JP4544714B2 - 微生物検出用培地 - Google Patents
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、微生物検出用培地に関し、特にトルラ酵母エキスを有効成分として含有する微生物検出用培地に関するものである。
【０００２】
【従来技術】
病院等における微生物検査では、感染症の原因となる病原菌を検出するため、検査材料からの微生物の分離培養や増殖培養を行わなければならない。特に感染症の病像が複雑で多岐にわたり、臨床所見からの病原菌の推定が困難になりつつある現在、微生物検査による迅速かつ正確な検出結果は更に重要性を増している。
【０００３】
この微生物検査において病原菌の特定を行う場合、一般に寒天平板培地に検体を塗布し分離培養を行う。使用する培地により、目的菌が発育した集落の形状、色および集落周囲の培地の色の変化等に差が生じる。これを利用して雑多に発育した集落より目的菌をスクリーニングして生化学的性状検査等に移行する。
【０００４】
ところで、微生物を培養する培地の窒素源としては、ミルクカゼイン、ゼラチン、大豆タンパク質などのタンパク質をトリプシン、ペプシン、パパインなどの酵素で加水分解して調製されたペプトンが用いられていた。
しかしながら、窒素源としてペプトンを用いたとしても、栄養要求性の高い微生物では、生育が十分でない場合があった（特開平７−２６５０６６号公報）。
【０００５】
このため、窒素源としては、微生物の生育促進物質を豊富に含む酵母エキスが用いられている。酵母エキスとしては、ビール酵母エキスやパン酵母エキスが知られている。因みに、ビール酵母エキスは、ビール発酵後の余剰酵母をエキス化したものであり、パン酵母は、糖蜜発酵で培養したサッカロミセス属酵母を原料にエキス化したものである。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、これらの酵母エキスを用いた場合でも、確かに微生物の生育促進性能は改善されるものの、サンプルが少量の場合には陽性や陰性の判定が困難な場合があり、更に改善された培地の出現が強く望まれていた。
従って本発明は、このような従来の課題に着目してなされたものであって、従来の酵母エキスが有する生育促進性能を更に向上させると共に、従来品に比べて溶液の色が薄く、外観色が見た目にも良く、しかも安価で経済的な酵母エキスを含有する培地を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、従来の酵母エキスに代わる新たな酵母エキスを鋭意探索した結果、カンジダ属の酵母を糖蜜原料に培養しエキス化したトルラ酵母エキスが上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
本発明の上記の課題は、トルラ酵母エキスを有効成分として含有する微生物検出用培地により達成された。
以下、本発明について更に詳細に説明する。
【０００９】
本発明に使用するトルラ酵母エキスは、ガンジダ属の酵母を糖蜜原料を培養しエキス化したものである。
この酵母エキスは、従来用いていたビール酵母エキスやパン酵母エキスに比べて５’−イノシン酸、５’−グアニル酸およびオリゴヌクレオチドの含有量が高いことで知られている。
【００１０】
本発明においては、トルラ酵母エキスの含有量を培地全量に対して０．００１〜０．０１ｇ／ｍｌ、好ましくは０．００５〜０．０１ｇ／ｍｌの範囲となるように含有させる。トルラ酵母エキスの含有量が０．００１ｇ／ｍｌ未満になると、微生物の生育促進性能を向上させることができず、逆に０．０１ｇ／ｍｌを超えると、高価なものになり、経済性に劣る。
【００１１】
本発明の微生物検出用培地は、液体、半流動、固形のいずれの形態もとりうるが、検出のし易さ等の観点から、固形培地が好ましく、より好ましくは平板固形培地の形態である。
固形培地の固化剤としては、寒天、カラギーナン、アガロースなど通常使用されているものが挙げられる。本発明に使用しうる培地としては、微生物が増殖できる限り、公知の培地の中から適宜選択することができる。このような培地の具体例としては、ハートインフュージョン培地、トリプトソイ培地、マンニット食塩培地、スタピロコッカス培地が挙げられる。
【００１２】
本発明の培地組成は、実質的にトルラ酵母エキス、ペプトン、ブドウ糖、寒天および精製水を含むものである。トルラ酵母エキス、ペプトン、ブドウ糖の配合割合は、従来用いられている濃度を用いることができるが、通常精製水１０００ｍｌに対してトルラ酵母エキス１．０〜１０．０ｇ、好ましくは２．０〜６．０ｇ、ペプトン２．０〜２０．０ｇ、好ましくは５．０〜１５ｇ、ブドウ糖０．５〜３０ｇ、好ましくは１〜２０ｇである。
【００１３】
固形剤（寒天など）は、使用する培地の所望の硬度（固体、半流動）により任意に設定することができる。本発明の培地は、これらの成分を溶解した状態で通常の酸または塩基を必要に応じて加えｐＨを５．５〜９．０の範囲に調整することにより微生物の検出率を更に向上させることができる。
【００１４】
本発明の微生物検出用培地を、固形培地として用いる場合には、例えばブドウ球菌の存在の確認を目的とする検査用サンプルの適当量を、予め調製した本発明の微生物検出用培地の固形培地上にサンプリングし、適当な条件下で培養を行い、発生したブドウ球菌のコロニーの存否から、ブドウ球菌の存在を確認する。
【００１５】
本発明には、特に必要とされないが、ｐＨ指示薬を用いることにより、試験試料が少量でも反応の陽性や陰性が明瞭に判定できるようにすることができる。このようなｐＨ指示薬としては、特に制限はないが、ブロムチモールブルー、フェノールレッド、ブロムクレゾールパープル、クレゾールレッド、ブロムフェノールレッドが挙げられるが、中でもブロムチモールブルーが好ましい。
【００１６】
【発明の効果】
本発明の微生物検出用培地は、従来の酵母エキスが有する微生物の生育促進性能を更に向上させることができ、更に従来品に比べて溶液の色が薄く、外観色が見た目にも良い。従って、本発明の微生物検出用培地によれば、サンプルが少量の場合でも陽性や陰性の判定を高い精度で行うことができる。
また、本発明の微生物検出用培地は、従来用いていたビール酵母エキスやパン酵母エキスに比べて安価なトルラ酵母エキスを用いるため、経済的にも有利である。
【００１７】
【実施例】
以下、実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれによって限定されるものではない。
【００１８】
実施例１．標準寒天培地を用いた微生物の検出
表１に示した培地成分を精製水１０００ｍｌに溶解し、１２１℃で２０分間滅菌後、シャーレに２０ｍｌを注入し、ハートブイヨン培地で前培養した菌液を１０倍連続希釈してそれぞれ１０-6、１０-7とした菌株を混釈法で１ｍｌ接種し、培地が凝固しないうちに混合して均一にして凝固後、３７℃で２０時間培養し、菌数を測定した。対照として従来の酵母エキスを用いた培地で菌数を比較した。
その結果を表２〜表６に示す。
表に示すように、本発明品は、従来品に比べて、菌数が多いため、微生物の判定が容易となる。
【００１９】
【００２０】
【００２１】
【００２２】
【００２３】
【００２４】
【００２５】
実施例２．ＴＣＢＳ寒天培地を用いた微生物の検出
表７に示した培地成分を精製水１０００ｍＬに溶解し、１２１℃で２０分間滅菌後、シャーレに注入して常法により固化した培地に、ハートブイヨン培地で前培養した菌液を１０- １〜１０-6まで１０倍連続希釈した菌株をミスラ法で接種し、３７℃で２０時間培養後、菌の発育性、菌数およびコロニーの大きさを評価した。対照として従来の酵母エキスを用いた培地で菌の発育性、菌数およびコロニーの大きさを比較した。その結果を表８〜表１６に示す。
表に示すように、本発明品は、菌数およびコロニーの大きさとも、従来品より優れるため、判定が容易である。
【００２６】
【００２７】
【００２８】
【００２９】
【００３０】
【００３１】
【００３２】
【００３３】
【００３４】
【００３５】
【００３６】
実施例３．ガンジダＧＳ寒天培地を用いた微生物の検出
表１７に示した培地成分を用いた以外は、実施例２と全く同様にして菌の発育性、菌数およびコロニーの大きさを評価した。その結果を表１８〜表２５に示す。
表に示すように、本発明品は、従来品に比べて、菌数およびコロニーの大きさとも勝るため、判定が容易となる。
【００３７】
【００３８】
【００３９】
【００４０】
【００４１】
【００４２】
【００４３】
【００４４】
【００４５】
【００４６】
【００４７】
実施例４．トルラ酵母エキスを用いた場合の培地の色
表２７に示した培地成分を精製水１０００ｍＬに溶解し、１２１℃で２０分間滅菌後、培地の溶液の色を日立製作所製の分光光度計を用いて４２０ｎｍで測定した。対照として従来の酵母エキスを用いて同様に溶液の色を測定した。その結果、従来品は０．４８０であったのに対し、本発明品は０．３５３であった。
この結果に示すように、本発明品は、従来品に比べて溶液の色が薄いため、菌数や菌の発育性を判定し易いばかりでなく、外観色が見た目にも良い。
【００４８】
【００４９】
【産業上の利用分野】
本発明は、微生物検出用培地に関し、特にトルラ酵母エキスを有効成分として含有する微生物検出用培地に関するものである。
【０００２】
【従来技術】
病院等における微生物検査では、感染症の原因となる病原菌を検出するため、検査材料からの微生物の分離培養や増殖培養を行わなければならない。特に感染症の病像が複雑で多岐にわたり、臨床所見からの病原菌の推定が困難になりつつある現在、微生物検査による迅速かつ正確な検出結果は更に重要性を増している。
【０００３】
この微生物検査において病原菌の特定を行う場合、一般に寒天平板培地に検体を塗布し分離培養を行う。使用する培地により、目的菌が発育した集落の形状、色および集落周囲の培地の色の変化等に差が生じる。これを利用して雑多に発育した集落より目的菌をスクリーニングして生化学的性状検査等に移行する。
【０００４】
ところで、微生物を培養する培地の窒素源としては、ミルクカゼイン、ゼラチン、大豆タンパク質などのタンパク質をトリプシン、ペプシン、パパインなどの酵素で加水分解して調製されたペプトンが用いられていた。
しかしながら、窒素源としてペプトンを用いたとしても、栄養要求性の高い微生物では、生育が十分でない場合があった（特開平７−２６５０６６号公報）。
【０００５】
このため、窒素源としては、微生物の生育促進物質を豊富に含む酵母エキスが用いられている。酵母エキスとしては、ビール酵母エキスやパン酵母エキスが知られている。因みに、ビール酵母エキスは、ビール発酵後の余剰酵母をエキス化したものであり、パン酵母は、糖蜜発酵で培養したサッカロミセス属酵母を原料にエキス化したものである。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、これらの酵母エキスを用いた場合でも、確かに微生物の生育促進性能は改善されるものの、サンプルが少量の場合には陽性や陰性の判定が困難な場合があり、更に改善された培地の出現が強く望まれていた。
従って本発明は、このような従来の課題に着目してなされたものであって、従来の酵母エキスが有する生育促進性能を更に向上させると共に、従来品に比べて溶液の色が薄く、外観色が見た目にも良く、しかも安価で経済的な酵母エキスを含有する培地を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、従来の酵母エキスに代わる新たな酵母エキスを鋭意探索した結果、カンジダ属の酵母を糖蜜原料に培養しエキス化したトルラ酵母エキスが上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】
本発明の上記の課題は、トルラ酵母エキスを有効成分として含有する微生物検出用培地により達成された。
以下、本発明について更に詳細に説明する。
【０００９】
本発明に使用するトルラ酵母エキスは、ガンジダ属の酵母を糖蜜原料を培養しエキス化したものである。
この酵母エキスは、従来用いていたビール酵母エキスやパン酵母エキスに比べて５’−イノシン酸、５’−グアニル酸およびオリゴヌクレオチドの含有量が高いことで知られている。
【００１０】
本発明においては、トルラ酵母エキスの含有量を培地全量に対して０．００１〜０．０１ｇ／ｍｌ、好ましくは０．００５〜０．０１ｇ／ｍｌの範囲となるように含有させる。トルラ酵母エキスの含有量が０．００１ｇ／ｍｌ未満になると、微生物の生育促進性能を向上させることができず、逆に０．０１ｇ／ｍｌを超えると、高価なものになり、経済性に劣る。
【００１１】
本発明の微生物検出用培地は、液体、半流動、固形のいずれの形態もとりうるが、検出のし易さ等の観点から、固形培地が好ましく、より好ましくは平板固形培地の形態である。
固形培地の固化剤としては、寒天、カラギーナン、アガロースなど通常使用されているものが挙げられる。本発明に使用しうる培地としては、微生物が増殖できる限り、公知の培地の中から適宜選択することができる。このような培地の具体例としては、ハートインフュージョン培地、トリプトソイ培地、マンニット食塩培地、スタピロコッカス培地が挙げられる。
【００１２】
本発明の培地組成は、実質的にトルラ酵母エキス、ペプトン、ブドウ糖、寒天および精製水を含むものである。トルラ酵母エキス、ペプトン、ブドウ糖の配合割合は、従来用いられている濃度を用いることができるが、通常精製水１０００ｍｌに対してトルラ酵母エキス１．０〜１０．０ｇ、好ましくは２．０〜６．０ｇ、ペプトン２．０〜２０．０ｇ、好ましくは５．０〜１５ｇ、ブドウ糖０．５〜３０ｇ、好ましくは１〜２０ｇである。
【００１３】
固形剤（寒天など）は、使用する培地の所望の硬度（固体、半流動）により任意に設定することができる。本発明の培地は、これらの成分を溶解した状態で通常の酸または塩基を必要に応じて加えｐＨを５．５〜９．０の範囲に調整することにより微生物の検出率を更に向上させることができる。
【００１４】
本発明の微生物検出用培地を、固形培地として用いる場合には、例えばブドウ球菌の存在の確認を目的とする検査用サンプルの適当量を、予め調製した本発明の微生物検出用培地の固形培地上にサンプリングし、適当な条件下で培養を行い、発生したブドウ球菌のコロニーの存否から、ブドウ球菌の存在を確認する。
【００１５】
本発明には、特に必要とされないが、ｐＨ指示薬を用いることにより、試験試料が少量でも反応の陽性や陰性が明瞭に判定できるようにすることができる。このようなｐＨ指示薬としては、特に制限はないが、ブロムチモールブルー、フェノールレッド、ブロムクレゾールパープル、クレゾールレッド、ブロムフェノールレッドが挙げられるが、中でもブロムチモールブルーが好ましい。
【００１６】
【発明の効果】
本発明の微生物検出用培地は、従来の酵母エキスが有する微生物の生育促進性能を更に向上させることができ、更に従来品に比べて溶液の色が薄く、外観色が見た目にも良い。従って、本発明の微生物検出用培地によれば、サンプルが少量の場合でも陽性や陰性の判定を高い精度で行うことができる。
また、本発明の微生物検出用培地は、従来用いていたビール酵母エキスやパン酵母エキスに比べて安価なトルラ酵母エキスを用いるため、経済的にも有利である。
【００１７】
【実施例】
以下、実施例によって本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれによって限定されるものではない。
【００１８】
実施例１．標準寒天培地を用いた微生物の検出
表１に示した培地成分を精製水１０００ｍｌに溶解し、１２１℃で２０分間滅菌後、シャーレに２０ｍｌを注入し、ハートブイヨン培地で前培養した菌液を１０倍連続希釈してそれぞれ１０-6、１０-7とした菌株を混釈法で１ｍｌ接種し、培地が凝固しないうちに混合して均一にして凝固後、３７℃で２０時間培養し、菌数を測定した。対照として従来の酵母エキスを用いた培地で菌数を比較した。
その結果を表２〜表６に示す。
表に示すように、本発明品は、従来品に比べて、菌数が多いため、微生物の判定が容易となる。
【００１９】
実施例２．ＴＣＢＳ寒天培地を用いた微生物の検出
表７に示した培地成分を精製水１０００ｍＬに溶解し、１２１℃で２０分間滅菌後、シャーレに注入して常法により固化した培地に、ハートブイヨン培地で前培養した菌液を１０- １〜１０-6まで１０倍連続希釈した菌株をミスラ法で接種し、３７℃で２０時間培養後、菌の発育性、菌数およびコロニーの大きさを評価した。対照として従来の酵母エキスを用いた培地で菌の発育性、菌数およびコロニーの大きさを比較した。その結果を表８〜表１６に示す。
表に示すように、本発明品は、菌数およびコロニーの大きさとも、従来品より優れるため、判定が容易である。
【００２６】
実施例３．ガンジダＧＳ寒天培地を用いた微生物の検出
表１７に示した培地成分を用いた以外は、実施例２と全く同様にして菌の発育性、菌数およびコロニーの大きさを評価した。その結果を表１８〜表２５に示す。
表に示すように、本発明品は、従来品に比べて、菌数およびコロニーの大きさとも勝るため、判定が容易となる。
【００３７】
実施例４．トルラ酵母エキスを用いた場合の培地の色
表２７に示した培地成分を精製水１０００ｍＬに溶解し、１２１℃で２０分間滅菌後、培地の溶液の色を日立製作所製の分光光度計を用いて４２０ｎｍで測定した。対照として従来の酵母エキスを用いて同様に溶液の色を測定した。その結果、従来品は０．４８０であったのに対し、本発明品は０．３５３であった。
この結果に示すように、本発明品は、従来品に比べて溶液の色が薄いため、菌数や菌の発育性を判定し易いばかりでなく、外観色が見た目にも良い。
【００４８】
Claims (3)
- トルラ酵母エキスを有効成分として含有することを特徴とする微生物検出用培地。
- トルラ酵母エキスの含有量が０．００１〜０．０１ｇ／ｍｌの範囲である請求項１記載の微生物検出用培地。
- 平板固形培地の形態である請求項１または２記載の微生物検出用培地。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000239615A JP4544714B2 (ja) | 2000-08-08 | 2000-08-08 | 微生物検出用培地 |
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|---|---|
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| JP4544714B2 true JP4544714B2 (ja) | 2010-09-15 |
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Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000239615A Expired - Fee Related JP4544714B2 (ja) | 2000-08-08 | 2000-08-08 | 微生物検出用培地 |
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|---|---|---|---|---|
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| JPH11113562A (ja) * | 1997-10-09 | 1999-04-27 | Konica Corp | 微生物の検出方法、微生物検出装置及び微生物検出用プレート |
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2000
- 2000-08-08 JP JP2000239615A patent/JP4544714B2/ja not_active Expired - Fee Related
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