JP4331939B2 - サイトカイン活性を増強させ、そしてサイトカインの投与に伴う低血圧を治療するための組成物および方法 - Google Patents

Description

【０００１】
発明の分野
本発明は、薬効量のスーパーオキシド不均化触媒と共にサイトカインを投与することによってサイトカインの免疫活性を増強するための組成物および方法に関する。本発明は、またサイトカインと組み合せて、薬効量のスーパーオキシド不均化触媒を投与することによって、サイトカインの投与から生じる哺乳類の低血圧を予防し治療する組成物および方法にも関する。本発明は、サイトカインと組み合せて、薬効量のスーパーオキシド不均化触媒を投与することによって、被験者のガン治療を増強する方法にも関する。また、サイトカインおよびスーパーオキシド不均化触媒のみを、またはこれらの方法に用いられるカテコールアミン昇圧剤と組み合せて、含有してなる医薬組成物が提供される。
【０００２】
発明の背景
免疫系において、リンパ球の三つの主要形式は、Ｂ細胞、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞である。Ｂ細胞は、骨髄に由来して、血液中を循環していると認められる約１０％のリンパ球からなる。特異的な抗原によって刺激されるとき、それぞれのＢ細胞は単一の特異性を有する抗体を分泌する血漿細胞に分化する。Ｔ細胞は、胸腺において成熟し、約８０%の循環するリンパ球を生成する。Ｔ細胞は、その表面上に抗体分子に似た特異的の抗原レセプタを有し、免役媒体分子またはサイトカインおよび毒性分子を分泌することによって抗原刺激に反応する。細胞毒性Ｔ細胞は、感染した細胞、および微生物など、それらが含むことができるいかなる外来粒子をも殺す、毒性分子を分泌する。ＮＫ細胞は、リンパ集団の約１０%を形成し、抗原特異的ではなく、微生物に感染した細胞を認識して殺す。
【０００３】
単核細胞およびマクロファージは、外来粒子を摂取する大きなスカベンジャー細胞であって、それは特異的な免疫応答を起動させるＴ細胞に対する抗原を提示する。抗原を導入するとき、それは最初にマクロファージおよび他の抗原を提示する細胞によって摂取される。消化後に、その短い断片はその細胞表面に提示される。全ての循環するＴ細胞のうち、少数のものだけが特異的に抗原に結合するレセプタを有し、そしてこの結合がＴ細胞を刺激してサイトカインを分泌する。
【０００４】
サイトカインは、他の細胞の増殖および／または分化機能を促進し、そして免役応答の大きさの調節に重要な役割を演じる、免役系細胞によって主として分泌される小さなタンパクである。サイトカインの例示としては、インターロイキン類、インターフェロン類、造血性コロニー刺激因子（ＣＳＦ）および、例えば、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのプロインフラマトリー因子が挙げられる。この種のサイトカインは、リンパ球に作用し、それを刺激して増殖させ、それによってホストの免疫応答を押し上げる。例えば、ＩＬ−２は, ＮＫ細胞を刺激することにより生来のまたは天然のホスト防衛を強化し、さらにＴ細胞およびＢ細胞を刺激することによって抗原特異的な獲得免疫反応性を強化する。
【０００５】
かくして、個々の免役の増強は、ガン、後天性免役不全症候群（AIDS）、肝炎および他の疾患症状で診断された患者の治療の望ましい目標である。例えば、低投与量、例えば、１０〜１００ ＩＵのサイトカインは、ホストにおけるサイトカインの所望の免疫応答を増強させる能力を発生させるために患者に投与できる。
【０００６】
さらに、リンフォカインおよび関連した免疫活性調節物質の投与は、多くのガン治療における共通の治療であって、多様な種類の腫瘍を有する患者に若干肯定的な応答が得られている。例えば、高い用量のインタ−ロイキン２（ＩＬ−２）を投与すると、転移性腎細胞ガンおよび悪性メラノーマの臨床活性を示したが、長期の完全応答は少ない割合（５〜１５％）を示した。
【０００７】
主として活性化Ｔリンパ球によって合成されるサイトカインである、インタ−ロイキン２（ＩＬ−２）は、細胞性免役の発生において中心的な役割を果たす。Mertelsmann R. and Welte, K., Immunobiol. 172: 400-419 (1988)参照。低濃度（例えば、１０〜１００ＩＵ／ｍｌ）のＩＬ−２は、これらのエフェクター細胞のクローン拡大と同様に抗原特異性細胞融解リンパ球の活性化のために重大に見える。Weiss, A., Fundamental_Immunology, 3rd ed. New York: Raven Press, 467-504 (1993)参照。ロッツェらは、ネズミまたはヒトのリンパ球を試験管内または生体内で３〜４日間高濃度のＩＬ−２（>６００ＩＵ/ｍｌ）にさらすと、リンフォカイン-活性化キラー細胞（ＬＡＫ）と呼ばれる細胞毒性リンパ球集団の増殖をもたらすことを、示した。Lotze et al., Cancer Res., 41:4420-4425 (1981)参照。一旦活性化されると、ＬＡＫ細胞は、同系内、同種内または異種間のホストに由来する、多種多様な最近単離したガン細胞または培養したガン細胞系に対して、細胞毒性を示す。Rayner et al., J. Natl.Cancer Inst., 75: 67-75 (1985); Hank et al., Cancer Res. 48: 1965-1971 (1988)参照。細胞毒性のパターンは腫瘍に特異的でなくて、細胞毒性に対する標的細胞に関して自己の主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）の発現を必要としないので、ＬＡＫ細胞は「非特異的」キラー細胞と呼ばれる。ＬＡＫ集団における細胞融解性細胞の主要サブセットはＣＤ３^ーであって、かくしてナチュラルキラー（ＮＫ）リンパ球派生を示す、神経細胞付着分子（Ｎ−ＣＡＭ）を、ＣＤ５６と発現する。Lanier et al., J. Immunol. 136: 4480-4486 (1986)参照。多薬剤耐性腫瘍細胞を含む、ほとんど全ての新たに単離し、培養された悪性細胞は、ＬＡＫ媒介の細胞融解に敏感である。Harker et al., Cancer Res., 50: 5931- 5936 (1990); Brune and Lapetina, Adv. Pharmacol. 34: 35 1-360 (1995)参照。
【０００８】
さらに、ＩＬ−２は抗腫瘍免疫の発生における重要なリンフォカインである。腫瘍抗原に応答して、リンパ球のサブセット、つまりヘルパーＴ細胞は、少量のＩＬ−２を分泌し、そしてそれは腫瘍抗原刺激の部位に局所的に作用して、組織的な腫瘍細胞分解を媒介する、細胞毒性Ｔ細胞およびナチュラルキラー細胞を活性化する。ＩＬ−２の投与は、マウスや、例えば、メラノーマ、腎臓ガン、結腸直腸ガンまたは非ホジキンリンパ腫などの転移性ガンを有する患者に存在する、ある種のガンの退行を誘発することが可能であることが認められた。Rosenberg et al., N. Engi. J. Med. 316: 889-897 (1987) 参照。さらに、細胞減少的（cytoreductive）化学療法と組み合せて、ＩＬ−２を使用する臨床試験は、急性の骨髄性白血病、非ホジキン病リンパ腫および乳癌の治療の有望さを示す。
【０００９】
このように、サイトカイン濃度の調節は患者の免疫応答を増強する手段として試みられ、ＩＬ−２のようなサイトカインの低用量の投与は患者の免疫応答を刺激しまたは維持することが示された。米国特許第6,045,788号参照。しかし、ＩＬ−２、ＴＮＦ−αおよびインタ−ロイキン−１２などのサイトカインの高用量（例えば、１００，０００〜６００，０００ＩＵ）の臨床上の使用は、用量依存性低血圧（心収縮期血圧（ＳＢＰ）<９０ｍｍ/Ｈｇ）などの重篤な副作用の発生によって制限される。これらの薬剤は局所的な細胞相互作用を媒介し、通常極めて少量が分泌されるので、全身的に投与されるサイトカインの毒性は驚くほどのものではない。残念なことに、治療用サイトカイン組成物の潜在的に致死性の低血圧副作用は、患者に投与できるこれらの化合物の極量を厳しく制限し、かくしてサイトカインの免疫活性および治療用の抗腫瘍効果を減らすことになる。
【００１０】
反応性酸素種（ＲＯＳ）および、特に、スーパーオキシドアニオン（Ｏ_２ ^―）は、サイトカイン治療に関連して、不必要な副作用、例えば低血圧、低反応性および減少したＴリンパ球活性に寄与する。低血圧は、内因性カテコールアミンの増加した水準にもかかわらず、減少した血管抵抗から生じる血行力学的状態である。この状態は、正常な血液容量（正常血液量）の維持にもかかわらず、持続する。この状態の特性は、低反応性、つまり血管応答の喪失であって、そしてそれは外因性カテコールアミンと、おそらく、内因性カテコールアミンの両方に発生する。
【００１１】
低血圧の他の特性は、体内におけるスーパーオキシドアニオンを含む、フリーラジカルの生産の大きな増加である。lschiropoulos et al., Arch. Biochem. Biophys. 298: 446-451 (1992); Taylor et al., Arch. Biochem. Biophys., 316: 70-76 (1995)参照。ＩＬ−２のようなサイトカインの投与は、血管昇圧性カテコールアミン、すなわち、ノルエピネフリン、エピネフリンおよびドーパミンの生物学的活性と相互作用し、これを破壊するスーパーオキシドアニオンを放出する。スーパーオキシドアニオンは、下記の反応において過酸化水素と酸素の生成により生物系中で通常除去される（以下、不均化と称する）：
【化２５】

【００１２】
遍在するスーパオキシドジスムターゼ酵素は生体内でこの反応を触媒する。このスーパーオキシドの不均化活性をまれる非タンパク性触媒がいくつか発見されている。スーパーオキシド不均化のための非タンパク性触媒の特に有効な系統群は、米国特許第５，８７４，４２１号および第５，６３７，５７８号に記載されているようにーこれらはいずれも本願明細書中に引用したものとするースーパーオキシドから酸素と過酸化水素への転換に触媒作用を及ぼす、窒素を含有する１５員のマクロ環リガンドのマンガン（ＩＩ），マンガン（ＩＩＩ），鉄（ＩＩ）または鉄（ＩＩＩ）錯体からなる。また、Weiss, R.H., et al., "Manganese(H)-Based Superoxide Dismutase Mimetics: Rational Drug Design of Artificial Enzymes", Drugs of the Future 21: 383-389 (1996); and Riley, D.P., et al., "Rational Design of Synthetic Enzymes and Their Potential Utility as Human Pharmaceuticals" (1997) in CatTech, I, 41 参照。スーパーオキシドジスムターゼの模倣品は、消炎作用を含む様々な治療効果を有することが示された。Ｗeiss, R.H., et al., "Therapeutic Aspects of Manganese (II)-Based Superoxide Dismutase Mimics" in "Inorganic Chemistry in Medicine", (Farrell, N., Ed.), Royal Society of Chemistry, in Press; Weiss, R.H., et al., "Manganese-Based Superoxide Dismutase Mimics: Design, Discovery and Pharmacologic Efficacies" (1995), in "The Oxygen Paradox" (Davies, K.J.A., and Ursini, F., Eds.) pp. 641-651, CLEUP University Press, Padova, Italy; Weiss, R.H., et al., .J. Biol. Chem., 271: 26149 (1996); and Hardy, M.M., et al., J. Biol. Chem.269: 18535-18540 (1994)参照。スーパーオキシド不均化活性を有することを示された、他の非タンパク性触媒は、米国特許第５，６９６，１０９号に記載されているように、サレン遷移金属陽イオン錯体およびポルフィリンと鉄およびマンガンとの錯体である。
【００１３】
現在、サイトカイン投与関連して、低血圧の管理は、流体およびアルブミンの注入、そして、場合によっては、ドーパミンのようなカテコールアミン昇圧剤による治療を含む。ドーパミンが低血圧を逆転させることができないとき、エピネフリン、フェニルエフリンまたはノルエプリエフリンを投与することができる。しかし、繰り返されたカテコールアミンの投与にもかかわらず、受け入れられる血圧（通常>９０ｍｍＨｇ）の維持は、しばしばうまく行かない。したがって、感受性が鈍い低血圧および低反応性（血管収縮剤に対する応答の喪失）の結果として、２０〜５０％の症例で、血行力学的支援として集中治療室（ＩＣＵ）入院が必要となる。用量制限する副作用の結果、低血圧および次の腎機能不全を減少させるために、全期間のＩＬ−２投与がしばしば省略される。
【００１４】
したがって、サイトカインの投与から生じる免疫応答を増強する組成物および方法への必要性がいまや存在する。また、サイトカインの治療上の機構に悪影響を与えない低血圧を予防または治療する組成物および方法が必要である。さらに、平均動脈圧の減少を予防することによってまたは平均動脈圧力の継続した減少を予防し、逆転させることによって、サイトカイン投与から生じる低血圧に苦しむ哺乳類を予防または治療する組成物および方法が必要である。この種の組成物および方法は、ＩＬ−２投与を著しく容易にし、そしてサイトカインの臨床上の用途を広げるのに役立つことになる。さらにまた、サイトカインの免疫増強作用を押し上げることによっておよび／またはサイトカインの投与から生じる哺乳類の低血圧を予防し、治療することによって、ガン治療のためのサイトカイン投与の効果を増強する組成物および方法が必要である。
【００１５】
発明の要約
したがって、本発明の目的は、ホストにおいてサイトカイン性免疫応答を増強させ、それによってウィルスに対する改良された免疫応答を生じさせ、医薬および動物薬の組成物および方法を提供することである。本発明の別の目的は、サイトカイン投与に関連して、用量制限する低血圧の毒性を減少させ、それによってより投与すべき治療用サイトカインの高い投与量を可能にすることである。その結果、サイトカインの治療効果が強化される。出願人は、スーパーオキシドジスムターゼ酵素（ＳＯＤ）およびその酵素の小さい分子量の有機リガンド模倣品（ＳＯＤ模倣品またはＳＯＤｍｓ）を含むスーパーオキシド不均化触媒を用いる治療が、カテコールアミンの生体外での不活性化を予防することになること、を発見した。さらに、この不活性化は、低血圧の場合に観察される外因性カテコールアミン対する低反応性を説明し、したがって、スーパーオキシドによる内因性ノルエピネフリンの不活性化がこの局面の血管急性発症に有意に寄与することができるようである。
【００１６】
いかなる特定の理論にも制限されずに、本発明の一つの目的は、スーパーオキシドを取除き、かくして外因性および内因性カテコールアミンを自動酸化から保護することによって、サイトカインの投与に伴う低血圧を治療する化合物および方法を提供することである。カテコールアミンの不活性化を防止または制限することによって、低反応性および低血圧を逆転させ、そしてガン治療としてサイトカイン投与の有効性を改善することができる。
【００１７】
この発明のもう一つの目的は、サイトカインのみと関連してまたはカテコールアミン昇圧剤と組み合せて、平均動脈圧を維持する量の、スーパーオキシド不均化触媒を哺乳類、好ましくはヒトに、共に投与することにより、哺乳類においてサイトカインの投与から生じる平均動脈圧の低下を抑制する方法を提供することである。
【００１８】
この発明のもう一つの目的は、サイトカインのみと関連してまたはカテコールアミン昇圧剤と組み合せて、平均動脈圧を増大させる量の、スーパーオキシド不均化触媒を哺乳類に共に投与することからなる、サイトカインの投与から生じる低血圧の哺乳類において平均動脈圧を増大させる方法を提供することである。
【００１９】
本発明の別の局面は、サイトカイン治療を受けている患者に、ガン治療を増強する量の、スパーオキシド不均化触媒のみを、またはサイトカインおよび／またはカテコールアミン昇圧剤と組み合せて、投与することを目的とする。この種の化合物の投与は、ガン治療として、サイトカインの腫瘍減少効果、好ましくはＩＬ−２性治療効果を増強させる。これに関連して、本発明の目的は、治療上有効な量の、スーパーオキシド不均化触媒のみを、またはサイトカインと組み合せて、投与することからなる、腫瘍の増殖を抑制する方法および組成物を提供することである。
【００２０】
本発明の別の態様は、スーパーオキシド不均化触媒のみを、またはサイトカインと組み合せて、含有する組成物を投与することからなる、ウィルスに対してサイトカイン性免疫応答を増強させる組成物および方法を目的とする。好ましくは、その方法および組成物は、Ｃ型肝炎ウィルスまたはヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する免疫応答を増強させることを目的とする。
【００２１】
関連して、スーパーオキシド不均化触媒だけを、またはサイトカインおよび製薬上許容される担体と組み合せて、含有してなる医薬組成物が提供される。また、スーパーオキシド不均化触媒、サイトカイン、カテコールアミン昇圧剤および製薬上許容される担体を含有してなる医薬組成物が提供される。腫瘍で苦しんでいる哺乳類に投与されるとき、これらの組成物は患者の免疫応答およびサイトカイン治療の抗腫瘍効果を増強させる。さらに、これらの医薬組成物はカテコールアミンの劣化を抑制し、カテコールアミン昇圧剤に血管の緊張を改良させ、哺乳類の平均動脈圧を増強させることができる。好ましくは、上記の方法および組成物において使用されるサイトカインは、インターロイキンー１（ＩＬ−１）、インターロイキンー２（ＩＬ−２）、インターロイキンー３（ＩＬ−３）、インターロイキンー４（ＩＬ−４）、インターロイキンー５（ＩＬ−５）、インターロイキンー６（ＩＬ−６）、インターロイキンー７（ＩＬ−７）、インターロイキンー１０（ＩＬ−１０）、インターロイキンー１２（ＩＬ−１２）、インターロイキンー１５（ＩＬ−１５）、ガンマーインターフェロン（γ-ＩＦ）、インターフェロンーアルファ（ＩＦ−α）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、顆粒球コロニー刺激因子および顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子から選ばれ、そしてＩＬ−２がより好ましい。
【００２２】
他の目的および特徴は、一部において明白であり、そして一部において、以下に指摘される。
【００２３】
図面の簡単な説明
第１図は、ＩＬ−２誘発の低血圧が、３ｍｇ/ｋｇ Ｍ４０４０３で得られた最大の反転を示し、ＳＯＤ模倣品Ｍ４０４０３によって用量依存的に減衰したことを示しているグラフである。Ｍ４０４０３最大投与量（３ｍｇ/ｋｇ、１日２回、５日間）で、毒性の明らかな徴候がなく、また心収縮期血圧に対する効果が特になかった。
【００２４】
第２図は、Ｍ４０４０３の存在下に高い投与量のＩＬ−２が投与できた（Ｍ４０４０３は血圧を維持できたが、IＬ−２媒介の死亡率は減少した）ことを示しているグラフである。Ｍ４０４０３の不存在下に、２００，０００；２５０，０００および３００，０００I U、１日２回投与において、 各々のＩＬ−２投与群に死亡１（６例中１例死亡）であり、４００，０００I U、１日２回投与群で、全マウスが死んだ（マウス６例中６例死亡）。M４０４０３の存在下に、ＩＬ−２の全ての投与量で全てのマウスが生存した（全群でマウス６例中死亡０）。
【００２５】
第３図は、広い範囲の濃度（０〜１０μM）のM４０４０３がネズミ（マウス）のＬＡＫ細胞活性化に悪影響を及ぼさないことを、示しているグラフである。
【００２６】
第４図は、ＳＯＤ模倣品Ｍ４０４０３が、リンパ節(Ａ)および脾臓（Ｂ）に示されるように、生体内でＩＬ−２に誘発されたＬＡＫ細胞活性化を有意に強化したことを示すグラフである。M４０４０３は生体内でそれ自体ＬＡＫ細胞誘発を増大しなかった。
【００２７】
第５図は、マウスのＩＬ−２治療が肺臓の腫瘍小瘤の数々を除去し、ＩＬ−２の抗腫瘍効果に影響を及ぼさないことを示すグラフである。使用する投与量でＭ４０４０３それ自体は、完全にマウスの肺臓の腫瘍小瘤の数々を除去した。
【００２８】
第６図は、コントロールと比較して、ＩＬ−２治療したマウスの残存効果を示しているグラフである（１９日と比較した１４日）。Ｍ４０４０３それ自体は、残存に影響を及ぼさなかった。これらの結果から、Ｍ４０４０３はＩＬ−２誘発の低血圧を遮断するのみならず、また高度に難治性の治療モデルにおいてＩＬ−２誘発の抗腫瘍応答を改善することを、示唆する。
【００２９】
第７図は、M４０４０１が、生体外でＩＬ−２のＬＡＫ細胞を活性化する能力を妨害しなかったこと、そしてＭ４０４０３よりも低用量でＩＬ−２媒介の低血圧を反転させたこと、を示しているグラフである。低血圧の完全な反転は、０．３ｍｇ/ｋｇ（Ｍ４０４０３に使用されるものと同一のプロトコ−ル、１日２回、５日間ＩＬ−２を投与）で認められた。
【００３０】
定義および省略
本発明の理解を容易にするため、本願明細書において使用される多数の用語を以下に定義する：
用語「低血圧」は、正常な血液容量（正常血液量normovolemia）の維持にもかかわらず持続する、低下した血圧によって特徴づけられる、血行力学的状態を意味する。適度の心室充満圧（肺動脈楔入圧[ ＰＡＷＰ] １２ｍｍHg）にもかかわらず あるいは充分な中枢心静脈圧（ＣＶＰ）１２ｍｍHgにもかかわらず、平均動脈圧が少なくとも１時間９０ｍｍHg未満の場合、通常低血圧が起こる。低血圧の他の指標は、９０ｍｍＨｇの心収縮期血圧を維持するために、攻撃的な初期流体治療（例えば、等張性クリスタロイド ５００ｍｌ、アルブミン２５ｇｍまたは他のコロイド（例えば、ヒドロキシエチルデンプン）２００ｍｌの投与）に対して応答できない低血圧状態、またはドーパミン（> ５ｇ/ｋｇ/ｍiｎ）、ノルエピネフリンまたは他の昇圧剤の投与量の必要性に応答できない場合である。
【００３１】
本明細書中で使用されているように、「ＭＡＰ」は平均動脈圧を意味する。
【００３２】
本出願明細書中に使用される用語「平均動脈圧維持量」は、正常血圧域、好ましくは、少なくとも３０分間約７０〜約１３０ｍｍHgにて、様々なショック状態に伴う低血圧で苦しむか、または低血圧の危険がさし迫っている哺乳類の平均動脈圧を維持するために必要とされる化合物の量を意味する。
【００３３】
本出願明細書中に使用される用語「平均動脈圧増大量」は、低血圧の状態から正常血圧域、好ましくは、少なくとも３０分間約７０〜約１３０ｍｍHgにて、様々なショック状態に伴う低血圧で苦しむ哺乳類の平均動脈圧を増大させるために必要とされる化合物の量を意味する。
【００３４】
用語「サイトカインと組み合せてスーパーオキシド不均化触媒と共に投与すること」は、サイトカイン投与によって生じる低血圧効果を抑制するために、および／または、文脈が必要とするように、十分に遅れずに哺乳類の免疫系上のサイトカイン媒介の治療効果を増強し、さらに腫瘍の増殖を抑制するために、サイトカイン投与と同時に、あるいはサイトカイン投与の前か後で十分に近いときに、触媒を投与することを意味する。
【００３５】
用語「スーパーオキシド不均化の非タンパク性触媒」は、スーパーオキシドアニオンを過酸化水素および分子状酸素に変換するための低分子量触媒を意味する。これらの触媒は、一般に有機リガンドおよびキレート化した遷移金属イオン、好ましくはマンガン（II)、マンガン（III)、鉄（II)、または鉄（III)からなる。この用語は、有機リガンドとして短鎖ポリペチド（アミノ酸１５未満）またはアミノ酸に由来するマクロ環状構造を含む触媒を意味する。この用語は、いかなる生物種であっても、それから得られるスーパーオキシドジスムターゼ酵素を明白に除外している。
【００３６】
用語「置換される」は、記載部分が、少なくとも１の炭素またはヘテロ原子を含み、さらに０〜２２の炭素原子、より好ましくは、１〜１５の炭素原子を含み、そして０〜２２、より好ましくは、０〜１５を含む、１以上の置換基を有することを意味する。ここで使用されているように、「ヘテロ原子」は炭素に結合した、炭素でも水素でもない原子であって、Ｏ，Ｓ，Ｎ，Ｐ，Ｓｉ，Ｂ，Ｆ，Ｃｌ，Ｂｒ，またはＩからなる群から選択される。これらの原子は、不飽和、飽和または芳香族である置換基を形成し、若干数の配置に配列することができる。この種の置換基の例示としては、分枝状または非分枝状であって、アルキル、アルケニルまたはアルキニル、環状、ヘテロ環状、アリール、ヘテロアリール、アリル、ポリシクロアルキル、ポリシクロアリ−ル、ポリシクロヘテロアリール、イミン、アミノアルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシル、フェノール、アミンオキシド、チオアルキル、カーボアルコキシアルキル、カルボン酸およびそれら誘導体、ケト、エーテル、アルデヒド、アミン、アミド、ニトリル、ハロ、チオール、スルホキシド、スルホン、スルホン酸、サルファイド、ジサルファイド、ホスホン酸、ホスフィン酸、アクリル酸、スルフォンアミド、アミノ酸、ペプチド、タンパク、炭水化物、核酸、脂肪酸、脂質、ニトロ、ヒドロキシルアミン、ヒドロキサム酸、チオカルボニル、チオカルボニル、ホウ酸塩、ボラン、ボラザ、シリル、シラザ、シロキシ、およびそれらの組み合せが挙げられる。
【００３７】
用語「アルキル」は、単独または組み合せて、１〜約２２の炭素原子、好ましくは約１〜約１８の炭素原子、そして最も好ましくは約１〜約１２の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖アルキル基を意味する。この種の基の例示としては、これらに限定されるものではないが、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、イソ−アミル、ヘキシル、オクチル、ノニル、デシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、オクタデシルおよびエイコシルが挙げられる。
【００３８】
用語「アルケニル」は、単独または組み合せて、１以上の二重結合を有するアルキル基を意味する。かかるアルケニル基の例示としては、これに限定されるものではないが、エテニル、プロペニル、1-ブテニル、シスー２−ブテニル、トランスー２−ブテニル、イソ−ブチレニル、シスー２−ペンテニル、トランスー２−ペンテニル、３−メチルー１−ブテニル、２，３−ジメチルー２−ブテニル、１−ペンテニル、1-ヘキセニル、１−オクテニル、デセニル、ドデセニル、テトラデセニル、ヘキサデセニル、シスー およびトランスー9-オクタデセニル、１，３−ペンタジエニル、２，４−ペンタジエニル、２，３−ペンタジエニル、１，３−ヘキサジエニル、２，４−ヘキサジエニル、５，８，１１，１４−アイコサテトラエニル、および９，１２，１５−オクタデカトリエニルが挙げられる。
【００３９】
用語「アルキニル」は、単独または組み合せて、１以上の三重結合を有するアルキル基を意味する。かかるアルキニル基の例示としては、これに限定されるものではないが、エチニル、プロピニル（プロパルギル）、1−ブチニル、１−オクチニル、９−オクタデシニル、１，３−ペンタジイニル、２，４−ペンタジイニル、１，３−ヘキサジイニル、および２，４−ヘキサジイニルが挙げられる。
【００４０】
用語「シクロアルキル」は、単独または組み合せて、３〜約１０、好ましくは３〜約８、そして最も好ましくは３〜約６の炭素原子を含むシクロアルキル基を意味する。かかるシクロアルキル基の例示としては、これに限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、およびパーヒドロナフチルが挙げられる。
【００４１】
用語「シクロアルキルアルキル」は、上記で定義されるシクロアルキル基で置換されている、上記で定義されるアルキル基を意味する。シクロアルキルアルキル基の例示としては、これに限定されるものではないが、シクロヘキシルメチル、シクロペンチルメチル、（４−イソプロピルシクロヘキシル）メチル、（４−ｔ−ブチルーシクロヘキシル）メチル、３−シクロヘキシルプロピル、２−シクロヘキシルメチルペンチル、３−シクロペンチルメチルヘキシル、１−（４−ネオペンチルシクロヘキシル）メチルヘキシル、および１−（４−イソプロピルシクロヘキシル）メチルヘプチルが挙げられる。
【００４２】
用語「シクロアルキルシクロアルキル」は、上記で定義済みのもう一方のシクロアルキル基によって置換されている、上記で定義済みのシクロアルキル基を意味する。シクロアルキルシクロアルキル基の例示としては、これに限定されるものではないが、シクロヘキシルシクロペンチル、およびシクロヘキシルシクロヘキシルが挙げられる。
【００４３】
用語「シクロアルケニル」は、単独または組み合せて、１以上の二重結合を有するシクロアルキルを意味する。シクロアルケニル基の例示としては、これに限定されるものではないが、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロオクテニル、シクロペンタジエニル、シクロヘキサジエニル、およびシクロオクタジエニルが挙げられる。
【００４４】
用語「シクロアルケニルアルキル」は、上記で定義済みのシクロアルケニル基によって置換されている、上記で定義済みのアルキル基を意味する。シクロアルケニルアルキル基の例示としては、これに限定されるものではないが、２−シクロヘキセンー１−イルメチル、１−シクロペンテンー１−イルメチル、２−（１−シクロヘキセンー１−イル）エチル、３−（１−シクロペンテンー１−イル）プロピル、１−（１−シクロヘキセンー１−イルメチル）ペンチル、１−（１−シクロペンテンー１−イル）ヘキシル、６−（１−シクロヘキセンー１−イル）ヘキシル、１−（１−シクロペンテンー１−イル）ノニル、および１−（１ーシクロヘキセンー１−イル）ノニルが挙げられる。
【００４５】
用語「アルキルシクロアルキル」および「アルケニルシクロアルキル」は、上記定義済みのアルキルまたはアルケニルによって置換された、上記定義済みのシクロアルキル基を意味する。アルキルシクロアルキル基およびアルケニルシクロアルキル基の例示としては、これに限定されるものではないが、２−エチルシクロブチル、１−メチルシクロペンチル、１−ヘキシルシクロペンチル、１−メチルシクロヘキシル、１−（９−オクタデセニル）シクロペンチルおよび１−（９−オクタデセニル）シクロヘキシルが挙げられる。
【００４６】
用語「アルキルシクロアルケニル」および「アルケニルシクロアルケニル」は、上記定義済みのアルキルまたはアルケニルによって置換された、上記定義済みのシクロアルケニル基を意味する。アルキルシクロアルケニル基およびアルケニルシクロアルケニル基の例示としては、これに限定されるものではないが、１−メチル−２−シクロペンチル、１−ヘキシル−２−シクロペンテニル、１−エチル−２−シクロヘキセニル、１−ブチル−２−シクロヘキセニル、１−（９−オクタデセニル）−２−シクロヘキセニルおよび１−（２−ペンテニル）−２−シクロヘキセニルが挙げられる。
【００４７】
用語「アリール」は、単独または組み合せて、アルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロ環、アルコキシアリール、アルカリール、アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミン、シアノ、ニトロ、アルキルチオ、フェノキシ、エ−テル、トリフロロメチルなどから選ばれる１以上の置換基を任意に担持するフェニルまたはナフチル基を意味し、例えば、フェニル、p-トリル、４−メトキシフエニル、４−（ｔert−ブトキシ）フエニル、４−フルオロフエニル、４−クロロフエニル、４−ヒドロキシフエニル、1-ナフチル、2-ナフチルなどが例示される。
【００４８】
用語「アラルキル」は、単独または組み合せて、そこで1つの水素原子が上記定義済みのアリール基で置換されているアルキル基またはシクロアルキル基を意味し、例えば、ベンジル、２−フェネチルなどが例示される。
【００４９】
用語「ヘテロ環の」は、環内に少なくとも１つのヘテロ原子を含んでいるリング構造を意味する。ここで使用されているように、「ヘテロ原子」は、炭素に結合した、炭素でも水素でもない原子を意味する。ヘテロ環の例示としては、これに限定されるものではないが、ピロリジニル、ピペリジル、イミダゾリジニル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロフリル、テトラヒドロチエニル、フリル、チエニル、ピリジル、キノリル、イソキノリル、ピリダジニル、ピラジニル、インドリル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、トリアゾリル、およびテトラゾリル基が挙げられる。
【００５０】
用語「飽和、部分的飽和または不飽和環」は、環内の２個の炭素が１５員マクロ環状リガンドの一部でもある、縮合リング構造を意味する。このリング構造は、３〜２０の炭素原子、好ましくは５〜１０の炭素原子を有し、また、炭素に加えて１以上の他の原子を含むこともできる。他の原子の最も一般的なものは、窒素、酸素および硫黄が例示される。このリング構造は、また、複数の環を含むこともできる。
【００５１】
用語「飽和、部分的飽和または不飽和リング構造」は、環内の１の炭素が１５員マクロ環状リガンドの一部でもある、リング構造を意味する。このリング構造は、３〜２０の炭素原子、好ましくは５〜１０の炭素原子を有し、また、窒素、酸素および／または硫黄原子を含むこともできる。
【００５２】
用語「窒素を含むヘテロ環」は、環内の２の炭素および１の窒素が１５員マクロ環リガンドの一部でもある、リング構造を意味する。このリング構造は、２〜２０、好ましくは４〜１０の炭素原子を有し、また、置換または非置換であってもよく、部分的にまたは完全に不飽和または飽和していてもよく、そして、また１５員マクロ環リガンドの一部でもないが、環の部分として窒素、酸素および／または硫黄原子を含むこともできる。
【００５３】
用語「有機酸アニオン」は、約１〜約１８の炭素原子を有するカルボン酸アニオンを指す。
【００５４】
用語「ハライド」は、クロリド、フルオリド、アイオダイド、またはブロマイドを意味する。
【００５５】
ここで使用されるように、「Ｒ」基は、マクロ環の炭素原子に結合した全てのＲ基群、すなはち、R、R'、R_１、R'_１、R_２、R'_２、R_３、R'_３、R_４、R'_４、R_５、R'_５、R_６、R'_６、R_７、R'_７、R_８、R'_８、R_９、R'_９を意味する。
【００５６】
用語「ガン治療」は、患者の腫瘍細胞を殺すように設計されているいかなる治療をも指す。ここで使用されているように、用語「腫瘍細胞」および「ガン細胞」は、交互に使用され、悪性細胞を意味する。腫瘍細胞は肉腫、癌腫、メラノーマ、リンパ腫または神経膠腫などの固形腫瘍、あるいは白血病のようなより拡散性ガンに存在し、またそれから入手できる。
【００５７】
本発明の方法の哺乳類疾患者は、サイトカインの投与に起因する低血圧に苦しむか、またはサイトカインの将来の投与のために低血圧の差し迫った危険にある、哺乳類である。したがって、用語「低血圧に苦しむ哺乳類」は、例えば、サイトカイン投与ののちに、低血圧が明白である症例の場合と同様に、差し迫ったサイトカイン投与の場合など低血圧が予期される症例を含むように考慮されている。ス−パ−オキシド不均化触媒が投与される哺乳類の患者は、本発明の方法または組成物ではヒトであることが、想像される。しかし、獣医科における他の哺乳類の患者（例えば、コンパニオンペットおよび大きい獣医科動物）、そして他の考えられる文脈前後のものもまた考慮される。
【００５８】
ここで使用されているように、用語「サイトカイン」は、免疫系の細胞によって生産され、免役応答のエフェクタ−機能を積極的に調整または調節するタンパク群の一員を指す。この種の調整は体液内で、または細胞媒介の免疫応答の中で発生し、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、抗原提示細胞または他の免疫系細胞のエフェクタ機能を調節することができる。例えば、サイトカインの具体例としては、インターロイキンー１（ＩＬ−１）、インターロイキンー２（ＩＬ−２）、インターロイキンー３（ＩＬ−３）、インターロイキンー４（ＩＬ−４）、インターロイキンー５（ＩＬ−５）、インターロイキンー６（ＩＬ−６）、インターロイキンー７（ＩＬ−７）、インターロイキンー１０（ＩＬ−１０）、インターロイキンー１２（ＩＬ−１２）、インターロイキンー１５（ＩＬ−１５）、ガンマーインターフェロン（γ-ＩＦ）、インターフェロンーアルファ（ＩＦ−α）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、顆粒球コロニー刺激因子および顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子が挙げられる。
【００５９】
ここで使用されているように、用語「治療」または「治療すること」は、低血圧のいかなる治療にも関し、以下のことを含む：すなわち、（１）被険者に生じる低血圧を予防すること； （２）平均動脈圧の低下を抑制すること、つまり、その展開を阻止または制限すること；または（３）疾患の症状を改善または軽減すること。その上に、前後の文脈から要求されるように、用語「治療」または「治療すること」が被験者のウィルス感染に対するいかなる治療にも関し、以下のことを含む：すなわち、（１）被験者に生じるウィルス感染を予防し；（２）被検者においてウィルスの発生を抑制し、阻止または制限する; または（３）ウィルス感染の症状を改善または軽減すること。
【００６０】
ここに引用される全ての文献は本願明細書に明らかに引用したものとする。
【００６１】
詳細な説明
本発明は、薬効量の、スーパーオキシド不均化触媒のみをまたは低投与量のサイトカインと組み合せて、投与することによってサイトカインの免疫性活性を増強させる組成物および方法に関する。これに関連して、本発明は、サイトカインと組み合せて、スーパーオキシド不均化触媒を含む組成物を共に投与することからなる、高投与量のサイトカインの投与に伴う、低血圧の予防および治療ための方法および組成物を目的とする。好適の触媒は、スーパーオキシドジスムターゼ酵素（ＳＯＤ)および低分子量の、その酵素の有機リガンド模倣品（ＳＯＤ模倣品またはＳＯＤｍｓ）を含む。
【００６２】
最近の研究によると、スーパーオキシドイオン（Ｏ_２ ^-)などの反応性酸素的生物種（ＲＯＳ）のマクロファージ合成がＬＡＫ細胞活性化プロセスを抑制する因子であり得ることが、明らかになった。LＡＫ細胞によって産生される炎症性サイトカインの部分的な結果として、反応性酸素的生物種が誘発されることができる。この種の炎症性サイトカインの産生は、副産物としてスーパーオキシダーゼを生成する酵素である、キサンチンオキシダーゼの増加制御を導くことになる。このように、その必要性がある患者にＩＬ−２のようなサイトカインを投与することは、昇圧剤カテコールアミン（例えば、ノルエピネフリン、エピネフリンおよびドーパミン）の生物学的活性を相互作用して破壊することが示されている、スーパーオキシドイオンを放出する。さらに、出願人は、ス−パ−オキシド（Ｏ_２ ^-）が、生体外でチェーン自動酸化反応を開始し、そしてこれを不活性化させるカテコールアミンに反応する、と考える。これは、Ｏ_２ ^-による内因性ノルエピネフリンの不活性化がこの状況の脈管急性発症に有意に関与することを、示唆する。出願人は、ス−パ−オキシド不均化触媒の投与がこれらのカテコールアミンを劣化から保護して、様々なショック状態に伴う低血圧および低反応性をいずれも予防すること、を発見した。Macarthur et al., PNAS 97:9753 (2000) 参照。
【００６３】
さらに、反応性酸素式生物種は、ＮＦ_ＫＢ活性化を誘発し、そしてそれはＬＡＫ細胞の拡大を増幅する、ＩＬ−２およびその他サイトカインのオートクリン産生を押し下げることができる。Ginn et al., Free Radic. Biol. Med. 25: 346-361 (1998) 参照。スーパーオキシドのような酸化性ラジカルに対するリンパ球の露出は、リンパ球の免役性欠如および細胞死滅を導き、これが次にＩＬ−２や他のサイトカインの抗腫瘍効能を制限することになる。したがって、Ｏ_２-の除去は、サイトカイン投与から生じる低血圧による投与量を制限する毒性を予防し、減少させ、かくしてこの種のサイトカインの継続した投与を可能にすることになる。さらに、スーパーオキシドの除去は、サイトカイン媒介のＬＡＫ細胞誘発を増大させ、そしてガン治療薬としてＩＬ−２および他のサイトカインの効果を強化する。出願人は、増大したＬＡＫ細胞活性が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞およびおそらくＴリンパ球による増大した細胞毒性を導くことができると、考える。腫瘍細胞死滅（細胞融解菌体数の拡大または増大した効率のいずれかを経由）の８〜１８倍の増加は、生体内で死滅した腫瘍細胞の増大した菌体数およびより大きな制癌応答に翻訳することができた。その上、増大したＬＡＫ細胞活性は、増大したＴＨ１ヘルパー細胞応答（プロサイトトキシックprocytotoxic）への潜在的な移動をもたらすことができる。ＴＨ１ヘルパー細胞は、ヘルパーＴ細胞のサブセットであって、そしてそれは、サイトカイン分泌様式に基づく、主として抗体/ＤＴＨ媒介の応答に対して、主として細胞融解免疫応答の出現を指令することができる。細胞毒性の誘発は、ＩＬ−２、ＩＦＮγ、ＩＬ−１２（ＴＨ１ サイトカイン）によって促進され、そして抗体応答は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６によって誘発されるように見え、ＩＬ−１０はＴＨ１活性（ＴＨ２サイトカイン）を減少させるように作用する。
【００６４】
したがって、本発明の一つの態様として、現在の方法および組成物は、サイトカインの投与から生じる低血圧を治療するためにサイトカインおよびスーパーオキシド不均化触媒を含む。その結果、Ｏ_２-は取り除かれ、サイトカイン投与に伴う低反応性および低血圧は反転し、そして残存率は改善される。哺乳類の状態および使用する治療に依存し、サイトカインの投与の前に、サイトカインの投与と同時に、またはサイトカインの投与の直後に、触媒は投与される。特定の理論に限定されずに、サイトカインおよびスーパーオキシド不均化触媒を含む組成物の投与は、サイトカイン投与に伴う潜在的に致死性の低血圧副作用を予防すると共に、腫瘍に対する哺乳類のサイトカイン免疫応答を増強すると思われる。
【００６５】
これに関連して、出願人は、低投与量のサイトカインと組み合せてスーパーオキシド不均化触媒を含んでいる組成物の投与が、サイトカインの免役応答を刺激する能力を増強させ、それによって腫瘍に対する哺乳類のサイトカイン免疫応答を増強させる、と考える。この際、腫瘍の増殖を抑制するホストの能力は向上する。その結果、サイトカイン投与を続けることができ、そしてガン治療は増強される。上記の組成物および方法で使用されるサイトカインの好ましい例示としては、インターロイキンー１（ＩＬ−１）、インターロイキンー２（ＩＬ−２）、インターロイキンー３（ＩＬ−３）、インターロイキンー４（ＩＬ−４）、インターロイキンー５（ＩＬ−５）、インターロイキンー６（ＩＬ−６）、インターロイキンー７（ＩＬ−７）、インターロイキンー１０（ＩＬ−１０）、インターロイキンー１２（ＩＬ−１２）、インターロイキンー１５（ＩＬ−１５）、ガンマーインターフェロン（γ-ＩＦ）、インターフェロンーアルファ（ＩＦ−α）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、顆粒球コロニー刺激因子および顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子が挙げられ、そして、ＩＬ−２がより好ましい。
【００６６】
もう一つの態様として、ウィルス、好ましくは、Ｃ型肝炎またはヒト免疫不全ウイルス（HIV）に対するサイトカイン媒介の免疫応答は、サイトカインと組み合せてスーパーオキシド不均化触媒からなる組成物を投与することによって、増強させられることができる。これに関連して、出願人は、サイトカインおよびスーパーオキシド不均化触媒を含む組成物がＣ型肝炎の治療に投与できると、考える。スーパーオキシド不均化触媒と組み合せて投与できるサイトカインは、Ｃ型肝炎の治療のためにはＩＦ-αが好ましい。他の態様としては、出願人は、サイトカインおよびスーパーオキシド不均化触媒を含んでいる組成物が、ＨＩＶに感染しているか、またはＡＩＤＳに苦しんでいる哺乳類の治療のために投与できると、と思っている。一つの好ましい態様としては、スーパーオキシド不均化触媒と組み合せて投与されるサイトカインは、ＨＩＶに感染したか、またＡＩＤＳに苦しんでいる哺乳類の治療のために、ＩＬ−２が好ましい。
【００６７】
スパーオキシド不均化触媒
本発明の方法および組成において、非タンパク性スーパーオキシ不均化触媒が使用できることが、好ましい。本発明における使用ために好ましいペンタアザ−マクロ環状非タンパク性触媒は、酵素触媒の触媒活性に接近しまたは等しいものである。酵素とは異なり、非タンパク性触媒は、室温で長期間保存するとき、溶液中では劣化せず、そしてずいぶん抗原性でない。その上、これらの触媒は、通常酵素よりも遙かに合成と製造が容易であり、そして、それは天然の資源から分離され、または組換え型バイオテクノロジーを使用して産生されなければならない。
【００６８】
本発明に用いられる非タンパク性スーパーオキシド不均化触媒は、好ましくは有機リガンドおよび遷移金属カチオンを含有してなる。特に好適な触媒は、ペンタアザマクロ環状リガンド化合物であり、より詳しくはペンタアザシクロペンタデカン化合物のマンガン（II)、マンガン（III)、鉄(II)および鉄（III)キレートである。ペンタアザマクロ環状リガンドマンガン(II)錯体は、本発明における使用に特に有利であり、何故なら、それらは、低分子量であることに加えて、スーパーオキシドアニオンの不均化のために非常に選択的であり、天然のＳＯＤ対応物と類似したかまたはより迅速な触媒速度を有する。これらのペンタアザシクロペンタデカン化合物は、以下の式によって示され得る：
【化２６】

【００６９】
式中、Mは遷移金属、好ましくはマンガンまたは鉄のカチオンである; 式中、
R、R'、R₁、R'₁、R₂、R'₂、R₃、R'₃、R₄, R'₄、R₅、R'₅、R₆、R'₆、R₇、R'₇、R₈、R'₈、R₉、R'₉は水素または置換または非置換のアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルシクロアルキル、シクロアルケニルアルキル、アルキルシクロアルキル、アルキルシクロアルケニル、アルケニルシクロアルキル、アルケニルシクロアルケニル、ヘテロ環、アリールおよびアラルキル基をそれぞれ表し; R₁またはR'₁、そして、R₂またはR'₂、R₃またはR'₃、そして、R₄またはR'₄、R₅またはR'₅、そして、R₆またはR'₆、R₇またはR'₇、そして、R₈またはR'₈、そして、R₉またはR'₉、そして、RまたはR’は、それらが付着している炭素原子と共に、炭素原子３〜２０を有する、置換しまたは非置換の、飽和の、部分的に飽和の、または不飽和の、環またはヘテロ環をそれぞれ形成し；RまたはR’、そして、R₁またはR'₁、R₂またはR'₂、そして、R₃またはR'₃、R₄またはR'₄、そして、R₅またはR'₅、R₆またはR'₆、そして、R₇またはR'₇、そして、R₈またはR'₈、そして、R₉またはR'₉は、それらが付着している炭素原子と共に、炭素原子２〜２０を有する、置換または非置換の、窒素を含むヘテロ環をそれぞれ形成する、ただしその窒素を含むヘテロ環が、その窒素に結合している水素を全く有しない芳香族ヘテロ環であるとき、その窒素がマクロ環状リガンドまたは錯体中にも存在する、上記式に示されるように窒素に結合した水素ならびに、マクロ環に包含された炭素原子に付着したＲ基は存在しない；RおよびR’、R₁およびR'₁、R₂およびR'₂、R₃およびR'₃、R₄およびR'₄、R₅およびR'₅、R₆およびR'₆、R₇およびR'₇、R₈およびR'₈、R₉およびR'₉は、それらが付着している炭素原子と共に、炭素原子３〜２０を有する、飽和の、部分的に飽和の、または不飽和の、環またはヘテロ環をそれぞれ形成する；そして、R、R’、R₁、R'₁、R₂、R'₂、R₃、R'₃、R₄、R'₄、R₅、R'₅、R₆、R'₆、R₇、R'₇、R₈、R'₈、R₉およびR'₉からの一つは、マクロ環状リガンド中の他の炭素原子に付着したR、R’、R₁、R'₁、R₂、R'₂、R₃、R'₃、R₄、R'₄、R₅、R'₅、R₆、R'₆、R₇、R'₇、R₈、R'₈、R₉およびR'₉からの異なる一つと共に結合して、次式で示される帯状基を形成することができる：
【化２７】
- (CH₂)_x-M-(CH₂)_w-L-(CH₂)_z-I-(CH₂)_y-
【００７０】
式中 w、x、yおよびzは、それぞれ０〜１０の整数であり、そしてM,LおよびＩは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、シクロアルキル、ヘテロアリール、アルカリ−ル、アルクヘテロアリール、アザ、アミド、アンモニウム、オキサ、チア、スルホニル、フルフィニル、スルホンアミド、ホスホリル、ホスフィニル、ホスフィノ、ホスホニウム、ケト、エステル、アルコール、カルバメート、尿素、チオカルボニル、ホウ酸塩、ボラン、ボラザ、シリル、シロキシ、シラザ、それらの組み合せからなる群からそれぞれ選ばれる。
【００７１】
このように、本発明で有用なペンタアザマクロ環状リガンド化合物は、置換または非置換のＲ基、飽和、部分的な飽和または不飽和の環状物、リング構造、窒素を含んでいるヘテロ環、または上記定義済みの帯状基の中から、いかなる組み合せも有することができる。
【００７２】
X、YおよびZは、一座配位または多座配位を調整する、リガンドまたはリガンド系またはその対応するアニオン（例えば、安息香酸またはベンゾエートアニオン、フェノールまたはフェノキシドアニオン、アルコールまたはアルコキシドアニオン）のいずれかから誘導される、適切なリガンドまたは荷電−中和性アニオンを示す。X、YおよびZは、ハライド、オキソ、アクオ、ヒドロキソ、アルコール、フェノール、ジオキシゲン、ペルオキソ、ヒドロペルオキソ、アルキルペルオキソ、アリ−ルペルオキソ、アンモニア、アルキルアミノ、アリールアミノ、ヘテロシクロアルキルアミノ、ヘテロシクロアルキルアミノ、ヘテロシクロアリールアミノ、アミンオキシド、ヒドラジン、アルキルヒドラジン、アリールヒドラジン、ニトリックオキシド、シアニド、シアナート、チオシアナート、イソシアナート、イソチオシアナート、アルキルニトリル、アリールニトリル、アルキルイソニトリル、アリールイソニトリル、ニトレート、ニトライト、アジド、アルキルスルホン酸、アリールスルホン酸、アルキルスルホキシド、アリールスルホキシド、アルキルアリールスルホキシド、アルキルスルフェン酸、アリールスルフェン酸、アルキルスルフィン酸、アリールスルフィン酸、アルキルチオールカルボン酸、アリールチオールカルボン酸、アルキルチオールチオカルボン酸、アリールチオールチオカルボン酸、アルキルカルボン酸（例えば、酢酸、トリフルオロ酢酸、シュウ酸）、アリールカルボン酸（例えば、安息香酸、フタール酸）、尿素、アルキル尿素、アリール尿素、アルキルアリール尿素、チオ尿素、アルキルチオ尿素、アリールチオ尿素、アルキルアリールチオ尿素、サルフェート、サルファイト、ビサルフェート、チオサルフェート、チオサルファイト、ヒドロサルファイト、アルキルフォスフィン、アリールフォスフィン、アルキルフォスフィンオキシド、アリールフォスフィンオキシド、アルキルアリールフォスフィンオキシド、アルキルフォスフィンサルファイド、アリールフォスフィンサルファイド、アルキルアリールフォスフィンサルファイド、アルキルホスホン酸、アリールホスホン酸、アルキルホスフィン酸、アリールホスフィン酸、アルキルホスフィナウスアッシド、アリールホスフィナウスアッシド、ホスフェート、チオホスフェート、ホスファイト、ピロホスファイト、トリホスフェート、ハイドロゲンホスフェート、ジハイドロゲンホスフェート、アルキルグアニジノ、アリールグアニジノ、アルキルアリールグアニジノ、アルキルカルバメート、アリ−ルカルバメート、アルキルアリールカルバメート、アルキルチオカルバメート、アリールチオカルバメート、アルキルアリ−ルチオカルバート、アルキルジチオカルバメート、アリールジチオカルバメート、アルキルアリールジチオカルバメート、ビカーボネート、カーボネート、パークロレート、クロレート、クロライト、ハイポクロライト、パーブロメート、ブロメート、ブロマイト、ハイポブロマイト、テトラハロマンガネート、テトラフルオロボレート、ヘキサフルオロホスフェート、ヘキサフルオロアンチモネート、ハイポホスファイト、アイオデート、パーアイオデート、メタボレート、テトラアリールボレート、テトラアルキルボレート、タートレート、サリシレート、サクシネート、シトレート、アスコルベート、サッカリネート、アミノ酸、ヒドロキサム酸、チオトシレート、イオン交換樹脂アニオンからなる群からそれぞれ選択される。X、YおよびZが選ばれる好適なリガンドは、ハライド、有機酸、ニトレートおよびビカーボネートアニオンを含む。
【００７３】
マクロ環の炭素原子に付着した「Ｒ」基は、マクロ環に関して軸方向またはエクアトリアルの位置にあることができる。「Ｒ」基が水素以外であるとき、またはそれらが付着した炭素原子とともに、つまり、隣接した炭素原子上の、２個の隣接した「Ｒ」基が飽和、部分的に飽和または不飽和の、環または窒素を含むヘテロ環を形成するとき、またはそれらが付着した炭素原子とともに、同じ炭素原子上の、２個の隣接した「Ｒ」基が飽和、部分的に飽和または不飽和のリング構造を形成するとき、少なくともいくつかの「Ｒ]基が改良された活性および安定性の理由でエクアトリアルの位置あることが好ましい。錯体が水素でない複数の「Ｒ」基を含むときに、このことは特に真実である。
【００７４】
スーパーオキシド不均化活性を有する、多様なペンタアザマクロ環状リガンド化合物は容易に合成され得る。通常、触媒の遷移金属中心は触媒作用の活性サイトであると思われ、そこではマンガンまたは鉄イオンは２価(II)および３価(III)状態の間で環状をとる。このように、スーパーオキシドアニオンが酸化した金属を還元することができ、プロトン化したスーパーオキシドが還元した金属を酸化させることができ、そして、スーパーオキシドアニオンへの接近の立体障害が最小である範囲に、イオンの酸化還元電位が存在する限り、触媒が約１０^６〜１０^８ｋ_catで機能することになる。
【化２８】

【００７５】
記載されているペンタアザマクロ環状リガンド化合物触媒はさらに、米国特許第５，６３７，５７８号、ＰＣＴ出願Ｗ０９８／５８６３６および係属中の出願Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．０９／３９８１２０ に記載されている。これらはいずれも本願明細書に引例として取り込まれるものとする。これらのペンタアザマクロ環状リガンド触媒は、米国特許第５，６１０，２９３号に開示された方法によって製造され得る。しかし、好ましくは、本発明で使用されるペンタアザマクロ環状リガンド化合物触媒は、係属中の出願ＵＳＳＮ６０／１３６，２９８およびＵＳＳＮ０９／３９８，１２０に記載されているテンプレート法によって合成され、それらは引例として本願明細書中に取り込まれる。
【００７６】
このペンタアザマクロ環状リガンド群の好ましい化合物は、化合物Ｍ４０４０１と指名されて、以下の式によって示される：
【化２９】

【００７７】
このペンタアザマクロ環状リガンド群の他の好ましい化合物は、化合物M4040３と指名されて、以下の式によって示される：
【化３０】

【００７８】
また、本発明での使用が適切ではあるが、しかしペンタアザマクロ環状リガンド化合物よりも好ましさが低いものとして、米国特許第５，６９６，１０９号に開示されたマンガンおよび鉄のサレン錯体があり、それはここに引例として組み込まれる。用語「サレン錯体」は次の一般式を有するリガンド錯体を意味する：
【化３１】

【００７９】
式中、Ｍは遷移金属イオン、好ましくはマンガンまたは鉄であり；Ａはアニオン（概してCl）であり;そして、ｎは０、１または２のいずれかである。Ｘ_１、Ｘ_２、Ｘ_３およびＸ_４は、水素、シリル、アルリル（arlyls）、アリール、アリールアルキル、第一級アルキル、第二級アルキル、第三級アルキル、アルコキシ、アリ−ルオキシ、アミノ、第四級アミン、ヘテロ原子および水素からなる群からそれぞれ選ばれる;概して、Ｘ_１およびＸ_３は、通常水素、第四級アミンまたは第三級ブチルといった同じ官能基から選ばれ、そしてＸ_２およびＸ_４は概して水素である。Ｙ_１，Ｙ_２，Ｙ_３，Ｙ_４，Ｙ_５、Ｙ_６は、水素、ハライド、アルキル、アリール、アリールアルキル、シリル基、アミノ、ヘテロ原子を保持しているアルキルまたはアリール、アリールオキシ、アルコシキおよびハライドからなる群からそれぞれ選ばれ；好ましくは、Ｙ_１およびＹ_４はアルコキシ、ハライドまたはアミノ基である。典型的には、Ｙ_１およびＹ_４は同一である。Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３およびＲ_４は、Ｈ，ＣＨ_３，Ｃ_２Ｈ_５，Ｃ_６Ｈ_５，Ｏ−ベンジル、第一級アルキル、脂肪酸エステル、置換されたアルコキシアルキル、ヘテロ原子を保持している芳香族基、アリールアルキル、第二級アルキル、および第三級アルキルからなる群からそれぞれ選ばれる。これらのサレン錯体の合成方法もまた米国特許第５，６９６，１０９号に開示されている。
【００８０】
鉄またはマンガンポルフィリン類、例えばマンガン(III)テトラキス（４−Ｎ−メチルピリジル）ポルフィリン、マンガン(III)テトラキス−o−（４−N-メチルイソニコチンアミドフエニル）ポルフィリン、マンガン(III)テトラキス(４-Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアニリニウム)ポルフィリン、マンガン(III)テトラキス(１−メチル−４−ピリジル)ポルフィリン、マンガン^III（４−安息香酸)ポルフィリン、マンガン(II)オクタブロモ−メソ−テトラキス（Ｎ−メチルピリジニウム−４−イル）ポルフィリン、５，１０，１５，２０−テトラキス−（２，４，６−トリメチル−３，５−ジスルフォナトフェニル）ポルフィリナトイオン(III)（ＦeＴＭＰＳ）、鉄(III)テトラキス（４−Ｎ−メチルピリジル）ポルフィリンおよび鉄(III)テトラキス−o−(４−Ｎ−メチルイソニコチンアミドフェニル)ポルフィリン、好ましくは置換鉄ポルフィンである５，１０，１５，２０−テトラキス−（２，４，６−トリメチル−３，５−ジスルフォナトフェニル）ポルフィリナトイオン(III)（ＦeＴＭＰＳ）もまた、本発明の方法および組成物において使用できる。米国特許第６,１０３,７１４号参照。これらの非タンパク性触媒の触媒活性および精製方法または合成方法は、有機化学技術では周知である。
【００８１】
非タンパク性ス−パ−オキシド不均化触媒に加えて、多様な資源から分離され、または遺伝子組み換えにより産生されたス−パ−オキシドジスミュ−タ−ゼ酵素（ＳＯＤｓ）が、本発明の方法および組成物において使用できる。これらの酵素で最も周知のものは、ＣuＺn ＳＯＤであって、銅２原子および亜鉛２原子を含む、分子量３３，０００を有する二量体である。ＣuＺn ＳＯＤは、サイトゾルにおいて、そしてまたミトコンドリアの膜間隙において認められる。ＭｎＳＯＤはマンガン４原子を含む、分子量８５，０００を有する四量体であって、主にミトコンドリア基質に位置する。これらの酵素は生化学技術では周知であり、そしてそれらの単離法および製造法もまた周知である。本願明細書に引用したものとして、米国特許第５,７８８,９６１号参照。さらに、ＣｕＺｎ ＳＯＤは、商品名オルゴテインＯＲＧＯＴＥＩＮ（パ−オキシノルム Peroxinorm）として市販されている。本発明の実施方法が哺乳類の血管壁にて行われると推定されるので、これらの酵素触媒と非タンパク性触媒間の拡散速度の差が、スーパーオキシド不均化触媒の血管内投与によって見られるカテコールアミン維持効果に影響を及ぼすと予期されない。かくして、これらの酵素触媒は、本発明方法および組成物に効果的であると思われる。しかし、酵素触媒が個体によってはアレルギー性反応を生じることがあり、血流中でかなり急速に劣化され、それらの小さい有機リガンド非タンパク性対応物よりも製造するのがずっと困難であるので、酵素触媒は好ましくない。
【００８２】
スーパーオキシド不均化を触媒作用するための本発明の化合物または錯体の活性は、本願明細書において引用したものとされる、Riley, D.P. et al., Anal. Biochem., 196: 344-349 (1991)に記載されているように、ストップトフロー動力学的分析技術を使用して示されることができる。ストップトフロー動力学的分析は、水中のスーパーオキシドの消失速度を定量的にモニターする正確で直接的な方法である。ストップトフロー動力学的分析は、ＳＯＤ活性について化合物をスクリーニングするのに適していて、そして本発明の化合物または錯体の活性は、ストップトフロー分析で示されるように、上記の疾患状態および失調を治療することに相関する。
【００８３】
中間体の場合と同様に、化合物および誘導体に対して上記で記載された一般式の考察される均等物は、その化合物の互変異性体のような、そして、さまざまなＲ基の１以上がそこに定義されるように置換基の単純な変異である場合など、例えば、Ｒが、指定されたものよりもより高いアルキルである場合、またはトシル基が他の窒素または酸素を保護する基である場合、あるいはＯ−トシルがハライドである場合など、それ以外は一致している化合物であって、そして同じ一般の特性を有する化合物である。１以外の電荷を有するアニオン、例えば、炭酸塩、リン酸塩および水素リン酸塩は、それらがその錯体の全体的な活性に悪影響を与えない限り、１の電荷を有するアニオンの代わりに使用することができる。しかし、１以外の電荷を有するアニオンを使用することは、上記で記載された錯体の一般式のわずかな変化を導くことになる。その上に、置換基が水素であると指定されるか、あるいはおそらく水素である場合、その位置で水素以外の置換基、例えば、ヒドロカルビル基またはハロゲン、ヒドロキシ、アミノなどの官能基の化学的性質は、それが全体的な活性および／または合成手順に悪影響を与えない限り、重大でない。さらに、マンガン(III）錯体が主題のマンガン(II)錯体に均等になることが、考察される。
【００８４】
他の好ましい態様として、スーパーオキシド不均化触媒は、サイトカインの投与に伴う低血圧を治療する組成物および方法に使用されるカテコールアミン昇圧剤に関連させる。カテコールアミン昇圧剤としては、ドーパミン、ノルエピネフリン、エピネフリンおよびαアゴニストフェニルエプリンが好ましく、ドーパミンおよびノルエピネフリンがさらに好ましい。いかなる特定の理論にも制限されずに、出願人は、サイトカイン投与から生じる低血圧に苦しむ哺乳類に、サイトカイン、スーパーオキシド不均化触媒およびカテコールアミン昇圧剤からなる組成物を投与すると、カテコールアミンの劣化を予防し、かくしてカテコールアミン昇圧剤が血管の緊張度を改良して、哺乳類の平均動脈圧を増進させることができることを、提案する。哺乳類の状態および使用する治療に従い、カテコールアミン昇圧剤は、触媒およびサイトカインの投与の前にまたは触媒およびサイトカインと同時に投与される。
【００８５】
医薬組成物
本発明の化合物は、本発明で使用される医薬または動物薬用組成物として処方されることができる。治療されるべき被験体、投与の方式および要求される治療の型（例えば、阻害、防止、予防、治療）に従い、これらのパラメータに調和した方法で化合物は処方される。本発明の組成物は、治療上または予防上有効な用量の、スーパーオキシド不均化触媒だけ、またはサイトカインと組み合せて、からなる。スーパーオキシド不均化触媒は、好ましくはスーパオキシドジスムターゼ酵素、例えば、ＣｕＺｎ ＳＯＤまたは低分子量の、その酵素の有機リガンド模倣品（ＳＯＤｍ）である。好ましい態様としては、本触媒は、有機リガンドおよび遷移金属カチオン、より好ましくは、ペンタアザシクロペンタデカン化合物のマンガン（ＩＩ）、マンガン（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）および鉄（ＩＩＩ）キレートを含有する非タンパク性触媒である。また、米国特許第５，６９６，１０９号に開示されている、マンガンおよび鉄のサレン錯体および、上記で検討した鉄またはマンガンポルフィリンは、本発明における使用に適当である。
【００８６】
好ましい態様として、本発明の医薬または動物薬組成物は、サイトカインと並行して投与される、治療上または予防上有効な投与量のスーパーオキシド不均化触媒を含有してなる。哺乳類に投与されるとき、これらの組成物は、免役応答を刺激するサイトカインの能力を増強させ、それにより腫瘍に対する哺乳類のサイトカイン免疫応答を増強させる。この際、腫瘍の増殖を抑制するホストの能力は、向上する。上記の組成物および方法で使用されるサイトカインは、好ましくは、インターロイキンー１（ＩＬ−１）、インターロイキンー２（ＩＬ−２）、インターロイキンー３（ＩＬ−３）、インターロイキンー４（ＩＬ−４）、インターロイキンー５（ＩＬ−５）、インターロイキンー６（ＩＬ−６）、インターロイキンー７（ＩＬ−７）、インターロイキンー１０（ＩＬ−１０）、インターロイキンー１２（ＩＬ−１２）、インターロイキンー１５（ＩＬ−１５）、ガンマーインターフェロン（γ-ＩＦ）、インターフェロンーアルファ（ＩＦ−α）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、顆粒球コロニー刺激因子および顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子であり、そしてＩＬ−２がより好ましい。
【００８７】
他の態様として、スーパーオキシド不均化触媒およびサイトカインを含有してなる組成物は、ウィルス、好ましくは、Ｃ型肝炎またはヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）に対する、サイトカイン媒介の免疫応答を増強させるために哺乳類に投与され得る。これに関連して、この種の組成物は、Ｃ型肝炎またはＡＩＤＳの治療のために投与され得る。スーパーオキシド不均化触媒と組み合せて投与される好適なサイトカインは、Ｃ型肝炎の治療のためにはＩＦ−αであり、そして、スーパーオキシド不均化触媒と組み合せて投与される好適なサイトカインはＨＩＶに感染したかまたはＡＩＤＳに苦しむ哺乳類の治療のためにはＩＬ−２である。
【００８８】
他の好ましい態様として、スーパーオキシド不均化触媒、サイトカインおよびカテコールアミン昇圧剤を含有してなる医薬または動物薬組成物が提供される。サイトカインの投与から生じる低血圧状態の哺乳類に投与されるとき、これらの医薬組成物は、サイトカイン投与に伴う潜在的に致死性の低血圧副作用を予防するかまたは減少させ、それによりガンを治療するためにサイトカインの継続した投与を許容することができる。これらの組成物は、好ましくは、カテコールアミンの劣化を予防し、カテコールアミン昇圧剤が血管緊張度を改良して、哺乳類の平均動脈圧を増大させることができる。
【００８９】
本発明の組成物は、その必要によりヒトまたは動物を治療するときに使用される従来の医薬製剤（例えば、注射液）に取り入れられることができる。医薬組成物は、皮下に、静脈内にまたは筋肉内への注入によって、あるいは大きい容量の非経口溶液などとして投与されることができる。ここで使用される用語「非経口的な」は、皮下注射、静脈内注射、筋肉内注射、胸骨内注射または点滴技術を含む。
【００９０】
例えば、非経口治療用組成物は、スーパーオキシド不均化触媒の容量に対して、０．１〜３０重量％の滅菌等張性食塩水を含むことができる。好適な溶液は、溶液中に約０．５〜約１０％、より好ましくは、約１〜約５％、そして、最も好ましくは約２．５％のスーパーオキシド不均化触媒（対容量重量％）を含む。
【００９１】
注射用製剤、例えば、滅菌注射用水性または油性懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用して、周知の技術に従って、処方されることができる。滅菌注射用製剤は、また、非毒性非経口的に許容可能な希釈剤または溶剤の滅菌注射用溶液または懸濁液、例えば、エチルアルコールおよび水の溶液であってもよい。水および等張性食塩液は、使用されることができる許容可能な賦形剤および溶剤の一つである。加えて、滅菌し、固定した油は、従来から、溶剤または懸濁している培地として使用される。
【００９２】
医薬の直腸投与のための坐薬は、室温で固体であるが、直腸温度では液体であり、したがって、直腸で溶けて、医薬を放出する、カカオバターおよびポリエチレングリコールのような適切な非刺激性賦形剤を医薬に混合することによって調製されることができる。
【００９３】
動物またはヒト被験者に対する投与については、スーパーオキシド不均化触媒およびサイトカインを含有してなる組成物の典型的な用量は、患者体重キログラム当たりスーパーオキシド不均化触媒およびカテコールアミン昇圧剤０．００１〜約１０ｍｇおよび患者体重キログラム当たりサイトカイン１００〜６００，０００Ｉ．Ｕ．を含有する。スーパーオキシド不均化触媒の用量は、好ましくは、患者体重に対して０．００１〜５ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、０．０５〜５ｍｇ／ｋｇ体重、そして最も好ましくは０．０５〜１ｍｇ／ｋｇ体重である。組成物中のサイトカインの用量は、好ましくは約５００〜約１００，０００Ｉ．Ｕ．／ｋｇ体重、より好ましくは約１，０００〜１００，０００Ｉ．Ｕ．／ｋｇ体重、そして最も好ましくは約５，０００〜約１００，０００Ｉ．Ｕ．／ｋｇ体重の範囲である。本発明の別の態様において、組成物はウィルスに対してサイトカイン媒介の応答を増強させるために患者に投与されることができる。スーパーオキシド不均化触媒だけを、またはサイトカインと組み合せて、含有してなるこの種の組成物の典型的投与量は、患者体重キログラム当たり、スーパーオキシド不均化触媒０．００１〜約１０ｍｇ、そして、好ましくはサイトカイン１０〜１００Ｉ．Ｕ．から構成されている。上記の組成物について、日用量の全量を、単一または分割した量で哺乳類に与えることができる。用量単位組成物は、全用量を形成するために、その約数の、この種の量を含むことができる。しかし、投与される特定の組成物に関して、全用量が変動することを、当業者は認識する。
【００９４】
単一の投与形式を生産するために担体部材と混合できる活性成分の量は、治療されるホストおよび特定の投与方式によって、変化する。いくつかの個別の用量を投与することによって必要な有効量に達することができるので、それぞれの投与形式の個別の用量に含まれる活性成分の単位含量が有効量を構成するに及ばないことは言うまでもない。投与量の採択は、利用される投与形式、治療される状態および当業者の決定によって達成される特定の目的に依存する。
【００９５】
本発明の化合物および／または組成物で疾患状態を治療するための投薬治療計画は、患者の体型、年齢、体重、性別、食餌および健康状態、使用される特定の化合物の、投与ルート、活性、効能、薬物動力学的および毒性プロフィル、ドラッグデリバリーシステムが利用されるかどうか、そして、その化合物が医薬の組み合せの一部として投与されるかどうかなど、薬理学的考察を含む、多数の因子に従って、採択される。このように、実際に使用される投薬治療計画は、広く変化することができ、したがって、上記で記載される好適な投薬治療計画から逸脱することができる。
【００９６】
以下の実施例は、本発明を限定せずに、例示するために提供される。
【００９７】
実施例
実施例1：ＩＬー２誘発の低血圧に対するＳＯＤ模倣Ｍ４０４０３の効果
平均血圧に対する次の化合物の効果を決定するために、ＩＬ−２、Ｍ４０４０３およびＩＬ−２／Ｍ４０４０３がマウス（１群当たり、ｎ＝６）に投与された。１８０，０００ＩＵのＩＬー２は、４日間毎日のベースで、第１群の各動物に、５日間（１０回分）、１日２回腹腔内に投与された。被験動物は、ＩＬー２と組み合せて、１日２回腹腔内にＭ４０４０３（０．０３〜３ｍｇ／ｋｇ）を投与された。未処理のマウスまたはＭ４０４０３のみ（試験された最高投与量３ｍｇ／ｋｇ）を投与されたマウスの並行する群は、コントロールとして役立った。ＩＬー２の最後の投与から２時間後、心収縮期の血圧は、テールカフ（Stoelting、Wood Dell，IL）により、パワーラボ（PowerLab）ディジィタル信号変換器（AD instruments, Mountain View, CA）を使用して測定した。分析は、チャート 3.6.1ソフトウェア（AD instruments）を使用して実行された。これらの試験の結果は、第１表において確認できる。
【表１】
第１表：ＩＬ―２誘発の低血圧に対するＭ４０４０３の保護効果

【００９８】
血圧値は、各群マウス６匹の平均値から平均動脈血圧を示す。この実験は、ＩＬ−２投与（平均４５±８．０ｍｍＨｇ）に続く、心収縮期血圧の著明な（ほぼ５０％）減少を示した。ＳＯＤ模倣品だけを投与されたマウスは、コントロールと比較して多様な血圧増加を示した（平均１１１±４５ ｍｍＨｇ対８３±４ｍｍＨｇ−−ＳＯＤ模倣品群で非常に高い血圧のマウス１匹により、ほとんどの場合エラー）。ＩＬ−２プラスしたＳＯＤ模倣品を投与されたマウスは、ＩＬ−２誘発の低血圧（１１４±２９ｍｍＨｇ）の完全な反転を示した。
【００９９】
第１図において示されるように、ＩＬ−２誘発の低血圧がＭ４０４０３により用量依存して減らされ、３ｍｇ／ｋｇのM４０４０３で最大の反転を示した。M４０４０３の最高投与量（５日間１日２回投与）では、明白な毒性の兆候がなく、そして心収縮期血圧について特に効果がなかった。
【０１００】
実施例２：用量拡大研究
JL−２からの毒性を減少させることに加えて、M４０４０３が、患者により我慢できるＩＬ−２の投与量を増やすのに役立つかどうかを決定するため、あるいは計画的した完全な数の服用が与えられ、応答の潜在性を最大化することができることを保証するために、以下の研究が行われた。
【０１０１】
マウス（１群、ｎ＝６）に、５日間１日２回腹腔内にＩＬ−２の暫増する投与量１８０，０００、２００，０００、２５０，０００、３００，０００、３５０，０００および４００，０００ＩＵ（１０回分）を注射した。実験動物に、ＩＬ−２と組み合せて、Ｍ４０４０３（３ｍｇ／ｋｇ）を１日２回腹腔内に投与した。ＩＬ−２の最後投与から２時間後に、心収縮期の血圧は、テールカフ（Stoelting、Wood Dell，IL）により、パワーラボ（PowerLab）ディジィタル信号変換器（AD instruments, Mountain View, CA）を使用して測定した。分析は、チャート 3.6.1ソフトウェア（AD instruments）を使用して実行された。
【０１０２】
Ｍ４０４０３の不存在下で、１日２回ＩＬ−２それぞれ２００，０００、２５０，０００および３００，０００Ｉ．Ｕ．で処理した群では１匹死亡し（６匹中１匹死亡）、１日２回４００，０００Ｉ．Ｕ．で処理した群では全てのマウスが死亡した（マウス６匹中６匹死亡）。対照に、Ｍ４０４０３が存在する場合には、ＩＬ−２の全ての投与量で全てのマウスが生存した（全群でマウス６匹中死亡０匹）。したがって、ＩＬ−２介在の死亡率が減少すると共に、Ｍ４０４０３により血圧の維持が可能となった。このように、Ｍ４０４０３が存在する場合、より高い投与量のＩＬ−２が安全に投与されることができる。
【０１０３】
実施例3：生体外ＬＡＫ細胞誘発に対するM４０４０３の効果の評価
Ｍ４０４０３が、生体外でＬＡＫ細胞の細胞毒性を誘発するＩＬ−２の能力に影響を及ぼしたかどうか、を決定するために研究が行われた。ネズミ脾細胞は、ＩＬ−２で活性化しながら、増加する濃度のＭ４０４０３を加えて、培養させた（１０％子ウシ胎仔血清、抗生物質および１ｍＭグルタミンを含む、ＲＰＭＩ−１６４０培地中のrhＩＬ−２ ６０００ＩＵ／ｍｌ）。非Ｍ４０４０３にさらした培地は、正のコントロールとして役立った。７２時間後に、ＬＡＫ細胞を集め、そして細胞生存率を評価した。ＬＡＫ細胞の細胞毒性は、前に発表された方法(Yim et al., 1994; Samlowski et al., 1998)を使用して、細胞比率（平均±SDとして表される）を目標とする様々なエフェクタ−にて、３組サンプルのＲＤ−９９５腫瘍に対して試験された。
【０１０４】
これらの実験は、広い範囲の濃度（０〜１０μM）のＭ４０４０３がネズミ（マウス）ＬＡＫ細胞活性化に悪影響を与えないことを確認した（第３図参照）。実際に、ＬＡＫ細胞活性化の用量依存的増大が誘発されるように見えた。細胞生存率は、トリパンブルー排除によって評価された。Ｍ４０４０３濃度１０μM未満にてコントロールの１００％が生存した。ヒトＬＡＫ細胞を使用するとき、Ｍ４０４０３について、類似した結果が得られた（図示せず）。
【０１０５】
実施例4：生体内ＬＡＫ細胞誘発に対するM４０４０３の効果の評価
５日間１日２回（１０回分）マウス（１群ｎ＝６）に１８０，０００IUのＩＬ−２を腹腔内に投与した。実験動物に、ＩＬ−２と組み合せて、Ｍ４０４０３（３ｍｇ／ｋｇ）を１日２回腹腔内に投与した。未処理のマウスまたはＭ４０４０３だけで処理されたマウス（試験された最高投与量３ｍｇ／ｋｇ）の並行群は、コントロールとして役立った。ＩＬ−２の最後の服用から２時間後にマウスを殺した。単一細胞浮遊液は各々の動物からのリンパ節および脾臓から調製され、そして連続的希釈を行った（１０^６から起動）。リンパ節および脾臓細胞の細胞融解活性は、細胞比率を目標とする様々なエフェクターで（３組にて）、標準４ｈ^５１Ｃｒ放出検定法により^５１Ｃｒー放射性同位元素で標識されたＲＤ−９９５腫瘍（１０^４細胞、ＮＫ抵抗性、ＬＡＫ感受性）に対して試験された。ＩＬ−２を入れた細胞融解エフェクター細胞が存在するときに認められる、ＬＡＫ活性の急速な増加制御を試験するために、６０００ＩＵ／ｍｌ のＩＬ−２を含む、並行したウエルが設定された。スチューデントｔ検定を使用し、多重分析用ボンフェローニの補正を用い、器官当たり特定の細胞毒性（例えば、標的比率に対する１００：１のエフェクターにて）および溶解ユニットの統計的比較が行われた。
【０１０６】
第４図から分かるように、Ｍ４０４０３は、リンパ節(Ａ)および脾臓（Ｂ）に示される、生体内でＩＬ−２に誘発されたＬＡＫ細胞活性化を有意に強化した。
【０１０７】
実施例５：生体内におけるＩＬ−２誘発の腫瘍応答のＭ４０４０３による増強 ＩＬ−２で誘発された腫瘍応答に対するＭ４０４０３の効果は、進行の進んだ段階で異なる２種の腫瘍において評価された。ＲＤ−９９５およびＭｅｔｈ Aが初期実験のために選択された。その理由は、次のことにある。これらの腫瘍は、ＩＬ−２に誘発されたＬＡＫ細胞に対して異なる感受性を示し、かくして、我々が、ＩＬ−２により誘発された、非ＬＡＫ細胞介在の腫瘍細胞を死滅させる機構から同じくＬＡＫ細胞介在のそれを評価することができるからである。
【０１０８】
ローゼンバーグ腫瘍モデル
ＲＤ−９９５は、Ｃ３Ｈ／ＨｅＮマウス(Samlowski et al.,1995)を慢性的に紫外線に露出させることによって誘発された黒皮線維肉腫である。この腫瘍は、非免役抑制されたマウスにおいて成長し、かくして「プログレサー」腫瘍と呼ばれる。ＲＤ−９９５は、生体外でＬＡＫ細胞媒介の死滅に感受性がある。ＲＤ−９９５に由来する肺転移は、ＩＬ−２治療（ＬＡＫ細胞の注入の有無にかかわらず）に、きわめて感受性がある。Ｍ４０４０３はマウスにおいてＩＬ−２誘発応答を減少させない、ことを確認するために、以下の実験でこのモデル（ローゼンバーグ腫瘍モデルとして知られている）が使用された。
【０１０９】
４群（１群当たり、マウスｎ＝６）のマウス（コントロール、Ｍ４０４０３だけ、ＩＬ−２だけ、ＩＬ−２＋Ｍ４０４０３）は、代謝ケージに順応した。一旦安定すると、マウスに静注で１０^６のＲＤ−９９５腫瘍細胞を注入した。ＩＬ−２だけの治療群は正のコントロールとして役立ち、腫瘍注入から３日後にＩＬ−２治療を開始した（１８０，０００ＩＵのＩＬ−２を５日間１２時間毎に腹腔内に投与した）。ＩＬ−２と共に同時にマウスの並行群にＭ４０４０３（３ｍｇ／ｋｇ）を開始した。第１４日目に、マウスを麻酔薬用量過多によって犠牲にした。前開胸術後に、肺臓が完全に拡大するまで、印度インク溶液（１７０ｍｌの蒸留水に印度インク３０ｍｌ、水酸化アンモニウム４滴）を１８ga.の針にて各々のマウスの気管に点滴した。次に、肺臓は切除され、拡大レンズを用いて、転移の算出より前に少なくとも２４時間フエケーテ溶液（Fekete's solution）（７０％エチルアルコール１００ｍｌ、ホルムアルデヒド１０ｍｌ、氷酢酸５ｍｌ）５〜１０ｍｌ中に晒された。
【０１１０】
ハツカネズミのＩＬ−２治療は、肺臓中の腫瘍小瘤の数々を除去した（第５図）。Ｍ４０４０３は、ＩＬ−２の抗腫瘍効果に影響を及ぼさなかった（第５図）。しかし、使用される投与量でＭ４０４０３は、それ自体でマウス肺臓の腫瘍小瘤の数々を完全に除去し（第５図）、そして、Ｍ４０４０３はそれ自体生体内でＬＡＫ細胞誘発を増大させなかった（第４図参照）ので、その効果はＬＡＫ細胞活性化から独立していた。実験データに基づいて、ＩＬ−２プラスＭ４０４０３の相和または相乗効果が観察されると、出願人は考える。
【０１１１】
Ｍｅｔｈ Ａ線維肉腫腫瘍モデル
Ｍｅｔｈ Ａは、ＢＡＬＢ／ｃマウスにおいてメチルコラントレン治療（Lloyd Old, MSKCCから入手）によって誘導された。この非常に積極的な線維肉腫は、生体外でＬＡＫ細胞介在の細胞融解に抵抗するまれに見る腫瘍のうちの一つである。この腫瘍は、これをマウス（悪性腫瘍腹水症）の腹腔内に注入するとき、改善された生残を示してＩＬ−２治療に呼応する。機構は完全に決められなくて、治療応答の一つの要素として、ニトリックオキシドを含むことができる。Yim et al., J. Immunol. 155: 4382-4390 (1995)参照。Ｍ４０４０３は、ＮＯを抑制せずに、そしてＭｅｔｈ Ａ腫瘍のＮＯ媒介のアポプトシスに影響を及ぼさない（図示せず）。Ｍｅｔｈ Ａモデルは、ＩＬ−２とＭ４０４０３との組み合せの潜在的に相乗する抗腫瘍効果を評価するために抵抗性腫瘍モデルを提供するのに役立つ。このモデルは、大多数のＩＬ−２治療されたヒトのガンの代表的なものであり、そしてそれは、ＩＬ−２治療に続く疾患安定化を精々受けて、最終的な疾患進行を伴う。
【０１１２】
正常なＢＡＬＢ／ｃマウス（コントロール、Ｍ４０４０３だけ、ＩＬ−２＋Ｍ４０４０３）８匹の各群は、２ｘ１０^６Ｍｅｔｈ Ａ腫瘍細胞を腹腔内に注入された（０日）。腫瘍移植から６日目に、マウスに、Ｍ４０４０３（３ｍｇ／ｋｇ、皮下注）による付随する治療の有無にかかわらず、ＩＬ−２（１８０，０００ＩＵ、５日間１２時間毎に皮下注）による治療を開始した。マウスの生残は、治療的な応答を評価するための主要終点として使われた。
【０１１３】
第６図に示すように、ＩＬ−２治療のマウスに適度であるが、確かな生残効果が、コントロールと比較して生起した（１９日対１４日）。Ｍ４０４０３は、それ自体生残に影響を及ぼさなかった。対照に、ＩＬ−２とＭ４０４０３との間に顕著な相乗効果があり、目に見える（明瞭な）腹水症もなく、６０日目で５０％のマウスがなお生存した。この結果として、Ｍ４０４０３はＩＬ−２誘発の低血圧を遮断するだけでなく、極めて難治性の治療モデルにおいてＩＬ−２誘発の抗腫瘍応答を改善し、それによってＩＬ−２の治療効果を増強させることが、示された。
【０１１４】
実施例５：Ｍ４０４０１およびＩＬ−２
Ｍ４０４０１についてもまた初期実験が実行された。これらの実験は、Ｍ４０４０１が生体外でＬＡＫ細胞を活性化するＩＬ−２の能力を妨げないことを証明した。さらに、そして、敗血症のショックにおける我々の以前のデータから予測されるように、Ｍ４０４０１は、Ｍ４０４０３よりも低い投与量でＩＬ−２介在の低血圧を逆転させた。このように、低血圧の完全な反転は、０．３ｍｇ／ｋｇ（１日２回、５日間ＩＬ−２を使用、Ｍ４０４０３について使用されたプロトコールと同一のプロトコール）で認められた（第７図参照）。
【０１１５】
本発明の他の特徴、目的および効果は、当業者にとって明らかである。本願明細書において示される説明および図解は、他の当業者に本発明、その原理およびその実際的な応用例を知らせることを目的とする。特定の用途の要件に最適となり得るように、当業者は多数の様式で本発明を適応させ、利用することができる。したがって、ここに記載した本発明の特定の態様は、本発明について網羅したり、限定したりすることを意図するものではない。
【図面の簡単な説明】
【図１】 第１図は、ＩＬ−２誘発の低血圧が、３ｍｇ/ｋｇ Ｍ４０４０３で得られた最大の反転を示し、ＳＯＤ模倣品Ｍ４０４０３によって用量依存的に減衰したことを示しているグラフである。Ｍ４０４０３最大投与量（３ｍｇ/ｋｇ、１日２回、５日間）で、毒性の明らかな徴候がなく、また心収縮期血圧に対する効果が特になかった。
【図２】 第２図は、M４０４０３の存在下に高い投与量のＩＬ−２が投与できた（Ｍ４０４０３は血圧を維持できたが、IＬ−２媒介の死亡率は減少した）ことを示しているグラフである。M４０４０３の不存在下に、２００，０００；２５０，０００および３００，０００I U、１日２回投与において、 各々のＩＬ−２投与群に死亡１（６例中１例死亡）であり、４００，０００I U、１日２回投与群で、全マウスが死んだ（マウス６例中６例死亡）。M４０４０３の存在下に、ＩＬ−２の全ての投与量で全てのマウスが生存した（全群でマウス６例中死亡０）。
【図３】 第３図は、広い範囲の濃度（０〜１０μM）のM４０４０３がネズミ（マウス）のＬＡＫ細胞活性化に悪影響を及ぼさないことを、示しているグラフである。
【図４】 第４図は、ＳＯＤ模倣品Ｍ４０４０３が、リンパ節(Ａ)および脾臓（Ｂ）に示されるように、生体内でＩＬ−２に誘発されたＬＡＫ細胞活性化を有意に強化したことを示すグラフである。M４０４０３は生体内でそれ自体ＬＡＫ細胞誘発を増大しなかった。
【図５】 第５図は、マウスのＩＬ−２治療が肺臓の腫瘍小瘤の数々を除去し、ＩＬ−２の抗腫瘍効果に影響を及ぼさないことを示すグラフである。使用する投与量でＭ４０４０３それ自体は、完全にマウスの肺臓の腫瘍小瘤の数々を除去した。
【図６】 第６図は、コントロールと比較して、ＩＬ−２治療したマウスの残存効果を示しているグラフである（１９日と比較した１４日）。M４０４０３それ自体は、残存に影響を及ぼさなかった。これらの結果から、M４０４０３はＩＬ−２誘発の低血圧を遮断するのみならず、また高度に難治性の治療モデルにおいてＩＬ−２誘発の抗腫瘍応答を改善することを、示唆する。
【図７】 第７図は、M４０４０１が、生体外でＩＬ−２のＬＡＫ細胞を活性化する能力を妨害しなかったこと、そしてM４０４０３よりも低用量でＩＬ−２媒介の低血圧を反転させたこと、を示しているグラフである。低血圧の完全な反転は、０．３ｍｇ/ｋｇ（M４０４０３に使用されるものと同一のプロトコ−ル、１日２回、５日間ＩＬ−２を投与）で認められた。

Claims (4)

1. インターロイキン２（ＩＬ−２）投与による平均動脈圧の低下を抑制するか、ＩＬ−２投与から生じる低血圧の平均動脈圧を増大させるための医薬であって、式：
   

   

   で示される化合物および式：
   

   

   で示される化合物から選択されるスーパーオキシド不均化触媒を含む医薬。
2. 平均動脈圧の低下抑制または増大がカテコールアミンの自動酸化を制限することによって達成される、請求項１記載の医薬。
3. 哺乳類に投与するための、請求項１または２記載の医薬。
4. 哺乳類がヒトである、請求項３記載の医薬。

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