JP6174176B2 - 高濃度抗体製剤 - Google Patents

Description

本発明は、高濃度抗体製剤に関する。
関連出願の相互参照
本願は、２０１０年５月１４日出願の米国仮出願第６１／３３４，９８６号の優先権の利益を主張し、その開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

高濃度液体抗体製剤は、より少量の用量を送達するのに有用である。しかしながら、高濃度タンパク質製剤は、いくつかの問題をもたらす。１つの問題は、微粒子の形成に起因する不安定性である。別の問題は、抗体の高分子性質からの多くの分子間相互作用の結果としての、粘度の増加である。高粘性製剤は、製造、シリンジへの吸引、および注入が困難である。粘性製剤の取り扱いに力を使用することは、過剰な泡をもたらし、活性生物製剤の変性および不活性化をもたらす可能性がある。

米国特許第６，８７５，４３２号および米国特許出願公開第２００６／０１８２７４０号、第２００７／０１７２４７９号、第２００８／０１６００１４号は、抗体製剤およびそれを作製する方法を開示する。これらの公開文献のうち、本明細書で言及する抗体を開示するものはない。

米国特許第６，８７５，４３２号 米国特許出願公開第２００６／０１８２７４０号 米国特許出願公開第２００７／０１７２４７９号 米国特許出願公開第２００８／０１６００１４号

本開示は、低濃度、例えば、５〜１０ｍＭの酢酸カルシウムの添加が、高濃度の選択された抗スクレロスチン抗体を含む製剤中の有効粘度を低減したという発見に基づく。対照的に、同濃度の酢酸カルシウムは、他の抗体製剤の粘度を有意に低減しなかった。一態様では、本製剤は、滅菌され、液体または再構成液体形態の場合、（ａ）少なくとも７０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗スクレロスチン抗体であって、配列番号１〜５（Ａｂ−ＡおよびＡｂ−１ ＣＤＲ）、１５〜２０（Ａｂ−Ｂ ＣＤＲ）、２５〜３０（Ａｂ−Ｃ ＣＤＲ）、３５〜４０（Ａｂ−Ｄ ＣＤＲ）、４５〜５０（Ａｂ−２ ＣＤＲ）、５５〜６０（Ａｂ−３およびＡｂ−１５ ＣＤＲ）、７３〜７８（Ａｂ−４およびＡｂ−５ ＣＤＲ）、９１〜９６（Ａｂ−６ ＣＤＲ）、１０１〜１０６（Ａｂ−７ ＣＤＲ）、１１１〜１１６（Ａｂ−８ ＣＤＲ）、１２１〜１２６（Ａｂ−９ ＣＤＲ）、１３１〜１３６（Ａｂ−１０ ＣＤＲ）、１４１〜１４６（Ａｂ−１１およびＡｂ−１６ ＣＤＲ）、１５９〜１６４（Ａｂ−１２ ＣＤＲ）、１６９〜１７４（Ａｂ−１３およびＡｂ−１４ ＣＤＲ）、１８７〜１９２（Ａｂ−１７およびＡｂ−１８ ＣＤＲ）、２０１〜２０６（Ａｂ−１９、Ａｂ−２０、およびＡｂ−２３ ＣＤＲ）、２２５〜２２９（Ａｂ−２１およびＡｂ−２２ ＣＤＲ）、または２３９〜２４４（Ａｂ−２４ ＣＤＲ）から成る群より選択される６つのＣＤＲのセットを含む、抗体と、（ｂ）約１ｍＭ〜約２０ｍＭ、または約５ｍＭ〜約１０ｍＭの範囲の濃度のカルシウム塩とを含み、本製剤は、約１０ｃＰ以下の絶対粘度を有する。本明細書に記載する絶対粘度は、適合する試料カップの温度が一定の２５℃で循環水槽によって調整される、ＣＰＥ−４０スピンドルを用いた、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ ＬＶ−ＤＶＩＩコーンプレート粘度計を使用して測定された。

いくつかの実施形態では、カルシウム塩は、酢酸カルシウム、炭酸カルシウム、および塩化カルシウムから成る群より選択される。一実施形態では、カルシウム塩は、酢酸カルシウムである。あるいは、いくつかの実施形態では、カルシウム塩は、カルシウム塩を含まない抗体の同一製剤と比較して、少なくとも１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、またはそれ以上、抗体製剤の粘度を低減する濃度で存在する。

関連態様では、本製剤は、滅菌され、液体または再構成液体形態の場合、（ａ）約７０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗スクレロスチン抗体であって、配列番号１〜５（Ａｂ−ＡおよびＡｂ−１ ＣＤＲ）、１５〜２０（Ａｂ−Ｂ ＣＤＲ）、２５〜３０（Ａｂ−Ｃ ＣＤＲ）、３５〜４０（Ａｂ−Ｄ ＣＤＲ）、４５〜５０（Ａｂ−２ ＣＤＲ）、５５〜６０（Ａｂ−３およびＡｂ−１５ ＣＤＲ）、７３〜７８（Ａｂ−４およびＡｂ−５ ＣＤＲ）、９１〜９６（Ａｂ−６ ＣＤＲ）、１０１〜１０６（Ａｂ−７ ＣＤＲ）、１１１〜１１６（Ａｂ−８ ＣＤＲ）、１２１〜１２６（Ａｂ−９ ＣＤＲ）、１３１〜１３６（Ａｂ−１０ ＣＤＲ）、１４１〜１４６（Ａｂ−１１およびＡｂ−１６ ＣＤＲ）、１５９〜１６４（Ａｂ−１２ ＣＤＲ）、１６９〜１７４（Ａｂ−１３およびＡｂ−１４ ＣＤＲ）、１８７〜１９２（Ａｂ−１７およびＡｂ−１８ ＣＤＲ）、２０１〜２０６（Ａｂ−１９、Ａｂ−２０、およびＡｂ−２３ ＣＤＲ）、２２５〜２２９（Ａｂ−２１およびＡｂ−２２ ＣＤＲ）、または２３９〜２４４（Ａｂ−２４ ＣＤＲ）から成る群より選択される６つのＣＤＲのセットを含む、抗体と、（ｂ）約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、または約５ｍＭ〜約１０ｍＭの範囲の濃度の酢酸カルシウムとを含み、本製剤は、約１０ｃＰ以下の絶対粘度を有する。あるいは、いくつかの実施形態では、酢酸カルシウムは、酢酸カルシウムを含まない抗体の同一製剤と比較して、少なくとも１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、またはそれ以上、抗体製剤の粘度を低減する濃度で存在する。

また、タンパク質製剤の粘度を低減する方法も提供し、本方法は、抗スクレロスチン免疫グロブリン製剤に、約１ｍＭ〜約２０ｍＭの濃度の酢酸カルシウムを添加することを含み、本製剤は、約７０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの濃度の免疫グロブリンを含み、酢酸カルシウムを含む製剤の粘度は、酢酸カルシウムを含まない抗体製剤の粘度と比較して低減される。

別の態様では、本製剤は、滅菌され、約１０ｃＰ以下の絶対粘度を有し、（ａ）少なくとも７０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの濃度のＡｂ−５と、（ｂ）約１ｍＭ〜約２０ｍＭの範囲の濃度の酢酸カルシウムと、約１％ｗ／ｖ〜約１２％ｗ／ｖの範囲の量の、例えばスクロース等のポリオールとを含む。ある特定の実施形態では、ポリオールは、約４％〜１０％の範囲の量である。いくつかの実施形態では、免疫グロブリンは、配列番号８６（Ａｂ−５重鎖可変領域）および／または配列番号８４（Ａｂ−５軽鎖可変領域）のアミノ酸配列を含む。

別の態様では、本製剤は、滅菌され、約１０ｃＰ以下の絶対粘度を有し、（ａ）少なくとも７０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの濃度のＡｂ−５と、（ｂ）約１ｍＭ〜約２０ｍＭの範囲の濃度の酢酸カルシウムと、（ｃ）約４％ｗ／ｖ〜約６％ｗ／ｖの範囲の量の、例えばスクロース等のポリオールとを含む。

前述の態様のうちのいずれにおいても、いくつかの実施形態では、本製剤は、（ｃ）約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、または約５ｍＭ〜約１０ｍＭの濃度の酢酸緩衝液、例えば、酢酸ナトリウムをさらに含む。いくつかの実施形態では、酢酸塩の全濃度は、約１０ｍＭ〜約５０ｍＭ、または約２０ｍＭ〜約４０ｍＭである。

異なる態様では、本製剤は、滅菌され、液体または再構成液体形態の場合、（ａ）約７０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗スクレロスチン抗体であって、配列番号１〜５（Ａｂ−ＡおよびＡｂ−１ ＣＤＲ）、１５〜２０（Ａｂ−Ｂ ＣＤＲ）、２５〜３０（Ａｂ−Ｃ ＣＤＲ）、３５〜４０（Ａｂ−Ｄ ＣＤＲ）、４５〜５０（Ａｂ−２ ＣＤＲ）、５５〜６０（Ａｂ−３およびＡｂ−１５ ＣＤＲ）、７３〜７８（Ａｂ−４およびＡｂ−５ ＣＤＲ）、９１〜９６（Ａｂ−６ ＣＤＲ）、１０１〜１０６（Ａｂ−７ ＣＤＲ）、１１１〜１１６（Ａｂ−８ ＣＤＲ）、１２１〜１２６（Ａｂ−９ ＣＤＲ）、１３１〜１３６（Ａｂ−１０ ＣＤＲ）、１４１〜１４６（Ａｂ−１１およびＡｂ−１６ ＣＤＲ）、１５９〜１６４（Ａｂ−１２ ＣＤＲ）、１６９〜１７４（Ａｂ−１３およびＡｂ−１４ ＣＤＲ）、１８７〜１９２（Ａｂ−１７およびＡｂ−１８ ＣＤＲ）、２０１〜２０６（Ａｂ−１９、Ａｂ−２０、およびＡｂ−２３ ＣＤＲ）、２２５〜２２９（Ａｂ−２１およびＡｂ−２２ ＣＤＲ）、または２３９〜２４４（Ａｂ−２４ ＣＤＲ）から成る群より選択される６つのＣＤＲのセットを含む、抗体と、（ｂ）約１０ｍＭ〜約５０ｍＭの酢酸塩、または約２０ｍＭ〜約４０ｍＭの酢酸塩の範囲の濃度の、酢酸塩および／または酢酸緩衝液とを含み、本製剤は、約１０ｃＰ以下の絶対粘度を有する。いくつかの実施形態では、酢酸塩および／または緩衝液は、酢酸カルシウムおよび／または酢酸ナトリウムを含む。あるいは、いくつかの実施形態では、酢酸塩および／または緩衝液は、酢酸塩および／または緩衝液を含まない抗体の同一製剤と比較して、少なくとも１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、２６％、２７％、２８％、２９％、３０％、３１％、３２％、３３％、３４％、３５％、３６％、３７％、３８％、３９％、４０％、４１％、４２％、４３％、４４％、４５％、４６％、４７％、４８％、４９％、５０％、５１％、５２％、５３％、５４％、５５％、５６％、５７％、５８％、５９％、６０％、またはそれ以上、抗体製剤の粘度を低減する濃度で存在する。

前述の態様のうちのいずれにおいても、いくつかの実施形態では、溶液中のイオンの全濃度（陽イオンおよび陰イオン）は、約２０ｍＭ〜約７０ｍＭ、または約３０ｍＭ〜約６０ｍＭである。これらの実施形態のうちのいずれにおいても、全オスモル濃度は、約４００ｍＯｓｍ／Ｌまたは３５０ｍＯｓｍ／Ｌ未満であり、好ましくは、等張に近く、例えば、２５０〜３５０ｍＯｓｍ／Ｌである。いくつかの実施形態では、本製剤は、低張である。例えば、そのような実施形態では、本製剤のオスモル濃度は、約２５０ｍＯｓｍ／Ｌ未満である。他の実施形態では、本製剤は、高張である。したがって、そのような実施形態では、本製剤の全オスモル濃度は、約３５０ｍＯｓｍ／Ｌよりも大きい。

本明細書に記載する製剤のうちのいずれにおいても、いくつかの実施形態では、本製剤中の抗スクレロスチン抗体は、抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１７、Ａｂ−１９、Ａｂ−２１、Ａｂ−２３、またはＡｂ−２４のうちのいずれかの成熟重鎖および／または軽鎖可変領域を含むことができる。したがって、特定の実施形態では、抗体は、配列番号１４（Ａｂ−１重鎖可変領域）、および／または配列番号１２（Ａｂ−１軽鎖可変領域）、または配列番号６８（Ａｂ−１５重鎖可変領域）、および／または配列番号６６（Ａｂ−１５軽鎖可変領域）、または配列番号８６（Ａｂ−５重鎖可変領域）、および／または配列番号８４（Ａｂ−５軽鎖可変領域）、または配列番号１５４（Ａｂ−１６重鎖可変領域）、および／または配列番号１５２（Ａｂ−１６軽鎖可変領域）、または配列番号１８２（Ａｂ−１４重鎖可変領域）および／または配列番号１８０（Ａｂ−１４軽鎖可変領域）、または配列番号２０８（Ａｂ−１９重鎖可変領域）および／または配列番号２０７（Ａｂ−１９軽鎖可変領域）、または配列番号２１６（Ａｂ−２０重鎖可変領域）および／または配列番号２１４（Ａｂ−２０軽鎖可変領域）、または配列番号２２０（Ａｂ−２３重鎖可変領域）および／または配列番号２１８（Ａｂ−２３軽鎖可変領域）、または配列番号２３８（Ａｂ−２２重鎖可変領域）および／または配列番号２３６（Ａｂ−２２軽鎖可変領域）のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１９、Ａｂ−２３、またはＡｂ−２４のうちのいずれかの成熟重鎖および／または軽鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書に記載する、抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１９、Ａｂ−２３、またはＡｂ−２４のうちのいずれかの重鎖および／または軽鎖、あるいは重鎖および／または軽鎖可変領域をコードするｃＤＮＡを、哺乳動物の宿主細胞中に発現することによって得られる、アミノ酸配列を含む。

本明細書に記載する製剤のうちのいずれにおいても、いくつかの実施形態では、抗スクレロスチン抗体は、Ａｂ−４もしくはＡｂ−５、Ａｂ−１３もしくはＡｂ−１４、またはＡｂ−１９、Ａｂ−２０、もしくはＡｂ−２３のうちのいずれかのＣＤＲ、または成熟重鎖および軽鎖可変領域、または成熟重鎖および軽鎖を含む。本明細書に記載する製剤のうちのいずれにおいても、いくつかの実施形態では、抗体は、１０^−７またはそれ以下のＫ_Ｄで、配列番号１のスクレロスチンに結合する（より低い数値は、より高い結合親和性を意味する）。

本明細書に記載する製剤のうちのいずれにおいても、いくつかの実施形態では、本製剤中の抗体は、少なくとも１２０ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも１４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する。本明細書に記載する製剤のうちのいずれにおいても、いくつかの実施形態では、本製剤の絶対粘度は、約８ｃＰ以下、または約６ｃＰ以下である。代替の実施形態では、本製剤中の抗体は、約７０ｍｇ／ｍＬ〜約１３０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し、本製剤は、約１０ｃＰ以下の絶対粘度を有する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載する製剤のうちのいずれも、約４％ｗ／ｖ〜約６％の範囲の量の、例えばスクロース等のポリオールをさらに含む。いくつかの実施形態では、本製剤は、約９％のスクロースを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する製剤のうちのいずれも、任意で、他の薬学的に許容される賦形剤、例えば、塩、緩衝液、アミノ酸、安定剤、ポリオール、他の等張化剤、界面活性剤、充填剤、抗凍結剤、リオプロテクタント、抗酸化剤、金属イオン、キレート剤、および／または防腐剤を含む。いくつかの実施形態では、本製剤は、０．０５重量％未満の界面活性剤を有する。

本明細書に記載する製剤のうちのいずれにおいても、いくつかの実施形態では、本製剤は、約４．５〜約６、または約５〜約６、または約５〜約５．５の範囲のｐＨを有する。いくつかの実施形態では、本製剤は、５．２のｐＨを有する。

また、軟骨形成不全症、鎖骨頭蓋骨形成不全症、内軟骨腫症、線維性骨異形成、ゴーシェ病、低リン酸血症性くる病、マルファン症候群、遺伝性多発性外骨腫、神経線維腫症、骨形成不全症、大理石骨病、骨斑紋症、硬化病変、偽関節、化膿性骨髄炎、歯周病、抗てんかん薬誘発性骨量減少、原発性もしくは二次性副甲状腺機能亢進症、家族性副甲状腺機能亢進症候群、無重力誘発性骨量減少、男性の骨粗鬆症、閉経後骨量減少、変形性関節炎、腎性骨ジストロフィー、骨の浸潤性疾患、口腔の骨量減少、顎骨壊死、若年性パジェット病、メロレオストーシス、代謝性骨疾患、肥満細胞症、鎌状赤血球貧血／病、臓器移植関連骨量減少、腎臓移植関連骨量減少、全身性エリテマトーデス、強直性脊椎炎、てんかん、若年性関節炎、サラセミア、ムコ多糖症、ファブリー病、ターナー症候群、ダウン症候群、クラインフェルター症候群、ハンセン病、ペルテス病、青年期特発性脊柱側弯症、乳児期発症多系統炎症性疾患、ウィンチェスター症候群、メンケス病、ウィルソン病、虚血性骨疾患（レッグカルペペルテス病もしくは局所性移動性骨粗鬆症等）、貧血状態、ステロイドによって引き起こされる状態、グルココルチコイド誘発性骨量減少、ヘパリン誘発性骨量減少、骨髄障害、壊血病、栄養不良、カルシウム欠乏症、骨粗鬆症、骨減少症、アルコール依存症、慢性肝疾患、閉経後の状態、慢性炎症状態、関節リウマチ、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、炎症性大腸炎、クローン病、希発月経、無月経、妊娠、糖尿病、甲状腺機能亢進症、甲状腺障害、副甲状腺障害、クッシング病、末端肥大症、性腺機能低下症、運動不足もしくは非活動、反射性交感神経性ジストロフィー症候群、局所性骨粗鬆症、骨軟化症、関節置換術と関連する骨量減少、ＨＩＶと関連する骨量減少、成長ホルモンの減少と関連する骨量減少、嚢胞性線維症と関連する骨量減少、化学療法と関連する骨量減少、腫瘍誘発性骨量減少、癌と関連する骨量減少、ホルモン除去による骨量減少、多発性骨髄腫、薬物誘発性骨量減少、神経性無食欲症、疾患関連顔面骨量減少、疾患関連頭部骨量減少、疾患関連顎骨量減少、疾患関連頭蓋骨量減少、老化と関連する骨量減少、老化と関連する顔面骨量減少、老化と関連する頭部骨量減少、老化と関連する顎骨量減少、老化と関連する頭蓋骨量減少、または宇宙旅行と関連する骨量減少が挙げられるがこれらに限定されない、骨密度の低下と関連するいかなる疾患も治療するために、本明細書に記載する製剤を使用する方法を本明細書に記載する。

本明細書に記載する製剤は、いくつかの実施形態では、整形外科手術、歯科手術、インプラント手術、関節置換術、骨移植術、骨美容整形、ならびに骨折治癒、癒着不能治癒、遷延治癒、および顔面再建術等の骨修復における結果を改善するのに有用である。１つ以上の製剤が、処置、置換、移植、手術、または修復の前、間、および／または後に投与されてもよい。

そのような方法は、治療上有効な量、例えば、骨密度を改善するために有効な量の製剤を投与することを含んでもよく、さらに第二の治療剤を投与することを含みうる。

また、本明細書に記載する製剤を含むバイアル、キット、または容器、例えば、充填済みシリンジまたは注入デバイス、および任意で、患者の体重１ｋｇ当たり約０．５〜２０ｍｇ、または０．５〜１０ｍｇ用量を達成するために必要な、適切な体積または量の製剤を使用するための使用説明書を含むラベルを本明細書に開示する。

本明細書中の種々の実施形態が、「含む」という用語を用いて示される一方で、種々の状況下で、関連実施形態はまた、「から成る」または「から本質的になる」という用語を用いて記載され得ることを理解されたい。「ａ」または「ａｎ」という用語は、１つ以上を指すことに留意されたく、例えば、「免疫グロブリン分子（an immunoglobulin molecule）」は、１つ以上の免疫グロブリン分子（one or more immunoglobulin molecules）を表すと理解される。したがって、「ａ（または「ａｎ」）」、「１つ以上（one or more）」、および「少なくとも１つ」という用語は、本明細書中で互換的に使用され得る。

また、値の範囲を表す時、表されている数字は、その範囲内で見られる個別の値であり得ることも理解されたい。例えば、「約ｐＨ４〜約ｐＨ６のｐＨ」は、ｐＨ４、４．２、４．６、５．１、５．５等、およびそのような値の間のいかなる値であってもよいが、これらに限定されない。さらに、「約ｐＨ４〜約ｐＨ６のｐＨ」は、当該製剤のｐＨが、保存中、２ｐＨの単位をｐＨ４〜ｐＨ６の範囲で変化させることを意味すると解釈されるべきではなく、むしろ、１つの値が、溶液のｐＨに対してその範囲で選択されてもよく、そのｐＨは、だいたいそのｐＨで緩衝化された状態を保つ。いくつかの実施形態では、「約」という用語が使用される時、挙げられた数値＋または−挙げられた数値の５％、１０％、１５％、またはそれ以上を意味する。目的とする実際の変動は、文脈から決定することができる。

本明細書に記載する範囲のいずれにおいても、その範囲の端点は、その範囲内に含まれる。しかしながら、その表現は、低いおよび／または高い端点が除外される同一の範囲も考慮する。本発明のさらなる特徴および変化形は、図面および詳細な説明を含む本願全体から、当業者には明らかとなり、全てのそのような特徴は、本発明の態様として意図される。同様に、本明細書に記載する本発明の特徴は、特徴の組み合わせが本発明の態様または実施形態として具体的に上記されるかどうかにかかわらず、同様に本発明の態様として意図されるさらなる実施形態に組み替えることができる。また、本発明に不可欠であると本明細書に記載されるような限定のみが、そのようなものと見なされるべきであり、不可欠であると本明細書に記載されていない、限定を含まない本発明の変化形は、本発明の態様として意図される。

粘度を低減するためにカルシウム塩、および／または酢酸塩または緩衝液を含有する、高濃度の抗体を含む製剤と、これらの製剤を使用する方法と、これらの製剤を含む容器またはキットとを本明細書に記載する。

Ｉ．製剤中の抗体
いくつかの実施形態では、本製剤中の抗スクレロスチン抗体は、少なくとも約７０ｍｇ／ｍＬ、約７１ｍｇ／ｍＬ、約７２ｍｇ／ｍＬ、約７３ｍｇ／ｍＬ、約７４ｍｇ／ｍＬ、約７５ｍｇ／ｍＬ、約７６ｍｇ／ｍＬ、約７７ｍｇ／ｍＬ、約７８ｍｇ／ｍＬ、約７９ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約８１ｍｇ／ｍＬ、約８２ｍｇ／ｍＬ、約８３ｍｇ／ｍＬ、約８４ｍｇ／ｍＬ、約８５ｍｇ／ｍＬ、約８６ｍｇ／ｍＬ、約８７ｍｇ／ｍＬ、約８８ｍｇ／ｍＬ、約８９ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約９１ｍｇ／ｍＬ、約９２ｍｇ／ｍＬ、約９３ｍｇ／ｍＬ、約９４ｍｇ／ｍＬ、約９５ｍｇ／ｍＬ、約９６ｍｇ／ｍＬ、約９７ｍｇ／ｍＬ、約９８ｍｇ／ｍＬ、約９９ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１０１ｍｇ／ｍＬ、約１０２ｍｇ／ｍＬ、約１０３ｍｇ／ｍＬ、約１０４ｍｇ／ｍＬ、約１０５ｍｇ／ｍＬ、約１０６ｍｇ／ｍＬ、約１０７ｍｇ／ｍＬ、約１０８ｍｇ／ｍＬ、約１０９ｍｇ／ｍＬ、約１１０ｍｇ／ｍＬ、約１１１ｍｇ／ｍＬ、約１１２ｍｇ／ｍＬ、約１１３ｍｇ／ｍＬ、約１１４ｍｇ／ｍＬ、約１１５ｍｇ／ｍＬ、約１１６ｍｇ／ｍＬ、約１１７ｍｇ／ｍＬ、約１１８ｍｇ／ｍＬ、約１１９ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１２１ｍｇ／ｍＬ、約１２２ｍｇ／ｍＬ、約１２３ｍｇ／ｍＬ、約１２４ｍｇ／ｍＬ、約１２５ｍｇ／ｍＬ、約１２６ｍｇ／ｍＬ、約１２７ｍｇ／ｍＬ、約１２８ｍｇ／ｍＬ、約１２９ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１３１ｍｇ／ｍＬ、約１３２ｍｇ／ｍＬ、約１３２ｍｇ／ｍＬ、約１３３ｍｇ／ｍＬ、約１３４ｍｇ／ｍＬ、約１３５ｍｇ／ｍＬ、約１３６ｍｇ／ｍＬ、約１３７ｍｇ／ｍＬ、約１３８ｍｇ／ｍＬ、約１３９ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１４１ｍｇ／ｍＬ、約１４２ｍｇ／ｍＬ、約１４３ｍｇ／ｍＬ、約１４４ｍｇ／ｍＬ、約１４５ｍｇ／ｍＬ、約１４６ｍｇ／ｍＬ、約１４７ｍｇ／ｍＬ、約１４８ｍｇ／ｍＬ、約１４９ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１５１ｍｇ／ｍＬ、約１５２ｍｇ／ｍＬ、約１５３ｍｇ／ｍＬ、約１５４ｍｇ／ｍＬ、約１５５ｍｇ／ｍＬ、約１５６ｍｇ／ｍＬ、約１５７ｍｇ／ｍＬ、約１５８ｍｇ／ｍＬ、約１５９ｍｇ／ｍＬ、または約１６０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在し、最大で、例えば、約３００ｍｇ／ｍＬ、約２９０ｍｇ／ｍＬ、約２８０ｍｇ／ｍＬ、約２７０ｍｇ／ｍＬ、約２６０ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ、約２４０ｍｇ／ｍＬ、約２３０ｍｇ／ｍＬ、約２２０ｍｇ／ｍＬ、約２１０ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、または約１７０ｍｇ／ｍＬにまで及んでもよい。約７０ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ〜約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２５０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬ、または約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１８０ｍｇ／ｍＬが挙げられるがこれらに限定されない、上記の端点の組み合わせを特徴付けるいかなる範囲も考慮される。

抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−１、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１３、Ａｂ−１４、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１７、Ａｂ−１８、Ａｂ−１９、Ａｂ−２０、Ａｂ−２１、Ａｂ−２２、Ａｂ−２３、およびＡｂ−２４は、米国特許出願公開第２００７／０１１０７４７号にすでに記載されており、配列表を含むその開示は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本明細書に記載する抗スクレロスチン抗体は、１０^−６もしくはそれ以下、または１０^−７もしくはそれ以下、または１０^−８もしくはそれ以下、または１０^−９もしくはそれ以下のＫ_Ｄで、配列番号１のスクレロスチンに結合する（より低い数値は、より高い結合親和性を意味する）。親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ技術によるものを含む、当該技術分野で既知のいかなる手段によっても決定することができる。

いくつかの例示的な実施形態では、本抗体は、抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１９、Ａｂ−２３、またはＡｂ−２４のうちのいずれかの重鎖および／または軽鎖を含む。定常領域を含む、抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１７、Ａｂ−１９、Ａｂ−２３、およびＡｂ−２４の成熟完全長軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号８、２２、３２、４２、５２、６２、８０、８８、９８、１０８、１１８、１２８、１３８、１４８、１６６、１７６、１８４、７０、２１０ ２２２、および２４６にそれぞれ記載される。定常領域を含む、抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１９、Ａｂ−２３、およびＡｂ−２４の成熟完全長重鎖のアミノ酸配列は、配列番号１０、２４、３４、４４、５４、６４、８２、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６８、１７８、１８６、７２、２２４、および２４８にそれぞれ記載される。

定常領域を含む、抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１９、Ａｂ−２３、およびＡｂ−２４の完全長軽鎖をコードする、対応するｃＤＮＡ配列は、配列番号７、２１、３１、４１、５１、６１、７９、８７、９７、１０７、１１７、１２７、１３７、１４７、１６５、１７５、１８３、６９、２０９、２２１、および２４５にそれぞれ記載される。抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１９、Ａｂ−２３、およびＡｂ−２４の定常領域を含む完全長重鎖をコードする、対応するｃＤＮＡ配列は、配列番号９、２３、３３、４３、５３、６３、８１、８９、９９、１０９、１１９、１２９、１３９、１４９、１６７、１７７、１８５、７１、２１１、２２３、および２４７にそれぞれ記載される。

他の例示的な実施形態では、本抗体は、抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１７、Ａｂ−１９、Ａｂ−２１、Ａｂ−２３、またはＡｂ−２４のうちのいずれかの重鎖および／または軽鎖可変領域を含む。例えば、本抗体は、配列番号１４（Ａｂ−１重鎖可変領域）および／または配列番号１２（Ａｂ−１軽鎖可変領域）、配列番号６８（Ａｂ−１５重鎖可変領域）および／または配列番号６６（Ａｂ−１５軽鎖可変領域）、または配列番号８６（Ａｂ−５重鎖可変領域）および／または配列番号８４（Ａｂ−５軽鎖可変領域）、または配列番号１５４（Ａｂ−１６重鎖可変領域）および／または配列番号１５２（Ａｂ−１６軽鎖可変領域）、または配列番号１８２（Ａｂ−１４重鎖可変領域）および／または配列番号１８０（Ａｂ−１４軽鎖可変領域）、または配列番号２０８（Ａｂ−１９重鎖可変領域）および／または配列番号２０７（Ａｂ−１９軽鎖可変領域）、または配列番号２１６（Ａｂ−２０重鎖可変領域）および／または配列番号２１４（Ａｂ−２０軽鎖可変領域）、または配列番号２２０（Ａｂ−２３重鎖可変領域）および／または配列番号２１８（Ａｂ−２３軽鎖可変領域）、または配列番号２３８（Ａｂ−２２重鎖可変領域）および／または配列番号２３６（Ａｂ−２２軽鎖可変領域）を含む。

いくつかの実施形態では、本抗体は、配列番号１〜５（Ａｂ−ＡおよびＡｂ−１ ＣＤＲ）、または１５〜２０（Ａｂ−Ｂ ＣＤＲ）、または２５〜３０（Ａｂ−Ｃ ＣＤＲ）、または３５〜４０（Ａｂ−Ｄ ＣＤＲ）、または４５〜５０（Ａｂ−２ ＣＤＲ）、または５５〜６０（Ａｂ−３およびＡｂ−１５ ＣＤＲ）、または７３〜７８（Ａｂ−４およびＡｂ−５ ＣＤＲ）、または９１〜９６（Ａｂ−６ ＣＤＲ）、または１０１〜１０６（Ａｂ−７ ＣＤＲ）、または１１１〜１１６（Ａｂ−８ ＣＤＲ）、または１２１〜１２６（Ａｂ−９ ＣＤＲ）、または１３１〜１３６（Ａｂ−１０ ＣＤＲ）、または１４１〜１４６（Ａｂ−１１およびＡｂ−１６ ＣＤＲ）、または１５９〜１６４（Ａｂ−１２ ＣＤＲ）、または１６９〜１７４（Ａｂ−１３およびＡｂ−１４ ＣＤＲ）、または１８７〜１９２（Ａｂ−１７およびＡｂ−１８ ＣＤＲ）、または２０１〜２０６（Ａｂ−１９、Ａｂ−２０、およびＡｂ−２３ ＣＤＲ）、または２２５〜２２９（Ａｂ−２１およびＡｂ−２２ ＣＤＲ）、または２３９〜２４４（Ａｂ−２４ ＣＤＲ）に記載されるＣＤＲを含む。

いくつかの実施形態では、本抗体は、本明細書に記載する、抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１９、Ａｂ−２３、またはＡｂ−２４のうちのいずれかの重鎖および／または軽鎖、あるいは重鎖および／または軽鎖可変領域をコードするｃＤＮＡを、哺乳動物の宿主細胞中に発現することによって得られる、アミノ酸配列を含む。本明細書に記載する製剤のうちのいずれにおいても、いくつかの実施形態では、本抗体は、２つの重鎖および２つの軽鎖から成る、四量体免疫グロブリンである。

いくつかの実施形態では、本抗体は、抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１９、Ａｂ−２３、またはＡｂ−２４のうちのいずれかのＣＤＲを含み、それぞれ、抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１９、Ａｂ−２３、またはＡｂ−２４の重鎖および／または軽鎖と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含む、重鎖および／または軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本抗体は、抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１９、Ａｂ−２３、またはＡｂ−２４のうちのいずれかのＣＤＲを含み、それぞれ、抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１９、Ａｂ−２３、またはＡｂ−２４の重鎖および／または軽鎖可変領域と少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含む、重鎖および／または軽鎖を含む。

いくつかの実施形態では、本抗体は：

１）抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−１、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１３、Ａｂ−１４、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１７、Ａｂ−１８、Ａｂ−１９、Ａｂ−２０、Ａｂ−２１、Ａｂ−２２、Ａｂ−２３、またはＡｂ−２４のうちのいずれかのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、ＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、および／またはＣＤＲＬ３のうちのいずれか１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つを保持し、任意で、そのようなＣＤＲにおいて、１つまたは２つの変異を含む。

２）抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−１、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１３、Ａｂ−１４、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１７、Ａｂ−１８、Ａｂ−１９、Ａｂ−２０、Ａｂ−２１、Ａｂ−２２、Ａｂ−２３、またはＡｂ−２４のうちのいずれかのＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３、または重鎖可変領域の全てを保持し、任意で、そのようなＣＤＲにおける、１つまたは２つの変異を含む。

３）抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−１、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１３、Ａｂ−１４、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１７、Ａｂ−１８、Ａｂ−１９、Ａｂ−２０、Ａｂ−２１、Ａｂ−２２、Ａｂ−２３、またはＡｂ−２４のうちのいずれかのＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３、または軽鎖可変領域の全てを保持し、任意で、そのようなＣＤＲにおける、１つまたは２つの変異を含む。

４）例えば、Ｘ線結晶学で決定される、抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−１、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１３、Ａｂ−１４、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１７、Ａｂ−１８、Ａｂ−１９、Ａｂ−２０、Ａｂ−２１、Ａｂ−２２、Ａｂ−２３、もしくはＡｂ−２４、または配列番号２４９のアミノ酸８６〜１１１によって形成されるループ内のアミノ酸と、同一のスクレロスチンのエピトープに結合する。および／または、

５）約７５％、約８０％超、または約８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、もしくは９５％超、スクレロスチンに結合するために、抗体Ａｂ−Ａ、Ａｂ−Ｂ、Ａｂ−Ｃ、Ａｂ−Ｄ、Ａｂ−１、Ａｂ−２、Ａｂ−３、Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−６、Ａｂ−７、Ａｂ−８、Ａｂ−９、Ａｂ−１０、Ａｂ−１１、Ａｂ−１２、Ａｂ−１３、Ａｂ−１４、Ａｂ−１５、Ａｂ−１６、Ａｂ−１７、Ａｂ−１８、Ａｂ−１９、Ａｂ−２０、Ａｂ−２１、Ａｂ−２２、Ａｂ−２３、またはＡｂ−２４と競合する。

いくつかの実施形態では、本抗体は、全ての３つの軽鎖ＣＤＲ、成熟軽鎖可変領域、全ての３つの重鎖ＣＤＲ、成熟重鎖可変領域、全ての６つのＣＤＲ、または成熟軽鎖および成熟重鎖可変領域の両方を含む。いくつかの例示的な実施形態では、１つの抗体からの２つの軽鎖ＣＤＲが、異なる抗体からの第３の軽鎖ＣＤＲと組み合わされてもよい。あるいは、１つの抗体からのＣＤＲＬ１を、特に、ＣＤＲが高度の相同性を示す場合、異なる抗体からのＣＤＲＬ２、およびさらに別の抗体からのＣＤＲＬ３と組み合わせることができる。同様に、１つの抗体からの２つの重鎖ＣＤＲが、異なる抗体からの第３の重鎖ＣＤＲと組み合わされてもよく、または１つの抗体からのＣＤＲＨ１を、特に、ＣＤＲが高度の相同性を示す場合、異なる抗体からのＣＤＲＨ２、およびさらに別の抗体からのＣＤＲＨ３と組み合わせることができる。

「抗体」という用語は、無傷抗体またはその結合断片を指す。抗体は、完全抗体分子（完全長重鎖および／または軽鎖を有するポリクローナル、モノクローナル、キメラ、ヒト化、またはヒト型を含む）を含んでもよく、またはその抗原結合断片を含んでもよい。抗体断片は、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆｖ、Ｆｃ、およびＦｄ断片を含み、単一ドメイン抗体、一本鎖抗体、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ−ＮＡＲ、およびビス−ｓｃＦｖ（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２３（９）：１１２６−１１３６（２００５）を参照されたい）に組み込むことができる。

「単離」抗体は、その用語が本明細書で定義されるように、その自然環境の成分から特定および分離された抗体である。その自然環境の汚染成分は、抗体の診断的または治療的使用を妨げる物質であり、酵素、ホルモン、および他のタンパク性または非タンパク性溶質を含み得る。ある特定の実施形態では、本抗体は、（１）抗体の９５重量％超、および最も好ましくは、９９重量％超まで、（２）Ｎ末端もしくは内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るために十分な程度まで、または（３）クマシーブルー、もしくは好ましくは、銀染色を用いた、還元もしくは非還元条件下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによる均一性まで精製される。単離された天然抗体は、抗体の自然環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換え細胞内のインサイチュの抗体を含む。しかしながら、通常、単離抗体は、少なくとも１つの精製工程によって調製される。

「免疫グロブリン」または「天然抗体」は、四量体糖タンパク質である。天然の免疫グロブリンにおいて、各四量体は、ポリペプチド鎖の２つの相同対から成り、各対は、１つの「軽鎖」（約２５ｋＤａ）および１つの「重鎖」（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する、約１００〜１１０、またはそれ以上のアミノ酸の「可変」（「Ｖ」）領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクタ機能に関与する、定常領域を画定する。免疫グロブリンは、それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、異なるクラスに分けることができる。重鎖は、ミュー（μ）、デルタ（Δ）、ガンマ（γ）、アルファ（α）、およびエプシロン（ε）に分類され、それぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥとして、抗体のアイソタイプを定義する。これらのうちのいくつかは、サブクラスまたはアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分けることができる。異なるアイソタイプは、異なるエフェクタ機能を有する。例えば、ＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプは、抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）活性を有する。ヒト軽鎖は、カッパ（κ）およびラムダ（λ）軽鎖に分類される。軽鎖および重鎖内で、可変および定常領域は、約１２またはそれ以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結されており、重鎖はまた、約１０またはそれ以上のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。

アロタイプは、免疫原性であってもよく、ヒトにおいて特定の対立遺伝子によってコードされる、しばしば定常領域中の抗体配列の変化である。アロタイプは、ヒトＩＧＨＣ遺伝子のうちの５つ、ＩＧＨＧ１、ＩＧＨＧ２、ＩＧＨＧ３、ＩＧＨＡ２、およびＩＧＨＥ遺伝子に対して特定されており、それぞれ、Ｇ１ｍ、Ｇ２ｍ、Ｇ３ｍ、Ａ２ｍ、およびＥｍアロタイプと表される。少なくとも１８のＧｍアロタイプが既知である：ｎＧ１ｍ（１）、ｎＧ１ｍ（２）、Ｇ１ｍ（１、２、３、１７）またはＧ１ｍ（ａ、ｘ、ｆ、ｚ）、Ｇ２ｍ（２３）またはＧ２ｍ（ｎ）、Ｇ３ｍ（５、６、１０、１１、１３、１４、１５、１６、２１、２４、２６、２７、２８）またはＧ３ｍ（ｂ１、ｃ３、ｂ５、ｂ０、ｂ３、ｂ４、ｓ、ｔ、ｇ１、ｃ５、ｕ、ｖ、ｇ５）。２つのＡ２ｍアロタイプ、Ａ２ｍ（１）およびＡ２ｍ（２）がある。

「超可変」領域という用語は、相補性決定領域またはＣＤＲからのアミノ酸残基を指す（すなわち、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５^ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）によって記載されるような、軽鎖可変ドメイン中の残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）、および８９〜９７（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメイン中の３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）、および９５〜１０２（Ｈ３））。単一のＣＤＲでさえ、ＣＤＲの全てを含有する完全な抗原結合部位よりも低い親和性ではあるが、抗原を認識し、結合し得る。

超可変「ループ」からの残基の代替の定義は、軽鎖可変ドメイン中の２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、および９１〜９６（Ｌ３）、ならびに重鎖可変ドメイン中の２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、および９６〜１０１（Ｈ３）として、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）によって記載される。

「骨格」またはＦＲ残基は、超可変領域残基以外の可変領域残基である。

「抗体断片」は、無傷免疫グロブリンの一部分、好ましくは、無傷抗体の抗原結合または可変領域を含み、抗体断片から形成される多特異性（二重特異性、三重特異性等）の抗体を含む。免疫グロブリンの断片は、組換えＤＮＡ技術によって、または無傷抗体の酵素的もしくは化学的開裂によって生成されてもよい。

抗体断片の限定されない実施例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ（可変領域）、ドメイン抗体（ｄＡｂ、ＶＨドメインを含有する）（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６，１９８９）、相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、一本鎖抗体（ｓｃＦｖ、単一のポリペプチド鎖上にＶＨおよびＶＬドメインを含有する）（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３−４２６，１９８８、およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９−５８８３，１９８８、任意で、ポリペプチドリンカーを含む、および任意で、多特異性、Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４））、一本鎖抗体断片、ダイアボディ（別の鎖の相補的ＶＬおよびＶＨドメインと対を形成する、単一のポリペプチド鎖上のＶＨおよびＶＬドメイン）（欧州特許第ＥＰ４０４，０９７号、国際公開第ＷＯ９３／１１１６１号、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３））、トリアボディ、テトラボディ、ミニボディ（ペプチドリンカー（ヒンジなし）を介して、またはＩｇＧヒンジを介してＣＨ３に融合されるｓｃＦｖ）（Ｏｌａｆｓｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２００４ Ａｐｒ；１７（４）：３１５−２３）、線状抗体（タンデムＦｄ断片（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）（Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５））、キレート組換え抗体（ｃｒＡｂ、同一抗原上の２つの隣接エピトープに結合し得る）（Ｎｅｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２４６：３６７−７３，１９９５）、バイボディ（二重特異性Ｆａｂ−ｓｃＦｖ）またはトリボディ（三重特異性Ｆａｂ−（ｓｃＦｖ）（２））（Ｓｃｈｏｏｎｊａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：７０５０−５７，２０００、Ｗｉｌｌｅｍｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｂ Ａｎａｌｙｔ Ｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｍｅｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．７８６：１６１−７６，２００３）、イントラボディ（Ｂｉｏｃｃａ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．９：１０１-１０８，１９９０、Ｃｏｌｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．１０１：１７６１６−２１，２００４）（細胞内に抗体を保持するまたは誘導する細胞シグナル配列も含み得る（Ｍｈａｓｈｉｌｋａｒ ｅｔ ａｌ，ＥＭＢＯ Ｊ １４：１５４２−５１，１９９５、Ｗｈｅｅｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＦＡＳＥＢ Ｊ．１７：１７３３−５，２００３））、トランスボディ（ｓｃＦｖに融合するタンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）を含有する細胞透過性抗体）（Ｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｄ Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．６４：１１０５−８，２００５）、ナノボディ（約１５ｋＤａの重鎖可変ドメイン）（Ｃｏｒｔｅｚ−Ｒｅｔａｍｏｚｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６４：２８５３−５７，２００４）、小モジュール免疫薬剤（ＳＭＩＰ）（国際公開第ＷＯ０３／０４１６００号、米国特許公開第２００３０１３３９３９号、および米国特許公開第２００３０１１８５９２号）、抗原結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質、ラクダ化抗体（ここで、ＶＨは、ヒンジ、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインを含有する定常領域と再結合する）（Ｄｅｓｍｙｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２６２８５−９０，２００１、Ｅｗｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４１：３６２８−３６，２００２、米国特許公開第２００５０１３６０４９号および第２００５００３７４２１号）、ＶＨＨ含有抗体、重鎖抗体（ＨＣＡｂ、構造Ｈ２Ｌ２を有する２つの重鎖のホモ二量体）、またその変異体もしくは誘導体、ならびに抗体が所望の生物学的活性を保持する限り、ＣＤＲ配列等のポリペプチドに結合する特異性抗原を与えるのに十分である、免疫グロブリンの少なくとも一部分を含有するポリペプチドが挙げられる。

抗体に関連して使用される「変異体」という用語は、変異体が所望の結合親和性または生物学的活性を保持するという条件で、可変領域および可変領域に相当する部分における少なくとも１つのアミノ酸置換、欠失、または挿入を含有する抗体のポリペプチド配列を指す。さらに、本明細書に記載する抗体は、半減期またはクリアランス、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を含む、抗体のエフェクタ機能を修飾するために、定常領域中にアミノ酸修飾を有し得る。そのような修飾は、例えば、癌を治療する際に、薬物動態を強化するか、または抗体の有効性を強化することができる。Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６（９）：６５９１−６６０４（２００１）を参照されたく、それは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。ＩｇＧ１の場合、定常領域、特に、ヒンジまたはＣＨ２領域に対する修飾は、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣ活性を含む、エフェクタ機能を増加または減少させ得る。他の実施形態では、ＩｇＧ２定常領域を修飾して、抗体−抗原凝集体形成を減少させる。ＩｇＧ４の場合、定常領域、特に、ヒンジ領域に対する修飾は、半抗体の形成を減少させ得る。

本明細書に記載する抗体またはポリペプチドに関連して使用される「修飾」という用語は、１つ以上のアミノ酸変化（置換、挿入、または欠失を含む）、ヘプシジン結合活性を妨げない化学修飾、治療用または診断用薬剤に共役することによる共有結合修飾、標識化（例えば、放射性核種または種々の酵素による）、ペグ化等の共有結合ポリマーの結合（ポリエチレングリコールによる誘導体化）、および非天然アミノ酸の化学合成による挿入または置換を含むが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の修飾ポリペプチド（抗体を含む）は、本発明の非修飾分子の結合特性を保持するであろう。

本発明の抗体またはポリペプチドに関連して使用される「誘導体」という用語は、治療用または診断用薬剤に共役することによる共有結合修飾、標識化（例えば、放射性核種または種々の酵素による）、ペグ化等の共有結合ポリマーの結合（ポリエチレングリコールによる誘導体化）、および非天然アミノ酸の化学合成による挿入または置換によって共有結合的に修飾される抗体またはポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、本発明の誘導体は、本発明の非誘導体化分子の結合特性を保持するであろう。

二重特異性または他の多重特異性抗体を作製するための方法は、当該技術分野で既知であり、化学的架橋結合、ロイシンジッパーの使用（Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３，１９９２）、ダイアボディ技術（Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−４８，１９９３）、ｓｃＦｖ二量体（Ｇｒｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８，１９９４）、線状抗体（Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８：１０５７−６２，１９９５）、およびキレート組換え抗体（Ｎｅｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２４６：３６７−７３，１９９５）が挙げられる。

タンパク質および非タンパク質薬剤は、当該技術分野で既知である方法によって、抗体に共役されてもよい。共役方法としては、直接結合、共有結合リンカーを介した結合、および特異的結合対メンバー（例えば、アビジン−ビオチン）が挙げられる。そのような方法としては、例えば、ドキソルビシンの共役に関して、Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５０，６６００−６６０７（１９９０）によって記載されるもの、ならびに白金化合物の共役に関して、Ａｒｎｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．３０３，７９−９０（１９９１）およびＫｉｓｅｌｅｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（ＵＳＳＲ）２５，５０８−５１４（１９９１）によって記載されるものが挙げられる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載する抗体および抗体断片は、例えば、天然の抗体、またはＦａｂもしくはｓｃＦｖファージディスプレイライブラリから得られる。「ヒト化抗体」というフレーズは、非ヒト抗体、典型的には、齧歯類モノクローナル抗体に由来する抗体を指し、それは、配列をよりヒトに近い状態にする修飾を含む。あるいは、ヒト化抗体は、キメラ抗体に由来し得る。

抗体断片は、Ｖ_Ｈドメインから成るドメイン抗体（ｄＡｂ）断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６，１９８９）を含み、「線状抗体」は、一対の抗原結合領域を形成する、一対のタンデムＦｄ断片（Ｖ_Ｈ−Ｃ_Ｈ１−Ｖ_Ｈ−Ｃ_Ｈ１）を含む。線状抗体は、二重特異性または単一特異性であり得る（Ｚｅｐａｔａ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ． ８：１０５７−６２（１９９５））。ペプチドリンカー（ヒンジなし）を介して、またはＩｇＧヒンジを介して、ＣＨ３に融合されるｓｃＦｖから成る「ミニボディ」は、Ｏｌａｆｓｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２００４ Ａｐｒ；１７（４）：３１５−２３に記載されている。「マキシボディ」は、免疫グロブリンのＦｃ領域に共有結合している二価のｓｃＦｖを指し、例えば、Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋｓ ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，１７：９５−１０６（２００４）およびＰｏｗｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２５１：１２３−１３５（２００１）を参照されたい。重鎖抗体、例えば、ＶＨ_Ｈドメイン、またはＨ_２Ｌ_２（「重鎖抗体」もしくは「ＨＣＡｂｓ」と称される）、またはラクダ化Ｖ_ＨＨ（例えば、Ｒｅｉｃｈｍａｎ，ｅｔａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ １９９９，２３１：２５−３８、Ｄｅｓｍｙｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２６２８５−９０，２００１、Ｅｗｅｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４１：３６２８−３６，２００２を参照されたい）、ナノボディ（Ｃｏｒｔｅｚ−Ｒｅｔａｍｏｚｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６４：２８５３−５７，２００４）。イントラボディは、細胞内発現を示し、細胞内タンパク質機能を操作することができる、一本鎖抗体である（Ｂｉｏｃｃａ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．９：１０１-１０８，１９９０、Ｃｏｌｂｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．１０１：１７６１６−２１，２００４、Ｍｈａｓｈｉｌｋａｒ ｅｔ ａｌ，ＥＭＢＯ Ｊ １４：１５４２−５１，１９９５、Ｗｈｅｅｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（ＦＡＳＥＢ Ｊ．１７：１７３３−５．２００３））。トランスボディは、タンパク質形質導入ドメイン（ＰＴＤ）が一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）抗体と融合している、細胞透過性抗体である（Ｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，（Ｍｅｄ Ｈｙｐｏｔｈｅｓｅｓ．６４：１１０５−８，２００５））。ＳＭＩＰ、または標的タンパク質に特異的な結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質は、抗体エフェクタ機能を実行するために必要な免疫グロブリンドメインに融合する抗原結合ドメインを含む、一本鎖ポリペプチドである。例えば、国際公開第ＷＯ０３／０４１６００号、米国特許公開第２００３０１３３９３９号、および米国特許公開第２００３０１１８５９２号を参照されたい。

ＩＩ．カルシウムおよび酢酸塩または緩衝液
比較的低濃度の酢酸カルシウムを、選択された抗体の製剤に添加することによって、製剤の粘度を低減することがわかっている。ここで使用される「粘度」という用語は、「絶対粘度」を指す。時に動的または単純粘度と呼ばれる絶対粘度は、運動学的粘度および流体密度の積である：絶対粘度＝運動学的粘度×密度。運動学的粘度の次元は、Ｌ^２／Ｔであり、Ｌは長さであり、Ｔは時間である。一般的に、運動学的粘度は、センチストーク（ｃＳｔ）で表される。運動学的粘度のＳＩ単位は、ｍｍ^２／ｓであり、それは、１ｃＳｔである。絶対粘度は、センチポアズ（ｃＰ）の単位で表される。絶対粘度のＳＩ単位は、ミリパスカル−秒（ｍＰａ−ｓ）であり、１ｃＰ＝１ｍＰａ-ｓである。

そのような粘度測定は、抗体製剤への粘度低下剤の添加後、時間単位（例えば、１〜２３時間）、日単位（例えば、１〜１０日間）、週単位（例えば、１〜５週間）、または月単位（例えば、１〜１２ヶ月間）、または年単位（例えば、１〜２年間、１〜３年間）で行われてもよい。粘度測定は、保存または投与温度、例えば、２〜８℃または２５℃（室温）で行われてもよい。いくつかの実施形態では、保存および／または投与温度での液体または再構成液体製剤の絶対粘度は、１５ｃＰ以下、または１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５、もしくは４ｃＰ以下である。

いくつかの実施形態では、タンパク質製剤の粘度は、カルシウム塩、および／または酢酸塩（および／または緩衝液）の添加の前および後に測定される。粘度を測定する方法は、当該技術分野でよく知られており、例えば、毛細管粘度計またはコーンプレートレオメータの使用が挙げられる。同一の方法が試験および対照製剤を比較するために使用されるという条件で、いかなる方法が使用されてもよい。

抗体製剤の粘度は、製剤へのカルシウム塩、および／または酢酸塩（および／または緩衝液）の添加によって低減され得る。抗体製剤の粘度は、カルシウム塩、および／または酢酸塩（および／または緩衝液）を含まない、比較抗体製剤の粘度と比較して、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、および約９０％、低減され得る。

例示的なカルシウム塩としては、酢酸カルシウム、炭酸カルシウム、および塩化カルシウムが挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、カルシウム塩は、少なくとも０．５ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、または１０ｍＭの濃度である。ある特定の実施形態では、カルシウム塩の濃度は、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、１５ｍＭ、１６ｍＭ、１７ｍＭ、１８ｍＭ、１９ｍＭ、２０ｍＭ、２１ｍＭ、２２ｍＭ、２３ｍＭ、２４ｍＭ、または２５ｍＭ以下である。約０．５ｍＭ〜約１０ｍＭ、約５ｍＭ〜約１０ｍＭ、または約５ｍＭ〜約１５ｍＭが挙げられるがこれらに限定されない、上記の端点の組み合わせを特徴付けるいかなる範囲も考慮される。いくつかの実施形態では、カルシウム塩は、酢酸塩および／または緩衝液を含まない抗体の同一製剤と比較して、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、またはそれ以上、抗体製剤の粘度を低減するか、あるいは１０ｃＰ以下、または９、８、７、６、もしくは５ｃＰ以下の粘度を達成する、濃度で存在する。ある特定の実施形態では、カルシウム塩は、低濃度で添加され、タンパク質製剤に悪影響を及ぼさないようにする。例えば、２０ｍＭまたはそれ以上の塩化カルシウムまたは塩化マグネシウム濃度で、タンパク質は、低い保存温度（２〜８℃）でゲルを形成する可能性がある。したがって、粘度が低減された粘度製剤の目的とする保存温度で低減されるカルシウム塩の濃度が、概して選択される。

本明細書に記載する範囲の全てにおいて、記載する陽イオン、陰イオン、または塩の濃度は、投与されることになっている液体または再構成液体製剤中の最終濃度である。本明細書に記載する範囲のいずれにおいても、範囲の端点は、その範囲内に含まれる。しかしながら、その表現は、低いおよび／または高い端点が除外される同一の範囲も考慮する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載する製剤は、カルシウム塩に加えて、少なくとも５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、または１５ｍＭの濃度の酢酸緩衝液もさらに含む。いくつかの実施形態では、濃度は、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、または５０ｍＭ以下である。約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、または約５ｍＭ〜約１０ｍＭが挙げられるがこれらに限定されない、上記の端点の組み合わせを特徴付けるいかなる範囲も考慮される。緩衝液は、好ましくは、ｐＨを約５〜６、または５〜５．５、または４．５〜５．５に維持する濃度で添加される。製剤中のカルシウム塩が酢酸カルシウムである時、いくつかの実施形態では、酢酸塩の全濃度は、約１０ｍＭ〜約５０ｍＭ、または約２０ｍＭ〜約４０ｍＭである。

いくつかの態様では、本製剤は、少なくとも約１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、または５０ｍＭである、酢酸塩の全濃度を有する。いくつかの実施形態では、酢酸塩の濃度は、約３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、または９０ｍＭ以下である。約１０ｍＭ〜約５０ｍＭ、約２０ｍＭ〜約５０ｍＭ、約２０ｍＭ〜約４０ｍＭ、約３０ｍＭ〜約５０ｍＭ、または約３０ｍＭ〜約７５ｍＭが挙げられるがこれらに限定されない、上記の端点の組み合わせを特徴付けるいかなる範囲も考慮される。いくつかの実施形態では、酢酸塩または緩衝液は、酢酸カルシウムおよび／または酢酸ナトリウムを含む。あるいは、いくつかの実施形態では、酢酸塩および／または緩衝液は、酢酸塩および／または緩衝液を含まない抗体の同一製剤と比較して、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、またはそれ以上、抗体製剤の粘度を低減するか、あるいは１０ｃＰ以下、または９、８、７、６、もしくは５ｃＰ以下の粘度を達成する、濃度で存在する。限定されない実施例として、１０ｍＭの酢酸カルシウムを含有する溶液は、カルシウム陽イオンの二価性質のため、２０ｍＭの酢酸塩陰イオンおよび１０ｍＭのカルシウム陽イオンを有し、一方で、１０ｍＭの酢酸ナトリウムを含有する溶液は、１０ｍＭのナトリウム陽イオンおよび１０ｍＭの酢酸塩陰イオンを有する。

いくつかの実施形態では、溶液中のイオン（陽イオンおよび陰イオン）の全濃度は、少なくとも１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、または８５ｍＭである。いくつかの実施形態では、イオンの全濃度は、約３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１２０ｍＭ、１３０ｍＭ、１４０ｍＭ、１５０ｍＭ、１６０ｍＭ、１７０ｍＭ、１８０ｍＭ、１９０ｍＭ、または２００ｍＭ以下である。約３０ｍＭ〜約６０ｍＭ、または約３０ｍＭ〜約７０ｍＭ、または約３０ｍＭ〜約８０ｍＭ、または約４０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、または約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭが挙げられるがこれらに限定されない、上記の端点の組み合わせを特徴付けるいかなる範囲も考慮される。限定されない実施例として、１０ｍＭの酢酸カルシウムの溶液は、３０ｍＭの全濃度のイオン（１０ｍＭの陽イオンおよび２０ｍＭの陰イオン）を有する。

本明細書に記載する製剤のうちのいずれにおいても、いくつかの実施形態では、全オスモル濃度は、５００ｍＯｓｍ／Ｌ、４５０ｍＯｓｍ／Ｌ、４００ｍＯｓｍ／Ｌ、または３５０ｍＯｓｍ／Ｌ以下であり、好ましくは、等張に近く、例えば、２５０−３５０ｍＯｓｍ／Ｌである。

さらに、当該技術分野で既知の、または本明細書に記載する、他の賦形剤を製剤に含むことができる。

ＩＩＩ．製剤中の賦形剤
タンパク質製剤は、概して、非経口的に投与される。非経口的に投与される場合、それらは、滅菌されていなければならない。滅菌希釈剤は、薬学的に許容され（ヒトへの投与に対して安全かつ非毒性）、凍結乾燥後の製剤再構成等、液体製剤の調製に有用である、液体を含む。例示的な希釈剤としては、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水、リンガー溶液、またはデキストロース溶液が挙げられる。希釈剤は、塩の水溶液および／または緩衝液を含むことができる。

賦形剤は、それらが薬物製品の安定性、送達、および製造性を与えるか、または強化するため、本製剤中に含まれる、添加剤である。それらが含まれる理由にかかわらず、賦形剤は、薬物製品の不可欠な要素であり、したがって、安全であり、患者の耐容性が良好である必要がある。タンパク質薬物に対して、賦形剤が薬物の有効性および免疫原性の両方に影響をもたらす可能性があるため、賦形剤の選択は、特に重要である。したがって、タンパク質製剤は、好適な安定性、安全性、および市場性を提供する、賦形剤の適切な選択を伴って開発される必要がある。

本明細書に記載する賦形剤は、それらの化学型、あるいは製剤中のそれらの機能的役割によって整理される。各賦形剤の種類を考察するとき、安定化方法の簡単な説明が提供される。本明細書に提供する教示および指導を与えられた場合、当業者は、望ましくないレベルに粘度を増加させることなく、賦形剤の量および範囲を容易に変更することができるであろう。賦形剤は、最終溶液の所望のオスモル濃度（すなわち、等張、低張もしくは高張）、ｐＨ、所望の安定性、凝集もしくは分解もしくは沈殿への耐性、凍結、凍結乾燥、もしくは高温の条件下での保護、または他の特性を達成するように選択されてもよい。種々の種類の賦形剤が当該技術分野で既知である。例示的な賦形剤としては、塩、アミノ酸、他の等張化剤、界面活性剤、安定剤、充填剤、抗凍結剤、リオプロテクタント、抗酸化剤、金属イオン、キレート剤、および／または防腐剤が挙げられる。

さらに、特定の賦形剤が、製剤中で、例えば、パーセント（％）ｗ／ｖによって報告される場合、当業者は、その賦形剤の同等のモル濃度もまた考慮されることを認識するであろう。

Ａ．緩衝液
最適な安定性のｐＨ範囲は、予備処方研究中の早期に特定される必要がある。加速安定性試験および熱量測定スクリーニング等のいくつかの方法が、この試みに有用であることが証明されている（Ｒｅｍｍｅｌｅ Ｒ．Ｌ．Ｊｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３８（１６）：５２４１−７（１９９９））。いったん製剤が仕上げられると、薬物製品は、その保存可能期間全体を通して、所定の仕様内で製造および維持されなければならない。したがって、ほとんどの場合、緩衝剤が製剤中のｐＨを調整するために採用される。

タンパク質製剤中の緩衝液として、有機酸、リン酸塩、およびトリスが通常採用されてきた（表１）。緩衝種の緩衝能は、ｐＫａに等しいｐＨで最大であり、ｐＨがこの値から増加または減少するにつれて減少する。緩衝能の９０％は、そのｐＫａの１ｐＨ単位内に存在する。緩衝能はまた、緩衝液濃度の増加と比例的に増加する。

緩衝液を選択する時に、いくつかの要因が考慮される必要がある。何よりもまず、緩衝種およびその濃度は、そのｐＫａおよび所望の製剤ｐＨに基づき定義される必要がある。緩衝液がタンパク質薬物、他の製剤賦形剤と適合し、いかなる分解反応も触媒しないことを確実にすることも、同様に重要である。近年、クエン酸塩およびコハク酸塩等のポリアニオン系カルボン酸塩緩衝液が、タンパク質の側鎖残基と共有結合付加体を形成することが示されている。考慮されるべき第３の重要な特徴は、緩衝液が誘発し得る刺痛および刺激の感覚である。例えば、クエン酸塩は、注射時に刺痛を引き起こすことが知られている（Ｌａｕｒｓｅｎ Ｔ，ｅｔ ａｌ．，Ｂａｓｉｃ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ．，９８（２）：２１８−２１（２００６））。製剤が投与時に血液中に急速に希釈される、静脈内経路によって投与される場合よりも、薬液が比較的長い期間にわたって部位に留まる、皮下および筋肉内経路を介して投与される薬物に対して、刺痛および刺激の可能性はより大きい。直接静脈注射によって投与される製剤に対して、緩衝液（およびいかなる他の製剤成分）の総量は、監視される必要がある。例えば、リン酸カリウム緩衝液の形態で投与されるカリウムイオンが、患者における心臓血管系作用を誘発する可能性があることが報告されている（Ｈｏｌｌａｎｄｅｒ−Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ ＪＣ，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｆａｍ．Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ．，７３（２）：２８３−９０（２００６））。
表１：一般的に使用される緩衝剤およびそれらのｐＫａ値

本製剤中に存在する緩衝系は、生理学的に適合するように、かつ所望のｐＨを維持するように選択される。

ｐＨ緩衝化合物は、所与のレベルで製剤のｐＨを維持するために好適な任意の量で存在してもよい。ｐＨ緩衝剤、例えば、酢酸塩は、０．１ｍＭ〜１０００ｍＭ（１Ｍ）の濃度で存在してもよい。一実施形態では、ｐＨ緩衝剤は、少なくとも０．１、０．５、０．７、０．８、０．９、１．０、１．２、１．５、１．７、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、５００、７００、または９００ｍＭである。別の実施形態では、ｐＨ緩衝剤の濃度は、１、１．２、１．５、１．７、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、または９０ｍＭ〜１００ｍＭである。さらに別の実施形態では、ｐＨ緩衝剤の濃度は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、または４０ｍＭ〜５０ｍＭである。さらに別の実施形態では、ｐＨ緩衝剤の濃度は、１０ｍＭである。

本明細書に示される、製剤を緩衝するために使用される他の例示的なｐＨ緩衝剤としては、グリシン、グルタミン酸塩、コハク酸塩、リン酸塩、酢酸塩、およびアスパラギン酸塩が挙げられるがこれらに限定されない。ヒスチジンおよびグルタミン酸等のアミノ酸もまた、緩衝剤として使用することができる。

Ｂ．安定剤および充填剤
安定剤は、抗凍結剤、リオプロテクタント、およびガラス形成剤としての機能を果たすことができる化合物群を含む。抗凍結剤は、低温での凍結中または凍結状態において、タンパク質を安定化させるように作用する。リオプロテクタントは、凍結乾燥の脱水段階中にタンパク質の天然様配座特性を保つことによって、タンパク質を凍結乾燥固形投薬形態で安定化させる。ガラス状態特性は、温度の関数としてのそれらの緩和特性に応じて、「頑丈」または「脆弱」に分類されてきた。抗凍結剤、リオプロテクタント、およびガラス形成剤が、安定性を与えるために、タンパク質と同じ相のままであることが重要である。糖、ポリマー、およびポリオールは、このカテゴリーに入り、時に全ての３つの役割を果たすことができる。

ポリオールは、糖（例えば、マンニトール、スクロース、ソルビトール）、ならびに他の多価アルコール（例えば、グリセロールおよびプロピレングリコール）を含む、賦形剤群を包含する。ポリマーのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）は、このカテゴリーに含まれる。ポリオールは、液体および凍結乾燥非経口タンパク質製剤の両方において、安定化賦形剤および／または等張性剤として一般的に使用される。ポリオールは、物理的および化学的分解経路の両方からタンパク質を保護することができる。

例示的なＣ３−Ｃ６ポリオールとしては、プロピレングリコール、グリセリン（グリセロール）、トレオース、トレイトール、エリトロース、エリトリトール、リボース、アラビノース、アラビトール、リキソース、マルチトール、ソルビトール、ソルボース、グルコース、マンノース、マンニトール、レブロース、デキストロース、マルトース、トレハロース、フルクトース、キシリトール、イノシトール、ガラクトース、キシロース、フルクトース、スクロース、１，２，６−ヘキサントリオール等が挙げられる。高次糖としては、デキストラン、プロピレングリコール、またはポリエチレングリコールが挙げられる。フルクトース、マルトース、またはガラクトース等の還元糖は、非還元糖よりも容易に酸化する。糖アルコールのさらなる例は、グルシトール、マルチトール、ラクチトール、またはイソマルツロースである。さらなる例示的なリオプロテクタントとしては、グリセリンおよびゼラチンが挙げられ、糖としては、メリビオース、メレジトース、ラフィノース、マンノトリオース、およびスタキオースが挙げられる。還元糖の例としては、グルコース、マルトース、ラクトース、マルツロース、イソマルツロース、およびラクツロースが挙げられる。非還元糖の例としては、糖アルコールおよび他の直鎖多価アルコールから選択されるポリヒドロキシ化合物の非還元グリコシドが挙げられる。モノグリコシドとしては、ラクトース、マルトース、ラクツロース、およびマルツロース等の二糖類の還元によって得られる化合物が挙げられる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載する製剤はまた、製剤に添加される安定剤（または安定剤の組み合わせ）を含む。「安定剤」という用語は、水性および固体状態での化学的分解 （例えば、自己消化、脱アミド化、酸化等）と同様に、凝集または他の物理的分解を防止することができる賦形剤を意味する。医薬組成物中で従来採用される安定剤としては、スクロース；トレハロース；マンノース；マルトース；ラクトース；グルコース；ラフィノース；セロビオース；ゲンチオビオース；イソマルトース；アラビノース；グルコサミン；フルクトース；マンニトール；ソルビトール；グリシン；アルギニンＨＣＬ；デキストラン、でんぷん、ヒドロキシエチルでんぷん、シクロデキストリン、Ｎ−メチルピロリデン、セルロース、およびヒアルロン酸等を含む、ポリヒドロキシ化合物；塩化ナトリウム（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖｅｌｏｐ．Ｂｉｏｌ．Ｓｔａｎｄａｒｄ ７４：２２５，（１９９１））が挙げられるがこれらに限定されない。一実施形態では、安定剤は、約０％〜約４０％ｗ／ｖの濃度で取り込まれる。別の実施形態では、安定剤は、少なくとも０．５、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、３０、または４０％ｗ／ｖの濃度で取り込まれる。別の実施形態では、安定剤は、約１、２、３、４、５、６、７、８、９％〜約１０％ｗ／ｖの濃度で取り込まれる。さらに別の実施形態では、安定剤は、約２％〜約６％ｗ／ｖの濃度で取り込まれる。さらに別の実施形態では、安定剤は、約４％ｗ／ｖの濃度で取り込まれる。さらに別の実施形態では、安定剤は、約６％ｗ／ｖの濃度で取り込まれる。

必要に応じて、本製剤はまた、凍結乾燥「ケーキ」を形成するのに好適な、適量の充填剤およびオスモル濃度調整剤も含む。充填剤は、結晶性（例えば、マンニトール、グリシン）または非晶質（例えば、スクロース、デキストラン等のポリマー、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロース）のいずれかであってもよい。他の例示的な充填剤としては、ラクトース、ソルビトール、トレハロース、またはキシリトールが挙げられる。さらなる実施形態では、充填剤は、約０％〜約１０％ｗ／ｖの濃度で取り込まれる。別の実施形態では、充填剤は、少なくとも０．２、０．５、０．７、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、または９．５％ｗ／ｖの濃度で取り込まれる。さらなる実施形態では、充填剤は、機械的および医薬的に好適なケーキを生成するように、約１、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５％〜５．０％ｗ／ｖの濃度で取り込まれる。

Ｃ．界面活性剤
タンパク質分子は、空気−液体、バイアル−液体、および液体−液体（シリコーン油）の界面において、それらに吸着および変性を起こしやすくさせる表面と相互作用する傾向が強い。この分解経路は、タンパク質濃度に反比例して決まり、表面への吸着を介して、溶性および不溶性タンパク質凝集体の形成または溶液からのタンパク質の損失のいずれかをもたらすことが認められている。容器表面の吸着に加えて、製品の配送および取扱中に起こり得るように、物理的撹拌によって表面誘起分解が悪化する。

界面活性剤は、表面誘起分解を防止するために、タンパク質製剤中に一般的に使用される。界面活性剤は、界面位置に対してタンパク質との競合に勝つ能力を有する、両親媒性分子である。界面活性剤分子の疎水性部分は、界面位置（例えば、空気／液体）を占め、一方で、分子の親水性部分は、バルク溶媒に配向した状態のままである。十分な濃度（典型的には、だいたい洗剤の臨界ミセル濃度）で、界面活性剤分子の表面層は、界面における吸着からタンパク質分子を防ぐ働きをする。それによって、表面誘起分解は最小限に抑えられる。もっとも一般的に使用される界面活性剤は、ソルビタンポリエトキシレートの脂肪酸エステル、すなわち、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０ （例えば、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）、Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）、Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））である。２つは、それぞれ、Ｃ−１２およびＣ−１８と、分子に疎水性を与える脂肪族鎖の長さのみが異なる。したがって、ポリソルベート８０は、ポリソルベート２０よりも表面活性であり、より低い臨界ミセル濃度を有する。界面活性剤ポロキサマー１８８もまた、Ｇｏｎａｌ−Ｆ（登録商標）、Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎ（登録商標）、およびＯｖｉｄｒｅｌ（登録商標）等のいくつかの市販されている液体製品中で使用されてきた。

洗剤はまた、タンパク質の熱力学的立体配座安定性に影響を及ぼす可能性がある。ここでまた、所与の賦形剤の効果は、タンパク質特異的である。例えば、ポリソルベートは、いくつかのタンパク質の安定性を低減し、他の安定性を増加させることが示されてきた。洗剤のタンパク質不安定化は、部分的または全体的に変性したタンパク質の状態との特異的結合に関与し得る洗剤分子の疎水性尾部の観点から、理論的に説明され得る。これらの種類の相互作用は、立体配座平衡のより膨張したタンパク質の状態への移行を引き起こし得る（すなわち、結合するポリソルベートを補完してタンパク質分子の疎水性部分の露出を増加させる）。あるいは、タンパク質の天然状態がいくつかの疎水性表面を示す場合、天然状態に結合する洗剤は、その立体配座を安定化させ得る。

ポリソルベートの別の特徴は、それらが本質的に酸化分解を起こしやすい点である。しばしば、原材料として、それらは、タンパク質残基側鎖、特に、メチオニンの酸化を引き起こすのに十分な量の過酸化物を含有する。安定剤の添加から生じる酸化損傷の可能性は、最低有効濃度の賦形剤が製剤中に使用されるべきであるという点を強調する。界面活性剤に関して、所与のタンパク質に対する有効濃度は、安定化機構によって決まる。界面活性剤の安定化機構が表面変性の防止に関連する場合、有効濃度がだいたい洗剤の臨界ミセル濃度になることが想定されている。反対に、安定化機構が特異的なタンパク質−洗剤相互作用と関連する場合、有効な界面活性剤濃度は、タンパク質濃度および相互作用の化学量論に関連する（Ｒａｎｄｏｌｐｈ Ｔ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１３：１５９−７５（２００２））。

また、凍結および乾燥中の表面関連凝集現象を防止するために、適量の界面活性剤が添加されてもよい（Ｃｈａｎｇ，Ｂ，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８５：１３２５，（１９９６））。例示的な界面活性剤としては、天然のアミノ酸に由来する界面活性剤を含む、陰イオン、陽イオン、非イオン、双性イオン、および両性界面活性剤が挙げられる。陰イオン界面活性剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウムおよびスルホン酸ジオクチルナトリウム、ケノデオキシコール酸、Ｎ−ラウロイルサルコシンナトリウム塩、ドデシル硫酸リチウム、１−オクタンスルホン酸ナトリウム塩、コール酸ナトリウム水和物、デオキシコール酸ナトリウム、およびグリコデオキシコール酸ナトリウム塩が挙げられるがこれらに限定されない。陽イオン界面活性剤としては、塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム一水和物、および臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウムが挙げられるがこれらに限定されない。双性イオン界面活性剤としては、ＣＨＡＰＳ、ＣＨＡＰＳＯ、ＳＢ３−１０、およびＳＢ３−１２が挙げられるがこれらに限定されない。非イオン界面活性剤としては、ジギトニン、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１１４、ＴＷＥＥＮ−２０、およびＴＷＥＥＮ−８０が挙げられるがこれらに限定されない。別の実施形態では、界面活性剤としては、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン水素化ヒマシ油１０、４０、５０、および６０、モノステアリン酸グリセロール、ポリソルベート４０、６０、６５、および８０、大豆レシチンおよび他のリン脂質（ＤＯＰＣ、ＤＭＰＧ、ＤＭＰＣ、およびＤＯＰＧ等）、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロースおよびカルボキシメチルセルロースが挙げられる。

本明細書に記載する製剤はさらに、個々に、あるいは異なる割合の混合物として、これらの界面活性剤を含んでもよい。一実施形態では、界面活性剤は、約０％〜約５％ｗ／ｖの濃度で取り込まれる。別の実施形態では、界面活性剤は、少なくとも０．００１、０．００２、０．００５、０．００７、０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．７、０．８、０．９、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、または４．５％ｗ／ｖの濃度で取り込まれる。別の実施形態では、界面活性剤は、約０．００１％〜約０．５％ｗ／ｖの濃度で取り込まれる。さらに別の実施形態では、界面活性剤は、約０．００４、０．００５、０．００７、０．０１、０．０５、または０．１％ｗ／ｖ〜約０．２％ｗ／ｖの濃度で取り込まれる。さらに別の実施形態では、界面活性剤は、約０．０１％〜約０．１％ｗ／ｖの濃度で取り込まれる。

いくつかの実施形態では、粘度低下は、比較的ほとんどない、または全くない界面活性剤、例えば、０．１％以下の全界面活性剤、または０．０５％以下、または０．０１％以下で達成される。

Ｄ．アミノ酸
アミノ酸は、緩衝液、充填剤、安定剤、および抗酸化剤として、タンパク質製剤において多目的に利用されてきた。ヒスチジンおよびグルタミン酸は、タンパク質製剤を、それぞれ５．５〜６．５および４．０〜５．５のｐＨ範囲で緩衝するために採用される。ヒスチジンのイミダゾール基は、ｐＫａ＝６．０を有し、グルタミン酸側鎖のカルボキシル基は、４．３のｐＫａを有し、それらを、それらの個々のｐＨ範囲における緩衝に好適なものにする。グルタミン酸は、いくつかの製剤中に見られる（例えば、Ｓｔｅｍｇｅｎ（登録商標））。ヒスチジンは、市販されているタンパク質製剤中に一般的にみられる（例えば、Ｘｏｌａｉｒ（登録商標）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）、Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｅ（登録商標））。それは、注射時に刺痛を起こすことが既知の緩衝液である、クエン酸塩の良い代替品を提供する。興味深いことに、ヒスチジンはまた、液体および凍結乾燥の提示の両方において、高濃度で使用される場合、安定効果を有することも報告されている（Ｃｈｅｎ Ｂ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．，２０（１２）：１９５２−６０（２００３））。ヒスチジン（最大で６０ｍＭ）はまた、この抗体の高濃度製剤の粘度を低減することが認められた。しかしながら、同一試験において、著者らは、ステンレス鋼容器中の抗体の凍結融解試験中、ヒスチジン含有製剤における凝集および変色の増加を認めた。著者らは、これが、鋼製容器の腐食から溶出された鉄イオンの効果によるものであると考えた。ヒスチジンに関する別の注意点は、それが、金属イオンの存在下で光酸化を受けるということである（Ｔｏｍｉｔａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，８（１２）：５１４９−６０（１９６９））。製剤中の抗酸化剤としてのメチオニンの使用は、有望と思われる。それは、多数の酸化的ストレスに対して有効であることが認められている（Ｌａｍ ＸＭ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．，８６（１１）：１２５０−５（１９９７））。

アミノ酸であるグリシン、プロリン、セリン、およびアラニンは、タンパク質を安定化させる。グリシンもまた、凍結乾燥製剤（例えば、Ｎｅｕｍｅｇａ（登録商標）、Ｇｅｎｏｔｒｏｐｉｎ（登録商標）、Ｈｕｍａｔｒｏｐｅ（登録商標））中で一般的に使用される充填剤である。アルギニンは、凝集を阻害するのに有効な薬剤であることが示されており、液体および凍結乾燥製剤の両方において使用されてきた（例えば、Ａｃｔｉｖａｓｅ（登録商標）、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）、Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標）液体）。

Ｅ．抗酸化剤
タンパク質残基の酸化は、多数の異なる原因から生じる。特定の抗酸化剤の添加以外に、酸化的なタンパク質の損傷の防止は、大気酸素、温度、光への曝露、および化学汚染等、製造工程および製品の保存全体にわたった多数の要因の慎重な管理を伴う。最も一般的に使用される医薬用抗酸化剤は、還元剤、酸素／フリーラジカルスカベンジャー、またはキレート剤である。治療用タンパク質製剤中の抗酸化剤は、水溶性でなければならず、製品の保存可能期間を通して活性な状態を保たなければならない。還元剤および酸素／フリーラジカルスカベンジャーは、溶液中の活性酸素種を除去することによって機能する。ＥＤＴＡ等のキレート剤は、フリーラジカル形成を促進する微量金属汚染物を結合することによって効果的になり得る。例えば、金属イオンによって触媒されるシステイン残基の酸化を阻害するために、酸性繊維芽細胞増殖因子の液体製剤中でＥＤＴＡが使用された。ＥＤＴＡは、Ｋｉｎｅｒｅｔ（登録商標）およびＯｎｔａｋ（登録商標）等の市販の製品中に使用されてきた。

しかしながら、抗酸化剤それ自体が、タンパク質に対して他の共有結合的または物理的な変化を誘導する可能性がある。多くのそのような事例が、文献に報告されている。還元剤（グルタチオン等）は、分子内ジスルフィド結合の破壊を引き起こす可能性があり、それは、ジスルフィドのシャフリングをもたらし得る。遷移金属イオンの存在下で、アスコルビン酸およびＥＤＴＡは、多数のタンパク質およびペプチド中でメチオニン酸化を促進することが示されている（Ａｋｅｒｓ ＭＪ，ａｎｄ Ｄｅｆｅｌｉｐｐｉｓ ＭＲ．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ａｓ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ．Ｉｎ：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ．Ｓｖｅｎ Ｆｒｏｋｊａｅｒ，Ｌａｒｓ Ｈｏｖｇａａｒｄ，ｅｄｉｔｏｒｓ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ．Ｔａｙｌｏｒ ａｎｄ Ｆｒａｎｃｉｓ，ＵＫ（１９９９））、Ｆｒａｎｓｓｏｎ Ｊ．Ｒ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．８６（９）：４０４６−１０５０（１９９７）、Ｙｉｎ Ｊ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．，２１（１２）：２３７７−８３（２００４））。チオ硫酸ナトリウムは、光および温度によって誘発されたｒｈｕＭａｂ ＨＥＲ２中のメチオニン酸化のレベルを低減することが報告されている。しかしながら、本研究では、チオ硫酸−タンパク質付加体の形成も報告されている（Ｌａｍ ＸＭ，Ｙａｎｇ ＪＹ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．８６（１１）：１２５０−５（１９９７））。適切な抗酸化剤の選択は、タンパク質の特異的なストレスおよび感受性に従って行われる。

Ｆ．金属イオン
一般に、遷移金属イオンは、タンパク質中の物理的および化学的分解反応を触媒する可能性があるため、タンパク質製剤中において望ましくない。しかしながら、特定の金属イオンが、タンパク質に対する補因子である場合には製剤中に、配位錯体を形成する場合にはタンパク質の懸濁液製剤（例えば、インスリンの亜鉛懸濁液）中に含まれる。近年、アスパラギン酸のイソアスパラギン酸への異性化を阻害するために、マグネシウムイオン（１０〜１２０ｍＭ）の使用が提案されている（国際公開第ＷＯ２００４／０３９３３７号）。

金属イオンがタンパク質中に安定性または増加した活性を与える２つの例は、ヒトデオキシリボヌクレアーゼ（ｒｈＤＮａｓｅ、Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ（登録商標））および第ＶＩＩＩ因子である。ｒｈＤＮａｓｅの場合、Ｃａ^＋２イオン（最大で１００ｍＭ）は、特異的結合部位を通じて、酵素の安定性を増加させた（Ｃｈｅｎ Ｂ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．，８８（４）：４７７−８２（１９９９））。実際、ＥＧＴＡで溶液からカルシウムイオンを除去することによって、脱アミド化および凝集の増加が引き起こされた。しかしながら、この効果は、Ｃａ^＋２イオンを用いた場合のみ認められた。他の二価陽イオン（Ｍｇ^＋２、Ｍｎ^＋２、およびＺｎ^＋２）は、ｒｈＤＮａｓｅを不安定化させることが認められた。同様の効果が第ＶＩＩＩ因子において認められた。Ｃａ^＋２およびＳｒ^＋２イオンがタンパク質を安定化させた一方で、Ｍｇ^＋２、Ｍｎ^＋２およびＺｎ^＋２、Ｃｕ^＋２、ならびにＦｅ^＋２等のイオンは、酵素を不安定化させた（Ｆａｔｏｕｒｏｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．，１５５，１２１-１３１（１９９７）。第ＶＩＩＩ因子を用いた別個の試験において、Ａｌ^＋３イオンの存在下で、凝集速度の有意な増加が認められた（Ｄｅｒｒｉｃｋ ＴＳ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，９３（１０）：２５４９−５７（２００４））。著者らは、緩衝塩等の他の賦形剤が、しばしば、Ａｌ^＋３イオンで汚染されていることを指摘しており、製剤化された製品中で、適切な品質の賦形剤を使用する必要性を説明している。

Ｇ．防腐剤
同一容器から２回以上の抽出を伴う複数回使用の非経口製剤を開発する場合、防腐剤が必要である。それらの主な機能は、微生物増殖を阻害し、薬物製品の保存可能期間または使用期間を通じて、製品の無菌性を確実にすることである。一般に使用されている防腐剤としては、フェノール、ベンジルアルコール、メタクレゾール、メチルパラベンまたはプロピルパラベン等のアルキルパラベン、塩化ベンザルコニウム、および塩化ベンゼトニウムが挙げられる。抗菌防腐活性を有する化合物の他の例としては、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキサメトニウムが挙げられる。他の種類の防腐剤としては、ブチルアルコール、フェノール、ベンジルアルコール等の芳香族アルコール、アテコール、レソルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノールが挙げられる。防腐剤は、長い使用歴を有するが、防腐剤を含むタンパク質製剤の開発は、困難なであり得る。防腐剤は、ほとんどの場合、タンパク質に対して不安定化効果（凝集）を有し、これは、複数回投与タンパク質製剤における防腐剤の使用を限定する主要な原因となっている（Ｒｏｙ Ｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．，９４（２）：３８２−９６（２００５））。

複数回使用のペン型注射器の提示は、保存製剤を含む。例えば、保存されたｈＧＨの製剤は、現在市場で入手可能である。Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎ（登録商標）（液体、Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ）、Ｎｕｔｒｏｐｉｎ ＡＱ（登録商標）（液体、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、およびＧｅｎｏｔｒｏｐｉｎ（凍結乾燥−デュアルチャンバカートリッジ、Ｐｈａｒｍａｃｉａ ＆ Ｕｐｊｏｈｎ）は、フェノールを含有し、一方で、Ｓｏｍａｔｒｏｐｅ（登録商標）（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ）は、ｍ−クレゾールを伴って製剤化される。

いくつかの態様が、保存投薬形態の製剤開発中に考慮される必要がある。薬物製品中の有効防腐剤濃度は、最適化されなければならない。これは、タンパク質安定性を低下させずに、抗菌有効性を与える濃度範囲を有する投薬形態中の所与の防腐剤を試験する必要がある。例えば、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）を用いて、インターロイキン−１受容体（Ｉ型）に対する液体製剤の開発において、３つの防腐剤を成功裏にスクリーニングした。市販の製品で一般的に使用される濃度で、安定性に対する防腐剤の影響に基づき、防腐剤を順位付けした（Ｒｅｍｍｅｌｅ ＲＬ Ｊｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ．，１５（２）：２００−８（１９９８））。

いくつかの防腐剤は、注射部位反応を引き起こす可能性があり、それは、防腐剤を選択する場合に検討する必要がある別の要因である。Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎ中の防腐剤および緩衝液の評価に焦点を当てた臨床試験において、ｍ−クレゾールを含有する製剤と比較して、フェノールおよびベンジルアルコールを含有する製剤中では、疼痛知覚がより低いことが認められた（Ｋａｐｐｅｌｇａａｒｄ Ａ．Ｍ．，Ｈｏｒｍ Ｒｅｓ．６２ Ｓｕｐｐｌ ３：９８−１０３（２００４））。興味深いことに、一般的に使用される防腐剤のうち、ベンジルアルコールは、麻酔作用がある（Ｍｉｎｏｇｕｅ ＳＣ，ａｎｄ Ｓｕｎ ＤＡ．，Ａｎｅｓｔｈ Ａｎａｌｇ．，１００（３）：６８３−６（２００５））。

ＩＶ．キット
さらなる態様として、対象への投与のためのそれらの使用を容易にする方法でパッケージ化される、本明細書に記載する１つ以上の製剤を含む、キットを本明細書に記載する。一実施形態では、そのようなキットは、密閉ボトル、管、使い捨てもしくは複数回使用バイアル、充填済みシリンジ、または充填済み注入デバイス等の容器にパッケージ化される、本明細書に記載する製剤（例えば、そこに記載される抗体のいずれかを含む組成物）を含み、任意で、その方法の実施における化合物または組成物の使用を説明するラベルが、容器に貼付されるか、またはパッケージに含まれる。一態様では、化合物または組成物は、単位投薬形態でパッケージ化される。キットはさらに、特定の投与経路に従って、組成物を投与するのに好適なデバイスを含んでもよい。好ましくは、キットは、本明細書に記載する抗体、または本明細書に記載する製剤の使用を説明するラベルを含む。

Ｖ．投与量
本明細書に記載する状態を治療するための方法に関与する投薬計画は、薬物の作用を修正する種々の要因、例えば、患者の年齢、状態、体重、性別、および食習慣、任意の感染症の重症度、投与時間、ならびに他の臨床的因子を考慮して、主治医によって決定される。種々の態様では、毎日の処方は、体重１キログラム当たり０．１〜５０ｍｇの抗体の調製物の範囲である（化学修飾なしで、タンパク質のみの質量を計算する）。いくつかの実施形態では、投与量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、または約０．５〜１０ｍｇ／ｋｇである。

本製剤は、概して、非経口的に、例えば、静脈内に、皮下に、筋肉内に、エアロゾルを介して（肺内もしくは吸入投与）、または長時間放出用のデポーを介して投与される。いくつかの実施形態では、本製剤は、初回にボーラス、続いて、持続注入によって静脈内投与され、薬物製品の治療的循環レベルを維持する。他の実施形態では、本製剤は、１回用量として投与される。当業者は、良好な医療行為および個々の患者の臨床状態によって決定されるように、有効投与量および投与計画を容易に最適化するであろう。投薬頻度は、薬剤の薬物動態パラメータおよび投与経路によって決まる。最適な薬学的製剤は、投与経路および所望の投与量に応じて、当業者によって決定される。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ'ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ Ｅｄ．（１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ １８０４２）ｐａｇｅｓ１４３５−１７１２を参照されたく、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。そのような製剤は、投与される薬剤の物理的状態、安定性、生体内放出速度、および生体内クリアランス速度に影響を与える可能性がある。投与経路に応じて、好適な用量は、体重、体表面積、または器官の大きさに従って計算されてもよい。上記の製剤のそれぞれを伴う、治療のための適切な投与量を決定するために必要な計算のさらなる精緻化は、特に、本明細書に開示する投与量情報およびアッセイ、ならびに上記のヒト臨床試験で認められる薬物動態データを考慮して、必要以上の実験をすることなく、当業者によって日常的に行われる。適切な投与量は、適切な用量反応データと併せて、血中濃度投与量を決定するための確立されたアッセイの使用によって確認され得る。最終投薬計画は、薬物の作用を修正する種々の要因、例えば、薬物の特異的活性、患者の損傷および反応性の重症度、患者の年齢、状態、体重、性別、および食習慣、任意の感染症の重症度、投与時間、ならびに他の臨床的因子を考慮して、主治医によって決定される。研究を実施するにつれて、種々の疾病および状態に対する適切な投与量レベルおよび治療期間に関して、さらなる情報が明らかになるであろう。

ＶＩ．製剤の治療的使用
本明細書に記載する製剤は、異常な骨芽細胞または破骨細胞活性と関連する骨関連障害等の骨関連障害を治療または予防するのに有用である。いくつかの実施形態では、軟骨形成不全症、鎖骨頭蓋骨形成不全症、内軟骨腫症、線維性骨異形成、ゴーシェ病、低リン酸血症性くる病、マルファン症候群、遺伝性多発性外骨腫、神経線維腫症、骨形成不全症、大理石骨病、骨斑紋症、硬化病変、偽関節、化膿性骨髄炎、歯周病、抗てんかん薬誘発性骨量減少、原発性もしくは二次性副甲状腺機能亢進症、家族性副甲状腺機能亢進症候群、無重力誘発性骨量減少、男性の骨粗鬆症、閉経後骨量減少、変形性関節炎、腎性骨ジストロフィー、骨の浸潤性疾患、口腔の骨量減少、顎骨壊死、若年性パジェット病、メロレオストーシス、代謝性骨疾患、肥満細胞症、鎌状赤血球貧血／病、臓器移植関連骨量減少、腎臓移植関連骨量減少、全身性エリテマトーデス、強直性脊椎炎、てんかん、若年性関節炎、サラセミア、ムコ多糖症、ファブリー病、ターナー症候群、ダウン症候群、クラインフェルター症候群、ハンセン病、ペルテス病、青年期特発性脊柱側弯症、乳児期発症多系統炎症性疾患、ウィンチェスター症候群、メンケス病、ウィルソン病、虚血性骨疾患（レッグカルペペルテス病および局所性移動性骨粗鬆症等）、貧血状態、ステロイドによって引き起こされる状態、グルココルチコイド誘発性骨量減少、ヘパリン誘発性骨量減少、骨髄障害、壊血病、栄養不良、カルシウム欠乏症、骨粗鬆症、骨減少症、アルコール依存症、慢性肝疾患、閉経後の状態、慢性炎症状態、関節リウマチ、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、炎症性大腸炎、クローン病、希発月経、無月経、妊娠、糖尿病、甲状腺機能亢進症、甲状腺障害、副甲状腺障害、クッシング病、末端肥大症、性腺機能低下症、運動不足もしくは非活動、反射性交感神経性ジストロフィー症候群、局所性骨粗鬆症、骨軟化症、関節置換術と関連する骨量減少、ＨＩＶと関連する骨量減少、成長ホルモンの減少と関連する骨量減少、嚢胞性線維症と関連する骨量減少、化学療法と関連する骨量減少、腫瘍誘発性骨量減少、癌と関連する骨量減少、ホルモン除去による骨量減少、多発性骨髄腫、薬物誘発性骨量減少、神経性無食欲症、疾患関連顔面骨量減少、疾患関連頭部骨量減少、疾患関連顎骨量減少、疾患関連頭蓋骨量減少、老化と関連する骨量減少、老化と関連する顔面骨量減少、老化と関連する頭部骨量減少、老化と関連する顎骨量減少、老化と関連する頭蓋骨量減少、または宇宙旅行と関連する骨量減少から成る群より選択される、骨関連障害を患う対象に製剤が投与される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載する製剤は、整形外科手術、歯科手術、インプラント手術、関節置換術、骨移植術、骨美容整形、ならびに骨折治癒、癒着不能治癒、遷延治癒、および顔面再建術等の骨修復における結果を改善するのに有用である。１つ以上の組成物が、処置、置換、移植、手術、または修復の前、間、および／または後に投与されてもよい。

本製剤は、有益な生物学的反応を達成するために、障害の対象を治癒する、または骨関連障害の発現から完全に保護する必要はない。本製剤は、骨関連障害またはその症状から全体的または部分的に保護する目的で、予防的に使用され得る。本製剤はまた、骨関連障害もしくはその症状を全体的または部分的に改善するために、または骨関連障害もしくはその症状のさらなる進行から全体的または部分的に保護するために、治療的に使用され得る。実際に、本発明の材料および方法は、骨ミネラル濃度を増加させ、増加した骨ミネラル濃度を長い期間にわたって維持するのに特に有用である。

例えば、約１ヶ月〜約１２ヶ月（例えば、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、または約１１ヶ月）の治療期間にわたって、本明細書に記載する製剤の１回以上の投与が実施されてもよい。いくつかの実施形態では、骨ミネラル濃度を維持するために、対象は、本製剤の１つ以上の用量を投与される。ここで使用される「骨ミネラル濃度を維持する」という用語は、本製剤の初回投与によって生じる骨ミネラル濃度の増加が、約６ヶ月、約９ヶ月、約１年、約１８ヶ月、約２年、または患者の一生にわたって、約１％〜約５％を超えて減少しないことを意味する。患者は、骨密度を増加させ、骨密度を維持するために、別の治療期を必要とし得ることが理解されるであろう。

さらに、特定の対象に対して選択された治療計画に応じて、本製剤の複数回用量を投与すること、または用量の投与の間隔をあけることが有利であり得る。本製剤は、１年またはそれ以下の期間にわたって、定期的に投与することができる（例えば、９ヶ月以下、６ヶ月以下、または３ヶ月以下）。この点に関して、本製剤は、約７日、または２週間、または３週間、または１か月、または５週間、または６週間、または７週間、または２ヶ月、または９週間、または１０週間、または１１週間、または３ヶ月、または１３週間、または１４週間、または１５週間、または４ヶ月、または１７週間、または１８週間、または１９週間、または５ヶ月、または２１週間、または２２週間、または２３週間、または６ヶ月、または１２ヶ月に１回、ヒトに投与することができる。

ＶＩＩ．併用治療
同一の病原体または生化学的経路を標的とする２つ以上の薬剤を組み合わせることによる病状の治療は、時に、治療上関連のある用量の各薬剤の単独の使用と比較して、より大きい有効性および副作用の減少をもたらす。場合によっては、薬物併用の有効性は、相加的であるが（併用の有効性は、各薬物の単独の効果の合計にほぼ等しい）、他の場合では、効果は、相乗的である（併用の有効性は、単独で与えられる各薬物の効果の合計よりも大きい）。ここで使用される「併用治療」という用語は、２つの化合物を同時に、例えば、並行して、または化合物のうちの１つが最初に投与され、続いて第２の薬剤が投与される方法で、例えば連続して、送達することができることを意味する。所望の結果は、１つ以上の症状の主観的な緩和、または投与量の受容者における客観的に識別できる改善のいずれかであり得る。

いくつかの実施形態では、骨ミネラル濃度の減少の治療のための標準治療剤とともに、本製剤が投与される。ここで使用される「標準治療」という用語は、ある種類の疾患と診断されたある特定の種類の患者に対して、概して、臨床医によって認められる治療を指す。いくつかの実施形態では、標準治療剤は、再吸収阻害薬、骨形成剤、エストロゲン受容体拮抗薬（ラロキシフェン、バゼドキシフェン、およびラソフォキシフェンが挙げられるがこれらに限定されない）、ならびに破骨細胞に対して刺激作用を有する薬物から成る群より選択される。いくつかの実施形態では、再吸収阻害薬としては、ビスホスホネート（アレンドロネート、リセドロネート、イバンドロネート、およびゾレドロネートが挙げられるがこれらに限定されない）、エストロゲンまたはエストロゲン類似体、選択的エストロゲン受容体モジュレータ（ＳＥＲＭ）およびカルシウム源、チボロン、カルシトニン、カルシトリオール、ならびにホルモン補充療法が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、骨形成剤としては、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）またはそのペプチド断片、ＰＴＨ関連タンパク質（ＰＴＨｒｐ）、骨形成タンパク質、オステオゲニン、ＮａＦ、ＰＧＥ_２アゴニスト、スタチン、およびＲＡＮＫリガンド（ＲＡＮＫＬ）が挙げられるがこれらに限定されない。いくつかの実施形態では、破骨細胞に対して刺激作用を有する薬物としては、ビタミンＤ、またはビタミンＤ誘導体もしくはその模倣体が挙げられるがこれらに限定されない。

いくつかの実施形態では、本製剤は、本明細書に記載する標準治療剤の治療が禁忌である場合、対象に投与される。
（実施例）
実施例１−酢酸カルシウムによる、スクレロスチン抗体製剤の有効粘度の低減
１０ｍＬの選択された抗スクレロスチン抗体（７５．７ｍｇ／ｍＬ）を、２リットルの１０ｍＭ Ｎａ（ＯＡｃ）および９％スクロースに対して、４℃で２時間透析した。選択された抗スクレロスチン抗体（７５．７ｍｇ／ｍＬ）を約１６０ｍｇ／ｍＬまで濃縮し、水で、約１４０ｍｇ／ｍＬおよび１２０ｍｇ／ｍＬまで希釈した。希釈試料の吸光度を、それぞれ、１２０、１４２、および１５７ｍｇ／ｍＬに決定した。

１０μＬの１．０Ｍ Ｃａ（ＯＡｃ）_２を、１ｍＬの１２０ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、および１６０ｍｇ／ｍＬの試料に添加した。試料の絶対粘度、ｐＨ、およびオスモル濃度を決定した（表２を参照されたい）。適合する試料カップの温度が一定の２５℃で循環水槽によって調整される、ＣＰＥ−４０スピンドルを用いた、Ｂｒｏｏｋｆｉｅｌｄ ＬＶ−ＤＶＩＩコーンプレート粘度計を使用して、試料（５００μＬ）の絶対粘度を測定した。

結果は、選択された抗体の液体組成物に添加した１０ｍＭのＣａ（ＯＡｃ）_２は、粘度を約半分低減した。抗体Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−１３、Ａｂ−１４、Ａｂ−１９、Ａｂ−２０、およびＡｂ−２３のそれぞれに対して、この実験を実施する。
実施例２−製剤調節
１０ｍＬの選択された抗スクレロスチン抗体（７５．７ｍｇ／ｍＬ）を、２リットルの１０ｍＭ Ｎａ（ＯＡｃ）、６％スクロースまたは４％スクロースに対して、４℃で２時間透析した。次いで、Ａｍｉｃｏｎを用いて、各スクロース製剤を約１４０ｍｇ／ｍＬまで濃縮し、次いで、標的濃度まで、水で希釈し戻した（すなわち、１２０ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、および１６０ｍｇ／ｍＬ）。希釈試料の吸光度値を、それぞれ、１２４ｍｇ／ｍＬ（４％スクロース）、１１９．５ｍｇ／ｍＬ（６％スクロース）、１３７．５ｍｇ／ｍＬ（４％スクロース）、および１４２ｍｇ／ｍＬ（６％スクロース）に決定した。

１０μＬの１．０Ｍ Ｃａ（ＯＡｃ）_２を１ｍＬの試料に添加した。試料の粘度、オスモル濃度、およびｐＨを決定した（表３を参照されたい）。

アッセイを以下のように反復した。１０ｍＬの選択された抗スクレロスチン抗体（７５．７ｍｇ／ｍＬ）を、２リットルの１０ｍＭ Ｎａ（ＯＡｃ）、６％スクロースまたは４％スクロースに対して、４℃で２時間透析した。次いで、Ａｍｉｃｏｎフィルタを用いて、各スクロース製剤を約１４０ｍｇ／ｍＬまで濃縮し、次いで、標的濃度まで、水で希釈し戻した（すなわち、７０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、および１２０ｍｇ／ｍＬ）。希釈試料の吸光度値を、それぞれ、７１ｍｇ／ｍＬ（４％スクロース）、６８．２ｍｇ／ｍＬ（６％スクロース）、９９．４ｍｇ／ｍＬ（４％スクロース）、１００．５（６％スクロース）、１２２ｍｇ／ｍＬ（４％スクロース）、および１１３ｍｇ／ｍＬ（６％スクロース）に決定した。

試料の粘度、オスモル濃度、およびｐＨを決定した。表４を参照されたい。

Ｃａ（ＯＡｃ）_２緩衝液のｐＨを５．２まで低下させることで、全ての最終製剤ｐＨを、５．２５〜５．３０７に保った。４％スクロース製剤は、等張範囲（２５０〜３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ）未満であったが、６％スクロース製剤は、等張範囲の中央値に近かった。

粘度の低減における１０ｍＭ Ｃａ（ＯＡｃ）_２を含む６％スクロースの効果をさらに評価するために、最大で１６０ｍｇ／ｍＬの抗スクレロスチン抗体のさらなる濃度で、上記のアッセイを反復した。

以下の濃度で、試料を上記の通り調製した：１２０ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、および１６０ｍｇ／ｍＬ。１０μＬの１．０Ｍ Ｃａ（ＯＡｃ）_２、ｐＨ５．２を試料のそれぞれに添加した。試料の粘度、オスモル濃度、およびｐＨを決定した。表５を参照されたい。

抗体Ａｂ−４、Ａｂ−５、Ａｂ−１３、Ａｂ−１４、Ａｂ−１９、Ａｂ−２０、およびＡｂ−２３のそれぞれに対して、上記の実験を実施する。
実施例３−他の高タンパク質濃度製剤中の酢酸カルシウムの効果
以下の実施例は、酢酸カルシウムが、スクレロスチン抗体以外に、高濃度のタンパク質を含有する製剤の粘度を低減するかどうかを判定した。

非スクレロスチン抗体＃１〜＃５を、それぞれ、１３１．６ｍｇ／ｍＬ、９４ｍｇ／ｍＬ、１１３．２ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、および１０６．３の濃度を有するように決定した。ここで使用される「非スクレロスチン抗体」という用語は、本明細書に記載するスクレロスチン抗体以外の抗体を意味する。

１０μＬの１．０Ｍ Ｃａ（ＯＡｃ）_２を、上記の１ｍＬの５つの試料に添加した。試料の粘度、ｐＨ、およびオスモル濃度を決定した（表６を参照されたい）。

酢酸カルシウムは、試料のいずれの粘度も有意に低減しなかった。
実施例４−高濃度抗スクレロスチン抗体製剤の粘度に対する非カルシウム塩の効果
非カルシウム塩が抗スクレロスチン抗体製剤の粘度を低減することが可能であるかどうかを判断するために、以下の実験を実施した。

選択された抗スクレロスチン抗体（上記の実施例１〜２と同一）を、約１３０ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。１０μＬの１．０Ｍ（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４または１．０Ｍ ＭｇＳＯ_４のいずれかを、１ｍＬの抗体試料に添加した。対照の粘度を、３０ｃＰと決定した。ＭｇＳＯ_４は、試料の粘度を有意に低減すると判断された（ＭｇＳＯ_４＋試料＝１６ｃＰ）。（ＮＨ_４）_２ＳＯ_４は、試料の粘度を有意に低減しなかった。
実施例５−高濃度抗スクレロスチン抗体製剤の粘度に対する他のカルシウム塩の効果
酢酸カルシウム以外のカルシウム塩が抗スクレロスチン抗体製剤の粘度を低減することが可能であるかどうかを判断するために、以下の実験を実施した。

選択された抗スクレロスチン抗体（上記の実施例１〜２と同一）を、約１２５ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。１０μＬの２５ｍＭ ＣａＣｌ_２または２５ｍＭ ＭｇＣｌ_２のいずれかを、１ｍＬの抗体試料に添加した。対照の粘度を、１８．５ｃＰと決定した。ＣａＣｌ_２およびＭｇＣｌ_２は、試料の粘度を有意に低減すると判断された（ＣａＣｌ_２＋試料＝９ｃＰおよびＭｇＣｌ_２＋試料＝８）。
実施例６−別の抗スクレロスチン抗体に対する酢酸カルシウムの効果
酢酸カルシウムが、上記の実施例１〜２とは異なる抗スクレロスチン抗体を含む、抗スクレロスチン抗体製剤の粘度を低減することが可能であるかどうかを判断するために、以下の実験を実施した。

選択された抗スクレロスチン抗体を、約１３１ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。１０μＬの１．０Ｍ Ｃａ（ＯＡｃ）_２を、１ｍＬの抗体試料に添加した。対照の粘度を、１７．３ｃＰと決定した。Ｃａ（ＯＡｃ）_２は、試料の粘度をわずかに低減すると判断された（１５．３ｃＰ）。

本発明の現在好ましい実施形態を考慮することによって、本発明の実施における多くの修正および変更が当業者に想到されることが予想される。したがって、本発明の範囲に対して設けられる唯一の制限は、添付の特許請求の範囲に記載されるものである。

本明細書で言及される、および／または出願データシートに列挙される、米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、海外特許、海外特許出願、および非特許刊行物の全ては、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本発明の特定の実施形態が例示目的で本明細書に記載されてきたが、上記から、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、種々の修正が行われてもよいことが理解されるであろう。
本発明はまた以下に関する。
[１]
（ａ）少なくとも７０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗スクレロスチン免疫グロブリンと、（ｂ）約１ｍＭ〜約２０ｍＭの範囲の濃度の酢酸カルシウムとを含む、約１０ｃＰ以下の絶対粘度を有する、滅菌液体製剤。
[２]
前記免疫グロブリンは、配列番号１４および／もしくは配列番号１２、または配列番号８６および／もしくは配列番号８４、または配列番号６８および／もしくは配列番号６６、または配列番号１５４および／もしくは配列番号１５２、または配列番号１８２および／もしくは配列番号１８０、または配列番号２０８および／もしくは配列番号２０７、または配列番号２１６および／もしくは配列番号２１４、または配列番号２３８および／もしくは配列番号２３６のアミノ酸配列を含む、[１]に記載の製剤。
[３]
（ｃ）約５ｍＭ〜約１５ｍＭの濃度の酢酸緩衝液、例えば、酢酸ナトリウムをさらに含む、[１]に記載の製剤。
[４]
（ａ）約７０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗スクレロスチン免疫グロブリンと、（ｂ）約１０ｍＭ〜約５０ｍＭの酢酸塩の範囲の濃度の酢酸塩および／または酢酸緩衝液とを含む、約１０ｃＰ以下の絶対粘度を有する、滅菌液体製剤であって、前記免疫グロブリンは、配列番号１４および／もしくは配列番号１２、または配列番号８６および／もしくは配列番号８４、または配列番号６８および／もしくは配列番号６６、または配列番号１５４および／もしくは配列番号１５２、または配列番号１８２および／もしくは配列番号１８０、または配列番号２０８および／もしくは配列番号２０７、または配列番号２１６および／もしくは配列番号２１４、または配列番号２３８および／もしくは配列番号２３６のアミノ酸配列を含む、滅菌液体製剤。
[５]
約３５０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の全オスモル濃度を有する、[１]〜[４]のいずれかに記載の製剤。
[６]
前記免疫グロブリンは、少なくとも１２０ｍｇ／ｍＬ、または任意で、１４０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、[１]〜[５]のいずれかに記載の製剤。
[７]
前記製剤の前記絶対粘度は、約８ｃＰ以下、または任意で、約６ｃＰ以下である、[１]〜[６]のいずれかに記載の製剤。
[８]
前記製剤は、約４％ｗ／ｖ〜約６％ｗ／ｖの範囲の量の、スクロースなどのポリオールをさらに含む、[１]〜[７]のいずれかに記載の製剤。
[９]
前記製剤は、約４．５〜約６、または任意で、約５〜約５．５の範囲のｐＨを有する、[１]〜[８]のいずれかに記載の製剤。
[１０]
タンパク質製剤の粘度を低減するための方法であって、約１ｍＭ〜約２０ｍＭの濃度の酢酸カルシウムを、抗スクレロスチン免疫グロブリン製剤に添加することを含み、前記製剤は、約７０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの濃度の免疫グロブリンを含み、前記酢酸カルシウムを含む前記製剤の前記粘度は、前記酢酸カルシウムを含まない抗体製剤の粘度と比較して低減される、方法。
[１１]
前記免疫グロブリンは、配列番号８６および／または配列番号８４のアミノ酸配列を含む、[１０]に記載の方法。
[１２]
（ａ）少なくとも７０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの濃度のＡｂ−５と、（ｂ）約１ｍＭ〜約２０ｍＭの範囲の濃度の酢酸カルシウムと、（ｃ）約４％ｗ／ｖ〜約６％ｗ／ｖの範囲の量の、例えばスクロース等のポリオールとを含む、約１０ｃＰ以下の絶対粘度を有する、滅菌液体製剤。
[１３]
滅菌液体製剤であって、
（ａ）少なくとも７０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの濃度の抗スクレロスチン免疫グロブリンであって、配列番号１４および／もしくは配列番号１２、または配列番号８６および／もしくは配列番号８４、または配列番号６８および／もしくは配列番号６６、または配列番号１５４および／もしくは配列番号１５２、または配列番号１８２および／もしくは配列番号１８０、または配列番号２０８および／もしくは配列番号２０７、または配列番号２１６および／もしくは配列番号２１４、または配列番号２２０および／もしくは配列番号２１８、または配列番号２３８および／もしくは配列番号２３６のアミノ酸配列を含む、免疫グロブリンと、
（ｂ）約１ｍＭ〜約２０ｍＭの範囲の濃度の酢酸カルシウムであって、前記酢酸カルシウムを含まない抗体製剤の粘度と比較して、前記製剤の絶対粘度を少なくとも１０％低減する、酢酸カルシウムと、
を含む、滅菌液体製剤。
[１４]
整形外科手術、歯科手術、インプラント手術、関節置換術、骨移植術、骨美容整形、ならびに骨折治癒、癒着不能治癒、遷延治癒、および顔面再建術などの骨修復を受ける患者を治療するための、[１]〜[９]、[１２]および[１３]のいずれかに記載の治療上有効な量の製剤を使用する方法。

Claims (14)

1. （ａ）７０ｍｇ／ｍＬ〜１２０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗スクレロスチン免疫グロブリンであって、配列番号７３〜７８に示される相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗スクレロスチン免疫グロブリン、
   （ｂ）約１ｍＭ〜約２０ｍＭの範囲の濃度の酢酸カルシウム、
   （ｃ）４％ｗ／ｖ〜６％ｗ／ｖの範囲の量のスクロース、および
   （ｄ）界面活性剤
   を含む、約１０ｃＰ以下の絶対粘度を有する、滅菌液体製剤。
2. 前記免疫グロブリンは、配列番号８６および配列番号８４のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の製剤。
3. １０ｍＭ〜９０ｍＭの酢酸塩の全濃度を含む、請求項１に記載の製剤。
4. ３０ｍＭ〜９０ｍＭまたは３０ｍＭ〜７５ｍＭの酢酸塩の全濃度を含む、請求項１または２に記載の製剤。
5. カルシウム塩の濃度が少なくとも５ｍＭであり、かつ１５ｍＭ以下であり、酢酸塩の濃度が少なくとも５０ｍＭである、請求項１または２に記載の製剤。
6. 約３５０ｍＯｓｍ／Ｌ未満の全オスモル濃度を有する、請求項１〜５のいずれか１項に記載の製剤。
7. 前記免疫グロブリンは、少なくとも１２０ｍｇ／ｍＬの濃度で存在する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の製剤。
8. 前記製剤の前記絶対粘度は、約８ｃＰ以下である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の製剤。
9. 前記製剤は、約４．５〜約６の範囲のｐＨを有する、請求項１〜８のいずれか１項に記載の製剤。
10. 前記製剤は、５〜５．５の範囲のｐＨを有する、請求項９に記載の製剤。
11. 前記界面活性剤の濃度が、０．００４％ｗ／ｖ〜０．２％ｗ／ｖである、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の製剤。
12. 前記界面活性剤がポリソルベート２０である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の製剤。
13. （ａ）９０ｍｇ／ｍＬの濃度の、配列番号９０に示されるアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号８８に示されるアミノ酸配列を含む軽鎖を有する免疫グロブリン、
    （ｂ）約１ｍＭ〜約２０ｍＭの範囲の濃度の酢酸カルシウム、
    （ｃ）約４％ｗ／ｖ〜約６％ｗ／ｖの範囲の量のスクロース、および
    （ｄ）０．００４％ｗ／ｖ〜０．２％ｗ／ｖの範囲の濃度のポリソルベート２０
    を含む、約１０ｃＰ以下の絶対粘度を有する、滅菌液体製剤。
14. 患者において骨粗鬆症または骨減少症を治療するための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の製剤。