JP4087249B2

JP4087249B2 - Treatment for chronic hepatitis B

Info

Publication number: JP4087249B2
Application number: JP2002545723A
Authority: JP
Inventors: 明治渡辺; 清博樋口; 宏紀早澤; 進寺口; 恒治山内
Original assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Current assignee: Morinaga Milk Industry Co Ltd
Priority date: 2000-11-30
Filing date: 2001-11-30
Publication date: 2008-05-21
Anticipated expiration: 2021-11-30
Also published as: CN1287855C; WO2002043753A8; CN1446099A; HK1057489A1; JPWO2002043753A1; WO2002043753A1; KR20030045025A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ラクトフェリン、又はラクトフェリン、プロバイオティクス及びプレバイオティクスの混合物を有効成分として含有するＢ型慢性肝炎治療剤に関する。更に詳しくは、本発明は、ラクトフェリンが金属非飽和ラクトフェリン、金属飽和ラクトフェリン、又はアポラクトフェリン（以下、これらをまとめてラクトフェリン類と記載することがある。）であり、プロバイオティクスがビフィドバクテリウム属に属する微生物、ラクトバチルス属に属する微生物及びストレプトコッカス属に属する微生物からなる群より選択される少なくとも１種類以上の微生物の菌末であるＢ型慢性肝炎治療剤、プレバイオティクスがオリゴ糖であるＢ型慢性肝炎治療剤に関する。また、本発明は、Ｂ型慢性肝炎治療剤製造のためのラクトフェリンの使用、Ｂ型慢性肝炎治療剤製造のためのラクトフェリン、プロバイオティクス及びプレバイオティクスの混合物の使用に関する。
本明細書において百分率は、特に断りのない限り質量による表示である。
【０００２】
【従来の技術】
肝炎という病名で呼ばれるものとしては、ウイルス性肝炎、自己免疫性肝炎、アルコール性肝炎、薬剤性肝炎などがあり、これらは、血中肝炎ウイルスマーカーの測定、抗体測定、血液検査などの検査を行うことによって鑑別されている。いずれの原因であっても、肝炎は、放置すると慢性化し、肝の炎症の程度に応じて一部は肝硬変に進行する。さらに、肝硬変の進行によって肝癌の発生、肝不全といった重大な合併症の出現がみられる。またＢ型肝炎ウイルス感染では重症化し、劇症化することもあり、慢性肝炎の原因により治療の目的も異なってくる。
ウイルス性肝炎は、肝炎ウイルスの感染の結果発症するが、その病像は感染した肝炎ウイルスの種類によって大いに異なる。現在までのところ、ウイルス肝炎を惹起する肝炎ウイルスとしては、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、Ｇ型肝炎ウイルス等が知られている。このうち、Ａ型肝炎は慢性化しないこと、Ｅ型肝炎は汚染地域で汚染された飲料水や生ものを摂取しなければ発症しないこと、Ｇ型肝炎はその臨床像が不詳であることなどから、日常しばしば遭遇するウイルス肝炎は慢性のＢ型肝炎とＣ型肝炎である。
Ｂ型肝炎ウイルスは、ＤＮＡウイルスであり、ＲＮＡウイルスであるＣ型肝炎ウイルスなどの他の肝炎ウイルスとは異なるだけでなく、その遺伝子複製過程でＲＮＡ中間体ができ、それがＤＮＡに逆転写されたり、また遺伝子が肝細胞の染色体に頻繁に組み込まれるなどの特徴を持っている。また、Ｂ型肝炎ウイルスは、Ｃ型肝炎ウイルスに比べ感染力が強いことから、Ｂ型肝炎ウイルスの感染経路は多岐にわたっている。
Ｂ型肝炎には、無症状に経過して慢性肝炎化する病態と、明らかに急性肝炎として発症する病態が存在する。Ｂ型肝炎の病態及びその進展は、Ｃ型肝炎と大きく異なり、肝硬変や肝細胞癌だけでなく、極めて多彩で複雑である（佐藤信絋編、別冊・医学のあゆみ、第１版、第２７頁、医歯薬出版株式会社、１９９９年）。Ｃ型肝炎の場合は、ウイルスを減少させるインターフェロン療法が第一選択とされている。一方、Ｂ型肝炎の場合、ウイルスを根本的に減少排除する根治的療法だけでなく、肝炎ウイルスから肝を守る非根治療法などの病態に適した治療法が用いられている（佐藤信絋編、別冊・医学のあゆみ、第１版、第３１頁、医歯薬出版株式会社、１９９９年）が、有効率が低く、種々の副作用を持つなどの問題点がある。
従来、Ｂ型慢性肝炎に対する治療薬剤としては、ステロイド、インターフェロン、強力ネオミノファーゲンＣ（ミノファーゲン製薬社製。以下ＳＮＭＣと略記することがある。）及びウルソデオキシコール酸等が使用されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、これらの治療剤は、有効性が低く、また以下のような問題点を有する。すなわち、ステロイドを短期間に比較的大量に使用した後に急激に中断し、強い免疫賦活作用を発揮させるステロイド離脱療法では、肝炎の重症化をきたす可能性がある。また、インターフェロン療法では、間質性肺炎及び鬱などの重篤な副作用が起き易い。また、ＳＮＭＣなどでは、高血圧及び浮腫などの副作用が起き易い。
前述のとおり、従来から、Ｂ型慢性肝炎の治療剤は、副作用や他の薬剤との併用に関する問題が懸念されることから、治療効果の有効性が高く、副作用が少ない、Ｂ型慢性肝炎に対する治療薬剤の開発が急務の課題となっていた。
さらに、世界保健機構によると、世界中でＢ型肝炎ウイルスの感染者は２０億人を超え、その中でもおよそ５億人が慢性の感染者であることが推定されており、世界的規模でＢ型肝炎ウイルスに対する予防とともに、Ｂ型慢性肝炎の治療が課題となっていた。
本発明は、前記事情に鑑みてなされたものであり、治療の有効率が高く、且つ連続摂取可能なＢ型慢性肝炎治療剤、該Ｂ型慢性肝炎治療剤製造のための有効成分の使用、該Ｂ型慢性肝炎治療剤の有効成分を用いたＢ型慢性肝炎の治療方法を提供することを課題とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、Ｂ型慢性肝炎の優れた治療効果を有する化合物について鋭意研究を行った結果、ラクトフェリンに着目した。
ラクトフェリンは、涙、唾液、末梢血、乳汁等に含まれている無害、かつ天然の鉄結合蛋白質（１分子当たり２個の鉄イオンを結合可能）であり、分子量は、ウシ・ラクトフェリンが８６，０００ダルトン、ヒト・ラクトフェリンが８８，０００ダルトンである（今堀和友・山川民夫監修、「生化学辞典」、第２版、第１３９０頁、東京化学同人、１９９０年）。
現在までに、ラクトフェリンの効果は、大腸菌、カンジダ菌、クロストリジウム菌等の有害微生物に対して抗菌作用を示すこと［ジャーナル・オブ・ペディアトリクス（ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｅｄｉａｔｒｉｃｓ）、第９４巻、第１頁、１９７９年］、ヒト及び動物の腸内にビフィズス菌、乳酸菌等の有用細菌を定着するのに有効であること（特許第２５３２９１１号公報）、ビフィズス菌増殖因子であること（特開平２−２２５４１９号公報）、及びサイトメガロウイルス、ヘルペスウイルス、ヒト免疫不全ウイルスに対して抗ウイルス作用を示すこと［アドバンシス・イン・エクスペリメンタル・メディシン・アンド・バイオロジー（ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＢｉｏｌｏｇｙ）、第４４３巻、第１９９頁、１９９８年］がそれぞれ報告されている。
更に、ラクトフェリンは、免疫賦活作用（特開平７−１７９３５５号公報）、細胞増殖作用（特開平６−４８９５５号公報）、抗腫瘍作用［キャンサー・リサーチ（ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ）、第５４巻、第２３１０頁、１９９４年］、疾病の治療剤に応用した抗リウマチ剤（特開平５−１８６３６８号公報）、及び薬剤に起因する慢性肝障害に対する改善効果が示された肝機能改善剤（ＷＯ００／０６１９２号公報）等、様々な作用をもつ乳タンパク質として開示されている。
しかしながら、ラクトフェリン、又はラクトフェリン、プロバイオティクス及びプレバイオティクスの混合物が、肝炎の中でもＢ型肝炎ウイルスによる慢性肝炎の治療に有効であることは知られておらず、文献も皆無であった。
【０００５】
本発明者らは、Ｂ型慢性肝炎患者へ、ラクトフェリン、又はラクトフェリン、プロバイオティクス及びプレバイオティクスの混合物を３ヶ月間以上の期間にわたって経口投与した結果、一時的に緩和にアラニンアミノトランスフェラーゼ（ａｌａｎｉｎｅａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ：以下、ＡＬＴと略記することがある。）値が上昇して宿主の免疫賦活化が確認された後、Ｂ型肝炎に対して有効率が高い治療効果が導かれ、且つ治療に伴う副作用が無いことを見い出し、本発明を完成した。
【０００６】
前記課題を解決する本発明の第一の発明は、ラクトフェリンを有効成分として含有するＢ型慢性肝炎治療剤である。
前記課題を解決する本発明の第二の発明は、ラクトフェリン、ビフィドバクテリウム属に属する微生物、ラクトバチルス属に属する微生物、及びストレプトコッカス属に属する微生物からなる群より選択される少なくとも１種類以上の微生物の菌末であるプロバイオティクス、並びにオリゴ糖であるプレバイオティクスの混合物を有効成分として含有するＢ型慢性肝炎治療剤である。
前記課題を解決する本発明の第三の発明は、第一の発明のＢ型慢性肝炎治療剤製造のためのラクトフェリンの使用である。前記課題を解決する本発明の第四の発明は、第二の発明のＢ型慢性肝炎治療剤製造のためのラクトフェリン、ビフィドバクテリウム属に属する微生物、ラクトバチルス属に属する微生物、及びストレプトコッカス属に属する微生物からなる群より選択される少なくとも１種類以上の微生物の菌末であるプロバイオティクス、並びにオリゴ糖であるプレバイオティクスの混合物の使用である。
【０００７】
【発明の実施の形態】
次に、本発明について具体的に説明する。
本発明のＢ型慢性肝炎治療剤において、有効成分として使用するラクトフェリンは、市販品であってもよく、あるいは哺乳類（例えば、ヒト、ウシ、水牛、ウマ、ヤギ、ヒツジ等）の初乳、移行乳、常乳、末期乳等、これらの処理物である脱脂乳、ホエー等から、イオン交換クロマトグラフィー等の常法により分離し、必要に応じて精製したラクトフェリンであってもよい。さらに、ラクトフェリンから常法により鉄を除去したアポラクトフェリン、アポラクトフェリンに鉄、銅、亜鉛、マンガン等の金属を一部又は完全にキレートさせた金属非飽和ラクトフェリン又は金属飽和ラクトフェリンであってもよい。
また、天然のヒト・ラクトフェリンは、大量に製造することはできないが、組換えＤＮＡ技術により得られる組換え真菌、組換え乳牛（トランスジェニック・カウ）等により生産されるヒト・ラクトフェリンも本発明に使用することができる。
【０００８】
本発明のＢ型慢性肝炎治療剤に配合されるプロバイオティクスは、ヒトの健康に有益な作用を示す、生きている細菌のことを指し、ビフィドバクテリウム属に属する微生物、ラクトバチルス属に属する微生物及びストレプトコッカス属に属する微生物の菌末などを例示することができる。なお、菌末は、市販品または公知の方法（例えば、特開平１−２２１３１９号公報に記載の方法等）により調製したものを使用することができる。
【０００９】
本発明のＢ型慢性肝炎治療剤に配合されるプレバイオティクスは、腸管内に生息しているビフィズス菌などの限定した菌を特異的に増殖させることにより、ヒトの健康に有益な作用を示す、難消化性の食品成分であり、ラクチュロースなどのオリゴ糖を例示することができる。なお、ラクチュロースは、肝性脳症および肝性昏睡の症状を低減する作用が知られている（精神医学、第１５巻、第１０号、第１１０１頁、１９７３年）が、Ｂ型慢性肝炎の治療に有効であることは知られていない。
【００１０】
上述したラクトフェリン、又はラクトフェリンとプロバイオティクスとプレバイオティクスとの混合物を有効成分として含む本発明のＢ型慢性肝炎治療剤は、公知の方法により種々の態様に製剤化され、経口投与される。具体的製剤として、錠剤（糖衣錠、コーティング錠、バッカル錠を含む。）、散剤、カプセル剤（ソフトカプセルを含む。）、顆粒剤（コーティングしたものを含む。）、丸剤、トローチ剤、液剤又はこれらの製剤学的に許容され得る徐放製剤等を例示することができる。
前記の製剤は、公知の製剤学的製法に準じ、製剤として薬理学的に許容され得る担体、賦形剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤等と共に医薬組成物として製剤化される。
これらの製剤に用いる担体及び賦形剤としては、乳糖、ブドウ糖、白糖、マンニトール、馬鈴薯澱粉、トウモロコシ澱粉、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、結晶セルロース、カンゾウ末、ゲンチアナ末など、結合剤としては例えば澱粉、ゼラチン、シロップ、ポリビニルアルコール、ポリビニルエーテル、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース等を例示することができる。
また、崩壊剤としては、澱粉、寒天、ゼラチン末、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、結晶セルロース、炭酸カルシウム、炭酸水素ナトリウム、及びアルギン酸ナトリウム等を、それぞれ例示することができる。
更に、滑沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、水素添加植物油、及びマクロゴール等、着色剤としては医薬品に添加することが許容されている赤色２号、黄色４号、及び青色１号等を、それぞれ例示することができる。
錠剤及び顆粒剤は、必要に応じ白糖、ヒドロキシプロピルセルロース、精製セラック、ゼラチン、ソルビトール、グリセリン、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、フタル酸セルロースアセテート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、メチルメタクリレート、及びメタアクリル酸重合体等により被膜することもできる。
【００１１】
本発明のＢ型慢性肝炎治療剤は、有効成分であるラクトフェリンを薬剤１ｇ当たり少なくとも１ｍｇ含むことが望ましい。投与量は、年齢、症状等により異なるが、ヒト体重１ｋｇ当たり少なくとも１ｍｇの割合で、ヒト一人１日当たり２０ｍｇ〜１５ｇ、特に１００ｍｇ〜１０ｇ投与されることが望ましい。投与方法は、経口的に投与することが好ましく、１日に１回又は数回に分けて投与することができる。また、本発明の第二の発明のＢ型慢性肝炎治療剤、即ちラクトフェリン、プロバイオティクス及びプレバイオティクスの混合物を有効成分とする場合には、該混合物を薬剤１ｇ当たり少なくとも２．５ｍｇ含むことが望ましい。投与量は、年齢、症状等により異なるが、ヒト体重１ｋｇ当たり少なくとも２．５ｍｇの割合で、ヒト一人１日当たり５０ｍｇ〜４０ｇ、特に２００ｍｇ〜３０ｇ投与することが望ましい。投与方法は、経口的に投与することが好ましく、１日に１回又は数回に分けて投与することができる。ただし、プロバイオティクスは、例えば菌末の場合、少なくとも１日当たり１億個、プレバイオティクスは、例えばオリゴ糖の場合、少なくとも１日当たり３０ｍｇ投与することが望ましい。
【００１２】
また、本発明のＢ型慢性肝炎治療剤は、主成分が食品由来の成分で安全性が高いため、他の肝疾患治療剤、例えばインターフェロン、ＳＮＭＣ等と併用することができ、これにより、これら薬剤の投与量を低減し得るとともに、肝機能改善の相乗効果が期待できる。
【００１３】
本発明のＢ型慢性肝炎治療剤は、飲食品の形態で使用することもできる。飲食品形態のＢ型慢性肝炎治療剤は、飲料または食品にラクトフェリン、またはラクトフェリンとプロバイオティクスとプレバイオティクスとの混合物を添加して作製される。飲食品として好ましい形態は、清涼飲料、乳製品、健康食品、菓子類を挙げることができ、特に乳飲料、発酵乳、錠菓、流動食等を挙げることができる。本発明の飲食品中のラクトフェリン、またはラクトフェリンとプロバイオティクスとプレバイオティクスとの混合物の添加量は、該飲食品を健康維持および健康増進の目的で用いる場合、特に限定されることはないが、飲食品１ｋｇ当たり少なくとも１００ｍｇ含むことが望ましく、飲食品１ｋｇ当たり３００ｍｇ〜８００ｇ含むことが特に望ましい。ラクトフェリンは、食品由来の成分で安全性が高いため、ラクトフェリンを添加することによって、安全で、しかも健康維持及び健康増進に有用な飲食品を提供し得る。
【００１４】
次に試験例を示して本発明を詳細に説明する。
試験例１
この試験は、ラクトフェリンのＢ型慢性肝炎治療効果を調べるために行った。
１）試料の調製
試料は後述する実施例１の錠剤と同一の方法により製造した。
２）試験方法
Ｂ型慢性肝炎患者４名（男性３名、女性１名）を患者Ａ〜患者Ｄとして、１日あたり、ラクトフェリン１．２ｇを含む錠剤（後述する実施例１の錠剤）を、４ヶ月間連日経口投与した。
投与開始より経時的に採血し、血清中のアラニンアミノトランスフェラーゼ（ａｌａｎｉｎｅａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ：以下、ＡＬＴと略記することがある）、及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ａｓｐａｒｔａｔｅａｍｉｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ：以下、ＡＳＴと略記することがある。）を測定した。
３）試験結果
ラクトフェリンのＢ型慢性肝炎患者に対する効果は表１、表２に示すとおりである。表１は各患者のＡＬＴ値（単位：ＩＵ／Ｌ）及び表２は各患者のＡＳＴ値（単位：ＩＵ／Ｌ）をそれぞれ示している。
試験の結果、投与前と比較して、ＡＬＴは、４例中２例において、投与１ヶ月後及び２ヵ月後で緩和な上昇を示したが、引き続き経口投与することにより、投与３カ月以降より投与前に比して低値を示した。この結果から、宿主の免疫賦活化に伴う改善効果が確認された。また、残る２例については、投与１ヶ月より緩和な低下を示した。
ＡＳＴは、４例中１例において投与１ヶ月後で緩和な上昇を示したが、引き続き経口投与することにより、投与２ヶ月以降より投与前に比して低値を示し、宿主の免疫賦活化に伴う改善効果が確認された。また、残る３例は投与１ヶ月より緩和な低下を示した。
【００１５】
【表１】

【００１６】
【表２】

【００１７】
試験例２
この試験は、ラクトフェリン、プロバイオティクス及びプレバイオティクスの混合物のＢ型慢性肝炎治療効果を調べるために行った。
１）試料の調製
試料は後述する実施例２の錠剤と同一の方法により製造した。
２）試験方法
Ｂ型慢性肝炎患者４名（男性３名、女性１名）を患者Ｅ〜患者Ｈとして、後述する実施例２の錠剤を、１日当たり１２錠を４ヶ月間連日経口投与した。
投与開始より経時的に採血し、血清中のＡＬＴ及びＡＳＴを測定した。
３）試験結果
ラクトフェリン、プロバイオティクス及びプレバイオティクスの混合物のＢ型慢性肝炎患者に対する効果は表３、表４に示すとおりである。表３は各患者のＡＬＴ値（単位：ＩＵ／Ｌ）、及び表４は各患者のＡＳＴ値（単位：ＩＵ／Ｌ）をそれぞれ示している。
試験の結果、投与前と比較して、ＡＬＴ、ＡＳＴが投与１カ月後及び２カ月後で緩和な上昇を示したが、引き続き経口投与することにより、投与３カ月以降より投与前に比して低値を示し、投与４ヶ月後で有意に低下した。すなわち、ラクトフェリン単独投与に比べ、全例で宿主の免疫賦活化が確認され、ＡＬＴ値及びＡＳＴ値の減少による治療効果が認められた。
【００１８】
【表３】

【００１９】
【表４】

【００２０】
【実施例】
次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
【００２１】
実施例１（ウシ・ラクトフェリンを配合した錠剤の調製）
次の組成からなる錠剤のＢ型慢性肝炎治療剤を次の方法により製造した。
ウシ・ラクトフェリン（ミライ社製）５０．０（％）
還元麦芽糖（東和化成工業社製）２８．５
甘味料（日研化学社製）１７．１
滑沢剤（理研ビタミン社製）４．０
香料（長谷川香料社製）０．４
【００２２】
ウシ・ラクトフェリン、還元麦芽糖、甘味料、滑沢剤及び香料の混合物を、常法により１錠当たり１．２ｇとなるように打錠し、ラクトフェリンを６００ｍｇ含有する錠剤を得た。
【００２３】
実施例２（ウシ・ラクトフェリン、プロバイオティクス及びプレバイオティクスを配合した錠剤の調製）
次の組成からなる錠剤のＢ型慢性肝炎治療剤を次の方法により製造した。
ウシ・ラクトフェリン（ミライ社製）２０．０（％）
ビフィドバクテリウム・ロンガム菌末（森永乳業社製）１５．０
ラクチュロース（森永乳業社製）２０．０
還元麦芽糖（東和化成工業社製）２７．６
甘味料（日研化学社製）１５．２
滑沢剤（理研ビタミン社製）１．８
香料（長谷川香料社製）０．４
【００２４】
ウシ・ラクトフェリン、ビフィドバクテリウム・ロンガム菌末、ラクチュロース、還元麦芽糖、甘味料、滑沢剤及び香料の混合物を常法により１錠当たり０．５ｇとなるように打錠し、ラクトフェリン１００ｍｇ、ビフィドバクテリウム・ロンガム菌１億個、ラクチュロース１００ｍｇをそれぞれ含有する錠剤を得た。
【００２５】
実施例３（ウシ・ラクトフェリンを配合したシロップ剤の調製）
次の組成からなるシロップ剤のＢ型慢性肝炎治療剤を常法により製造した。
ウシ・ラクトフェリン（ミライ社製）８．０（％）
果糖ブドウ糖液糖（参松工業社製）１２．４
クエン酸（上野製薬社製）０．２
クエン酸ナトリウム（丸善製薬社製）０．２
カルボキシメチルセルロースカルシウム（五徳薬品社製）０．２
精製水（大塚製薬社製）７９．０
【００２６】
実施例４（カプセル入りウシ・ラクトフェリンの調製）
次のとおり、カプセル剤のＢ型慢性肝炎治療剤を製造した。
乳糖（和光純薬工業社製）６００ｇ、トウモロコシデンプン（日清製粉社製）４００ｇ、結晶セルロース（和光純薬工業社製）４００ｇ及びウシ・ラクトフェリン（ミライ社製）６００ｇを、５０メッシュ篩（ヤマト科学社製）により篩分けし、厚さ０．５ｍｍのポリエチレン製の袋にとり、転倒混合し、全自動カプセル充填機（ＣｅｓｅｒｅＰｅｄｉｎｉ社製。プレス式）を用い、前記粉末をカプセル（日本エランコ社製。１号ゼラチンカプセル、Ｏｐ．ＹｅｌｌｏｗＮｏ．６Ｂｏｄｙ、空重量は７５ｍｇ）に内容量２７５ｍｇで充填し、ラクトフェリン８２．５ｍｇ入りのカプセル剤７，０００個を得た。
【００２７】
実施例５（ヒト・ラクトフェリン散剤の調製）
次のとおり、散剤のＢ型慢性肝炎治療剤を製造した。
予め６号篩（井内盛栄堂社製）で篩分けしたヒト・ラクトフェリン粉末（ミライ社製）１００ｇ及び乳糖（森永乳業社製）５００ｇを乳鉢中で混和し、これに予め５号篩（井内盛栄堂社製）で篩分けした乳糖（森永乳業社製）４００ｇを添加して混和し、全量を再度５号篩で篩分けし、１包５ｇずつ分包機（東京商会。ＯＭＰ−９０Ａ）により分包し、１０％ヒト・ラクトフェリン散剤２００包を得た。
【００２８】
参考例１（ラクトフェリンを添加した飲料の調製）
脱脂粉乳（森永乳業社製）９０ｇを５０℃の温湯８００ｍｌに溶解し、砂糖（日新製糖社製）３０ｇ、インスタントコーヒー粉末（ネスレ社製）１４ｇ、カラメル（昭和化工社製）２ｇ、及びコーヒーフレーバー（三栄化学社製）０．０１ｇ、を攪拌しながら順次添加して溶解し、１０℃に冷却し、ラクトフェリン（ミライ社製）１ｇを添加し、ラクトフェリン約０．１％を含むＢ型慢性肝炎治療剤を含有する乳飲料を調製した。
【００２９】
【発明の効果】
以上詳細に記載したとおり、本発明は、以下のような効果を奏するものであり、医薬品や健康食品等の分野に利用することができる。
（１）日常的に摂取されている食品成分を主成分として含有するので、経済的で且つ長期間連続摂取しても副作用がほとんどない。
（２）Ｂ型慢性肝炎の治療に著効を有する。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a therapeutic agent for chronic hepatitis B containing lactoferrin or a mixture of lactoferrin, probiotics and prebiotics as an active ingredient. More specifically, in the present invention, the lactoferrin is metal unsaturated lactoferrin, metal saturated lactoferrin, or apolactoferrin (hereinafter sometimes collectively referred to as lactoferrins), and the probiotic is Bifidobacterium. A therapeutic agent for chronic hepatitis B that is a bacterial powder of at least one microorganism selected from the group consisting of microorganisms belonging to the genus, microorganisms belonging to the genus Lactobacillus and microorganisms belonging to the genus Streptococcus, and prebiotics are oligosaccharides It relates to chronic hepatitis B therapeutic agents. The invention also relates the use of lactoferrin for chronic hepatitis B therapeutic agents production, lactoferrin for chronic hepatitis B therapeutic agents production, the use of a mixture of probiotics and prebiotics.
In the present specification, the percentage is expressed by mass unless otherwise specified.
[0002]
[Prior art]
There are viral hepatitis, autoimmune hepatitis, alcoholic hepatitis, drug hepatitis, etc., which are referred to by the name of hepatitis, and these tests include blood hepatitis virus marker measurement, antibody measurement, blood test, etc. Have been identified. Regardless of the cause, hepatitis becomes chronic when left untreated, and partly progresses to cirrhosis according to the degree of liver inflammation. In addition, the progression of liver cirrhosis causes serious complications such as the occurrence of liver cancer and liver failure. In addition, hepatitis B virus infection can become severe and fulminant, and the purpose of treatment varies depending on the cause of chronic hepatitis.
Viral hepatitis develops as a result of infection with the hepatitis virus, but its pathology varies greatly depending on the type of hepatitis virus infected. So far, hepatitis A virus, hepatitis B virus, hepatitis C virus, hepatitis E virus, hepatitis G virus and the like are known as hepatitis viruses causing viral hepatitis. Among them, hepatitis A does not become chronic, hepatitis E does not develop unless drinking contaminated drinking water and raw materials, and hepatitis G has an unknown clinical picture. Viral hepatitis frequently encountered on a daily basis is chronic hepatitis B and hepatitis C.
Hepatitis B virus is a DNA virus, not only different from other hepatitis viruses such as RNA virus hepatitis C virus, but also an RNA intermediate in its gene replication process, which is reverse transcribed into DNA In addition, the gene is frequently integrated into the hepatocyte chromosome. In addition, since hepatitis B virus is more infectious than hepatitis C virus, there are a wide variety of infection routes of hepatitis B virus.
Hepatitis B has a pathological condition that develops as chronic hepatitis after asymptomatic progress, and a pathological condition that manifests as acute hepatitis. The pathology of hepatitis B and its progress are very different from those of hepatitis C and are not only liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma, but also extremely diverse and complicated (Sato, Shingo, Volume, History of Medicine, 1st Edition, 27th) Page, Ishiyaku Publishing Co., Ltd., 1999). In the case of hepatitis C, interferon therapy that reduces viruses is the first choice. On the other hand, in the case of hepatitis B, not only radical therapy that radically reduces and eliminates the virus, but also treatments suitable for pathological conditions such as non-root treatment that protects the liver from hepatitis virus are used (Shingo Sato) , Separate volume, History of Medicine, 1st edition, 31st page, Ishiyaku Shuppan Publishing Co., Ltd., 1999) has problems such as low effective rate and various side effects.
Conventionally, as therapeutic agents for chronic hepatitis B, steroids, interferons, strong neominophagen C (manufactured by Minophagen Pharmaceutical Co., Ltd., hereinafter abbreviated as SNMC), ursodeoxycholic acid, and the like have been used.
[0003]
[Problems to be solved by the invention]
However, these therapeutic agents have low effectiveness and have the following problems. In other words, steroid withdrawal therapy that uses a relatively large amount of steroid in a short period of time and then interrupts it suddenly to exert a strong immunostimulatory effect may cause hepatitis. In addition, interferon therapy tends to cause serious side effects such as interstitial pneumonia and depression. In addition, side effects such as hypertension and edema are likely to occur in SNMC.
As described above, since the therapeutic agent for chronic hepatitis B has been concerned about side effects and problems related to the combination with other drugs, the effectiveness of the therapeutic effect is high and there are few side effects. The development of therapeutic drugs has become an urgent issue.
Furthermore, according to the World Health Organization, there are over 2 billion people infected with hepatitis B virus worldwide, of which approximately 500 million are estimated to be chronically infected. Along with prevention against hepatitis B virus, the treatment of chronic hepatitis B has been an issue.
The present invention has been made in view of the above circumstances, and has an effective therapeutic rate, and can be continuously ingested, a therapeutic agent for chronic hepatitis B, use of an active ingredient for producing the therapeutic agent for chronic hepatitis B, It is an object of the present invention to provide a method for treating chronic hepatitis B using the active ingredient of the therapeutic agent for chronic hepatitis B.
[0004]
[Means for Solving the Problems]
As a result of intensive studies on compounds having an excellent therapeutic effect on chronic hepatitis B, the present inventors have focused on lactoferrin.
Lactoferrin is a harmless and natural iron-binding protein (capable of binding two iron ions per molecule) contained in tears, saliva, peripheral blood, milk, etc. The molecular weight of bovine lactoferrin is 86, 000 daltons and human lactoferrin are 88,000 daltons (supervised by Kazutomo Imabori and Tamio Yamakawa, “Biochemical Dictionary”, 2nd edition, page 1390, Tokyo Kagaku Dojin, 1990).
To date, the effect of lactoferrin has an antibacterial action against harmful microorganisms such as Escherichia coli, Candida and Clostridium [Journal of Pediatrics, Vol. 94, page 1, 1979] Effective in fixing useful bacteria such as bifidobacteria and lactic acid bacteria in the intestines of humans and animals (Japanese Patent No. 2532911), and a growth factor of bifidobacteria (JP-A-2-225419) ), And exhibit antiviral activity against cytomegalovirus, herpes virus, human immunodeficiency virus [Advanced in Medicine and Biology, 4th 43, 199, 1998], respectively.
Furthermore, lactoferrin has an immunostimulatory effect (Japanese Patent Laid-Open No. 7-179355), a cell proliferative effect (Japanese Patent Laid-Open No. 6-48955), an antitumor effect [Cancer Research, Vol. 54, 2310]. 1994], an anti-rheumatic agent applied as a therapeutic agent for diseases (Japanese Patent Laid-Open No. 5-186368), and a liver function improving agent (WO 00/06192) that showed an improvement effect on chronic liver damage caused by the drug. ) And the like are disclosed as milk proteins having various actions.
However, it is not known that lactoferrin or a mixture of lactoferrin, probiotics and prebiotics is effective in treating chronic hepatitis caused by hepatitis B virus, and there is no literature.
[0005]
As a result of oral administration of lactoferrin or a mixture of lactoferrin, probiotic and prebiotic to a patient with chronic hepatitis B over a period of 3 months or more, the present inventors temporarily relaxed alanine aminotransferase (alanine). aminotransferase: hereinafter abbreviated as ALT.) After the value is increased and the immune activation of the host is confirmed, a therapeutic effect with a high effective rate is induced for hepatitis B, and side effects associated with the treatment As a result, the present invention was completed.
[0006]
The first invention of the present invention that solves the above-described problems is a therapeutic agent for chronic hepatitis B containing lactoferrin as an active ingredient.
The second invention of the present invention for solving the above-mentioned problems is at least one kind selected from the group consisting of lactoferrin, a microorganism belonging to the genus Bifidobacterium, a microorganism belonging to the genus Lactobacillus, and a microorganism belonging to the genus Streptococcus. probiotics are bacterial powder of microorganisms, and Ru chronic hepatitis B therapeutic agents der containing as an active ingredient a mixture of prebiotic oligosaccharides.
A third invention of the present invention that solves the above-mentioned problems is the use of lactoferrin for producing the therapeutic agent for chronic hepatitis B of the first invention. The fourth invention of the present invention for solving the above-mentioned problems is a lactoferrin, a microorganism belonging to the genus Bifidobacterium, a microorganism belonging to the genus Lactobacillus, and a genus Streptococcus for the manufacture of the therapeutic agent for chronic hepatitis B of the second invention. Use of a mixture of probiotics , which are bacterial powders of at least one microorganism selected from the group consisting of microorganisms belonging to, and prebiotics , which are oligosaccharides .
[0007]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Next, the present invention will be specifically described.
In the therapeutic agent for chronic hepatitis B of the present invention, lactoferrin used as an active ingredient may be a commercially available product, or colostrum, migration of mammals (eg, human, cow, buffalo, horse, goat, sheep, etc.) It may be lactoferrin that is separated from these processed products such as milk, regular milk, end-stage milk, etc. by skim milk, whey, etc. by conventional methods such as ion exchange chromatography, and purified as necessary. Furthermore, it may be apolactoferrin from which iron is removed from lactoferrin by a conventional method, a metal unsaturated lactoferrin or a metal saturated lactoferrin obtained by partially or completely chelating a metal such as iron, copper, zinc or manganese to apolactoferrin.
In addition, natural human lactoferrin cannot be produced in large quantities, but human lactoferrin produced by recombinant fungi, recombinant dairy cows (transgenic cows) and the like obtained by recombinant DNA technology is also included in the present invention. Can be used.
[0008]
The probiotic compounded in the therapeutic agent for chronic hepatitis B of the present invention refers to a living bacterium that exhibits beneficial effects on human health, and belongs to the genus Lactobacillus, a microorganism belonging to the genus Bifidobacterium. Examples include microorganisms belonging to the genus and microorganisms belonging to the genus Streptococcus. The bacterial powder can be a commercially available product or one prepared by a known method (for example, the method described in JP-A-1-221319).
[0009]
The prebiotic compounded in the therapeutic agent for chronic hepatitis B of the present invention exhibits a beneficial effect on human health by specifically growing limited bacteria such as bifidobacteria inhabiting the intestinal tract. It is an indigestible food ingredient and can be exemplified by oligosaccharides such as lactulose. In addition, lactulose is known to have an effect of reducing the symptoms of hepatic encephalopathy and hepatic coma (psychiatry, Vol. 15, No. 10, p. 1101, 1973), but treatment of chronic hepatitis B It is not known to be effective.
[0010]
The therapeutic agent for chronic hepatitis B of the present invention containing the above-mentioned lactoferrin or a mixture of lactoferrin, probiotic and prebiotic as an active ingredient is formulated into various embodiments by known methods and is orally administered. Specific preparations include tablets (including sugar-coated tablets, coated tablets, and buccal tablets), powders, capsules (including soft capsules), granules (including those coated), pills, troches, liquids, and the like. Examples of the pharmacologically acceptable sustained-release preparation can be exemplified.
The above-mentioned preparation is formulated as a pharmaceutical composition together with a pharmacologically acceptable carrier, excipient, disintegrant, lubricant, colorant and the like according to a known pharmaceutical manufacturing method.
Carriers and excipients used in these preparations include lactose, glucose, sucrose, mannitol, potato starch, corn starch, calcium carbonate, calcium phosphate, calcium sulfate, crystalline cellulose, licorice powder, gentian powder, etc. Examples thereof include starch, gelatin, syrup, polyvinyl alcohol, polyvinyl ether, polyvinyl pyrrolidone, hydroxypropyl cellulose, ethyl cellulose, methyl cellulose, carboxymethyl cellulose and the like.
Examples of the disintegrant include starch, agar, gelatin powder, sodium carboxymethyl cellulose, carboxymethyl cellulose calcium, crystalline cellulose, calcium carbonate, sodium bicarbonate, and sodium alginate.
Furthermore, as a lubricant, magnesium stearate, hydrogenated vegetable oil, and macrogol, etc., as a colorant, red No. 2, yellow No. 4, and blue No. 1, etc. that are allowed to be added to pharmaceuticals, Each can be illustrated.
Tablets and granules are sucrose, hydroxypropylcellulose, purified shellac, gelatin, sorbitol, glycerin, ethylcellulose, hydroxypropylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, polyvinylpyrrolidone, cellulose phthalate acetate, hydroxypropylmethylcellulose phthalate, methyl methacrylate, if necessary It can also be coated with a methacrylic acid polymer or the like.
[0011]
The therapeutic agent for chronic hepatitis B of the present invention preferably contains at least 1 mg of lactoferrin as an active ingredient per 1 g of the drug. Although the dosage varies depending on the age, symptoms, etc., it is desirable to administer 20 mg to 15 g, particularly 100 mg to 10 g per person per day at a rate of at least 1 mg per kg human body weight. The administration method is preferably oral administration, and can be administered once or divided into several times a day. In addition, when the therapeutic agent for chronic hepatitis B of the second invention of the present invention, that is, a mixture of lactoferrin, probiotic and prebiotic is used as an active ingredient, the mixture should contain at least 2.5 mg per gram of the drug. Is desirable. Although the dose varies depending on the age, symptoms, etc., it is desirable to administer 50 mg to 40 g, particularly 200 mg to 30 g per person per day at a rate of at least 2.5 mg per kg human body weight. The administration method is preferably oral administration, and can be administered once or divided into several times a day. However, it is desirable to administer at least 100 million probiotics per day in the case of fungi, for example, and at least 30 mg of prebiotics per day in the case of oligosaccharides, for example.
[0012]
In addition, since the therapeutic agent for chronic hepatitis B of the present invention is a food-derived component and has high safety, it can be used in combination with other liver disease therapeutic agents such as interferon and SNMC. The dose of the drug can be reduced, and a synergistic effect of improving liver function can be expected.
[0013]
The therapeutic agent for chronic hepatitis B of the present invention can also be used in the form of food and drink. The therapeutic agent for chronic hepatitis B in the form of food or drink is prepared by adding lactoferrin or a mixture of lactoferrin, probiotic and prebiotic to a beverage or food. Preferred forms of food and drink include soft drinks, dairy products, health foods, and confectionery, and particularly milk drinks, fermented milk, tablet confectionery, and liquid foods. The amount of lactoferrin in the food or drink of the present invention or a mixture of lactoferrin, probiotic and prebiotic is not particularly limited when the food or drink is used for the purpose of health maintenance and health promotion. It is desirable to contain at least 100 mg per 1 kg of food and drink, and it is particularly desirable to contain 300 to 800 g per 1 kg of food and drink. Since lactoferrin is a component derived from food and highly safe, the addition of lactoferrin can provide food and drinks that are safe and useful for maintaining and promoting health.
[0014]
Next, the present invention will be described in detail with reference to test examples.
Test example 1
This test was conducted to examine the therapeutic effect of lactoferrin on chronic hepatitis B.
1) Preparation of sample The sample was manufactured by the same method as the tablet of Example 1 mentioned later.
2) Test method Assuming that patients with chronic hepatitis B (3 men, 1 woman) are patients A to D, a tablet containing 1.2 g of lactoferrin per day (tablet of Example 1 described later), It was orally administered every day for 4 months.
Blood was collected over time from the start of administration, and serum alanine aminotransferase (hereinafter abbreviated as ALT) and aspartate aminotransferase (hereinafter abbreviated as AST). Was measured.
3) Test results The effects of lactoferrin on chronic hepatitis B patients are shown in Tables 1 and 2. Table 1 shows the ALT value (unit: IU / L) of each patient, and Table 2 shows the AST value (unit: IU / L) of each patient.
As a result of the study, ALT showed a moderate increase after 1 month and 2 months in 2 out of 4 cases compared with before administration. The value was lower than that before administration. From this result, the improvement effect accompanying the immune activation of the host was confirmed. Further, the remaining 2 cases showed a moderate decrease from 1 month of administration.
AST showed a moderate increase in 1 of 4 cases after 1 month of administration, but continued oral administration showed a lower value than after administration after 2 months of administration, and stimulated host immunity The improvement effect accompanying this was confirmed. Further, the remaining 3 cases showed a moderate decrease from 1 month of administration.
[0015]
[Table 1]

[0016]
[Table 2]

[0017]
Test example 2
This test was conducted to examine the therapeutic effect of a mixture of lactoferrin, probiotics and prebiotics on chronic hepatitis B.
1) Preparation of sample The sample was manufactured by the same method as the tablet of Example 2 mentioned later.
2) Test method Four patients with chronic hepatitis B (three men, one woman) were treated as patients E to H, and 12 tablets of Example 2 described later were orally administered daily for 4 months.
Blood was collected over time from the start of administration, and ALT and AST in the serum were measured.
3) Test results The effects of a mixture of lactoferrin, probiotics and prebiotics on patients with chronic hepatitis B are as shown in Tables 3 and 4. Table 3 shows the ALT value (unit: IU / L) of each patient, and Table 4 shows the AST value (unit: IU / L) of each patient.
As a result of the test, ALT and AST showed a moderate increase after 1 month and 2 months compared with before administration, but by oral administration, compared to before administration from 3 months after administration. The value was low, and decreased significantly 4 months after administration. That is, as compared with the administration of lactoferrin alone, the immunostimulation of the host was confirmed in all cases, and the therapeutic effect due to the decrease in ALT value and AST value was recognized.
[0018]
[Table 3]

[0019]
[Table 4]

[0020]
【Example】
EXAMPLES Next, although an Example is shown and this invention is demonstrated further in detail, this invention is not limited to a following example.
[0021]
Example 1 (Preparation of a tablet containing bovine lactoferrin)
A tablet for treating chronic hepatitis B having the following composition was produced by the following method.
Bovine lactoferrin (Mirai) 50.0 (%)
Reduced maltose (Towa Kasei Kogyo Co., Ltd.) 28.5
Sweetener (Nikken Chemical Co., Ltd.) 17.1
Lubricant (Riken Vitamin Co., Ltd.) 4.0
Fragrance (Hasegawa Fragrance Co., Ltd.) 0.4
[0022]
A mixture of bovine lactoferrin, reduced maltose, sweetener, lubricant, and fragrance was tableted by a conventional method to 1.2 g per tablet to obtain a tablet containing 600 mg of lactoferrin.
[0023]
Example 2 (Preparation of tablets containing bovine lactoferrin, probiotics and prebiotics)
A tablet for treating chronic hepatitis B having the following composition was produced by the following method.
Bovine lactoferrin (Mirai) 20.0 (%)
Bifidobacterium longum fungus (Morinaga Milk Industry Co., Ltd.) 15.0
Lactulose (Morinaga Milk Industry Co., Ltd.) 20.0
Reduced maltose (Towa Kasei Kogyo Co., Ltd.) 27.6
Sweetener (Nikken Chemical Co., Ltd.) 15.2
Lubricant (Riken Vitamin Co., Ltd.) 1.8
Fragrance (Hasegawa Fragrance Co., Ltd.) 0.4
[0024]
A mixture of bovine lactoferrin, Bifidobacterium longum, powdered lactulose, reduced maltose, sweetener, lubricant and fragrance was tableted to 0.5 g per tablet by a conventional method. Tablets containing 100 million Phytobacterium longum and 100 mg lactulose were obtained.
[0025]
Example 3 (Preparation of syrup containing bovine lactoferrin)
A syrup preparation for chronic hepatitis B having the following composition was produced by a conventional method.
Bovine lactoferrin (Mirai) 8.0 (%)
Fructose glucose liquid sugar (Sanmatsu Kogyo Co., Ltd.) 12.4
Citric acid (Ueno Pharmaceutical Co., Ltd.) 0.2
Sodium citrate (Maruzen Pharmaceutical Co., Ltd.) 0.2
Carboxymethylcellulose calcium (manufactured by Gotoku Pharmaceutical) 0.2
Purified water (Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) 79.0
[0026]
Example 4 (Preparation of capsuled bovine lactoferrin)
A capsule treatment for chronic hepatitis B was produced as follows.
A 50 mesh sieve (Yamato) was prepared by adding 600 g of lactose (manufactured by Wako Pure Chemical Industries), 400 g of corn starch (manufactured by Nisshin Flour Mills), 400 g of crystalline cellulose (manufactured by Wako Pure Chemical Industries) and 600 g of bovine lactoferrin (manufactured by Mirai). Sifted into a polyethylene bag with a thickness of 0.5 mm, mixed by overturning, and the powder was encapsulated (Nippon Elanco) using a fully automatic capsule filling machine (Cesere Pedini, press type). No. 1 gelatin capsule, Op.Yellow No.6 Body, empty weight is 75 mg) with an internal volume of 275 mg to obtain 7,000 capsules containing 82.5 mg of lactoferrin.
[0027]
Example 5 (Preparation of human lactoferrin powder)
Powdered chronic hepatitis B therapeutic agent was manufactured as follows.
100 g of human lactoferrin powder (manufactured by Mirai Co., Ltd.) sieved in advance with a No. 6 sieve (manufactured by Inei Seieido Co., Ltd.) and 500 g of lactose (manufactured by Morinaga Milk Industry Co., Ltd.) are mixed in a mortar. 400 g of lactose (manufactured by Morinaga Milk Industry Co., Ltd.) sieved by Doesha) is added and mixed, and the whole amount is sieved again using No. 5 sieve, and 1 g of 5 g each is separated by a packaging machine (Tokyo Shokai. OMP-90A). After packaging, 200% 10% human lactoferrin powder was obtained.
[0028]
Reference Example 1 (Preparation of beverage with added lactoferrin)
90 g of skim milk powder (manufactured by Morinaga Milk Industry Co., Ltd.) is dissolved in 800 ml of hot water at 50 ° C., 30 g of sugar (manufactured by Nissin Sugar Co., Ltd.), 14 g of instant coffee powder (manufactured by Nestlé Corporation), 2 g of caramel (manufactured by Showa Chemical Co., Ltd.), and coffee 0.01 g of flavor (manufactured by Sanei Chemical Co., Ltd.) is sequentially added and dissolved while stirring, cooled to 10 ° C., 1 g of lactoferrin (manufactured by Mirai) is added, and B type chronic containing about 0.1% lactoferrin A milk drink containing a hepatitis therapeutic agent was prepared.
[0029]
【The invention's effect】
As described above in detail, the present invention has the following effects and can be used in fields such as pharmaceuticals and health foods.
(1) Since it contains a food component that is ingested as a main component, it is economical and has few side effects even if it is ingested continuously for a long period of time.
(2) Remarkably effective in treating chronic hepatitis B.

Claims

A therapeutic agent for chronic hepatitis B containing lactoferrin as an active ingredient.

A probiotic which is a powder of at least one microorganism selected from the group consisting of lactoferrin, a microorganism belonging to the genus Bifidobacterium, a microorganism belonging to the genus Lactobacillus, and a microorganism belonging to the genus Streptococcus, and an oligosaccharide A therapeutic agent for chronic hepatitis B containing a mixture of a certain prebiotic as an active ingredient.

Use of lactoferrin for the manufacture of a therapeutic agent for chronic hepatitis B.

Bacterial powder of at least one microorganism selected from the group consisting of lactoferrin for the manufacture of a therapeutic agent for chronic hepatitis B , a microorganism belonging to the genus Bifidobacterium, a microorganism belonging to the genus Lactobacillus, and a microorganism belonging to the genus Streptococcus Use of a mixture of probiotics as well as prebiotics as oligosaccharides .