JP5043868B2

JP5043868B2 - Ｃ型肝炎の予防または治療のためのピリミジンジオン誘導体の使用

Info

Publication number: JP5043868B2
Application number: JP2008554144A
Authority: JP
Inventors: クウォン、ホ−ソク; リ、ジェ−ウォン; リ、スン−ファン; リ、ユン−ヘ; ジョ、ジョン−ホ; チュン、スン−ガン; キム、ヒュン−テ; チョ、ウイ−ファン; ミュン、ヒュン−ナム
Original assignee: Samjin Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Samjin Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2006-02-10
Filing date: 2007-02-08
Publication date: 2012-10-10
Anticipated expiration: 2027-02-08
Also published as: WO2007091857A1; US7851479B2; CN101384262B; KR20070081238A; EP1986651B1; JP2009526041A; CA2642136A1; KR101237312B1; CA2642136C; EP1986651A1; EP1986651A4; US20090023764A1; CN101384262A

Description

発明の分野

本発明は、Ｃ型肝炎の予防または治療のためのピリミジンジオン誘導体またはその薬学的に許容可能な塩の使用に関する。

発明の背景

Ｃ型肝炎ウイルス（HCV）感染により引き起こされるＣ型肝炎は、ここ20年の間、広く研究されているが、HCVに関する情報が不完全なため、依然として治療は困難である。現在、Ｃ型肝炎を治療するために食品医薬品局（FDA）により承認されている唯一の薬は、プリンヌクレオシド誘導体のリバビリン（Ribavirin）である（Thomas et al., Hepatology 20(4):440, 1994）。広範囲のDNAおよびRNAウイルスに対して抗ウイルス活性を有するインターフェロン−αは、Ｃ型肝炎の治療薬として提案されている。しかし、これらは、重大な副作用と低い治癒効果のために、臨床応用に不適切であると考えられる。リバビリンとインターフェロン−αの併用療法は、改良された結果を示したが、貧血およびうつ病などの副作用を伴うことに加えて、Ｃ型肝炎ウイルスに対する低い特異性と低い治癒効果を依然として示す。このため、改良された治癒活性と低い副作用を有するＣ型肝炎の新規治療薬が求められる。

幾つかのピリミジンジオン誘導体が、AIDSを治療するための抗ウイルス剤として使用するために開発されている。たとえば、韓国特許公開公報2000-65885は、ピリミジンジオンのN-1位に同素環、またはアルキルもしくはアルキルカルボニルメチル基を導入することにより合成された新規なピリミジンジオン誘導体を開示する。この開示は、前記ピリミジンジオン誘導体が、毒性をもたないで、ヒト免疫不全ウイルス（HIV）に対して強力な薬理活性を示すことを示唆する。我々は、かかるピリミジンジオン誘導体が、Ｃ型肝炎の予防または治療に有効であることを予測できないことに見出した。

発明の概要

したがって、本発明の目的は、Ｃ型肝炎を効果的に予防または治療するための方法を提供することである。

本発明の一つの側面に従って、Ｃ型肝炎の予防または治療のための式（I）のピリミジンジオン誘導体またはその薬学的に許容可能な塩の使用が提供される：

ここで
Ｒ¹は、少なくとも一つのヒドロキシＣ₁〜Ｃ₄アルキルで必要に応じて置換された、Ｃ₃〜Ｃ₆シクロアルキルまたはＣ₃〜Ｃ₆シクロアルケニルであり；
Ｘは、酸素、硫黄またはカルボニルであり；
ｎは１または２であり；
Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は、それぞれ独立して、水素またはＣ₁〜Ｃ₄アルキルである。

発明の詳細な説明

本発明で使用され得る式（I）の好ましいピリミジンジオン誘導体は、Ｒ¹が、Ｃ₃〜Ｃ₆シクロアルキル、シクロペンテニル、またはヒドロキシメチルシクロペンテニルである対応化合物である。

本発明で使用される代表的化合物を表１に挙げる。

表１

本発明で使用されるピリミジンジオン誘導体は、韓国特許公開公報2000-65885に記載される方法で調製することができる。

たとえば、本発明で使用されるピリミジンジオン誘導体は、以下の反応スキームに従って調製される。

ここで、Ｒ¹〜Ｒ⁴、Ｘおよびｎは、式（I）で規定したのと同じ意味を有し、Lieは離脱基、たとえばハロゲン、アルキルスルホニルおよびアリールスルホニルを意味する。

反応スキームにおいて出発材料として使用される式（II）の化合物は、慣用的な方法、たとえばWO 93/02044およびWO 95/18109により調製することができる。式（I）のピリミジンジオン誘導体は、塩基の存在下で、式（II）の化合物を式（III）の化合物と反応させることにより調製することができる。式（II）と式（III）の化合物の当量比は、好ましくは１：0.8〜１：1.5の範囲である。

上記反応で使用される塩基は、無水炭酸水素ナトリウム、無水炭酸ナトリウム、水素化ナトリウム、炭酸カリウムおよびその混合物からなる群より選択され得る；このために使用される有機溶媒は、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシドおよびその混合物などの極性溶媒であり得る。この反応は、10〜100℃で1〜48時間、行われ得る。

更に、本発明で使用されるピリミジンジオン誘導体は、式（I）のピリミジンジオン誘導体を無機もしくは有機酸、または塩基と反応させることにより調製される薬学的に許容可能な塩の形態であり得る。酸には、有機酸、たとえば塩酸および硫酸、および無機酸、たとえば酢酸およびマレイン酸が含まれ得る。塩基には、アルカリまたはアルカリ土類金属、たとえばナトリウム、カリウム、マグネシウムおよびカルシウムが含まれ得る。

本発明によれば、ピリミジンジオン誘導体またはその薬学的に許容可能な塩は、リバビリンよりも高い程度でＣ型肝炎ウイルスの活性を阻害する能力により、Ｃ型肝炎を予防または治療するために有利に使用することができる。このため、本発明は、好ましくは薬学的に許容可能なキャリアまたは添加剤と組合せて、式（I）のピリミジンジオン誘導体またはその薬学的に許容可能な塩を有効成分として含む、Ｃ型肝炎を予防または治療するための薬学的組成物を提供する。

薬学的調合物は、慣用的な手法の何れかに従って調製され得る。調合物を調製する際、有効成分は、好ましくは、キャリアと混合もしくは希釈されるか、あるいは、キャリア、サシェット（sachet）もしくは他の容器内に封入される。キャリアが希釈剤として機能するとき、それは、有効成分のためのビヒクル、賦形剤もしくはメディウムとして作用する固体、半固体もしくは液体材料であり得る。よって、調合物は、錠剤、ピル、パウダー、サシェット（sachet）、エリキシル、懸濁剤、エマルジョン、液剤、シロップ、エアロゾル、軟質および硬質ゼラチンカプセル、滅菌注射剤、滅菌パッケージパウダーなどの形態であり得る。適切なキャリア、賦形剤、および希釈剤の例は、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム、および鉱油である。調合物は、充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香味剤、乳化剤、保存剤などを更に含み得る。本発明の組成物は、当該技術分野で周知の手法の何れかを採用することにより、哺乳動物への投与後に有効成分の迅速、持続または遅延放出を提供するように調合され得る。

更に、本発明は、式（I）のピリミジンジオン誘導体を哺乳動物に投与することを含む、
哺乳動物におけるＣ型肝炎の予防または治療方法を提供する。

有効成分の用量は、治療される被検体のコンディション、病気の種類および重症性、投与速度、および医者の意見など種々の関連ファクターを考慮して調整され得る。式（I）の化合物は、ヒトを含む哺乳動物が単回投与もしくは分割投与される場合、一日あたり約１〜100 mg/kg(体重)、好ましくは５〜50 mg/kg(体重)の有効量で、経口もしくは非経口的に投与することができる。あるケースでは、上記用量より少ない量が適切な場合がある。有害な副作用を引き起こさない限り、上記用量より多い量が使用されてもよく、かかる量は、一日あたり分割投与で投与することができる。

以下の例は、説明の目的のためだけに提供され、本発明の範囲を限定することを意図しない。

例１：
本発明で使用されるピリミジンジオン誘導体のＣ型肝炎の予防または治療薬としての有効性を評価するため、ウシウイルス性下痢ウイルス（BVDV）を用いて抗BVDV薬スクリーニングアッセイを行った。Ｃ型肝炎ウイルスに類似したゲノム、複製サイクルおよび感染タイプを有するウイルスBVDVは、Ｃ型肝炎ウイルスをインビボ培養することができないために採用した。

（工程１）細胞およびウイルスの調製
スクリーニングの１日前に、予め継代培養されたMDBK細胞株（Mardin-Darby bovine kidney, ATTC CCL22）をトリプシン処理し、プレートに播き、次いで、形成された細胞コロニーを数えた。その後、等量のDMEM（ダルベッコ改変イーグル培地）およびHam’s F-12を混合し、得られた混合液に10％ウシ胎仔血清を添加して、組織培養培地を調製した。この培地にMDBK細胞を6×10⁴細胞/mlの濃度で接種し、その後、得られた細胞溶液を96ウェル平底プレートにウェルあたり100μlの量で添加した。

一方、-80℃フリーザーに所定の濃度で保存されていたBVDV（ATCC VR534）を、生物学的安全キャビネットに移し、室温で融解させた。ウイルスを、各ウェルにおいて、ウイルスに対して十分な量の組織培養培地で希釈して、ウイルス感染から6日後に85〜95％の細胞死を誘発した。

（工程２）サンプル化合物の調製
特定のピリミジンジオン誘導体（SAMJIN Pharmaceuticals）をテスト化合物として調製し、従来のＣ型肝炎治療薬リバビリン（Sigma）を比較薬として使用した。テスト化合物のそれぞれをDMSOに溶解し、サンプル溶液を調製した。その後、得られたサンプル溶液を、等量のDMEMとHam’s F-12を混合することにより調製された混合液で、スリーワンログシリーズ（three one-log series）希釈に従って希釈して、サンプル希釈液を調製した。

（工程３）ウイルスとサンプル化合物の処理
MDBK細胞を96ウェルプレートに添加してから１日後に、プレート上の培養溶液を取り除き、そこに工程２で得られたサンプル希釈液のそれぞれを添加し、その最終濃度を１〜100μg/mlに調整した。比較薬リバビリンを、プレートのコントロールウェルのそれぞれに、１〜100μg/mlの濃度で添加した。

ウェルプレートは、MDBK細胞のみを含有する「細胞コントロールグループウェル」；MDBK細胞とBVDVウイルスを含有する「ウイルスコントロールウェル」；各サンプルの細胞毒性を評価するためにMDBK細胞とサンプル化合物を含有する「薬の毒性コントロールウェル」；サンプル化合物を一つだけ含有する「薬の比色コントロールウェル」；およびMDBK細胞とBVDVウイルスとサンプル化合物の一つを含有する「実験グループウェル」を含む。

（工程４）プレートをスクリーニングするためのMTS染色
ウェルプレートを、37℃で6日間、5% CO₂インキュベーターに置き、その後、Cell Proliferation Assay kit(細胞増殖アッセイキット) (CellTiter96(登録商標)AQ_UEOUS one solution, Promega) で分析した。この分析は、生きている細胞を比色法で数える工程を含み、キットは、テスト化合物を添加したときに安定な溶液を形成する新規テトラゾリウム化合物MTSと、電子カップリング剤PESを含有する。活発な代謝を有する細胞では、ミトコンドリアのデヒドロゲナーゼにより生成されるNADPHまたはNADHが、可溶性MTSを不溶性ホルマザン結晶の形態に変える。したがって、ホルマザン結晶の量は、培地中で生きている細胞の数に正比例する。

CellTiter96(登録商標)AQ_UEOUS one solution試薬10μlを、プレートの各ウェルに添加し、37℃で4時間、インキュベーターで培養した。その後、プレートを粘着プレートシーラーで被覆し、ホルマザン結晶を混合してつくった。各ウェルの吸光度を、Molecular Devices Vmax plate reader (Molecular Devices) により490 nmで測定した。

各サンプル化合物の毒性を、社内コンピュータープログラムと細胞変性効果（CPE）で分析し、次いで、％細胞活性、治療インデックス（TI）を計算した。その結果を表２に示す。

表２において、EC₅₀は、所望の応答が母集団の50％に存在する用量、すなわち、BVDV感染がMDBK細胞の50％で阻害されるサンプル化合物の濃度を意味し；TC₅₀は、細胞死が母集団の50％に誘発される用量、すなわち、MDBK細胞に対するサンプル化合物の細胞毒性を意味する。TI（TC₅₀/EC₅₀）は、毒性効果を引き起こす治療剤の量に対する、治療効果を引き起こす治療剤の量の比較を意味する。定量的には、これは、毒性効果を生じるのに必要な用量を治療用量で割ることにより得られる比である。

表２に示されるとおり、本発明のピリミジンジオン誘導体は、コントロール薬リバビリンと同等またはそれより優れたTI値を示し、これは、本発明のピリミジンジオン誘導体がＣ型肝炎の予防または治療のために使用可能であることを意味する。

本発明は、上述の具体的な態様について説明されたが、添付の特許請求の範囲に規定される本発明の範囲内に含まれる種々の改変および変更が当業者により本発明になされてもよいことを認識すべきである。

Claims

式（I）のピリミジンジオン誘導体を含む、Ｃ型肝炎の予防または治療用医薬組成物：

ここで
Ｒ¹は、少なくとも一つのヒドロキシＣ₁〜Ｃ₄アルキルで必要に応じて置換された、Ｃ₃〜Ｃ₆シクロアルキルまたはＣ₃〜Ｃ₆シクロアルケニルであり；
Ｘは、酸素、硫黄またはカルボニルであり；
ｎは１または２であり；
Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は、それぞれ独立して、水素またはＣ₁〜Ｃ₄アルキルである。
Ｒ¹が、Ｃ₃〜Ｃ₆シクロアルキル、シクロペンテニル、またはヒドロキシメチルシクロペンテニルである、請求項１の医薬組成物。
前記ピリミジンジオン誘導体が、以下からなる群より選択される、請求項１の医薬組成物：
1) 1-シクロプロピルメチル-6-(3,5-ジメチル-フェニルスルファニル)-5-イソプロピル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン;
2) 1-シクロプロピルメチル-6-(3,5-ジメチル-フェノキシ)-5-エチル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン;
3) 1-シクロブチルメチル-6-(3,5-ジメチル-フェニルスルファニル)-5-イソプロピル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン;
4) 1-シクロペンチルメチル-6-(3,5-ジメチル-フェニルスルファニル)-5-イソプロピル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン;
5) 1-シクロペンタ-1-エニルメチル-6-(3,5-ジメチル-フェニルスルファニル)-5-イソプロピル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン;
6) 1-シクロペンタ-1-エニルメチル-6-(3,5-ジメチル-フェノキシ)-5-エチル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン;
7) 1-シクロペンタ-1-エニルメチル-6-(3,5-ジメチル-フェノキシ)-5-イソプロピル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン;
8) 1-シクロペンタ-1-エニルメチル-6-(3,5-ジメチル-ベンゾイル)-5-エチル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン;
9) 1-シクロペンタ-1-エニルメチル-6-(3,5-ジメチル-ベンゾイル)-5-イソプロピル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン;
10) 1-シクロペンタ-3-エニルメチル-5-イソプロピル-6-フェニルスルファニル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン;
11) 1-シクロヘキシルメチル-6-(3,5-ジメチル-フェニルスルファニル)-5-イソプロピル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン;
12) 1-(2-シクロペンチル-エチル)-6-(3,5-ジメチル-フェニルスルファニル)-5-イソプロピル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン;
13) 1-(2-シクロペンタ-2-エニル-エチル)-6-(3,5-ジメチル-フェノキシ)-5-イソプロピル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン;
14) 1-(2-シクロペンタ-3-エニル-エチル)-6-(3,5-ジメチル-フェニルスルファニル)-5-エチル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン;
15) 1-(2-シクロペンタ-2-エニル-エチル)-6-(3,5-ジメチル-ベンゾイル)-5-イソプロピル-1H-ピリミジン-2,4-ジオン; および
16) 6-(3,5-ジメチル-ベンゾイル)-5-エチル-1-(4-ヒドロキシメチル-シクロペンタ-1-エニルメチル)-1H-ピリミジン-2,4-ジオン。