JP4340339B2 - 血液凝固因子もしくは血液凝固制御因子欠損モデル動物並びに該モデル動物の作製方法 - Google Patents

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
本願発明は、血液凝固因子または血液凝固制御因子欠損モデル動物に関する。詳細には、猿猴類動物を用いた血液凝固因子もしくは血液凝固制御因子欠損モデル並びに該モデル動物の作製方法に関する。より詳細には、ヒト由来の血液凝固因子または血液凝固制御因子を免疫原として猿猴類動物に各種方法で免疫し、産生させた抗体が猿猴類動物体内のヒト由来当該因子と同一機能を有する物質を中和し機能不全に陥らせることにより作製される血液凝固因子もしくは血液凝固制御因子欠損モデル並びに該モデル動物を作製する方法を提供するものである。
【０００２】
【従来の技術並びに発明が解決しようとする課題】
血液凝固因子またはその制御因子の欠損は、正常な血液凝固反応とその制御反応のバランスがくずれ、過剰な出血と自然発生的な血栓を生じさせる。特に遺伝的な血液凝固因子の欠損疾患として、血液凝固第ＶＩＩＩ因子(以下、ＦＶＩＩＩと称することがある)欠損の血友病A、血液凝固第ＩＸ因子(以下、ＦＩＸと称することがある)欠損の血友病Bがある。これら疾患は、臨床上、重篤な反復性の深部臓器出血(関節、筋肉、中枢神経系や消化管出血など)を呈するのが特徴であり、国内には約３０００名の患者が存在する。
【０００３】
血友病患者は常に出血の危険にさらされており、その出血の管理、つまり出血防止及び出血停止のために、プール血漿から抽出精製または遺伝子組み換え法により各種細胞に発現させたＦＶＩＩＩまたはＦＩＸを投与する補充療法が行われている。しかし、このような治療方法は元々ＦＶＩＩＩやＦＩＸが欠損している患者に行われるため、患者の中には投与されたこれら血液凝固因子を異物と見なし中和抗体が産生される場合がある。このようにして補充療法が無効となる血友病インヒビター保有患者は血友病患者の約６.０％に発生すると言われており、補充療法に伴う副作用の中で最も深刻な問題の一つとなっている(松田道生、鈴木宏治編、止血・血栓・線溶、中外医学社１９９４年刊、神谷正、血友病 最近の話題 ｐ.４７２-４７９）。
【０００４】
上記血友病インヒビター保有患者の治療には、(１)産生された抗体を凌駕するほどの過剰な血液凝固第ＶＩＩＩ因子、血液凝固第ＩＸ因子を投与する。（2）血液凝固経路中のＦＶＩＩＩやＦＩＸを経由しない、つまり横道(バイパス)の経路により血液凝固を生じさせるバイパス製剤(プロプレックス(商品名)、オートプレックス(商品名)、ファイバ(商品名))の投与が行われている。しかし、欠損因子の過剰投与は量的、経済的な限界があること、バイパス製剤では、血液凝固の最終段階であるトロンビン産生力が強すぎるが故に、汎発性血管内凝固症候群(以下、ＤＩＣと称することがある)の誘発をまねく危険性があり(Ｎ. Ｅｎｇ. Ｊ. Ｍｅｄ. ｖｏｌ.３０３,ｐ.４２１-４２５, １９８０)、有効性と安全性を満足する新規製剤の開発が待たれている。
【０００５】
製剤開発のためには実験動物を用いた薬効モデルが不可欠である。これまで各種バイパス製剤の薬効評価には先天性ＦＶＩＩＩまたはＦＩＸ欠損のイヌモデル(血友病犬)及び抗ＦＶＩＩＩ抗体、インヒビター患者血漿の各種動物への投与による一過性血友病インヒビターモデルが使用されてきた(Ｐｒｏｃ. Ｎａｔｌ. Ａｃａｄ. Ｓｃｉ., ｖｏｌ.８６,ｐ.１３８２-１３８６, １９８９; Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ,ｖｏｌ.７７,ｐ.５９１-５９９, １９９７)。また、近年では、トランスジェニックマウスを用いた血液凝固第ＶＩＩＩ因子、血液凝固第ＩＸ因子欠損マウスの作製が行われている(Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ, ｖｏｌ.１０,ｐ.１１９-１２１, １９９５; Ｂｌｏｏｄ,ｖｏｌ.８８,ｐ.３４４６-３４５０, １９９６; Ｂｌｏｏｄ,ｖｏｌ.９１,ｐ.７８４-７９０, １９９８)。しかし、これらの動物モデルではヒトとは種が離れているため、インヒビターの病態もしくは投与薬剤の血中動態、薬効評価などの点で、十分にヒトへの応用可能な試験結果を得ることができておらず、このことが新規な血友病インヒビター治療薬の開発が進展しない一因となっている。
【０００６】
【問題を解決するための手段、発明の構成】
本願発明者等は上記問題点を解決するために鋭意努力を重ねた結果、ヒトの血液凝固因子もしくは血液凝固制御因子欠損状態を好適に再現する猿猴類動物を用いたモデル動物並びに当該モデル動物を簡便に作出する方法を提供する本願発明を完成した。
以下、本願発明を概説する。
【０００７】
本願発明の猿猴類動物を用いたヒト血液凝固因子または血液凝固制御因子欠損状態モデル動物は、ヒト由来血液凝固因子または血液凝固制御因子を猿猴類動物に免疫することによって、動物体内で産生されたヒト免疫原に対する抗体が動物体内の血液凝固因子または血液凝固制御因子を中和する状態を好適に再現するインヒビター保有患者モデルである。加えて、本願発明はまた前記ヒト血液凝固因子または血液凝固制御因子欠損状態モデル動物を簡便に作出し得る方法を提供する。
【０００８】
本願発明で用いられるヒト由来血液凝固因子には、血液凝固第ＸＩＩ因子、血液凝固第ＸＩＩＩ因子、血液凝固第ＸＩ因子、血液凝固第Ｘ因子、血液凝固第ＩＸ因子、血液凝固第ＶＩＩＩ因子、血液凝固第ＶＩＩ因子、血液凝固第Ｖ因子、プロトロンビン及びフィブリノーゲンがある。また、血液凝固制御因子には、プロテインＣ、プロテインＳ、プロテインＺ、トロンボモジュリン、ＴＦＰＩ(Ｔｉｓｓｕｅ Ｆａｃｔｏｒ Ｐａｔｈｗａｙ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ)、ＡＴ-ＩＩＩ(Ａｎｔｉｔｈｒｏｍｂｉｎ-ＩＩＩ)等の一連のセリンプロテアーゼインヒビターが包含される。
本願発明において免疫原として用いられる当該因子は、ヒト由来であれば血液、細胞由来はもちろんのこと、そのアミノ酸配列を基にした化学合成ペプチドまたは遺伝子組換え技術により産生されたものを含む。また、本願発明のモデル動物としての猿猴類動物は、系統発生学的に真猿類以上の大型猿猴類、例えばカニクイザルが例示されこれらを使用することが望ましいが、本願発明の血液凝固因子または血液凝固制御因子欠損状態を呈しさえすれば特に限定されるものではない。
【０００９】
免疫方法は、中和抗体を産生し得る方法であれば投与形態を問わないが、望ましくは、抗原の皮下、皮内、筋肉内への接種による免疫が推奨され、これらによれば投与する免疫原の量が静脈投与に比較して低投与量で済ますことができる。抗原の接種に当たっては免疫賦活作用を有するアジュバントを併用すれば効果的であるが、フロイントの完全アジュバントと不完全アジュバントの組み合わせでの使用が好ましい結果をもたらす。好適な抗原及びアジュバント量並びに投与スケジュールは以下のとおりである。
一般的な動物への異種蛋白質の免疫方法が適用され、数ｍｇ/ｋｇの抗原をフロイントの完全アジュバントと混合し、皮下の複数の部位に投与する。３〜４週間後、同様に抗原をフロイントの不完全アジュバントと混合し、皮下の複数の部位に投与する。
【００１０】
免疫開始後、モデルの対象となる疾患の血液学上の指標、例えば、後述する(１)組織トロンボプラスチン時間及び活性化部分トロンボプラスチン時間、(２)凝固因子活性、(３)抗ヒトＦＶＩＩａまたは抗ヒトＦＩＸ抗体、(４)中和試験、及び(５)出血時間及び出血量を経時的に測定すること、並びに同時にサルの観察を行なえば、実験動物を目標とする凝固因子または血液凝固制御因子欠乏症状態に誘導できたことが確認できる。誘導完了後、開発薬剤の投与を行えばその薬剤の薬効評価が可能となる。
【００１１】
以下、疾患の血液学上の指標と当該指標の測定原理を概説する。
(１)組織トロンボプラスチン時間(ＰＴ)及び活性化部分トロンボプラスチン時間(ＡＰＴＴ)
血液の止血反応は、血小板の血管損傷部位への粘着・凝集による一次止血反応、その後のフィブリン形成に基づく二次止血反応に分類される。凝固反応には外因系凝固反応、内因系凝固反応の２つの経路がある。ＰＴは血漿に組織トロンボプラスチン/リン脂質/Ｃａ²⁺を添加したときの凝固時間であり、ＡＰＴＴは血漿にアクチン/リン脂質/Ｃａ²⁺を添加したときの凝固時間である。ＰＴは外因系の血液凝固第ＶＩＩ因子(以下、ＦＶＩＩと称することがある)の異常を、ＡＰＴＴは内因系凝固因子(ＦＸＩＩ、ＦＸＩ、ＦＩＸ、ＦＶＩＩＩ)の異常を主に検出する。
【００１２】
(２)凝固因子活性測定方法
凝固因子活性は、各凝固因子の欠乏血漿を用いて測定する。例えば、ＦＶＩＩの活性を測定する場合はＦＶＩＩ欠乏血漿にサンプルを添加し、組織トロンボプラスチン/リン脂質/Ｃａ²⁺の混合溶液によって凝固を開始させ、標準血漿を１倍としたときの活性(倍/ml)として表示する。ＦＩＸの場合も同様にＦＩＸ欠乏血漿にサンプルを添加し、アクチン/リン脂質混合溶液添加後、さらにＣａ²⁺を添加することにより凝固反応を開始させ、標準血漿を１倍としたときの活性(倍/ml)として表示する。
【００１３】
(３)抗ヒトＦＶＩＩａまたは抗ヒトＦＩＸ抗体の測定
モデル動物に産生させたＩｇＧ抗体の上昇は、固相プレート上にヒトＦＶＩＩａまたはヒトＦＩＸを固定化し、サンプルを展開後、ペルオキシダーゼをコンジュゲートした抗ＩｇＧ抗体と反応させた後、水解された発色基質の発色強度を測定することによって確認する。
【００１４】
(４)中和試験
モデル動物に産生させた抗体が、血漿中のＦＶＩＩ及びＦＩＸの中和能力を有するか否かの程度は、モデル動物標準血漿に希釈した検体を１：１に混合し、その活性が５０％中和される希釈倍率を、Bethesda単位(ＢＵ)として評価する。
【００１５】
(５)出血時間及び出血量の測定
モデル動物の尾にシンプレート(商品名)(オルガノンテクニカ社)で切創を作出し、３０秒毎にワットマン３ＭＭ(商品名)濾紙(ワットマン社 )に血液を吸着させ吸着が停止した時間を出血時間とする。二次出血は一次出血が終了後、切創部位を脱脂綿で３回拭うことにより再出血を生じさせ、これを二次出血とする。出血量は吸着した血液をアンモニア溶液で抽出しヘモグロビン量を定量し算出する
。
【００１６】
【発明の効果】
本願発明により、従来容易に再現することができなかったヒトの血液凝固因子もしくは血液凝固制御因子欠損状態モデル動物並びに該モデル動物の作出方法が提供される。これにより血友病インヒビター治療薬の開発の障壁が低減され、当該治療薬開発のより一層の進展が期待される。
以下に、実施例を挙げて本願発明を具体的に説明するが、本願発明はこれらの例に何ら限定されるものではない。
【００１７】
【実施例】
実施例１
(猿猴類動物を用いたＦＩＸ欠損モデル)
(１)実施方法
ヒト新鮮凍結血漿６０リットルを冷融解し、沈殿画分を遠心分離した上清を陰イオン交換体(ＤＥＡＥ-ＳｅｐｈａｄｅｘＡ-４０、ファルマシア社)に添加した。２０ｍＭ クエン酸/０.１Ｍ ＮａＣｌ(ｐＨ７.０)にて充分に洗浄し、２０ｍＭ クエン酸/０.５Ｍ ＮａＣｌ(ｐＨ７.０)にてＧｌａドメインを有するビタミンＫ依存性凝固因子画分を溶出した。溶出液３００リットルを５０ｍＭ Ｔｒｉｓ/１５０ｍＭ ＮａＣｌ/５.０ｍＭ ＣａＣｌ₂(ｐＨ８.０)であらかじめ平衡化した抗ＦＩＸモノクローナル抗体固定化アフィニテイゲルに展開し、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ/２.５Ｍ ＮａＣｌ/５.０ｍＭ ＣａＣｌ₂(ｐＨ８.０)の緩衝液で洗浄後、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ/３０ｍＭ ＮａＣｌ/５.０ｍＭ ＣａＣｌ₂(ｐＨ８.０)で更に洗浄し、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ/３０ｍＭ ＮａＣｌ/１０ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ(ｐＨ７.４)で溶出しＦＩＸ画分を得た。得られたＦＩＸ画分を、予め５０ｍＭ Ｔｒｉｓ/３０ｍＭ ＮａＣｌ(ｐＨ８.０)の緩衝液で充填してあるウイルス除去膜(ベンベルグマイクロポーラスメンブレン、旭化成)に展開しろ液を得た。ろ液中に純度９０％以上のヒトＦＩＸを４０ｍｇ取得した。
【００１８】
上記、ヒトＦＩＸをカニクイサル３頭(Ｎｏ.１雄-６歳、Ｎｏ.２雄-６歳、Ｎｏ.３雌-９歳)にヒトＦＩＸとフロイント完全アジュバントを１：１に混合し油中型エマルジョンとして、５ｍｇ/頭になるように初回免疫した、さらに追加免疫のために、初回免疫後２８日目にヒトＦＩＸとフロイント不完全アジュバントを同様の方法で皮下に投与した。サルの凝血学的試験として、ＰＴ、ＡＰＴＴ、ＦＶＩＸ活性、ＦＩＸ抗体価測定を行った。また、Ｎｏ.１サルには、バイパス製剤の一つであるＦＶＩＩａ製剤を４５μｇ/ｋｇ投与した。ＦＶＩＩａ製剤の投与試験では投与前、投与３０分後、投与３６０分後に出血時間及び出血量を測定した。
【００１９】
(２)結果
カニクイザルは３頭共に、ＰＴは免疫開始前に比べ変動しなかったが(図１)、ＡＰＴＴの顕著な延長(図２)と追加免疫後抗ヒトＦＩＸ抗体価の急激な上昇(図４)が認められた．ＦＩＸ活性は抗体価の上昇と共に低下し(図３、４)、Ｎｏ.１サルの免疫開始後３５日目の中和活性は１２ＢＵであった。この現象はヒトＦＩＸ抗原により誘導された抗体が自己のＦＩＸと免疫複合体を形成することによって生じたものと考えられた。３頭のうちＮｏ.１サルは追加免疫後３週間以上にわたってＦＩＸ活性が５％未満の状態を持続し(図３)、その間に一過性の血尿と上腕部に紫斑が観察され、血友病Bインヒビター様の症状を呈した．また、追加免疫後３週目のＮｏ.１サルにＦＶＩＩａを４５μｇ/ｋｇ投与した結果、出血時間の短縮、出血量の低減効果が認められた(表１)。従って、本モデルがバイパス製剤の薬効評価系として有効であることが確認された。
【００２０】
【表１】
──────────────────────────────────
項 目 投与前 投与３０分後 投与３６０分後
出血時間
一次出血時間(分,秒) ９.２２ ４.０２ ３.４２
二次出血時間(分,秒) ４.１５ ２.２９ ５.２７
出血量
一次出血量(μｌ) ９３.１ ５６.６ ３５.５
二次出血量(μｌ) ６９.５ ２４.３ ４９.０
──────────────────────────────────
試験は２回実施し、その平均値を表示した
【００２１】
実施例２
(サルを用いたＦＶＩＩ欠損モデル)
(１)実施方法
ヒト新鮮凍結血漿３０００リットルを冷融解し、沈殿画分を遠心分離した上清を陰イオン交換体(ＤＥＡＥ-ＳｅｐｈａｄｅｘＡ-４０、ファルマシア社)に添加した。２０ｍＭ クエン酸/０.１Ｍ ＮａＣｌ(ｐＨ７.０)にて充分に洗浄し、２０ｍＭ クエン酸/０.５Ｍ ＮａＣｌ(ｐＨ７.０)にてＧｌａドメインを有するビタミンＫ依存性蛋白質画分を溶出した。溶出液３００リットルを５０ｍＭ Ｔｒｉｓ/１５０ｍＭ ＮａＣｌ/５.０ｍＭ ＣａＣｌ₂(ｐＨ８.０)であらかじめ平衡化した抗ＦＶＩＩモノクローナル抗体固定化アフィニテイゲルに展開し、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ/２.５Ｍ ＮａＣｌ/５.０ｍＭ ＣａＣｌ₂(ｐＨ８.０)の緩衝液で洗浄後、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ/３０ｍＭ ＮａＣｌ/５.０ｍＭ ＣａＣｌ₂(ｐＨ８.０)で更に洗浄し、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ/３０ｍＭ ＮａＣｌ/１０ｍＭ ＥＤＴＡ・２Ｎａ(ｐＨ７.４)で溶出しＦＶＩＩ画分を得た。得られたＦＶＩＩ画分を、予め５０ｍＭ Ｔｒｉｓ/３０ｍＭ ＮａＣｌ(ｐＨ８.０)の緩衝液で充填してあるウイルス除去膜(ベンベルグマイクロポーラスメンブレン、旭化成)に展開しろ液を得た。得られたろ液のＦＶＩＩ純度は８５％であった。上記、０.２ｍｇ/ｍｌのＦＶＩＩ溶液５０ｍｌを予め５０ｍＭ Ｔｒｉｓ/３０ｍＭ ＮａＣｌ(ｐＨ８.０)で平衡化したφ５.０ｍｍ、高さ５.０ｃｍのＤＥＡＥ-セファロースファーストフロウ(ファルマシア社)カラムに展開し活性化し、純度９５％のＦＶＩＩａを８００ｍｇ取得した。
【００２２】
上記ヒトＦＶＩＩａを４歳齢のカニクイサル３頭(Ｎｏ.１、Ｎｏ.２は雄、Ｎｏ.３は雌)に２８日間連日３.３ｍｇ/ｋｇ静脈内投与した。投与後、凝血学的試験として、ＰＴ、ＡＰＴＴ、ＦＶＩＩ活性、ＦＶＩＩａ抗体価測定を行った。また、投与２８日目のＮｏ.３サル血漿を用いＦＶＩＩ中和能測定を行った。
【００２３】
(2)結果及び考察
ヒトＦＶＩＩａをサル３頭に２８日間毎日連続投与し、投与前及び２８日後の凝血学的検査を行った結果、３頭のサルは共にＡＰＴＴの変化は観られなかったが、ＰＴの顕著な延長が認められた(表２(ＰＴの変動)、表３(ＡＰＴＴの変動))。投与開始後１４日目にはＦＶＩＩ活性の低下が認められ、２８日後には検出感度以下まで低下した(表４(ＦＶＩＩ活性の変動))。また、抗ヒトＦＶＩＩａ/ＦＶＩＩ抗体価は投与開始後１４日目には上昇が確認され２８日目にはさらに上昇した(図５)。また、２８日目のＮｏ.３サルの血漿の中和活性を測定したところ５ＢＵであった。
【００２４】
【表２】

【００２５】
【表３】

【００２６】
【表４】

【００２７】
上記事実は、外因系凝固因子であるサルＦＶＩＩがヒトＦＶＩＩａの投与により誘導された抗体によってその機能が中和されたか、もしくは、体内で産生された抗ヒトＦＶＩＩａ抗体と免疫複合体が形成され網内系により処理され代謝されたものと推察される。また、Ｎｏ.３サルの血漿中に正常サル血漿のＦＶＩＩ活性の中和活性が認められたことから、産生された抗ヒトＦＶＩＩａ抗体はサルＦＶＩＩ活性の中和能を有していることを強く示唆している。以上の結果は、サルにヒトＦＶＩＩａの静脈内投与を頻回行うことによりＦＶＩＩ欠損モデルが作出可能であることを示している。
【００２８】
実施例３
(ＦＩＸ欠損モデルのウサギでの考察)
(１)実施方法
ヒトＦＩＸをウサギに免疫し精製した抗ヒトＦＩＸウサギ抗体(ノルデディク社より購入)が正常ウサギ血漿中のＦＩＸへの中和活性を有しているかどうかを調べた。試験は、ウサギ血漿３００μｌに抗ヒトＦＩＸウサギ抗体を終濃度が０.０〜１.０ｍｇ/ｍｌになるように添加し３７℃で２時間インキュベ−トした後、残存するＦＩＸ活性を測定することによって実施した。
【００２９】
(２)試験結果及び考察
残存ＦＩＸ活性測定の結果、上記抗体濃度０.０〜１.０ｍｇ/ｍｌ以下ではウサギＦＩＸ活性の低下は確認されなかった(図６)。本結果は、ヒトＦＩＸを免疫原としてウサギで産生された抗体はウサギＦＩＸとは反応しないか、もしくはその中和活性の程度が低いことを示唆している。
【００３０】
実施例４
(ＦＩＸ欠損モデルのヤギでの考察)
(１)実施方法
ヒトＦＩＸをヤギに免疫し精製した抗ヒトＦＩＸヤギ抗体(ＣＥＤＡＲＬＡＮＥ社より購入)が正常ヤギ血漿中のＦＩＸへの中和活性を有しているかどうかを調べた。試験は、正常ヤギ血漿３００μｌに抗ヒトＦＩＸヤギ抗体を終濃度が０.０〜１.０ｍｇ/ｍｌになるように添加し３７℃で２時間インキュベ−トしたのち、残存するＦＩＸ活性を測定することによって実施した。
【００３１】
(２)試験結果及び考察
残存ＦＩＸ活性測定の結果、上記抗体濃度０.０〜１.０ｍｇ/ｍｌ以下ではヤギＦＩＸ活性の低下は確認されなかった(図７)。本結果は、ヒトＦＩＸを免疫原としてヤギで産生された抗体はヤギＦＩＸとは反応しないか、もしくはその程度が低いことを示唆している。
【００３２】
実施例３及び４の結果から、系統発生上サルより低い動物種ではヒト血液凝固因子を抗原として投与しても自己の凝固因子を中和する抗体が産生される可能性は極めて低いことが推定された。
【図面の簡単な説明】
【図１】ヒトＦＩＸをサルに投与したときのＰＴの変動を示す図である。
【図２】ヒトＦＩＸをサルに投与したときのＡＰＰＴの変動を示す図である。
【図３】ヒトＦＩＸをサルに投与したときのＦＩＸ力価の変動を示す図である。
【図４】ヒトＦＩＸをサルに投与したときの抗ヒトＦＩＸ抗体価の変動を示す図である。
【図５】ヒトＦＶＩＩａをサルに投与したときの抗ヒトＦＶＩＩａ/ＦＶＩＩ抗体価の変動を示す図である。
【図６】抗ヒトＦＩＸウサギ抗体によるウサギＦＩＸの中和試験における残存ＦＩＸ活性測定の結果を示す図である。
【図７】抗ヒトＦＩＸヤギ抗体によるヤギＦＩＸの中和試験における残存ＦＩＸ活性測定の結果を示す図である。

Claims (10)

1. ヒト由来血液凝固因子または血液凝固制御因子がビタミンＫ依存性因子であって、ヒト由来当該因子を猿猴類動物に投与し免疫反応を惹起させ、猿猴類動物の生体内のヒト由来当該因子と同一機能を有する血液凝固因子または血液凝固制御因子を免疫反応により中和することによって作製される、血液凝固因子または血液凝固制御因子インヒビター患者モデル動物。
2. 前記猿猴類動物が、系統発生学的に真猿類以上の大型サルである請求項１に記載の血液凝固因子または血液凝固制御因子インヒビター患者モデル動物。
3. ヒト由来血液凝固因子または血液凝固制御因子が、血液凝固第Ｘ因子、血液凝固第ＩＸ因子、血液凝固第ＶＩＩ因子、プロトロンビン、プロテインＣより選択される、請求項１または請求項２のいずれかに記載の血液凝固因子または血液凝固制御因子インヒビター患者モデル動物。
4. ヒト由来血液凝固因子または血液凝固制御因子が、血液凝固第ＩＸ因子、血液凝固第ＶＩＩ因子より選択される、請求項１から請求項３のいずれかに記載の血液凝固因子または血液凝固制御因子インヒビター患者モデル動物。
5. ヒト由来血液凝固因子または血液凝固制御因子がビタミンＫ依存性因子であって、ヒト由来当該因子を猿猴類動物に投与し免疫反応を惹起させ、猿猴類動物の生体内のヒト由来当該因子と同一機能を有する血液凝固因子または血液凝固制御因子を免疫反応により中和することによって作製される、血液凝固因子または血液凝固制御因子インヒビター患者モデル動物を作製する方法。
6. 前記猿猴類動物が、系統発生学的に真猿類以上の大型サルである請求項５に記載の血液凝固因子または血液凝固制御因子インヒビター患者モデル動物を作製する方法。
7. ヒト由来血液凝固因子または血液凝固制御因子が、血液凝固第Ｘ因子、血液凝固第ＩＸ因子、血液凝固第ＶＩＩ因子、プロトロンビン、プロテインＣより選択される、請求項５または請求項６のいずれかに記載のインヒビター患者モデル動物の作製方法。
8. ヒト由来血液凝固因子または血液凝固制御因子が、血液凝固第ＩＸ因子、血液凝固第ＶＩＩ因子より選択される、請求項５から請求項７のいずれかに記載のインヒビター患者モデル動物の作製方法。
9. ヒト由来血液凝固因子または血液凝固制御因子の投与方法が皮下投与または静脈投与である請求項５から請求項８のいずれかに記載のインヒビター患者モデル動物の作製方法。
10. ヒト由来血液凝固因子または血液凝固制御因子の投与方法が皮下投与時に免疫賦活化剤としてフロイントの完全アジュバントまたはフロイントの不完全アジュバントを用いる方法である、請求項９に記載のインヒビター患者モデル動物の作製方法。

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