JP4456944B2

JP4456944B2 - Topical skin preparation

Info

Publication number: JP4456944B2
Application number: JP2004187373A
Authority: JP
Inventors: 恭子三浦; 寛光中沢
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 2004-06-25
Filing date: 2004-06-25
Publication date: 2010-04-28
Anticipated expiration: 2024-06-25
Also published as: JP2006008584A

Description

本発明は、アミノ酸、脂肪酸などからなるセリンジアミドを含有する皮膚外用剤に関し、アトピー性皮膚炎や乾癬、湿疹などの皮膚疾患によって引き起こされる経皮の水分蒸散を抑制する効果に優れ、また皮膚の乾燥を抑制し、荒れ肌改善効果にも優れた皮膚外用剤に関する。 The present invention relates to a topical skin preparation containing serine diamide composed of amino acids, fatty acids, etc., and is excellent in the effect of suppressing transcutaneous moisture transpiration caused by skin diseases such as atopic dermatitis, psoriasis and eczema. The present invention relates to an external preparation for skin which suppresses drying and has an excellent effect of improving rough skin.

皮膚の最外層にある角質層は、全身を被覆して外界からの様々な刺激や乾燥などから生体を保護するバリアの役目を果たしている。肌が健全な状態であれば、この角質層がバリア防御層となって、紫外線や乾燥などのあらゆる外的刺激から肌を保護している。 The stratum corneum, which is the outermost layer of the skin, serves as a barrier that covers the whole body and protects the living body from various stimuli and dryness from the outside. If the skin is in a healthy state, this stratum corneum serves as a barrier defense layer, protecting the skin from all external stimuli such as ultraviolet rays and drying.

一方、アトピー性皮膚炎や乾癬、湿疹などの皮膚疾患は、バリア機能の低下、経皮水分蒸散量の増加、さらにサイトカイン産生の促進や炎症の増大などを引き起こし、アレルゲンや刺激物が容易に皮膚へと進入できる肌状態にあると考えられている（非特許文献１参照）。 On the other hand, skin diseases such as atopic dermatitis, psoriasis, and eczema cause a decrease in barrier function, an increase in transdermal water transpiration, and an increase in cytokine production and an increase in inflammation. It is considered that the skin is in a state where it can enter (see Non-Patent Document 1).

また生体のバリア機能が何らかの原因で崩れると、紫外線やアレルゲンなどの外的刺激に対してバリア機能が低下し、きめの細やかさやハリ、みずみずしさなどが失われ、乾燥やカサツキなど、いわゆる荒れ肌となる。 In addition, if the biological barrier function breaks down for some reason, the barrier function is reduced against external stimuli such as ultraviolet rays and allergens, and the fineness, firmness, freshness, etc. are lost. Become.

バリア機能には、角質層の細胞間脂質が重要な役割を果たしており、その細胞間脂質はセラミド、コレステロール、脂肪酸などの脂質で構成されているが、荒れ肌では、細胞間脂質の分子配列が乱れて分子間に緩みや隙間が生じており、この緩みや隙間から水分が蒸散してしまうことが荒れ肌の原因の１つと考えられている（非特許文献２参照）。
濱中すみ子、「保湿剤−セラミド−」、「皮膚科の臨床」、金原出版社、２００２年１０月３０日発行、第４４巻、第１１号、１２３１−１２３８頁坂貞徳、八田一郎、「高輝度Ｘ線回折を用いた角質層の構造解析」、「フレグランスジャーナル」、フレグランスジャーナル社、２００２年１月１５日発行、第３０巻、１号、３４−３９頁 The intercellular lipids in the stratum corneum play an important role in the barrier function. The intercellular lipids are composed of lipids such as ceramide, cholesterol, and fatty acids, but in rough skin, the molecular arrangement of intercellular lipids is disturbed. It is considered that one of the causes of rough skin is that looseness and gaps are generated between the molecules, and moisture is evaporated from the looseness and gaps (see Non-Patent Document 2).
Sumiko Hatanaka, “Moisturizer -Ceramide-”, “Clinical Dermatology”, published by Kanbara Publishing Company, October 30, 2002, Vol. 11, No. 11, pp. 1231-1238 Sadanori Saka and Ichiro Hatta, “Structural analysis of stratum corneum using high-intensity X-ray diffraction”, “Fragrance Journal”, Fragrance Journal, published on January 15, 2002, Vol. 30, No. 1, pp. 34-39

本発明の目的は、アトピー性皮膚炎や乾癬、湿疹などの皮膚疾患によって引き起こされる経皮の水分蒸散を抑制する効果に優れ、また皮膚の乾燥を抑制し、荒れ肌改善効果にも優れる皮膚外用剤を提供することにある。 An object of the present invention is an external preparation for skin which is excellent in the effect of suppressing transdermal moisture transpiration caused by skin diseases such as atopic dermatitis, psoriasis and eczema, and also suppresses dryness of the skin and is excellent in rough skin improvement Is to provide.

本発明者らは、上記事情に鑑み、鋭意研究を行った結果、種々の脂肪酸やアルキルアミンを用いて容易に製造されるジアミド構造を有するアミノ酸が、優れた水分蒸散抑制効果、かつ荒れ肌改善効果を示すことを確認し、本発明を完成するに至った。 In light of the above circumstances, the present inventors have conducted extensive research, and as a result, amino acids having a diamide structure that are easily produced using various fatty acids and alkylamines have excellent moisture transpiration suppression effects and rough skin improvement effects. As a result, the present invention has been completed.

すなわち本発明は、下記一般式（１）で表されるセリンジアミドを含有することを特徴とする皮膚外用剤にある。 That is, this invention exists in the skin external preparation characterized by containing serine diamide represented by following General formula (1).

（但し、式中Ｒ_１は炭素数７〜２３の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基であり、飽和、不飽和のどちらでもよく、Ｒ_２は炭素数２〜１８の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基であり、飽和、不飽和のどちらでもよい。またこれらのアルキル基はヒドロキシル化されていてもよい。） (In the formula, R ₁ is a linear or branched alkyl group having 7 to 23 carbon atoms, which may be either saturated or unsaturated, and R ₂ is a linear or branched group having 2 to 18 carbon atoms. (It is a chain alkyl group, which may be saturated or unsaturated, and these alkyl groups may be hydroxylated.)

本発明は、アトピー性皮膚炎や乾癬、湿疹などの皮膚疾患によって引き起こされる経皮の水分蒸散を抑制すると共に、紫外線やアレルゲンなどの外的刺激に対してバリア機能が低下することにより起こる荒れ肌を改善する。 The present invention suppresses transdermal moisture transpiration caused by skin diseases such as atopic dermatitis, psoriasis and eczema, as well as rough skin caused by a decrease in barrier function against external stimuli such as ultraviolet rays and allergens. Improve.

以下、本発明の実施の形態を詳述する。 Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail.

本発明に用いられるセリンジアミドは、生体内の必須アミノ酸の１つであるＬ−セリンと、脂肪酸およびアルキルアミンから、例えば、以下のような定法によって合成することができる。 Serine diamide used in the present invention can be synthesized from L-serine, which is one of the essential amino acids in the living body, fatty acid and alkylamine, for example, by the following standard method.

Ｚ−Ｌ−セリンとアルキルアミンをＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶媒中、ペプチド縮合剤を用いてアミド化した後、パラジウムを触媒として水素気流下で反応させベンジルオキシカルボニル基（Ｚ基）を除去した。続いてパラジウムの除去、濃縮操作後、適当な溶媒に再溶解し、トリエチルアミン存在下で脂肪酸クロリドと反応させるか、またはペプチド縮合剤を用いて脂肪酸と反応させるとセリンジアミドが得られる。 ZL-serine and alkylamine are amidated in a N, N-dimethylformamide (DMF) solvent using a peptide condensing agent and then reacted with palladium as a catalyst under a hydrogen stream to generate a benzyloxycarbonyl group (Z group). Was removed. Subsequently, after removing palladium and concentrating, redissolving in a suitable solvent and reacting with fatty acid chloride in the presence of triethylamine, or reacting with fatty acid using a peptide condensing agent, serine diamide is obtained.

本発明に用いられるセリンジアミドは、下記一般式（１）で表される。 Serine diamide used in the present invention is represented by the following general formula (1).

一般式（１）中、Ｒ_１は炭素数７〜２３（特に好ましくは炭素数１５〜１９）の直鎖状または分岐鎖状のアルキル基であり、飽和、不飽和のどちらでもよく、当該アルキル基はヒドロキシル化されていてもよい。 In general formula (1), R ₁ is a linear or branched alkyl group having 7 to 23 carbon atoms (particularly preferably 15 to 19 carbon atoms), which may be either saturated or unsaturated. The group may be hydroxylated.

またＲ_２は炭素数２〜１８（特に好ましくは炭素数４〜８）の直鎖状または分岐鎖状の
アルキル基であり、飽和、不飽和のどちらでもよく、当該アルキル基はヒドロキシル化されていてもよいが、Ｒ_２が、−Ｃ_６Ｈ_１３の場合、本発明の効果が特に優れる。 R ₂ is a linear or branched alkyl group having 2 to 18 carbon atoms (particularly preferably 4 to 8 carbon atoms), which may be either saturated or unsaturated, and the alkyl group is hydroxylated. However, when R ₂ is —C ₆ H ₁₃ , the effect of the present invention is particularly excellent.

また具体的には下記構造式（２）から（５）で表されるセリンジアミドを挙げることができる。 Specific examples thereof include serine diamides represented by the following structural formulas (2) to (5).

本発明におけるセリンジアミドの配合量は、皮膚外用剤の総量を基準として、０．０１〜５０．０質量％（以下、単に％で示す）が好ましく、特に０．１〜２０％が好ましい。この下限未満の配合量では、本発明の目的とする効果が十分でなく、一方、上限を超えてもその増加分に見合った効果の向上がなく、好ましくない。 The blending amount of serine diamide in the present invention is preferably 0.01 to 50.0% by mass (hereinafter simply indicated by%), particularly preferably 0.1 to 20%, based on the total amount of the external preparation for skin. If the blending amount is less than this lower limit, the intended effect of the present invention is not sufficient. On the other hand, even if the upper limit is exceeded, the effect commensurate with the increase is not preferred.

本発明の皮膚外用剤は、外用剤として医薬品に適用される他に、医薬部外品や、皮膚化粧料、入浴剤などに適用でき、剤型的には例えばローション類、乳液類、クリーム類、軟膏類、パック類などとすることができる。 The external preparation for skin of the present invention can be applied to quasi-drugs, skin cosmetics, bathing agents, etc., in addition to being applied to pharmaceuticals as external preparations. For example, lotions, emulsions, creams , Ointments, packs and the like.

以下、実施例および比較例に基づいて本発明を詳説する。尚、本発明は以下の実施例に何ら限定されるものではない。
製造例１
セリンジアミド２［上記構造式（２）］
Ｚ−Ｌ−セリン１．５ｇをＤＭＦ１５ｍＬに溶かし、ｎ−ヘキシルアミン０．９ｍＬおよびペプチド縮合剤として１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）１．３ｇと１−ヒドロキシベンゾトリアゾール１水和物（ＨＯＢｔ）１．１ｇを加え、室温にて一晩攪拌した。反応終了後、酢酸エチルで抽出し、塩酸洗浄、硫酸ナトリウム上で乾燥後、溶媒を留去し、Ｚ−Ｌ−セリンヘキシルアミドを得た。これをジオキサンとメタノールの混合溶媒４０ｍＬに溶解し、パラジウムカーボン（５％パラジウム）５００ｍｇを加えて、水素雰囲気下（常圧）、常温で５時間攪拌した。不溶物を濾過した後、ろ液を減圧下で濃縮した。さらに濃縮物をトルエン２０ｍＬに再溶解し、トリエチルアミン１．３ｍＬとステアロイルクロリド２ｍＬを加えた。反応終了後、抽出洗浄および濃縮を行い、得られた結晶をヘキサンで洗浄することにより、上記構造式（２）のセリンジアミド２を１．７ｇ得た。
セリンジアミド２の^１Ｈ−ＮＭＲ測定結果を示す。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：０．８６（ｔ，６Ｈ），１．２５（ｓ，３４Ｈ），１．４０−１．４５（ｍ，２Ｈ），１．６０−１．６５（ｍ，２Ｈ），２．２０−２．２５（ｍ，２Ｈ）３．１５−３．２５（ｍ，２Ｈ），３．４０（ｄｄ，２Ｈ），３．５５（ｔ，１Ｈ），４．１４（ｄｄ，１Ｈ），４．３０−４．３５（ｍ，１Ｈ），６．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），６．７８（ｓ，１Ｈ）．
製造例２
セリンジアミド３［上記構造式（３）］
製造例１に従い調製したＺ−Ｌ−セリンヘキシルアミド１ｇをジオキサンとメタノールの混合溶媒２０ｍＬに溶解し、パラジウムカーボン（５％パラジウム）２５０ｍｇを加え
て、水素雰囲気下（常圧）、常温で５時間攪拌した。不溶物を濾過した後、ろ液を減圧下で濃縮した。さらに濃縮物をＤＭＦ５ｍＬに再溶解し、リノール酸１．１ｍＬおよびペプチド縮合剤としてＷＳＣ６５４ｍｇとＨＯＢｔ４７５ｍｇを加えた。反応終了後、抽出洗浄および濃縮を行い、得られた結晶をエーテルとヘキサンで洗浄することにより、上記構造式（３）のセリンジアミド３を０．５４ｇ得た。
セリンジアミド３の^１Ｈ−ＮＭＲ測定結果を示す。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：０．８１（ｔ，６Ｈ），１．２５（ｓ，２０Ｈ），１．３５−１．４０（ｍ，２Ｈ），１．５５−１．６０（ｍ，２Ｈ），１．９５−２．２０（ｍ，４Ｈ），２．１５−２．２０（ｍ，２Ｈ），２．７０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ），３．１５−３．２０（ｍ，２Ｈ），３．３５（ｄｄ，１Ｈ），３．５０−３．５５（ｍ，１Ｈ），４．０８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．０Ｈｚ），４．２５−４．３０（ｍ，１Ｈ），５．２５−５．３０（ｍ，４Ｈ），６．５０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），６．７１（ｓ，１Ｈ）．
製造例３
セリンジアミド４［上記構造式（４）］
製造例１に従い調製したＺ−Ｌ−セリンヘキシルアミド１．５ｇをジオキサンとメタノールの混合溶媒３０ｍＬに溶解し、パラジウムカーボン（５％パラジウム）３５０ｍｇを加えて、水素雰囲気下（常圧）、常温で５時間攪拌した。不溶物を濾過した後、ろ液を減圧下で濃縮した。さらに濃縮物をＤＭＦ１５ｍＬに再溶解し、ミリスチン酸１．１ｇおよびペプチド縮合剤としてＷＳＣ８９２ｍｇとＨＯＢｔ７１２ｍｇを加えた。反応終了後、抽出洗浄および濃縮を行い、得られた結晶をエーテルとヘキサンで洗浄することにより、上記構造式（４）のセリンジアミド４を１．２５ｇ得た。
セリンジアミド４の^１Ｈ−ＮＭＲ測定結果を示す。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：０．８７（ｔ，６Ｈ），１．２５（ｓ，２６Ｈ），１．４０−１．４５（ｍ，２Ｈ），１．６０−１．６５（ｍ，２Ｈ），２．２５−２．３０（ｍ，２Ｈ）３．１５−３．２５（ｍ，２Ｈ），３．３５（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝３．３，９．８Ｈｚ），３．５５−３．６０（ｍ，１Ｈ），４．１６（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝３．２，１１．４Ｈｚ），４．３０−４．３５（ｍ，１Ｈ），６．５２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），６．７３（ｓ，１Ｈ）．
製造例４
セリンジアミド５［上記構造式（５）］
製造例１に従い調製したＺ−Ｌ−セリンヘキシルアミド０．５ｇをジオキサンとメタノールの混合溶媒５ｍＬに溶解し、パラジウムカーボン（５％パラジウム）１５０ｍｇを加えて、水素雰囲気下（常圧）、常温で５時間攪拌した。不溶物を濾過した後、ろ液を減圧下で濃縮した。さらに濃縮物をＤＭＦ５ｍＬに再溶解し、ドデカン酸４８５ｍｇおよびペプチド縮合剤としてＷＳＣ２９７ｍｇとＨＯＢｔ２３７ｍｇを加えた。反応終了後、抽出洗浄および濃縮を行い、得られた結晶をエーテルとヘキサンで洗浄することにより、上記構造式（５）のセリンジアミド５を０．３８ｇ得た。
セリンジアミド５の^１Ｈ−ＮＭＲ測定結果を示す。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：０．８６（ｔ，６Ｈ），１．２６（ｓ，３９Ｈ），１．４０−１．４５（ｍ，２Ｈ），１．５５−１．６０（ｍ，２Ｈ），２．２０−２．３０（ｍ，２Ｈ）３．２０−３．２５（ｍ，２Ｈ），３．５０（ｄｄ，１Ｈ），４．１５（ｄｄ，１Ｈ），４．３０−４．３５（ｍ，１Ｈ），６．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），６．７４（ｓ，１Ｈ）．
実施例１〜４および比較例１
本発明を人工膜に適用したときの水分蒸散量を次の試験方法により調べた。
１．試料と実験方法
脂質溶液（セラミド１．１ｍｇ、コレステロール０．２ｍｇ、パルミチン酸０．４ｍｇ、コレステロール硫酸０．３ｍｇを適当量のクロロホルムとメタノールの混合溶媒に溶解させた溶液）と、この脂質溶液に製造例１の化合物０．２ｍｇ、または製造例２の化合物０．０２ｍｇ、または製造例３あるいは４の化合物をそれぞれ０．４ｍｇを添加し、各セリンジアミドを含む溶液を調製した。次に、脂質溶液および製造例１〜４の化合物を含む脂質溶液を、それぞれ６５℃窒素気流下で乾燥、次いでロータリーポンプ真空下で一晩乾燥後、蒸留水を添加し、脂質懸濁液とした。この脂質懸濁液は、加温処理を施した後、ホットプレート上でメンブレンフィルターＧＳ（ミリポア社製ＧＳＷＰ０２５００）に人工膜を形成させるために数回に分けて塗布した。この時、全てのフィルターに２ｍｇの脂質が含まれるように調製した。最終塗布後、３０分以上放置し乾燥させた。 Hereinafter, the present invention will be described in detail based on examples and comparative examples. The present invention is not limited to the following examples.
Production Example 1
Serine diamide 2 [Structural Formula (2) above]
Z-L-serine (1.5 g) was dissolved in DMF (15 mL), n-hexylamine (0.9 mL) and 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (WSC) (1.3 g) as a peptide condensing agent and 1- Hydroxybenzotriazole monohydrate (HOBt) (1.1 g) was added, and the mixture was stirred overnight at room temperature. After completion of the reaction, the mixture was extracted with ethyl acetate, washed with hydrochloric acid and dried over sodium sulfate, and then the solvent was distilled off to obtain ZL-serine hexylamide. This was dissolved in 40 mL of a mixed solvent of dioxane and methanol, 500 mg of palladium carbon (5% palladium) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 5 hours in a hydrogen atmosphere (normal pressure). The insoluble material was filtered off, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. Further, the concentrate was redissolved in 20 mL of toluene, and 1.3 mL of triethylamine and 2 mL of stearoyl chloride were added. After completion of the reaction, extraction washing and concentration were performed, and the obtained crystals were washed with hexane to obtain 1.7 g of serine diamide 2 of the above structural formula (2).
The ¹ H-NMR measurement result of serine diamide 2 is shown.
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) δ: 0.86 (t, 6H), 1.25 (s, 34H), 1.40-1.45 (m, 2H), 1.60-1.65 (m , 2H), 2.20-2.25 (m, 2H) 3.15-3.25 (m, 2H), 3.40 (dd, 2H), 3.55 (t, 1H), 4.14 (Dd, 1H), 4.30-4.35 (m, 1H), 6.56 (d, 1H, J = 7.0 Hz), 6.78 (s, 1H).
Production Example 2
Serine diamide 3 [Structural Formula (3) above]
1 g of Z-L-serine hexylamide prepared according to Production Example 1 was dissolved in 20 mL of a mixed solvent of dioxane and methanol, 250 mg of palladium carbon (5% palladium) was added, and hydrogen atmosphere (normal pressure) was performed at room temperature for 5 hours. Stir. The insoluble material was filtered off, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. Further, the concentrate was redissolved in 5 mL of DMF, and 1.1 mL of linoleic acid and 654 mg of WSC and 475 mg of HOBt were added as peptide condensing agents. After completion of the reaction, extraction washing and concentration were performed, and the obtained crystals were washed with ether and hexane to obtain 0.54 g of serine diamide 3 of the above structural formula (3).
The ¹ H-NMR measurement result of serine diamide 3 is shown.
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) δ: 0.81 (t, 6H), 1.25 (s, 20H), 1.35-1.40 (m, 2H), 1.55-1.60 (m , 2H), 1.95-2.20 (m, 4H), 2.15-2.20 (m, 2H), 2.70 (t, 2H, J = 5.8 Hz), 3.15-3. .20 (m, 2H), 3.35 (dd, 1H), 3.50-3.55 (m, 1H), 4.08 (d, 1H, J = 12.0 Hz), 4.25-4 .30 (m, 1H), 5.25-5.30 (m, 4H), 6.50 (d, 1H, J = 7.1 Hz), 6.71 (s, 1H).
Production Example 3
Serine diamide 4 [above structural formula (4)]
ZL-serine hexylamide (1.5 g) prepared according to Production Example 1 is dissolved in 30 mL of a mixed solvent of dioxane and methanol, and 350 mg of palladium carbon (5% palladium) is added to the solution at room temperature under a hydrogen atmosphere (normal pressure). Stir for 5 hours. The insoluble material was filtered off, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. Further, the concentrate was redissolved in 15 mL of DMF, and 1.1 g of myristic acid and 892 mg of WSC and 712 mg of HOBt were added as peptide condensing agents. After completion of the reaction, extraction washing and concentration were performed, and the obtained crystals were washed with ether and hexane to obtain 1.25 g of serine diamide 4 of the above structural formula (4).
The ¹ H-NMR measurement result of serine diamide 4 is shown.
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) δ: 0.87 (t, 6H), 1.25 (s, 26H), 1.40-1.45 (m, 2H), 1.60-1.65 (m , 2H), 2.25-2.30 (m, 2H) 3.15-3.25 (m, 2H), 3.35 (dd, 2H, J = 3.3, 9.8 Hz), 3. 55-3.60 (m, 1H), 4.16 (dt, 1H, J = 3.2, 11.4 Hz), 4.30-4.35 (m, 1H), 6.52 (d, 1H) , J = 7.0 Hz), 6.73 (s, 1H).
Production Example 4
Serine diamide 5 [Structural Formula (5) above]
Dissolve 0.5 g of ZL-serine hexylamide prepared according to Production Example 1 in 5 mL of a mixed solvent of dioxane and methanol, add 150 mg of palladium carbon (5% palladium), and in a hydrogen atmosphere (normal pressure) at room temperature. Stir for 5 hours. The insoluble material was filtered off, and the filtrate was concentrated under reduced pressure. Further, the concentrate was redissolved in 5 mL of DMF, and 485 mg of dodecanoic acid and 297 mg of WSC and 237 mg of HOBt were added as peptide condensing agents. After completion of the reaction, extraction washing and concentration were performed, and the obtained crystal was washed with ether and hexane to obtain 0.38 g of serine diamide 5 of the above structural formula (5).
The ¹ H-NMR measurement result of serine diamide 5 is shown.
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) δ: 0.86 (t, 6H), 1.26 (s, 39H), 1.40-1.45 (m, 2H), 1.55-1.60 (m , 2H), 2.20-2.30 (m, 2H) 3.20-3.25 (m, 2H), 3.50 (dd, 1H), 4.15 (dd, 1H), 4.30 -4.35 (m, 1H), 6.56 (d, 1H, J = 6.9 Hz), 6.74 (s, 1H).
Examples 1 to 4 and Comparative Example 1
The amount of water transpiration when the present invention was applied to an artificial membrane was examined by the following test method.
1. Sample and Experimental Method Lipid solution (ceramide 1.1 mg, cholesterol 0.2 mg, palmitic acid 0.4 mg, cholesterol sulfate 0.3 mg dissolved in a suitable amount of chloroform and methanol mixed solvent) and this lipid solution 0.2 mg of the compound of Production Example 1 or 0.02 mg of Production Example 2 or 0.4 mg of the compound of Production Example 3 or 4 was added to prepare a solution containing each serine diamide. Next, the lipid solution and the lipid solution containing the compounds of Production Examples 1 to 4 are each dried under a nitrogen stream at 65 ° C., and then dried overnight under a rotary pump vacuum, and then distilled water is added to the lipid suspension. did. This lipid suspension was heated and then applied in several batches to form an artificial membrane on the membrane filter GS (GSWP02500 manufactured by Millipore) on a hot plate. At this time, all the filters were prepared to contain 2 mg of lipid. After the final application, it was left to dry for 30 minutes or more.

調製した人工膜の水分蒸散量は、水５ｍＬを添加したフランツセルを用いて３８℃、１８時間放置前後の水分量より算出し、脂質溶液のみの水分蒸散量と相対評価した。
２．結果
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
群相対水分蒸散量
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
実施例１セリンジアミド２含有脂質溶液０．４３±０．０１
実施例２セリンジアミド３含有脂質溶液０．４８±０．０４
実施例３セリンジアミド４含有脂質溶液０．５４±０．０５
実施例４セリンジアミド５含有脂質溶液０．６６±０．０３
比較例１脂質溶液のみ１．００±０．０８
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
値は、平均値±標準偏差、ｎ＝３
本試験の結果から実施例１〜４に係るセリンジアミドは、比較例１と比較して明らかに水分蒸散を抑制する効果を有することがわかる。 The amount of water transpiration of the prepared artificial membrane was calculated from the amount of water before and after standing for 18 hours at 38 ° C. using a Franz cell to which 5 mL of water was added, and was evaluated relative to the amount of transpiration of the lipid solution alone.
2. Result --------------------------------
Group Relative moisture transpiration --------------------------------
Example 1 Serine diamide 2-containing lipid solution 0.43 ± 0.01
Example 2 Serine Diamide 3-containing Lipid Solution 0.48 ± 0.04
Example 3 Serine Diamide 4 Containing Lipid Solution 0.54 ± 0.05
Example 4 Serine Diamide 5 Containing Lipid Solution 0.66 ± 0.03
Comparative Example 1 Lipid solution only 1.00 ± 0.08
--------------------------------
Values are mean ± standard deviation, n = 3
From the results of this test, it can be seen that the serine diamides according to Examples 1 to 4 clearly have an effect of suppressing moisture evaporation compared to Comparative Example 1.

尚、製造例１〜４のセリンジアミドを同量（０．２ｍｇ）ずつ脂質溶液に添加して、上記試験を行ったところ、セリンジアミド２は、他のセリンジアミドと比べ、２．３〜２．７倍もの水分蒸散抑制効果を示し、他のセリンジアミドと比べ優れた水分蒸散抑制効果を示すことがわかった。
実施例５および比較例２
本発明を肌荒れした皮膚に適用したときの荒れ肌改善効果を次の試験方法により調べた。
本実施例および比較例で使用した実験動物
試験開始時９週齢のヘアレスマウス１群５匹を用いた。
２．水分蒸散量の測定
２−１．測定装置及び条件
経皮水分蒸散量（以下、ＴＥＷＬと略記する）は、連続発汗測定装置ハイドログラフＡＭＵ−１００（ケイアンドエス社製）を用いて次の通りに測定した。１平方センチメートルのカプセルを皮膚に密着させ、カプセル内に窒素ガスを導入（３００ｍＬ／ｍｉｎ）し、カプセルに送り出す前とカプセルから回収した後の窒素ガス中の水蒸気量を測定した。
この値の差から、１分当たり皮膚１平方センチメートルから蒸散する水分量（ｍｇ／ｃｍ^２）を算出し、ＴＥＷＬとした。
２−２．試料と実験方法
基剤（プロピレングリコール：エタノール＝３：７）を用い、製造例１のセリンジアミド２を０．１％、０．３％、１．０％の濃度に調製した。この調製後の試料０．０５ｍＬを予めＴＥＷＬを測定したヘアレスマウスの背部皮膚（直径２．５ｃｍ）に１日１回、１週間に５回の頻度で４週間連続の塗布を行った。その後、事前塗布の最終塗布から３日目に紫外線Ｂ波長（ＵＶＢ）を０．１５Ｊ／ｃｍ^２、１回照射した。 In addition, when serine diamide of Production Examples 1 to 4 was added to the lipid solution in the same amount (0.2 mg) each time and the above test was performed, serine diamide 2 was 2.3 to 2 in comparison with other serine diamides. .7 times as much moisture transpiration inhibiting effect as that of the other serine diamides.
Example 5 and Comparative Example 2
The effect of improving rough skin when the present invention was applied to rough skin was examined by the following test method.
Experimental animals used in this example and comparative example Five groups of hairless mice of 9 weeks of age at the start of the test were used.
2. Measurement of moisture transpiration 2-1. Measuring Device and Conditions Transcutaneous moisture transpiration (hereinafter abbreviated as TEWL) was measured using a continuous sweat measuring device Hydrograph AMU-100 (manufactured by K & S Co., Ltd.) as follows. A 1 cm 2 capsule was brought into close contact with the skin, nitrogen gas was introduced into the capsule (300 mL / min), and the amount of water vapor in the nitrogen gas was measured before being sent out to the capsule and after being recovered from the capsule.
From this difference in value, the amount of water (mg / cm ² ) evaporated from 1 square centimeter of skin per minute was calculated and used as TEWL.
2-2. Sample and Experimental Method Using a base (propylene glycol: ethanol = 3: 7), Serine Diamide 2 of Production Example 1 was prepared at concentrations of 0.1%, 0.3%, and 1.0%. 0.05 mL of the sample after this preparation was applied to the back skin (diameter 2.5 cm) of hairless mice in which TEWL was measured in advance once a day for 5 times a week for 4 weeks. Thereafter, ultraviolet B wavelength (UVB) was irradiated once at 0.15 J / cm ^{2 on} the third day from the final application of the pre-application.

その紫外線照射直後から事前塗布と同様の量、頻度で照射後３日まで各試料を塗布した。そして、照射後３日目のＴＥＷＬを測定し、試験開始時のＴＥＷＬを基準にして、ＵＶＢによりＴＥＷＬがどれだけ変動したかを示す相対値であるＴＥＷＬ変動率（＝照射後３日目のＴＥＷＬ値／試験開始時のＴＥＷＬ値）を算出し、基剤群と各群の平均値を比較した。
２−３．結果
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
群ＴＥＷＬ変動率
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実施例５セリンジアミド２（０．１％）４．２５±０．９８
（０．３％）３．９０±１．００
（１．０％）１．８０±０．２７
比較例２基剤のみ９．１２±２．３２
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
値は、平均値±標準誤差
本試験の結果からセリンジアミド２が、比較例２と比較して明らかに、荒れ肌を改善する効果を有することが分かる。
実施例６、７および比較例３、４
製造例１で製造したセリンジアミド２を下記の調製方法に従いスキンローションおよびスキンクリームを調製し、これを試料として下記の荒れ肌改善試験に従って評価した。
スキンローションの組成
原料成分配合量（質量％）
Ａ成分
オリーブ油１０．０
ミリスチン酸イソプロピル１．０
モノラウリン酸
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン０．５
プロピレングリコール１．０
グリセリン２．０
Ｂ成分
メチルパラベン０．１
エタノール７．０
精製水総量を１００とする残量
Ｃ成分
セリンジアミド２１．０（実施例６）
または０（比較例３）
調製方法
Ｃ成分のセリンジアミド２をＢ成分に添加して、均一に溶解した後、Ａ成分を添加して混合撹拌分散し、次いで容器に充填する。使用時には内容物を均一に振盪分散して使用する。
スキンクリームの組成
原料成分配合量（質量％）
Ａ成分
密ロウ２．０
ステアリン酸５．０
ステアリルアルコール５．０
還元ラノリン２．０
スクワレン２０．０
モノステアレートソルビタン３．０
モノステアレート
ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン３．０
プロピレングリコール５．０
Ｂ成分
メチルパラベン０．２
精製水総量を１００とする残量
Ｃ成分
セリンジアミド２１．０（実施例７）
または０（比較例４）
調製方法
Ｃ成分のセリンジアミド２をＢ成分に添加して、Ａ，Ｂ成分を各々８０℃に加熱溶解した後、混合して撹拌しつつ、３０℃まで冷却してスキンクリームを調製した。
荒れ肌改善試験方法
下脚に荒れ肌を有する４０歳から５５歳の被験者２０名を対象として８週間連用後の効果を調べた。被験者の左側下脚試験部位に１日２回約１ｇの皮膚外用剤を試料として塗布し、連用開始前及び終了後の皮膚の乾燥状態を次の基準によって評価した。
右側下脚は試料を塗布せず、対照とした。
＜評価基準＞
− ：正常
＋− ：軽微乾燥、落屑なし
＋：乾燥、落屑軽度
＋＋：乾燥、落屑中程度
＋＋＋：乾燥、落屑顕著
連用前後の試験部位と対照部位の判定結果を比較し、皮膚の乾燥状態が２段階以上改善された場合を（例えば＋から−、＋＋＋から＋のように）「有効」、１段階改善された場合を「やや有効」、変化がなかった場合を「無効」とした。 Each sample was applied immediately after the ultraviolet irradiation until the third day after irradiation with the same amount and frequency as in the previous application. Then, TEWL on the third day after the irradiation is measured, and the TEWL fluctuation rate (= TEWL on the third day after the irradiation) which is a relative value indicating how much the TEWL has changed due to UVB with reference to the TEWL at the start of the test. Value / TEWL value at the start of the test) was calculated, and the average values of the base group and each group were compared.
2-3. Result -------------------------------
Group TEWL fluctuation rate -------------------------------
Example 5 Serine Diamide 2 (0.1%) 4.25 ± 0.98
(0.3%) 3.90 ± 1.00
(1.0%) 1.80 ± 0.27
Comparative Example 2 Base only 9.12 ± 2.32
-------------------------------
The value is an average value ± standard error From the result of this test, it can be seen that serine diamide 2 clearly has an effect of improving rough skin as compared with Comparative Example 2.
Examples 6 and 7 and Comparative Examples 3 and 4
A skin lotion and a skin cream were prepared from serine diamide 2 produced in Production Example 1 according to the following preparation method, and this was used as a sample and evaluated according to the following rough skin improvement test.
Composition of skin lotion Raw material Component Blending amount (% by mass)
A component olive oil 10.0
Isopropyl myristate 1.0
Monolauric acid polyoxyethylene (20) sorbitan 0.5
Propylene glycol 1.0
Glycerin 2.0
B component Methylparaben 0.1
Ethanol 7.0
Purified water Remaining C component with a total amount of 100 Serine diamide 2 1.0 (Example 6)
Or 0 (Comparative Example 3)
Preparation Method Serine diamide 2 of component C is added to component B and dissolved uniformly, component A is added, mixed, stirred and dispersed, and then filled into a container. In use, the contents are uniformly shaken and dispersed.
Composition of skin cream Raw material Component Blending amount (mass%)
A component dense wax 2.0
Stearic acid 5.0
Stearyl alcohol 5.0
Reduced lanolin 2.0
Squalene 20.0
Monostearate sorbitan 3.0
Monostearate Polyoxyethylene (20) Sorbitan 3.0
Propylene glycol 5.0
B component Methylparaben 0.2
Purified water Remaining C component with a total amount of 100 Serine diamide 2 1.0 (Example 7)
Or 0 (Comparative Example 4)
Preparation Method Serine diamide 2 of component C was added to component B, and each of components A and B was heated and dissolved at 80 ° C, and then cooled to 30 ° C while mixing and stirring to prepare a skin cream.
Rough skin improvement test method For 20 subjects aged 40 to 55 having rough skin on the lower leg, the effect after 8 weeks of continuous use was examined. About 1 g of an external preparation for skin was applied as a sample twice a day to the subject's left lower leg test site, and the dry state of the skin before and after continuous use was evaluated according to the following criteria.
The right lower leg was a control with no sample applied.
<Evaluation criteria>
-: Normal +-: Lightly dry, no desquamation +: Dry, desquamation light ++: Dry, desquamation moderate +++: Dry, desquamation prominent Compared the test results before and after continuous use and the control site, the dryness of the skin A case where improvement was made by two or more levels (for example, from + to-, +++ to +) was set to "effective", a case where improvement was made by one step was set to "somewhat effective", and a case where there was no change was set to "invalid".

尚、連用後に皮膚の乾燥が進んだ例はなかった。
荒れ肌改善試験の結果を下記表１に示す。
（表１）
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荒れ肌改善効果実施例６実施例７比較例３比較例４
−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−−
有効１５１６３３
やや有効２２３４
無効３２１４１３
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本試験結果から実施例６および実施例７は、比較例３および比較例４と比較して明らかに肌荒れを改善していることが分かる。また、本発明のスキンローションおよびスキンクリームによる刺激やかゆみなどの皮膚の異常は認められなかった。 In addition, there was no example in which skin drying progressed after continuous use.
The results of the rough skin improvement test are shown in Table 1 below.
(Table 1)
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Example 6 Example 7 Example 7 Comparative Example 3 Comparative Example 4
----------------------------------
Effective 15 16 3 3
Slightly effective 2 2 3 4
Invalid 3 2 14 13
----------------------------------
From this test result, it can be seen that Example 6 and Example 7 clearly improved rough skin compared to Comparative Example 3 and Comparative Example 4. Moreover, skin abnormalities such as irritation and itching due to the skin lotion and skin cream of the present invention were not observed.

外用剤として医薬品、医薬部外品や、皮膚化粧料、入浴剤などに適用でき、剤型的には例えばローション類、乳液類、クリーム類、軟膏類、パック類などとすることができ、皮膚の美容の面からも非常に有用である。 It can be applied to medicines, quasi drugs, skin cosmetics, bath preparations, etc. as external preparations, and the dosage form can be, for example, lotions, emulsions, creams, ointments, packs, etc. It is also very useful in terms of beauty.

Claims

An external preparation for skin containing serine diamide represented by the following general formula (1).

(In the formula, R ₁ is a linear or branched alkyl group having 7 to 23 carbon atoms, which may be saturated or unsaturated, and R ₂ is a linear or branched group having 2 to 18 carbon atoms. (It is a chain alkyl group and may be saturated or unsaturated .)