JP6818486B2 - 心房性ナトリウム利尿ペプチド分泌促進用組成物 - Google Patents

Description

本発明は、心房性ナトリウム利尿ペプチド分泌促進用組成物に関する。

心房性ナトリウム利尿ペプチド（Atrial Natriuretic Peptide、ANP）は、主として心房で合成、貯蔵される心臓ホルモンであり、心臓から血中へ分泌される。心房性ナトリウム利尿ペプチドは、ナトリウム利尿、レニンやアルドステロン等の分泌抑制、心肥大抑制、心繊維化抑制、血管新生促進、脂肪細胞分解促進、交感神経抑制をはじめとする様々な作用を有することが知られており、心臓、血管、中枢神経、腎臓、副腎等を介して生体保護機能の維持、改善を図っているといえる（非特許文献１〜３）。このように、心房性ナトリウム利尿ペプチドは生体内で重要な役割を担っている。

従来、心房性ナトリウム利尿ポリペプチド製剤としてカルペリチド（商品名ハンプ）が上市され、急性心不全に対して使用されているが、禁忌及び副作用もある。

錦見 俊雄ら、Na利尿ペプチドの発見と薬理作用、Fluid Management Renaissance Vol.4 No.3, 43-49, 2014 桑原 宏一郎ら、心房性および脳性Na利尿ペプチドの心血管保護作用、Fluid Management Renaissance Vol.4 No.3, 50-56, 2014 吉村 道博、ナトリウム利尿ペプチドの可能性を探究、Angiotensin Research Vol.12 No.3, 158-161, 2015

本発明は、心房性ナトリウム利尿ペプチドの分泌を促進できる新たな組成物を提供することを目的とする。

本発明者らが前記課題に鑑み鋭意検討を行ったところ、イリドイド骨格を有する化合物によれば心房性ナトリウム利尿ペプチドの分泌を促進できることを見いだした。本発明は該知見に基づき更に検討を重ねた結果完成されたものであり、次に掲げるものである。
項１．イリドイド骨格を有する化合物を含有する心房性ナトリウム利尿ペプチド分泌促進用組成物。
項２．１日投与量あたり、イリドイド骨格を有する化合物を１５〜５００ｍｇ含有する、項１に記載の組成物。
項３．食品組成物、医薬組成物または飼料組成物である、項１または２に記載の組成物。
項４．イリドイド骨格を有する化合物がゲニポシド酸である、項１〜３のいずれかに記載の組成物。
項５．高血圧、動脈硬化、心不全、虚血性心疾患、慢性腎臓病、肥満、癌または骨粗鬆症の予防または改善を目的として使用される、項１〜４のいずれかに記載の組成物。

本発明のイリドイド骨格を有する化合物を含有する組成物によれば、心房性ナトリウム利尿ペプチドの分泌を促進できる。本発明によれば、心房性ナトリウム利尿ペプチドの分泌促進に基づく各種有用作用を獲得することができ、従って、これに基づく高血圧、動脈硬化、心不全、虚血性心疾患、慢性腎臓病、肥満、癌、骨粗鬆症といった各種疾患を予防または改善することができる。

図１は、コントロール群と比較して、ゲニポシド酸投与群において血漿ＡＮＰ濃度が上昇したことを示す。

以下、本発明について説明する。

本発明は、イリドイド骨格を有する化合物を含有する心房性ナトリウム利尿ペプチド分泌促進用組成物に関する。

イリドイド骨格を有する化合物としては、ゲニポシド酸、アスペルロシド、アスペルロシド酸、オークビン、デアセチルアスペルロシド酸、スキャンデシド１０−Ｏ−アセテート、オイコミオール、１−デオキシオイコミオール、エピオイコミオール、オイコミシドＡ、オイコミシドＢ、オイコミシドＣ等が例示され、好ましくはゲニポシド酸、アスペルロシド、アスペルロシド酸、オークビンが例示され、より好ましくはゲニポシド酸、アスペルロシドが例示される。

これらの成分は、天然物由来であってもよく、化学合成して製造されたものであってもよく、その由来は制限されない。これらの入手方法も公知である。

例えば、イリドイド骨格を有する化合物を含む天然物としては、トチュウ（杜仲：Eucommia ulmoides、トチュウ目トチュウ科）、オオバコ（オオバコ科）、ヤエヤマアオキ（八重山青木：Morinda citrifolia、アカネ目アカネ科ヤエヤマアオキ属、通常「ノニ」と称される） 等の植物を挙げることができる。使用するこれら植物の部位は、イリドイド骨格を有する化合物を含む部位であれば特に制限されず、全草、花、果実、葉、枝、樹皮、根茎、種子をいずれも使用することができる。これらは１種単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。これらの天然物から前記各種成分を入手する方法は公知である。

本発明を制限するものではないが、この観点から、前述のイリドイド骨格を有する化合物として、好ましくは前記植物由来のイリドイド骨格を有する化合物が例示され、より好ましくはトチュウ由来のイリドイド骨格を有する化合物が例示され、更に好ましくはトチュウ葉由来のイリドイド骨格を有する化合物が例示される。

これらの成分は商業的に入手することもできる。本発明を制限するものではないが、例えばゲニポシド酸の市販品は和光純薬工業株式会社から購入することができる。

これらは１種単独で用いてもよく、２種以上を組み合わせて用いてもよい。

本発明の心房性ナトリウム利尿ペプチド分泌促進用組成物において、イリドイド骨格を有する化合物の含有量は制限されず、対象者（対象動物）の体格、年齢、症状、心房性ナトリウム利尿ペプチド分泌の程度、適用形態、使用目的等に応じて適宜設定すればよい。組成物中のイリドイド骨格を有する化合物の含有量として、本発明を制限するものではないが、１日投与量中、体重６０ｋｇの成人を基準として、イリドイド骨格を有する化合物は総量で好ましくは１５〜５００ｍｇ程度、より好ましくは３０〜３００ｍｇ、更に好ましくは５０〜１５０ｍｇが例示される。本発明の組成物は、１日あたり単回投与であってもよく複数回投与であってもよい。

このような範囲を目安としてイリドイド骨格を有する化合物を投与（摂取）することにより、より効率よく心房性ナトリウム利尿ペプチドの分泌を促進させることができる。

本発明の組成物の形態も制限されず、目的に応じて適宜設定すればよい。本発明の組成物の形態として、液剤、乳剤、懸濁剤、シロップ剤、エキス剤、酒精剤、エリキシル剤等の液状形態、散剤、顆粒剤、細粒剤、錠剤、丸剤、カプセル剤（ハードカプセル、ソフトカプセルを含む）、トローチ、チュアブル、ゲル状、クリーム状、ペースト状、ムース状、液状形態の凍結乾燥物等の半固形または固形形態、この他、エアゾール剤等の各種形態が例示される。

また、例えば本発明の組成物が固形形態である場合、これは水等と混合して使用してもよく、また、本発明の組成物は徐放性の剤形であってもよい。

また、本発明の組成物の使用態様も制限されず、目的に応じて適宜設定すればよい。本発明の組成物の使用態様として、食品組成物（飲料を含む、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品、サプリメント等を含む）、病者用食品を含む）、医薬組成物、飼料組成物、また、食品組成物、医薬組成物、飼料等への添加剤等として使用することができる。

本発明の組成物は、前述の各種形態、使用態様等における従来公知の通常の手順に従い製造すればよく、必要に応じて、薬学的に許容される成分、可食性の成分といった任意の成分と混合等して製造すればよい。該任意の成分として、賦形剤、崩壊剤、希釈剤、滑沢剤、香料、着色剤、甘味剤、矯味剤、懸濁剤、湿潤剤、乳化剤、可溶化剤、分散剤、緩衝剤、結合剤、浸透促進剤、安定剤、増量剤、防腐剤、増粘剤、ｐＨ調整剤、界面活性剤、コーティング剤、吸収促進剤、吸着剤、充填剤、酸化防止剤、抗炎症剤、清涼剤、皮膜形成剤、ゲル化剤、アミノ酸、ビタミン、酵素、各種栄養成分等が例示される。これらは１種単独で使用してもよく、２種以上を組み合わせて使用してもよい。

本発明の組成物は、経口で投与される。対象者（対象動物）も制限されないが、ヒト、ヒト以外の哺乳動物が例示される。ヒト以外の哺乳動物としては、心房性ナトリウム利尿ペプチドが生体保護機能の維持、改善を図っている動物が挙げられ、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、ネコ、サル、ブタ、牛、馬等の動物、好ましくはマウス、ラット、モルモット、ウサギ、イヌ、サル等の動物が例示される。

心房性ナトリウム利尿ペプチドとは、心房組織から産生、分泌される２８個のアミノ酸からなるペプチドホルモンであり、その配列を含めて本分野において広く知られている（非特許文献１）。

本発明の組成物によれば、イリドイド骨格を有する化合物を有効成分として心房性ナトリウム利尿ペプチド分泌を有意に促進できる。このことから、本発明は、イリドイド骨格を有する化合物を用いることを特徴とする心房性ナトリウム利尿ペプチド分泌促進用組成物の製造方法を提供するといえる。また、本発明は、イリドイド骨格を有する化合物を用いることを特徴とする、心房性ナトリウム利尿ペプチド分泌促進方法を提供するといえる。

このように本発明の組成物によれば、心房性ナトリウム利尿ペプチド分泌を有意に促進できる。このことから、本発明によれば心房性ナトリウム利尿ペプチド分泌に基づく有用作用を亢進することができ、心房性ナトリウム利尿ペプチドの分泌促進に基づく各種症状の予防または改善が可能になる。本発明を制限するものではないが、一例として、心房性ナトリウム利尿ペプチドの分泌促進によれば、心筋細胞肥大抑制、心繊維化抑制、血管新生促進、交感神経抑制、水分・塩分摂取調節、ナトリウム利尿促進、レニン分泌抑制、アルドステロン分泌抑制、脂肪分解促進、内軟骨骨化促進、癌転移抑制、血管拡張、血管内皮透過性調節、血管内皮バリア機能調節、血管線維化抑制、血管平滑筋増殖・肥大抑制等の各種効果が得られる。このことから、本発明の組成物は、高血圧、動脈硬化、心不全、虚血性心疾患、慢性腎臓病、肥満、癌、骨粗鬆症の予防及び／または改善に有用である。このことから、本発明の組成物は、高血圧治療薬、動脈硬化治療薬等としても使用できる。

以下、実施例を挙げて本発明を説明するが、本発明は実施例に限定されるものではない。

試験例
（１）ゲニポシド酸（ＧＥＡ）の調製
精製水に４８重量％濃度になるように水酸化ナトリウムを加え５０℃まで昇温した。６分間かけてゲニポシド（四川双子叶生物科技有限公司より購入）を加えて５０℃にて２時間撹拌した。原料の消失を目視で確認した後、２５℃付近まで冷却し、４Ｎ塩酸で中和して粗ゲニポシド酸溶液を得た。粗ゲニポシド酸溶液を希塩酸でｐＨ３．５に調整し、水で平衡化したＯＤＳ（Daisogel SP-120-40/60 ODS-B、ダイソー株式会社製）に吸着させた。次いで、脱塩のため精製水で洗浄し、５０容量％メタノール水溶液にて溶出し、高純度のゲニポシド酸を得た（純度９９．５％以上）。

（２）ゲニポシド酸の投与
ゲニポシド酸をラットに投与し、血中の心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）濃度を測定した。具体的には、前述の方法で精製したゲニポシド酸を純水と混合し、得られた溶液を、ゲニポシド酸１００ｍｇ／ｋｇとなるように絶食後の雄性１６週齢ＳＨＲ（高血圧自然発症ラット）へ単回経口投与した（ｎ＝６）。コントロールとして、前記溶液と同量の純水を、別の雄性１６週齢ＳＨＲ（高血圧自然発症ラット）へ単回経口投与した（ｎ＝６）。

投与６時間後、各ラットの腹部大動脈から全血採血を行い、血漿（約５ｍＬ／匹）を得た。得られた血漿のうち３００μＬをＡＮＰの定量に用いた。

（３）心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）分泌促進評価
血漿中のＡＮＰを定量するにあたり、化学発光酵素免疫測定法の一種であるsandwich chemiluminescent enzyme immunoassay（サンドイッチＣＬＥＩＡ）法を使用した。抗ラット／マウスα-ＡＮＰポリクローナル抗体（pAb #131-7、国立循環器病研究センター提供）が固定化されたマイクロプレートへ標準溶液としてアッセイバッファーに溶解したｒａｔ／ｍｏｕｓｅ ａ−ＡＮＰ（株式会社ペプチド研究所化学合成物）を添加して一次抗体処理を行った後、抗α−ＡＮＰマウスモノクローナル抗体（anti-α-ANP mAb、塩野義製薬株式会社提供）をプレートへ入れ、二次抗体処理を行った。続いて、発光基質（CDP-star plus Emerald II enhancer、Applied Biosystems、USA）を加えた後、プレートリーダー（Molecular Devices、USA）を用いて標準溶液の発光強度（relative luminescent units（ＲＬＵ））を測定し、その平均値からバックグラウンド（Non-Specific Binding（ＮＳＢ））を引いた値を測定値（ＲＬＵ―ＮＳＢ）として算出した。

標準溶液（ｎ＝２）の測定値の変動係数は全ての濃度において１０％以下であり、測定結果に問題がないことを確認した。検量線は、標準溶液濃度の自然対数値を横軸として、測定値の自然対数値を縦軸として作成した。得られた直線の決定係数Ｒ^２値は０．９９８４であり、直線性に問題はなかった。

血漿中のＡＮＰ濃度は、プレートリーダーによる測定値（ＲＬＵ―ＮＳＢ）の自然対数値を、標準溶液の検量線の式に代入して求めた（外部標準法）。血漿測定値（ｎ＝２）の変動係数は各個体において１０％以下であり、測定結果に問題がないことを確認した。

ゲニポシド酸投与群の平均値、コントロール群の平均値を図１に示す。ゲニポシド酸投与群（図中、ＧＥＡ）、コントロール群（図中、ｃｏｎｔｒｏｌ）のＡＮＰ濃度はそれぞれ６９．４±５．２ｐＭ、４６．２±５．３ｐＭであり、ゲニポシド酸投与群の血漿ＡＮＰ濃度がコントロール群の濃度と比較して、有意に上昇していた（ｐ＜０．０５、ｐ＝０．０１０６）。

前記試験の結果を、「ＣＲＣテキストブック 日本臨床薬理学会認定ＣＲＣのための研修ガイドライン」に基づいてヒトへの投与量へ換算した場合、ゲニポシド酸を１００ｍｇ／ｂｏｄｙ（６０ｋｇ）／ｄａｙといえ、このことから、ヒトにおいても同様に心房性ナトリウム利尿ペプチドの分泌促進作用を発揮できることが分かった。

このことから、ゲニポシド酸によれば、心房性ナトリウム利尿ペプチドの分泌を促進できることが確認された。

Claims (3)

1. ゲニポシド酸を含有する心房性ナトリウム利尿ペプチド分泌促進用組成物。
2. １日投与量あたり、ゲニポシド酸を１５〜５００ｍｇ含有する、請求項１に記載の組成物。
3. 食品組成物、医薬組成物または飼料組成物である、請求項１または２に記載の組成物。