JP5634066B2

JP5634066B2 - 唾液分泌促進剤

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Publication number: JP5634066B2
Application number: JP2009540088A
Authority: JP
Inventors: 武阪本; 章勝嶋; 敦志横溝; 松田　隆志; 隆志松田; 俊明藤谷
Original assignee: San Ei Gen FFI Inc
Current assignee: San Ei Gen FFI Inc
Priority date: 2007-11-06
Filing date: 2008-11-06
Publication date: 2014-12-03
Anticipated expiration: 2028-11-06
Also published as: WO2009060915A1; JPWO2009060915A1

Description

本発明は唾液分泌促進剤、特に口腔内で用いられる形態（口腔用形態）または経口投与して用いられる形態（経口投与形態）を有する唾液分泌促進剤に関する。

唾液は口腔内の環境および口腔機能などの維持に重要な役割を果たしている。口腔機能としては、会話や発声を円滑にする機能や食物摂取機能を挙げることができるが、特に食物摂取機能において、唾液は食塊形成や消化酵素作用といった消化活動、味物質の可溶化やカーボネート・デヒドロゲナーゼの分泌による味覚の維持作用に深く関わっている。また口腔内環境維持機能において、唾液は歯や口腔内の自浄作用、歯の再石灰化作用、抗菌作用、免疫作用、抗炎症作用、および成長因子等による組織修復促進作用に深く関わっている。

しかしながら、情緒やストレス障害、神経症、臓器障害、脳炎、腫瘍、脳血管障害、高血圧、バセドウ氏病、および糖尿病等の各種疾患、薬剤の副作用、放射線治療、ならびに加齢等を原因として唾液の分泌量が低下することが知られている。特に高齢者には、加齢による唾液腺機能の低下に加え、複数の慢性疾患やそれらの治療薬により、唾液の分泌量が減少して口腔内の乾燥を訴える者が多い。

唾液分泌の低下は、口腔内に乾燥をもたらし、その結果、咀嚼や嚥下困難および消化機能の低下を招く。また、口腔内不快感や口臭発生の原因ともなる。さらに症状が進行すると、歯周疾患や、口内炎などの口腔感染症等の原因になる。従って、何らかの手段によって、患者の唾液の分泌量を増加させることが求められる。

唾液の分泌量を増加させる手段としては、酸味を用いて、味覚的に刺激を与える方法や嗅覚的に刺激を与える方法が提案されている（例えば、特許文献１および２など参照）。また、唾液分泌促進作用を有する植物抽出物を使用する方法（例えば、特許文献３〜６など参照）、並びにムスカリン受容体を標的にした薬物（特許文献７）やＰＡＲ−２を標的とした薬物（特許文献８）を用いる方法なども提案されている。
特開平７−１０１８５６号公報特開２００３−４０７５２号公報特開平１１−７１２５３号公報特開平１０−１８２３９２号公報特開２００２−２６５３７５号公報特開２００５−１６２６３３号公報特開平８−１２５７５号公報特開２００１−６４２０３号公報

本発明は唾液分泌促進剤を提供することを目的とする。好ましくは、本発明は唾液分泌の少ないときに選択的に唾液分泌を促進することができる唾液分泌促進剤を提供することを目的とする。より好ましくは、本発明は長時間継続して唾液の分泌を促進して口の乾きを癒すことができる唾液分泌促進剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を重ねていたところ、黒豆の溶媒抽出物に唾液分泌促進作用があること、特に黒豆の溶媒抽出物には、上記するように唾液量が多いときよりもむしろ、唾液分泌の少ないときに選択的に唾液分泌を促進する理想的な作用があることを見出し、さらに当該黒豆抽出物にカリウムを併用することにより、黒豆抽出物の唾液分泌促進作用が持続し、長時間にわたって高い唾液分泌量を維持することができることを見出した。また本発明者らは、唾液分泌促進作用の有効成分の単離同定を目指して鋭意検討を重ねていたところ、当該有効成分が、分子量約８kDaのBowman-Birk Protease Inhibitor（ボーマン-バーク・プロテアーゼ・インヒビター）（以下、「BBI」ともいう）であることを見出した。

これらの知見から、本発明者らは、かかるBBIおよび当該BBIを含む植物抽出画分（例えば分子量6-13kDaの画分）を含む組成物、またこれらにカリウムを組み合わせて含む組成物が、唾液分泌量の減少に起因して生じる口腔内乾燥およびこれによる口腔機能や口腔内環境維持機能の低下を抑制する唾液分泌促進剤として有用であることを確認して、本発明を完成するにいたった。

すなわち、本発明は下記の態様を含むものである：
（Ｉ）唾液分泌促進剤
（I-1）Bowman-Birk Protease Inhibitor（BBI）を有効成分とする、唾液分泌促進剤。

（I-2）BBIが、下記の（ａ）または（ｂ）に示されるタンパク質である、（I-1）に記載する唾液分泌促進剤：
（ａ）配列番号１に記載されるアミノ酸配列からなるタンパク質、
（ｂ）配列番号１において、１または複数個のアミノ酸が欠失、置換または付加されており、且つトリプシン阻害活性、キモトリプシン阻害活性、および唾液分泌促進作用を有するタンパク質。

（I-3）BBIを含む植物抽出物を含有する、（I-1）記載の唾液分泌促進剤。

（I-4）上記植物抽出物が、分子量8kDaを中心とした6〜13kDaの範囲にある画分を含む植物抽出物である、（I-3）に記載する唾液分泌促進剤。

（I-5）上記植物抽出物がマメ科、ナス科、イネ科、バショウ科、パイナップル科、ネギ科、キンポウゲ科、およびアブラナ科からなる群から選択されるいずれかの科に属する植物の抽出物である、（I-3）または（I-4）に記載する唾液分泌促進剤。

（I-6）上記植物抽出物がマメ科に属する植物の種子に由来するものである、（I-3）または（I-4）に記載する唾液分泌促進剤。

（I-7）上記植物抽出物がマメ科ダイズ属に属する植物の種子に由来するものである、（I-3）または（I-4）に記載する唾液分泌促進剤。

（I-8）さらにカリウムを含有する（I-1）乃至（I-7）のいずれかに記載する唾液分泌促進剤。

（I-9）口腔用または経口投与用の形態を有する（I-1）乃至（I-8）のいずれかに記載する唾液分泌促進剤。

（I-10）シロップ剤、ジェル剤、噴霧剤、チュアブル錠、フィルム剤、トローチ剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤、粉末剤、練り歯磨き、飴、ゼリー、ガムまたは飲料の形態を有する（I-1）乃至（I-8）のいずれかに記載する唾液分泌促進剤。

（II）唾液分泌促進剤の調製方法
（II-1）下記の（１）および（３）の工程を有する、（I-1）乃至（I-10）のいずれかに記載する唾液分泌促進剤の調製方法：
（１）BBIを含有する植物から、BBIを含有する画分を採取する工程、および
（３）上記で得られたBBI含有物を口腔用または経口投与用の形態に加工する工程。

（II-2）下記の（１）〜（３）の工程を有する、（I-8）乃至（I-10）のいずれかに記載する唾液分泌促進剤の調製方法：
（１）BBIを含有する植物から、BBIを含有する画分を採取する工程、
（２）工程（１）で得られたBBI含有物にカリウムを配合して、BBIおよびカリウムを含有する組成物を調製する工程、および
（３）上記で得られた組成物を口腔用または経口投与用の形態に加工する工程。

（II-3）BBIを含有する画分が、分子量8kDaを中心とした6〜13kDaの範囲にある画分である（II-1）または（II-2）に記載する方法。

（II-4）上記植物がマメ科、ナス科、イネ科、バショウ科、パイナップル科、ネギ科、キンポウゲ科、およびアブラナ科からなる群から選択されるいずれかの科に属する植物である、（II-1）乃至（II-3）のいずれかに記載する方法。

（II-5）上記植物がマメ科に属する植物の種子である、（II-1）乃至（II-3）のいずれかに記載する方法。

（II-6）上記植物がマメ科ダイズ属に属する植物の種子である、（II-1）乃至（II-3）のいずれかに記載する方法。

（III）唾液分泌を促進する方法
（III-1）（I-1）〜（I-10）のいずれかに記載する唾液分泌促進剤を有効量、被験者に経口的に摂取させる工程を有する、当該被験者の唾液分泌を促進する方法。

（III-2）上記被験者が唾液分泌低下症または口腔乾燥症の患者である、(III-1)記載の方法。

（IV）唾液分泌剤としての使用
（IV-1）BBIまたはBBIを含む植物抽出物の、唾液分泌促進剤としての使用。

（IV-2）BBIまたはBBIを含む植物抽出物に加えてカリウムを含有する組成物の、唾液分泌促進剤としての使用。

（IV-3）上記植物抽出物が、分子量8kDaを中心とした6〜13kDaの範囲にある画分を含む植物抽出物である、（IV-1）または（IV-2）に記載する使用。

（IV-4）上記植物抽出物がマメ科、ウリ科、イネ科、バショウ科、パイナップル科、ネギ科、キンポウゲ科、およびアブラナ科からなる群から選択されるいずれかの科に属する植物の抽出物である、（IV-1）乃至（IV-3）のいずれかに記載する使用。

（IV-5）上記植物抽出物がマメ科に属する植物の種子に由来するものである、（IV-1）乃至（IV-3）のいずれかに記載する使用。

（IV-6）上記植物抽出物がマメ科ダイズ属に属する植物の種子に由来するものである、（IV-1）乃至（IV-3）のいずれかに記載する使用。

本発明の唾液分泌促進剤によれば、唾液の分泌を促進することで、口腔内の自浄作用を高め、唾液の分泌の低下によって生じる種々の弊害（例えば、口腔内の乾燥、口腔内の不快感、味覚障害、口臭、う蝕、歯周疾患、粘膜の感染症などの口腔機能不全、会話や発声のし難さなど）を予防することができる。特に本発明の唾液分泌促進剤は、唾液の分泌量が多いときにはあまり効果を発揮せず、唾液の分泌量が低下したときに選択的に効果を発揮する理想的な作用を有している。

またカリウムを含む本発明の唾液分泌促進剤は、BBIにカリウムが併用されることにより、唾液分泌促進作用の持続性が向上し、このため、唾液分泌促進が長時間にわたって維持され、その結果、上記弊害の発生を長期にわたって防止することができる。

しかも本発明の唾液分泌促進剤は、大豆、特に黒豆など、食経験のある植物を材料として用いることができるため、安全性が高く、継続的に口腔内で用いられるかまたは経口摂取される口腔用組成物または経口投与用組成物（医薬品、医薬部外品、食品が含まれる）として好適に用いることができる。当該本発明の唾液分泌促進剤は、医薬品として医療において用いることもできるが、機能性食品または健康食品として代替医療または補完代替医療において好適に用いることができる。

（Ｉ）Bowman-Birk Protease Inhibitor
Bowman-Birk Protease Inhibitor （以下「BBI」という）は、セリンプロテアーゼ阻害剤として公知の可溶性タンパク質であり、14つのシステイン残基がジスルフィド結合して計７つのループを形成していることが知られている（Journal of Biology, 2001, Vol.3, pp164-173）。またBBIは、トリプシン阻害活性およびキモトリプシン阻害活性を有しており、これらの活性部位は、異なるループのアミノ酸領域に位置することが知られている（J. Biol Chem. (1992) 267, 1990-1994；Eur. J. Biochem. (1993) 212,549-555；Eur. J. Biochem. 242,122-131）。

かかるBBIは、下記に掲げる植物に含まれていることが知られている。

(1)マメ科（Leguminosae）に属する植物
ナタマメ属（ハナマタマメ：Canavalia lineata）、ダイズ属（ダイズ：Glycine max、Glycine microphylla）、ササゲ属（リョクトウ：Vigna radiata var. radiata、Vigna trilobata、アカササゲ: Vigna vexillata、アズキ：Vigna angularis、ケツルアズキ：Vigna mungo、ハマアズキ：Vigna marina、ササゲ：Vigna unguiculata）、ラッカセイ属（ラッカセイ：Arachis hypogaea）、エンドウ属（エンドウ：Pisum sativum）、インゲンマメ属（ライマメ：Phaseolus lunatus、ベニバナインゲン：Phaseolus polyanthus、テパリービーン：Phaseolus acutifolius、Phaseolus filiforms、Phaseolus wrightii、Phaseolus glabellus、Phaseolus microcarpus、Phaseolus augusti、Phaseolus oligospermus、Phaseolus maculatus、Phaseolus hintonii、Phaseolus grayanus、Phaseolus zimapanensis、ハナササゲ：Phaseolus coccineus、Phaseolus parvulus、Phaseolus costaricensis）、ホドイモ属（アピオス：Apios americana）、ウマゴヤシ属（ウズマキウマゴヤシ：Medicago scutellata、ムラサキウマゴヤシ：Medicago sativa）、ヒラマメ属（レンズマメ：Lens culinaris、Lens culinaris subsp. tomentosus、Lens culinaris subsp. odemensis、Lens culinaris subsp.orientalis、Lens nigricans、Lenservoides、Lens lamottei）、ソラマメ属（ソラマメ：Vicia faba、ヤハズエンドウ：Vicia sativa subsp. nigra）、デイゴ属（デイゴ：Erythrina variegata）、Dioclea属（フジマメ：Dolichos lablab、Dioclea glabra）、Amburana属（Amburana acreana、Amburana cearensis）、ロンコカルプス属（Lonchocarpus capassa）、またはハウチワマメ属（ルピナス：Lupinus albus）に属する植物。

(2)イネ科に属する植物
イネ属（コメ：Oryza sativa）、オオムギ属（大麦：Hordeum vulgar）、コムギ属（コムギ：Triticum aestivum）、トウコロコシ属（トウモロコシ：Zea mays）、ブタモロコシ（Zea diploperennis）、エノコゴグサ属（あわ：Staria italica）、またはジュズダマ属（ハトムギ：Coix lacryma-jobi）に属する植物。

(3)ナス科に属する植物
ナス属（ジャガイモ：Solanum tuberosum）に属する植物。

(4)バショウ科に属する植物
バショウ属（バナナ：Musaa acuminata）に属する植物。

(5)パイナップル科に属する植物
アナナス属（パイナップル：Ananas comosus）に属する植物。

(6)ネギ科に属する植物
ネギ属（たまねぎ：Allium cepa）に属する植物。

(7)キンポウゲ科に属する植物
オウレン属（オウレン：Coptis japonica）に属する植物。

(8)アブラカ科に属する植物
シロイナズナ属（シロイヌズナ：Arabidopsis thaliana）に属する植物。

上記植物のうち、マメ科ダイズ属に属する植物であるダイズに由来するBBIのアミノ酸配列を配列番号１に示す。当該ダイズ由来のBBIは、分子量が約8kDa、等電点約4.5の酸性タンパク質である。かかるBBIは、まず110個のアミノ酸からなる前駆体（配列番号２）として翻訳されるが、各器官に運ばれる過程でＮ末端が切断されてmatureなタンパク質（成熟型タンパク）となる。上記配列番号１に示すアミノ酸配列は、大豆種子中に存在するmature な状態のBBIである。なお、翻訳直後のBBI前駆体のアミノ酸配列およびそれをコードする遺伝子の塩基配列は、SWISS-Protアクセス番号P01055及びNCBI GeneID548083にそれぞれ登録されている。

BBIは、前述するように各種の植物に含まれているが、そのアミノ酸配列は、生物種間で、通常20〜60％程度の相同性を有していることが知られている。特に、最初のシステイン残基から14番目の最後のシステイン残基までのシステインリッチな領域は、生物種間で50〜60％程度の相同性を有している。大豆以外の植物種に含まれるBBIのアミノ酸配列に関しては、例えばアズキに由来するBBIのアミノ酸配列はSWISS-Protアクセス番号P01058に、またピーナッツに由来するBBIのアミノ酸配列はSWISS-Protアクセス番号P01066に登録されている。

またBBIには、複数のアイソフォーム（isoform）が存在することが知られている。かかるアイソフォームには、具体的には、配列番号１に示すmatureなBBIのアミノ酸配列において、Ｎ末端およびＣ末端のいずれか少なくとも１方のアミノ酸残基が最大で10個、好ましくは最大で、Ｎ末端またはＣ末端から最初のジスルフィド結合部位までのアミノ酸残基が切断されたものが含まれる。例えば、大豆の種子を乾燥することにより、BBIのＣ末端側の9〜10のアミノ酸残基が除去されることが知られている。なお、BBIのトリプシン阻害活性部位およびキモトリプシン阻害活性部位はループ上に存在するため、上記のようなアミノ酸残基の切断は、BBIのトリプシン阻害活性およびキモトリプシン阻害活性に何ら影響を与えない。

BBIは、前述する植物を原料として、これからトリプシン阻害活性、キモトリプシン阻害活性、分子量（約8kDa）および等電点（pI約4.5）等を指標として、単離精製することによって調製することができる。例えば、黒豆からBBIを単離精製する方法としては、後述する実験例２を参照することができる。またBBIは、その遺伝子情報に基づいて、遺伝子工学的手法により製造することもできる（例えば、特開2007-528212号公報参照）。

（II）唾液分泌促進剤
本発明の唾液分泌促進剤は、前述するBBIを有効成分とすることを特徴とする。

ここでBBIは、その由来を特に制限されるものでなく、BBIを含む植物、例えば上記のマメ科植物、イネ科植物、ナス科植物、バショウ科植物、パイナップル科植物、ネギ科植物、キンポウゲ科植物およびアブラナ科植物のいずれに由来するものであってもよい。好ましくはマメ科植物、より好ましくはマメ科ダイズ属に属する植物、特に大豆および黒大豆に由来するBBIである。これらのマメ科植物には、実験例１に示すように、その種子に多くのBBIが含まれている。

本発明の唾液分泌促進剤は、好ましくは大豆の種子に由来するBBI、より好ましくは黒豆の種子に由来するBBIを有効成分とする。

ここで黒豆は、マメ科ダイズ種 Glycine max(L.) Merrillに属する短日性の一年生草木の黒い種子（子実）（黒大豆）である。黒豆には、例えば中生光黒、トカチクロ、いわいくろ、玉大黒、丹波黒、信濃黒、および雁喰などの品種があるが、黒豆であればどの品種の種子を用いてもよい。

当該BBIとしては、具体的には配列番号１に示されるアミノ酸配列からなるタンパク質を挙げることができる。

また、前述するようにBBIには複数のアイソフォームが存在することから、本発明で用いるBBIは、上記タンパク質のアイソフォームであってもよい。かかるアイソフォームとしては、配列番号１において１または複数個のアミノ酸が欠失されており、且つトリプシン阻害活性およびキモトリプシン阻害活性を有し、しかも唾液分泌促進作用を有するものを挙げることができる。なお、１または複数個のアミノ酸が欠失する領域は、前述するように、BBIのＮ末端及びＣ末端から、最大で10個のアミノ酸からなる領域であり、好ましくは最大で、Ｎ末端またはＣ末端から最初のジスルフィド結合部位までのアミノ酸領域である。

前述するようにBBIのトリプシン阻害活性部位およびキモトリプシン阻害活性部位はいずれもジスルフィド結合により形成されたループ上に存在するため、Ｎ末端またはＣ末端から最初のジスルフィド結合部位までのアミノ酸領域においてアミノ酸残基の置換やアミノ酸残基の付加があっても、BBIのトリプシン阻害活性およびキモトリプシン阻害活性に影響を与えない。よって、本発明で用いるBBIは、配列番号１の上記アミノ酸領域において１または複数個のアミノ酸が置換または付加されており、且つトリプシン阻害活性およびキモトリプシン阻害活性を有し、しかも唾液分泌促進作用を有するものであってもよい。

ここでBBIのトリプシン阻害活性は、ＢＡＥＥ（N-Benzoyl-L-Arginine Ethyl Ester）、ＢＡＰＮＡ（N-Benzoyl-L-Arginine 4-nitroanilide）、またはカゼインなどを基質として、BBIと予め混合したトリプシンを用いて酵素反応させた時の、BBIによる反応阻害率から評価することが出来る（例えば、文献名シグマ社推奨プロトコルSIGMA QUALITY CONTROL TEST, Enzymatic Assay of TRYPSIN INHIBITOR参照）。またキモトリプシン阻害活性は、ＢＴＥＥ（N-Benzoyl-L-Tyrosine Ethyl Ester）などを基質として、BBIと予め混合したトリプシンを用いて酵素反応させた時の、BBIによる反応阻害率から評価することが出来る（例えば、文献名Planta (2007) 226:73-85参照）。さらにBBIの唾液分泌促進作用は、後述する実験例１〜３に記載するいずれかの方法で評価することができる。

本発明の唾液分泌促進剤は、上記のBBIの１回摂取量が0.02〜0.25mg、好ましくは0.036〜0.18mgとなるように調製されることが望ましい。なお、本発明の唾液分泌促進剤は、唾液量が低下したときまたは唾液分泌を増加させたいときに、適宜使用することができる。このため、本発明の唾液分泌促進剤の一日当たりの服用回数は制限されず、上記量のBBIを含有する唾液分泌促進剤を一日に一回若しくは複数回、または連続若しくは間歇的に服用することができる。

本発明の唾液分泌促進剤は、上記BBIを精製状態で含むものであってもよいが、これに限らず、BBIを粗精製状態で含むものであってもよい。かかる粗精製BBIとしては、BBIを含む例えば上記植物から調製されるBBI含有抽出物（以下「BBI含有抽出物」という）を挙げることができる。また、より純度の高いBBIをより多く含むように、BBIの活性（トリプシン阻害活性、キモトリプシン阻害活性）、分子量（約8kDa）および等電点（約pI4.5）等を指標として、上記BBI含有抽出物をさらに精製処理してなる処理物（以下「BBI含有処理物」という）を用いることもできる。請求項において本発明が対象とする「BBIを含む植物抽出物」には、かかるBBI含有抽出物およびBBI含有処理物の両方が含まれる。好ましくはマメ科植物の種子、より好ましくはマメ科ダイズ属に属する植物の種子、特に好ましくは大豆または黒豆の種子から調製されるBBI含有抽出物またはBBI含有処理物である。

BBI含有抽出物の調製に使用される抽出溶媒としては、水、極性有機溶媒またはこれらの混合液を挙げることができる。極性有機溶媒としては、アルコール、アセトン、酢酸エチル等が挙げられる。中でも人体への安全性と取扱性の観点から、抽出溶媒として、水、低級アルコール、またはこれらの混合液を挙げることができる。低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール及びイソプロピルアルコール、ブタノール等の炭素数１〜４の低級アルコール、好ましくはエタノールを例示することができる。抽出溶媒として、好ましくは水、または含水アルコール（特に、含水エタノール）である。なお、溶媒として含水アルコール（特に、含水エタノール）を用いる場合、それに含まれるアルコール（エタノール）量は４０容量％以下であることが好ましい。

なお、抽出溶媒は酸性、中性及びアルカリ性の何れの範囲で調製されていてもよい。

抽出方法としては、一般に用いられる方法を採用することができる。制限はされないが、例えば溶媒中に生または乾燥処理した植物（好ましくは大豆の種子）（そのままの形状、若しくは粗末、細切物）を低温、常温、加温または煮沸条件下で浸漬する方法；低温、常温、加温または煮沸条件下で攪拌しながら抽出を行う方法；炭酸ガス等を用いた超臨界抽出法；またはパーコレーション法等を挙げることができる。好ましくは、乾燥処理した植物、好ましくは大豆の種子（そのままの形状、若しくは粗末、細切物）を溶媒中に、高温若しくは煮沸条件下で浸漬し、必要に応じて攪拌しながら、抽出する方法である（熱処理抽出法）。

得られた抽出物は、必要に応じて濾過、共沈、遠心分離、圧搾等の各種の固液分離手段によって溶媒に不要な固形物（残渣）を除去することができる。また、得られた抽出物は、さらに凍結乾燥や濃縮して粉末状、ペースト状の抽出エキス（濃縮抽出物）として調製することもできる。

なお、制限はされないものの、上記で得られた抽出物に対して、さらに酵素処理または所望の分子量画分を分画する処理（分子量分画処理）を行うこともできる。なおこれらの処理は組み合わせて行うこともできる。本発明において所望の分子量画分とは、分子量8000Daを中心とした分子量6000〜13000Daの範囲にある画分である。

ここで酵素処理に用いられる酵素としては、糖質または／および蛋白質を分解する作用を有する酵素を挙げることができる。具体的には、例えば、前者の糖質分解酵素として、クライスターゼＹ（大和化成製）、及びスミチームＳ（新日本化学工業製）などのアミラーゼ；セルラーゼＡ（天野エンザイム製）、及びセルロシンＡＣ４０（エイチビィアイ製）などのセルラーゼ；スクラーゼＳ（三共製）、及びスミチームＸ（新日本化学工業製）などのヘミセルラーゼ等の糖質分解活性を有する酵素を使用することができる。また、後者の蛋白質分解酵素としては、ニューラーゼＡ（天野エンザイム製）、及びプロテアーゼＹＰ-ＳＳ（ヤクルト薬品工業製）などの酸性プロテアーゼ；スミチームＦＰ（新日本化学工業製）、及びエンチロンＮＢＳ（洛東化成工業製）などの中性プロテアーゼ；ノボザイムＦＭ（ノボザイムズ製）やビオプラーゼＳＰ-４ＦＧ（ナガセケムテックス製）などのアルカリ性プロテアーゼ等の蛋白質分解活性を有する酵素を使用することができる。

かかる糖質分解活性を有する酵素、及び蛋白質分解活性を有する酵素は、それぞれ１種単独で使用してもよく、また両者を組み合わせて使用することもできる。また使用する酵素は単一酵素でも良いが、各種の酵素を組み合わせて使用することもできる。好ましい酵素は糖質分解活性を有する酵素であり、特に上記セルラーゼ、アミラーゼ、ヘミセルラーゼ等の多糖を分解する活性を有する酵素が好適に使用できる。

酵素処理は、使用する各酵素に適した所定の条件で実施することができる。酵素処理を行う温度条件は、特に制限されないが、通常３０〜８０℃の範囲を用いることができる。好ましくは３５〜６０℃である。

分子量6000〜13000Daの分画処理としては、ゲル濾過方法、膜分離方法、または吸着処理方法などを挙げることができる。好ましくは膜分離方法である。ここで用いる膜分離方法は、植物の溶媒抽出物から、結果として分子量8000Daを中心とした分子量6000〜13000Daの画分が取得できる方法であれば特に制限されない。尚、BBIは、重合または再会合などにより二量体を形成することが報告されている（文献名：The Journal of Biological Chemistry, Vol. 279, No. 29, Issue of July 16, pp. 30425-30432, 2004）。このため、かかる二量体まで効率よく回収するためには、結果として分子量6,000〜26,000Daの画分を取得する分画処理方法を採用することが好ましい。この場合、具体的には、分画分子量の設定カットオフ値が、例えば26,000Da±10％の範囲、好ましくは18,000Da±10％の範囲、より好ましくは13,000Da±10％の範囲にある膜を用いて高分子化合物を分離除去する処理方法と、設定カットオフ値が、例えば6,000Da±10％の範囲にある膜を用いて低分子化合物を分離除去する処理方法とを組み合わせて行うことが好ましい。

前者の高分子化合物を分離除去する方法として、具体的には分画分子量が上記の範囲にあるNTU-3150膜, NTU-3250膜, NTU-3550膜, NTU-3800 UF膜（以上、日東電工製）；Cefilt-UF（日本ガイシ製）；AHP-2013膜, AHP-3013膜, AHP-1010膜（以上、旭化成製）；等を利用した限外濾過（UF）膜処理を挙げることができる。また後者の低分子化合物を分離除去する方法として、具体的には分画分子量が上記の範囲にあるNTR-7250膜, NTR-7410膜, NTR-7430膜, NTR-7450膜（以上、日東電工製）、AIP-3013膜, ACP-3013膜, ACP-2013膜, AIP-2013膜, AIO-1010膜（以上、旭化成製）などの膜を利用した逆浸透（RO）膜処理、または限外濾過（UF）膜処理を挙げることができる。

かかる膜分離法に用いられる膜材料としては、天然、合成、半合成の別を問わず、例えばセルロース、セルロース・ジアセテート若しくはトリアセテート、ポリアミド、ポリスルホン、ポリスチレン、ポリイミド、ポリアクリロニトリルなどを挙げることができる。なお、分画処理に使用される膜として、上記限外濾過膜、及び逆浸透膜の他、精密濾過（MF）膜等を用いることもできる。

上記酵素処理と分子量分画処理は、前述する植物抽出物（BBI含有抽出物）またはその処理物（BBI含有処理物）に対して、単独または組み合わせて行うことができる。また両者を組み合わせて行う場合、酵素処理と分子量分画処理は、連続的または非連続的に任意に組み合わせて行うことができる。その組み合わせの順番は特に制限されず、酵素処理に次いで分子量分画処理の順、分子量分画処理に次いで酵素処理の順のいずれでもよいが、好ましくは前者の方法である。また、上記酵素処理及び分子量6000〜13000Daの分画処理に加えて、植物抽出物またはその処理物に対して、さらに、酸処理、抽出処理、吸着処理、イオン交換処理または膜処理等の通常精製に使用される処理を行うこともできる。これらの処理は、一種または任意に２種以上組み合わせて、植物抽出物（BBI含有抽出物）またはその処理物（BBI含有処理物）に対して行うことができる。

本発明の唾液分泌促進剤は、上記方法に従って調製されるBBI含有抽出物若しくはBBI含有処理物を、原料植物の水溶性固形分として１回あたり0.126〜1.55ｇ、好ましくは0.22〜1.12ｇとなる割合で投与（摂取）出来るよう調整されることが望ましい。またこのとき、BBIの量に換算して１回あたり、BBIが0.02〜0.25mg、好ましくは0.036〜0.18mgとなるような割合で投与（摂取）出来るよう調整されることが望ましい。

本発明の唾液分泌促進剤には、上記BBIまたはBBI含有抽出物若しくはBBI含有処理物に加えて、カリウムを配合することができる。かかる唾液分泌促進剤中に配合されるカリウムの割合は、特に制限されないが、１回摂取される唾液分泌促進剤あたり（一投与形態あたり）のカリウムイオン量として1〜100mg、好ましくは1.5〜50mgを挙げることが出来る。

ここでカリウムの配合は、通常カリウム含有物を用いることによって行われる。かかるカリウム含有物とは、カリウム塩を含有するものを挙げることができる。一例を挙げれば、塩化カリウム、炭酸カリウム、リン酸２カリウム、リン酸３カリウム、グルコン酸カリウム、クエン酸３カリウム、グルタミン酸カリウム、および酒石酸水素カリウムなどの無機化合物；ならびにホエイソルト、海藻灰抽出物、そば柄灰抽出物、粗製海水塩化カリウム、塩水湖水塩化ナトシウムなどの組成物を挙げることができる。

本発明の唾液分泌促進剤は、本発明の効果を損なわない範囲で、香料、着色料、清涼化剤、抗酸化剤、甘味料または抗菌剤など他の成分を配合することもできる。

本発明の唾液分泌促進剤は、その形状を特に制限するものではなく、例えば、液状の形態ならびに半固形または固形状の形態に調製することができる。

液状形態を有する唾液分泌促進剤は、水（精製水、イオン水、蒸留水、生理食塩水など）およびエタノールなどの薬学的に許容される溶媒または食品用の溶媒を用いて調製することができ、また必要に応じて粘度付与剤を用いて、その粘度が５０mPa・s以上、好ましくは５０〜３６,０００mPa・sとなるように調整される。より好ましくは６０〜１００００mPa・s、さらに好ましくは９０〜８０００mPa・sである。

ここで粘度は、２０℃の条件下、ＢＬ型回転粘度計（東機産業（株）社製、粘度４５０mPa・sまでローターNo.１、粘度４５０〜２２５０mPa・sはローターNo.２、粘度２２５０〜９０００mPa・sローターNo.３、粘度９０００mPa・s以上はローターNo.４を使用）を用いて回転数１２rpmで測定した場合に得られる粘度を意味する。なお、本明細書全体において、「粘度」とは、かかる条件で測定される粘度を意味する。

ここで粘度付与剤としては、制限されないが、原料植物に由来する水溶性固形分を４〜２０重量％の割合で含む液状組成物の粘度を５０mPa・s以上、好ましくは５０〜３６,０００mPa・sに調整することができるものが好ましい。

例えば、ローカストビーンガム、タマリンドシードガム、プルラン、キサンタンガム、グァーガム、タラガム、ラムザンガム、マンナンなどのガム類；でんぷん（以上、これらを総称して「多糖類」ともいう）；グルコース、フラクトース等の単糖類；スクロース、乳糖、トレハロース等の二単糖類；三糖以上からなるオリゴ糖類；イヌリンおよびポリデキストロースなどの多糖類；水飴；ソルビトール、マンニトール、マルチトール、エリスリトール、ラクチトール、キシリトール、グリセリン等の糖アルコール；糖蜜、蜂蜜、果糖ブドウ糖液糖、還元麦芽糖水飴、還元澱粉加水分解物、水飴などの糖類の混合物（以上、これらを総称して「糖類」ともいう）を挙げることができる。これらは１種を単独で使用しても、また２種以上を任意に組み合わせて使用することもできる。

好ましくは、ローカストビーンガム、タマリンドシードガム、プルラン、グァーガム、イヌリン、およびポリデキストロースなどの多糖類；ならびに糖蜜、蜂蜜、果糖ブドウ糖液糖、還元麦芽糖水飴、還元澱粉加水分解物および水飴などの糖類であり、より好ましくは糖類である。

また液状の唾液分泌促進剤のｐＨは、制限されないが、通常ｐＨ５〜９の範囲にあることが好ましく、より好ましくはｐＨ５〜８、さらに好ましくはｐＨ５〜７．５である。

これらの液状唾液分泌促進剤は、溶液タイプ、噴霧タイプ、滴下タイプ、または吐出タイプの形態（洗口液、液体歯磨き、うがい液、および口腔スプレーなどの口腔用組成物、およびシロップなどの経口投与用組成物を含む）に調製できるほか、通常の飲料の形態に調製することもできる。上記各種形態を有する唾液分泌促進剤は、その形態に応じて、ボトル、ポンプ、スプレー、チューブ、缶、および瓶などの各種の容器に充填された状態で用いることができる。

半固形または固体形態を有する唾液分泌促進剤は、口腔内で用いられる形態（口腔用形態）、または経口投与して用いられる形態（経口投与形態）を有するものであれば特に制限されない。例えば、散剤、錠剤、顆粒剤、丸剤、トローチ剤、シロップ剤、チュアブル錠、フィルム剤、ジェル剤およびドライシロップ剤などの形態とすることができる。また、飴（ハードキャンディー、ソフトキャンディー、グミを含む）、ゼリー、またはガムの形態を有するものであってもよい。かかる形態を有する半固形または固形状の組成物は、当業界の慣用法に従って調製することができる。

本発明の唾液分泌促進剤は、上記の口腔用形態または経口投与形態に調製するため、またその安定化のために、薬学上経口投与に許容される各種の担体並びに添加剤を配合することもできる（例えば、局方または「医薬品添加物事典」（薬事日報社発行）などが参照できる。）。

経口投与（または経口摂取）用の担体または添加剤としては、乳糖、白糖、ブドウ糖、マンニット、ソルビトール、トウモロコシデンプン、部分α化デンプン、結晶セルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロースナトリウム、タルクなどの賦形剤；デンプン、α−デンプン、寒天、ゼラチン、アラビアガム、デキストリン、メチルセルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースまたはその塩、結晶セルロースなどの結合剤；炭酸カルシウム、クロスポピドン、デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコール、無水ケイ酸などの滑沢剤；ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、及びプルロニックなどの懸濁化剤；白糖、タルク、沈降炭酸カルシウム、ゼラチン、アラビアゴム、プルラン、カルナウバロウ、ヒドロキシプロピルメチルフタレートなどのコーティング剤；白糖、ブドウ糖、サッカリンナトリウム、ソルビトール、クエン酸、及びアスパルテームなどの矯味剤等を挙げることができる。また上記成分の他、本発明の効果が損なわれない範囲であれば、通常医薬品または食品の添加物として許容される、安定剤、乳化剤、分散剤、流動化剤、緩衝剤、湿潤剤、界面活性剤、粘稠剤、防腐剤、ｐＨ調整剤、着色剤、溶剤、溶解補助剤などの任意成分を所望に応じて添加することもできる。

これらの半固形または固形形態を有する唾液分泌促進剤は、摂食または服用後、口腔内で通常ｐＨ５〜９の範囲になるように調製されていることが好ましい。口腔内でのｐＨとして、好ましくはｐＨ５〜８、より好ましくはｐＨ５〜７．５である。

後述する実験例に示すように、斯くして調製される本発明の唾液分泌促進剤は、唾液の分泌を促進させる作用を有している。中でも、BBIまたはBBI含有抽出物若しくはBBI含有処理物に加えてカリウムを含む唾液分泌促進剤は、持続性に優れており、唾液の分泌促進効果を長期にわたって発揮することができる。

本発明の唾液分泌促進剤は、前述する固体、半固体または液体の口腔用形態または経口投与用形態に調製され、投与もしくは摂取することができる。その投与若しくは摂取方法およびその時期は、特に制限されず、口腔内の乾燥時、または乾燥する前に随時用いることができる。また、その使用量も特に制限されないが、唾液分泌促進剤に含まれるBBIの量に換算して１回投与（摂取）あたり、BBIが0.036〜0.18mgとなるような割合で投与（摂取）するか、または原料植物の水溶性固形分が１回あたり0.22〜1.12ｇとなる割合で投与（摂取）することが好ましい。また本発明の唾液分泌促進剤の１日あたり投与回数（摂取回数）は制限されず、上記量のBBIを含有する唾液分泌促進剤を、前述するように１日１回若しくは複数回、または連続もしくは間歇的に投与（摂取）することができる。

なお、本発明の唾液分泌促進剤は、唾液分泌が低下した被験者または唾液分泌の低下を感じる被験者に対して好適に用いることができる。唾液分泌が低下した被験者として、好ましくは唾液分泌低下症または口腔乾燥症を有する患者を挙げることができる。

（III）被験者の唾液分泌を促進する方法
上記のことから、本発明の唾液分泌促進剤によれば、唾液分泌が低下した被験者または唾液分泌の低下を感じる被験者について、唾液分泌を促進することができる。ゆえに、本発明は、当該被験者に対する唾液分泌促進方法を提供する。

かかる方法は、前述する本発明の唾液分泌促進剤を、上記被験者の口腔内に適用するか、または経口投与することによって実施することができる。口腔内への適用は、唾液分泌促進剤の形態に応じて適宜選択することができ、例えば唾液分泌促進剤が溶液タイプ、噴霧タイプ、滴下タイプ、または吐出タイプ等の液状形態を有する場合は、洗口、歯磨き、うがい（含嗽）、および口腔内への噴霧を挙げることができる。また唾液分泌促進剤がガムなどの固形状の形態を有する場合は、咀嚼（チューイング）を挙げることができる。経口投与する場合は、液状、半固形または固体状の形態（例えば、散剤、錠剤、顆粒剤、丸剤、トローチ剤、シロップ剤、フィルム剤、チュアブル錠およびドライシロップ剤などの経口投与製剤や、シロップ、ドリンク、飴、ゼリー、グミ、可食性フィルムなどの形態）を有するものをその形態に応じて経口的に摂取（投与）させることによって実施することができる。

摂取（投与）時期は、特に制限されず、口腔内の乾燥時、または乾燥する前に随時用いることができる。また、その使用量も特に制限されないが、唾液分泌促進剤に含まれるBBIの量に換算して１回あたり、BBIが0.036〜0.18mgとなるような割合で投与（摂取）するか、または原料植物の水溶性固形分が１回あたり0.22〜1.12ｇとなる割合で投与（摂取）することが好ましい。また唾液分泌促進剤の１日あたりの投与回数（摂取回数）は制限されず、上記量のBBIを含有する唾液分泌促進剤を、前述するように１日１回若しくは複数回、または連続もしくは間歇的に投与（摂取）することができる。

本発明の方法が対象とする唾液分泌が低下した被験者として、好ましくは唾液分泌低下症または口腔乾燥症を有する患者を挙げることができる。なお、唾液分泌の低下の診断方法には、(1)安静時唾液量を測定する方法（吐唾法、唾液ワッテ法）、(2)刺激唾液量を測定する方法（サクソン法）、(3)口腔粘膜保湿度を測定する方法（ペリオトロン法、濾紙法、口腔水分計）、(4)唾液物性を測定する方法（粘度検査、意糸引き検査）、および(5)アンケート法などがある。これらのいずれかの方法または２種以上を組み合わせて、被験者の唾液分泌低下の有無を評価することができる。

以下に、本発明の構成ならびに効果をより明確にするために、実験例および処方例を記載する。但し本発明は、これらの実験例等に何ら影響されるものではない。

実験例１
（１）黒豆濃縮抽出物（水溶性固形分７０重量％）の調製
水７０Ｌにマメ科植物（黒大豆：Glycine max）の種子（種皮を含む）（以下、「黒豆」という）１０ｋｇを投入して、室温下に一夜放置し、続いて煮沸を２時間行った。斯くして得られた熱水抽出物を固液分離し、得られた抽出液に、濾過助剤及び珪藻土を配合して吸引濾過し、約５５Ｌ（ｐＨ５.８）の濾液を得た。当該熱水抽出濾液５５Ｌ（ｐＨ５．８）に、酵素・セルラーゼ（セルロシン AC40、力価：4000units/g、エイチビィアイ製）を１０ｇ添加し、４０〜５５℃で２時間ゆっくり攪拌して酵素反応処理を行った。次いで、反応液を９５℃に達するまで加熱して酵素を失活させ、酵素処理液を得た。得られた酵素処理液を、減圧下で濃縮して、黒豆の濃縮抽出物２.５ｋｇ（水溶性固形分７０重量％、ＢＢＩ０．１９７ｇ含有）を得た。

（２）唾液分泌促進効果の評価
（１）で調製した黒豆の濃縮抽出物（水溶性固形分７０重量％）と、粘度付与剤として水飴と還元麦芽糖水飴を用いて、表１に示すシロップ状の組成物（被験試料１および２）を調製した。

（2-1）被験試料の調製
水飴及び還元麦芽水飴を６０℃に加温し、ゆっくり攪拌しながら黒豆濃縮抽出物（水溶性固形分７０重量％）、及び被験試料２の場合はさらにＫＣｌを加えて、均一になるまで混合した。その後、香料を加えて、黒豆の水溶性固形分を７.９８重量％の割合で含むシロップ状の組成物を調製した。次いでこれを９０℃で２０分間殺菌し、室温まで冷却して、被験試料１および２とした。なお、この組成物（被験試料１および２）の粘度は、ＢＬ型回転粘度計（東機産業（株）製）（粘度450mPa・sまではローターNO.1使用、粘度が450mPa・sより大きく2250mPa・sまではローターNO.2使用、粘度が2250mPa・sより大きく9000mPa・sまではローターNO.3使用、粘度が9000mPa・s以上はローターNO.4使用）を用いて、回転数１２rpmで２０℃にて測定した。

（2-2）唾液分泌促進効果の評価
（ａ）被験者の選定
日常生活のリズムが同じような健常者（男性６名）を用い、口腔内に異物がない状態で口を閉じ、安静状態を保ちながら、５分ごとに唾液を採取して３０分間の唾液重量を測定し、唾液分泌の日内変動を観察した。健常者６名の唾液分泌量の日内変動を調べた結果、比較的近い日内変動を有する３名を選定し、これらを下記実験の被験者とした。

（ｂ）唾液分泌促進効果の評価
上記方法で選定した３名をパネリストとして、上記で調製した被験試料１および２について、唾液分泌促進効果を評価した。具体的には、各被験試料４ｇを摂取させた後５分後から、前述する方法に従って、５分ごとに唾液を採取し始め、３０分間の総量を測定し、唾液分泌の日内変動を評価した。なお、唾液の採取は朝の９時３０分から開始し、夕方６時まで行った。また被験試料の摂取は、これを舌の奥の部分に載せて、これを一気に飲み込むことで行った。

各被験試料の摂取による唾液分泌の日内変動と、非摂取時（コントロール）の唾液分泌の日内変動とを対比した結果を図１に示す。

この結果からわかるように、黒豆抽出物を含有する被験試料１を摂取することにより、唾液分泌が顕著に増加することが判明した。また、黒豆抽出物にカリウム（KCl）を併用する（被験試料２）ことで、唾液分泌量が増加した状態が長時間にわたって維持された。このことから、黒豆抽出物とカリウムとを併用することで、黒豆抽出物の唾液分泌促進作用が持続的に維持されるようになると考えられた。

実験例２唾液分泌促進成分の単離同定
黒豆抽出物の各分画について唾液分泌促進効果を評価し、唾液分泌促進作用を発揮する有効成分を単離同定した。

（１）唾液分泌促進効果の評価方法
評価は、実験例１と同様の方法で、唾液分泌量の日内変動が比較的近い被験者３名（50代男性１名、30代男性２名）を選定して、下記の実験を行うことにより実施した。

まず、口腔内に異物がない状態で口を閉じ、安静状態を保ちながら、５分ごとに唾液を採取して１５分間の唾液重量を測定した（摂取前唾液量。「平常時唾液量」ともいう）。次いで、各被験試料を摂取してもらい、１５分間安定にした後、１５分目から安静状態を保ちながら、５分ごとに唾液を採取して１５分間の唾液重量を測定した（摂取後唾液量）。なお、実験は、各被験者に被験試料が何なのか分からないようにして行った（ブラインド化）。

（２）黒豆部位毎の唾液分泌促進効果
（2-1）被験試料の調製
黒大豆（光黒大豆）４.６ｋｇから種皮を外し、黒豆種皮（以下、「黒豆種皮」という）０．３７ｋｇと種皮を取り外した黒豆種子（以下、「黒豆種子」という）４.２３ｋｇとに分けた。

得られた黒豆種皮３６０ｇをイオン交換水１.５Ｌに浸漬し、１００℃で２時間抽出を行なった。斯くして得られた熱水抽出物を固液分離した後、回収した抽出液をろ紙を用いて濾過することでBrix０.６の抽出液８７０ｍLを回収した。次いで、この抽出液を濃縮後、凍結乾燥して、黒豆種皮の乾燥エキス（「黒豆種皮エキス」という）５.５ｇを得た。

一方、黒豆種皮とは別に、黒豆種子３００ｇに対しイオン交換水８４０ｍＬを加え、室温で一晩静置し膨潤させた後、沸騰条件で２時間抽出を行なった。斯くして得られた熱水抽出物を固液分離した後、得られた抽出液に対して酵素・セルラーゼ（セルロシンＡＣ40、力価：4000units/g、エイチビィアイ製）を０.３ｇ添加し、４０〜５５℃で２時間ゆっくり攪拌しながら反応させた。当該反応液を９５℃に達するまで加熱して酵素を失活させた後、得られた酵素処理液に濾過助剤および珪藻土を配合して吸引濾過し、Brix４.４の抽出液１.１６kgを得た。次いで、得られた抽出液を濃縮後、凍結乾燥して黒豆種子の乾燥エキス（「黒豆種子エキス」という）４３.８ｇを得た。

斯くして調製した黒豆種皮エキスまたは黒豆種子エキスと、精製ハチミツを用いて、表２に示す処方からなるシロップ状の組成物（被験試料３及び４）を調製した。

（2-2）唾液分泌促進効果の評価
３名の被験者に、被験試料３及び４をそれぞれ３.５ｇ（黒豆種皮エキス20mg、黒豆種子エキス245mg）摂取してもらい、前述する方法に従って、摂取前の１５分間および摂取１５分後の１５分間の安静時唾液量を計測して、唾液分泌量の増加率を評価した。

結果を図２に示す。図２は、横軸に被験試料摂取前の唾液量（ml）、すなわち何も摂取していない平常時の唾液量（ml）（平常時唾液量（ml））を示す。また、縦軸は、被験試料摂取による唾液分泌量の増加率を示す。当該増加率は、上記平常時唾液量（ml）を１とした場合の、被験試料摂取後の唾液量（ml）の相対比として示される。この相対比が１より多くなるほど、被験試料の唾液促進効果が高いと判断される。しかし、この唾液促進効果は平常時唾液量が少ないときに高くなることが好ましく、平常時唾液量が多いときはむしろ効果が高くないほうが好ましい。このため、図２において、平常時唾液量が少ないときに高い増加率を示す場合、すなわち傾斜勾配の大きい右下がりのカーブが得られる場合に、当該被験試料は理想的な唾液促進効果があると判断することができる。

図２Ａは被験試料３（黒豆種皮エキス）摂取後の唾液分泌量の増加率を、図２Ｂは被験試料４（黒豆種子エキス）摂取後の唾液分泌量の増加率を、および図２Ｃはキャリア（精製ハチミツ）摂取後の唾液分泌量の増加率を、それぞれ示す。図２ＡとＢの結果から、唾液分泌促進作用を発揮する有効成分は、黒豆種皮よりも黒豆種子に多く含まれていることが判明した。また図２Ｂの結果より、黒豆種皮の抽出物は平常時唾液量が少ない場合に唾液分泌を顕著に促進することから、理想的な唾液促進効果を発揮すると判断された。

（３）黒豆種子の各分画の唾液分泌促進効果
（3-1）被験試料の調製
水１００Ｌに、黒大豆（光黒大豆）から種皮を取り外した黒豆種子７.４ｋｇを投入して、室温下に一夜放置した後、煮沸を２時間行った。斯くして得られた熱水抽出物を固液分離し、得られた抽出液に、濾過助剤及び珪藻土を配合して吸引濾過し、約１００Ｌ（ｐＨ５.８）の熱水抽出濾液を得た。当該熱水抽出濾液１００Ｌ（ｐＨ５.８）に、酵素・セルラーゼ（セルロシン AC40、力価：4000units/g、エイチビィアイ製）を７.４ｇ添加し、４０〜５５℃で２時間ゆっくり攪拌して酵素処理を行った。次いでこの反応液を９５℃に達するまで加熱して酵素を失活させ、酵素処理液を得た。得られた酵素処理液を、減圧下で濃縮して、黒豆種子の濃縮抽出物３.７ｋｇ（水溶性固形分37.8重量％）を得た。

次いで得られた黒豆種子濃縮抽出物を、限外濾過膜装置（旭化成社製）に供して、(a)分子量が６kDa未満の画分（分画分子量6kDa未満）、(b) 分子量が６kDa以上13kDa以下の範囲にある画分（分画分子量6-13kDa）（回収率１％）、および(c) 分子量が13kDaより大きい画分（分画分子量13kDaより大）に分画した。これらをそれぞれ凍結乾燥して粉末化し、これに精製ハチミツをキャリアとして添加して、シロップ状の被験試料５（分画分子量6kDa未満）、被験試料６（分画分子量6-13kDa）、および被験試料７（分画分子量13kDaより大）を調製した。

（3-2）唾液分泌促進効果の評価
これを３名の被験者にそれぞれ、黒豆種子濃縮抽出物を固形分換算で２４５ｍｇとなる割合で摂取してもらい、前述する方法に従って、摂取前の１５分間および摂取１５分後の１５分間の安静時唾液量を計測して、摂取後の唾液分泌量の増加率を評価した。

その結果、被験試料６（分画分子量6-13kDa）に唾液分泌促進作用が強く認められた。その結果を図３に示す。なお、図の縦軸に示す「被験試料摂取後の唾液分泌量の増加率（倍）」は、図２と同様に、摂取前唾液量（平常時唾液量）（ml）を１として、それに対する被験試料摂取後の唾液量（ml）の相対比から算出した値である。図３の結果からわかるように、被験試料６（分画分子量6-13kDa）は、（２）の黒豆種子エキスと同様に、平常時唾液量が少ないときに顕著に高い唾液分泌促進効果を発揮し、しかも平常時唾液量が多くなるとその効果は低下するという理想的な唾液促進効果を示した。このことから、唾液分泌促進作用を発揮する有効成分は、黒豆種子中に含まれる分子量6-13kDaの成分であると推定された。

（４）唾液分泌促進作用を有する有効成分の単離と同定
（4-1）有効成分の単離
（i）陰イオン交換カラムクロマトグラフィー
上記（３）で採取した黒豆種子抽出物の分子量6-13kDaの画分（以下「黒豆抽出物6-13kDa」という）（乾燥重量3.63g）を20mM トリス塩酸緩衝液(pH8.5)に溶解し、下記条件の陰イオン交換カラムクロマトグラフィーに供した。

＜陰イオン交換カラムクロマトグラフィーの条件＞
カラム：30 cm×2.5 cm i.d.
固定相：DEAE-TOYOPEARL 650M（東ソー製）
移動相：20mM Tris-HCl pH8.5 /1M NaClを含む20mM Tris-HCl pH8.5
グラジェント：0〜0.7M NaClで直線勾配グラジエントした後、1M NaClにステップワイズ（図４に点線で示す）
流速：３ml/min
カラム温度：室温（25℃）
検出器：フラクション毎にUV280nm吸収を計測。

結果を図４に示す。図４のクロマトグラムに示す各フラクションＡ〜Ｆをそれぞれ採取し、イオン交換水に対して透析を行うことで塩を除去した後に濃縮した。これらに精製ハチミツをキャリアとして添加して、シロップ状の被験試料Ａ〜Ｊを調製した。これを上記（３）（3-2）と同様に、３名の被験者にそれぞれ、黒豆種子濃縮抽出物を固形分換算で２４５ｍｇとなる割合で摂取してもらい、前述する方法に従って唾液分泌量の増加率を評価した。その結果、被験試料Ｊ（フラクションＪ）に唾液分泌促進作用が認められた。

（ii）疎水的相互作用カラムクロマトグラフィー
上記で唾液分泌促進作用が認められたフラクションＪに硫酸アンモニウムを添加して、４０％飽和硫酸アンモニウム水溶液を調製し、これを下記条件の疎水的相互作用カラムクロマトグラフィーに供した。

＜疎水的相互作用クロマトグラフィーの条件＞
カラム：20 cm×2.5 cm i.d.
固定相：Phenyl-TOYOPEARL 650M（東ソー製）
移動相：40％飽和硫酸アンモニウム/イオン交換水
グラジェント：硫酸アンモニウム濃度40％飽和から0％（イオン交換水）までの逆直線勾配グラジエント後、イオン交換水で通液した（その後、40%EtOHまでグラジエント）（図５に点線で示す）
流速：３ml/min
カラム温度：室温（25℃）
検出器：フラクション毎にUV280nm吸収を計測。

結果を図５に示す。図５のクロマトグラムに示す各フラクションJA〜JEをそれぞれ採取し、イオン交換水に対して透析を行うことで塩を除去した後に濃縮した。得られた各濃縮物に精製ハチミツをキャリアとして添加して、シロップ状の被験試料JA〜JEを調製した。これを上記（３）（3-2）と同様に、３名の被験者にそれぞれ、黒豆種子濃縮抽出物を固形分換算で２４５ｍｇとなる割合で摂取してもらい、前述する方法に従って唾液分泌量の増加率を評価した。

その結果、図６に示すように、被験試料JD（フラクションJD）に、理想的な唾液分泌促進作用があることが認められた。

（4-2）有効成分の同定
上記で唾液分泌促進作用が認められたフラクションJDを濃縮して、下記方法に従ってSDS-PAGEに供した。

SDS-PAGEは、ATTO社製プレキャストゲル(ゲル濃度15%)、トリス/トリシン緩衝液を用いて電圧20mA、2時間通電することによりスラブ電気泳動を行なった。分析試料は、フラクションJDにジチオスレイトール(DTT)含有サンプルバッファーを添加した後、沸騰水で５分間加熱処理し、次いで冷却して調製した。斯くして調製した分析試料を、分子量マーカー（タンパク質分子量マーカー低分子用、和光純薬製）と同時に電気泳動に供した。電気泳動後、クーマシーブリリアントブルー染色（CBB R-250使用）によりゲルを染色し、染色されたバンドの分子量（フラクションJDに含まれる蛋白質の分子量）を、分子量マーカーの泳動距離による検量線から求めた。

SDS-PAGEの結果を図７に示す。図７に示すように、8kDa付近にほぼ単一のバンドが認められた。これを、PDVF膜にブロッティングした後、Ｎ末端アミノ酸分析に供した。その結果、そのＮ末端アミノ酸配列は、DESSKPXXDQ（配列番号３）であった。このアミノ酸配列中、Xに関しては小さなプロリンピークが検出されたが、その他のアミノ酸は検出されなかったことから、システイン残基の可能性が高いと考えられた。かかるアミノ酸配列を指標としてBLASTを用い相同性検索を行なったところ、上記Ｎ末端アミノ酸配列は、Bowman-Birk Protease Inhibitor（「BBI」と略される。以下、単に「BBI」と表記）の成熟タンパク質のアミノ酸配列のＮ末端配列「DDESSKPCCDQ」（配列番号４）とよく類似していた。BBIは、トリプシン活性およびキモトリプシン活性を阻害する作用を有するセリンプロテアーゼ阻害剤として知られているタンパク質である（Krishnan,H.B., et al, Planta, 217(3), 523-427 (2003); Egyptian Journal of Biology, 2001,Vol.3, pp.164-173）。

ちなみに、BBIの成熟タンパク質のアミノ酸配列を配列番号１に、その前駆体のアミノ酸配列を配列番号２に示す。これからわかるように、BBIはシステイン残基を１４つ有しており、その結果、構造中に７箇所のジスルフィド結合が有している。また成熟タンパク質の理論的な分子量は約７.９ｋＤａ、等電点（ｐＩ）は４.５１である。

実験例３
（１）黒豆抽出物（BBI含有画分）の調製
水７０Ｌにマメ科植物（黒大豆：Glycine max）の種子（黒豆）１０ｋｇを投入して、室温下に一夜放置し、続いて煮沸を２時間行った。得られた熱水抽出物を固液分離し、回収した抽出液に濾過助剤及び珪藻土を配合して吸引濾過し、約５５Ｌの熱水抽出濾液を得た。得られた熱水抽出濾液５５Ｌ（ｐＨ５.８）に酵素・セルラーゼ（セルロシンAC40、力価：4,000units/g、エイチビィアイ製）を１０ｇ添加し、４０〜５５℃で２時間ゆっくり攪拌して酵素処理を行い、酵素処理液を得た。次いでこの酵素処理液を減圧下で濃縮して、黒豆の濃縮抽出物を２.５ｋｇ（水溶液固形分７０重量％）を得た。

斯くして調製した抽出物から1.78ｋｇをとり、実験例２（３）に記載するように、限外濾過膜装置（旭化成社製）に供して、分子量が6-13kDaの範囲にある画分（分画分子量6-13kDa）を採取することにより、前述するBBI（分子量約8kDa）を含有するフラクションを取得し、次いでこれを濃縮及び凍結乾燥し、14.0ｇの黒豆抽出物（BBI含有処理物）を得た（BBI 0.14g含有）。

（２）被験試料の調製
下記表３の処方に従って、被験試料を調製した。具体的には、まず水飴及び還元麦芽水飴を６０℃に加温し、ゆっくり攪拌させながら、上記で調製したBBI含有処理物、及び被験試料８についてはさらにＫＣｌを加えて、均一になるまで混合した。その後、香料を加え、BBI含有処理物を０.４５重量％または０.２５重量％の割合で含むシロップ状の組成物を調製した（被験試料７および８）。次いでこれを９０℃で２０分間殺菌し、室温まで冷却した。なお、これら被験試料の粘度は、ＢＬ型回転粘度計（東機産業(株)製）を用い、回転数１２rpmで２０℃にて測定した（実験例１参照）。

（３）唾液分泌促進効果の評価
（3-1）被験者の選定
口腔内に異物がなく、日常生活のリズムが同じような健常者（男性６名）を用い、ガーゼ（ピュア滅菌ガーゼM 7.5cm×7.5cm 玉川衛材（株）製）１枚を口に含み、正確に１秒間隔で２分間噛み続け、ガーゼの重量を測定した（サクソン法）。予め新品ガーゼの重量を測定しておき、その差を２分間における唾液分泌重量とし、唾液分泌の日内変動を観察した。この結果より、比較的近い日内変動を有する３名を選定し、これを下記実験の被験者とした。
（3-2）唾液分泌促進効果の評価
上記方法で選定した３名を被験者に、（２）で調製した被験試料７及び被験試料８をそれぞれ４ｇ摂取してもらい、唾液分泌促進効果を評価した。具体的には、まず各被験者の試験当日の非摂取条件での唾液量を測定する為、９時２５分に前述する方法（サクソン法）に従って２分間の唾液の重量(g)を測定した。その後、９時３０分に被験試料４ｇを摂取してもらい、その３０分後に唾液重量(g)を測定した。唾液重量の測定は、１０時３０分から１時間間隔で１８時３０分まで行った。なお、対照試験（コントロール）として、当該３名を対象として、別の日の９時３０分から１８時３０分にかけて１時間毎に唾液重量(g)を測定し（被験試料非摂取）、被験試料を摂取しない条件下での唾液分泌の日内変動を求めた。

被験試料７（―▲―）および被験試料８（―■―）を摂取した場合の唾液分泌の日内変動、非摂取の場合（コントロール）（―●―）の唾液分泌の日内変動を、図８に示す。

この結果より、黒豆のBBI含有抽出物を含有する被験試料を摂取することにより、唾液分泌量が増加し、かつその増加した状態が持続することが確認された。また、黒豆抽出物（BBI含有処理物）にカリウムを併用することで（被験試料８）、黒豆抽出物（BBI含有処理物）の添加量を半分に減らしても、その倍量の黒豆抽出物（BBI含有処理物）（被験試料７）とほぼ同様の効果があることが観察された。

以上のことから、黒豆抽出物に含まれるBBIに唾液分泌促進作用があること（BBIが唾液分泌促進作用の有効成分であること）、またこれにカリウムを併用することでその作用が増強されることが判明した。また実験例１の結果を考慮すると、BBIにカリウムを併用することで、BBIの唾液分泌促進作用に持続性が付与されると考えられる。

実験例４
（１）被験試料の調製
実験例３（１）で調製した黒豆抽出物（BBI含有処理物）を用いて、表４に示す処方に従って、錠剤（１錠0.3g）を調製した。これを被験試料９として、下記の実験を行った。

（２）唾液分泌促進効果の評価
（2-1）試験方法
被験者として健常者（男性58歳１名）を用いた。試験に先立ち、ガーゼ（ピュア滅菌ガーゼM 7.5cm×7.5cm 玉川衛材（株)）１枚を口に含み、正確に１秒間隔で２分間噛み続け、ガーゼの重量を測定した（サクソン法）。予め新品ガーゼの重量を測定しておき、その差を２分間における唾液分泌重量とし、唾液分泌の日内変動を観察した（n=1）。
（2-2）唾液分泌促進効果の評価
（１）で調製した被験試料９についての唾液分泌促進効果を評価した。

具体的には、上記被験者の試験当日のコントロール（平常時唾液量）を測定する為、９時２５分に前述する方法に従って２分間の唾液重量を測定した。その後、９時３０分に被験試料９（１錠、0.3ｇ）を噛まずに水と共に摂取してもらい、その３０分後に唾液重量を測定した。１０時３０分から１時間間隔で同様の試験を１８時３０分まで行った。尚、この試験を６日間継続して行った。

図９に、被験試料を毎日継続的に摂取した３日目（―◆―）及び６日目（―▲―）の唾液分泌量の日内変動、及び非摂取時（コントロール）（―●―）の唾液分泌量の日内変動を示す。

この結果よりわかるように、黒豆抽出物（BBI含有処理物）を含有する被験試料は、噛まずに経口摂取した場合でも、継続的に摂取することにより、口腔内でそのまま接触させた場合（例えば、実験例１〜３参照）と同様に、有意に唾液分泌促進効果を発揮することが確認された。

処方例１〜４
表５および６に記載する処方に従って、液状の唾液分泌促進剤（ドリンクタイプ：処方例１と２）および固形状の唾液分泌促進剤（チュアブルタイプ：処方例３、トローチタイプ：処方例３）を調製した。

（１）処方例１〜２（液状の唾液分泌促進剤）
表５に示す処方に従って、実験例１（１）で調製した黒豆濃縮抽出物（水溶性固形分70％）５７.２ｇ、Ｋ_３ＰＯ_４２.１ｇ、水９３９.７ｇを配合し、８０℃で加熱攪拌して溶解した後、香料１ｇを添加し、１２１℃、２０分間、オートクレーブ殺菌を行って粘度３mPa・ｓ、ｐＨ７.６の処方例１の液状唾液分泌促進剤を１ｋｇ調製した。これを５０ｍｌ容量になるように瓶に充填してドリンク剤を調製した。

また、処方例２の液状唾液分泌促進剤（ｐＨ６）は、上記のＫ_３ＰＯ_４に変えてＫＣｌを用いる以外は、表５の処方に従って、上記処方例１の液状唾液分泌促進剤と同様の方法にて調製した。これを５０ｍｌ容量になるように瓶に充填してドリンク剤を調製した。

（２）処方例３〜４（固形状の唾液分泌促進剤）
香料以外の原料を表６に記載する処方に従って混合し、流動層造粒機にて顆粒化した後、これに香料を加えて均一混合し、ロータリー打錠機（回転数20rpm）にて打錠した。斯くして硬度１０ｋｇ/ｃｍ^２のチュアブルタイプ（処方例３）、硬度１９ｋｇ/ｃｍ^２のトローチタイプ（処方例４）の２種類のタブレット(１粒０.９ｇ)を得ることができた。

なお、黒豆エキスＦＤパウダーは、次のように調製した。
まず黒豆濃縮抽出物（水溶性固形分20%）を調製し、その１４０ｋｇを０.８Torr以下で２４時間凍結乾燥し、ブロック状に粉砕した。その後３０meshの篩を通すことで、３０.５ｋｇの黒豆エキスＦＤパウダー（ＦＤパウダー30.5kg中にBBI 3.4g含有）を得た。

上記方法により調製した２タイプのタブレット（０．９ｇ）を経口摂取したところ、チュアブル１粒（０.９ｇ）は、唾液約１ｇで噛んで溶かすことができ、トローチ１粒(０.９ｇ)は、唾液約５ｇで舐めて溶かすことができた。このときの口腔内でのｐＨは、それぞれｐＨ６.６および７.１であった。

処方例５〜８唾液分泌促進剤（酸性飲料タイプ）
表７に記載する処方に従って、実験例１（１）で調製した黒豆濃縮抽出物（水溶性固形分70％）、果糖ぶどう糖液、クエン酸、および水（処方例６〜８については、さらに塩化カリウム）を配合し、８０℃で加熱攪拌して溶解した。その後、香料２ｇを添加し、９３℃達温にて殺菌を行いｐＨ３.１、Ｂｒｉｘ９.０の処方例５〜８の唾液分泌促進剤（酸性飲料タイプ）を１ｋｇ調製した。１回の摂取目安量は２００ｍｌとした。

処方例９〜１２唾液分泌促進剤（中性飲料タイプ）
表８に記載する処方に従って、実験例１（１）で調製した黒豆濃縮抽出物（水溶性固形分70％）、緑茶エキスパウダー、アスコルビン酸ナトリウム、および水（処方例１０〜１２については、さらに塩化カリウム）を配合し、８０℃で加熱攪拌して溶解した。その後、香料０．２５ｇを添加し、缶に充填し、１２１℃、２０分間、オートクレーブ殺菌を行いｐＨ６．８、Ｂｒｉｘ０．７の唾液分泌促進剤（中性飲料タイプ）を１ｋｇ調製した。１回の摂取量は２００ｍｌとした。

処方例１３〜１６唾液分泌促進剤（ゼリータイプ）
表９に記載する処方に従って、寒天１０ｇと水５００ｇを配合し、８０℃で加熱攪拌して溶解した後、実験例１（１）で調製した黒豆濃縮抽出物（水溶性固形分70％）、砂糖１５０ｇ、クエン酸２ｇ、香料２.５ｇ、および残りの水（処方例１４〜１６については、さらに塩化カリウム）を配合し、容器に充填後、８５℃３０分間にて殺菌を行い、ｐＨ３.８の唾液分泌促進剤（ゼリータイプ）を１ｋｇ調製した。１回の摂取量は１００ｇとした。

処方例１７〜２０唾液分泌促進剤（ガムタイプ）
表１０に記載する処方に従って、実験例３（１）で調製した黒豆抽出物（BBI含有処理物）とチューインガムベース２４ｇ、グラニュー糖、水飴１５ｇ、軟化剤５ｇ、クロロフィル０．１ｇ、香料０．１ｇ（処方例１８〜２０については、さらに塩化カリウム）を配合し、よく混練した後、成形して唾液分泌促進剤（板ガムタイプ）を１００ｇ調製した。１回の摂取は５ｇ(１枚)とした。

処方例２１〜２４唾液分泌促進剤（飴タイプ）
表１１に記載する処方に従って、実験例３（１）で調製した黒豆抽出物（BBI含有処理物）とグラニュー糖４５ｇ、酵素糖化水飴４３．６ｇ、水３０ｇを配合し、１９０℃まで煮詰める。１６０℃まで冷却し、香料０．１ｇ（処方例２２〜２４については、さらに塩化カリウム）を配合し、混合後、成形して唾液分泌促進剤（飴タイプ）を１００ｇ調製した。尚、１回の摂取量は５ｇ(１粒)とした。

処方例２５〜２８液状の唾液分泌促進剤（洗口液）
表１２に記載する処方に従って、実験例３（１）で調製した黒豆抽出物（BBI含有処理物）、ｌ−メントール０．１ｇ、ハッカ油０．１ｇ、ポリグリセリン脂肪酸エステル４ｇ、エタノール４５ｇ、サッカリンナトリウム０．０１ｇ、適量のｐＨ調整剤（処方例２６〜２８については、さらに塩化カリウム）を配合し、精製水にて１００ｇに調製した。尚、１回の使用量は１０ｍｌとした。

処方例２９〜３２液状の唾液分泌促進剤（口腔内用ジェル剤）
表１３に記載する処方に従って、実験例３（１）で調製した黒豆抽出物（BBI含有処理物）、グリセリン２０ｇ、ソルビトール２５ｇ、キシリトール１０ｇ、カルボキシメチルセルロ−ス１ｇ、カラギーナン０．３ｇ、香料０．１ｇ、メチルパラベン０．１ｇ、適量のｐＨ調整剤（処方例３０〜３２については、さらに塩化カリウム）を配合し、精製水にて１００ｇに調製した。１回の摂取量は１ｇとした。

処方例３３〜３６液状の唾液分泌促進剤（口腔内用スプレー剤）
表１４に記載する処方に従って、実験例３（１）で調製した黒豆抽出物（BBI含有処理物）、グリセリン３５ｇ、ソルビトール７．５ｇ、香料０．１ｇ、メチルパラベン０．１ｇ、適量のｐＨ調整剤を配合（処方例３４〜３６については、さらに塩化カリウム）し、精製水にて１００ｇに調製した。尚、１回の摂取量は２ｇとした(１回あたり１ｇ量を２回噴霧)。

処方例３７〜４０液状の唾液分泌促進剤（練り歯磨き）
表１５に記載する処方に従って、実験例３（１）で調製した黒豆抽出物（BBI含有処理物）、炭酸カルシウム３５ｇ、ソルビトール２０ｇ、カルボキシメチルセルロース１．０ｇ、ラウリル硫酸ナトリウム１．０ｇ、サッカリン０．１ｇ、香料１．０ｇ、アラントイン０．０１ｇ、グリチルリチン酸ジカリウム０．０１ｇ（処方例３８〜４０については、さらに塩化カリウム）を配合し、精製水にて１００ｇに調製した。１回の使用量は１ｇとした。

本発明の唾液分泌促進剤（被験試料１および２）を摂取したときの唾液分泌量の日内変動を、非摂取のときの日内変動（コントロール）と対比した図である。縦軸は、３０分間採取した唾液量（g）であり、これから唾液分泌量の経時的変化がわかる。図２Ａは被験試料３（黒豆種皮エキス）摂取後の唾液分泌量の増加率を、図２Ｂは被験試料４（黒豆種子エキス）摂取後の唾液分泌量の増加率を、および図２Ｃはキャリア（精製ハチミツ）摂取後の唾液分泌量の増加率を、それぞれ示す。横軸は被験試料摂取前の唾液量（ml）（平常時唾液量（ml））を、縦軸は被験試料摂取による唾液分泌量の増加率を示す。当該増加率は、上記平常時唾液量（ml）を１とした場合の、被験試料摂取後の唾液量（ml）の相対比として示す。図中、実線は、各結果に対して最小二乗法にて一次回帰直線を求めた結果を示している。（実験例２（２））。被験試料６（分画分子量6-13kDa）摂取後の唾液分泌量の増加率を示す。横軸は被験試料摂取前の唾液量（ml）（平常時唾液量（ml））を、縦軸は被験試料摂取による唾液分泌量の増加率を示す。当該増加率は、上記平常時唾液量（ml）を１とした場合の、被験試料摂取後の唾液量（ml）の相対比として示す。図中、実線は、各結果に対して最小二乗法にて一次回帰直線を求めた結果を示している。（実験例２（３））。実験例２（４）(4-1)(i)で行った陰イオン交換カラムクロマトグラフィーで得られたクロマトグラムを示す。実験例２（４）(4-1)(ii)で行った疎水的相互作用カラムクロマトグラフィーで得られたクロマトグラムを示す。被験試料JD摂取後の唾液分泌量の増加率を示す。横軸は被験試料摂取前の唾液量（ml）（平常時唾液量（ml））を、縦軸は被験試料摂取による唾液分泌量の増加率を示す。当該増加率は、上記平常時唾液量（ml）を１とした場合の、被験試料摂取後の唾液量（ml）の相対比として示す。図中、実線は、各結果に対して最小二乗法にて一次回帰直線を求めた結果を示している。（実験例４（４）（4-2））。被験試料JDをSDS-PAGEにかけた結果を示す（実験例４（４）（4-2））。被験試料７（―▲―）および被験試料８（―■―）を摂取した場合の唾液分泌の日内変動、非摂取の場合（コントロール）（―●―）の唾液分泌の日内変動を示す（実験例３）。被験試料９を毎日継続的に摂取した３日目（―◆―）及び６日目（―▲―）の唾液分泌量の日内変動、及び非摂取時（コントロール）（―●―）の唾液分泌量の日内変動を示す（実験例４）。

Claims

Bowman-Birk Protease Inhibitorを有効成分とする、唾液分泌が低下した被験者または唾液分泌の低下を感じる被験者に対して適用される唾液分泌促進剤。
Bowman-Birk Protease Inhibitorが、下記の（ａ）または（ｂ）に示されるタンパク質である、請求項１に記載する唾液分泌促進剤：
（ａ）配列番号１に記載されるアミノ酸配列からなるタンパク質、
（ｂ）配列番号１において、Ｎ末端及びＣ末端のいずれか少なくとも１方のアミノ酸残基が最大で１０個欠失しており、且つトリプシン阻害活性、キモトリプシン阻害活性、および唾液分泌促進作用を有するタンパク質。
Bowman-Birk Protease Inhibitorを含む植物抽出物を含有する、請求項１または２記載の唾液分泌促進剤。
上記植物抽出物が、分子量8kDaを中心とした6〜13kDaの範囲にある画分を含む植物抽出物である、請求項３記載の唾液分泌促進剤。
上記植物抽出物がマメ科に属する植物の種子に由来するものである、請求項３または４に記載する唾液分泌促進剤。
さらにカリウムを含有する請求項１乃至５のいずれかに記載する唾液分泌促進剤。
口腔用または経口投与用の形態を有する請求項１乃至６のいずれかに記載する唾液分泌促進剤。
シロップ剤、ドライシロップ剤、フィルム剤、ジェル剤、噴霧剤、チュアブル錠、トローチ剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、顆粒剤、散剤、または練り歯磨きの形態を有する請求項１乃至７のいずれかに記載する唾液分泌促進剤。
１日当たり、Bowman-Birk Protease Inhibitorが０．００３６〜０．１８ｍｇの割合で投与若しくは摂取されるものである、請求項１乃至８のいずれかに記載する唾液分泌促進剤。
下記の（１）および（３）の工程を有する、請求項１または２に記載する唾液分泌促進剤の調製方法：
（１）Bowman-Birk Protease Inhibitorを含有する植物から、Bowman-Birk Protease Inhibitorを含有する画分を採取する工程、および
（３）上記で得られたBowman-Birk Protease Inhibitor含有物を口腔用または経口投与用の形態に加工する工程。
下記の（１）〜（３）の工程を有する、請求項６に記載する唾液分泌促進剤の調製方法：
（１）Bowman-Birk Protease Inhibitorを含有する植物から、Bowman-Birk Protease Inhibitorを含有する画分を採取する工程、
（２）工程（１）で得られたBowman-Birk Protease Inhibitor含有物にカリウムを配合して、Bowman-Birk Protease Inhibitorとカリウムを含有する組成物を調製する工程、および
（３）上記で得られた組成物を口腔用または経口投与用の形態に加工する工程。
Bowman-Birk Protease Inhibitorを含有する画分が、分子量8kDaを中心とした6〜13kDaの範囲にある画分である請求項１０または１１に記載する方法。
上記植物がマメ科に属する植物の種子である、請求項１０乃至１２のいずれかに記載する調製方法。
Bowman-Birk Protease InhibitorまたはBowman-Birk Protease Inhibitorを含む植物抽出物の、唾液分泌が低下した被験者または唾液分泌の低下を感じる被験者に対して適用される唾液分泌促進剤を製造するための使用。