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JP5222610B2 - A novel microorganism having a resolution of polyisoprene rubber and a method for decomposing a rubber composition - Google Patents
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JP5222610B2 - A novel microorganism having a resolution of polyisoprene rubber and a method for decomposing a rubber composition - Google Patents

A novel microorganism having a resolution of polyisoprene rubber and a method for decomposing a rubber composition Download PDF

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Description

本発明は、ポリイソプレン系ゴムの分解能を有する新規微生物及び該微生物を用いたゴム組成物の分解方法に関する。   The present invention relates to a novel microorganism having a resolution of polyisoprene rubber and a method for decomposing a rubber composition using the microorganism.

ゴム製品は一般のプラスチック製品とともに再利用しにくい材料であり、特にセメント工場などを中心として燃料として再利用されている場合が多い。しかしながら、近年環境問題の高まりとともに、ゴム製品を燃料として燃やすのではなく、コンポストのように低温で分解する省エネルギー型の方法や分解した材料を再利用するマテリアルリサイクルの方法の開発が求められている。   Rubber products are difficult to reuse with general plastic products, and are often reused as fuel, especially in cement factories. However, in recent years, with the growing environmental problems, it is required to develop energy-saving methods that decompose at low temperatures, such as compost, and material recycling methods that reuse decomposed materials, instead of burning rubber products as fuel. .

ゴム製品を分解する方法として、微生物による分解処理が考えられる。微生物分解は低温での処理なので、エネルギー消費は最も少ない処理法といえる。また、ゴム製品を微生物分解した後、分解物を再利用することも考えられる。例えば、分解されたモノマーやオリゴマーを再利用することや、粉ゴムの表面を微生物分解し、再度未加硫ゴムに混練り加硫することにより、新たな製品に利用することも考えられる。   As a method for decomposing a rubber product, a decomposing process using microorganisms is considered. Microbial degradation is a low-temperature treatment, so energy consumption is the least treatment method. It is also conceivable to recycle the decomposition product after microbial decomposition of the rubber product. For example, it is conceivable to reuse the decomposed monomer or oligomer, or to microbially decompose the surface of the powdered rubber and knead it again with the unvulcanized rubber and vulcanize it for a new product.

ゴムの微生物分解については、従来様々な微生物がスクリーニングされ、検討されている。そのような微生物分解については、特開平9−194624号公報(特許文献1)、特開平11−60793号公報(特許文献2)等で報告されており、これらの特許文献には、ノカルディア属に属する微生物によるゴムの分解方法が記載されている。   Various microorganisms have been screened and studied for microbial degradation of rubber. Such microbial degradation has been reported in JP-A-9-194624 (Patent Document 1), JP-A-11-60793 (Patent Document 2), and the like. A method for decomposing rubber by microorganisms belonging to the above is described.

特開平9−194624号公報JP-A-9-194624 特開平11−60793号公報Japanese Patent Laid-Open No. 11-60793

しかしながら、ゴムの微生物分解の実用化に当たっては、より高効率でゴムを分解することが可能な微生物が望まれている。   However, in the practical application of microbial degradation of rubber, a microorganism capable of decomposing rubber with higher efficiency is desired.

そこで、本発明の目的は、従来より高効率でゴムを分解することが可能な新規な微生物及び該微生物によるゴムの分解方法を提供することにある。   Therefore, an object of the present invention is to provide a novel microorganism capable of decomposing rubber with higher efficiency than before and a method for decomposing rubber by the microorganism.

本発明者は、上記目的を達成すべく、日本各地の多くの土壌から天然ゴム分解菌の探索を行った結果、高効率でポリイソプレン系ゴムを分解できる微生物が驚くべきことに、ノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌であることを見出し、本発明を完成させるに至った。   As a result of searching for natural rubber-degrading bacteria from many soils all over Japan to achieve the above object, the present inventor has surprisingly found that microorganisms capable of degrading polyisoprene rubber with high efficiency are Nocardia It discovered that it was an actinomycete which belongs to Takedensis (Nocardia Takedensis), and came to complete this invention.

すなわち、本発明の新規微生物は、ポリイソプレン系ゴムの分解能を有する、ノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌BS−GS1株(FERM P-21535)であることを特徴とする。 That is, the novel microorganism of the present invention is characterized by the actinomycete BS-GS1 strain ( FERM P-21535 ) belonging to Nocardia Takedensis having the resolution of polyisoprene rubber.

また、本発明の別の新規微生物は、ポリイソプレン系ゴムの分解能を有する、ノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌BS−GS2株(FERM P-21536)であることを特徴とする。 Another novel microorganism of the present invention is the actinomycete BS-GS2 strain ( FERM P-21536 ) belonging to Nocardia Takedensis, which has the resolution of polyisoprene rubber. .

また、本発明の別の新規微生物は、ポリイソプレン系ゴムの分解能を有する、ノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌BS−GS5株(FERM P-21537)であることを特徴とする。 Another novel microorganism of the present invention is the actinomycete BS-GS5 strain ( FERM P-21537 ) belonging to Nocardia Takedensis having the resolution of polyisoprene rubber. .

また、本発明の別の新規微生物は、ポリイソプレン系ゴムの分解能を有する、ノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌BS−GS6株(FERM P-21538)であることを特徴とする。 Another novel microorganism of the present invention is the actinomycete BS -GS6 strain ( FERM P-21538 ) belonging to Nocardia Takedensis, which has the resolution of polyisoprene rubber. .

また、本発明の別の新規微生物は、ポリイソプレン系ゴムの分解能を有する、ノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌BS−GS7株(FERM P-21539)であることを特徴とする。 Another novel microorganism of the present invention is the actinomycete BS-GS7 strain ( FERM P-21539 ) belonging to Nocardia Takedensis having the resolution of polyisoprene rubber. .

また、本発明のゴム組成物の分解方法は、上記微生物により、ポリイソプレン系ゴムを含有するゴム組成物を分解することを特徴とする。   The method for decomposing a rubber composition of the present invention is characterized by decomposing a rubber composition containing a polyisoprene-based rubber by the microorganism.

また、本発明のゴム組成物の好適例において、前記ゴム組成物中のポリイソプレン系ゴムの含有量が10質量%以上であることを特徴とする。   In a preferred embodiment of the rubber composition of the present invention, the polyisoprene rubber content in the rubber composition is 10% by mass or more.

また、本発明のゴム組成物の他の好適例において、前記ポリイソプレン系ゴムがシスポリイソプレンゴムであることを特徴とする。   In another preferred embodiment of the rubber composition of the present invention, the polyisoprene rubber is cis polyisoprene rubber.

本発明によれば、従来より高効率でゴム製品を分解することができるという有利な効果を奏する。   According to the present invention, there is an advantageous effect that the rubber product can be decomposed with higher efficiency than before.

以下、本発明を詳細に説明する。本発明の新規微生物は、ポリイソプレン系ゴムの分解能を有する、ノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌BS−GS1株、BS−GS2株、BS−GS5株、BS−GS6株、BS−GS7株である。上記5種の菌株は、本発明者が日本各地の多くの土壌から天然ゴム分解菌を鋭意スクリーニングした結果、得られたものである。これらの菌株は、それぞれ独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに2008年3月12日に受託されている。詳細には、BS−GS1株は受託番号FERM P-21535として、BS−GS2株は受託番号FERM P-21536として、BS−GS5株は受託番号FERM P-21537、BS−GS6株は受託番号FERM P-21538として、BS−GS7株は受託番号FERM P-21539として受託されている。 Hereinafter, the present invention will be described in detail. The novel microorganisms of the present invention are actinomycetes BS-GS1 strain, BS-GS2 strain, BS-GS5 strain, BS-GS6 strain, BS-GS6 strain belonging to Nocardia Takedensis having the resolution of polyisoprene rubber. -GS7 strain. The above five strains were obtained as a result of the inventor's earnest screening for natural rubber-degrading bacteria from many soils throughout Japan. These strains were entrusted to the Patent Organism Depositary, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology on March 12, 2008, respectively. Specifically, the BS-GS1 strain has the accession number FERM P-21535 , the BS-GS2 strain has the accession number FERM P-21536 , the BS-GS5 strain has the accession number FERM P-21537 , and the BS- GS6 strain has the accession number FERM. as P-21538, BS-GS7 shares have been deposited as accession number FERM P-21539.

上記5種のノカルディア・タケデンシスに帰属する放線菌の菌株は、無機塩の液体培地中でゴムを資化しながら増殖する。無機塩としては、窒素、リン、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが挙げられる。   Strains of actinomycetes belonging to the above five types of Nocardia Takedensis grow while assimilating rubber in a liquid medium of inorganic salts. Inorganic salts include nitrogen, phosphorus, potassium, calcium, magnesium and the like.

ノカルディア属の放線菌は、天然ゴムなどのポリイソプレン系ゴムを分解することが知られているが、ノカルディア・タケデンシスに帰属する放線菌において、ポリイソプレン系ゴムを分解することができるものはこれまでに報告されていない。さらに、上記5種の本発明の菌株は、従来報告されているノカルディア属に属する放線菌よりもポリイソプレン系ゴムを分解する能力が高く、したがって、これら5種の菌株を用いることで、従来よりも高効率でポリイソプレン系ゴムを含有するゴム製品を分解することが可能である。   Actinomycetes of the genus Nocardia are known to degrade polyisoprene rubbers such as natural rubber, but the actinomycetes belonging to Nocardia Takedensis are those that can degrade polyisoprene rubber. It has not been reported so far. Further, the five strains of the present invention have a higher ability to degrade polyisoprene rubber than the conventionally reported actinomycetes belonging to the genus Nocardia, and therefore, by using these five strains, It is possible to decompose a rubber product containing a polyisoprene rubber with higher efficiency.

上記5種の菌株の同定は、近年主流となっている16SrRNAの比較に基づいて行った。以下に方法を詳細に述べる。菌株をYM寒天培地(Becton Dickinson NJ,USA)に植菌し、30℃で5日間培養した。その後、この菌体からPrepMan Method(Applied Biosystems、CA,USA)により、ゲノムDNAの抽出を行った。抽出したゲノムDNAを鋳型として、PCRにより、16S Ribosomal RNA遺伝子(16S rDNA)のうち、5末端側約500bpの領域を増幅した。その後、増幅した塩基配列をシーケンスし、検体の16S rDNA部分塩基配列を得た。得られた16SrDNAの塩基配列から検体の相同性検索を、細菌基準株データベース及び国際塩基配列データベースから、検索に用いるアルゴリズムとしてBLASTを用いて行った。結果を下記の表1及び2に示す。   The above five strains were identified based on the comparison of 16S rRNA, which has become the mainstream in recent years. The method is described in detail below. The strain was inoculated into YM agar medium (Becton Dickinson NJ, USA) and cultured at 30 ° C. for 5 days. Thereafter, genomic DNA was extracted from the cells by PrepMan Method (Applied Biosystems, CA, USA). The extracted genomic DNA was used as a template to amplify a region of about 500 bp on the 5-terminal side of the 16S Ribosomal RNA gene (16S rDNA) by PCR. Thereafter, the amplified base sequence was sequenced to obtain a 16S rDNA partial base sequence of the specimen. The homology search of the specimen from the obtained 16S rDNA base sequence was performed using BLAST as an algorithm used for the search from the bacterial reference strain database and the international base sequence database. The results are shown in Tables 1 and 2 below.

Figure 0005222610
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Figure 0005222610
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これらの結果から、上記5種の菌株は、ノカルディア・タケデンシスに帰属する菌株であると同定した。   From these results, the above five strains were identified as strains belonging to Nocardia Takedensis.

また、本発明のゴム組成物の分解方法は、上記ノカルディア・タケデンシスに帰属する菌株を一種又は複数組み合わせて用いることを特徴とする。本発明を適用する対象となるポリイソプレン系ゴムとしては、主鎖がシスポリイソプレン及びトランスポリイソプレンであるゴムまたはエラストマーを挙げることができる。本発明においてシスポリイソプレンであるゴムが最も好ましいが、イソプレンと他のモノマーとの共重合体を主鎖とするゴムまたはエラストマーにも本発明を適応することが可能である。具体的なシスポリイソプレンとしては、それに限定されるものではないが、天然ゴムやNatsynなどの合成シスポリイソプレンが例示され、トランスポリイソプレンとしてはガッタパーチャなどの天然系ゴムが例示される。   The method for decomposing a rubber composition of the present invention is characterized by using one or a combination of strains belonging to the above Nocardia Takedensis. Examples of the polyisoprene rubber to which the present invention is applied include rubbers or elastomers whose main chain is cis polyisoprene and trans polyisoprene. In the present invention, rubber which is cis polyisoprene is most preferable, but the present invention can also be applied to rubber or elastomer having a copolymer of isoprene and another monomer as a main chain. Specific examples of cis polyisoprene include, but are not limited to, natural rubber and synthetic cis polyisoprene such as Natsyn, and trans polyisoprene includes natural rubber such as gutta percha.

ゴム組成物を構成するゴムエラストマー中のポリイソプレン系ゴムの含有量が10質量%以上であれば本発明の方法の適応が可能である。ゴムエラストマー中のポリイソプレンは50質量%以上が好ましく、さらに好ましくは80質量%以上であるが、その範囲に限定されるものではない。   If the content of the polyisoprene rubber in the rubber elastomer constituting the rubber composition is 10% by mass or more, the method of the present invention can be applied. The polyisoprene in the rubber elastomer is preferably 50% by mass or more, and more preferably 80% by mass or more, but is not limited to this range.

本発明で分解の対象となるゴムは、イソプレン系ゴムであれば、ゴム工業で通常使用されているシランカップリング剤、硫黄、加硫剤、加硫促進剤、加硫促進助剤、酸化防止剤、オゾン劣化防止剤、老化防止剤、プロセス油、亜鉛華(ZnO)、ステアリン酸、過酸化物等の通常の配合剤が配合されたものでよい。ただし、ゴム配合剤の中に上記5種の菌株の増殖を阻害する配合剤が配合されている場合は、ゴムを溶剤抽出し、これを除去する必要がある。   If the rubber to be decomposed in the present invention is an isoprene-based rubber, a silane coupling agent, sulfur, vulcanizing agent, vulcanization accelerator, vulcanization accelerating agent, antioxidant that are usually used in the rubber industry Ordinary compounding agents such as an agent, an ozone deterioration preventing agent, an antiaging agent, a process oil, zinc white (ZnO), stearic acid, and peroxide may be blended. However, when the rubber compounding agent contains a compounding agent that inhibits the growth of the above five strains, it is necessary to solvent-extract the rubber and remove it.

ゴム組成物の分解反応の条件としては、通常のノカルディア属に属する放線菌の培養方法に準じた条件を採用することができる。例えば、培養培地として、本発明の微生物の基質であるゴム組成物のほか、窒素、リン、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどの無機塩類を含むものが挙げられる。   As the conditions for the decomposition reaction of the rubber composition, conditions according to the normal cultivation method of actinomycetes belonging to the genus Nocardia can be employed. Examples of the culture medium include those containing inorganic salts such as nitrogen, phosphorus, potassium, calcium and magnesium in addition to the rubber composition which is a substrate of the microorganism of the present invention.

分解反応における温度は28〜32℃、好ましくは30℃である。また、pHは6〜8、好ましくは7である。   The temperature in the decomposition reaction is 28 to 32 ° C, preferably 30 ° C. Moreover, pH is 6-8, Preferably it is 7.

例えば、分解反応は以下のようにして行うことができる。まず、分解対象となるゴム組成物とともに本発明の微生物を前培養する。次に、分解対象のゴム組成物0.1〜10g/Lと前培養した微生物10〜10/100mlを反応容器に入れ、上述したような温度及びpHの条件で20日以上培養する。このような分解反応によって、分解対象のゴム組成物を高効率で分解することができる。 For example, the decomposition reaction can be performed as follows. First, the microorganism of the present invention is pre-cultured with the rubber composition to be decomposed. Then, microorganisms 10 7 ~10 9 / 100ml preincubated with the rubber composition 0.1 to 10 g / L of decomposed placed in a reaction vessel, and cultured for more than 20 days under the conditions of temperature and pH as described above. By such a decomposition reaction, the rubber composition to be decomposed can be decomposed with high efficiency.

以下、実施例で本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例により限定されるものではない。   EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention concretely, this invention is not limited by these Examples.

(実施例1)
シリコーン栓付きのガラス容器に準備した下記表3の組成の培地に、アセトン抽出済みの天然ゴムラテックス手袋の短冊状に切ったゴム片5g/Lを入れ、90℃で、オートクレーブ中で滅菌処理した。これに同様の手袋ゴムを唯一の炭素源として前培養したノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌BS−GS1株の菌液(10/100ml)を加え、40日間、30℃、50rpmで振盪培養し、121℃でオートクレーブ中で滅菌し、手袋ゴム片を取り出した。取り出した手袋ゴム片をアセトンで数回洗浄後、純水で洗浄し、充分に乾燥したことを確認後、重量測定を行った。
Example 1
A rubber piece 5 g / L cut into a strip of natural rubber latex gloves already extracted with acetone was put into a medium having the composition shown in Table 3 below prepared in a glass container with a silicone stopper, and sterilized at 90 ° C. in an autoclave. . Bacterial liquid of actinomycetes BS-GS1 strain attributable to precultured Nocardia Takedenshisu (Nocardia Takedensis) Similar glove rubber as the sole carbon source (10 8 / 100ml) was added, 40 days, 30 ° C., The mixture was cultured with shaking at 50 rpm, sterilized in an autoclave at 121 ° C., and a glove rubber piece was taken out. The glove rubber piece taken out was washed several times with acetone, then with pure water, and after confirming that it was sufficiently dried, the weight was measured.

Figure 0005222610
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(実施例2)
実施例1と同様の実験を、ノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌BS−GS2株を用いて行った。
(Example 2)
An experiment similar to that of Example 1 was performed using the actinomycete BS-GS2 strain belonging to Nocardia Takedensis.

(実施例3)
実施例1と同様の実験を、ノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌BS−GS5株を用いて行った。
(Example 3)
The same experiment as in Example 1 was performed using the actinomycete BS-GS5 strain belonging to Nocardia Takedensis.

(実施例4)
実施例1と同様の実験を、ノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌BS−GS6株を用いて行った。
Example 4
The same experiment as in Example 1 was performed using the actinomycete BS-GS6 strain belonging to Nocardia Takedensis.

(実施例5)
実施例1と同様の実験を、ノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌BS−GS7株を用いて行った。
(Example 5)
An experiment similar to Example 1 was performed using the actinomycete BS-GS7 strain belonging to Nocardia Takedensis.

(比較例)
実施例1〜5と同様の実験を土壌から分離した放線菌を用いて行った。
(Comparative example)
Experiments similar to Examples 1 to 5 were performed using actinomycetes isolated from soil.

実施例1〜5及び比較例の結果を表4に示す。   Table 4 shows the results of Examples 1 to 5 and the comparative example.

Figure 0005222610
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表4のように、実施例1〜5では、本発明の微生物を用いた場合の重量減少が20〜30%であったが、比較例では、重量減少が0%であった。よって、本発明の微生物は天然ゴムに対して大きな分解性を持つことが確認された。   As shown in Table 4, in Examples 1 to 5, the weight reduction when using the microorganism of the present invention was 20 to 30%, but in the comparative example, the weight reduction was 0%. Therefore, it was confirmed that the microorganism of the present invention has a large degradability with respect to natural rubber.

本発明の新規微生物は、タイヤなどのゴム製品の廃棄及び再利用においてゴム製品を分解する手段として有用である。   The novel microorganism of the present invention is useful as a means for decomposing rubber products in the disposal and reuse of rubber products such as tires.

Claims (8)

ポリイソプレン系ゴムの分解能を有する、ノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌BS−GS1株(FERM P-21535)。 Actinomycetes BS-GS1 strain ( FERM P-21535 ) belonging to Nocardia Takedensis having the resolution of polyisoprene rubber. ポリイソプレン系ゴムの分解能を有する、ノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌BS−GS2株(FERM P-21536)。 Actinomycetes BS-GS2 strain ( FERM P-21536 ) belonging to Nocardia Takedensis having the resolution of polyisoprene rubber. ポリイソプレン系ゴムの分解能を有する、ノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌BS−GS5株(FERM P-21537)。 Actinomycetes strain BS-GS5 ( FERM P-21537 ) belonging to Nocardia Takedensis having the resolution of polyisoprene rubber. ポリイソプレン系ゴムの分解能を有する、ノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌BS−GS6株(FERM P-21538)。 Actinomycetes BS -GS6 strain ( FERM P-21538 ) belonging to Nocardia Takedensis having the resolution of polyisoprene rubber. ポリイソプレン系ゴムの分解能を有する、ノカルディア・タケデンシス(Nocardia Takedensis)に帰属する放線菌BS−GS7株(FERM P-21539)。 Actinomycetes BS-GS7 strain ( FERM P-21539 ) belonging to Nocardia Takedensis having the resolution of polyisoprene rubber. 請求項1〜5項のいずれか1項に記載の放線菌により、ポリイソプレン系ゴムを含有するゴム組成物を分解することを特徴とするゴム組成物の分解方法。   A method for decomposing a rubber composition, comprising decomposing a rubber composition containing a polyisoprene rubber with the actinomycetes according to any one of claims 1 to 5. 前記ゴム組成物中のポリイソプレン系ゴムの含有量が10質量%以上であることを特徴とする請求項6記載の方法。   The method according to claim 6, wherein the content of the polyisoprene rubber in the rubber composition is 10% by mass or more. 前記ポリイソプレン系ゴムがシスポリイソプレンゴムである請求項6又は7記載の方法。   The method according to claim 6 or 7, wherein the polyisoprene rubber is cis polyisoprene rubber.
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