JP5864097B2 - Production method of beer-like beverage - Google Patents
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Description
本発明は、S−フラクションを添加するビール様飲料およびその製造方法に関する。 The present invention relates to a beer-like beverage to which S-fraction is added and a method for producing the same.
微生物の中には、ビール中で生育することができるものが存在し、それらはビール混濁菌と呼ばれる。例えば、ペクチネイタス・フリシンジェンシスおよびペクチネイタス・セレビシフィラスもビール混濁菌であり、ビールを濁らせ、硫黄臭を発し、ビール品質を著しく低下させる場合がある。 Some microorganisms can grow in beer and are called beer turbid bacteria. For example, Pectinate frisgensis and Pectinate cerevisiaphylus are also beer-contaminating bacteria that can turbid beer, produce a sulfur odor, and significantly reduce beer quality.
ビールには爽快な苦味と香りを付与するためにホップが使用されるが、ホップ中の成分であるα酸の酸化成分(当該酸化成分は、以下、「S−フラクション」という場合もある)は、微生物の増殖を抑制できることも知られている。 Hops are used to give refreshing bitterness and aroma to beer, but the oxidation component of α acid, which is a component in hops (the oxidation component may be referred to as “S-fraction” hereinafter), It is also known that the growth of microorganisms can be suppressed.
しかしながらこれまでに、このS−フラクションが、ビール混濁菌、例えばペクチネイタス属菌に対して抗菌活性を有することについてはまったく知られておらず、また飲料中のS−フラクションの含有量と、ペクチネイタス属菌との増殖関係も、まったく知られていなかった(例えば、特許文献1、特許文献2、および特許文献3参照)。
However, until now, it has not been known at all that this S-fraction has antibacterial activity against beer turbid bacteria, such as Pectinata, and the content of S-fraction in beverages and the genus Pectinata The growth relationship with bacteria was not known at all (for example, see
本発明は、微生物汚染のリスクが低いビール様飲料およびその製造方法を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to provide a beer-like beverage having a low risk of microbial contamination and a method for producing the same.
本発明者らは、特定量のS−フラクションが製造飲料に存在するようにビール様飲料を製造すると、製造飲料においてペクチネイタス属菌の増殖が抑制されることを見出した。本発明はこの知見に基づくものである。 The inventors have found that when a beer-like beverage is produced such that a specific amount of S-fraction is present in the produced beverage, the growth of Pectinata is suppressed in the produced beverage. The present invention is based on this finding.
すなわち、本発明によれば以下の発明が提供される。
(1)ビール様飲料の製造方法であって、α酸の酸化成分(S−フラクション)の添加工程を含んでなり、かつ、製造飲料においてペクチネイタス属菌の増殖が抑制された製造方法。
(2)ビール様飲料がビール様発酵アルコール飲料である、(1)に記載の方法。
(3)ペクチネイタス属菌がペクチネイタス・フリシンジェンシスまたはペクチネイタス・セレビシフィラスである、(1)または(2)に記載の方法。
(4)製造された飲料中のS−フラクションの量が、飲料を下記分析条件:
<高速液体クロマトグラフィ分析条件>
カラム:C18オクタデシルカラム(粒径5μm×内径4.0mm×カラム長250mm)
移動相組成:蒸留水27.0%(v/v)・メタノール72.0%(v/v)・リン酸1.0%(v/v)
移動相流速:毎分1ml(流速一定)
検出波長:270nm
HPLC分析用試料中に含まれるβフェニルカルコンの量:内部標準物質βフェニルカルコン12mgと、リン酸メタノール溶液(リン酸:メタノール=40ml:400ml)440mlとの混合溶液の1ml中に含まれるβフェニルカルコンの量
により高速液体クロマトグラフィ分析に付した場合、βフェニルカルコンのピーク面積に対するS−フラクションのピーク面積の比(S−フラクション内標比)が0.79超2.00未満となるようにS−フラクションを添加する、(1)〜(3)のいずれか一項に記載の方法。
(5)S−フラクションの添加工程が、
発酵前液の加温開始前および/または加温開始後煮沸前に、ホップを添加した後、沸点まで昇温させる工程、および/または
発酵前液の煮沸中にホップを添加する工程
を含む、(1)〜(4)のいずれか一項に記載の方法。
(6)ペクチネイタス属菌の増殖を抑制する量のS−フラクションを含む、ビール様飲料。
(7)ビール様飲料がビール様発酵アルコール飲料であり、
ペクチネイタス属菌がペクチネイタス・フリシンジェンシスまたはペクチネイタス・セレビシフィラスであり、
製造された飲料中のS−フラクションの量が、飲料を(4)に記載の分析条件により高速液体クロマトグラフィ分析に付した場合、S−フラクション内標比が0.79超2.00未満となる量である、(6)に記載の飲料。
(8)ビール様飲料にS−フラクションを添加することを特徴とする、ペクチネイタス属菌の増殖抑制方法。
That is, according to the present invention, the following inventions are provided.
(1) A method for producing a beer-like beverage, comprising a step of adding an α-acid oxidizing component (S-fraction), and in which the growth of Pectinatus spp.
(2) The method according to (1), wherein the beer-like beverage is a beer-like fermented alcoholic beverage.
(3) The method according to (1) or (2), wherein the Pectinatus spp. Is Pectinatus frisengensis or Pectinatus cerevisiae.
(4) The amount of S-fraction in the produced beverage is determined according to the following analysis conditions:
<High performance liquid chromatography analysis conditions>
Column: C18 octadecyl column (particle size 5 μm × inner diameter 4.0 mm × column length 250 mm)
Mobile phase composition: distilled water 27.0% (v / v), methanol 72.0% (v / v), phosphoric acid 1.0% (v / v)
Mobile phase flow rate: 1 ml / min (constant flow rate)
Detection wavelength: 270 nm
The amount of β-phenylchalcone contained in the sample for HPLC analysis: β-phenylchalcone contained in 1 ml of a mixed solution of 12 mg of internal standard substance β-phenylchalcone and 440 ml of a phosphoric acid methanol solution (phosphoric acid: methanol = 40 ml: 400 ml) When subjected to high performance liquid chromatography analysis according to the amount of chalcone, the ratio of the peak area of S-fraction to the peak area of β-phenylchalcone (S-fraction internal standard ratio) is more than 0.79 and less than 2.00. -The method according to any one of (1) to (3), wherein a fraction is added.
(5) The step of adding S-fraction includes
Including the step of heating to the boiling point after adding hops before starting the heating of the pre-fermentation liquid and / or before boiling after starting the heating, and / or adding the hops during boiling of the pre-fermentation liquid, The method according to any one of (1) to (4).
(6) A beer-like beverage containing an amount of S-fraction that inhibits the growth of Pectinata spp.
(7) The beer-like beverage is a beer-like fermented alcoholic beverage,
Pectinata spp. Is Pectinata frisengensis or Pectinata cerevisiaphys,
When the amount of S-fraction in the produced beverage is subjected to high performance liquid chromatography analysis under the analysis conditions described in (4), the S-fraction internal standard ratio is more than 0.79 and less than 2.00. The beverage according to (6), which is an amount.
(8) A method for inhibiting the growth of Pectinatus spp., Comprising adding S-fraction to a beer-like beverage.
本発明の製造方法は、微生物汚染のリスクが低いビール様飲料を提供できる点で有利である。 The production method of the present invention is advantageous in that it can provide a beer-like beverage with a low risk of microbial contamination.
ビール様飲料の製造方法
本発明によれば、ビール様飲料の製造方法において、ペクチネイタス属菌の増殖を抑制する量のS−フラクションを添加することによりビール様飲料中のペクチネイタス属菌の増殖を抑制することが可能となる。すなわち、本発明によれば、ビール様飲料の製造方法であって、α酸の酸化成分の添加工程を含んでなり、かつ、製造飲料においてペクチネイタス属菌の増殖が抑制された製造方法が提供される。
Method for producing beer-like beverage According to the present invention, in the method for producing beer-like beverage, the growth of pectinata in a beer-like beverage is suppressed by adding an amount of S-fraction that suppresses the growth of pectinata. It becomes possible to do. That is, according to the present invention, there is provided a method for producing a beer-like beverage, the method comprising the step of adding an α-acid oxidizing component, and the growth of Pectinatus spp. Being suppressed in the produced beverage. The
本発明において「ビール様飲料」とは、通常にビールを製造した場合、すなわち、酵母等による発酵に基づいてビールを製造した場合に得られるビール特有の味わい、香りを有する飲料をいい、例えば、ビール、発泡酒、リキュール等の発酵麦芽飲料や、完全無アルコール麦芽飲料等の非発酵麦芽飲料が挙げられる。また、ビール様飲料である限り、麦芽飲料に限定されるものではない。 In the present invention, “beer-like beverage” refers to a beverage having a taste and aroma peculiar to beer obtained when beer is usually produced, that is, when beer is produced based on fermentation by yeast or the like. Examples include fermented malt beverages such as beer, happoshu, and liqueurs, and non-fermented malt beverages such as completely alcohol-free malt beverages. Moreover, as long as it is a beer-like drink, it is not limited to a malt drink.
本発明の製造方法では、製造飲料においてペクチネイタス属菌の増殖が抑制されるようにS−フラクションを添加することができる。例えば、S−フラクションは、ホップを加えて、煮沸等することにより飲料中のS−フラクションの量を増加させて、ペクチネイタス属菌の増殖を抑制する量のS−フラクションを飲料中に含ませてもよい。ここで、S−フラクションとは、ホップに含まれるα酸の酸化成分であり、具体的には図1の高速液体クロマトグラフィ分析チャート中に示されたイソα酸ピーク以前に検出される全てのピークに対応する成分を意味する(「醸造物の成分」(財団法人日本醸造協会:平成11年12月10日発行)、p252〜258参照)。 In the production method of the present invention, S-fraction can be added so that the growth of Pectinatus spp. For example, the S-fraction is added with hops, boiled, etc. to increase the amount of S-fraction in the beverage, and the beverage contains an amount of S-fraction that inhibits the growth of Pectinata spp. Also good. Here, the S-fraction is an oxidation component of α acid contained in hops, specifically, all peaks detected before the iso α acid peak shown in the high performance liquid chromatography analysis chart of FIG. (Refer to “Ingredients of Brewing” (Japan Brewing Association: issued on Dec. 10, 1999), p252-258).
このS−フラクションの取得源は特に限定されるものではなく、市販のもの、合成して得られたもの、あるいは天然物から単離・精製されたものいずれを用いてもよい。S−フラクションは、例えばα酸を含有するホップから調製することができる。また、S−フラクションはα酸の酸化成分を多く含む後熟ホップから調製してもよい。ホップや後熟ホップからのS−フラクションの調製方法は、特に限定されるものではないが、例えば、ホップや後熟ホップを水に浸漬させた後、遠心し、遠心後の上清をS−フラクション抽出液としてもよい。ここで、後熟ホップとは、原料煮沸工程時に用いるホップを、収穫後、望ましくない酸化臭成分や樹脂様臭などの生成を有意に抑制、制限させた条件下において熟成させ、ホップに含まれる香気成分の生成のための酸化反応を有意に促進させて、ホップ中に含まれる香気成分を増加させたホップであり、具体的には、収穫後乾燥させたホップ毬花を、収穫後10〜20℃の中低温下で、3ヶ月以上熟成したホップである。 The acquisition source of this S-fraction is not particularly limited, and any commercially available product, one obtained by synthesis, or one isolated and purified from a natural product may be used. The S-fraction can be prepared, for example, from hops containing alpha acids. Further, the S-fraction may be prepared from a post-ripening hop containing a large amount of an α-acid oxidizing component. The method for preparing S-fraction from hops and post-ripening hops is not particularly limited. For example, hops or post-ripening hops are immersed in water, centrifuged, and the supernatant after centrifugation is subjected to S- A fraction extract may be used. Here, post-ripening hops are included in hops used in the raw material boiling step after ripening under the conditions that significantly suppress and limit the production of undesirable oxidative odor components and resin-like odors after harvesting. It is a hop that significantly promotes the oxidation reaction for the generation of fragrance components and increases the fragrance component contained in the hops. It is a hop that has been aged for 3 months or more at a low temperature of 20 ° C.
本発明の製造方法におけるS−フラクションの添加時期は、製造飲料にペクチネイタス属菌の増殖が抑制される程度の量のS−フラクションが含まれる限り、ビール様飲料の製造工程のいずれの時点で添加してもよい。 The addition timing of the S-fraction in the production method of the present invention is added at any point in the production process of the beer-like beverage as long as the production beverage contains an amount of S-fraction that prevents the growth of Pectinatus spp. May be.
本発明の製造方法におけるS−フラクションの添加態様は、製造飲料にペクチネイタス属菌の増殖が抑制される程度の量のS−フラクションが含まれる限り特に限定されるものではなく、S−フラクションを発酵前液や発酵液にそのまま添加しても、S−フラクションの前駆物質であるα酸やα酸を含有するホップを発酵前液に添加してもよい。すなわち、α酸やホップをビール様飲料の製造工程のいずれかの時点で添加し、α酸やホップに含まれるα酸の酸化を引き起こし、結果的にビール様飲料中にS−フラクションが存在する状態としてもよい。 The addition aspect of the S-fraction in the production method of the present invention is not particularly limited as long as the produced beverage contains an amount of S-fraction that can inhibit the growth of Pectinata sp. Even if it adds to a pre-solution or a fermentation liquid as it is, you may add the hop containing alpha acid and alpha acid which are the precursors of S-fraction to a pre-fermentation liquid. That is, alpha acid or hops are added at any point in the production process of beer-like beverages, causing the oxidation of alpha acids or alpha acids contained in hops, resulting in the presence of S-fraction in the beer-like beverages. It is good also as a state.
本発明において「ペクチネイタス属菌の増殖が抑制される」とはペクチネイタス属菌を植菌したときに一定期間経過後に初期植菌濃度が減少するような場合を意味する。例えば、実施例に記載したように、1.0×104CFU/ml(初期植菌濃度)レベルのペクチネイタス属菌を植菌し、14日間30℃で処置した後、生菌数を測定し、生菌数が初期植菌濃度を下回ったかどうかを指標に「ペクチネイタス属菌の増殖が抑制される」か否かを評価することができる。 In the present invention, “inhibition of growth of Pectinatus spp.” Means a case where the initial inoculation concentration decreases after a certain period of time when Pectinatus spp. For example, as described in the examples, 1.0 × 10 4 CFU / ml (initial inoculation concentration) level of Pectinatus spp. Was inoculated and treated at 30 ° C. for 14 days, and then the viable count was measured. Whether or not “the growth of Pectinatus spp. Is suppressed” can be evaluated using as an index whether or not the number of viable bacteria has fallen below the initial inoculation concentration.
本発明の製造方法により製造される飲料が、例えば、発酵麦芽飲料である場合には、少なくとも水、麦芽、およびホップを含んでなる発酵前液を発酵させることにより製造することができる。すなわち、麦芽等の醸造原料から調製された麦汁(発酵前液)に発酵用ビール酵母を添加して発酵を行い、所望により発酵液を低温にて貯蔵した後、ろ過工程により酵母を除去することにより、本発明による発酵麦芽飲料を製造することができる。ここで、発酵前液の調製に当たっては、後述のようにペクチネイタス属菌の増殖がさらに抑制されるような量のS−フラクションが発酵飲料に含まれるようにホップを添加してもよい。 When the beverage produced by the production method of the present invention is, for example, a fermented malt beverage, it can be produced by fermenting a pre-fermentation solution comprising at least water, malt, and hops. That is, fermentation beer yeast is added to wort (pre-fermentation liquid) prepared from brewing raw materials such as malt, and the fermentation liquid is stored at a low temperature if desired, and then the yeast is removed by a filtration step. Thus, the fermented malt beverage according to the present invention can be produced. Here, when preparing the pre-fermentation solution, hops may be added so that the fermented beverage contains S-fraction in such an amount that the growth of Pectinatus is further suppressed as described later.
上記製造手順において麦汁の作製は常法に従って行うことができる。例えば、醸造原料と水の混合物を糖化し、濾過して、麦汁を得、その麦汁を煮沸し、煮沸した麦汁を冷却することにより麦汁を調製することができる。ホップは、麦汁を煮沸する前、麦汁を煮沸した後、あるいは麦汁を煮沸中に添加することができる。 In the above production procedure, wort can be produced according to a conventional method. For example, wort can be prepared by saccharifying a mixture of brewing raw materials and water, filtering to obtain wort, boiling the wort, and cooling the boiled wort. Hops can be added before boiling the wort, after boiling the wort, or during the boiling of the wort.
本発明の製造方法が発酵麦芽飲料の製造方法である場合には、ホップ、麦芽以外に、米、とうもろこし、こうりゃん、馬鈴薯、でんぷん、糖類(例えば、液糖)等の酒税法で定める副原料や、タンパク質分解物や酵母エキス等の窒素源、香料、色素、起泡・泡持ち向上剤、水質調整剤、発酵助成剤等のその他の添加物を醸造原料として使用することができる。また、未発芽の麦類(例えば、未発芽大麦(エキス化したものを含む)、未発芽小麦(エキス化したものを含む))を醸造原料として使用してもよい。得られた発酵麦芽飲料は、(i)減圧若しくは常圧で蒸留してアルコールおよび低沸点成分を除去するか、あるいは(ii)逆浸透(RO)膜にてアルコールおよび低分子成分を除去することによって、非アルコール発酵麦芽飲料とすることもできる。 When the production method of the present invention is a method for producing a fermented malt beverage, in addition to hops and malt, auxiliary materials specified by liquor tax law such as rice, corn, corn, potato, starch, saccharides (eg, liquid sugar), etc. In addition, other sources such as nitrogen sources such as protein degradation products and yeast extract, fragrances, pigments, foaming / foaming improvers, water quality modifiers, fermentation aids, and the like can be used as brewing materials. Further, ungerminated barley (for example, ungerminated barley (including an extracted one), ungerminated wheat (including an extracted one)) may be used as a brewing raw material. The obtained fermented malt beverage should be (i) distilled under reduced pressure or atmospheric pressure to remove alcohol and low boiling components, or (ii) remove alcohol and low molecular components with a reverse osmosis (RO) membrane. Can also be used as a non-alcohol fermented malt beverage.
本発明の製造方法により製造される飲料が麦や麦芽を使用しないビール様発酵飲料である場合には、発酵麦芽飲料の製造手順に準じて、少なくとも水およびホップを含んでなる発酵前液を発酵させることにより製造することができる。発酵前液には、水、ホップの他に炭素源(例えば、液糖などの糖類)、窒素源(例えば、タンパク質分解物や酵母エキスなどのアミノ酸供給源)を添加することができ、必要に応じて、香料、色素、起泡・泡持ち向上剤、水質調整剤、発酵助成剤等のその他の添加物等を添加することができる。得られたビール様発酵飲料は、(i)減圧若しくは常圧で蒸留してアルコールおよび低沸点成分を除去するか、あるいは(ii)逆浸透(RO)膜にてアルコールおよび低分子成分を除去することによって、非アルコール・ビール様発酵飲料とすることもできる。ここで、発酵前液の調製に当たっては、後述のようにペクチネイタス属菌の増殖がさらに抑制されるような量のS−フラクションが発酵飲料に含まれるようにホップを添加してもよい。 When the beverage produced by the production method of the present invention is a beer-like fermented beverage that does not use wheat or malt, ferment a pre-fermentation solution comprising at least water and hops according to the production procedure of the fermented malt beverage. Can be manufactured. In addition to water and hops, carbon sources (for example, sugars such as liquid sugar) and nitrogen sources (for example, amino acid sources such as protein degradation products and yeast extract) can be added to the pre-fermentation solution. Accordingly, other additives such as fragrances, pigments, foaming / foaming improvers, water quality modifiers, fermentation aids, and the like can be added. The resulting beer-like fermented beverage is either (i) distilled at reduced pressure or atmospheric pressure to remove alcohol and low boiling components, or (ii) removed alcohol and low molecular components with a reverse osmosis (RO) membrane. Depending on the situation, a non-alcohol beer-like fermented beverage can be obtained. Here, when preparing the pre-fermentation solution, hops may be added so that the fermented beverage contains S-fraction in such an amount that the growth of Pectinatus is further suppressed as described later.
本発明の好ましい態様によれば、S−フラクションの添加工程が、
発酵前液の加温開始前および/または加温開始後煮沸前にホップを添加した後、沸点まで昇温させる工程、および/または
発酵前液の煮沸中にホップを添加する工程
を含む方法である。S−フラクションの添加工程がこのような工程を含むことにより、飲料中のS−フラクションの量を増加させることができ、その結果として、ペクチネイタス属菌の増殖をさらに抑制することが可能となる。ここで、「加温」とは麦汁を煮沸するために昇温させること、昇温させた温度を維持することの両方を意味する。
According to a preferred embodiment of the present invention, the step of adding S-fraction comprises
In a method comprising the steps of adding hops before starting the heating of the pre-fermentation liquid and / or before starting boiling and before boiling, and / or adding hops during boiling of the pre-fermented liquid is there. By including such a step in the step of adding S-fraction, the amount of S-fraction in the beverage can be increased, and as a result, the growth of Pectinatus spp. Can be further suppressed. Here, “warming” means both raising the temperature to boil wort and maintaining the elevated temperature.
発酵前液の煮沸中に添加するホップは後熟ホップであることが好ましい。また、発酵前液の加温開始前および/または加温開始後煮沸前に添加するホップは後熟ホップであってもよい。 The hop added during boiling of the pre-fermentation solution is preferably a post-ripening hop. Moreover, the post-ripening hop may be sufficient as the hop added before the heating start of a pre-fermentation liquid and / or before boiling after a heating start.
本発明のより好ましい態様によれば、前記添加工程が発酵前液の加温開始前および加温開始後煮沸前のいずれの時点においてもホップを添加した後、沸点まで昇温させる工程を含むことが好ましい。 According to a more preferred aspect of the present invention, the adding step includes a step of raising the temperature to the boiling point after adding hops at any time before starting the heating of the pre-fermentation solution and before starting the heating and before boiling. Is preferred.
本発明のより好ましい別の態様によれば、前記添加工程が発酵前液の煮沸中に非後熟ホップおよび後熟ホップを添加する工程を含んでなることが好ましい。 According to another more preferable aspect of the present invention, it is preferable that the adding step includes a step of adding non-post-ripening hops and post-ripening hops during boiling of the pre-fermentation solution.
本発明の好ましい態様によれば、ビール様飲料はビール様発酵アルコール飲料である。発酵アルコール飲料は、一般的にパス工程などの滅菌工程がないため、本発明の方法が特に有用である。ここで、発酵アルコール飲料とは酵母により発酵して得られた飲料を意味し、アルコールは発酵により得られても良いし、さらにアルコールを添加して作成しても良い。ビール様発酵アルコール飲料としては、例えば、ビール、発泡酒、雑酒、リキュール類、スピリッツ類、および低アルコール麦芽発酵飲料が挙げられる。 According to a preferred embodiment of the present invention, the beer-like beverage is a beer-like fermented alcoholic beverage. Since fermented alcoholic beverages generally do not have a sterilization step such as a pass step, the method of the present invention is particularly useful. Here, the fermented alcoholic beverage means a beverage obtained by fermentation with yeast, and the alcohol may be obtained by fermentation, or may be prepared by adding alcohol. Examples of beer-like fermented alcoholic beverages include beer, sparkling wine, miscellaneous sake, liqueurs, spirits, and low alcohol malt fermented beverages.
本発明の方法により増殖が抑制されるペクチネイタス属菌は、本発明の効果を奏する限り特に限定されないが、好ましくはペクチネイタス・フリシンジェンシスまたはペクチネイタス・セレビシフィラスであり、より好ましくはペクチネイタス・フリシンジェンシスである。本発明の製造方法により製造された飲料はこれらの菌の増殖を抑制することができる。 The Pectinatus spp. Whose growth is suppressed by the method of the present invention is not particularly limited as long as the effects of the present invention are exhibited. Sith. The beverage produced by the production method of the present invention can suppress the growth of these bacteria.
本発明の方法により製造されるビール様飲料中のS−フラクションの含有量は、公知のいずれの方法により測定してもよいが、好ましくは高速液体クロマトグラフィ(HPLC)分析により測定することができる。 The content of S-fraction in the beer-like beverage produced by the method of the present invention may be measured by any known method, but preferably can be measured by high performance liquid chromatography (HPLC) analysis.
ビール様飲料中のS−フラクションの含有量を測定するための高速液体クロマトグラフィの分析条件としては、例えば、以下の条件を用いて行うことができるが、高速液体クロマトグラフィに使用されるカラムは逆相カラムであれば特に限定されないが、C18オクタデシルカラム(粒径5μm×内径4.0mm×カラム長250mm)が好ましい。C18オクタデシルカラムとしては、例えば、Nucleosil 100−5C18(粒径5μm×内径4.0mm×カラム長250mm)(ジーエルサイエンス株式会社製)が挙げられる。 As an analysis condition of the high performance liquid chromatography for measuring the content of S-fraction in the beer-like beverage, for example, the following conditions can be used, but the column used for the high performance liquid chromatography is in reverse phase. The column is not particularly limited, but a C18 octadecyl column (particle size 5 μm × inner diameter 4.0 mm × column length 250 mm) is preferable. Examples of the C18 octadecyl column include Nucleosil 100-5C18 (particle diameter 5 μm × inner diameter 4.0 mm × column length 250 mm) (manufactured by GL Sciences Inc.).
<高速液体クロマトグラフィ分析条件>
カラム:C18オクタデシルカラム(粒径5μm×内径4.0mm×カラム長250mm)
移動相組成:蒸留水27.0%(v/v)・メタノール72.0%(v/v)・リン酸1.0%(v/v)
移動相流速:毎分1ml(流速一定)
検出波長:270nm
HPLC分析用試料中に含まれるβフェニルカルコンの量:内部標準物質βフェニルカルコン12mgと、リン酸メタノール溶液(リン酸:メタノール=40ml:400ml)440mlとの混合溶液の1ml中に含まれるβフェニルカルコンの量
※HPLC分析用試料は、下記HPLC分析用試料調製条件に記載の方法により、調製された試料である。
<High performance liquid chromatography analysis conditions>
Column: C18 octadecyl column (particle size 5 μm × inner diameter 4.0 mm × column length 250 mm)
Mobile phase composition: distilled water 27.0% (v / v), methanol 72.0% (v / v), phosphoric acid 1.0% (v / v)
Mobile phase flow rate: 1 ml / min (constant flow rate)
Detection wavelength: 270 nm
The amount of β-phenylchalcone contained in the sample for HPLC analysis: β-phenylchalcone contained in 1 ml of a mixed solution of 12 mg of internal standard substance β-phenylchalcone and 440 ml of a phosphoric acid methanol solution (phosphoric acid: methanol = 40 ml: 400 ml) Amount of chalcone * The sample for HPLC analysis is a sample prepared by the method described in the following sample preparation conditions for HPLC analysis.
本発明では、上記高速液体クロマトグラフィ条件により分析を実施し、イソα酸ピークより早く検出される全てのピーク面積の総和を、内部標準物質のピーク面積で除したピーク面積比(S−フラクション内標比)に基づいて、S−フラクションを添加することができる。S−フラクション内標比は、以下の式により表される:
S−フラクション内標比=(S−フラクションのピーク面積)/(内部標準物質のピーク面積)・・・(I)
In the present invention, analysis is performed under the above-mentioned high performance liquid chromatography conditions, and a peak area ratio (S-fraction internal standard) obtained by dividing the sum of all peak areas detected earlier than the iso-α acid peak by the peak area of the internal standard substance. S-fraction can be added based on the ratio). The S-fraction internal ratio is represented by the following formula:
S-fraction internal standard ratio = (S-fraction peak area) / (peak area of internal standard) (I)
高速液体クロマトグラフィ分析の際に用いられる内部標準物質は、特に限定されないが、βフェニルカルコンを用いることが好ましい。HPLC分析用試料は、例えば、以下のように調製することができる。
<HPLC分析用試料調製条件>
S−フラクションを添加した試料10mlに、1mlの3N塩酸を加えた後、20mlのイソオクタンを加え、振とう、静置する。この溶液は水溶層と、有機溶媒層との二層に分離し、有機溶媒層から10mlを採取する。採取した溶液を、窒素ガス噴霧下で完全に乾燥させ固体化する。これに内部標準物質βフェニルカルコン12mgと、リン酸メタノール溶液(リン酸:メタノール=40ml:400ml)440mlとの混合溶液を1ml加え、溶解したものをHPLC分析用試料とする。
The internal standard used in the high performance liquid chromatography analysis is not particularly limited, but β phenyl chalcone is preferably used. The sample for HPLC analysis can be prepared as follows, for example.
<Sample preparation conditions for HPLC analysis>
1 ml of 3N hydrochloric acid is added to 10 ml of the sample to which the S-fraction has been added, 20 ml of isooctane is added, and the mixture is shaken and allowed to stand. This solution is separated into two layers, an aqueous layer and an organic solvent layer, and 10 ml is collected from the organic solvent layer. The collected solution is completely dried and solidified under a nitrogen gas spray. To this, 1 ml of a mixed solution of 12 mg of internal standard substance β-phenylchalcone and 440 ml of a phosphoric acid methanol solution (phosphoric acid: methanol = 40 ml: 400 ml) is added, and the dissolved one is used as a sample for HPLC analysis.
製造された飲料中のS−フラクションの量が、飲料を上記高速液体クロマトグラフィ分析条件により高速液体クロマトグラフィ分析に付した場合に、S−フラクション内標比が0.79超、好ましくは0.96以上となるようにS−フラクションを添加することができる。S−フラクション内標比を0.79超とすることによりペクチネイタス属菌の増殖を抑制することができ、S−フラクション内標比を0.96以上とすることによりペクチネイタス属菌の増殖を完全に抑制することができる。 When the beverage is subjected to high performance liquid chromatography analysis under the above high performance liquid chromatography analysis conditions, the S-fraction internal standard ratio is more than 0.79, preferably 0.96 or more. S-fraction can be added so that By setting the S-fraction internal standard ratio to more than 0.79, the growth of Pectinatus spp. Can be suppressed, and by setting the S-fraction internal standard ratio to 0.96 or more, the Pectinatus spp. Can be suppressed.
製造された飲料中のS−フラクションの量が、飲料を上記高速液体クロマトグラフィ分析条件により高速液体クロマトグラフィ分析に付した場合に、S−フラクション内標比が2.00未満、好ましくは1.86未満となるようにS−フラクションを添加することができる。S−フラクション内標比を2.00未満とすることにより、製造される飲料の過度な渋みを抑えることができ、好ましい飲料を提供することができる。 When the beverage is subjected to high performance liquid chromatography analysis under the above high performance liquid chromatography analysis conditions, the S-fraction internal standard ratio is less than 2.00, preferably less than 1.86. S-fraction can be added so that By making S-fraction internal standard ratio less than 2.00, the excessive astringency of the drink manufactured can be suppressed and a preferable drink can be provided.
製造された飲料中のS−フラクションの量が、飲料を上記高速液体クロマトグラフィ分析条件により高速液体クロマトグラフィ分析に付した場合に、S−フラクション内標比が0.79超2.00未満、好ましくは0.79超1.86未満、より好ましくは0.96以上1.86未満となるようにS−フラクションを添加することができる。S−フラクション内標比を0.79超2.00未満とすることにより、製造される飲料の過度な渋みを抑えることができ、またペクチネイタス属菌の増殖を抑制することができる。 The amount of S-fraction in the produced beverage is such that when the beverage is subjected to high performance liquid chromatography analysis under the above high performance liquid chromatography analysis conditions, the S-fraction internal standard ratio is more than 0.79 and less than 2.00, preferably S-fraction can be added so as to be more than 0.79 and less than 1.86, more preferably 0.96 or more and less than 1.86. By making S-fraction internal standard ratio more than 0.79 and less than 2.00, the excessive astringency of the drink manufactured can be suppressed and the proliferation of Pectinata spp. Can be suppressed.
ビール様飲料
本発明の好ましい態様によれば、ペクチネイタス属菌の増殖を抑制する量のS−フラクションを含むビール様飲料が提供される。
Beer-like beverage According to a preferred embodiment of the present invention, a beer-like beverage is provided that contains an amount of S-fraction that inhibits the growth of Pectinatus spp.
本発明のより好ましい態様によれば、ビール様飲料はビール様発酵アルコール飲料である。また、本発明の別の好ましい態様によれば、ペクチネイタス属菌はペクチネイタス・フリシンジェンシスまたはペクチネイタス・セレビシフィラスであり、さらに好ましい態様によれば、ペクチネイタス・フリシンジェンシスである。本発明のビール様飲料によれば、これらの菌の増殖を顕著に抑制することができる。 According to a more preferred embodiment of the present invention, the beer-like beverage is a beer-like fermented alcoholic beverage. Moreover, according to another preferable aspect of the present invention, the genus Pectinatus is Pectinatus fricensiensis or Pectinatus cerevisiae, and according to a more preferable aspect, it is Pectinatus fricensiensis. According to the beer-like beverage of the present invention, the growth of these bacteria can be remarkably suppressed.
本発明の別の好ましい態様によれば、ビール様飲料がビール様発酵アルコール飲料であり、ペクチネイタス属菌がペクチネイタス・フリシンジェンシスまたはペクチネイタス・セレビシフィラスであり、製造された飲料中のS−フラクションの量が、上記高速液体クロマトグラフィ分析条件により高速液体クロマトグラフィ分析に付した場合、S−フラクション内標比が0.79超2.00未満となる量である飲料が提供される。 According to another preferred embodiment of the present invention, the beer-like beverage is a beer-like fermented alcoholic beverage, the Pectinata spp. When the amount is subjected to high performance liquid chromatography analysis under the above-mentioned high performance liquid chromatography analysis conditions, a beverage having an S-fraction internal standard ratio of more than 0.79 and less than 2.00 is provided.
また、本発明のさらに好ましい態様によれば、製造された飲料中のS−フラクションの量が、飲料を上記高速液体クロマトグラフィ分析条件により高速液体クロマトグラフィ分析に付した場合、S−フラクション内標比が0.79超、好ましくは0.96以上となる量であるビール様飲料が提供される。S−フラクション内標比を0.79超とすることによりペクチネイタス属菌の増殖を抑制することができ、S−フラクション内標比を0.96以上とすることによりペクチネイタス属菌の増殖を完全に抑制することができる。 According to a further preferred aspect of the present invention, when the amount of S-fraction in the produced beverage is subjected to high performance liquid chromatography analysis under the above high performance liquid chromatography analysis conditions, the S-fraction internal standard is A beer-like beverage is provided in an amount greater than 0.79, preferably greater than or equal to 0.96. By setting the S-fraction internal standard ratio to more than 0.79, the growth of Pectinatus spp. Can be suppressed, and by setting the S-fraction internal standard ratio to 0.96 or more, the Pectinatus spp. Can be suppressed.
また、本発明のさらに好ましい別の態様によれば、製造された飲料中のS−フラクションの量が、飲料を上記高速液体クロマトグラフィ分析条件により高速液体クロマトグラフィ分析に付した場合、S−フラクション内標比が2.00未満、好ましくは1.86未満となる量であるビール様飲料が提供される。S−フラクション内標比を2.00未満とすることにより、製造される飲料の過度な渋みを抑えることができ、好ましい飲料を提供することができる。 According to still another preferred aspect of the present invention, when the amount of S-fraction in the produced beverage is subjected to high performance liquid chromatography analysis under the above high performance liquid chromatography analysis conditions, A beer-like beverage is provided in which the ratio is less than 2.00, preferably less than 1.86. By making S-fraction internal standard ratio less than 2.00, the excessive astringency of the drink manufactured can be suppressed and a preferable drink can be provided.
また、本発明のさらに好ましい別の態様によれば、製造された飲料中のS−フラクションの量が、飲料を上記高速液体クロマトグラフィ分析条件により高速液体クロマトグラフィ分析に付した場合、S−フラクション内標比が0.79超2.00未満、好ましくは0.79超1.86未満、より好ましくは0.96以上1.86未満となる量であるビール様飲料が提供される。S−フラクション内標比を0.79超2.00未満とすることにより、製造される飲料の過度な渋みを抑えることができ、またペクチネイタス属菌の増殖を抑制することができる。 According to still another preferred aspect of the present invention, when the amount of S-fraction in the produced beverage is subjected to high performance liquid chromatography analysis under the above high performance liquid chromatography analysis conditions, A beer-like beverage is provided in which the ratio is greater than 0.79 and less than 2.00, preferably greater than 0.79 and less than 1.86, more preferably between 0.96 and less than 1.86. By making S-fraction internal standard ratio more than 0.79 and less than 2.00, the excessive astringency of the drink manufactured can be suppressed and the proliferation of Pectinata spp. Can be suppressed.
本発明の好ましい態様によれば、ビール様飲料にS−フラクションを添加することを特徴とする、ペクチネイタス属菌の増殖抑制方法が提供される。 According to a preferred aspect of the present invention, there is provided a method for inhibiting the growth of Pectinatus spp., Characterized in that S-fraction is added to a beer-like beverage.
本発明の別の好ましい態様によれば、ビール様発酵アルコール飲料にS−フラクションを添加することを特徴とする、ペクチネイタス属菌の増殖抑制方法が提供される。 According to another preferred embodiment of the present invention, there is provided a method for inhibiting the growth of Pectinatus spp., Characterized in that S-fraction is added to a beer-like fermented alcoholic beverage.
本発明の別の好ましい態様によれば、製造された飲料中のS−フラクションの量が、上記高速液体クロマトグラフィ分析条件により高速液体クロマトグラフィ分析に付した場合、S−フラクション内標比が0.79超2.00未満、好ましくは0.79超1.86未満、より好ましくは0.96以上1.86未満となる量である、ペクチネイタス属菌の増殖抑制方法が提供される。 According to another preferred embodiment of the present invention, when the amount of S-fraction in the produced beverage is subjected to high performance liquid chromatography analysis under the above high performance liquid chromatography analysis conditions, the S-fraction internal ratio is 0.79. There is provided a method for inhibiting the growth of Pectinatus spp., Which is an amount of less than 2.00, preferably more than 0.79 and less than 1.86, more preferably 0.96 or more and less than 1.86.
以下の例に基づいて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。 The present invention will be specifically described based on the following examples, but the present invention is not limited to these examples.
植菌試験用S−フラクション抽出液の調製
S−フラクションは、後熟させたペレットホップ(CSA)を、水に24時間、4℃で浸漬させ、抽出した。浸漬後、6000rpm、15分間遠心分離し、その上清をS−フラクション抽出液とした。
Preparation of S-fraction extract for inoculation test The S-fraction was extracted by soaking post-ripened pellet hops (CSA) in water at 4 ° C. for 24 hours. After soaking, the mixture was centrifuged at 6000 rpm for 15 minutes, and the supernatant was used as an S-fraction extract.
S−フラクション抽出液添加による植菌試験
市販品のビールにホップから抽出した上記S−フラクション抽出液を添加し、ペクチネイタス・フリシンジェンシス(入手先:ドイツ微生物寄託機関(Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH(DSM)) No.20760)の増殖抑制効果を得る成分値の範囲を探索した。各抽出液の添加水準は、下記に示した表1の通りであった。
Inoculation test with addition of S-fraction extract The above-mentioned S-fraction extract extracted from hops was added to commercial beer, and Pectinatus frisengensis (source: Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH (DSM)) No. 20760) was searched for a range of component values for obtaining the growth inhibitory effect. The addition level of each extract was as shown in Table 1 below.
さらに、1.0×104CFU/mlでペクチネイタス・フリシンジェンシスを植菌し、14日間30℃で培養後、生菌数を確認した。初期植菌濃度(1.0×104CFU/ml)よりも、生菌数が減少していれば増殖抑制効果を有すると判断した。試験の結果を下記表1に示す。S−フラクション内標比が0.96の場合には、生菌数は0となり、完全にペクチネイタス・フリシンジェンシスの増殖を抑制したことが示された。 Further, Pectinatus frisengensis was inoculated at 1.0 × 10 4 CFU / ml and cultured at 30 ° C. for 14 days, and the viable cell count was confirmed. If the number of viable bacteria decreased from the initial inoculation concentration (1.0 × 10 4 CFU / ml), it was judged to have a growth inhibitory effect. The test results are shown in Table 1 below. When the S-fraction internal standard ratio was 0.96, the viable cell count was 0, indicating that the growth of Pectinatus frisengensis was completely suppressed.
HPLC分析のための試料の調製
S−フラクションを添加した各試料10mlに、1mlの3N塩酸を加えた後、20mlのイソオクタンを加え、振とう、静置した。この溶液は水溶層と、有機溶媒層との二層に分離し、有機溶媒層から10mlを採取した。採取した溶液を、窒素ガス噴霧下で完全に乾燥させ固体化させた。これに内部標準物質βフェニルカルコン12mgと、リン酸メタノール溶液(リン酸:メタノール=40ml:400ml)440mlとの混合溶液を1ml加え、溶解したものをHPLC分析用試料とした。
Preparation of samples for HPLC analysis To 10 ml of each sample to which S-fraction was added, 1 ml of 3N hydrochloric acid was added, 20 ml of isooctane was added, and the mixture was shaken and allowed to stand. This solution was separated into two layers, an aqueous layer and an organic solvent layer, and 10 ml was collected from the organic solvent layer. The collected solution was completely dried and solidified under a nitrogen gas spray. To this was added 1 ml of a mixed solution of 12 mg of internal standard substance β-phenylchalcone and 440 ml of a phosphoric acid methanol solution (phosphoric acid: methanol = 40 ml: 400 ml), and the dissolved one was used as a sample for HPLC analysis.
HPLC分析によるS−フラクション内標比の算出
HPLCの分析条件は、以下の通りである。
<HPLC分析条件>
カラム:Nucleosil 100−5C18(粒径5μm×内径4.0mm×カラム長250mm)(ジーエルサイエンス株式会社製)
サンプル注入量:50μl
移動相A組成:蒸留水27.0%(v/v)・メタノール72.0%(v/v)・リン酸1.0%(v/v)
移動相B組成:メタノール99.0%(v/v)・リン酸1.0%(v/v)
移動相流速:1ml/min.(流速一定)
検出波長:270nm
HPLC分析用試料中に含まれるβフェニルカルコンの量:内部標準物質βフェニルカルコン12mgと、リン酸メタノール溶液(リン酸:メタノール=40ml:400ml)440mlとの混合溶液の1ml中に含まれるβフェニルカルコンの量
※HPLC分析用試料は、上記HPLC分析用試料調製条件に記載の方法により、調製された試料である。
Calculation of S-fraction internal standard ratio by HPLC analysis The HPLC analysis conditions are as follows.
<HPLC analysis conditions>
Column: Nucleosil 100-5C18 (particle size 5 μm × inner diameter 4.0 mm × column length 250 mm) (manufactured by GL Sciences Inc.)
Sample injection volume: 50 μl
Mobile phase A composition: distilled water 27.0% (v / v), methanol 72.0% (v / v), phosphoric acid 1.0% (v / v)
Mobile phase B composition: methanol 99.0% (v / v), phosphoric acid 1.0% (v / v)
Mobile phase flow rate: 1 ml / min. (Constant flow rate)
Detection wavelength: 270 nm
The amount of β-phenylchalcone contained in the sample for HPLC analysis: β-phenylchalcone contained in 1 ml of a mixed solution of 12 mg of internal standard substance β-phenylchalcone and 440 ml of a phosphoric acid methanol solution (phosphoric acid: methanol = 40 ml: 400 ml) Amount of chalcone * The sample for HPLC analysis is a sample prepared by the method described in the sample preparation conditions for HPLC analysis.
グラジエントプログラム
HPLC用カラム(Nucleosil 100−5C18(粒径5μm×内径4.0mm×カラム長250mm)を用いて、蒸留水27%(v/v)、メタノール72%(v/v)、およびリン酸1%(v/v)からなる移動相Aを、毎分1mlの一定流速で270nmの検出波長の高速液体クロマトグラフィ分析を行った場合において、イソα酸ピーク以前に検出される全てのピークの面積を総和し、「S−フラクション」と表記した(図1参照)。図1においては、イソα酸ピークのリテンションタイム(RT)は3.0〜4.0分であった。イソα酸ピークのRTは±0.5分の差は許容される。
Using HPLC column (Nucleosil 100-5C18 (particle size 5 μm × inner diameter 4.0 mm × column length 250 mm), distilled water 27% (v / v), methanol 72% (v / v), and
また内部標準物質βフェニルカルコンも、同様にピーク面積の総和として求めた。S−フラクション内標比は、上記式(I)に基づき算出した。各添加量でのS−フラクション内標比は、上記表1に示す。 Similarly, the internal standard substance β-phenylchalcone was determined as the sum of peak areas. The S-fraction internal standard ratio was calculated based on the above formula (I). The internal ratio of S-fraction at each addition amount is shown in Table 1 above.
試験醸造品でのS−フラクション増量の検証
a)後熟ホップを煮沸中に添加して、試験醸造品を作成した。その結果、当該醸造品にてペクチネイタス・フリシンジェンシスの増殖抑制可能な範囲までS−フラクションを増量できることが明らかとなった(表3参照)。
Verification of S-fraction increase in test brewed products a) After ripening hops were added during boiling to create test brewed products. As a result, it was revealed that the brewed product can increase the S-fraction to the extent that the growth of Pectinatus frisengensis can be suppressed (see Table 3).
b)非後熟ホップ添加タイミングを下記表4に記載のとおり変更し、それ以外は全て上記a)の試験区Bと同一の条件で試醸製品を作成した。その結果、加温開始前の麦汁もしくは加温開始後煮沸状態(沸点)前の麦汁にホップを添加した後、煮沸状態まで昇温させることで、S−フラクションをペクチネイタス・フリシンジェンシスの増量抑制可能な範囲まで増量できることが明らかとなった(下記表4参照)。 b) The timing of addition of non-after-ripening hops was changed as shown in Table 4 below, and all other samples were made under the same conditions as in test section B of a) above. As a result, hops were added to the wort before the start of heating or the wort before the boiling state (boiling point) after the start of heating, and then the temperature was raised to the boiling state. It was revealed that the amount could be increased to a range where the increase in the amount could be suppressed (see Table 4 below).
市販品の分析結果
市販品のS−フラクションの内標比を上記のHPLC条件と同様の条件で測定し、S−フラクションの内標比を算出した。その結果を下記表5に示した。測定した市販品の中には、S−フラクションの内標比が0.79超のものは存在しなかった。
Claims (5)
<高速液体クロマトグラフィ分析条件>
カラム:C18オクタデシルカラム(粒径5μm×内径4.0mm×カラム長250mm)
移動相組成:蒸留水27.0%(v/v)・メタノール72.0%(v/v)・リン酸1.0%(v/v)
移動相流速:毎分1ml(流速一定)
検出波長:270nm
HPLC分析用試料中に含まれるβフェニルカルコンの量:内部標準物質βフェニルカルコン12mgと、リン酸メタノール溶液(リン酸:メタノール=40ml:400ml)440mlとの混合溶液の1ml中に含まれるβフェニルカルコンの量
により高速液体クロマトグラフィ分析に付した場合、βフェニルカルコンのピーク面積に対するS−フラクションのピーク面積の比(S−フラクション内標比)が0.96以上2.00未満となるようにS−フラクションを添加する、製造方法。 A method for producing a beer-like beverage, the method comprising the step of adding an oxidizing component (S-fraction) of α acid, wherein the growth of Pectinatus spp. The amount of S-fraction in the beverage is determined according to the following analysis conditions:
<High performance liquid chromatography analysis conditions>
Column: C18 octadecyl column (particle size 5 μm × inner diameter 4.0 mm × column length 250 mm)
Mobile phase composition: distilled water 27.0% (v / v), methanol 72.0% (v / v), phosphoric acid 1.0% (v / v)
Mobile phase flow rate: 1 ml / min (constant flow rate)
Detection wavelength: 270 nm
The amount of β-phenylchalcone contained in the sample for HPLC analysis: β-phenylchalcone contained in 1 ml of a mixed solution of 12 mg of internal standard substance β-phenylchalcone and 440 ml of a phosphoric acid methanol solution (phosphoric acid: methanol = 40 ml: 400 ml) When subjected to high performance liquid chromatography analysis according to the amount of chalcone, the ratio of the peak area of S-fraction to the peak area of β-phenylchalcone (S-fraction internal standard ratio) is 0.96 or more and less than 2.00. -A production method in which fractions are added.
発酵前液の加温開始前および/または加温開始後煮沸前に、ホップを添加した後、沸点まで昇温させる工程、および/または
発酵前液の煮沸中にホップを添加する工程
を含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。 The S-fraction addition step is
Including the step of heating to the boiling point after adding hops before starting the heating of the pre-fermentation liquid and / or before boiling after starting the heating, and / or adding the hops during boiling of the pre-fermentation liquid, The method as described in any one of Claims 1-3.
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