JP6696963B2 - 凝固時間の延長原因に関する情報を取得する方法とそれを実施するための装置及びプログラム - Google Patents

Description

本発明は、凝固時間の延長原因に関する情報を取得する方法に関する。また、本発明は、血液凝固の分析のための装置、システム及びコンピュータプログラムに関する。

血液検査の一つである凝固検査は、止血機構の状態を把握するために、血液の凝固時間を測定することにより行われる。凝固時間の延長が認められる場合、原因として、先天的な血液凝固因子の欠乏もしくは異常による先天性凝固障害、又は、凝固反応を阻害する自己抗体による後天性凝固阻害が疑われる。先天性凝固障害と後天性凝固阻害とは、凝固時間の延長を示した被検血漿と、正常血漿とを混合して得た試料の凝固時間を測定する試験(クロスミキシングテスト)で鑑別できる。すなわち、先天性凝固障害の場合は、正常血漿との混合により凝固時間の延長が是正されるが、後天性凝固障害の場合は、凝固時間の延長は是正されない。

自己抗体を原因とする後天性凝固障害は、その病態が自己抗体の種類によって異なることが知られている。例えば、血液凝固因子に対する自己抗体(凝固因子インヒビターとも呼ばれる)を有する患者は、一般に出血症状を示す。一方、ループスアンチコアグラント(ＬＡ)と呼ばれる自己抗体は、リン脂質依存性の凝固反応に必要なリン脂質を阻害するにもかかわらず、ＬＡを有する患者は血栓症状を示す。したがって、凝固因子インヒビターを含む検体と、ＬＡを含む検体とを鑑別することは、臨床的に重要である。しかし、上記のとおり、どちらの検体でも凝固時間の延長が認められるので、通常の凝固検査では両者を鑑別することは困難である。

現在、クロスミキシングテストにおいて、調製直後の試料及び37℃にて２時間インキュベートした試料について凝固時間を測定し、得られた各試料の凝固時間と、正常血漿と被検血漿との混合比率とをプロットしたグラフのパターン変化から、凝固因子インヒビターを含む検体と、ＬＡを含む検体とを鑑別する方法が行われている。例えば、非特許文献１には、凝固因子インヒビターは温度及び時間に依存的であり、ＬＡはそれらに依存しないことに基づいて、両者を鑑別することが開示されている。しかし、グラフのパターン変化を見分けることによる鑑別には経験が必要であり、熟練者でなければ鑑別が難しいケースも多い。

一方、ＬＡについては、ICA(Index of Circulating Anticoagulant)と呼ばれる、クロスミキシングテストの結果を定量的に評価するための指標を用いて判定をする方法が知られている(非特許文献２参照)。ICAは、被検血漿、正常血漿、及びそれらの等量混合物の凝固時間から算出される。算出されたICAの値が所定の閾値以上であるとき、被検血漿はＬＡを含むと判定される。また、本発明者の一人は、RC-S(Response Curve-Score)と呼ばれる指標を考案し、これを用いてＬＡ陽性検体を検出している(非特許文献３参照)。

Collins P.ら、Consensus recommendations for the diagnosis and treatment of acquired hemophilia A. BMC Reseach Notes 2010; 3: 161-169 Pengo V.ら、Update of the guidelines for lupus anticoagulant detection. Journal of Thrombosis and Haemostasis 2009; 7: 1737-1740 内藤澄悦ら、交差混合試験の新たな判定方法によるLA検出の評価と有用性．臨床病理、第60巻補冊、第166頁、2012

しかし、クロスミキシングテストの結果に基づいて、血液検体が凝固因子インヒビターを含むか否かを定量的に評価するための指標は、これまで知られていない。そのため、そのような指標を新たに見出し、血液検体が凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがあるかを簡便に判定することを可能にする手段が望まれる。

本発明の第１の態様によれば、凝固時間の延長原因に関する情報を取得する方法が提供される。この方法は、被験者の血液検体の凝固時間である第１凝固時間、正常血液検体の凝固時間である第２凝固時間、及び上記被験者の血液検体と上記正常血液検体とを混合した混合検体の凝固時間である第３凝固時間を、凝固時間測定試薬を用いて測定する工程と、所定の条件下でインキュベートした上記被験者の血液検体の凝固時間である第４凝固時間、上記所定の条件下でインキュベートした上記正常血液検体の凝固時間である第５凝固時間、及び上記所定の条件下でインキュベートした上記混合検体の凝固時間である第６凝固時間を、上記試薬を用いて測定する工程と、上記第１、第２及び第３凝固時間に基づいて第１定量化指標を取得し、上記第４、第５及び第６凝固時間に基づいて第２定量化指標を取得する工程と、上記第１定量化指標の値と上記第２定量化指標の値とを用いて演算し、演算結果を凝固時間の延長原因に関する情報として取得する工程とを含む。

本発明の第２の態様によれば、血液凝固分析装置が提供される。この装置は、検体と凝固時間測定試薬とが混和されてなる測定試料を調製する測定試料調製部と、調製された測定試料に光を照射し、この測定試料から光量に関する光学的情報を取得する光学的情報取得部と、制御部と、入力部と、表示部とを備える。この装置では、制御部が、被験者の血液検体と上記試薬とが混和されてなる第１測定試料、正常血液検体と上記試薬とが混和されてなる第２測定試料、及び上記被験者の血液検体と上記正常血液検体とを混合した混合検体と上記試薬とが混和されてなる第３測定試料を調製するように上記測定試料調製部を制御し、上記第１、第２及び第３測定試料から、それぞれ第１、第２及び第３光学的情報を取得するように上記光学的情報取得部を制御し、上記第１、第２及び第３光学的情報から、それぞれ第１、第２及び第３凝固時間を取得し、上記第１、第２及び第３凝固時間から第１定量化指標の値を取得し、所定の条件下でインキュベートした上記被験者の血液検体から取得された第４凝固時間、上記所定の条件下でインキュベートした上記正常血液検体から取得された第５凝固時間、及び上記所定の条件下でインキュベートした上記混合検体から取得された第６凝固時間の入力を、上記入力部によって受け付けると、上記第４、第５及び第６凝固時間に基づいて第２定量化指標の値を取得し、上記第１定量化指標の値と上記第２定量化指標の値とを用いて演算し、演算結果を凝固時間の延長原因に関する情報として上記表示部に出力することを特徴とする。

本発明の第３の態様によれば、血液凝固分析装置が提供される。この装置は、検体と凝固時間測定試薬とが混和されてなる測定試料を調製する測定試料調製部と、調製された測定試料に光を照射し、この測定試料から光量に関する光学的情報を取得する光学的情報取得部と、上記検体を所定の条件下でインキュベートするインキュベート部と、制御部と、表示部とを備える。この装置では、制御部が、被験者の血液検体の一部、正常血液検体の一部、及び上記被験者の血液検体と上記正常血液検体とを混合した混合検体の一部を上記所定の条件下でインキュベートするように上記インキュベート部を制御し、上記被験者の血液検体と上記試薬とが混和された第１測定試料、上記正常血液検体と上記試薬とが混和された第２測定試料、及び上記混合検体と上記試薬とが混和されてなる第３測定試料を調製するように上記測定試料調製部を制御し、上記第１、第２及び第３測定試料から、それぞれ第１、第２及び第３光学的情報を取得するように上記光学的情報取得部を制御し、上記所定の条件下でインキュベートした被験者の血液検体と上記試薬とが混和された第４測定試料、上記所定の条件下でインキュベートした正常血液検体と上記試薬とが混和された第５測定試料、及び上記所定の条件下でインキュベートした上記混合検体と上記試薬とが混和されてなる第６測定試料を調製するように上記測定試料調製部を制御し、上記第４、第５及び第６測定試料から、それぞれ第４、第５及び第６光学的情報を取得するように上記光学的情報取得部を制御し、上記第１、第２及び第３光学的情報から、それぞれ第１、第２及び第３凝固時間を取得し、上記第１、第２及び第３凝固時間から第１定量化指標の値を取得し、上記第４、第５及び第６光学的情報から、それぞれ第４、第５及び第６凝固時間を取得し、上記第４、第５及び第６凝固時間から第２定量化指標の値を取得し、上記第１定量化指標の値と上記第２定量化指標の値とを用いて演算し、演算結果を凝固時間の延長原因に関する情報として上記表示部に出力することを特徴とする。

本発明の第４の態様は、プロセッサ及びこのプロセッサの制御下にあるメモリを含むコンピュータを備える、血液凝固分析のためのシステムを提供する。上記のメモリには、被験者の血液検体と凝固時間測定試薬とが混和された第１測定試料の第１光学的情報、正常血液検体と上記試薬とが混和された第２測定試料の第２光学的情報、及び上記被験者の血液検体と上記正常血液検体とを混合した混合検体と上記試薬とが混和されてなる第３測定試料の第３光学的情報を取得するステップと、所定の条件下でインキュベートした上記被験者の血液検体と上記試薬とが混和された第４測定試料の第４光学的情報、上記所定の条件下でインキュベートした上記正常血液検体と上記試薬とが混和された第５測定試料の第５光学的情報、及び上記所定の条件下でインキュベートした上記混合検体と上記試薬とが混和されてなる第６測定試料の第６光学的情報を取得するステップと、上記第１、第２及び第３光学的情報から、それぞれ第１、第２及び第３凝固時間を取得し、上記第４、第５及び第６光学的情報から、それぞれ第４、第５及び第６凝固時間を取得するステップと、上記第１、第２及び第３凝固時間から第１定量化指標の値を取得し、上記第４、第５及び第６凝固時間から第２定量化指標の値を取得するステップと、上記第１定量化指標の値と上記第２定量化指標の値とを用いて演算し、演算結果を凝固時間の延長原因に関する情報として取得するステップとを、上記コンピュータに実行させるためのコンピュータプログラムが記録されている。

本発明の第５の態様は、コンピュータが読み取り可能な媒体に記録されている、血液凝固分析のためのコンピュータプログラムを提供する。このコンピュータプログラムは、被験者の血液検体と凝固時間測定試薬とが混和された第１測定試料の第１光学的情報、正常血液検体と上記試薬とが混和された第２測定試料の第２光学的情報、及び上記被験者の血液検体と上記正常血液検体とを混合した混合検体と上記試薬とが混和されてなる第３測定試料の第３光学的情報を取得するステップと、所定の条件下でインキュベートした被験者の血液検体と上記試薬とが混和された第４測定試料の第４光学的情報、上記所定の条件下でインキュベートした正常血液検体と上記試薬とが混和された第５測定試料の第５光学的情報、及び上記所定の条件下でインキュベートした上記混合検体と上記試薬とが混和されてなる第６測定試料の第６光学的情報を取得するステップと、上記第１、第２及び第３光学的情報から、それぞれ第１、第２及び第３凝固時間を取得し、上記第４、第５及び第６光学的情報から、それぞれ第４、第５及び第６凝固時間を取得するステップと、上記第１、第２及び第３凝固時間から第１定量化指標の値を取得し、上記第４、第５及び第６凝固時間から第２定量化指標の値を取得するステップと、上記第１定量化指標の値と上記第２定量化指標の値とを用いて演算し、演算結果を凝固時間の延長原因に関する情報として取得するステップとを、上記のコンピュータに実行させることを特徴とする。

本発明によれば、被験者の血液検体が凝固因子インヒビターなどの凝固時間の延長原因を有するかについて、定量的に評価することを可能にする。

クロスミキシングテストのグラフの一例である。図中、Ａは、正常血漿の凝固時間を示し、Ｂは、被検血漿の比率が10％(v/v)の混合血漿の凝固時間を示し、Ｃは、被検血漿の比率が20％(v/v)の混合血漿の凝固時間を示し、Ｄは、被検血漿の比率が50％(v/v)の混合血漿の凝固時間を示し、Ｅは、被検血漿の比率が80％(v/v)の混合血漿の凝固時間を示し、Ｆは、被検血漿の比率が90％(v/v)の混合血漿の凝固時間を示し、Ｇは、被検血漿の凝固時間を示す。 血液凝固分析装置の外観の構成を示す斜視図である。 血液凝固分析装置が備える測定装置の内部を上側から見た場合の平面図である。 第２の態様に係る血液凝固分析装置が備える測定装置の構成を示す図である。 第３の態様に係る血液凝固分析装置が備える測定装置の構成を示す図である。 測定装置が備えるランプユニットの構成を示す図である。 測定装置が備える検出部の構成を示す図である。 測定装置が備える検出部の構成を示す図である。 測定装置が備える検出部の構成を示す図である。 測定装置が備える検出部の構成を示す図である。 血液凝固分析装置が備える制御装置の機能構成を示す図である。 血液凝固分析装置が備える制御装置のハードウェア構成を示す図である。 測定試料の調製及び測定の処理の手順を示すフローチャートである。 測定データの分析処理及び分析結果の表示処理の手順を示すフローチャートである。 遅延型の凝固時間の入力処理の手順を示すフローチャートである。 遅延型の凝固時間の入力前の分析結果画面の一例を示す図である。 遅延型の凝固時間の入力画面の一例を示す図である。 遅延型の凝固時間の入力後の分析結果画面の一例を示す図である。 血液検体における凝固因子インヒビターについての情報を取得する判定処理の手順を示すフローチャートである。 血液検体におけるＬＡについての情報を取得する判定処理の手順を示すフローチャートである。 第１定量化指標と第２定量化指標との比の値に基づいて、各種の検体を解析した結果を示すボックスプロットである。 第１定量化指標と第２定量化指標との差の値に基づいて、各種の検体を解析した結果を示すボックスプロットである。 第１定量化指標のみに基づいて、各種の検体を解析した結果を示すボックスプロットである。 第２定量化指標のみに基づいて、各種の検体を解析した結果を示すボックスプロットである。

[１．凝固時間の延長原因に関する情報を取得する方法]
第１の態様に係る凝固時間の延長原因に関する情報を取得する方法(以下、単に「方法」ともいう)について、以下に説明する。本実施形態に係る方法では、まず、被験者の血液検体、正常血液検体及びそれらを混合した検体のそれぞれについて凝固時間を測定する。また、後述の所定の条件下でインキュベートした各検体についても凝固時間を測定する。

本実施形態において、被験者の血液検体は、被験者から得た血液(全血)又は該血液から調製した血漿であればよい。それらの中でも、血漿が好ましく、血小板除去血漿がより好ましい。なお、血小板は、遠心分離やフィルター分離など公知の手法により除去できる。

好ましい実施形態では、被験者の血液検体は、凝固時間の延長原因を有する疑いのある血液検体である。そのような血液検体としては、例えば、通常の凝固検査により凝固時間の延長が認められた検体、凝固時間の延長原因を有する疑いのある者を含む複数の被験者から得た検体群などが挙げられる。

本実施形態において、凝固時間の延長原因は特に限定されないが、例えば、凝固因子インヒビター、ＬＡ、凝固因子欠損、血液凝固に作用する薬剤などが挙げられる。凝固因子インヒビターは特に限定されないが、例えば、第VIII因子インヒビター、第IX因子インヒビター、第Ｖ因子インヒビターなどが挙げられる。欠損が疑われる凝固因子は特に限定されないが、例えば、第Ｖ因子、第VII因子、第VIII因子、第IX因子、第Ｘ因子、第XI因子、第XII因子などが挙げられる。血液凝固に作用する薬剤は特に限定されないが、例えば、ヘパリン、ワーファリンなどが挙げられる。

正常血液検体は、健常者から得た血液又は該血液から調製した血漿であればよい。また、市販の正常血漿を用いてもよい。市販の正常血漿としては、例えば、CRYOcheck Pooled Normal Plasma(Precision BioLogic Inc)などが挙げられる。

本実施形態に係る方法は、クロスミキシングテストの原理に基づいているので、被験者の血液検体と正常血液検体とを少なくとも１つの混合比で混合した検体(以下、「混合検体」ともいう)が用いられる。被験者の血液検体と正常血液検体との混合比は、被験者の血液検体の量又は後述の定量化指標の種類などに応じて適宜決定できる。混合検体における被験者の血液検体の比率として、例えば、５、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90及び95％(v/v)から少なくとも１つ選択する。これらの中でも、被験者の血液検体の比率が50％(v/v)の混合検体を調製することが好ましい。なお、混合検体の調製は、用手法で行ってもよいし、全自動凝固時間測定装置で行ってもよい。

本実施形態では、所定の条件下でインキュベートしていない検体の凝固時間及び当該条件下でインキュベートした検体の凝固時間を測定するので、上記の被験者の血液検体、正常血液検体及び混合検体のそれぞれを、少なくとも二組ずつ用意する。

本実施形態において、第１凝固時間とは、上記の被験者の血液検体を、後述の所定の条件下でインキュベートせずに測定して得た凝固時間である。第２凝固時間とは、上記の正常血液検体を、後述の所定の条件下でインキュベートせずに測定して得た凝固時間である。第３凝固時間とは、上記の混合検体を、後述の所定の条件下でインキュベートせずに測定して得た凝固時間である。すなわち、第１、第２及び第３凝固時間の測定は、上記の各検体について通常の凝固時間を測定することと変わるところはない。例えば、第１、第２及び第３凝固時間の測定は、上記の各検体を調製した後、通常45分未満のうちに、好ましくは30分以内に、より好ましくは15分以内に凝固時間を測定することにより行うことができる。本明細書において、第１、第２及び第３凝固時間を「即時型の凝固時間」とも呼ぶ。

本実施形態において、第４凝固時間とは、上記の被験者の血液検体を、所定の条件下でインキュベートしてから測定して得た凝固時間である。第５凝固時間とは、上記の正常血液検体を、所定の条件下でインキュベートしてから測定して得た凝固時間である。第６凝固時間とは、上記の混合検体を、所定の条件下でインキュベートしてから測定して得た凝固時間である。所定の条件としては、凝固因子インヒビターによる阻害反応を促進させるための温度及び時間を設定すればよい。そのような条件としては、例えば、15℃以上40℃以下にて、45分以上４時間以下、好ましくは１時間以上３時間以下でインキュベートすることが挙げられる。当該技術では、37℃にて２時間インキュベートする条件が広く用いられている。

本実施形態では、第４、第５及び第６凝固時間の測定は、調製した上記の各検体を所定の条件下でインキュベートすることを除いて、第１、第２及び第３凝固時間の測定と同じである。例えば、第４、第５及び第６凝固時間の測定は、上記の各検体を調製して、これらを所定の条件下でインキュベートした後、通常45分未満のうちに、好ましくは30分以内に、より好ましくは15分以内に凝固時間を測定することにより行うことができる。検体をインキュベートする手段は、特に限定されない。用手法でインキュベーションを行う場合は、例えば、所定の温度に設定したウォーターバス又は恒温槽にて検体をインキュベートすることが挙げられる。あるいは、検体を一定の間インキュベートする機能を有する全自動凝固時間測定装置で行ってもよい。本明細書において、第４、第５及び第６凝固時間を「遅延型の凝固時間」とも呼ぶ。

本実施形態において、凝固時間測定試薬(以下、単に「試薬」ともいう)は、当該技術において公知の測定原理に基づく凝固時間を測定するための試薬であればよい。例えば、プロトロンビン時間(PT)、活性化部分トロンボプラスチン時間(APTT)、希釈プロトロンビン時間(dPT)、希釈活性化部分トロンボプラスチン時間(dAPTT)、カオリン凝固時間(KCT)、希釈ラッセル蛇毒凝固時間(dRVVT)、トロンビン時間(TT)、及び希釈トロンビン時間(dTT)の少なくとも１種を測定するための試薬が挙げられる。これらの中でも、dAPTT測定試薬が好ましい。また、市販の凝固時間測定試薬及び試薬キットを用いてもよい。例えば、APTT測定試薬としては、トロンボチェックAPTT-SLA(シスメックス社)、トロンボチェックAPTT(シスメックス社)、Actin FSL(シスメックス社)などが知られている。

各凝固時間の測定は、上記の各検体と凝固時間測定試薬とを混和してなる測定試料について行う。測定試料の調製自体は、当該技術において公知である。例えば、各検体と試薬との反応時間は、通常１分以上10分以下であり、好ましくは３分以上５分以下である。温度条件は、通常25℃以上45℃以下であり、好ましくは35℃以上38℃以下である。測定試料の調製は、用手法で行ってもよいし、全自動凝固時間測定装置で行ってもよいが、全自動凝固時間測定装置で行うことが好ましい。全自動凝固時間測定装置としては、例えば、CS-5100(シスメックス社)、CS-2400(シスメックス社)、CS-2000i(シスメックス社)が挙げられる。

測定試料についての凝固時間の測定手順自体は、当該技術において公知である。測定試料の凝固時間の測定は、用手法で行ってもよいし、全自動凝固時間測定装置で行ってもよい。好ましくは、全自動凝固時間測定装置で測定を行う。この装置により凝固時間を測定する場合は、測定試料に光を照射して、得られた光学的情報に基づいて凝固時間が算出される。照射する光は、凝固時間の測定に通常用いられる光であればよく、例えば、波長が660 nm近傍である光が挙げられる。光源は特に限定されないが、例えば、発光ダイオード、ハロゲンランプなどが挙げられる。光源から測定試料に光を照射することにより、該測定試料から散乱光及び透過光が生じる。本実施形態では、光量に関する光学的情報として、例えば、散乱光量又は透過光量に関する情報が挙げられ、散乱光強度、透過度、吸光度などが好ましい。

本実施形態において、即時型の凝固時間及び遅延型の凝固時間のいずれを先に測定するかは、特に限定されない。遅延型の凝固時間の測定はインキュベーション時間を要するので、その間に、即時型の凝固時間を先に測定してもよい。

本実施形態において、即時型の凝固時間及び遅延型の凝固時間は、同じ手段によって測定してもよいし、異なる手段によって測定してもよい。異なる手段で測定する場合、例えば、即時型の凝固時間を全自動凝固時間測定装置で測定し、遅延型の凝固時間を用手法で測定してもよい。あるいは、即時型の凝固時間を用手法で測定し、遅延型の凝固時間を全自動凝固時間測定装置で測定してもよい。また、即時型の凝固時間及び遅延型の凝固時間をいずれも全自動凝固時間測定装置で測定する場合、当該装置は同じ装置であってもよいし、異なる装置であってもよい。

次いで、本実施形態に係る方法では、上記の第１、第２及び第３凝固時間に基づいて第１定量化指標を取得し、上記の第４、第５及び第６凝固時間に基づいて第２定量化指標を取得する。

本実施形態において、定量化指標は、被験者の血液検体、正常血液検体及び／又はそれらの混合検体の凝固時間に基づいて、クロスミキシングテストの結果を定量的に評価するための指標であれば、特に限定されない。また、公知の定量化指標を用いてもよい。公知の定量化指標としては、例えば、ICA、PC(Percent Correction)及びRC-Sなどが挙げられる。なお、ICAは非特許文献２に開示され、PCはChang S-H.ら、"Percent Correction" Formula for Evaluation of Mixing Studies., Am J Clin Pathol 2002;117:62-73に開示され、RC-Sは非特許文献３に開示されている。以下に、ICA、PC及びRC-Sについて、図１を参照して説明する。なお、下記の各式におけるＡ〜Ｇはそれぞれ、図１中のＡ〜Ｇに対応する。

ICAは、ロスナー・インデックス(Rosner Index)とも呼ばれ、ＬＡ検体の判定に用いられる指標である。ICAは、下記の式により算出される。
ICA ＝ [(Ｄ−Ａ)／Ｇ]×100
(式中、Ａ：正常血漿の凝固時間、Ｄ：被検血漿の比率が50％(v/v)の混合血漿の凝固時間、Ｇ：被検血漿の凝固時間)

PCは、下記のとおり、混合検体における被検血漿の比率に応じて算出式が異なる。
PC(9:1) ＝ [(Ｇ−Ｂ)／(Ｇ−Ａ)]×100
PC(8:2) ＝ [(Ｇ−Ｃ)／(Ｇ−Ａ)]×100
PC(5:5) ＝ [(Ｇ−Ｄ)／(Ｇ−Ａ)]×100
PC(2:8) ＝ [(Ｇ−Ｅ)／(Ｇ−Ａ)]×100
PC(1:9) ＝ [(Ｇ−Ｆ)／(Ｇ−Ａ)]×100
(式中、Ａ：正常血漿の凝固時間、Ｂ：被検血漿の比率が10％(v/v)の混合血漿の凝固時間、Ｃ：被検血漿の比率が20％(v/v)の混合血漿の凝固時間、Ｄ：被検血漿の比率が50％(v/v)の混合血漿の凝固時間、Ｅ：被検血漿の比率が80％(v/v)の混合血漿の凝固時間、Ｆ：被検血漿の比率が90％(v/v)の混合血漿の凝固時間、Ｇ：被検血漿の凝固時間)

RC-Sは、ロスナー・インデックスを応用した指標であり、次のようにして算出される。まず、被検血漿の比率が20及び50％(v/v)の混合検体についてのスコアを、下記の式により算出する。
RC-S(20) ＝ [(Ｃ−Ｂ)／Ｄ]×100
RC-S(50) ＝ [(Ｄ−Ｃ)／Ｅ]×100
(式中、Ｂ：被検血漿の比率が10％(v/v)の混合血漿の凝固時間、Ｃ：被検血漿の比率が20％(v/v)の混合血漿の凝固時間、Ｄ：被検血漿の比率が50％(v/v)の混合血漿の凝固時間、Ｅ：被検血漿の比率が80％(v/v)の混合血漿の凝固時間)

次いで、被検血漿の比率が20及び50％(v/v)の混合検体について、図１の反応曲線が直線であった仮定した場合のコントロールスコアを、下記の式により算出する。
RC-Sc(20) ＝ [[(３×Ｂ＋Ｄ)／４−Ｂ]／Ｄ]×100
RC-Sc(50) ＝ [[(Ｃ＋Ｅ)／２−Ｂ]／Ｅ]×100
(式中、Ｂ：被検血漿の比率が10％(v/v)の混合血漿の凝固時間、Ｃ：被検血漿の比率が20％(v/v)の混合血漿の凝固時間、Ｄ：被検血漿の比率が50％(v/v)の混合血漿の凝固時間、Ｅ：被検血漿の比率が80％(v/v)の混合血漿の凝固時間)

そして、被検血漿の比率が20及び50％(v/v)の各混合検体について、コントロールスコア(Sc)に対するスコア(S)の比率を算出し、算出した２つの比率の和を定量化指標とする(下記の式を参照)。
S/Sc(20+50) ＝ (RC-S(20)／RC-Sc(20))×100＋(RC-S(50)／RC-Sc(50))×100

本実施形態において、第１定量化指標及び第２定量化指標の種類は、同じであってもよいし、異なっていてもよいが、同じであることが好ましい。

そして、本実施形態に係る方法では、上記で得られた第１定量化指標の値と第２定量化指標の値とを用いて演算し、演算結果を凝固時間の延長原因に関する情報として取得する。

本実施形態では、上記の演算は特に限定されないが、好ましくは、第１定量化指標の値と第２定量化指標の値との比もしくは差の値、又はこの比の値と差の値とを組み合わせた値を演算する。なお、比の値と差の値とを組み合わせた値としては、例えば、比の値と差の値との和、差、積、比などが挙げられる。

本実施形態において、比の値は、下記のいずれかの式で算出される値であってもよい。
(比の値) = (第１定量化指標の値)／(第２定量化指標の値)
又は
(比の値) = (第２定量化指標の値)／(第１定量化指標の値)

本実施形態では、上記の式から算出された値を100倍して得られる比率(％)を、比の値として取得してもよい。あるいは、上記の式から算出された値に定数を足した値を、比の値として取得してもよい。

本実施形態において、差の値は、下記のいずれかの式で算出される値であってもよい。
(差の値) = (第１定量化指標の値)−(第２定量化指標の値)
又は
(差の値) = (第２定量化指標の値)−(第１定量化指標の値)

本実施形態では、上記の式から算出された値に定数を乗じた値を、差の値として取得してもよい。

本発明者らは、即時型の凝固時間及び遅延型の凝固時間に基づく上記の比及び差の値が、凝固因子インヒビターとその他の延長原因との鑑別を可能にすることを見出している。よって、本実施形態に係る方法では、上記の演算結果を、凝固時間の延長原因に関する情報として取得することができる。

本実施形態に係る方法では、得られた凝固時間の延長原因に関する情報に基づいて、被験者の血液検体における凝固因子インヒビターについての情報をさらに取得することができる。具体的には、上記の比もしくは差の値又はそれらを組み合わせた値と、第１の閾値とを比較し、比較結果に基づいて、被験者の血液検体が、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビター以外の延長原因を有する検体の疑いがあるかについての情報を取得する。

例えば、比の値が、第２定量化指標の値を第１定量化指標の値で除した値であるとき、次のようにして、上記の情報を取得してもよい。すなわち、比の値が第１の閾値以上である場合、被験者の血液検体は、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがあるという情報を取得できる。反対に、比の値が第１の閾値より小さい場合、被験者の血液検体は、凝固因子インヒビター以外の延長原因を有する検体の疑いがあるという情報を取得できる。

比の値が、第１定量化指標の値を第２定量化指標の値で除した値であるときは、次のようにして、上記の情報を取得してもよい。すなわち、比の値が第１の閾値より小さい場合、被験者の血液検体は、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがあるという情報を取得できる。反対に、比の値が第１の閾値以上である場合、被験者の血液検体は、凝固因子インヒビター以外の延長原因を有する検体の疑いがあるという情報を取得できる。

差の値が、第２定量化指標の値から第１定量化指標の値を減じた値であるときは、次のようにして、上記の情報を取得してもよい。すなわち、差の値が第１の閾値以上である場合、被験者の血液検体は、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがあるという情報を取得できる。反対に、差の値が第１の閾値より小さい場合、被験者の血液検体は、凝固因子インヒビター以外の延長原因を有する検体の疑いがあるという情報を取得できる。

差の値が、第１定量化指標の値から第２定量化指標の値を減じた値であるときは、次のようにして、上記の情報を取得してもよい。すなわち、差の値が第１の閾値より小さい場合、被験者の血液検体は、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがあるという情報を取得できる。反対に、差の値が第１の閾値以上の場合、被験者の血液検体は、凝固因子インヒビター以外の延長原因を有する検体の疑いがあるという情報を取得できる。

本実施形態では、第１の閾値は特に限定されない。例えば、凝固因子インヒビター陽性検体、及びＬＡなどの他の延長原因を有する検体についてのデータの蓄積により、上記の比もしくは差の値又はそれらを組み合わせた値に対応する第１の閾値を経験的に設定できる。あるいは、凝固因子インヒビター陽性検体群とＬＡなどの他の延長原因を有する検体群のそれぞれについて即時型の凝固時間及び遅延型の凝固時間を測定して、第１定量化指標の値及び第２定量化指標の値の比及び／又は差を取得し、取得した比及び／又は差の値に基づいて、両群を明確に区別可能な値を、第１の閾値として設定できる。第１の閾値の算出には、ROC解析などの統計学的手法を用いてもよい。

本実施形態に係る方法では、被験者の血液検体が、凝固因子インヒビター以外の延長原因を有する検体の疑いがあるという情報を取得した場合、第１定量化指標又は第２定量化指標の値に基づいて、被験者の血液検体におけるＬＡについての情報を取得することもできる。

具体的には、上記の第１定量化指標又は第２定量化指標の値と第２の閾値とを比較し、比較結果に基づいて、被験者の血液検体が、ＬＡを含む検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビター及びＬＡ以外の延長原因を有する検体の疑いがあるかについての情報を取得できる。すなわち、第１定量化指標及び第２定量化指標から選択されたいずれか１つの値が第２の閾値以上であるとき、被験者の血液検体は、ＬＡを含む検体の疑いがあるという情報を取得できる。反対に、選択された定量化指標の値が第２の閾値より小さいとき、被験者の血液検体は、凝固因子インヒビター及びＬＡ以外の延長原因を有する検体の疑いがあるという情報を取得できる。

本実施形態では、第２の閾値は特に限定されない。例えば、ＬＡ陽性検体と、他の延長原因を有する検体についてのデータの蓄積により上記の第１定量化指標又は第２定量化指標の値に対応する第２の閾値を経験的に設定できる。あるいは、ＬＡ陽性検体群と、凝固因子インヒビター及びＬＡ以外の延長原因を有する検体群のそれぞれについて即時型の凝固時間及び遅延型の凝固時間を測定して、第１定量化指標の値及び第２定量化指標の値を取得し、取得した値に基づいて両群を明確に区別可能な値を、第２の閾値として設定できる。第２の閾値の算出には、ROC解析などの統計学的手法を用いてもよい。

[２．血液凝固の分析のための装置、システム及びコンピュータプログラム]
以下に、本実施形態に係る血液凝固分析装置の一例を、図面を参照して説明する。しかし、本実施形態はこの例のみに限定されない。図２に示されるように、血液凝固分析装置１０は、測定試料の調製及び光学的測定を行う測定装置５０と、測定装置５０により取得された測定データを分析すると共に測定装置５０に指示を与える制御装置４０とを備える。測定装置５０は、測定試料からの光量に関する光学的情報を取得する測定部２０と、測定部２０の前方に配置された検体搬送部３０とを備える。

測定部２０には、蓋２０ａ及び２０ｂと、カバー２０ｃと、電源ボタン２０ｄが設けられている。ユーザは、蓋２０ａを開けて、試薬テーブル１１及び１２(図３参照)に設置されている試薬容器１０３を新たな試薬容器１０３と交換したり、また、別の試薬容器１０３を新たに追加したりすることができる。試薬容器１０３には、収容する試薬の種類と、試薬に付与されたシリアルナンバーからなる試薬ＩＤとを含むバーコードが印刷されたバーコードラベル１０３ａが貼付されている。

ユーザは、蓋２０ｂを開けて、ランプユニット２７(図３参照)を交換できる。また、ユーザは、カバー２０ｃを開けて、ピアサ１７ａ(図３参照)を交換できる。検体搬送部３０は、検体ラック１０２に支持された検体容器１０１を、ピアサ１７ａによる吸引位置まで搬送する。検体容器１０１は、ゴム製の蓋１０１ａにより密封されている。

血液凝固分析装置１０を使用する場合、ユーザは、まず、測定部２０の電源ボタン２０ｄを押して測定部２０を起動させ、制御装置４０の電源ボタン４３９を押して制御装置４０を起動させる。制御装置４０が起動すると、表示部４１にログオン画面が表示される。ユーザは、ログオン画面にユーザ名及びパスワードを入力して制御装置４０にログオンし、血液検体分析装置１０の使用を開始する。

測定装置の構成について、以下に説明する。図３に示されるように、測定部２０は、試薬テーブル１１及び１２と、キュベットテーブル１３と、バーコードリーダ１４と、キュベット供給部１５と、キャッチャ１６と、検体分注アーム１７と、試薬分注アーム１８と、緊急検体セット部１９と、光ファイバ２１と、検出部２２と、キュベット移送部２３と、加温部２４と、廃棄口２５と、流体部２６と、ランプユニット２７とを備えている。

(測定試料調製部)
試薬テーブル１１及び１２とキュベットテーブル１３は、それぞれ、円環形状を有し、回転可能に構成されている。試薬テーブル１１及び１２は試薬収納部に相当し、ここには試薬容器１０３が載せ置かれる。試薬テーブル１１及び１２に載せ置かれた試薬容器１０３のバーコードは、バーコードリーダ１４により読み取られる。バーコードから読み取られた情報(試薬の種類、試薬ＩＤ)は、制御装置４０に入力され、ハードディスク４３４(図８参照)に格納される。また、試薬テーブル１１及び／又は１２には、混合検体の調製のための正常血液検体が収容された試薬容器１０３が載せ置かれてもよい。

キュベットテーブル１３には、キュベット１０４を支持可能な複数の孔からなる支持部１３ａが形成されている。ユーザによってキュベット供給部１５に投入された新しいキュベット１０４は、キュベット供給部１５により順次移送され、キャッチャ１６によりキュベットテーブル１３の支持部１３ａに設置される。

検体分注アーム１７と試薬分注アーム１８には、それぞれ、上下移動及び回転移動できるようステッピングモータが接続されている。検体分注アーム１７の先端には、検体容器１０１の蓋１０１ａを穿刺できるよう先端が鋭利に形成されたピアサ１７ａが設置されている。試薬分注アーム１８の先端にはピペット１８ａが設置されている。ピペット１８ａの先端は、ピアサ１７ａと異なり平坦に形成されている。また、ピペット１８ａには、静電容量式の液面検知センサ２１３(図４Ａ及びＢ参照)が接続されている。

検体搬送部３０(図２参照)によって検体容器１０１が所定位置に搬送されると、ピアサ１７ａが、検体分注アーム１７の回転移動により検体容器１０１の真上に位置付けられる。そして、検体分注アーム１７が下方向に移動され、ピアサ１７ａが検体容器１０１の蓋１０１ａを貫通し、検体容器１０１に収容されている血液検体が、ピアサ１７ａにより吸引される。緊急を要する血液検体が緊急検体セット部１９にセットされている場合、ピアサ１７ａは、検体搬送部３０から供給される検体に割り込んで、緊急を要する血液検体を吸引する。ピアサ１７ａにより吸引された血液検体は、キュベットテーブル１３上の空のキュベット１０４に吐出される。

血液検体が吐出されたキュベット１０４は、キュベット移送部２３のキャッチャ２３ａにより、キュベットテーブル１３の支持部１３ａから、加温部２４の支持部２４ａに移送される。加温部２４は、支持部２４ａに設置されたキュベット１０４に収容されている血液検体を、所定の温度(例えば37℃)で一定時間加温する。加温部２４による血液検体の加温が終了すると、このキュベット１０４は、キャッチャ２３ａによって再び把持される。そして、このキュベット１０４は、キャッチャ２３ａにより把持されたまま所定位置に位置付けられ、この状態で、ピペット１８ａにより吸引された試薬がキュベット１０４内に吐出される。

ピペット１８ａによる試薬の分注では、まず、試薬テーブル１１及び１２が回転され、測定項目に対応する試薬を収容する試薬容器１０３が、ピペット１８ａによる吸引位置に搬送される。そして、原点位置を検知するためのセンサに基づいて、ピペット１８ａの上下方向の位置が原点位置に位置付けられた後、液面検知センサ２１３によりピペット１８ａの下端が試薬の液面に接触するまで、ピペット１８ａが下降される。ピペット１８ａの下端が試薬の液面に接触すると、必要な量の試薬を吸引できる程度に、さらにピペット１８ａが下降される。そして、ピペット１８ａの下降が停止され、ピペット１８ａにより試薬が吸引される。ピペット１８ａにより吸引された試薬は、キャッチャ２３ａによって把持されたキュベット１０４に吐出される。そして、キャッチャ２３ａの振動機能により、キュベット１０４内の血液検体と試薬が攪拌される。これにより、測定試料の調製が行われる。その後、測定試料を収容するキュベット１０４は、キャッチャ２３ａにより、検出部２２の支持部２２ａに移送される。

(光学的情報取得部)
ランプユニット２７は、検出部２２による光学的信号の検出に用いられる複数種類の波長の光を供給する。図５を参照して、ランプユニット２７の構成の一例を説明する。ランプユニット２７は光源に相当し、ハロゲンランプ２７ａと、ランプケース２７ｂと、集光レンズ２７ｃ〜２７ｅと、円盤形状のフィルター部２７ｆと、モータ２７ｇと、光透過型のセンサ２７ｈと、光ファイバカプラ２７ｉとを備える。

ランプユニット２７からの光は、光ファイバ２１を介して、検出部２２に供給される。検出部２２には、穴状の支持部２２ａが複数設けられており、各支持部２２ａには、キュベット１０４が挿入可能となっている。各支持部２２ａには、それぞれ、光ファイバ２１の端部が装着され、支持部２２ａに支持されたキュベット１０４に光ファイバ２１からの光が照射可能となっている。検出部２２は、光ファイバ２１を介して、ランプユニット２７から供給される光をキュベット１０４に照射し、キュベット１０４を透過する光(又はキュベット１０４からの散乱光)の光量を検出する。

図６Ａ〜Ｄを参照して、検出部２２に配された複数の支持部２２ａのうちの一つの構成の例を示すが、他の支持部２２ａも同様の構成を有する。図６Ａを参照して、検出部２２には、光ファイバ２１の先端が挿入される円形の穴２２ｂが形成される。さらに、検出部２２には、穴２２ｂを支持部２２ａに連通させる円形の連通孔２２ｃが形成されている。穴２２ｂの径は、連通孔２２ｃの径よりも大きい。穴２２ｂの端部には、光ファイバ２１からの光を集光するレンズ２２ｄが配置されている。さらに、支持部２２ａ内壁面には、連通孔２２ｃに対向する位置に孔２２ｆが形成される。この孔２２ｆの奥に、光検出器２２ｇが配置されている。光検出器２２ｇは受光部に相当し、受光光量に応じた電気信号を出力する。レンズ２２ｄを透過した光は、連通孔２２ｃ、支持部２２ａ及び孔２２ｆを介して、光検出器２２ｇの受光面に集光される。光ファイバ２１は、端部が穴２２ｂに挿入された状態で、板ばね２２ｅによって抜け止めされる。

図６Ｂを参照して、支持部２２ａにキュベット１０４が支持されると、レンズ２２ｄによって集光された光は、キュベット１０４およびキュベット１０４に収容された試料を透過して、光検出器２２ｇに入射する。試料において血液凝固反応が進むと、試料の濁度が上昇する。これに伴い、試料を透過する光の光量(透過光量)が減少し、光検出器２２ｇの検出信号のレベルが低下する。

図６Ｃを参照して、散乱光を用いる場合の検出部２２の構成を説明する。支持部２２ａの内側面において、連通孔２２ｃと同じ高さの位置に、孔２２ｈが設けられる。この孔２２ｈの奥に、光検出器２２ｉが配置される。支持部２２ａにキュベット１０４が挿入され、光ファイバ２１から光が出射されると、キュベット１０４内の測定試料によって散乱された光が、孔２２ｈを介して光検出器２２ｉに照射される。この例では、光検出器２２ｉからの検出信号は、測定試料による散乱光の強度を示す。また、図６Ｄに示されるように、測定試料を透過する透過光と、測定試料により散乱される散乱光との両方を検出できるようにしてもよい。

上記のように、検出部２２は、ランプユニット２７から供給される光をキュベット１０４に照射し、測定試料からの光学的情報を取得する。取得された光学的情報は、制御装置４０に送信される。制御装置４０は、光学的情報に基づいて分析を行い、分析結果を表示部４１に表示する。

測定終了後、不要となったキュベット１０４は、キュベットテーブル１３により搬送され、キャッチャ１６により廃棄口２５に廃棄される。なお、測定動作の際に、ピアサ１７ａとピペット１８ａは、流体部２６から供給される洗浄液などの液体により、適宜洗浄される。

測定装置のハードウェア構成について、以下に説明する。図４Ａに示されるように、測定部２０は、制御部２００と、ステッピングモータ部２１１と、ロータリーエンコーダ部２１２と、液面検知センサ２１３と、センサ部２１４と、機構部２１５と、取得部２１６と、バーコードリーダ１４と、ランプユニット２７を含む。

制御部２００は、ＣＰＵ２０１と、メモリ２０２と、通信インターフェース２０３と、Ｉ／Ｏインターフェース２０４を含んでいる。ＣＰＵ２０１は、メモリ２０２に記憶されているコンピュータプログラムを実行する。メモリ２０２は、ＲＯＭ、ＲＡＭ、ハードディスクなどからなる。また、ＣＰＵ２０１は、通信インターフェース２０３を介して、検体搬送部３０を駆動させると共に、制御装置４０との間で指示信号及びデータの送受信を行う。また、ＣＰＵ２０１は、Ｉ／Ｏインターフェース２０４を介して、測定部２０内の各部を制御すると共に、各部から出力された信号を受信する。

ステッピングモータ部２１１は、試薬テーブル１１及び１２と、キュベットテーブル１３と、キャッチャ１６と、検体分注アーム１７と、試薬分注アーム１８と、キュベット移送部２３を、それぞれ駆動するためのステッピングモータを含んでいる。ロータリーエンコーダ部２１２は、ステッピングモータ部２１１に含まれる各ステッピングモータの回転変位量に応じたパルス信号を出力するロータリーエンコーダを含んでいる。

液面検知センサ２１３は、試薬分注アーム１８の先端に設置されたピペット１８ａに接続されており、ピペット１８ａの下端が試薬の液面に接触したことを検知する。センサ部２１４は、ピペット１８ａの上下方向の位置が原点位置に位置付けられたことを検知するセンサと、電源ボタン２０ｄが押されたことを検知するセンサを含んでいる。機構部２１５は、キュベット供給部１５と、緊急検体セット部１９と、加温部２４と、流体部２６を駆動するための機構と、ピアサ１７ａとピペット１８ａによる分注動作が可能となるようピアサ１７ａとピペット１８ａに圧力を供給する空圧源を含んでいる。取得部２１６は、検出部２２を含んでいる。

別の実施形態に係る装置では、図４Ｂに示されるように、測定部２０は、インキュベート部２１７をさらに含む。インキュベート部２１７は、遅延型の凝固時間を測定するために、被験者の血液検体、正常血液検体及び混合検体を所定の条件(例えば37℃で２時間)の下でインキュベートする。インキュベート部２１７は、加温部２４を含んでいてもよいし、別途備えた加温部(加温部２４とは異なる加温部)を含んでいてもよい。

制御装置４０の構成について、以下に説明する。図２に示されるように、制御装置４０は、表示部４１と、入力部４２と、コンピュータ本体４３とから構成されている。制御装置４０は、測定部２０から光学的情報を受信する。そして、制御装置４０のプロセッサは、光学的情報に基づいて凝固時間を算出する。さらに、制御装置４０のプロセッサは、算出された凝固時間に基づいて第１定量化指標の値及び第２定量化指標の値と、それらの比もしくは差の値又はそれらを組み合わせた値とを算出する。また、制御装置４０のプロセッサは、血液検体の判定のためのコンピュータプログラムを実行してもよい。なお、制御装置４０は、本実施形態に係る血液凝固分析のためのシステムに相当する。

制御装置４０の機能構成について、図７に示されるように、制御装置４０は、取得部４０１と、記憶部４０２と、算出部４０３と、判定部４０４と、出力部４０５とを備える。取得部４０１は、測定部２０と、ネットワークを介して通信可能に接続されている。出力部４０５は、表示部４１と通信可能に接続されている。

取得部４０１は、測定部２０から送信された光学的情報を取得する。記憶部４０２は、光学的情報から凝固時間を算出するための式、凝固時間から第１定量化指標の値及び第２定量化指標の値を算出するための式、ならびに第１定量化指標の値及び第２定量化指標の値を用いて演算するための式などを記憶する。また、記憶部４０２は、判定に必要な第１の閾値及び第２の閾値も記憶する。算出部４０３は、取得部４０１で取得された情報を用い、記憶部４０２に記憶された式にしたがって、第１定量化指標の値及び第２定量化指標の値、ならびにそれらの比もしくは差の値又はそれらを組み合わせた値を算出する。出力部４０５は、算出部４０３によって算出された値を、血液検体についての参考情報として出力する。

本実施形態では、判定部４０４は、算出部４０３によって算出された値が、記憶部４０２に記憶された閾値よりも小さいか否かを判定してもよい。この場合、出力部４０５は、判定部４０４による判定結果を、血液検体についての参考情報として出力する。

図８に示されるように、制御装置４０のコンピュータ本体４３は、ＣＰＵ４３１と、ＲＯＭ４３２と、ＲＡＭ４３３と、ハードディスク４３４と、読出装置４３５と、入出力インターフェース４３６と、通信インターフェース４３７と、画像出力インターフェース４３８と、電源ボタン４３９とを備える。ＣＰＵ４３１、ＲＯＭ４３２、ＲＡＭ４３３、ハードディスク４３４、読出装置４３５、入出力インターフェース４３６、通信インターフェース４３７、画像出力インターフェース４３８及び電源ボタン４３９は、バス４４０によって通信可能に接続されている。

ＣＰＵ４３１は、ＲＯＭ４３２に記憶されているコンピュータプログラム及びＲＡＭ４３３にロードされたコンピュータプログラムを実行する。ＣＰＵ４３１がアプリケーションプログラムを実行することにより、上述した各機能ブロックが実現される。これにより、コンピュータシステムが、血液検体を判定するための判定装置としての端末として機能する。

ＲＯＭ４３２は、マスクＲＯＭ、ＰＲＯＭ、ＥＰＲＯＭ、ＥＥＰＲＯＭなどによって構成されている。ＲＯＭ４３２には、ＣＰＵ４３１によって実行されるコンピュータプログラム及びこれに用いるデータが記録されている。

ＲＡＭ４３３は、ＳＲＡＭ、ＤＲＡＭなどによって構成されている。ＲＡＭ４３３は、ＲＯＭ４３２及びハードディスク４３４に記録されているコンピュータプログラムの読み出しに用いられる。また、ＲＡＭ４３３は、これらのコンピュータプログラムを実行するときに、ＣＰＵ４３１の作業領域としても利用される。

ハードディスク４３４は、オペレーティングシステム、ＣＰＵ４３１に実行させるためのアプリケーションプログラム(血液検体の判定のためのコンピュータプログラム)などのコンピュータプログラム、当該コンピュータプログラムの実行に用いるデータ、及び制御装置４０の設定内容がインストールされている。

読出装置４３５は、フレキシブルディスクドライブ、ＣＤ−ＲＯＭドライブ、ＤＶＤ−ＲＯＭドライブなどによって構成されている。読出装置４３５は、ＣＤ、ＤＶＤなどの可搬型記録媒体４４１に記録されたコンピュータプログラムまたはデータを読み出すことができる。

入出力インターフェース４３６は、例えば、ＵＳＢ、ＩＥＥＥ１３９４、ＲＳ−２３２Ｃなどのシリアルインターフェイスと、ＳＣＳＩ、ＩＤＥ、ＩＥＥＥ１２８４などのパラレルインターフェイスと、Ｄ／Ａ変換器、Ａ／Ｄ変換器などからなるアナログインターフェイスとから構成されている。入出力インターフェース４３６には、キーボード、マウスなどの入力部４２が接続されている。ユーザは入力部４２を介して指示を入力し、入出力インターフェース４３６は、入力部４２を介して入力された信号を受け付ける。

通信インターフェース４３７は、例えば、Ethernet(登録商標)インターフェースなどである。制御装置４０は、通信インターフェース４３７により、プリンタへの印刷データの送信が可能である。通信インターフェース４３７は測定装置５０に接続されており、ＣＰＵ４３１は、通信インターフェース４３７を介して、測定装置５０との間で指示信号及びデータの送受信を行う。

画像出力インターフェース４３８は、ＬＣＤ、ＣＲＴなどで構成される表示部４１に接続されている。画像出力インターフェース４３８は、画像データに応じた映像信号を表示部４１に出力し、表示部４１は、画像出力インターフェース４３８から出力された映像信号に基づいて画像を表示する。

図４Ａ及びＢを参照して、測定動作の際、測定部２０のＣＰＵ２０１は、検出部２２(図３参照)から出力された検出信号をデジタル化したデータ(光学的情報)を、メモリ２０２に一時格納する。メモリ２０２の記憶領域は、支持部２２ａ毎にエリア分割される。各エリアには、対応する支持部２２ａに支持されたキュベット１０４に対して所定波長の光を照射したときに取得されるデータ(光学的情報)が、順次格納される。こうして、所定の測定時間にわたって順次、データがメモリ２０２に格納される。測定時間が経過すると、ＣＰＵ２０１は、メモリ２０２に対するデータの格納を中止し、格納したデータを、通信インターフェース２０３を介して制御装置４０に送信する。制御装置４０は、受信したデータを処理して解析を行い、解析結果を表示部４１に表示する。

第２の態様に係る装置による測定処理の一例を以下に説明するが、本発明はこの例に限定されない。この例では、当該装置によって即時型の凝固時間(第１、第２及び第３凝固時間)を測定し、別途測定した遅延型の凝固時間(第４、第５及び第６凝固時間)の入力を受け付けることにより、被験者の血液検体について凝固時間の延長原因に関する情報を出力する。なお、この例では、遅延型の凝固時間は、上記態様に係る装置で測定してもよいし、別の分析装置で測定してもよいし、用手法により測定してもよい。

測定部２０における処理は、主として測定部２０のＣＰＵ２０１の制御の下で行われ、制御装置４０における処理は、主として制御装置４０のＣＰＵ４３１の制御の下で行われる。図９Ａを参照して、測定処理が開始されると、測定部２０は、上記のように、検体搬送部により搬送された検体容器１０１から被験者の血液検体(血漿)を吸引し、これを、キュベットテーブル１３上の空のキュベット１０４に分注する。また、測定部２０は、試薬収容部に収容された正常血液検体が入った試薬容器１０３から正常血液検体(血漿)を吸引し、これを、キュベットテーブル１３上の空のキュベット１０４に分注する。ここで、被験者の血液検体と正常血液検体との混合検体は、ユーザが用手法によって予め調製して、検体容器１０１に収容してもよい。あるいは、混合検体は、測定部２０により調製してもよい。測定部２０による混合検体の調製は、例えば、次のとおりである。測定部２０は、正常血液検体が収容された試薬容器１０３から所定量の正常血液検体(血漿)を吸引して、これを空のキュベット１０４に分注する。そして、測定部２０は、被験者の血液検体が収容された検体容器１０１から所定量の血液検体(血漿)を吸引し、これを、正常血液検体が入っているキュベット１０４に分注して攪拌することにより、混合検体を調製する。

次いで、測定部２０は、被験者の血液検体、正常血液検体及び混合検体のそれぞれが分注されたキュベット１０４を加温部２４に移送して、キュベット１０４内の血液検体を所定温度(例えば37℃)に加温して、各検体を調製する(ステップＳ１１)。そして、測定部２０は、キュベット１０４に試薬を添加して、測定試料を調製する(ステップＳ１２)。測定部２０は、キュベット１０４に試薬を添加した時点から凝固時間の計測を開始する。その後、測定部２０は、試薬が添加されたキュベット１０４を検出部２２に移送し、キュベット１０４に光を照射して測定試料を測定する(ステップＳ１３)。この測定では、波長660 nmの光に基づくデータ(散乱光量又は透過光量)が、測定時間の間、順次、メモリ２０２に格納される。このとき、データは、試薬添加時点からの経過時間に対応付けられた状態でメモリ２０２に格納される。そして、測定時間が経過すると、測定部２０は、測定を中止し、メモリ２０２に格納された測定結果(データ)を制御装置４０に送信する(ステップＳ１４)。

制御装置４０が測定部２０から測定結果(データ)を受信すると(ステップＳ２１：ＹＥＳ）、制御装置４０は、受信した測定結果に対して分析処理を実行する(ステップＳ２２)。すなわち、制御装置４０は、測定試料について、即時型の凝固時間及び第１定量化指標(例えばICA、PC又はRC-S)の算出を行う。分析処理(ステップＳ２２)を行った後、制御装置４０は、即時型の凝固時間を測定した検体についての分析結果の表示処理を実行する(ステップＳ２３)。

上記の分析処理及び表示処理について、図９Ｂを参照して説明する。ステップＳ３１において、制御装置４０の取得部４０１は、測定部２０から受信したデータ(散乱光量又は透過光量)に基づいて、光学的情報(散乱光強度、又は透過度もしくは吸光度)を取得する。ステップＳ３２において、算出部４０３は、取得部４０１が取得した光学的情報から、記憶部４０２に記憶された凝固時間を算出するための式にしたがって、即時型の凝固時間(第１、第２及び第３凝固時間)を算出し、算出された値を記憶部４０２に記憶する。ステップＳ３３において、算出部４０３は、記憶部４０２に記憶された即時型の凝固時間の値から、記憶部４０２に記憶された定量化指標を算出するための式にしたがって、第１定量化指標の値を算出し、算出された値を記憶部４０２に記憶する。ステップＳ３４において、出力部４０５は、分析結果として、即時型の凝固時間、第１定量化指標の値、即時型の凝固時間をプロットしたグラフなどを表示部４１に表示させる。

なお、遅延型の凝固時間を上記態様に係る装置により測定する場合は、ユーザにより調製及び所定の条件下でのインキュベートがなされた各検体を、上述の即時型の凝固時間の測定と同様にして測定すればよい。

次いで、第２の態様に係る装置では、即時型の凝固時間を測定した各検体についての分析結果を示す画面にて、別途測定した遅延型の凝固時間の入力を受け付けると、凝固時間の延長原因に関する情報の分析処理と表示処理を開始する。これらの処理について、以下に説明する。

図１０を参照して、制御装置４０のＣＰＵ４３１は、即時型の凝固時間を測定した各検体についての分析結果画面Ｄ１(図１１Ａ)を表示した状態で、ユーザからの遅延型の凝固時間の入力指示を受け付ける(ステップＳ４１)。

図１１Ａを参照して、画面Ｄ１は、遅延型の凝固時間が入力されていない状態を示している。画面Ｄ１は、検体番号を表示する領域Ｄ１１と、測定項目名を表示する領域Ｄ１２と、測定日時を表示するための領域Ｄ１３と、検体コメントを表示する領域Ｄ１４と、凝固時間及び混合比を表示する領域Ｄ１５と、参考情報を表示する領域Ｄ１６と、凝固時間をプロットしたグラフを表示する領域Ｄ１７と、入力画面を表示させるためのボタンＤ１８とを含む。図１１Ａにおいて、領域Ｄ１５には、混合比及び即時型の凝固時間が表示されている。混合比の欄において、「0/1」は正常血液検体を意味し、「1/10」、「1/5」及び「1/2」はそれぞれ被検血漿率が10、20及び50％(v/v)の混合検体を意味し、「1/1」は被験者の血液検体を意味する。図１１Ａにおいて、領域Ｄ１６には、第１定量化指標としてICAが表示されている。

画面Ｄ１においてユーザがボタンＤ１８を選択すると、ＣＰＵ４３１は、遅延型の凝固時間の入力指示を受け付け(ステップＳ４２：ＹＥＳ)、遅延型の凝固時間の入力画面Ｄ２(図１１Ｂ)を表示する(ステップＳ４３)。第２凝固時間の入力指示が与えられない場合(ステップＳ４２：ＮＯ)、ＣＰＵ４３１は処理を終了する。

図１１Ｂを参照して、画面Ｄ２は、検体の希釈倍率(混合比)、即時型の凝固時間及び遅延型の凝固時間を表示する領域Ｄ２１と、数字入力ボタンＤ２２と、検体コメントを表示する領域Ｄ２３と、入力指示を決定するボタンＤ２４と、入力指示をキャンセルするボタンＤ２５とを含む。図１１Ｂでは、遅延型の凝固時間として、被験者の血液検体、正常血液検体、及び希釈倍率が1/2の混合検体のそれぞれの凝固時間の入力を受け付けた後の領域Ｄ２１を示している。

画面Ｄ２において、ユーザが、入力部４２又は数字入力ボタンＤ２２を介して、別途測定した遅延型の凝固時間(第４、第５及び第６凝固時間)を入力すると、ＣＰＵ４３１は遅延型の凝固時間の入力を受け付け(ステップＳ４４：ＹＥＳ)、遅延型の凝固時間から第２定量化指標の値を算出し、第１定量化指標の値と第２定量化指標の値との比又は差の値を算出する(ステップＳ４５)。あるいは、比及び差の値を組み合わせた値を算出してもよい。そして、ＣＰＵ４３１は、分析結果画面Ｄ３(図１１Ｃ)を表示する(ステップＳ４６)。遅延型の凝固時間が入力されない場合(ステップＳ４４：ＮＯ)、ＣＰＵ４３１は処理を終了する。

図１１Ｃを参照して、画面Ｄ３は、画面Ｄ１が更新されたものである。画面Ｄ３は、検体番号を表示する領域Ｄ３１と、測定項目名を表示する領域Ｄ３２と、測定日時を表示するための領域Ｄ３３と、検体コメントを表示する領域Ｄ３４と、凝固時間及び混合比を表示する領域Ｄ３５と、参考情報を表示する領域Ｄ３６と、凝固時間をプロットしたグラフを表示する領域Ｄ３７とを含む。図１１Ｃにおいて、領域Ｄ３５には、混合比、即時型の凝固時間、及び遅延型の凝固時間が表示されている。領域Ｄ３６には、即時型の凝固時間から算出したICAと、遅延型の凝固時間から算出したICA(ICA D)と、凝固時間の延長原因に関する情報として、第１定量化指標の値と第２定量化指標の値との比(ICA D/ICA)が表示されている。領域Ｄ３７には、即時型の凝固時間及び遅延型の凝固時間のそれぞれをプロットしたグラフが表示されている。

第３の態様に係る装置による測定処理の一例を以下に説明するが、本発明はこの例に限定されない。この例では、当該装置によって即時型の凝固時間(第１、第２及び第３凝固時間)及び遅延型の凝固時間(第４、第５及び第６凝固時間)を測定し、被験者の血液検体について凝固時間の延長原因に関する情報を出力する。すなわち、この例では、ユーザによる遅延型の凝固時間の入力を要しない。

この例では、測定部２０は、上記の被験者の血液検体、正常血液検体及び混合検体のそれぞれを、少なくとも二組ずつ調製し、一方を即時型の凝固時間の測定用検体とし、もう一方を遅延型の凝固時間の測定用検体とする。即時型の凝固時間の測定処理は、上記の第２の態様に係る装置による測定処理について述べたことと同様である。遅延型の凝固時間の測定処理は、図９Ａに示されるステップＳ１１において、調製した各検体を、インキュベート部にて所定の条件下でインキュベートしたことを除いて、即時型の凝固時間の測定処理と同様である。具体的には、ステップＳ１１において、測定部２０は、血液検体が分注されたキュベット１０４をインキュベート部２１７に移送して、キュベット１０４内の血液検体を所定の条件(例えば37℃で２時間)の下でインキュベートする。

図９Ａを参照して、制御装置４０が測定部２０から測定結果(データ)を受信すると(ステップＳ２１：ＹＥＳ）、制御装置４０は、受信した測定結果に対して分析処理を実行する(ステップＳ２２)。すなわち、制御装置４０は、測定試料について、即時型の凝固時間及び遅延型の凝固時間と、第１定量化指標及び第２定量化指標(例えばICA、PC又はRC-S)の算出を行う。分析処理(ステップＳ２２)を行った後、制御装置４０は、各検体についての分析結果の表示処理を実行する(ステップＳ２３)。

上記の分析処理及び表示処理について、図９Ｂを参照して説明する。ステップＳ３１において、制御装置４０の取得部４０１は、測定部２０から受信したデータ(散乱光量又は透過光量)に基づいて、光学的情報(散乱光強度、又は透過度もしくは吸光度)を取得する。ステップＳ３２において、算出部４０３は、取得部４０１が取得した光学的情報から、記憶部４０２に記憶された凝固時間を算出するための式にしたがって、即時型の凝固時間(第１、第２及び第３凝固時間)及び遅延型の凝固時間(第４、第５及び第６凝固時間)を算出し、算出された値を記憶部４０２に記憶する。ステップＳ３３において、算出部４０３は、記憶部４０２に記憶された即時型の凝固時間及び遅延型の凝固時間の各値から、記憶部４０２に記憶された定量化指標を算出するための式にしたがって、第１定量化指標の値及び第２定量化指標の値を算出し、算出された値を記憶部４０２に記憶する。また、算出部４０３は、第１定量化指標の値と第２定量化指標の値との比又は差の値を算出し、算出された値を記憶部４０２に記憶する。あるいは、比及び差の値を組み合わせた値を算出してもよい。ステップＳ３４において、出力部４０５は、分析結果として、即時型の凝固時間及び遅延型の凝固時間、第１定量化指標の値及び第２定量化指標の値、即時型の凝固時間及び遅延型の凝固時間をプロットしたグラフなどを表示部４１に表示させる。例えば、表示部４１は、図１１Ｃに示される画面Ｄ３を表示する。

別の実施形態では、制御装置４０は、上記の比もしくは差の値又はそれらを組み合わせた値と、第１の閾値とを比較し、比較結果に基づいて、被験者の血液検体が、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビター以外の延長原因を有する検体の疑いがあるかについての情報を取得してもよい。

図１２Ａを参照して、制御装置による判定のフローを以下に説明する。図１２Ａでは、第１定量化指標として、即時型の凝固時間から算出されたICA(以下、「即時型ICA」ともいう)と、第２定量化指標として、遅延型の凝固時間から算出されたICA(以下、「遅延型ICA」又は「ICA D」ともいう)とから比の値(ICA D/ICA)を算出し、この比の値と第１の閾値とを比較して血液検体の判定を行なう場合を例として説明する。しかし、本実施形態は、この例に限定されない。この例においては、ICAに代えて、PC又はRC-Sを用いてもよいし、比の値に代えて、差の値、又は、比及び差の値を組み合わせた値を用いてもよい。

まず、ステップＳ１０１において、制御装置４０の算出部４０３は、記憶部４０２に記憶された即時型ICA及び遅延型ICAの値を用いて、両者の比の値(ICA D/ICA)を算出する。次に、ステップＳ１０２において、判定部４０４は、算出部４０３で算出された比の値と、記憶部４０２に記憶された第１の閾値とを用いて、血液検体が、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビター以外の延長原因を有する検体の疑いがあるかを判定する。ここで、比の値が第１の閾値よりも小さくないとき(すなわち、比の値が第１の閾値以上であるとき)、処理はステップＳ１０３に進行する。ステップＳ１０３において、判定部４０４は、被験者の血液検体が凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがあるとの判定結果を出力部４０５に送信する。一方、比の値が第１の閾値よりも小さいとき、処理はステップＳ１０４に進行する。ステップＳ１０４において、判定部４０４は、血液検体が凝固因子インヒビター以外の延長原因を有する検体の疑いがあるとの判定結果を出力部４０５に送信する。

ステップＳ１０５において、出力部４０５は、判定結果を出力し、表示部４１に表示させたり、プリンタに印刷させたりする。あるいは、音声で出力してもよい。これにより、判定結果を、血液検体についての参考情報としてユーザに提供できる。判定結果に関する参考情報は、文字情報でもよいし、フラグのような標識でもよい。さらに、参考情報として、第１の閾値を表示してもよい。

別の実施形態では、制御装置４０は、被験者の血液検体が、凝固因子インヒビター以外の延長原因を有する検体の疑いがあるという情報を取得した場合、第１定量化指標又は第２定量化指標の値に基づいて、被験者の血液検体におけるＬＡについての情報を取得することができる。

図１２Ｂを参照して、制御装置による判定のフローを以下に説明する。このフローでは、即時型ICAの値と第２の閾値とを比較して、血液検体の判定を行なう場合を例として説明する。しかし、本実施形態は、この例に限定されない。この例においては、ICAに代えて、PC又はRC-Sを用いてもよいし、即時型ICAの値に代えて、遅延型ICAの値と第２の閾値とを比較してもよい。

図１２Ｂに示されるステップ２０１、ステップ２０２及びステップ２０３については、図１２Ａのステップ１０１、ステップ１０２及びステップ１０３について述べたことと同様である。ステップＳ２０２において、即時型ICAと遅延型ICAとの比の値(ICA D/ICA)が第１の閾値よりも小さいとき、処理はステップＳ２０４に進行する。ステップＳ２０４において、判定部４０４は、即時型ICAの値と、記憶部４０２に記憶された第２の閾値とを用いて、血液検体が、ＬＡを含む検体の疑いがあるか又は凝固因子インヒビター及びＬＡ以外の延長原因を有する検体の疑いがあるかを判定する。ここで、即時型ICAの値が第２の閾値よりも小さくないとき(すなわち、即時型ICAの値が第２の閾値以上であるとき)、処理はステップＳ２０５に進行する。ステップＳ２０５において、判定部４０４は、被験者の血液検体がＬＡを含む検体の疑いがあるとの判定結果を出力部４０５に送信する。一方、即時型ICAの値が第２の閾値よりも小さいとき、処理はステップＳ２０６に進行する。ステップＳ２０６において、判定部４０４は、血液検体が凝固因子インヒビター及びＬＡ以外の延長原因を有する検体の疑いがあるとの判定結果を出力部４０５に送信する。

ステップＳ２０７において、出力部４０５は、判定結果を出力し、表示部４１に表示させたり、プリンタに印刷させたりする。あるいは、音声で出力してもよい。これにより、判定結果を、血液検体についての参考情報としてユーザに提供できる。判定結果に関する参考情報は、文字情報でもよいし、フラグのような標識でもよい。さらに、参考情報として、第１の閾値及び第２の閾値を表示してもよい。

以下に、本発明を実施例により詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。

実施例１
第１定量化指標と第２定量化指標との比の値により、凝固因子インヒビター陽性検体群と他の検体群との鑑別が可能であるかを検討した。

(１)試薬及び検体
凝固時間測定試薬として、APTT試薬のトロンボチェックAPTT-SLA(シスメックス株式会社)を用いた。また、カルシウム液として、20 mM塩化カルシウム液(シスメックス株式会社)を用いた。被検血漿として、ＬＡ陽性患者の血漿(15例)、凝固因子(第Ｖ因子、第VIII因子、第IX因子又は第XI因子)の欠損患者の血漿(17例)、ヘパリン投与患者の血漿(８例)及び凝固因子(第VIII因子)インヒビター陽性患者の血漿(48例)を用いた。正常血漿として、CRYOcheck Pooled Normal Plasma(Precision BioLogic Inc.社)を用い、精度管理用コントロール試料として、コアグトロールIX・IIX(シスメックス株式会社)を用いた。

(２)検体の処理及び測定
各被検血漿について、被検血漿と正常血漿とを１：１で混合して、被検血漿の比率が50％(v/v)の混合血漿を調製した。被検血漿、正常血漿及び混合血漿の調製後、すぐに凝固時間を測定して、第１、第２及び第３凝固時間(即時型の凝固時間)を得た。また、被検血漿、正常血漿及び混合血漿の調製後、これらを37℃にて２時間インキュベートしてから凝固時間を測定して、第４、第５及び第６凝固時間(遅延型の凝固時間)を得た。なお、即時型の凝固時間の測定では、正常血漿と被検血漿との混合及び凝固時間の測定をCS-2400(シスメックス株式会社)により行った。遅延型の凝固時間の測定では、正常血漿と被検血漿との混合を用手法で行い、被検血漿、正常血漿及び混合血漿を37℃で２時間インキュベートした後、測定をCS-2400(シスメックス株式会社)により行った。具体的な測定手順は次のとおりである。各血漿が合計で50μLになるように反応キュベットに分注し、37℃で１分間加温した。ここに、予め37℃で加温した上記のAPTT試薬(50μL)を添加して、37℃で３分間反応させた。そして、20 mM塩化カルシウム液(50μL)を混合して、透過度を測定した。得られた透過度から凝固時間を算出した。

(３)定量化指標(ICA)の算出
下記の式に従って、即時型の凝固時間から各検体についてのICA(即時型ICA)を算出した。同様に、遅延型の凝固時間から各検体についてのICA(遅延型ICA)を算出した。

ICA ＝ [(ｂ−ｃ)／ａ]×100
(式中、ａ：被検血漿の凝固時間、ｂ：被検血漿の比率が50％(v/v)の混合血漿の凝固時間、ｃ：正常血漿の凝固時間)

(４)即時型ICAと遅延型ICAとの比の算出
下記の式に従って、各検体についての即時型ICAと遅延型ICAとの比を算出した。
比(％) ＝ [(遅延型ICAの値)／(即時型ICAの値)]×100

(５)解析結果
各検体についての即時型ICAと遅延型ICAとの比の値からボックスプロットを作成した。凝固因子インヒビター陽性検体群と他の各検体群との比較をWilcoxon Signed-Rank Testにより行った。結果を図１３に示す。また、凝固因子インヒビター陽性検体群に対してROC解析を行った結果、即時型ICAと遅延型ICAとの比の最適なカットオフ値(閾値)は132％であった。このカットオフ値を用いたときの凝固因子インヒビター陽性検体群に対する感度は93.8％であり、特異度は85.0％であった。

図１３に示されるように、凝固因子インヒビター陽性検体群についての比の値は、他の検体群と比較して有意に高値を示した。また、ROC解析の結果より、凝固因子インヒビター陽性検体群に対する感度及び特異度は良好であった。よって、即時型ICAと遅延型ICAとの比の値を用いることにより、凝固因子インヒビター陽性検体群と、他の延長原因を有する検体群とを精度よく鑑別できると考えられる。また、即時型ICAと遅延型ICAとの比の値を用いることで、APTT延長を示すヘパリン検体との鑑別も可能となることが示唆される。

実施例２
第１定量化指標と第２定量化指標との差の値により、凝固因子インヒビター陽性検体群と他の検体群との鑑別が可能であるかを検討した。なお、実施例２では、実施例１で取得した即時型ICA及び遅延型ICAの値を用いた。

(１)即時型ICAと遅延型ICAとの差の算出
実施例１で取得した即時型ICA及び遅延型ICAの値を用いて、下記の式に従って、各検体についての即時型ICAと遅延型ICAとの差を算出した。
差 ＝ (遅延型ICAの値)−(即時型ICAの値)

(２)解析結果
各検体についての即時型ICAと遅延型ICAとの比の値からボックスプロットを作成した。凝固因子インヒビター陽性検体群と他の各検体群との比較をWilcoxon Signed-Rank Testにより行った。結果を図１４に示す。また、凝固因子インヒビター陽性検体群に対してROC解析を行った結果、即時型ICAと遅延型ICAとの差の最適なカットオフ値(閾値)は6.4であった。このカットオフ値を用いたときの凝固因子インヒビター陽性検体群に対する感度は91.7％であり、特異度は98.8％であった。

図１４に示されるように、凝固因子インヒビター陽性検体群についての差の値は、他の検体群と比較して有意に高値を示した。また、ROC解析の結果より、凝固因子インヒビター陽性検体群に対する感度及び特異度は良好であった。よって、即時型ICAと遅延型ICAとの差の値を用いることにより、凝固因子インヒビター陽性検体群と、他の延長原因を有する検体群とを精度よく鑑別できると考えられる。また、即時型ICAと遅延型ICAとの差の値を用いることで、APTT延長を示すヘパリン検体との鑑別も可能となることが示唆される。

実施例３
即時型ICAと遅延型ICAとの比又は差と、即時型ICAの値とを組み合わせて用いることで、病態の鑑別が可能であるか否かを検討した。具体的には、下記のマトリックスに基づいて、実施例１で用いた検体を分類し、分類結果についての感度及び特異度を調べた。なお、実施例３では、即時型ICAと遅延型ICAとの比のカットオフ値(閾値)を132％とし、即時型ICAと遅延型ICAとの差のカットオフ値(閾値)を6.4とし、即時型ICAのカットオフ値(閾値)を12.4とした。

表１に示されるマトリックスを使用した結果、ＬＡ陽性検体に対する感度は92.6％、特異度は82.2％であった。また、凝固因子インヒビター陽性検体に対する感度は93.8％、特異度は85.0％であった。

表２に示されるマトリックスを使用した結果、ＬＡ陽性検体に対する感度は92.6％、特異度は82.2％であった。また、凝固因子インヒビター陽性検体に対する感度は91.7％、特異度は98.8％であった。

よって、即時型ICAと遅延型ICAとの比又は差と、即時型ICAの値とを組み合わせて用いることにより、実施例１で用いた４種の検体群を、凝固因子インヒビター群、ＬＡ群、及びこれら以外の延長原因を有する群に区別できることが示された。

比較例
即時型ICA及び遅延型ICAのいずれか一方の値により、凝固因子インヒビター陽性検体群と他の検体群との鑑別が可能であるかを検討した。なお、この比較例では、実施例１で取得した即時型ICA及び遅延型ICAの値を用いた。

各検体についての即時型ICA及び遅延型ICAのそれぞれの値からボックスプロットを作成した。凝固因子インヒビター陽性検体群と他の各検体群との比較をWilcoxon Signed-Rank Testにより行った。結果を図１５Ａ及びＢに示す。凝固因子インヒビター陽性検体群に対してROC解析を行った結果、即時型ICAの最適なカットオフ値は11.0であった。このカットオフ値を用いたときの凝固因子インヒビター陽性検体群に対する感度は87.5％であり、特異度は45.0％であった。また、遅延型ICAの最適なカットオフ値は23.0であった。このカットオフ値を用いたときの凝固因子インヒビター陽性検体群に対する感度は81.3％であり、特異度は66.3％であった。

図１５Ａに示されるように、凝固因子インヒビター陽性検体群についての即時型ICAの値は、ＬＡ陽性検体群及び凝固因子欠損検体群とは有意差が認められたが、ヘパリン検体群と比較して有意差は認められなかった。また、図１５Ｂに示されるように、凝固因子インヒビター陽性検体群についての遅延型ICAの値は、ヘパリン検体群及び凝固因子欠損検体群とは有意差が認められたが、ＬＡ陽性検体群と比較して有意差は認められなかった。よって、即時型ICA又は遅延型ICAの値を単独で用いても、凝固因子インヒビター陽性検体群を他の検体群と切り分けることは困難であることが示された。

本出願は、２０１５年３月１３日に出願された日本国特許出願特願２０１５−３９００６号に関し、特許請求の範囲、明細書、図面及び要約書の全ては本明細書中に参照として組み込まれる。

１０ 血液凝固分析装置
１１、１２ 試薬テーブル(試薬収容部)
２０ 測定部
２２ｇ、２２ｉ 光検出器(受光部)
２７ ランプユニット(光源)
３０ 検体搬送部
４０ 制御装置(制御部)
４１ 表示部
４２ 入力部
４３ コンピュータ本体
５０ 測定装置(測定試料調製部及び光学的情報取得部)

Claims (20)

1. 被験者の血液検体の凝固時間である第１凝固時間、正常血液検体の凝固時間である第２凝固時間、及び前記被験者の血液検体と前記正常血液検体とを混合した混合検体の凝固時間である第３凝固時間を、凝固時間測定試薬を用いて測定する工程と、
   所定の条件下でインキュベートした前記被験者の血液検体の凝固時間である第４凝固時間、前記所定の条件下でインキュベートした前記正常血液検体の凝固時間である第５凝固時間、及び前記所定の条件下でインキュベートした前記混合検体の凝固時間である第６凝固時間を、前記試薬を用いて測定する工程と、
   前記第１、第２及び第３凝固時間に基づいて第１定量化指標を取得し、前記第４、第５及び第６凝固時間に基づいて第２定量化指標を取得する工程と、
   前記第１定量化指標の値と前記第２定量化指標の値との比もしくは差の値、又は前記比の値と前記差の値とを組み合わせた値を取得する工程であり、取得した値が、前記被験者の血液検体が凝固因子インヒビターを含む疑いがあるか否かを示唆する情報である、前記取得工程と
   を含み、
   前記所定の条件下でのインキュベートが、15℃以上40℃以下にて、45分以上４時間以下でのインキュベートであり、
   前記第１定量化指標及び第２定量化指標が、それぞれIndex of Circulating Anticoagulant (ICA)、Percent Correction (PC)及びResponse Curve-Score (RC-S)から選択されるいずれか１つである、
   凝固時間の延長原因に関する情報を取得する方法。
2. 前記第１定量化指標の値と前記第２定量化指標の値との比もしくは差の値、又は前記比の値と前記差の値とを組み合わせた値と、第１の閾値とを比較し、比較結果に基づいて、前記被験者の血液検体が、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがあるか否かについての情報を取得する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
3. 前記比の値が、第２定量化指標の値を第１定量化指標の値で除した値であり、
   前記比の値が第１の閾値以上である場合、前記被験者の血液検体は、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがあるという情報を取得し、
   前記比の値が第１の閾値より小さい場合、前記被験者の血液検体は、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがないという情報を取得する、
   請求項２に記載の方法。
4. 前記差の値が、第２定量化指標の値から第１定量化指標の値を減じた値であり、
   前記差の値が第１の閾値以上である場合、前記被験者の血液検体は、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがあるという情報を取得し、
   前記差の値が第１の閾値より小さい場合、前記被験者の血液検体は、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがないという情報を取得する、
   請求項２に記載の方法。
5. 前記情報を取得する工程において、被験者の血液検体は、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがないという情報を取得した場合、第１定量化指標又は第２定量化指標の値に基づいて、前記被験者の血液検体がループスアンチコアグラントを含む疑いがあるか否かについての情報を取得する工程をさらに含む、請求項２〜４のいずれか１項に記載の方法。
6. 前記ループスアンチコアグラントを含む疑いがあるか否かについての情報を取得する工程が、第１定量化指標及び第２定量化指標から選択されたいずれか１つの値と、第２の閾値とを比較し、
   選択された定量化指標の値が第２の閾値以上であるとき、前記被験者の血液検体は、ループスアンチコアグラントを含む検体の疑いがあるという情報を取得し、
   選択された定量化指標の値が第２の閾値より小さいとき、前記被験者の血液検体は、凝固因子インヒビター及びループスアンチコアグラントを含む検体の疑いがないという情報を取得する、
   請求項５に記載の方法。
7. 前記凝固時間測定試薬が、プロトロンビン時間、活性化部分トロンボプラスチン時間、希釈プロトロンビン時間、希釈活性化部分トロンボプラスチン時間、カオリン凝固時間、希釈ラッセル蛇毒時間、トロンビン時間、及び希釈トロンビン時間からなる群より選択される少なくとも１種を測定するための試薬である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
8. 前記血液検体が、全血又は血漿である請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
9. 検体と凝固時間測定試薬とが混和されてなる測定試料を調製する測定試料調製部と、
   調製された前記測定試料に光を照射し、前記測定試料から光量に関する光学的情報を取得する光学的情報取得部と、
   制御部と、
   入力部と、
   表示部と
   を備え、
   前記制御部は、被験者の血液検体と前記試薬とが混和されてなる第１測定試料、正常血液検体と前記試薬とが混和されてなる第２測定試料、及び前記被験者の血液検体と前記正常血液検体とを混合した混合検体と前記試薬とが混和されてなる第３測定試料を調製するように前記測定試料調製部を制御し、
   前記第１、第２及び第３測定試料から、それぞれ第１、第２及び第３光学的情報を取得するように前記光学的情報取得部を制御し、
   前記第１、第２及び第３光学的情報から、それぞれ第１、第２及び第３凝固時間を取得し、前記第１、第２及び第３凝固時間から第１定量化指標の値を取得し、
   所定の条件下でインキュベートした前記被験者の血液検体から取得された第４凝固時間、前記所定の条件下でインキュベートした前記正常血液検体から取得された第５凝固時間、及び前記所定の条件下でインキュベートした前記混合検体から取得された第６凝固時間の入力を、前記入力部によって受け付けると、前記第４、第５及び第６凝固時間に基づいて第２定量化指標の値を取得し、
   前記第１定量化指標の値と前記第２定量化指標の値との比もしくは差の値、又は前記比の値と前記差の値とを組み合わせた値を取得し、取得した値を、前記被験者の血液検体が凝固因子インヒビターを含む疑いがあるか否かを示唆する情報として前記表示部に出力し、
   前記所定の条件下でのインキュベートが、15℃以上40℃以下にて、45分以上４時間以下でのインキュベートであり、
   前記第１定量化指標及び第２定量化指標が、それぞれIndex of Circulating Anticoagulant (ICA)、Percent Correction (PC)及びResponse Curve-Score (RC-S)から選択されるいずれか１つである、
   血液凝固分析装置。
10. 前記制御部は、前記所定の条件下でインキュベートした前記被験者の血液検体と前記試薬とが混和されてなる第４測定試料、前記所定の条件下でインキュベートした前記正常血液検体と前記試薬とが混和されてなる第５測定試料、及び前記所定の条件下でインキュベートした前記混合検体と前記試薬とが混和されてなる第６測定試料を調製するように前記測定試料調製部を制御し、
    前記第４、第５及び第６測定試料から、それぞれ第４、第５及び第６光学的情報を取得するように前記光学的情報取得部を制御し、
    前記第４、第５及び第６光学的情報から、それぞれ第４、第５及び第６凝固時間を取得する、
    請求項９に記載の装置。
11. 前記被験者の血液検体を搬送する搬送部と、前記試薬及び前記正常血液検体を載置するための試薬収容部とを備えており、
    前記測定試料調製部は、前記搬送部により搬送された前記被験者の血液検体と前記試薬収容部に収容された前記試薬とから前記第１測定試料を調製し、前記試薬収容部に収容された前記正常血液検体と前記試薬とから前記第２測定試料を調製し、前記搬送部により搬送された前記被験者の血液検体と前記試薬収容部に収容された前記正常血液検体と前記試薬とから前記第３測定試料を調製する、
    請求項９又は１０に記載の装置。
12. 前記光学的情報が、連続的又は断続的に測定された散乱光量、透過度又は吸光度である、請求項９〜１１のいずれか１項に記載の装置。
13. 前記制御部が、前記比もしくは差の値又はそれらを組み合わせた値と、第１の閾値とを比較し、比較結果に基づいて、前記被験者の血液検体が、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがあるか否かについての情報をさらに取得する、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の装置。
14. 前記比の値が、第２定量化指標の値を第１定量化指標の値で除した値であり、
    前記比の値が第１の閾値以上である場合、前記被験者の血液検体は、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがあるという情報を取得し、
    前記比の値が第１の閾値より小さい場合、前記被験者の血液検体は、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがないという情報を取得する、
    請求項１３に記載の装置。
15. 前記差の値が、第２定量化指標の値から第１定量化指標の値を減じた値であり、
    前記差の値が第１の閾値以上である場合、前記被験者の血液検体は、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがあるという情報を取得し、
    前記差の値が第１の閾値より小さい場合、前記被験者の血液検体は、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがないという情報を取得する、
    請求項１３に記載の装置。
16. 前記制御部は、被験者の血液検体が、凝固因子インヒビターを含む検体の疑いがないという情報を取得した場合、第１定量化指標又は第２定量化指標の値に基づいて、前記被験者の血液検体がループスアンチコアグラントを含む疑いがあるか否かについての情報を取得する、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の装置。
17. 前記制御部は、第１定量化指標及び第２定量化指標から選択されたいずれか１つの値と第２の閾値とを比較し、
    選択された定量化指標の値が第２の閾値以上であるとき、前記被験者の血液検体は、ループスアンチコアグラントを含む検体の疑いがあるという情報を取得し、
    選択された定量化指標の値が第２の閾値より小さいとき、前記被験者の血液検体は、凝固因子インヒビター及びループスアンチコアグラントを含む検体の疑いがないという情報を取得する、
    請求項１６に記載の装置。
18. 検体と凝固時間測定試薬とが混和されてなる測定試料を調製する測定試料調製部と、
    調製された前記測定試料に光を照射し、前記測定試料から光量に関する光学的情報を取得する光学的情報取得部と、
    前記検体を所定の条件下でインキュベートするインキュベート部と、
    制御部と、
    表示部と
    を備え、
    前記制御部は、被験者の血液検体の一部、正常血液検体の一部、及び前記被験者の血液検体と前記正常血液検体とを混合した混合検体の一部を前記所定の条件下でインキュベートするように前記インキュベート部を制御し、
    前記被験者の血液検体と前記試薬とが混和された第１測定試料、前記正常血液検体と前記試薬とが混和された第２測定試料、及び前記混合検体と前記試薬とが混和されてなる第３測定試料を調製するように前記測定試料調製部を制御し、
    前記第１、第２及び第３測定試料から、それぞれ第１、第２及び第３光学的情報を取得するように前記光学的情報取得部を制御し、
    前記所定の条件下でインキュベートした被験者の血液検体と前記試薬とが混和された第４測定試料、前記所定の条件下でインキュベートした正常血液検体と前記試薬とが混和された第５測定試料、及び前記所定の条件下でインキュベートした前記混合検体と前記試薬とが混和されてなる第６測定試料を調製するように前記測定試料調製部を制御し、
    前記第４、第５及び第６測定試料から、それぞれ第４、第５及び第６光学的情報を取得するように前記光学的情報取得部を制御し、
    前記第１、第２及び第３光学的情報から、それぞれ第１、第２及び第３凝固時間を取得し、前記第１、第２及び第３凝固時間から第１定量化指標の値を取得し、
    前記第４、第５及び第６光学的情報から、それぞれ第４、第５及び第６凝固時間を取得し、前記第４、第５及び第６凝固時間から第２定量化指標の値を取得し、
    前記第１定量化指標の値と前記第２定量化指標の値との比もしくは差の値、又は前記比の値と前記差の値とを組み合わせた値を取得し、取得した値を、前記被験者の血液検体が凝固因子インヒビターを含む疑いがあるか否かを示唆する情報として前記表示部に出力し、
    前記所定の条件下でのインキュベートが、15℃以上40℃以下にて、45分以上４時間以下でのインキュベートであり、
    前記第１定量化指標及び第２定量化指標が、それぞれIndex of Circulating Anticoagulant (ICA)、Percent Correction (PC)及びResponse Curve-Score (RC-S)から選択されるいずれか１つである、
    血液凝固分析装置。
19. プロセッサ及び前記プロセッサの制御下にあるメモリを含むコンピュータを備え、
    前記メモリには、下記のステップ：
    被験者の血液検体と凝固時間測定試薬とが混和された第１測定試料の第１光学的情報、正常血液検体と前記試薬とが混和された第２測定試料の第２光学的情報、及び前記被験者の血液検体と前記正常血液検体とを混合した混合検体と前記試薬とが混和されてなる第３測定試料の第３光学的情報を取得するステップと、
    所定の条件下でインキュベートした被験者の血液検体と前記試薬とが混和された第４測定試料の第４光学的情報、前記所定の条件下でインキュベートした正常血液検体と前記試薬とが混和された第５測定試料の第５光学的情報、及び前記所定の条件下でインキュベートした前記混合検体と前記試薬とが混和されてなる第６測定試料の第６光学的情報を取得するステップと、
    前記第１、第２及び第３光学的情報から、それぞれ第１、第２及び第３凝固時間を取得し、前記第４、第５及び第６光学的情報から、それぞれ第４、第５及び第６凝固時間を取得するステップと、
    前記第１、第２及び第３凝固時間から第１定量化指標の値を取得し、前記第４、第５及び第６凝固時間から第２定量化指標の値を取得するステップと、
    前記第１定量化指標の値と前記第２定量化指標の値との比もしくは差の値、又は前記比の値と前記差の値とを組み合わせた値を取得し、取得した値を、前記被験者の血液検体が凝固因子インヒビターを含む疑いがあるか否かを示唆する情報として取得するステップと
    を前記コンピュータに実行させるためのコンピュータプログラムが記録されており、
    前記所定の条件下でのインキュベートが、15℃以上40℃以下にて、45分以上４時間以下でのインキュベートであり、
    前記第１定量化指標及び第２定量化指標が、それぞれIndex of Circulating Anticoagulant (ICA)、Percent Correction (PC)及びResponse Curve-Score (RC-S)から選択されるいずれか１つである、
    血液凝固分析のためのシステム。
20. コンピュータが読み取り可能な媒体に記録されているコンピュータプログラムであって、下記のステップ：
    被験者の血液検体と凝固時間測定試薬とが混和された第１測定試料の第１光学的情報、正常血液検体と前記試薬とが混和された第２測定試料の第２光学的情報、及び前記被験者の血液検体と前記正常血液検体とを混合した混合検体と前記試薬とが混和されてなる第３測定試料の第３光学的情報を取得するステップと、
    所定の条件下でインキュベートした被験者の血液検体と前記試薬とが混和された第４測定試料の第４光学的情報、前記所定の条件下でインキュベートした正常血液検体と前記試薬とが混和された第５測定試料の第５光学的情報、及び前記所定の条件下でインキュベートした前記混合検体と前記試薬とが混和されてなる第６測定試料の第６光学的情報を取得するステップと、
    前記第１、第２及び第３光学的情報から、それぞれ第１、第２及び第３凝固時間を取得し、前記第４、第５及び第６光学的情報から、それぞれ第４、第５及び第６凝固時間を取得するステップと、
    前記第１、第２及び第３凝固時間から第１定量化指標の値を取得し、前記第４、第５及び第６凝固時間から第２定量化指標の値を取得するステップと、
    前記第１定量化指標の値と前記第２定量化指標の値との比もしくは差の値、又は前記比の値と前記差の値とを組み合わせた値を取得し、取得した値を、前記被験者の血液検体が凝固因子インヒビターを含む疑いがあるか否かを示唆する情報として取得するステップと
    を前記コンピュータに実行させ、
    前記所定の条件下でのインキュベートが、15℃以上40℃以下にて、45分以上４時間以下でのインキュベートであり、
    前記第１定量化指標及び第２定量化指標が、それぞれIndex of Circulating Anticoagulant (ICA)、Percent Correction (PC)及びResponse Curve-Score (RC-S)から選択されるいずれか１つである、
    血液凝固分析のためのコンピュータプログラム。