JP4813690B2

JP4813690B2 - Filaggrin synthesis promoter, stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent and stratum corneum free amino acid content increasing agent

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Publication number: JP4813690B2
Application number: JP2001170226A
Authority: JP
Inventors: 信明大戸; 敏光神原; 宏右鳥居; 由利岡野; 仁正木
Original assignee: Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2001-06-05
Filing date: 2001-06-05
Publication date: 2011-11-09
Anticipated expiration: 2021-06-05
Also published as: JP2002363054A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、フィラグリンの合成を促進することができるフィラグリン合成促進剤、フィラグリン合成促進作用を通じて角質層の保湿機能を本質的に改善及び／又は増強することができる角質層保湿機能改善・増強剤、並びにフィラグリン合成促進作用を通じて天然保湿因子（ＮＭＦ）の主体をなす角質層の遊離アミノ酸量を増加させることができる角質層遊離アミノ酸量増加剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚の角質層は角質細胞と細胞間脂質から構成され、体内の水分蒸散や外界からの異物の侵入を防ぐというバリアー機能を発揮している。この角質層に含まれる水分が、スキンケアにおける保湿に重要な役割を果たしており、その保湿に関与する因子としては天然保湿因子（以下「ＮＭＦ」と略す。）を挙げることができる。ＮＭＦは、糖、アミノ酸及びその誘導体、乳酸塩、ミネラル塩などから構成されており、アミノ酸がその主体をなしている。
【０００３】
これまでは、ＮＭＦである糖、アミノ酸、有機酸、ピロリドンカルボン酸塩、コラーゲン、ヒアルロン酸などのムコ多糖類、グリセリン、1,3-ブチレングリコール等の保湿作用を有する物質を塗布して皮膚の保湿性を高めてきた。
【０００４】
しかしながら、上記のような保湿剤は、塗布により皮膚からの蒸散を防ぐ作用は有しても、角質層の水分保持機構を本質的に改善する作用までは期待できない。また、上記のような保湿剤は、皮膚からの水分蒸散を遅くするものであるから、概して使用感が悪く、長期間の使用により皮膚障害を起こすことさえある。
【０００５】
一方、角質層水分量の低下を伴う乾皮症、アトピー性疾患及び肌荒れの皮膚においては、角質層のアミノ酸量が減少していることが知られている。ＮＭＦの主体をなすアミノ酸の産生は、ケラトヒアリン顆粒に由来するフィラグリンの分解によるものである。このフィラグリンは、表皮ケラチノサイトにおいてプロフィラグリンとして発現し、直ちにリン酸化し、ケラトヒラリン顆粒に蓄積する。その後、脱リン酸、加水分解を経て、フィラグリンへと分解され、角質層へと移行し、ケラチンフィラメントの凝集効率を高め、角質細胞の内部構築に関わる。
【０００６】
近年、このフィラグリンが皮膚の水分保持に非常に重要かつ必要不可欠であること、及び乾燥などの条件によりフィラグリンの合成が低下することが明らかとなったが、フィラグリンの合成を促進させることができる物質は未だ発見されていない。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明は、第一に、フィラグリン合成を促進させることができる物質を見出し、これを有効成分として含有するフィラグリン合成促進剤を提供することを目的とする。
【０００８】
また、本発明は、第二に、フィラグリン合成促進作用を通じて角質層の保湿機能を本質的に改善及び／又は増強することができる角質層保湿機能改善・増強剤を提供することを目的とする。
【０００９】
さらに、本発明は、第三に、フィラグリン合成促進作用を通じて天然保湿因子の主体をなす角質層の遊離アミノ酸量を増加させることができる角質層遊離アミノ酸量増加剤を提供することを目的とする。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
上記目的を達成するために、本発明のフィラグリン合成促進剤、角質層保湿機能改善・増強剤および角質層遊離アミノ酸量増加剤は、カンゾウ抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。
【００１１】
本発明のフィラグリン合成促進剤、角質層保湿機能改善・増強剤および角質層遊離アミノ酸量増加剤の好ましい実施形態において、前記カンゾウ抽出物は、極性溶媒を抽出溶媒として用いて得られるカンゾウの根部からの抽出物である。
【００１２】
【発明の実施の形態】
本発明のフィラグリン合成促進剤、角質層保湿機能改善・増強剤および角質層遊離アミノ酸量増加剤の有効成分である「カンゾウ抽出物」は、カンゾウから得られる抽出物を意味し、「カンゾウ抽出物」には、カンゾウから得られる抽出液、該抽出液の希釈液もしくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、またはこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１３】
抽出原料としては、カンゾウ（甘草）を使用する。カンゾウは、マメ科に属し、古代より薬用又は甘味料の原料として利用されている有用植物である。特に根部にはグリチルリチンその他有用成分が含有されていることが確認されている。
【００１４】
カンゾウには、Glychyrrhiza glabra、Glychyrrhiza inflata、Glychyrrhiza uralensis、Glychyrrhiza aspera、Glychyrrhiza eurycarpa、Glychyrrhiza pallidiflora、Glychyrrhiza yunnanensis、Glychyrrhiza lepidota、Glychyrrhiza echinata、Glychyrrhiza acanthocarpaなど様々な種類のものがあり、これらのうち、いずれの種類の植物を抽出原料として使用してもよいが、Glychyrrhiza属に属する植物のうち、Glychyrrhiza glabraおよびGlychyrrhiza inflataを抽出原料として使用することが好ましい。また、抽出原料としては、カンゾウの根部を使用することが好ましい。
【００１５】
抽出原料として使用するカンゾウは、採取後ただちに乾燥し粉砕したものが適当である。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。カンゾウは、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、カンゾウの極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１６】
抽出処理の際には、抽出溶媒として極性溶媒を使用するのが好ましい。カンゾウに含まれるフィラグリン合成促進作用を示す成分は、極性溶媒を抽出溶媒とする抽出処理によって容易に抽出することができる。
【００１７】
好適な抽出溶媒の具体例としては、水、低級脂肪族アルコール、含水の低級脂肪族アルコール等を例示でき、これらを単独で、又はこれら２種以上の混合物として使用することができる。好適な低級脂肪族アルコールの具体例としては、メタノール、エタノール、プロパノール、1,3−ブチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール等を例示することができる。
【００１８】
抽出溶媒として使用し得る水には、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、滅菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１９】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水と低級脂肪族アルコールとの混合比を自由に変更することができるが、特に７：３〜２：８（重量比）が好適である。
【００２０】
抽出処理は、カンゾウに含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定されず、常法に従って行うことができる。抽出処理の際には、特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温ないし還流加熱下において任意の装置を使用することができる。
【００２１】
例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、ときどき攪拌しながら可溶性成分を溶出させる。この際、抽出条件は抽出原料等に応じて適宜調整し得るが、抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（重量比）あり、抽出時間は通常１〜３時間であり、抽出温度は通常、常温〜９５℃である。
【００２２】
抽出処理により可溶性成分を溶出させた後、ろ過して抽出残渣を除くことによって、抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００２３】
得られた抽出液はそのままでもフィラグリン合成促進剤、角質層保湿機能改善・増強剤および角質層遊離アミノ酸量増加剤として使用することができるが、濃縮液またはその乾燥物としたものの方が利用しやすい。抽出液の乾燥物を得るにあたっては、吸湿性を改善するためにデキストリン、シクロデキストリン等のキャリアーを添加してもよい。
【００２４】
また、カンゾウは特有の匂いと味を有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、化粧料に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。精製は、具体的には活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２５】
カンゾウ抽出物は、そのままでもフィラグリン合成促進剤、角質層保湿機能改善・増強剤または角質層遊離アミノ酸量増加剤として使用することができるが、常法に従って製剤化して使用することもできる。製剤化する場合、保存や取扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他任意の助剤を添加することができる。カンゾウからの抽出物は、製剤化により粉末状、顆粒状、錠剤状等、任意の剤形とすることができる。
【００２６】
本発明のフィラグリン合成促進剤、角質層保湿機能改善・増強剤または角質層遊離アミノ酸量増加剤は、次のような作用効果を発揮することができる。
【００２７】
本発明のフィラグリン合成促進剤は、経皮的に吸収されて、皮膚におけるフィラグリン合成を促進することができる。本発明のフィラグリン合成促進剤の作用機序としては、プロフィラグリンの発現量の増加などが考えられる。
【００２８】
本発明の角質層保湿機能改善・増強剤は、フィラグリン合成促進作用を通じて、フィラグリンによるケラチンフィラメントの凝集を誘導し、これによって角質細胞の内部構造を構築して、角質層の保湿機能を改善及び／又は増強することができる。
【００２９】
本発明の角質層遊離アミノ酸量増加剤は、フィラグリン合成促進作用を通じて、天然保湿因子の主体をなす角質層の遊離アミノ酸量を増加させ、これによって保湿効果を発揮することができる。また、本発明の角質層遊離アミノ酸量増加剤は、乾皮症、アトピー性疾患、肌荒れなど角質層の遊離アミノ酸量の低下が原因となって発症する皮膚疾患を予防及び／又は治療することができる。
【００３０】
本発明のフィラグリン合成促進剤、角質層保湿機能改善・増強剤および角質層遊離アミノ酸量増加剤は、フィラグリン合成促進作用を通じて保湿効果を発揮することができるとともに、皮膚に適用した場合の使用感と安全性に優れているため、皮膚化粧料に配合するのに好適である。
【００３１】
本発明のフィラグリン合成促進剤、角質層保湿機能改善・増強剤および角質層遊離アミノ酸量増加剤を配合し得る皮膚化粧料は特に限定されないが、その具体例としては、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、入浴剤等を例示することができる。
【００３２】
皮膚化粧料におけるフィラグリン合成促進剤、角質層保湿機能改善・増強剤および角質層遊離アミノ酸量増加剤の配合量は、皮膚化粧料の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調製することができるが、好適な配合率は標準的なカンゾウ抽出物に換算して約０．０１〜１０重量％である。
【００３３】
皮膚化粧料には、保湿効果の妨げにならない限り、皮膚化粧料の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他任意の助剤を配合することができ、皮膚の保湿効果に関し、本発明の保湿剤のみが主剤となるものに限られるわけではない。
【００３４】
皮膚化粧料において、本発明のフィラグリン合成促進剤、角質層保湿機能改善・増強剤および角質層遊離アミノ酸量増加剤と共に構成成分として利用可能なものとしては、具体的に挙げると次のとおりである。なお、カンゾウ抽出物とともに以下の構成成分を併用した場合、カンゾウ抽出物と併用された構成成分との間の相乗作用が、通常期待される以上の優れた使用効果をもたらすことがある。
【００３５】
収斂剤：クエン酸又はその塩類、酒石酸又はその塩類、乳酸又はその塩類、塩化アルミニウム、硫酸アルミニウムカリウム、アラントインクロルヒドロキシアルミニウム、アラントインジヒドロキシアルミニウム、パラフェノールスルホン酸亜鉛、硫酸亜鉛、ジユエキス、エイジツエキス、ハマメリスエキス、ゲンノショウコエキス、茶カテキン類、プロアントシアニジン類、ガイヨウエキス、オドリコソウエキス、オトギリソウエキス、ダイオウエキス、ヤグルマソウエキス、スギナエキス、キズタエキス、キューカンバーエキス、マロニエエキス、サルビアエキス、メリッサエキス、タマリンドハスクエキス等。
【００３６】
殺菌・抗菌剤：安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、塩化ジステアリルメチルアンモニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化アルキルジアミノエチルグリシン液、塩酸クロルヘキシジン、オルトフェニルフェノール、感光素１０１号、感光素２０１号、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、ソルビン酸、ハロカルバン、レゾルシン、パラクロロフェノール、フェノキシエタノール、ビサボロール、ヒノキチオール、メントール、キトサン、キトサン分解物、ジユエキス、クジンエキス、エンメイソウエキス、ビワエキス、ウワウルシエキス、ホップエキス、ユッカエキス、アロエエキス、ケイヒエキス、ガジュツエキス、油溶性甘草エキス（カンゾウ疎水性フラボノイド、グラブリジン、グラブレン、リコカルコンＡ）等。
【００３７】
紫外線吸収剤：β−イソプロピルフラノン誘導体、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、オキシベンゾン、オキシベンゾンスルホン酸、テトラヒドロキシベンゾフェノン、ジヒドロキシジメトキシベンゾフェノン、ジヒドロキシベンゾフェノン、シノキサート、ジイソプロピルケイヒ酸メチル、メトキシケイヒ酸オクチル、パラアミノ安息香酸グリセリル、パラジメチルアミノ安息香酸アミル、パラジメチル安息香酸オクチル、パラアミノ安息香酸オクチル、パラアミノ安息香酸、パラアミノ安息香酸エチル、ブチルメトキシジベンゾイルメタン、酸化チタン、β−カロチン、γ−オリザノール、コメヌカエキス、アロエエキス、カバノキエキス、シラカンバエキス、カミツレエキス、コゴメグサエキス、セイヨウサンザシエキス、ヘンナエキス、テウチグルミエキス、マロニエエキス、イチョウ葉エキス、カミツレエキス、油溶性カンゾウエキス等。
【００３８】
美白剤：アスコルビン酸およびその誘導体、イオウ、胎盤加水分解物、エラグ酸およびその誘導体、コウジ酸およびその誘導体、グルコサミンおよびその誘導体、アゼライおよびその誘導体、アルブチンおよびその誘導体、ヒドロキシケイヒ酸およびその誘導体、グルタチオン、アルニカエキス、オウゴンエキス、センキュウエキス、ソウハクヒエキス、サイコエキス、ボウフウエキス、ハマボウフウエキス、マンネンタケ菌糸体培養物およびその抽出物、ギムネマエキス、シナノキエキス、モモ葉エキス、エイジツエキス、クジンエキス、ジユエキス、トウキエキス、ヨクイニンエキス、カキ葉エキス、ダイオウエキス、ボタンピエキス、ハマメリスエキス、マロニエエキス、オトギリソウエキス、オドリコソウエキス、油溶性カンゾウエキス（カンゾウ疎水性フラボン、グラブリジン、グラブレン、リコカルコンＡ）等。
【００３９】
保湿剤：セリン、グリシン、スレオニン、アラニン、コラーゲン、加水分解コラーゲン、ビトロネクチン、フィブロネクチン、ケラチン、エラスチン、ローヤルゼリー、コンドロイチン硫酸ヘパリン、グリセロリン酸脂質、スフィンゴリン脂質、スフィンゴ糖脂質、リノール酸又はそのエステル類、エイコサペンタエン酸又はそのエステル類、ペクチン、アルゲコロイド、ビフィズス菌発酵物、乳酸発酵物、酵母抽出物、レイシ菌糸体培養物又はその抽出物、小麦胚芽油、アボガド油、米胚芽油、ホホバ油、ダイズリン脂質、γ-オリザノール、ビロウドアオイエキス、ヨクイニンエキス、ジオウエキス、タイソウエキス、カイソウエキス、キダチアロエエキス、ゴボウエキス、マロニエエキス、マンネンロウエキス、アルニカエキス、小麦フスマ、コメヌカエキス等。
【００４０】
細胞賦活剤：胎盤抽出物、リボフラビン又はその誘導体、ピリドキシン又はその誘導体、ニコチン酸又はその誘導体、パントテン酸又はその誘導体、α−トコフェロール又はその誘導体、アルニカエキス、ニンジンエキス、オタネニンジンエキス、エゾウコギエキス、ヘチマエキス（サポニン）、シコンエキス、シラカンバエキス、オウバクエキス、ボタンピエキス、シャクヤクエキス、ムクロジエキス、ベニバナエキス、アシタバエキス、ビワ葉エキス、ヒキオコシエキス、ユキノシタエキス、黄杞エキス、サルビアエキス、ニンニクエキス、マンネンロウエキス等。
【００４１】
消炎・抗アレルギー剤：アズレン、アラントイン、アミノカプロン酸、インドメタシン、塩化リゾチーム、イプシロンアミノカプロン酸、オキシベンゾン、グリチルリチン酸又はその誘導体、グリチルレチン酸又はその誘導体、感光素301号、感光素401号、塩酸ジフェンヒドラミン、トラネキサム酸又はその誘導体、アデノシンリン酸、エストラジオール、エスロン、エチニルエストラジオール、コルチゾン、ヒドロコルチゾン、プレドニゾロン、プロゲステロン、コルチコステロン、アルニカエキス、インチンコウエキス、サンシシエキス、ジュウヤクエキス、カンゾウエキス、トウキエキス、ヨモギエキス、ワレモコウエキス、リンドウエキス、サイコエキス、センキュウエキス、ボウフウエキス、セイヨウノコギリソウエキス、オウレンエキス、シソエキス、マロニエエキス、オウゴンエキス等。
【００４２】
抗酸化・活性酸素消去剤：ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、没子食酸プロピル、バイカリン、バイカレイン、スーパーオキサイドディスムターゼ、カタラーゼ、ローズマリーエキス、メリッサエキス、オウゴンエキス、エイジツエキス、ビワ葉エキス、ホップエキス、ハマメリスエキス、シャクヤクエキス、セージエキス、キナエキス、カミツレエキス、ユーカリエキス、シソエキス、イチョウ葉エキス、タイムエキス、カルダモンエキス、キャラウェイエキス、ナツメグエキス、メースエキス、ローレルエキス、クローブエキス、ターメリックエキス、ヤナギタデエキス等。
【００４３】
油脂類：大豆油、アマニ油、キリ油、ゴマ油、ヌカ油、綿実油、ナタネ油、サフラワー油、トウモロコシ油、オリーブ油、ツバキ油、アーモンド油、ヒマシ油、落花生油、カカオ油、モクロウ、ヤシ油、パーム核油、牛脂、ミンク油、卵黄油、ホホバ油、月見草油、馬油等。
【００４４】
ロウ類：カルナウバロウ、キャンデリラロウ、蜜ロウ、サラシ蜜ロウ、鯨ロウ、セラックス、ラノリン類等。
【００４５】
炭化水素類：流動パラフィン、ワセリン、マイクロスリスタリンワックス、セレシン、スクワラン、ポリエチレン末等。
【００４６】
脂肪酸類：ステアリン酸、リノール酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ヘベニン酸、ラノリン酸、オレイン酸、ウンデシレン酸、イソステアリン酸等。
【００４７】
アルコール類：ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、ラノリンアルコール、水添ラノリンアルコール、オレイルアルコール、ヘキサデシルアルコール、2−オクチルドデカノール、グリセリン、ソルビトール、プロピレングリコール、1,3−ブチレングリコール、エチレングリコール又はその重合体、ブドウ糖、白糖、コレステロール、フィトステロール、セトステアリルアルコール等。
【００４８】
エステル類：オレイン酸デシル、ステアリン酸ブチル、ミリスチン酸ミリスチル、ラウリン酸ヘキシル、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、ジオレイン酸プロピレングリコール、フタル酸ジエチル、モノステアリン酸プロピレングリコール、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸グリセリン、トリミリスチン酸グリセリン、酢酸ラノリン、乳酸セチル等。
【００４９】
界面活性剤：陰イオン性界面活性剤、陽イオン界面活性剤、両イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤等。
【００５０】
香料：メントール、カルボン、オイゲノール、アネトール、ハッカ油、スペアミント油、ペパーミント油、ユーカリ油、アニス油その他各種動植物からのオイル状香料等。
【００５１】
以上に説明した本発明のフィラグリン合成促進剤、角質層保湿機能改善・増強剤および角質層遊離アミノ酸量増加剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【００５２】
【実施例】
以下、実施例を示して本発明を更に詳細に説明する。なお、本発明の範囲はこれらの実施例等に限定されるものではない。
【００５３】
〔製造例１〕
カンゾウ（Glychyrrhiza glabra及びGlychyrrhiza inflataの混合物）の根部の粗砕物３００ｇを抽出溶媒２０００ｍＬに投入し、ゆるく攪拌しながら３時間、７０℃に保った。その後、ろ過し、ろ液を４０℃で減圧下にて濃縮し、さらに減圧乾燥機で乾燥させ、カンゾウ抽出物を得た。４種類の抽出溶媒を用いて上記抽出を行ったところ、抽出物の収率は表１のとおりであった。なお、抽出溶媒が混合物の場合、以下に示す混合比は重量基準によるものである。
【００５４】

【００５５】
〔製造例２〕
製造例１で用いたものと同一のカンゾウの根部の粗砕物３００ｇを抽出溶媒２０００ｍＬに投入し、攪拌しながら３時間、８０℃に保った。その後、ろ過し、ろ液を得た。４種類の抽出溶媒を用いて上記抽出を行い、表２に示した固形分濃度の抽出液約１５００ｍＬを得た。なお、抽出溶媒が混合物の場合、以下に示す混合比は重量基準によるものである。
【００５６】

【００５７】
〔試験例１〕細胞賦活作用試験
（１）正常ヒト表皮細胞（クラボウ）を２×１０^４cells／wellの密度で９６穴マイクロプレートに播種した。この際、播種培地としてHumedia-KG2（クラボウ）を用いた。３７℃、５％二酸化炭素下で２４時間培養後、製造例１の試料１（濃度：１．２５，０．６３，０．３１，０．１６，０．０８，０．０４ｍｇ／ｍＬ）を添加した試験培地に交換し３７℃、５％二酸化炭素下で２４時間培養した。その後、細胞賦活作用をＭＴＴ還元法（H.Tada et.al.,J.Immunol.Methods 93, 157, 1986）によって評価した。
【００５８】
各濃度における試料１の細胞賦活率（細胞増加率）（％）は、以下の表３に示すとおりであった。なお、表３には、細胞賦活率（細胞増加率）（％）を平均±Ｓ．Ｄ（ｎ＝６）で示し、表３中、「^＊＊」はｐ＜０．０１、「^＊」はｐ＜０．０５を意味する。
【００５９】

【００６０】
表３に示される結果より、カンゾウ抽出物が０．３１ｍｇ／ｍＬ以下の濃度で正常ヒト表皮細胞賦活作用（増殖作用）を有することが確認された。
【００６１】
〔試験例２〕フィラグリン合成促進作用試験およびフィラグリンの観察
試験例１で細胞毒性のないことを確認した濃度（０．１６，０．０８，０．０４ｍｇ／ｍＬ）を用いてフィラグリン合成促進作用を評価した。正常ヒト表皮細胞（クラボウ）を２×１０^４cells／wellの密度で９６穴マイクロプレートに播種した。この際、播種培地としてHumedia-KG2（クラボウ）を用いた。３７℃、５％二酸化炭素下で２４時間培養後、製造例１の試料１を添加した試験培地に交換し３７℃、５％二酸化炭素下で６日間培養した。その後、細胞を溶解し、色素結合法にてタンパク量を定量した。フィラグリン合成量はドットブロット法を用いた酵素抗体法にて定量した。すなわち、一定量のタンパクをドットブロットし、抗フィラグリン抗体、Horseradish Peroxidase標識した二次抗体を用いて発色させた後、デンシトメトリーにて数値化し、フィラグリン合成促進率（％）を求めた。
その結果を表４に示す。なお、表４には、フィラグリン合成促進率（％）を平均±Ｓ．Ｄ（ｎ＝６）で示し、表４中、「^＊＊」はｐ＜０．０１を意味する。
【００６２】
また、フィラグリンの観察を目的とし、表皮染色切片を作成した。製造例１の試料１を０．２ｇ秤量し、１０(v/v)％エタノール溶液１０ｍＬに溶解したものを試料溶液とした。この試料溶液０．１ｍＬを生後６週齢のへアレスマウス（ＨＲ−１、雌）の背部に１日２回（朝夕）、１００μＬを２週間連続塗布した。同時にコントロールとして試料を溶解していない１０(v/v)％エタノール溶液を塗布した。試料塗布終了時から２４時間目に皮膚組織を採取し、凍結切片を作成した。フィラグリンは酵素抗体染色法にて、ＦＩＴＣ標識抗体を用いて染色した。その結果を図１に示す。なお、図１中、（ａ）はコントロールマウスの結果を、（ｂ）はカンゾウエキス塗布マウスの結果を示す。
【００６３】

【００６４】
表４に示される結果より、カンゾウ抽出物が０．1６ｍｇ／ｍＬの濃度でコントロールと比較して有意なフィラグリン合成促進作用を発揮することが確認された。また、図１より、フィラグリン量の増加は組織学的にも明らかとなった。
【００６５】
〔試験例３〕角質層水分測定
製造例１の試料１を０．２ｇ秤量し、１０(v/v)％エタノール溶液１０ｍＬに溶解したものを試料溶液とした。この試料溶液０．１ｍＬを生後６週齢のへアレスマウス（ＨＲ−１、雌）の背部に１日２回（朝夕）、１００μＬを２週間連続塗布した。同時にコントロールとして試料を溶解していない１０(v/v)％エタノール溶液を塗布した。
【００６６】
試料塗布終了時から２４時間目にネンブタール麻酔下でＳＫＩＣＯＮ−２００（ＩＢＳ株式会社）を用いて試料塗布部の電気伝導度（μＳ）を測定した。角質層中の水分量は電気伝導度と相関することから、角質層水分量はこの値をもとに評価した。なお、測定は室温２３℃、湿度５５％に保った室内で行った。
その結果を表５に示す。なお、表５には、コントロールの角質層水分量（コンダクタンス（μＳ））を平均±Ｓ．Ｄ（ｎ＝５）で示し、試料１を用いた場合の角質層水分量（コンダクタンス（μＳ））を平均±Ｓ．Ｄ（ｎ＝６）で示し、表５中、「^＊」はｐ＜０．０５を意味する。
【００６７】

【００６８】
表５に示される結果より、カンゾウ抽出物を塗布することにより、コントロールと比較して有意な角質層水分量の増加作用が確認された。
【００６９】
〔試験例４〕角質層遊離アミノ酸量測定
製造例１の試料１を０．２ｇ秤量し、１０(v/v)％エタノール溶液１０ｍＬに溶解したものを試料溶液とした。この試料溶液０．１ｍＬを生後６週齢のへアレスマウス（ＨＲ−１、雌）の背部に１日２回（朝夕）、１００μＬを２週間連続塗布した。同時にコントロールとして試料を溶解していない１０(v/v)％エタノール溶液を塗布した。
【００７０】
試料塗布終了時から２４時間目にテープストリップ法にて角質層を採取した。トルエン抽出および乾燥後、０．３ｍｏｌ／ＬのＨＣｌＯ₄を添加し、遠心分離にて沈殿したペプチドを除去した。上清に等量の０．３ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウムを加えて中和し、凍結乾燥させたものをアミノ酸分析試料とした。
【００７１】
コントロールの結果を表６に、試料１を用いた場合の結果を表７に示す。なお、表６には遊離アミノ酸量（ｎｍｏｌ／６ｃｍ^２）を平均値±Ｓ．Ｄ（ｎ＝５）で示し、表７には遊離アミノ酸量（ｎｍｏｌ／６ｃｍ^２）を平均値±Ｓ．Ｄ（ｎ＝４）で示し、表７中、「^＊」はｐ＜０．０５、「^＊＊」はｐ＜０．０１を意味する。
【００７２】
[表６]
アミノ酸の種類アミノ酸量
セリン(Ser) 582.1±106.1
グリシン(Gly) 274.3±51.3
アルギニン(Arg) 276.0±47.2
バリン(Val) 116.1±23.2
総遊離アミノ酸量 1816.2±298.8
【００７３】
[表７]
アミノ酸の種類アミノ酸量
セリン(Ser) 791.6±32.0^**
グリシン(Gly) 402.6±97.7^*
アルギニン(Arg) 352.6±35.7^*
バリン(Val) 153.0±10.6^*
総遊離アミノ酸量 2423.7±254.6^*
【００７４】
表６および７に示されるアミノ酸分析の結果より、カンゾウ抽出物の塗布により、コントロールと比較して有意な全アミノ酸の増加が確認された。また、個々のアミノ酸４種についても、コントロールと比較して有意な増加が認められた。
【００７５】
〔配合例１〕
下記の組成の乳液を常法により製造した。
ホホバオイル４．０ｇ
オリーブオイル２．０ｇ
アロエエキス２．０ｇ
パセリエキス２．０ｇ
ヒアルロン酸ナトリウム０．５ｇ
スクワラン２．０ｇ
セタノール２．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル２．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０）２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(２０Ｅ.０) ２．０ｇ
１，３−ブチレングリコール３．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル０．１５ｇ
香料０．０５ｇ
カンゾウ抽出物（製造例１の試料１）１．０ｇ
精製水残部（全量を１００ｇとする）
【００７６】
〔配合例２〕
下記の組成の化粧水を常法により製造した。
グリセリン３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール３．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(２０Ｅ.０) ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル０．１５ｇ
クエン酸０．１ｇ
クエン酸ソーダ０．１ｇ
ビタミンＥ０．１ｇ
ハマメリスエキス１．０ｇ
パセリ由来抗酸化物質０．５ｇ
香料０．０５ｇ
カンゾウ抽出物（製造例１の試料１）１．０ｇ
精製水残部（全量を１００ｇとする）
【００７７】
〔配合例３〕
下記の組成のクリームを常法により製造した。
流動パラフィン５．０ｇ
サラシミツロウ４．０ｇ
セタノール３．０ｇ
スクワラン１０．０ｇ
ラノリン２．０ｇ
ステアリン酸１．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(２０Ｅ.０) １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール６．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル１．５ｇ
アミノ酸・糖混合物０．５ｇ
酵母エキス０．５ｇ
カロットエキス０．５ｇ
α−ヒドロキシ脂肪酸０．５ｇ
香料０．１ｇ
カンゾウ抽出物（製造例１の試料１）１．０ｇ
精製水残部（全量を１００ｇとする）
【００７８】
〔配合例４〕
下記の組成のパックを常法により製造した。
ポリビニルアルコール１５．０ｇ
ポリエチレングリコール３．０ｇ
プロピレングリコール７．０ｇ
エタノール１０．０ｇ
パラオキシ安息香酸エチル０．０５ｇ
香料０．０５ｇ
グリチルリチン酸１．０ｇ
Ｌ-アルギニン０．５ｇ
カンゾウ抽出物（製造例１の試料１）５．０ｇ
精製水残部（全量を１００ｇとする）
【００７９】
【発明の効果】
本発明により、フィラグリン合成促進剤、角質層保湿機能改善・増強剤および角質層遊離アミノ酸量増加剤が提供される。本発明のフィラグリン合成促進剤、角質層保湿機能改善・増強剤および角質層遊離アミノ酸量増加剤は、皮膚の保湿機能の衰えを予防および／または改善する上で有用である。また、本発明のフィラグリン合成促進剤、角質層保湿機能改善・増強剤および角質層遊離アミノ酸量増加剤は、皮膚の保湿効果を発揮することができるとともに、皮膚の適用した場合の使用感と安全性に優れているので、皮膚化粧料の配合成分として有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】試料塗布終了時から２４時間後の皮膚組織凍結切片のフィラグリンを、ＦＩＴＣ標識抗体を用いて染色した結果を表す図である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a filaggrin synthesis promoter capable of promoting the synthesis of filaggrin, a stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent capable of essentially improving and / or enhancing the moisturizing function of the stratum corneum through the action of filaggrin synthesis, In addition, the present invention relates to a stratum corneum free amino acid amount increasing agent capable of increasing the amount of free amino acids in the stratum corneum, which is a main constituent of natural moisturizing factor (NMF), through the action of promoting filaggrin synthesis.
[0002]
[Prior art]
The stratum corneum of the skin is composed of keratinocytes and intercellular lipids, and exhibits a barrier function that prevents moisture transpiration in the body and invasion of foreign substances from the outside world. Moisture contained in the stratum corneum plays an important role in moisturizing in skin care, and natural moisturizing factor (hereinafter abbreviated as “NMF”) can be mentioned as a factor involved in the moisturizing. NMF is composed of sugar, amino acids and derivatives thereof, lactate, mineral salts, and the like, and amino acids are the main components.
[0003]
Until now, NMF sugar, amino acids, organic acids, pyrrolidone carboxylates, collagen, mucopolysaccharides such as hyaluronic acid, glycerin, 1,3-butylene glycol and other substances having a moisturizing effect have been applied to the skin. Increased moisture retention.
[0004]
However, even if the moisturizing agent as described above has an effect of preventing transpiration from the skin by application, it cannot be expected to substantially improve the moisture retention mechanism of the stratum corneum. In addition, since the moisturizing agent as described above slows the transpiration of moisture from the skin, the feeling of use is generally poor, and skin damage may be caused by long-term use.
[0005]
On the other hand, it is known that the amount of amino acids in the stratum corneum is reduced in dry skin, atopic disease and rough skin accompanied by a decrease in the amount of water in the stratum corneum. The production of amino acids that are the main component of NMF is due to the degradation of filaggrin derived from keratohyalin granules. This filaggrin is expressed as profilagrin in epidermal keratinocytes, immediately phosphorylated, and accumulates in keratohiralin granules. Then, it is decomposed into filaggrin through dephosphorylation and hydrolysis, and transferred to the stratum corneum, increasing the aggregation efficiency of keratin filaments and involved in the internal construction of corneocytes.
[0006]
In recent years, it has been clarified that filaggrin is very important and indispensable for moisture retention of the skin and that the synthesis of filaggrin is reduced by conditions such as drying, but a substance that can promote the synthesis of filaggrin Has not yet been discovered.
[0007]
[Problems to be solved by the invention]
Therefore, the present invention firstly aims to provide a filaggrin synthesis promoter containing a substance capable of promoting filaggrin synthesis and containing this as an active ingredient.
[0008]
The second object of the present invention is to provide a stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent that can essentially improve and / or enhance the moisturizing function of the stratum corneum through filaggrin synthesis promoting action.
[0009]
A third object of the present invention is to provide an agent for increasing the amount of free amino acid in the stratum corneum that can increase the amount of free amino acid in the stratum corneum, which is the main component of the natural moisturizing factor, through the action of promoting filaggrin synthesis.
[0010]
[Means for Solving the Problems]
In order to achieve the above object, the filaggrin synthesis promoter, stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent and stratum corneum free amino acid amount increasing agent of the present invention are characterized by containing a licorice extract as an active ingredient.
[0011]
In a preferred embodiment of the filaggrin synthesis promoter, stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent, and stratum corneum free amino acid content increasing agent of the present invention, the licorice extract is obtained from a root of licorice obtained using a polar solvent as an extraction solvent. Is an extract of
[0012]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The term “licorice extract” as an active ingredient of the filaggrin synthesis promoter, stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent and stratum corneum free amino acid content increasing agent of the present invention means an extract obtained from licorice, "Includes an extract obtained from licorice, a diluted or concentrated solution of the extract, a dried product obtained by drying the extract, or a crude product or a purified product thereof.
[0013]
Licorice (licorice) is used as an extraction raw material. Licorice is a useful plant that belongs to the legume family and has been used as a raw material for medicinal or sweeteners since ancient times. In particular, it has been confirmed that the root contains glycyrrhizin and other useful components.
[0014]
There are Glychyrrhiza glabra, Glychyrrhiza inflata, Glychyrrhiza uralensis, Glychyrrhiza aspera, Glychyrrhiza eurycarpa, Glychyrrhiza pallidiflora, Glychyrrhiza yunnanensis, Glychyrrhiza lepidchy, Glychyrrhly Although a plant may be used as an extraction raw material, among plants belonging to the genus Glychyrrhiza, it is preferable to use Glychyrrhiza glabra and Glychyrrhiza inflata as an extraction raw material. Moreover, it is preferable to use the root part of licorice as an extraction raw material.
[0015]
The licorice used as the raw material for extraction is suitably dried and pulverized immediately after collection. Drying may be performed in the sun or using a commonly used dryer. Licorice may be used as a raw material for extraction after pretreatment such as degreasing with a nonpolar solvent such as hexane or benzene. By performing a pretreatment such as degreasing, extraction treatment with a polar solvent of licorice can be performed efficiently.
[0016]
In the extraction process, it is preferable to use a polar solvent as the extraction solvent. The component which shows the filaggrin synthesis promotion effect contained in licorice can be easily extracted by the extraction process which uses a polar solvent as an extraction solvent.
[0017]
Specific examples of suitable extraction solvents include water, lower aliphatic alcohols, hydrous lower aliphatic alcohols, and the like, and these can be used alone or as a mixture of two or more thereof. Specific examples of suitable lower aliphatic alcohols include methanol, ethanol, propanol, 1,3-butylene glycol, glycerin, propylene glycol and the like.
[0018]
Water that can be used as the extraction solvent includes pure water, tap water, well water, mineral spring water, mineral water, hot spring water, spring water, fresh water, and the like, as well as those subjected to various treatments. Examples of the treatment applied to water include purification, heating, sterilization, sterilization, filtration, ion exchange, adjustment of osmotic pressure, buffering, and the like. Therefore, the water that can be used as the extraction solvent in the present invention includes purified water, hot water, ion-exchanged water, physiological saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline, and the like.
[0019]
When using the liquid mixture of 2 or more types of polar solvents as an extraction solvent, the mixing ratio can be adjusted suitably. For example, when a mixed liquid of water and a lower aliphatic alcohol is used, the mixing ratio of water and the lower aliphatic alcohol can be freely changed. Particularly, the ratio is 7: 3 to 2: 8 (weight ratio). ) Is preferred.
[0020]
The extraction treatment is not particularly limited as long as the soluble components contained in licorice can be eluted in the extraction solvent, and can be performed according to a conventional method. In the extraction process, it is not necessary to adopt a special extraction method, and any apparatus can be used at room temperature or under reflux heating.
[0021]
For example, the extraction raw material is put into a treatment tank filled with the extraction solvent, and the soluble components are eluted with occasional stirring. At this time, although the extraction conditions can be appropriately adjusted according to the extraction raw material, the amount of the extraction solvent is usually 5 to 15 times (weight ratio) of the extraction raw material, and the extraction time is usually 1 to 3 hours. The temperature is usually from room temperature to 95 ° C.
[0022]
An eluate can be obtained by eluting soluble components by extraction and then filtering to remove the extraction residue. The obtained extract is diluted, concentrated, dried, purified, etc. according to a conventional method in order to obtain a diluted or concentrated solution of the extract, a dried product of the extract, or a crude purified product or a purified product thereof. Processing may be performed.
[0023]
The obtained extract can be used as it is as a filaggrin synthesis promoter, a stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent, and a stratum corneum free amino acid content increasing agent. Cheap. In obtaining a dried extract, a carrier such as dextrin or cyclodextrin may be added to improve hygroscopicity.
[0024]
In addition, licorice has a peculiar odor and taste, so it can be purified for the purpose of decolorization, deodorization, etc. within a range that does not cause a decrease in its physiological activity. Is not used in large quantities, so there is no practical problem even if it is not purified. Specifically, purification can be performed by activated carbon treatment, adsorption resin treatment, ion exchange resin treatment, or the like.
[0025]
The licorice extract can be used as it is as a filaggrin synthesis promoter, a stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent, or a stratum corneum free amino acid amount increasing agent, but it can also be formulated and used according to a conventional method. In the case of formulating, a pharmaceutically acceptable carrier such as dextrin and cyclodextrin and other optional auxiliaries can be added to facilitate storage and handling. The extract from licorice can be made into any dosage form such as powder, granule, tablet, etc. by formulation.
[0026]
The filaggrin synthesis promoter, stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent or stratum corneum free amino acid amount increasing agent of the present invention can exert the following effects.
[0027]
The filaggrin synthesis promoter of the present invention can be absorbed transdermally to promote filaggrin synthesis in the skin. As an action mechanism of the filaggrin synthesis promoter of the present invention, an increase in the expression level of profilagrin is considered.
[0028]
The stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent of the present invention induces the aggregation of keratin filaments by filaggrin through the action of promoting filaggrin synthesis, thereby constructing the internal structure of the stratum corneum and improving the moisturizing function of the stratum corneum. Or it can be enhanced.
[0029]
The agent for increasing the amount of free amino acid in the stratum corneum of the present invention increases the amount of free amino acid in the stratum corneum, which is the main component of the natural moisturizing factor, through the action of promoting the synthesis of filaggrin, thereby exerting a moisturizing effect. In addition, the stratum corneum free amino acid amount increasing agent of the present invention can prevent and / or treat skin diseases that develop due to a decrease in the amount of free amino acids in the stratum corneum such as dry skin, atopic diseases, and rough skin. it can.
[0030]
The filaggrin synthesis promoter, stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent and stratum corneum free amino acid amount increasing agent of the present invention can exert moisturizing effect through filaggrin synthesis promoting action, and feel when used on the skin. Since it is excellent in safety, it is suitable for blending into skin cosmetics.
[0031]
The skin cosmetics to which the filaggrin synthesis promoter, stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent and stratum corneum free amino acid content increasing agent of the present invention can be blended are not particularly limited. Specific examples thereof include ointments, creams, emulsions, lotions. , Packs, bathing agents and the like.
[0032]
The amount of filaggrin synthesis promoter, stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent, and stratum corneum free amino acid content increasing agent in skin cosmetics can be appropriately adjusted depending on the type of skin cosmetics, physiological activity of the extract, etc. The preferred blending ratio is about 0.01 to 10% by weight in terms of standard licorice extract.
[0033]
As long as the moisturizing effect is not hindered, various main agents and auxiliaries usually used in the manufacture of skin cosmetics and other optional auxiliaries can be added to the skin cosmetic. However, it is not limited to the one in which only the moisturizing agent is the main ingredient.
[0034]
Specific examples of skin cosmetics that can be used as components together with the filaggrin synthesis promoter, stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent, and stratum corneum free amino acid content increasing agent of the present invention are as follows. . In addition, when the following components are used in combination with the licorice extract, the synergistic action between the components used in combination with the licorice extract may lead to an excellent use effect that is more than normally expected.
[0035]
Astringents: citric acid or salts thereof, tartaric acid or salts thereof, lactic acid or salts thereof, aluminum chloride, potassium aluminum sulfate, allantoinchlorohydroxyaluminum, allantoindihydroxyaluminum, zinc paraphenol sulfonate, zinc sulfate, diu extract, agez extract, hamamelis Extracts, Ganoderma biloba extract, tea catechins, proanthocyanidins, diatomaceous earth extract, periwinkle extract, hypericum extract, dairy extract, cornflower extract, cedar extract, kizuta extract, cucumber extract, maronier extract, salvia extract, melissa extract, tamarind husk extract, etc.
[0036]
Bactericidal and antibacterial agents: benzoic acid, sodium benzoate, paraoxybenzoic acid ester, distearylmethylammonium chloride, benzethonium chloride, alkyldiaminoethylglycine chloride solution, chlorhexidine hydrochloride, orthophenylphenol, photosensitizer 101, photosensitizer 201, Salicylic acid, sodium salicylate, sorbic acid, halocarban, resorcin, parachlorophenol, phenoxyethanol, bisabolol, hinokitiol, menthol, chitosan, chitosan degradation product, jellyfish extract, cucumber extract, hemlock extract, loquat extract, walnut extract, hop extract, yucca extract, Aloe extract, cinnamon extract, gadget extract, oil-soluble licorice extract (licorice hydrophobic flavonoid, grabrizine, glabrene, lycochalcone A) .
[0037]
UV absorber: β-isopropylfuranone derivative, urocanic acid, ethyl urocanate, oxybenzone, oxybenzonesulfonic acid, tetrahydroxybenzophenone, dihydroxydimethoxybenzophenone, dihydroxybenzophenone, cinoxalate, methyl diisopropylcinnamate, octyl methoxycinnamate, glyceryl paraaminobenzoate Amyl paradimethylaminobenzoate, octyl paradimethylbenzoate, octyl paraaminobenzoate, paraaminobenzoic acid, ethyl paraaminobenzoate, butylmethoxydibenzoylmethane, titanium oxide, β-carotene, γ-oryzanol, rice bran extract, aloe extract, Birch extract, white birch extract, chamomile extract, sorghum extract, hawthorn extract, henna echi , Teuchigurumi extract, horse chestnut extract, ginkgo leaf extract, chamomile extract, oil-soluble licorice extract, and the like.
[0038]
Whitening agents: ascorbic acid and its derivatives, sulfur, placental hydrolyzate, ellagic acid and its derivatives, kojic acid and its derivatives, glucosamine and its derivatives, azelay and its derivatives, arbutin and its derivatives, hydroxycinnamic acid and its derivatives, Glutathione, Arnica extract, Ogon extract, Senkyu extract, Sakuhakuhi extract, Psycho extract, Bowfu extract, Hamaboufu extract, Mannen mycelium culture and extract thereof, Gymnema extract, Linden extract, Peach leaf extract, Ages extract, Kuji extract, Jyu extract, Toki extract, Yokuinin extract, Oyster leaf extract, Daio extract, Button pi extract, Hamamelis extract, Maronnier extract, Hypericum extract, Odrianthus extract, Oil soluble licorice Scan (licorice hydrophobic flavones, glabridin, glabrene, licochalcone A) and the like.
[0039]
Moisturizer: serine, glycine, threonine, alanine, collagen, hydrolyzed collagen, vitronectin, fibronectin, keratin, elastin, royal jelly, chondroitin sulfate heparin, glycerophosphate lipid, sphingophospholipid, sphingoglycolipid, linoleic acid or esters thereof, Eicosapentaenoic acid or esters thereof, pectin, algae colloid, bifidobacteria fermentation product, lactic acid fermentation product, yeast extract, litchi mycelium culture or extract thereof, wheat germ oil, avocado oil, rice germ oil, jojoba oil, Soybean phospholipids, γ-oryzanol, bellows oyster extract, Yokuinin extract, Giant extract, Taisou extract, Gypsophila extract, Kidachi aloe extract, Burdock extract, Maronier extract, Mannen wax extract, Arnica extract, Wheat flour Ma, rice bran and the like.
[0040]
Cell activating agent: placental extract, riboflavin or derivative thereof, pyridoxine or derivative thereof, nicotinic acid or derivative thereof, pantothenic acid or derivative thereof, α-tocopherol or derivative thereof, arnica extract, carrot extract, ginseng extract, sorghum extract, loofah Extract (saponin), shikon extract, birch extract, buckwheat extract, button peony extract, peonies extract, mugwort extract, safflower extract, ashitaba extract, loquat leaf extract, shrimp extract, saxifrage extract, japonica extract, salvia extract, garlic extract, mannen wax extract etc.
[0041]
Anti-inflammatory / anti-allergic agents: azulene, allantoin, aminocaproic acid, indomethacin, lysozyme chloride, epsilon aminocaproic acid, oxybenzone, glycyrrhizic acid or its derivatives, glycyrrhetinic acid or its derivatives, photosensitizer 301, photosensitizer 401, diphenhydramine hydrochloride, tranexam Acid or derivative thereof, adenosine phosphate, estradiol, eslon, ethinyl estradiol, cortisone, hydrocortisone, prednisolone, progesterone, corticosterone, arnica extract, inchinkou extract, sanshishi extract, jujube extract, licorice extract, pearl millet extract, mugwort extract, Bare extract, Gentian extract, Psycho extract, Senkyu extract, Bow-fu extract, Yarrow extract, Auren Kiss, mint extract, horse chestnut extract, Scutellaria root extract, and the like.
[0042]
Antioxidant / active oxygen scavenger: dibutylhydroxytoluene, butylhydroxyanisole, propyl gallate, baicalin, baicalein, superoxide dismutase, catalase, rosemary extract, melissa extract, oxon extract, age extract, loquat leaf extract, hop Extract, Hamamelis extract, Peonies extract, Sage extract, Kina extract, Chamomile extract, Eucalyptus extract, Perilla extract, Ginkgo biloba extract, Thyme extract, Cardamom extract, Callaway extract, Nutmeg extract, Mace extract, Laurel extract, Clove extract, Turmeric extract, Yanagitade Extracts etc.
[0043]
Fats and oils: soybean oil, linseed oil, tung oil, sesame oil, nutca oil, rapeseed oil, rapeseed oil, safflower oil, corn oil, olive oil, camellia oil, almond oil, castor oil, peanut oil, cacao oil, molasses, palm oil , Palm kernel oil, beef tallow, mink oil, egg yolk oil, jojoba oil, evening primrose oil, horse oil, etc.
[0044]
Wax: Carnauba wax, candelilla wax, beeswax, salasy beeswax, whale wax, serax, lanolin, etc.
[0045]
Hydrocarbons: liquid paraffin, petrolatum, microlistin wax, ceresin, squalane, polyethylene powder, etc.
[0046]
Fatty acids: stearic acid, linoleic acid, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, hebenic acid, lanolinic acid, oleic acid, undecylenic acid, isostearic acid and the like.
[0047]
Alcohols: lauryl alcohol, cetyl alcohol, stearyl alcohol, lanolin alcohol, hydrogenated lanolin alcohol, oleyl alcohol, hexadecyl alcohol, 2-octyldodecanol, glycerin, sorbitol, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, ethylene glycol or Its polymers, glucose, sucrose, cholesterol, phytosterol, cetostearyl alcohol, etc.
[0048]
Esters: Decyl oleate, butyl stearate, myristyl myristate, hexyl laurate, isopropyl palmitate, isopropyl myristate, octyldodecyl myristate, hexyl decyl dimethyloctanoate, propylene glycol dioleate, diethyl phthalate, monostearic acid Propylene glycol, ethylene glycol monostearate, glyceryl monostearate, glyceryl trimyristate, lanolin acetate, cetyl lactate and the like.
[0049]
Surfactant: Anionic surfactant, cationic surfactant, amphoteric surfactant, nonionic surfactant and the like.
[0050]
Fragrance: Menthol, carvone, eugenol, anethole, peppermint oil, spearmint oil, peppermint oil, eucalyptus oil, anise oil and other oily fragrances from various animals and plants.
[0051]
The filaggrin synthesis promoter, stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent and stratum corneum free amino acid amount increasing agent of the present invention described above are suitably applied to humans, but each has its effects. It can also be applied to animals other than humans as long as possible.
[0052]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. The scope of the present invention is not limited to these examples.
[0053]
[Production Example 1]
300 g of a coarsely ground product of licorice (a mixture of Glychyrrhiza glabra and Glychyrrhiza inflata) was put into 2000 mL of an extraction solvent and kept at 70 ° C. for 3 hours with gentle stirring. Then, it filtered, the filtrate was concentrated under reduced pressure at 40 degreeC, and also it was made to dry with a vacuum dryer, and the licorice extract was obtained. When the above extraction was performed using four kinds of extraction solvents, the yield of the extract was as shown in Table 1. When the extraction solvent is a mixture, the mixing ratio shown below is based on weight.
[0054]

[0055]
[Production Example 2]
300 g of the same licorice root crushed material as used in Production Example 1 was put into 2000 mL of the extraction solvent, and kept at 80 ° C. for 3 hours with stirring. Then, it filtered and the filtrate was obtained. The above extraction was performed using four types of extraction solvents to obtain about 1500 mL of an extract having a solid content concentration shown in Table 2. When the extraction solvent is a mixture, the mixing ratio shown below is based on weight.
[0056]

[0057]
[Test Example 1] Cell activation test
(1) 2 × 10 normal human epidermal cells (Kurabo)⁴A 96-well microplate was seeded at a density of cells / well. At this time, Humedia-KG2 (Kurabo) was used as a seeding medium. After culturing at 37 ° C. under 5% carbon dioxide for 24 hours, Sample 1 of Production Example 1 (concentration: 1.25, 0.63, 0.31, 0.16, 0.08, 0.04 mg / mL) was added. The test medium was changed to the added test medium and cultured at 37 ° C. under 5% carbon dioxide for 24 hours. Thereafter, cell activation was evaluated by the MTT reduction method (H. Tada et.al., J. Immunol. Methods 93, 157, 1986).
[0058]
The cell activation rate (cell increase rate) (%) of Sample 1 at each concentration was as shown in Table 3 below. In Table 3, the cell activation rate (cell increase rate) (%) is expressed as mean ± S.D. D (n = 6).^**For p <0.01,^*"Means p <0.05.
[0059]

[0060]
From the results shown in Table 3, it was confirmed that the licorice extract has a normal human epidermal cell activation effect (proliferation effect) at a concentration of 0.31 mg / mL or less.
[0061]
[Test Example 2] Filaggrin synthesis promoting action test and observation of filaggrin
Using the concentrations (0.16, 0.08, 0.04 mg / mL) confirmed to be non-cytotoxic in Test Example 1, the filaggrin synthesis promoting effect was evaluated. 2 × 10 normal human epidermal cells (Kurabo)⁴A 96-well microplate was seeded at a density of cells / well. At this time, Humedia-KG2 (Kurabo) was used as a seeding medium. After culturing at 37 ° C. under 5% carbon dioxide for 24 hours, the culture medium was replaced with the test medium to which Sample 1 of Production Example 1 was added and cultured at 37 ° C. under 5% carbon dioxide for 6 days. Thereafter, the cells were lysed and the amount of protein was quantified by a dye binding method. The amount of filaggrin synthesis was quantified by an enzyme antibody method using a dot blot method. That is, a certain amount of protein was dot-blotted and developed using an anti-filaggrin antibody and a secondary antibody labeled with Horseradish Peroxidase, and then digitized by densitometry to determine the filaggrin synthesis promotion rate (%).
The results are shown in Table 4. In Table 4, the rate of acceleration of filaggrin synthesis (%) is expressed as mean ± S.D. D (n = 6).^**"Means p <0.01.
[0062]
For the purpose of observing filaggrin, an epidermis stained section was prepared. 0.2 g of Sample 1 of Production Example 1 was weighed and dissolved in 10 mL of 10 (v / v)% ethanol solution to obtain a sample solution. 0.1 mL of this sample solution was applied twice a day (morning and evening) to the back of a 6-week-old hairless mouse (HR-1, female), and 100 μL was continuously applied for 2 weeks. At the same time, a 10 (v / v)% ethanol solution in which the sample was not dissolved was applied as a control. Skin tissue was collected 24 hours after completion of sample application, and frozen sections were prepared. Filaggrin was stained with a FITC-labeled antibody by enzyme antibody staining. The result is shown in FIG. In FIG. 1, (a) shows the result of the control mouse, and (b) shows the result of the licorice extract-coated mouse.
[0063]

[0064]
From the results shown in Table 4, it was confirmed that the licorice extract exhibited a significant filaggrin synthesis promoting effect as compared with the control at a concentration of 0.16 mg / mL. Moreover, the increase in the amount of filaggrin became clear also histologically from FIG.
[0065]
[Test Example 3] Measurement of stratum corneum moisture
0.2 g of Sample 1 of Production Example 1 was weighed and dissolved in 10 mL of 10 (v / v)% ethanol solution to obtain a sample solution. 0.1 mL of this sample solution was applied twice a day (morning and evening) to the back of a 6-week-old hairless mouse (HR-1, female), and 100 μL was continuously applied for 2 weeks. At the same time, a 10 (v / v)% ethanol solution in which the sample was not dissolved was applied as a control.
[0066]
24 hours after the end of the sample application, the electrical conductivity (μS) of the sample application part was measured using SKICON-200 (IBS Co., Ltd.) under Nembutal anesthesia. Since the amount of water in the stratum corneum correlates with electrical conductivity, the amount of water in the stratum corneum was evaluated based on this value. Note that the measurement was performed in a room kept at a room temperature of 23 ° C. and a humidity of 55%.
The results are shown in Table 5. In Table 5, the control stratum corneum moisture content (conductance (μS)) is the mean ± S. D (n = 5), and when the sample 1 is used, the stratum corneum moisture content (conductance (μS)) is the average ± S. D (n = 6).^*"Means p <0.05.
[0067]

[0068]
From the results shown in Table 5, by applying licorice extract, a significant increase in the stratum corneum moisture content was confirmed as compared with the control.
[0069]
[Test Example 4] Measurement of stratum corneum free amino acid content
0.2 g of Sample 1 of Production Example 1 was weighed and dissolved in 10 mL of 10 (v / v)% ethanol solution to obtain a sample solution. 0.1 mL of this sample solution was applied twice a day (morning and evening) to the back of a 6-week-old hairless mouse (HR-1, female), and 100 μL was continuously applied for 2 weeks. At the same time, a 10 (v / v)% ethanol solution in which the sample was not dissolved was applied as a control.
[0070]
The stratum corneum was collected by the tape strip method 24 hours after the end of the sample application. After toluene extraction and drying, 0.3 mol / L HClO_FourWas added, and the precipitated peptide was removed by centrifugation. The supernatant was neutralized by adding an equal amount of 0.3 mol / L sodium hydroxide and freeze-dried to obtain an amino acid analysis sample.
[0071]
Table 6 shows the results of the control, and Table 7 shows the results when Sample 1 was used. In Table 6, the amount of free amino acid (nmol / 6 cm²) Mean value ± S. D (n = 5), and Table 7 shows the amount of free amino acids (nmol / 6 cm).²) Mean value ± S. D (n = 4).^*Is p <0.05,^**"Means p <0.01.
[0072]
[Table 6]
Types of amino acids Amino acid content
Serine 582.1 ± 106.1
Glycine 274.3 ± 51.3
Arginine (Arg) 276.0 ± 47.2
Valin 116.1 ± 23.2
Total free amino acid 1816.2 ± 298.8
[0073]
[Table 7]
Types of amino acids Amino acid content
Serine 791.6 ± 32.0^**
Glycine 402.6 ± 97.7^*
Arginine (Arg) 352.6 ± 35.7^*
Valin 153.0 ± 10.6^*
Total free amino acid 2423.7 ± 254.6^*
[0074]
From the results of amino acid analysis shown in Tables 6 and 7, application of licorice extract confirmed a significant increase in total amino acids compared to the control. Moreover, significant increase was recognized also about four types of individual amino acids compared with control.
[0075]
[Formulation Example 1]
An emulsion having the following composition was produced by a conventional method.
Jojoba oil 4.0g
Olive oil 2.0g
Aloe extract 2.0g
Parsley extract 2.0g
Sodium hyaluronate 0.5g
Squalane 2.0g
Cetanol 2.0g
Glyceryl monostearate 2.0g
2.5 g of polyoxyethylene cetyl ether (20E.0)
Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.0) 2.0g
1,3-butylene glycol 3.0 g
Methyl paraoxybenzoate 0.15g
Fragrance 0.05g
Licorice extract (Sample 1 of Production Example 1) 1.0 g
Purified water remainder (total amount is 100 g)
[0076]
[Formulation Example 2]
A lotion having the following composition was produced by a conventional method.
Glycerin 3.0g
1,3-butylene glycol 3.0 g
Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.0) 0.5g
Methyl paraoxybenzoate 0.15g
Citric acid 0.1g
Sodium citrate 0.1g
Vitamin E 0.1g
Hamamelis extract 1.0g
Parsley-derived antioxidant 0.5g
Fragrance 0.05g
Licorice extract (Sample 1 of Production Example 1) 1.0 g
Purified water remainder (total amount is 100 g)
[0077]
[Composition Example 3]
A cream having the following composition was produced by a conventional method.
Liquid paraffin 5.0g
Salami beeswax 4.0g
Cetanol 3.0g
Squalane 10.0g
Lanolin 2.0g
Stearic acid 1.0g
1.5 g of polyoxyethylene sorbitan oleate (20E.0)
3.0 g glyceryl monostearate
1,3-butylene glycol 6.0 g
1.5 g of methyl paraoxybenzoate
Amino acid / sugar mixture 0.5g
Yeast extract 0.5g
Carrot extract 0.5g
α-hydroxy fatty acid 0.5g
Fragrance 0.1g
Licorice extract (Sample 1 of Production Example 1) 1.0 g
Purified water remainder (total amount is 100 g)
[0078]
[Formulation Example 4]
A pack having the following composition was produced by a conventional method.
Polyvinyl alcohol 15.0g
Polyethylene glycol 3.0g
Propylene glycol 7.0g
Ethanol 10.0g
0.05 g ethyl paraoxybenzoate
Fragrance 0.05g
Glycyrrhizic acid 1.0 g
L-Arginine 0.5g
Licorice extract (Sample 1 of Production Example 1) 5.0 g
Purified water remainder (total amount is 100 g)
[0079]
【The invention's effect】
The present invention provides a filaggrin synthesis promoter, a stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent, and a stratum corneum free amino acid content increasing agent. The filaggrin synthesis promoter, stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent and stratum corneum free amino acid content increasing agent of the present invention are useful for preventing and / or improving the deterioration of the skin moisturizing function. In addition, the filaggrin synthesis promoter, stratum corneum moisturizing function improving / enhancing agent of the present invention and stratum corneum free amino acid content increasing agent can exert skin moisturizing effect, and feel and safety when applied to the skin. Since it has excellent properties, it is useful as a component for skin cosmetics.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a diagram showing the result of staining filaggrin of a frozen section of skin tissue 24 hours after the end of sample application using a FITC-labeled antibody.

Claims

A filaggrin synthesis promoter characterized by containing licorice extract as an active ingredient (excluding applications for moisturizing and improving rough skin) .

2. The filaggrin synthesis promoter according to claim 1, wherein the licorice extract is an extract from the root of licorice obtained using a polar solvent as an extraction solvent (excluding the use for moisturizing and roughening skin) .

A stratum corneum free amino acid content increasing agent characterized by containing licorice extract as an active ingredient (except for moisturizing and rough skin use) .

The licorice extract, horny layer free amino acid amount increasing agent according to claim 3, characterized in that an extract from the root portion of the resulting licorice using a polar solvent as the extraction solvent (the use of moisturizing skin roughness improvement Except) .