JP4979596B2 - 腸疾患のための医薬組成物、飲食品、又は飼料 - Google Patents

Description

本発明は、ラクトパーオキシダーゼを有効成分として含有する潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群等の腸疾患の予防及び／又は治療のための医薬組成物、飲食品、又は飼料に関する。

潰瘍性大腸炎やクローン病は、いまだ原因が不明な炎症性腸疾患であって、緩解、再燃を繰返す慢性の難治性疾患である。これら疾患の病因としては、遺伝的要因や免疫異常に加え、食事等の環境因子の関与の指摘がある（例えば、非特許文献１）が、原因は不明のままである。潰瘍性大腸炎は、大腸の粘膜にびらんや潰瘍が連続的に形成される炎症性疾患であり、血便、粘血便、下痢、腹痛に加え、重症の場合には発熱、体重減少、貧血等の全身性の症状が現れる（例えば、非特許文献２）。また、クローン病は、口から肛門にいたる消化管のどの部位にも炎症や潰瘍等の病変が非連続的に起こることが特徴であり、腹痛、下痢、血便に加え、重症の場合には発熱、下血、体重減少、全身倦怠感、貧血等の症状が現れる（例えば、非特許文献３）。

従来、これらの炎症性腸疾患の罹患率は欧米において高いことが知られていたが、近年、本邦においても食習慣等の生活習慣の変化とともに患者数が急増している。しかしながら、原因が不明であることもあって根本的治療法は確立されていない。そのために治療の方針は、治癒（完全に治療された状態）を目指すのではなく、緩解（寛解）（一時的に症状がよくなった状態）を早期に導入して、それをできるだけ長期間維持することを目指すものとなる。このような対症療法のための薬剤としては、主としてアミノサリチル酸製剤、副腎皮質ステロイド剤、免疫抑制剤等が使用されるが、これらの副作用は臨床上の大きな問題である。例えばアミノサリチル酸製剤としてよく使用されるサラゾスルファピリジンの副作用には悪心、嘔吐、食欲不振、皮疹、頭痛、肝障害、白血球減少、異常赤血球、蛋白尿、下痢などが報告されている。また副腎皮質ステロイド剤は通常はプレドニゾロンの経口投与、注腸、座薬、静注などが用いられるが、胃潰瘍や長期使用による大腿骨頭壊死など副作用が強い。しかし、投薬の中断は症状の再燃（再発）をもたらすために、これらの薬剤は継続的に使用せざるを得ない。

一方、過敏性腸症候群は、小腸や大腸に明らかな器質的病変が認められないものの、機能的異常によって、腹痛、下痢、粘液便、便秘、腹部膨満等の症状が現れる疾患である（例えば、非特許文献４）。本邦での検討によると、その罹患率は欧米と同程度であり、１５．５％にのぼることが報告されている（例えば、非特許文献４）。過敏性腸症候群の病因はいまだ不明であるが、精神的ストレス、腸管運動機能異常に加え、完治してない軽度の腸炎が本症状を引き起こす可能性が指摘されている（例えば、非特許文献５）。また、過敏性腸症候群に対しても、その原因が明らかでないため、寛解の導入と維持を目指した対症療法を行うことになる。このための薬剤としては主に整腸剤、下剤、抗コリン剤、抗うつ剤、抗不安薬等が投与されている。さらに、炎症性腸疾患の対症療法に使用される薬剤を過敏性腸症候群に使用することにより、過敏性超症候群の症状が緩和されることが示唆されている（例えば、非特許文献６）。しかし、寛解の導入と維持のためには、薬剤を継続的に使用せざるを得ず、これによる副作用が大きな問題である。

ラクトパーオキシダーゼは、牛乳等の哺乳類の乳汁をはじめ、唾液、涙液、気道粘液等の分泌液に含有される分子量約８万の酸化還元酵素であり（例えば、非特許文献７）、補酵素として分子内に一つのヘムを含有している（例えば、非特許文献８）。また、ラクトパーオキシダーゼは、動物の組織や体液に広く含有されるチオシアン酸（ＳＣＮ−）を過酸化水素の存在下で酸化することによって、抗菌物質であるヒポチオシアン酸（ＯＳＣＮ−）を生成させることが知られており（例えば、非特許文献９）、このような系に基づいて、ラクトパーオキシダーゼ、チオシアン酸、及び過酸化水素（又は過酸化水素を供与できる化合物）から構成される様々な効果を発揮する薬剤が開発されている。例えば、ヘリコバクタピロリ感染の治療用医薬を製造するためのラクトペルオキシダーゼ、ペルオキシドドナーおよびチオシアネートの使用（特許文献１）、ペルオキシダーゼの予防および治療への応用（特許文献２）、パーオキシダーゼ−チオシアン酸イオン及び又はハロゲノイオン−過酸化水素系を含む乳酸菌発酵食品の製造法（特許文献３）、二酵素系歯みがき（特許文献４）、殺菌剤組成物（特許文献５）、パーオキシダーゼを含有する乳酸菌スターター、発酵乳製品及びそれらの製造法（特許文献６）、ウレアーゼ不活性化組成物および飲食品（特許文献７）に関する技術などが開示されている。

また、ラクトパーオキシダーゼ単独の効果については、その経口投与によって、インフルエンザウイルスを感染させたマウスにおける肺炎症の重症度、気管支肺胞洗浄液中の炎症性細胞数、血清中インターロイキン−６濃度上昇が抑制されること（例えば、非特許文献１０）が報告され、さらに腸内フローラ改善剤及び飲食品（特許文献８）、プロテアーゼ阻害剤（特許文献９）、抗ウイルス剤（特許文献１０）、インターロイキン−６産生抑制剤（特許文献１１）に関する技術が開示されている。しかしながら、現在に至るまで腸疾患に対するラクトパーオキシダーゼの効果に関する既存の技術は一切報告されていなかった。

特表２０００−５０９３６７号公報 特許第３４７８８２１号公報 特開昭６２−２２８２２４号公報 特公平４−２５９２４号公報 特開平１−６１４２７号公報 特許第３００７６８６号公報 特開２００２−２３８５５４号公報 特開２００３−２４６７５３号公報 特開２００５−１０４９００号公報 特開２００５−２３２１３３号公報 国際公開２００４／０７３７３３号パンフレット 日本臨床、第６３巻、２００５年、ｐ．７５７−７６２ 日本臨床、第６３巻、２００５年、ｐ．７４４−７４９ ディジージーズ・オブ・ザ・コロン・アンド・レクタム（Diseases of the Colon and Rectum）、アメリカ、２０００年、第４３巻、ｐ．Ｓ８５−Ｓ９３ インターナル・メディスン（Internal Medicine）、日本、２００４年、第４３巻、ｐ．３５３−３５９ ガット（Gut）、イギリス、２００２年、第５１巻、ｐ．ｉ４１−ｉ４４ カレント・オピニオン・イン・ガストロエンテロロジー（Current Opinion in Gastroenterology）、アメリカ、２００３年、第１９巻、ｐ．３３６−３４２ アメリカン・ジャーナル・オブ・レスピラトリー・アンド・クリティカル・ケアー・メディスン（American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine）、アメリカ、第１６６巻、２００２年、ｐ．Ｓ５７−Ｓ６１ ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ニュートリション（British Journal of Nutrition）、イギリス、第８４巻、２０００年、ｐ．Ｓ１９−Ｓ２５ アメリカン・ジャーナル・オブ・レスピラトリー・セル・アンド・モレキュラー・バイオロジー（American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology）、アメリカ、第２０巻、２０００年、ｐ．６４２−６４４ ジャーナル・オブ・メディカル・マイクロバイオロジー（Journal of Medical Microbiology）、イギリス、第５４巻、２００５年、ｐ．７１７−７２３

このような状況から、寛解の導入と維持のために、安全で副作用をもたらすことなく長期間にわたって投与又は摂取することが可能な潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群等の腸疾患に対する予防剤又は治療剤の開発が希求されていた。

また、副作用の心配なく継続して日常的に摂取が可能であって、健康食品、機能性食品、特別用途食品、栄養機能食品、特定保健用食品等の形態として、生活習慣のなかでの腸疾患の予防及び／又は腸疾患の症状の改善（寛解の導入と維持）のために有用な飲食品を提供することが望まれていた。

本発明者らは前記課題を鑑み、鋭意研究を重ねた結果、乳蛋白質であるラクトパーオキシダーゼに潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群等の腸疾患に対する予防効果と症状の緩和（改善）効果を初めて見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち本発明は、ラクトパーオキシダーゼを有効成分として含有する潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群等の腸疾患の予防及び／又は治療のための医薬組成物、飲食品、又は飼料を提供することより達成されたものであり、課題を解決するための手段は以下のとおりである。

前記課題を解決する本願第一の発明は、ラクトパーオキシダーゼを有効成分として含有する炎症性腸疾患の予防及び／又は治療のための医薬組成物であって、腸疾患が潰瘍性大腸炎、又はクローン病であることを好ましい態様としている。

前記課題を解決する本願第二の発明は、有効成分としてのラクトパーオキシダーゼ、及び薬学的に許容される担体を含有させて、本願第一の発明に係る医薬組成物を製造する方法である。

また、本発明は次の（１）〜（１１）にある。
（１） 有効成分としてのラクトパーオキシダーゼ、及び薬学的に許容される担体を含有してなる、腸疾患の予防及び／又は治療のための医薬組成物。
（２） 腸疾患が潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群から選択される少なくとも１又は複数の疾患である前記（１）に記載の医薬組成物。
（３） 前記（１）〜（２）の何れかに記載の医薬組成物を製造するためのラクトパーオキシダーゼの使用。
（４） ラクトパーオキシダーゼを有効成分として含有する腸疾患の予防及び／又は治療のための飲食品。
（５） 腸疾患が潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群から選択される少なくとも１又は複数の疾患である前記（４）に記載の飲食品。
（６） 前記（４）〜（５）の何れかに記載の飲食品を製造するためのラクトパーオキシダーゼの使用。
（７） 飲食品が健康食品、機能性食品、特別用途食品、栄養機能食品、又は特定保健用食品の形態である前記（４）〜（６）の何れかに記載の飲食品。
（８） ラクトパーオキシダーゼを有効成分として含有する腸疾患の予防及び／又は治療のための食品添加剤。
（９） 腸疾患が潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群から選択される少なくとも１又は複数の疾患である前記（８）に記載の食品添加剤。
（１０） ラクトパーオキシダーゼを有効成分として含有する腸疾患の予防及び／又は治療のための飼料。
（１１） 腸疾患が潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群から選択される少なくとも１又は複数の疾患である（１０）に記載の飼料。
（１２） 有効成分としてのラクトパーオキシダーゼ、及び薬学的に許容される担体を含有してなる医薬組成物を投与することにより、ほ乳類の腸疾患の予防及び／又は治療を行う方法。
（１３） 腸疾患が潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群から選択される少なくとも１又は複数の疾患である前記（１２）に記載の方法。

上記のラクトパーオキシダーゼは、天然物から単離されたラクトパーオキシダーゼを使用することができ、また人工的に合成されたパーオキシダーゼを使用することもできる。好ましくは天然物から単離されたラクトパーオキシダーゼが使用される。

本発明によって奏される効果は次のとおりである。

（１）本発明の医薬組成物、飲食品及び食品添加剤は、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群等の腸疾患の予防及び／又は治療効果を有する。

（２）本発明の医薬組成物、飲食品及び食品添加剤は、ヒトおよび動物に対する安全性が高く、副作用の心配なく長期間に渡って継続して日常的に摂取することができ、これによって腸疾患の予防及び／又は治療をすることが可能である。

（３）本発明の有効成分であるラクトパーオキシダーゼは、生体材料として比較的安価な乳およびホエー等の原料から安定して大量に製造することができるので、腸疾患の予防及び／又は治療のための医薬組成物、飲食品及び食品添加剤を安価に提供することが可能である。このために費用負担の面からも、長期間に渡って継続して日常的に摂取することが容易となる。

次に、本発明の好ましい実施形態について詳細に説明する。ただし、本発明は以下の好ましい実施形態に限定されず、本発明の範囲内で自由に変更することができるものである。尚、本明細書において百分率は特に断りのない限り質量による表示である。

本発明において、腸疾患の予防効果と治療効果とは、主として炎症性の腸疾患に対する効果であって、特に潰瘍性大腸炎、クローン病等の炎症性腸疾患や、完治していない軽度の炎症が引き起こす過敏性腸症候群等の症状に対する効果である。そして治療効果とは、症状を緩和（改善）する効果と疾患を治療する効果を含み、特に寛解に導入する効果とその状態を維持する効果を意味する。すなわち、本発明において、有効成分であるラクトパーオキシダーゼを日常的に投与又は摂取することによって、副作用などが殆ど生じず、前記疾患の予防及び／又は治療効果が発揮されるのである。

本発明に使用するラクトパーオキシダーゼは、以下の製造法、例えば生菌含有液状組成物（特開平５−４１９８１号公報）に開示された方法のように未加熱のホエーまたは脱脂乳から、常法（例えば、イオンクロマトグラフィー等）に従って工業的に製造することが好適に可能である。あるいは所望により、市販の天然物由来のラクトパーオキシダーゼ（例えばバイオポール社製等）、又は組換え型ラクトパーオキシダーゼ〔例えば、シンらの方法［バイオケミカル・アンド・バイオフィジカル・リサーチ・コミュニュケーションズ（Biochemical and Biophysical Research Communications）、第２７１巻、２０００年、ｐ．８３１−８３６］によって発現・精製された組換え型ラクトパーオキシダーゼ、又は市販の組換え型ラクトパーオキシダーゼ〕を使用することも可能である。

本発明に使用するラクトパーオキシダーゼは、ほ乳類の乳に由来するものを好適に使用可能である。ヒトのための医薬組成物、飲食品に使用する場合には、その乳が伝統的に飲食用に用いられている牛、羊、山羊などの乳に由来するラクトパーオキシダーゼが好ましく、特に牛乳由来のものが好ましい。これらは歴史的な年月の間、ヒトの飲食に使用されていたために、ヒトに対する安全性が極めて高い水準で担保されているからである。

また、牛乳由来の未加熱のホエーは、乳製品製造の副産物として安定して大量に得ることができるために、本発明に使用するラクトパーオキシダーゼの原料として、特に好適である。

本発明の医薬組成物、飲食品、又は飼料における有効成分であるラクトパーオキシダーゼは、乳由来の天然物であって、摂取した場合の安全性が高く、牛乳等の食品中に含有され、日常的に摂取されているもので、毒性を示さず、長期間連続的に摂取しても副作用が殆ど認められない。従って、経口等の投与方法により適宜使用することが可能であり、公知の方法により、錠剤、カプセル剤、トローチ剤、シロップ剤、顆粒剤、散剤等に加工することも可能である。また、ラクトパーオキシダーゼを有効成分として食品中に含有させることもでき、腸疾患の予防及び／又は治療の一態様として、腸疾患の予防及び／又は治療効果を有する機能性食品に加工することも可能である。

本発明の医薬組成物、飲食品又は飼料の有効成分であるラクトパーオキシダーゼの投与量は、剤型、症状、年齢、体重等によって異なるが、腸疾患の予防及び／又は治療を効果的に発揮させるためには、少なくとも１ｍｇ／ｋｇ体重／日の割合で経口投与、特に３〜３００ｍｇ／ｋｇ体重／日の割合で投与することが好ましい。

本発明による医薬組成物としては、例えば、ラクトパーオキシダーゼを薬学的に許容され得る賦形剤等の任意の添加剤を用いて製剤化することにより製造できる。製剤化する場合、製剤中のラクトパーオキシダーゼの含有量は、通常０．００１〜１０質量％、好ましくは０．０１〜１０質量％である。製剤化にあたっては、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、注射剤用溶剤等の添加剤を使用できる。

賦形剤としては、例えば、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビット等の糖誘導体；トウモロコシデンプン、馬鈴薯デンプン、α−デンプン、デキストリン、カルボキシメチルデンプン等のデンプン誘導体；結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等のセルロース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルラン；軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウム等の珪酸塩誘導体；リン酸カルシウム等のリン酸塩誘導体；炭酸カルシウム等の炭酸塩誘導体；硫酸カルシウム等の硫酸塩誘導体等が挙げられ、結合剤としては、例えば、上記賦形剤の他、ゼラチン；ポリビニルピロリドン；マグロゴール等が挙げられ、崩壊剤としては、例えば、上記賦形剤の他、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドン等の化学修飾されたデンプン又はセルロース誘導体等が挙げられ、滑沢剤としては、例えば、タルク；ステアリン酸；ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム等のステアリン酸金属塩；コロイドシリカ；ビーガム、ゲイロウ等のワックス類；硼酸；グリコール；フマル酸、アジピン酸等のカルボン酸類；安息香酸ナトリウム等のカルボン酸ナトリウム塩；硫酸ナトリウム等の硫酸類塩；ロイシン；ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム等のラウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水和物等の珪酸類；デンプン誘導体等が挙げられ、安定剤としては、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン等のパラオキシ安息香酸エステル類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチルアルコール等のアルコール類；塩化ベンザルコニウム；無水酢酸；ソルビン酸等が挙げられ、矯味矯臭剤としては、例えば、甘味料、酸味料、香料等が挙げられ、注射剤用溶剤としては、例えば、水、エタノール、グリセリン等が挙げられる。

本発明の医薬組成物の投与経路としては、例えば、経口投与、経腸投与等の非経口投与が挙げられ、本発明の医薬組成物の投与剤型としては、例えば、噴霧剤、カプセル剤、錠剤、顆粒剤、シロップ剤、乳剤、座剤、注射剤、軟膏、テープ剤等が挙げられる。また、本発明の医薬組成物は、飲食品や飼料等に配合して投与することもできる。

本発明の医薬組成物を含有する飲食品は、ラクトパーオキシダーゼを有効成分として含有する腸疾患の予防及び／又は治療のための飲食品を意味するものであって、日常的に摂取が可能な飲食品を例示することができる。

例えば、ラクトパーオキシダーゼに、デキストリン、デンプン等の糖類；ゼラチン、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質；アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類；セルロース、アラビアゴム等の多糖類；大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類等を配合することにより製造できる。飲食品組成物の形態としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料（これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む）；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物、パン；経腸栄養食；機能性食品等が挙げられる。

本発明の医薬組成物を含有する飼料としては、ラクトパーオキシダーゼを有効成分として含有する腸疾患の予防及び／又は治療のための飼料を意味するものであって、日常的に給餌が可能な飼料を例示することができる。

例えば、ラクトパーオキシダーゼに、トウモロコシ、小麦、大麦、ライ麦、マイロ等の穀類；大豆油粕、ナタネ油粕、ヤシ油粕、アマニ油粕等の植物性油粕類；フスマ、麦糠、米糠、脱脂米糠等の糠類；コーングルテンミール、コーンジャムミール等の製造粕類；魚粉、脱脂粉乳、ホエー、イエローグリース、タロー等の動物性飼料類；トラル酵母、ビール酵母等の酵母類；第三リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の鉱物質飼料；油脂類；単体アミノ酸；糖類等を配合することにより製造できる。飼料の形態としては、ペットフード、家畜飼料、養魚飼料等が挙げられる。

本発明の医薬組成物、飲食品、又は飼料は、それのみで使用してもよいが、その他の腸疾患に効果を有する医薬組成物、飲食品、又は飼料と併用してもよい。併用によって、腸疾患の予防及び／又は治療の効果を高めることができる。併用する医薬組成物、飲食品、又は飼料は、本発明の医薬組成物、飲食品、又は飼料中に有効成分として含有させてもよいし、本発明の医薬組成物、飲食品、又は飼料中には含有させずに別個の薬剤、飲食品等として組み合わせて商品化してもよい。

本発明の飲食品における用途としては、腸疾患の予防及び／又は治療の効果を利用するような種々の用途をとることが可能である。

本発明の飲食品は、腸疾患を改善するためとの用途が表示された飲食品、例えば「腸疾患改善用と表示された、腸疾患改善効果を有する飲食品」、「腸疾患改善用と表示された、ラクトパーオキシダーゼを含有する飲食品」、あるいは「腸疾患予防用と表示された、ラクトパーオキシダーゼを含有する飲食品」等として販売することが好ましい。

なお、以上のような表示を行うために使用する文言は、「腸疾患改善用」あるいは「腸疾患予防用」という文言のみに限られるわけではなく、それ以外の文言であっても、腸疾患を予防又は治療効果を表す文言であれば、本発明の範囲に包含されることはいうまでもない。そのような文言としては、例えば、需要者に対して、腸疾患の予防効果及び／又は改善効果を認識させるような種々の用途に基づく表示も可能である。

前記「表示」の行為（表示行為）には、需要者に対して上記用途を知らしめるための全ての行為が含まれ、上記用途を想起・類推させうるような表示であれば、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体等の如何に拘わらず、すべて本発明の「表示」の行為に該当する。しかしながら、需要者が上記用途を直接的に認識できるような表現により表示することが好ましい。具体的には、本発明の飲食品に係る商品又は商品の包装に上記用途を記載する行為を表示行為として挙げることができ、さらに商品又は商品の包装に上記用途を記載したものを譲渡し、引き渡し、譲渡若しくは引渡しのために展示し、輸入する行為、商品に関する広告、価格表若しくは取引書類に上記用途を記載して展示し、若しくは頒布し、又はこれらを内容とする情報に上記用途を記載して電磁気的（インターネット等）方法により提供する行為、等を例示できる。

一方、表示される内容（表示内容）としては、行政等によって認可された表示（例えば、行政が定める各種制度に基づいて認可を受け、そのような認可に基づいた態様で行う表示）であることが好ましく、そのような表示内容を、包装、容器、カタログ、パンフレット、ＰＯＰ等の販売現場における宣伝材、その他の書類等へ付することが好ましい。

また、例えば、健康食品、機能性食品、経腸栄養食品、特別用途食品、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品、医薬用部外品等としての表示を例示することができる。特に、厚生労働省によって認可される表示、例えば、特定保健用食品制度、これに類似する制度にて認可される表示を例示できる。後者の例としては、特定保健用食品としての表示、条件付き特定保健用食品としての表示、身体の構造や機能に影響を与える旨の表示、疾病リスク低減表示等を例示することができ、詳細にいえば、健康増進法施行規則（平成１５年４月３０日日本国厚生労働省令第８６号）に定められた特定保健用食品としての表示（特に保健の用途の表示）、及びこれに類する表示が、典型的な例として列挙することが可能である。

本発明において、ラクトパーオキシダーゼによる腸疾患の予防及び／又は治療効果を評価するために、ガストロエンテロロジー（Gastroenterology）、アメリカ、第１０９巻、１９９５年、第１３４４−１３６７頁、又はラボラトリー・インベスティゲーション（Laboratory Investigation）、アメリカ、第６９巻、１９９３年、ｐ．２３８−２４９に記載されたデキストラン硫酸ナトリウム投与による腸炎誘導に基づいた腸炎モデル動物を用いた試験を行った。すなわち、常法によりマウスにデキストラン硫酸ナトリウムを添加した飲水を与えることにより腸炎を誘導し、その症状に対するラクトパーオキシダーゼの効果（体重減少抑制作用、大腸短縮抑制作用、腸炎抑制作用）として検討した。

次に実施例を示して本発明を更に詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

［ラクトパーオキシダーゼの製造］
１００ＬのＣＭ−セファデックスＣ−５０（アマシャム社製）を充填したカラムに、未加熱のホエー１０，０００ｋｇを通液した。次いで水１，０００ｋｇでセファデックスゲルを洗浄し、０．３Ｍ食塩を含む２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）を２００Ｌ通液し、セファデックス樹脂に吸着したラクトパーオキシダーゼを溶出した。この溶出液を分画分子量１０，０００の限外濾過膜モジュール（旭化成社製）で濃縮して脱塩した。得られた約１０リットルの濃縮液に３０Ｌの脱イオン水を添加し、これを２０ＬのＳＰセファロースＦＦ（アマシャム社製）を充填したカラムに通液した。次いで０．１５Ｍ食塩を含む２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．４）でセファロースゲルを洗浄し、０．３Ｍ食塩を含む２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．４）でラクトパーオキシダーゼを溶出した。この溶出液を分画分子量１０，０００の限外濾過膜モジュール（旭化成社製）で濃縮して脱塩した。次いで平均孔サイズ０．２μｍの精密濾過膜モジュール（旭化成社製）で無菌濾過し、凍結乾燥して粉末状の無菌ラクトパーオキシダーゼ約１５０ｇを得た。

このラクトパーオキシダーゼ標品を、アクリルアミド濃度が１０〜２０％のＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルを用いて電気泳動を行い、クマシーブリリアントブルーＲ２５０（シグマ社製）で染色して、画像処理装置（アトー社製）で分析したところ、純度は約９７％であった。

［ラクトパーオキシダーゼ・タブレットの製造］
実施例１の方法で得られたラクトパーオキシダーゼ１５０ｇ、ラクチュロース粉末（森永乳業社製）１００ｇ、マルツデキストリン（松谷化学工業社製）６３５ｇ、脱脂粉乳（森永乳業社製）８５ｇ、ステビア甘味料（三栄源エフ・エフ・アイ社製）１ｇ、ヨーグルト・フレーバー（三栄源エフ・エフ・アイ社製）５ｇ、グリセリン脂肪酸エステル製剤（理研ビタミン社製）２４ｇの各粉末を添加して均一に混合し、打錠機（畑鉄鋼所社製）を使用して、錠剤１錠当り０．５ｇとし、１２錠／分打錠速度、９．８ＫＰａの圧力で前記混合粉末を連続的に打錠し、炎症性腸疾患及び過敏性腸症候群の症状緩和剤及び／又は治療剤であるラクトパーオキシダーゼを含有するタブレット１８００錠（約９００ｇ）を製造した。

ホエー蛋白加水分解物（森永乳業社製）１０．８ｋｇ、デキストリン（昭和産業社製）３６ｋｇ、および少量の水溶性ビタミンとミネラルを水２００ｋｇに溶解して水相をタンク内に調製した。これとは別に、大豆サラダ油（太陽油脂社製）３ｋｇ、パーム油（太陽油脂社製）８．５ｋｇ、サフラワー油（太陽油脂社製）２．５ｋｇ、レシチン（味の素社製）０．２ｋｇ、脂肪酸モノグリセリド（花王社製）０．２ｋｇ、及び少量の脂溶性ビタミンを混合溶解して油相を調製した。タンク内の水相に油相を添加し、攪拌して混合した後、７０℃に加温し、更に、ホモゲナイザーにより１４．７ＭＰａの圧力で均質化した。次いで、９０℃で１０分間殺菌した後、濃縮し、噴霧乾燥して、中間製品粉末約５９ｋｇを調製した。この中間製品粉末５０ｋｇに、蔗糖（ホクレン社製）６．８ｋｇ、アミノ酸混合粉末（味の素社製）１６７ｇ、および実施例１の方法で得られたラクトパーオキシダーゼ６０ｇを添加し、均一に混合して、腸疾患の予防及び／又は症状の緩和する効果を有するラクトパーオキシダーゼを含有する経腸栄養食粉末約５６ｋｇを製造した。

次に試験例を示して本発明を詳細に説明する。

［試験例１］
本試験は、腸疾患の中でも潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群等のモデル動物を対象とした、大腸炎の症状に対するラクトパーオキシダーゼの効果を調べるために行った。

（１）試料の調製
実施例１の方法で得られたラクトパーオキシダーゼを１２．５質量％の濃度になるように精製水に溶解し、試験試料を調製した。また、ウシ血清アルブミン（シグマ社製）を１２．５質量％の濃度になるように精製水に溶解して対照試料を調製した。

試験動物としては、７週齢のＣＢＡ／Ｊ雌性マウス（日本チャールス・リバー社から購入）に、デキストラン硫酸ナトリウム（分子量３６，０００〜５０，０００、ＭＰバイオメディカルス社製）を投与し、腸炎を誘導した状態のマウスをモデル動物として使用した。

（２）試験方法
ａ）試料の投与と体重測定
合計３２匹の７週齢のＣＢＡ／Ｊ雌性マウスを、糞食防止ネットを設置したケージに入れ、ラボＭＲストック（日本農産工業社製）と飲水で一週間馴化飼育した。次に、表１のように、前記マウスを６匹ずつ２群、１０匹ずつ２群に分け（合計４群）した。

デキストラン硫酸ナトリウムを投与しない動物群（第１群、第２群）のうち、第１群については、対照試料０．５ｍｌをゾンデを用いて一日一回、１０日間連日経口投与し、第２群については、試験試料０．５ｍｌをゾンデを用いて一日一回、１０日間連日経口投与した。

また、デキストラン硫酸ナトリウムを投与して腸炎を誘発させるモデル動物群（第３群、第４群）のうち、第３群については、対照試料０．５ｍｌをゾンデを用いて一日一回、１０日間連日経口投与し、ここで、対照試料の投与２日目から１０日目の９日間、デキストラン硫酸ナトリウムを３．０質量％の濃度になるように飲水中に溶解して、デキストラン硫酸投与も行った。

さらに、第４群については、試験試料０．５ｍｌをゾンデを用いて一日一回、１０日間連日経口投与し、ここで、試験試料の投与２日目から１０日目の９日間、デキストラン硫酸ナトリウムを３．０質量％の濃度になるように飲水中に溶解して、デキストラン硫酸ナトリウム投与も行った。

第１〜４群のいずれも、試料投与開始から２日目にマウスの体重を測定し、投与終了日（１０日目）にも体重測定を行った。投与が終了した各群のマウスは、麻酔下で解剖し、大腸を摘出した。

ｂ）大腸の長さ測定
試料の投与が終了した各試験群のマウスは、麻酔下で解剖し、大腸を摘出した。腸壁肥厚の指標とするために、摘出した大腸の長さを定規で測定し、平均値±標準偏差を求めた。

ｃ）腸炎スコア化
上記の方法で摘出された大腸の残りを丸棒に巻きつけ、虫ピンで留め、リン酸緩衝１０％ホルマリン液（ナカライテスク社製）で固定した。次いで、常法に従いパラフィンで包埋し、薄切した後、ヘマトキシリン・エオシン染色を施した。この標本を用いて、クーパーらの方法〔例えば、［ラボラトリー・インベスティゲーション（Laboratory Investigation）、アメリカ、第６９巻、１９９３年、ｐ．２３８−２４９］を参照〕に従い、表２に記載の基準によって腸炎の重症度を病理組織学的にスコア化し、さらに表３に記載の基準によって腸炎の病変部分が大腸全域に占める割合をスコア化し、これらのスコアを掛け合わせることによって腸炎スコアを求め、各試験群の腸炎スコアの平均値±標準偏差を求めた。

ｄ）統計解析
各試験群の体重変化、大腸の長さ及び腸炎スコアについて、一元配置の分散分析及びTukey-Kramer法によって統計解析し、危険率５％未満（ｐ＜０．０５）で有意差ありと判定した。

（３）試験結果
本試験の結果を表４〜６に示す。表４は各試験群の体重変化（試料投与開始２日−１０日目）、表５は大腸の長さの測定結果、表６は腸炎スコアをそれぞれ平均値±標準偏差で示す。その結果、体重変化（表４参照）は第１群の対照試料を投与した正常動物では平均０．８５ｇと体重が増加したのに対し、第３群の対照試料を投与した腸炎モデル動物では−１．７３ｇと体重が減少し、第１群と第３群の間で有意差が認められた。一方、第４群のラクトパーオキシダーゼを投与した腸炎モデル動物では、−０．３０ｇにとどまり、第３群の対照試料を投与した腸炎モデル動物に比べて体重減少が抑制され、第３群と第４群の間で有意差が認められた。なお、第２群のラクトパーオキシダーゼを投与した正常動物では、第１群の対照試料を投与した正常動物とほぼ同様に体重が増加し、第１群と第２群の間には有意差は認められなかった。

また、大腸の長さ（表５参照）は、第１群の対照試料を投与した正常動物では平均９．１ｃｍを示したのに対し、第３群の対照試料を投与した腸炎モデル動物では５．８ｃｍと短く、第１群と第３群の間で有意差が認められた。一方、第４群のラクトパーオキシダーゼを投与した腸炎モデル動物では、６．７ｃｍを示し、第３群の対照試料を投与した腸炎モデル動物に比べて大腸の短縮が抑制され、第３群と第４群の間で有意差が認められた。なお、第２群のラクトパーオキシダーゼを投与した正常動物では、第１群の対照試料を投与した正常動物とほぼ同様の大腸の長さを示し、第１群と第２群の間で有意差は認められなかった。

さらに、腸炎スコア（表６参照）は、第１群の対照試料を投与した正常動物では平均ゼロであったのに対し、第３群の対照試料を投与した腸炎モデル動物では８．０と高く、第１群と第３群の間で有意差が認められた。一方、第４群のラクトパーオキシダーゼを投与した腸炎モデル動物では５．１を示し、第３群の対照試料を投与した腸炎モデル動物に比べて腸炎スコアが改善され、第３群と第４群の間で有意差が認められた。

以上の結果から、ラクトパーオキシダーゼは、統計学的に有意に体重減少及び大腸短縮等の腸炎の症状を改善し、腸炎スコアを改善する効果を示すことが明らかになった。

本発明の腸疾患のための医薬組成物、飲食品、又は飼料により、ヒトや動物に対する安全性が高く、日常的に投与又は摂取することによって、潰瘍性大腸炎、クローン病、過敏性腸症候群等の腸疾患によって起因する症状を緩和させること（寛解の導入と維持）が可能である。また、本発明の有効成分であるラクトパーオキシダーゼは、乳等の原料から大量に製造することができるので、腸疾患のための医薬組成物や飲食品を安価に提供することが可能である。

Claims (3)

1. 有効成分としてのラクトパーオキシダーゼ、及び薬学的に許容される担体を含有してなる（ただし、チオシアン酸が添加されていない）、炎症性腸疾患の予防及び／又は治療のための医薬組成物。
2. 炎症性腸疾患が潰瘍性大腸炎、又はクローン病である請求項１に記載の医薬組成物。
3. 有効成分としてのラクトパーオキシダーゼ、及び薬学的に許容される担体を含有させて、請求項１〜２の何れかに記載の医薬組成物を製造する方法。