JP6863966B2

JP6863966B2 - 標的ポリペプチドを提示するためのポリペプチド担体及びその使用

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Publication number: JP6863966B2
Application number: JP2018510399A
Authority: JP
Inventors: チャン、ティアンイン; ユアン、クワン; グオ、シュエラン; チャン、イン; ザオ、キンチャン; チャン、チュン; シァ、ニンシャオ
Original assignee: Yang Sheng Tang Co Ltd
Current assignee: Yang Sheng Tang Co Ltd
Priority date: 2015-08-25
Filing date: 2016-08-24
Publication date: 2021-04-21
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Also published as: CN106480070A; JP2018533908A; KR102116320B1; AU2016313660B2; EP3342866A1; EP3342866A4; AU2016313660A1; WO2017032303A1; BR112018003580A2; EP3342866B1; US20190247494A1; CA2996497A1; CN106480070B; KR20180038557A; US10548973B2; HK1252980A1

Description

本発明は、遺伝子改変ワクチン、分子ウイルス学、及び免疫学の分野に関する。加えて、本発明は、具体的には、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染の処置の分野に関する。特に、本発明は、ポリペプチド担体（ペプチド担体）をコードするヌクレオチド配列を含み、且つ標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の挿入のために用いられる核酸分子に関する。特に、本発明の核酸分子が、それに挿入された標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有し、且つ組換えタンパク質として発現した後、ポリペプチド担体が、標的ポリペプチド（例えば、標的抗原、又は抗原における標的エピトープ）を提示することができ、及び／又は組換えタンパク質が、ウイルス様粒子を形成して、標的ポリペプチドを提示することができる。加えて、本発明はさらに、ポリペプチド担体及び標的ポリペプチドを含む組換えタンパク質に関する。さらに、本発明はさらに、核酸分子及び組換えタンパク質の使用に関する。加えて、本発明は具体的には、本発明のポリペプチド担体及びＨＢＶ由来のエピトープを含む組換えタンパク質を含む、ＨＢＶ感染、又はＨＢＶ感染に関連した疾患（例えば、Ｂ型肝炎）を防止し、軽減し、又は処置するのに有用なワクチン又は医薬組成物に関する。

ワクチンは、感染性疾患と闘うための効果的な手段である。適用可能な人に応じて、ワクチンは予防ワクチン及び治療ワクチンへ分けることができる。予防ワクチンは、主に、ウイルス感染を予防するために用いられ、それには、弱毒ワクチン、不活性化ワクチン、及び遺伝子改変ワクチンが挙げられ、それらは、主に、生物体において中和抗体を誘導することにより、ウイルス感染から生物体を保護する。治療ワクチンは、主として、持続性ウイルス感染及び腫瘍などの疾患を処置するために用いられる。これらの疾患において、患者は、一般的に、標的抗原に免疫寛容であり、したがって、研究者は、生物体において標的抗原に対する効果的な免疫応答の発生を誘導するためにいくつかの形のワクチンを試みている。治療ワクチンには、主に、核酸ワクチン、ウイルスベクターワクチン、遺伝子改変ワクチンなどが挙げられる。それらの中で、遺伝子改変ワクチンは、重要な利点を有する。

市販されている遺伝子改変ワクチンには、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）ワクチン、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）ワクチン、及びＥ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）ワクチンが挙げられ、それらの全部は、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）の形をとる。ウイルス様粒子は、ある特定のウイルスの１つ又は複数の構造タンパク質により形成される中空粒子を指し、それは、ウイルス核酸を含まず、自己複製することができないが、形態及び構造に関して真のビリオンと同じ、又は類似している。ウイルス様粒子は、以下の利点：強い免疫原性、高い安全性、容易には不活性化されないこと、及び外因性ペプチド断片を提示して、生物体においてその外因性ペプチド断片に対する特異的免疫応答を誘導し得ることを有し、それゆえに、ワクチンの分野において重要な適用価値を有する。

現在、世界中で、約２０億人の人がＨＢＶに感染しており、それらのうちの約３億５千万人が、慢性ＨＢＶ感染を有し、これらの感染した人が、ＨＢＶ感染に関連した肝臓疾患で最終的に死亡するリスクは、１５％〜２５％に達し得る。世界中で毎年、１００万人を超える人が、Ｂ型肝炎により引き起こされる末期肝臓疾患で死亡している。中国は、ＨＢＶ感染に激しく冒されている地域であり、現在、Ｂ型肝炎を有する約９３００万人の人がいる。ここ数年、症例報告システムの継続的改善で、Ｂ型肝炎関連疾患の発生率及び死亡率は、減少するどころか、増加している。

現在、慢性ＨＢＶ感染を処置するための薬剤は、主に、２つのクラス、すなわち、インターフェロン及びヌクレオシド／ヌクレオチド類似体（ＮＡ）に分けることができる。慢性ＨＢＶ感染を処置することの最終目標は、重度の肝炎（肝不全）、肝硬変、及び肝臓癌などの末期肝臓疾患の発生を防止することである；最善の臨床的エンドポイントは、患者が、Ｂ型肝炎表面抗原の血清学的陰性転換又は血清学的転換に達する、すなわち、ＨＢＶを完全に排除することを可能にすることである。しかしながら、その目標に達することができる既存の薬剤は非常に限られた数しかない。したがって、慢性ＨＢＶ感染を有する患者について、ウイルスをより効果的に排除することができ、特に、ＨＢｓＡｇを効果的に排除することができ、又はＨＢｓＡｇレベルを大いに減少させることができる新規の独創的な治療薬及び方法を開発することが緊急且つ必要であり、治療ワクチンを開発することが可能性のあるストラテジーである。

本出願の発明者らは、３つのコウモリ由来のＢ型肝炎ウイルスコア抗原（すなわち、カグラコウモリ（ｒｏｕｎｄｌｅａｆｂａｔ）ＨＢＶ（ＲＢＨＢＶ）コア抗原（ＲＢＨＢｃＡｇ）；テントコウモリ（ｔｅｎｔ−ｍａｋｉｎｇｂａｔ）ＨＢＶ（ＴＢＨＢＶ）コア抗原（ＴＢＨＢｃＡｇ）；及びキクガシラコウモリ（ｈｏｒｓｅｓｈｏｅｂａｔ）ＨＢＶ（ＨＢＨＢＶ）コア抗原（ＨＢＨＢｃＡｇ））に基づいて、標的ポリペプチドを提示するための新しいポリペプチド担体（ペプチド担体）の類を開発している。したがって、本発明は、ポリペプチド担体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を提供する。そのような核酸分子は、それに挿入された標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を有することができ、ポリペプチド担体及び標的ポリペプチド（例えば、標的抗原、又は抗原における標的エピトープ）を含む組換えタンパク質として発現することができる。さらに、産生された組換えタンパク質は、ＶＬＰを効果的に形成することができ、ＶＬＰの表面上にそれに挿入された標的ポリペプチドを提示することができ、その結果、標的ポリペプチドが生物体における免疫系により効果的に認識され、それにより、生物体において、標的ポリペプチドに対する特異的免疫応答の発生を誘導することができる。したがって、本発明のポリペプチド担体は、標的ポリペプチド、例えば、標的抗原由来のペプチド断片（例えば、エピトープ）を提示するためのワクチンのための担体として用いることができ、本発明のポリペプチド担体及び標的ポリペプチドを含む組換えタンパク質は、生物体において標的ポリペプチドに対する特異的免疫応答を誘導するためのワクチンとして用いることができる。

加えて、本出願の発明者らはまた、驚くべきことに、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質、及びＨＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端が、リシン豊富な領域であり、ＶＬＰのアセンブリーに必要ではないことを見出した。したがって、本発明のポリペプチド担体は、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質、及びＨＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端を含まなくてもよい。例えば、本発明のＲＢＨＢｃＡｇ担体は、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質の位置１４５〜１８９のアミノ酸が部分的に、又は完全に除去され得（例えば、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質の位置１５０〜１８９のアミノ酸が除去され得る）、本発明のＴＢＨＢｃＡｇ担体は、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質の位置１４９〜１８８のアミノ酸が部分的に、又は完全に除去され得（例えば、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質の位置１５４〜１８８のアミノ酸が除去され得る）、本発明のＨＢＨＢｃＡｇ担体は、ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質の位置１４５〜１８９のアミノ酸が部分的に、又は完全に除去され得る（例えば、ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質の位置１５０〜１８９のアミノ酸が除去され得る）。

加えて、本出願の発明者らはまた、驚くべきことに、本発明のポリペプチド担体が、ヒトＢ型肝炎ウイルス由来の抗原エピトープ（例えば、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープ）を提示するのに特に適しており、既存のＢ型肝炎ワクチン（例えば、同じエピトープを含み、且つポリペプチド担体としてヒトＨＢＶのＨＢｃＡｇを用いることにより構築されたワクチン）の効力より有意に高い効力で、対象においてＨＢｓＡｇを排除するための非常に強く且つ特異的な免疫応答を誘導し得ることを見出した。したがって、本発明はさらに、ヒトＢ型肝炎ウイルス由来の抗原エピトープを提示するのに特に適したポリペプチド担体を提供する。

したがって、態様において、本発明は、ポリペプチド担体をコードするヌクレオチド配列又はそのバリアントを含む核酸分子であって、バリアントが、ヌクレオチド配列と少なくとも９０％（例えば、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％）の同一性を有し、又はストリンジェントな条件若しくは高ストリンジェントな条件下でヌクレオチド配列とハイブリダイズする能力があり、ポリペプチド担体が、以下から選択される、核酸分子を提供する：
（１）カグラコウモリＨＢＶコア抗原タンパク質（ＲＢＨＢｃＡｇ；例えば、それのアミノ酸配列は配列番号１に示される）とは（ａ）ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置７８〜８３のアミノ酸残基の１個若しくは複数のアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、又は６個のアミノ酸残基；例えば、位置７８〜８３のアミノ酸残基、位置７８〜８２のアミノ酸残基、位置７８〜８１のアミノ酸残基、又は位置７８〜８０のアミノ酸残基）が除去され、若しくはリンカー（例えば、可動性リンカー；例えば、配列番号４３に示されたリンカー）で置換されている点、及び（ｂ）任意で、１〜４０個のアミノ酸残基（例えば、１〜５個、５〜１０個、１０〜１５個、１５〜２０個、２０〜２５個、２５〜３０個、３０〜３５個、又は３５〜４０個のアミノ酸残基）がＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端において除去されている点で異なるＲＢＨＢｃＡｇ担体；
（２）テントコウモリＨＢＶコア抗原タンパク質（ＴＢＨＢｃＡｇ；例えば、それのアミノ酸配列は配列番号２に示される）とは（ａ）ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置８０〜８４のアミノ酸残基の１個若しくは複数のアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、又は５個のアミノ酸残基；例えば、位置８０〜８４のアミノ酸残基、位置８０〜８３のアミノ酸残基、又は位置８０〜８２のアミノ酸残基）が除去され、若しくはリンカー（例えば、可動性リンカー；例えば、配列番号４３に示されたリンカー）で置換されている点、及び（ｂ）任意で、１〜３５個のアミノ酸残基（例えば、１〜５個、５〜１０個、１０〜１５個、１５〜２０個、２０〜２５個、２５〜３０個、又は３０〜３５個のアミノ酸残基）がＴＢＨＢｃＡｇのＣ末端において除去されている点で異なるＴＢＨＢｃＡｇ担体；又は
（３）キクガシラコウモリＨＢＶコア抗原タンパク質（ＨＢＨＢｃＡｇ；例えば、それのアミノ酸配列は配列番号３に示される）とは（ａ）ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置７８〜８３のアミノ酸残基の１個若しくは複数のアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、又は６個のアミノ酸残基；例えば、位置７８〜８３のアミノ酸残基、位置７８〜８２のアミノ酸残基、位置７８〜８１のアミノ酸残基、又は位置７８〜８０のアミノ酸残基）が除去され、若しくはリンカー（例えば、可動性リンカー；例えば、配列番号４３に示されたリンカー）で置換されている点、及び（ｂ）任意で、１〜４０個のアミノ酸残基（例えば、１〜５個、５〜１０個、１０〜１５個、１５〜２０個、２０〜２５個、２５〜３０個、３０〜３５個、又は３５〜４０個のアミノ酸残基）がＨＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端において除去されている点で異なるＨＢＨＢｃＡｇ担体。

好ましい実施形態において、バリアントは、ポリペプチド担体をコードするヌクレオチド配列と少なくとも９０％の同一性、例えば、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の同一性を有する。

好ましい実施形態において、バリアントは、ポリペプチド担体をコードするヌクレオチド配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズする能力がある。好ましい実施形態において、バリアントは、ポリペプチド担体をコードするヌクレオチド配列と高ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする能力がある。

好ましい実施形態において、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質は、野生型ＲＢＨＢｃＡｇである。好ましい実施形態において、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号１に示されている。

好ましい実施形態において、ＲＢＨＢｃＡｇ担体は、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質とは、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置７８〜８３のアミノ酸残基の１個又は複数の連続したアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の連続したアミノ酸残基）が除去され、又はリンカーと置換されている点で異なる。例えば、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置７８〜８３のアミノ酸残基、位置７８〜８２のアミノ酸残基、位置７８〜８１のアミノ酸残基、位置７８〜８０のアミノ酸残基、位置７８〜７９のアミノ酸残基、位置７９〜８３のアミノ酸残基、位置７９〜８２のアミノ酸残基、位置７９〜８１のアミノ酸残基、位置７９〜８０のアミノ酸残基、位置８０〜８３のアミノ酸残基、位置８０〜８２のアミノ酸残基、位置８０〜８１のアミノ酸残基、位置８１〜８３のアミノ酸残基、位置８１〜８２のアミノ酸残基、位置８２〜８３のアミノ酸残基、位置７８におけるアミノ酸残基、位置７９におけるアミノ酸残基、位置８０におけるアミノ酸残基、位置８１におけるアミノ酸残基、位置８２におけるアミノ酸残基、又は位置８３におけるアミノ酸残基が、除去され、又はリンカーと置換され得る。好ましい実施形態において、リンカーは、例えば、可動性リンカーである。そのような可動性リンカーは、当業者により、よく知られており、例えば、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＴＧＳＥＦＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４３）である。

好ましい実施形態において、ＲＢＨＢｃＡｇ担体は、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質とは、（１）ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置７８〜８３のアミノ酸残基の１個又は複数の連続したアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の連続したアミノ酸残基）が除去され、又は上記で定義されているようなリンカーと置換されている点；及び（２）ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端における１〜４０個のアミノ酸残基が除去されている点で異なる。好ましい実施形態において、１〜５個、５〜１０個、１０〜１５個、１５〜２０個、２０〜２５個、２５〜３０個、３０〜３５個、又は３５〜４０個のアミノ酸残基が、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端において除去されている；例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、又は４０個のアミノ酸残基が除去されている。

好ましい実施形態において、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質は野生型ＴＢＨＢｃＡｇである。好ましい実施形態において、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のアミノ酸配列は、配列番号２に示されている。

好ましい実施形態において、ＴＢＨＢｃＡｇ担体は、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質とは、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置８０〜８４のアミノ酸残基の１個又は複数の連続したアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、又は５個の連続したアミノ酸残基）が除去され、又はリンカーと置換されている点で異なる。例えば、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置８０〜８４のアミノ酸残基、位置８０〜８３のアミノ酸残基、位置８０〜８２のアミノ酸残基、位置８０〜８１のアミノ酸残基、位置８１〜８４のアミノ酸残基、位置８１〜８３のアミノ酸残基、位置８１〜８２のアミノ酸残基、位置８２〜８４のアミノ酸残基、位置８２〜８３のアミノ酸残基、位置８３〜８４のアミノ酸残基、位置８０におけるアミノ酸残基、位置８１におけるアミノ酸残基、位置８２におけるアミノ酸残基、位置８３におけるアミノ酸残基、又は位置８４におけるアミノ酸残基が、除去され、又はリンカーと置換され得る。好ましい実施形態において、リンカーは、例えば、可動性リンカーである。そのような可動性リンカーは、当業者により、よく知られており、例えば、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＴＧＳＥＦＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４３）である。

好ましい実施形態において、ＴＢＨＢｃＡｇ担体は、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質とは、（１）ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置８０〜８４のアミノ酸残基の１個又は複数の連続したアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、又は５個の連続したアミノ酸残基）が除去され、又は上記で定義されているようなリンカーと置換されている点；及び（２）ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端における１〜３５個のアミノ酸残基が除去されている点で異なる。好ましい実施形態において、１〜５個、５〜１０個、１０〜１５個、１５〜２０個、２０〜２５個、２５〜３０個、又は３０〜３５個のアミノ酸残基が、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端において除去されている；例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、又は３５個のアミノ酸残基が除去されている。

好ましい実施形態において、ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質は、野生型ＨＢＨＢｃＡｇである。好ましい実施形態において、ＨＢＨＢｃＡｇのアミノ酸配列は、配列番号３に示されている。

好ましい実施形態において、ＨＢＨＢｃＡｇ担体は、ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質とは、ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置７８〜８３のアミノ酸残基の１個又は複数の連続したアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の連続したアミノ酸残基）が除去され、又はリンカーと置換されている点で異なる。例えば、ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置７８〜８３のアミノ酸残基、位置７８〜８２のアミノ酸残基、位置７８〜８１のアミノ酸残基、位置７８〜８０のアミノ酸残基、位置７８〜７９のアミノ酸残基、位置７９〜８３のアミノ酸残基、位置７９〜８２のアミノ酸残基、位置７９〜８１のアミノ酸残基、位置７９〜８０のアミノ酸残基、位置８０〜８３のアミノ酸残基、位置８０〜８２のアミノ酸残基、位置８０〜８１のアミノ酸残基、位置８１〜８３のアミノ酸残基、位置８１〜８２のアミノ酸残基、位置８２〜８３のアミノ酸残基、位置７８におけるアミノ酸残基、位置７９におけるアミノ酸残基、位置８０におけるアミノ酸残基、位置８１におけるアミノ酸残基、位置８２におけるアミノ酸残基、又は位置８３におけるアミノ酸残基が、除去され、又はリンカーと置換され得る。好ましい実施形態において、リンカーは、例えば、可動性リンカーである。そのような可動性リンカーは、当業者により、よく知られており、例えば、ＧＧＧＧＧＳＧＧＧＧＴＧＳＥＦＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号４３）である。

好ましい実施形態において、ＨＢＨＢｃＡｇ担体は、ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質とは、（１）ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置７８〜８３のアミノ酸残基の１個又は複数の連続したアミノ酸残基（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、又は６個の連続したアミノ酸残基）が除去され、又は上記で定義されているようなリンカーと置換されている点；及び（２）ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端における１〜４０個のアミノ酸残基が除去されている点で異なる。好ましい実施形態において、１〜５個、５〜１０個、１０〜１５個、１５〜２０個、２０〜２５個、２５〜３０個、３０〜３５個、又は３５〜４０個のアミノ酸残基が、ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端において除去されている；例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個、３０個、３１個、３２個、３３個、３４個、３５個、３６個、３７個、３８個、３９個、又は４０個のアミノ酸残基が除去されている。

当業者により知られているように、制限酵素切断部位の導入は、特に有利である。したがって、好ましい実施形態において、本発明の核酸分子において、制限酵素切断部位が、除去される１個又は複数のアミノ酸残基をコードするヌクレオチドの位置に導入される。好ましい実施形態において、本発明の核酸分子において、制限酵素切断部位は、リンカーをコードするヌクレオチド配列内に、及び／又はその末端の一方若しくは両方に導入される。好ましい実施形態において、１つ又は複数の制限酵素切断部位が、本発明の核酸分子内に、及び／又はその末端の一方若しくは両方に導入される。様々な制限酵素切断部位が、当業者に知られており、それらには、ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ、ＨｉｎｄＩＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ、ＨｐａＩ、ＨｐａＩＩ、ＭｂｏＩ、及びＭｂｏＩＩなどの制限酵素により認識される酵素切断部位が挙げられるが、それらに限定されない。

好ましい実施形態において、ポリペプチド担体は、配列番号４〜９から選択されるアミノ酸配列を有する。

好ましい実施形態において、核酸分子は、配列番号１２〜１７から選択されるヌクレオチド配列を含む。

好ましい実施形態において、核酸分子は、標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列の挿入のために用いられる。例えば、標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、除去される１個若しくは複数のアミノ酸残基をコードするヌクレオチドの位置に挿入され、或いはリンカーをコードするヌクレオチド配列内に、又はその末端の一方若しくは両方に挿入される。好ましい実施形態において、インフレーム様式で、標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、ポリペプチド担体をコードするヌクレオチド配列へ挿入される。好ましい実施形態において、制限酵素切断部位のおかげで、標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、ポリペプチド担体をコードするヌクレオチド配列へ挿入される。

好ましい実施形態において、核酸分子はさらに、標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、標的ポリペプチドが、ポリペプチド担体に対して異種性であり、且つ標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、除去される１個若しくは複数のアミノ酸残基をコードするヌクレオチドの位置に挿入され、或いはリンカーをコードするヌクレオチド配列内に、又はその末端の一方若しくは両方に挿入される。好ましい実施形態において、インフレーム様式で、標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、ポリペプチド担体をコードするヌクレオチド配列内に挿入される、好ましい実施形態において、制限酵素切断部位のおかげで、標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、ポリペプチド担体をコードするヌクレオチド配列内に挿入される。

好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、抗原、又は抗原性エピトープを含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、エピトープペプチド、例えば、ＨＩＶ、ＰＤＬ１、又はＨＢＶ（特に、ヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープを含むエピトープペプチドである。

好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ヒトＨＢＶのＨＢｓＡｇ、又はＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。好ましい実施形態において、ポリペプチド担体は、ＲＢＨＢｃＡｇ担体であり、エピトープペプチドは、ＨＩＶ、ＰＤＬ１、又はＨＢＶ（特に、ヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープ（例えば、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ））を含み、又はそれである。好ましい実施形態において、ポリペプチド担体はＴＢＨＢｃＡｇ担体であり、エピトープペプチドは、ＨＩＶ、ＰＤＬ１、又はＨＢＶ（特に、ヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープ（例えば、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ））を含み、又はそれである。好ましい実施形態において、ポリペプチド担体はＨＢＨＢｃＡｇであり、エピトープペプチドは、ＨＩＶ、ＰＤＬ１、又はＨＢＶ（特に、ヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープ（例えば、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ））を含み、又はそれである。

好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ヒトＨＢＶのＨＢｓＡｇタンパク質、又は前記ＨＢｓＡｇタンパク質のエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。好ましい実施形態において、ＨＢＶは、ＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤから選択される。好ましい実施形態において、ＨＢｓＡｇタンパク質のエピトープは、ＨＢｓＡｇタンパク質の位置１１３〜１３５のアミノ酸である。

好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ＨＩＶＧＰ１２０タンパク質、又は前記ＧＰ１２０タンパク質のエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。好ましい実施形態において、エピトープペプチドは、ＧＰ１２０タンパク質の位置３６１〜３７５のアミノ酸を含み、又はそれである。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質、又はヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質のエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。好ましい実施形態において、エピトープペプチドは、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質の位置１４７〜１６０のアミノ酸を含み、又はそれである。

好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、配列番号２０〜２２及び６０〜６２から選択されるアミノ酸配列を有する。好ましい実施形態において、核酸分子は、配列番号２３〜４０及び６９〜７４から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、又はそれからなる。

別の態様において、本発明は、上記で定義されているような本発明の核酸分子を含むベクターに関する。

標的ポリヌクレオチド（例えば、本発明の核酸分子）の挿入のためのベクターは、当技術分野においてよく知られており、それには、クローニングベクター及び発現ベクターが挙げられるが、それらに限定されない。好ましい実施形態において、本発明のベクターは、真核生物の発現ベクター又は原核生物の発現ベクターであり得る。好ましい実施形態において、本発明のベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、又はファージなどである。

別の態様において、本発明はさらに、核酸分子又はベクターを含む宿主細胞に関する。そのような宿主細胞には、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞などの原核細胞、並びに酵母細胞、昆虫細胞、植物細胞、及び（例えば哺乳動物細胞、例えば、マウス細胞、ヒト細胞などの）動物細胞などの真核細胞が挙げられるが、それらに限定されない。本発明の宿主細胞は、２９３Ｔ細胞などの細胞系でもあり得る。

別の態様において、本発明は、以下のステップを含む、標的ポリペプチドを提示するための方法に関する：
（１）組換えタンパク質をコードする核酸分子を得るように、標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を、本発明の核酸分子へ（特に、ポリペプチド担体をコードするヌクレオチド配列へ）挿入するステップ；及び
（２）ステップ（１）における組換えタンパク質をコードする核酸分子を発現させて、組換えタンパク質を産生するステップ。

好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ポリペプチド担体に対して異種性である。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列は、除去される１個若しくは複数のアミノ酸残基をコードするヌクレオチドの位置に挿入され、或いはリンカーをコードするヌクレオチド配列内に、又はその末端の一方若しくは両方に挿入される。好ましい実施形態において、インフレーム様式で、標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、ポリペプチド担体をコードするヌクレオチド配列内に挿入される。好ましい実施形態において、制限酵素切断部位のおかげで、標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、ポリペプチド担体をコードするヌクレオチド配列内に挿入される。

好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ヒトＨＢＶのＨＢｓＡｇ、又はＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。好ましい実施形態において、ポリペプチド担体は、ＲＢＨＢｃＡｇ担体であり、エピトープペプチドは、ＨＩＶ、ＰＤＬ１、又はＨＢＶ（特に、ヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープ、例えば、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含み、又はそれである。好ましい実施形態において、ポリペプチド担体はＴＢＨＢｃＡｇ担体であり、エピトープペプチドは、ＨＩＶ、ＰＤＬ１、又はＨＢＶ（特に、ヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープ、例えば、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含み、又はそれである。好ましい実施形態において、ポリペプチド担体はＨＢＨＢｃＡｇ担体であり、エピトープペプチドは、ＨＩＶ、ＰＤＬ１、又はＨＢＶ（特に、ヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープ、例えば、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含み、又はそれである。

好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、配列番号２０〜２２及び６０〜６２から選択されるアミノ酸配列を有する。好ましい実施形態において、組換えタンパク質をコードする核酸分子は、配列番号２３〜４０及び６９〜７４から選択されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含み、又はそれからなる。

別の態様において、本発明は、ポリペプチド担体及び標的ポリペプチドを含む組換えタンパク質に関し、ポリペプチド担体が、上記で定義されているのと同じ意味を有し、標的ポリペプチドが、ポリペプチド担体に挿入されている。

好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、除去される１個若しくは複数のアミノ酸残基の位置に挿入され、或いは、リンカー内に、又はその末端の一方若しくは両方に挿入される。

好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、抗原、又は抗原性エピトープを含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、エピトープペプチド、例えば、ＨＩＶ、ＰＤＬ１、又はＨＢＶ（特に、ヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープを含むエピトープペプチドである。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ヒトＨＢＶのＨＢｓＡｇ、又はＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。

好ましい実施形態において、ポリペプチド担体は、ＲＢＨＢｃＡｇ担体であり、エピトープペプチドは、ＨＩＶ、ＰＤＬ１、又はＨＢＶ（特に、ヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープ、例えば、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含み、又はそれである。好ましい実施形態において、ポリペプチド担体はＴＢＨＢｃＡｇ担体であり、エピトープペプチドは、ＨＩＶ、ＰＤＬ１、又はＨＢＶ（特に、ヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープ、例えば、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含み、又はそれである。好ましい実施形態において、ポリペプチド担体はＨＢＨＢｃＡｇ担体であり、エピトープペプチドは、ＨＩＶ、ＰＤＬ１、又はＨＢＶ（特に、ヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープ、例えば、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含み、又はそれである。

好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ＨＩＶＧＰ１２０タンパク質、又はＧＰ１２０タンパク質のエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。好ましい実施形態において、エピトープペプチドは、ＧＰ１２０タンパク質の位置３６１〜３７５のアミノ酸を含み、又はそれである。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質、又はヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質のエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。好ましい実施形態において、エピトープペプチドは、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質の位置１４７〜１６０のアミノ酸を含み、又はそれである。

好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、配列番号２０〜２２及び６０〜６２から選択されるアミノ酸配列を有する。好ましい実施形態において、ポリペプチド担体は、配列番号４〜９から選択されるアミノ酸配列を有する。好ましい実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号２３〜４０及び６９〜７４から選択されるアミノ酸配列を含み、又はそれからなる。

別の態様において、本発明は、本発明の組換えタンパク質を含み、又はそれからなるウイルス様粒子に関する。

別の態様において、本発明は、本発明の組換えタンパク質、又は本発明のウイルス様粒子、及び任意で、１つ又は複数の薬学的に許容される媒体又は賦形剤（例えば、アジュバント）を含む医薬組成物（例えば、ワクチン）に関する。好ましい実施形態において、本発明の組換えタンパク質、又は本発明のウイルス様粒子は、医薬組成物において有効量で存在する。例えば、本発明の医薬組成物は、ＨＢＶ感染、又はＨＢＶ感染に関連した疾患（例えば、Ｂ型肝炎）の予防又は処置に有効な量で、組換えタンパク質又はウイルス様粒子を含み得る。

別の態様において、本発明は、ＨＢＶ感染、又はＨＢＶ感染に関連した疾患（例えば、Ｂ型肝炎）を予防又は処置するための方法であって、それを必要としている対象に本発明の組換えタンパク質又はウイルス様粒子又は医薬組成物を投与するステップを含み、標的ポリペプチドがＨＢＶ（特にヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープを含む、方法に関する。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ＨＢＶ（特にヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープを含むエピトープペプチドである。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ヒトＨＢＶのＨＢｓＡｇ、又はＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。

好ましい実施形態において、ポリペプチド担体は、ＲＢＨＢｃＡｇ担体であり、エピトープペプチドは、ＨＢＶ（特にヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープ、例えば、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含み、又はそれである。好ましい実施形態において、ポリペプチド担体はＴＢＨＢｃＡｇ担体であり、エピトープペプチドは、ＨＢＶ（特にヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープ、例えば、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含み、又はそれである。好ましい実施形態において、ポリペプチド担体はＨＢＨＢｃＡｇ担体であり、エピトープペプチドは、ＨＢＶ（特にヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープ、例えば、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含み、又はそれである。

好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、配列番号２２及び６０〜６２から選択されるアミノ酸配列を有する。好ましい実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号３５〜４０及び６９〜７４から選択されるアミノ酸配列を含み、又はそれからなる。

好ましい実施形態において、本発明の組換えタンパク質又はウイルス様粒子又は医薬組成物は、ＨＢＶ感染、又はＨＢＶ感染に関連した疾患（例えば、Ｂ型肝炎）を予防又は処置するのに有効な量で投与される。

別の態様において、本発明は、ＨＢＶ感染、又はＨＢＶ感染に関連した疾患（例えば、Ｂ型肝炎）を予防又は処置するための薬物の製造における組換えタンパク質又はウイルス様粒子の使用に関し、標的ポリペプチドが、ＨＢＶ（特にヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープを含む。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ＨＢＶ（特にヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープを含むエピトープペプチドである。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ヒトＨＢＶのＨＢｓＡｇ、又はＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。

好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ヒトＨＢＶのＨＢｓＡｇタンパク質、又はＨＢｓＡｇタンパク質のエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。好ましい実施形態において、ＨＢＶは、ＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤから選択される。好ましい実施形態において、ＨＢｓＡｇタンパク質のエピトープは、ＨＢｓＡｇタンパク質の位置１１３〜１３５のアミノ酸である。

別の態様において、本発明は、ＨＢＶ感染、又はＨＢＶ感染に関連した疾患（例えば、Ｂ型肝炎）の予防又は処置における使用のための、本発明の組換えタンパク質又はウイルス様粒子又は医薬組成物に関し、標的ポリペプチドが、ＨＢＶ（特にヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープを含む。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ＨＢＶ（特にヒトＨＢＶ）由来の抗原性エピトープを含むエピトープペプチドである。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ヒトＨＢＶのＨＢｓＡｇ、又はＨＢｓＡｇのエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。

別の態様において、本発明は、ＨＩＶ感染、又はＨＩＶ感染に関連した疾患（例えば、ＡＩＤＳ）を予防又は処置するための方法であって、それを必要としている対象に本発明の組換えタンパク質又はウイルス様粒子又は医薬組成物を投与するステップを含み、標的ポリペプチドがＨＩＶの抗原性エピトープを含む、方法に関する。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ＨＩＶ由来の抗原性エピトープを含むエピトープペプチドである。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ＨＩＶＧＰ１２０タンパク質、又はＧＰ１２０タンパク質のエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。

好ましい実施形態において、エピトープペプチドは、ＧＰ１２０タンパク質の位置３６１〜３７５のアミノ酸を含み、又はそれである。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、配列番号２０に示されたアミノ酸配列を有する。好ましい実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号２３〜２８から選択されるアミノ酸配列を含み、又はそれからなる。

好ましい実施形態において、本発明の組換えタンパク質又はウイルス様粒子又は医薬組成物は、ＨＩＶ感染、又はＨＩＶ感染に関連した疾患（例えば、ＡＩＤＳ）を予防又は処置するのに有効な量で投与される。

別の態様において、本発明は、ＨＩＶ感染、又はＨＩＶ感染に関連した疾患（例えば、ＡＩＤＳ）を予防又は処置するための薬物の製造における本発明の組換えタンパク質又はウイルス様粒子の使用に関し、標的ポリペプチドが、ＨＩＶ由来の抗原性エピトープを含む。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ＨＩＶ由来の抗原性エピトープを含むエピトープペプチドである。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ＨＩＶＧＰ１２０タンパク質、又はＧＰ１２０タンパク質のエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれらから選択される。

別の態様において、本発明は、ＨＩＶ感染、又はＨＩＶ感染に関連した疾患（例えば、ＡＩＤＳ）の予防又は処置における使用のための、本発明の組換えタンパク質又はウイルス様粒子又は医薬組成物に関し、標的ポリペプチドが、ＨＩＶ由来の抗原性エピトープを含む。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ＨＩＶ由来の抗原性エピトープを含むエピトープペプチドである。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ＨＩＶＧＰ１２０タンパク質、又はＧＰ１２０タンパク質のエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。

別の態様において、本発明は、癌（例えば、非小細胞肺癌）を予防又は処置するための方法であって、それを必要としている対象に本発明の組換えタンパク質又はウイルス様粒子又は医薬組成物を投与するステップを含み、標的ポリペプチドがヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質の抗原性エピトープを含む、方法に関する。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質の抗原性エピトープを含むエピトープペプチドである。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質、又はヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質のエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。

好ましい実施形態において、エピトープペプチドは、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質の位置１４７〜１６０のアミノ酸を含み、又はそれである。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、配列番号２１に示されたアミノ酸配列を有する。好ましい実施形態において、組換えタンパク質は、配列番号２９〜３４から選択されるアミノ酸配列を含み、又はそれからなる。

好ましい実施形態において、本発明の組換えタンパク質又はウイルス様粒子又は医薬組成物は、癌（例えば、非小細胞肺癌）を予防又は処置するのに有効な量で投与される。

別の態様において、本発明は、癌（例えば、非小細胞肺癌）を予防又は処置するための薬物の製造における組換えタンパク質又はウイルス様粒子の使用に関し、標的ポリペプチドが、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質の抗原性エピトープを含む。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質の抗原性エピトープを含むエピトープペプチドである。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質、又はヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質のエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。

別の態様において、本発明は、癌（例えば、非小細胞肺癌）の予防又は処置における使用のための、組換えタンパク質又はウイルス様粒子又は医薬組成物に関し、標的ポリペプチドが、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質の抗原性エピトープを含む。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質の抗原性エピトープを含むエピトープペプチドである。好ましい実施形態において、標的ポリペプチドは、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質、又はヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質のエピトープ（例えば、直線状エピトープ）を含むエピトープペプチドを含み、又はそれである。

別の態様において、本発明は、組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド、及びポリヌクレオチドを含むベクターに関する。

別の態様において、本発明はさらに、ポリヌクレオチド又はベクターを含む宿主細胞に関する。そのような宿主細胞には、大腸菌細胞などの原核細胞、並びに酵母細胞、昆虫細胞、植物細胞、及び（例えば哺乳動物細胞、例えば、マウス細胞、ヒト細胞などの）動物細胞などの真核細胞が挙げられるが、それらに限定されない。本発明の宿主細胞は、２９３Ｔ細胞などの細胞系でもあり得る。

別の態様において、本発明はさらに、本発明の宿主細胞を組換えタンパク質を発現するのに適した条件下で培養するステップ、及び組換えタンパク質を回収するステップを含む、組換えタンパク質を調製するための方法に関する。

本発明における関連用語の定義及び説明
本発明において、他に規定がない限り、本明細書で用いられる科学的及び技術的用語は、当業者によって一般的に理解されているような意味をもつ。さらに、本明細書で用いられる細胞培養、分子遺伝学、核酸化学、及び免疫学の実験操作ステップは、対応する分野で広く用いられる日常的ステップである。加えて、本発明をより良く理解するために、関連用語の定義及び説明が以下の通り、提供される。

本明細書で用いられる場合、用語「カグラコウモリＨＢＶコア抗原タンパク質（ＲＢＨＢｃＡｇ）」及び「ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質」は、カグラコウモリＨＢＶ（ＲＢＨＢＶ）由来のコア抗原タンパク質を指し、それは、当業者によく知られている（例えば、ＮＣＢＩＧＥＮＢＡＮＫ受託番号：ＫＣ７９０３７３．１を参照）。

本明細書で用いられる場合、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のアミノ酸配列が言及される時、それは、配列番号１に示された配列を参照することにより記載される。例えば、句「ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置７８〜８３のアミノ酸残基」は、配列番号１に示されたポリペプチドの位置７８〜８３のアミノ酸残基を指す。しかしながら、変異又はバリエーション（例えば、置換、欠失、及び／又は付加が挙げられるが、それらに限定されない。例えば、異なる遺伝子型又は遺伝子サブタイプのＲＢＨＢｃＡｇタンパク質）が、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のアミノ酸配列に天然で存在し、又はそれへ、その生物学的性質に影響することなく、人工的に導入され得ることを、当業者は理解している。したがって、本発明において、用語「ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質」は、配列番号１に示された配列、及びそれの天然又は人工的バリアントを含む、全てのそのような配列を含むことを意図する。加えて、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質の配列断片が記載される時、それらは、配列番号１の配列断片だけでなく、それの天然又は人工的バリアントの対応する配列断片も含む。例えば、句「ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置７８〜８３のアミノ酸残基」は、配列番号１の位置７８〜８３のアミノ酸残基、及びそれのバリアント（天然又は人工的バリアント）の対応する断片を含む。本発明によれば、句「対応する配列断片」又は「対応する断片」は、その配列が最適化アラインメントに供された時、すなわち、その配列が最高パーセンテージの同一性を得るようにアラインメントされた時の配列の同等の位置に位置する断片を指す。

本明細書で用いられる場合、用語「野生型ＲＢＨＢｃＡｇ」は、カグラコウモリＨＢＶにおける天然で存在するコア抗原タンパク質を指す。

本明細書で用いられる場合、用語「ＲＢＨＢｃＡｇ担体」は、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質に由来したポリペプチド担体を指す。上記で詳細に記載されているように、ＲＢＨＢｃＡｇ担体は、（ａ）ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置７８〜８３のアミノ酸残基の１個又は複数のアミノ酸残基が除去され、又はリンカーで置換されている点、及び（ｂ）任意で、１〜４０個のアミノ酸残基がＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端において除去されている点でＲＢＨＢｃＡｇタンパク質と異なる。

本明細書で用いられる場合、用語「テントコウモリＨＢＶコア抗原（ＴＢＨＢｃＡｇ）」及び「ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質」は、テントコウモリＨＢＶ（ＴＢＨＢＶ）由来のコア抗原タンパク質を指し、それは、当業者によく知られている（例えば、ＮＣＢＩＧＥＮＢＡＮＫ受託番号：ＫＣ７９０３７８．１を参照）。

本明細書で用いられる場合、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のアミノ酸配列が言及される時、それは、配列番号２に示された配列を参照することにより記載される。例えば、句「ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置８０〜８４のアミノ酸残基」は、配列番号２に示されたポリペプチドの位置８０〜８４のアミノ酸残基を指す。しかしながら、変異又はバリエーション（例えば、置換、欠失、及び／又は付加が挙げられるが、それらに限定されない。例えば、異なる遺伝子型又は遺伝子サブタイプのＴＢＨＢｃＡｇタンパク質）が、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のアミノ酸配列に天然で存在し、又はそれへ、その生物学的性質に影響することなく、人工的に導入され得ることを、当業者は理解している。したがって、本発明において、用語「ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質」は、配列番号２に示された配列、及びそれの天然又は人工的バリアントを含む、全てのそのような配列を含むことを意図する。加えて、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質の配列断片が記載される時、それらは、配列番号２の配列断片だけでなく、それの天然又は人工的バリアントの対応する配列断片も含む。例えば、句「ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置８０〜８４のアミノ酸残基」は、配列番号２の位置８０〜８４のアミノ酸残基、及びそれのバリアント（天然又は人工的バリアント）の対応する断片を含む。本発明によれば、句「対応する配列断片」又は「対応する断片」は、その配列が最適化アラインメントに供された時、すなわち、その配列が最高パーセンテージの同一性を得るようにアラインメントされた時の配列の同等の位置に位置する断片を指す。

本明細書で用いられる場合、用語「野生型ＴＢＨＢｃＡｇ」は、テントコウモリＨＢＶにおける天然で存在するコア抗原タンパク質を指す。

本明細書で用いられる場合、用語「ＴＢＨＢｃＡｇ担体」は、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質に由来したポリペプチド担体を指す。上記で詳細に記載されているように、ＴＢＨＢｃＡｇ担体は、（ａ）ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置８０〜８４のアミノ酸残基の１個又は複数のアミノ酸残基が除去され、又はリンカーで置換されている点、及び（ｂ）任意で、１〜３５個のアミノ酸残基がＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端において除去されている点でＴＢＨＢｃＡｇタンパク質と異なる。

本明細書で用いられる場合、用語「キクガシラコウモリＨＢＶコア抗原タンパク質（ＨＢＨＢｃＡｇ）」及び「ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質」は、キクガシラコウモリＨＢＶ（ＨＢＨＢＶ）由来のコア抗原タンパク質を指し、それは、当業者によく知られている（例えば、ＮＣＢＩＧＥＮＢＡＮＫ受託番号：ＫＣ７９０３７７．１を参照）。

本明細書で用いられる場合、ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質のアミノ酸配列が言及される時、それは、配列番号３に示された配列を参照することにより記載される。例えば、句「ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置７８〜８３のアミノ酸残基」は、配列番号３に示されたポリペプチドの位置７８〜８３のアミノ酸残基を指す。しかしながら、変異又はバリエーション（例えば、置換、欠失、及び／又は付加が挙げられるが、それらに限定されない。例えば、異なる遺伝子型又は遺伝子サブタイプのＨＢＨＢｃＡｇタンパク質）が、ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質のアミノ酸配列に天然で存在し、又はそれへ、その生物学的性質に影響することなく、人工的に導入され得ることを、当業者は理解している。したがって、本発明において、用語「ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質」は、配列番号３に示された配列、及びそれの天然又は人工的バリアントを含む、全てのそのような配列を含むことを意図する。加えて、ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質の配列断片が記載される時、それらは、配列番号３の配列断片だけでなく、それの天然又は人工的バリアントの対応する配列断片も含む。例えば、句「ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置７８〜８３のアミノ酸残基」は、配列番号３の位置７８〜８３のアミノ酸残基、及びそれのバリアント（天然又は人工的バリアント）の対応する断片を含む。本発明によれば、句「対応する配列断片」又は「対応する断片」は、その配列が最適化アラインメントに供された時、すなわち、その配列が最高パーセンテージの同一性を得るようにアラインメントされた時の配列の同等の位置に位置する断片を指す。

本明細書で用いられる場合、用語「野生型ＨＢＨＢｃＡｇ」は、キクガシラコウモリＨＢＶにおける天然で存在するコア抗原タンパク質を指す。

本明細書で用いられる場合、用語「ＨＢＨＢｃＡｇ担体」は、ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質に由来したポリペプチド担体を指す。上記で詳細に記載されているように、ＨＢＨＢｃＡｇ担体は、（ａ）ＨＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における位置７８〜８３のアミノ酸残基の１個又は複数のアミノ酸残基が除去され、又はリンカーで置換されている点、及び（ｂ）任意で、１〜４０個のアミノ酸残基がＨＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端において除去されている点でＨＢＨＢｃＡｇタンパク質と異なる。

本明細書で用いられる場合、用語「ヒトＨＢＶＨＢｃＡｇ」及び「Ｈｕ−ＨＢｃＡｇ」は、ヒトＢ型肝炎ウイルスのコア抗原タンパク質を指し、それは、当業者によりよく知られている（例えば、ＮＣＢＩＧＥＮＢＡＮＫ受託番号：ＡＡＯ６３５１７．１を参照）。本明細書で用いられる場合、ヒトＨＢＶＨＢｃＡｇのアミノ酸配列が言及される時、それは、ＮＣＢＩＧＥＮＢＡＮＫ受託番号：ＡＡＯ６３５１７．１に示された配列により記載される。

本明細書で用いられる場合、用語「ヒトＨＢＶＨＢｓＡｇ」及び「Ｈｕ−ＨＢｓＡｇ」は、ヒトＢ型肝炎ウイルスの表面抗原タンパク質を指し、それは、当業者によりよく知られている（例えば、ＮＣＢＩＧＥＮＢＡＮＫ受託番号：ＡＡＦ２４７２９．１を参照）。

本明細書で用いられる場合、ヒトＨＢＶＨＢｓＡｇのアミノ酸配列が言及される時、それは、配列番号４４（すなわち、ＮＣＢＩＧＥＮＢＡＮＫ受託番号：ＡＡＦ２４７２９．１）に示された配列を参照することにより記載される。例えば、句「ＨＢｓＡｇタンパク質の位置１１３〜１３５のアミノ酸残基」は、配列番号４４に示されたポリペプチドの位置１１３〜１３５のアミノ酸残基を指す。しかしながら、変異又はバリエーション（例えば、置換、欠失、及び／又は付加が挙げられるが、それらに限定されない。例えば、異なる遺伝子型又は遺伝子サブタイプのＨＢｓＡｇタンパク質）が、ＨＢｓＡｇタンパク質のアミノ酸配列に天然で存在し、又はそれへ、その生物学的性質に影響することなく、人工的に導入され得ることを、当業者は理解している。したがって、本発明において、用語「ＨＢｓＡｇタンパク質」は、配列番号４４に示された配列、及びそれの天然又は人工的バリアントを含む、全てのそのような配列を含むことを意図する。加えて、ＨＢｓＡｇタンパク質の配列断片が記載される時、それらは、配列番号４４の配列断片だけでなく、それの天然又は人工的バリアントの対応する配列断片も含む。例えば、句「ＨＢｓＡｇタンパク質の位置１１３〜１３５のアミノ酸残基」は、配列番号４４の位置１１３〜１３５のアミノ酸残基、及びそれのバリアント（天然又は人工的バリアント）の対応する断片を含む。本発明によれば、句「対応する配列断片」又は「対応する断片」は、その配列が最適化アラインメントに供された時、すなわち、その配列が最高パーセンテージの同一性を得るようにアラインメントされた時の配列の同等の位置に位置する断片を指す。

本明細書で用いられる場合、句「Ｘタンパク質のＣ末端において除去されたＹ個のアミノ酸残基」とは、Ｘタンパク質のＣ末端における最後のＹ個のアミノ酸残基が完全に除去されていることを意味する。例えば、句「ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端において除去された１〜４０個のアミノ酸残基」は、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端において最後の１〜４０個のアミノ酸残基が完全に除去されていることを意味する。

本明細書で用いられる場合、用語「同一性」は、２つのポリペプチド間、又は２つの核酸間の一致の程度を指す。比較のための２つの配列が、ある特定の部位において同じ塩基又はアミノ酸単量体サブユニットを有する（例えば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれが、ある特定の部位においてアデニンを有し、又は２つのポリペプチドのそれぞれが、ある特定の部位においてリシンを有する）場合、その２つの分子はその部位において同一である。２つの配列間でのパーセント同一性は、比較のための部位の総数で割った、２つの配列によって共有される同一部位の数×１００という関数である。例えば、２つの配列の１０個の部位のうちの６個が一致している場合には、これらの２つの配列は、６０％の同一性を有する。例えば、ＤＮＡ配列：ＣＴＧＡＣＴとＣＡＧＧＴＴは、５０％の同一性を共有する（６個の部位のうち３個が一致している）。一般的に、２つの配列の比較は、最大同一性を生じ得る様式で行われる。そのようなアラインメントは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３〜４５３、１９７０）の方法に基づいているＡｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡｓｔａｒ，Ｉｎｃ．）などのコンピュータプログラムを用いることにより行うことができる。２つのアミノ酸配列間のパーセント同一性は、ＰＡＭ１２０重み残基表、１２のギャップ長ペナルティ、及び４のギャップペナルティを用いる、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）へ組み込まれている、Ｅ．Ｍｅｙｅｒｓ及びＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．、４：１１〜１７（１９８８））のアルゴリズムを用いて決定することができる。加えて、２つのアミノ酸配列間の同一性のパーセンテージは、Ｂｌｏｓｓｕｍ６２マトリックスか又はＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、及び１６、１４、１２、１０、８、６、又は４のギャップ重み、及び１、２、３、４、５、又は６の長さ重みを用いる、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能）におけるＧＡＰプログラムへ組み込まれているＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４〜４５３（１９７０））のアルゴリズムにより、決定することができる。

本明細書で用いられる場合、用語「保存的置換」は、アミノ酸配列を含むタンパク質又はポリペプチドの生物学的活性に不利に影響しないであろう、又は変化させないであろうアミノ酸置換を指す。例えば、保存的置換は、部位特異的変異誘発及びＰＣＲ媒介性変異誘発などの当技術分野において知られた標準技術により導入され得る。保存的アミノ酸置換には、アミノ酸残基が、類似した側鎖を有する別のアミノ酸残基、例えば、対応するアミノ酸残基と物理的又は機能的に類似した（例えば、類似したサイズ、形、電荷、共有結合又は水素結合を形成する能力を含む化学的性質などを有する）残基と置換される置換が挙げられる。類似した側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーが当技術分野において定義されている。これらのファミリーには、アルカリ性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リシン、アルギニン、及びヒスチジン）、酸性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン酸及びグルタミン酸）、非荷電極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、β−分岐型側鎖を有するアミノ酸（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）、及び芳香族側鎖を有するアミノ酸（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。したがって、対応するアミノ酸残基は、好ましくは、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基と置換される。アミノ酸保存的置換を同定するための方法は、当技術分野においてよく知られている（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１１８０〜１１８７（１９９３）；Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇ．１２（１０）：８７９〜８８４（１９９９）；及びＢｕｒｋｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９４：４１２〜４１７（１９９７）（それらは参照により本明細書に組み入れられている）を参照）。

本明細書で用いられる場合、用語「ハイブリダイゼーション」は、ある特定の条件（例えば、適切な温度、イオン強度など）下で、相補的塩基対形成の原理に基づいて、相補的配列を有する２つの一本鎖核酸分子をアニールすることにより、二本鎖核酸を形成する過程を指す。核酸ハイブリダイゼーションは、塩基対形成のための相補的配列を有する限り、ＤＮＡ−ＤＮＡ間、加えて、ＤＮＡ−ＲＮＡ間又はＲＮＡ−ＲＮＡ間で起こり得る。核酸ハイブリダイゼーションのさらなる詳細な説明に関して、例えば、ＨｅｎｅｇａｒｉｕＯら、（１９９９）「核酸標識のための代替方法としてのカスタム蛍光−ヌクレオチド合成（Ｃｕｓｔｏｍｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ−ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｓａｎａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｌａｂｅｌｉｎｇ）」、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１８：３４５〜３４８；ＥｚａｋｉＴら、１９８９、細菌株の間で遺伝的関連性を決定するために放射性同位元素が用いられる膜フィルターハイブリダイゼーションの代替としての微量希釈ウェルにおける蛍光定量的デオキシリボ核酸−デオキシリボ核酸ハイブリダイゼーション（ＦｌｕｏｒｏｍｅｔｒｉｃＤｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄ−ＤｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄＨｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｉｎＭｉｃｒｏｄｉｌｕｔｉｏｎＷｅｌｌｓａｓａｎＡｌｔｅｒｎａｔｉｖｅｔｏＭｅｍｂｒａｎｅＦｉｌｔｅｒＨｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎｉｎｗｈｉｃｈＲａｄｉｏｉｓｏｔｏｐｅｓＡｒｅＵｓｅｄｔｏＤｅｔｅｒｍｉｎｅＧｅｎｅｔｉｃＲｅｌａｔｅｄｎｅｓｓａｍｏｎｇＢａｃｔｅｒｉａｌＳｔｒａｉｎｓ）、Ｉｎｔ．Ｊ．ｏｆＳｙｓｔｅｍｉｃＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ２９（３）：２２４〜２２９；及びＨｅｒｒｉｎｇｔｏｎＣら、１９９８ＰＣＲ３：ＰＣＲインサイチュハイブリダイゼーション：実践的アプローチ（ＰＣＲ３：ＰＣＲｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ：ａｐｒａｃｔｉｃａｌａｐｐｒｏａｃｈ）、３巻Ｏｘｆｏｒｄ：ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓを参照してください。

核酸ハイブリダイゼーションの特異性を保証するために、ストリンジェントな条件又は高ストリンジェントな条件が一般的に用いられる。ストリンジェントな条件及び高ストリンジェントな条件は、分子生物学の分野においてよく知られている。例えば、ストリンジェントな条件は、約４５℃、６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのハイブリダイゼーション、続いて約５０〜６５℃、０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中での１回又は複数回の洗浄を指し得る。高ストリンジェントな条件は、約４５℃、６×ＳＳＣ中でのハイブリダイゼーション、続いて約６８℃、０．１×ＳＳＣ／０．２％ＳＤＳ中での１回又は複数回の洗浄を指し得る。当業者により知られた他のストリンジェントな条件又は高ストリンジェントな条件に関して、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら（編）、１９８９、生物分子学における現在のプロトコール（ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ）、１巻、ＧｒｅｅｎＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＡｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．、及びＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、ＮｅｗＹｏｒｋ、６．３．１〜６．３．６及び２．１０．３ページを参照してください。

本明細書で用いられる場合、用語「リンカー」は、２つの分子（例えば、タンパク質）を連結するための短いペプチドを指す。そのようなリンカーは当業者によりよく知られており、それには、（Ｇｌｙ）_４、（Ｇｌｙ）_４−Ｓｅｒ、及び（（Ｇｌｙ）_４−Ｓｅｒ）_３などの可動性リンカーが挙げられるが、それに限定されない。

本発明において、用語「ポリペプチド」及び「タンパク質」は、同じ意味をもち、交換可能に用いることができる。さらに、本発明において、アミノ酸は、一般的に、１文字コード及び３文字コードとして表される。例えば、アラニンはＡ又はＡｌａとして表され得る。

本明細書で用いられる場合、用語「制限酵素切断部位」は、制限酵素によって認識される酵素切断部位を指す。そのような制限酵素切断部位は、当業者によりよく知られており、それには、ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨＩ、ＨｉｎｄＩＩ、ＨｉｎｄＩＩＩ、ＨｐａＩ、ＨｐａＩＩ、ＭｂｏＩ、及びＭｂｏＩＩなどの制限酵素により認識される酵素切断部位が挙げられるが、それらに限定されない。

本明細書で用いられる場合、用語「抗原性エピトープ」、「抗原エピトープ」、及び「エピトープ」は、免疫グロブリン又は抗体が特異的に結合する抗原上の部分を指す。「エピトープ」はまた、当技術分野において、「抗原決定基」と呼ばれる。エピトープ又は抗原決定基は、一般的に、アミノ酸、糖質、又は糖側鎖などの分子の化学的活性表面群からなり、且つ一般的に、特定の３Ｄ構造特性及び特定の電荷特性を有する。例えば、エピトープは一般的に、少なくとも３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、又は１５個の連続した、又は不連続なアミノ酸を、「直線状」又は「立体構造的」であり得るそれ固有の立体構造で含む。例えば、分子生物学の方法におけるエピトープマッピングプロトコール（ＥｐｉｔｏｐｅＭａｐｐｉｎｇＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ）、６６巻、Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ編（１９９６）を参照。直線状エピトープにおいて、タンパク質と相互作用分子（例えば、抗体）との間の全ての相互作用部位は、そのタンパク質の一次アミノ酸配列に沿って直線的に存在する。立体構造的エピトープにおいて、相互作用部位は、そのタンパク質のアミノ酸残基によりお互いに間隔があいている。

本明細書で用いられる場合、用語「ＨＢｓＡｇエピトープ」は、免疫グロブリン又は抗体が特異的に結合し得るＨＢｓＡｇ上の部分を指す。ヒトＨＢＶのＨＢｓＡｇの構造及び機能は十分、研究されている。さらに、多くの論文が、ヒトＨＢＶのＨＢｓＡｇ上のエピトープを報告している。例えば、ＷＯ９７／３９０２９Ａ２；ＷＯ８５／０４１０３Ａ１；ＸｉａｏｘｉｎｇＱｉｕら、ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９６、１５６巻、３３５０〜３３５６ページ；ＷＯ２０１３／１８５５５８Ａ１などを参照。

本明細書で用いられる場合、用語「エピトープペプチド」は、エピトープを形成し、又はエピトープとして作用することができる、抗原上のペプチド断片を指す。いくつかの条件下で、単独でのエピトープペプチドには、そのエピトープに対する抗体が特異的に認識／結合し得る。いくつかの他の条件下で、エピトープペプチドは、エピトープペプチドが抗体により特異的に認識されるのを促進するために、ポリペプチド担体に融合しなければならない。エピトープペプチド内に含まれるエピトープは、直線状エピトープ又は立体構造的エピトープであり得る。エピトープペプチドが直線状エピトープを含む場合、それは、抗体においてエピトープを形成する連続したアミノ酸セグメント（すなわち、ペプチド断片）を含み、又はそれであり得る。エピトープペプチドが立体構造的エピトープを含む場合、それは、立体構造的エピトープに関与する全てのアミノ酸残基を包含する連続したアミノ酸セグメント（すなわち、ペプチド断片）を含み、又はそれであり得る。本発明のいくつかの実施形態において、エピトープペプチドは、好ましくは、５００個以下のアミノ酸残基の長さ、例えば、４００個以下のアミノ酸残基の長さ、３００個以下のアミノ酸残基の長さ、２００個以下のアミノ酸残基の長さ、１００個以下のアミノ酸残基の長さ、９０個以下のアミノ酸残基の長さ、８０個以下のアミノ酸残基の長さ、７０個以下のアミノ酸残基の長さ、６０個以下のアミノ酸残基の長さ、５０個以下のアミノ酸残基の長さ、４０個以下のアミノ酸残基の長さ、３０個以下のアミノ酸残基の長さ、又は２５個以下のアミノ酸残基の長さを有する。

本明細書で用いられる場合、用語「ポリペプチド担体」は、エピトープペプチドの担体として作用し得る、すなわち、エピトープペプチドが、提示され得、それにしたがって、抗体又は免疫系により認識され得るように、特定の位置（例えば、そのタンパク質内、又はそのタンパク質のＮ末端若しくはＣ末端）に挿入されたエピトープペプチドを有し得る、そのような担体タンパク質を指す。そのような担体タンパク質は、以前の論文において報告されており、それには、例えば、ＨＰＶＬ１タンパク質（エピトープペプチドが、そのタンパク質の位置１３０のアミノ酸と位置１３１のアミノ酸の間、又は位置４２６のアミノ酸と位置４２７のアミノ酸の間で挿入され得る；Ｓｌｕｐｅｔｚｋｙ，Ｋ．ら、カプシド表面ループ上に外来エピトープを発現するキメラパピローマウイルス様粒子（Ｃｈｉｍｅｒｉｃｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ−ｌｉｋｅｐａｒｔｉｃｌｅｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇａｆｏｒｅｉｇｎｅｐｉｔｏｐｅｏｎｃａｐｓｉｄｓｕｒｆａｃｅｌｏｏｐｓ）［Ｊ］ＪＧｅｎＶｉｒｏｌ、２００１、８２：２７９９〜２８０４；Ｖａｒｓａｎｉ，Ａ．ら、ＨＰＶ−６及びＨＰＶ−１６のＬ２マイナーカプシドタンパク質についての共通中和エピトープを提示するキメラヒトパピローマウイルス１６型（ＨＰＶ−１６）Ｌ１粒子（Ｃｈｉｍｅｒｉｃｈｕｍａｎｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓｔｙｐｅ１６（ＨＰＶ−１６）Ｌ１ｐａｒｔｉｃｌｅｓｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｔｈｅｃｏｍｍｏｎｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇｅｐｉｔｏｐｅｆｏｒｔｈｅＬ２ｍｉｎｏｒｃａｐｓｉｄｐｒｏｔｅｉｎｏｆＨＰＶ−６ａｎｄＨＰＶ−１６）［Ｊ］ＪＶｉｒｏｌ、２００３、７７：８３８６〜８３９３参照）、ＣＲＭ１９７タンパク質（エピトープペプチドが、そのタンパク質又はそれの断片のＮ末端又はＣ末端に連結され得る）などが挙げられる。上記で論じられているように、本発明は、ヒトＢ型肝炎ウイルス由来の抗原性エピトープ（例えば、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープ）を含むエピトープペプチドを提示するのに特に適している、標的ポリペプチドを提示するためのポリペプチド担体の新しい類を提供する。本発明の実施形態において、リンカー（例えば、可動性又は剛性リンカー）が、エピトープペプチドとポリペプチド担体との間に、それらのフォールディングをそれぞれ、促進するために用いられ得る。

本明細書で用いられる場合、用語「組換えタンパク質」は、記載されたそのタンパク質が天然に存在するタンパク質ではないことを意味するのみであり、そのタンパク質を産生又は取得する手段を制限することを意図されない。本発明の組換えタンパク質は、任意の公知の方法により産生され得、その方法には、遺伝子工学方法及び人工的合成方法が挙げられるが、それらに限定されない。

本明細書で用いられる場合、用語「ウイルス様粒子」は、ウイルス核酸を含まず、自己複製することができないが、形態及び構造に関して真のビリオンと同じ、又は類似している、ある特定のウイルスの１つ又は複数の構造タンパク質によって形成される中空粒子を指す。

本明細書で用いられる場合、用語「薬学的に許容される担体及び／又は賦形剤」は、対象及び活性成分に薬理学的及び／又は生理学的に適合性である担体及び／又は賦形剤を指し、それは、当技術分野においてよく知られており（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎの薬学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ）、ＧｅｎｎａｒｏＡＲによる編集、第１９版、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏｍｐａｎｙ、１９９５参照）、それには、ｐＨ調整剤、界面活性剤、アジュバント、及びイオン強度増強剤が挙げられるが、それらに限定されない。例えば、ｐＨ調整剤には、リン酸バッファーが挙げられるが、それに限定されない；界面活性剤には、陽イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤、非イオン性界面活性剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ−８０）が挙げられるが、それらに限定されない；及び、イオン強度増強剤には、ＮａＣｌが挙げられるが、それに限定されない。

本明細書で用いられる場合、用語「アジュバント」は、それが、抗原と共に生物体へ送達され、又は前もって生物体へ送達される場合、生物体において抗原に対する免疫応答を増強し、又は免疫応答の型を変化させることができる、非特異的免疫賦活剤を指す。様々なアジュバントがあり、それには、アルミニウムアジュバント（例えば、水酸化アルミニウム）、フロイントアジュバント（例えば、フロイント完全アジュバント及びフロイント不完全アジュバント）、コリネバクテリウム・パルバム（ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍｐａｒｖｕｍ）、リポ多糖、サイトカインなどが挙げられるが、それらに限定されない。フロイントアジュバントは、動物実験において、現在、最も一般的に用いられるアジュバントである。水酸化アルミニウムアジュバントは、より一般的には、臨床試験に用いられる。

本明細書で用いられる場合、用語「大腸菌発現系」は、大腸菌（株）及びベクターからなる発現系を指し、大腸菌（株）には、市場で入手できる、ＧＩ６９８、ＥＲ２５６６、ＢＬ２１（ＤＥ３）、Ｂ８３４（ＤＥ３）、及びＢＬＲ（ＤＥ３）が挙げられるが、それらに限定されない。

本明細書で用いられる場合、用語「ベクター」は、それに挿入されるポリヌクレオチドを有し得る核酸媒体を指す。ベクターが、それに挿入されたポリヌクレオチドによりコードされるタンパク質の発現を可能にする場合、ベクターは発現ベクターと呼ばれる。ベクターは、宿主細胞への形質転換、形質導入、又はトランスフェクションにより宿主細胞において発現する、輸送される遺伝子材料エレメントを有し得る。ベクターは当業者によりよく知られており、それには、プラスミド、ファージ、コスミド、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、又はＰ１由来人工染色体（ＰＡＣ）などの人工染色体；λファージ又はＭ１３ファージなどのファージ、及び動物ウイルスが挙げられるが、それらに限定されない。ベクターとして用いることができる動物ウイルスには、（レンチウイルスを含む）レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、及びパポーバウイルス（例えば、ＳＶ４０）が挙げられるが、それらに限定されない。ベクターは、発現を制御するための複数のエレメントを含み得、そのエレメントには、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択エレメント、及びレポーター遺伝子が挙げられるが、それらに限定されない。加えて、ベクターは、複製開始点を含み得る。

本明細書で用いられる場合、用語「宿主細胞」は、ベクターが導入され得る細胞を指し、それには、大腸菌又は枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）などの原核細胞、酵母細胞又はアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）などの真菌細胞、Ｓ２ショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）細胞又はＳｆ９などの昆虫細胞、線維芽細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＮＳＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、又はヒト細胞などの動物細胞が挙げられるが、それらに限定されない。

本明細書で用いられる場合、用語「対象」は、哺乳動物、例えば、ヒトなどの霊長類哺乳動物を指す。

本明細書で用いられる場合、用語「有効量」は、所望の効果を達成し、又は少なくとも部分的に達成するのに十分である量を指す。例えば、疾患（例えば、ＨＢＶ感染、又はＨＢＶ感染に関連した疾患）を予防するための有効量は、その疾患（例えば、ＨＢＶ感染、又はＨＢＶ感染に関連した疾患）の発生を予防し、抑制し、又は遅らせるのに十分である量を指す；治療的有効量は、疾患及びその疾患を有する患者におけるそれの合併症を治癒し、又は少なくとも部分的に抑制するのに十分である量を指す。そのような有効量の決定は、完全に、当業者の能力の範囲内である。例えば、治療的使用に有効な量は、処置されるべき疾患の重症度、患者における免疫系の一般的な状態、年齢、体重、及び性別などの患者の一般的な状態、薬剤の投与経路、同時に用いられる追加の治療などに依存する。

本発明の技術的ソリューションは、先行技術に優る、以下の有益な効果を有する：
（１）本発明は、幅広い適用性を有し、様々な標的ポリペプチド（例えば、抗原エピトープ／抗原ペプチド断片）を効率的に提示して、宿主において標的ポリペプチドに対する特異的免疫応答の発生を誘導するために用いることができる、新しいポリペプチド担体を提供する。そのような標的ポリペプチド（例えば、抗原性エピトープ／抗原ペプチド断片）には、ＨＩＶ由来の抗原性エピトープ／抗原ペプチド断片（例えば、ＨＩＶＧＰ１２０タンパク質由来の抗原性エピトープ／抗原ペプチド断片；例えば、ＧＰ１２０タンパク質の位置３６１〜３７５のアミノ酸を含むポリペプチド）、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質由来の抗原性エピトープ／抗原ペプチド断片（例えば、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質の位置１４７〜１６０のアミノ酸を含むポリペプチド）、及びヒトＨＢＶ由来の抗原性エピトープ／抗原ペプチド断片（例えば、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇタンパク質の抗原性エピトープ／抗原ペプチド断片；例えば、ＨＢｓＡｇタンパク質の位置１１３〜１３５のアミノ酸を含むポリペプチド）が挙げられるが、それらに限定されない。
（２）本発明のポリペプチド担体は、ヒトＢ型肝炎ウイルス由来の抗原エピトープ（ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇにおけるエピトープ）を提示するのに特に適しており、既存のＢ型肝炎ワクチン（例えば、同じエピトープを含み、且つポリペプチド担体としてヒトＨＢＶのＨＢｃＡｇを用いることにより構築されたワクチン）の効力より有意に良い効力で、対象においてＨＢｓＡｇを排除するために、非常に強く、且つ特異的な免疫応答を誘導することができる。

本発明の実施形態は、以下の図面及び実施例を参照することにより詳細に例証されている。しかしながら、以下の図面及び実施例は、本発明の保護範囲を限定するためではなく、本発明を例証するためだけに用いられていることが当業者によって理解される。以下の図面及び好ましい実施形態の詳細な説明により、本発明の様々な目的及び有利な態様が当業者にとって明らかである。

組換えタンパク質が、標的ポリペプチド（標的抗原ペプチド断片）を本発明のＲＢＨＢｃＡｇ担体、ＴＢＨＢｃＡｇ担体、及びＨＢＨＢｃＡｇ担体へ挿入することにより構築される、クローニングソリューションの概要を示す図である。例２で構築された１８個の組換えタンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ結果、及びその組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子の透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）結果を示す図である。図３Ａは、例２で構築された６個の組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子でのＢＡＬＢ／Ｃマウスの免疫化後の時間経過に対する、マウス血清における、組換えタンパク質内の標的ポリペプチドに対する抗体の力価の変化を示す図である。縦軸：抗体価（ｌｏｇ１０）；横軸：時間（週）。：用いられた標的ポリペプチドは配列番号２０であり、抗ＧＰ１２０抗体の力価が決定された。図３Ｂは、例２で構築された６個の組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子でのＢＡＬＢ／Ｃマウスの免疫化後の時間経過に対する、マウス血清における、組換えタンパク質内の標的ポリペプチドに対する抗体の力価の変化を示す図である。縦軸：抗体価（ｌｏｇ１０）；横軸：時間（週）。：用いられた標的ポリペプチドは配列番号２１であり、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の力価が決定された。図３Ｃは、例２で構築された６個の組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子でのＢＡＬＢ／Ｃマウスの免疫化後の時間経過に対する、マウス血清における、組換えタンパク質内の標的ポリペプチドに対する抗体の力価の変化を示す図である。縦軸：抗体価（ｌｏｇ１０）；横軸：時間（週）。：用いられた標的ポリペプチドは配列番号２２であり、抗ＨＢｓＡｇ抗体の力価が決定された。図４Ａは、ＨＢＶトランスジェニック雄マウスの、同じエピトープペプチド（配列番号２２）を提示する異なるウイルス様粒子での処置後の、時間経過に対するマウス血清中のＨＢｓＡｇレベルの変化を示す図である。縦軸：ＨＢｓＡｇレベル（ＩＵ／ｍｌ）；横軸：時間（週）。矢印は、ウイルス様粒子をマウスへ投与した時点を示す。図４Ａは、ＨＢＶトランスジェニック雌マウスの、同じエピトープペプチド（配列番号２２）を提示する異なるウイルス様粒子での処置後の、時間経過に対するマウス血清中のＨＢｓＡｇレベルの変化を示す図である。縦軸：ＨＢｓＡｇレベル（ＩＵ／ｍｌ）；横軸：時間（週）。矢印は、ウイルス様粒子をマウスへ投与した時点を示す。ＨＢＶトランスジェニック雄マウスの、同じエピトープペプチド（配列番号２２）を提示する異なるウイルス様粒子での処置後の、時間経過に対するマウス血清中のＨＢＶＤＮＡレベルの変化を示す図である。縦軸：ＨＢＶＤＮＡレベル（Ｌｏｇ１０ＩＵ／ｍｌ）；横軸：時間（週）。矢印は、ウイルス様粒子をマウスへ投与した時点を示す。図６Ａは、ＨＢＶトランスジェニック雄マウスの、同じエピトープペプチド（配列番号２２）を提示する異なるウイルス様粒子での処置後の、時間経過に対するマウス血清中のＨＢｓＡｇ抗体の力価の変化を示す図である。縦軸：抗ＨＢｓＡｇ抗体の力価；横軸：時間（週）。図６Ｂは、ＨＢＶトランスジェニック雌マウスの、同じエピトープペプチド（配列番号２２）を提示する異なるウイルス様粒子での処置後の、時間経過に対するマウス血清中のＨＢｓＡｇ抗体の力価の変化を示す図である。縦軸：抗ＨＢｓＡｇ抗体の力価；横軸：時間（週）。例５で構築された６個の組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子のＴＥＭ結果を示す図である。図８Ａは、８個の組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子でのＢＡＬＢ／Ｃマウスの免疫化から３週間後の、マウス血清における、対応する標的ポリペプチド（配列番号６０、２２、６１、及び６２）に対する抗体の力価を示す図である；ここでは、ＨＢＶ遺伝子型Ａ由来のＨＢｓＡｇタンパク質のエピトープペプチド（配列番号６０）が、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ６０で免疫されたマウスの血清中の抗体価を決定するために用いられた；ＨＢＶ遺伝子型Ｂ由来のＨＢｓＡｇタンパク質のエピトープペプチド（配列番号２２）が、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ２２で免疫されたマウスの血清中の抗体価を決定するために用いられた；ＨＢＶ遺伝子型Ｃ由来のＨＢｓＡｇタンパク質のエピトープペプチド（配列番号６１）が、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ６１で免疫されたマウスの血清中の抗体価を決定するために用いられた；及び、ＨＢＶ遺伝子型Ｄ由来のＨＢｓＡｇタンパク質のエピトープペプチド（配列番号６２）が、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ６２で免疫されたマウスの血清中の抗体価を決定するために用いられた。結果は、８個の組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子全てが良い免疫原性を有し、マウスにおいて標的抗原に特異的に結合する高力価の抗体の発生を誘導し得ることを示している。図８Ｂは、８個の組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子でのＢＡＬＢ／Ｃマウスの免疫化から３週間後の、マウス血清における、対応する標的ポリペプチド（配列番号６０、２２、６１、及び６２）に対する抗体の力価を示す図である；ここでは、ＨＢＶ遺伝子型Ａ由来のＨＢｓＡｇタンパク質のエピトープペプチド（配列番号６０）が、ＴＢＨＢｃＡｇ１５３−ＳＥＱ６０で免疫されたマウスの血清中の抗体価を決定するために用いられた；ＨＢＶ遺伝子型Ｂ由来のＨＢｓＡｇタンパク質のエピトープペプチド（配列番号２２）が、ＴＢＨＢｃＡｇ１５３−ＳＥＱ２２で免疫されたマウスの血清中の抗体価を決定するために用いられた；ＨＢＶ遺伝子型Ｃ由来のＨＢｓＡｇタンパク質のエピトープペプチド（配列番号６１）が、ＴＢＨＢｃＡｇ１５３−ＳＥＱ６１で免疫されたマウスの血清中の抗体価を決定するために用いられた；及び、ＨＢＶ遺伝子型Ｄ由来のＨＢｓＡｇタンパク質のエピトープペプチド（配列番号６２）が、ＴＢＨＢｃＡｇ１５３−ＳＥＱ６２で免疫されたマウスの血清中の抗体価を決定するために用いられた。結果は、８個の組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子全てが良い免疫原性を有し、マウスにおいて標的抗原に特異的に結合する高力価の抗体の発生を誘導し得ることを示している。図９Ａは、４個の組換えタンパク質（配列番号３６、６９、７０、及び７１）により形成されたウイルス様粒子でのＨＢＶトランスジェニック雄マウスの処置後の、マウス血清中のＨＢｓＡｇレベルの変化を示す図である（縦軸：ＨＢｓＡｇレベル（ＩＵ／ｍｌ）；横軸：時間（週））。図９Ｂは、４個の組換えタンパク質（配列番号３６、６９、７０、及び７１）により形成されたウイルス様粒子でのＨＢＶトランスジェニック雌マウスの処置後の、マウス血清中のＨＢｓＡｇレベルの変化を示す図である（縦軸：ＨＢｓＡｇレベル（ＩＵ／ｍｌ）；横軸：時間（週））。

配列情報
本発明に関与する配列（配列番号１〜４４）の部分に関する情報は、以下の表１に提供されている。

本発明は、以下の実施例（それは、本発明の保護範囲を限定することではなく、本発明を説明することを意図される）を参照することにより例証される。

他に指示がない限り、本発明に用いられる分子生物学的実験方法及び免疫学的アッセイは、実質的には、ＳａｍｂｒｏｏｋＪら、分子クローニング：実験マニュアル（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ）（第２版）、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、１９８９、及びＦ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら、分子生物学における短いプロトコール（ＳｈｏｒｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ）、第３版、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、１９９５に記載されているような方法に従って実行される；制限酵素は、その製品の製造会社により推奨される条件下で用いられる。実施例は、本発明を例証するために用いられるが、本発明の保護範囲を限定することを意図されないことを当業者は理解している。

（例１）
ポリペプチド担体をコードするプラスミドの構築
本実施例において、ポリペプチド担体をコードするプラスミドを構築した。

１．１ポリペプチド担体をコードするヌクレオチド配列の調製
３つのコウモリ由来ＨＢＶコア抗原（すなわち、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質、及びＨＢＨＢｃＡｇタンパク質）に基づいて、以下のポリペプチド担体を設計した：
ＲＢＨＢｃＡｇ１８９担体：ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質の位置７８〜８１のアミノ酸残基が、配列番号４３に示されたリンカーと置換されている点でＲＢＨＢｃＡｇタンパク質（配列番号１）とは異なる；ＲＢＨＢｃＡｇ１８９担体のアミノ酸配列は配列番号４に示されており、ＲＢＨＢｃＡｇ１８９担体のヌクレオチド配列は配列番号１２に示されている；
ＴＢＨＢｃＡｇ１８８担体：ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質の位置８０〜８３のアミノ酸残基が、配列番号４３に示されたリンカーと置換されている点でＴＢＨＢｃＡｇタンパク質（配列番号２）とは異なる；ＴＢＨＢｃＡｇ１８８担体のアミノ酸配列は配列番号６に示されており、ＴＢＨＢｃＡｇ１８８担体のヌクレオチド配列は配列番号１４に示されている；
ＨＢＨＢｃＡｇ１８９担体：ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質の位置７８〜８１のアミノ酸残基が、配列番号４３に示されたリンカーと置換されている点でＨＢＨＢｃＡｇタンパク質（配列番号３）とは異なる；ＨＢＨＢｃＡｇ１８９担体のアミノ酸配列は配列番号８に示されており、ＨＢＨＢｃＡｇ１８９担体のヌクレオチド配列は配列番号１６に示されている。

加えて、ヒトＨＢＶのＨＢｃＡｇタンパク質に基づいて、ＨＢｃＡｇ１８３担体もまた、対照として設計した。ＨＢｃＡｇ１８３担体は、ヒトＨＢＶのＨＢｃＡｇタンパク質の位置７９〜８１のアミノ酸残基が、配列番号４３に示されたリンカーと置換されている点で、ヒトＨＢＶのＨＢｃＡｇタンパク質とは異なる；ＨＢｃＡｇ１８３担体のアミノ酸配列は配列番号１０に示されており、ＨＢｃＡｇ１８３担体のヌクレオチド配列は配列番号１８に示されている。

前記４つの担体のヌクレオチド配列に関して、それらの全遺伝子合成は、ＳａｎｇｏｎＢｉｏｔｅｃｈ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｃｏ．，Ｌｔｄにより実施された。

１．２ポリペプチド担体をコードするプラスミドの調製
合成されたヌクレオチド配列を鋳型として用い、且つ表２におけるプライマーを用いることにより、前記４つの担体の完全長遺伝子及び切り詰め型（すなわち、Ｃ末端で切り詰められた遺伝子断片）を、それぞれ、ＰＣＲにより増幅した。８個のＰＣＲ産物、すなわち、ＲＢＨＢｃＡｇ１８９担体をコードする遺伝子（配列番号１２；それによりコードされたアミノ酸配列は配列番号４である）、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９担体をコードする遺伝子（配列番号１３；それによりコードされたアミノ酸配列は配列番号５である）、ＴＢＨＢｃＡｇ１８８担体をコードする遺伝子（配列番号１４；それによりコードされたアミノ酸配列は配列番号６である）、ＴＢＨＢｃＡｇ１５３をコードする遺伝子（配列番号１５；それによりコードされたアミノ酸配列は配列番号７である）、ＨＢＨＢｃＡｇ１８９担体をコードする遺伝子（配列番号１６；それによりコードされたアミノ酸配列は配列番号８である）、ＨＢＨＢｃＡｇ１４９担体をコードする遺伝子（配列番号１７；それによりコードされたアミノ酸配列は配列番号９である）、ＨＢｃＡｇ１８３担体をコードする遺伝子（配列番号１８；それによりコードされたアミノ酸配列は配列番号１０である）、及びＨＢｃＡｇ１４９担体をコードする遺伝子（配列番号１９；それによりコードされたアミノ酸配列は配列番号１１である）が得られた。

ｐＴＯ−Ｔ７ベクター（ＬｕｏＷｅｎｘｉｎ、ＺｈａｎｇＪｕｎ、ＹａｎｇＨａｉｊｉｅら、エンハンサーを有する大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）高効率発現ベクターの構築及び適用（ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＨｉｇｈＥｆｆｅｃｔｉｖｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＶｅｃｔｏｒｗｉｔｈａｎＥｎｈａｎｃｅｒ）［Ｊ］、ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２０００、１６（５）：５７８〜５８１）をＮｄｅＩ及びＨｉｎｄＩＩＩによる二重酵素消化に供して、直線状ベクターを得た。Ｇｉｂｓｏｎアセンブリークローニング方法（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ（ＵＫ）Ｌｔｄ）により、得られた８個のＰＣＲ産物を、直線状ベクターにライゲーションし、ＤＨ５ａコンピテント細菌へ形質転換した。形質転換された細菌をプレート上に広げて培養し、その後、モノクローナルコロニーを選択し、プラスミドを抽出し、シーケンシングした。ポリペプチド担体をコードするヌクレオチド配列を含む８個のプラスミドが得られたことは、シーケンシングによって確認された。

ＰＣＲに関与したプライマーは表２に示されている。

（例２）
組換えタンパク質の調製
本例において、標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を、例１で構築されたプラスミドへ挿入し、標的ポリペプチド及びポリペプチド担体を含む組換えタンパク質が得られた。組換えタンパク質が、標的ポリペプチド（標的抗原ペプチド断片）を本発明のＲＢＨＢｃＡｇ担体、ＴＢＨＢｃＡｇ担体、及びＨＢＨＢｃＡｇ担体へ挿入することにより構築される、クローニングソリューションの概要は図１に示されている。

２．１標的ポリペプチド及びポリペプチド担体を含む組換えタンパク質の発現プラスミドの構築
本例において、３個の標的ポリペプチドを用いて、ペプチド断片を提示することについての本発明のポリペプチド担体の多用途性を検証した。前記３個の標的ポリペプチドは以下であった：ポリペプチドＨＩＶ−ＧＰ１２０−ａａ３６１−３７５（すなわち、ＨＩＶＧＰ１２０タンパク質の位置３６１〜３７５のアミノ酸、それのアミノ酸配列は配列番号２０に示されている）；ポリペプチドｈＰＤＬ１−ａａ１４７−１６０（すなわち、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質の位置１４７〜１６０のアミノ酸、それのアミノ酸配列は配列番号２１に示されている）；及びポリペプチドＨＢｓＡｇ−ａａ１１３−１３５（すなわち、ヒトＨＢＶ由来のＢ型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）の位置１１３〜１３５のアミノ酸、それのアミノ酸配列は配列番号２２に示されている）。

（表３に示されているような）前記３個の標的ポリペプチドをコードするセンス配列及びアンチセンス配列を、直接、合成して、付着末端を有し且つ標的ポリペプチドをコードする遺伝子断片を得るようにアニールした。

例１で得られた６個のプラスミド（ＲＢＨＢｃＡｇ１８９、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９、ＴＢＨＢｃＡｇ１８８、ＴＢＨＢｃＡｇ１５３、ＨＢＨＢｃＡｇ１８９、及びＨＢＨＢｃＡｇ１４９）を、ＢａｍＨＩ及びＥｃｏＲＩによる二重酵素消化に供し、６個の直線状ベクターを得た。その後、上記で調製されているような、付着末端を有し且つ標的ポリペプチドをコードする３個の遺伝子断片を、直線状ベクターへライゲーションして、組換えタンパク質をコードする発現プラスミド（合計１８個：ＲＢＨＢｃＡｇ１８９−ＳＥＱ２０、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ２０、ＴＢＨＢｃＡｇ１８８−ＳＥＱ２０、ＴＢＨＢｃＡｇ１５３−ＳＥＱ２０、ＨＢＨＢｃＡｇ１８９−ＳＥＱ２０、ＨＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ２０、ＲＢＨＢｃＡｇ１８９−ＳＥＱ２１、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ２１、ＴＢＨＢｃＡｇ１８８−ＳＥＱ２１、ＴＢＨＢｃＡｇ１５３−ＳＥＱ２１、ＨＢＨＢｃＡｇ１８９−ＳＥＱ２１、ＨＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ２１、ＲＢＨＢｃＡｇ１８９−ＳＥＱ２２、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ２２、ＴＢＨＢｃＡｇ１８８−ＳＥＱ２２、ＴＢＨＢｃＡｇ１５３−ＳＥＱ２２、ＨＢＨＢｃＡｇ１８９−ＳＥＱ２２、及びＨＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ２２）を得た。

２．２組換えタンパク質の発現、精製、及びアセンブリー
前のステップで構築された１８個の発現プラスミドを用いて、同じ方法により、発現プラスミドによりコードされる組換えタンパク質を発現し、精製した。組換えタンパク質の発現及び精製を記載するための例として、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱＸ（ＳＥＱＸはＳＥＱ２０、ＳＥＱ２１、又はＳＥＱ２２を表す）を用いた。

（２．２．１）組換えタンパク質を発現するための細菌株の調製：２．１において得られた発現プラスミドＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱＸを、発現細菌株を得るために、大腸菌株ＥＲ２５６６へ形質転換した。

（２．２．２）組換えタンパク質：ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱＸの発現：発現細菌株を５００ｍＬ三角フラスコに播種し、ＯＤが約１．０になるまで振盪台上、３７℃で培養し、後で、イソプロピル−ベータ−Ｄ−チオガラクトシド（ＩＰＴＧ）を、０．５ｍＭの最終濃度で加え、発現を、２５℃で６時間、さらに実施した。

（２．２．３）組換えタンパク質ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱＸの精製：
（２．２．３．１）細菌の超音波破壊：２．２．２における細菌を、遠心分離により採取し、超音波破壊に供した。超音波処理バッファー：２０ｍＭリン酸バッファー（ＰＨ６．０）＋３００ｍＭＮａＣｌ。
（２．２．３．２）組換えタンパク質の一次精製：超音波破壊後に得られた混合物を、６５℃の水浴中、３０分間、インキュベートし、その後、上清を遠心分離により収集した；飽和硫酸アンモニウムを上清に１：１の体積比で加え、沈殿物を遠心分離により収集した；一次精製された組換えタンパク質ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱＸを得るために、適切な体積のバッファー（２０ｍＭリン酸バッファー（ｐＨ＝７．４）＋１５０ｍＭＮａＣｌ）を加えて、沈殿物を再懸濁した。
（２．２．３．３）クロマトグラフィによる組換えタンパク質の精製：製造会社の使用説明書に従って、２．２．３．２で得られたタンパク質を、精製組換えタンパク質を得るために、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４ＦＦ（ＧＥ）モレキュラーシーブカラムクロマトグラフィによりさらに精製した。精製された標的タンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより検出し、組換えタンパク質により形成されたＶＬＰが、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）により観察された。

図２は、構築された１８個の組換えタンパク質のＳＤＳ−ＰＡＧＥ結果、及びその組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子のＴＥＭ結果を示す。結果は、得られた１８個の組換えタンパク質の全てが、８５％より上の純度を有し、約３０ｎｍの直径を有するウイルス様粒子へアセンブリーされ得ることを示している。これらの結果は、本発明において構築されたポリペプチド担体が幅広い多用途性を有し、様々な標的ポリペプチドを提示するために用いることができ、ＶＬＰを形成し得ることを示している。

（例３）
ウイルス様粒子の免疫原性に関する評価
本例において、本発明者らは、本発明の組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子の免疫原性を検証した。全てのそのようなウイルス様粒子は、生物体において標的抗原に特異的に結合する抗体の発生を誘導することができる。

３．１マウスの免疫化
ＢＡＬＢ／Ｃマウスを、例２で調製された１８個のウイルス様粒子、それぞれで免疫した。免疫化過程は以下の通りであった：用いられる免疫アジュバントは水酸化アルミニウムアジュバントであった；免疫用量は３ｕｇ／用量であった；免疫化を、後肢の外側大腿での筋肉内注射により実施した；免疫手順は、一次免疫＋２週間後の追加免疫であった（すなわち、合計２回）。

３．２血清中の標的抗原に特異的に結合する抗体の力価の検出
３．２．１反応プレートの調製
反応プレートをコーティングするための抗原は、前記３個の標的ポリペプチドに対応する標的抗原、すなわち、ＨＩＶ−１ｇｐ１２０タンパク質（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｃ．から購入、カタログＮｏ．１１２３３−Ｖ０８Ｈ）、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＩｎｃ．から購入）、及びＣＨＯ細胞において組換え発現したヒトＢ型肝炎ウイルス表面抗原（ＨＢｓＡｇ、ＢｅｉｊｉｎｇＷａｎｔａｉＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｙから購入）であった。

３個の組換えタンパク質を、それぞれ、ｐＨ９．６５０ｍＭＣＢバッファー（５０ｍＭの最終濃度、ｐＨ＝９．６でのＮａＨＣＯ_３／Ｎａ_２ＣＯ_３バッファー）で、２μｇ／ｍＬの最終濃度で、希釈し、コーティング溶液を得た。９６ウェルＥＬＩＳＡプレートの各ウェルへ、１００μＬコーティング溶液を加え、ウェルを２〜８℃で１６〜２４時間、コーティングし、その後、３７℃で２時間、さらにコーティングした。その後、ＰＢＳＴ洗浄溶液（２０ｍＭＰＢ７．４、１５０ｍＭＮａＣｌ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）を用いて、ウェルを１回、洗浄した；その後、２００μＬブロッキング溶液（２０％仔ウシ血清及び１％カゼインを含有する、２０ｍＭＮａ_２ＨＰＯ_４／ＮａＨ_２ＰＯ_４バッファー溶液、ｐＨ＝７．４）を各ウェルに加え、ウェルを３７℃で２時間、ブロッキングした。ブロッキング溶液を捨てた。その後、ＥＬＩＳＡプレートを乾燥させ、アルミホイルバッグへパッケージングし、それをさらなる使用のために２〜８℃で保存した。

３．２．２血清における抗ＨＢｓＡｇ抗体価のＥＬＩＳＡ検出
血清試料の収集：０週間目、２週間目、及び４週間目、マウスの眼窩から血液を収集し、血清を分離して、検出まで−２０℃で凍結保存した。
試料希釈：マウス血清を、２０％新生仔ウシ血清を含有するＰＢＳ溶液で、７つの希釈勾配、すなわち、１：１００、１：５００、１：２５００、１：１２５００、１：６２５００、１：３１２５００、及び１：１５６２５００において希釈した。
ＥＬＩＳＡ検出：コーティング化ＥＬＩＳＡプレートの各ウェルへ、１００μＬ希釈血清試料を加え、３７℃で３０分間、インキュベートした。その後、ＥＬＩＳＡプレートを、ＰＢＳＴ洗浄溶液（２０ｍＭＰＢ７．４、１５０ｍＭＮａＣｌ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）で５回、洗浄した。洗浄後、ＥＬＩＳＡプレートの各ウェルへ、１００μＬＧＡＭ−ＨＲＰ反応溶液を加え、３７℃で３０分間、インキュベートした。その後、ＥＬＩＳＡプレートを、ＰＢＳＴ洗浄溶液（２０ｍＭＰＢ７．４、１５０ｍＭＮａＣｌ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）で５回、洗浄した。洗浄後、ＥＬＩＳＡプレートの各ウェルへ、５０μＬＴＭＢ発色剤（ＢｅｉｊｉｎｇＷａｎｔａｉＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｙによる提供）を加え、３７℃で１５分間、インキュベートした。インキュベーション後、ＥＬＩＳＡプレートの各ウェルへ、５０μＬ停止溶液（ＢｅｉｊｉｎｇＷａｎｔａｉＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｙによる提供）を加え、各ウェルについてのＯＤ４５０／６３０値をＥＬＩＳＡ計器により読み取った。
抗体価の計算：読み取り値が０．２〜２．０内にある試料を分析した；希釈倍率と読み取り値で回帰曲線をプロットし、読み取り値がバックグラウンド値の２倍である試料の希釈倍率を計算した；そして、試料の希釈倍率を、血清中の特異的抗体の力価として用いた。

図３は、１８個の組換えタンパク質、それぞれにより形成されたウイルス様粒子でのＢＡＬＢ／Ｃマウスの免疫化後の時間経過に対する、マウス血清中の標的抗原に対する抗体の力価の変化を示している。図３Ａ：用いられた標的ポリペプチドは配列番号２０であり、抗ＧＰ１２０抗体の力価が決定された；図３Ｂ：用いられた標的ポリペプチドは配列番号２１であり、抗ＰＤ−Ｌ１抗体の力価が決定された；図３Ｃ：用いられた標的ポリペプチドは配列番号２２であり、抗ＨＢｓＡｇ抗体の力価が決定された。結果は、１８個の組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子の全てが、良い免疫原性を有し、マウスにおいて標的抗原に特異的に結合する高力価の抗体の発生を誘導し得ることを示している。

（例４）
ＨＢｓＡｇエピトープ（配列番号２２）を提示するウイルス様粒子の抗ＨＢＶ治療効果に関する評価
本例において、本発明者らは、異なるポリペプチド担体に基づいて構築された場合の、同じエピトープペプチド（配列番号２２）を提示するウイルス様粒子の抗ＨＢＶ治療効果を評価した。

４．１マウスの免疫化
例１〜２に記載された方法に従って、ＨＢｓＡｇエピトープ（配列番号２２）を提示し、且つヒトＨＢＶのＨＢｃＡｇに基づいて構築された２個の組換えタンパク質（すなわち、ＨＢｃＡｇ１８３−ＳＥＱ２２（それのアミノ酸配列は配列番号４１に示されている）；及びＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ２２（それのアミノ酸配列は配列番号４２に示されている））を調製し、その２個の組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子を調製した。

後で、例２で調製されたＨＢｓＡｇエピトープ（配列番号２２）を提示する５個のウイルス様粒子、及び本例で調製された２個のウイルス様粒子を、ＨＢＶトランスジェニックマウスモデルにおいて抗ＨＢＶ治療効果について評価した。

免疫化方法は、以下の通りであった：用いられる免疫アジュバントは水酸化アルミニウムアジュバントであった；免疫用量は１２μｇ／用量であった；免疫化を、後肢の外側大腿での筋肉内注射により実施した；免疫手順は、０週間目、２週間目、３週間目、４週間目、５週間目、及び６週間目での免疫化であった（すなわち、合計６回）。

４．２血清中の抗体価及びウイルス学的指標の検出
例３．２に記載されているような方法に従って、血清中の抗ＨＢｓＡｇ抗体価を決定し、マウス血清中のウイルス学的指標（すなわち、ＨＢＶＤＮＡ及びＨＢｓＡｇのレベル）を決定した。

４．３組換えタンパク質の治療効果の分析
検出結果は、図４〜６に示されている。図４は、ＨＢＶトランスジェニック雄（図４Ａ）及び雌（図４Ｂ）マウスの、同じエピトープペプチド（配列番号２２）を提示する異なるウイルス様粒子での処置後の、時間経過に対するマウス血清中のＨＢｓＡｇレベルの変化を示す。図５は、ＨＢＶトランスジェニック雄マウスの、同じエピトープペプチド（配列番号２２）を提示する異なるウイルス様粒子での処置後の、時間経過に対するマウス血清中のＨＢＶＤＮＡレベルの変化を示す。図６は、ＨＢＶトランスジェニック雄（図６Ａ）及び雌（図６Ｂ）マウスの、同じエピトープペプチド（配列番号２２）を提示する異なるウイルス様粒子での処置後の、時間経過に対するマウス血清中のＨＢｓＡｇ抗体の力価の変化を示す。

結果は、ＶＬＰでの免疫療法を受ける群において、抗ＨＢｓＡｇ抗体が、免疫化後、マウス血清において検出され、ＨＢＶＤＮＡ及びＨＢｓＡｇのレベルが、マウス血清において異なる程度まで減少したことを示している。比較すると、（ＶＬＰで免疫されなかった）対照マウスの血清において抗ＨＢｓＡｇ抗体は発生せず、血清中のＨＢＶＤＮＡ及びＨＢｓＡｇのレベルの減少は観察されなかった。

これらの結果は、コウモリＢ型肝炎ウイルスコアタンパク質に基づいて構築された６個のポリペプチド担体全てが、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープペプチド（例えば、ＨＢｓＡｇ−ａａ１１３−１３５）を効果的に提示するために用いることができ、ＶＬＰを形成することができ、生物体において高力価の抗ＨＢｓＡｇ抗体の発生を誘導し、それにより、マウスにおいてＨＢＶＤＮＡ及びＨＢｓＡｇのレベルを抑制する（すなわち、ＨＢＶＤＮＡ及びＨＢｓＡｇは有意に減少した）ことを示している。加えて、図４〜６における実験データはまた、本発明のポリペプチド担体（例えば、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９及びＴＢＨＢｃＡｇ１５３）に基づいたウイルス様粒子が、ヒトＨＢＶのＨＢｃＡｇに基づいて構築されたウイルス様粒子より優れた、特に有意な抗ＨＢＶ治療効果を生じることを示している。

したがって、本例における実験結果は以下を示している：（１）本発明のポリペプチド担体は、ＶＬＰを形成することができ、様々な標的ポリペプチドを提示するのに適しており、生物体において標的ポリペプチドに対する高力価の抗体の発生を誘導することができる；（２）本発明のポリペプチド担体は、ヒトＨＢＶのエピトープ（例えば、ヒトＨＢＶのＨＢｓＡｇのエピトープ）を提示するのに特に適しており、生物体においてＨＢｓＡｇに対する高力価の抗体の発生を誘導することができ、インビボで、ＨＢＶＤＮＡ及びＨＢｓＡｇのレベルを、ヒトＨＢＶのＨＢｃＡｇに基づいて構築されたポリペプチド担体の効力より優れた効力で、排除又は抑制することができる。このように、本発明によるヒトＨＢＶエピトープを提示する組換えタンパク質は、ＨＢＶ感染を処置することにおいて可能性があり、効果的で、特異的で、且つ治療的な抗ＨＢＶ免疫化を誘導するのに特に適している。

（例５）
異なるＨＢＶ遺伝子型由来のＨＢｓＡｇのエピトープを提示するウイルス様粒子の調製及び評価
例２〜４に用いられたＨＢｓＡｇエピトープ（配列番号２２）は、ＨＢＶ遺伝子型Ｂ由来であった。様々なＨＢＶ遺伝子型について本発明のポリペプチド担体の幅広い多用途性を確認するために、本発明者らはまた、例示的なポリペプチド担体としてＲＢＨＢｃＡｇ１４９及びＴＢＨＢｃＡｇ１５３を用いて、異なるＨＢＶ遺伝子型（遺伝子型Ａ、Ｃ、及びＤ）由来のＨＢｓＡｇのエピトープを提示する組換えタンパク質を構築し、その構築された組換えタンパク質の、ウイルス様粒子へアセンブリーする能力、産生されたウイルス様粒子の免疫原性、及びＨＢＶ感染に対するそれらの治療効果を評価した。

５．１標的ポリペプチド及びポリペプチド担体を含む組換えタンパク質をコードする発現プラスミドの構築
本例において、例２〜４に用いられたＨＢｓＡｇエピトープ（ＨＢＶ遺伝子型Ｂ由来、配列番号２２）に加えて、標的ポリペプチドはさらに、ＨＢｓＡｇ−ａａ１１３−１３５−Ａ、ＨＢｓＡｇ−ａａ１１３−１３５−Ｃ、及びＨＢｓＡｇ−ａａ１１３−１３５−Ｄと名付けられた、ＨＢＶ遺伝子型Ａ、Ｃ、及びＤ由来のＨＢｓＡｇエピトープ（位置１１３〜１３５のアミノ酸）を含み、それらの配列（配列番号６０〜６２）は表４に示されている。

前記３個の標的ポリペプチドをコードする（表５に示されているような）センス配列及びアンチセンス配列を直接、合成し、アニールして、付着末端を有し且つ標的ポリペプチドをコードする遺伝子断片を得た。

例２で記載されているように、上記で調製されたような、付着末端を有し且つ標的ポリペプチドをコードする３個の遺伝子断片を、組換えタンパク質をコードする発現プラスミド（合計６個：ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ６０、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ６１、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ６２、ＴＢＨＢｃＡｇ１５３−ＳＥＱ６０、ＴＢＨＢｃＡｇ１５３−ＳＥＱ６１、及びＴＢＨＢｃＡｇ１５３−ＳＥＱ６２）を得るために、直線状ベクターＲＢＨＢｃＡｇ１４９及びＴＢＨＢｃＡｇ１５３、それぞれにライゲーションした。その発現プラスミドによりコードされる組換えタンパク質のアミノ酸配列は表６に示されている。

５．２組換えタンパク質の発現、精製、及びアセンブリー
例２に記載されているように、前のステップで構築された６個の発現プラスミドを用いることにより、その発現プラスミドによりコードされる組換えタンパク質を発現させ、精製した。後で、その組換えタンパク質により形成されたＶＬＰが、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）により観察された。

図７は、構築された６個の組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子のＴＥＭ結果を示す。結果は、得られた６個の組換えタンパク質の全てが、約３０ｎｍの直径を有するウイルス様粒子へアセンブリーされ得ることを示している。これらの結果は、本発明において構築されたポリペプチド担体が幅広い多用途性を有し、様々なＨＢＶ遺伝子型由来のエピトープペプチド（例えば、ＨＢｓＡｇタンパク質のａａ１１３〜１３５）を提示するために用いることができ、ＶＬＰをうまく形成し得ることを示している。

５．３ウイルス様粒子の免疫原性の評価
例３に記載された方法を用いることにより、上記で構築された６個の組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子、及び例２における組換えタンパク質ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ２２及びＴＢＨＢｃＡｇ１５３−ＳＥＱ２２を、それらの免疫原性について評価した。実験結果は図８に示されている。

図８は、８個の組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子でのＢＡＬＢ／Ｃマウスの免疫化から３週間後の、マウス血清における、対応する標的ポリペプチド（配列番号６０、２２、６１、及び６２）に対する抗体の力価を示す；その場合、ＨＢＶ遺伝子型Ａ由来のＨＢｓＡｇタンパク質のエピトープペプチド（配列番号６０）が、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ６０及びＴＢＨＢｃＡｇ１５３−ＳＥＱ６０で免疫されたマウスの血清中の抗体価を決定するために用いられた；ＨＢＶ遺伝子型Ｂ由来のＨＢｓＡｇタンパク質のエピトープペプチド（配列番号２２）が、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ２２及びＴＢＨＢｃＡｇ１５３−ＳＥＱ２２で免疫されたマウスの血清中の抗体価を決定するために用いられた；ＨＢＶ遺伝子型Ｃ由来のＨＢｓＡｇタンパク質のエピトープペプチド（配列番号６１）が、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ６１及びＴＢＨＢｃＡｇ１５３−ＳＥＱ６１で免疫されたマウスの血清中の抗体価を決定するために用いられた；及び、ＨＢＶ遺伝子型Ｄ由来のＨＢｓＡｇタンパク質のエピトープペプチド（配列番号６２）が、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ６２及びＴＢＨＢｃＡｇ１５３−ＳＥＱ６２で免疫されたマウスの血清中の抗体価を決定するために用いられた。結果は、８個の組換えタンパク質により形成されたウイルス様粒子が良い免疫原性を有し、マウスにおいて標的エピトープと特異的に結合する高力価の抗体の発生を誘導し得ることを示している。

５．４ウイルス様粒子の抗ＨＢＶ治療効果に関する評価
例４に記載されているような方法を用いることにより、４個の組換えタンパク質（配列番号３６、６９、７０、及び７１）により形成されたウイルス様粒子を、抗ＨＢＶ治療効果について評価した。実験結果は図９に示されている。

図９は、上記の構築された４個の組換えタンパク質（ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ２２、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ６０、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ６１、及びＲＢＨＢｃＡｇ１４９−ＳＥＱ６２；それらの配列は、それぞれ、配列番号３６、６９、７０、及び７１である）により形成されたウイルス様粒子でのＨＢＶトランスジェニック雄（図９Ａ）及び雌（図９Ｂ）マウスの処置後の、時間経過に対するマウス血清中のＨＢｓＡｇレベルの変化を示す（縦軸：ＨＢｓＡｇレベル（ＩＵ／ｍｌ）；横軸：時間（週））。結果は、ＶＬＰでの免疫療法を受けたマウスにおいて、マウス血清中のＨＢｓＡｇレベルが、免疫化後、有意に減少したことを示す。

これらの実験結果は、本発明のポリペプチド担体（例えば、ＲＢＨＢｃＡｇ１４９及びＴＢＨＢｃＡｇ１５３）が、異なる遺伝子型（例えば、遺伝子型Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤ）のヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープペプチド（例えば、ＨＢｓＡｇ−ａａ１１３−１３５）を効果的に提示するために用いられ得ることを示している。本発明のポリペプチド担体及びＨＢｓＡｇのエピトープペプチドに基づいて構築された組換えタンパク質は、ＶＬＰを形成することができ、生物体において高力価の抗ＨＢｓＡｇ抗体の発生を誘導して、それにより、マウスにおいてＨＢｓＡｇレベルを抑制することができる（すなわち、ＨＢｓＡｇレベルは有意に減少した）。これは、本発明のポリペプチド担体及びＨＢｓＡｇのエピトープペプチドを含む組換えタンパク質が、様々なＨＢＶ遺伝子型による感染を予防及び処置するために用いることができ、したがって、新しい抗ＨＢＶワクチン及び薬物の開発に用いられ得ることを示している。

本発明の実施形態は詳細に記載されているが、当業者は、全ての開示された教示に従って、細部が修正及び改変され得、これらの変化の全てが、本発明の保護範囲内に入ることを理解しているであろう。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲、及びそれらの任意の均等物により定義される。

配列番号４：＜２２３＞RBHBcAg189担体
配列番号５：＜２２３＞RBHBcAg149担体
配列番号６：＜２２３＞TBHBcAg188担体
配列番号７：＜２２３＞TBHBcAg153担体
配列番号８：＜２２３＞HBHBcAg189担体
配列番号９：＜２２３＞HBHBcAg149担体
配列番号１０：＜２２３＞HBcAg183担体
配列番号１１：＜２２３＞HBcAg149担体
配列番号１２：＜２２３＞RBHBcAg189担体をコードするヌクレオチド配列
配列番号１３：＜２２３＞RBHBcAg149担体をコードするヌクレオチド配列
配列番号１４：＜２２３＞TBHBcAg188担体をコードするヌクレオチド配列
配列番号１５：＜２２３＞TBHBcAg153担体をコードするヌクレオチド配列
配列番号１６：＜２２３＞HBHBcAg189担体をコードするヌクレオチド配列
配列番号１７：＜２２３＞HBHBcAg149担体をコードするヌクレオチド配列
配列番号１８：＜２２３＞HBcAg183担体をコードするヌクレオチド配列
配列番号１９：＜２２３＞HBcAg149担体をコードするヌクレオチド配列
配列番号２３：＜２２３＞組換タンパク質RBHBcAg189-SEQ20
配列番号２４：＜２２３＞組換タンパク質RBHBcAg149-SEQ20
配列番号２５：＜２２３＞組換タンパク質TBHBcAg188-SEQ20
配列番号２６：＜２２３＞組換タンパク質TBHBcAg153-SEQ20
配列番号２７：＜２２３＞組換タンパク質HBHBcAg189-SEQ20
配列番号２８：＜２２３＞組換タンパク質HBHBcAg149-SEQ20
配列番号２９：＜２２３＞組換タンパク質RBHBcAg189-SEQ21
配列番号３０：＜２２３＞組換タンパク質RBHBcAg149-SEQ21
配列番号３１：＜２２３＞組換タンパク質TBHBcAg188-SEQ21
配列番号３２：＜２２３＞組換タンパク質TBHBcAg153-SEQ21
配列番号３３：＜２２３＞組換タンパク質HBHBcAg189-SEQ21
配列番号３４：＜２２３＞組換タンパク質HBHBcAg149-SEQ21
配列番号３５：＜２２３＞組換タンパク質RBHBcAg189-SEQ22
配列番号３６：＜２２３＞組換タンパク質RBHBcAg149-SEQ22
配列番号３７：＜２２３＞組換タンパク質TBHBcAg188-SEQ22
配列番号３８：＜２２３＞組換タンパク質TBHBcAg153-SEQ22
配列番号３９：＜２２３＞組換タンパク質HBHBcAg189-SEQ22
配列番号４０：＜２２３＞組換タンパク質HBHBcAg149-SEQ22
配列番号４１：＜２２３＞組換タンパク質HBcAg183-SEQ22
配列番号４２：＜２２３＞組換タンパク質HBcAg149-SEQ22
配列番号４３：＜２２３＞リンカー
配列番号４５〜５９、６３〜６８：＜２２３＞プライマー
配列番号６９：＜２２３＞組換タンパク質RBHBcAg149-SEQ60
配列番号７０：＜２２３＞組換タンパク質RBHBcAg149-SEQ61
配列番号７１：＜２２３＞組換タンパク質RBHBcAg149-SEQ62
配列番号７２：＜２２３＞組換タンパク質TBHBcAg153-SEQ60
配列番号７３：＜２２３＞組換タンパク質TBHBcAg153-SEQ61
配列番号７４：＜２２３＞組換タンパク質TBHBcAg153-SEQ62

Claims

ポリペプチド担体をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子であって、前記ポリペプチド担体が、
（１）カグラコウモリＨＢＶ由来コア抗原タンパク質（ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質）とは、（ａ）ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における配列番号１の位置７８〜８３に対応する位置のアミノ酸残基の１個若しくは複数のアミノ酸残基、すなわち１個、２個、３個、４個、５個、又は６個のアミノ酸残基が除去され、若しくはリンカーで置換されている点、及び（ｂ）ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端における４０個のアミノ酸残基が除去されている点で異なるＲＢＨＢｃＡｇ担体；並びに
（２）テントコウモリＨＢＶ由来コア抗原タンパク質（ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質）とは、（ａ）ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における配列番号２の位置８０〜８４に対応する位置のアミノ酸残基の１個若しくは複数のアミノ酸残基、すなわち１個、２個、３個、４個、又は５個のアミノ酸残基が除去され、若しくはリンカーで置換されている点、及び（ｂ）ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端における３５個のアミノ酸残基が除去されている点で異なるＴＢＨＢｃＡｇ担体
から選択される、上記核酸分子。
以下の（ｉ）〜（ｉｘ）の１つ又は複数を特徴とする請求項１に記載の核酸分子：
（ｉ）前記ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質は配列番号１に示されるアミノ酸配列を有し、
（ｉｉ）前記ＲＢＨＢｃＡｇ担体が、（ａ）ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における配列番号１の位置７８〜８３に対応する位置のアミノ酸残基、位置７８〜８２に対応する位置のアミノ酸残基、位置７８〜８１に対応する位置のアミノ酸残基、又は位置７８〜８０に対応する位置のアミノ酸残基が除去され、若しくはリンカーで置換されている点、及び（ｂ）ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端における４０個のアミノ酸残基が除去されている点で、ＲＢＨＢｃＡｇタンパク質と異なり、
（ｉｉｉ）前記ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質は配列番号２に示されるアミノ酸配列を有し、
（ｉｖ）前記ＴＢＨＢｃＡｇ担体が、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のＮ末端における配列番号２の位置８０〜８４に対応する位置のアミノ酸残基、位置８０〜８３に対応する位置のアミノ酸残基、又は位置８０〜８２に対応する位置のアミノ酸残基が除去され、若しくはリンカーで置換されている点、及び（ｂ）ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質のＣ末端における３５個のアミノ酸残基が除去されている点で、ＴＢＨＢｃＡｇタンパク質と異なり、
（ｖ）前記リンカーは可動性リンカーであり、
（ｖｉ）制限酵素切断部位が、請求項１の（１）（ａ）又は（２）（ａ）に定義されるように、前記除去される１個又は複数のアミノ酸残基をコードするヌクレオチドの位置に導入され、
（ｖｉｉ）制限酵素切断部位が、前記リンカーをコードするヌクレオチド配列内に、及び／又はその末端の一方若しくは両方に導入され、
（ｖｉｉｉ）前記核酸分子が、標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を挿入するために用いられ；並びに
（ｉｘ）前記核酸分子が、標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列をさらに含み、前記標的ポリペプチドが、前記ポリペプチド担体に対して異種性であり、且つ前記標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、前記除去される１個若しくは複数のアミノ酸残基をコードするヌクレオチドの位置に挿入され、或いは前記リンカーをコードするヌクレオチド配列内に、又はその末端の一方若しくは両方に挿入される。
前記ポリペプチド担体が、配列番号５及び配列番号７から選択されるアミノ酸配列を有し、前記核酸分子が、配列番号１３及び配列番号１５から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の核酸分子。
（１）組換えタンパク質をコードする核酸分子を得るように、標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を、請求項１〜３のいずれか一項に記載の核酸分子へ挿入するステップであって、前記標的ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が、前記除去される１個若しくは複数のアミノ酸残基をコードするヌクレオチドの位置に挿入され、或いは前記リンカーをコードするヌクレオチド配列内に、又はその末端の一方若しくは両方に挿入される、ステップ；及び
（２）ステップ（１）における前記組換えタンパク質をコードする核酸分子を発現させて、前記組換えタンパク質を産生するステップ
を含む、標的ポリペプチドを提示するための方法。
前記標的ポリペプチドが、エピトープペプチドであり、前記エピトープペプチドが、以下の（ｉ）〜（ｉｉｉ）の１つを特徴とする、請求項４に記載の方法：
（ｉ）前記エピトープペプチドはヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープ、ＨＩＶＧＰ１２０タンパク質のエピトープ、又はヒトＰＤ−Ｌ１のエピトープを含み；
（ｉｉ）前記エピトープペプチドはＨＢｓＡｇタンパク質の位置１１３〜１３５のアミノ酸、ＨＩＶＧＰ１２０タンパク質の位置３６１〜３７５のアミノ酸、又はヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質の位置１４７〜１６０のアミノ酸を含み；並びに
（ｉｉｉ）前記エピトープペプチドが、配列番号２０〜２２及び６０〜６２から選択されるアミノ酸配列を有する。
ポリペプチド担体及び標的ポリペプチドを含む組換えタンパク質であって、前記ポリペプチド担体が、請求項１〜３のいずれか一項に定義されている通りであり、前記標的ポリペプチドが、前記除去される１個若しくは複数のアミノ酸残基の位置に挿入され、或いは前記リンカー内に、又はその末端の一方若しくは両方に挿入される、上記組換えタンパク質。
以下の（ｉ）〜（ｉｉｉ）の１つ又は複数を特徴とする、請求項６に記載の組換えタンパク質：
（ｉ）前記ポリペプチド担体が、配列番号５及び配列番号７から選択されるアミノ酸配列を有し、
（ｉｉ）前記標的ポリペプチドが、エピトープペプチドであり、任意に前記エピトープペプチドが、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープ、ＨＩＶＧＰ１２０タンパク質のエピトープ若しくはヒトＰＤ−Ｌ１のエピトープを含み、又はＨＢｓＡｇタンパク質の位置１１３〜１３５のアミノ酸、ＨＩＶＧＰ１２０タンパク質の位置３６１〜３７５のアミノ酸、又はヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質の位置１４７〜１６０のアミノ酸を含み、或いは配列番号２０〜２２及び６０〜６２から選択されるアミノ酸配列を含み、；並びに
（ｉｉｉ）前記組換えタンパク質が、配列番号２４、２６、３０、３２、３６、３８及び６９〜７４から選択されるアミノ酸配列を含み、又はそれからなる、請求項６に記載の組換えタンパク質。
請求項６又７に記載の組換えタンパク質を含む、ウイルス様粒子。
請求項６又７に記載の組換えタンパク質、又は請求項８に記載のウイルス様粒子、及び任意で、１つ又は複数の薬学的に許容される媒体又は賦形剤を含む医薬組成物。
前記標的ポリペプチドが、ＨＢＶ由来の抗原性エピトープを含むエピトープペプチドであり、任意に以下の（ｉ）〜（ｖ）の１つ又は複数を特徴とする、ＨＢＶ感染、又はＨＢＶ感染に関連した疾患の予防又は処置における使用のための、請求項６又は７に記載の組換えタンパク質又は請求項８に記載のウイルス様粒子又は請求項９に記載の医薬組成物：
（ｉ）前記ＨＢＶ感染に関連した疾患がＢ型肝炎であり、
（ｉｉ）前記エピトープペプチドが、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇのエピトープを含み、
（ｉｉｉ）前記エピトープペプチドが、ヒトＨＢＶ由来のＨＢｓＡｇタンパク質の位置１１３〜１３５のアミノ酸を含み
（ｉｖ）前記標的ポリペプチドが、配列番号２２及び６０〜６２から選択されるアミノ酸配列を有し；並びに
（ｖ）前記組換えタンパク質が、配列番号３６、３８及び６９〜７４から選択されるアミノ酸配列を含み、又はそれからなる。
請求項６又は７に記載の組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
請求項１〜３のいずれか一項に記載の核酸分子又は請求項１１に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクター。
請求項１〜３のいずれか一項に記載の核酸分子、請求項１１に記載のポリヌクレオチド、又は請求項１２に記載のベクターを含む、宿主細胞。
組み換えタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む宿主細胞を、前記組換えタンパク質を発現させるのに適した条件下で培養するステップ、及び前記組換えタンパク質を回収するステップを含む、請求項６又は７に記載の組換えタンパク質を調製するための方法。
ＨＩＶ感染、又はＨＩＶ感染に関連した疾患の予防又は処置における使用のための請求項６又は７に記載の組換えタンパク質又は請求項８に記載のウイルス様粒子、又は請求項９に記載の医薬組成物であって、前記標的ポリペプチドが、ＨＩＶ由来の抗原性エピトープを含むエピトープペプチドであり、任意に以下の（ｉ）〜（ｖ）の１つ又は複数を特徴とする、上記組換えタンパク質、ウイルス様粒子、又は医薬組成物：
（ｉ）前記ＨＩＶ感染に関連した疾患がＡＩＤＳであり、
（ｉｉ）前記エピトープペプチドが、ＨＩＶＧＰ１２０タンパク質のエピトープを含み、
（ｉｉｉ）前記エピトープペプチドが、ＨＩＶＧＰ１２０タンパク質の位置３６１〜３７５のアミノ酸を含み、
（ｉｖ）前記標的ポリペプチドが、配列番号２０に示されるアミノ酸配列を有し；及び
（ｖ）前記組換えタンパク質が、配列番号２４及び２６から選択されるアミノ酸配列を含み、又はそれからなる。
癌の予防又は処置における使用のための請求項６又は７に記載の組換えタンパク質、請求項８に記載のウイルス様粒子、又は請求項９に記載の医薬組成物であって、前記標的ポリペプチドが、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質の抗原性エピトープを含むエピトープペプチドであり、任意に以下の（ｉ）〜（ｉｖ）の１つ又は複数を特徴とする、上記組換えタンパク質、ウイルス様粒子、又は医薬組成物：
（ｉ）前記癌が非小細胞肺癌であり、
（ｉｉ）前記エピトープペプチドが、ヒトＰＤ−Ｌ１タンパク質の位置１４７〜１６０のアミノ酸を含み、
（ｉｉｉ）前記標的ポリペプチドが、配列番号２１に示されたアミノ酸配列を有し；及び
（ｉｖ）前記組換えタンパク質が、配列番号３０及び３２から選択されるアミノ酸配列を含み、又はそれからなる。