower alcohol aqueous solution (hereinafter referred to as “alkaline cleaning liquid”) having a pH of 7.5 or higher and a lower alcohol concentration of 15% by volume or lower to the second-step synthetic adsorbent as a cleaning liquid. And wash the synthetic adsorbent.
[0015]
By washing the synthetic adsorbent with this alkaline washing solution, inactive components and / or low active components among the components adsorbed on the synthetic adsorbent are desorbed and removed. On the other hand, the highly active component intended for recovery in the present invention is not desorbed. The pH of the cleaning liquid is preferably 8 or more, more preferably 9 or more, and usually 12 or less. If it exceeds 12, the antioxidant component may be decomposed.
[0016]
The pH adjuster for water or a lower alcohol aqueous solution is not particularly limited, and examples thereof include sodium hydroxide, potassium hydroxide, disodium hydrogen phosphate, dipotassium hydrogen phosphate, sodium silicate, sodium carbonate and the like. Of these, disodium hydrogen phosphate is preferred. Further, the pH may be adjusted using a generally known buffer solution, that is, a phosphate buffer solution, a Tris buffer solution, a Maclvain buffer solution, or the like.
[0017]
When the alcohol concentration in the alkaline cleaning liquid exceeds 15% by volume, it is not preferable because highly active components are also desorbed, preferably 12% by volume or less, and usually 5% by volume or more.
The alkali cleaning solution is usually used in an amount of 50 to 500 mL, preferably 100 to 300 mL, with respect to 100 mL of the synthetic adsorbent.
After washing with an alkaline washing solution, it is preferable to wash the synthetic adsorbent with water or a lower alcohol aqueous solution having a lower alcohol concentration of less than 20% by volume (hereinafter referred to as “washing alcohol aqueous solution”) to remove the pH regulator. When the concentration of the lower alcohol in the cleaning alcohol aqueous solution is 20% or more, the target highly active component is desorbed, and the yield is unfavorable. The lower alcohol concentration is preferably 17 to 19% by volume, more preferably 15 to 18% by volume. The aqueous alcohol solution for washing is usually used in an amount of 50 to 300 mL, preferably 100 to 200 mL, with respect to 100 mL of the synthetic adsorbent.
(3) A desorption solution comprising a lower alcohol aqueous solution having a lower alcohol concentration of 20% by volume or more is passed through the synthetic adsorbent after the third step washing to desorb the highly active component. The lower alcohol concentration in the desorption liquid is preferably 25% by volume or more, and more preferably 30% by volume or more. The concentration of the lower alcohol in the desorption liquid is usually 60% by volume or less, preferably 50% by volume or less. If it exceeds 60% by volume, the inactive component and / or the low active component is desorbed, which is not preferable. The desorption liquid usually passes through 100 to 500 mL with respect to 100 mL of synthetic resin.
[0018]
The column flow rate in the first to third steps is usually 0.1 to 20, preferably 0.5 to SV (liquid flow rate per hour / apparent volume of resin). 10, more preferably in the range of 1-5. Moreover, as temperature in that case, it is normally implemented at 5-40 degreeC.
[Production Method 2]
In this method, an aqueous solution of Lamiaceae plant extract having a pH of 6.5 or more and a lower alcohol concentration of 15% by volume or less is brought into contact with a synthetic adsorbent to adsorb an antioxidant component to the synthetic adsorbent (first step),
Next, the antioxidant component is desorbed from the synthetic adsorbent with a desorption liquid composed of a lower alcohol aqueous solution having a lower alcohol concentration of 20% by volume or more (second step).
[0019]
In this method, the first step and the second step in the production method 1 are combined into one step and simplified. That is, in the production method 1, in the first step, the inactive component or / and the low active component and the high active component are once adsorbed on the synthetic adsorbent in the extract, and then in the second step, the inactive component or / In addition, the low active ingredient is removed with an alkaline cleaning solution. However, in this method, in the first step, inactive components and / or low active components are not adsorbed on the synthetic adsorbent from the beginning, but only high active components are adsorbed. This method is preferable in manufacturing because the processing method is simplified as compared with the method of manufacturing method 1.
(1) First step {circle around (1)} After producing a Lamiaceae plant extract in the same manner as in pretreatment production method 1, the lower alcohol concentration in the extract is adjusted to 15% by volume or less, and the pH is adjusted to 6 Adjust to 5 or more. The pH adjustment method used in the second step of production method 1 can be used for pH adjustment. The pH is preferably 7 or more and usually 11 or less. If it exceeds 11, the antioxidant component may be decomposed.
[0020]
In manufacturing method 2, the pH of the extract is adjusted to 6.5 or higher, whereas the pH of the alkaline cleaning liquid in manufacturing method 1 is adjusted to 7.5 or higher. This is because the inactive component and / or low active component to be removed in the present invention is essentially desorbed from the adsorbent at pH 6.5 or higher when the alcohol concentration is 15% by volume or lower. It is considered that the extract solution to be brought into contact with the agent is usually acidic at pH 4 to 5, so that it is necessary to neutralize it.
The method for setting the lower alcohol concentration to 15% by volume or less, and the preferred lower alcohol concentration are the same as in the pretreatment in the first step of production method 1.
{Circle around (2)} The aqueous extract solution is contacted with the synthetic adsorbent In the same manner as in Production Method 1, the column is filled with the synthetic adsorbent, and the aqueous extract solution subjected to the above-described pretreatment is passed through the synthetic adsorbent. For example, with respect to 100 mL of synthetic adsorbents, 50 to 5000 mL of an extract containing 1 to 10% by weight of an extract by dry weight is passed.
[0021]
Thereafter, the synthetic adsorbent is preferably washed with water or a lower alcohol aqueous solution (washing alcohol aqueous solution) having a lower alcohol concentration of less than 20% to remove the pH regulator. When the concentration of the lower alcohol in the cleaning alcohol aqueous solution is 20% or more, the target highly active component is desorbed, and the yield is unfavorable. The lower alcohol concentration is preferably 17 to 19% by volume, more preferably 15 to 18% by volume. The alcohol aqueous solution for washing is usually 50 to 300 mL, preferably 100 to 200 mL with respect to 100 mL of the synthetic adsorbent.
(3) Second step As in the third step of the production method 1, a desorption solution comprising a lower alcohol aqueous solution having a lower alcohol concentration of 20% by volume or more is passed through to desorb highly active components. The lower alcohol concentration in the desorption liquid is preferably 30% by volume or more. The concentration of the lower alcohol in the desorption liquid is usually 60% by volume or less, preferably 50% by volume or less. If it exceeds 60% by volume, the inactive components are desorbed, which is not preferable. The desorption liquid usually passes through 100 to 500 mL with respect to 100 mL of synthetic resin.
[0022]
In addition, the liquid flow rate of the column of the 1st process of the manufacturing method 2 and a 2nd process and the temperature at the time of a column process are the same as that of the manufacturing method 1. In production method 1 and production method 2, it is particularly preferable to use ethanol as the lower alcohol.
The recovered liquid obtained by Production Method 1 and Production Method 2 may be used after partially concentrating the solvent, or may be used as a solid after removing all of the solvent.
In the above description, the method for purifying the column with the synthetic adsorbent is described as an example. However, the production method 1 and the production method 2 of the present invention are not limited to this, and the synthetic adsorbent is used in the column. You may refine | purify by a batch type, without filling. For example, in the production method 1, the aqueous solution of the Lamiaceae plant extract and the synthetic adsorbent are mixed, the solution is filtered, the synthetic adsorbent and the alkaline washing liquid are mixed, the solution is filtered, and then the synthetic adsorbent and the desorbing liquid are mixed. The filtrate may be recovered by mixing and filtering. Similarly, in the production method 2, the pH-adjusted extract may be mixed with a synthetic adsorbent, the solution may be filtered, then the synthetic adsorbent and the desorption liquid may be mixed, and filtered to collect the filtrate.
[0023]
The production method of the present invention, it is possible if a result of the HPLC analysis under the following conditions, the molecular weight area% of the peak components of 478, to produce a 20% or more antioxidants.
<HPLC analysis conditions>
Column: Inertsil ODS 80A (5 μm 4.6 mm ID × 250 mm, GL Sciences Inc.)
Column temperature: 40 ° C
Mobile phase: A-4 wt% phosphoric acid aqueous solution, B-acetonitrile Flow rate: 1 mL / min
Detector: UV detector, wavelength 280 nm
Injection volume: 25 μL
Analysis time: 35 minutes
Gradient condition: 0 minute (A 90 volume%, B 10 volume%) → 30 minutes (A 60 volume%, B 40 volume%) → 35 minutes (A 60 volume%, B 40 volume%)
This is a compound represented by the chemical formula of the molecular weight 478 component, C ₂₂ H ₂₂ O ₁₂ . Its structure is similar to luteolin, which is a kind of flavone, and has OH groups at the 4 'and 5' positions of the B ring and the 5 position of the A ring of the flavone skeleton, It is presumed to be a structure having a monosaccharide via an oxygen atom at any one of the 7 positions and a methoxy group on the other (referred to herein as “methoxyltheolin glycoside”). Its structural formula is shown below. However, the structure of the sugar is currently unknown. This has a retention time of −2.6 ± 1 min on the basis of the retention time of rosmarinic acid under the above analysis conditions.
[0024]
[Chemical 1]

(In the above formula, _one of R ₁ and R _{2 represents} a methyl group, and the other represents a sugar (C ₆ H ₁₁ O ₅ ).)
The content of the molecular weight 478 component in the antioxidant is preferably higher. Preferably, in the above analysis conditions, the peak area% is preferably 30% or more, and more preferably 40% or more.
[0025]
The antioxidant obtained by the production method of the present invention has a high content of methoxy luteolin glycoside and is more active than the antioxidant obtained by the conventional purification method, and methoxy luteolin glycoside Is a derivative of luteolin glycoside which is known as an antioxidant component, so this methoxy luteolin glycoside is considered to be a very highly active antioxidant component.
[0026]
The antioxidant obtained by this production method has high antioxidant activity and can be used as it is as an antioxidant for foods and beverages and cosmetics. Moreover, since this antioxidant is particularly excellent in the ability to scavenge active oxygen, when used in foods and drinks, pharmaceuticals, and quasi-drugs that are taken into the body, the effect of removing active oxygen in the body is expected. In addition, when used in cosmetics for skin and hair, an effect of removing active oxygen from the skin and hair is expected.
[0027]
【Example】
EXAMPLES The present invention will be specifically described below with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples. In the following Examples and Comparative Examples, the antioxidant ability evaluation and HPLC (high performance liquid chromatography) analysis were performed as follows.
<Antioxidant evaluation>
Antioxidant ability evaluation was performed by measuring SOD-like activity with SOD Test Wako (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and comparing active oxygen scavenging ability relative to each other. The specific measurement method is as follows.
[0028]
Each antioxidant component was dissolved in water to a concentration of 0.025% by weight, and this was used as a stock solution for measuring SOD-like activity. Each SOD-like activity measurement stock solution (0.1 mL) and enzyme solution (enzyme solution mixed with enzyme dilution solution, 1 mL of xanthine oxidase 0.049 units / mL) and 1 mL of color reagent were mixed, and incubated at 37C for 20 minutes to react. I let you. After 20 minutes, 2 mL of a reaction stop solution was added and mixed to stop the reaction. Then, the absorbance was measured (E _S) in the 560nm of the solution after the reaction is stopped. Furthermore, the reaction was similarly performed using water 0.1 in place of the SOD-like activity measuring stock solution, and the reaction was similarly performed using the absorbance (E _BL ) of the liquid whose reaction was stopped, and 1 mL of the blank liquid instead of the enzyme liquid. , absorbance of the reaction was stopped liquid (E _S-BL), and, using instead water 0.1mL of SOD-like activity measuring stock and reacted in the same manner using a blank solution 1mL instead of the enzyme solution, the reaction is stopped The absorbance (E _BL-BL ) of the solution was measured, and the inhibition rate% was determined from the following formula. It can be said that the higher the inhibition rate%, the higher the SOD-like activity.
[0029]
[Expression 1]
Inhibition rate% = {(E _BL -E _BL-BL )-(E _S -E _S-BL )} / (E _BL -E _BL-BL ) × 100
<HPLC analysis conditions>
Column: Inertsil ODS 80A (5 μm 4.6 mm ID × 250 mm, GL Sciences Inc.)
Column temperature: 40 ° C
Mobile phase: A-4 wt% phosphoric acid aqueous solution, B-acetonitrile flow rate: 1 mL / min
Detector: UV detector, wavelength 280 nm
Injection volume: 25 μL
Analysis time: 35 minutes
Gradient condition:
0 minutes (A 90 volume%, B 10 volume%) → 30 minutes (A 60 volume%, B 40 volume%) → 35 minutes (A 60 volume%, B 40 volume%)
Example 1
1000 mL of 45 volume% ethanol aqueous solution was added to 100 g of dried rosemary leaves (coarse cuts), and the mixture was refluxed at 70 ° C. for 3 hours. The rosemary extraction residue on the filter paper was further extracted twice with 1000 mL of 45 vol% ethanol aqueous solution in the same manner as described above to obtain an extract. These extracts were combined to obtain about 2700 mL of rosemary extract. The solvent was distilled off at about 55 ° C. under reduced pressure (about 50 mmHg) using an evaporator, and water was added to obtain 500 mL of a concentrated extract having an ethanol content of 1 wt% or less including a precipitate. This was filtered through a glass fiber filter having an average pore size of 1.6 μm to separate a filtrate and a precipitate.
[0030]
From the obtained filtrate, the solvent was further completely distilled off using an evaporator to obtain a solid content containing 22 g of an antioxidant component. This solid content was subjected to fractionation using the following synthetic adsorbent as an antioxidant base.
In an apparatus in which 60 mL of this 5% by weight aqueous solution of antioxidant raw material was placed in a glass column (diameter 12.5 mmφ) with 30 mL of styrene-divinylbenzene resin (Mitsubishi Chemical Corporation: Diaion ^™ HP20SS), SV = about Next, 60 mL of a cleaning solution composed of a 10 vol% ethanol aqueous solution (pH 9.5) to which 0.5 wt% of disodium hydrogen phosphate was added as a pH adjusting agent was passed. Further, 60 mL of 18% ethanol aqueous solution (no pH adjuster added) was passed through to wash the synthetic adsorbent. Thereafter, 90 mL of a 30% by volume ethanol aqueous solution was passed as a desorption solution, and 90 mL of the desorption solution containing an antioxidant component was recovered at the column outlet. The solvent was completely distilled off from the desorption solution containing the antioxidant component by an evaporator to obtain 0.2 g of solid antioxidant A. A 0.025% by weight aqueous solution of the antioxidant is prepared, and SOD-like activity is measured as a stock solution for measuring SOD-like activity. It was.
[0031]
The SOD-like activity measurement and HPLC analysis results are shown in Table 1.
Example 2
The antioxidant base obtained in Example 1 was dissolved in a 10% by volume ethanol aqueous solution containing 1% by weight disodium hydrogen phosphate as a pH adjuster so as to be 5% by weight. The pH of the solution was 7.0. 60 mL of the solution was passed through a glass column (diameter: 12.5 mmφ) with 30 mL of styrene-divinylbenzene resin (Mitsubishi Chemical Corporation: Diaion ^™ HP20) at a rate of SV = approximately 3. did. Subsequently, 60 mL of 18% ethanol aqueous solution was passed through to wash the synthetic adsorbent. Thereafter, 90 mL of a 30% by volume ethanol aqueous solution was passed as a desorption solution, and 90 mL of the desorption solution containing an antioxidant component was recovered at the column outlet. The solvent was completely distilled off from the desorption solution containing the antioxidant component by an evaporator, and about 0.2 g of solid antioxidant B was obtained. A 0.025% by weight aqueous solution of the antioxidant was prepared, and SOD-like activity was measured as a stock solution for measuring SOD-like activity. Simultaneously, HPLC analysis was performed to determine the peak area% of a highly active antioxidant component having a molecular weight of 478. It was.
[0032]
The SOD-like activity measurement and HPLC analysis results are shown in Table 1.
Comparative Example 1
A 0.025% by weight aqueous solution of the antioxidant raw material obtained in Example 1 was prepared, and this was used as a stock solution for measuring SOD-like activity. The peak area% of the oxidation component was determined.
Comparative Example 2
An apparatus in which 60 mL of a 5 wt% aqueous solution of the antioxidant base obtained in Example 1 was placed in a glass column (diameter: 12.5 mmφ) with 30 mL of styrene-divinylbenzene resin (Made by Mitsubishi Chemical Corporation: Diaion ^™ HP20SS). Then, SV = approximately 3 was passed through, followed by 60 mL of a cleaning solution composed of a 10% by volume ethanol aqueous solution (pH 2.3) to which 0.5% by weight of phosphoric acid was added as a pH adjuster. Thereafter, another 60 mL of 18% ethanol aqueous solution was passed through to wash the synthetic adsorbent. Thereafter, 90 mL of a 30% by volume ethanol aqueous solution was passed as a desorption solution, and 90 mL of the desorption solution containing an antioxidant component was recovered at the column outlet. The solvent was completely distilled off from the desorption solution containing the antioxidant component by an evaporator to obtain about 0.4 g of a solid antioxidant C. A 0.025% by weight aqueous solution of the antioxidant is prepared, and SOD-like activity is measured as a stock solution for measuring SOD-like activity. It was.
[0033]
The SOD-like activity measurement and HPLC analysis results are shown in Table 1.
[0034]
[Table 1]

[0035]
[Effect of the present invention]
According to the production method of the present invention, an antioxidant containing a high activity antioxidant component in a high concentration can be produced. This antioxidant is particularly useful in the fields of food, cosmetics and the like, and is expected to have a skin whitening effect.

Claims

A Lamiaceae plant is extracted with a lower alcohol aqueous solution having an alcohol concentration of 10 to 80% by weight, and the obtained extract is brought into contact with a synthetic adsorbent as an aqueous solution that may contain a lower alcohol at a concentration of 15% by volume or less. The antioxidant component in the extract is adsorbed on a synthetic adsorbent, and then the synthetic adsorbent is washed with water having a pH of 7.5 or more, which may contain a lower alcohol at a concentration of 15% by volume or less. A method for producing an antioxidant, characterized in that an antioxidant component adsorbed on a synthetic adsorbent is desorbed and recovered with a lower alcohol aqueous solution having an alcohol concentration of 20 vol% or more.

The synthetic adsorbent adsorbed with the antioxidant component is washed with water having a pH of 8 to 12 containing a lower alcohol at a concentration of 5 to 12% by volume. Method.

A Lamiaceae plant is extracted with a lower alcohol aqueous solution having an alcohol concentration of 10 to 80% by weight, and the obtained extract is synthesized as an aqueous solution having a pH of 6.5 or more, which may contain a lower alcohol at a concentration of 15% by volume or less. The antioxidant component in the extract is adsorbed on the synthetic adsorbent by contacting with the adsorbent, and then the antioxidant component adsorbed on the synthetic adsorbent is mixed with a lower alcohol aqueous solution having an alcohol concentration of 20% by volume or more. A method for producing an antioxidant, characterized by desorbing and collecting.

The method for producing an antioxidant according to any one of claims 1 to 3, wherein the Labiatae plant is rosemary.

Method for producing an antioxidant according to any one of claims 1 to 4, wherein extracting the Labiatae plant with an alcohol concentration of 30 to 60 wt% of a lower alcohol solution.

The method for producing an antioxidant according to any one of claims 1 to 5, wherein the synthetic adsorbent is a styrene-divinylbenzene resin.

7. The method for producing an antioxidant according to claim 1, wherein the antioxidant component adsorbed on the synthetic adsorbent is desorbed with a lower alcohol aqueous solution having an alcohol concentration of 30 to 60% by volume. .

An antioxidant comprising a rosemary extract, wherein the peak area% of a component having a molecular weight of 478 is 20% or more when subjected to HPLC analysis under the following conditions.
<HPLC analysis conditions>
Column: Inertsil ODS 80A (5 μm 4.6 mm ID × 250 mm, GL Sciences Inc.)
Column temperature: 40 ° C
Mobile phase: A-4 wt% phosphoric acid aqueous solution, B-acetonitrile Flow rate: 1 mL / min
Detector: UV detector, wavelength 280 nm
Injection volume: 25 μL
Analysis time: 35 minutes
Gradient condition: 0 minute (A 90 volume%, B 10 volume%) → 30 minutes (A 60 volume%, B 40 volume%) → 35 minutes (A 60 volume%, B 40 volume%).

The antioxidant according to claim 8, wherein the component having a molecular weight of 478 is a compound represented by the following formula.

(In the formula, _one of R ₁ and R _{2 represents} a methyl group, and the other represents a sugar ((C ₆ H ₁₁ O ₅ ).)