JP4176457B2

JP4176457B2 - Sampling tool for dental diseases

Info

Publication number: JP4176457B2
Application number: JP2002357221A
Authority: JP
Inventors: 亮一松瀬; 壱夫内田; 隆埴岡
Original assignee: 株式会社いかがく
Priority date: 2002-12-09
Filing date: 2002-12-09
Publication date: 2008-11-05
Anticipated expiration: 2022-12-09
Also published as: JP2004187805A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、歯科疾患、主として歯周病の検査に用いる歯肉溝滲出液を、歯肉溝から採取する方法および採取するときに使用される採取器具に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、歯科疾患、主として歯周病の検査は歯科医師の口腔内検診が中心であり、歯肉溝の深さを用手法で測定する方法が行なわれている。
【０００３】
また、歯周病の他の検査方法としては、歯周病の患部である歯周ポケットに存在する歯肉溝滲出液を採取して、これを検査試料として利用する方法が挙げられる（例えば、非特許文献１参照）。
【０００４】
【非特許文献１】
埴岡隆（Takashi Hanioka）、他７名，「Utilization of Laboratory Tests of a Gingival Crevicular Sample in an Occupational Periodontal Care System: A Pilot Study」，Journal of Occupational Health，社団法人日本産業衛生学会，平成１２年１月，第４２巻（Ｖｏｌ．４２），第１号（Ｎｏ．１），ｐ．８−１３
【０００５】
かかる歯肉溝滲出液は、歯科医師あるいは歯科衛生士が、紙を爪楊枝状あるいは薄片状に成形した採取器具（商品名；ペリオペーパー、輸入発売元ヨシダ）をピンセットで摘んで歯周ポケットに差し込むことにより採取されている（ＧＣＦ採取法）。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上記の採取器具をピンセットで摘んで歯肉溝滲出液を採取する場合には、歯牙あるいは歯肉等の歯周ポケット以外の部位に採取器具が当たる等して変形しやすいため、経験の乏しい者によっては採取器具を新しいものに交換して採取しなおす場合も多い。また、採取器具を歯周ポケットに差し込まなくてはならないため、この採取器具を的確に使用できる者は、歯周ポケットの構造等の医学的知識を有している歯科医師あるいは歯科衛生士に事実上限定されるという問題もある。
【０００７】
本発明は、かかる事情に鑑みて行なわれたものであり、経験が乏しく、医学的知識が十分でない者でも、歯肉溝から歯肉溝滲出液を容易かつ確実に採取するための採取方法および採取器具を提供することを主たる目的とするものである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記目的を達成するために鋭意検討した結果、毛束を構成する細毛の毛先若しくは側部を歯肉溝に押し当てることにより、上記の課題を解決できることを見出し、本発明を完成した。
【０００９】
すなわち、本発明は、毛束を構成する細毛の毛先若しくは側部を歯肉溝に押し当て、この細毛に保持された歯肉溝滲出液を歯科疾患の検査用試料として用いることを特徴とするものである。
【００１０】
かかる毛束を構成する細毛の毛先若しくは側部を歯肉溝近傍に押し当てることにより、その一部が確実に歯肉溝内に入る（若しくは歯肉溝上部に当たる）。このため、歯肉溝内に入った（若しくは歯肉溝上部に当たった）細毛間には毛細管現象が働き、細毛間に所定量の歯肉溝滲出液が確実に保持される。なお、本発明において所定量とは、測定対象を検出し得る量をいう。
【００１１】
上記の採取方法を実施するにあたっては、太さ３〜５０μｍの複数の細毛が束ねられた毛束を備える試料採取器具が好適に用いられる。
【００１２】
試料採取器具の他の具体例としては、太さ３〜５０μｍの複数の細毛が支持台に植毛された毛束を備える試料採取器具が挙げられる。
【００１３】
かかる試料採取器具によれば、細毛に触れることなく支持台をピンセットもしくは直接手で摘めるので、細毛の毛先若しくは側部をより簡易に歯肉溝に押し当てることができる。
【００１４】
また、本発明では、上記の構成に加えて、支持台に取っ手が取り付けられてもよい。
【００１５】
かかる試料採取器具によれば、歯の裏側や奥歯等の採取器具を押し当てるのが困難な部位についても、細毛の毛先若しくは側部を容易かつ確実に押し当てることができる。
【００１６】
また、本発明では、上記取っ手は支持台に対して分離可能に取り付けることもできる。
【００１７】
かかる試料採取器具によれば、歯肉溝滲出液を採取した後に取っ手部分を分離させれば、残りの部分はコンパクトになるので、その状態で検出用、抽出用あるいは保存用試料として用いることができる。
【００１８】
また、本発明では、上記取っ手として可撓性材料または弾性材料を用いてもよい。
【００１９】
かかる取っ手は容易に変形可能なので、取っ手部分を分離させなくても上記と同様の効果が発揮される。
【００２０】
【発明の実施の形態】
本発明は、歯科疾患、主として歯周病の発症の有無及び歯周病の進展具合を検査するために用いられるものである。
以下、図面を参照しつつ本発明の検査用試料の採取方法および採取器具について具体的に説明する。図１は試料採取器具の一実施例を示す外観斜視図である。試料採取器具Ａは、複数の細毛１が、その終端にて結束部材２により束ねられた毛束を形成している。
【００２１】
本発明において、結束部材２とは、複数の細毛１を束ねるために用いられるものであり、細毛１を束ねることができる部位であれば、結束部材２は細毛１のどの部位に取り付けられてもよい。したがって、図１では、結束部材２は細毛１の終端付近に取り付けられているが、かかる部位に限らず、例えば細毛の側面部の中央など、細毛の側面部にも取り付けられる。
【００２２】
また、細毛１を結束する方法としては、接着剤等により細毛を固定させる方法、糸等により細毛をくくりつける方法、針金や金属片により細毛を固定する方法等があり、結束する細毛の材質、大きさ、部位等に応じてこれらの方法を適宜選択することができる。このような構成からなる試料採取器具Ａを用いる場合には、結束部をピンセット若しくは直接手で摘めば、細毛を歯肉溝に押し当てる操作が容易になる。
【００２３】
なお、例えば奥歯など、細毛を歯肉溝に押し当てるのが困難な部位に用いる場合には、上記の構成に加えて結束部分に把持部を設けてもよい。
【００２４】
本発明において細毛１とは、歯科疾患の検査用試料として用いられる歯肉溝滲出液を採取するために用いられるものである。本発明では、歯肉溝に押し当てるという簡易な手段により、細毛１が確実に歯肉溝に入る必要があるので、細毛１は複数が束ねられた毛束として形成される必要がある。
【００２５】
また、本発明では、上記の歯肉溝滲出液は、以下に示す２つの作用のうち、主として第一の作用により、若しくはその組み合わせにより細毛に保持されるものである。第一の作用としては、毛束を構成する細毛の毛先若しくは側部が歯肉溝に押し当てられると、その一部が歯肉溝等の中に入り、細毛間の毛細管現象により、細毛間に所定量の歯肉溝滲出液が保持されるものである。第二の作用としては、毛束を構成する細毛の毛先若しくは側部が歯肉溝に押し当てられると、その一部が歯肉溝等の中に入り、細毛の吸収作用により、細毛自身に所定量の歯肉溝滲出液が保持されるものである。
【００２６】
主として第一の作用を示す細毛は特に限定されるものではないが、例えばポリアミド、レーヨン、ポリブチレンテレフタレート、ポリプロピレンなどの合成樹脂毛や、豚毛、馬毛、羊毛などの天然毛が挙げられる。
【００２７】
また、第一の作用と第二の作用の両方を示す細毛は特に限定されるものではないが、例えば紙、発泡体、布等は、歯肉溝に押し当てたときに、容易に折り曲がったりしない強度を有する場合には利用できる。
【００２８】
なお、上記の作用を有する限り、細毛の先端・断面形状や細毛の長さ・太さ等は特に限定されるものではないが、以下その一例を説明する。まず、細毛の先端部分の形状としては、平切型と段切型等が挙げられ、特に段切型は先端に向いて細くなっており歯肉溝内に入り込みやすいことから、本発明において通常好ましく用いられる。また、細毛の断面形状は、使用部位等に応じて任意の形状（例えば、円形、楕円形、三角型、四角形、多角形等）を適宜選択することができる。また、細毛の長さは、５〜２０ｍｍが通常好ましく、１０〜１５ｍｍが更に好ましい。また、細毛の太さは、１μｍ〜２ｍｍが通常好ましく、３μｍ〜５０μｍが更に好ましい。
【００２９】
また、毛束を構成する各細毛の長さは任意に設定することができ、使用部位等に応じて毛束の先端を均一に揃えてもよいし、不揃いにしてもよい。
【００３０】
次に歯肉溝滲出液を採取する方法について説明する。まず、被験部位の歯肉溝周辺の歯垢、唾液等の汚れを除き、本発明の試料採取器具の結束部もしくは支持部をピンセット若しくは手で摘み、歯肉溝付近に細毛の毛先若しくは側部を所定時間押し当てる。ここで、細毛を歯肉溝内に入り込みやすくして、歯肉溝滲出液の採取を確実に行うには、細毛部を歯面に対し略垂直に押し当てるよりも細毛部を歯面に対し略平行に押し当てる方がよい。また、押し当てる時間は検査部位、検査項目、検査の種類（数）により数秒〜数分の間で適宜選択することができる。
【００３１】
上記のように、試料採取器具の細毛部を歯肉溝付近に所定時間押し当てることにより、ほぼ一定量の歯肉溝滲出液が細毛部に保持されるので、歯肉溝滲出液を容易かつ確実に採取することができる。
【００３２】
上記試料採取器具により採取された歯肉溝滲出液は、そのままの状態で検査試料として用いることもできるし、所望により歯肉溝滲出液を抽出して、得られた分離液を検査試料として用いることもできる。かかる抽出を行なう場合には、試料採取器具の毛束部を、試験管内で所定濃度、所定量の抽出液に浸漬し、歯肉溝滲出液を抽出し分離を行なう。なお、抽出による分離操作を行なうか否かは、歯肉溝滲出液成分の測定方法によって適宜選択できる。
【００３３】
続いて、上記で得られた歯肉溝滲出液中の測定対象について説明する。本発明では、歯周病の検査、診断に有効なマーカー物質であれば測定対象とすることができ、特に測定対象の種類について限定されるものではない。
【００３４】
ここで、本発明者は、従来から歯周病の検査、診断に有効なマーカー蛋白について探索を行なっており、それらの結果を踏まえたうえで、以下に好ましい測定対象の一例を説明する。まず、本発明者は、歯周病患者の歯周ポケット中の好中球に由来するラクトフェリンやミエロペルオキシダーゼが健常者よりも高い値を示し、かつ、病状の悪化によりこれらの値が増加することを発見しており、歯肉溝滲出液中のラクトフェリン、ミエロペルオキシダーゼを測定することで、歯周病の診断ができることを見出している（特開平10-2899号公報）。
【００３５】
また、本発明者は、歯周病において歯周ポケット中の血液中蛋白が正常値よりも高い値を示し、かつ、病状の悪化が進むにつれ、その値が増加することを発見しており、歯肉溝滲出液中のアルブミンやα１―アンチトリプシンを測定することで、歯周病の診断ができることを見出している（特開平10-197527号公報、特開2000-28608号公報）。
【００３６】
したがって、少なくともラクトフェリン、ミエロペルオキシダーゼ、アルブミン、α１―アンチトリプシンから選ばれる歯肉溝滲出液中の成分を測定対象にすることが好ましい。また、本発明における測定対象の測定方法は特に限定されるものではないが、酵素免疫法、ラテックス凝集反応法、免疫比濁法などから選ばれる免疫学的測定法を用いることが好ましい。より好適には酵素免疫法、特にサンドイッチＥＬＩＳＡ法あるいはラテックス凝集反応法が好ましい。
【００３７】
例えば、測定対象をラクトフェリンとしてサンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いる場合には、それぞれ異なる抗原決定部位を認識する２種類の抗ラクトフェリン抗体の一方を公知の不溶性担体に結合してこれを一次抗体とし、他方を二次抗体として用いることが好ましい。なお、二次抗体には酵素などで標識したものを用いることが好ましい。標識酵素としては公知のものであれば何ら限定されるものではなく、例えばアルカリホスファターゼを用いれば、抗原抗体反応終了後に基質溶液を加えて発色させ、その吸光度と別途作成した検量線から、測定試料中の測定対象の濃度を定量できるので本発明において好適に用いられる。
【００３８】
以上のようにして得られる測定試料中の測定対象の濃度は、上述の如く歯周病の病状の進展と相関関係を有する。したがって、本発明によれば、歯科疾患、主として歯周病の発症の有無及び歯周病の進展具合を検査することができる。
【００３９】
次に上述した検査用試料の採取方法に好適に用いられる試料採取器具の実施例について追加して説明する。図２は試料採取器具の第二実施例を示す外観斜視図である。試料採取器具Ｂは、複数の細毛１が支持台３に植毛された毛束を備えている。
【００４０】
試料採取器具Ｂでは、支持台３を設けることにより、試料採取器具Ａと同様の効果に加えて、細毛１に触れることなく支持台３をピンセット若しくは直接手で摘むことができるので、細毛の毛先若しくは側部をより簡易に歯肉溝に押し当てることができる。また、上述した如く、歯肉溝滲出液を採取した後に抽出操作を行なう場合には、支持台３よりやや小径の抽出用サンプル瓶や試験管の上部に支持台３を載置するだけで、人手を使わずに抽出を行なうことができるので、数多くの試料を迅速に処理することができる。
【００４１】
かかる支持台の材質としては、摘んで操作するときに軽量であれば特に限定されるものではなく、例えばポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリブチレンテレフタレート、ポリスチレン、アクリロニトリルブタジエンスチレン、アクリロニトリルスチレン、ポリメタクリル酸メチル、セルロースプロピオネート、ポリアクリレート、ポリカーボネート、ポリオキシメチレン、ポリアミド等の樹脂を単独でまたは２種以上混合して使用できる。
【００４２】
なお、支持台の植毛面の形状については特に限定されるものではなく、使用部位等に応じて任意の形状（例えば、四角形、多角形、円形、楕円形等）を適宜選択することができる。さらに、被検者によって異なるが、歯茎は曲面の形状が多いため、かかる曲面形状に適合させるため、植毛面の形状として片一方に湾曲した形状としてもよい。
【００４３】
また、一本の歯の歯肉溝から歯肉溝滲出液を採取する場合には、支持台の幅は５〜２０ｍｍが適当であるが、支持台の幅を長くすることで、同時に複数の歯の歯肉溝から歯肉溝滲出液を採取することが可能となる。この場合、支持台の幅は、２０〜１５０ｍｍが適当である。
【００４４】
なお、植毛面からの毛束（細毛）の長さや先端形状についても、歯肉溝滲出液を確実に採取することができれば特に限定されるものではない。一例としては、毛束（細毛）の長さは５〜２０ｍｍが通常好ましく、１０〜１５ｍｍが更に好ましい。また、細毛の先端の毛切り形状と細毛の長さを任意に設定することにより、毛束の先端形状を単一平面状としたり、斜め状としたり、山切り状としたり、凹凸形状とするなど、さらには、植毛面の外側と内側、先端部と後端部などで異なった構成としてもよい。
【００４５】
図３は試料採取器具の第三実施例を示す外観斜視図である。試料採取器具Ｃは、複数の細毛１が支持台３に植毛された毛束を備え、かつ支持台３に対して取っ手４が取り付けられている。支持台３に取っ手４を設けることで、奥歯や歯の裏の歯肉溝についても、取っ手４を手で握れば、細毛１を容易かつ確実に押し当てることができる。
【００４６】
かかる効果を有する限り、取っ手４の取り付け位置は特に限定されるものではなく、図３では支持部３に対して垂直方向に取っ手４が取り付けられているが、歯肉溝滲出液の採取部位によっては支持台３に対して平行に取っ手を取り付ける等適宜選択することできる。
【００４７】
かかる取っ手の長さは、奥歯の歯肉溝にも対応できるよう、少なくとも口唇から奥歯までの長さと人が片手で握れる長さを有していればよい。また、通常取っ手の材質は、上述した試料採取器具Ｂに設けられた支持台３の材質と同じでよく、特に限定されるものではない。
【００４８】
また、本発明では、取っ手４は支持台３に対して分離可能に取り付けられてもよい。このように取っ手を分離可能とすることにより、上述した如く、歯肉溝滲出液を採取した後に抽出操作を行なう場合には、支持台よりやや小径の抽出用サンプル瓶や試験管の上部に支持台３を載置するだけで、人手を使わずに抽出を行なうことができるので、数多くの試料を多数処理することができる。
【００４９】
なお、取っ手４が支持台３に一体化して取り付けられている場合には、可撓性材料または弾性材料からなる取っ手を用いれば、上記と同様の効果を得ることができる。すなわち、典型的にはゴムからなる取っ手を用いた場合には、取っ手を任意の形状に容易に変形できる。このため、取っ手を抽出用サンプル瓶の上部に嵌め込む等バリエーションに富む使用方法を採用することにより、人手を使わずに抽出を行なうことができるので、数多くの試料を多数処理することができる。
【００５０】
【実施例】
以下、本発明を実施例により更に詳しく説明するが、本発明はこれらの実施例によって何ら限定されるものではない。
【００５１】
［試料採取器具の作製］
縦１２mm、横６mm、厚み１０mmの略直方体で、植毛面が平面に形成されたポリプロピレン製の支持台に、太さ３μmのナイロン毛を縦１０mm、横４mm、長さ１０mmの毛束を形成するよう植毛することにより、試料採取器具を作製した。
【００５２】
［歯肉溝滲出液の採取］
歯周病患者５名及び健常対照者３名を被験者として、第６臼歯の口蓋側歯肉溝を綿棒等で拭い、歯垢、唾液等の汚れを除いた。次に、作製した採取器具の支持台を手で摘み、歯面に対し略平行になるようにして歯肉溝付近に毛束の毛先を３０秒間押し当てて歯肉溝滲出液を採取した。なお、歯肉溝滲出液の採取を行った者は、特別の経験を有する歯科医師でも歯科衛生士でもない。
【００５３】
［歯肉溝滲出液の抽出］
試料採取器具の毛先を含む毛束部分を、ポリプロピレン製の試験管内で0.1％の牛血清アルブミンを含むトリス―塩酸緩衝液１mL（0.05Ｍ,ｐＨ7.5）に１０分間浸漬することにより歯肉溝滲出液を抽出した。
【００５４】
［マイクロプレートへの抗体の固相化］
ポリスチレン製マイクロプレートの各ウェルに抗ラクトフェリン抗体（ＤＡＫＯ社）５μg／mLを含むトリス―塩酸緩衝液（0.05Ｍ,ｐＨ8.4）を100μLずつ分注し、４℃で一夜放置して上記抗体を物理吸着によりウェルに固相化した。
【００５５】
［酵素標識抗体の調製］
別途、過ヨー素酸法により、アルカリホスファターゼを抗ラクトフェリン抗体（ＤＡＫＯ社）に標識した。
【００５６】
［歯肉溝中のラクトフェリンの測定］
作製した抗体固相化マイクロプレートの各ウェルに、上記で抽出した歯肉溝成分含有サンプルを100μL分注し、混和した後、３７℃で１時間反応させた。次に、Tween20を0.05％含むトリス―塩酸緩衝液（0.05Ｍ,ｐＨ7.5）でマイクロプレートを３回洗浄した。その後、作製した酵素標識抗ラクトフェリン抗体2.5μg／mL及び１％の牛血清アルブミンを含むトリス―塩酸緩衝生理食塩水（0.1Ｍ,ｐＨ8.0）を100μLずつ分注し、混和した後、３７℃で１時間反応させた。続いて、Tween20を0.05％含むトリス―塩酸緩衝液（0.05Ｍ,ｐＨ7.5）でマイクロプレートを３回洗浄した。
【００５７】
その後、Kind−King法のアルカリホスファターゼ基質緩衝液100μLを各ウェルに加え、３７℃で３０分間反応させた。なお、用いた基質緩衝液は、フェニルリン酸二ナトリウム0.215ｇと４―アミノアンチピリン0.09ｇを炭酸緩衝液（0.05Ｍ,ｐＨ10.15）100mLに溶解したものである。次いで、100μLの呈色液を各ウェルに加えて呈色させた。なお、用いた呈色液は、200mLの脱イオン水に2.6ｇのホウ酸を溶解させた後、0.38ｇのヘキサシアノ鉄（III）酸カリウムを溶解させたものである。最後に、各ウェルの呈色を、マイクロプレート用比色計を用いて510／630nmの波長で比色し、別途作成した検量線から歯肉溝中のラクトフェリン濃度を算出した。検査結果を［表１］に示す。
【００５８】
【表１】

【００５９】
［検査結果］
まず、本発明の試料採取器具を用いた場合には、採取操作が非常に容易であった。一方、従来の採取器具（商品名：ペリオペーパー）を用いた場合には、採取器具を幾度と無く折り曲げてしまい、採取操作が煩雑だった。
【００６０】
次に、歯周病患者５名及び健常対照者３名の歯肉溝滲出液中ラクトフェリンの濃度について検討する。実施例（本発明の採取器具を使用）では、被検者全てについてラクトフェリンが検出され、さらに歯周病患者の値が正常対照者よりも相対的に大きい値を示した。したがって、本発明の方法を用いれば、歯周病の有無を検査できることが確認された。また、本発明で得られた値と従来の口腔内検査等とを比較してその相関性を検討することにより、本発明の方法を用いて歯周病の進展度合いも検査できるものと考えられる。他方、比較例（ペリオペーパーを使用）では、被験者８名中７名について、ラクトフェリン値が微量のため検出ができなかった。したがって、従来の採取用具を用いた場合には、採取操作が困難で、かつ歯周病滲出液の採取自体も困難であることが確認された。
【００６１】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明の検査用試料の採取方法によれば、毛束を構成する細毛の毛先若しくは側部を歯肉溝に押し当ることにより歯肉溝滲出液を採取するので、経験が乏しく、医学的知識が十分でない者でも、歯肉溝から歯肉溝滲出液を容易かつ確実に採取することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の試料採取器具の第一実施例を示す外観斜視図である。
【図２】本発明の試料採取器具の第二実施例を示す外観斜視図である。
【図３】本発明の試料採取器具の第三実施例を示す外観斜視図である。
【符号の説明】
Ａ，Ｂ，Ｃ試料採取器具
１細毛
２結束部材
３支持台
４取っ手[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a method for collecting a gingival crevicular fluid used for examination of dental diseases, mainly periodontal diseases, from a gingival crevice and a collecting device used for collecting the gingival crevicular fluid.
[0002]
[Prior art]
Conventionally, examinations of dental diseases, mainly periodontal diseases, have been centered on dentists' oral examinations, and methods for measuring the depth of the gingival crevice have been performed.
[0003]
In addition, as another test method for periodontal disease, a method of collecting gingival crevicular fluid present in a periodontal pocket that is an affected part of periodontal disease and using it as a test sample (for example, non-periodic disease) Patent Document 1).
[0004]
[Non-Patent Document 1]
Takashi Hanioka and 7 others, “Utilization of Laboratory Tests of a Gingival Crevicular Sample in an Occupational Periodontal Care System: A Pilot Study”, Journal of Occupational Health, Japan Society for Occupational Health, 2000 1 Moon, Vol. 42 (Vol. 42), No. 1 (No. 1), p. 8-13
[0005]
This gingival crevice exudate is obtained by a dentist or dental hygienist using a tweezers to pick up a sampling device (trade name: Periopaper, imported and sold by Yoshida) in which the paper is formed into a toothpick or flake shape and insert it into the periodontal pocket. (GCF sampling method).
[0006]
[Problems to be solved by the invention]
However, when collecting the gingival crevicular fluid by tweezering the above sampling device with tweezers, it is easy to deform because the sampling device hits the part other than the periodontal pocket such as teeth or gums. In some cases, the sampling equipment is replaced with a new one and then collected again. In addition, since it is necessary to insert the sampling device into the periodontal pocket, the person who can use this sampling device accurately is the fact that the dentist or dental hygienist who has medical knowledge such as the structure of the periodontal pocket. There is also a problem that it is limited.
[0007]
The present invention has been made in view of such circumstances, and a sampling method and a sampling device for easily and reliably collecting gingival crevicular fluid from a gingival sulcus even for those who have little experience and insufficient medical knowledge The main purpose is to provide
[0008]
[Means for Solving the Problems]
As a result of intensive studies to achieve the above-mentioned object, the present inventor has found that the above-mentioned problems can be solved by pressing the bristles or side portions of the fine hairs constituting the hair bundle against the gingival sulcus. completed.
[0009]
That is, the present invention is characterized in that the tip or side portion of the fine hair constituting the hair bundle is pressed against the gingival sulcus, and the gingival crevicular fluid retained by the fine hair is used as a test sample for dental diseases. It is.
[0010]
By pressing the tips or sides of the fine hairs constituting such a hair bundle against the vicinity of the gingival sulcus, a part thereof surely enters the gingival sulcus (or hits the upper part of the gingival sulcus). For this reason, a capillary phenomenon works between the fine hairs that have entered the gingival sulcus (or hit the upper part of the gingival sulcus), and a predetermined amount of gingival crevice exudate is reliably held between the fine hairs. In the present invention, the “predetermined amount” refers to an amount by which a measurement target can be detected.
[0011]
In carrying out the above-described sampling method, a sample collection device including a hair bundle in which a plurality of thin hairs having a thickness of 3 to 50 μm are bundled is preferably used.
[0012]
As another specific example of the sample collection device, a sample collection device including a hair bundle in which a plurality of fine hairs having a thickness of 3 to 50 μm are planted on a support base may be mentioned.
[0013]
According to such a sampling device, the support base can be picked by tweezers or directly by hand without touching the fine hairs, so that the tip or side of the fine hairs can be more easily pressed against the gingival sulcus.
[0014]
In the present invention, in addition to the above configuration, a handle may be attached to the support base.
[0015]
According to such a sample collection device, it is possible to easily and reliably press the tip of the fine hair or the side portion even on a site where it is difficult to press the collection device such as the back side of the teeth or the back teeth.
[0016]
Moreover, in this invention, the said handle can also be attached with respect to a support stand so that isolation | separation is possible.
[0017]
According to such a sampling device, if the handle portion is separated after collecting the gingival crevicular fluid, the remaining portion becomes compact, and can be used as a sample for detection, extraction or storage in that state. .
[0018]
In the present invention, a flexible material or an elastic material may be used as the handle.
[0019]
Since such a handle can be easily deformed, the same effect as described above can be exhibited without separating the handle portion.
[0020]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The present invention is used to examine the presence or absence of onset of dental diseases, mainly periodontal diseases, and the progress of periodontal diseases.
Hereinafter, the sampling method and the sampling instrument of the test sample of the present invention will be specifically described with reference to the drawings. FIG. 1 is an external perspective view showing an embodiment of a sample collecting device. In the sampling device A, a plurality of fine hairs 1 form a hair bundle bundled by a binding member 2 at the end thereof.
[0021]
In the present invention, the bundling member 2 is used for bundling a plurality of fine hairs 1, so long as the bundling member 2 is attached to any part of the bristles 1 as long as the bristles 1 can be bundled. Good. Therefore, in FIG. 1, the binding member 2 is attached in the vicinity of the terminal end of the fine hair 1, but is not limited to such a part, and is attached to the side surface portion of the fine hair, such as the center of the side surface portion of the fine hair.
[0022]
In addition, as a method of binding the fine hair 1, there are a method of fixing the fine hair with an adhesive or the like, a method of attaching the fine hair with a thread or the like, a method of fixing the fine hair with a wire or a metal piece, and the like. These methods can be appropriately selected depending on the size, part, and the like. When using the sample-collecting device A having such a configuration, the operation of pressing the bristles against the gingival sulcus can be facilitated by picking the binding portion with tweezers or directly by hand.
[0023]
In addition, when using it for the site | part where it is difficult to press fine hair against a gingival sulcus, such as a back tooth, in addition to said structure, you may provide a holding part in a binding part.
[0024]
In the present invention, the fine hair 1 is used for collecting a gingival crevicular fluid used as a test sample for dental diseases. In the present invention, since the fine hairs 1 need to surely enter the gingival sulcus by simple means of pressing against the gingival sulcus, the fine hairs 1 need to be formed as a bundle of hairs bundled together.
[0025]
Moreover, in this invention, said gingival crevice exudate is hold | maintained at a fine hair mainly by the 1st effect | action among the two effects shown below, or the combination. The first effect is that when the tips or sides of the fine hairs constituting the hair bundle are pressed against the gingival sulcus, a part of them enters the gingival sulcus, etc. A predetermined amount of gingival crevicular fluid is retained. As the second action, when the tip or side part of the fine hair constituting the hair bundle is pressed against the gingival sulcus, a part of it enters the gingival sulcus etc. A fixed amount of gingival crevicular fluid is retained.
[0026]
The fine hair that mainly exhibits the first action is not particularly limited, and examples thereof include synthetic resin hair such as polyamide, rayon, polybutylene terephthalate, and polypropylene, and natural hair such as pig hair, horse hair, and wool.
[0027]
Further, the fine hair showing both the first action and the second action is not particularly limited, but for example, paper, foam, cloth, etc. are easily bent when pressed against the gingival sulcus. It can be used when it does not have enough strength.
[0028]
In addition, as long as it has said effect | action, although the front-end | tip and cross-sectional shape of a fine hair, the length and thickness of a fine hair are not specifically limited, The example is demonstrated below. First, examples of the shape of the tip portion of the fine hair include a flat-cut type and a step-cut type, and the step-cut type is particularly preferable in the present invention because it is thin toward the tip and easily enters the gingival sulcus. Used. In addition, as the cross-sectional shape of the fine hair, an arbitrary shape (for example, a circular shape, an elliptical shape, a triangular shape, a quadrangular shape, a polygonal shape, or the like) can be appropriately selected according to the use site or the like. The length of the fine hair is usually preferably 5 to 20 mm, and more preferably 10 to 15 mm. The thickness of the fine hair is usually preferably 1 μm to 2 mm, and more preferably 3 μm to 50 μm.
[0029]
Moreover, the length of each fine hair which comprises a hair | bristle bundle can be set arbitrarily, According to a use site | part etc., the front-end | tip of a hair | bristle bundle may be arrange | equalized uniformly and may be made uneven.
[0030]
Next, a method for collecting the gingival crevicular fluid will be described. First, remove dirt such as plaque and saliva around the gingival crevice of the test site, pick the binding part or support part of the sampling device of the present invention with tweezers or hands, and attach the tip or side of the fine hair near the gingival crevice. Press for a predetermined time. Here, in order to facilitate the entry of gingival crevicular fluid by facilitating the entry of gingival crevicular fluid into the gingival crevice, the fine bristles are substantially parallel to the tooth surface rather than being pressed substantially perpendicular to the tooth surface. It is better to press against. The pressing time can be appropriately selected from several seconds to several minutes depending on the examination site, the examination item, and the type (number) of examinations.
[0031]
As described above, the gingival crevicular fluid is easily and reliably collected because the gingival crevicular fluid is held in the fine hair by pressing the fine hair of the sampling device against the gingival crevice for a predetermined time. can do.
[0032]
The gingival crevice exudate collected by the sampling device can be used as it is as a test sample, or the gingival crevicular exudate can be extracted as desired, and the obtained separation liquid can be used as a test sample. it can. When performing such extraction, the hair bundle part of the sampling device is immersed in a predetermined concentration and a predetermined amount of extraction liquid in a test tube, and the gingival crevicular fluid is extracted and separated. Whether or not to perform the separation operation by extraction can be appropriately selected depending on the method for measuring the gingival crevicular fluid component.
[0033]
Then, the measuring object in the gingival crevicular fluid obtained above is demonstrated. In the present invention, any marker substance effective for the examination and diagnosis of periodontal disease can be used as a measurement target, and the type of measurement target is not particularly limited.
[0034]
Here, the present inventor has been searching for marker proteins effective for periodontal disease examination and diagnosis, and based on those results, an example of a preferable measurement object will be described below. First, the present inventor shows that lactoferrin and myeloperoxidase derived from neutrophils in periodontal pockets of periodontal disease patients show higher values than normal subjects, and that these values increase due to worsening of the disease state It has been found that periodontal disease can be diagnosed by measuring lactoferrin and myeloperoxidase in the gingival crevicular fluid (Japanese Patent Laid-Open No. 10-2899).
[0035]
In addition, the inventor has found that in periodontal disease, the blood protein in the periodontal pocket shows a value higher than the normal value, and that the value increases as the condition worsens, It has been found that periodontal disease can be diagnosed by measuring albumin and α1-antitrypsin in the gingival crevicular fluid (Japanese Patent Laid-Open Nos. 10-197527 and 2000-28608).
[0036]
Therefore, it is preferable to measure at least a component in the gingival crevicular fluid selected from lactoferrin, myeloperoxidase, albumin, and α1-antitrypsin. In addition, the measurement method of the measurement target in the present invention is not particularly limited, but it is preferable to use an immunological measurement method selected from an enzyme immunization method, a latex agglutination method, an immunoturbidimetric method, and the like. More preferably, an enzyme immunization method, particularly a sandwich ELISA method or a latex agglutination reaction method is preferred.
[0037]
For example, when the sandwich ELISA method is used with lactoferrin as the measurement target, one of two types of anti-lactoferrin antibodies that recognize different antigen-determining sites is bound to a known insoluble carrier, which is used as the primary antibody, and the other is used as the second antibody. It is preferably used as a secondary antibody. The secondary antibody is preferably labeled with an enzyme or the like. The labeling enzyme is not particularly limited as long as it is a known enzyme. For example, if alkaline phosphatase is used, a substrate solution is added after the completion of the antigen-antibody reaction to develop color, and from the absorbance and a separately prepared calibration curve, a measurement sample is obtained. Since the density | concentration of the measuring object in it can be quantified, it uses suitably in this invention.
[0038]
The concentration of the measurement target in the measurement sample obtained as described above has a correlation with the progress of periodontal disease as described above. Therefore, according to the present invention, it is possible to examine the presence or absence of onset of dental diseases, mainly periodontal diseases, and the progress of periodontal diseases.
[0039]
Next, an example of a sample collection tool that is preferably used in the above-described sample collection method for inspection will be additionally described. FIG. 2 is an external perspective view showing a second embodiment of the sampling device. The sample collection device B includes a hair bundle in which a plurality of fine hairs 1 are planted on a support base 3.
[0040]
In the sample collection device B, in addition to the same effect as the sample collection device A, the support table 3 can be picked by tweezers or directly by hand without touching the fine hair 1 by providing the support table 3. The tip or the side can be more easily pressed against the gingival sulcus. In addition, as described above, when the extraction operation is performed after collecting the gingival crevicular fluid, it is necessary to place the support table 3 on the upper part of the extraction sample bottle or the test tube having a slightly smaller diameter than the support table 3. Since extraction can be performed without using a large number of samples, a large number of samples can be processed quickly.
[0041]
The material of the support is not particularly limited as long as it is lightweight when picked and operated. For example, polyethylene, polypropylene, polyethylene terephthalate, polybutylene terephthalate, polystyrene, acrylonitrile butadiene styrene, acrylonitrile styrene, polymethacrylic acid. Resins such as methyl, cellulose propionate, polyacrylate, polycarbonate, polyoxymethylene and polyamide can be used alone or in admixture of two or more.
[0042]
In addition, the shape of the flocked surface of the support base is not particularly limited, and an arbitrary shape (for example, a quadrangle, a polygon, a circle, an ellipse, or the like) can be appropriately selected according to a use site or the like. Furthermore, although it varies depending on the subject, the gums have many curved surfaces, so that the shape of the flocked surface may be curved to one side in order to adapt to the curved surface shape.
[0043]
Also, when collecting gingival crevicular fluid from the gingival sulcus of one tooth, the width of the support base is suitably 5 to 20 mm, but by increasing the width of the support base, Gingival crevicular fluid can be collected from the gingival sulcus. In this case, the width of the support base is suitably 20 to 150 mm.
[0044]
The length of the hair bundle (fine hair) from the flocked surface and the tip shape are not particularly limited as long as the gingival crevicular fluid can be collected reliably. As an example, the length of the hair bundle (fine hair) is usually preferably 5 to 20 mm, and more preferably 10 to 15 mm. In addition, by arbitrarily setting the hair trimming shape and the hair length at the tip of the fine hair, the tip shape of the hair bundle is made to be a single flat shape, an oblique shape, a mountain shape, or an uneven shape. Furthermore, it is good also as a different structure by the outer side and inner side of a flocked surface, a front-end | tip part, and a rear-end part.
[0045]
FIG. 3 is an external perspective view showing a third embodiment of the sampling device. The sample collection device C includes a hair bundle in which a plurality of fine hairs 1 are planted on a support base 3, and a handle 4 is attached to the support base 3. By providing the support 4 with the handle 4, the fine hairs 1 can be easily and reliably pressed by gripping the handle 4 with respect to the back teeth and the gingival grooves on the back of the teeth.
[0046]
As long as it has such an effect, the attachment position of the handle 4 is not particularly limited. In FIG. 3, the handle 4 is attached in a direction perpendicular to the support portion 3, but depending on the collection site of the gingival crevicular fluid. It can be appropriately selected such as attaching a handle parallel to the support 3.
[0047]
The length of the handle may be at least the length from the lips to the back teeth and the length that a person can hold with one hand so that it can also correspond to the gingival sulcus of the back teeth. Further, the material of the normal handle may be the same as the material of the support 3 provided in the above-described sample collection device B, and is not particularly limited.
[0048]
Moreover, in this invention, the handle 4 may be attached with respect to the support stand 3 so that isolation | separation is possible. By making the handle separable in this way, as described above, when the extraction operation is performed after collecting the gingival crevicular fluid, the support table is placed on the upper part of the sample bottle or test tube having a slightly smaller diameter than the support table. Since the sample 3 can be extracted without using human hands by simply mounting the sample 3, a large number of samples can be processed.
[0049]
When the handle 4 is integrally attached to the support base 3, the same effect as described above can be obtained by using a handle made of a flexible material or an elastic material. That is, when a handle typically made of rubber is used, the handle can be easily deformed into an arbitrary shape. Therefore, by adopting a variety of usage methods such as fitting the handle into the upper part of the extraction sample bottle, extraction can be performed without using human hands, and a large number of samples can be processed.
[0050]
【Example】
EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention in more detail, this invention is not limited at all by these Examples.
[0051]
[Production of sampling equipment]
A nylon bundle with a thickness of 3 μm is formed on a polypropylene support with a length of 12 mm, a width of 6 mm, and a thickness of 10 mm. A sample collection device was prepared by implanting the hair.
[0052]
[Collecting gingival crevicular fluid]
With 5 periodontal patients and 3 healthy controls as subjects, the palatal gingival sulcus of the sixth molar was wiped with a cotton swab etc. to remove stains such as plaque and saliva. Next, the support stand of the produced sampling device was picked by hand, and the tip of the hair bundle was pressed near the gingival sulcus for 30 seconds so as to be substantially parallel to the tooth surface, and the gingival crevicular fluid was collected. The person who collected the gingival crevicular fluid is neither a dentist or a dental hygienist with special experience.
[0053]
[Extraction of gingival crevicular fluid]
The gingival sulcus is obtained by immersing the hair bundle portion including the hair tip of the sampling device in a polypropylene test tube for 10 minutes in 1 mL (0.05 M, pH 7.5) of Tris-HCl buffer containing 0.1% bovine serum albumin. Exudate was extracted.
[0054]
[Solidification of antibody to microplate]
Dispense 100 μL of Tris-HCl buffer (0.05 M, pH 8.4) containing 5 μg / mL of anti-lactoferrin antibody (DAKO) into each well of a polystyrene microplate, and leave the antibody at 4 ° C. overnight. The well was immobilized on the well by physical adsorption.
[0055]
[Preparation of enzyme-labeled antibody]
Separately, alkaline phosphatase was labeled with an anti-lactoferrin antibody (DAKO) by the periodic acid method.
[0056]
[Measurement of lactoferrin in gingival crevice]
100 μL of the gingival crevice component-containing sample extracted above was dispensed into each well of the prepared antibody-immobilized microplate, mixed, and reacted at 37 ° C. for 1 hour. Next, the microplate was washed three times with Tris-HCl buffer (0.05 M, pH 7.5) containing 0.05% Tween20. Thereafter, 100 μL each of the prepared enzyme-labeled anti-lactoferrin antibody 2.5 μg / mL and Tris-HCl buffered saline (0.1 M, pH 8.0) containing 1% bovine serum albumin was dispensed and mixed, and then 37 ° C. For 1 hour. Subsequently, the microplate was washed three times with Tris-HCl buffer (0.05 M, pH 7.5) containing 0.05% Tween20.
[0057]
Thereafter, 100 μL of Kind-King alkaline phosphatase substrate buffer was added to each well and allowed to react at 37 ° C. for 30 minutes. The substrate buffer used was prepared by dissolving 0.215 g of disodium phenylphosphate and 0.09 g of 4-aminoantipyrine in 100 mL of carbonate buffer (0.05 M, pH 10.15). Next, 100 μL of the color developing solution was added to each well to cause coloration. The color developing solution used was prepared by dissolving 2.6 g of boric acid in 200 mL of deionized water and then dissolving 0.38 g of potassium hexacyanoferrate (III). Finally, the coloration of each well was colorimetrically measured at a wavelength of 510/630 nm using a microplate colorimeter, and the lactoferrin concentration in the gingival sulcus was calculated from a separately prepared calibration curve. The inspection results are shown in [Table 1].
[0058]
[Table 1]

[0059]
[Inspection results]
First, when the sample collecting instrument of the present invention was used, the sampling operation was very easy. On the other hand, when a conventional sampling instrument (trade name: Periopaper) was used, the sampling instrument was bent several times, and the sampling operation was complicated.
[0060]
Next, the concentration of lactoferrin in the gingival crevicular fluid of 5 periodontal patients and 3 healthy controls will be examined. In the examples (using the collection device of the present invention), lactoferrin was detected in all subjects, and the value of periodontal disease patients was relatively higher than that of normal controls. Therefore, it was confirmed that the presence or absence of periodontal disease can be examined by using the method of the present invention. In addition, it is considered that the degree of periodontal disease can be examined using the method of the present invention by comparing the values obtained in the present invention with conventional intraoral examinations and examining the correlation. . On the other hand, in the comparative example (using Periopaper), 7 of 8 subjects could not be detected because the lactoferrin level was very small. Therefore, it was confirmed that when a conventional collection tool was used, the collection operation was difficult and the collection of periodontal disease exudate itself was difficult.
[0061]
【The invention's effect】
As described above, according to the method for collecting a test sample of the present invention, the gingival crevicular exudate is collected by pressing the tip or side of the fine hair constituting the hair bundle against the gingival sulcus. Even those who are poor and have insufficient medical knowledge can easily and reliably collect gingival crevicular fluid from the gingival sulcus.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is an external perspective view showing a first embodiment of a sampling device according to the present invention.
FIG. 2 is an external perspective view showing a second embodiment of the sampling device of the present invention.
FIG. 3 is an external perspective view showing a third embodiment of the sampling device of the present invention.
[Explanation of symbols]
A, B, C Sampling instrument 1 Fine hair 2 Bundling member 3 Support base 4 Handle

Claims

A sampling device comprising a hair bundle in which a plurality of thin hairs having a thickness of 3 to 50 μm are bundled,
A sample-collecting device, wherein the tip or side portion of the fine hair constituting the hair bundle is pressed against the vicinity of the gingival sulcus, and the gingival crevicular fluid retained by the trichome is used as a sample for examination of a dental disease.

A sample collection device comprising a hair bundle in which a plurality of fine hairs having a thickness of 3 to 50 μm are planted on a support,
A sample-collecting device, wherein the tip or side portion of the fine hair constituting the hair bundle is pressed against the vicinity of the gingival sulcus, and the gingival crevicular fluid retained by the trichome is used as a sample for examination of a dental disease.

The sampling apparatus according to claim 2 , wherein a handle is attached to the support base.

The sample collecting instrument according to claim 3 , wherein the handle is detachably attached to the support base.

The sampling instrument according to claim 3 , wherein the handle is made of a flexible material or an elastic material.