JP6846052B2 - クルクミンホウ素錯体及びこれを含有する医薬 - Google Patents
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Description
本発明は、種々の病原性アミロイドが関与する疾患を予防又は治療するための医薬に関する。
通常、タンパク質はフォールディングすることにより、特異的なネイティブ構造を形成して生命機能を担うが、一方でミスフォールディングすることでβシート構造に富んだ線維へと凝集（アミロイド化）することがある。このアミロイド化の過程で産生する凝集体（オリゴマー、プロトフィブリル、線維）は様々な機能障害を引き起こすことが知られており（このような疾患は「アミロイド病」と総称される）、２０種類以上のタンパク質がアミロイド病の原因物質として同定されている。そのようなアミロイドとしては、例えば、アルツハイマー病のアミロイドβ、タウ蛋白質、パーキンソン病のαシヌクレイン、糖尿病のアミリン、全身性アミロイド−シスのトランスサイレチン、ハンチントン病のハンチンチン等が知られている。
これらの病原性アミロイドを標的とした治療薬の開発戦略としては、例えばアルツハイマー病の原因アミロイドであるアミロイドβ（Ａβと略す）に対しては、前駆体蛋白質からＡβを産生する酵素の阻害剤、Ａβの分解酵素促進剤、免疫療法、Ａβの凝集阻害剤等が知られている。
一方、Ａβに関しては、ＡβペプチドのＭｅｔ酸素化体（ＡβペプチドのＭｅｔ残基の硫黄原子が酸素化（Ｏ）された酸素化体）が生体内に少量残存すること、及び当該Ｍｅｔ酸素化体はＡβペプチドに比べて凝集性が低いことが報告されている（非特許文献１〜３）。かかる観点から、本発明者は、式（ａ）で表されるＡβ結合部位を有するフラビン光触媒を用いてＡβペプチドを酸素化するとＡβペプチド酸素化体が得られ、当該Ａβペプチド酸素化体はＡβの凝集を抑制することを報告した（非特許文献４）。
一方、Ａβに関しては、ＡβペプチドのＭｅｔ酸素化体（ＡβペプチドのＭｅｔ残基の硫黄原子が酸素化（Ｏ）された酸素化体）が生体内に少量残存すること、及び当該Ｍｅｔ酸素化体はＡβペプチドに比べて凝集性が低いことが報告されている（非特許文献１〜３）。かかる観点から、本発明者は、式（ａ）で表されるＡβ結合部位を有するフラビン光触媒を用いてＡβペプチドを酸素化するとＡβペプチド酸素化体が得られ、当該Ａβペプチド酸素化体はＡβの凝集を抑制することを報告した（非特許文献４）。
Hou, L. et al.J. Biol. Chem., 2002, Vol.277, No.43, p40173-40176
Bitan, G. et al.J. Am. Chem. Soc., 2003, Vol.125, No.50, p15359-15365
Moskovitz, J. etal. Biochemistrym, 2011, 50, p10687-10697
A. Taniguchi etal. Angew. Chem. Int. Ed., 2014, 53, 1382-1385
しかしながら、前記非特許文献４で用いたフラビン光触媒はＡβ非存在下においても酸素化活性を有するため、インビトロでは適用可能であるが、生体内では非特異的に反応する可能性があり、生体内への適用は困難であった。また、Ａβペプチドにしか適用できないものであった。
従って、本発明の課題は、生体内に適用可能で、アミロイドに選択的であって、Ａβペプチドだけでなく他のアミロイドにも適用可能なアミロイド酸素化触媒として有用な化合物及びこれを用いたアミロイド関連疾患予防治療薬を提供することにある。
従って、本発明の課題は、生体内に適用可能で、アミロイドに選択的であって、Ａβペプチドだけでなく他のアミロイドにも適用可能なアミロイド酸素化触媒として有用な化合物及びこれを用いたアミロイド関連疾患予防治療薬を提供することにある。
そこで本発明者は、アミロイドに対する選択的な酸素化活性を有し、生体内に適用可能な触媒を開発すべく種々検討した結果、Ｘ3が臭素原子、ヨウ素原子又はセレン原子であるという特徴を有する下記一般式（１）で表されるクルクミンホウ素錯体が、長波長側の光照射によりＡβペプチド及び他のアミロイドに対する酸素化活性が強く、毒性が強いＡβペプチド凝集体に対する酸素化活性が特に強く、アミロイド以外のペプチドに対しては酸素化活性を有さず、かつ水中や光照射に対する安定性が高いことから、凝集性を有しないアミロイド酸素化体を生成する生体内触媒として有用であることを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、次の〔１〕〜〔１１〕を提供するものである。
次の一般式（１）
（式中、Ｘ1及びＸ2は、同一又は異なって、ハロゲノアルキル基又はハロゲン原子を示し；
Ｘ3は、臭素原子、ヨウ素原子又はセレン原子を示し；
Ｒ1及びＲ2は、同一又は異なって、水素原子又は置換基を有していてもよいアルキル基を示し；
Ｒ3及びＲ4は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、アルコキシ基又は置換基を有していてもよいアルキル基を示すか、Ｒ1とＲ3、又はＲ2とＲ4が一緒になって、置換基を有していてもよいアルキレン基又はアルケニレン基を形成してもよく；
Ｒ5及びＲ6は、同一又は異なって、水素原子又は置換基を有していてもよいアルキル基を示し；
Ｒ7及びＲ8は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、アルコキシ基又は置換基を有していてもよいアルキル基を示すか、Ｒ5とＲ7、又はＲ6とＲ8が一緒になって、置換基を有していてもよいアルキレン基又はアルケニレン基を形成してもよく；
ｍ及びｎは、１〜３の整数を示す）
で表されるクルクミンホウ素錯体又はその塩。
〔２〕Ｘ1がハロゲノアルキル基であり、Ｘ2がハロゲン原子である〔１〕記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩。
〔３〕ｍ及びｎが１である〔１〕又は〔２〕記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩。
〔４〕Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8が示す置換基を有していてもよいアルキル基が、カルボキシ基、スルホン酸基、ヒドロキシ基、アミノ基、−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−及びトリアゾール基から選ばれる１種以上の置換基を有していてもよいアルキル基である〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩。
〔５〕Ｒ1とＲ3、Ｒ2とＲ4、Ｒ5とＲ7、又はＲ6とＲ8が一緒になって形成されるアルキレン基又はアルケニレン基の炭素数が２又は３である〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩。
〔６〕〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩を有効成分とする医薬。
〔７〕病原性アミロイドが関連する疾患の予防又は治療薬である〔６〕記載の医薬。
〔８〕〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩及び薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物。
〔９〕病原性アミロイドが関与する疾患の予防又は治療薬製造のための〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩の使用。
〔10〕病原性アミロイドが関与する疾患を予防又は治療するための、〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩。
〔11〕〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩の有効量を投与することを特徴とする病原性アミロイドが関連する疾患を予防又は治療する方法。
Ｘ3は、臭素原子、ヨウ素原子又はセレン原子を示し；
Ｒ1及びＲ2は、同一又は異なって、水素原子又は置換基を有していてもよいアルキル基を示し；
Ｒ3及びＲ4は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、アルコキシ基又は置換基を有していてもよいアルキル基を示すか、Ｒ1とＲ3、又はＲ2とＲ4が一緒になって、置換基を有していてもよいアルキレン基又はアルケニレン基を形成してもよく；
Ｒ5及びＲ6は、同一又は異なって、水素原子又は置換基を有していてもよいアルキル基を示し；
Ｒ7及びＲ8は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、アルコキシ基又は置換基を有していてもよいアルキル基を示すか、Ｒ5とＲ7、又はＲ6とＲ8が一緒になって、置換基を有していてもよいアルキレン基又はアルケニレン基を形成してもよく；
ｍ及びｎは、１〜３の整数を示す）
で表されるクルクミンホウ素錯体又はその塩。
〔２〕Ｘ1がハロゲノアルキル基であり、Ｘ2がハロゲン原子である〔１〕記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩。
〔３〕ｍ及びｎが１である〔１〕又は〔２〕記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩。
〔４〕Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7及びＲ8が示す置換基を有していてもよいアルキル基が、カルボキシ基、スルホン酸基、ヒドロキシ基、アミノ基、−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−及びトリアゾール基から選ばれる１種以上の置換基を有していてもよいアルキル基である〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩。
〔５〕Ｒ1とＲ3、Ｒ2とＲ4、Ｒ5とＲ7、又はＲ6とＲ8が一緒になって形成されるアルキレン基又はアルケニレン基の炭素数が２又は３である〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩。
〔６〕〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩を有効成分とする医薬。
〔７〕病原性アミロイドが関連する疾患の予防又は治療薬である〔６〕記載の医薬。
〔８〕〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩及び薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物。
〔９〕病原性アミロイドが関与する疾患の予防又は治療薬製造のための〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩の使用。
〔10〕病原性アミロイドが関与する疾患を予防又は治療するための、〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩。
〔11〕〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩の有効量を投与することを特徴とする病原性アミロイドが関連する疾患を予防又は治療する方法。
本発明のクルクミンホウ素錯体（１）は、長波長側の光照射によりＡβペプチド等の病原性アミロイドを酸素化する触媒活性が高く、生体内でアミロイドを酸素化することによりアミロイドの凝集を抑制し、また凝集したアミロイドに対する酸素化活性が高く、アミロイド以外のペプチドに対しては酸素化活性を有さず、かつ水に対する安定性や光照射条件下での安定性が高いことから、病原性アミロイドが関与する疾患の予防治療薬として有用である。本明細書では、酸素化（oxygenation）は、酸化（oxidation）のうち、特に酸素原子を結合させる反応を意味する。
一般式（１）中、Ｘ1及びＸ2は、同一又は異なって、ハロゲノアルキル基又はハロゲン原子を示す。ハロゲノアルキル基としては、直鎖又は分岐鎖のハロゲノＣ1−Ｃ6アルキル基が好ましく、直鎖又は分岐鎖のハロゲノＣ1−Ｃ4アルキル基がより好ましい。ハロゲノアルキル基の具体例としては、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基等のパーフルオロＣ1−Ｃ6アルキル基が挙げられ、パーフルオロＣ1−Ｃ4アルキル基がより好ましい。ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子が挙げられる。
Ｘ1及びＸ2は両者がハロゲン原子又はハロゲノアルキル基であってもよいが、アミロイドに対する酸素化活性の選択性の点から、Ｘ1がハロゲノアルキル基であり、Ｘ2がハロゲン原子であるのが好ましく、Ｘ1がパーフルオロＣ1−Ｃ6アルキル基であり、Ｘ2がフッ素原子であるのがより好ましく、Ｘ1がトリフロオロメチル基又はペンタフルオロエチル基であり、Ｘ2がフッ素原子であるのがさらに好ましい。
Ｘ3は、臭素原子、ヨウ素原子又はセレン原子を示す。Ｘ3がこれらの重原子であることにより、アミロイドに対する強い酸素化活性が得られる。
Ｒ1及びＲ2は、同一又は異なって、水素原子又は置換基を有していてもよいアルキル基を示す。Ｒ3及びＲ4は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、アルコキシ基又は置換基を有していてもよいアルキル基を示すか、Ｒ1とＲ3、又はＲ2とＲ4が一緒になって、置換基を有していてもよいアルキレン基又はアルケニレン基を形成してもよい。Ｒ5及びＲ6は、同一又は異なって、水素原子又は置換基を有していてもよいアルキル基を示す。Ｒ7及びＲ8は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、アルコキシ基又は置換基を有していてもよいアルキル基を示すか、Ｒ5とＲ7、又はＲ6とＲ8が一緒になって、置換基を有していてもよいアルキレン基又はアルケニレン基を形成してもよい。
Ｒ1〜Ｒ8におけるアルキル基としては、直鎖又は分岐鎖のＣ1−Ｃ6アルキル基が好ましく、直鎖又は分岐鎖のＣ1−Ｃ4アルキル基がさらに好ましい。当該アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基等が挙げられる。これらのアルキル基に置換し得る基としては、カルボキシ基、スルホン酸基、ヒドロキシ基、アミノ基、−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−、及びトリアゾール基から選ばれる１〜３個が好ましい。このうち、カルボキシ基、スルホン酸基、ヒドロキシ基、アミノ基が水溶性を高める点で好ましい。
好ましい置換基の例としては、−（ＣＨ2）l−（Ｙ）0−（ＣＨ2）p−Ｚが挙げられる。ここで、Ｙは、−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−又はトリアゾール環を示す。また、ｏは０又は１の数を示す。トリアゾール環としては、１，２，３−トリアゾール−１，４−ジイル基、１，２，４−トリアゾール−１，３−ジイル基が挙げられる。
ｌ及びｐは、同一又は異なって、１〜６の整数を示す。ｌは１〜６の整数が好ましく、１〜４の整数がより好ましい。ｐは１〜６の整数が好ましく、１〜４の整数がより好ましい。
Ｚは、ヒドロキシ基、アミノ基、カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）又はスルホン酸基（−ＳＯ3Ｈ）を示す。
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ7及びＲ8で示されるアルコキシ基としては、直鎖又は分岐鎖のＣ1−Ｃ6アルコキシ基が好ましく、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ基がさらに好ましい。具体的には、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基等が挙げられる。また、ハロゲン原子としては、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、フッ素原子が挙げられる。
ｌ及びｐは、同一又は異なって、１〜６の整数を示す。ｌは１〜６の整数が好ましく、１〜４の整数がより好ましい。ｐは１〜６の整数が好ましく、１〜４の整数がより好ましい。
Ｚは、ヒドロキシ基、アミノ基、カルボキシル基（−ＣＯＯＨ）又はスルホン酸基（−ＳＯ3Ｈ）を示す。
Ｒ3、Ｒ4、Ｒ7及びＲ8で示されるアルコキシ基としては、直鎖又は分岐鎖のＣ1−Ｃ6アルコキシ基が好ましく、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ基がさらに好ましい。具体的には、メトキシ基、エトキシ基、プロピルオキシ基等が挙げられる。また、ハロゲン原子としては、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、フッ素原子が挙げられる。
Ｒ1とＲ3、Ｒ2とＲ4、Ｒ5とＲ7、又はＲ6とＲ8が一緒になって形成するアルキレン基としては、Ｃ2〜Ｃ4アルキレン基が好ましく、エチレン基、トリメチレン基、テトラメチレン基が挙げられる。アルケニレン基としては、ビニレン基、プロペニレン基が挙げられる。
これらの基が一緒になって形成する環構造としては、以下のものが挙げられる。
（ａ）〜（ｒ）の構造中、Ｒ1〜Ｒ8はアルキレン基やアルケニレン基を形成する場合以外の基を示す。
ｍ及びｎは、１〜３の整数を示すが、１又は２が好ましく、１がより好ましい。
本発明化合物（１）が不斉炭素原子を有する場合、本発明には光学異性体が存在するが、光学異性体及びラセミ体のいずれも含まれる。
本発明化合物（１）は、例えば次の反応式に従って製造することができる。
（式中、Ｘ1〜Ｘ3、Ｒ1〜Ｒ8は前記と同じ）
すなわち、ハロゲノアセチルアセトン（２）にハロゲン化ホウ酸化合物を反応させ化合物（３）を得、これにベンズアルデヒド化合物（４）を縮合させて化合物（５）を得、次いで化合物（５）と化合物（６）とをさらに縮合させることにより化合物（１）が得られる。
ハロゲノアセチルアセトン（２）に反応させるハロゲン化ホウ酸としては、例えば、ＢＦ3・Ｅｔ2Ｏ、ＣＦ3ＢＦ3Ｋ、ＣＦ3ＣＦ2ＢＦ3Ｋ等が用いられる。ハロゲノアセチルアセトン（２）とハロゲン化ホウ酸との反応は、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル等の酸の存在下、アセトニトリル等の極性溶媒中、０℃〜室温で行うことができる。
化合物（３）とベンズアルデヒド化合物（４）との縮合反応は、アルドール縮合反応である。トリメトキシボラン、トリエトキシボラン、トリブトキシボラン等のホウ酸エステル、アミン等の塩基の存在下に行うことができる。反応は、トルエン等の不活性溶媒中、室温〜８０℃程度の温度で行うことができる。
得られた化合物（５）に化合物（６）を縮合させることにより、本発明化合物（１）が得られる。化合物（５）と化合物（６）の縮合反応も、アルドール縮合反応である。前記化合物（３）とベンズアルデヒド化合物（４）との縮合反応と同様に行うことができる。
Ｒ5又はＲ6が、−（ＣＨ2）l−（Ｙ）O−（ＣＨ2）p−Ｚを示す場合、化合物（６）は、例えば次の反応式に従って製造できる。
（式中、Ｈａｌはハロゲン原子を示し、Ｚ1はアルコキシカルボニル基又はアルキルスルホニル基を示し、Ｚ、Ｙ、ｌ、ｏ及びｐは前記と同じ）
テトラヒドロキノリン（７）に化合物（８）を反応させ、得られた化合物（９）にジメチルホルムアミド等のホルミル化剤を反応させ、加水分解することにより化合物（６）が得られる。ここで、テトラヒドロキノリン（７）と化合物（８）の反応は、ヨウ化カリウム、炭酸カリウム等の塩基の存在下に、アセトニトリル中で８０〜１００℃で行えばよい。また、化合物（９）のホルミル化反応は、オキシ塩化リン等の酸触媒の存在下、ジメチルホルムアミド等を室温下で反応させればよい。Ｚ1部分の加水分解は、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の塩基を反応させればよい。
また、前記中のＹがトリアゾールのような複素環である場合は、次の反応式に従って製造することもできる。
（式中、Ｘ1〜Ｘ3、Ｒ1〜Ｒ4、ｌ及びＺは前記と同じ）
化合物（５）と化合物（１０）を縮合させて化合物（１１）を得、次いで化合物（１１）に化合物（１２）を反応させることにより化合物（１ａ）が得られる。
化合物（５）と化合物（１０）の縮合反応は、アルドール縮合反応であり、前記化合物（３）とアルデヒド化合物（４）との反応と同様に行うことができる。
化合物（１１）と化合物（１２）の反応は、アルキンとアジドの１，３−双極子付加反応であり、硫酸銅等の銅触媒の存在下、ジメチルホルムアミド、水等の極性溶媒中、室温で容易に進行する。
得られる本発明の化合物（１）は、洗浄、結晶化、再結晶、クロマトグラフィー等の通常の手段により、反応混合物から単離、精製することができる。
本発明化合物（１）の最大吸光波長は、チオフラビンＴに比べて長波長側にシフトしている。
また、Ａβに本発明化合物（１）を添加し、生理的条件下で６６０ｎｍ以上の光を照射すると、経時的にネイティブＡβが減少するとともに、酸素原子が１〜４個付加した酸素化Ａβが増加した。その酸素化効率は、チオフラビンＴに比べて顕著に高かった。また、本発明化合物（１）による酸素化反応は、アンギオテンシンIVやメチオニンエンケファリン等の非アミロイド性のペプチドに対しては極めて弱く、Ａβに選択的である。
さらに、本発明化合物（１）は、単量体のＡβペプチドに対する酸素化活性よりも、毒性が強い凝集Ａβペプチドに対する酸素化活性が高かった。また、本発明化合物（１）は、水に対する安定性及び光照射条件下での安定性も優れている。
従って、本発明化合物（１）は、Ａβペプチド、アミリン、トランスサイレチン、αシヌクレイン、タウ蛋白質、ハンチンチン等の病原性アミロイドを選択的に酸素化する触媒として作用する。これらの病原性アミロイドは、酸素化されるとβ−シート構造の積層体を形成しなくなるため、病原性を生じなくなる。従って、本発明化合物（１）は、ヒトを含む動物のアルツハイマー病、パーキンソン病、糖尿病、ハンチントン病、全身性アミロイド−シス等の病原性アミロイドが関与する疾患の予防治療薬として有用である。
また、Ａβに本発明化合物（１）を添加し、生理的条件下で６６０ｎｍ以上の光を照射すると、経時的にネイティブＡβが減少するとともに、酸素原子が１〜４個付加した酸素化Ａβが増加した。その酸素化効率は、チオフラビンＴに比べて顕著に高かった。また、本発明化合物（１）による酸素化反応は、アンギオテンシンIVやメチオニンエンケファリン等の非アミロイド性のペプチドに対しては極めて弱く、Ａβに選択的である。
さらに、本発明化合物（１）は、単量体のＡβペプチドに対する酸素化活性よりも、毒性が強い凝集Ａβペプチドに対する酸素化活性が高かった。また、本発明化合物（１）は、水に対する安定性及び光照射条件下での安定性も優れている。
従って、本発明化合物（１）は、Ａβペプチド、アミリン、トランスサイレチン、αシヌクレイン、タウ蛋白質、ハンチンチン等の病原性アミロイドを選択的に酸素化する触媒として作用する。これらの病原性アミロイドは、酸素化されるとβ−シート構造の積層体を形成しなくなるため、病原性を生じなくなる。従って、本発明化合物（１）は、ヒトを含む動物のアルツハイマー病、パーキンソン病、糖尿病、ハンチントン病、全身性アミロイド−シス等の病原性アミロイドが関与する疾患の予防治療薬として有用である。
本発明化合物（１）は、病原性アミロイドの酸素化反応を触媒する。この酸素化反応は、光によって本発明化合物（１）が励起状態となり、アミロイドを酸素化することにより進行する。従って、本発明化合物（１）を医薬として使用する場合には、本発明化合物（１）を投与後、患者に光を照射するのが好ましい。また、本発明化合物（１）を励起状態とするための光の波長は６６０ｎｍ以上と長波長であるから、生体を透過しやすいという特徴を有する。
また、本発明化合物（１）の作用により酸素化されるアミロイド中のアミノ酸残基としては、メチオニン残基の硫黄原子、ヒスチジン残基のイミダゾール環等が挙げられる。
本発明化合物（１）を含有する医薬組成物は投与法に応じ適当な製剤を選択し、薬学的に許容される担体を用いて各種製剤の調製法にて調製できる。本発明化合物（１）を主剤とする医薬組成物の剤形としては例えば錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤や、液剤、シロップ剤、エリキシル剤、油性ないし水性の懸濁液等を経口用製剤として例示できる。
注射剤としては製剤中に安定剤、防腐剤、溶解補助剤を使用することもあり、これらの補助剤を含むこともある溶液を容器に収納後、凍結乾燥等によって固形製剤として用時調製の製剤としてもよい。また一回投与量を一の容器に収納してもよく、また多投与量を一の容器に収納してもよい。
また外用製剤として液剤、懸濁液、乳濁液、軟膏、ゲル、クリーム、ローション、スプレー、貼付剤等を例示できる。
固形製剤としては本発明化合物（１）とともに薬学上許容されている添加物を含み、例えば充填剤類や増量剤類、結合剤類、崩壊剤類、溶解促進剤類、湿潤剤類、潤滑剤類等を必要に応じて選択して混合し、製剤化することができる。
液体製剤としては溶液、懸濁液、乳液剤等を挙げることができるが添加剤として懸濁化剤、乳化剤等を含むこともある。
液体製剤としては溶液、懸濁液、乳液剤等を挙げることができるが添加剤として懸濁化剤、乳化剤等を含むこともある。
本発明化合物（１）を人体用の医薬として使用する場合、投与量は成人１日あたり１ｍｇ〜１ｇ、好ましくは１ｍｇ〜３００ｍｇの範囲が好ましい。
以下、本発明を実施例を挙げて具体的に説明するが、本発明の範囲は下記実施例に限定されることはない。
合成例１
ヨウ化カリウム（１５．９ｇ，９５．６ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（１１．０ｇ，７９．７ｍｍｏｌ）が溶解したアセトニトリル（４０ｍＬ）に対し、１，２，３，４−テトラヒドロキノリン（５．０ｍＬ，３９．８ｍｍｏｌ）およびメチル６−ブロモヘキサノエート（７．３ｍＬ，４７．８ｍｍｏｌ）を室温で加え、反応懸濁液をアルゴン雰囲気下、１００℃で３０時間撹拌した。反応液を室温まで冷やし、濾過後、減圧濃縮し、水による希釈、酢酸エチルによる抽出を行った。有機層を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、有機溶媒を減圧除去した。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し（ｈｅｘａｎｅ／ＥｔＯＡｃ＝１００／０ ｔｏ ８０／２０）化合物Ａを得た（７．９５ｇ，７６％）。
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.02 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.51-6.54 (m, 2H), 3.66 (s, 3H), 3.20-3.26 (m, 4H), 2.73 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.90-1.94 (m, 2H), 1.63-1.69 (m, 2H), 1.56-1.62 (m, 2H), 1.32-1.38 (m, 2H); LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 262; found: 262.
1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.02 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.51-6.54 (m, 2H), 3.66 (s, 3H), 3.20-3.26 (m, 4H), 2.73 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 1.90-1.94 (m, 2H), 1.63-1.69 (m, 2H), 1.56-1.62 (m, 2H), 1.32-1.38 (m, 2H); LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 262; found: 262.
合成例２
化合物Ａ（３．３ｇ，１２．６ｍｍｏｌ）が溶解したジクロロメタン（２０ｍＬ）に対し、ＤＭＦ（９．８ｍＬ，１２６ｍｍｏｌ）および塩化ホスホリル（３．５ｍＬ，３７．８ｍｍｏｌ）を加え、アルゴン雰囲気下、混合液を室温で１日撹拌した。反応混合液を、水で希釈し、水酸化ナトリウム水溶液を加えて中和し、減圧濃縮後、酢酸エチルにて抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムによって乾燥させた。有機溶媒を減圧除去したのち、得られた残渣をメタノール（２０ｍＬ）に溶解し、５規定水酸化カリウム（６ｍＬ）を０℃にてゆっくりと加えた。反応混合液を６時間室温で撹拌した。反応混合液を水で希釈後、塩酸水溶液を０℃にて加えることによりｐＨを１にし、その後酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムによって乾燥させた。有機溶媒を減圧除去したのち、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒比 ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１）によって精製を行い、化合物Ｂを薄い緑色の固体として得た（２．４ｇ，６９％）。
1H NMR (392 MHz, DMSO-d6) δ 12.03 (s, 1H), 9.56 (s, 1H), 7.48 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.64 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 3.49 - 3.18 (m, 4H), 2.83 - 2.56 (m,2H), 2.35 - 2.06 (m, 2H), 1.93 - 1.66 (m, 2H), 1.63 - 1.41 (m, 4H), 1.41 - 1.12(m, 2H); LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 276; found: 276.
1H NMR (392 MHz, DMSO-d6) δ 12.03 (s, 1H), 9.56 (s, 1H), 7.48 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 6.64 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 3.49 - 3.18 (m, 4H), 2.83 - 2.56 (m,2H), 2.35 - 2.06 (m, 2H), 1.93 - 1.66 (m, 2H), 1.63 - 1.41 (m, 4H), 1.41 - 1.12(m, 2H); LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 276; found: 276.
合成例３
０℃に氷冷したトリフルオロ（ペンタフルオロエチル）ホウ酸カリウム（ＣＦ3ＣＦ2ＢＦ3Ｋ，０．８６ｇ，３．８ｍｍｏｌ）のアセトニトリル懸濁液にトリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリル（ＴＭＳ−ＯＴｆ，１．０３ｍＬ，５．７ｍｍｏｌ）を滴下し０度で３０分間撹拌した。本反応液に対し、３−ブロモペンタン−２，４−ジオン（０．３４ｇ，１．９ｍｍｏｌ）を加え、室温に昇温して終夜撹拌した。有機溶媒を減圧除去したのちフラッシュカラムクロマトグラフィー（展開溶媒比 ヘキサン：酢酸エチル＝９０／１０ ｔｏ ７０／３０）によって精製を行い、化合物Ｃを薄い黄色の結晶として得た（０．３３ｇ，５３％）。
合成例４
化合物Ｃ（１６３ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）、９−ジュロリジンカルボアルデヒド（１００．７ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）、ノルマル−ブチルアミン（１０μＬ，０．１ｍｍｏｌ）が溶解したトルエン（３ｍＬ）溶液に対し、ほう酸トリブチル（１６０．５μＬ，０．６ｍｍｏｌ）を加え、アルゴンで封入した。反応混合液を６０℃で２時間おき、反応液を室温に冷ました後、トルエンを減圧除去し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（展開溶媒比 ヘキサン：酢酸エチル＝９０／１０ ｔｏ ７０／３０）によって精製することで化合物Ｄを濃い紫色の固体として得た（１４８ｍｇ，５８％）。
1H NMR (392 MHz, CDCl3) δ 8.03 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 7.19 (s, 2H), 6.91 (d, J =14.4 Hz, 1H), 3.45 - 3.31 (m, 4H), 2.80 - 2.69 (m, 4H), 2.45 (s, 3H), 1.98 (dd, J = 11.2, 5.7 Hz, 4H); LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 510; found: 510.
1H NMR (392 MHz, CDCl3) δ 8.03 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 7.19 (s, 2H), 6.91 (d, J =14.4 Hz, 1H), 3.45 - 3.31 (m, 4H), 2.80 - 2.69 (m, 4H), 2.45 (s, 3H), 1.98 (dd, J = 11.2, 5.7 Hz, 4H); LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 510; found: 510.
合成例５
化合物Ｄ（１５．３ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）、化合物Ｂ（１６．５ｍｇ，０．０６ｍｍｏｌ）、ノルマル−ブチルアミン（１．２μＬ，０．０１２ｍｍｏｌ）が溶解したトルエン（０．５ｍＬ）溶液に対し、ほう酸トリブチル（８０μＬ，０．３ｍｍｏｌ）を加え、アルゴンで封入した。反応混合液を７０℃で１２時間おき、反応液を室温に冷ました後、トルエンを減圧除去し、ＨＰＬＣ（ＭｅＣＮ／０．１％ ＴＦＡ＝１０／９０ ｔｏ １００／０）によって精製することで、化合物Ｅを濃い紫色の固体として得た。（１５．８ｍｇ，６９％）．
1H NMR (392 MHz, DMSO-d6) δ 7.66 (dd, J = 14.5, 9.1 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.30 (s, 2H), 7.01 (dd, J = 17.4, 14.6 Hz, 2H), 6.69 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 3.45 - 3.30 (m, 8H), 2.75 - 2.67 (m, 6H), 2.22 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.92 - 1.78 (m, 6H), 1.52 (dd, J = 15.1, 7.4 Hz, 4H), 1.32 (dd, J = 15.1, 8.1 Hz, 2H); LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 767; found: 767.
1H NMR (392 MHz, DMSO-d6) δ 7.66 (dd, J = 14.5, 9.1 Hz, 2H), 7.46 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.30 (s, 2H), 7.01 (dd, J = 17.4, 14.6 Hz, 2H), 6.69 (d, J= 9.0 Hz, 1H), 3.45 - 3.30 (m, 8H), 2.75 - 2.67 (m, 6H), 2.22 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 1.92 - 1.78 (m, 6H), 1.52 (dd, J = 15.1, 7.4 Hz, 4H), 1.32 (dd, J = 15.1, 8.1 Hz, 2H); LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 767; found: 767.
合成例６
３−ブロモペンタン−２，４−ジオン（０．９ｇ，５ｍｍｏｌ）と三フッ化ホウ素のジエチルエーテル錯体（ＢＦ3・Ｅｔ2Ｏ，０．９４ｍＬ，７．５ｍｍｏｌ）を含むアセトニトリル溶液を、アルゴン雰囲気下、０℃で撹拌した。減圧濃縮し、残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー（展開溶媒比 ヘキサン：酢酸エチル＝９０／１０ ｔｏ ６０／４０）によって精製することで、化合物Ｆを薄い黄色の固体として得た（０．４８ｇ，４２％）。
合成例７
３−ブロモペンタン−２，４−ジオンおよびトリフルオロ（トリフルオロメチル）ホウ酸カリウム（ＣＦ3ＢＦ3Ｋ）を用いて、化合物Ｃと同様の方法により化合物Ｇを合成した。薄い茶色のオイル状物質（０．８５ｇ，６２％）。
合成例８
３−ヨードペンタン−２，４−ジオンおよびトリフルオロ（トリフルオロメチル）ホウ酸カリウム（ＣＦ3ＢＦ3Ｋ）を用いて、化合物Ｃと同様の方法により化合物Ｈを合成した。薄い茶色のオイル状物質（０．３４ｇ，５１％）。
合成例９
化合物Ｇと９−ジュロリジンカルボアルデヒドを用いて、化合物Ｅと同様の方法により化合物Ｉを合成した。濃い青色の固体（２段階で４５％）。
LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 717; found: 717.
LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 717; found: 717.
合成例１０
化合物Ｃと４−ジメチルアミノベンズアルデヒドを用いて、化合物Ｅと同様の方法により化合物Ｊを合成した。濃い青色の固体（２段階で８％）。
LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 715; found: 715.
LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 715; found: 715.
合成例１１
化合物Ｇと４−ジメチルアミノベンズアルデヒドを用いて、化合物Ｅと同様の方法により化合物Ｋを合成した。濃い青色の固体（２段階で１５％）。
LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 665; found: 665.
LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 665; found: 665.
合成例１２
化合物Ｆと４−ジメチルアミノベンズアルデヒドを用いて、化合物Ｅと同様の方法により化合物Ｌを合成した。濃い青色の固体（２段階で８％）。
LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 615; found: 615.
LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 615; found: 615.
合成例１３
化合物Ｈと４−ジメチルアミノベンズアルデヒドを用いて、化合物Ｅと同様の方法により化合物Ｍを合成した。濃い青色の固体（２段階で１３％）。
LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 713; found: 713.
LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 713; found: 713.
合成例１４
化合物Ｇと４−ジメチルアミノベンズアルデヒドを用いて、化合物Ｄと同様の方法により化合物Ｎを合成した。その後、化合物Ｎと化合物Ｏを用いて、化合物Ｅと同様の方法により化合物Ｐを合成した。濃い青色の固体（２段階で２４％）。
LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 620; found: 620.
LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 620; found: 620.
合成例１５
化合物Ｐ（５．０ｍｇ，８μｍｏｌ）および２−プロピン−１−スルホン酸ナトリウムのエタノール（０．４ｍＬ）、ＤＭＦ（０．４ｍＬ）混合溶液に、ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ（１．０ｍｇ，４μｍｏｌ）およびＬ−アスコルビン酸（７．０ｍｇ，４０μｍｏｌ）、ＤＭＦ（０．３ｍＬ）、Ｈ2Ｏ（０．１ｍＬ）を加え、室温で８時間撹拌した。その後、反応混合液を凍結乾燥後、ＨＰＬＣにより精製（ＭｅＣＮ／０．１％ ＴＦＡ＝１０／９０ ｔｏ １００／０）して化合物Ｑを得た。濃い紫色の固体。（１．６ｍｇ，２７％）LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+: 740; found: 740.
合成例１６
トリフルオロ（ペンタフルオロエチル）ホウ酸カリウムの代わりにトリフルオロ（ヘプタフルオロプロピル）ホウ酸カリウム（２７６．０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を用いて、合成例３と同様の方法により、中間体化合物を薄茶色オイルとして得た（７９．０ｍｇ、２１％）。
この中間体化合物（３７．７ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を化合物Ｃの代わりに用いて合成例４と同様の方法により、化合物Ｒを濃紫色固体として得た（２０．７ｍｇ、３７％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 7.18 (s, 2H), 6.90 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.58 - 3.33 (m, 4H), 2.88 - 2.72 (m, 4H), 2.44 (s, 3H), 2.10 - 1.90 (m, 4H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 179.74, 174.17, 154.78, 149.42, 132.10, 121.82, 121.64, 108.49, 95.58, 50.55, 27.41, 24.68, 20.90; 19F NMR (369 MHz, CDCl3) δ -81.48(3F), -128.32(2F), -135.96 (2F), -152.51 (1F); 11B NMR (126 MHz, CDCl3) δ 1.07 (s); LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+ 560.1, found 560.1.
この中間体化合物（３７．７ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）を化合物Ｃの代わりに用いて合成例４と同様の方法により、化合物Ｒを濃紫色固体として得た（２０．７ｍｇ、３７％）。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.02 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 7.18 (s, 2H), 6.90 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 3.58 - 3.33 (m, 4H), 2.88 - 2.72 (m, 4H), 2.44 (s, 3H), 2.10 - 1.90 (m, 4H); 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ 179.74, 174.17, 154.78, 149.42, 132.10, 121.82, 121.64, 108.49, 95.58, 50.55, 27.41, 24.68, 20.90; 19F NMR (369 MHz, CDCl3) δ -81.48(3F), -128.32(2F), -135.96 (2F), -152.51 (1F); 11B NMR (126 MHz, CDCl3) δ 1.07 (s); LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+ 560.1, found 560.1.
合成例１７
化合物Ｄの代わりに化合物Ｒ（１６．８ｍｇ、０．０３ｍｍｏｌ）、および化合物Ａの代わりに化合物Ｂ（１６．５ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）を用いて合成例５と同様の方法により、化合物Ｓを濃青色の固体として得た（２０．８ｍｇ、８５％）。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.63 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.22 (s, 2H), 6.95 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.74 - 3.12 (m, 8H), 2.94 - 2.56 (m, 6H), 2.17 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.03 - 1.69 (m, 6H), 1.63 - 1.39 (m, 4H), 1.39 - 1.19 (m, 2H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ 174.41, 169.03, 168.39, 149.74, 149.05, 148.40, 147.74, 132.38, 130.69, 122.84, 121.79, 121.43, 121.12, 110.94, 110.78, 109.57, 94.61, 50.60, 49.84, 49.35, 33.61, 27.16, 26.75, 25.93, 25.85, 24.34, 20.90, 20.51; 19F NMR (369 MHz, DMSO-d6) δ -81.38 (3F), -128.29 (2F), -135.73 (2F), -154.02 (1F); 11B NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ -1.22 (s); LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+ 817.2, found 817.2.
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 7.63 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.22 (s, 2H), 6.95 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 6.62 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 3.74 - 3.12 (m, 8H), 2.94 - 2.56 (m, 6H), 2.17 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.03 - 1.69 (m, 6H), 1.63 - 1.39 (m, 4H), 1.39 - 1.19 (m, 2H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ 174.41, 169.03, 168.39, 149.74, 149.05, 148.40, 147.74, 132.38, 130.69, 122.84, 121.79, 121.43, 121.12, 110.94, 110.78, 109.57, 94.61, 50.60, 49.84, 49.35, 33.61, 27.16, 26.75, 25.93, 25.85, 24.34, 20.90, 20.51; 19F NMR (369 MHz, DMSO-d6) δ -81.38 (3F), -128.29 (2F), -135.73 (2F), -154.02 (1F); 11B NMR (126 MHz, DMSO-d6) δ -1.22 (s); LRMS (ESI): m/z calcd for [M+H]+ 817.2, found 817.2.
試験例１
本発明は化合物が実際にＡβ酸素化活性を有することを確認するべくＡβ1-42を基質としてｉｎ ｖｉｔｒｏ酸素化実験を行った。Ａβ1-42（１０μＭ）を含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．４／細胞培養液（０．１％馬血清を含む）（１：３）に、被検化合物（それぞれ１μＭ）を加え、ＬＥＤ照射下（波長６６０ｎｍ、７３０ｎｍ）、３７℃でインキュベートした後、質量分析装置（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）にて反応を追跡した。光照射前はネイティブＡβ1-42およびＮａ+付加体が主に観測されるが、光照射を行うと経時的に酸素化体の存在を示唆するイオンピークが観測されるようになった（図１、図２）。
その結果、化合物Ｅ及び化合物Ｉは、６６０ｎｍ及び７３０ｎｍの光照射の両条件においてＡβの酸素化が進行した（図１）。また、化合物Ｋ及び化合物Ｍは、７３０ｎｍの光照射条件においてＡβの酸素化が進行した（図２）。
本発明は化合物が実際にＡβ酸素化活性を有することを確認するべくＡβ1-42を基質としてｉｎ ｖｉｔｒｏ酸素化実験を行った。Ａβ1-42（１０μＭ）を含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．４／細胞培養液（０．１％馬血清を含む）（１：３）に、被検化合物（それぞれ１μＭ）を加え、ＬＥＤ照射下（波長６６０ｎｍ、７３０ｎｍ）、３７℃でインキュベートした後、質量分析装置（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ）にて反応を追跡した。光照射前はネイティブＡβ1-42およびＮａ+付加体が主に観測されるが、光照射を行うと経時的に酸素化体の存在を示唆するイオンピークが観測されるようになった（図１、図２）。
その結果、化合物Ｅ及び化合物Ｉは、６６０ｎｍ及び７３０ｎｍの光照射の両条件においてＡβの酸素化が進行した（図１）。また、化合物Ｋ及び化合物Ｍは、７３０ｎｍの光照射条件においてＡβの酸素化が進行した（図２）。
試験例２
ポリＤ−リジンコート９６穴プレートに播種したラット副腎髄質由来褐色細胞腫ＰＣ１２細胞（理化学研究所から購入）の培養培地を、０．１％ウマ血清を含むダルベッコ変法イーグル培地７５μＬに置換し、５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で１日間インキュベートした後、そこへ化合物を含むリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）２５μＬを加えた。その後、本混合液を、ＬＥＤ照射下（波長６６０ｎｍ，１０ｍＷ）（ｄａｒｋでは光非照射）、３７℃で５分間インキュベートした。さらに、その反応液を含む細胞培養プレートを５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で４８時間インキュベートした。最後に、ＷＳＴ−８を含む生細胞数測定試薬ＳＦ（１０μＬ：ナカライから購入）を加え、５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で３時間インキュベートした後、４５０ｎｍ（参照波長：６５５ｎｍ）における吸光度から細胞生存率を測定した。
その結果、図３に示すように、光照射条件において、化合物Ｅの毒性が最も低く、化合物Ｊ、化合物Ｋ、化合物Ｌの順に高くなった。この結果から、ホウ素中心がＢＦ2の場合に毒性が最も高く、ＢＦＣＦ3＞ＢＦＣ2Ｆ5の順で低くなることが示唆された。また化合物Ｊと化合物Ｅの比較から、ジメチルアラニンをジュロリジンに変換することによって、毒性が軽減されることが示唆された。
また、図示していないが、化合物Ｋと化合物Ｍの比較から、ヨウ素の方が臭素の場合と比べて、毒性が軽減することが示唆されている。
ポリＤ−リジンコート９６穴プレートに播種したラット副腎髄質由来褐色細胞腫ＰＣ１２細胞（理化学研究所から購入）の培養培地を、０．１％ウマ血清を含むダルベッコ変法イーグル培地７５μＬに置換し、５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で１日間インキュベートした後、そこへ化合物を含むリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）２５μＬを加えた。その後、本混合液を、ＬＥＤ照射下（波長６６０ｎｍ，１０ｍＷ）（ｄａｒｋでは光非照射）、３７℃で５分間インキュベートした。さらに、その反応液を含む細胞培養プレートを５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で４８時間インキュベートした。最後に、ＷＳＴ−８を含む生細胞数測定試薬ＳＦ（１０μＬ：ナカライから購入）を加え、５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で３時間インキュベートした後、４５０ｎｍ（参照波長：６５５ｎｍ）における吸光度から細胞生存率を測定した。
その結果、図３に示すように、光照射条件において、化合物Ｅの毒性が最も低く、化合物Ｊ、化合物Ｋ、化合物Ｌの順に高くなった。この結果から、ホウ素中心がＢＦ2の場合に毒性が最も高く、ＢＦＣＦ3＞ＢＦＣ2Ｆ5の順で低くなることが示唆された。また化合物Ｊと化合物Ｅの比較から、ジメチルアラニンをジュロリジンに変換することによって、毒性が軽減されることが示唆された。
また、図示していないが、化合物Ｋと化合物Ｍの比較から、ヨウ素の方が臭素の場合と比べて、毒性が軽減することが示唆されている。
試験例３
Ａβ（４０μＭ）を含むリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）を３７℃にて３時間インキュベートした。次に、化合物Ｅを加えた（４又は１２μＭ）。ポリＤ−リジンコート９６穴プレートに播種したラット副腎髄質由来褐色細胞腫ＰＣ１２細胞（理化学研究所から購入）の培養培地を、０．１％ウマ血清を含むダルベッコ変法イーグル培地７５μＬに置換し、５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で１日間インキュベートした後、そこへＡβと化合物Ｅを含む上記リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）２５μＬを加えた。（最終ボリューム：１００μＬ，最終Ａβ濃度：１０μＭ，最終化合物Ｅの濃度：１又は３μＭ）その後、本混合液を、ＬＥＤ照射下（波長６６０ｎｍ，１０ｍＷ）（ｄａｒｋでは光非照射）、３７℃で５分間インキュベートした。さらに、その反応液を含む細胞培養プレートを５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で４８時間インキュベートした。最後に、ＷＳＴ−８を含む生細胞数測定試薬ＳＦ（１０μＬ：ナカライから購入）を加え、５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で３時間インキュベートした後、４５０ｎｍ（参照波長：６５５ｎｍ）における吸光度から細胞生存率を測定した。
その結果、図４に示すように、細胞存在下Ａβ1-42を酸素化することでその毒性を低減することができるか否か検証することとした。細胞にはラット副腎髄質由来の神経モデル細胞ＰＣ１２を用い、触媒としては化合物Ｅを用いた。細胞生存率はＷＳＴ−８による４５０ｎｍの吸光をプレートリーダーにて測定することで得た。Ａβ1-42と化合物Ｅを添加した場合、光を照射しない条件ではＡβ1-42のみを添加した場合と同様に顕著な細胞死が見られた一方で、光照射を行った場合には細胞生存率が有意に向上した。この結果から、触媒がＡβ1-42を選択的に酸素化することによって細胞毒性を低減していることが示唆された。
Ａβ（４０μＭ）を含むリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）を３７℃にて３時間インキュベートした。次に、化合物Ｅを加えた（４又は１２μＭ）。ポリＤ−リジンコート９６穴プレートに播種したラット副腎髄質由来褐色細胞腫ＰＣ１２細胞（理化学研究所から購入）の培養培地を、０．１％ウマ血清を含むダルベッコ変法イーグル培地７５μＬに置換し、５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で１日間インキュベートした後、そこへＡβと化合物Ｅを含む上記リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）２５μＬを加えた。（最終ボリューム：１００μＬ，最終Ａβ濃度：１０μＭ，最終化合物Ｅの濃度：１又は３μＭ）その後、本混合液を、ＬＥＤ照射下（波長６６０ｎｍ，１０ｍＷ）（ｄａｒｋでは光非照射）、３７℃で５分間インキュベートした。さらに、その反応液を含む細胞培養プレートを５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で４８時間インキュベートした。最後に、ＷＳＴ−８を含む生細胞数測定試薬ＳＦ（１０μＬ：ナカライから購入）を加え、５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で３時間インキュベートした後、４５０ｎｍ（参照波長：６５５ｎｍ）における吸光度から細胞生存率を測定した。
その結果、図４に示すように、細胞存在下Ａβ1-42を酸素化することでその毒性を低減することができるか否か検証することとした。細胞にはラット副腎髄質由来の神経モデル細胞ＰＣ１２を用い、触媒としては化合物Ｅを用いた。細胞生存率はＷＳＴ−８による４５０ｎｍの吸光をプレートリーダーにて測定することで得た。Ａβ1-42と化合物Ｅを添加した場合、光を照射しない条件ではＡβ1-42のみを添加した場合と同様に顕著な細胞死が見られた一方で、光照射を行った場合には細胞生存率が有意に向上した。この結果から、触媒がＡβ1-42を選択的に酸素化することによって細胞毒性を低減していることが示唆された。
試験例４
ベンゾイルメチオニン（２０００μＭ）を溶解したグリセロール／水（０：１００、１０：９０、３０：７０、５０：５０）に化合物Ｋ（２μＭ）を加え、室温でＬＥＤ照射（波長７３０ｎｍ）した後、ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ−Ｑ）にて反応を追跡した。
その結果、図５に示すように、グリセロール／水混合溶媒において、粘度の高いグリセロールの濃度増加にしたがって、ベンゾイルメチオニン酸素化体比（％）が増大したことから、化合物Ｋの分子内回転運動が抑えられることによって、一重項酸素の産生を経て、酸素化活性を発現していることが示唆された。
ベンゾイルメチオニン（２０００μＭ）を溶解したグリセロール／水（０：１００、１０：９０、３０：７０、５０：５０）に化合物Ｋ（２μＭ）を加え、室温でＬＥＤ照射（波長７３０ｎｍ）した後、ＬＣ／ＭＳ（ＥＳＩ−Ｑ）にて反応を追跡した。
その結果、図５に示すように、グリセロール／水混合溶媒において、粘度の高いグリセロールの濃度増加にしたがって、ベンゾイルメチオニン酸素化体比（％）が増大したことから、化合物Ｋの分子内回転運動が抑えられることによって、一重項酸素の産生を経て、酸素化活性を発現していることが示唆された。
試験例５
触媒を含む中性のリン酸緩衝液を、光非照射または光照射条件（６６０ｎｍ）にてインキュベートし、その後ベンジルアルコール（内部標準として）を含むエタノールを加え、ＨＰＬＣにより分析した。
光非照射条件においては、いずれの触媒も１日後安定であった。
また、光照射条件においては、図６に示すように、ホウ素中心がＢＦ2（化合物Ｌ）の場合最も安定性が低く、ＢＦＣＦ3（化合物Ｋ）＜ＢＦＣＦ2ＣＦ3（化合物Ｊ）の順で安定性が増大した。また、ドナー部位にジュロリジンを有する化合物（化合物Ｅ、化合物Ｉ）は、相当するジメチルアニリン体（化合物Ｋ、化合物Ｊ）と比べて安定性が増大した。
触媒を含む中性のリン酸緩衝液を、光非照射または光照射条件（６６０ｎｍ）にてインキュベートし、その後ベンジルアルコール（内部標準として）を含むエタノールを加え、ＨＰＬＣにより分析した。
光非照射条件においては、いずれの触媒も１日後安定であった。
また、光照射条件においては、図６に示すように、ホウ素中心がＢＦ2（化合物Ｌ）の場合最も安定性が低く、ＢＦＣＦ3（化合物Ｋ）＜ＢＦＣＦ2ＣＦ3（化合物Ｊ）の順で安定性が増大した。また、ドナー部位にジュロリジンを有する化合物（化合物Ｅ、化合物Ｉ）は、相当するジメチルアニリン体（化合物Ｋ、化合物Ｊ）と比べて安定性が増大した。
試験例６ マウス脳抽出物での酸素化反応
８月齢のＡｐｐ ｋｎｏｃｋ−ｉｎ（ＡｐｐNL-G-F/NL-G-F）マウス（アルツハイマー型モデルマウス）から摘出した脳を大脳皮質、海馬、および残りの脳組織に分離した。大脳皮質と海馬は合わせてリン酸緩衝液生理食塩水中でホモジナイズし、懸濁物を−８０℃で保管した。化合物Ｅまたはリボフラビンを溶解物の懸濁液にそれぞれ最終濃度が１００μＭ又は５０μＭになるように加え、光照射（７８０ｎｍの波長で）を行うか、または室温で暗所に保管した。任意の時点で、任意の反応混合物の分割量をギ酸で最終濃度が７０％になるように希釈し、濃縮し、６Ｍの尿素水溶液に再溶解した。内部標準（Ａβ1-40、ペプチド研究所、日本）を加え、残りの混合物をＺｉｐＴｉｐにて処理し、ＡｒｃｔｉｃタイプＡβ1-38およびＡβ1-42をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで分析した。
Ａβペプチドの変換はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ分析によってピーク強度が低下することにより裏付けられた。反応の３０分後、６０分後、１５０分後においてそれぞれＡｒｃｔｉｃタイプＡβ1-38では３６％／５３％／７４％、ＡｒｃｔｉｃタイプＡβ1-42では４３％／６０％／８３％のピーク強度が低下した（図７）。
暗室において行われた対照実験により、光照射はＡβペプチドの低下にとって重要であることが確認された。
Ａβ1-38とＡβ1-42が化合物Ｅによってそれぞれ５３％、６０％の収率で変換されるとき（６０分経過時）、非Ａβの内因性物質であってその質量スペクトル値がＡβの値に近いペプチドＡ、Ｂ、Ｃ（分子量がそれぞれ３７７０、４２８６、４９６８のペプチド）は、０分時と比較すると、変換されていなかった（図８）。
対照的に、リボフラビンを用いると、Ａβ1-38とＡβ1-42だけでなく、非ＡβのペプチドであるＡ、Ｂ、Ｃも相当程度消費される（図９）。これらの結果より、Ａβの濃度が低く標的外の分子が大量に含まれている脳溶解物であっても、化合物ＥがＡβペプチドを選択的に酸素化することを示す。
８月齢のＡｐｐ ｋｎｏｃｋ−ｉｎ（ＡｐｐNL-G-F/NL-G-F）マウス（アルツハイマー型モデルマウス）から摘出した脳を大脳皮質、海馬、および残りの脳組織に分離した。大脳皮質と海馬は合わせてリン酸緩衝液生理食塩水中でホモジナイズし、懸濁物を−８０℃で保管した。化合物Ｅまたはリボフラビンを溶解物の懸濁液にそれぞれ最終濃度が１００μＭ又は５０μＭになるように加え、光照射（７８０ｎｍの波長で）を行うか、または室温で暗所に保管した。任意の時点で、任意の反応混合物の分割量をギ酸で最終濃度が７０％になるように希釈し、濃縮し、６Ｍの尿素水溶液に再溶解した。内部標準（Ａβ1-40、ペプチド研究所、日本）を加え、残りの混合物をＺｉｐＴｉｐにて処理し、ＡｒｃｔｉｃタイプＡβ1-38およびＡβ1-42をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで分析した。
Ａβペプチドの変換はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ分析によってピーク強度が低下することにより裏付けられた。反応の３０分後、６０分後、１５０分後においてそれぞれＡｒｃｔｉｃタイプＡβ1-38では３６％／５３％／７４％、ＡｒｃｔｉｃタイプＡβ1-42では４３％／６０％／８３％のピーク強度が低下した（図７）。
暗室において行われた対照実験により、光照射はＡβペプチドの低下にとって重要であることが確認された。
Ａβ1-38とＡβ1-42が化合物Ｅによってそれぞれ５３％、６０％の収率で変換されるとき（６０分経過時）、非Ａβの内因性物質であってその質量スペクトル値がＡβの値に近いペプチドＡ、Ｂ、Ｃ（分子量がそれぞれ３７７０、４２８６、４９６８のペプチド）は、０分時と比較すると、変換されていなかった（図８）。
対照的に、リボフラビンを用いると、Ａβ1-38とＡβ1-42だけでなく、非ＡβのペプチドであるＡ、Ｂ、Ｃも相当程度消費される（図９）。これらの結果より、Ａβの濃度が低く標的外の分子が大量に含まれている脳溶解物であっても、化合物ＥがＡβペプチドを選択的に酸素化することを示す。
試験例７ マウス皮下での酸素化
生体内におけるアミロイドタンパクの酸素化への化合物Ｅの有用性を証明するために、マウス皮下（末梢アミロイド疾患の治療モデル）での反応を検証した。Ａβ1-42（２０μＭ、３時間事前に凝集したもの）および化合物Ｅまたは化合物３〔９−（６−ブロモ−３−メチル−１，３−ベンゾトリアゾール−３−イウム−２−イル）−ジュロリジン〕を含むリン酸緩衝液を入れたマイクロチューブを野生マウスの背中の皮内に埋め込み、ＬＥＤランプを用いて７８０ｎｍの波長でマウスの体外より３０分間光照射を行った（図１０）。対照実験として、同じ成分（Ａβ1-42（２０μＭ、３時間事前に凝集したもの）および化合物Ｅまたは化合物３）を含む別のマイクロチューブに対し、マウス体外にて直接光照射を行った。反応混合物をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで分析後、ＺｉｐＴｉｐ処理を行って解析を行った。酸素化比は、皮膚内部と皮膚外部の酸素化の比率「［マウス皮膚内部での酸素化比／マウス皮膚外部の酸素化比］×１００」から計算した。
図１１に示すように、化合物Ｅを用いた酸素化率の比（体外での酸素化率に対して生体内での酸素化率）は、６５％であったが、それに対して、化合物３（１０μＭ）では酸素化率の比は１２％であった。化合物Ｅと化合物３による結果の違いは、皮膚を透過した後の光強度の違いである。これらの結果は、ＮＩＲ光活性化可能な酸素化触媒である化合物Ｅが、生体内で、毒性のある凝集アミロイドタンパクを酸素化するのに適していることを示す。
生体内におけるアミロイドタンパクの酸素化への化合物Ｅの有用性を証明するために、マウス皮下（末梢アミロイド疾患の治療モデル）での反応を検証した。Ａβ1-42（２０μＭ、３時間事前に凝集したもの）および化合物Ｅまたは化合物３〔９−（６−ブロモ−３−メチル−１，３−ベンゾトリアゾール−３−イウム−２−イル）−ジュロリジン〕を含むリン酸緩衝液を入れたマイクロチューブを野生マウスの背中の皮内に埋め込み、ＬＥＤランプを用いて７８０ｎｍの波長でマウスの体外より３０分間光照射を行った（図１０）。対照実験として、同じ成分（Ａβ1-42（２０μＭ、３時間事前に凝集したもの）および化合物Ｅまたは化合物３）を含む別のマイクロチューブに対し、マウス体外にて直接光照射を行った。反応混合物をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳで分析後、ＺｉｐＴｉｐ処理を行って解析を行った。酸素化比は、皮膚内部と皮膚外部の酸素化の比率「［マウス皮膚内部での酸素化比／マウス皮膚外部の酸素化比］×１００」から計算した。
図１１に示すように、化合物Ｅを用いた酸素化率の比（体外での酸素化率に対して生体内での酸素化率）は、６５％であったが、それに対して、化合物３（１０μＭ）では酸素化率の比は１２％であった。化合物Ｅと化合物３による結果の違いは、皮膚を透過した後の光強度の違いである。これらの結果は、ＮＩＲ光活性化可能な酸素化触媒である化合物Ｅが、生体内で、毒性のある凝集アミロイドタンパクを酸素化するのに適していることを示す。
試験例８ グリセロール濃度を変化させた条件でのフルフリルアルコールまたはＮ−ベンゾイル−Ｍｅｔの変換
グリセロール−メタノール混合溶媒（グリセロール：０、１０、３０、または５０％）にフルフリルアルコールまたはＮ−ベンゾイル−Ｍｅｔ（それぞれ２ｍＭ）および化合物Ｅ（２μＭ）を加え、混合物に室温で光照射（波長７８０ｎｍ）を行い、開始後１０分、２０分、３０分の時点でのフルフリルアルコールまたはＮ−ベンゾイル−Ｍｅｔの濃度をＬＣ／ＭＳを用いたＵＶ吸光計で定量化した。
結果を図１２および１３に示す。化合物Ｅが触媒するフルフリルアルコール（特異的に1Ｏ2と反応する）の酸素化反応速度が、溶媒の粘度が上がるにつれて増加した。化合物Ｅが触媒するＮ−ベンゾイル−Ｍｅｔの酸素化もまた、溶媒の粘度が高くなるにつれて加速した。これらの観察は、ドナーとアクセプターの間の単結合の自由回転を妨害することで化合物Ｅの活性化状態の寿命を延ばすと1Ｏ2の量子収率が高められることを示唆する。
グリセロール−メタノール混合溶媒（グリセロール：０、１０、３０、または５０％）にフルフリルアルコールまたはＮ−ベンゾイル−Ｍｅｔ（それぞれ２ｍＭ）および化合物Ｅ（２μＭ）を加え、混合物に室温で光照射（波長７８０ｎｍ）を行い、開始後１０分、２０分、３０分の時点でのフルフリルアルコールまたはＮ−ベンゾイル−Ｍｅｔの濃度をＬＣ／ＭＳを用いたＵＶ吸光計で定量化した。
結果を図１２および１３に示す。化合物Ｅが触媒するフルフリルアルコール（特異的に1Ｏ2と反応する）の酸素化反応速度が、溶媒の粘度が上がるにつれて増加した。化合物Ｅが触媒するＮ−ベンゾイル−Ｍｅｔの酸素化もまた、溶媒の粘度が高くなるにつれて加速した。これらの観察は、ドナーとアクセプターの間の単結合の自由回転を妨害することで化合物Ｅの活性化状態の寿命を延ばすと1Ｏ2の量子収率が高められることを示唆する。
試験例９ 酸素化のＡβ選択性
凝集前のＡβペプチド（３７℃で１時間インキュベートして調製）、アンギオテンシン−ＩＶ（ＡＴ４）、Ｍｅｔ−エンケファリン（ＭＥ）、又はソマトスタチン（Ｓｓｔ）（それぞれ２０μＭ）を含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を、化合物Ｅ（５μＭ）存在下で７８０ｎｍ（７ｍＷ）またはリボフラビン（５μＭ）存在下で５００ｎｍの光照射を３７℃で３０分間行った。
化合物Ｅ（２５ｍｏｌ％）はプレ凝集したＡβペプチドを４４％酸素化した（図１４）。Ａβペプチド以外のペプチドでは、同じ反応条件であったが、５％未満の酸素化率であった。クロスβシート認識機能を有しない触媒であるリボフラビンは非選択的であり、酸素化Ａβの収率（４３％）は、標的外の基質を用いて得られた収率（アンギオテンシン−ＩＶ：３５％、Ｍｅｔ−エンケファリン：５０％、ソマトスタチン：６０％）とほぼ同一であった。この標的の選択性は、細胞の存在下、脳溶解物において、凝集Ａβの選択的酸素化にとって重要である。
凝集前のＡβペプチド（３７℃で１時間インキュベートして調製）、アンギオテンシン−ＩＶ（ＡＴ４）、Ｍｅｔ−エンケファリン（ＭＥ）、又はソマトスタチン（Ｓｓｔ）（それぞれ２０μＭ）を含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）を、化合物Ｅ（５μＭ）存在下で７８０ｎｍ（７ｍＷ）またはリボフラビン（５μＭ）存在下で５００ｎｍの光照射を３７℃で３０分間行った。
化合物Ｅ（２５ｍｏｌ％）はプレ凝集したＡβペプチドを４４％酸素化した（図１４）。Ａβペプチド以外のペプチドでは、同じ反応条件であったが、５％未満の酸素化率であった。クロスβシート認識機能を有しない触媒であるリボフラビンは非選択的であり、酸素化Ａβの収率（４３％）は、標的外の基質を用いて得られた収率（アンギオテンシン−ＩＶ：３５％、Ｍｅｔ−エンケファリン：５０％、ソマトスタチン：６０％）とほぼ同一であった。この標的の選択性は、細胞の存在下、脳溶解物において、凝集Ａβの選択的酸素化にとって重要である。
試験例１０ 各光触媒のＡβ1-42に対する酸素化活性および毒性の比較
（１）酸素化
Ａβ1-42イソペプチド（０．１％トリフルオロ酢酸水溶液中に２５０μＭの濃度）、アンギオテンシンＩＶ（２００μＭ水溶液）、Ｍｅｔ−エンケファリン（２００μＭ水溶液）、およびソマトスタチン（２００μＭ水溶液）をリン酸緩衝液またはリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）を加えて最終ペプチド濃度が２０μＭまたは４０μＭ（ｐＨ７．４）となるように調整した（必要に応じて、０．１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を用いた）。Ａβ1-42溶液を酸素化反応に付す前に、３７℃で１〜３時間インキュベートした。４０μＭのＡβを含むリン酸緩衝液を２５ｍＭの４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）で緩衝した０．１％ウマ血清を含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、ライフテクノロジー社）で希釈した。
それぞれの溶液に対し、リボフラビン（０．１％トリフルオロ酢酸／アセトニトリル（１：１）水溶液中に１ｍＭ）、化合物３（アセトニトリルに１ｍＭ)、ＣＲＡＮＡＤ−２〔（Ｔ−４）−［（１Ｅ，６Ｅ）−１，７−ビス［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１，６−ヘプタジエン−３，５−ジオナト−κＯ3，κＯ5］ジフルオロボロン〕（２００μＭジメチルスルホキシド溶液）又は化合物Ｅ、化合物Ｉ、化合物Ｊ、化合物Ｌ、化合物Ｋ、もしくは化合物Ｓの５〜１０（２００μＭジメチルスルホキシド溶液）を加えた。化合物の最終濃度を２μＭにしたものを、Ａβ1-42の酸素化の評価に用いた。最終濃度を５μＭにしたものを、ペプチド選択性の評価に用いた。混合物を室温にてＬＥＤ（波長５００、６６０、又は７８０ｎｍ）で約５〜１０ｃｍの距離で光照射を行った。光照射を行わない非対照群も用意した。反応はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳを用いてモニター分析を行った。酸素化度は酸素化度（％）＝(ｎ［Ｏ］付加物のＭＳ強度の合計)／（ネイティブのＭＳ強度＋ｎ［Ｏ］付加物のＭＳ強度の合計）×１００の比で求めた。必要に応じ、反応溶液の分配量はＺｉｐＴｉｐ Ｕ−Ｃ１８（メルク・ミリポア）で質量分析前に脱塩処理を行った。結果を以下の表１および２に示す。
（１）酸素化
Ａβ1-42イソペプチド（０．１％トリフルオロ酢酸水溶液中に２５０μＭの濃度）、アンギオテンシンＩＶ（２００μＭ水溶液）、Ｍｅｔ−エンケファリン（２００μＭ水溶液）、およびソマトスタチン（２００μＭ水溶液）をリン酸緩衝液またはリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）を加えて最終ペプチド濃度が２０μＭまたは４０μＭ（ｐＨ７．４）となるように調整した（必要に応じて、０．１Ｍの水酸化ナトリウム水溶液を用いた）。Ａβ1-42溶液を酸素化反応に付す前に、３７℃で１〜３時間インキュベートした。４０μＭのＡβを含むリン酸緩衝液を２５ｍＭの４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）で緩衝した０．１％ウマ血清を含むダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ、ライフテクノロジー社）で希釈した。
それぞれの溶液に対し、リボフラビン（０．１％トリフルオロ酢酸／アセトニトリル（１：１）水溶液中に１ｍＭ）、化合物３（アセトニトリルに１ｍＭ)、ＣＲＡＮＡＤ−２〔（Ｔ−４）−［（１Ｅ，６Ｅ）−１，７−ビス［４−（ジメチルアミノ）フェニル］−１，６−ヘプタジエン−３，５−ジオナト−κＯ3，κＯ5］ジフルオロボロン〕（２００μＭジメチルスルホキシド溶液）又は化合物Ｅ、化合物Ｉ、化合物Ｊ、化合物Ｌ、化合物Ｋ、もしくは化合物Ｓの５〜１０（２００μＭジメチルスルホキシド溶液）を加えた。化合物の最終濃度を２μＭにしたものを、Ａβ1-42の酸素化の評価に用いた。最終濃度を５μＭにしたものを、ペプチド選択性の評価に用いた。混合物を室温にてＬＥＤ（波長５００、６６０、又は７８０ｎｍ）で約５〜１０ｃｍの距離で光照射を行った。光照射を行わない非対照群も用意した。反応はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳを用いてモニター分析を行った。酸素化度は酸素化度（％）＝(ｎ［Ｏ］付加物のＭＳ強度の合計)／（ネイティブのＭＳ強度＋ｎ［Ｏ］付加物のＭＳ強度の合計）×１００の比で求めた。必要に応じ、反応溶液の分配量はＺｉｐＴｉｐ Ｕ−Ｃ１８（メルク・ミリポア）で質量分析前に脱塩処理を行った。結果を以下の表１および２に示す。
（２）細胞アッセイ
ラット褐色細胞腫ＰＣ１２細胞を５％ウマ血清および１０％胎児ウシ血清をポリ−Ｄ−リジンコート９６穴プレートに１穴あたり１０，０００細胞の濃度で播種したＤＭＥＭに懸濁し、５％二酸化炭素雰囲気下３７℃で３日間インキュベートした。溶媒を除去後、細胞を１５０μＬの血清フリーのＤＭＥＭで洗浄し、０．１％馬血清を含有するＤＭＥＭ（７５μＬ）を加えた。その後、９６穴プレートを５％二酸化炭素雰囲気下３７℃で１日間インキュベートし、酸素化反応に用いた。酸素化反応において、化合物Ｅ（（１００μＭジメチルスルホキシド溶液））をＡβ（事前に３時間凝集したもの、４０μＭ）、上記の２５μＬの本溶液を含むリン酸緩衝液生理食塩水に加えた（Ａβの最終濃度は１０μＭ、化合物Ｅの最終濃度は１μＭ）。混合物をＬＥＤ（波長７８０ｎｍ）で約５ｃｍの距離から３７℃で５分間照射した。細胞を３７℃の５％二酸化炭素雰囲気下で４８時間インキュベートした。細胞生存率は細胞カウント試薬ＳＦ（ナカライテスク、京都、日本）を用いてＷＳＴ−８（２−（２−メトキシ−４−ニトロフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム）で測定した。結果を以下の表１および表２に示す。
ラット褐色細胞腫ＰＣ１２細胞を５％ウマ血清および１０％胎児ウシ血清をポリ−Ｄ−リジンコート９６穴プレートに１穴あたり１０，０００細胞の濃度で播種したＤＭＥＭに懸濁し、５％二酸化炭素雰囲気下３７℃で３日間インキュベートした。溶媒を除去後、細胞を１５０μＬの血清フリーのＤＭＥＭで洗浄し、０．１％馬血清を含有するＤＭＥＭ（７５μＬ）を加えた。その後、９６穴プレートを５％二酸化炭素雰囲気下３７℃で１日間インキュベートし、酸素化反応に用いた。酸素化反応において、化合物Ｅ（（１００μＭジメチルスルホキシド溶液））をＡβ（事前に３時間凝集したもの、４０μＭ）、上記の２５μＬの本溶液を含むリン酸緩衝液生理食塩水に加えた（Ａβの最終濃度は１０μＭ、化合物Ｅの最終濃度は１μＭ）。混合物をＬＥＤ（波長７８０ｎｍ）で約５ｃｍの距離から３７℃で５分間照射した。細胞を３７℃の５％二酸化炭素雰囲気下で４８時間インキュベートした。細胞生存率は細胞カウント試薬ＳＦ（ナカライテスク、京都、日本）を用いてＷＳＴ−８（２−（２−メトキシ−４−ニトロフェニル）−３−（４−ニトロフェニル）−５−（２，４−ジスルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム）で測定した。結果を以下の表１および表２に示す。
ａ：プレ凝集したＡβ1-42（２０μＭ、３７℃で３時間インキュベート）および各触媒（２μＭ）を含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）溶液を３７℃で３０分間光照射（波長６６０ｎｍ）を行った。その後、反応混合物をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳにて分析した。
ｂ：ＬＣ50（暗所）が化合物自身の毒性、ＬＣ50（明所）が化合物の光毒性を表す。ＰＣ１２細胞を暗所または光照射下（波長６６０ｎｍ）光触媒処理し、３７℃で５分間、そして５％二酸化炭素雰囲気下３７℃で４８時間インキュベートし、細胞生存率を分析した（ｎ＝５、平均±ＳＥＭ）。
ｃ：化合物Ｊは、光照射下（Ｔｕｋｅｙ試験）で化合物Ｌおよび化合物Ｋに対してｐ＜０．０５であった。
ｂ：ＬＣ50（暗所）が化合物自身の毒性、ＬＣ50（明所）が化合物の光毒性を表す。ＰＣ１２細胞を暗所または光照射下（波長６６０ｎｍ）光触媒処理し、３７℃で５分間、そして５％二酸化炭素雰囲気下３７℃で４８時間インキュベートし、細胞生存率を分析した（ｎ＝５、平均±ＳＥＭ）。
ｃ：化合物Ｊは、光照射下（Ｔｕｋｅｙ試験）で化合物Ｌおよび化合物Ｋに対してｐ＜０．０５であった。
ａ：事前に凝集したＡβ1-42（２０μＭ、３７℃で３時間インキュベーションして得た）を含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）および触媒（２μＭ）を３７℃で７８０ｎｍ（１４ｍＷ）で３０分間光照射を行った。反応混合物をＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳにて分析した。
ｂ：ＰＣ１２細胞を光触媒（１μＭ）と暗所または光照射（波長７８０ｎｍ）条件で３７℃で５分間処置を行った後、細胞生存率を分析した（ｎ＝３、平均値±ＳＥＭ）。
ｂ：ＰＣ１２細胞を光触媒（１μＭ）と暗所または光照射（波長７８０ｎｍ）条件で３７℃で５分間処置を行った後、細胞生存率を分析した（ｎ＝３、平均値±ＳＥＭ）。
Claims (8)
- 次の一般式（１）
（式中、Ｘ１及びＸ２は、同一又は異なって、ハロゲノアルキル基又はハロゲン原子を示し；
Ｘ３は、臭素原子、ヨウ素原子又はセレン原子を示し；
Ｒ１及びＲ２は、同一又は異なって、水素原子又は置換基を有していてもよいアルキル基を示し；
Ｒ３及びＲ４は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、アルコキシ基又は置換基を有していてもよいアルキル基を示すか、Ｒ１とＲ３、又はＲ２とＲ４が一緒になって、置換基を有していてもよいアルキレン基又はアルケニレン基を形成してもよく；
Ｒ５及びＲ６は、同一又は異なって、水素原子又は置換基を有していてもよいアルキル基を示し；
Ｒ７及びＲ８は、同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、アルコキシ基又は置換基を有していてもよいアルキル基を示すか、Ｒ５とＲ７、又はＲ６とＲ８が一緒になって、置換基を有していてもよいアルキレン基又はアルケニレン基を形成してもよく；
ｍ及びｎは、１〜３の整数を示す）
で表されるクルクミンホウ素錯体又はその塩。 - Ｘ１がハロゲノアルキル基であり、Ｘ２がハロゲン原子である請求項１記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩。
- ｍ及びｎが１である請求項１又は２記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩。
- Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７及びＲ８が示す置換基を有していてもよいアルキル基が、カルボキシ基、スルホン酸基、ヒドロキシ基、アミノ基、−ＣＯ−、−ＣＯＮＨ−及びトリアゾール基から選ばれる１種以上の置換基を有していてもよいアルキル基である請求項１〜３のいずれか１項に記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩。
- Ｒ１とＲ３、Ｒ２とＲ４、Ｒ５とＲ７、又はＲ６とＲ８が一緒になって形成されるアルキレン基又はアルケニレン基の炭素数が２又は３である請求項１〜４のいずれか１項に記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩。
- 請求項１〜５のいずれか１項に記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩を有効成分とする医薬。
- 病原性アミロイドが関連する疾患の予防又は治療薬である請求項６記載の医薬。
- 請求項１〜５のいずれか１項に記載のクルクミンホウ素錯体又はその塩及び薬学的に許容される担体を含有する医薬組成物。
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