JP5543492B2 - 水難溶性薬物を含有する高分子ミセル組成物の製造方法 - Google Patents

Description

本発明は、薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法に関する。

薬物の静脈投与のために生分解性高分子を利用した超微粒子薬物送達システム（ｓｕｂｍｉｃｒｏｎｉｃ ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍ）が研究されている。近年、生分解性高分子を利用した極小粒子システム（ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｙｓｔｅｍ）及び高分子ミセルシステム（ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｍｉｃｅｌｌｅ ｓｙｓｔｅｍ）が静脈投与によって投与された薬物の体内分布を変更することで副作用を軽減させ、向上した効能を提供する技術であると報告されている。また、斯かるシステムは、標的化した薬物の送達を可能とするため、目標とする器官、組織または細胞への薬物の放出を調節するようになる。実際に斯かるシステムは、体液との適合性に優れ、水難溶性薬物の可溶化能及び薬物の生体内利用率を向上させるものと知られている。

近年、親水性部分と疎水性部分とで構成されたブロック共重合体に薬物を化学的に結合してブロック共重合体ミセルを製造する方法が報告されたことがある。上記ブロック共重合体は、親水性部分（Ａ）と疎水性部分（Ｂ）とが重合されてなるＡ−Ｂ型二重ブロック共重合体である。上記ブロック共重合体によって形成された高分子ミセルのコアにアドリアマイシンまたはインドメタシンなどの薬物を物理的に封入させて薬物送達システムとして使用することができる。しかしながら、上記ブロック共重合体によって形成された高分子ミセルは、生体内で加水分解されず酵素によってのみ分解され、免疫反応を誘発するなどの生体適合性に劣るため、生体内への使用時には各種の問題を引き起こす。

したがって、このような生分解性及び生体適合性を向上させたコアシェル型薬物送達システムを開発するための多大な努力がなされている。

例えば、親水性高分子であるポリアルキレングリコールと疎水性高分子であるポリ乳酸とからなる二重または多重ブロック共重合体が当業界において知られている。より具体的には、上記二重または多重ブロック共重合体の末端基にアクリル酸誘導体を結合させて共重合体を形成する。該形成された共重合体を架橋結合させて高分子ミセルを安定化させるようになる。

しかしながら、上記二重または多重ブロック共重合体を製造する方法では、上記高分子が架橋結合にて安定した構造をなすためには、Ａ−ＢまたはＡ−Ｂ−Ａ型の二重または三重ブロック共重合体の疎水性部分に架橋結合物質（ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｅｒ）を導入しなければならないという製造上の困難がある。また、上記方法で使用される架橋結合物質は、人体に適用した例がないことから人体安全性が確保されておらず、架橋結合された高分子が生体内で分解されないため、生体内への適用が不可能であるという問題点がある。

上記以外にも、高分子ミセル組成物の製造方法として、エマルジョン化法、透析法、溶媒蒸発法が知られている。エマルジョン化法では、水と混合されない溶媒中にポリ乳酸を溶解させ、この重合体溶液に薬物を加えて完全に溶かした後、界面活性剤を添加して水中油型エマルションを形成し、真空下でエマルジョンを徐々に蒸発させることを含む。上記エマルジョン化法では、エマルジョンを形成させるための設備が必要となるため、製造条件の設定が難しく且つ複雑である。さらには、エマルション化法では、有機溶媒を揮発させる過程を含むことから、時間が長くかかるという短所がある。また、透析法では、多量の水が必要となり、且つ製造時間が長くかかる。溶媒蒸発法では、回転式減圧蒸留装置のような溶媒を除去するための設備が必要となり、且つ溶媒を完全に除去するのに時間が長くかかる。その他にも、溶媒蒸発法では、長時間の間高温に露出する工程を含むことから、薬理成分の破壊または薬理効果の低下といった不具合を生じさせることがある。

米国公開特許第２００４−００５６３７２号公報 ヨーロッパ公開特許第０８７７０３３号公報 米国特許第６,２１０,７１７号明細書

本発明の目的は、薬物を含有する高分子ミセル組成物の製造方法を提供することである。

本発明による薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法は、薬物と両親媒性ブロック共重合体を有機溶媒に溶解させる段階；及び有機溶媒混合物に水溶液を添加してミセルを形成する段階を含み、上記薬物を含有する高分子ミセル組成物の製造方法は、ミセルを形成する段階の前に別途の有機溶媒の除去工程を施さないことを特徴とする。

本発明による薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法では、製造工程が単純であり、且つ製造時間を短縮させることができ、大量生産が容易である。また、薬物含有高分子ミセル組成物を低温または室温で製造可能であるため、薬物の安定性を向上させることができるという長所がある。

以下、典型的な実施態様を示す図面を参照して該典型的な実施態様について詳しく説明することとする。しかしながら、本発明は、種々の他の形態を含むことができ、本明細書に記載された典型的な実施態様に限定されるものではない。典型的な実施態様は当業者が請求の範囲を完成し且つ十分に伝わるようにするために提供されるものである。本明細書では、広く知られている特徴や技術の詳細事項は不要に本実施態様を曖昧にさせないようにするために省略することとする。

本明細書において用いる用語は特定の実施態様を説明するためのものであり、本発明を限定するためのものではない。本明細書において用いているような単数形の「一つの」、「一つ」、及び「上記」は、文脈上明確に他のものを指示するものでない限り、複数形も含む。また、「一つの」、「一つ」などの用語の使用は量を限定するものではなく、言及したものが少なくとも一つ以上存在することを示す。また、本明細書において用いられた「含む。」及び／または「含む」、または「備える。」及び／または「備える」という用語は、特徴、領域、整数、段階、作動、要素、及び／または構成成分の存在を具体化するものであるが、一つ以上の他の特性、領域、整数、段階、作動、要素、構成成分及び／またはこれらのグループの存在または追加を不可能にするものではないという点が理解できるであろう。

本明細書において用いられた全ての用語（技術的及び科学的用語を含む）は、特にこだわりがない限り、当業者に一般に知られている用語と同じ意味を持つ。一般的な辞書において定義されたものと同じ用語は、関連技術及び本発明の文脈において持つ意味に相応する意味を持つものと解釈されなければならない。また、本明細書において明示されていない以上、理想的にまたは過度に形式的に解釈されてはならない。

本発明の一実施態様による薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法は、
水難溶性薬物と両親媒性ブロック共重合体を有機溶媒に溶解させる段階、及び
有機溶媒に溶解させて得た溶液に水溶液を添加してミセルを形成する段階を含み、
上記方法は、ミセルを形成する段階の前に別途の有機溶媒の除去工程を施さないことを特徴とする。

より具体的に、本発明による薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法は、薬物及び高分子を有機溶媒、具体的には水混和性有機溶媒に溶解させた後、水溶液を加えて有機溶媒／水混合溶媒中において高分子ミセルを形成する。したがって、本発明の製造方法による高分子ミセル組成物は、薬物と両親媒性ブロック共重合体を含む。また、上記製造方法は、製造過程において使用された有機溶媒をミセルの形成前の中間段階において別途に除去しないという長所がある。

ミセルを形成する過程中においてミセル溶液中に有機溶媒が存在すると、両親媒性高分子ミセルの疎水性部分と有機溶媒との親和度が高いため、ミセルの脱会合がより生じやすくなり、これにより疎水性薬物分子の析出を加速化させるようになる。上記のような理由から、従来から知られている高分子ミセルを製造する方法では、薬物と両親媒性高分子を有機溶媒に溶解し、有機溶媒を除去した後、水溶液を加えてミセルを形成していた。しかしながら、上記方法では、有機溶媒を除去するのに時間が長くかかり、減圧蒸留装置のような別途の設備が必須として必要となる。また、有機溶媒の除去工程を施しても完全に除去されずに有機溶媒が残留することがあり、有機溶媒の除去過程において薬物が長時間高温に露出するため、該薬物が分解してしまうおそれもある。

本発明の一実施態様では、ミセルの形成過程中において高温で有機溶媒を除去する代わりに、低温でミセルを形成することもできる。一般に、高分子ミセルは、温度が高くなると両親媒性高分子の単一体の運動エネルギーが増大し、両親媒性高分子の会合体が脱会合しやすくなる。それにより、ミセルの疎水性核に存在する疎水性薬物分子が水相と接触しやすくなり、薬物結晶が生成されて析出するようになる。これに対し、本発明による方法は、有機溶媒の揮発を特に必要としないため、工程全体を単純化するとともに、薬物の分解を防止する。また、本発明による方法は、低温で施されるため、高分子ミセルの安定性が保持される。

本発明のように有機溶媒を除去せずに一定の濃度以上に存在させても、低温を保持してミセルを形成する場合は、薬物の析出を阻止することができる。これは、低い温度では両親媒性高分子及び有機溶媒分子の動的エネルギーが減少し、両親媒性高分子ミセルの疎水性部分に存在する薬物が水相に露出しにくくなるためである。

本発明の一実施態様において、上記ミセルを形成するときは、０ないし６０℃、具体的には、０ないし５０℃、より具体的には、０ないし４０℃の温度で水溶液を有機溶媒内の薬物／両親媒性高分子混合物に加えて高分子ミセルを形成させることを特徴とする。

他の実施態様において、両親媒性ブロック共重合体のミセル構造内部に封入される薬物の種類は、特に制限されるものではないが、水難溶性の薬物であればよい。例えば、上記薬物は、水に対する溶解度が１００ｍｇ／ｍｌ以下の水難溶性薬物であればよい。それは、本発明が水難溶性の薬物をミセル構造内部に封入させた状態で人体に投与するための組成物の製造方法を提供するためになされたものであるためである。

また他の一実施態様において、上記水難溶性薬物は、抗癌剤の中から選択すればよく、具体的には、タキサン抗癌剤であってよい。例えば、上記タキサン抗癌剤は、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、７−エピパクリタキセル（７−ｅｐｉｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、ｔ−アセチルパクリタキセル（ｔ−ａｃｅｔｙｌ ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、１０−デスアセチルパクリタキセル（１０−ｄｅｓａｃｅｔｙｌ−ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、１０−デスアセチル−７−エピパクリタキセル（１０−ｄｅｓａｃｅｔｙｌ−７−ｅｐｉｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、７−キシロシルパクリタキセル（７−ｘｙｌｏｓｙｌｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、１０−デスアセチル−７−グルタリルパクリタキセル（１０−ｄｅｓａｃｅｔｙｌ−７−ｇｌｕｔａｒｙｌｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、７−Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシルパクリタキセル（７−Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｇｌｙｃｙｌｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、７−Ｌ−アラニルパクリタキセル（７−Ｌ−ａｌａｎｙｌ ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、またはそれらの混合物を含む。より具体的に、タキサン抗癌剤は、パクリタキセルまたはドセタキセルを含む。

本方法の一実施態様において、上記両親媒性ブロック共重合体は、親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）がＡ−Ｂ形態で連結され、非イオン性の二重ブロック共重合体を含む。また、上記両親媒性ブロック共重合体は、水溶液状で疎水性ブロック（Ｂ）がコアを形成し、親水性ブロック（Ａ）がシェルを形成するという、コアシェル形態の高分子ミセルを形成する。

本方法の他の一実施態様において、上記両親媒性ブロック共重合体の親水性ブロック（Ａ）は、水に溶ける高分子であって、ポリアルキレングリコール（ｐｏｌｙａｌｋｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）、ポリビニルアルコール（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌａｌｃｏｈｏｌ）、ポリビニルピロリドン（ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ）、ポリアクリルアミド（ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ）、及びそれらの誘導体からなる群より選ばれた一つ以上を含む。具体的に、上記親水性ブロック（Ａ）は、ポリアルキレングリコール、モノメトキシポリアルキレングリコール（ｍｏｎｏｍｅｔｈｏｘｙｐｏｌｙａｌｋｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）、モノアセトキシポリアルキレングリコール（ｍｏｎｏａｃｅｔｏｘｙ ｐｏｌｙａｌｋｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）、ポリエチレン−コ−プロピレングリコール（ｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ−ｃｏ−ｐｒｏｐｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）、及びポリビニルピロリドンからなる群より選ばれた一つ以上であってよい。より具体的に、親水性ブロック（Ａ）は、ポリエチレングリコール、モノメトキシポリエチレングリコール、モノアセトキシポリエチレングリコール、及びポリエチレン−コ−プロピレングリコールからなる群より選ばれた一つ以上であってよい。

親水性ブロック（Ａ）は、数平均分子量が５００〜５０，０００ダルトンであってよく、具体的には、１，０００〜２０，０００ダルトン、より具体的には、１，０００〜１０，０００ダルトンであってよい。

上記両親媒性ブロック共重合体の疎水性ブロック（Ｂ）は、水に溶けず且つ生体適合性に優れた生分解性の高分子であってよい。例えば、上記疎水性ブロック（Ｂ）は、ポリエステル（ｐｏｌｙｅｓｔｅｒ）、ポリ酸無水物（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ポリアミノ酸（ｐｏｌｙａｍｉｎｏ ａｃｉｄ）、ポリオルトエステル（ｐｏｌｙｏｒｔｈｏｅｓｔｅｒ）、ポリホスファジン（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｉｎｅ）、及びそれらの誘導体からなる群より選ばれた一つ以上であってよい。より具体的には、疎水性ブロック（Ｂ）は、ポリラクチド（ｐｏｌｙｌａｃｔｉｄｅ）、ポリグリコリド（ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）、ポリカプロラクトン（ｐｏｌｙｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ）、ポリジオキサン−２−オン（ｐｏｌｙｄｉｏｘａｎ−２−ｏｎｅ）、ポリ乳酸−コ−グリコリド（ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ−ｃｏ−ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）、ポリ乳酸−コ−ジオキサン−２−オン（ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ−ｃｏ−ｄｉｏｘａｎｅ−２−ｏｎｅ）、ポリ乳酸−コ−カプロラクトン（ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ−ｃｏ−ｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ）、及びポリグリコール酸−コ−カプロラクトン（ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｃ−ｃｏ−ｃａｐｒｏｌａｃｔｏｎｅ）からなる群より選ばれる一つ以上であってよい。また、上記疎水性ブロック（Ｂ）として挙げられた物質は、ヒドロキシ末端が脂肪酸基で置換された誘導体であってよい。上記脂肪酸基は、ブチル酸基、プロピオン酸基、酢酸基、ステアリン酸基、パルミチン酸基、トコフェロール基、及びコレステロール基からなる群より選ばれる一つ以上であってよい。また他の一実施態様において、疎水性ブロック（Ｂ）は、数平均分子量が５００〜５０，０００ダルトンであり、具体的には、１，０００〜２０，０００ダルトン、より具体的には、１，０００〜１０，０００ダルトンである。

また他の一実施態様において、水溶液状で安定した高分子ミセルを形成するために、上記両親媒性ブロック共重合体の親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）との組成比（親水性ブロック（Ａ）：疎水性ブロック（Ｂ））は、質量比で３：７ないし８：２であり、具体的には、４：６ないし７：３である。親水性ブロック（Ａ）の比率が上記範囲未満である場合には、高分子が水溶液中において高分子ミセルを形成することができない。これに対し、親水性ブロック（Ａ）の比率が上記範囲を超える場合には、親水性が高くなりすぎて安定性が低下する。

例えば、本方法に使用される有機溶媒は、水混和性有機溶媒であり、アルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、酢酸、アセトニトリル、及びジオキサンからなる群より選ばれる一つ以上であってよい。より具体的に、上記アルコールは、メタノール、エタノール、プロパノール、及びブタノールからなる群より選ばれる一つ以上であってよい。

また他の一実施態様において、高分子及び薬物を溶解するためには有機溶媒の使用が必要であるが、有機溶媒は、ミセルの安定性を落として薬物の析出を促進させるため、本発明では少量の有機溶媒を使用することを特徴とする。上記有機溶媒の含量は、有機溶媒を除去していない組成物の全質量を基準に、０．５ないし３０質量％、具体的には、０．５ないし１５質量％、より具体的には、１ないし１０質量％であってよい。上記有機溶媒の含量が０．５質量％未満であると薬物を溶かしにくい。これに対し、有機溶媒の含量が３０質量％を超えると、再構成時に薬物が析出され得る。

本発明の水難溶性薬物は、高分子と同時に、または順序を変えて有機溶媒に溶解されていてよい。

本発明の方法においては、上記薬物と高分子とを有機溶媒に同時に添加して溶解させることができる。あるいは、高分子を先に有機溶媒に溶解させてから薬物を溶解させるか、または薬物を先に有機溶媒に溶解させてから高分子を添加して溶解させることができる。薬物と高分子は、薬物の分解を防止する任意の温度下において有機溶媒に溶解されていてよい。上記温度は、０ないし６０℃、具体的には、０ないし５０℃、より具体的には、０ないし４０℃の範囲であればよい。

本発明の一実施態様による薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法は、
両親媒性ブロック共重合体を有機溶媒に溶解させる段階、
上記高分子溶液に水難溶性薬物を溶解させる段階、及び、
上記薬物及び高分子混合物に水溶液を添加してミセルを形成する段階を含み、
上記薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法は、ミセルを形成する段階の前に別途の有機溶媒の除去工程を施さないことを特徴とする。

本方法において使用される水溶液は、通常の水、蒸留水、注射用蒸留水、生理食塩水、５％ブドウ糖、緩衝液などであってよい。

上記高分子ミセルは、０ないし６０℃、具体的に、０ないし５０℃、より具体的に、０ないし４０℃の温度で水溶液を加えて形成すればよい。

また、他の一実施態様において、上記高分子ミセルを形成する段階の後に、ミセル組成物に凍結乾燥補助剤を添加して凍結乾燥する段階をさらに含んでいてよい。上記凍結乾燥補助剤は、凍結乾燥された組成物がケーキ形態を保持できるようにするために添加される。一実施態様において、上記凍結乾燥補助剤は、糖、糖アルコール、及びそれらの混合物からなる群より選ばれた一つ以上であればよい。上記糖は、ラクトース、マルトース、スクロース、トレハロース、及びそれらの組み合わせからなる群より選ばれる一つ以上であってよい。上記糖アルコールは、マンニトール、ソルビトール、マルチトール、キシリトール、ラクチトール、及びそれらの組み合わせからなる群より選ばれる一つ以上であってよい。

また、上記凍結乾燥補助剤は、凍結乾燥された高分子ミセル組成物を再構成する過程において早期に均一に溶けることを助ける作用をする。本文脈において、かかる作用をする凍結乾燥補助剤の含量は、凍結乾燥された組成物の全質量を基準に、１ないし９９．８質量％、より具体的には、１０ないし６０質量％であってよい。

一実施態様において、上記高分子ミセル組成物は、乾燥組成物の全質量を基準に、０．１〜３０．０質量％の薬物、及び７０〜９９．９質量％の親水性ブロックと疎水性ブロックとから構成された両親媒性ブロック共重合体の組み合わせを含むことができる。上記範囲は、薬物の封入率と高分子ミセルの安定性を考慮して選定したものである。
本発明による製造方法は、有機溶媒を除去する別途の工程を不要とするため、製造工程が単純であり、且つ製造時間を短縮させることができ、大量生産が容易であるという長所がある。また、上記製造方法では、低温または室温で薬物含有高分子ミセル組成物の製造が可能であるため、薬物の安定性を向上させることができるという長所がある。

また、他の一実施態様において、薬物含有高分子ミセル組成物は、防腐剤、安定化剤、水和剤または乳化促進剤、浸透圧調節のための塩及び／または緩衝剤等の薬剤学的補助剤、及びその他治療的に有用な物質をさらに含有していてよい。上記組成物は、当業界において知られている通常的な方法にて様々な経口または非経口投与形態で剤形化することができる。

非経口投与用剤形では、直腸、局所、経皮、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下等に投与することができ、非経口剤形の代表的なものは、等張性水溶液または懸濁液の形態の注射用剤形である。本発明の一実施態様において、上記組成物は凍結乾燥形態で調製されてよく、注射用蒸留水、５％ブドウ糖及び生理食塩水等で再構成して血管に注射する形態で投与すればよい。

経口投与用剤形は、錠剤、丸剤、硬質及び軟質カプセル剤、液剤、懸濁剤、乳化剤、シロップ剤、顆粒剤等を含む。これらの剤形は、有効成分の他、希釈剤（例：ラクトース、デキストロース、スクロース、マンニトール、ソルビトール、セルロース及びグリシン）、滑剤（例：シリカ、タルク、ステアリン酸、及びそのマグネシウムまたはカルシウム塩及びポリエチレングリコール）を含有していてよい。錠剤もまた、マグネシウムアルミニウムシリケート、澱粉ペースト、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、及びポリビニルピロリジンのような結合剤を含有していてよい。必要に応じては、澱粉、寒天、アルギン酸、またはそのナトリウム塩のような崩解剤、吸収剤、着色剤、香味剤、及び甘味剤等の薬剤学的添加剤を含有していてよい。錠剤は、通常的な混合、顆粒化、またはコーティング方法にて製造することができる。また、非経口投与用剤形の典型的なものは、等張性水溶液または懸濁液のような注射用剤形を含む。

以下、下記の実施例及び実験例を通じて本発明をより詳しく説明するが、これらは、本発明を説明するためのものに過ぎず、これらによって本発明の範囲が何ら制限されるものではない。

本発明の両親媒性ブロック共重合体は、国際特許公開第０３／３３５９２号に開示された方法によって製造されたものである。

［実施例１〜３］ドセタキセル含有高分子ミセル組成物の製造
両親媒性ブロック共重合体として、数平均分子量が２,０００〜１,７６６ダルトンのモノメトキシポリエチレングリコール−ポリラクチドを製造した。下の表1に表すような含量にて両親媒性ブロック共重合体を６０℃で完全に溶融させた後、エタノール０．０８ｍＬを加えて完全に混合した。混合物の温度を３０℃に下げてからドセタキセルを加え、ドセタキセルが完全に溶けて透明な溶液になるまで撹拌した。溶液の温度を２５℃に下げてから室温の精製水４．０ｍＬを加え、青色の透明な溶液になるまで反応させて高分子ミセルを形成した。これに凍結乾燥化剤としてＤ−マンニトール１００ｍｇを加えて完全に溶かしてから、孔径２００ｎｍのフィルターにて濾過した後、凍結乾燥して粉末状のドセタキセル含有高分子ミセル組成物を製造した。

［実施例４〜６］パクリタキセル含有高分子ミセル組成物の製造
両親媒性ブロック共重合体として、数平均分子量が２,０００〜１,７６６ダルトンのモノメトキシポリエチレングリコール−ポリラクチドを製造した。下の表２に表すような含量にて両親媒性ブロック共重合体を８０℃で撹拌して完全に溶融させた後、エタノールを加えて完全に混合した。混合溶液にパクリタキセルを加え、パクリタキセルが完全に溶けて透明な溶液になるまで撹拌した。溶液の温度を５０℃に下げてから室温の精製水５．０ｍｌを加え、青色の透明な溶液になるまで反応させて、高分子ミセルを形成した。これに凍結乾燥化剤として無水乳糖１００ｍｇを加えて完全に溶かしてから、孔径２００ｎｍのフィルターにて濾過した後、凍結乾燥して粉末状のパクリタキセル含有高分子ミセル組成物を製造した。

［比較例１］溶媒蒸発法を用いたドセタキセル含有高分子ミセルの製造
実施例３と同じ含量にてドセタキセル及び両親媒性ブロック共重合体を用意した。ドセタキセルと両親媒性ブロック共重合体にエタノール５ｍｌを加え、完全に溶けて透明な溶液になるまで６０℃で撹拌した。次いで、丸底フラスコが装着された回転式減圧蒸留装置を利用して６０℃で３時間減圧蒸留してエタノールを除去した。混合物の温度を２５℃に下げてから室温の精製水４ｍｌを加え、青色の透明な溶液になるまで反応させて、高分子ミセルを形成した。これに凍結乾燥化剤としてＤ−マンニトール１００ｍｇを加えて完全に溶かした後、孔径２００ｎｍのフィルターにて濾過し、凍結乾燥して粉末状のドセタキセル含有高分子ミセル組成物を製造した。

［比較例２］溶媒蒸発法を用いたパクリタキセル含有高分子ミセルの製造
実施例６と同じ含量にてパクリタキセル及び両親媒性ブロック共重合体を用意した。パクリタキセルと両親媒性ブロック共重合体にエタノール５ｍｌを加え、完全に溶けて透明な溶液になるまで６０℃で撹拌した。次いで、丸底フラスコが装着された回転式蒸留装置を利用して６０℃で３時間減圧蒸留してエタノールを除去した。混合物の温度を５０℃に下げてから室温の精製水５ｍｌを加え、青色の透明な溶液になるまで反応させて、高分子ミセルを形成した。これに凍結乾燥化剤として無水乳糖１００ｍｇを加えて完全に溶かした後、孔径２００ｎｍのフィルターにて濾過し、凍結乾燥して粉末状のパクリタキセル含有高分子ミセル組成物を製造した。

［比較例３］溶媒蒸発法を用いたドセタキセル含有高分子ミセルの製造
実施例３と同じ含量にてドセタキセル及び両親媒性ブロック共重合体を用意した。両親媒性ブロック共重合体を６０℃で完全に溶融させた後、エタノール５．０ｍｌを加えて完全に混合した。混合物の温度を３０℃に下げてからドセタキセルを加え、ドセタキセルが完全に溶けて透明な溶液になるまで撹拌した。しかる後、丸底フラスコが装着された回転式減圧蒸留装置を利用して減圧蒸留してエタノールを除去した。混合物の温度を２５℃に下げてから室温の精製水４ｍｌを加え、青色の透明な溶液になるまで反応させて、高分子ミセルを形成した。これに凍結乾燥化剤としてＤ−マンニトール１００ｍｇを加えて完全に溶かした後、孔径２００ｎｍのフィルターにて濾過し、凍結乾燥して粉末状のドセタキセル含有高分子ミセル組成物を製造した。

［比較例４］溶媒蒸発法を用いたパクリタキセル含有高分子ミセルの製造
実施例６と同じ含量にてパクリタキセル及び両親媒性ブロック共重合体を用意した。両親媒性ブロック共重合体を８０℃で完全に溶融させた後、エタノール５．０ｍｌを加えて完全に混合した。混合物にパクリタキセルを加え、パクリタキセルが完全に溶けて透明な溶液になるまで撹拌した。しかる後、丸底フラスコが装着された回転式減圧蒸留装置を利用して減圧蒸留してエタノールを除去した。温度を５０℃に下げてから室温の精製水５ｍｌを加え、混合物を青色の透明な溶液になるまで反応させて、高分子ミセルを形成した。これに凍結乾燥化剤として無水乳糖１００ｍｇを加えて完全に溶かした後、孔径２００ｎｍのフィルターにて濾過し、凍結乾燥して粉末状のパクリタキセル含有高分子ミセル組成物を製造した。

［比較例５］高温でのミセルの製造
実施例１の含量及び方法どおりにドセタキセル含有高分子ミセル組成物を製造するが、エタノール溶液を加えた後、温度を７０℃に保ちながら高分子ミセルを形成した。次いで、実施例１と同法にて凍結乾燥して、凍結乾燥されたミセル組成物を得た。

［比較例６］高温でのミセルの製造
実施例６の含量どおりにパクリタキセル含有高分子ミセル組成物を製造するが、エタノール溶液を加えた後、温度を７０℃に保ちながら高分子ミセルを形成した。次いで、実施例６と同法にて凍結乾燥して、凍結乾燥されたミセル組成物を得た。

［実験例１］薬物封入量の測定
実施例１〜３、及び比較例１及び３のドセタキセル含有高分子ミセル組成物に対し、表３に表したＨＰＬＣ条件によって各組成物内のドセタキセルの濃度を測定した。しかる後、次式１にて薬物の含量（封入量）を計算し、その結果を表４に表した。

上記表から分かるように、有機溶媒を除去せずに凍結乾燥した実施例１〜３に係る組成物のドセタキセルの含量は、ほぼ１００％であった。これに対し、６０℃での有機溶媒の除去後に凍結乾燥した比較例１に係る組成物のドセタキセルの含量は、約６０％であった。これは、比較例１の溶媒蒸発法による製造工程にて得られた高分子ミセル内のドセタキセルは、高温での有機溶媒の揮発過程で分解されることが分かる。

また、比較例３の３０℃での有機溶媒の除去後に凍結乾燥した組成物内のドセタキセルの封入量とは、ほとんど差がなかった。このことから、本発明の有機溶媒を除去する中間段階を省略することで工程全体を単純化しつつも、薬物封入量の面においてほぼ同じ結果が得られることが分かる。

［実験例２］粒径の測定
実施例４〜６、並びに比較例２及び４のパクリタキセル含有高分子ミセル組成物を生理食塩水５ｍＬにて再構成してから、粒子測定器（ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ａｎａｌｙｚｅｒ、ＤＬＳ）にて水溶液中の各再構成された組成物内の粒子の粒径を測定した。その結果を下表５に表した。

上記表から分かるように、実施例４ないし６の有機溶媒を除去せずに凍結乾燥した組成物と、比較例２及び４の有機溶媒を除去してから凍結乾燥した組成物との水溶液中の粒子の粒径にはほとんど差がなかった。

［実験例３］安定性の実験
実施例６と比較例２に従い製造されたパクリタキセル含有高分子ミセル組成物に対し、３７℃水溶液における安定性を比較した。

実施例６及び比較例２に従って製造された各組成物を生理食塩注射液中にパクリタキセル濃度が１ｍｇ／ｍｌになるように希釈した。各希釈された溶液を３７℃で放置しながら、ミセル構造内に含まれているパクリタキセルの濃度を時間経過につれてＨＰＬＣにて測定した。ＨＰＬＣ分析条件は、表３のドセタキセル分析条件と同一にした。その結果を表６に表した。

上記表から分かるように、実施例６の有機溶媒を除去せずに凍結乾燥した組成物と、比較例２の有機溶媒を除去してから凍結乾燥した組成物との水溶液の安定性には、２４時間の間ほとんど差がなかった。

［実験例４］
実施例１と比較例５の方法にて製造されたドセタキセル含有高分子ミセル組成物に対し、ドセタキセルの含量及び関連化合物の含量を比較した。ドセタキセルの含量は表３に表したＨＰＬＣ条件にて、関連化合物の含量は表７に表したＨＰＬＣ条件にてそれぞれ測定した。その結果を表８に表した。

上記表から分かるように、高温で製造した組成物のうちドセタキセルの関連化合物が、低温で製造した組成物の場合よりも５倍以上増加し、ドセタキセルの含量が減少した。これは、高温の工程条件によって薬物が分解されることを意味する。

［実験例５］
実施例６と比較例６の方法にて製造したパクリタキセル含有高分子ミセル組成物内のパクリタキセルの含量を互いに比較した。パクリタキセルの含量は、表３に表したＨＰＬＣ条件にて測定した。しかる後、次式２にて薬物の含量（封入量）を計算し、その結果を表９に表した。

上記表から分かるように、比較例６に従い製造された高分子ミセル組成物は、有機溶媒の存在下で７０℃の高温を保ちながら水を加えてミセル化を進行させたとき、薬物、パクリタキセルの析出を観察することができた。具体的に、比較例６のパクリタキセルの含量は、実施例６に比べて約４０％減少した。

以上、実施例を図示し説明したが、当業者ならば、請求項に開示された本質及び範囲を逸脱することなく、その形態及び詳細事項において様々な変化がなされ得ることが理解できるであろう。

これに加え、本発明の必須範囲を逸脱することなく、本発明の開示に特定の状況または材料を適用して種々の変形がなされ得る。それゆえに、本発明は、本発明を遂行する最善の形態として開示された特定の実施例に限定されるものではなく、本発明は、請求の範囲内に該当するすべての実施を含む。

Claims (11)

1. 水難溶性薬物と両親媒性ブロック共重合体とを有機溶媒に溶解させる段階、
   該有機溶媒に溶解させて得た溶液に水溶液を添加して高分子ミセルを形成する段階、及び
   前記ミセル組成物に凍結乾燥補助剤を添加して前記ミセル組成物を凍結乾燥する段階を含む、薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法であって、
   該製造方法が、別途の有機溶媒の除去工程を施さず、前記有機溶媒が、前記組成物の全質量を基準に０．５から３０質量％の量で用いられ、前記有機溶媒に溶解させて得た溶液に水溶液を添加して高分子ミセルを形成する段階が０℃から６０℃で行われ、そして前記高分子ミセルが液体ポリ（エチレングリコール）媒体を含まない、該薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法。
2. 前記水難溶性薬物と前記両親媒性ブロック共重合体を前記有機溶媒に溶解させる前記段階が、
   前記両親媒性ブロック共重合体を前記有機溶媒に溶解させる段階及び、
   該高分子溶液に前記水難溶性薬物を溶解させる段階を含む、請求項１に記載の薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法。
3. 前記薬物が、水に対する溶解度が１００ｍｇ／ｍＬ以下である、請求項１に記載の薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法。
4. 前記薬物がタキサン抗癌剤である、請求項１に記載の薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法。
5. 前記タキサン抗癌剤が、パクリタキセル（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、ドセタキセル（ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）、７−エピパクリタキセル（７−ｅｐｉｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、ｔ−アセチルパクリタキセル（ｔ−ａｃｅｔｙｌ ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、１０−デスアセチルパクリタキセル（１０−ｄｅｓａｃｅｔｙｌ−ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、１０−デスアセチル−７−エピパクリタキセル（１０−ｄｅｓａｃｅｔｙｌ−７−ｅｐｉｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、７−キシロシルパクリタキセル（７−ｘｙｌｏｓｙｌｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、１０−デスアセチル−７−グルタリルパクリタキセル（１０−ｄｅｓａｃｅｔｙｌ−７−ｇｌｕｔａｒｙｌｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、７−Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシルパクリタキセル（７−Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｇｌｙｃｙｌｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、７−Ｌ−アラニルパクリタキセル（７−Ｌ−ａｌａｎｙｌ ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ）、及びそれらの混合物からなる群より選ばれる少なくとも一つである、請求項４に記載の薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法。
6. 前記両親媒性ブロック共重合体が、親水性ブロック（Ａ）と疎水性ブロック（Ｂ）との二重ブロック共重合体であり、
   該親水性ブロック（Ａ）が、ポリアルキレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる少なくとも一つであり、
   該疎水性ブロック（Ｂ）が、ポリエステル、ポリ酸無水物、ポリアミノ酸、ポリオルトエステル、ポリホスファジン、及びそれらの誘導体からなる群より選ばれる少なくとも一つである、請求項１に記載の薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法。
7. 前記親水性ブロック（Ａ）の数平均分子量が５００から５０,０００ダルトンであり、前記疎水性ブロック（Ｂ）の数平均分子量が５００ないし５０,０００ダルトンである、請求項６に記載の薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法。
8. 前記両親媒性ブロック共重合体が、前記親水性ブロック（Ａ）と前記疎水性ブロック（Ｂ）との質量比（Ａ：Ｂ）が３：７から８：２である、請求項６に記載の薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法。
9. 前記有機溶媒が、アルコール、アセトン、テトラヒドロフラン、酢酸、アセトニトリル、及びジオキサンからなる群より選ばれる少なくとも一つである、請求項１に記載の薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法。
10. 前記アルコールが、メタノール、エタノール、プロパノール、及びブタノールからなる群より選ばれる少なくとも一つである、請求項９に記載の薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法。
11. 前記薬物含有高分子ミセルが、前記組成物の乾燥質量を基準に、０．１から３０．０質量％の前記薬物、及び親水性ブロックと疎水性ブロックとを有する、７０から９９．９質量％の前記両親媒性ブロック共重合体を含む、請求項１に記載の薬物含有高分子ミセル組成物の製造方法。