JP6830462B2 - 抗体および抗体含有組成物 - Google Patents
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Description
本発明はまた、以下の項目を提供する。
(項目1) 菌体の破砕液を抗原とする抗体。
(項目2) 上記抗体は上記菌体の破砕液を抗原として免疫した鳥類の卵から得られたIgYである項目1に記載の抗体。
(項目3) 上記鳥類はダチョウである項目2に記載された抗体。
(項目4) 上記菌体は、Stapylococcus aureusである請求項1乃至3のいずれかの項目に記載された抗体。
(項目5) 上記菌体は、Propionibacterium acnesである項目1乃至3のいずれかに記載された抗体。
(項目6) ウイルスの表面タンパク質を抗原とする抗体。
(項目7) 上記抗体は上記タンパク質を抗原として免疫した鳥類の卵から得られたIgYである項目6に記載の抗体。
(項目8) 上記鳥類はダチョウである項目7に記載された抗体。
(項目9) 上記タンパク質は、HIVgp120を含む項目6乃至8のいずれかの項目に記載された抗体。
(項目10) 上記タンパク質は、HPVのtype6、11、16、18のいずれかを含む項目6乃至8のいずれかの項目に記載された抗体。
(項目11) 項目1乃至10のいずれかの抗体と基剤を含む抗体含有組成物。
(項目12) 上記基剤はワセリンである項目11記載の抗体含有組成物。
本発明の効果を示す実施例として対象とした細菌は、黄色ブドウ球菌 Staphylococcus aureus (NBRC102135)(以下 S. aureus)、アクネ菌 Propionibacterium acnes (NBRC107605) (以下 P. acnes)の2種類である。
初回免疫は、フロイントの完全アジュバントにタンパク質量として100μgの上記それぞれのホモジネートを混和し、メスのダチョウの腰部の筋肉内に接種した。その後、追加免疫として、初回免疫後上記2種類のホモジネートは、ともに隔週毎に3回追加免疫した。なお、この追加免疫の場合も、フロイントの不完全アジュバントに100μgのバクテリアホモジネート液を混和し、すでに免疫を行っているメスのダチョウの腰部の筋肉内に接種した。
追加免疫2週後以降に産卵されるダチョウ卵より抗体を精製した。抗体の精製法を以下に示す。卵黄からの抗体(IgY)の精製は以下のように行った。
以下のELISAにより、得られた抗体の抗原反応性を測定した。
2μg/mLのバクテリア菌体(S.aureus、P.acnes)、S.aureusのenterotoxins(エンテロトキシン)、S.aureusのTSST−1,コアグラーゼ、プロテアーゼをそれぞれELISA用96穴マイクロプレートの各wellに100μl入れ、室温で2時間放置した。その後、PBSで3回洗浄したのち、市販のブロッキング溶液(ブロックエース:大日本住友製薬)を各wellに100μl入れ2時間放置した。その後、PBSで3回洗浄したのち、免疫前および免疫後のダチョウIgY抗体の段階希釈液(2mg/mLを原液として100倍、200倍〜と2倍段階希釈)を各wellに50μl入れ室温で1時間放置した。
れた結果を、免疫前のIgYの吸光度値の2倍以上となる最高希釈倍率で示した。
培養前のバクテリア液(S.aureus、P.acnes)に1mg/mLとなるようにダチョウ卵黄抗体を混和し、それぞれ寒天培地(半径10cmのシャーレにバクテリア液0.1mlを培養)にて18時間培養した。バクテリアのコロニーをカウントしPFU(プラークフォーミングユニット)を算出した。図1にその結果を示す。図1(a)はS.aureusの場合で、図1(b)は、P.acnesの場合である。横軸は免疫前抗体の場合と、免疫後抗体の場合を示す。縦軸はPFU(×105/100μL)である。どちらの抗体も抗原であるバクテリアの増殖を抑制していた。
培養前のS.aureus液に1mg/mLとなるようにダチョウ卵黄抗体(S.aureusを免疫して得た抗体)を混和し、寒天培地(半径10cmのシャーレにバクテリア液0.1mlを培養)にて18時間培養した。結果は図2の写真に示す。免疫前抗体(
図2(a)左写真)および免疫後(図2(b)右写真)の抗体を混和した結果である。免疫抗体の混和により、バクテリアのコロニー(白点)数が明らかに減少していることが分かる。つまり抗体によりバクテリアの増殖が抑制されていた。
S.aureus、P.acnesの免疫により作製したダチョウ卵黄抗体をワセリン(基剤)に混和(抗体濃度が50μg/mLになるように調整)し、アトピーおよびニキビ罹患人に軟膏として患部に塗布した。一日2回の使用を毎日連続して行い、1週間目の患部の状態を観察した。比較対象には基剤のみを使用した。結果を表3に示す。ここで、「S.aureus抗体」は、S.aureus菌体のホモジネート液を抗原として得た抗体を示し、「P.acnes抗体」は、P.acnes菌体のホモジネート液を抗原として得た抗体を示す。「混合抗体」は、「S.aureus抗体」と「P.acnes抗体」を50対50で混合したものを基剤に混和(全抗体濃度が50μg/mLになるように調整)したものである。
HIVそのものではなく、HIVの表面タンパク質を、遺伝子工学的にバキュロウイルスにより作製されたリコンビナント蛋白質HIVgp120とHIV160を抗原として用いた。HIVgp120とHIVgp160はHIVがヒト細胞に感染するのに必要な蛋白質であり、これらに対する抗体を作製すればHIVの感染を抑制できると考えられる。1匹のダチョウへの免疫はHIVgp120を50μg、HIVgp160を50μgを混合したものを用いた。
子宮頸ガンを誘発するHPV type6、11、16、18を用いた(計4種の抗原)。HPVそのものではなく、遺伝子工学的にバキュロウイルスにより作製されたウイルスのL1タンパク質(リコンビナントタンパク質)を抗原として用いた。1匹のダチョウへの免疫は上記4種類の抗原(各40μg)を混合したものを用いた。
HIVとHPVはそれぞれ別のダチョウに免疫した。初回免疫は、フロイントの完全アジュバントにタンパク質量として100μgの上記ウイルス抗原を混和し、メスのダチョウの腰部の筋肉内に接種した。また、追加免疫として、初回免疫後、上記2パターンともに隔週毎に3回追加免疫した。フロイントの不完全アジュバントに100μgの抗原を混和し、メスのダチョウの腰部の筋肉内に接種した。
追加免疫2週後以降に産卵されるダチョウ卵より抗体を精製した。抗体の精製法を以下に示す。
以下のELISAにより、得られた抗体の抗原反応性を測定した。2μg/mLのHIVgp120、HIVgp160、HPV type6、11、16、18をそれぞれE
LISA用96穴マイクロプレートの各wellに100μl入れ、室温で2時間放置した。
上記ダチョウ卵黄抗体(HIV、HPV)をローション(性交時に直接使用、コンドームの表面にも使用)に混和した。ダチョウ卵黄抗体1mgを10mLのローション液(成分:水、グリセリン、エタノール、ポリアクリル酸Na,ヒドロキシエチルセルロース、フェノキシエタノール、EDTA−2Na,パラベン、ポリソルベート80,脂肪酸ソルビタン)と混和した。この混和液中の抗体活性(HIV、HPVの各抗原)を上記と同様のELISAにより測定した。
表4にHIVgp120とHIVgp160の場合のELISAの結果を示す。表中の数値は、免疫前抗体の吸光度値の2倍以上となる最高希釈倍率である。HIV感染に重要とされるHIVgp120とHIVgp160に対して高い力価の抗体が産生されることが判明した。また、ローションに混和しても抗体活性が全く失われないことが判明した。
Claims (6)
- ヒトエイズウイルス(HIV)の表面タンパク質を抗原とするダチョウ抗体と基剤とを含む組成物であって、前記タンパク質は、HIVのgp120、gp160、gp41のいずれかを含み、前記組成物がローションであり、前記ローションが、水、グリセリン、エタノール、ポリアクリル酸Na、ヒドロキシエチルセルロース、フェノキシエタノール、EDTA−2Na、パラベン、ポリソルベート80および脂肪酸ソルビタンを含む、組成物。
- 前記抗体は前記タンパク質を抗原として免疫した鳥類の卵から得られたIgYである、請求項1に記載の組成物。
- ポリクローナル抗体である、請求項1または2に記載の組成物。
- 前記タンパク質は、HIVのgp120、gp160のいずれかを含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記タンパク質は、HIVのgp120およびgp160を含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の組成物。
- HIV感染の予防用または治療用の、請求項1〜5のいずれか1項に記載の組成物。
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