JP4326744B2

JP4326744B2 - Physiological activity activator

Info

Publication number: JP4326744B2
Application number: JP2002070801A
Authority: JP
Inventors: 茂乃佐々木; 哲夫檜山
Original assignee: Nippon Shikizai Inc
Current assignee: Nippon Shikizai Inc
Priority date: 2002-03-14
Filing date: 2002-03-14
Publication date: 2009-09-09
Anticipated expiration: 2022-03-14
Also published as: JP2004059431A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、藍藻を培養した後、さらに前記培養温度より高い温度に加熱して、藍藻に熱ショックを与えて改質した藍藻及び前記改質藍藻製造時の培養上清の新規機能に係る生理作用活性化剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、酵母を利用した代謝活性化剤の技術が開示されている（特表平１０−５０５６１２公報）。しかしながら、酵母の活性成分の製造は煩雑であり、また酵母自体を培養するための培地も高価である。さらに、前記特表平１０−５０５６１２公報においては、生理作用を確認したデータは示されておらず、その作用の程度、範囲も不明である。
【０００３】
一方、近年植物系由来の代謝活性化剤等の生理作用活性化剤は依然として需要があるが、酵母は植物系由来ではない。また、植物系由来としてはクロレラの線維芽細胞増殖促進剤としての技術開示があるが（特開平１０−３６２８３公報）、その効果の程度は充分でない。
【０００４】
さらに、熱安定性スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）をシアノバクテリア等の光合成微生物を用いて産生させてこれを抽出する方法が開示されているが（特開平７−１３５９７０公報）、そのＳＯＤ活性は充分でない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は上記事情に鑑みてなされたもので、その目的は、安価で、簡単に製造することができる、優れた生理作用活性を有する植物系由来の生理作用活性化剤を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、藍藻に熱ショックを与えて改質した藍藻及び藍藻改質過程で得られる培養上清に、高活性の生理作用活性化機能があることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００７】
すなわち、本発明は、藍藻を培養した後、さらに前記培養温度より高い温度に加熱して、藍藻に熱ショックを与えて改質した藍藻からなる生理作用活性化剤である。
【０００８】
前記改質藍藻からなる生理作用活性化剤としては、ＳＯＤ様活性剤、過酸化脂質生成抑制剤、線維芽細胞増殖促進剤、育毛剤、突然変異抑制剤が挙げられる。
【０００９】
また、本発明は、藍藻を培地に懸濁させた培養液中で培養した後、さらに前記培養液を前記培養温度より高い温度に加熱した後、前記培養液を分離して得られる培養上清からなる生理作用活性化剤である。この生理作用活性化剤としては、線維芽細胞増殖促進剤が挙げられる。
【００１０】
本発明において藍藻の最適培養温度とは、藍藻が指数的に増殖する最適な培養温度（培地の温度）である。
【００１１】
本発明においては、ＳＯＤ様活性、過酸化脂質生成抑制、育毛、突然変異抑制、線維芽細胞増殖促進等の作用を生理作用と称し、それらの生理作用機能を有するものを生理作用活性化剤と称する。
【００１２】
【発明の実施の形態】
以下、本発明の実施形態について詳述する。
【００１３】
本発明において、藍藻は公知の藍藻の中から選択され用いられる。藍藻としては、例えば、Synechococcus属、Synechocystis属、Cyanothece属、Choroococcus属、Gloeocapsa属、Microcystis属、Aphanocapsa属、Aphanothece属、Chamaesiphon属、Coelosphaerium属、Dactylococcpsis属、Eucapsis属、Gloeobacter属、Gloeothece属、Gomphosphaeria属、Holopedia属、Marssoniella属、Marssoniella属、Merismopedia属、Rhabdoderma属、Tetrapedia属等の藍藻が挙げられる。さらに、具体的には、Synechococcus
vulcanus、Synechococcus
elongatus、Synechococcus
sp.PCC7942、Synechocystis
sp.PCC6803、Cyanothece sp.BH68等が挙げられる。これらのうちで、Synechococcus属の藍藻、特に、Synechococcus vulcanus、Synechococcus elongatus、Synechococcus sp.PCC7942が好ましく用いられる。さらに好ましくは、Synechococcus
vulcanusである。
【００１４】
本発明においては、藍藻を培養した後、さらに前記培養温度より高い温度に加熱して、藍藻に熱ショックを与えて改質した藍藻（以下、改質藍藻という。）、及び藍藻を培地に懸濁させた培養液中で培養した後、さらに前記培養液を前記培養温度より高い温度に加熱した後、前記培養液を分離して得られる培養上清が用いられる。
【００１５】
藍藻は、まず通常の培養方法を用いて培養される。例えば、藍藻を培地中に懸濁させて培養する方法がとられる。培養は、該藍藻個々が有している最適培養温度で培養されることが好ましい。最適培養温度は、例えばSynechococcus
vulcanusは５０〜５５℃程度、Synechocystis PCC6803は３０〜３４℃程度、Synechococcus elongatusは５０〜５７℃程度である。
【００１６】
培地としては、通常の藍藻を培養する培地、例えば無機培地が用いられる。培養は好気性条件下、光照射下で行うことが好ましい。
【００１７】
本発明においては、藍藻を好ましくは藍藻の最適培養温度で培養を行った後、さらに前記培養温度より高い温度に加熱される（この工程を加熱工程という。）。培養温度の加熱によって増殖した藍藻は熱ショックを受け改質される。なお、加熱工程時にも培養が継続され（前記培養を第一段階の培養とすれば継続される培養は第二段階の培養となる。）、藍藻が増殖されるであろうが、このこと自体は本発明の目的とは関係することはない。前記加熱工程時の加熱温度は、第一段階の培養温度より高い温度であればよいが、第一段階の培養温度より５〜２５℃高い温度が好ましい。さらに好ましくは１０〜２０℃高い温度である。
【００１８】
前記加熱工程の培養時間は任意に設定できるが、２〜５時間が好適である。また、前記加熱工程時には、培養液に光照射と通気が行われることが好ましい。
【００１９】
前記加熱工程後、培養培地から改質された藍藻を分離する。藍藻が懸濁された培養液を用いた場合は、必要に応じて冷却した後遠心分離などによって改質藍藻層と培養上清とに分けられ、改質藍藻を分離する。また、前記培養上清は後述するように藍藻とは別の生理活性もあるので分離して用いることができる。
【００２０】
前記改質藍藻は、破砕され破砕物として、また溶媒により抽出され抽出物として用いることが効果を充分に発揮させるために好ましい。特に、破砕物として用いることが好ましい。破砕は機械的に破砕するのが好ましく、例えばミキサー、凍結破砕装置、コロイドミル等が用いられる。また、抽出は公知の溶媒を用いた抽出方法が用いられる。
【００２１】
本発明における前記改質藍藻、前記培養上清には、後述するように、高活性の、過酸化脂質生成抑制、育毛、突然変異抑制、線維芽細胞増殖促進等の生理作用機能を有する。
【００２２】
したがって、本発明は、前記の生理作用機能を有する生理作用活性化剤を提供するものである。この生理作用活性化剤は、生理作用活性化剤として活用できる他、種々の応用が可能であり、生理作用活性化剤を配合して医薬品、医薬品部外品を含む化粧品、飲食品等の組成物として前記機能を発揮させることができる。
【００２３】
なお、前記改質藍藻は、特に線維芽細胞増殖促進作用とＳＯＤ様活性作用とを併せ持つので抗老化機能を有し、抗老化剤として活用できる。
【００２４】
また、前記改質藍藻は熱安定性に優れ、例えば、７０℃では１時間、７５℃では４０分間曝してもその強いＳＯＤ様活性等の生理活性は失われることはない。
【００２５】
【実施例】
以下実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。実施例の説明に先立ち本発明で用いた生理作用の測定方法について説明する。
【００２６】
［ＳＯＤ様活性の測定］
キサンチンとＥＤＴＡを含む炭酸ナトリウム−塩酸緩衝液２．６ｍｌに、ＮＢＴ水溶液、０．１５％ＢＳＡ水溶液、および試料を混合し、２５℃にて１０分放置した。その後、酵素溶液を添加し、反応開始から２０分後に反応液の５６０ｎｍにおける吸光度を測定し、ＮＢＴ還元抑制率を算出した。酵素反応によって発生したＯ_２ ⁻がどのくらい消去されたかをＮＢＴの還元により調べ、その消去能をＳＯＤ様活性とした。
【００２７】
［過酸化脂質生成抑制作用の測定］
紫外線により引き起こされるリノレン酸の過酸化に対する、抑制効果をＴＢＡ法を用いて測定した。
【００２８】
［線維芽細胞増殖促進作用の測定］
あらかじめ細胞（ＮＢ１ＲＧＢ理研ジ−ンバンクより購入）が増殖も減少もしないＦＢＳ濃度を検討し、０．５％ＦＢＳ−ＭＥＭ培地がこの条件を満たすことを確認し、試験試料のみの線維芽細胞増殖促進作用を評価できるようにした。細胞を１．５％ＦＢＳ−ＭＥＭ培地を用いて１×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｄｉｓｈ（２ｍｌ）の密度となるように３５ｍｍｄｉｓｈに播種し、２４時間５％ＣＯ_２、３７℃の条件で培養した。その後培養液を０．５％ＦＢＳ−ＭＥＭに交換し、試料を最高１０％の添加濃度となるように添加した。９日間培養後、細胞をビュルケルチュルク血球計算板でカウントした。生理食塩水を添加したブランクをもうけ、ブランクの細胞数を１００として、それに対する試料添加群の細胞生存率を示した。ｃｏｎｔｒｏｌとして１．５％ＦＢＳ−ＭＥＭを使用した。培養上清については、培地の測定も行いその分の作用を補正して、培養上清の作用とした。試料の添加量は５％とした。
【００２９】
［育毛作用の測定］
小川ら、フレグランスジャーナル、５，２０（１９８９）を参考に、試料を背部毛を除毛した８週齢のＣ３Ｈマウスの背部に塗布することにより育毛作用効果を評価した。
【００３０】
［突然変異抑制作用の測定］
紫外線照射によって細菌に誘発される突然変異を、ＤＮＡ傷害として計測した。突然変異の検出は、Ames Testの原理を利用し、突然変異菌及び生存菌から突然変異頻度を計算した。
【００３１】
次に、本発明に用いられる改質藍藻及び培養上清の製造実施例を参考製造例とともに説明する。
【００３２】
［参考製造例：藍藻の製造］
藍藻（Synechococcus
vulcanus）１白金耳を５００ｍｌの無機培地中に懸濁した。この懸濁液を５０℃で２日間保持した。次いで、懸濁液を遠心分離し、培養上清とSynechococcus
vulcanusからなる沈殿物層に分け、Synechococcus
vulcanusを得た。次いで、Synechococcus
vulcanus５ｇを５０ｍｌの蒸留水で懸濁してミキサーで破砕し、Synechococcus
vulcanusの破砕物（藍藻Ａという。）を得た。
【００３３】
［製造例１：改質藍藻の製造１］
藍藻（Synechococcus
vulcanus）１白金耳を５００ｍｌの無機培地中に懸濁した。この懸濁液を５０℃で２日間保持した。次いで、懸濁液を加熱し、６３℃に上昇させ、この温度に３時間保持した。この間光照射と通気を行った。次いで、懸濁液を遠心分離し、培養上清（培養上清Ａという。）と改質Synechococcus
vulcanusからなる沈殿物層に分け、改質Synechococcus
vulcanusを得た。次いで、改質Synechococcus
vulcanus５ｇを５０ｍｌの蒸留水で懸濁してミキサーで破砕し、改質Synechococcus
vulcanusの破砕物（改質藍藻Ａという。）を得た。
【００３４】
［製造例２：改質藍藻の製造２］
藍藻（Synechococcus
sp.PCC7942）１白金耳を５００ｍｌの無機培地中に懸濁した。この懸濁液を３０℃で２日間保持した。次いで、懸濁液を加熱し、４２℃に上昇させ、この温度に３時間保持した。この間光照射と通気を行った。次いで、懸濁液を遠心分離し、培養上清（培養上清Ｂという。）と改質Synechococcus
sp.PCC7942からなる沈殿物層に分け、改質Synechococcus
sp.PCC7942を得た。次いで、改質Synechococcus
sp.PCC7942５ｇを５０ｍｌの蒸留水で懸濁してミキサーで破砕し、改質Synechococcus
sp.PCC7942の破砕物（改質藍藻Ｂという。）を得た。
【００３５】
［製造例３：改質藍藻の製造３］
藍藻（Synechococcus
elongatus）１白金耳を５００ｍｌの無機培地中に懸濁した。この懸濁液を５０℃で２日間保持した。次いで、懸濁液を加熱し、６３℃に上昇させ、この温度に３時間保持した。この間光照射と通気を行った。次いで、懸濁液を遠心分離し、培養上清（培養上清Ｃという。）と改質Synechococcus
elongatusからなる沈殿物層に分け、改質Synechococcus
elongatusを得た。次いで、改質Synechococcus
elongatus５ｇを５０ｍｌの蒸留水で懸濁してミキサーで破砕し、改質Synechococcus
elongatusの破砕物（改質藍藻Ｃという。）を得た。
【００３６】
（実施例１）ＳＯＤ様活性の測定１
藍藻Ａ及び改質藍藻ＡのＳＯＤ様活性の結果を図１に示した。
【００３７】
【図１】
【００３８】
図１の結果から明らかなように、改質藍藻ＡのＮＢＴ還元抑制率が藍藻Ａに比べ高く、藍藻Ａに比べて改質藍藻Ａが強いＳＯＤ様活性を有していることが分かる。
【００３９】
（実施例２）ＳＯＤ様活性の測定２
改質藍藻ＢのＳＯＤ様活性の結果を図２に示した。また、改質藍藻Ａを蒸留水で１０倍に希釈したもののＳＯＤ様活性も同様にして求め、その結果を同じ図２に示した。
【００４０】
【図２】
【００４１】
図２の結果から明らかなように、改質藍藻ＢもＳＯＤ様活性を有することが確認できた。
【００４２】
（実施例３）ＳＯＤ様活性の耐熱性の測定
藍藻Ａおよび改質藍藻Ａを７５℃に４０分曝した後に、ＳＯＤ様活性を測定した。結果を図３に示した。
【００４３】
【図３】
【００４４】
図３の結果から明らかなように、改質藍藻Ａは藍藻Ａに比べて７５℃に４０分間曝してもその強いＳＯＤ様活性は失われないことが確認できた。
【００４５】
（実施例４）過酸化脂質生成抑制作用
改質藍藻Ａの過酸化脂質生成抑制作用を測定した。結果を図４に示した。
【００４６】
【図４】
【００４７】
図４の結果から明らかなように、改質藍藻Ａは過酸化脂質生成抑制率が高く、過酸化脂質生成抑制作用を有することが確認できた。
【００４８】
（実施例５）線維芽細胞増殖促進作用の測定１
改質藍藻Ａの線維芽細胞増殖促進作用を測定した。結果を図５に示した。
【００４９】
【図５】
【００５０】
図５の結果から明らかなように、改質藍藻Ａは、線維芽細胞増殖促進作用を有することが確認された。
【００５１】
（実施例６）線維芽細胞増殖促進作用の測定２
改質藍藻Ａ、改質藍藻Ｃ、培養上清Ａ及び培養上清Ｃの線維芽細胞増殖促進作用を測定した。結果を図６に示した。
【００５２】
【図６】
【００５３】
図６の結果から明らかなように、改質藍藻Ａ、改質藍藻Ｃ、培養上清Ａ及び培養上清Ｃは、線維芽細胞増殖作用を有することが確認された。
【００５４】
（実施例７）育毛作用の測定
改質藍藻Ａの育毛作用を測定した。結果を図７に示した。
【００５５】
【図７】
【００５６】
図７の結果から明らかなように、改質藍藻Ａは強い育毛作用が得られることが確認された。
【００５７】
（実施例８）突然変異抑制作用
改質藍藻Ａの突然変異抑制作用を測定した。結果を図８に示した。
【００５８】
【図８】
【００５９】
図８の結果から明らかなように、改質藍藻Ａは強い突然変異抑制作用を有することが確認できた。
【００６０】
【発明の効果】
以上、詳述したように、本発明における改質藍藻は、ＳＯＤ様活性、過酸化脂質生成抑制、線維芽細胞増殖促進、育毛、突然変異抑制等の生理作用を発揮する機能を有することが明らかになり、このことから本発明によれば、前記改質藍藻からなるＳＯＤ様活性、過酸化脂質生成抑制、線維芽細胞増殖促進、育毛、突然変異抑制等の生理作用を有する新規な生理作用活性化剤が得られる。また、藍藻を培地に懸濁させた培養液中で培養した後、さらに前記培養液を前記培養温度より高い温度に加熱した後、前記培養液を分離して得られる培養上清には線維芽細胞増殖促進の生理作用を発揮する機能があることが明らかになり、このことから本発明によれば、前記培養上清からなる線維芽細胞増殖促進の生理作用を有する新規な生理作用活性化剤が得られる。
【図面の簡単な説明】
【図１】藍藻Ａ及び改質藍藻ＡのＳＯＤ様活性を示す図である。
【図２】改質藍藻Ａ及び改質藍藻ＢのＳＯＤ様活性を示す図である。
【図３】藍藻Ａ及び改質藍藻ＡのＳＯＤ様活性の耐熱性を示す図である。
【図４】改質藍藻Ａの過酸化脂質生成抑制作用を示す図である。
【図５】改質藍藻Ａの線維芽細胞増殖促進作用を示す図である。
【図６】改質藍藻Ａ、改質藍藻Ｃ、培養上清Ａ及び培養上清Ｃの線維芽細胞増殖促進作用を示す図である。
【図７】改質藍藻Ａの育毛作用を示す図である。
【図８】改質藍藻Ａの突然変異抑制作用を示す図である。
【符号の説明】[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention cultivates cyanobacteria and then further heats the cyanobacteria to a temperature higher than the culture temperature to give a heat shock to the cyanobacteria to modify the cyanobacteria and the physiological function relating to the novel function of the culture supernatant during the production of the modified cyanobacteria It relates to an action activator.
[0002]
[Prior art]
Conventionally, the technique of the metabolic activation agent using yeast has been disclosed (Japanese Patent Publication No. 10-505612). However, the production of the active ingredient of yeast is complicated and the medium for culturing the yeast itself is also expensive. Furthermore, in the Japanese translation of PCT publication No. 10-505612, data confirming the physiological action is not shown, and the extent and range of the action are unknown.
[0003]
On the other hand, physiologically active activators such as plant-derived metabolic activators are still in demand in recent years, but yeast is not derived from plant systems. Moreover, although there is a technical disclosure as a chlorella fibroblast growth promoter from plant origin (JP-A-10-36283), the degree of the effect is not sufficient.
[0004]
Furthermore, although a method for producing thermostable superoxide dismutase (SOD) using a photosynthetic microorganism such as cyanobacteria and extracting the same has been disclosed (JP-A-7-135970), its SOD activity is not sufficient. .
[0005]
[Problems to be solved by the invention]
The present invention has been made in view of the above circumstances, and an object of the present invention is to provide a plant-derived physiological activity activator having excellent physiological activity that is inexpensive and can be easily produced. .
[0006]
[Means for Solving the Problems]
As a result of diligent research to solve the above problems, the present inventors have activated cyanobacteria modified by applying a heat shock to cyanobacteria and culture supernatant obtained in the process of modifying cyanobacteria. As a result, the present invention has been completed.
[0007]
That is, the present invention is a physiological activity activator comprising a cyanobacteria that has been modified by culturing cyanobacteria and then further heating to a temperature higher than the culture temperature to give a heat shock to the cyanobacteria.
[0008]
Examples of the physiologically active activator comprising the modified cyanobacteria include SOD-like activators, lipid peroxide production inhibitors, fibroblast proliferation promoters, hair restorers, and mutation inhibitors.
[0009]
Further, the present invention provides a culture supernatant obtained by culturing in a culture solution in which cyanobacteria is suspended in a culture medium, further heating the culture solution to a temperature higher than the culture temperature, and then separating the culture solution. Is a physiologically active activator comprising Examples of the physiological activity activator include a fibroblast proliferation promoter.
[0010]
In the present invention, the optimum culture temperature for cyanobacteria is the optimum culture temperature (medium temperature) at which cyanobacteria grow exponentially.
[0011]
In the present invention, actions such as SOD-like activity, lipid peroxide production inhibition, hair growth, mutation inhibition, and fibroblast proliferation promotion are referred to as physiological actions, and those having these physiological action functions are referred to as physiological action activators. Called.
[0012]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail.
[0013]
In the present invention, cyanobacteria are selected from known cyanobacteria. Examples of cyanobacteria include, for example, Synechococcus, Synechocystis, Cyanothece, Choroococcus, Gloeocapsa, Microcystis, Aphanocapsa, Aphanothece, Chamaesiphon, Coelosphaerium, Dactylococcpsis, Eucapsis, And cyanobacteria such as Holopedia, Marssoniella, Marssoniella, Merismopedia, Rhabdoderma, Tetrapedia, and the like. Furthermore, specifically, Synechococcus
vulcanus, Synechococcus
elongatus, Synechococcus
sp.PCC7942, Synechocystis
sp.PCC6803, Cyanothece sp.BH68 and the like. Among these, cyanobacteria belonging to the genus Synechococcus, particularly Synechococcus vulcanus, Synechococcus elongatus, Synechococcus sp. PCC7942 are preferably used. More preferably, Synechococcus
It is vulcanus.
[0014]
In the present invention, after cultivating cyanobacteria, it is further heated to a temperature higher than the above-mentioned culture temperature to give a heat shock to the cyanobacteria (hereinafter referred to as modified cyanobacteria), and the cyanobacteria are suspended in a medium. After culturing in a turbid culture solution, the culture solution is further heated to a temperature higher than the culture temperature, and then the culture supernatant obtained by separating the culture solution is used.
[0015]
The cyanobacteria are first cultured using a normal culture method. For example, a method is employed in which cyanobacteria are suspended in a medium and cultured. The culture is preferably performed at the optimum culture temperature possessed by each cyanobacteria. The optimal culture temperature is, for example, Synechococcus
Vulcanus is about 50-55 ° C, Synechocystis PCC6803 is about 30-34 ° C, and Synechococcus elongatus is about 50-57 ° C.
[0016]
As the medium, a medium for cultivating ordinary cyanobacteria, for example, an inorganic medium is used. Cultivation is preferably performed under light irradiation under aerobic conditions.
[0017]
In the present invention, cyanobacteria are preferably cultured at the optimum culture temperature of cyanobacteria, and then further heated to a temperature higher than the culture temperature (this step is referred to as a heating step). The blue-green algae grown by heating at the culture temperature are modified by heat shock. The culture is continued even during the heating step (if the culture is the first stage culture, the continued culture is the second stage culture), and the blue-green algae will grow. Is not related to the object of the present invention. The heating temperature in the heating step may be higher than the first stage culture temperature, but is preferably 5 to 25 ° C. higher than the first stage culture temperature. More preferably, the temperature is higher by 10 to 20 ° C.
[0018]
Although the culture time of the heating step can be arbitrarily set, 2 to 5 hours is preferable. Moreover, it is preferable that light irradiation and ventilation | gas_flowing are performed to a culture solution at the time of the said heating process.
[0019]
After the heating step, the modified cyanobacteria are separated from the culture medium. When a culture solution in which cyanobacteria is suspended is used, the modified cyanobacteria layer is separated into a modified cyanobacteria layer and a culture supernatant by cooling after cooling as necessary, and the modified cyanobacteria are separated. Moreover, since the culture supernatant has physiological activity different from cyanobacteria as described later, it can be used separately.
[0020]
The modified cyanobacteria are preferably crushed and used as a crushed product, or extracted with a solvent and used as an extract, in order to sufficiently exert the effect. In particular, it is preferably used as a crushed material. The crushing is preferably carried out mechanically, and for example, a mixer, a freeze crushing device, a colloid mill or the like is used. For extraction, a known extraction method using a solvent is used.
[0021]
As described later, the modified cyanobacteria and the culture supernatant in the present invention have highly active physiological functions such as lipid peroxide production inhibition, hair growth, mutation inhibition, and fibroblast proliferation promotion.
[0022]
Therefore, the present invention provides a physiological activity activator having the physiological function described above. The physiologically active activator can be used as a physiologically active activator and can be used in various applications. The physiologically active activator is combined with a physiologically active activator to make a composition such as pharmaceuticals, cosmetics including quasi-drugs, and foods and drinks. The said function can be exhibited as a thing.
[0023]
The modified cyanobacteria have both an anti-aging function and can be used as an anti-aging agent because they have both a fibroblast proliferation promoting action and an SOD-like activity action.
[0024]
Further, the modified cyanobacteria are excellent in thermal stability. For example, even when exposed to 70 ° C. for 1 hour and at 75 ° C. for 40 minutes, physiological activity such as strong SOD-like activity is not lost.
[0025]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be specifically described with reference to examples. Prior to the description of the examples, the physiological action measurement method used in the present invention will be described.
[0026]
[Measurement of SOD-like activity]
An NBT aqueous solution, a 0.15% BSA aqueous solution, and a sample were mixed with 2.6 ml of a sodium carbonate-hydrochloric acid buffer solution containing xanthine and EDTA, and left at 25 ° C. for 10 minutes. Thereafter, the enzyme solution was added, and the absorbance at 560 nm of the reaction solution was measured 20 minutes after the start of the reaction, and the NBT reduction inhibition rate was calculated. The amount of O ₂ ⁻ generated by the enzyme reaction was eliminated by reducing NBT, and the elimination ability was defined as SOD-like activity.
[0027]
[Measurement of lipid peroxide production inhibitory effect]
The inhibitory effect on the peroxidation of linolenic acid caused by ultraviolet rays was measured using the TBA method.
[0028]
[Measurement of fibroblast proliferation promoting effect]
In advance, we examined the FBS concentration at which cells (purchased from NB1RGB RIKEN Genebank) did not grow or decrease, confirmed that 0.5% FBS-MEM medium satisfies this condition, and promoted fibroblast proliferation only in the test sample The effect can be evaluated. The cells were seeded in a 35 mm dish using 1.5% FBS-MEM medium to a density of 1 × 10 ⁵ cells / dish (2 ml) and cultured under conditions of 5% CO ₂ and 37 ° C. for 24 hours. Thereafter, the culture medium was replaced with 0.5% FBS-MEM, and the sample was added so as to obtain an addition concentration of 10% at the maximum. After culturing for 9 days, the cells were counted with a Bürkerturk hemocytometer. A blank to which physiological saline was added was provided, and the number of cells in the blank was defined as 100, and the cell viability of the sample addition group was shown. As a control, 1.5% FBS-MEM was used. As for the culture supernatant, the medium was also measured to correct the corresponding action to be the action of the culture supernatant. The amount of sample added was 5%.
[0029]
[Measurement of hair growth action]
With reference to Ogawa et al., Fragrance Journal, 5, 20 (1989), the hair growth effect was evaluated by applying the sample to the back of 8-week-old C3H mice with the back hair removed.
[0030]
[Measurement of mutation suppression effect]
Mutations induced in bacteria by UV irradiation were counted as DNA damage. Mutation detection utilized the principle of Ames Test, and calculated the mutation frequency from mutant bacteria and viable bacteria.
[0031]
Next, production examples of the modified cyanobacteria and culture supernatant used in the present invention will be described together with reference production examples.
[0032]
[Reference production example: Production of cyanobacteria]
Cyanobacteria (Synechococcus)
vulcanus) 1 platinum loop was suspended in 500 ml of inorganic medium. This suspension was held at 50 ° C. for 2 days. The suspension is then centrifuged and the culture supernatant and Synechococcus
Divide into a sediment layer consisting of vulcanus, Synechococcus
Got vulcanus. Then Synechococcus
5 g of vulcanus is suspended in 50 ml of distilled water and crushed with a mixer. Synechococcus
Crushed material of vulcanus (referred to as cyanobacteria A) was obtained.
[0033]
[Production Example 1: Production of modified cyanobacteria 1]
Cyanobacteria (Synechococcus)
vulcanus) 1 platinum loop was suspended in 500 ml of inorganic medium. This suspension was held at 50 ° C. for 2 days. The suspension was then heated to 63 ° C. and held at this temperature for 3 hours. During this time, light irradiation and ventilation were performed. The suspension is then centrifuged, and the culture supernatant (referred to as culture supernatant A) and the modified Synechococcus.
Divided into a sediment layer consisting of vulcanus, modified Synechococcus
Got vulcanus. Then modified Synechococcus
5 g of vulcanus is suspended in 50 ml of distilled water, crushed with a mixer, and modified Synechococcus
Crushed material of vulcanus (referred to as modified cyanobacteria A) was obtained.
[0034]
[Production Example 2: Production 2 of modified cyanobacteria]
Cyanobacteria (Synechococcus)
sp.PCC7942) One platinum loop was suspended in 500 ml of an inorganic medium. This suspension was held at 30 ° C. for 2 days. The suspension was then heated to 42 ° C. and held at this temperature for 3 hours. During this time, light irradiation and ventilation were performed. The suspension is then centrifuged, and the culture supernatant (referred to as culture supernatant B) and the modified Synechococcus.
Divided into a precipitate layer consisting of sp.PCC7942, modified Synechococcus
sp.PCC7942 was obtained. Then modified Synechococcus
sp.PCC79425g suspended in 50ml distilled water, crushed with a mixer, modified Synechococcus
A crushed product of sp.PCC7942 (referred to as modified cyanobacteria B) was obtained.
[0035]
[Production Example 3: Production of modified cyanobacteria 3]
Cyanobacteria (Synechococcus)
elongatus) 1 platinum loop was suspended in 500 ml of inorganic medium. This suspension was held at 50 ° C. for 2 days. The suspension was then heated to 63 ° C. and held at this temperature for 3 hours. During this time, light irradiation and ventilation were performed. The suspension is then centrifuged, and the culture supernatant (referred to as culture supernatant C) and the modified Synechococcus.
Dividing into a sediment layer consisting of elongatus, modified Synechococcus
got elongatus. Then modified Synechococcus
5 g elongatus suspended in 50 ml distilled water, crushed with a mixer, and modified Synechococcus
A crushed elongatus (referred to as modified cyanobacteria C) was obtained.
[0036]
Example 1 Measurement 1 of SOD-like activity
The results of SOD-like activity of cyanobacteria A and modified cyanobacteria A are shown in FIG.
[0037]
[Figure 1]
[0038]
As is clear from the results of FIG. 1, it can be seen that the modified cyanobacteria A has a higher NBT reduction inhibition rate than cyanobacteria A, and the modified cyanobacteria A has a stronger SOD-like activity than the cyanobacteria A.
[0039]
(Example 2) Measurement of SOD-like activity 2
The result of the SOD-like activity of the modified cyanobacteria B is shown in FIG. Further, the SOD-like activity of the modified cyanobacteria A diluted 10-fold with distilled water was similarly determined, and the result is shown in FIG.
[0040]
[Figure 2]
[0041]
As is clear from the results of FIG. 2, it was confirmed that the modified cyanobacteria B also has SOD-like activity.
[0042]
(Example 3) Measurement of heat resistance of SOD-like activity After exposure of cyanobacteria A and modified cyanobacteria A to 75 ° C for 40 minutes, SOD-like activity was measured. The results are shown in FIG.
[0043]
[Fig. 3]
[0044]
As is clear from the results of FIG. 3, it was confirmed that the modified cyanobacteria A did not lose its strong SOD-like activity even when exposed to 75 ° C. for 40 minutes compared to cyanobacteria A.
[0045]
(Example 4) Lipid peroxide production inhibitory action The modified cyanobacteria A inhibits lipid peroxide production. The results are shown in FIG.
[0046]
[Fig. 4]
[0047]
As is clear from the results of FIG. 4, it was confirmed that the modified cyanobacteria A has a high lipid peroxide production inhibition rate and has a lipid peroxide production inhibitory action.
[0048]
Example 5 Measurement of fibroblast proliferation promoting action 1
The fibroblast proliferation promoting action of the modified cyanobacteria A was measured. The results are shown in FIG.
[0049]
[Figure 5]
[0050]
As is clear from the results in FIG. 5, it was confirmed that the modified cyanobacteria A has a fibroblast proliferation promoting action.
[0051]
(Example 6) Measurement of fibroblast proliferation promoting action 2
The fibroblast proliferation promoting action of the modified cyanobacterium A, the modified cyanobacterium C, the culture supernatant A and the culture supernatant C was measured. The results are shown in FIG.
[0052]
[Fig. 6]
[0053]
As is clear from the results of FIG. 6, it was confirmed that the modified cyanobacteria A, the modified cyanobacteria C, the culture supernatant A, and the culture supernatant C have a fibroblast proliferation action.
[0054]
(Example 7) Measurement of hair growth action The hair growth action of the modified cyanobacteria A was measured. The results are shown in FIG.
[0055]
[Fig. 7]
[0056]
As is clear from the results of FIG. 7, it was confirmed that the modified cyanobacteria A can obtain a strong hair-growth effect.
[0057]
Example 8 Mutation Suppressing Action The mutation inhibiting action of the modified cyanobacteria A was measured. The results are shown in FIG.
[0058]
[Fig. 8]
[0059]
As is clear from the results in FIG. 8, it was confirmed that the modified cyanobacteria A had a strong mutation suppressing action.
[0060]
【The invention's effect】
As described above in detail, it is clear that the modified cyanobacteria in the present invention have functions that exhibit physiological functions such as SOD-like activity, lipid peroxide production inhibition, fibroblast proliferation promotion, hair growth, and mutation inhibition. Therefore, according to the present invention, a novel physiological activity having physiological functions such as SOD-like activity comprising the modified cyanobacteria, lipid peroxide production inhibition, fibroblast proliferation promotion, hair growth, mutation inhibition, etc. An agent is obtained. In addition, after culturing in a culture solution in which cyanobacteria is suspended in a medium, the culture solution is further heated to a temperature higher than the culture temperature, and then the culture supernatant is separated to obtain fibroblasts. It has been clarified that it has a function of exerting a physiological action for promoting cell growth, and according to the present invention, a novel physiologically active activator having a physiological action for promoting fibroblast proliferation comprising the culture supernatant. Is obtained.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows the SOD-like activity of cyanobacteria A and modified cyanobacteria A.
FIG. 2 is a graph showing SOD-like activity of modified cyanobacteria A and modified cyanobacteria B.
FIG. 3 is a graph showing the heat resistance of SOD-like activity of cyanobacteria A and modified cyanobacteria A.
FIG. 4 is a graph showing the lipid peroxide production inhibitory action of the modified cyanobacteria A.
FIG. 5 is a graph showing the fibroblast proliferation promoting action of the modified cyanobacteria A.
FIG. 6 is a graph showing the fibroblast proliferation promoting action of the modified cyanobacteria A, the modified cyanobacteria C, the culture supernatant A, and the culture supernatant C.
FIG. 7 is a diagram showing a hair-growth effect of modified cyanobacteria A.
FIG. 8 is a diagram showing the mutation-suppressing action of modified cyanobacteria A.
[Explanation of symbols]

Claims

Reactive oxygen scavenger comprising Synechococcus genus Algae modified by applying a heat shock of culturing Synechococcus cyanobacterium at an optimum culture temperature and then culturing at 5 to 25 ° C. higher than the culture temperature for 2 to 5 hours .