JP4767256B2 - 安定化したロイコトリエンｂ４（ｌｔｂ４）剤の医薬製剤 - Google Patents

Description

（（ａ）発明の分野）
本発明は、ＬＴＢ_４剤を安定化させるのに有効なアルカリ性ｐＨの新規なＬＴＢ_４剤の医薬製剤に関し、貯蔵寿命を増加させた製剤を提供する。したがって、本発明はアルカリ性ｐＨでＬＴＢ_４剤および薬剤として許容される担体を含む組成物に関する。

（（ｂ）従来技術の説明）
ロイコトリエンＢ_４自体は、２０個の炭素の四不飽和脂肪酸であり、比較的不安定な分子である。ヒトおよび動物への投与に適しているｐＨ７．０〜７．６でのＬＴＢ_４の等張性水溶液は、２℃〜２５℃（および２５℃超）の温度範囲で貯蔵した場合、短時間だけしか安定ではない（数週間から数ヵ月）。実際、ＬＴＢ_４剤は、可能性のある様々な構造的変化の中で、酸化、二重結合の異性化（ＬＴＢ_４は２つのシス型および２つのトランス型の二重結合を含む）、ラセミ化（ＬＴＢ_４は２つの不斉中心を含む）、エステル化（ＬＴＢ_４はカルボキシル基を含む）、ラクトン化の影響を受けやすい。

ＬＴＢ_４剤は薬剤として大きな有用性を有しているが、動物またはヒトにおける治療剤としてのその使用には問題がある。その理由は、２℃〜２５℃の温度での溶液中におけるその安定性および貯蔵寿命が不十分なためである。

科学文献によれば、ごく最近まで、ヒトおよび動物への投与のためのＬＴＢ_４製剤は、分解を避けるために非常に低温（−２０℃またはそれ以下）で保存されるｐＨ７．０〜７．５の水溶液であることが示されている。あるいは、ＬＴＢ_４はエタノール溶液として用いられ、分解を避けるためにやはり低温で貯蔵する。このエタノール溶液は、（ｐＨ７．０〜７．５）緩衝液で希釈されるか、蒸発させて乾燥し、使用する直前に（ｐＨ７．０〜７．５）緩衝液中に再溶解する。そうした製剤は、ヒトおよび動物における治療剤としてＬＴＢ_４を用いるのには不十分である（非実用的であり、かつ貯蔵寿命が短い）。

ヒトおよび動物における感染症および癌の予防および治療のための治療剤としてＬＴＢ_４剤の可能性を考えると、ＬＴＢ_４剤を安定化させるのに有効なアルカリ性ｐＨの新規なＬＴＢ_４剤の医薬製剤を提供し、貯蔵寿命を増加させる製剤を提供することが非常に望まれている。

（発明の概要）
本発明の１つの目的は、ＬＴＢ_４剤を安定化させるのに有効なアルカリ性ｐＨの新規なＬＴＢ_４剤の医薬製剤を提供し、かつ貯蔵寿命を増加させる製剤を提供することである。

本発明の一実施形態によれば、ＬＴＢ_４剤を安定化させるのに有効であるアルカリ性ｐＨで、薬剤として許容される担体とともに治療有効量のＬＴＢ_４剤、それらの塩、それらのエステルまたはそれらのエーテルを含み、それによって、製剤の貯蔵寿命を増加させるＬＴＢ_４剤の医薬製剤を提供する。したがって、本発明は、アルカリ性ｐＨで、ＬＴＢ_４剤、それらの塩、それらのエステルまたはそれらのエーテル、および薬剤として許容される担体を含む組成物に関する。

本発明の他の実施形態によれば、好ましいアルカリ性ｐＨは、７．１〜１４、より好ましくは７．５〜１０．５の範囲である。ｐＨは７．６超、より好ましくは７．７〜１１．５であることが好ましい。ｐＨは８．１超、例えば８．２〜１４、特に８．５〜１２．５、例えば８．５〜１１．５、最も好ましくは９．５〜１１．５、例えば約９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１０．１、１０．２、１０．３、１０．４、１０．５、１０．６、１０．７、１０．８、１０．９、１１．０、１１．１、１１．２、１１．３、１１．４または１１．５であることがより好ましい。他の好ましい実施形態では、好ましいアルカリ性ｐＨは、８．０〜９．０、８．５〜９．５、９．０〜１０．０、９．５〜１０．５または１０．０〜１１．５の範囲である。

いくつかの実施形態では、ＬＴＢ_４剤の医薬製剤は、薬剤として許容されるアルカリ性の反応性担体とともに治療有効量のＬＴＢ_４剤を含む。本出願が、当該医薬製剤を安定化させるのに有効なアルカリ性ｐＨの、薬剤として許容される担体に関連する実施形態を説明する場合は、常に、この実施形態は薬剤として許容されるアルカリ性の反応性担体も含む。

本発明の他の実施形態によれば、担体は水性担体である。

本発明の他の実施形態によれば、担体は、アルカリ性マトリックスでコーティングされた粒子状固体、またはアルカリ性マトリックスで構成された粒子状固体であり、その担体は有機溶媒類またはその混合物および水からなる群から選択することができる。

本発明の他の実施形態によれば、安定化した製剤は、水と、少なくとも５０％（容積／容積）、好ましくは少なくとも６０％（容積／容積）、より好ましくは少なくとも７０％（容積／容積）、例えば約７５％（容積／容積）、特に少なくとも８０％（容積／容積）の共溶媒を含む。本発明の特定の実施形態では、安定化した製剤は水と１〜４９％の共溶媒、または水と５０〜９９％の共溶媒を含む。前記共溶媒は、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、イソプロピルアルコール、ベンジルアルコール、プロパンジオール、グリセロール、グリコフロール、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミドおよびその混合物からなる群から選択することができる。本発明の特定の実施形態では、安定化した製剤は少なくとも９０％（容積／容積）の前記共溶媒を含む。

本発明の他の実施形態によれば、製剤は、液体形態、凍結乾燥形態、結晶形態または固体非晶質形態であり、好ましくは液体形態または凍結乾燥形態である。

本発明の他の実施形態によれば、水性担体は、水、アルカリ金属水酸化物溶液、例えば水酸化ナトリウム溶液、緩衝食塩水、例えばリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、共溶媒含有水溶液、例えばアルコール含有水溶液、糖溶液またはそれらの混合物からなる群から選択される。前記共溶媒含有水溶液は一般に約１％〜約４９％（容積／容積）の共溶媒を含む。

本発明の他の実施形態によれば、共溶媒含有水溶液中に存在する共溶媒は、エタノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、イソプロピルアルコール、ベンジルアルコール、プロパンジオール、グリセロール、グリコフロール、ジメチルスルホキシド、ジメチルアセトアミドおよびそれらの混合物からなる群から選択される。

本発明の他の実施形態によれば、製剤は、担体が水性担体であり、製剤が液体形態である場合、−２５℃〜４５℃、好ましくは０℃〜４０℃、例えば２℃〜３５℃、特に５℃〜２５℃の範囲の温度で安定化させ、担体が有機担体、例えばアルコール含有担体であるか製剤が凍結乾燥形態である場合、−２５℃〜４５℃、好ましくは−２０℃〜４０℃、より好ましくは−１０℃〜３０℃、特に０℃〜２０℃、最も好ましくは０℃〜１０℃の範囲で安定化させる。担体が有機担体、例えばアルコール含有担体であるか製剤が凍結乾燥形態である場合、他の最も好ましい温度範囲は、−２０℃〜０℃、例えば−１０℃〜０℃、または２０℃〜４０℃、例えば２０℃〜３０℃である。

本発明の他の実施形態によれば、製剤は、キレート化剤またはそのキレート化剤の薬剤として許容される塩を、ＬＴＢ_４剤を安定化させるのに有効な量でさらに含む。

本発明の他の実施形態による好ましいキレート化剤は、これらに限定されないが以下のものを含む。すなわち、
・アミノポリカルボン酸、
・エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、グルタミン酸およびアスパラギン酸、
・ＥＧＴＡ、ならびに
・ＤＴＰＡ
である。

本発明の他の実施形態によれば、薬剤として許容される塩は、ナトリウムイオンの塩およびカリウムイオンの塩からなる群から選択することができる。

本発明の特定の実施形態によれば、安定化した製剤は、製剤中にヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含むことによって、凍結乾燥形態でさらに安定化させることができる。

本発明の他の実施形態によれば、キレート化剤はＬＴＢ_４剤製剤の約０．００１〜約１．０重量％の量で存在し、より好ましくは、キレート化剤はＬＴＢ_４剤製剤の約０．０１〜約４０重量％の量で存在する。

本発明による好ましいＬＴＢ_４剤は、これらに限定されないが以下のものを含む。すなわち、
・ロイコトリエンＢ_４［５Ｓ，１２Ｒ−ジヒドロキシ−６，８，１０，１４（Ｚ，Ｅ，Ｅ，Ｚ）−エイコサテトラエン酸］（「ＬＴＢ_４」）、
・ＬＴＢ_４、１４，１５−ジヒドロ−ＬＴＢ_４（「ＬＴＢ_３」）、１７，１８−デヒドロ−ＬＴＢ_４（「ＬＴＢ_５」）、１９−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４、２０−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４ならびにその５（Ｓ）ヒドロペルオキシおよび５−デオキシ類似体、
・ＬＴＢ_４剤の５（Ｒ）−ヒドロキシおよび５（Ｒ）−ヒドロペルオキシ類似体、
・ロイコトリエンＡ_４（「ＬＴＡ_４」）、１４，１５−ジヒドロ−ＬＴＡ_４（「ＬＴＡ_３」）および１７，１８−デヒドロ−ＬＴＡ_４（「ＬＴＡ_５」）、
・１４，１５−ジヒドロ−ＬＴＡ_４メチルエステルおよびＬＴＢ_４メチルエステル、
・５（Ｓ）−ヒドロキシ−６，８，１１，１４（Ｅ，Ｚ，Ｚ，Ｚ）−エイコサテトラエン酸（「５−ＨＥＴＥ」）、１４，１５−ジヒドロ−５−ＨＥＴＥ、１７，１８−デヒドロ−５−ＨＥＴＥおよびその５（Ｒ）−ヒドロキシ、５（Ｓ）−ヒドロペルオキシ、５（Ｒ）−ヒドロペルオキシ類似体、
・ロイコトリエンＣ_４およびＤ_４ならびにその１４，１５−ジヒドロまたは１７，１８−デヒドロ類似体；ロイコトリエンＣ_４およびＤ_４ならびにその１４，１５−ジヒドロまたは１７，１８−デヒドロ類似体のＮ−アシルまたはＮ−アルキル誘導体、
・５，１２−ジヒドロキシ−６，８，１０，１４−エイコサテトラエン酸、５−ヒドロキシ−６，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸およびその異性体、
・２０，２０，２０−トリフルオロメチル−ＬＴＢ_４；１９−メチル−ＬＴＢ_４、１９，１９−ジメチル−ＬＴＢ_４、１９−フルオロ−ＬＴＢ_４、１９，１９−ジフルオロ−ＬＴＢ_４、１８，２０−ジフルロ−ＬＴＢ_４および２０−フルオロ−ＬＴＢ_４、
・３−チオ−ＬＴＢ_４、３−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４、３−メチル−ＬＴＢ_４、３，３−ジメチル−ＬＴＢ_４、３−フルオロ−ＬＴＢ_４、３，３−ジフルオロ−ＬＴＢ_４および２，３−ジフルオロ−ＬＴＢ_４、ＬＴＢ_４メチルスルホニルアミド、ＬＴＢ_４メチルアミド、１−テトラゾールＬＴＢ_４、ならびに
・それらの塩、それらのエステル誘導体およびそれらのエーテル誘導体
である。

特に好ましくは、本発明によるＬＴＢ_４剤は、ＬＴＢ_４、ＬＴＢ_３、ＬＴＢ_５、２０−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４、２０，２０，２０−トリフルオロメチル−ＬＴＢ_４、１９−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４、１８−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４、３−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４、２−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４、４−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４、その５−デオキシ類似体、およびそれらの塩、それらのエステルまたはそれらのエーテルからなる群から選択される。

さらに好ましくは、本発明によるＬＴＢ_４剤は、ＬＴＢ_４、ＬＴＢ_３、ＬＴＢ_５、２０−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４、２０，２０，２０−トリフルオロメチル−ＬＴＢ_４、３−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４、その５−デオキシ類似体、およびそれらの塩、それらのエステルまたはそれらのエーテルからなる群から選択される。

ＬＴＢ_４剤は、製剤の約０．１μｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは製剤の１μｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは製剤の約１μｇ／ｍｌ〜１ｍｇ／ｍｌの量で存在することが好ましい。

（発明の詳細な説明）
ＬＴＢ_４の水溶液の安定性を様々な実験条件下で試験した。１）ＬＴＢ_４溶液の安定性はアルカリ性ｐＨで劇的に増加し、２）ＥＤＴＡなどのキレート化剤はＬＴＢ_４溶液の安定性を増加させることが判明した。リン酸緩衝液またはグリシン緩衝液を用いるとＬＴＢ_４溶液安定性に対するアルカリ性ｐＨの好ましい効果が観察され、試験した薬物のすべての濃度（１７．５μｇ／ｍｌ〜１７．５ｍｇ／ｍｌ）および試験したすべての温度（４℃および４０℃）で、ＬＴＢ_４溶液安定性に対するアルカリ性ｐＨの好ましい効果が観察された。

本発明に関連して「増加した貯蔵寿命」と称する場合、それは、上記ｐＨおよび／または上記キレート化剤を備えていないＬＴＢ_４剤製剤または組成物と比較して、本発明の製剤または組成物におけるＬＴＢ_４剤の安定性が増加していることを意味するもとのとする。上記ｐＨおよび／または上記キレート化剤を備えていないＬＴＢ_４剤製剤または組成物と比較して、本発明の製剤または組成物におけるＬＴＢ_４剤の安定性の期間は、温度、汚染度およびＬＴＢ_４剤の濃度に応じて、少なくとも１週間、例えば少なくとも２、３または４週間、より好ましくは少なくとも２、３または４ヵ月間、特に少なくとも６、９または１２ヵ月間、例えば少なくとも２４または４８ヵ月間増加することが好ましい。

製剤または組成物におけるＬＴＢ_４剤の安定性の期間に言及する場合、それは不純物のレベルが１０％未満、好ましくは６％未満、最も好ましくは５％未満、例えば４％、３％、２％または１％未満である期間を指すものとする。

本発明に関連して「不純物」という用語は、逆相ＨＰＬＣおよび２７０ｎｍでのＵＶ光度測定で測定したＬＴＢ_４剤の分解生成物を意味するものとする。したがって、不純物のレベルが高ければ高いほど、ＬＴＢ_４剤製剤の安定性はより低い。本発明の詳細な説明、実施例および図面では、不純物のレベルは、２７０ｎｍでのＵＶ光度測定で測定したＬＴＢ_４ピーク面積に対する不純物のピーク面積のパーセントとして表す。これらに関連する実施例および図面においては、不純物のレベルは、２７０ｎｍでの曲線下の総面積のパーセントとして表すことができる。適用した定義は実施例の文脈から明白であろう。

「それらの塩」という用語は、カルボン酸などの酸の形態の官能基を、例えばアルカリ金属水酸化物；典型的には水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウム；アルカリ金属炭酸塩；典型的にはナトリウムまたはカリウムの炭酸塩または炭酸水素塩；アルカリ土類金属水酸化物；典型的には水酸化カルシウムまたは水酸化マグネシウム；アルカリ土類金属炭酸塩；典型的にはカルシウムまたはマグネシウムの炭酸塩または炭酸水素塩；またはアンモニア；あるいは有機塩基、例えば第１、第２もしくは第３アミン、アルカリ金属またはアルカリ土類金属アルコラート、例えばナトリウムメチラート、ナトリウムエチラートまたはカリウムエチラートなどの無機塩基などの適切な塩基で処理することによって得られる薬剤として許容される塩基付加塩を意味するものとする。本発明の好ましい塩は水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムとの塩基付加塩である。

「それらのエステル」という用語は、酸または酸誘導体形態の官能基を当業者に周知の典型的な任意のエステル化剤で処理することによって得られる薬剤として許容されるエステルを意味するものとする。本発明の関連では、本明細書で定義するＬＴＢ_４剤のエステルは、好ましくはメチルエステル、エチルエステル、ｎ−プロピルエステル、ｉ−プロピルエステル、ｎ−ブチルエステル、ｉ−ブチルエステル、ｓ−ブチルエステル、ｔ−ブチルエステル、ｎ−ペンチルエステル、ｉ−ペンチルエステル、ｓ−ペンチルエステル、ネオ−ペンチルエステルおよびｎ−ヘキシルエステルなどのＣ_１〜６アルキルエステルである。本明細書で定義するＬＴＢ_４剤のエステルは、分子内エステル、すなわち、例えば５−ヒドロキシ基とカルボン酸基との分子内エステル化によって形成されるラクトンであってもよい。

「それらのエーテル」という用語は、アルコールまたはアルコール誘導体形態の官能基を当業者に周知の典型的な任意のエーテル化剤で処理することによって得られる薬剤として許容されるエーテルを意味するものとする。本発明の関連では、本明細書で定義するＬＴＢ_４剤のエーテルは、好ましくは、メチルエーテル、エチルエーテル、ｎ−プロピルエーテル、ｉ−プロピルエーテル、ｎ−ブチルエーテル、ｉ−ブチルエーテル、ｓ−ブチルエーテル、ｔ−ブチルエーテル、ｎ−ペンチルエーテル、ｉ−ペンチルエーテル、ｓ−ペンチルエーテル、ネオ−ペンチルエーテルおよびｎ−ヘキシルエーテルなどのＣ_１〜６アルキルエーテルである。

ＬＴＢ_４剤
本発明のロイコトリエンＢ４（ＬＴＢ_４）剤はＬＴＢ_４であるか、その生物活性を模倣する、ある種の構造的に関連するポリ不飽和脂肪酸である。これらは、天然物質であるかそうした天然物質の類似体である。ＬＴＢ_４剤のすべては、文献に記載されている方法による化学的合成によって得られ、またほとんどは市販されている。

本明細書では、「ＬＴＢ_４剤」という用語は、それらはＬＴＢ_４自体に加え、ＬＴＢ_４の類似体、またはＬＴＢ_４もしくはＬＴＢ_４類似体の前駆体もしくは代謝産物である以下のポリ不飽和脂肪酸のうちの１つまたは複数を意味する。すなわち、ＬＴＢ_４、１４，１５−ジヒドロ−ＬＴＢ_４、１７，１８−デヒドロ−ＬＴＢ_４、１９−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４、２０−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４およびその５（Ｒ）−ヒドロキシ、５（Ｓ）ヒドロペルオキシ、５（Ｒ）−ヒドロペルオキシおよび５−デオキシ類似体；ＬＴＡ_４；１４，１５−ジヒドロ−ＬＴＡ_４、１７，１８−デヒドロ−ＬＴＡ_４；１４，１５−ジヒドロ−ＬＴＡ_４メチルエステル、ＬＴＡ_４メチルエステル、５（Ｓ）ヒドロキシ−６，８，１１，１４（Ｅ，Ｚ，Ｚ，Ｚ）−エイコサテトラエン酸（「５−ＨＥＴＥ」）、１４，１５−ジヒドロ−５−ＨＥＴＥ、１７，１８−デヒドロ−５−ＨＥＴＥおよびその５（Ｒ）−ヒドロキシ、５（Ｓ）−ヒドロペルオキシ、５（Ｒ）−ヒドロペルオキシ類似体である。

ＬＴＢ_４剤という用語は、ポリ不飽和脂肪酸の他の誘導体：ロイコトリエンＣ４およびＤ４ならびにその１４，１５−ジヒドロまたは１７，１８−デヒドロ類似体；ロイコトリエンＣ４およびＤ４のＮ−アシルまたはＮ−アルキル誘導体ならびにその１４，１５−ジヒドロまたは１７，１８−デヒドロ類似体；すべての異性体５，１２−ジヒドロキシ−６，８，１０，１４−エイコサテトラエン酸および５−ヒドロキシ−６，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸も含む。

ＬＴＢ_４という用語は、ＬＴＢ_４剤のナトリウムまたはカリウム塩などの非共有結合的に改変された脂肪酸である変異体も含む。

ＬＴＢ_４剤という用語は、脂肪酸の標的官能基を、選択された官能基と反応することができるか（例えばＬＴＢ_４剤のエステルおよびエーテル誘導体をもたらす）、または分子内転移を引き起こすことができる（ヒドロキシ化脂肪酸とのラクトンの形成など）有機誘導剤と反応させることによって分子内に改変が導入される変異体も含む。得られる化合物は、生物活性および／または生物学的利用能が変えられていてよい。したがって、共有結合的に改変された脂肪酸は、インビボでの投与で、より活性な分子（誘導化されていないＬＴＢ_４剤）に徐々に変化する、低い生物活性を有するプロドラッグであってよい。変異体は、化合物の処分を遅らせる結果をもたらす（代謝および／または排除の低下）ように変えられた、代謝的に安定しており、かつ生物学的に活性なＬＴＢ_４剤の類似体であってもよい。オメガ末端（２０，２０，２０−トリフルオロメチル−ＬＴＢ_４など）で改変された変異体はオメガ酸化（不飽和脂肪酸の分解産物反応）への高い抵抗性を示し、炭素１３〜２０のレベルでのオメガ末端で改変を有する他の変異体（１９−メチル−ＬＴＢ_４、１９，１９−ジメチル−ＬＴＢ_４、１９−フルオロ−ＬＴＢ_４、１９，１９−ジフルオロ−ＬＴＢ_４、１８，２０−ジフルロ−ＬＴＢ_４または２０−フルオロ−ＬＴＢ_４など）はオメガ酸化への高い抵抗性を示すことができ、炭素１、２、３または４のレベルでのカルボン酸末端で改変を有する変異体（例えば、３−チオ−ＬＴＢ_４、３−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４、３−メチル−ＬＴＢ_４、３，３−ジメチル−ＬＴＢ_４、３−フルオロ−ＬＴＢ_４、３，３−ジフルオロ−ＬＴＢ_４または２，３−ジフルオロ−ＬＴＢ_４、ＬＴＢ_４メチルスルホニルアミド、ＬＴＢ_４メチルアミド、１−テトラゾールＬＴＢ_４）は、ベータ酸化および／または排除（プロベネシド感受性の有機酸輸送体による摂取など）への高い代謝抵抗性を示すことができる。炭素１２で改変を有する１２（Ｒ）−メチル−ＬＴＢ_４などの他の変異体は、１１，１２二重結合（ＬＴＢ_４の代謝経路）の低減に高い抵抗性を示すことができる。他の変異体は、鎖長の変化（４個までの炭素が増減した鎖長）、二重結合の付加、二重結合の飽和、二重結合の幾何学的配置の変化（シスからトランスへまたはその逆）、三重結合への二重結合の変化、１個または複数の官能基の構造変化（ＲかＳへまたはＳからＲへ）などの構造的変化、あるいは、１個もしくは複数の官能基または置換基が、他の官能基または置換基（これらに限定されないが、ヒドロペルオキシル、カルボニル、スルフヒドリル、スルホキシド、スルホン、システイニル、グルタチオニル、システイン−グリシン、メチル、イソプロピル、ベンジル、クロロ、フルオロを含む）のために除かれているか、加えられているか、変えられている構造的変化、あるいは、１つもしくは複数の官能基および／または１つもしくは複数の二重結合の位置が、オメガ末端に対して１つか、２つか３つの炭素だけ移動している構造的変化を伴うＬＴＢ_４剤の類似体である。ＬＴＢ_４剤は、１つまたは複数の上記の構造改変を含む変異体であってよい。

ＬＴＢ_４剤製剤という用語は、２つもしくはいくつかのＬＴＢ_４剤の混合物か、あるいはＬＴＢ_４剤と、活性が同等であるかより少ない１つもしくは複数のＬＴＢ_４剤の異性体（位置異性体、幾何異性体または光学異性体）の混合物を含むことができる化合物の製剤も含む。

感染症
本発明により、ＬＴＢ_４剤で治療することができる感染症は、ヒトおよび／または動物の細菌性病原体によって引き起こされる感染症である。さらに、本発明者等は、本発明のＬＴＢ_４製剤または組成物を用いた感染症の防止または予防、および好中球機能の刺激を考慮する。

「ヒトおよび／または動物の細菌性病原体」という表現は、これらに限定されないが、一般的なＤＮＡおよびＲＮＡウイルスならびにレトロウイルス、細菌、菌類および寄生生物を含むものとする。

用量範囲
投与するＬＴＢ_４剤の治療上の有効量は、用いられる具体的なＬＴＢ_４剤、投与の種類または方式、他の活性化合物の併用、宿主の年齢および大きさ、感染症の種類、重篤度および広がり、個別患者の応答等によって変わることになる。ＬＴＢ_４の場合、約０．１ｎＭ〜１０μＭ、好ましくは０．１ｎＭ〜１０００ｎＭ、より好ましくは約０．２５ｎＭ〜２．５μＭ、例えば０．２５ｎＭ〜２５ｎＭの有効ピーク濃度または定常状態濃度を得るのに十分な用量で投与することができる。ＬＴＢ_４剤の有効な用量は、上記のすべての基準を考慮した上で臨床医師によって決定される。異なる生物活性を有する、ＬＴＢ_４以外のＬＴＢ_４剤の場合、必要とされる有効ピーク濃度または定常状態濃度は異なる可能性があり、例えば最大で２５μＭ、例えば最大で１０μＭである。血液中で所望の濃度を得るのに必要な薬剤の投与量は、Ｍａｒｌｅａｕ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：２０６、１９９３、およびＭａｒｌｅａｕ等、Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１２：６５４、１９９４に記載されているような薬物動態研究によって決定することができる。

ｐＨ
「アルカリ性ｐＨ」という表現は、水溶液または有機溶液中、あるいは本発明の固体または凍結乾燥製剤中において、ＬＴＢ_４剤を安定化させるのに有効なアルカリ性ｐＨ７．１〜１４を含むものとする。好ましいアルカリ性ｐＨは、８．２〜１４、特に８．５〜１２．５、例えば８．５〜１１．５、最も好ましくは９．５〜１１．５、例えば約９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１０．１、１０．２、１０．３、１０．４、１０．５、１０．６、１０．７、１０．８、１０．９、１１．０、１１．１、１１．２、１１．３、１１．４または１１．５の範囲である。他の好ましい実施形態では、好ましいアルカリ性ｐＨは８．５〜９．５、９．０〜１０．０、９．５〜１０．５または１０．０〜１１．５の範囲である。

「アルカリ性の反応性担体」という表現は、安定化したＬＴＢ_４製剤が凍結乾燥した、結晶性または固体非晶質形態である場合に、水が混合物の粒子に吸着されるか混合物に水を少量加えた際、各ＬＴＢ_４粒子の周りに、８．２〜１４、特に８．５〜１２．５、例えば８．５〜１１．５、最も好ましくは９．５〜１１．５、例えば約９．５、９．６、９．７、９．８、９．９、１０．０、１０．１、１０．２、１０．３、１０．４、１０．５、１０．６、１０．７、１０．８、１０．９、１１．０、１１．１、１１．２、１１．３、１１．４または１１．５のアルカリ性「ミクロｐＨ」を生み出し、そうでなければ不活性な薬剤として許容される物質（または複数の物質）を含む。他の好ましい実施形態では、アルカリ性「ミクロｐＨ」は、８．０〜９．０、８．５〜９．５、９．０〜１０．０または１０．０〜１１．５の範囲である。前記「ミクロｐＨ」を生み出すそうした物質は、これらに限定されないが、リン酸、炭酸、クエン酸または他の適切な弱い無機酸もしくは有機酸のナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびアルミニウム塩；水酸化アルミニウム、水酸化カルシウムおよび水酸化マグネシウムなどの制酸剤に通常用いられる物質；Ａｌ_２Ｏ_３．６ＭｇＯ．ＣＯ_２．１２Ｈ_２Ｏ、（Ｍｇ_６Ａｌ_２（ＯＨ）_１６ＣＯ_３．４Ｈ_２Ｏ）、ＭｇＯ．Ａｌ_２Ｏ_３．２ＳｉＯ_２．ｎＨ_２Ｏもしくは類似の化合物などのマグネシウムの酸化物または複合物質；トリヒドロキシメチルアミノメタンまたは類似の薬剤として許容されるｐＨ緩衝物質などの有機ｐＨ緩衝物質などの物質から選択することができる。

薬剤として許容される担体
「薬剤として許容される担体」という表現は、生理学的用途や薬剤学的用途に適した任意の水性担体などの任意の担体を含むものとする。そうした担体は、水、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、またはトリス（Ｔｒｉｓ）、グリシンもしくは他のアミノ酸、特に塩基性アミノ酸などの薬剤で緩衝化した塩化ナトリウム溶液などの緩衝塩溶液、エタノール、プロピレングリコール、プロパンジオール、グリセロールまたはマンニトールなどのアルコールを含む水溶液、ならびに、グルコースもしくはラクトース溶液などの糖溶液、あるいは様々な上記溶媒の混合物からなる群から選択される。さらに、「薬剤として許容される担体」という表現は、スクロース、ソルビトール、糖、マンニトール、微結晶性セルロース、ジャガイモデンプンを含むデンプン、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウム、硫酸カルシウムまたはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤または増量剤；顆粒化剤および崩壊剤、例えば微結晶性セルロースを含むセルロース誘導体、ジャガイモデンプンを含むデンプン、クロスカルメロースナトリウム、アルギナートまたはアルギン酸；結合剤、例えばスクロース、グルコース、ソルビトール、アカシア、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、デンプン、アルファ化デンプン、微結晶性セルロース、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドンまたはポリエチレングリコール；ならびに、流動促進剤および付着防止剤を含む滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、シリカ、水添植物油またはタルクを含むことができる。

本発明の特定の実施形態では、「薬剤として許容される担体」という表現は、非毒性物質のみを含むものである。本発明の好ましい実施形態では、「薬剤として許容される担体」という表現は、アセトニトリルを含まない。

本明細書では「毒性」という用語は、当業者によく知られている意味であり、より具体的には、本発明の製剤の関連では、毒性物質は、本発明の製剤中に存在する量で細胞または生物の機能を損なうか細胞または生物に構造的損傷をもたらす恐れがある物質である。したがって、「非毒性物質」はアセトニトリルを含まない。

本発明の特に好ましい実施形態では、その製剤は非毒性物質のみを含む。

本発明による製剤は、２５％（容積／容積）未満、好ましくは１５％未満、より好ましくは５％未満、最も好ましくは１％未満（容積／容積）のアセトニトリルを含むことができる。

哺乳動物、特にヒトに有効な投与量の本発明のＬＴＢ_４剤製剤を提供するために、適切な任意の投与のタイプまたは方式を用いることができる。例えば、経口、非経口、十二指腸内、空腸内および局所で行うことができる。剤形には錠剤、カプセル剤、粉剤、液剤、分散剤、懸濁剤、クリーム剤、軟膏およびエアロゾルが含まれる。

非経口、例えば皮下もしくは静脈内、または局所投与のためには、本発明の製剤は、所望により、可溶化剤、増粘剤、乳化剤、等張化剤、保存剤または他の補助剤などのこの目的に慣用的な薬剤物質を用いて、溶液、ゲルまたは乳液に変えられる。

製薬に用いる局所ビヒクルは、例えば緩衝系、または水と、水と混和性の溶媒との等張性もしくは高張性混合物である水溶液である。その溶媒は、例えば、アルコールもしくはアリールアルコール、油、ポリアルキレングリコール、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドンまたは酸化エチレンおよび酸化プロピレンのコポリマー（ｐｌｕｒｏｎｉｃ）、ミリスチン酸イソプロピルである。適切な緩衝物質の例は、水酸化ナトリウムならびにグリシン、アルギニン、ヒスチジンおよびリジンなどのアミノ酸、リン酸ナトリウム、酢酸ナトリウムまたはグルコン酸塩緩衝剤である。局所投与形態は、ポリエチレングリコールおよび抗菌性化合物などの非毒性補助剤も含むことができる。

連続放出製剤も本発明の範囲内として考えられる。そうした製剤は、当業者に理解されているように様々なものが考えられる。例示的な連続放出物質には、例えば乳液、ゲル、ミクロスフェアおよびヒドロゲルを含む有機溶媒または生分解性の生体適合性ポリマーが含まれる。本発明と合わせて用いるのに好ましい連続放出製剤は、マイクロカプセルまたはミクロスフェアおよびミセルである。マイクロカプセル／ミクロスフェアは、適切なポリマー中に埋め込まれて約４０〜５００μｍ（好ましくは１５０μｍ未満）の直径のスフェアを形成している本質的に小さい活性化合物粒子であり、適切な液体ビヒクルに懸濁させると注入により容易に投与される。

ＬＴＢ_４剤は、任意の局所方式または全身方式の投与に適した治療用の無菌医薬組成物として処方することができる。その生産物は、溶媒フリーの形態（例えば、マンニトールを含む凍結乾燥溶液）であって、使用するために適切な担体または希釈剤を加えて再構成できるようになっていてよい。あるいは、生産物は、水性または有機性であって、投与されるようになっているか、適切な希釈剤を加えることで改変されるようになっている溶液の形態であってよい。

本発明による溶液の形態に生産物を改変するためには、無菌希釈剤を用いることができ、その希釈剤は、生理的条件に近似させるのに一般に認められている材料を含むことができる。このように、生理学的に許容される張度およびｐＨを実現するために無菌希釈剤は塩化ナトリウム、リン酸塩などの塩および／または緩衝剤、ならびに／あるいは生理学的に許容されかつ／または使用するのに安全である他の物質を含むことができる。

水溶液として用いる場合、医薬組成物は、大部分、溶媒フリーの生産物を再構成するために上記したのと同じ物質の多くを含むことになる。有機溶媒中の溶液として用いる場合、脂肪酸（ＬＴＢ_４剤）を含む少量の溶液を、溶媒フリーの生産物を再構成するために上記したのと同じ物質の多くを含む水溶液で希釈する。したがって、医薬組成物は大部分、溶媒フリーの生産物を再構成するために上記したのと同じ物質の多くを含むことになる。

ＬＴＢ_４剤は、これらに限定されないが、抗菌剤、抗癌剤、免疫抑制剤、免疫刺激剤、抗炎症剤、サイトカイン、増殖因子（Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦなど）、レチノイド、およびプロベネシド、ジピリダモールまたはクロフィブレートなどのＬＴＢ_４剤の摂取、排除または代謝を低減することができる化合物を含む他の薬剤と併用して用いることができる。

対象のＬＴＢ_４剤を抗感染剤として宿主に投与する場合、その薬剤は、例えば経口、動脈内、静脈内、腹膜内、皮下、鼻腔内、筋肉内、注入、吸入等で投与することができる。

腸溶コーティングを有する剤形
本明細書によるＬＴＢ_４剤を十二指腸内投与すると望ましい薬物動力学的プロファイルが提供されることが、ラットのモデル（実施例１１）で示されている。したがって、好ましい実施形態では、本発明の製剤は腸溶コーティングを有する経口剤形であってよい。先に挙げたＬＴＢ_４剤の安定特性について述べたことから、有利には、前記ＬＴＢ_４剤の経口剤形は、分解することなく小腸に達するように、酸性の反応性胃液との接触を阻止すべきであることは明らかである。

腸溶コーティングした配合物は、酸媒体中では溶解しにくく、中性からアルカリ性の媒体中で急速に溶解する。腸溶コーティングした剤形は以下のような特徴を有することが好ましい。すなわち、アルカリ性の反応性化合物と混合されているＬＴＢ_４剤、またはアルカリ性の反応性化合物と任意選択で混合されているＬＴＢ_４剤の塩を含むコアは、その第１の層が水に可溶性であるか非酸性の水の中で急速に崩壊し、そうでなければ不活性である薬剤として許容される物質からなる２層以上の層でコーティングされていることが好ましい。この第１の層は、アルカリ性の反応性コア材料を、腸溶コーティングである外層と隔てる。長期の貯蔵の間、剤形の安定性を良好にするために、最終的な腸溶コーティング剤形は、適切な方法で処理して水の含量を非常に低いレベルに減少させる。

コア
ＬＴＢ_４剤は、最終混合物において好ましい濃度の活性化合物が得られるように、不活性で好ましくは水溶性の慣用的な薬剤成分と混合し、かつ、混合物の粒子に水が吸着されるか混合物に水を少量加えた際に上記「ミクロｐＨ」を生み出すアルカリ性の反応性であり、そうでなければ不活性の薬剤として許容される物質（または複数の物質）と混合する。そうした物質は、リン酸、炭酸、クエン酸または他の適切な弱い無機酸もしくは有機酸のナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびアルミニウムの塩などの物質；水酸化アルミニウム、水酸化カルシウムおよび水酸化マグネシウムなどの制酸配合物中に通常用いられる物質；Ａｌ_２Ｏ_３．６ＭｇＯＣＯ_２．１２Ｈ_２Ｏ、（Ｍｇ_６Ａｌ_２（ＯＨ）_１６ＣＯ_３．４Ｈ_２Ｏ）、ＭｇＯ．Ａｌ_２Ｏ_３．２ＳｉＯ_２．ｎＨ_２Ｏなどのマグネシウムの酸化物もしくは複合物質（ただし、ｎは整数ではなく２未満である）または類似の化合物；トリスヒドロキシメチルアミノメタンまたは類似の薬剤として許容されるｐＨ緩衝物質などの有機ｐＨ緩衝物質から選択することができる。

次いで粉末混合物は、従来の薬剤学的手順によって小さいビーズ状物、すなわちペレットまたは錠剤として製剤される。ペレットまたは錠剤はさらに加工するためのコアとして用いられる。

分離層
ＬＴＢ_４剤を含むアルカリ性の反応性コアは、遊離カルボキシル基を含む腸溶コーティングポリマーから分離しなければならない。そうしないと、コーティングの過程または貯蔵の間にＬＴＢ_４剤の分解が引き起こされる。サブコーティング層（分離層）は、その中で外側からアルカリ性コアの方へ拡散する水素イオンが、アルカリ性コアからコーティング粒子の表面の方へ拡散するヒドロキシルイオンと反応することができるｐＨ−緩衝区域としても作用する。分離層のｐＨ緩衝特性は、例えば、マグネシウムの酸化物、水酸化物または炭酸塩、アルミニウムまたはカルシウムの水酸化物、炭酸塩またはケイ酸塩；Ａｌ_２Ｏ_３．６ＭｇＯＣＯ_２．１２Ｈ_２Ｏ、（Ｍｇ_６Ａｌ_２（ＯＨ）_１６ＣＯ_３．４Ｈ_２Ｏ）、ＭｇＯ．Ａｌ_２Ｏ_３．２ＳｉＯ_２．ｎＨ_２Ｏ（ただし、ｎは整数ではなく２未満である）または類似の化合物などの複合アルミニウム／マグネシウム化合物；あるいは例えば、リン酸、クエン酸または他の適切な弱い無機酸もしくは有機酸のナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムおよびアルミニウム塩などの他の薬剤として許容されるｐＨ緩衝物質などの制酸製剤で通常用いられる化合物の群から選択される物質を層の中に導入することによってさらに強化することができる。

分離層は、ｐＨ緩衝物質を任意選択で含む１つまたは複数の水溶性不活性層からなる。

分離層は、適切なコーティングパンまたは流動床装置において従来のコーティング手順で、水および／またはコーティング溶液のための通常の有機溶媒を用いてコア（ペレットまたは錠剤）に塗布することができる。分離層用の材料は、例えば、糖、ポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシメチルセルロースまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの膜コーティング用途に用いられる薬剤として許容される水溶性の不活性化合物またはポリマーから選択される。分離層の厚さは２μｍ以上であり、小さい球状ペレットのためには好ましくは４μｍ以上であり、錠剤のためには好ましくは１０μｍ以上である。

錠剤の場合、ドライコーティング技術によって、コーティングを施すための他の方法を実施することができる。まず、酸不安定性化合物を含む錠剤を上記のようにして押圧する。適切な打錠機を用いて、この錠剤の周りに他の層を押圧する。外側の分離層は、薬剤として許容される水溶性または水中で急速に崩壊する錠剤用賦形剤からなる。分離層は１ｍｍ以上の厚さを有する。通常の可塑剤、顔料、二酸化チタン、タルクおよび他の添加剤を分離層中に含めることもできる。

腸溶コーティング層は、例えば、水および／または適切な有機溶中のポリマーの溶液、あるいは前記ポリマーのラテックス懸濁液を用いたパンコーティングまたは流動床コーティングなどの従来のコーティング技術によってサブコーティングされたコア上に塗布する。腸溶コーティングポリマーとして、例えば、セルロースアセテートフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ポリビニルアセテートフタレート、共重合メタクリル酸／メタクリル酸メチルエステル、例えばＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１２，５またはＥｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００、（Ｒｏｈｍ Ｐｈａｒｍａ）の商品名で知られている化合物または腸溶コーティングを得るのに用いられる類似の化合物を用いることができる。

腸溶コーティングは、水をベースとしたポリマー分散液、例えばＡｑｕａｔｅｒｉｃ（ＦＭＣ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）Ｌ１００−５５（Ｒｏｈｍ Ｐｈａｒｍａ）、Ｃｏａｔｉｎｇ ＣＥ５１４２（ＢＡＳＦ）を用いて塗布することもできる。腸溶コーティング層は、セタノール、トリアセチン、例えばＣｉｔｒｏｆｌｅｘ（登録商標）（Ｐｆｉｚｅｒ）の商品名で知られているものなどのクエン酸エステル、フタル酸エステル、コハク酸ジブチルまたは類似の可塑剤などの薬剤として許容される可塑剤を任意に含むことができる。

可塑剤の量は通常、各腸溶コーティングポリマーについて最適化され、一般に腸溶コーティングポリマーの１〜２０％の範囲である。タルクなどの分散剤、着色剤および顔料も腸溶コーティング層中に含めることができる。

したがって、本発明による腸溶コーティングした配合物は、アルカリ性の反応性化合物と混合したＬＴＢ_４剤を含むコアか、アルカリ性の反応性化合物と混合した酸不安定性化合物のアルカリ性塩を含むコアからなる。コアは、アルカリ性コアを腸溶コーティングから分離する、ｐＨ緩衝物質を任意に含む水溶性または水中で急速に崩壊するコーティング材でコーティングする。サブコーティングされた剤形は腸溶コーティング材で最終的にコーティングされ、その剤形を、酸媒体においては不溶性にするが、中性からアルカリ性の媒体、例えば溶解を要する部位である小腸の近位部に存在する液体などの中では急速に崩壊するかその中に溶解するようにする。

キレート化剤
「キレート化剤」という表現は、当業界で一般に知られている金属キレート化剤を含むものとする。金属イオン用のキレート剤は、通常、様々な親和度で金属イオンを封鎖することができる、非常に多くの負に荷電したリガンドおよび／または電子リッチなリガンドを有する多官能性分子である。適切な電子リッチな官能基には、カルボン酸基、ヒドロキシ基およびアミノ基が含まれる。アミノポリカルボン酸、ヒドロキシポリカルボン酸、ヒドロキシアミノカルボン酸等の中のこれらの基の配置によって、優れたキレート剤として挙動する部分がもたらされる。これらには、例えばエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）、Ｎ−２−アセトアミド−２−イミノ二酢酸（ＡＤＡ）、ビス（アミノエチル）グリコールエーテル、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）、トランス−ジアミノシクロヘキサン四酢酸（ＤＣＴＡ）、グルタミン酸、およびアスパラギン酸などのアミノポリカルボン酸；例えばＮ−ヒドロキシエチルイミノ二酢酸（ＨＩＭＤＡ）、Ｎ，Ｎ−ビス−ヒドロキシエチルグリシン（ビシン）およびＮ−（トリスヒドロキシメチルメチル）グリシン（トリシン）などのヒドロキシアミノカルボン酸；ならびに、グリシルグリシンなどのＮ−置換グリシンが含まれる。他の候補のキレート剤には、２−（２−アミノ−２−オキソクチル）アミノエタンスルホン酸（ＢＥＳ）が含まれる。上記のものはすべて、カルボキシルまたは他の酸性官能基の塩も含む。

そうした塩の例には、ナトリウム、カリウムおよび他の弱く結合した金属イオンで形成される塩が含まれ、塩の性質および中和される電荷の数は、存在するカルボキシル基の数、および安定化させるキレート剤が供給されるｐＨに依存することになる。

当業界で理解されているように、キレート化剤は、それが個々の目的イオンと結合する強度は様々である。一般に、重金属イオンは、同様に荷電したより低い分子量の対応するイオンより強く結合する。例えば、いくつかの場合、供給されたキレート剤のカルシウム塩を使用する能力によって、Ｃｕ^＋２はＣａ^＋２より均一に強くキレート化される。相対的強度を評価するために、本明細書では、製剤のｐＨでの銅イオンについての安定定数を、キレート剤の比較のための任意標準として用いる。これらの安定定数はもちろんｐＨ依存性である。これらは文献で容易に入手することができ、例えば、Ｐｅｒｒｉｎ，Ｄ．Ｄ．等、“Ｂｕｆｆｅｒｓ ｆｏｒ ｐＨ ａｎｄ Ｍｅｔａｌ Ｉｏｎ Ｃｏｎｔｒｏｌ”Ｃｈａｐｍａｎ ＆ Ｈａｌｌ，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｎ．Ｙ．，（１９７４）、特に、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｏｎ ｏｆ Ｐｕｒｅ ＆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：“Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ Ｃｏｎｓｔａｎｔｓ”、ｓｕｐｐｌ １（１９７１）Ａｌｄｅｎ ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄに見ることができる。これらの文献に記載されているＣｕ^＋２錯体の安定度の値をキレート剤の強度の尺度として用いて、キレート剤の強度の区分を設定することができる。「ログベータ（ｌｏｇ ｂｅｔａ）」値が用いられ、これは錯体についての解離定数の対数に負号をつけたものである。したがって、ログベータの値が高くなればなるほど、銅イオンとキレート部分の間の会合はより強くなる。もちろん、キレート剤中に含まれる種々のカルボン酸基は、それらが負に荷電している場合、封鎖されたイオンとより強く結合するので、測定を行うｐＨが重要である。

本発明で特に有用なものは、約７以上の銅イオンのログベータ値（提示した製剤のｐＨで測定して）を有するキレート剤；より好ましくは１０以上の値を有するキレート剤；最も好ましくは使用の際のｐＨで１５以上のログベータ値を有するキレート剤である。したがって、例えばトリシン、ビシン、ＡＤＡおよびＨＩＭＤＡが、それらがかなり強力なので好ましい。より好ましくはＮＴＡ、ＤＴＰＡおよびＥＤＴＡである。本発明で用いるのに最も好ましいキレート剤はＥＤＴＡおよびＤＴＰＡである。

非常に多くのキレート化剤が当業界で知られており、候補のキレート剤は、目的とする使用ｐＨで銅イオンについてのそのログベータ値を測定することによって容易に評価することができ、もしそれらの候補のキレート剤が患者に投与する組成物に使用可能な薬剤として許容される特性を有している場合には、本発明の方法および本発明の組成物において使用するために好都合に評価することができる。

製剤の残余のものの性質に応じて様々なキレート剤が異なる量で存在していてよいが、水への溶解性も考慮しなければならない。

キレート化剤は安定化させる量で存在するが、キレート化剤総重量のパーセントは製剤全体の約０．００１％〜約１．０％（重量／重量）であってよい。キレート化剤総重量のパーセントは約０．０１％〜約０．１％（重量／重量）の量であることが好ましい。これらの値は、薬剤学的適応のための最終の再構成生産物に属するものである。製剤を凍結乾燥する場合、乾燥ケーキ中のキレート化剤のパーセントは約１０〜約４０％もあってよい。したがって、乾燥形態では、キレート化剤は約０．０１％〜約４０％総重量、好ましくは約１．０％〜約３０％の量で存在することができる。当業者が理解されるように、製剤中におけるキレート化剤のパーセントは、活性化合物を処方するのに必要な具体的な充てん剤に応じて変化する。充てん剤中かあるいは組成物中に存在する問題の金属イオンのレベルが高くなればなるほど、必要なキレート剤のレベルは高くなることが明らかである。以下で説明する技術を用いれば、キレート化剤の最適濃度を決めることは容易である。

以下の実施例を参照すれば、本発明をより容易に理解されよう。これらの実施例は、本発明を説明するためであってその範囲を限定するものではない。

（実施例１）
材料および方法
ＬＴＢ_４（酸の形態）は、Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｉｏｃｈｅｍ（Ｕ．Ｋ．）からエタノール／水、９５／５中の溶液で入手した。この出発材料の純度レベルは逆相ＨＰＬＣで評価して約９８．５％（±０．３％）であった。エタノール系ＬＴＢ_４溶液を１当量の水酸化ナトリウムで中和してＬＴＢ_４ナトリウム（Ｎａ）塩を得た。ＬＴＢ_４Ｎａ塩のエタノール溶液を、ロトエバポレーターと水浴（３０℃）を用いて減圧下で乾燥するまで蒸発させて、油状の残留物を得た。残留物を、ｐＨ７．４で０．０１％エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含む、あるいは含まないダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水（ＤＰＢＳ）中に再溶解して、１５ｍｇのＬＴＢ_４／ｍｌの最終濃度を得た。その溶液を２ｍｌのＩ型のホウケイ酸塩ガラスバイアル中に分注し、次いでこれを、テフロンライニングしたゴム製ストッパーとアルミニウムキャップを用いて、アルゴン雰囲気で密封した。試料は、指定の時間点で分析するまで、２５±５℃で暗所に貯蔵した。ＬＴＢ_４溶液の分析は、Ｃ１８、５μ粒子、４．７×２５０ｍｍカラム（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ）と、メタノール／アセトニトリルのグラジエント溶離液を用いて逆相ＨＰＬＣにより実施した。ＬＴＢ_４および不純物の検出はＨＰＬＣＵＶ分光光度計を用いて２７０ｎｍでオンラインで実施した。

結果
図１に示すように、ＥＤＴＡを含まない５ｍｇ／ｍｌのＬＴＢ_４Ｎａ塩水溶液は、２５℃で７日間貯蔵した後ですでに高いレベルの不純物を示しており、１４日間の貯蔵後で不純物レベルは２３．３％のＬＴＢ_４ピーク面積に達した。これに対して、０．０１％ＥＤＴＡを含む５ｍｇ／ｍｌのＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液は、１４日間までの貯蔵で分解の進行が見られず、２５℃で６０日間および９０日間貯蔵後で、それぞれ２．９％および８．６％の不純物レベルを有していた。これらのデータは明らかに、ＥＤＴＡが、ＬＴＢ_４Ｎａ塩の水溶液の分解を劇的に遅延させていることを示している。

（実施例２）
材料および方法
エタノール／水、９５／５中に１２ｍｇ／ｍｌの濃度のＬＴＢ_４（酸の形態）の溶液（Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｉｏｃｈｅｍ，Ｕ．Ｋ．より）を１当量の水酸化ナトリウムで中和してＮａ塩を生成した。実施例２から７に記載の実験で用いたこの出発材料は、逆相ＨＰＬＣで評価して９６．８％（±０．３％）の純度レベルを有していた。ＬＴＢ_４Ｎａ塩のエタノール溶液を蒸発させて（実施例１参照）油状の残留物を得た。次いで、２５ｍｇ／ｍｌのＬＴＢ_４Ｎａ塩の等張性溶液を得るために、残留物を、０．０１％ＥＤＴＡを含むリン酸緩衝塩化ナトリウム溶液（生理食塩水）（３０ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ７．５）中に再溶解させた。その２５ｍｇ／ｍｌ溶液を、０．０１％ＥＤＴＡを含む等張性３０ｍＭナトリウムリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．５で希釈して、０．１ｍｇ／ｍｌのＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液を得た。溶液の一定分量を実施例１で述べたようにして２ｍｌのＩ型のガラスバイアルに分注し、空気雰囲気下、４０±５℃の暗所で貯蔵した。ＬＴＢ_４および不純物を、指定した時間で、２７０ｎｍでのＵＶ検出を用いて逆相ＨＰＬＣにより分析した。

結果
図２は、０．１および２５ｍｇ／ｍｌの濃度でのＬＴＢ_４Ｎａ塩の等張性ｐＨ７．５水溶液の強制分解試験（４０℃）の結果を示す。データは、ＬＴＢ_４Ｎａ塩の２５ｍｇ／ｍｌ溶液が０．１ｍｇ／ｍｌのＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液よりずっと安定性が低いことを明らかに実証しており、ＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液における安定性と濃度に逆相関関係があることを示している。０．０１ｍｇ／ｍｌのＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液の安定性は、０．１ｍｇ／ｍｌの溶液の安定性と同様であった（データは示していない）。

（実施例３）
材料および方法
ＬＴＢ_４Ｎａ塩（実施例２参照）の２５ｍｇ／ｍｌ溶液を、０．０１％ＥＤＴＡを含む適切なリン酸／グリシン緩衝生理食塩水で希釈することによって、０．０１％ＥＤＴＡを含むリン酸／グリシン緩衝生理食塩水（３ｍＭリン酸ナトリウムおよび１０ｍＭグリシン緩衝液、ｐＨ７．５、８．５、９．５および１０．５）中の１．７５ｍｇ／ｍｌの濃度の等張性ＬＴＢ_４Ｎａ塩水溶液を得た。溶液を２ｍｌバイアルに分注して、空気雰囲気下、４±４℃および２０±５℃の暗所で９ヵ月間貯蔵し、続いて実施例１に記載のようにしてＬＴＢ_４および不純物の逆相ＨＰＬＣ分析を実施した。

結果
図３は、試料のＨＰＬＣ分析によって検出された不純物のレベルの低下に見られるように、等張性ＬＴＢ_４Ｎａ塩水溶液のｐＨを増大させると、ＬＴＢ_４の安定性が著しく増大することを明らかに示している。ＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液に対するアルカリ性ｐＨのこの安定化効果は４℃と２０℃の両方で観察された。これは、アルカリ性ｐＨの安定化効果が温度に依存しないことを示している。ＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液のｐＨを高くする強制分解試験（４０℃で貯蔵）でも、ＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液安定性（データは示していない）の劇的な改善が得られた。

（実施例４）
材料および方法
０．０１％ＥＤＴＡを含むリン酸緩衝生理食塩水（３ｍＭナトリウムリン酸緩衝液、ｐＨ７．５、８．５、９．５および１０．５）中への２５ｍｇ／ｍｌ（実施例２）のＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液の希釈によって、１７．５μｇ／ｍｌの濃度の等張性ＬＴＢ_４Ｎａ塩水溶液を得た。４つの異なるｐＨの１７．５μｇ／ｍｌのＬＴＢ_４Ｎａ塩の溶液を２ｍｌバイアルに分注して、空気雰囲気下、４±４℃および２０±５℃の暗所で１５ヵ月間貯蔵し、続いて実施例１に記載のようにしてＬＴＢ_４および不純物の逆相ＨＰＬＣ分析を実施した。

結果
試料のＨＰＬＣ分析によって検出された不純物のレベルの低下に見られるように、１７．５μｇ／ｍｌの等張性ＬＴＢ_４Ｎａ塩水溶液のｐＨを増大させると、ＬＴＢ_４の安定性が著しく増大することを図４は明らかに示している。４℃では、同じ溶液を１５ヵ月間貯蔵した後でもＬＴＢ_４の分解はほとんど見られないので、１７．５μｇ／ｍｌのＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液に対するアルカリ性ｐＨのこの安定化効果は、２０℃においてよりはっきりとする。図３に示すデータと合わせると、これらのデータは、１．７５ｍｇ／ｍｌならびに１７．５μｇ／ｍｌのＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液についてアルカリ性ｐＨの安定化効果が明らかに認められており、したがって、ＬＴＢ_４の広い濃度にわたって、アルカリ性ｐＨの安定化効果がもたらされていることを実証している。

（実施例５）
材料および方法
ＬＴＢ_４Ｎａ塩（実施例２）の２５ｍｇ／ｍｌ溶液を希釈することによって、０．０１％ＥＤＴＡおよび種々の濃度のグリシン（０．０１ｍＭ〜１０ｍＭ）を含むリン酸緩衝生理食塩水（３ｍＭナトリウムリン酸緩衝液、ｐＨ９．５）中に３５μｇ／ｍｌおよび３５０μｇ／ｍｌの濃度の等張性ＬＴＢ_４Ｎａ塩水溶液を得た。４つの異なるグリシン濃度での３５μｇ／ｍｌおよび３５０μｇ／ｍｌのＬＴＢ_４Ｎａ塩の溶液を２ｍｌバイアルに分注して、空気雰囲気下、４０±５℃の暗所で５ヵ月間貯蔵し、続いて実施例１に記載のようにしてＬＴＢ_４および不純物の逆相ＨＰＬＣ分析を実施した。

結果
この実験では、１０ｍＭグリシンを含み、４０℃で５ヵ月間貯蔵した３５μｇ／ｍｌ、ｐＨ７．５のＬＴＢ_４Ｎａ塩の溶液は、２０％の不純物レベル（データは示していない）を示した。測定された不純物レベルがより低い（６．５％）ことで示されているように、同じく３５μｇ／ｍｌのＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液でｐＨが９．５では、より安定であることを図５は示しており、これは、０．０１ｍＭ〜１０ｍＭの範囲のグリシン緩衝液の濃度が、ＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液の安定性にほとんど影響を及ぼしていないことを実証している。同じ４つの異なる濃度のグリシンについて、４０℃で５ヵ月間貯蔵した３５０μｇ／ｍｌ、ｐＨ９．５のＬＴＢ_４Ｎａ塩の溶液についても同様の観察結果であった。

（実施例６）
材料および方法
実施例５に記載のようにして、０．０１％ＥＤＴＡを含むリン酸緩衝生理食塩水（３ｍＭナトリウムリン酸緩衝液、ｐＨ７．５または９．５）中に３５μｇ／ｍｌの濃度の等張性ＬＴＢ_４Ｎａ塩水溶液を得た。凍結乾燥した際にＬＴＢ_４Ｎａ塩および賦形剤のすべての成分を含む固体残留物（マンニトールブレッド）を生成させるために、マンニトールを、すべての溶液に最終濃度が４％となるように加えた。脂肪酸フリー（脱脂された）のヒト血清アルブミン（ＨＳＡ，Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｓｔ−Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を、溶液のいくつかに１ｍｇ／ｍｌの最終濃度となるように加え、続いて最終ｐＨ（７．５〜９．５に）に調節した。溶液を２ｍｌバイアル中に分注し、−２０℃で凍結させ、凍結乾燥した。次いで、凍結乾燥した溶液（マンニトールブレッド）を含むバイアルを、実施例１に記載のようにして密封し（ただしアルゴンではなく空気雰囲気下で）、４０±５℃の暗所で貯蔵した。１．５ヵ月または４．５ヵ月間後、バイアルを開封し、マンニトールブレッド（ＬＴＢ_４を含む）を１ｍｌの水で溶解して、元のＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液を３５μｇ／ｍｌで再生成させた。次いで、ＬＴＢ_４および不純物を、実施例１に記載のようにして逆相ＨＰＬＣにより分析した。

結果
凍結乾燥後（時間０）で水に直ぐに再溶解させた、３５μｇ／ｍｌ、ｐＨ７．５の凍結乾燥したＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液は、２．９％の不純物のレベルを示しており、４０℃で１．５ヵ月および４．５ヵ月間貯蔵した同一の凍結乾燥試料はそれぞれ２２．７％および５１．３％の不純物レベルであることを図６は示している。図６は、凍結乾燥の前にＨＳＡをＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液（ｐＨ７．５）に加えると、１．５ヵ月間貯蔵した後、不純物のレベルがほぼ５０％減少することも示している。図６はまた、凍結乾燥の前にＬＴＢ_４溶液のｐＨを７．５から９．５へ上昇させると、１．５ヵ月間貯蔵した後でも（ＨＳＡの存在下）、４．５ヵ月間貯蔵した後でも不純物のレベルが著しく減少することも明白に示している。これらのデータは、アルカリ性ｐＨは、固体形態において、すなわちマンニトールの存在下、およびＨＳＡの存在下または非存在下での凍結乾燥後においても、ＬＴＢ_４Ｎａ塩の安定性を増加させることを明らかに実証している。

（実施例７）
材料および方法
製造メーカー（Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｉｏｃｈｅｍ，ＵＫ）から入手したＬＴＢ_４（酸の形態）（ＥｔＯＨ／水、９５／５）のエタノール溶液をＥｔＯＨ／水、９５／５で希釈して、９ｍｇ／ｍｌおよび０．９ｍｇ／ｍｌのＬＴＢ_４（酸の形態）のエタノール溶液を調製した。１．０５当量の水酸化ナトリウムを加えて９ｍｇ／ｍｌおよび０．９ｍｇ／ｍｌのＬＴＢ_４ナトリウム塩のエタノール溶液を得た。ＥｔＯＨ／水、９５／５中に１２ｍｇ／ｍｌおよび１．２ｍｇ／ｍｌのＬＴＢ_４ナトリウム塩の溶液（３容積）を、ｐＨ１０．５の４０ｍＭグリシン緩衝液（１容積）と混合することによって、ｐＨ１０．５（水酸化ナトリウム）の７５／２５ＥｔＯＨ／（水中に１０ｍＭグリシン）中に９ｍｇ／ｍｌおよび０．９ｍｇ／ｍｌの濃度のＬＴＢ_４ナトリウム塩の溶液を得た。溶液を２ｍｌバイアルに分注して、空気雰囲気下、−８０℃および４０±５℃の暗所で１７ヵ月間貯蔵し、続いて実施例１に記載のようにしてＬＴＢ_４および不純物の逆相ＨＰＬＣ分析を実施した。

結果
２つの異なる濃度でのＬＴＢ_４（酸の形態）またはＬＴＢ_４Ｎａ塩のエタノール溶液のこの強制分解試験の結果を図７に示す。４０℃で１７ヵ月間貯蔵した後、９．０ｍｇ／ｍｌのＬＴＢ_４（酸の形態）エタノール（ＥｔＯＨ／水、９５／５）溶液は、１００％のＡＵＣ（２７０ｎｍでの曲線下の面積）の不純物レベルで、完全な分解（ＬＴＢ_４は検出できず）を示した。図７は、１．０５当量の水酸化ナトリウムを加えて、ＬＴＢ_４をそのナトリウム塩に変化させた場合、同一条件下で得られたエタノールＬＴＢ_４Ｎａ塩溶液の安定性はわずか５．４％の不純物レベルであり、劇的に改善されることを明らかに示している。同様に、７５／２５ＥｔＯＨ １０ｍＭグリシンｐＨ１０．５中のＬＴＢ_４ナトリウム塩溶液の強制分解試験によって、アルカリ性ｐＨ下でＬＴＢ_４のナトリウム塩は、ＥｔＯＨ／水、９５／５におけるその酸の形態のＬＴＢ_４より、著しく安定である（３．８％の不純物レベル）ことが実証された。１０分の１の濃度（０．９ｍｇ／ｍｌ）のＬＴＢ_４（酸の形態）およびＬＴＢ_４ナトリウム塩の溶液についても同じ結論を得ることができる。すなわち、９５／５ＥｔＯＨ水中のＬＴＢ_４の酸の形態（ＡＵＣの不純物レベル６２％）より、９５／５ＥｔＯＨ／水または７５／２５ＥｔＯＨ／１０ｍＭグリシンｐＨ１０．５中のＬＴＢ_４のナトリウム塩の安定性は増加している（それぞれ、４．９％および４．３％のＡＵＣの不純物レベル）。−８０℃で１７ヵ月間貯蔵した９ｍｇ／ｍｌおよび０．９ｍｇ／ｍｌのＬＴＢ_４の同じ３つのエタノール製剤で測定した不純物レベルは、２．８から３．７％のＡＵＣと変動した（データは示していない）。以下の表１は、−８０℃および４０℃で１７ヵ月間貯蔵したＬＴＢ_４のエタノール製剤において測定したｐＨ値を示す。このデータは、安定性の向上が製剤のより高いｐＨと強く対応していることを明らかに実証している。最後に、図７はまた、ＬＴＢ_４Ｎａ塩の水溶液について観察されたのと同様に、９５／５ＥｔＯＨ／水中のＬＴＢ_４のより高濃度（９ｍｇ／ｍｌ）の溶液は、同一実験条件で、ＬＴＢ_４のより希釈された（０．９ｍｇ／ｍｌ）溶液より安定性が低いことも示している。

（実施例８）
材料および方法
ＬＴＢ_４および類似体を酸の形態のエタノール溶液として得た。ＬＴＢ_４はＣａｓｃａｄｅ Ｂｉｏｃｈｅｍ（ＵＫ）から、ＬＴＢ_５はＢｉｏｍｏｌ（Ｐｌｙｍｏｕｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ，ＰＡ，ＵＳＡ）から入手し、他のすべての化合物（ＬＴＢ_３、トリフルオロ−ＬＴＢ_４、２０−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４および５−ＨＥＴＥ）はＣａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ，ＵＳＡ）から入手した。１当量の水酸化ナトリウムを加えて、種々のＬＴＢ_４剤（ＬＴＢ_４および類似体）のナトリウム塩のエタノール溶液を得た。ＬＴＢ_４剤のナトリウム塩のエタノール溶液を窒素気流下で乾燥するまで蒸発させ、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５またはｐＨ９．５に調節した１０ｍＭグリシン、０．０１％ＥＤＴＡを含むリン酸塩（３０ｍＭ）緩衝生理食塩水中に〜３５μｇ／ｍｌの濃度で再溶解した。即時分析（ｔ_０）するために一定分量の溶液をとり、残る３５μｇ／ｍｌのＬＴＢ_４剤Ｎａ塩の溶液を２ｍｌバイアルに分注して、空気雰囲気下、４０±５℃の暗所で６ヵ月間貯蔵し、続いて実施例１に記載のようにしてＬＴＢ_４剤および不純物の逆相ＨＰＬＣ分析を実施した。

結果
この実験では、図８に示すように（白地のバー）、３５μｇ／ｍｌのＬＴＢ_４剤ナトリウム塩の種々の溶液は、２％〜１５％で変動する初期（ｔ_０）不純物レベルを示した。図８は、４０℃、ｐＨ７．５で６ヵ月間貯蔵したすべてのＬＴＢ_４剤溶液において不純物レベルが著しく増大していることを示している（灰色のバー）。より高い９．５のｐＨで、４０℃で６ヵ月間貯蔵した同じＬＴＢ_４剤の溶液は、すべての溶液において、不純物レベルがより低いことから実証されているように（黒色のバー）、著しく安定していることも図８は示している。

（実施例９）
材料および方法
ＬＴＢ_４および類似体を酸の形態のエタノール溶液として得た。エナンチオ−ＬＴＢ_４はＣａｓｃａｄｅ Ｂｉｏｃｈｅｍ（ＵＫ）から、他のすべての化合物（６−トランス−ＬＴＢ_４、１２−エピ−ＬＴＢ_４および６−トランス−１２−エピ−ＬＴＢ_４）はＣａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ，ＵＳＡ）から入手した。１当量の水酸化ナトリウムを加えて、種々のＬＴＢ_４剤（ＬＴＢ_４および類似体）のナトリウム塩のエタノール溶液を得た。ＬＴＢ_４剤のナトリウム塩のエタノール溶液を窒素気流下で乾燥するまで蒸発させ、水酸化ナトリウムでｐＨ７．５またはｐＨ９．５に調節した１０ｍＭグリシン、０．０１％ＥＤＴＡを含むリン酸塩（３０ｍＭ）緩衝生理食塩水中に〜３５μｇ／ｍｌの濃度で再溶解した。即時分析（ｔ_０）するために一定分量の溶液をとり、残る３５μｇ／ｍｌのＬＴＢ_４剤Ｎａ塩の溶液を２ｍｌバイアルに分注して、空気雰囲気下、４０±５℃の暗所で６ヵ月間貯蔵し、続いて実施例１に記載のようにしてＬＴＢ_４剤および不純物の逆相ＨＰＬＣ分析を実施した。

結果
この実験では、図９に示すように（白地のバー）、３５μｇ／ｍｌのＬＴＢ_４剤ナトリウム塩の種々の溶液は、２％〜１５％の初期（ｔ_０）不純物レベルを示した。図９は、４０℃、ｐＨ７．５で６ヵ月間貯蔵したすべてのＬＴＢ_４剤溶液における不純物レベルが著しく増大していることを示している（灰色のバー）。より高い９．５のｐＨで、４０℃で６ヵ月間貯蔵した同じＬＴＢ_４剤の溶液は、すべての溶液において、不純物レベルがより低いことから実証されているように（黒色のバー）、著しく安定していることも図９は示している。

（実施例１０）
材料および方法
Ｃａｓｃａｄｅ Ｂｉｏｃｈｅｍ（ＵＫ）から入手したＬＴＢ_４（酸の形態）のエタノール溶液に１当量の水酸化ナトリウムを加えて中和してＬＴＢ_４ナトリウム塩を調製した。一定分量のＬＴＢ_４ナトリウム塩のエタノール溶液を２ｍｌバイアルに分注し（バイアルあたり２ｍｇのＬＴＢ_４が得られるように）、溶媒を窒素気流下で乾燥するまで蒸発させた。バイアル中の残留物を、０．９％塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）（バイアル１）、０．１ｍＮ ＮａＯＨ中に０．９％ＮａＣｌ（バイアル２）、１ｍＮ ＮａＯＨ中に０．９％ＮａＣｌ（バイアル３）、１０ｍＮ ＮａＯＨ中に０．９％ＮａＣｌ（バイアル４）、０．１Ｎ ＮａＯＨ中に０．３％ＮａＣｌ（バイアル５）および１Ｎ ＮａＯＨ（バイアル６）で溶解させた。即時分析（ｔ_０）するために一定分量の溶液をとり、残る２ｍｇ／ｍｌのＬＴＢ_４ナトリウム塩の溶液を、空気雰囲気下、４０±５℃の暗所で５週間貯蔵し、続いて実施例１に記載のようにしてＬＴＢ_４および不純物の逆相ＨＰＬＣ分析を実施した。

結果
水酸化ナトリウム濃度を増加させた（ｐＨを増大させて）、ＬＴＢ_４ナトリウム塩の水溶液の強制分解試験の結果を図１０に示す。得られたデータは、ＬＴＢ_４ナトリウム塩は、４０℃で５週間貯蔵した後、ｐＨをｐＨ５未満の値に低下させたバイアル＃１および＃２では、完全に分解して１００％（ＬＴＢ_４は検出できず）の不純物レベルとなっていることを実証している。これに対して、最終ｐＨ（５週間後）がそれぞれ８．０２、９．８３、１２．５０および１３．０３であったバイアル３〜６では、不純物レベルはそれぞれ５．３４、３．４６、４．３８および５．７７（ＡＵＣ２７０ｎｍの％）と測定された。初期不純物レベル（ｔ_０で）は２．６５から３．３５％と変動した。これらのデータは、ＬＴＢ_４ナトリウム塩溶液は、緩衝液およびキレート化剤の非存在下で、広範囲のｐＨにわたって、アルカリ性ｐＨで著しく安定化されていることを明らかに実証している。

（実施例１１）
この実施例では、３つの異なる経路、静脈内（ｉ．ｖ．）、空腸内（ｉ．ｊ．）および皮下（ｓ．ｃ．）による投与に続いて、ＬＴＢ_４の薬物動態を検討した。

３匹のメスのスプラーグドーリーラット（体重〜２５０ｇ）の３つのグループを用いた。動物を１８時間断食させ、ケタミン／キシラジンで麻酔し、血液の反復サンプリングができるように、その頸静脈にカニューレを挿入した。ＬＴＢ_４を、すべての経路について、４ｍｌ／ｋｇのドーズ容積、５０μｇ／ｋｇの用量で投与した。血液試料（０．５ｍｌ／試料）を、ＬＴＢ_４注射に続いて０、０．５、１、２、５、１５、３０および６０分で採取した。血液試料を直ぐにＥＤＴＡで抗凝固処理し、氷水浴に移し、遠心分離にかけて血漿を単離した。血漿試料を−８０℃で貯蔵し、続いて市販のＥＬＩＳＡ（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ，ＭＩ，ＵＳＡ）でＬＴＢ_４含量を分析した。尾静脈経由でＬＴＢ_４をｉ．ｖ投与した（１５秒ボーラス）。ｉ．ｊ．投与については、腹腔を開口した後、ＬＴＢ_４を空腸中に直接注射した。ｓ．ｃ．投与は背部で実施した。

図１１Ａは、ラットにおける５０μｇ／ｋｇの用量でのｉ．ｊ．投与に続くＬＴＢ_４の薬物動態を示す。データは、ｉ．ｊ．注射に続いてラットの血漿ＬＴＢ_４濃度は急速に増大し、ｉ．ｊ．投与後５分間で最大レベルに到達していることを示している。データは、ｉ．ｊ．投与後３０分間でＬＴＢ_４血漿レベルがベースラインレベルに戻っていることも示している。これらのデータは、ＬＴＢ_４が空腸から末梢循環系に十分送られていることを明らかに示している。図１１Ｂは、３つの異なる投与経路での曲線下の面積（ＡＵＣ）（ＬＴＢ_４血漿濃度について）の比較を示している。この場合、薬物動力学的パラメータＡＵＣは、薬物への全身曝露を示している。予測されるように、循環系に直接投与された（ｉ．ｖ．注射）ＬＴＢ_４は、最も高いＡＵＣの結果をもたらした。しかし、これらのデータは、ＬＴＢ_４のｉ．ｊ．注射でのＡＵＣはｉ．ｖ．でのＬＴＢ_４の３５％もの高さであり、これはｉ．ｊ．投与すると、ＬＴＢ_４の循環系への摂取が効率的であることも明らかに示している。これらのデータは、小腸に送達するための適切な製剤を用いたＬＴＢ_４の経口投与が、薬物を全身投与するための効率的な経路であることをさらに示唆している。比較のために、ＬＴＢ_４のｓ．ｃ．投与についてのＡＵＣを示している。ラットのモデルにおいて、皮下投与は、ＬＴＢ_４を投与するのに効果的な方法であることは当業界で周知である。

本発明を、その具体的な実施形態に関連して説明してきたが、そのさらなる改変が可能であり、本出願は、一般に本発明の原理に従い、かつ、それに本発明が関係する当業界の周知か慣用的な実務の範囲内にあるような本発明の開示からの発展を含む本発明の任意の変更形態、使用または適用形態を、上記し、添付の特許請求の範囲に示した本質的特徴に適用できるものとして包含するものとすることを理解されよう。

キレート化剤ＥＤＴＡが、ｐＨ７．４でのＬＴＢ_４Ｎａ塩の水溶液の安定性を増加させることを示す図である。 ＬＴＢ_４Ｎａ塩の水溶液の安定性に対するＬＴＢ_４濃度の影響を示す図である。 １．７５ｍｇ／ｍｌでのＬＴＢ_４Ｎａ塩の水溶液の安定性に対するｐＨ（リン酸／グリシン緩衝液）の影響を示す図である。 １７．５μｇ／ｍｌでのＬＴＢ_４Ｎａ塩の水溶液の安定性に対するｐＨ（リン酸緩衝液）の影響を示す図である。 ＬＴＢ_４Ｎａ塩の水溶液の安定性に対する異なる緩衝強度（リン酸／グリシン緩衝液）の影響を示す図である。 ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）または／およびアルカリ性ｐＨ（リン酸緩衝液）がＬＴＢ_４Ｎａ塩の凍結乾燥水溶液（マンニトールを含む）の安定性を増加させることを示す図である。 アルカリ性ｐＨ（リン酸／グリシン緩衝液）が、ＬＴＢ_４（酸の形態およびＮａ塩）のエタノール溶液（９５／５、エタノール／水および７５／２５、エタノール／緩衝液、容積／容積）の安定性を増加させることを示す図である。 アルカリ性ｐＨ（リン酸／グリシン緩衝液）が、溶液中において種々のＬＴＢ_４剤の安定性を増加させることを示す図である。 アルカリ性ｐＨ（リン酸／グリシン緩衝液）が、溶液中において種々のＬＴＢ_４剤の安定性を増加させることをさらに示す図である。 ＬＴＢ_４が広範囲のアルカリ性ｐＨにわたって安定化され、安定性を確実にするためには高いｐＨを維持しなければならないことを示す図である。 ラットのモデルにおける空腸内投与によるＬＴＢ_４の効率的摂取を示し、かつ、静脈内投与および皮下投与と比較して示す図である。

Claims (23)

1. 安定化したＬＴＢ_４剤の医薬製剤であって、
   ＬＴＢ_４剤を安定化させるのに有効であり、それによって前記製剤の貯蔵寿命を増加させる８．２〜１４のアルカリ性ｐＨの薬剤として許容される担体、または薬剤として許容されるアルカリ性の反応性担体とともに、治療有効量のＬＴＢ_４剤、その塩、そのエステルまたはそのエーテルを含み、
   前記ＬＴＢ_４剤が、ＬＴＢ_４、１４，１５−ジヒドロ−ＬＴＢ_４、１７，１８−デヒドロ−ＬＴＢ_４、１９−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４、２０−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４ 、５（Ｓ）−ヒドロキシ−６，８，１１，１４（Ｅ，Ｚ，Ｚ，Ｚ）−エイコサテトラエン酸（「５−ＨＥＴＥ」）、１４，１５−ジヒドロ−５−ＨＥＴＥ、１７，１８−デヒドロ−５−ＨＥＴＥからなる群から選択される１種または複数のポリ不飽和脂肪酸であり、
   安定化したＬＴＢ_４製剤が凍結乾燥形態、結晶形態または固体非晶質形態である場合に、混合物の粒子に水が吸着されるか混合物に水を少量加えた際、アルカリ性の反応性担体が、各ＬＴＢ_４粒子の周りにアルカリ性の８．２〜１４のミクロｐＨを生み出し、そうでなければ不活性な、薬剤として許容される物質（または複数の物質）である医薬製剤。
2. ８．２〜１４のアルカリ性ｐＨの薬剤として許容される担体、または薬剤として許容されるアルカリ性の反応性担体とともに、ＬＴＢ_４剤、その塩、そのエステルまたはそのエーテルを含む組成物であって、
   前記ＬＴＢ_４剤が、ＬＴＢ_４、１４，１５−ジヒドロ−ＬＴＢ_４、１７，１８−デヒドロ−ＬＴＢ_４、１９−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４、２０−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４ 、５（Ｓ）−ヒドロキシ−６，８，１１，１４（Ｅ，Ｚ，Ｚ，Ｚ）−エイコサテトラエン酸（「５−ＨＥＴＥ」）、１４，１５−ジヒドロ−５−ＨＥＴＥ、１７，１８−デヒドロ−５−ＨＥＴＥからなる群から選択される１種または複数のポリ不飽和脂肪酸であり、
   安定化したＬＴＢ_４製剤が凍結乾燥形態、結晶形態または固体非晶質形態である場合に、混合物の粒子に水が吸着されるか混合物に水を少量加えた際、アルカリ性の反応性担体が、各ＬＴＢ_４粒子の周りにアルカリ性の８．２〜１４のミクロｐＨを生み出し、そうでなければ不活性な、薬剤として許容される物質（または複数の物質）である組成物。
3. 非毒性物質のみを含む、請求項１または２のいずれかに記載の組成物または安定化した製剤。
4. 前記アルカリ性ｐＨが８．５〜１１．５の範囲である、請求項１から３のいずれか１項に記載の組成物または安定化した製剤。
5. 前記アルカリ性ｐＨが９．５〜１１．５の範囲である、請求項１から４のいずれか１項に記載の組成物または安定化した製剤。
6. 前記製剤が液体形態、凍結乾燥形態、結晶形態または固体非晶質形態である、請求項１から５のいずれか１項に記載の組成物または安定化した製剤。
7. 前記担体が水性担体である、請求項１から６のいずれか１項に記載の組成物または安定化した製剤。
8. 前記水性担体が、水、アルカリ金属水酸化物溶液、緩衝生理食塩水溶液、アルコール含有水溶液、糖溶液、およびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項７に記載の組成物または安定化した製剤。
9. 前記アルカリ金属水酸化物溶液が水酸化ナトリウム溶液である、請求項８に記載の組成物または安定化した製剤。
10. 前記緩衝生理食塩水溶液がリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）である、請求項８に記載の組成物または安定化した製剤。
11. 前記アルコール含有水溶液のアルコールが、エタノール、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、プロパンジオール、グリセロールおよびマンニトールからなる群から選択される、請求項８に記載の組成物または安定化した製剤。
12. 前記担体が、有機溶媒およびその混合物および水からなる群から選択される担体である、請求項１から６のいずれか１項に記載の組成物または安定化した製剤。
13. 前記混合物が水と、少なくとも５０％（容積／容積）のアルコールを含む、請求項１２に記載の組成物または安定化した製剤。
14. 前記混合物が水と、少なくとも６０％（容積／容積）のアルコールを含む、請求項１２に記載の組成物または安定化した製剤。
15. 前記アルコールが、エタノール、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、プロパンジオール、グリセロールおよびマンニトールからなる群から選択される、請求項１３または１４に記載の組成物または安定化した製剤。
16. 前記担体が、アルカリ性マトリックスでコーティングされている粒子状固体、またはアルカリ性マトリックスで構成されている粒子状固体である、請求項１から５のいずれか１項に記載の組成物または安定化した製剤。
17. 前記ＬＴＢ_４剤が、ロイコトリエンＢ_４［５Ｓ，１２Ｒ−ジヒドロキシ−６，８，１０，１４（Ｚ，Ｅ，Ｅ，Ｚ）−エイコサテトラエン酸］（「ＬＴＢ_４」）である、請求項１から１６のいずれか１項に記載の組成物または安定化した製剤。
18. 前記ＬＴＢ_４剤が、
    ＬＴＢ_４、１４，１５−ジヒドロ−ＬＴＢ_４（「ＬＴＢ_３」）、１７，１８−デヒドロ−ＬＴＢ_４（「ＬＴＢ_５」）、１９−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４、２０−ヒドロキシ−ＬＴＢ_４ 、
    ＬＴＢ_４メチルエステルおよびＬＴＢ_４エチルエステル、
    ５（Ｓ）−ヒドロキシ−６，８，１１，１４（Ｅ，Ｚ，Ｚ，Ｚ）−エイコサテトラエン酸（「５−ＨＥＴＥ」）、１４，１５−ジヒドロ−５−ＨＥＴＥ、１７，１８−デヒドロ−５−ＨＥＴＥからなる群から選択される、請求項１から１６のいずれか１項に記載の組成物または安定化した製剤。
19. 前記ＬＴＢ_４剤が製剤の０．１μｇ／ｍｌ〜２５ｍｇ／ｍｌの量で存在する、請求項１から１８のいずれか１項に記載の組成物または安定化した製剤。
20. 前記ＬＴＢ_４剤が製剤の１μｇ／ｍｌ〜１ｍｇ／ｍｌの量で存在する、請求項１から１９のいずれか１項に記載の組成物または安定化した製剤。
21. ２５％（容積／容積）未満のアセトニトリルを含む、請求項１から２０のいずれか１項に記載の組成物または安定化した製剤。
22. 外層として腸溶コーティングをさらに含む、請求項１から２１のいずれか１項に記載の組成物または安定化した製剤。
23. ＬＴＢ_４剤およびアルカリ性の反応性担体を含むコアと外層との間に分離層をさらに含む、請求項２２に記載の組成物または安定化した製剤。

Images