JP4433496B2 - Ａｔｐクエン酸リアーゼの発現抑制用医薬組成物及びその使用 - Google Patents

Description

発明の背景
本発明はＡＴＰクエン酸リアーゼの発現を抑制するための医薬組成物、詳しくはナテグリニドを含有するＡＴＰクエン酸リアーゼの発現を抑制するための医薬組成物、更には代謝症候群、脂肪肝、ＮＡＳＨ、肝障害の予防、改善及び／又は治療用医薬組成物に関するものである。
近年、食生活の西洋化に伴い、インスリン抵抗性が高く、肥満、高血圧、高脂血症、高血糖などの症状を呈する代謝症候群あるいはシンドロームＸ、インスリン抵抗性症候群、マルチプルリスクファクター症候群などと呼ばれる患者が増加している。中でも肥満及び脂肪肝のような脂質代謝異常に関連する症状を有する患者は非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）などの重篤な肝障害に至るリスクが高く、これら肝疾患の予防、改善、治療法の開発が重要な課題となっている（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１２１：７１０（２００１））。
脂質代謝異常を改善する薬剤としてこれまでにコレステロール合成に関わる酵素であるＨＭＧＣｏＡの阻害剤であるスタチン類や、転写因子ＰＰＡＲαを活性化するフィブラート類、ＰＰＡＲγを活性化するグリタゾン類が知られている。これらの薬剤はそれぞれ高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、インスリン抵抗性を伴う高血糖を改善することが報告されているが、代謝症候群に伴う脂質代謝異常全般を改善するものではない。またＮＡＳＨに対しても上記の薬剤の一部、あるいは血糖降下剤であるメトホルミンが有効であることを示唆する報告があるが（Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，３３：１３３８（２００１））、これらの効果も満足なものではない。
ところでＡＴＰクエン酸リアーゼ（以下、「ＡＣＬ」と称する）は脂肪合成系の最上流に位置し、細胞内において脂質合成の材料となるアセチルＣｏＡを解糖系中間体であるクエン酸から生成させる酵素である。この酵素の阻害剤として微生物由来の化合物（Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．，５０：７２９（１９９７），特開ＪＰ２００１−２６１６８２）やクエン酸アナログ（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２０２：８８９（１９９１），Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３５：４８７５（１９９２），Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３８：５３７（１９９５））が報告され、そのうち（３Ｒ，５Ｓ）−ｏｍｅｇａ−ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ−３−ｃａｒｂｏｘｙ−３，５−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙａｌｋａｎｏｉｃ ａｃｉｄｓのｇａｍｍａ−ｌａｃｔｏｎｅプロドラッグ（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４１：３５８２（１９９８））では肝細胞株ＨｅｐＧ２からのコレステロール及び脂肪酸合成を抑制すること、生体内投与によりラットあるいはイヌの血中コレステロール及びトリグリセリドレベルを下げることも示され、これを含有する高脂血症治療剤及びこれを利用した高脂血症の治療方法が出願されている（ＷＯ９３／２２３０４）。しかしながら生体内投与でＡＣＬの発現レベルそのものを抑制するような化合物は知られていない。またＡＣＬは絶食後高炭水化物摂取時に生理的に発現が亢進するが、代謝症候群の動物では恒常的に発現が亢進していることが知られている（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７４：３００２８（１９９９），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７４：３５８３２（１９９９），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６：３８３３７（２００１））。しかしＡＣＬ発現亢進を抑制する化合物を見出しこれを代謝症候群、特に肥満や脂肪肝、ＮＡＳＨといった肝疾患の予防、改善、治療に使用することもこれまで報告されていない。
一方ナテグリニドは膵β細胞に作用して速やかにインスリン分泌を促す化合物であり（Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１２０：１３７（１９９７））、単独で血糖降下剤（特許公告平４−１５２２１）、糖尿病性合併症及び神経障害用薬剤（ＷＯ０１６８１３６）としての用途が報告されている。またナテグリニドと他の薬剤を組み合わせることで代謝異常、特に糖尿病に関連した以下に例示されるような諸疾患及び症状、例えば高血糖、高インスリン血症、高脂血症、インスリン抵抗性、糖代謝異常、肥満、糖尿病性網膜症、黄斑変性、白内障、糖尿病性腎症、糸球体硬化症、糖尿病性神経症、勃起不全、月経前症候群、血管再狭窄、潰瘍性大腸炎、冠動脈心疾患、高血圧、狭心症、心筋梗塞、発作、皮膚及び結合組織障害、足潰瘍、代謝性アシドーシス、関節炎、骨粗鬆症、耐糖能不全の予防、進展防止、治療に用いうることも記載されている（ＷＯ０１／２１１５９，ＷＯ０１／２６６３９）。しかしながらナテグリニドがＡＣＬ発現に及ぼす効果は報告されていない。またインスリンは逆にＡＣＬ発現を亢進するという報告もあり（Ｙｏｎｓｅｉ．Ｍｅｄ．Ｊ．，３５：２５（１９９４））、ナテグリニドが代謝症候群特異的なＡＣＬ発現を抑制すること及び代謝症候群、特に脂質代謝異常に関連した肝疾患に有用であることを類推させる報告はこれまでまったくない。
一方、インスリン分泌促進剤についての臨床結果は多数報告されているが、肝疾患、肝機能に対する影響については知られていない。速効型インスリン分泌促進剤ナテグリニドの例で見ると、例えば３０日投与で肝機能に変化はないとの報告がある（Ｄｒｕｇｓ Ｒ＆Ｄ；２（２）：１２３（１９９９））。しかし肝疾患を有する患者に投与した場合の記載ではない。薬物動態的な研究では肝硬変患者に投与し薬剤のファーマコカイネティクスに変化がなかったとの報告（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，４０：６３４（２０００），Ｄｒｕｇｓ，６０（３）：６０７（２０００））、あるいはマイルドな肝不全を有する患者において総暴露量が３０％増加したので慢性肝疾患を有する患者には注意して使用するべきであるとの記載（Ａｍ Ｊ Ｈｅａｌｔｈ−Ｓｙｓｔ Ｐｈａｒｍ，５８，２８５（２００１））が見られる。しかしこれらも肝疾患に対する薬剤の効果について記載したものではない。臨床試験において、薬剤に関係する可能性のある肝機能試験（ＧＯＴ、ＧＰＴ）の上昇例が稀に報告されている（Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ ２３；２０２（２０００），Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ ２４；７３（２００１），Ａｎｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．３５：１４２６（２００１））。しかしこれらも安全性視点からの報告で、肝疾患に対する薬剤の薬効について記載したものではない。チアゾリジンジオン（トログリタゾン）との併用での肝逸脱酵素の上昇についても報告されているが（Ａｍ Ｊ Ｈｅａｌｔｈ−Ｓｙｓｔ Ｐｈａｒｍ，５８ １２００（２００１），Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ ２５；１５２９（２００２））、この上昇はトログリタゾン治療によるものであるとされている。すなわちこれまでインスリン分泌促進剤、例えばナテグリニドが肝疾患、あるいは肝機能（ＧＯＴ、ＧＰＴのような肝逸脱酵素）を改善することを示唆する記載は一切されていない。
発明の開示
本発明は、ＡＣＬの発現抑制用医薬組成物を提供することを目的とする。
本発明は、又、代謝症候群の予防、改善及び治療用組成物を提供することを目的とする。
本発明は、又、脂肪肝の予防、改善及び治療用組成物を提供することを目的とする。
本発明は、又、ＮＡＳＨの予防、改善及び治療用組成物を提供することを目的とする。
本発明は、又、肝障害の予防、改善及び治療用組成物を提供することを目的とする。
上記のように、代謝症候群、特に脂質代謝異常を伴う肝疾患の予防、改善、治療するのに有効な、新しい作用機作の薬剤の開発が求められている。
本発明者等は上記課題解決に向けて鋭意研究を重ねた結果、グルコースに対するインスリン分泌不全で高血糖を呈するＧｏｔｏ−Ｋａｋｉｚａｋｉラット（以下、「ＧＫラット」と称する）において代謝症候群特有の肝ＡＣＬの発現亢進が遺伝子レベルで認められること、そして驚くべきことにインスリン分泌促進剤、特にナテグリニドのようなメグリチニド類といった速効型インスリン分泌促進剤を投与することで亢進しているＧＫラットの肝ＡＣＬ発現が抑制されることを見出し、本発明を完成するに到った。
さらに、糖尿病は代謝症候群の一つのフェノタイプと考えられるが、脂肪肝を有する、あるいは軽度の肝障害を有する糖尿病患者にナテグリニドを３カ月間投与することにより、これらの患者で肝障害の指標であるＧＯＴ、ＧＰＴが改善することを確認した。
すなわち、本発明は、ＡＣＬの発現を抑制する化合物を含有することを特徴とするＡＣＬの発現抑制用医薬組成物を提供する。
本発明は、又、上記ＡＣＬの発現を抑制する化合物を含有する代謝症候群の予防、改善及び治療用組成物を提供する。
本発明は、又、上記ＡＣＬの発現を抑制する化合物を含有する脂肪肝の予防、改善及び治療用組成物を提供する。
本発明は、又、上記ＡＣＬの発現を抑制する化合物を含有するＮＡＳＨの予防、改善及び治療用組成物を提供する。
本発明は、又、上記ＡＣＬの発現を抑制する化合物を含有する肝障害の予防、改善及び治療用組成物を提供する。
本発明は、又、代謝症候群、脂肪肝、ＮＡＳＨ、肝障害の予防、改善及び／又は治療用組成物を製造するための上記化合物の使用を提供する。
発明を実施するための最良の形態
本発明で用いるＡＣＬの発現を抑制する化合物としては、このような効果を有するものであれば特に制限無く使用できる。中でも下記一般式（Ｉ）で示されるメグリチニド類（ホルモンアンドメタボリックリサーチ誌、２７巻、２６３−２６６頁（１９９５年））に含まれる化合物が好ましい。

（式中、Ｒ１は、

で表される基、Ｒ２は、水素原子、メチル基、エチル基などの低級アルキル基、Ｒ３は、水素原子、カルボキシル基、１−ピペリヂル基、Ａは、ＮＨ又はＣＨ２基、ｎは０又は１を表す。）
より好ましくは下記式で示される（−）−Ｎ−（トランス−４−イソプロピルシクロヘキサンカルボニル）−Ｄ−フェニルアラニン（「ナテグリニド」と称する。）等のＤ−フェニルアラニン誘導体、ミチグリニド等のベンジルコハク酸誘導体及びレパグリニド等の安息香酸誘導体であり、更に好ましくはナテグリニドを挙げることができる。

本発明では、上記化合物を単独で、又は血糖降下剤及び高脂血症治療薬の少なくとも１種と組み合わせた形態で使用することができる。ここで、血糖降下剤としては、例えば、インスリンやリスプロ、ｇｌａｒｇｉｎｅのようなインスリン誘導体、トルブタミド、グリクラジド、グリベンクラミド、グリメピリドのようなスルホニルウレア剤、アカルボース、ボグリボース、ミグリトールのようなαグルコシダーゼ阻害剤、メトホルミン、フェンホルミンのようなビグアナイド剤、ピオグリタゾン、ロジグリタゾン、トログリタゾンのようなチアゾリジン類あるいはＧＩ−２６２５７０、ＪＴＴ−５０１、ＹＭ−４４０、ＮＮ−６２２、ＫＲＰ−２９７のような非チアゾリジン骨格のＰＰＡＲγアゴニスト、アンタゴニストを含むインスリン抵抗性改善剤、ＡＪ−９６７７のようなアドレナリンβ３受容体アゴニスト、ＣＬＸ−０９０１のようなインスリン様作動薬、ＧＬＰ−１、Ｅｘｅｎｄｉｎ−４、ＮＮ−２２１１のようなＧＬＰ−１アゴニスト、ＤＰＰ−７２８ＡのようなＤＰＰＩＶ阻害剤、Ｔ−１０９５のようなＳＧＬ Ｔ阻害剤あるいはＡＣＣ阻害剤等があげられる。
又、血中脂質を低下させるような高脂血症治療薬としては、例えば、プラバスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン、セリバスタチン、アトルバスタチン、イタバスタチンのようなＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤やシンフィブラート、クロフィブラート、クリノフィブラート、ベザフィブラート、フェノフィブラートのようなフィブラート系薬剤、コレスチミド、コレスチラミンのような陰イオン交換樹脂、ニコモール、ニセリトロールのようなニコチン酸製剤があげられる。これらを組み合わせた形態で使用することにより、本発明の効果を一層高めることができる。特に、代謝症候群、特に脂質代謝異常に関連する代謝症候群に有効である。組み合わせは、１つの医薬組成物中に両者を共に含有する形態でも、それぞれの成分を含有する２つの医薬組成物を同時に又は多少の間隔をおいて投与する形態のいずれでもよい。
医薬組成物中のＡＣＬの発現を抑制する化合物、及び血糖降下剤及び／又は高脂血症治療薬の量は任意とすることができるが、ＡＣＬの発現を抑制する化合物の含有量を０．１〜９９重量％とするのがよく、血糖降下剤及び／又は高脂血症治療薬の量を１〜９９．９重量％とするのがよい。
さらに、本発明の医薬組成物には、上記成分に加えて、薬理学的に許容し得る各種の製剤用物質（補助剤として）を含むこともできる（以下、「製剤学上許容される担体）とも称する。）。製剤用物質は製剤の剤型により適宜選択することができるが、例えば、賦形剤、希釈剤、添加剤、崩壊剤、結合剤、被覆剤、潤滑剤、滑走剤、滑沢剤、風味剤、甘味剤、可溶化剤等を挙げることができる。更に、製剤用物質を具体的に例示すると、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、ラクトース、マンニトール及びその他の糖類、タルク、牛乳蛋白、ゼラチン、澱粉、セルロース及びその誘導体、動物及び植物油、ポリエチレングリコール、及び溶剤、例えば滅菌水及び一価又は多価アルコール、例えばグリセロールを挙げることができる。
本発明の医薬組成物は、代謝症候群の予防、改善、治療等に有効である。代謝症候群のの種類には特に制限は無いが、特に肥満、脂肪肝、ＮＡＳＨ等に広く適用することができる。又、肝疾患の治療等に使用する場合にも各種の肝障害に広く使用することができる。
本発明の医薬製剤の形態は、例えば、経口投与、腹腔内投与、経皮的投与、吸入投与等各種の投与形態に調製することができる。具体的には、適当な固形又は液状の製剤形態、例えば顆粒、粉剤、被覆錠剤、錠剤、（マイクロ）カプセル、坐剤、シロップ、ジュース、懸濁液、乳濁液、滴下剤、注射用溶液、活性物質の放出を延長する製剤等を挙げることができる。
本発明の薬剤に使用するＡＣＬの発現を抑制する化合物（有効成分）の投与量については、ＡＣＬの発現を抑制する化合物の種類、合併症の種類、合併症や神経障害の症状の程度、製剤の形態、副作用の有無やその程度等に応じて適当に選択される。例えば、ナテグリニドを有効成分とする製剤の場合には、経口投与で患者１日当たり、ナテグリニドの正味重量で表して好ましくは１０ｍｇ〜１０ｇ程度、より好ましくは３０ｍｇ〜１ｇ程度、更に好ましくは９０〜２７０ｍｇ程度投与することができる。また、重篤な場合には更に増量することもできる。投与の回数、時期については、数日に１回でも、また１日１回でも可能であるが、通常は１日当たり数回、例えば２〜４回に分けて、好ましくは食前に投与される。また、静脈投与等非経口投与の場合には上記経口投与に比べて１／１０〜１／２０程度の投与量でもよい。
尚、血糖降下剤、及び高脂血症治療薬の少なくとも１種を混合又は組み合わせて使用する場合のこれ等薬剤の投与又は使用量については、当該血糖降下剤、或いは高脂血症治療薬として、或いはその効果を有する薬剤として既に開発され、又は開発途上等その他で知られる個々の薬剤の有効量として好適な使用量や投与量を採用することができる。
次に実施例に基づいて本発明を詳細に説明する。
実施例１
ナテグリニドが肝ＡＣＬの発現に及ぼす影響をＤＮＡチップを用いて解析した。
実験１では一晩絶食した正常ウイスターラットにメチルセルロースまたはメチルセルロースに懸濁したナテグリニド５０ｍｇ／ｋｇを経口投与し、投与１時間後に肝を採取後凍結粉砕し、ＲＮｅａｓｙキット（キアゲン社）を用いて全ＲＮＡを分離した。定法に従いビオチン化ｃＲＮＡプローブを作成し、ラットゲノムＵ３４アレイ（アフィメトリックス社）にハイブリダイズさせ、ラットＡＣＬ遺伝子（ＧｅｎＢａｎｋ ＩＤ：Ｊ０５２１０）にハイブリダイズしたｃＲＮＡ量をＭｉｃｒｏａｒｒａｙ Ｓｕｉｔｅ ５．０ソフトウエア（アフィメトリックス社）で解析した。
実験２では同様に一晩絶食したウイスターラット及びＧＫラットに１ｇ／ｋｇのブドウ糖、５０ｍｇ／ｋｇのナテグリニド、またはブドウ糖とナテグリニドの両者を経口投与し、投与１時間後に肝を採取し、実験１と同様にＡＣＬの発現をＤＮＡチップにて解析した。

正常ウイスターラットに比しＧＫラットでは肝ＡＣＬの発現が恒常的に亢進していることがわかる（実験２、１ｖｓ３）。
正常ラットへのグルコース負荷は食後血糖上昇と正常な門脈インスリン分泌を惹起していると考えられるが、正常ラットにおいては高グルコースと高インスリンに暴露されても投与後１時間で肝ＡＣＬ遺伝子発現が抑制されることはなかった（実験２、１ｖｓ２）。またＧＫラットにおいてもグルコース負荷で肝ＡＣＬの発現に有意な変動は認められなかった（実験２、３ｖｓ４）。また正常ウイスターラットにナテグリニドを投与しても、肝ＡＣＬｍＲＮＡレベルには有意な抑制は認められなかった（実験１）。
これに対し、ＧＫラットへのナテグリニド投与（実験２、３，４ｖｓ５）では、驚くべきことに、亢進していたＡＣＬの発現が有意に抑制され、正常レベルに回復した。またナテグリニド投与によりＧＫラット門脈内インスリンレベルの一過性上昇が認められた。
以上、ナテグリニドの投与によりＧＫラットで亢進している肝ＡＣＬの発現レベルが著しく改善されていることが確かめられた。
実施例２
２型糖尿病患者に、ナテグリニドを１２週間、通常１日９０ｍｇを１日３回毎食直前に経口投与し、０週目、１２週目に肝機能値の指標として血中ＧＯＴ、ＧＰＴ濃度を測定した。
解析１では、脂肪肝を有する２型糖尿病患者５３例に対し、ナテグリニドを１２週間経口投与した結果を解析した。結果を表−２に示す。

ナテグリニド投与前後の比較で、ＧＯＴ、ＧＰＴとも統計学的に有意な低下が認められた。
さらに脂肪肝を有していて、特にＮＡＳＨ様の肝障害（ＧＰＴ＞ＧＯＴ、ＧＯＴ，ＧＰＴ≧５１ＩＵ／Ｌ）が認められた５例を取り出してみても、ＧＯＴ値は１３８．６±５６．０が８３．６±４１．５へ、ＧＰＴ値は２４２．６±１１２．８が５７．８±５９．２へそれぞれ減少していた。
解析２では、肝障害（投与前ＧＯＴ，ＧＰＴ≧５１ＩＵ／Ｌ）を有する２型糖尿病患者１６例に対し、ナテグリニドを１２週間経口投与した結果を解析した。結果を表−３に示す。

ナテグリニド投与前後の比較で、ＧＯＴ、ＧＰＴとも統計学的に有意な低下が認められた。
以上、ナテグリニド投与により脂肪肝、ＮＡＳＨ、及び肝障害を有する患者の肝機能が改善することが示唆された。
よってナテグリニドは代謝症候群、特に脂質代謝異常による肝障害の予防、改善、治療用の薬剤として期待できる。
本発明によれば、代謝症候群、脂肪肝、ＮＡＳＨ、肝障害の予防、改善、治療等に有用な薬剤、その使用方法（それ等の治療等のための投与方法等）や、そのためのＡＣＬの発現を抑制する化合物の当該薬剤製造への使用等を提供することができる。特に、ＡＣＬの発現を抑制する化合物としては、ナテグリニドが期待される。

Claims (3)

1. ナテグリニドを有効成分とすることを特徴とするＮＡＳＨ又は他の肝障害の予防、改善及び治療用医薬組成物。
2. ＮＡＳＨを予防、改善及び治療するためのものである請求項１記載の医薬組成物。
3. さらに血糖降下剤及び高脂血症治療薬の少なくとも１種を含有する請求項１又は２記載の医薬組成物。