JP4620652B2 - 新規ポリガラテノシド化合物およびそれを含む抗鬱剤 - Google Patents

Description

本発明は、ヒメハギ（Ｐｏｌｙｇａｌａ）の水溶性抽出物から精製された新規化合物に関するものであり、また該化合物の抗鬱剤としての使用に関するものである。

不安や神経症などの精神障害は近年増加しており、種々の抗鬱剤が現在用いられている。ベンラファキシン（ノルエピネフリン再取り込み阻害剤）やブプロピオン(ノルエピネフリン／ドーパミン再取り込み阻害剤）のような近年開発された抗鬱剤は、中枢神経系内の複数の受容体と相互作用することによってその作用を発揮することが、多数の研究により明らかにされている。

遠志（Ｙｕａｎ Ｚｈｉ）(ヒメハギ科、イトメハギ（Ｐｏｌｙｇａｌａ ｔｅｎｕｉｆｏｌｉａ Ｗｉｌｌｄ）の根）は、中枢神経系に対して鎮静作用、抗精神作用、認知向上、神経保護、消炎作用などの治療効果を有するため、漢方で処方される重要な薬草である。遠志はまた、不眠症、神経衰弱症、健忘症、不安に伴う動悸、情緒不安定、見当識障害にも適用され、また認知症や物忘れに対する予防にも用いられる。遠志から抽出された種々のキサントン、サポニン、およびオリゴ糖エステルが従来より報告されている（例えば、非特許文献１〜９）。

特許文献１では、薬剤として許容される有効成分のキャリアーまたは希釈剤との混合物として治療効果量の有効成分を含む抗鬱剤組成物が開示されている。該有効性成分は、ｉ）極性溶媒が水または水とメタノールもしくはエタノールとの混合物であるヒメハギの極性溶媒抽出物、ｉｉ）有機溶媒を用いて抽出した極性溶媒抽出物から抽出される水溶液フラクション、ｉｉｉ）逆相クラマトグラフカラム中の極性溶媒抽出物または水溶液フラクションを用い、次に水および有機溶媒によりカラムを溶出することによって得られる有機溶出液、またはｉｖ）有機溶出液中の３００００ダルトン未満の分子量を有するろ液である。

特許文献２では、ノルエピネフリンの再取り込みを阻害することが有効な身体的もしくは精神的疾患、不調、状態に罹患しているヒトを治療する、またはそのような疾患に罹患することを予防するための方法および組成物が開示されている。上記身体的もしくは精神的疾患、不調、状態は、嗜癖障害（アルコール、ニコチン、他の精神活性物質によるものを含む）および禁断症候群、適応障害（憂鬱感、不安、不安と憂鬱感の併発、行動障害、行動と感情障害の併発）、加齢性の学習障害や精神障害（アルツハイマー病を含む）、拒食症、無気力、一般的な健康状態による注意力欠如（または他の認知）障害、注意力欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、双極性障害、多食症、慢性疲労症候群、慢性的なまたは急性のストレス、慢性疼痛、行為障害、気分循環性障害、鬱病（青年期の鬱病、小鬱病を含む）、気分変調性障害、線維筋痛および他の身体型障害（身体化障害、転換性障害、疼痛性障害、心気症、身体醜形障害、鑑別不能型身体表現性障害、および特定不能の身体表現性障害）、全般性不安障害（ＧＡＤ）、失禁（すなわち、緊張性失禁、ストレス性失禁、原因が混在した失禁）、吸息障害、中毒症（アルコール中毒）、躁病、偏頭痛、肥満（すなわち、肥満または過重量の患者の体重を減らすこと）、強迫性障害および関連するスペクトラム障害、反抗挑戦性障害、パニック障害、末梢神経障害、心的外傷後ストレス障害、月経前不機嫌性障害（すなわち、月経前症候群および後期黄体期不機嫌性障害）、精神異常（統合失調症、統合失調性感情障害および統合失調症様障害を含む）、季節性情動障害、睡眠障害（ナルコプレシー、夜尿症など）、対人恐怖症（社会不安障害を含む）、特異的発達障害、選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）耐性症候群（すなわち、初期に効果が現れるものの、その後はＳＳＲＩ治療の効果が持続しない患者）、およびチック障害（例えば、トゥレット症候群）からなる群から選択される。
英国特許出願公開第２３８３９５１号公報 米国特許第６，６４２，２３５号明細書 Ｆｕｊｉｔａ，Ｔ．；Ｌｉｕ，Ｄ．Ｙ．；Ｕｅｄａ，Ｓ．；Ｔａｋｅｄａ，Ｙ．，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１９９２，３１，３９９７−４０００ Ｉｋｅｙａ，Ｙ．；Ｓｕｇａｍａ，Ｋ．；Ｏｋａｄａ，Ｍ．；Ｍｉｔｓｕｈａｓｈｉ，Ｈ．，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１９９１，３０，２０６１−２０６５ Ｉｋｅｙａ，Ｙ．；Ｓｕｇａｍａ，Ｋ．；Ｏｋａｄａ，Ｍ．；Ｍｉｔｓｕｈａｓｈｉ，Ｈ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９９１，３９，２６００−２６０５ Ｍｉｙａｓｅ，Ｔ．；Ｉｗａｔａ，Ｙ．；Ｕｅｎｏ，Ａ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９９１，３９，３０８２−３０８４ Ｊｉａｎｇ，Ｙ．；Ｔｕ，Ｐ．Ｆ．，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２００２，６０，８１３−８１６ Ｓａｋｕｍａ，Ｓ．；Ｓｈｏｊｊｉ，Ｊ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９８１，３０，８１０−８２１ Ｊｉａｎｇ，Ｙ．；Ｔｕ，Ｐ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２００５，５３，１１６４−１１６６ Ｊｉａｎｇ，Ｙ．；Ｔｕ，Ｐ．Ｊ．，Ａｓｉａｎ Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．Ｒｅｓ．２００３，５，２７９−２８３ Ｊｉａｎｇ，Ｙ．；Ｚｈａｎｇ，Ｗ．；Ｔｕ，Ｐ．Ｘｕ，Ｘ．Ｊ．，Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．２００５，６８，８７５−８７９

本発明の第一の目的は、抗鬱剤の有効成分として有用な新規化合物を提供することにある。

本発明の第二の目的は、本発明の新規化合物の抗鬱剤としての使用を提供することにある。

本発明において、イトメハギ（Ｐ．ｔｅｎｕｉｆｏｌｉａ）の根の水溶性抽出物のメタノール溶出液の抑制作用を、［^１２５Ｉ］ＲＴＩ−５５（３β−（４−ヨードフェニル）−ｔｒｏｐａｎ−２β−カルボン酸メチルエステル）の膜タンパク質への結合に対して調べた。本願発明者らはバイオアッセイによりイトメハギ（Ｐ．ｔｅｎｕｉｆｏｌｉａ）の抽出物から５つの新規なオリゴ糖誘導体（化合物１〜５）を単離し、これらがノルエピネフリントランスポーター（以下、ＮＥＴとする）への［^１２５Ｉ］ＲＴＩ−５５結合を阻害することを見出した。前記化合物の中でも、化合物１および２が他の化合物に比べてより効果があることを見出した。

本発明のイトメハギから抽出された新規化合物は、抗鬱剤の有効成分として有用である。

本発明は、下記化学式（１）で表される化合物または薬剤として許容される塩を提供するものである。なお、本明細書では、下記化学式（１）で表される化合物または薬剤として許容される塩を総称して「ポリガラテノシド（ｐｏｌｙｇａｌａｔｅｎｏｓｉｄｅｓ）」と称することもある。

化学式（１）中、Ｒ、Ｒ’およびＲ”は、各々独立して水素原子またはＲ_１であり（この際、Ｒ、Ｒ’およびＲ”が全て水素原子になることはない）、Ｒ_１は、下記化学式（２）；

式中、Ｒ₂は水素原子、Ｃ１〜６のアルキル基、Ｃ１〜６のアルコキシ基またはハロゲン原子からなる群から選択されたものを表す。Ｃ１〜６のアルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ペンチル基、ネオペンチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、１，２−ジメチルプロピル基、ｎ−ヘキシル基、ｃｙｃｌｏ−ヘキシル基、１，３−ジメチルブチル基、１−ｉｓｏ−プロピルプロピル基、および１，２−ジメチルブチル基などが挙げられる。Ｃ１〜６のアルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、イソプロポキシ基、ｎ−ブトキシ基、ペントキシ基、ネオペントキシ基、ｓｅｃ−ブトキシ基、ｔｅｒｔ−ブトキシ基、１，２−ジメチルプロポキシ基、ｎ−ヘキシルオキシ基、ｃｙｃｌｏ−ヘキシルオキシ基、１，３−ジメチルブトキシ基、１−ｉｓｏ−プロピルプロポキシ基および１，２−ジメチルブトキシ基などが挙げられる。ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子およおびヨウ素原子などが挙げられる。

好ましくは、Ｒ₂は水素原子である。

また、好ましくはＲ、Ｒ’およびＲ”のうちいずれか１つがＲ_１であり、その他２つが水素原子である。すなわち、好ましくはＲがＲ_１であり、Ｒ’およびＲ”が水素原子である。また、好ましくは、Ｒ’がＲ_１であり、ＲおよびＲ”が水素原子である。また、好ましくは、Ｒ”がＲ_１であり、ＲおよびＲ’が水素原子である。

化学式（１）のポリガラテノシドには、光学活性化合物のラセミ混合物または光学的に純粋なＲおよびＳ立体異性体が含まれる。

本発明はさらに、薬剤的に許容できるキャリアーおよび希釈剤とともに上記式（１）によって表されるポリガラテノシドまたは薬剤として許容されるこれらの塩を有効成分として治療学的に有効量含む抗鬱剤組成物を提供する。

本発明の抗鬱剤組成物は、薬剤的に許容できるキャリアーと配合したまたは薬剤的に許容できる希釈剤に溶解もしくは懸濁した組成物として、経口的または非経口的に患者に投与できる。

本剤を経口投与用とする場合には、前記ポリガラテノシドを適当な添加剤、例えば、乳糖、ショ糖、マンニット、トウモロコシデンプン、合成もしくは天然ガム、結晶セルロース等の賦形剤、デンプン、セルロース誘導体、アラビアゴム、ゼラチン、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボシキメチルセルーロースカルシウム、カルボシキメチルセルーロースナトリウム、デンプン、コーンスターチ、アルギン酸ナトリウム等の崩壊剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム等の滑沢剤、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、リン酸ナトリウム等の充填剤または希釈剤等と適宜混合して、錠剤、散剤（粉末）、丸剤、および顆粒剤等の固型製剤にすることができる。また、硬質または軟質のゼラチンカプセル等を用いてカプセル剤としてもよい。これらの固型製剤には、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートスクシネート、セルロースアセテートフタレート、メタアクリレートコポリマー等の被覆用基剤を用いて腸溶性被覆を施してもよい。さらに、前記ポリガラテノシドを、精製水等の一般的に用いられる不活性希釈剤に溶解して、必要に応じて、この溶液に浸潤剤、乳化剤、分散助剤、界面活性剤、甘味料、フレーバー、芳香物質等を適宜添加することにより、シロップ剤、エリキシル剤等の液状製剤とすることもできる。

また、本発明の抗鬱剤組成物を非経口投与用とする場合には、前記ポリガラテノシドを精製水、リン酸緩衝液等の適当な緩衝液、生理的食塩水、リンガー溶液、ロック溶液等の生理的塩類溶液、エタノール、グリセリン及び慣用される界面活性剤等と適当に組み合わせた滅菌された水溶液、非水溶液、懸濁液、リポソームまたはエマルジョンとして、好ましくは注射用注入用または噴霧用滅菌水溶液として、静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、腸内、気管支内等に投与される。この際、液状製剤は、生理学的なｐＨ、好ましくは６〜８の範囲内のｐＨを有することが好ましい。さらに、本発明の抗鬱剤組成物は、ペレットによる埋め込み、または坐薬用基剤を用いた坐薬として投与されることも可能である。

上述したうち、好ましい製剤や投与形態等は、担当の医師によって選択される。

本発明の抗鬱剤組成物の投与量は、患者の年齢、体重及び症状、目的とする投与形態や方法、治療効果、および処置期間等によって異なり、正確な量は医師により適宜決定される。

本発明はさらに、ノルエピネフリンの再取り込み阻害が有効である疾病に罹患している患者を治療するための薬剤組成物を提供するものである。前記薬剤組成物は、薬剤的に許容できるキャリアーおよび希釈剤とともに、上記式によって表されるポリガラテノシドまたは薬剤として許容されるこれらの塩を治療学的に有効量含むものである。上記式（１）によって表されるポリガラテノシドまたは薬剤として許容されるこれらの塩は、ノルエピネフリン輸送を遮断することによってノルエピネフリンの再取り込み阻害剤として作用する。前記薬剤組成物におけるキャリアーおよび希釈剤は、上記抗鬱剤組成物で記載してものと同様のものが使用できる。また、投与方法（経口等）、製剤化方法や投与形態（錠剤等）、投与量は上記抗鬱剤組成物で記載したのと同様である。

本発明の組成物が適用される疾病としては、好ましくは、嗜癖障害、禁断症候群、適応障害、加齢性の学習障害や精神障害、拒食症、無気力、注意力欠如障害、注意力欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、双極性障害、または肥満が挙げられる。

イトメハギ（Ｐｏｌｙｇａｌａ ｔｅｎｕｉｆｏｌｉａ）の根からの水溶液抽出物の［^１２５Ｉ］ＲＴＩ−５５−膜結合アッセイによる分別および精製により、５つの新規なオリゴ糖誘導体、ポリガラテノシドＡ〜Ｅ（化合物１〜５）を得た。これらの新規オリゴ糖誘導体の構造は、分光学的証拠に基づいて解析した。ポリガラテノシドＡおよびＢ（化合物１および２）は、本実施例による結合アッセイにおいて、ＩＣ_５０値でそれぞれ３０．０および６．０４μＭという顕著な阻害活性を示し、ノルエピネフリン輸送阻害によるノルエピネフリン再取り込み阻害剤として作用することが明らかとなった。

[実験手順]
旋光度は、旋光度測定装置（ＪＡＳＣＯ ＤＩＰ−３７０）を使って測定した。ＵＶスペクトルは、分光光度計（Ｈｉｔａｃｈｉ ＵＶ−３２１０、日立製作所社製）を使って測定した。ＩＲスペクトルは、ＫＢｒ ｄｉｓｃ法で分光光度計（ＪＡＳＣＯ ＩＲ Ｒｅｐｏｒｔ−１００）を使って測定した。ＨＰＬＣは、Ｃｏｓｍｏｓｉｌ（登録商標）５Ｃ−１８−ＭＳ−ＩＩカラム（２０×２５０ｍｍおよび４．６×２５０ｍｍ、５μｍ）を用いて、島津製作所社ＬＣ−１０ＡＴ_ＶＰシステムにより行った。^１Ｈ、^１３Ｃ、ＨＭＱＣ、ＨＭＢＣ、およびＮＯＥＳＹ ＮＭＲは、内部標準としてテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を用いて、Ｂｒｕｋｅｒ社ＡＭＸ−４００およびＶａｒｉａｎ−４００ Ｕｎｉｔｙ ＰｌｕｓＮＭＲ分光計で行い、全ての化学シフトの単位は、１００万分の１（ｐｐｍ、δ）である。質量スペクトル（ＥＩまたはＦＡＢ）は、ＶＧ７０−２５０Ｓ分光計で行った。

[植物材料]
Ｐ．ｔｅｎｕｉｆｏｌｉａの根は、２００３年５月に台湾台北のマーケットで購入し、Ｃ．Ｓ．Ｋｕｏｈ教授（国立Ｃｈｅｎｇ Ｋｕｎｇ大学、生命科学部）によって本物であることが確認された。植物証拠標本（Ｎｏ．９２００２１）は、醫藥工業技術發展中心(台湾、台北市)の標本集に寄託している。

[抽出および単離]
Ｐ．ｔｅｎｕｉｆｏｌｉａ（１．２５ｋｇ）の風乾根を粉末状にし、還流下で２時間、Ｈ_２Ｏ（５Ｌ）で２回抽出した。Ｈ_２Ｏ抽出物を、Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ−２０カラムクロマトグラフにかけ、Ｈ_２Ｏ（４５Ｌ）、５０％ＭｅＯＨ（３０Ｌ）、およびＭｅＯＨ（２５Ｌ）で連続して溶出させた。５０％ＭｅＯＨ溶出液を減圧下濃縮し、淡黄色シロップ（４４ｇ）を得、６フラクションとるために、ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ（８０：２０、７５：２５、７０：３０、６５：３５、および５０：５０）と１００％メタノールとの混合物を用いてシリカゲルカラム（２０３〜４００メッシュ、Ｅ．Ｍｅｒｃｋ社、８００ｇ）でクロマトグラフを行った。フラクション２（１．０ｇ）を移動相としてＨ_２Ｏ／ＣＨ_３ＣＮの混合物（Ｈ_２Ｏ：ＣＨ_３ＣＮ＝７０：３０、流速：１０ｍＬ／ｍｉｎ；ＵＶ２３０ｎｍ）を用いてリサイクル式高性能液体クロマトグラフィー（ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ＨＰＬＣ）［ＯＤＳ−５（２０×２５０ｍｍ）］にかけ、３つのサブ−フラクション：２−１（１２５．３ｍｇ）、保持時間５〜１３分；２−２（１２１．３ｍｇ）、保持時間１３〜１８分、および２−３（２７．１ｍｇ）、保持時間１８〜２３分を得た。サブフラクション２−２をＨＰＬＣ［カラム：移動相Ｈ_２Ｏ−ＭｅＯＨ（８０：２０）のＯＤＳ−５（４．６×２５０ｍｍ）；流速：１．０ｍＬ／分；ＵＶ：２３０ｎｍ］によって分離し、化合物２（保持時間：１３．３分）（３．１ｍｇ）、化合物５（保持時間：１７．７分）（１．６ｍｇ）、化合物４（保持時間：１９．４分）（３．８ｍｇ）、化合物３（保持時間：２０．９分）（４．６ｍｇ）、および化合物１（保持時間：２２．２分）（３３．８ｍｇ）を得た。それぞれの化合物の構造式は以下の通りである。

［ポリガラテノシドＡ（化合物１）］
無色シロップ様、［α］_Ｄ＋１７１（ｃ０．０１，ＭｅＯＨ）；ＵＶ（ＭｅＯＨ）λ_ｍａｘ（ｌｏｇε）２２８（４．１２），２７３（３．４１），２７９（ｓｈ）（３．３７）ｎｍ；ＩＲ（ＫＢｒ）ν_ｍａｘ３４１１，１７１３，１６３４，１６０３，１５８５，１２８５，１０８０ｃｍ^−１；^１Ｈおよび^１３ＣＮＭＲ，表１および２参照；ＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ ４３１（［Ｍ＋Ｈ］^＋，３），３０７（４０），２９１（２４），２８９（１８），２６７（８），１５４（１００），１３９（１１），１３８（２８），１３７（５６），１３６（５８），１０７（１５）；ＨＲＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ ４３１．１５５７［Ｍ＋１］^＋（ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_１９Ｈ_２７Ｏ_１１，４３１．１５５３）。

［ポリガラテノシドＢ（化合物２）］
無色シロップ様、［α］_Ｄ＋３４３．１（ｃ０．００３，ＭｅＯＨ）；ＵＶ（ＭｅＯＨ）λ_ｍａｘ（ｌｏｇε）２２８（３．９４），２７２（３．６９）ｎｍ；ＩＲ（ＫＢｒ）ν_ｍａｘ３４１５，２９２７，１７１３，１６０２，１４５２，１２８０ｃｍ^−１；^１Ｈおよび^１３ＣＮＭＲ，表１および２参照；ＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ ４３１［Ｍ＋Ｈ］^＋，３０７，２９１，２８９，１５４，１３７，１３６，１０７；ＨＲＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ ４３１．１５５２［Ｍ＋１］^＋（ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_１９Ｈ_２７Ｏ_１１，４３１．１５５３）。

［ポリガラテノシドＣ（化合物３）］
無色シロップ様、［α］_Ｄ＋２５６．６（ｃ０．００５，ＭｅＯＨ）；ＵＶ（ＭｅＯＨ）λ_ｍａｘ（ｌｏｇε）２２９（３．８７），２７３（３．７２），３０１（３．５５）ｎｍ；ＩＲ（ＫＢｒ）ν_ｍａｘ３４０２，１７１３，１６３１，１６０２，１４５２，１２８０ｃｍ^−１；^１Ｈおよび^１３ＣＮＭＲ，表１および２参照；ＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ ４３１（［Ｍ＋Ｈ］^＋，３．４），３０７（３３），２９１（２１），２８９（１５），２６７（８），１５５（２７），１５４（１００），１３９（１１），１３８（２９），１３７（５７），１３６（６１），１０７（１６）；ＨＲＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ ４３１．１５５４［Ｍ＋１］^＋（ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_１９Ｈ_２７Ｏ_１１，４３１．１５５３）。

［ポリガラテノシドＤ（化合物４）］
無色シロップ様、［α］_Ｄ＋１０３．７（ｃ０．００４，ＭｅＯＨ）；ＵＶ（ＭｅＯＨ）λ_ｍａｘ（ｌｏｇε）２１６（３．９８），２５８（４．０２）ｎｍ；ＩＲ（ＫＢｒ）ν_ｍａｘ３４１４，１７０８，１６０６，１５１２，１４６４ｃｍ^−１；^１Ｈおよび^１３ＣＮＭＲ，表１および２参照；ＨＲＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ ４７７．１６０６［Ｍ＋１］^＋（ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_２０Ｈ_２９Ｏ_１３， ４７７．１６１１）。

［ポリガラテノシドＥ（化合物５）］
無色シロップ様、［α］_Ｄ＋６１６．８（ｃ０．００１，ＭｅＯＨ）；ＵＶ（ＭｅＯＨ）λ_ｍａｘ（ｌｏｇε）２５８（４．１５）ｎｍ；ＩＲ（ＫＢｒ）ν_ｍａｘ３４００，１５８５，１５０５，１４６４，１４０５ｃｍ^−１；^１Ｈおよび^１３ＣＮＭＲ，表１および２参照；ＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ ５０５ （［Ｍ＋Ｈ］^＋，０．５），５０３（２），４５９（３），３７１（３），３６９（３），２９７（４），２７７（１１），２４１（１６），１８５（１００），１４９（２８），１１７（１０），９３（９８），７５（４０）；ＨＲＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ ５０５．１９２０［Ｍ＋１］^＋（ｃａｌｃｄ ｆｏｒ Ｃ_２２Ｈ_３３Ｏ_１３：５０５．１９２３）。

［膜結合アッセイ］
ヒトノルエピネフリントランスポーターが安定導入されたイヌ腎臓ＭＤＣＫ細胞由来の膜を用いた。５００ｃｍ^２組織培養プレート中でコンフルエンスに培養された、トランスフェクションされた細胞から、全細胞膜を準備した。細胞を遠心チューブ中に掻き取り、９００ｇ、４℃、１０分間で沈殿させた。改変したトリス−塩酸緩衝液（５０ｍＭトリス−塩酸、１００ｍＭＮａＣｌ、１μＭｌｅｕｐｅｔｉｎ、１０μＭＰＭＳＦ；ｐＨ７．４）で沈殿物を再懸濁し、１７０００ｇ、４℃、３０分間遠心を行った。その後、沈殿物を再懸濁し、テフロンペストルを備えたガラスホモジナイザーでホモジナイズし、１７０００ｇ、４℃、９０分間遠心を行った。沈殿物を回収し、改変したトリス−塩酸緩衝液中に再懸濁した。タンパク質濃度はＢＣＡタンパク質測定試薬（Ｐｉｅｒｃｅ社，ロックフォード）を用いて定量した。結合アッセイ用に膜タンパク質４０μｇアリコートを０．２ｎＭ［^１２５Ｉ］ＲＴＩ−５５（３β−（４−ヨードフェニル）−ｔｒｏｐａｎ−２β−カルボン酸メチルエステル）とともに４℃、３時間インキュベートした。０．３％ポリエチレンイミンを浸したＷｈａｔｍａｎ ＧＦ／Ｂを使って急速真空濾過し、冷バッファー１ｍＬで３回急速で洗うことによって結合を止めた。ガンマ線分光分析によって結合した放射活性を測定した。非特異性の結合は、１０μＭデシプラミン存在下で測定し、特異的結合を算出するためにデシプラミン非存在下のデータから、非特異性結合を差し引いた。

［結果］
Ｐ．ｔｅｎｕｉｆｏｌｉａ（１．２５ｋｇ）の風乾根を粉末状にし、還流下、水で抽出した。Ｈ_２Ｏ抽出物は、Ｄｉａｉｏｎ ＨＰ−２０カラムクロマトグラフにかけ、順にＨ_２Ｏ、５０％ＭｅＯＨ、および１００％ＭｅＯＨで溶出した。６フラクションとるために、ＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨを用いてシリカゲルカラム上で５０％ＭｅＯＨ溶出液をクロマトグラフにかけた。得られたもののうち、フラクション２が濃度依存的にＭＤＣＫ細胞のノルエピネフリントランスポーターに対する［^１２５Ｉ］ＲＴＩ−５５を阻害した。ＩＣ_５０値は、４．６μｇ／ｍＬであった。次にフラクション２を逆相ＯＤＳカラムを用いたリサイクル式高性能液体クロマトグラフィー（ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ＨＰＬＣ）にかけ、５つの新規オリゴ糖誘導体ポリガラテノシドＡ〜Ｅ（化合物１〜５）を得た。

ポリガラテノシドＡ（化合物１）は無色シロップ様で分離された。化合物１のＨＲＦＡＢＭＳでは、ｍ／ｚ ４３１．１５５７［Ｍ＋Ｈ］^＋でプロトン化した分子イオンピークを示し、Ｃ_１９Ｈ_２６Ｏ_１１であることが判明した。紫外スペクトルは、ベンゾイル残基の存在を示す最大吸収を示した。ＩＲスペクトルでは、３４１１および１７１３ｃｍ^−１にバンドがあり、ヒドロキシル基および共役エステルカルボニル基が存在することがわかった。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルにおいて、ガラクトシルおよびポリガリトシル（ｐｏｌｙｇａｌｉｔｏｓｙｌ）残基によるシグナルに加え、ベンゾイル基（δ７．９９，２Ｈ ｄ；７．６１，１Ｈ，ｔ；７．４７，２Ｈ，ｄ）に対するシグナルが現れた（表１参照）。また、ベンゾイル、ガラクトシル、およびポリガリトシル部分による^１３Ｃ ＮＭＲシグナル（表２参照）により、化合物１は安息香酸のポリガリトシルガラクトシドであることもまた明らかとなった。全てのプロトンおよびカーボンＮＭＲシグナルは、^１Ｈ−^１Ｈ ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、およびＨＭＢＣ ＮＭＲ実験によって決めた。ポリガリトール（下記式（３））と比較してポリガリトシルユニットのＣ−２が４ｐｐｍ低磁場へとシフトしていること、およびガラクトシルユニットのＣ−１がδ_Ｃ ９５．７へと低磁場側にシフトしていることから、ポリガリトシル（２→１）−α−ガラクトシドとして化合物１中にグリコシド内の結合があることが明らかとなった。

これは、ＨＭＢＣ実験におけるガラクトシルユニットのＨ−１（δ_Ｈ５．００）およびポリガリトール部分のＣ−２（δ_Ｃ７３．３）の間の^３Ｊ結合定数（ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ）によっても支持される（図１参照）。ＮＭＲスペクトルにおいて、ガラクトシル残基のメチレンプロトンシグナルがδ_Ｈ４．４９および４．３９へと低磁場シフトしていること、ならびにガラクトシル残基のＣ−６炭素がδ_Ｃ６４．３へと低磁場シフトシフトしていることから、Ｃ-６位がベンゾイル基結合位であると判断される。これは、Ｈ−６（δ_Ｈ４．４９および４．３９）ならびにベンゾイル残基のエステルカルボニル炭素（δ_Ｃ１６８．２）の間の^３Ｊ結合定数（ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ）によって確認した。以上のデータの解析から、ポリガラテノシドＡ（化合物１）は、６−Ｏ−ベンゾイル−ポリガリトシル（２→１）−α−ガラクトース（６−Ｏ−ｂｅｎｚｏｙｌ−ｐｏｌｙｇａｌｉｔｏｓｙｌ−（２→１）−α−ｇａｌａｃｔｏｓｅ）であると判断した。

ポリガラテノシドＢ（化合物２）およびポリガラテノシドＣ（化合物３）は無色シロップ様で分離された。化合物２および３のＨＲＦＡＢＭＳでは、各々ｍ／ｚ ４３１．１５５２および４３１．１５５４［Ｍ＋Ｈ］^＋でプロトン化した分子イオンピークを示し、化合物１と同じくＣ_１９Ｈ_２６Ｏ_１１であることが判明した。紫外スペクトルでは、ベンゾイル残基に対応する最大吸収を各々示した。ＩＲスペクトルでは、３４１５および１７１３ｃｍ^−１にバンドがあり、ヒドロキシル基および共役エステルカルボニル基が存在することがわかった。ポリガラテノシドＢおよびＣのＮＭＲスペクトルにおいては、化合物１と同様にエステル部分としてベンゾイル残基、および糖部分としてガラクトシルおよびポリガリトシル（ｐｏｌｙｇａｌｉｔｏｓｙｌ）残基の存在が明らかとなった。^１Ｈ−^１Ｈ ＣＯＳＹおよびＨＭＱＣスペクトルから全てのプロトンシグナルを割り当てた後、これらの残基の置換位置を、ＮＯＥ（図２参照）およびＨＭＢＣ（図１参照）により決定した。^１３ＣＮＭＲスペクトルおよび化合物２および３のＨＭＢＣスペクトル中のＨ−１（ガラクトシル）およびＣ−２（ポリガリトシル）の間の^３Ｊ結合定数（ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ）において、ポリガリトシル部分のＣ−２およびガラクトシル部分のＣ−１が低磁場シフトすることから、化合物１と同様にポリガリトシル（２→１）−α−ガラクトシドとして糖残基が存在することが明らかとなった。しかしながら、化合物２および３は、エステル結合部位が異なることがわかった。化合物２においては、ガラクトシルユニットのＨ−３およびＣ−３のシグナルがδ_Ｈ５．２９およびδ_Ｃ７５．３へと低磁場シフトしていることから、ガラクトシル残基のＣ−３位にベンゾイル基が存在することが明らかとなった。化合物３においては、ガラクトシルユニットのＨ−４およびＣ−４のシグナルは、それぞれδ_Ｈ５．５９およびδ_Ｃ７３．５へと低磁場シフトし、ガラクトシルＣ−４の位置でベンゾイル基が結合していることが明らかとなった。これは、ＨＭＢＣスペクトルにおいてガラクトシルユニットのＨ−４（δ_Ｈ５．５９）およびベンゾイル基のカルボニル炭素Ｃ−７（δ_Ｃ１６７．９）の間の^３Ｊ結合定数（ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ）によっても支持される。したがって、構造的に化合物２は３−Ｏ−ベンゾイル−ポリガラクトシル−（２→１）−α−ガラクトース（３−Ｏ−ｂｅｎｚｏｙｌ−ｐｏｌｙｇａｌｉｔｏｓｙｌ−（２→１）−α−ｇａｌａｃｔｏｓｅ）および化合物３は４−Ｏ−ベンゾイル−ポリガラクトシル−（２→１）−α−ガラクトース（４−Ｏ−ｂｅｎｚｏｙｌ−ｐｏｌｙｇａｌｉｔｏｓｙｌ−（２→１）−α−ｇａｌａｃｔｏｓｅ）であることがわかった。

ポリガラテノシドＤ（化合物４）は無色シロップ様で得られた。ＨＲＦＡＢＭＳでは、ｍ／ｚ４７７．１６０６でプロトン化した分子イオンピークを示し、Ｃ_２０Ｈ_２９Ｏ_１３であることが判明した。化合物４の紫外スペクトルでは、２１６および２５８ｎｍで吸収を示した。ＩＲスペクトルでは、３４１４および１７０８ｃｍ^−１にバンドがあり、ヒドロキシル基および共役エステルカルボニル基が存在することがわかった。^１ＨＮＭＲスペクトルは、スクロース部分に対するシグナルに加え、Ａ_２Ｂ_２−タイプの芳香族プロトン（各々の２Ｈに対してδ８．０６および７．０１）およびメトキシ基（δ３．８６，３Ｈ，ｓ）に対するシグナルを示した。化合物４の^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルもまた、ｐ−メトキシベンゾイル基およびスクロース残基によるシグナル（表２参照）を示した。^１Ｈおよび^１３Ｃ ＮＭＲシグナルの全ての割り当ては、ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣ、およびＨＭＢＣ実験によって確かめた。フルクトシル部分のオキシメチンプロトンおよびカーボン（Ｈ−３およびＣ−３）が各々δ_Ｈ５．５６およびδ_Ｃ８０．６へと低磁場シフトしていることから、ｐ−メトキシベンゾイル部分が化合物４のＣ−３’に位置することが示された。これはＨＭＢＣスペクトルによって支持される。なぜならば、フルクトシル残基のＨ−３（δ_Ｈ５．５６）は、δ_Ｃ１６７．７でｐ−メトキシベンゾイル部分のエステルカルボニル炭素に相関するからである。したがって、化合物４の構造は、３’−Ｏ−ｐ−メトキシベンゾイル−スクロース（３’−Ｏ−ｐ−ｍｅｔｈｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ−ｓｕｃｒｏｓｅ）であると推定される。

ポリガラテノシドＥ（化合物５）は無色シロップ様で分離され、ＨＲＦＡＢＭＳ（［Ｍ＋Ｈ］^＋ｍ／ｚ ５０５．１９２０）からＣ_２２Ｈ_３２Ｏ_１３の元素組成を有すると推定される。３４００、１５８５、１５０５、１４６４ｃｍ^−１でのＩＲ吸収バンドは、ヒドロキシルおよび芳香族部分の存在を示す。化合物５のＮＭＲデータは、ｃｉｓ−シナピルアルコール部分シグナルを示した。前記ｃｉｓ−シナピルアルコール部分シグナルは、化合物５の^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルにおいて、δ_Ｃ１０３．２、７９．２、７９．２、７１．８、７８．５および６３．１でのグルコシルならびにδ_Ｃ１１０．９、７８．６、８１．４、７６．１および６６．９でのアピオシル（ａｐｉｏｓｙｌ）のシグナルに加えて、δ_Ｈ６．５５（２Ｈ，ｓ）での２つの同等な芳香族プロトン、δ_Ｈ３．８３（６Ｈ，ｓ）での２つのメトキシ基、δ_Ｈ６．４８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ）および５．８０（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１１．６，６．４Ｈｚ）での２つのｃｉｓ−オレフィンのプロトン、ならびにδ_Ｈ４．３４（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．４，１．６Ｈｚ）でのオキシメチレンプロトンを含むものである。上記データとカロパナキシンＤ（ｋａｌｏｐａｎａｘｉｎ Ｄ）［Ｋａｚｕｋｏ，Ｓ．；Ｓｈｕｉｃｈｉ，Ｓ．；Ｙｏｓｈｉｔｅｒｕ Ｉ．；Ｊｕｎｚｏ，Ｓ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１９９１，３９，８６５−８７０）とを比較すると、糖部分は、β−アピオシル−（１→２）−β−グルコシド（β−ａｐｉｏｓｙｌ−（１→２）−β−ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）部分であると推定される。これは、ＨＭＢＣ実験においてグルコシルのＣ−２のδ_Ｃ７９．２への低磁場シフトおよびグルコシルユニットのＨ−２プロトン（δ_Ｈ３．６９）とアピオシルユニットのＣ−１（δ_Ｃ １１０．９）との間の^３Ｊ結合定数（ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ）によって支持される（図１参照）。また、グルコシルＨ−１（δ_Ｈ５．１０）とｃｉｓ−シナピルＣ−４（δ_Ｃ１３５．５）との間のＨＭＢＣ相関で観察されたことに基づき、シナピルアルコールはグルコシルＣ−１に位置する。上記データから、化合物５は、シナピルアルコール４−Ｏ−β−アピオシル−（１→２）−β−グルコース（４−Ｏ−β−ａｐｉｏｓｙｌ−（１→２）−β−ｇｌｕｃｏｓｅ）であることが明らかとなった。

化合物１〜５がノルエピネフリントランスポータープロテインへのアイソトープラベルしたＲＴＩ−５５の結合を阻害するかどうかをｉｎ ｖｉｔｒｏで試験した［Ｇａｌｌｉ，Ａ．；Ｄｅｆｅｌｉｃｅ Ｌ．Ｊ．；Ｄｕｋｅ，Ｂ．Ｊ．；Ｍｏｏｒｅ，Ｋ．Ｒ．；Ｂｌａｋｅｌｙ，Ｒ．Ｄ．Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．１９９５，１９８，２１９７−２２１２］。膜結合アッセイにおいて、ポリガラテノシドＡ（化合物１）およびＢ（化合物２）は、ＩＣ_５０値が各々３０．０および６．０４μＭという顕著な阻害活性を示した。三環系抗鬱剤であるデシプラミンは、ＩＣ_５０値が０．９３ｎＭでＮＥＴへの［^１２５Ｉ］ＲＴＩ−５５結合を阻害した。以上の結果より本発明の化合物がＮＥＴへの結合を特異的に阻害することによってノルエピネフリン再取り込み阻害剤として作用することが示された。

イトメハギ（Ｐｏｌｙｇａｌａ ｔｅｎｕｉｆｏｌｉａ）の根からの水溶液抽出物から精製した本発明の化合物１〜５のＨＭＢＣ（Ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｂｏｎｄ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ）相関を示す図である。 イトメハギ（Ｐｏｌｙｇａｌａ ｔｅｎｕｉｆｏｌｉａ）の根からの水溶液抽出物から精製した本発明の化合物２、３のＮＯＥＳＹ（Ｎｕｃｌｅａｒ Ｏｖｅｒｈａｕｓｅｒ Ｅｆｆｅｃｔ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）相関を示す図である。

Claims (5)

1. 下記化学式（１）：
   式中、Ｒ、Ｒ’およびＲ”は、各々独立して水素原子またはＲ_１であり（この際、Ｒ、Ｒ’およびＲ”が全て水素原子になることはない）、Ｒ_１は、下記化学式（２）；
   式中、Ｒ_２は水素原子、Ｃ１〜６のアルキル基、Ｃ１〜６のアルコキシ基およびハロゲン原子からなる群から選択されたものを表す：で表される化合物またはその薬剤として許容される塩。
2. 前記Ｒ_２が水素原子である請求項１に記載の化合物またはその薬剤として許容される塩。
3. 前記Ｒ、Ｒ’、Ｒ”のいずれか１つがＲ_１であり、その他２つが水素原子である、請求項２に記載の化合物またはその薬剤として許容される塩。
4. 薬剤的に許容できるキャリアーおよび希釈剤とともにノルエピネフリン輸送遮断によるノルエピネフリンの再取り込み阻害剤として請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物またはその薬剤として許容される塩を含む、ノルエピネフリンの再取り込み阻害が有効な疾病用薬剤組成物。
5. 前記疾病が嗜癖障害、禁断症候群、適応障害、加齢性の学習障害や精神障害、拒食症、無気力、注意力欠如障害、注意力欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、双極性障害、または肥満である請求項４に記載の薬剤組成物。