JP6932180B2

JP6932180B2 - タクロリムスを含む局所組成物

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Publication number: JP6932180B2
Application number: JP2019502155A
Authority: JP
Inventors: ナイジェル・クラッチリー
Original assignee: MC2 Therapeutics Ltd
Current assignee: MC2 Therapeutics Ltd
Priority date: 2016-04-04
Filing date: 2017-04-03
Publication date: 2021-09-08
Anticipated expiration: 2037-04-03
Also published as: US20190060288A1; RU2741504C2; RU2018138700A; EP3439632C0; EP3439632B1; US12447146B2; US20220273627A1; KR20180126583A; CA3020157C; EP3439632A1; JP2019513820A; CN109069418A; US11458125B2; WO2017174530A1; AU2017247963B2; CA3020157A1; KR102386585B1; AU2017247963A1; EP3439632B8; BR112018069741A2

Description

本発明は局所組成物に関する。特に、本発明は改善された皮膚浸透性、安定性および患者コンプライアンスを有するタクロリムスを含む局所組成物に関する。

アトピー性皮膚炎は一般的な、慢性的に再発する炎症性皮膚疾患である。疾患の正確な原因は議論されているが、湿疹性の病斑、皮膚乾燥および強い掻痒感(掻痒)により特徴付けられる。アトピー性皮膚炎の有病率が近年増加しているという強力な証拠もまた、存在する。状態は軽度から重度まで変わり得て、後にクオリティ・オブ・ライフを損なう。

現在の処置プログラムは軟化クリームの使用を含み、その後漸加的尺度で他の療法でこれを補う。ヒドロコルチゾンアセテートのようなマイルドなコルチコステロイドの局所適用は通常次の段階であり、必要である場合のみ、徐々に強力なコルチコステロイドが使用される。しかしながら、局所コルチコステロイドに関連する多くの潜在的な欠点が存在する。より強力なコルチコステロイドに特に当てはまるこれらの欠点は、皮膚菲薄化、速成耐性および反跳現象を含み得る。これらのおよび他の潜在的副作用のため、コルチコステロイドは顔面領域に使用することを推奨されない。顔に発症するアトピー性皮膚炎が患者のクオリティ・オブ・ライフにとって最も有害であり得るとの事実にも係わらず、そうである。

近年、局所適用マクロラクタム系免疫抑制剤が中程度から重度のアトピー性皮膚炎の処置に使用されている。コルチコステロイドとは異なり、これらの化合物は一般的に良好な耐容性プロファイルを有し、そのため顔面領域に使用することができる。

タクロリムスはマクロラクタム系免疫抑制性剤のアスコマイシン類に属する。機構的に、タクロリムスは細胞プロセスを直接的に阻害しないが、その代わりにイムノフィリンタンパク質ファミリーの一員である特異的細胞質タンパク質シス−トランスプロリルイソメラーゼＦＫＢＰ１２(ＦＫ５０６結合タンパク質としても知られる)との複合体を形成する。その後炎症性応答を阻害するのは、この得られた複合体である。

タクロリムスの場合において、形成された複合体はカルシニューリンを阻害し、活性化Ｔ−細胞の核因子(ＮＦ−ＡＴ)の脱リン酸化を阻止し、それによりそれらの細胞内でＩＬ−２および関連するサイトカインをコードする遺伝子の活性を減少させる。

タクロリムスは、その耐容性プロファイルにおいてコルチコステロイドを上回る明確な利点を有するが、タクロリムスを局所適用のために製剤化することは困難であることが証明されている。生じる第一の困難は化学的におよび物理的に安定な製品を得ることである。生じる第二の困難は、活性成分を有効にするために外部皮膚バリアを通過して十分な量の活性成分の送達を管理することである。タクロリムスの浸透性は、一般的に認識される容易に透過可能なサイズの５００Ｄａよりはるかに大きいその分子サイズ(８０４Ｄａ)により妨害される。疾患状態は皮膚バリアをある程度弱めるが、タクロリムスの皮膚への浸透性を改善する戦略が必要とされ続けている。

商業的に、０．０３％および０．１％タクロリムス無水軟膏(アステラスのＰｒｏｔｏｐｉｃ^ＴＭ)が上市されている。いずれの市販品も液体パラフィン、白色軟パラフィン、硬パラフィンおよび蜜蝋媒体に分散された極性溶媒(プロピレンカーボネート)を含む。プロピレンカーボネートは、薬物に対する担体および浸透性強化剤として作用する。溶媒は皮膚のより深い層へタクロリムスを送達するのに役立つが、既に傷つけられた皮膚バリアをさらに破壊し、従って皮膚に刺激を引き起こす。水の不在が加水分解またはｐＨ不適合による化学的分解の機会を制限し、賦形剤のバルクの閉鎖的性質は活性成分の浸透を助ける高度の閉鎖を生み出す。しかしながら、多くの軟膏のように、水の非存在およびパラフィンおよびワックス成分の存在は、製剤に極めて乏しい審美的プロファイルを与える(S.E. Wolverton, Comprehensive Dermatologic Drug Therapy 3rd Edition (2012), p13)。

いくつかの非軟膏タクロリムス製剤が知られている。例えば、米国特許第２００５／０２４９７５７号にはマクロライド系免疫抑制剤、１以上のクリーム形成剤および有効量の１以上の皮膚浸透強化剤を含む医薬クリーム組成物が開示されている。

米国特許第２０１２／０１８４５１１号にはマクロライド系免疫抑制剤の液体マイクロエマルジョンが開示されている。組成物は多量の界面活性剤および極性水混和性液体を浸透強化剤として含む。

欧州特許第２５９６７８８号にはセバシン酸ジイソプロピルが油層に使用され得るタクロリムスを含む水中油型クリーム組成物が開示されている。高温(例えば４０℃)での組成物の長期安定性は開示されていない。

非軟膏製剤はＰｒｏｔｏｐｉｃ^ＴＭ製剤より良好な審美的プロファイルを有する可能性があるが、有効成分の同化学的安定性に欠ける傾向がある。さらに、活性成分の十分な浸透を達成するために、一般的に多量の界面活性剤および／または極性水混和性液体を含むことが必要である。これは米国特許第２００５／０２４９７５７号、米国特許第２０１２／０１８４５１１号および欧州特許第２５９６７８８号に例示されている。多量のこれらの成分の結果、これらの非軟膏製剤は皮膚を刺激する傾向がある。

従って、本発明の一つの目的は、皮膚バリアに可能な限り無害でありながら、先行技術の製剤より良好な審美性を備えた、タクロリムスを皮膚に送達できる製剤の提供である。言いかえると、本発明の一つの目的は、先行技術の製剤より優れた患者コンプライアンスを有するタクロリムス製剤を提供することである。

別のおよび／またはさらなる目的は、先行技術の製剤より良好な皮膚浸透性を有するタクロリムス製剤を提供することまたは少なくとも商業的に有用なその代替品を提供することである。

別のおよび／またはさらなる目的は、既存の製剤と比較してタクロリムスの改善した化学的安定性を有する製剤を提供することである。

第一の態様によると、本発明は、
第一油およびタクロリムスを含む第一不連続相；
第二油を含む第二不連続相；および
連続水相；
を含み、ここで、第一油は第二油と異なる；
局所適用のための組成物を提供する。

本発明者らは、先行技術の非軟膏製剤と異なり、本明細書に記載の組成物は良好な皮膚浸透性を達成するために多量の極性水混和性液体または多量の界面活性剤を必要としないことを見出した。これは多くの利点を提供する。第一に、組成物が皮膚に低刺激性であり、改善された患者コンプライアンスを提供する。これは、患者が既に炎症した皮膚を有する場合に特に有利である。第二に、組成物はブタ炎症モデルにおいて試験したとき、インビボで優れた効果を有する。さらにタクロリムスは驚くべきことに、多くの既存製剤、特に非軟膏製剤より高い化学的安定性を有する。これは以下でより詳細に説明される。

本発明を、ここでさらに説明する。以下の記載において、本発明の種々の態様／実施態様がより詳細に定義される。そのように定義された各々の態様／実施態様は、反対のことが明らかに示されない限り、いずれかの他の態様／実施態様または態様／実施態様と組み合わせ得る。特に、好ましいまたは有利であると示されている任意の特徴は、他のいずれかの特徴または好ましいまたは有利であると示されている特徴と組み合わせ得る。

本発明は局所適用のための組成物を提供する。局所適用のための組成物はヒトまたは動物の身体の一部への直接適用に適切な組成物として本明細書において定義される。好ましくは、組成物は皮膚、例えば顔、頭皮、足、四肢または胴体への直接適用に適切である。

本発明の組成物は第一不連続相、第二不連続相および連続水相を含む。言いかえると、組成物は連続水相中に第一不連続相および第二不連続相の分散を含む。本明細書で使用される用語「不連続相」は、その特定の油相を形成する油滴の複数の別個の領域をいう。それは単一の油滴を示すために使用されない。これら相は物理的および化学的に異なる。第二不連続相中に第一不連続相は分散せず、その逆もまた同様であると解される。言いかえると、組成物は、例えば国際公開第２００５／０８２５１５号に開示されるように、複雑な内相を含まない。本発明による組成物の構造を示す簡単な概略図が図１に提供される。本発明の組成物における連続水相の包含は、軟膏ではなく、ローションまたはクリームの形態で提供されることを可能にする。従って、本発明の組成物は先行技術の軟膏と比較して改善した審美的プロファイルを有し、それにより改善した患者コンプライアンスを有する。好ましくは、組成物はローションまたはクリームの形態である。

第一不連続相および第二不連続相は第一油および第二油をそれぞれ含む。第一油は第二油と異なる、すなわち、化学的に異なる。好ましくは、第一油および／または第二油は薬学的に許容される油である。本発明において使用され得る油はココナッツ油、スクアレン、ミリスチン酸イソプロピル、イソプロピルイソステアレート、パルミチン酸イソプロピル、修飾トリグリセリド、カプリル酸カプリン酸グリセリド、分画トリグリセリド、グリセリルトリカプレート、グリセリルトリカプロエート、グリセリルトリカプリレート、グリセリルトリカプリレート／カプレート、グリセリルトリカプリレート／カプレート、グリセリルトリカプリレート／カプレート／ラウレート、グリセリルトリカプリレート／カプレート／リノレート、グリセリルトリカプリレート／カプレート／ステアレート、グリセリルトリラウレート、グリセリルトリリノレート、グリセリルトリリノレネート、グリセリルトリオレエート、グリセリルトリウンデカノエート、リノール酸グリセリド、飽和ポリグリコール化グリセリド、一級Ｃ_８−Ｃ_１２脂肪酸鎖含有合成中鎖トリグリセリド、中鎖トリグリセリド、長鎖トリグリセリド、修飾トリグリセリド、画分トリグリセリド、イソステアリン酸イソステアレート、アジピン酸ジイソプロピル、鉱油、ジメチコーン、シクロメチコーン、水素化ポリイソブテン、ヘプタメチルノナンおよびこれらの混合物を含む。好ましくは、組成物は２５℃で固体であるワックス成分を含まない。

第一油および第二油は２つの異なる不連続相を形成すると理解される。ある例示的な実施態様において、第一油および第二油は実質的に非混和性である。そうであるにもかかわらず、２つの混和性または少なくとも一部混和性の油から異なる２つの不連続相を形成することが同様に可能である。これはこれら油を予め混合せずに、連続層において個別に第一油および第二油を分散することにより達成され得る。好ましくは、第一不連続相は第二油を含まず、第二不連続相は第一油を含まない。

第一不連続相はタクロリムスを含む。用語「タクロリムス」は無水タクロリムスおよびタクロリムス水和物の両方を包含すると理解される。タクロリムスはマクロライドであり、天然物のポリケチド類に属する。これは免疫抑制剤であり、皮膚状態を処置することが知られている。本発明において使用されるタクロリムスの原料は好ましくは無水タクロリムスであるが、タクロリムス水和物などの他のタクロリムスの原料が使用され得ることは認識される。本明細書に基づく組成物に含有されるタクロリムスの量は、タクロリムスの無水形態に基づく。最終組成物において所望の量を提供するために使用される原料により、組成物の製造における使用量を調整することは、当業者の能力の範囲内である。

好ましくは、第一油はアジピン酸ジイソプロピルを含む。実施例に示すように、アジピン酸ジイソプロピル、セバシン酸ジエチルおよびアジピン酸ジブチルは全て、タクロリムスについて同様の溶解度プロファイルを有する。しかしながら、第一油の一部としてのアジピン酸ジイソプロピルの含有は、驚くべきことに、セバシン酸ジエチルまたはアジピン酸ジブチルが含まれるときより顕著により高いタクロリムスの化学的安定性をもたらす。理論に縛られることを望まないが、３つの全ての油に存在する２つのエステル結合は、結合に近いメチル基の近接／配座によりもたらされる立体障害により、アジピン酸ジイソプロピルでより保護されると考えられる。この結合の分解はその後活性成分の安定性に影響を与え得るため、アジピン酸ジイソプロピルが含まれるときの増大した安定性を説明する。タクロリムスに対して高い溶解能を有する油を含むことは、第一油の量を、所定の総タクロリムス濃度により制限することを可能とするため、第一不連続相にとって有利である。本明細書に開示される組成物は２つの不連続相を含むため、第一不連続相においてタクロリムスに対する溶解可能性が乏しい油を使用することは、製剤についてより高い総油含量をもたらし、悪い、脂っぽい審美性を与える。第一および第二油が好ましい比で使用される場合、第一油の量は製剤の総油量と顕著に関係がある。好ましくは、組成物は１重量％未満のセバシン酸ジエチルおよび／または１重量％未満のアジピン酸ジブチルを含む。好ましくは、組成物はセバシン酸ジエチルを含まない、および／またはアジピン酸ジブチルを含まない。

タクロリムスに対する良好な溶解度プロファイルを有する別の油はサリチル酸エチレングリコールである。この油はしばしば、先行技術の系で使用される。しかしながら、本発明者らは、本発明の組成物の物理的安定性がアジピン酸ジイソプロピルを使用したとき、サリチル酸エチレングリコールより顕著に高いことを見出した。理論に縛られることを望まないが、サリチル酸エチレングリコールより高いｌｏｇＰを有し、従って「極性」が低いアジピン酸ジイソプロピルは水相に分配される傾向が低い。好ましくは、組成物は組成物の重量に対して１重量％未満のサリチル酸エチレングリコールを含む。より好ましくは、組成物はサリチル酸エチレングリコールを含まない。

好ましくは、アジピン酸ジイソプロピルに加えて、第一油はミリスチン酸イソプロピルおよび／またはパルミチン酸イソプロピルとの組み合わせでカプリル酸カプリン酸トリグリセリドを含む。あるいは、第一油はアジピン酸ジイソプロピルに加えてヒマシ油および／またはスクアレンを含み得る。これらの油はアジピン酸ジイソプロピルの粘性を増大させ、従ってその加工性を改善する。それらは、少量の界面活性剤が使用されたとき、組成物の物理的安定性もまた改善し得る。好ましくは、第一油はアジピン酸ジイソプロピルおよび／またはミリスチン酸イソプロピルおよび／またはカプリル酸カプリン酸トリグリセリドを含むおよび／またはこれらから成る。

本発明者らはさらに、カプリル酸カプリン酸トリグリセリドおよび／またはミリスチン酸イソプロピルがタクロリムスに対する妥当な溶解度プロファイルを有するだけでなく、皮膚軟化機能を提供することを見出した。従って、第一油がカプリル酸カプリン酸トリグリセリドおよび／またはミリスチン酸イソプロピルとの組み合せでアジピン酸ジイソプロピルを含むおよび／またはこれらから成ることは特に好ましい。

好ましくは、第一油は、第一油に対して１０〜４０重量％のアジピン酸ジイソプロピルおよび／または１０〜４０重量％のミリスチン酸イソプロピルおよび／または２０〜８０重量％のカプリル酸カプリン酸トリグリセリドから成る。より好ましくはさらに、第一油は、第一油に対して２０〜３０重量％のアジピン酸ジイソプロピルおよび／または２０〜３０重量％のミリスチン酸イソプロピルおよび／または４０〜６０重量％のカプリル酸カプリン酸トリグリセリドから成る。好ましくは、第一油は、好ましくは前記の量のアジピン酸ジイソプロピルおよび／またはミリスチン酸イソプロピルおよび／またはカプリル酸カプリン酸トリグリセリドから成る。

好ましくは、第二油はエモリエントオイル、より好ましくは鉱油、ジメチコーン、シクロメチコーン、水素化ポリイソブタン、ヘプタメチルノナンおよびこれらの２以上の混合物から成る群から選択される油を含むか、これから成る。最も好ましくは、第二油は鉱油を含むか、鉱油から成る。第二油は製剤の皮膚軟化性質に寄与するだけでなく、タクロリムスの拡散を促進するための閉鎖層を提供する。このようにして、組成物の拡散性質が強化される。好ましくは、タクロリムスは第二油において実質的に不溶性である。言いかえると、第二油は好ましくは、非溶媒油層として作用する。

好ましくは、第一不連続相は、第一不連続相の重量に対して少なくとも９０重量％、より好ましくは少なくとも９５重量％、さらにより好ましくは少なくとも９７．５重量％および最も好ましくは少なくとも９９重量％の量で第一油を含む。好ましくは、第一不連続相は、第一不連続相に対して最大９９．７５重量％の第一油を含む。好ましくは、第一不連続相は、不連続相に対して０．０２５〜１０重量％、より好ましくは０．０５〜５重量％、さらにより好ましくは０．２５〜２．５重量％、および最も好ましくは約０．５重量％の量でタクロリムスを含む。好ましくは、第一不連続相はより好ましくは前記の量の第一油およびタクロリムスから成る。

好ましくは、第二不連続相は、第二不連続相の重量に対して少なくとも９０重量％、より好ましくは少なくとも９５重量％、さらにより好ましくは少なくとも９９重量％の第二油を含み、ほとんどの第二不連続相は第二油から成る。

好ましくは、第一不連続相においてタクロリムスが大部分を占める。第一不連続相において大部分を占めるとは、少なくとも９０重量％のタクロリムス、好ましくは少なくとも９５重量％、およびより好ましくは少なくとも９９重量％が不連続相に存在することを意味する。組成物のこの性質は、タクロリムスに対して良好な溶解度プロファイルを有する第一不連続相おける１以上の油および第二不連続相における非溶媒油の使用の結果として生じる。好ましくは、タクロリムスは第一油に実質的に可溶性および／または実質的に第二油に実質的に不溶性である。実質的に可溶性とは、２５℃で少なくとも０．１重量％、好ましくは少なくとも０．２重量％の溶解度を有することを意味する。実質的に不溶性とは、２５℃で０．１重量％未満、好ましくは０．０５重量％未満の溶解度を有することを意味する。

油相の選択の結果、本発明の連続水相は、タクロリムスの有効な皮膚浸透または溶解を達成するために、多量のアルコールおよびグリコールのような極性水混和性液体を含む必要がない。これらの液体は一般的に、従来のタクロリムス製剤において浸透強化剤として必要とされる。好ましくは、本発明の組成物は、組成物の重量に対して１０重量％未満のＣ_１−Ｃ_４アルコール、ポリエチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ペンチレングリコール、グリセロール、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、プロピレンカーボネートまたはこれらの混合物を含む。言いかえると、これらの成分は組成物に存在する必要はないが、これらのうち１以上が存在する場合、これらの成分の総量は組成物の重量に対して１０重量％未満である。より好ましくは、組成物は、組成物の重量に対して５重量％未満、さらにより好ましくは組成物の重量に対して２重量％未満、さらにより好ましくは１重量％未満、さらにより好ましくは０．５重量％未満、さらにより好ましくは０．２重量％未満、および最も好ましくは０．１重量％未満のＣ_１−Ｃ_４アルコール、ポリエチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、グリセロール、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、プロピレンカーボネートまたはこれらの混合物を含む。好ましくは、これらの化合物は組成物中に存在しない。

極めて少量の極性水混和性液体の使用(または不使用)は、本明細書に記載の第一および第二不連続相の使用により容易になり、組成物による皮膚刺激を最小限にする。これは患者が既に炎症した皮膚を有している場合、特に有利である。タクロリムス製剤および特に非軟膏製剤は、一般的に多量のこれらの溶媒を浸透強化剤として必要とするため、このような少量の極性水混和性液体が使用され得るという事実は驚くべきことである。

好ましくは、本発明の組成物は界面活性剤を含む。界面活性剤は１以上の不連続相および／または連続水相に含有され得る。適切な界面活性剤はアルキルポリグリコールエーテル、アルキルポリグリコールエステル、エトキシル化アルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、イオン性または非イオン性界面活性剤、水素化ヒマシ油／２５〜６０個のエトキシ基を含むポリオキシエチレングリコール付加体、ヒマシ油／２５〜４５個のエトキシ基を含むポリオキシエチレングリコール付加体、ソルビタン脂肪酸エステル(例えばＳｐａｎ２０またはＳｐａｎ８０)、エチレンオキシドおよびプロピレンオキシドのブロックコポリマー(例えばＰｌｕｒｏｎｉｃＬ１２１またはＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８)またはこれらの混合物を含む。ＰｅｍｕｌｅｎＴｒ−１およびＰｅｍｕｌｅｎＴｒ−２(Ｌｕｂｒｉｚｏｌ社)のようなアクリル酸の修飾架橋コポリマーに基づく別のポリマー界面活性剤が使用され得る。他の適切な界面活性剤が使用され得ると理解される。

好ましくは、組成物は２以上の界面活性剤、例えば第一および／または第二不連続相に含有される第一の界面活性剤、連続水相に含有される第二の異なる第二界面活性剤を含む。第一および第二界面活性剤は、好ましくは上で列挙されるモノから選択される。第一界面活性剤は第一および／または第二油において容易に溶解または分散し、好ましくはＬａｕｒｅｔｈ−４(ポリオキシエチレン(４)モノドデシルエーテル)、ポリソルベート８０、Ｓｐａｎ８０およびこれらの２以上の混合物から成る群から選択される。第二界面活性剤は連続水相において容易に溶解または分散し、好ましくはポリソルベート２０、ＰｌｕｒｏｎｉｃＬ１２１、ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８、ＰＥＧ−４０水素化ヒマシ油、Ｓｐａｎ２０およびこれらの２以上の混合物から成る群から選択される。最も好ましくは、第一界面活性剤はＬａｕｒｅｔｈ−４(ポリオキシエチレン(４)モノドデシルエーテル)であり、界面活性剤はポリソルベート２０である。

あるいは、組成物は界面活性剤を１種のみ含み得る。この実施態様において、界面活性剤は好ましくはアクリル酸の修飾架橋コポリマーに基づく別のポリマー界面活性剤である。適切な界面活性剤はＰｅｍｕｌｅｎＴｒ−１およびＰｅｍｕｌｅｎＴｒ−２(Ｌｕｂｒｉｚｏｌ社)である。このような界面活性剤は組成物の製造中に第一および／または第二不連続相に溶解されるが、界面活性剤は得られた組成物中で不連続相と連続水相の間を仕切る。

好ましくは、本明細書に記載の組成物は組成物の重量に対して５重量％未満、より好ましくは２．５重量％未満、さらにより好ましくは２重量％未満、さらにより好ましくは１重量％未満、および最も好ましくは０．５重量％未満の総界面活性剤含有量を有する。好ましくは、総界面活性剤含有量は少なくとも０．１重量％である。本明細書で使用される用語「総界面活性剤含有量」は、組成物中に存在する全ての界面活性剤の重量パーセントの合計をいう。上記のとおり、界面活性剤は１以上の不連続相および／または連続水相に包含され得る。

少量の界面活性剤の使用は本明細書に記載の第一および第二不連続相の使用により容易になり、組成物により引き起こされる皮膚炎症を最小限にする。患者が既に炎症した皮膚を有している場合、これは特に有利である。タクロリムスクリーム(非軟膏)製剤は、一般的に浸透強化剤として作用するために、または物理的に安定な生成物の形成を可能にするために極めて多量の界面活性剤を必要とするため、このような少量の界面活性剤が使用されるという事実は驚くべきことである。

好ましい少量の極性水混和性液体および／または界面活性剤を使用することの別の利点は、タクロリムスが驚くべきことに、既知の製剤中より高い化学的安定性を有することである。理論に縛られることを望まないが、本発明者らは極性水混和性液体および界面活性剤が油相および水相間のタクロリムス分配に影響を与えると考えている。タクロリムスは油溶性である。しかしながら、極性水混和性液体および界面活性剤の存在はタクロリムスと水相の相溶性を増大させる。本発明者らは、これがタクロリムスの著しく大きな水性暴露をもたらし、タクロリムスを分解させ得ることを見出した。対照的に、本発明の組成物において、好ましい少量の極性水混和性液体および／または界面活性剤は、タクロリムス水中曝露が少なく、結果的に高い化学的安定性を有することを意味する。

好ましくは、タクロリムスは６０％ＲＨ±５％で測定して、少なくとも１２か月、５℃±３℃で化学的に安定である。安定性は、密封アンバーガラス瓶に保存後に測定される。瓶を空気中で密封する。「化学的に安定である」とは、ｔ＝０での測定と比較して１００％±５％のＨＰＬＣアッセイ値を意味する。

好ましくは、タクロリムスは６０％ＲＨ±５％で測定して、少なくとも１２か月、２５℃±２℃で化学的に安定である。安定性は、密封アンバーガラス瓶に保存後に測定される。瓶を空気中で密封する。同様に、「化学的に安定である」とは、ｔ＝０での測定と比較して１００％±５％のＨＰＬＣアッセイ値を意味する。

好ましくは、タクロリムスは６０％ＲＨ±５％で測定して、少なくとも１２か月、４０℃±３℃で化学的に安定である。安定性は、密封アンバーガラス瓶に保存後に測定される。瓶を空気中で密封する。「化学的に安定である」とは、上記と同義である。

好ましくは、組成物は、組成物の重量に対して０．００５〜２重量％、より好ましくは０．０１〜１重量％、さらにより好ましくは０．０３〜０．５重量％、および最も好ましくは約０．１重量％のタクロリムスを含む。有利に、本発明は、審美性および患者コンプライアンスの改善を達成しながら、既知の軟膏製剤と同等のタクロリムスを可能とする。

好ましくは、組成物は、組成物の重量に対して５〜４０重量％、好ましくは１０〜３０重量％、より好ましくは１０〜２５重量％、さらにより好ましくは１５〜２５重量％および最も好ましくは約２０重量％の第一不連続相を含む。

好ましくは、組成物は、組成物の重量に対して５〜４０重量％、好ましくは１０〜３０重量％、より好ましくは１０〜２５重量％、さらにより好ましくは１５〜２５重量％および最も好ましくは約２０重量％の第二不連続相を含む。驚くべきことに、第二不連続相の量が相対的に少量であるとき、製剤の浸透性が最大化される。これは実施例のインビトロモデルにおいて示される。

好ましくは、第一油は組成物の重量に対して５〜４０重量％、より好ましくは１０〜３０重量％、さらにより好ましくは１０〜２５重量％、さらにより好ましくは１５〜２５重量％、および最も好ましくは約２０重量％の量で存在する。好ましくは、第二油は組成物の重量に対して５〜４０重量％、より好ましくは１０〜３０重量％、さらにより好ましくは１０〜２５重量％、さらにより好ましくは１５〜２５重量％、および最も好ましくは約２０重量％の量で存在する。

好ましくは、組成物は１：３〜３：１、より好ましくは１：２〜２：１、さらにより好ましくは２：３〜３：２、および最も好ましくは約１：１の第一油に対する第二油の重量比を有する。実施例で説明されるように、本発明者らは第一油に対する第二油の比は、製剤の浸透性が最大化されるならば、過剰に高くあるべきではないことを見出した。これは実施例のインビトロモデルにおいて示される。

好ましくは、組成物は、組成物の重量に対して少なくとも１０重量％、好ましくは少なくとも２０重量％、より好ましくは少なくとも３０重量％、さらにより好ましくは少なくとも４０重量％、および最も好ましくは少なくとも５０重量％の水を含む。好ましくは、組成物は、組成物の重量に対して７０重量％の水を含む。第一不連続相におけるタクロリムスの優れた溶解度は、活性成分の過剰の水中曝露をもたらすことなく、比較的多量の水が使用されることを意味する、比較的多量の水は皮膚に対する低い脂性感を与え、さらに患者コンプライアンスを改善する。

好ましくは、組成物は最大で２つの不連続相を含む。好ましくは、組成物は本明細書に記載の第一および第二油以外の油を含まない。

好ましくは、組成物はさらに、少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤を含む。

好ましくは、本発明の組成物は平均１〜３０μｍ、好ましくは１〜２０μｍの液滴直径(つまり、不連続相液滴直径)を有する。このような液滴直径は一般的に１〜１００ｎｍの平均液滴直径を有するマイクロエマルジョンと対照的である。本発明の文脈において、液滴直径はＭａｌｖｅｒｎＭａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ２０００レーザー回折粒子径分析装置を使用して測定される。

本発明の組成物はマクロエマルジョンの形態で存在し得る。マクロエマルジョンは当分野において既知であり、それらはより大きな平均液滴直径を有する点でマイクロエマルジョンと異なる。さらに、マイクロエマルジョンと異なり、マクロエマルジョンは熱力学的に不安定である。この相対的な熱力学的不安定性の結果、マクロエマルジョンは一般的にマイクロエマルジョンと異なる方法で製造される。例えば、マクロエマルジョン形成は一般的に、撹拌／剪断が通常必要であるが、マイクロエマルジョンは自然に効率的に形成する。

あるいは、本発明の組成物はポリアフロン分散剤の形態であり得る。ポリアフロン分散剤は当分野において知られており、Ｓｅｂｂａによる以下の参考文献に記載されている："Biliquid Foams", J. Colloid and Interface Science, 40 (1972) 468-474および"The Behaviour of Minute Oil Droplets Encapsulated in a Water Film", Colloid Polymer Sciences, 252 (1979) 392-396, Hicks "Investigating the Generation, Characterisation, and Structure of Biliquid Foams", PhD Thesis, University of Bristol, 2005, Crutchley "The Encapsulation of Oils and Oil Soluble Substances Within Polymer Films", PhD Thesis, The University of Leeds, 2006 and Lye and Stuckey, Colloid and Surfaces, 131 (1998) 119-136。アフロンは米国特許出願−Ａ−４，４８６，３３３号および国際公開第９７／３２５５９号にもまた、開示されている。ポリアフロン分散剤を製造する適切な方法は、国際公開第０３／０６４０２４号に記載されている。

好ましくは、組成物はローションまたはクリームの形態であり得る。本発明の文脈において、ローションおよびクリームは、例えば、使用に際して望ましい泡を生み出すためにより多量の界面活性剤成分を有するシェービングフォームと区別される。本発明者らは、本明細書に記載の２つの不連続相の使用が、優れた患者耐容性および認知される審美性、良好な有効性および低刺激性を有する物理的および化学的に安定なタクロリムスローションまたはクリーム組成物の提供を可能にすることを見出した。

好ましくは、本発明の組成物は水に分散可能である。好ましくは、本発明の組成物は水で希釈可能である。これは本発明の使用の順応性を、例えば毛髪を濡らしたまま毛髪を通して頭皮への組成物の適用を改善すること、または要求または必要が生じたときにどこかの局所表面から製剤を洗い流すことまたは衣服から予期せず汚した製品を洗い流して容易に落とすことにより、増大させる。これらの利点は使用者の使用中の経験を改善し、患者コンプライアンスを改善する。

好ましくは、組成物は３．５〜６、より好ましくは４〜５．５、さらにより好ましくは４．５〜５.２５、および最も好ましくは４．５〜５のｐＨを有する。本発明者らは組成物のｐＨをこれらの限定の範囲内で制御することで、全体としてタクロリムスおよび組成物の安定性が改善されることを見出した。当分野においてより低いｐＨを使用することは慣用である(例えば、米国特許第２０１１／０２０１６３９号および米国特許第８５７４５６２号を参照)ため、これは驚くべきことである。ｐＨを適切な値またはｐＨ範囲に調整するために、任意の適切な酸または塩基が使用され得ると理解される。有利におよび好ましくは、組成物のｐＨは適切な緩衝液の連続水相への取り込みにより安定化され得る。特定の範囲内のｐＨを有する適切な緩衝系は、当業者によく知られている。

好ましくは、タクロリムスは６０％ＲＨ±５％で測定して、少なくとも１２か月、５℃±３℃で物理的に安定である。安定性は、密封アンバーガラス瓶に保存後に測定される。瓶を空気中で密封する。「物理的に安定である」とは、組成物が均一なクリームとして見え、ｔ＝０からの全体の明らかなレオロジー的または外観変化が見られないことを意味する。

好ましくは、タクロリムスは６０％ＲＨ±５％で測定して、少なくとも１２か月、２５℃±２℃で物理的に安定である。安定性は、密封アンバーガラス瓶に保存後に測定される。瓶を空気中で密封する。同様に、「物理的に安定である」とは、組成物が均一なクリームとして見え、ｔ＝０からの明らかなレオロジー的または外観変化が見られないことを意味する。

好ましくは、タクロリムスは６０％ＲＨ±５％で測定して、少なくとも６か月、４０℃±３℃で物理的に安定である。安定性は、密封アンバーガラス瓶に保存後に測定される。瓶を空気中で密封する。「物理的に安定である」とは、上記と同義である。

好ましくは、本発明の組成物はさらに、粘性修飾剤のようなゲル化剤および／または流動性修飾剤を含む。ゲル化剤は例えば、アルギネートガムもしくはそれらの塩、グアーガム、ローカストビーンガム、キサンタンガム、アカシアガム、ゼラチン、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセルロースもしくはその塩、ベントナイト、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、「カーボマー」(アクリル酸の架橋ポリマーの塩)、またはグリセリルポリメタアクリレートもしくはそれらのグリコール中への分散剤から選択され得る。他の適切なゲル化剤が使用されると理解される。さらに、いくつかのゲル化剤(例えば、カーボマー)は化学的緩衝剤としてもまた機能し、従って保存および使用中の組成物における望まない変化を予防し得ることを見出した。粘性修飾剤が使用される場合、これは好ましくはポリマーセルロース増粘剤である。ゲル化剤および／または流動性修飾剤の含有はクリーム化に対するさらなる安定性を提供し、活性濃度が組成物全体で単一であることを確かにする。これらの成分の使用は国際公開第９７／３２５５９号に記載されている。ゲル化／濃化剤の選択は、簡単に注げる薄いローションから、顕著な流れ抵抗を有する濃いクリームまで、製剤粘性を制御することもまた、可能にする。

好ましくは、本発明の組成物は０．０５〜５．０重量％、好ましくは０．１〜２．０重量％、およびより好ましくは０．２〜１．０重量％のゲル化剤を含む。本発明の組成物のある実施態様はゲルの稠度を有する。

本発明の組成物はまた、防腐剤(例えば微生物的損傷を防ぐために)、緩衝剤(ｐＨの制御のためおよび皮膚の酸外套に対する不安定性および損傷を回避するため)および抗酸化剤のような他の添加剤を含む。防腐剤が使用される場合、好ましくは組成物の重量に対して０．５〜１重量％、より好ましくは０．６〜０．８重量％の比で存在する。防腐剤は好ましくは、ベンジルアルコール、フェノキシエタノール、安息香酸ナトリウムおよびこれらの２以上の組み合わせから成る群から選択される。より好ましくは、防腐剤はフェノキシエタノールである。これらの添加剤はポリアフロン分散剤の連続または不連続相に含まれ得る。これらの添加剤の含有は、有効および有用であると知られている物質のレベルおよび類型であると理解される。本発明の他の性能上の利点が損なわれることを防ぐために、これらの添加剤の選択および量に注意する必要がある。

特に好ましい実施態様において、本発明の組成物は、
アジピン酸ジイソプロピルおよびタクロリムスを含む第一不連続相；
鉱油を含む第二不連続相；および
連続水相；
を含み、
好ましくはここで、
タクロリムスは実質的に第一不連続相に存在し；
組成物は、組成物の重量に対して１重量％未満の界面活性剤を含み；
組成物は、組成物は組成物の重量に対して５重量％未満のＣ_１−Ｃ_４アルコール、ポリエチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ペンチレングリコール、グリセロール、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、プロピレンカーボネートおよびこれらの２以上の混合物を含み；そして
組成物はローションまたはクリームの形態である。

さらに特に好ましい実施態様において、本発明の組成物は、
アジピン酸ジイソプロピルおよびタクロリムスを含む第一不連続相；
鉱油を含む第二不連続相；および
連続水相；
を含み、
好ましくはここで、
タクロリムスは実質的に第一不連続相に存在し；
組成物は、組成物の重量に対して１重量％未満の界面活性剤を含み；
組成物は、組成物は組成物の重量に対して１重量％未満のＣ_１−Ｃ_４アルコール、ポリエチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ペンチレングリコール、グリセロール、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、プロピレンカーボネートおよびこれらの２以上の混合物を含み；そして
組成物はローションまたはクリームの形態である。

第二の態様によって、乾癬またはアトピー性皮膚炎の処置における使用のための、本明細書に記載の組成物が提供される。

第三の態様によって、乾癬またはアトピー性皮膚炎の処置のための医薬の製造における使用のための、本明細書に記載の組成物が提供される。

第四の態様によって、治療によるヒトまたは動物の身体の処置方法における使用のための、本明細書に記載の組成物が提供される。

第五の態様によって、処置を必要とする患者に有効量の本明細書に記載の化合物組成物を投与することを含む、ヒトまたは動物患者において乾癬またはアトピー性皮膚炎を処置する方法が提供される。

本明細書に記載の組成物は、毛髪を介して頭皮または他の皮膚表面に適用し得る。好ましくはこの実施態様において、毛髪は濡れている(例えばシャンプーを用いてまたは用いずに水を使用し、その後タオルで乾燥させることによる)。製品をその後適切な量で頭皮に適用し、その後毛髪を介して頭皮に揉み込み得る。その後毛髪を自然乾燥させるかまたはヘアドライヤーを使用して乾燥させ得る。有利に、水に分散可能な製剤の形態は、この方法を使用して皮膚に活性成分を分布させることも可能にする。これとは別にまたはこれに加えて、乾燥した毛髪を介して組成物を揉み込み、適切な時間(８〜１２時間でよい)放置した後に過剰分または残り分をシャンプーを用いてまたは用いずに水を使用して洗い流し得る。好ましくは、組成物は単位用量形態でヒトまたは動物に適用される。

第六の態様によって、本明細書に記載の組成物を含むパッケージを提供する。好ましくは、パッケージはチューブまたは無気ポンプである。例えば、組成物の局所適用のためにチューブを圧搾し得る。

第七の態様によって、本発明は、
(ｉ)タクロリムスを含む第一油を提供すること；
(ｉｉ)第二油を提供すること；
(ｉｉｉ)水性成分を提供すること；および
(ｉｖ)第一油およびタクロリムスを含む第一不連続相、第二油を含む第二不連続相、および連続水相を含む局所適用のための組成物を形成するために水性成分に第一油および第二油を分散させること
を含む、局所適用のための組成物を製造する方法を提供し、
ここで、第一油は第二油と異なる。

好ましくは、該方法により製造される組成物は、本明細書に記載の組成物である。このような水中油型分散剤を製造する方法は当分野で、例えばG. Godwin, Harry’s Cosmeticology 7^th Edition, 1982において知られている。他の製造方法が適宜使用され得ることは、当業者により理解される。

上記のとおり、組成物はポリアフロン分散剤であり得る。ポリアフロン分散剤を製造する適切な方法は、ＵＳ−Ａ−４４８６３３３号に記載されている。他の製造方法が適宜使用され得ることは、当業者により理解される。

好ましくは、該方法は組成物を包装することをさらに含む。

前記態様は、本明細書に記載の前記態様のいずれかと自由に組み合わせてよい。

本発明は、以下の非限定的図に関して説明する。

本発明による組成物の構造を示す簡単な模式図。薄い円は第一不連続相(第一油およびタクロリムスを含む)を表し、濃い円は第二不連続相(第二油を含む)を表し、背景は連続水相を表す。ｔ＝０での実施例１で使用されたタクロリムス標準のＨＰＬＣクロマトグラム。タクロリムス(１９．８６３分)、タクロリムス１９−エピマー(１６．８０３分)およびアスコマイシン(１８．９７６分)についてのピークが観察される。ＨＰＬＣ条件：カラム：ＬｕｎａＣ１８(２)、３μｍ粒子径、４．６ｘ１５０ｍｍカラム(Ｗａｔｅｒｓ)、流速：１．５ｍＬ／分。カラム温度：２５℃である。Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ：タクロリムス；Ａｓｃｏｍｙｃｉｎ：アスコマイシン；Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ１９−ｅｐｉｍｅｒ：タクロリムス１９−エピマー。ｔ＝０での実施例１のサンプル１のＨＰＬＣクロマトグラム。ＨＰＬＣ条件：カラム：ＬｕｎａＣ１８(２)、３μｍ粒子径、４．６ｘ１５０ｍｍカラム(Ｗａｔｅｒｓ)、流速：１．５ｍＬ／分。カラム温度：２５℃。Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ：タクロリムス；Ａｓｃｏｍｙｃｉｎ：アスコマイシン；Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ１９−ｅｐｉｍｅｒ：タクロリムス１９−エピマー。ｔ＝６か月、４０℃での実施例１のサンプル１のＨＰＬＣクロマトグラム。ＨＰＬＣ条件：カラム：ＬｕｎａＣ１８(２)、３μｍ粒子径、４．６ｘ１５０ｍｍカラム(Ｗａｔｅｒｓ)、流速：１．５ｍＬ／分。カラム温度：２５℃。Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ：タクロリムス；Ａｓｃｏｍｙｃｉｎ：アスコマイシン；Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ１９−ｅｐｉｍｅｒ：タクロリムス１９−エピマー。ｔ＝０での実施例１のサンプル９のＨＰＬＣクロマトグラム。ＨＰＬＣ条件：カラム：ＬｕｎａＣ１８(２)、３μｍ粒子径、４．６ｘ１５０ｍｍカラム(Ｗａｔｅｒｓ)、流速：１．５ｍＬ／分。カラム温度：２５℃。Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ：タクロリムス；Ａｓｃｏｍｙｃｉｎ：アスコマイシン；Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ１９−ｅｐｉｍｅｒ：タクロリムス１９−エピマー。ｔ＝６か月、４０℃での実施例１のサンプル９のＨＰＬＣクロマトグラム。ＨＰＬＣ条件：カラム：ＬｕｎａＣ１８(２)、３μｍ粒子径、４．６ｘ１５０ｍｍカラム(Ｗａｔｅｒｓ)、流速：１．５ｍＬ／分。カラム温度：２５℃。Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ：タクロリムス；Ｔａｃｒｏｌｉｍｕｓ１９−ｅｐｉｍｅｒ：タクロリムス１９−エピマー。組成物の最初の適用から４８時間後の、サンプル１、２、３および６の組成物の紅斑スコアに対する効果を示す棒グラフ。エラーバーは平均の標準誤差を示す。サンプル１、１３、１４および１５のインビトロ拡散(μｇ／ｃｍ^２)を示す棒グラフ。ｙ軸はμｇ／ｃｍ^２における拡散した平均累積タクロリムスを示す。エラーバーは標準偏差を示す。アレルギー性接触性皮膚炎のランドレースブタモデルにおけるタクロリムス軟膏の対応するバリアントと比較したサンプル１、２２、２３および２４(それぞれ、０．１％、０．０３％、０．０１％および０．００３％のタクロリムス濃度)の用量応答グラフ。黒丸：タクロリムス軟膏バリアント；灰色丸：サンプル１タクロリムスバリアントｓ；点線：サンプル２１(対照ビークル)。ｘ軸はタクロリムス濃度を示し、ｙ軸は１０日目(２４ｈ処理後試験)における紅斑スコアを示す。エラーバーは標準偏差を示す。

次に、本発明を、以下の非限定的実施例に関連して記載する。

実施例１
以下の組成物を製造し、初期アッセイ値および４０℃、６か月後の両方においてタクロリムス安定性を測定する。

成分の凡例：
１)分散水相
２)ＡＰＩ非溶媒油相
３)ＡＰＩ溶媒油相
４)ゲル／増粘剤
５)ｐＨ／水調整
成分を別々に製造し、その後適切な撹拌をしながら連続的に添加する。それぞれの場合において、成分１〜３の組合せは最終製剤の５０重量％、成分４は４８重量％、成分５は２重量％を形成した。
^＊物質は相の相対的なサイズにより２つの相の間で比例して分かれる。例えば、２つの油相が同量ならば、同量の界面活性剤を各油相に添加する。第一油相が第二油相の２倍量ならば、界面活性剤を重量で２：１の比で二相間に分割する。

容器の総使用体積の５％未満の上部空間を有する密閉気密ガラス容器に各サンプルを保存した。サンプルを含む各容器を、標準的な実験室インキュベーター(例えば、ＭｅｍｍｅｒｔＩＦ２６０ＰＬＵＳインキュベーター)で、４０℃の一定温度で保存した。各サンプルについての保存期間は６か月であり、その後化学的安定性を測定した。

１００±５％アッセイ値の安定性は、タクロリムスが４０℃で６か月間、化学的に安定であったことを示す。１００±２％アッセイ値は、タクロリムスの化学的安定性が特に高かったことを示す。

保存期間後の各サンプルにおけるタクロリムスの化学的安定性をＨＰＬＣ法により測定した。ＨＰＬＣ法は以下のとおりであった。

移動相調製：
溶液Ａ：１０００ｍＬの精製水に０．４ｍＬ添加することにより、６ｍＭオルトリン酸水溶液を調製する(一般的に３Ｌ調製)。
溶液Ｂ：アセトニトリルおよびｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルがそれぞれ８１：１９％の混合物を調製する(一般的に３Ｌ調製)。
移動相ＡおよびＢは、溶液ＡおよびＢが上の表に示される比である混合物として調製する。

サンプル調製：
アセトニトリルをサンプル希釈剤として使用する。
アンバーガラス容器内で溶液を調製する。
方法：
１．約１．０ｇのサンプルを１０ｍｌのメスフラスコに正確に量り、フラスコの首に残るサンプルを最小限にする。
２．約５ｍＬのサンプル希釈剤をメスフラスコに添加し、２分間ボルテックス撹拌する。
３．室温まで平衡させ、その後メスフラスコをサンプル希釈剤を添加する。１時間撹拌することにより完全に混合する。
４．溶液のアリコートを２ｍｌの遠心分離チューブに移し、１３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離する。
５．０．４５μｍＰＴＦＥシリンジフィルターでろ過する。

標品調製：
タクロリムスのアセトニトリル溶液を１００μｇ／ｍＬの濃度で調製した。
本方法を用いるタクロリムス標準についてのＨＰＬＣクロマトグラムを図２に示す。サンプル１についてのＨＰＬＣクロマトグラムを図３(ｔ＝０)および図４(ｔ＝６か月、４０℃)に示す。サンプル９についてのＨＰＬＣクロマトグラムを図５(ｔ＝０)および図６(ｔ＝６か月、４０℃)に示す。

安定性結果の検討
安定性データから理解できるように、サンプル１(第一不連続相にアジピン酸ジイソプロピル、ミリスチン酸イソプロピルおよびカプリル酸カプリン酸トリグリセリドを使用し、極性水混和性液体を含まない)は、タクロリムス安定性にの観点から、最も安定な製剤である。

サンプル２、３、４、５および９において、タクロリムスは安定性が低い。製剤は種々の極性水混和性液体(プロピレングリコール、ＴｒａｎｓｃｕｔｏｌＰ^ＴＭ、ヘキシレングリコールまたはペンチレングリコール)を１２〜３０重量％で含む。このより低い安定性は、油相および水相間のタクロリムスの分配に影響を与える極性非水性溶媒によると考えられる。特に、タクロリムスの水中曝露は実施例１よりサンプル２、３、４、５および９でより多く、増大したタクロリムスの分解をもたらすと考えられる。サンプル９と比較して強化されたサンプル１の化学的安定性は図３〜６において見ることができる。

サンプル１０は、界面活性剤Ｌａｕｒｅｔｈ４の量が多い(９．４重量％)以外、サンプル１と同様である。測定したタクロリムス安定性はサンプル１より有意に低かった。同様に、これは油相および水相間のタクロリムスの分配に影響を与える界面活性剤によると考えられる。特に、サンプル１０におけるタクロリムスの水中曝露はサンプル１より多く、増大したタクロリムスの分解をもたらすと考えられる。

サンプル１、７および８の比較は第一不連続相におけるアジピン酸ジイソプロピルの使用(実施例１)は、第一不連続相におけるセバシン酸ジエチルまたはアジピン酸ジブチルの使用(それぞれサンプル７および８)の使用より高いタクロリムス安定性を生じさせることを示す。全ての３つの油はタクロリムスについて同様の溶解度プロファイルを有する(実施例２の検討を参照)ため、これは驚くべきことである。

サンプルは４０℃、６か月後に物理的に安定であったことが観察され、すなわち各サンプルはｔ＝０からの全体の明らかなレオロジー的または外観変化が見られない均一なクリームとして見られた。

実施例２
本実施例において、種々の油性溶媒におけるタクロリムスの溶解度をＨＰＬＣにより測定した。

約４０ｍｇのタクロリムスを秤量し、既知量(１〜２ｇ)の油を添加して室温で５時間撹拌した。目視検査によりタクロリムスが溶解していないならば、さらなる油を最大１０ｇまで添加した。タクロリムスが１０ｇの油に完全に溶解したように見えたならば、その後サンプルを４℃で一晩撹拌した。冷保存後にタクロリムスが析出したならば、さらなる油を添加し、溶解するかまたは１０ｇの油を添加するまで上記の段階を繰り返した。全てのサンプルをその後遠心分離し、あらゆる非溶解タクロリムスを除去したことを確認し、上清を実施例１に記載のようにＨＰＬＣで分析した。

油性溶媒の冷却はタクロリムスが溶液中に残存しており、最終処方が冷凍されるまたは低温に曝されるべきであるという確信を提供する。市販品がこのような条件を経験することは、非現実的ではないであろう。タクロリムスが溶液から析出しないことが重要である。このような沈殿は製品を物理的または化学的に不安定にさせるか、またはタクロリムスを不均一に分布させることがある。

結果：
上記方法に従って測定した油性溶媒におけるタクロリムスについての溶解度データは以下のとおりである。

上のデータに基づいて、油は３つの群：良好な溶媒(＞１％溶解力)、中程度(０．１５−１％溶解力)および有効な非溶媒(＜０．１％)に分類され得る。

タクロリムスがセバシン酸ジエチル、アジピン酸ジイソプロピルおよびアジピン酸ジブチルにおいて同様の溶解度を有しているとすると、アジピン酸ジイソプロピルはタクロリムスの安定化についてセバシン酸ジエチルまたはアジピン酸ジブチルより有意により効果的である(実施例１を参照)。

理論に縛られないが、全ての３つの油に存在する２つのエステル結合は、結合に近いメチル基の近接／配座によりもたらされる立体障害により、アジピン酸ジイソプロピルでより保護されると考えられる。この結合の分解はその後活性成分の安定性に影響を与え得るため、実施例１の増大した安定性を説明する。

実施例３
ランドレースブタ(５頭)におけるアレルギー性接触性皮膚炎モデルを使用したインビボ試験により、Ｐｒｏｔｏｐｉｃ^ＴＭ(０．１％タクロリムス)、ワセリン対照およびサンプル１〜３および６を比較した。

方法は、接触過敏症を誘発するために皮膚パッチにジニトロフルオロベンゼン(ＤＮＦＢ)およびジニトロクロロベンゼン(ＤＮＣＢ)を投与し、Ｐｒｏｔｏｐｉｃ^ＴＭ(０．１％タクロリムス)、ワセリン対照およびサンプル１〜３および６の一つを用いて処置することを含む。

方法は、Mollison et al. J Invest Dermatol. 1999 May; 112(5):729-38: a macrolactam inhibitor of T helper type 1 and T helper type 2 cytokine biosynthesis for topical treatment of inflammatory skin diseasesに記載のプロトコルに基づく。

方法：
０日目：１００μｌの１０％ジニトロフルオロベンゼン(ＤＮＦＢ)のアセトン／ＤＭＳＯ／オリーブ油(４５／５／５０ｖ／ｖ／ｖ)溶液を両耳全体の外側および下腹部約２０ｃｍ^２にそれぞれ適用する。

３日目：１００μｌの１０％ジニトロフルオロベンゼン(ＤＮＦＢ)のアセトン／ＤＭＳＯ／オリーブ油(４５／５／５０ｖ／ｖ／ｖ)溶液を両耳の内側および下胸部約２０ｃｍ^２にそれぞれ適用する。

９日目：６１μｌの０．６％ジニトロクロロベンゼン(ＤＮＣＢ)のアセトン／オリーブ油(９５／５ｖ／ｖ)溶液をブタの１８箇所の長方形試験領域(３．５ｘ３．５ｃｍ、１２．２５ｃｍ^２)−各側９箇所に適用する。

９日目＋３０分：６１μｌの試験製剤を試験領域(３．５ｘ３．５ｃｍ、１２．２５ｃｍ^２)に適用する。

スコア付け／評価およびその後の試験製剤の再適用を、試験製剤の初期適用から２４時間後および３０時間後に行った。４８時間後にさらなるスコア付けを行った。

パッチを以下のようにスコア付けした。
０−紅斑なし
０．５−紅斑が疑われる
１−微かなまたはまばらな紅斑
２−硬化を伴わない中程度の紅斑
３−浮腫または硬結の局所領域を伴う強い紅斑
４−一様な硬結または浮腫を伴う極度の紅斑

４８時間目の結果もまた、図７に示す(エラーバーは平均の標準誤差を示す)。図７および上の表から明らかなように、４８時間の紅斑スコアはサンプル１〜３および６と同等である。これらの紅斑スコアはワセリン対照ビークルおよびＰｒｏｔｏｐｉｃ^ＴＭについてのスコアより有意に低い。従って、本発明の製剤はＰｒｏｔｏｐｉｃ^ＴＭのような既存の軟膏製剤より高いインビボ有効性を有する。

実施例４
種々の界面活性剤系を使用して、さらなる組成物を製造した。比較のために、サンプル１の組成物を表に含める。

^＊物質は相の相対的なサイズにより２つの相の間で比例して分かれる。例えば、２つの油相が同量ならば、同量の界面活性剤を各油相に添加する。第一油相が第二油相の２倍量ならば、界面活性剤を重量ｄえ２：１の比で二相間に分割する。

実施例１１および１２の両方について、成分を合わせる前に７０℃に加熱した。実施例１２の場合において、高剪断ロータ固定子(Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎ)装置を７０００ｒｐｍで使用した。

実施例５
第二油およびその量を変えた組成物を製造した。比較のために、サンプル１の組成物を表に含める。

^＊物質は相の相対的なサイズにより２つの相の間で比例して分かれる。例えば、２つの油相が同量ならば、同量の界面活性剤を各油相に添加する。第一油相が第二油相の２倍量ならば、界面活性剤を重量で２：１の比で二相間に分割する。

人工膜によるフランツセルインビトロ拡散試験を行った。使用した膜はＳｔｒａｔ−Ｍ膜(ＭｅｒｃｋＭｉｌｌｉｐｏｒｅ)であり、ヒト皮膚における拡散を予測する経皮拡散試験についての合成、非動物ベースモデルとして説明される。５％ウシ血清アルブミンおよび５％イソプロピルアルコールを含むリン酸緩衝化食塩水溶液を受容体相として使用した。０．６４ｃｍ^２の表面領域および約２ｃｍ^３の受容体体積を有する細胞を使用した。約４０ｍｇの製剤を０時間、２４時間および４８時間の時間で添加し、細胞を撹拌して３７℃でインキュベートした。受容体を２４、４８および７２時間の時間でサンプリングし、置換した。タクロリムス濃度を上記方法に従ってＨＰＬＣにより決定し、それぞれの細胞受容体体積を調整した。各サンプルについての膜１ｃｍ^２あたりの平均累積タクロリムスをその後プロットした(図８)。

データから、サンプル１およびサンプル１３はインビトロ分散特性に関して優れていることが明らかである。第一不連続相に対する第二不連続相と同一の割合を有する製剤であるが、鉱油に対してジメチコーンを使用している。サンプル１５(第二不連続相なし)はサンプル１およびサンプル１３の両方より有意に劣り、これは第二油相が浸透性において有意な改善を生み出すことを示す。しかしながら、サンプル１４は過剰量の第二不連続相はインビトロ拡散において有害な効果を有し得ることを示す。従って、製剤のインビトロ拡散を最大化する最適な量の第二不連続相が存在する。

さらに、サンプル１および１３についての結果に統計的に顕著な差異が存在しないことは注目すべきことである。ジメチコーンは、鉱油と比較して他の油との混和性が低いことが知られているため、適用においてにＡＰＩ油相と混合する可能性がはるかに低くなりやすい。従って、サンプルおよびサンプル１３の間に統計的有意差がないことは、単一のＡＰＩ油相系(サンプル１５)を上回る改善した浸透性は、主に得られた混合物におけるタクロリムスの飽和における変化をもたらす適用における油の混合によるものではないことを示す。

実施例６
水相に種々の量の水混和性液体(ＴｒａｎｓｃｕｔｏｌＰ^ＴＭ)を使用して、種々の簡易化された製剤を製造した。

界面活性剤は含まれていなかった。これは油相および水相が十分に混合できるが、一晩放置すると容易に分離し、サンプリングおよび分析をより容易にすることを確実にした。同様に、サンプリングおよび分析をより容易にするために、鉱油相またはゲル化剤は含まれていなかった。

２つの相を手動で激しく混合させることにより、製剤を製造した。その後、油相をピペットで取り出す前に、それらを一晩静置した。２つの相を遠心分離し、本明細書に記載のＨＰＬＣ法を使用してタクロリムスについて分析した。

サンプルを製造し、それらの関連するタクロリムス(ＡＰＩ)回収量を以下の表に示す。

水相に含まれる極性非水性溶媒の量が多いほど、水相へのタクロリムスの分配度が大きくなることが表から理解できる。この増大した水性曝露は、実施例１で観察された化学的安定性の傾向を一部説明すると考えられる。

実施例７
フェノキシエタノールの代わりに安息香酸ナトリウムを防腐剤として使用して、さらなる組成物を製造した。

成分の凡例：
１)分散水相
２)ＡＰＩ非溶媒油相
３)ＡＰＩ溶媒油相
４)ゲル／増粘剤
５)防腐剤
６)ｐＨ／水調整
成分を別々に製造し、その後適切な撹拌をしながら連続的に添加する。それぞれの場合において、成分１〜３の組合せは最終製剤の５０重量％、成分４は４３重量％、成分５は５重量％、成分６は２重量％を形成した。
^＊物質は相の相対的なサイズにより２つの相の間で比例して分かれる。例えば、２つの油相が同量ならば、同量の界面活性剤を各油相に添加する。第一油相が第二油相の２倍量ならば、界面活性剤を重量で２：１の比で二相間に分割する。

実施例８
ミニブタにおける局所耐容試験を、２つの本発明による局所タクロリムスクリームおよび商業的に入手可能な軟膏を評価するために、および皮膚適用により１日２回、４週間ミニブタに投与後の皮膚におけるタクロリムスの量を決定するために行った。

方法：
４匹の雄性ゲッティンゲンミニブタを試験に使用した。それぞれ２．５ｘ２．５ｃｍ計測した８の適用部位を各動物の背中に記し、各製剤サンプル１ビークル、０．０３％タクロリムスを含むサンプル１、０．１％タクロリムスを含むサンプル１およびＰｒｏｔｏｐｉｃ(登録商標)０．１％タクロリムス軟膏を各動物の２つの異なる部位に適用した。

以下のスケジュールに従って、動物に投与した。

以下を評価した：死亡率、臨床的徴候、体重および処置されたおよび未処置の皮膚の肉眼的観察および組織病理学を伴う剖検。生物分析のために皮膚生検サンプルを２８日目、最初の投与４８時間後、および剖検時に回収した。さらに、適用部位を処置反応について試験し、紅斑、浮腫および他の皮膚反応についてスコア付けした。

最終投与日(２８日目)の最初の投与から４時間＋／−１０分後および剖検時、生物分析のために全ての適用部位から生検サンプルを採取した。各サンプリング時間に、２つ(１つはバックアップの目的)の生検を各適用部位から採取した。合計で各サンプリング時間に各動物から１６の生検サンプル。生検サンプルを適用部位の末端から約５ｍｍ採取した。皮膚サンプルの回収前に、生検サンプルを採取する場合、市販の粘着テープを用いて、２つの生検サンプルあたり４０回の剥離により角質層を適用部位の部分における皮膚から分離した。

５ｍｍの直径を有するパンチを用いて生検サンプルを採取した。生検サンプルから、メスを用いて最良の可能な方法で皮膚から表皮を分離した。この後、メスを用いて皮膚から皮下組織を分離し、その後廃棄した。生検を計量し、液体窒素を用いて即時に冷凍し、−８０℃以下で分析まで保存した。有効な生物分析アッセイを用いて、タクロリムスの量について組織サンプルを分析した。

結果：
３種の異なる製剤；サンプル２１(ビークル)、サンプル２２(０．０３％タクロリムス)、サンプル１(０．１％タクロリムス)およびＰｒｏｔｏｐｉｃ(登録商標)０．１％軟膏でのミニブタへの局所タクロリムスの１日２回、４週間の皮膚適用は極めて慣用であり、皮膚反応または組織病理学的変化は観察されなかった。

生物分析は試験物が主に表皮に位置し、真皮において見られた量は少なかったことを示した。タクロリムスの量は、サンプル０．０３％タクロリムスクリームで処置した後よりサンプル０．１％タクロリムスクリームで処置した後の方が約３倍高く、用量−応答相関を示した。Ｐｒｏｔｏｐｉｃ(登録商標) ０．１％タクロリムス軟膏処置は、サンプル１０．１％タクロリムスクリーム処置より曝露量が約３０％低かった。従って、所定のタクロリムス負荷で、本発明の組成物はＰｒｏｔｏｐｉｃ^ＴＭのような軟膏製剤よりも改善した皮膚浸透性をインビボで示すと結論づけることができる。以下の表にデータを示す。

実施例９
ランドレースブタ(８頭の雌性ブタ)におけるアレルギー性接触性皮膚炎モデルを使用したインビボ実験を行い、商業的に入手可能なタクロリムス軟膏の用量−応答と種々の強度のタクロリムスを含む本発明による組成物を比較した。以下の試験製剤を比較した：Ｐｒｏｔｏｐｉｃ^ＴＭ(０．１％タクロリムス軟膏)、Ｐｒｏｔｏｐｉｃ^ＴＭ(０．０３％タクロリムス軟膏)、０．０１％タクロリムス軟膏、０．００３％タクロリムス軟膏、サンプル１(０．１％タクロリムスを含む)、サンプル２１および２２(サンプル１と同一であるが、それぞれタクロリムスを含まず、０．０３％タクロリムスを含む)、およびサンプル２３(サンプル１と同一であるが、０．０１％タクロリムスを含む)およびサンプル２４(サンプル１と同一であるが、０．００３％タクロリムスを含む)。欧州特許第１０９３３７１Ｂ１号の実施例１(欧州特許−Ａ−０４７４１２６号の実施例１に記載の方法を使用)に従って、適切に減らしたタクロリムスを用いて０．０１％および０．００３％タクロリムス軟膏を製造した。

方法は、接触過敏症を誘発するためにジニトロフルオロベンゼン(ＤＮＦＢ)およびジニトロクロロベンゼン(ＤＮＣＢ)を皮膚パッチに投与し、その後試験製剤で処置することを含む。

３日目：１００μｌの５％ジニトロフルオロベンゼン(ＤＮＦＢ)のアセトン／ＤＭＳＯ／オリーブ油(４５／５／５０ｖ／ｖ／ｖ)溶液を両耳の内側および下胸部約２０ｃｍ^２にそれぞれ適用する。

９日目：６０μｌの０．６％ジニトロクロロベンゼン(ＤＮＣＢ)のアセトン／オリーブ油(９５／５ｖ／ｖ)溶液をブタの１８の長方形試験領域(３．５ｘ３．５ｃｍ、１２．２５ｃｍ^２)−各側で９に適用する。

９日目＋３０分および６時間：６０μｌの試験製剤を試験領域(３．５ｘ３．５ｃｍ、１２.２５ｃｍ^２)に適用する。

スコア付け評価およびその後の試験製剤の再適用を、試験製剤の初期適用から２４時間後および３０時間後に行った。４８時間後にさらなるスコア付けを行った。

アレルギー性接触性皮膚炎から生じる紅斑について、試験領域を以下のようにスコア付けした。
０−紅斑なし
０．５−紅斑が疑われる
１−微かなまたはまばらな紅斑
２−硬化を伴わない中程度の紅斑
３−浮腫または硬結の局所領域を伴う強い紅斑
４−一様な硬結または浮腫を伴う極度の紅斑

結果：

２４時間目の結果は、図９(エラーバーは標準偏差を示す)においてもまた示される。サンプル１およびタクロリムス軟膏を用いた試験について、以下の結論が導かれる：
１．見かけ上、クリームサンプルも軟膏バリアントも、最も低いタクロリムス濃度(０．００３％および０．０１％)の効果はない。
２．軟膏より本発明によるクリームサンプルについてのベースラインが低く、クリームビークルが軟膏と比較して炎症に対する独立した有益な効果を有することを示す。
３．用量応答傾向は、特許請求の範囲に記載の発明の組成物におけるタクロリムスの抗炎症効果について観察され、軟膏バリアントにおけるタクロリムスと同等である。

前記の詳細な説明は、説明および実例の目的で使用され、添付の特許請求の範囲を限定することを意図しない。本明細書において説明される現在好ましい実施態様における多くの変化は、当業者にとって明らかであり、添付の特許請求の範囲およびそれらの等価の範囲内に留まる。

Claims

局所適用のための組成物であって、
第一油およびタクロリムスを含む第一不連続相；
第二油を含む第二不連続相；および
連続水相；
を含み、ここで、第一油は第二油と異なり、
第一油はアジピン酸ジイソプロピルおよび／またはミリスチン酸イソプロピルおよび／またはカプリル酸カプリン酸トリグリセリドを含み、
第二油は鉱油、ジメチコーン、シクロメチコーン、水素化ポリイソブタン、ヘプタメチルノナンおよびそれらの２以上の混合物から成る群から選択される油を含む、
組成物。
組成物の重量に対して５重量％未満、好ましくは１重量％未満、より好ましくは０．５重量％未満の総界面活性剤含有量を有する請求項１に記載の組成物。
組成物の重量に対して５重量％未満、好ましくは１重量％未満の、より好ましくは０．５重量％未満のＣ_１−Ｃ_４アルコール、ポリエチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ペンチレングリコール、グリセロール、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、プロピレンカーボネートおよびこれらの混合物を含む、請求項１又は２に記載の組成物。
第一油に対して１：３〜３：１、好ましくは２：３〜３：２、より好ましくは約１：１の第二油の重量比を有する、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
組成物の重量に対して１０〜３０重量％、好ましくは１５〜２５重量％の第二不連続相を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
組成物の重量に対して少なくとも１０重量％、好ましくは少なくとも５０重量％の水を含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
最大２つの不連続相を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
１〜３０μｍ、好ましくは１〜２０μｍの平均液滴直径を有する、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
３．５〜６、好ましくは４〜５．５、より好ましくは４．５〜５のｐＨを有する、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
６０％ＲＨ±５％で測定したとき２５℃±２℃で少なくとも１２か月安定であり；および／または６０％ＲＨ±５％で測定したとき４０℃±３℃で少なくとも６か月安定である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物であって、
アジピン酸ジイソプロピルおよびタクロリムスを含む第一不連続相；
鉱油を含む第二不連続相；および
連続水相；
を含み、ここで、好ましくはタクロリムスは実質的に第一不連続相に存在し；
組成物は、組成物の重量に対して１重量％未満の界面活性剤を含み；
組成物は、組成物の重量に対して５重量％未満のＣ_１−Ｃ_４アルコール、ポリエチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、ペンチレングリコール、グリセロール、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、プロピレンカーボネートおよびこれらの２以上の混合物を含み；
そして、ローションまたはクリームの形態である、
組成物。
局所適用によるヒトおよび／または動物皮膚の処置に使用するための、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物。
局所適用のための組成物を製造する方法であって、
(ｉ)タクロリムスを含む第一油を提供すること；
(ｉｉ)第二油を提供すること；
(ｉｉｉ)水性成分を提供すること；および
(ｉｖ)水性成分に第一油および第二油を分散させ、局所適用のための組成物を形成すること；
を含み、ここで、第一油は第二油と異なり、
第一油はアジピン酸ジイソプロピルおよび／またはミリスチン酸イソプロピルおよび／またはカプリル酸カプリン酸トリグリセリドを含み、
第二油は鉱油、ジメチコーン、シクロメチコーン、水素化ポリイソブタン、ヘプタメチルノナンおよびそれらの２以上の混合物から成る群から選択される油を含む、
方法。