JP4512228B2

JP4512228B2 - Urinary tract infection prevention and treatment agent

Info

Publication number: JP4512228B2
Application number: JP2000083111A
Authority: JP
Inventors: 崇朝原; 康二野本; 健介清水; 智美鈴木; 雅章綿貫
Original assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Current assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Priority date: 2000-03-24
Filing date: 2000-03-24
Publication date: 2010-07-28
Anticipated expiration: 2020-03-24
Also published as: JP2001270830A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、尿路内における感染症、特に複雑性尿路感染症の予防および治療に用いられる尿路感染症予防治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
尿路細菌感染症とは尿路への細菌の付着と増殖によって生じる慢性的な感染症である。尿路感染症は、尿路に明らかな基礎疾患や異常が見出せない単純性尿路感染症と尿路に基礎疾患があり、これが誘因となって感染が生じる複雑性尿路感染症に分類される。尿路感染症の原因菌は、1950年頃までスタフィロコッカス（Staphylococcus）属が主要であった。しかし、近年臨床での抗生物質の蔓延により、グラム陽性菌の症例が減少し、現在ではエスケリッチア・コリ（ Escherichia coli ）（以下E.coli）による症例が大部分となっている。また、シュードモナス・エルギノーサ（Pseudomonas aeruginosa）、カンジダアルビカンス（Candida albicans ）等の日和見感染原因菌（薬剤耐性菌）による症例も増加している。
【０００３】
尿路感染症における原因菌の感染動態は、管腔性（尿路上行性）と内因性（血行性）とに分けられ、その大部分は尿路上行性である。原因菌が外尿道口に付着した場合、１．細菌自身の力で尿道壁を伝わって上がる、２．排尿最後に起こる尿道膀胱逆流に乗じる、３．尿道の摩擦作用による、等によって膀胱へ到達する。そこで、菌は膀胱上皮ムチン層や上皮細胞に付着し増殖して尿管、腎盂へと感染が増悪していく。しかし健常人であれば、原因菌が外尿道口に付着し、さらに膀胱へ上行して上皮に接着しても、１．膀胱上皮ムチン層や赤血球凝集塊、２．感染細胞、３．原因菌を貪食した多核白血球、４．尿中微量物質（ファイブロネクチン等のレセプター物質、IgA等）により被膜された状態で排尿により体外に排除される。
【０００４】
したがって、尿路感染症の生じる患者では、感染の前提因子として上記の排除機構が欠落した基礎疾患ないし病態が認められている。これには全身的要因である代謝性疾患、先天性免疫不全、免疫抑制剤の投与、放射線照射と局所的要因である尿路（腎盂尿管移行部、尿管膀胱移行部、膀胱頸部、尿道）狭窄、結石、外傷、カテーテル、腫瘍等が挙げられる。特に後者の局所的要因が、原因菌の感染を助長している場合が多いものと考えられる。
【０００５】
尿路感染症の動物モデルとしては、カテーテル操作によりマウス膀胱内に経尿道的にE. coliを注入するモデルが報告されている。しかし尿路が正常な状態の動物に E. coliを感染させる方法は、臨床で問題視されている宿主の基礎的疾患よりもむしろ原因菌の病原性が起因となって感染が成立しているモデルと考えられ、このようなモデルでは、急性尿路感染症に対しては、モデルとして利用できるものの、複雑性（慢性）尿路感染症に対する評価モデルとしては利用できない。
【０００６】
このため、複雑性（慢性）尿路感染症に対する効果を評価できる方法が望まれており、また、これにより複雑性（慢性）尿路感染症予防治療に有効な手段を見出すことが望まれている。
【０００７】
尿路感染症に対しては、一般に抗生物質の投与等が行われているが、抗生物質の使用は、目的とする病原菌に対して、良好な除菌効果を発揮するが、一方で供した抗生剤に対して耐性な菌による二次感染の生じる可能性が危惧される。
【０００８】
一方、最近では、尿路感染症に対する乳酸菌の効果も報告されている。例えば、Hilton, E., Rindos, P and Isenberg, H.D. (1995). Lactobacillus GG vaginal Suppositories and Vaginitis. J. Clin. Microbiol. 33, 1443. および Bruce, A.W and Reid, G. (1988). Intravaginal Instillation of lactobacilli for Prevention of Recurrent Urinary Tract Infection. Can. J. Microbiol. 34, 339-343.では、臨床において、乳酸菌を膣内に注入することにより尿路感染症を防御する試みが報告されている。さらに Reid, G., Chan, R.C.Y., Bruce, A.W and Costerton, J.W. (1985). Prevention of Urinary Tract Infection in Rats with an Indigenous Lactobacillus casei strain. Can. J. Microbiol. 34, 339-343.では、動物モデルにおいて、乳酸菌を膀胱内に注入することにより、尿路感染症を防御できたと報告している。
しかしながら、これは、1.尿路局所の基礎的疾患を模した複雑性尿路感染症実験モデルを用いていない、2.感染防御効果に関する詳細なデータが示されていない、3.他の乳酸菌と効果の比較がされていないものである。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
このような現状において、より安全で治療効果の高い尿路感染症、特に複雑性尿路感染症の予防治療剤を開発することが望まれていた。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、マウス膀胱内を化学処理することにより、慢性的な尿路局所の感染症を誘導することで精度の高い尿路感染マウスによる評価方法を確立し、この方法を用いて各種乳酸菌について研究を進めたところ、ラクトバチルス・カゼイ、特にラクトバチルス・カゼイYIT9029株が優れた尿路感染症、特に複雑性尿路感染症に対する予防治療効果を有し、また安全性及び回収性にも優れていることを見出し、本発明を完成した。
【００１１】
即ち、本発明の請求項１に係る発明は、ラクトバチルス・カゼイYIT9029株を有効成分として含有する尿路感染症予防治療剤に係るものである。
【００１３】
また、本発明の請求項２に係る発明は、ラクトバチルス・カゼイが、生菌として含有されている請求項１記載の尿路感染症予防治療剤に係るものである。
【００１４】
更に、本発明の請求項３に係る発明は、尿路感染症が、複雑性尿路感染症である請求項１又は請求項２記載の尿路感染症予防治療剤に係るものである。
【００１５】
【発明の実施の形態】
本発明の尿路感染症予防治療剤の有効成分として含有されるラクトバチルス・カゼイは、ラクトバチルス属の乳酸桿菌の一種である。本発明では、ラクトバチルス・カゼイに分類される各種の株が有効に利用できるが、特にラクトバチルス・カゼイYIT9029株（FERM BP-1366）を用いることで特に優れた尿路感染症予防治療効果を得ることができる。
【００１６】
本発明の尿路感染症予防治療剤は、有効成分として前記ラクトバチルス・カゼイを含有させることが必要であるが、それ以外の成分を含有することを妨げるものではなく、各種の医療助剤等を添加しても良い。
また、前記ラクトバチルス・カゼイは、生菌、死菌いずれの状態で含有させても良いが、生菌の状態で含有させることが望ましい。
【００１７】
本発明の尿路感染症予防治療剤を医薬として使用する場合の投与量は、投与法、患者の年齢、体重、容態によって異なるが、成人患者に対して１日あたり、１００ｍｇ〜１０ｇ程度を患部に直接または経口で投与とすることができる。
【００１８】
【実施例】
慢性尿路感染症モデルの作成
動物：マウス C3H/HeN（SLC）SPFの雌 8週齢を一群につき 6匹用いた。飼育は MF 飼料と水の自由摂取で行った。
感染菌液の調製：名古屋大学泌尿器科より分与された尿路感染症の患者の尿分離株であるE．coli YU株を感染菌として用いた。この菌株が膀胱上皮細胞への接着、あるいは尿路感染への関与が報告されている Type I-fimbriae、および P-fimbriaeを有していることをあらかじめ確認した。E. coli をトリプトース液体培地（Difco）にて 37℃、14時間振盪培養した。培養菌体を滅菌生理食塩水で 4℃、3,500 rpm、5分間、3回遠心洗浄後、5.0×107（Colony Formation Units/ml、以下 CFU/ml）に調製した（以下 E. coli菌液）。
【００１９】
尿路感染症モデルの作製：ネンブタール麻酔下のマウスの膀胱内へ経尿道的に静脈内留置用カテーテル（BECTON DICKINSON）を挿入後、0.1N-HCl（和光純薬）を 100μｌ注入した。次いで 45秒後に 0.1N-KOH（和光純薬）を 100μｌ注入した後、直ちに PBS pH 7.2を 200μｌ注入して膀胱内を洗浄した。洗浄して24時間後に、上記の E. coli菌液を膀胱内に 20μｌ注入した。
【００２０】
試験例１（乳酸桿菌前添加）
乳酸桿菌の投与菌液の調製：ラクトバチルス・カゼイ YIT9029株（以下YIT9029株）、ラクトバチルス・ファーメンタム YIT0159（以下YIT0159株）、あるいはラクトバチルス・プランタラム YIT0102（以下YIT0102株）をMRS液体培地（Difco）にて37℃、48時間炭酸ガス培養した。培養菌体を滅菌生理食塩水で 4℃、3,500 rpm、5分間、3回遠心洗浄した後、5.0×10⁹CFU/mlに調製した。さらに 5.0×10¹⁰、あるいは 5.0×10⁸（CFU/ml）の投与菌液を調製した。
【００２１】
動物モデルによる防御効果の測定：化学処理を行って 15分後に乳酸桿菌の菌液を膀胱内に 20μｌ注入した。注入して24時間後に E. coli菌液を膀胱内に 20μｌ注入し、その後 15分、1、3および 7日目に解剖を行い、膀胱および腎臓を無菌的に採取して、５mlの滅菌生理食塩水に浮遊させた。テフロンホモジナイザーにて攪拌破砕した各臓器浮遊液中の E. coliと乳酸桿菌の菌数について、それぞれ DHLおよび MRS平板寒天培地（Difco）を用いて確認した。
結果を図１、図２及び図３に示す。
【００２２】
図１の結果、膀胱において、対照群では感染後 1日目から 7日目にかけて E.coliによる慢性感染が生じた。これに対して YIT9029投与群では、対照群に比較して感染１、４、および７日目に感染菌数がそれぞれ 1/100、1/100、および 1/1000だった。また腎臓においても、対照群に比較して YIT9029株投与群では感染菌数が 1/10以下だった。このことから YIT9029株の膀胱内注入は、 E. coliの慢性尿路感染症に対して有意な感染防御効果を有することが確認された。
【００２３】
図２の結果、YIT9029株投与群では、対照群に比較して感染菌数が 1/100であり、有意な感染防御効果が認められた。一方、YIT0159株投与群にも感染菌数の減少は認められたが有意な効果ではなかった。また、YIT0102株投与群では全く感染菌数の減少は認められなかった。このことから乳酸桿菌の防御効果には菌株（菌種）間で差が認められ、特に YIT9029株で防御効果の強いことが確認された。
【００２４】
図３の結果、10⁸、および10⁹（CFU/mouse）の YIT9029株を投与した群では、感染 4日目に感染菌数が対照群の 1/1000になり、有意な感染防御効果が認められたが、10⁷ 投与群では防御効果が弱まった。一方、YIT0159投与群では、いずれの菌数を投与した場合も感染菌数の減少はわずかであり、有意な防御効果は認められなかった。 YIT9029株の防御効果は投与菌数が影響することが確認された。以上図１、図２及び図３の結果より、ラクトバチルス・カゼイ YIT9029株を投与した系には、明らかな感染防御効果が認められた。
【００２５】
試験例２
化学処理を行って 15分後に YIT9029株菌液を膀胱内に 20μｌ注入した。注入して24時間後に尿路感染症の患者の尿分離株である E. coli YU株（Type I-fimbriae/P-fimbriae；＋/＋）およびSK株（＋/−）、あるいはウサギ糞便分離株（−/−）の菌液を膀胱内に 20μｌ注入した。注入後 4日目に解剖を行い、膀胱中の E. coliと YIT9029株の菌数について、それぞれ DHLおよび LLV平板寒天培地を用いて確認した。
結果を表１に示す。
【００２６】
【表１】

【００２７】
感染 1日目に対照群では、膀胱から検出された E.coli YU株、SK株、およびウサギ糞便分離株の感染菌数は、それぞれ 10⁶（CFU/Bladder）、10⁵、および 10⁵であった。これに対して YIT9029株投与群では、いずれの感染菌に対しても感染菌数が 1/100以下であった。尿路への接着に関与している線毛の有無に関わらず、いずれの感染菌に対しても有意な感染防御効果が認められた。感染菌間で乳酸桿菌の回収菌数に差は認められなかった。ラクトバチルス・カゼイ YIT9029株を投与した系では、病原性の異なる種々の大腸菌に対し、優れた感染防御効果が認められた。
【００２８】
試験例３（乳酸桿菌後添加）
化学処理を行って 24時間後に E. coli菌液を膀胱内に 20μｌ注入した。注入 24時間後に YIT9029株菌液を 1日 1回、計 11回膀胱内に 20μｌ注入した。 E. coliを感染後 12日目に解剖を行い、膀胱、および腎臓中の E. coliと YIT9029株の菌数について、それぞれ DHLおよび LLV平板寒天培地を用いて確認した。
結果を表２に示す。
【００２９】
【表２】

【００３０】
対照群では膀胱において、7例中 6例で感染菌が検出され、検出された個体の感染菌数は 10⁶（CFU/Bladder）レベルだった。これに対して YIT9029株投与群では 8例中 2例にのみ感染菌が検出され、菌数も 10⁴レベルだった。尿路感染後にラクトバチルス・カゼイ YIT9029株を膀胱内に注入した場合、明らかな治療効果が認められた。
【００３１】
試験例４（尿中白血球数及び尿中 Myeloperoxidase (MPO)活性への影響）
化学処理を行って 15分後に YIT9029株菌液を膀胱内に 20μｌ注入した。注入して24時間後に E. coli YU株の菌液を膀胱内に 20μｌ注入した。注入後 1、4および 7日目に尿を採取し、血球計算板を用いて尿中の白血球数を測定した。また、採取した尿 100μｌと抽出緩衝液（Hexadecyltrimethylammonium bromide, 10 g/l; KH₂PO₄, 6.82 g/l; pH 6.0）の 100 mlを混和後、氷中で10分間超音波処理した。次いで凍結融解を２回行った後、4℃、15,000 rpm、10分間遠心分離した上清の 50μｌと反応液（O-dianisidine dihydrochloride, 167 mg/l; KH₂PO₄, 6.82 g/l; Hydrogen peroxide, 40μｌ/l; pH 6.0）の 150μｌを混和後、25℃、5分間反応させた。その後、50μｌの 1N HClを添加して反応を終了させた後、405 nmの吸光度を測定した。尿試料中のMPO活性は、既知の酵素活性を示すMPO溶液の吸光度変化から導いた。
結果を図４に示す。
【００３２】
化学処理のみでは尿中の白血球数の増加は認められなかった。 E. coli感染後１日目に、対照群では白血球数の著しい増加が認められたのに対して、 YIT9029株投与群では白血球の増加は僅かだった。感染4〜7日目に対照群の白血球数は高く維持されたのに対して、YIT9029株投与群の白血球数は減少した。
【００３３】
化学処理のみでは尿中の MPO活性は上昇しなかった。 E. coli感染後1日目に、対照群ではMPO活性の上昇が認められたのに対して、 YIT9029株投与群では MPO活性の上昇は僅かだった。感染4〜7日目に対照群の MPO活性は高く維持されたのに対して、YIT9029株投与群のMPO活性に変化は認められなかった。
このことからラクトバチルス・カゼイ YIT9029株を膀胱内に注入した場合、E. coliの感染によって生じる尿中白血球の増加、および MPO活性の上昇が抑制されることが確認された。
【００３４】
【発明の効果】
本発明のラクトバチルス・カゼイを有効成分として含有する尿路感染症予防治療剤によれば、尿路感染症に対し、優れた予防効果及び治療効果を得ることができる。また、本発明の尿路感染症予防治療剤の有効成分であるラクトバチルス・カゼイは、乳酸菌飲料等に用いられている菌株であるので安全性に全く問題のないものである。
更に、本発明のラクトバチルス・カゼイ、特にラクトバチルス・カゼイYIT9029株は、抗生剤との併用により、薬剤耐性菌による尿路感染症に対しても優れた治療効果が期待できるものである。
【図面の簡単な説明】
【図１】カゼイ YIT9029株が慢性尿路感染症に対して感染防御効果を示す図
【図２】カゼイ YIT9029株と他の乳酸桿菌の感染防御効果の比較を示す図
【図３】カゼイ YIT9029株の投与菌数が感染防御効果に与える影響を示す図
【図４】カゼイ YIT9029株の投与が尿中白血球数およびMPO活性に与える影響を示す図[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a preventive / therapeutic agent for urinary tract infections used for the prevention and treatment of infections in the urinary tract, particularly complicated urinary tract infections.
[0002]
[Prior art]
Urinary bacterial infections are chronic infections caused by bacterial attachment and growth in the urinary tract. Urinary tract infections are classified into simple urinary tract infections in which no obvious underlying diseases or abnormalities are found in the urinary tract and basic urinary tract infections, and complicated urinary tract infections that cause infection. The The causative bacteria of urinary tract infections were mainly Staphylococcus until 1950. However, due to the spread of antibiotics in the clinic in recent years, cases of Gram-positive bacteria have decreased, and now cases of Escherichia coli (hereinafter referred to as E. coli) are mostly. In addition, cases due to opportunistic pathogens (drug-resistant bacteria) such as Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans are increasing.
[0003]
Infectious kinetics of causative bacteria in urinary tract infections can be divided into luminal (urinary tract) and intrinsic (hematogenous), most of which are urinary tract. If causative bacteria adhere to the mouth of the external urethra: 1. It goes up through the urethra wall by the power of bacteria itself. 2. Multiply the urethral regurgitation that occurs at the end of urination. It reaches the bladder by, for example, the frictional action of the urethra. Therefore, the bacteria adhere to and grow on the bladder epithelial mucin layer and epithelial cells, and the infection worsens to the ureter and renal pelvis. However, if a healthy person adheres to the outer urethral orifice and then ascends to the bladder and adheres to the epithelium, 1. 1. bladder epithelial mucin layer and erythrocyte aggregates; 2. infected cells; 3. multinucleated leukocytes that have phagocytosed the causative bacteria; It is removed from the body by urination in a state where it is coated with a trace substance in the urine (a receptor substance such as fibronectin, IgA, etc.).
[0004]
Therefore, in patients with urinary tract infections, basic diseases or pathologies lacking the above exclusion mechanism are recognized as preconditions for infection. This includes systemic factors such as metabolic disease, congenital immune deficiency, administration of immunosuppressive agents, irradiation and urinary tracts (local pelvic and ureteral transition, urinary bladder transition, bladder neck, (Urethra) include stenosis, stones, trauma, catheters, tumors and the like. In particular, it is considered that the latter local factor often promotes infection with causative bacteria.
[0005]
As an animal model of urinary tract infection, a model in which E. coli is injected transurethrally into a mouse bladder by catheter manipulation has been reported. However, the method of infecting animals with normal urinary tracts with E. coli has been established due to the pathogenicity of the causative organism rather than the underlying disease of the host, which is considered a problem in clinical practice. Such a model can be used as a model for acute urinary tract infections, but cannot be used as an evaluation model for complicated (chronic) urinary tract infections.
[0006]
Therefore, a method capable of evaluating the effect on complicated (chronic) urinary tract infection is desired, and it is desired to find an effective means for preventing and treating complicated (chronic) urinary tract infection. Yes.
[0007]
Antibiotics are generally administered for urinary tract infections, but the use of antibiotics shows good sterilization effects against the target pathogens, but they were provided on the other hand There is concern about the possibility of secondary infection caused by bacteria resistant to antibiotics.
[0008]
On the other hand, recently, the effect of lactic acid bacteria on urinary tract infections has also been reported. For example, Hilton, E., Rindos, P and Isenberg, HD (1995). Lactobacillus GG vaginal Suppositories and Vaginitis. J. Clin. Microbiol. 33, 1443. and Bruce, AW and Reid, G. (1988). Intravaginal Instillation Can. J. Microbiol. 34, 339-343., clinical attempts to protect against urinary tract infections by injecting lactic acid bacteria into the vagina have been reported in the clinical practice of Lactobacilli for Prevention of Recurrent Urinary Tract Infection. In Reid, G., Chan, RCY, Bruce, AW and Costerton, JW (1985). Prevention of Urinary Tract Infection in Rats with an Indigenous Lactobacillus casei strain. Can. J. Microbiol. 34, 339-343. In the model, it was reported that urinary tract infection could be protected by injecting lactic acid bacteria into the bladder.
However, this is due to: 1. not using a complex urinary tract infection experimental model that mimics a basic disease in the urinary tract; 2. no detailed data on the protective effect of infection; 3. other lactic acid bacteria The effect is not compared.
[0009]
[Problems to be solved by the invention]
Under such circumstances, it has been desired to develop preventive and therapeutic agents for urinary tract infections, particularly complicated urinary tract infections, which are safer and have a high therapeutic effect.
[0010]
[Means for Solving the Problems]
The inventors of the present invention established a highly accurate evaluation method using urinary tract-infected mice by inducing chronic urinary tract infection by chemically treating the inside of the mouse bladder. As a result of research on lactic acid bacteria, Lactobacillus casei, especially Lactobacillus casei strain YIT9029, has excellent preventive and therapeutic effects on urinary tract infections, especially complicated urinary tract infections, and is also safe and recoverable. The present invention has been completed.
[0011]
That is, the invention according to claim 1 of the present invention relates to a urinary tract infection preventive / remedy containing Lactobacillus casei YIT9029 as an active ingredient.
[0013]
The invention according to claim 2 of the present invention, Lactobacillus casei is relates to urinary tract infections prophylactic treatment agent according to claim 1, characterized in that contained as viable.
[0014]
Furthermore, the invention according to claim 3 of the present invention relates to the preventive or therapeutic agent for urinary tract infection according to

claim

1 or claim 2 , wherein the urinary tract infection is a complicated urinary tract infection.
[0015]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Lactobacillus casei contained as an active ingredient of the agent for preventing and treating urinary tract infection of the present invention is a kind of Lactobacillus belonging to the genus Lactobacillus. In the present invention, various strains classified as Lactobacillus casei can be used effectively. Particularly, by using Lactobacillus casei YIT9029 strain (FERM BP-1366), the urinary tract infection prevention and treatment effect is particularly excellent. Obtainable.
[0016]
The urinary tract infection preventive and therapeutic agent of the present invention is required to contain the aforementioned Lactobacillus casei as an active ingredient, but does not prevent the inclusion of other ingredients, such as various medical aids, etc. May be added.
The Lactobacillus casei may be contained in either a live or dead state, but is preferably contained in a live state.
[0017]
The dose when the urinary tract infection preventive or therapeutic agent of the present invention is used as a pharmaceutical agent varies depending on the administration method, patient age, body weight, and condition, but about 100 mg to 10 g per day for an adult patient is affected. Can be administered directly or orally.
[0018]
【Example】
Creation of chronic urinary tract infection model Animal: Mouse C3H / HeN (SLC) SPF female 8 weeks of age 6 mice were used per group. Rearing was done with free intake of MF feed and water.
Preparation of Infectious Bacterial Solution: E. urine isolates from patients with urinary tract infections, distributed by the urology department of Nagoya University. E. coli strain YU was used as an infectious bacterium. It was confirmed beforehand that this strain has Type I-fimbriae and P-fimbriae, which have been reported to be involved in adhesion to bladder epithelial cells or urinary tract infection. E. coli was cultured with shaking in tryptose liquid medium (Difco) at 37 ° C for 14 hours. Cultured cells were washed 3 times with sterile saline at 4 ° C, 3,500 rpm, 5 minutes, and prepared to 5.0 x 107 (Colony Formation Units / ml, hereinafter CFU / ml) (hereinafter E. coli bacterial solution) .
[0019]
Preparation of urinary tract infection model: A catheter for intravenous placement (BECTON DICKINSON) was transurethrally inserted into the bladder of a mouse under Nembutal anesthesia, and then 100 μl of 0.1 N HCl (Wako Pure Chemical Industries) was injected. After 45 seconds, 100 μl of 0.1N-KOH (Wako Pure Chemical Industries) was injected, and 200 μl of PBS pH 7.2 was immediately injected to wash the bladder. 24 hours after washing, 20 μl of the above E. coli bacterial solution was injected into the bladder.
[0020]
Test Example 1 (Addition before lactobacilli)
Preparation of lactobacillus administration solution: Lactobacillus casei YIT9029 strain (hereinafter referred to as YIT9029 strain), Lactobacillus fermentum YIT0159 (hereinafter referred to as YIT0159 strain), or Lactobacillus plantarum YIT0102 (hereinafter referred to as YIT0102 strain) in MRS liquid medium ( Difco) was cultured at 37 ° C. for 48 hours with carbon dioxide gas. The cultured cells were washed with sterile physiological saline at 4 ° C., 3,500 rpm, 5 minutes, 3 times, and then adjusted to 5.0 × 10 ⁹ CFU / ml. In addition, 5.0 × 10 ¹⁰ or 5.0 × 10 ⁸ (CFU / ml) administration bacterial solution was prepared.
[0021]
Measurement of protective effect by animal model: 15 minutes after the chemical treatment, 20 μl of lactobacillus solution was injected into the bladder. Twenty-four hours after injection, 20 μl of E. coli fluid is injected into the bladder, followed by dissection at 15 minutes, 1, 3 and 7 days, and the bladder and kidneys are aseptically removed and 5 ml of sterile physiology Suspended in saline. The numbers of E. coli and lactobacilli in each organ suspension crushed with a Teflon homogenizer were confirmed using DHL and MRS plate agar (Difco), respectively.
The results are shown in FIG. 1, FIG. 2 and FIG.
[0022]
As a result of FIG. 1, in the control group, chronic infection by E. coli occurred in the control group from day 1 to day 7 after infection. In contrast, in the YIT9029 administration group, the number of infected bacteria was 1/100, 1/100, and 1/1000, respectively, on the 1st, 4th, and 7th days of infection as compared with the control group. In the kidney, the number of infected bacteria in the YIT9029 strain administration group was 1/10 or less compared to the control group. This confirms that intravesical injection of YIT9029 strain has a significant protective effect against E. coli chronic urinary tract infections.
[0023]
As a result of FIG. 2, in the YIT9029 strain administration group, the number of infectious bacteria was 1/100 compared with the control group, and a significant infection protective effect was recognized. On the other hand, the YIT0159 strain administration group also showed a decrease in the number of infectious bacteria, but it was not a significant effect. Moreover, no decrease in the number of infectious bacteria was observed in the YIT0102 strain administration group. Thus, there was a difference in the protective effect of Lactobacillus among strains (species), and it was confirmed that the YIT9029 strain had a strong protective effect.
[0024]
As a result of FIG. 3, in the group administered with 10 ⁸ and 10 ⁹ (CFU / mouse) YIT9029 strain, the number of infectious bacteria became 1/1000 of the control group on the 4th day of infection, and a significant protective effect was observed. However, the protective effect was weakened in the 10 ⁷ administration group. On the other hand, in the YIT0159 administration group, the decrease in the number of infecting bacteria was slight when any number of bacteria was administered, and no significant protective effect was observed. It was confirmed that the number of bacteria administered affected the protective effect of YIT9029 strain. From the results shown in FIGS. 1, 2, and 3, a clear infection-protecting effect was observed in the system administered with Lactobacillus casei strain YIT9029.
[0025]
Test example 2
15 minutes after chemical treatment, 20 μl of YIT9029 strain was injected into the bladder. 24 hours after injection E. coli YU strains (Type I-fimbriae / P-fimbriae; + / +) and SK strains (+/-), or rabbit stool isolates, which are urine isolates of patients with urinary tract infection 20 μl of the bacterial solution of the strain (− / −) was injected into the bladder. On day 4 after injection, dissection was performed, and the numbers of E. coli and YIT9029 strains in the bladder were confirmed using DHL and LLV plate agar plates, respectively.
The results are shown in Table 1.
[0026]
[Table 1]

[0027]
In the control group on the first day of infection, the numbers of E.coli YU, SK, and rabbit fecal isolates detected in the bladder were 10 ⁶ (CFU / Bladder), 10 ⁵ , and 10 ⁵ , respectively. there were. In contrast, in the YIT9029 strain administration group, the number of infectious bacteria was 1/100 or less for all infectious bacteria. Regardless of the presence or absence of cilia involved in adhesion to the urinary tract, a significant protective effect was observed against any of the infectious bacteria. There was no difference in the number of lactobacilli recovered among infected bacteria. In the system administered with Lactobacillus casei YIT9029, an excellent protective effect against various E. coli strains was observed.
[0028]
Test Example 3 (added after lactobacilli)
24 hours after the chemical treatment, 20 μl of E. coli bacterial solution was injected into the bladder. Twenty-four hours after the injection, 20 μl of the YIT9029 strain solution was injected into the bladder once a day for a total of 11 times. On day 12 after infection, E. coli was dissected, and the numbers of E. coli and YIT9029 strains in the bladder and kidney were confirmed using DHL and LLV plate agar plates, respectively.
The results are shown in Table 2.
[0029]
[Table 2]

[0030]
In the control group, infectious bacteria were detected in 6 of 7 cases in the bladder, and the number of infectious bacteria detected was 10 ⁶ (CFU / Bladder) level. On the other hand, in the YIT9029 strain administration group, infectious bacteria were detected only in 2 of 8 cases, and the number of bacteria was 10 ⁴ level. When Lactobacillus casei strain YIT9029 was injected into the bladder after urinary tract infection, a clear therapeutic effect was observed.
[0031]
Test Example 4 (Effects on urinary white blood cell count and urinary Myeloperoxidase (MPO) activity)
15 minutes after chemical treatment, 20 μl of YIT9029 strain was injected into the bladder. 24 hours after the injection, 20 μl of E. coli YU strain was injected into the bladder. Urine was collected 1, 4, and 7 days after injection, and the number of white blood cells in the urine was measured using a hemocytometer. In addition, 100 μl of collected urine and 100 ml of extraction buffer (Hexadecyltrimethylammonium bromide, 10 g / l; KH ₂ PO ₄ , 6.82 g / l; pH 6.0) were mixed and then sonicated in ice for 10 minutes. Next, after freeze-thawing twice, 50 μl of the supernatant centrifuged at 4 ° C., 15,000 rpm for 10 minutes and the reaction solution (O-dianisidine dihydrochloride, 167 mg / l; KH ₂ PO ₄ , 6.82 g / l; Hydrogen After mixing 150 μl of peroxide, 40 μl / l; pH 6.0), the mixture was reacted at 25 ° C. for 5 minutes. Thereafter, 50 μl of 1N HCl was added to terminate the reaction, and the absorbance at 405 nm was measured. MPO activity in urine samples was derived from changes in absorbance of MPO solutions exhibiting known enzyme activity.
The results are shown in FIG.
[0032]
Chemical treatment alone did not increase the number of white blood cells in urine. On day 1 after E. coli infection, a significant increase in white blood cell count was observed in the control group, while a slight increase in white blood cell count was observed in the YIT9029 strain administration group. On the 4th to 7th day after infection, the white blood cell count of the control group was kept high, whereas the white blood cell count of the YIT9029 strain administration group decreased.
[0033]
Chemical treatment alone did not increase urinary MPO activity. On the first day after E. coli infection, the MPO activity was increased in the control group, whereas the MPO activity was slightly increased in the YIT9029 strain administration group. On the 4th to 7th days after the infection, the MPO activity of the control group was maintained high, while the MPO activity of the YIT9029 strain administration group was not changed.
From this, it was confirmed that when Lactobacillus casei strain YIT9029 was injected into the bladder, the increase in urinary leukocytes and the increase in MPO activity caused by E. coli infection were suppressed.
[0034]
【The invention's effect】
According to the preventive / therapeutic agent for urinary tract infection containing the Lactobacillus casei of the present invention as an active ingredient, an excellent preventive effect and therapeutic effect can be obtained for urinary tract infection. In addition, Lactobacillus casei, which is an active ingredient of the urinary tract infection preventive and therapeutic agent of the present invention, is a strain used in lactic acid bacteria beverages and the like, and thus has no safety problem.
Furthermore, the Lactobacillus casei of the present invention, particularly the Lactobacillus casei YIT9029 strain, can be expected to have an excellent therapeutic effect against urinary tract infections caused by drug-resistant bacteria when used in combination with antibiotics.
[Brief description of the drawings]
Fig. 1 Casei YIT9029 strain shows the protective effect against chronic urinary tract infections. Fig. 2 Casei YIT9029 strain compares with other lactobacilli's infection protective effect. Fig. 3 Casei YIT9029 strain. Shows the effect of the number of bacteria administered on the infection protection effect. Fig. 4 shows the effect of the administration of casei YIT9029 strain on the urinary leukocyte count and MPO activity.

Claims

A preventive / therapeutic agent for urinary tract infections containing Lactobacillus casei YIT9029 strain (FERM BP-1366) as an active ingredient.

The agent for preventing or treating urinary tract infection according to claim 1, wherein Lactobacillus casei YIT9029 strain (FERM BP-1366) is contained as a living bacterium.

The urinary tract infection preventive or therapeutic agent according to claim 1 or 2, wherein the urinary tract infection is a complicated urinary tract infection.