JP6033889B2

JP6033889B2 - 腎機能の判定方法

Info

Publication number: JP6033889B2
Application number: JP2014556961A
Authority: JP
Inventors: ヘットヴァー，シュテファン; フライブルード，ヤン・ウィレム; ダヒンデン，ピウス; シュトイブル，ドミニク; ロース，マルセル
Original assignee: ニューロチューン・アクチエンゲゼルシャフト
Priority date: 2012-02-25
Filing date: 2013-02-22
Publication date: 2016-11-30
Anticipated expiration: 2033-02-22
Also published as: EP2631657A1; US20150031057A1; WO2013124073A1; WO2013124072A1; EP2817634A1; JP2015508890A

Description

本発明は、特別なマーカーを使用した腎機能の判定方法に関する。

血清クレアチニンおよび尿素は、腎臓機能をモニターするための最も広く使用されるバイオマーカーである（ＰａｒｉｋｈおよびＤｅｖａｒａｊａｎ、２００８；Ｄｅｖａｒａｊａｎ２００７）。これらは数十年にわたって使用されており、大多数の研究において腎臓機能を評価するために適用されているが、適用は限定されており、特に急性腎障害では感受性および特異性が不十分で、筋肉量、肝機能および薬理作用物質などの複数のパラメータによって影響を受ける（ＰａｒｉｋｈおよびＤｅｖａｒａｊａｎ、２００８；Ｄｅｖａｒａｊａｎ２００７）。したがって、シスタチンｃ、ヒト好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）、インターロイキン−１８（ＩＬ−１８）および腎障害分子１（ＫＩＭ−１）などの新たなバイオマーカーが評価されている（ＰａｒｉｋｈおよびＤｅｖａｒａｊａｎ、２００８；Ｄｅｖａｒａｊａｎ２００７；Ｂｅｌｃｈｅｒ他、２０１１；ＣｒｕｚおよびＧｏｈ、２００７）。しかし、今までのところ、シスタチンｃ測定値が日常的な診断として一部定着しているだけである。

本発明の目的は、特に日常的な診断および／または腎機能のモニタリングで使用することができる信頼できる方法を提供することである。

本発明者等は、驚くべきことに、プロテオグリカンであるアグリンの特別な断片、いわゆる酵素ニューロトリプシンによるアグリンの切断によって得られるＣ末端断片は、腎機能の判定が必要な関連のある診断の適用およびスクリーニングの適用において、信頼できるバイオマーカーとして使用することができることを発見した。

アグリンは、分子量４００〜６００ｋＤａの大きなヘパランプロテオグリカンである（データベースアクセッション番号ＮＰ＿９４０９７８）。タンパク質の核は、約２０００個のアミノ酸からなり、その質量は約２２５ｋＤａである。９個のＫ（クニッツ型）ドメイン、２個のＬＥ（ラミニン−ＥＧＦ様）ドメイン、１個のＳＥＡ（精子タンパク質、エンテロキナーゼおよびアグリン）ドメイン、４個のＥＧ（上皮成長因子様）ドメインおよび３個のＬＧ（ラミニン球状）ドメインから構成されたマルチドメインタンパク質である（ＢｅｚａｋｏｖａおよびＲｕｅｇｇ、２００３）。

アグリンは、いくつかのスプライスバリアントで存在しており、Ｎ末端ＮｔＡ（Ｎ末端アグリン）ドメインを含有する分泌タンパク質として発現することができ、これはアグリンの最も豊富な形態であり、運動神経細胞において発現する主要な形態である。これは神経細胞の細胞体で産生され、軸索に輸送され、運動神経の軸索末端からＮＭＪのシナプス間隙に放出される（ＢｅｚａｋｏｖａおよびＲｕｅｇｇ、２００３）。そこでＬＲＰ４（低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質４）のアゴニストとして作用し、基底層の成分となることもできる（Ｋｉｍ他、２００８）。ＣＮＳ（中枢神経系）では、ほとんどのアグリンは、Ｎ末端での別のスプライシングによってＮ末端ＮｔＡドメインが欠如したＩＩ型膜貫通タンパク質として発現する（ＢｅｚａｋｏｖａおよびＲｕｅｇｇ、２００３）。神経組織および他の組織の中でも、腎臓においてアグリンは強く発現し、糸球体基底膜（ＧＢＭ）の形成に大いに寄与し（Ｇｒｏｆｆｅｎ他、１９９８ａ；Ｇｒｏｆｆｅｎ他１９９８ｂ、Ｍｉｎｅｒ他、２０１１）、有足細胞に結合することを可能にしている。これらの細胞は、糸球体の一部で、血液から低分子および小タンパク質を濾過する細胞器官である。糸球体は、有窓型内皮細胞を有する毛細血管およびメサンギウム細胞から構成される。メサンギウム細胞は、毛細血管と糸球体の間にある変形した平滑筋細胞である。これらの細胞の目的は、血流を調節すること、ならびに糸球体基底膜、プロスタグランジンおよびサイトカインを形成する細胞外マトリクスを分泌することである。有足細胞は、多数の足突起（小足）によって大きな細胞表面を作って毛細血管を囲んでいる。これらの小足は、ネフリンを発現し、ネフリンは血流とボーマン嚢内の原尿との間の濾過バリアとなることができる膜結合タンパク質である（Ｇｅｏｒｇｅ、２０１２）。この濾過バリアの特徴は、大きなタンパク質または負に荷電したタンパク質は透過することはできず、血流中に残存することである。低分子量タンパク質または代謝物は透過することができ、原尿中に移行する。これらの物質の一部は、ネフロン内に再循環されるか、または尿細管系の細胞によって分解されるか、または尿中に残存する（Ｈａｕｓｍａｎｎ他、２０１２；Ｖａｌｌｏｎ、２０１１）。

アグリンは、アグリンの活性の制御において重要な役割を担うニューロトリプシンと呼ばれる酵素によって分解される。現在のところ、アグリンはニューロトリプシンの唯一の知られている標的である。ニューロトリプシン（Ｓｔｅｐｈａｎ他、２００８）は、アルファ部位およびベータ部位と呼ばれる２つの異なる部位でアグリンを切断する。

アルファ部位は、ＳＥＡドメインからＮ末端に位置し、ベータ部位はアグリンのＬＧ３ドメインの前に位置する。アルファ部位の切断によって、４〜１２％ビス−トリスＳＤＳゲル中で約１３０ｋＤａに移動する約１１０ｋＤａのＣ末端アグリン断片が生成する。ベータ部位の切断によって、ゲル中で約２２ｋＤａに移動するＣ末端ＬＧ３ドメインが遊離し（Ｒｅｉｆ他、２００７）、これはＣＡＦとも呼ばれる。ヒトアグリンのＣ末端部分には、２つの別のスプライシング部位ｙおよびｚがある。ｙ部位には、０個、４個、１７個または２１（４＋１７）個のアミノ酸の挿入があってもよく、ｚ部位には、０個、８個、１１個または１９（８＋１１）個のアミノ酸の挿入があってもよい。アグリンのニューロトリプシンによる切断によって、原則的に２つの異なるアグリン断片が生成し得る。アグリンＣＡＦに加えて、アグリンＣ１１０も血中で検出することができるアグリン断片である。さらに、アグリンＣ１１０のベータ部位での切断後に得られる、ＣＡＦを含まない残りの断片（約９０ｋＤａ）も血中に存在することを予測することができる。

この断片はまた、ｙ位およびｚ位の特定の挿入の存在に応じて、特に神経組織または筋肉組織において異なる機能を有し得る（ＢｅｚａｋｏｖａおよびＲｕｅｇｇ、２００３）。ニューロトリプシン切断によって得られるアグリン断片を含有するＣＡＦのリストを以下の表１に挙げる。

循環するＣＡＦおよびアグリンＣ１１０断片は、ヒト血液中で検出可能である（Ｈｅｔｔｗｅｒ他、２０１３）。以下に使用する場合、全ＣＡＦ値という用語は、ＣＡＦ（２２ｋＤａ）の測定値とアグリンＣ１１０の測定値とを足し合わせた値を意味する。

ＣＡＦは糸球体の濾過バリアを貫通するのに十分小さいので、腎臓機能の変化はヒトにおけるＣＡＦ血清レベルの変化と関連する可能性がある。今までのところ、ＣＡＦが腎機能の新たなマーカーとして研究されたことはない。

従来の血清腎機能パラメータは、操作手法によって除去されてしまうので、血液透析または血液濾過治療を必要とする急性腎不全の場合での使用には限界がある。したがって、この場合、腎臓機能の改善または悪化をモニターするために使用することはできない。本出願人らがこの出願において指摘したように、ＣＡＦは、今までのところ、血液透析によって影響を受けない、腎臓機能を記録する最初の腎臓バイオマーカーである。

以下の通り、結果および図は、特にＣＡＦを示しているが、アグリンＣ１１０も腎機能の有望な新たなバイオマーカーである。この新たなマーカーのレベルは、腎臓機能（糸球体濾過率）と強く関連しており、慢性腎臓疾患の病期と強く関連している。正常範囲を上回るＣＡＦ値または全ＣＡＦ値は、腎機能障害を示している。ＣＡＦは、腎臓移植後にＤＧＦを早期検出するための新たな手段として役立つ可能性がある。さらに重要な側面は、ＣＡＦ（２２ｋＤａ）レベルは血液透析中安定しており、したがって、ＣＡＦは継続的に透析を受けている患者または臓器移植後の患者の腎臓機能の有用なマーカーであることである。

表面上は健康なスイス人の血液ドナー（ｎ＝２１０）のＣＡＦ値を示した図である。表面上は健康なスイス人の血液ドナー（ｎ＝２１０）の全ＣＡＦ値を示した図である。慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）病期０〜５（ＣＡＦおよび全ＣＡＦの正常範囲を枠で示した）に応じたＣＡＦ値を示した図である。慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）病期０〜５（ＣＡＦおよび全ＣＡＦの正常範囲を枠で示した）に応じた全ＣＡＦ値を示した図である。慢性腎臓疾患（ＣＫＤ）病期０〜５（ＣＡＦおよび全ＣＡＦの正常範囲を枠で示した）に応じたＮＧＡＬ値を示した図である。透析前後のＣＡＦレベルを示した図である。腎臓移植後のＣＡＦ、全ＣＡＦおよびクレアチニンレベルの経時変化を示した図である。ＣＡＦおよび糸球体濾過率（ｅＧＦＲ、ＭＤＲＤ）を示した図である。

［実施例１：ＣＡＦおよび全ＣＡＦ測定のためのサンドイッチＥｌｉｓａ］
ｉ）マイクロタイタープレート
コーティング緩衝液（リン酸カリウム緩衝液１２ｍＭ、ｐＨ７．４〜ｐＨ８．２；ＮａＣｌ１３７ｍＭ；ＫＣｌ２．７ｍＭ）に溶かした、ＥＰ１１０００８９８で開示された抗体２６４Ｅ１２Ｂ８、２６４Ｂ１２Ａ８（内部での名称）または同じ優先権を主張する同時係属中のＰＣＴ出願で開示された７Ｈ６、４Ａ７もしくは８Ｇ７の０．５μｇ／ｍｌ溶液で、１ウェル当たり１２５μｌでコーティングしたマイクロタイタープレート（ＭａｘｉＳｏｒｐ）を使用する。

ｉｉ）試料調製
アッセイのために、希釈していない血清試料を３７℃で１０分間解凍する。試料を混合し、１４０００×ｇで２分間遠心する。１枚のＥＬＩＳＡプレート用の試料を調製するために、試料インキュベーション緩衝液（リン酸カリウム緩衝液５０ｍＭ、ｐＨ７．２〜８．２；ＮａＣｌ１３７ｍＭ；ＫＣｌ２．７ｍＭ；ＨＳＡ５ｍｇ／ｍｌ；グリセロール０〜２０％；（ＮＨ４）２Ｓ０４０〜５０％および／またはＰＥＧ６０００１０〜３０％；Ｔｗｅｅｎ２００．２〜１％）５０μｌをタンパク質ＬｏＢｉｎｄディープウェルプレートのウェルに添加する。全ＣＡＦを測定するためには、ＰＥＧ６０００を試料調製緩衝液に添加しなかった。その後、血清試料５０μｌを同じウェルに添加し、ピペッティングで５〜７回出し入れすることによってインキュベーション緩衝液と混合する。さらに、標準物質溶液５０μｌをプレートのウェルのいくつかに添加し、試料と同じ方法で処理する。標準物質の調製は以下に説明する。

ＬｏＢｉｎｄプレートは、接着性カバーホイルで厳重に密封し、水浴中で５６℃で正確に３０分間インキュベートする。プレートは水面に浮かぶので、この段階では振盪は望ましくない。インキュベーション後、沈殿が生成し、沈殿をペレットにするために、プレートを室温で３０００×ｇで５分間遠心する。予めコーティングしたＥＬＩＳＡプレート（ＭＴＰ）のウェルに、試料希釈緩衝液（リン酸カリウム緩衝液５０ｍＭｐＨ７．２〜８．２；ＮａＣｌ１３７ｍＭ；ＫＣｌ２．７ｍＭ）９０μｌをピペットで入れることによって、透明な上清を試料希釈緩衝液で１０倍に希釈する。ＬｏＢｉｎｄディープウェルプレートの透明な上清１０μｌを予めコーティングしたＥＬＩＳＡプレートに注意深く移す（ペレットを乱さない）。試料は、ピペッティングによって５回から７回出し入れすることによって混合する。次に、ＭＴＰは接着性カバーホイルで厳重に覆い、室温で（１５〜２５℃）１〜１６時間（または一晩）インキュベートする。

ｉｉｉ）標準物質調製
ＣＡＦタンパク質標準物質溶液組換えヒトアグリンＣ１１０（ｙ部位およびｚ部位に挿入を含まない）溶液の１０００倍希釈は、１０倍連続希釈を作製することによって調製する。溶液は、試料希釈緩衝液（リン酸カリウム緩衝液５０ｍＭｐＨ７．２〜８．２；ＮａＣｌ１３７ｍＭ；ＫＣｌ２．７ｍＭ）で、最終濃度４００ｐＭまで希釈する。この保存溶液は、８種類の標準物質系列の調製において原料となる。

アッセイ用の標準物質系列を調製するために、４００ｐＭのＣＡＦ保存溶液および試料希釈緩衝液（表２に示した通り）の体積を１．５ｍｌタンパク質ＬｏＢｉｎｄチューブにピペットで入れる。チューブを数回はじくことによって混合する。前述したように、標準物質系列５０μｌをＭＴＰのウェルに添加し、その後、試料と同様に処理する。

ｉｖ）ＥＬＩＳＡ法
プレート（ＭＴＰ）での他のインキュベーションステップは全て、暗所で室温１５〜２５℃で実施する。インキュベーション後（ｉｉ参照）、ＭＴＰのウェルを洗浄緩衝液（リン酸カリウム緩衝液１２ｍＭｐＨ７．２〜８．２；ＮａＣｌ１３７ｍＭ；ＫＣｌ２．７ｍＭ；カゼイン０〜２％；Ｔｗｅｅｎ２００〜０．５％）３００μｌで３回洗浄する。各洗浄ステップの間に、ＭＴＰを室温で１分間インキュベートする。その後、吸引またはタッピングによって洗浄液を除去する。洗浄ステップ完了後、ＣＡＦ検出抗体溶液、２８Ａ６Ｈ１１−ビオチンまたは２８Ｈ７Ｇ３−ビオチンまたは１４Ｂ７Ｂ８−ビオチン結合体（０．０１〜２ｍｇ／ｍｌ）１００μｌを全ウェルにピペットで入れる。次に、ＭＴＰを室温で３０分間インキュベートする。

その後、ＭＴＰを前述のように洗浄緩衝液で３回洗浄し、吸引またはタッピングによって洗浄液を除去する。次に、ストレプトアビジン−ポリＨＲＰ溶液１００μｌを全ウェルにピペットで入れ、ＭＴＰを暗所で室温で３０分間インキュベートする。ＭＴＰを再度前述のように洗浄緩衝液で３回洗浄し、吸引またはタッピングによって洗浄液を除去する。ＴＭＢ溶液１００μｌを全ウェルにピペットで入れ、暗所で室温で３０分間インキュベートする。最後に、停止溶液（ＳｕｒＭｏｄｉｃｓ製のＴＭＢマイクロウェル基質用停止試薬）１００μｌを全ウェルにピペットで入れ、各ウェルの４５０ｎｍでの吸光度をマイクロタイタープレートリーダーで測定する。室温で１時間黄色が安定する。前記手法はまた、ｗｗｗ．ｎｅｕｒｏｔｕｎｅ．ｃｏｍで購入することができるＮＴＣＡＦＥＬＩＳＡキットの指示の一部である。

ｖ）結果
ＣＡＦおよび全ＣＡＦの正常範囲の評価
ＣＡＦの正常分布を定義するために、ＥＬＩＳＡアッセイを前述の手法に従って実施した。１９〜７４歳の表面上健康なスイス人の血液ドナーの２１０の血清を、ＣＡＦの存在に関して分析した。平均値は、５６．８ｐＭ±１８．９ｐＭ（平均値±標準偏差）であった。これは、１８．９ｐＭから９４．７ｐＭまでの正常範囲に対応する（平均値より２標準偏差下から平均値より２標準偏差上まで）。測定された最低値は２０ｐＭで、一方、最高値は１１８．４ｐＭであった。８人の個体（３．８％）のＣＡＦは、正常範囲を上回った。同個体の全ＣＡＦ（すなわち、ＣＡＦプラスアグリンＣ１１０断片）の測定値は、平均ＣＡＦレベルが２６０ｐＭ±５９．６ｐＭの結果となり、正常範囲は１４０．８ｐＭから７９．２ｐＭまでであった。３．３％の人が正常範囲を上回るＣＡＦレベルを示した。結果を図１Ａおよび図１Ｂに示す。

真性糖尿病に罹患した患者のＣＡＦレベル
真性糖尿病ＩＩに罹患した１８９人の患者の血清中のＣＡＦレベルを分析した。観察された平均ＣＡＦ値は、８１．４±２９．５ｐＭであった。これらの患者の２４．３％のＣＡＦレベルは、健康なスイス人の血液ドナーから定義された正常範囲１８．９ｐＭから９４．７ｐＭを上回った。これらの患者は、初期の腎臓機能障害を有すると考えることができる。

慢性腎臓疾患病期（ＣＫＤ病期）に応じたＣＡＦレベル
慢性腎臓疾患の異なる病期（ＣＫＤ病期１〜５）の２０５人の患者の血中のＣＡＦおよび全ＣＡＦレベルを分析した。ＣＡＦレベルが腎臓疾患の重症度に対応して増加することが明らかになった。これは、これらの患者でまた実施されたＮＧＡＬ測定値と一致する。ＮＧＡＬ測定は、分析法の技術水準を備えた臨床診断研究室で実施された。表３、図２Ａから図２Ｃは、ＣＡＦ、全ＣＡＦおよびＮＧＡＬ測定の結果をまとめて示す。

血液透析中のＣＡＦレベルの安定性
その大きさのため（２２ｋＤａ）、低フラックスおよび高フラックスダイアライザでも患者の血清から効率よくＣＡＦを除去することはできないと考えられる。これは、アグリンＣ１１０断片でより明らかである。さらに、血清ＣＡＦ濃度が低いことは、拡散によって血清から多量のＣＡＦまたはアグリンＣ１１０を除去することはできないことを示唆する。

ＦｒｅｓｅｎｉｕｓＦ×６０膜で血液透析を受けている１４人の患者の血清を分析した。１の血清試料を透析直前に採取し、透析終了５分前に１の試料を採取した。透析によって患者の体液の体積低下が引き起こされるので、ＣＡＦレベルはこの体積不足量で修正した。図３からわかるように、透析前の平均ＣＡＦ値は１０７７ｐＭで、透析後の体積修正ＣＡＦレベルは１０４７ｐＭであった。これは実質的に同じである。透析中のＣＡＦの損失は認められなかった。これは、通常使用される腎臓マーカー、例えば、クレアチニンおよびシスタチンＣとは対照的である（Ｈｕａｎｇ他、２０１１）。

腎臓移植後のＣＡＦレベル低下
腎臓移植を受けている末期腎疾患（ＥＳＲＤ）患者１１０人の血清ＣＡＦレベルを、移植前後に分析した。血清クレアチニンレベルは、よく確立された光度測定（Ｊａｆｆｅ法、正常範囲は男性で０．７〜１．３ｍｇ／ｄｌ、女性で０．５〜１．１ｍｇ／ｄｌ）を使用して定量した。測定は、ドイツ、ミュンヘンのＫｌｉｎｉｋｕｍｒｅｃｈｔｓｄｅｒＩｓａｒ、ＴｅｃｈｎｉｓｃｈｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔの臨床化学研究所、中央研究部門で実施された。血清クレアチニンレベルは、糸球体濾過率（ｅＧＦＲ）を計算するために有用であった。血清ＣＡＦとクレアチニンレベル／ｅＧＦＲとの間の関係は、患者内（ｃＷＰ）および患者間（ｃＢＰ）の関係として計算した。さらに、ＣＡＦと臓器移植後臓器機能障害（ＤＧＦ）との関連を評価した。クレアチニンと比較したＤＧＦの早期検出のためのＣＡＦの診断値は、受信者動作特性（ＲＯＣ）分析によって評価した。

図４Ａからわかるように、血清ＣＡＦレベルは血清クレアチニン（ｒ＝０．８６（ｃＷＰ）、ｒ＝０．７４（ｃＢＰ））およびｅＧＦＲ（ＭＤＲＤ）（ｒ＝０．８６（ｃＷＰ）、ｒ＝０．７７（ｃＢＰ））と強く相関した。移植前の（ｐｒｅ−Ｔｘ）ＣＡＦレベル中央値は、健康な個体よりも１９倍高かった（１１１５．０ｐＭ対５６．６ｐＭ）。移植後、ＣＡＦレベルはクレアチニンレベルよりも有意に速く減少した（術後１〜３日（ＰＯＤ１〜３）：５６２．８ｐＭ、すなわち、ｐｒｅ−Ｔｘレベルの５４％、クレアチニン：ｐｒｅ−Ｔｘ６．９ｍｇ／ｄＬ、ＰＯＤ１〜３：６．４ｍｇ／ｄＬ、すなわち、ｐｒｅ−Ｔｘレベルの９３％、ｐ＜０．００１）。移植後、１〜３カ月でＣＡＦおよびクレアチニンは安定した血清レベルに達した（ＣＡＦ：１４５．１ｐＭ、すなわち、ｐｒｅ−Ｔｘレベルの１３％；クレアチニン：１．６ｍｇ／ｄＬ、すなわち、ｐｒｅ−Ｔｘレベルの２４％）。これらのレベルは、まだ高い（正常レベルの約１．５倍）。これは、移植腎を有する患者は、機能する腎臓が１つだけで、健康な人々のように完全に機能する腎臓を２つ有さないので、まだ腎臓機能障害に罹患しているという事実と一致する。ＰＯＤ１〜３のＣＡＦレベルはＤＧＦと有意に関連しており、ＤＧＦの早期検出ではクレアチニンよりも優れていた（曲線下面積（ＡＵＣ）−ＣＡＦ：８０．７％（９５％信頼区間：７２．３％〜８９．１％）対ＡＵＣ−クレアチニン：７１．３％（９５％信頼区間：６１．８％−８１．１％、ｐ＝０．０６１））。

表３では、様々な患者群のＣＡＦおよび全ＣＡＦ値を示す。

移植前群および透析群の患者はＣＫＤ病期５に罹患しており、これは腎臓機能の完全な喪失を意味する。生存するために、２〜３日毎に血液透析しなければならない。ＣＡＦおよび全ＣＡＦレベルの増加は、この日常的な透析方法によって低下しない。真性糖尿病群では、ＣＡＦおよび全ＣＡＦ値の上昇を認めることができた。これらの患者の約２５％は、ＣＡＦまたは全ＣＡＦ値が正常範囲を上回る。当然ながら、この患者群は、非常に不均一である。前記に示したように、ＣＡＦおよび全ＣＡＦは疾患の進行（ＣＫＤ病期）に対応して増加する。

ＣＡＦおよび糸球体濾過率（ｅＧＦＲ、ＭＤＲＤ）が強く相関していることを示す図５を最後に記載する。対数血清ＣＡＦレベルを、「ＭｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＤｉｅｔｉｎＲｅｎａｌＤｉｓｅａｓｅ」の簡易式（ＭＤＲＤ）を使用して血清クレアチニンレベルから計算した推定糸球体濾過率（ｅＧＦＲ）の対数に対してプロットした。

ＣＡＦはシスタチンＣが相関する（ｒ＝−０．７４、Ｔａｎ他、２００２）のと非常によく類似して、糸球体濾過率と非常によく相関することを示すことができる（ｒ＝−０．７）。したがって、ＣＡＦは腎臓機能のマーカーであると十分に考えることができる。

［文献］

Claims

血液透析を受けている患者における腎機能の判定のための方法であって、ＣＡＦの量、または、ＣＡＦおよびＣ１１０の量を前記患者から採取した血液又は尿試料中で測定し、
ここで、前記ＣＡＦは、ニューロトリプシンによるアグリンのベータ部位での切断によって生成される、４〜１２％ビス−トリスＳＤＳゲル中で約２２ｋＤａに移動するＣ末端ＬＧ３ドメインからなるアグリン断片であり、
前記Ｃ１１０は、ニューロトリプシンによるアグリンのアルファ部位での切断によって生成される、４〜１２％ビス−トリスＳＤＳゲル中で約１３０ｋＤａに移動する約１１０ｋＤａのＣ末端アグリン断片であり、
前記血液又は尿試料中の前記ＣＡＦの測定された量、または、前記血液又は尿試料中の前記ＣＡＦの測定値と前記Ｃ１１０の測定値とを足し合わせた値である全ＣＡＦ値を、前記患者における腎機能の指標として使用する、方法。
移植後、血液透析中、または急性腎障害もしくは慢性腎臓疾患の場合に、前記患者の腎機能をモニターするための、請求項１に記載の方法の使用。
請求項１に記載の方法における、参照としての、組換え技術によって調製されたアグリン断片の使用。