JP6934164B2 - 新規イリジウム錯体、酸素濃度測定試薬、酸素濃度測定方法及び合成中間体 - Google Patents
新規イリジウム錯体、酸素濃度測定試薬、酸素濃度測定方法及び合成中間体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6934164B2 JP6934164B2 JP2017045545A JP2017045545A JP6934164B2 JP 6934164 B2 JP6934164 B2 JP 6934164B2 JP 2017045545 A JP2017045545 A JP 2017045545A JP 2017045545 A JP2017045545 A JP 2017045545A JP 6934164 B2 JP6934164 B2 JP 6934164B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- iridium complex
- ppy
- carbon atoms
- represented
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229910052741 iridium Inorganic materials 0.000 title claims description 119
- GKOZUEZYRPOHIO-UHFFFAOYSA-N iridium atom Chemical compound [Ir] GKOZUEZYRPOHIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 119
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 67
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 title claims description 67
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 title claims description 67
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 41
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 20
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 62
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 47
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 41
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 21
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 19
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 11
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 125000002029 aromatic hydrocarbon group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 claims description 7
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 5
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 70
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Natural products OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 50
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 28
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 27
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 22
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 22
- VQGHOUODWALEFC-UHFFFAOYSA-N 2-phenylpyridine Chemical compound C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=N1 VQGHOUODWALEFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 20
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 20
- -1 benzo [b] thiophen-2-yl Chemical group 0.000 description 19
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 18
- 150000002503 iridium Chemical class 0.000 description 18
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 17
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 17
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 17
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 14
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 13
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 13
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 10
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 10
- 125000000962 organic group Chemical group 0.000 description 10
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Natural products CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 9
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 9
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 9
- 230000030589 organelle localization Effects 0.000 description 9
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 9
- 150000003222 pyridines Chemical class 0.000 description 9
- 238000006862 quantum yield reaction Methods 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102100025386 Oxidized low-density lipoprotein receptor 1 Human genes 0.000 description 8
- 101710199789 Oxidized low-density lipoprotein receptor 1 Proteins 0.000 description 8
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 8
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 8
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 8
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 8
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 8
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- FSEXLNMNADBYJU-UHFFFAOYSA-N 2-phenylquinoline Chemical compound C1=CC=CC=C1C1=CC=C(C=CC=C2)C2=N1 FSEXLNMNADBYJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 6
- YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N acetylacetone Chemical compound CC(=O)CC(C)=O YRKCREAYFQTBPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 125000002723 alicyclic group Chemical group 0.000 description 6
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 6
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001296 phosphorescence spectrum Methods 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 5
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 5
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 5
- 238000009849 vacuum degassing Methods 0.000 description 5
- ZNQVEEAIQZEUHB-UHFFFAOYSA-N 2-ethoxyethanol Chemical compound CCOCCO ZNQVEEAIQZEUHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940093475 2-ethoxyethanol Drugs 0.000 description 4
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000005587 bubbling Effects 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 4
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 4
- LNJXVUXPFZKMNF-UHFFFAOYSA-K iridium(3+);trichloride;trihydrate Chemical compound O.O.O.Cl[Ir](Cl)Cl LNJXVUXPFZKMNF-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 4
- KZJPVUDYAMEDRM-UHFFFAOYSA-M silver;2,2,2-trifluoroacetate Chemical compound [Ag+].[O-]C(=O)C(F)(F)F KZJPVUDYAMEDRM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O thiamine pyrophosphate Chemical compound CC1=C(CCOP(O)(=O)OP(O)(O)=O)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N AYEKOFBPNLCAJY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 4
- RXXIVABOKBNIEI-UHFFFAOYSA-N (6-phenylpyridin-3-yl)methanol Chemical compound N1=CC(CO)=CC=C1C1=CC=CC=C1 RXXIVABOKBNIEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NRSBAUDUBWMTGL-UHFFFAOYSA-N 2-(1-benzothiophen-2-yl)pyridine Chemical compound S1C2=CC=CC=C2C=C1C1=CC=CC=N1 NRSBAUDUBWMTGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical group [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical group [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 3
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 3
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 3
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 3
- 125000000959 isobutyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 3
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 3
- 125000004108 n-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 3
- 239000013110 organic ligand Substances 0.000 description 3
- 238000004237 preparative chromatography Methods 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 3
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 3
- 125000004149 thio group Chemical group *S* 0.000 description 3
- LPCWDYWZIWDTCV-UHFFFAOYSA-N 1-phenylisoquinoline Chemical compound C1=CC=CC=C1C1=NC=CC2=CC=CC=C12 LPCWDYWZIWDTCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007821 HATU Substances 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 2
- JVZRCNQLWOELDU-UHFFFAOYSA-N gamma-Phenylpyridine Natural products C1=CC=CC=C1C1=CC=NC=C1 JVZRCNQLWOELDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 2
- DILRJUIACXKSQE-UHFFFAOYSA-N n',n'-dimethylethane-1,2-diamine Chemical compound CN(C)CCN DILRJUIACXKSQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N phenanthridine Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=CC=C3C=NC2=C1 RDOWQLZANAYVLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 125000000020 sulfo group Chemical group O=S(=O)([*])O[H] 0.000 description 2
- 125000001302 tertiary amino group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- GOXYBEXWMJZLJB-UHFFFAOYSA-N (6-chloropyridin-3-yl)methanol Chemical compound OCC1=CC=C(Cl)N=C1 GOXYBEXWMJZLJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- POILWHVDKZOXJZ-ARJAWSKDSA-M (z)-4-oxopent-2-en-2-olate Chemical compound C\C([O-])=C\C(C)=O POILWHVDKZOXJZ-ARJAWSKDSA-M 0.000 description 1
- SHXHPUAKLCCLDV-UHFFFAOYSA-N 1,1,1-trifluoropentane-2,4-dione Chemical compound CC(=O)CC(=O)C(F)(F)F SHXHPUAKLCCLDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UYFPTZHKCYFUJL-UHFFFAOYSA-N 1-(1-benzothiophen-2-yl)isoquinoline Chemical compound C1=CC=C2C(C3=CC4=CC=CC=C4S3)=NC=CC2=C1 UYFPTZHKCYFUJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WIODVQPPNKPCJA-UHFFFAOYSA-N 2-(1-benzothiophen-2-yl)quinoline Chemical compound C1=CC=CC2=NC(C3=CC4=CC=CC=C4S3)=CC=C21 WIODVQPPNKPCJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YONKLQYZOIGYRE-UHFFFAOYSA-N 2-(6-chloropyridin-3-yl)ethyl acetate Chemical compound C(C)(=O)OCCC=1C=NC(=CC=1)Cl YONKLQYZOIGYRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BIHZJTWOZPKKAB-UHFFFAOYSA-N 8-methyl-2-phenylquinoline Chemical compound N1=C2C(C)=CC=CC2=CC=C1C1=CC=CC=C1 BIHZJTWOZPKKAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003734 CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay Methods 0.000 description 1
- 229910020366 ClO 4 Inorganic materials 0.000 description 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 1
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKBWDYLFYVXTGE-UHFFFAOYSA-N N1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1[Ir](C=1C(=CC=CC=1)C=1N=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=N1 Chemical compound N1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1[Ir](C=1C(=CC=CC=1)C=1N=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1C1=CC=CC=N1 QKBWDYLFYVXTGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006069 Suzuki reaction reaction Methods 0.000 description 1
- HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N Trichloro(2H)methane Chemical class [2H]C(Cl)(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-MICDWDOJSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000732 arylene group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 1
- 210000002449 bone cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002648 chondrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002993 cycloalkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004976 cyclobutylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004956 cyclohexylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004979 cyclopentylene group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 1
- 125000004980 cyclopropylene group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003074 dental pulp Anatomy 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 150000002009 diols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 125000000816 ethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- QAMFBRUWYYMMGJ-UHFFFAOYSA-N hexafluoroacetylacetone Chemical compound FC(F)(F)C(=O)CC(=O)C(F)(F)F QAMFBRUWYYMMGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004051 hexyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- FZRNJOXQNWVMIH-UHFFFAOYSA-N lithium;hydrate Chemical compound [Li].O FZRNJOXQNWVMIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- SKTCDJAMAYNROS-UHFFFAOYSA-N methoxycyclopentane Chemical compound COC1CCCC1 SKTCDJAMAYNROS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004957 naphthylene group Chemical group 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N palladium;triphenylphosphane Chemical compound [Pd].C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1.C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 NFHFRUOZVGFOOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 125000000843 phenylene group Chemical group C1(=C(C=CC=C1)*)* 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000467 secondary amino group Chemical group [H]N([*:1])[*:2] 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000383 tetramethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N tetramethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)C CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003944 tolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 125000003258 trimethylene group Chemical group [H]C([H])([*:2])C([H])([H])C([H])([H])[*:1] 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Description
本発明は、新規イリジウム錯体、酸素濃度測定試薬、酸素濃度測定方法及び合成中間体に関する。より詳細には、新規イリジウム錯体、当該錯体を用いた酸素濃度測定試薬及び酸素濃度測定方法、並びに前記錯体の合成中間体に関する。
創薬開発や分子生物学研究の分野において、細胞培養技術によって培養した細胞が、薬剤の薬理活性評価や毒性試験のシミュレーターとして広く利用されている。従来、平面基板上で細胞は培養されていたが、この手法で培養した細胞（平面培養細胞）は二次元方向に広がった単層細胞であるため、三次元組織である生体内の細胞と機能が異なる場合があるという報告があり、近年では、生体内の細胞に近い機能を有する三次元組織であるスフェロイドが注目されている。
一方、細胞内や生体組織内の酸素濃度を測定する方法として、酸素濃度に依存してりん光を発する化合物を用いた方法が提案されている。
例えば、平面培養細胞内の酸素濃度を測定する方法として、２−フェニルキノリンを配位子とするイリジウム錯体を用いる方法、２−（２−ピリジニル）−１−ベンゾチオフェンとアセチルアセトンとを配位子とするイリジウム錯体を用いる方法、この錯体にペプチド残基を導入したイリジウム錯体を用いる方法が知られている（特許文献１、２）。
また、スフェロイド内の酸素濃度を測定する方法としては、ビス［２−（２’−ベンゾチエニル）−ピリジナト−Ｎ，Ｃ３’］イリジウム（アセチルアセトナート）を用いる方法が報告されている（特許文献３）。
例えば、平面培養細胞内の酸素濃度を測定する方法として、２−フェニルキノリンを配位子とするイリジウム錯体を用いる方法、２−（２−ピリジニル）−１−ベンゾチオフェンとアセチルアセトンとを配位子とするイリジウム錯体を用いる方法、この錯体にペプチド残基を導入したイリジウム錯体を用いる方法が知られている（特許文献１、２）。
また、スフェロイド内の酸素濃度を測定する方法としては、ビス［２−（２’−ベンゾチエニル）−ピリジナト−Ｎ，Ｃ３’］イリジウム（アセチルアセトナート）を用いる方法が報告されている（特許文献３）。
しかしながら、上記イリジウム錯体は、いずれも赤色りん光を発するものであった。赤色りん光を発する酸素濃度測定試薬を用いた場合、代謝過程や発現タンパク質等を調べるためのプローブとして赤色以外の色調の光を発現するプローブを選択する必要が生じる。また、赤色りん光ではシャープな画像が得られにくいため、緑色りん光を発する酸素濃度測定試薬の開発が望まれる。
一方、緑色りん光を発するイリジウム錯体として、トリス［２−（２−ピリジニル）フェニル］イリジウム（ＩＩＩ）（以下、「ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３」とも称する）が知られているが、ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３を細胞内や生体組織内の酸素濃度測定試薬として実際に用いたという具体的な報告はない。そこで、ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３について本発明者らが検討を行ったところ、スフェロイド内への移行性に劣るものであることが判明した。
一方、緑色りん光を発するイリジウム錯体として、トリス［２−（２−ピリジニル）フェニル］イリジウム（ＩＩＩ）（以下、「ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３」とも称する）が知られているが、ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３を細胞内や生体組織内の酸素濃度測定試薬として実際に用いたという具体的な報告はない。そこで、ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３について本発明者らが検討を行ったところ、スフェロイド内への移行性に劣るものであることが判明した。
本発明が解決しようとする課題は、緑色りん光を発し、且つ酸素濃度測定試薬として有用な新規イリジウム錯体を提供することにある。
そこで、本発明者らは鋭意検討した結果、特定の１価の基を有するイリジウム錯体が、緑色りん光を発し、且つ酸素濃度測定試薬として有用であることを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、以下の〔１〕〜〔１５〕を提供するものである。
〔１〕 イリジウムを中心原子として含む単核錯体であって、下記式（Ａ）で表される配位子を含有する、イリジウム錯体（以下、この錯体を「本発明のイリジウム錯体」とも称する）。
〔式（Ａ）中、
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ、Ｒｇ及びＲｈは、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は下記式（２）で表される１価の基を示し、
＊は、イリジウム原子との結合位置を示す。
但し、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ、Ｒｇ及びＲｈのうち少なくとも１つ以上は、式（２）で表される１価の基である。〕
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ、Ｒｇ及びＲｈは、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は下記式（２）で表される１価の基を示し、
＊は、イリジウム原子との結合位置を示す。
但し、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ、Ｒｇ及びＲｈのうち少なくとも１つ以上は、式（２）で表される１価の基である。〕
〔式（２）中、
Ｘは、親水性基を含む１価の基を示し、
Ｚ１及びＺ２は、それぞれ独立して、親水性基を含む１価の基、水素原子、１価の有機基、又はハロゲン原子を示し、
＊は、結合手を示す。〕
Ｘは、親水性基を含む１価の基を示し、
Ｚ１及びＺ２は、それぞれ独立して、親水性基を含む１価の基、水素原子、１価の有機基、又はハロゲン原子を示し、
＊は、結合手を示す。〕
〔２〕 下記式（１）で表されるイリジウム錯体。
〔式（１）中、
Ｒ１〜Ｒ２４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は上記式（２）で表される１価の基を示す。
但し、Ｒ１〜Ｒ２４のうち少なくとも１つ以上は、上記式（２）で表される１価の基である。〕
Ｒ１〜Ｒ２４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は上記式（２）で表される１価の基を示す。
但し、Ｒ１〜Ｒ２４のうち少なくとも１つ以上は、上記式（２）で表される１価の基である。〕
〔３〕 Ｒ１が、式（２）で表される１価の基であり、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は式（２）で表される１価の基であり、Ｒ４〜Ｒ２４が、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基である〔２〕に記載のイリジウム錯体。
〔４〕 Ｘが、下記式（３）で表される１価の基である〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載のイリジウム錯体。
〔式（３）中、
Ｒ２５は、単結合又は２価の有機基を示し、
Ｙは、１価の親水性基を示し、
＊は、結合手を示す。〕
Ｒ２５は、単結合又は２価の有機基を示し、
Ｙは、１価の親水性基を示し、
＊は、結合手を示す。〕
〔５〕 前記１価の親水性基が、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、リン原子含有基、メルカプト基、アルデヒド基、スルホ基又はカルバモイル基である〔４〕に記載のイリジウム錯体。
〔６〕 前記１価の親水性基が、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基又はリン原子含有基である〔４〕又は〔５〕に記載のイリジウム錯体。
〔７〕 Ｚ１及びＺ２が、それぞれ独立して、親水性基を含む１価の基、又は水素原子である〔１〕〜〔６〕のいずれかに記載のイリジウム錯体。
〔８〕 〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載のイリジウム錯体を含む、酸素濃度測定試薬（以下、「本発明の酸素濃度測定試薬」とも称する）。
〔９〕 〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載のイリジウム錯体を含む、スフェロイド内酸素濃度測定試薬。
〔９〕 〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載のイリジウム錯体を含む、スフェロイド内酸素濃度測定試薬。
〔１０〕 〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載のイリジウム錯体を用いる、酸素濃度測定方法（以下、「本発明の酸素濃度測定方法」とも称する）。
〔１１〕 〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載のイリジウム錯体を用いる、スフェロイド内の酸素濃度を測定する方法。
〔１１〕 〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載のイリジウム錯体を用いる、スフェロイド内の酸素濃度を測定する方法。
〔１２〕 イリジウムを中心原子として含む単核錯体であって、下記式（Ｂ）で表される配位子を含有する、イリジウム錯体（以下、この錯体を「本発明の合成中間体」とも称する）。
〔式（Ｂ）中、
Ｒｓ、Ｒｔ、Ｒｕ、Ｒｖ、Ｒｗ、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚは、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は下記式（６）で表される１価の基を示し、
＊は、イリジウム原子との結合位置を示す。
但し、Ｒｓ、Ｒｔ、Ｒｕ、Ｒｖ、Ｒｗ、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚのうち少なくとも１つ以上は、式（６）で表される１価の基である。〕
Ｒｓ、Ｒｔ、Ｒｕ、Ｒｖ、Ｒｗ、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚは、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は下記式（６）で表される１価の基を示し、
＊は、イリジウム原子との結合位置を示す。
但し、Ｒｓ、Ｒｔ、Ｒｕ、Ｒｖ、Ｒｗ、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚのうち少なくとも１つ以上は、式（６）で表される１価の基である。〕
〔式（６）中、
Ｒ５５は、炭化水素基を示し、
Ｚ３及びＺ４は、それぞれ独立して、−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ５６（Ｒ５６は炭化水素基を示す）、水素原子、１価の有機基、又はハロゲン原子を示し、
＊は、結合手を示す。〕
Ｒ５５は、炭化水素基を示し、
Ｚ３及びＺ４は、それぞれ独立して、−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ５６（Ｒ５６は炭化水素基を示す）、水素原子、１価の有機基、又はハロゲン原子を示し、
＊は、結合手を示す。〕
〔１３〕 下記式（５）で表されるイリジウム錯体。
〔式（５）中、
Ｒ３１〜Ｒ５４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は上記式（６）で表される１価の基を示す。
但し、Ｒ３１〜Ｒ５４のうち少なくとも１つ以上は、上記式（６）で表される１価の基である。〕
Ｒ３１〜Ｒ５４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は上記式（６）で表される１価の基を示す。
但し、Ｒ３１〜Ｒ５４のうち少なくとも１つ以上は、上記式（６）で表される１価の基である。〕
〔１４〕 Ｒ３１が、式（６）で表される１価の基であり、Ｒ３２及びＲ３３が、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は式（６）で表される１価の基であり、Ｒ３４〜Ｒ５４が、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基である〔１３〕に記載のイリジウム錯体。
〔１５〕 Ｚ３及びＺ４が、それぞれ独立して、−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ５６、又は水素原子である〔１２〕〜〔１４〕のいずれかに記載のイリジウム錯体。
本発明のイリジウム錯体は、緑色りん光を発し、且つ酸素濃度測定試薬として有用である。
また、本発明の合成中間体は、本発明のイリジウム錯体の合成中間体として有用である。
また、本発明の合成中間体は、本発明のイリジウム錯体の合成中間体として有用である。
＜イリジウム錯体＞
本発明のイリジウム錯体は、イリジウムを中心原子として含む単核錯体であって、下記式（Ａ）で表される配位子（以下、「配位子（Ａ）」とも称する）を含有することを特徴とするものである。なお、イリジウム原子と式（Ａ）中の窒素原子との間の結合は、配位結合である。また、本発明のイリジウム錯体に光学異性体が存在する場合はいずれの光学異性体であってもよく、また、１種の光学異性体を単独で用いても、複数の光学異性体を組み合わせて用いてもよい。
本発明のイリジウム錯体は、イリジウムを中心原子として含む単核錯体であって、下記式（Ａ）で表される配位子（以下、「配位子（Ａ）」とも称する）を含有することを特徴とするものである。なお、イリジウム原子と式（Ａ）中の窒素原子との間の結合は、配位結合である。また、本発明のイリジウム錯体に光学異性体が存在する場合はいずれの光学異性体であってもよく、また、１種の光学異性体を単独で用いても、複数の光学異性体を組み合わせて用いてもよい。
〔式（Ａ）中、
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ、Ｒｇ及びＲｈは、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は下記式（２）で表される１価の基を示し、
＊は、イリジウム原子との結合位置を示す。
但し、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ、Ｒｇ及びＲｈのうち少なくとも１つ以上は、式（２）で表される１価の基である。〕
Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ、Ｒｇ及びＲｈは、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は下記式（２）で表される１価の基を示し、
＊は、イリジウム原子との結合位置を示す。
但し、Ｒａ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ、Ｒｇ及びＲｈのうち少なくとも１つ以上は、式（２）で表される１価の基である。〕
〔式（２）中、
Ｘは、親水性基を含む１価の基を示し、
Ｚ１及びＺ２は、それぞれ独立して、親水性基を含む１価の基、水素原子、１価の有機基、又はハロゲン原子を示し、
＊は、結合手を示す。〕
Ｘは、親水性基を含む１価の基を示し、
Ｚ１及びＺ２は、それぞれ独立して、親水性基を含む１価の基、水素原子、１価の有機基、又はハロゲン原子を示し、
＊は、結合手を示す。〕
本発明のイリジウム錯体において、配位子（Ａ）は、二座配位子として中心原子（イリジウム原子）に配位している。また、配位子（Ａ）の個数は、本発明のイリジウム錯体１分子あたり、通常１〜３個であるが、細胞内移行性、オルガネラ局在性、低毒性、合成しやすさ、溶解性、安定性、低酸素状態（特に細胞内）でのりん光強度やりん光量子収率、りん光寿命の観点から、好ましくは２〜３個である。
配位子（Ａ）としては、下記式（Ａ−２）で表される配位子が好ましい。
配位子（Ａ）としては、下記式（Ａ−２）で表される配位子が好ましい。
〔式（Ａ−２）中、各記号は式（Ａ）中の各記号と同義である。〕
また、配位子（Ａ）の個数が１又は２個の場合、本発明のイリジウム錯体は、配位子（Ａ）以外の配位子を含有していてもよい。配位子（Ａ）以外の配位子としては、配位子（Ａ）以外のフェニルピリジン系配位子の他、２−フェニルキノリン、２−フェニル−８−メチルキノリン等のフェニルキノリン系配位子；１−フェニルイソキノリン等のフェニルイソキノリン系配位子；２−（２−ピリジニル）−１−ベンゾチオフェン等のピリジニルベンゾチオフェン系配位子；アセチルアセトン、トリフルオロアセチルアセトン、ヘキサフルオロアセチルアセトン等のアセチルアセトン系配位子；２−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）キノリン；１−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）イソキノリン；６−（ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−イル）ベンゾ［ｃ］キノリン等が挙げられるが、配位子（Ａ）以外のフェニルピリジン系配位子が好ましい。
本発明のイリジウム錯体としては、細胞内移行性、オルガネラ局在性、低毒性、合成しやすさ、溶解性、安定性、低酸素状態（特に細胞内）でのりん光強度やりん光量子収率、りん光寿命の観点から、下記式（１）で表されるイリジウム錯体が好ましい。なお、式（１）中の窒素原子とイリジウム原子との間の実線は配位結合である。
〔式（１）中、
Ｒ１〜Ｒ２４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は上記式（２）で表される１価の基を示す。
但し、Ｒ１〜Ｒ２４のうち少なくとも１つ以上は、上記式（２）で表される１価の基である。〕
Ｒ１〜Ｒ２４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は上記式（２）で表される１価の基を示す。
但し、Ｒ１〜Ｒ２４のうち少なくとも１つ以上は、上記式（２）で表される１価の基である。〕
ここで、式（Ａ）、（Ａ−２）、（１）、（２）中の各記号について説明する。
Ｒａ〜Ｒｈ、Ｒ１〜Ｒ２４で示されるアルキル基としては、直鎖状又は分枝状のアルキル基が好ましい。また、当該アルキル基の炭素数は１〜６であるが、好ましくは１又は２である。当該アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、イソブチル基等が挙げられる。
Ｒａ〜Ｒｈ、Ｒ１〜Ｒ２４で示されるアルキル基としては、直鎖状又は分枝状のアルキル基が好ましい。また、当該アルキル基の炭素数は１〜６であるが、好ましくは１又は２である。当該アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、イソブチル基等が挙げられる。
また、式（Ａ）、（Ａ−２）中、Ｒａ〜Ｒｈのうち少なくとも１つ以上は、式（２）で表される１価の基であり、式（１）中、Ｒ１〜Ｒ２４のうち少なくとも１つ以上は、式（２）で表される１価の基である。
この構成によって、本発明のイリジウム錯体は、スフェロイド内に移行しやすいものとなる。また、本発明のイリジウム錯体は、式（２）中の炭素原子（Ｘ、Ｚ１及びＺ２と結合した炭素原子）を有することによって、所望の緑色りん光を発するものであり、上記炭素原子がない場合には所望の緑色りん光が得られなくなる。
この構成によって、本発明のイリジウム錯体は、スフェロイド内に移行しやすいものとなる。また、本発明のイリジウム錯体は、式（２）中の炭素原子（Ｘ、Ｚ１及びＺ２と結合した炭素原子）を有することによって、所望の緑色りん光を発するものであり、上記炭素原子がない場合には所望の緑色りん光が得られなくなる。
式（Ａ）、（Ａ−２）中、細胞内移行性、オルガネラ局在性、低毒性、合成しやすさ、溶解性、安定性、低酸素状態（特に細胞内）でのりん光強度やりん光量子収率、りん光寿命の観点から、上記Ｒａ〜Ｒｈのうち、１〜４個が式（２）で表される１価の基であるのが好ましく、１〜３個が式（２）で表される１価の基であるのがより好ましく、１〜２個が式（２）で表される１価の基であるのが更に好ましく、１個が式（２）で表される１価の基であるのが特に好ましい。
また、式（Ａ）、（Ａ−２）中、合成しやすさ、細胞内移行性、オルガネラ局在性、溶解性、安定性の観点から、Ｒａ、Ｒｃ、Ｒｆ及びＲｇのうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基であるのが好ましく、Ｒａ及びＲｇのうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基であるのがより好ましく、Ｒａが式（２）で表される１価の基であるのが特に好ましい。
また、式（Ａ）、（Ａ−２）中、合成しやすさ、細胞内移行性、オルガネラ局在性、溶解性、安定性の観点から、Ｒａ、Ｒｃ、Ｒｆ及びＲｇのうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基であるのが好ましく、Ｒａ及びＲｇのうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基であるのがより好ましく、Ｒａが式（２）で表される１価の基であるのが特に好ましい。
また、式（Ａ）、（Ａ−２）中、Ｒａとしては、合成しやすさ、細胞内移行性、オルガネラ局在性、溶解性、安定性の観点から、水素原子、式（２）で表される１価の基が好ましく、式（２）で表される１価の基がより好ましい。
Ｒｂ〜Ｒｈとしては、合成しやすさ、安定性の観点から、水素原子が好ましい。
Ｒｂ〜Ｒｈとしては、合成しやすさ、安定性の観点から、水素原子が好ましい。
式（Ａ）、（Ａ−２）中、Ｒａ〜Ｒｈの組み合わせとしては、合成しやすさ、安定性、低酸素状態（特に細胞内）でのりん光強度の観点から、
Ｒａ、Ｒｃ、Ｒｆ及びＲｇが、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は式（２）で表される１価の基であり、Ｒｂ、Ｒｄ、Ｒｅ及びＲｈが、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基であり、Ｒａ、Ｒｃ、Ｒｆ及びＲｇのうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基である組み合わせが好ましく、
Ｒａ及びＲｇが、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は式（２）で表される１価の基であり、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ及びＲｈが、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基であり、Ｒａ及びＲｇのうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基である組み合わせがより好ましく、
Ｒａが、式（２）で表される１価の基であり、Ｒｂ〜Ｒｈが、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基である組み合わせが更に好ましく、
Ｒａが、式（２）で表される１価の基であり、Ｒｂ〜Ｒｈが、水素原子である組み合わせが特に好ましい。
Ｒａ、Ｒｃ、Ｒｆ及びＲｇが、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は式（２）で表される１価の基であり、Ｒｂ、Ｒｄ、Ｒｅ及びＲｈが、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基であり、Ｒａ、Ｒｃ、Ｒｆ及びＲｇのうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基である組み合わせが好ましく、
Ｒａ及びＲｇが、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は式（２）で表される１価の基であり、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｒｅ、Ｒｆ及びＲｈが、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基であり、Ｒａ及びＲｇのうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基である組み合わせがより好ましく、
Ｒａが、式（２）で表される１価の基であり、Ｒｂ〜Ｒｈが、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基である組み合わせが更に好ましく、
Ｒａが、式（２）で表される１価の基であり、Ｒｂ〜Ｒｈが、水素原子である組み合わせが特に好ましい。
また、式（１）中、細胞内移行性、オルガネラ局在性、低毒性、合成しやすさ、溶解性、安定性、低酸素状態（特に細胞内）でのりん光強度やりん光量子収率、りん光寿命の観点から、上記Ｒ１〜Ｒ２４のうち、１〜１２個が式（２）で表される１価の基であるのが好ましく、１〜９個が式（２）で表される１価の基であるのがより好ましく、１〜６個が式（２）で表される１価の基であるのが更に好ましく、１〜３個が式（２）で表される１価の基であるのが更に好ましく、２又は３個が式（２）で表される１価の基であるのが特に好ましい。
また、式（１）中、合成しやすさ、細胞内移行性、オルガネラ局在性、溶解性、安定性の観点から、Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ７〜Ｒ９及びＲ１６〜Ｒ２１のうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基であるのが好ましく、Ｒ１〜Ｒ３及びＲ１９〜Ｒ２１のうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基であるのがより好ましく、Ｒ１〜Ｒ３のうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基であるのが特に好ましい。
また、式（１）中、合成しやすさ、細胞内移行性、オルガネラ局在性、溶解性、安定性の観点から、Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ７〜Ｒ９及びＲ１６〜Ｒ２１のうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基であるのが好ましく、Ｒ１〜Ｒ３及びＲ１９〜Ｒ２１のうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基であるのがより好ましく、Ｒ１〜Ｒ３のうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基であるのが特に好ましい。
また、式（１）中、Ｒ１としては、合成しやすさ、細胞内移行性、オルガネラ局在性、溶解性、安定性の観点から、水素原子、式（２）で表される１価の基が好ましく、式（２）で表される１価の基がより好ましい。
Ｒ２としては、合成しやすさ、安定性、低酸素状態（特に細胞内）でのりん光強度の観点から、水素原子、式（２）で表される１価の基が好ましく、式（２）で表される１価の基が特に好ましい。
Ｒ３としては、合成しやすさ、安定性、低酸素状態（特に細胞内）でのりん光強度の観点から、水素原子、式（２）で表される１価の基が好ましい。
Ｒ４〜Ｒ２４としては、合成しやすさ、安定性の観点から、水素原子が好ましい。
Ｒ２としては、合成しやすさ、安定性、低酸素状態（特に細胞内）でのりん光強度の観点から、水素原子、式（２）で表される１価の基が好ましく、式（２）で表される１価の基が特に好ましい。
Ｒ３としては、合成しやすさ、安定性、低酸素状態（特に細胞内）でのりん光強度の観点から、水素原子、式（２）で表される１価の基が好ましい。
Ｒ４〜Ｒ２４としては、合成しやすさ、安定性の観点から、水素原子が好ましい。
式（１）中、Ｒ１〜Ｒ２４の組み合わせとしては、合成しやすさ、安定性、低酸素状態（特に細胞内）でのりん光強度の観点から、
Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ７〜Ｒ９及びＲ１６〜Ｒ２１が、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は式（２）で表される１価の基であり、Ｒ４〜Ｒ６、Ｒ１０〜Ｒ１５及びＲ２２〜Ｒ２４が、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基であり、Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ７〜Ｒ９及びＲ１６〜Ｒ２１のうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基である組み合わせが好ましく、
Ｒ１〜Ｒ３及びＲ１９〜Ｒ２１が、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は式（２）で表される１価の基であり、Ｒ４〜Ｒ１８及びＲ２２〜Ｒ２４が、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基であり、Ｒ１〜Ｒ３及びＲ１９〜Ｒ２１のうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基である組み合わせがより好ましく、
Ｒ１が、式（２）で表される１価の基であり、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は式（２）で表される１価の基であり、Ｒ４〜Ｒ２４が、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基である組み合わせが更に好ましく、
Ｒ１が、式（２）で表される１価の基であり、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、水素原子又は式（２）で表される１価の基であり、Ｒ４〜Ｒ２４が、水素原子である組み合わせが更に好ましく、
Ｒ１及びＲ２が、式（２）で表される１価の基であり、Ｒ３が、水素原子又は式（２）で表される１価の基であり、Ｒ４〜Ｒ２４が、水素原子である組み合わせが特に好ましい。
Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ７〜Ｒ９及びＲ１６〜Ｒ２１が、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は式（２）で表される１価の基であり、Ｒ４〜Ｒ６、Ｒ１０〜Ｒ１５及びＲ２２〜Ｒ２４が、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基であり、Ｒ１〜Ｒ３、Ｒ７〜Ｒ９及びＲ１６〜Ｒ２１のうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基である組み合わせが好ましく、
Ｒ１〜Ｒ３及びＲ１９〜Ｒ２１が、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は式（２）で表される１価の基であり、Ｒ４〜Ｒ１８及びＲ２２〜Ｒ２４が、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基であり、Ｒ１〜Ｒ３及びＲ１９〜Ｒ２１のうち少なくとも１つ以上が式（２）で表される１価の基である組み合わせがより好ましく、
Ｒ１が、式（２）で表される１価の基であり、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は式（２）で表される１価の基であり、Ｒ４〜Ｒ２４が、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基である組み合わせが更に好ましく、
Ｒ１が、式（２）で表される１価の基であり、Ｒ２及びＲ３が、それぞれ独立して、水素原子又は式（２）で表される１価の基であり、Ｒ４〜Ｒ２４が、水素原子である組み合わせが更に好ましく、
Ｒ１及びＲ２が、式（２）で表される１価の基であり、Ｒ３が、水素原子又は式（２）で表される１価の基であり、Ｒ４〜Ｒ２４が、水素原子である組み合わせが特に好ましい。
式（２）中、Ｘは、親水性基を含む１価の基を示す。この構成によって、本発明のイリジウム錯体は、細胞内移行性、オルガネラ局在性、溶解性、ハンドリング性、安定性、低酸素状態（特に細胞内）でのりん光強度等が良好なものとなる。当該１価の基における親水性基の置換位置及び置換個数は任意であるが、その個数は、好ましくは１〜５個であり、より好ましくは１〜３個であり、特に好ましくは１又は２個である。
上記親水性基は、アニオン性、カチオン性、中性のいずれでもよい。親水性基としては、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、リン原子含有基、メルカプト基、アルデヒド基、スルホ基、カルバモイル基等の１価の親水性基；ポリオキシアルキレン基、アミド結合等の２価以上の親水性基が挙げられ、Ｘで示される１価の基は、これらのうち１種のみを含んでいても２種以上を含んでいてもよい。上記親水性基の中でも、細胞内移行性、合成しやすさ、安定性の観点から、１価又は２価の親水性基が好ましく、１価の親水性基、アミド結合がより好ましく、１価の親水性基が更に好ましい。
上記アミノ基としては、第１級アミノ基（−ＮＨ２）；アルキルアミノ基等の第２級アミノ基；Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノ基等の第３級アミノ基が挙げられる。アルキルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノ基におけるアルキル基は、直鎖状、分枝状、環状のいずれでもよい。また、当該アルキル基の炭素数は、好ましくは１〜１５であり、より好ましくは１〜９であり、特に好ましくは１〜３である。アルキル基としては、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、イソブチル基、シクロヘキシル基等が挙げられる。また、上記アミノ基の中では、第３級アミノ基が好ましい。
上記リン原子含有基としては、リン原子を基中に１個含有するものが好ましい。また、リン原子含有基としては、例えば、下記式（４）で表される基、リン酸基等が挙げられ、式（４）で表される基が好ましい。なお、本発明のイリジウム錯体が式（４）で表される基を有する場合、本発明のイリジウム錯体は対アニオンを有していてもよい。対アニオンとしては、例えば、Ｆ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−、Ｉ−等のハロゲン化物イオン；ＣｌＯ４ −、ＢＦ４ −、ＣＨ３（Ｃ＝Ｏ）Ｏ−、ＰＦ６ −等の酸の対アニオン等が挙げられる。
〔式（４）中、
Ｒ２６〜Ｒ２８は、それぞれ独立して、置換又は非置換の炭化水素基を示し、
＊は、結合手を示す。〕
Ｒ２６〜Ｒ２８は、それぞれ独立して、置換又は非置換の炭化水素基を示し、
＊は、結合手を示す。〕
Ｒ２６〜Ｒ２８で示される炭化水素基は、脂肪族炭化水素基、脂環式炭化水素基及び芳香族炭化水素基を包含する概念である。これらの中では、芳香族炭化水素基が好ましい。
上記脂肪族炭化水素基の炭素数は、好ましくは１〜２０であり、より好ましくは１〜１２であり、特に好ましくは１〜６である。脂肪族炭化水素基は直鎖状でも分岐状でもよい。また、脂肪族炭化水素基は、分子内に不飽和結合を有していてもよいが、アルキル基が好ましい。アルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基等が挙げられる。
上記脂環式炭化水素基の炭素数は、好ましくは３〜１２であり、より好ましくは３〜８である。また、脂環式炭化水素基としては、具体的には、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等のシクロアルキル基が挙げられる。
上記芳香族炭化水素基の炭素数は、好ましくは６〜１２であり、より好ましくは６〜８である。また、芳香族炭化水素基としては、具体的には、フェニル基、トリル基、キシリル基等のアリール基が挙げられる。
Ｒ２６〜Ｒ２８における置換基としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等のハロゲン原子が挙げられる。
上記脂環式炭化水素基の炭素数は、好ましくは３〜１２であり、より好ましくは３〜８である。また、脂環式炭化水素基としては、具体的には、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基等のシクロアルキル基が挙げられる。
上記芳香族炭化水素基の炭素数は、好ましくは６〜１２であり、より好ましくは６〜８である。また、芳香族炭化水素基としては、具体的には、フェニル基、トリル基、キシリル基等のアリール基が挙げられる。
Ｒ２６〜Ｒ２８における置換基としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等のハロゲン原子が挙げられる。
上記１価の親水性基の中では、細胞内移行性、合成しやすさ、ハンドリング性、低毒性、安定性、低酸素状態（特に細胞内）でのりん光強度の観点から、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基、リン原子含有基が好ましく、細胞内移行性の観点から、ヒドロキシ基、カルボキシ基、アミノ基がより好ましい。なお、本発明のイリジウム錯体が、ヒドロキシ基、カルボキシ基を有する場合、小胞体に局在しやすくなり、アミノ基を有する場合、リソソームに局在しやすくなり、リン原子含有基を有する場合、ミトコンドリアに局在しやすくなる。
これらの中でも、スフェロイド内移行性、低毒性の観点からは、ヒドロキシ基、カルボキシ基が更に好ましく、ハンドリング性の観点から、ヒドロキシ基が特に好ましい。一方、平面培養細胞内移行性の観点からは、アミノ基が特に好ましい。
これらの中でも、スフェロイド内移行性、低毒性の観点からは、ヒドロキシ基、カルボキシ基が更に好ましく、ハンドリング性の観点から、ヒドロキシ基が特に好ましい。一方、平面培養細胞内移行性の観点からは、アミノ基が特に好ましい。
また、Ｘとしては、細胞内移行性、合成しやすさ、安定性、低酸素状態（特に細胞内）でのりん光強度の観点から、下記式（３）で表される１価の基が好ましい。
〔式（３）中、
Ｒ２５は、単結合又は２価の有機基を示し、
Ｙは、１価の親水性基を示し、
＊は、結合手を示す。〕
Ｒ２５は、単結合又は２価の有機基を示し、
Ｙは、１価の親水性基を示し、
＊は、結合手を示す。〕
Ｙで示される１価の親水性基としては、上記で親水性基の一例として挙げた１価の親水性基と同様のものが挙げられる。
また、Ｒ２５で示される２価の有機基としては、置換又は非置換の２価の炭化水素基、当該置換又は非置換の２価の炭化水素基の炭素原子の一部がエーテル結合、アミド結合、エステル結合及びチオ基から選ばれる１種以上に置き換わった基が好ましく、置換又は非置換の２価の炭化水素基、当該置換又は非置換の２価の炭化水素基の炭素原子の一部がアミド結合に置き換わった基がより好ましい。
なお、置換又は非置換の２価の炭化水素基の炭素原子の一部がエーテル結合、アミド結合、エステル結合及びチオ基から選ばれる１種以上に置き換わった基において、エーテル結合、アミド結合、エステル結合、チオ基は１つでもよく、２つ以上でもよい。
また、Ｒ２５で示される２価の有機基の総炭素数としては、１〜４２が好ましく、１〜３０がより好ましく、１〜１８が更に好ましく、１〜６が特に好ましい。
なお、置換又は非置換の２価の炭化水素基の炭素原子の一部がエーテル結合、アミド結合、エステル結合及びチオ基から選ばれる１種以上に置き換わった基において、エーテル結合、アミド結合、エステル結合、チオ基は１つでもよく、２つ以上でもよい。
また、Ｒ２５で示される２価の有機基の総炭素数としては、１〜４２が好ましく、１〜３０がより好ましく、１〜１８が更に好ましく、１〜６が特に好ましい。
また、Ｒ２５における「２価の炭化水素基」としては、２価の脂肪族炭化水素基、２価の脂環式炭化水素基、２価の芳香族炭化水素基のいずれでもよい。これらの中では、２価の脂肪族炭化水素基が好ましい。
上記２価の脂肪族炭化水素基の炭素数は、好ましくは１〜４２であり、より好ましくは１〜３０であり、更に好ましくは１〜１８であり、特に好ましくは１〜６である。２価の脂肪族炭化水素基は直鎖状でも分岐状でもよい。また、２価の脂肪族炭化水素基は、分子内に不飽和結合を有していてもよいが、アルカンジイル基が好ましい。アルカンジイル基としては、メタン−１，１−ジイル基、エタン−１，１−ジイル基、エタン−１，２−ジイル基、プロパン−１，１−ジイル基、プロパン−１，２−ジイル基、プロパン−１，３−ジイル基、プロパン−２，２−ジイル基、ブタン−１，４−ジイル基、ペンタン−１，５−ジイル基、ヘキサン−１，６−ジイル基等が挙げられる。
上記２価の脂環式炭化水素基の炭素数は、好ましくは３〜２０であり、より好ましくは３〜１６であり、更に好ましくは３〜１２であり、特に好ましくは３〜８である。具体的には、シクロプロピレン基、シクロブチレン基、シクロペンチレン基、シクロへキシレン基等のシクロアルキレン基が挙げられる。
上記２価の芳香族炭化水素基の炭素数は、好ましくは６〜１８であり、より好ましくは６〜１２であり、特に好ましくは６〜８である。具体的には、フェニレン基、ナフチレン基等のアリーレン基が挙げられる。
なお、２価の脂環式炭化水素基、２価の芳香族炭化水素基の結合部位は、環上のいずれの炭素上でもよい。
Ｒ２５における置換基としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等のハロゲン原子等が挙げられる。
上記２価の脂環式炭化水素基の炭素数は、好ましくは３〜２０であり、より好ましくは３〜１６であり、更に好ましくは３〜１２であり、特に好ましくは３〜８である。具体的には、シクロプロピレン基、シクロブチレン基、シクロペンチレン基、シクロへキシレン基等のシクロアルキレン基が挙げられる。
上記２価の芳香族炭化水素基の炭素数は、好ましくは６〜１８であり、より好ましくは６〜１２であり、特に好ましくは６〜８である。具体的には、フェニレン基、ナフチレン基等のアリーレン基が挙げられる。
なお、２価の脂環式炭化水素基、２価の芳香族炭化水素基の結合部位は、環上のいずれの炭素上でもよい。
Ｒ２５における置換基としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等のハロゲン原子等が挙げられる。
また、式（２）中、Ｚ１及びＺ２は、それぞれ独立して、親水性基を含む１価の基、水素原子、１価の有機基、又はハロゲン原子を示す。
Ｚ１及びＺ２で示される親水性基を含む１価の基としては、Ｘで示される親水性基を含む１価の基と同様のものが挙げられる。
Ｚ１及びＺ２で示される１価の有機基としては、置換又は非置換の炭化水素基が挙げられる。当該置換又は非置換の炭化水素基としては、Ｒ２６で示される置換又は非置換の炭化水素基と同様のものが挙げられる。
Ｚ１及びＺ２で示されるハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
上記の中でも、Ｚ１、Ｚ２としては、合成しやすさの観点から、親水性基を含む１価の基、水素原子が好ましく、水素原子が特に好ましい。
Ｚ１及びＺ２で示される親水性基を含む１価の基としては、Ｘで示される親水性基を含む１価の基と同様のものが挙げられる。
Ｚ１及びＺ２で示される１価の有機基としては、置換又は非置換の炭化水素基が挙げられる。当該置換又は非置換の炭化水素基としては、Ｒ２６で示される置換又は非置換の炭化水素基と同様のものが挙げられる。
Ｚ１及びＺ２で示されるハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等が挙げられる。
上記の中でも、Ｚ１、Ｚ２としては、合成しやすさの観点から、親水性基を含む１価の基、水素原子が好ましく、水素原子が特に好ましい。
＜合成中間体＞
本発明の合成中間体は、下記式（Ｂ）で表される配位子を含有し、イリジウムを中心原子として含む単核錯体である。なお、イリジウム原子と式（Ｂ）中の窒素原子との間の結合は、配位結合である。
式（Ｂ）で表される配位子としては、式（Ｂ−２）で表される配位子が好ましい。また、本発明の合成中間体としては、下記式（５）で表されるイリジウム錯体が好ましい。
本発明の合成中間体は、下記式（Ｂ）で表される配位子を含有し、イリジウムを中心原子として含む単核錯体である。なお、イリジウム原子と式（Ｂ）中の窒素原子との間の結合は、配位結合である。
式（Ｂ）で表される配位子としては、式（Ｂ−２）で表される配位子が好ましい。また、本発明の合成中間体としては、下記式（５）で表されるイリジウム錯体が好ましい。
〔式（Ｂ）中、
Ｒｓ、Ｒｔ、Ｒｕ、Ｒｖ、Ｒｗ、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚは、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は下記式（６）で表される１価の基を示し、
＊は、イリジウム原子との結合位置を示す。
但し、Ｒｓ、Ｒｔ、Ｒｕ、Ｒｖ、Ｒｗ、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚのうち少なくとも１つ以上は、式（６）で表される１価の基である。〕
Ｒｓ、Ｒｔ、Ｒｕ、Ｒｖ、Ｒｗ、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚは、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は下記式（６）で表される１価の基を示し、
＊は、イリジウム原子との結合位置を示す。
但し、Ｒｓ、Ｒｔ、Ｒｕ、Ｒｖ、Ｒｗ、Ｒｘ、Ｒｙ及びＲｚのうち少なくとも１つ以上は、式（６）で表される１価の基である。〕
〔式（６）中、
Ｒ５５は、炭化水素基を示し、
Ｚ３及びＺ４は、それぞれ独立して、−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ５６（Ｒ５６は炭化水素基を示す）、水素原子、１価の有機基、又はハロゲン原子を示し、
＊は、結合手を示す。〕
Ｒ５５は、炭化水素基を示し、
Ｚ３及びＺ４は、それぞれ独立して、−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ５６（Ｒ５６は炭化水素基を示す）、水素原子、１価の有機基、又はハロゲン原子を示し、
＊は、結合手を示す。〕
〔式（Ｂ−２）中、各記号は式（Ｂ）中の各記号と同義である。〕
〔式（５）中、
Ｒ３１〜Ｒ５４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は上記式（６）で表される１価の基を示す。
但し、Ｒ３１〜Ｒ５４のうち少なくとも１つ以上は、上記式（６）で表される１価の基である。〕
Ｒ３１〜Ｒ５４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は上記式（６）で表される１価の基を示す。
但し、Ｒ３１〜Ｒ５４のうち少なくとも１つ以上は、上記式（６）で表される１価の基である。〕
式（Ｂ）、（Ｂ−２）、（５）、（６）中の各記号の定義は、Ｘ、Ｚ１及びＺ２における親水性基を含む１価の基が、これを誘導する−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ５５、−（Ｃ＝Ｏ）ＯＲ５６であること以外は、式（Ａ）、（Ａ−２）、（１）、（２）中の各記号の定義と同義である。Ｒ５５、Ｒ５６で示される炭化水素基としては、Ｒ２６〜Ｒ２８で示される炭化水素基と同様のものが挙げられるが、脂肪族炭化水素基が好ましく、アルキル基がより好ましい。
次に、本発明のイリジウム錯体の合成方法について説明する。
本発明のイリジウム錯体は、常法や文献（特開２００４−１６８７５６号公報、国際公開第２０１２／０５７１３９号パンフレット、J. Poly. Sci. Part A: Poly. Chem., 46, 7517-7533, 2008.等）を参考にして合成することができる。加水分解や縮合反応、保護反応、脱保護反応等を必要に応じて適宜組み合わせて行ってもよい。
本発明のイリジウム錯体を合成する具体的な方法としては、例えば、以下の方法１〜４が挙げられる。
方法１：式（２）で表される１価の基を置換基として有する２−フェニルピリジン、又は式（２）で表される１価の基及び炭素数１〜６のアルキル基を置換基として有する２−フェニルピリジン（以下、これらを「ピリジン誘導体α」とも総称する）を鈴木カップリング反応等により調製し、２−フェニルピリジンを配位子とする塩素架橋２核イリジウム錯体（[Ｉｒ（ｐｐｙ）２Ｃｌ]２）又は炭素数１〜６のアルキル基を置換基として有する２−フェニルピリジンを配位子とする塩素架橋２核イリジウム錯体に、ピリジン誘導体αを有機配位子として反応させる方法。
方法２：ピリジン誘導体αと塩化イリジウム・３水和物とを反応させ、得られた塩素架橋２核イリジウム錯体に、２−フェニルピリジンを有機配位子として反応させる方法。
方法３：ピリジン誘導体αと塩化イリジウム・３水和物とを反応させ、得られた塩素架橋２核イリジウム錯体に、ピリジン誘導体αを有機配位子として反応させる方法。
なお、方法１〜３で用いるピリジン誘導体αとしては、例えば、６−フェニルピリジン−３−イル）メタノール等が挙げられる。
本発明のイリジウム錯体は、常法や文献（特開２００４−１６８７５６号公報、国際公開第２０１２／０５７１３９号パンフレット、J. Poly. Sci. Part A: Poly. Chem., 46, 7517-7533, 2008.等）を参考にして合成することができる。加水分解や縮合反応、保護反応、脱保護反応等を必要に応じて適宜組み合わせて行ってもよい。
本発明のイリジウム錯体を合成する具体的な方法としては、例えば、以下の方法１〜４が挙げられる。
方法１：式（２）で表される１価の基を置換基として有する２−フェニルピリジン、又は式（２）で表される１価の基及び炭素数１〜６のアルキル基を置換基として有する２−フェニルピリジン（以下、これらを「ピリジン誘導体α」とも総称する）を鈴木カップリング反応等により調製し、２−フェニルピリジンを配位子とする塩素架橋２核イリジウム錯体（[Ｉｒ（ｐｐｙ）２Ｃｌ]２）又は炭素数１〜６のアルキル基を置換基として有する２−フェニルピリジンを配位子とする塩素架橋２核イリジウム錯体に、ピリジン誘導体αを有機配位子として反応させる方法。
方法２：ピリジン誘導体αと塩化イリジウム・３水和物とを反応させ、得られた塩素架橋２核イリジウム錯体に、２−フェニルピリジンを有機配位子として反応させる方法。
方法３：ピリジン誘導体αと塩化イリジウム・３水和物とを反応させ、得られた塩素架橋２核イリジウム錯体に、ピリジン誘導体αを有機配位子として反応させる方法。
なお、方法１〜３で用いるピリジン誘導体αとしては、例えば、６−フェニルピリジン−３−イル）メタノール等が挙げられる。
方法４：加水分解や縮合反応、脱保護反応等によって式（２）で表される１価の基に官能基変換（又は式（２）で表される１価の基を導入）できる基（以下、基βとも称する）を有する２−フェニルピリジン、又は基β及び炭素数１〜６のアルキル基を有する２−フェニルピリジン（以下、これらを「ピリジン誘導体γ」とも総称する）を鈴木カップリング反応等により調製し、ピリジン誘導体γを[Ｉｒ（ｐｐｙ）２Ｃｌ]２と反応させることで基βを有するイリジウム錯体（以下、「合成中間体δ」とも称する）を得て、この錯体に加水分解や縮合反応、脱保護反応等を行う方法。なお、方法４で用いるピリジン誘導体γとしては、２−（６−フェニルピリジン−３−イル）酢酸エチル等が挙げられる。
ここで、合成中間体δとしては、本発明の合成中間体が好ましく、式（５）で表されるイリジウム錯体がより好ましい。本発明の合成中間体は、本発明のイリジウム錯体の合成に有用な新規化合物である。本発明の合成中間体は、基βとしてエステル結合を有し、加水分解によって、カルボキシ基を親水性基として有するイリジウム錯体を誘導できる。また、この得られた錯体に、カルボキシ基以外の親水性基を有するアミン（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン、（２−アミノエチル）トリフェニルホスホニウム臭素塩等）を反応させることで、カルボキシ基以外の親水性基を有するイリジウム錯体を簡便に得ることもできる。
ここで、合成中間体δとしては、本発明の合成中間体が好ましく、式（５）で表されるイリジウム錯体がより好ましい。本発明の合成中間体は、本発明のイリジウム錯体の合成に有用な新規化合物である。本発明の合成中間体は、基βとしてエステル結合を有し、加水分解によって、カルボキシ基を親水性基として有するイリジウム錯体を誘導できる。また、この得られた錯体に、カルボキシ基以外の親水性基を有するアミン（例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン、（２−アミノエチル）トリフェニルホスホニウム臭素塩等）を反応させることで、カルボキシ基以外の親水性基を有するイリジウム錯体を簡便に得ることもできる。
そして、後記実施例に示すように、上記のようにして合成できる本発明のイリジウム錯体は、酸素濃度に依存して緑色りん光を発するものであり、酸素濃度が低いときに緑色りん光の強度や寿命が増大する。さらに、スフェロイド、平面培養細胞等の細胞内や生体組織内に移行しやすく、これら細胞内等の低酸素領域で強い緑色りん光を発するものである。
したがって、本発明のイリジウム錯体は、低酸素プローブ等の酸素濃度測定試薬として有用であり、酸素濃度測定方法に用いることができる。また、本発明のイリジウム錯体は、発現される緑色りん光が一般に使用されるフィルタを用いて観察できる色調であり、しかも、平面培養細胞内、スフェロイド内のいずれの酸素濃度測定にも用いることができるため、酸素濃度測定試薬として広範に利用することができる。また、本発明のイリジウム錯体は、細胞毒性が低い。
したがって、本発明のイリジウム錯体は、低酸素プローブ等の酸素濃度測定試薬として有用であり、酸素濃度測定方法に用いることができる。また、本発明のイリジウム錯体は、発現される緑色りん光が一般に使用されるフィルタを用いて観察できる色調であり、しかも、平面培養細胞内、スフェロイド内のいずれの酸素濃度測定にも用いることができるため、酸素濃度測定試薬として広範に利用することができる。また、本発明のイリジウム錯体は、細胞毒性が低い。
＜酸素濃度測定試薬＞
本発明の酸素濃度測定試薬は、本発明のイリジウム錯体を含むものである。
本発明のイリジウム錯体の含有量は、本発明の酸素濃度測定試薬中、通常０．００５〜５質量％であり、好ましくは０．０１〜１質量％である。
また、本発明の酸素濃度測定試薬は、溶剤等を含んでいてもよい。溶剤としては、ジメチルスルホキシド等のスルホキシド類；ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン等のアミド類；エタノール、メタノール等のアルコール類；アセトニトリル等のニトリル類等が挙げられ、これらのうち１種を単独で用いても２種以上を組み合わせて用いてもよい。
本発明の酸素濃度測定試薬は、本発明のイリジウム錯体を含むものである。
本発明のイリジウム錯体の含有量は、本発明の酸素濃度測定試薬中、通常０．００５〜５質量％であり、好ましくは０．０１〜１質量％である。
また、本発明の酸素濃度測定試薬は、溶剤等を含んでいてもよい。溶剤としては、ジメチルスルホキシド等のスルホキシド類；ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン等のアミド類；エタノール、メタノール等のアルコール類；アセトニトリル等のニトリル類等が挙げられ、これらのうち１種を単独で用いても２種以上を組み合わせて用いてもよい。
＜酸素濃度測定方法＞
本発明の酸素濃度測定方法は、本発明のイリジウム錯体を用いるものである。当該測定方法は、本発明のイリジウム錯体を用いる以外は特許文献１〜３等に記載の方法や常法と同様にして行えばよい。また、本発明のイリジウム錯体の使用量は、最終濃度で、通常０．０１〜１００μＭであり、好ましくは０．０５〜５０μＭである。
本発明の酸素濃度測定方法は、本発明のイリジウム錯体を用いるものである。当該測定方法は、本発明のイリジウム錯体を用いる以外は特許文献１〜３等に記載の方法や常法と同様にして行えばよい。また、本発明のイリジウム錯体の使用量は、最終濃度で、通常０．０１〜１００μＭであり、好ましくは０．０５〜５０μＭである。
本発明の酸素濃度測定方法としては、具体的には、測定対象と本発明のイリジウム錯体とを接触させる工程を含む方法が挙げられ、この接触を行った後、培養（通常１時間〜１４日間程度）を必要に応じて行い、りん光強度及び／又はりん光寿命を観察・測定すればよい。これによって、りん光が強いときやりん光寿命が長いときに酸素濃度が低いといった判定をすることや、酸素濃度とりん光強度との関係を求めておくことにより酸素濃度を定量的に測定することができる。
測定対象としては、細胞、生体組織が挙げられる。また、マウスやラット等の実験動物を用いてもよく、これにより酸素濃度が低下している部位を検出できる。これらの中でも、測定対象としては細胞が好ましい。細胞は、平面培養細胞、スフェロイド、浮遊細胞のいずれでもよく、また、株化培養細胞でも初代培養細胞でもよい。細胞としては、具体的には、がん細胞、卵子細胞、受精卵細胞、精子細胞、胚性幹細胞、ｉＰＳ細胞、成体幹細胞、造血幹細胞、組織幹細胞、線維芽細胞、フィーダー細胞、血管内皮細胞、骨髄（幹）細胞、歯髄（幹）細胞、免疫細胞、肝細胞、腎臓細胞、神経細胞、膵臓細胞、平滑筋細胞、心筋細胞、筋芽細胞、角膜細胞、網膜細胞、骨細胞、破骨細胞、軟骨細胞、軟骨前駆細胞、滑膜由来細胞、滑膜幹細胞、骨芽細胞、歯芽細胞、歯根膜細胞、口腔粘膜細胞、鼻粘膜細胞、間葉系幹細胞、脂肪細胞、脂肪幹細胞、上皮細胞、内皮細胞、筋細胞、表皮細胞、卵巣、赤血球、白血球、血小板、植物細胞等が挙げられる。
なお、スフェロイド内の酸素濃度を測定する具体的な方法としては、スフェロイドを形成可能な培養基材上で細胞と本発明のイリジウム錯体とを接触させ、この接触を行った後に培養を行う方法や、スフェロイドを形成可能な培養基材上でスフェロイドを形成させ、当該スフェロイドと本発明のイリジウム錯体とを接触させ、この接触を行った後に培養を行う方法等が挙げられる。
また、りん光強度及び／又はりん光寿命の観察・測定は、イリジウム錯体を励起してりん光を観察できるような蛍光顕微鏡、蛍光測定装置、蛍光イメージング装置等を用いて行えばよい。
そして、本発明の酸素濃度測定方法は、細胞内や生体組織内の酸素濃度のモニタリング、細胞内や生体組織内の酸素濃度に変化を及ぼす化合物のスクリーニング等に有用であり、共染色、多色イメージング等に用いることもできる。
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。なお、実施例における1Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、ＪＥＯＬ製ＪＮＭ−ＥＣＳ４００を用いて測定した（内部標準物質：テトラメチルシラン、溶媒：重クロロホルム（ＣＤＣｌ３）、重ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ−ｄ６））。
また、下記式で表されるイリジウム錯体（ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３）は、ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨより購入して使用した。なお、式中の窒素原子とイリジウム原子との間の実線は配位結合である。
また、下記式で表されるイリジウム錯体（ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３）は、ＳＩＧＭＡ−ＡＬＤＲＩＣＨより購入して使用した。なお、式中の窒素原子とイリジウム原子との間の実線は配位結合である。
〔実施例１〕
下記式で表されるイリジウム錯体（以下、「（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）」とも称する）を以下の合成経路に従って合成した。なお、（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）における式中の窒素原子とイリジウム原子との間の実線は配位結合である。
下記式で表されるイリジウム錯体（以下、「（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）」とも称する）を以下の合成経路に従って合成した。なお、（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）における式中の窒素原子とイリジウム原子との間の実線は配位結合である。
（１） （６−フェニルピリジン−３−イル）メタノールの合成
フェニルボロン酸（３．１ｇ，２５．４ｍｍｏｌ）、（６−クロロピリジン−３−イル）メタノール（３．４ｇ，２３．７ｍｍｏｌ）及びテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（１．１ｇ，０．９５ｍｍｏｌ）を、トルエン（７５ｍＬ）、エタノール（２５ｍＬ）及び２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）の混合液に加え、窒素ガス雰囲気下で６時間還流した。これを室温に冷却後、脱イオン水を加え、クロロホルムで抽出を行い、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：酢酸エチル）を用いて精製した（（６−フェニルピリジン−３−イル）メタノール，４．０ｇ，２１．６ｍｍｏｌ，９１％）。
1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.66(s, 1H), 7.99-7.98(d, 2H), 7.82-7.74(dd, 2H), 7.50-7.40(m, 3H), 4.77(s, 2H)
フェニルボロン酸（３．１ｇ，２５．４ｍｍｏｌ）、（６−クロロピリジン−３−イル）メタノール（３．４ｇ，２３．７ｍｍｏｌ）及びテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（１．１ｇ，０．９５ｍｍｏｌ）を、トルエン（７５ｍＬ）、エタノール（２５ｍＬ）及び２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）の混合液に加え、窒素ガス雰囲気下で６時間還流した。これを室温に冷却後、脱イオン水を加え、クロロホルムで抽出を行い、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：酢酸エチル）を用いて精製した（（６−フェニルピリジン−３−イル）メタノール，４．０ｇ，２１．６ｍｍｏｌ，９１％）。
1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.66(s, 1H), 7.99-7.98(d, 2H), 7.82-7.74(dd, 2H), 7.50-7.40(m, 3H), 4.77(s, 2H)
（２） （ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）の合成
[Ｉｒ（ｐｐｙ）２Ｃｌ]２（１．０９ｇ，１．０２ｍｍｏｌ）及び上記（１）で得た（６−フェニルピリジン−３−イル）メタノール（０．５５ｇ，２．９７ｍｍｏｌ）を２−エトキシエタノール（５０ｍＬ）に溶解させ、２０分間窒素バブリングを行った。その後、トリフルオロ酢酸銀（０．６８ｇ，３．０８ｍｍｏｌ）を素早く加え、窒素ガス雰囲気下１１０℃で溶液を１８時間撹拌した。これを室温に冷却後、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルムとメタノールの混液，クロロホルム：メタノール＝９６：４，ｖ／ｖ）を用いて精製した。さらにリサイクル型分取クロマトグラフィーを用いて精製した（（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ），０．４５ｇ，０．６５ｍｍｏｌ，３２％）。
1HNMR(400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.14-8.08 (m, 3H), 7.81-7.70 (m, 6H), 7.50-7.48 (d, 3H), 7.15-7.11 (t, 3H), 6.81-6.77 (m, 3H), 6.70-6.62 (m, 6H), 5.21-5.18 (t, 1H), 4.34-4.33 (d, 2H)
[Ｉｒ（ｐｐｙ）２Ｃｌ]２（１．０９ｇ，１．０２ｍｍｏｌ）及び上記（１）で得た（６−フェニルピリジン−３−イル）メタノール（０．５５ｇ，２．９７ｍｍｏｌ）を２−エトキシエタノール（５０ｍＬ）に溶解させ、２０分間窒素バブリングを行った。その後、トリフルオロ酢酸銀（０．６８ｇ，３．０８ｍｍｏｌ）を素早く加え、窒素ガス雰囲気下１１０℃で溶液を１８時間撹拌した。これを室温に冷却後、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルムとメタノールの混液，クロロホルム：メタノール＝９６：４，ｖ／ｖ）を用いて精製した。さらにリサイクル型分取クロマトグラフィーを用いて精製した（（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ），０．４５ｇ，０．６５ｍｍｏｌ，３２％）。
1HNMR(400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.14-8.08 (m, 3H), 7.81-7.70 (m, 6H), 7.50-7.48 (d, 3H), 7.15-7.11 (t, 3H), 6.81-6.77 (m, 3H), 6.70-6.62 (m, 6H), 5.21-5.18 (t, 1H), 4.34-4.33 (d, 2H)
〔実施例２〕
下記式で表されるイリジウム錯体（以下、「（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＣＯＯＨ）」とも称する）を以下の合成経路に従って合成した。なお、（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＣＯＯＨ）における式中の窒素原子とイリジウム原子との間の実線は配位結合である。
下記式で表されるイリジウム錯体（以下、「（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＣＯＯＨ）」とも称する）を以下の合成経路に従って合成した。なお、（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＣＯＯＨ）における式中の窒素原子とイリジウム原子との間の実線は配位結合である。
（１） ２−（６−フェニルピリジン−３−イル）酢酸エチルの合成
フェニルボロン酸（３．５ｇ，２８．７ｍｍｏｌ）、２−（６−クロロピリジン−３−イル）酢酸エチル（５．２ｇ，２６．１ｍｍｏｌ）及びテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（１．１ｇ，０．９５ｍｍｏｌ）を、シクロペンチルメチルエーテル（８０ｍＬ）及び２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（４０ｍＬ）の混合液に加え、窒素ガス雰囲気下で１５時間還流した。これを室温に冷却後、脱イオン水を加え、クロロホルムで抽出を行い、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム）を用いて精製した（２−（６−フェニルピリジン−３−イル）酢酸エチル，３．２ｇ，１３．３ｍｍｏｌ，５１％）。
1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.58(s, 1H), 7.97-7.95(d, 2H), 7.73-7.68(d, 2H), 7.50-7.40(m, 3H), 4.21-4.13(q, 2H), 3.67(s, 2H), 1.28-1.22(t, 3H)
フェニルボロン酸（３．５ｇ，２８．７ｍｍｏｌ）、２−（６−クロロピリジン−３−イル）酢酸エチル（５．２ｇ，２６．１ｍｍｏｌ）及びテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（１．１ｇ，０．９５ｍｍｏｌ）を、シクロペンチルメチルエーテル（８０ｍＬ）及び２Ｍ炭酸ナトリウム水溶液（４０ｍＬ）の混合液に加え、窒素ガス雰囲気下で１５時間還流した。これを室温に冷却後、脱イオン水を加え、クロロホルムで抽出を行い、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム）を用いて精製した（２−（６−フェニルピリジン−３−イル）酢酸エチル，３．２ｇ，１３．３ｍｍｏｌ，５１％）。
1HNMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.58(s, 1H), 7.97-7.95(d, 2H), 7.73-7.68(d, 2H), 7.50-7.40(m, 3H), 4.21-4.13(q, 2H), 3.67(s, 2H), 1.28-1.22(t, 3H)
（２） （ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＣＯＯＥｔ）の合成
２−フェニルピリジン（０．９８ｇ，６．３ｍｍｏｌ）及び塩化イリジウム・３水和物（１．０６ｇ，３ｍｍｏｌ）を、２−エトキシエタノール（１００ｍＬ）と水（３０ｍＬ）の混合液に懸濁させ、１５時間還流を行った。これを室温に冷却後、生成した黄色沈殿をろ別し、この固形物をメタノール及びヘキサンで洗浄し、[Ｉｒ（ｐｐｙ）２Ｃｌ]２を得た（１．４ｇ，１．３ｍｍｏｌ，８７％）。次いで、[Ｉｒ（ｐｐｙ）２Ｃｌ]２（０．５４ｇ，０．５０ｍｍｏｌ）及び上記（１）で得た２−（６−フェニルピリジン−３−イル）酢酸エチル（０．３５ｇ，１．４５ｍｍｏｌ）を２−エトキシエタノール（４０ｍＬ）に溶解させ、２０分間窒素バブリングを行った。その後、トリフルオロ酢酸銀（０．３４ｇ，１．５４ｍｍｏｌ）を素早く加え、窒素ガス雰囲気下１１０℃で溶液を１８時間撹拌した。これを室温に冷却後、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルムとメタノールの混液，クロロホルム：メタノール＝９８：２，ｖ／ｖ）を用いて精製した（（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＣＯＯＥｔ），０．３０ｇ，０．４０ｍｍｏｌ，４０％）。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.15-8.09 (m, 3H), 7.82-7.72 (m, 6H), 7.50-7.42 (m, 3H), 7.15-7.11 (t, 2H), 6.82-6.78 (t, 3H), 6.72-6.62 (m, 6H), 4.02-3.96 (q, 2H), 3.57 (s, 2H), 1.09-1.08(t, 3H)
２−フェニルピリジン（０．９８ｇ，６．３ｍｍｏｌ）及び塩化イリジウム・３水和物（１．０６ｇ，３ｍｍｏｌ）を、２−エトキシエタノール（１００ｍＬ）と水（３０ｍＬ）の混合液に懸濁させ、１５時間還流を行った。これを室温に冷却後、生成した黄色沈殿をろ別し、この固形物をメタノール及びヘキサンで洗浄し、[Ｉｒ（ｐｐｙ）２Ｃｌ]２を得た（１．４ｇ，１．３ｍｍｏｌ，８７％）。次いで、[Ｉｒ（ｐｐｙ）２Ｃｌ]２（０．５４ｇ，０．５０ｍｍｏｌ）及び上記（１）で得た２−（６−フェニルピリジン−３−イル）酢酸エチル（０．３５ｇ，１．４５ｍｍｏｌ）を２−エトキシエタノール（４０ｍＬ）に溶解させ、２０分間窒素バブリングを行った。その後、トリフルオロ酢酸銀（０．３４ｇ，１．５４ｍｍｏｌ）を素早く加え、窒素ガス雰囲気下１１０℃で溶液を１８時間撹拌した。これを室温に冷却後、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルムとメタノールの混液，クロロホルム：メタノール＝９８：２，ｖ／ｖ）を用いて精製した（（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＣＯＯＥｔ），０．３０ｇ，０．４０ｍｍｏｌ，４０％）。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.15-8.09 (m, 3H), 7.82-7.72 (m, 6H), 7.50-7.42 (m, 3H), 7.15-7.11 (t, 2H), 6.82-6.78 (t, 3H), 6.72-6.62 (m, 6H), 4.02-3.96 (q, 2H), 3.57 (s, 2H), 1.09-1.08(t, 3H)
（３） （ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＣＯＯＨ）の合成
上記（２）で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＣＯＯＥｔ）（２５０ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ）及び水酸化リチウム・１水和物（６０ｍｇ，１．４３ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）、エタノール（１０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）の混合液に溶解させ、８０℃で１５時間撹拌した。これを室温に冷却後、５Ｎ塩酸を加えて溶液のｐＨを約３にした。この溶液に脱イオン水を加え、クロロホルムで抽出を行い、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去した（（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＣＯＯＨ），２７８ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ，９８％）。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.18-8.08 (m, 3H), 7.78-7.70 (m, 6H), 7.50-7.42 (m, 3H), 7.14-7.10 (m, 2H), 6.82-6.75 (m, 3H), 6.70-6.60 (m, 6H), 3.46-3.42 (d, 2H)
上記（２）で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＣＯＯＥｔ）（２５０ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ）及び水酸化リチウム・１水和物（６０ｍｇ，１．４３ｍｍｏｌ）を、テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）、エタノール（１０ｍＬ）及び水（２０ｍＬ）の混合液に溶解させ、８０℃で１５時間撹拌した。これを室温に冷却後、５Ｎ塩酸を加えて溶液のｐＨを約３にした。この溶液に脱イオン水を加え、クロロホルムで抽出を行い、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去した（（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＣＯＯＨ），２７８ｍｇ，０．３９ｍｍｏｌ，９８％）。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.18-8.08 (m, 3H), 7.78-7.70 (m, 6H), 7.50-7.42 (m, 3H), 7.14-7.10 (m, 2H), 6.82-6.75 (m, 3H), 6.70-6.60 (m, 6H), 3.46-3.42 (d, 2H)
〔実施例３〕
下記式で表されるイリジウム錯体（以下、「（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＤＭ）」とも称する）を以下の合成経路に従って合成した。なお、（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＤＭ）における式中の窒素原子とイリジウム原子との間の実線は配位結合である。
下記式で表されるイリジウム錯体（以下、「（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＤＭ）」とも称する）を以下の合成経路に従って合成した。なお、（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＤＭ）における式中の窒素原子とイリジウム原子との間の実線は配位結合である。
実施例２で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＣＯＯＨ）（７４ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（８０ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）及びＨＯＢＴ（２６ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）を、乾燥ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）に溶解させた。この溶液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチレンジアミン（１００μＬ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１７０μＬ）を加えて室温で１５時間撹拌した。その後、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去し減圧乾固させた。得られた粗生成物をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルムとメタノールの混液，クロロホルム：メタノール＝９８：２，ｖ／ｖ）を用いて精製した（（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＤＭ），５０ｍｇ，０．６３ｍｍｏｌ，６３％）。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.13-8.11 (d, 2H), 8.09-8.07 (d, 1H), 7.94-7.92 (t, 1H), 7.80-7.68 (m, 6H), 7.49-7.45 (t, 3H), 7.39 (s, 1H), 7.14-7.11 (t, 2H), 6.82-6.76 (m, 3H), 6.70-6.60 (m, 6H), 3.27 (s, 2H), 3.07-3.03 (m, 2H), 2.20-2.18 (m, 2H), 2.10, (s, 6H)
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.13-8.11 (d, 2H), 8.09-8.07 (d, 1H), 7.94-7.92 (t, 1H), 7.80-7.68 (m, 6H), 7.49-7.45 (t, 3H), 7.39 (s, 1H), 7.14-7.11 (t, 2H), 6.82-6.76 (m, 3H), 6.70-6.60 (m, 6H), 3.27 (s, 2H), 3.07-3.03 (m, 2H), 2.20-2.18 (m, 2H), 2.10, (s, 6H)
〔実施例４〕
下記式で表されるイリジウム錯体（以下、「（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＴＰＰ）」とも称する）を以下の合成経路に従って合成した。なお、（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＴＰＰ）における式中の窒素原子とイリジウム原子との間の実線は配位結合である。
下記式で表されるイリジウム錯体（以下、「（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＴＰＰ）」とも称する）を以下の合成経路に従って合成した。なお、（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＴＰＰ）における式中の窒素原子とイリジウム原子との間の実線は配位結合である。
実施例２で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＣＯＯＨ）（７４ｍｇ，０．１ｍｍｏｌ）、ＨＡＴＵ（７５ｍｇ，０．２０ｍｍｏｌ）及びＨＯＢＴ（１９ｍｇ，０．１４ｍｍｏｌ）を、乾燥ジメチルホルムアミド（２ｍＬ）に溶解させた。この溶液に、（２−アミノエチル）トリフェニルホスホニウム臭素塩（７８ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（１７０μＬ）を加えて室温で１５時間撹拌した。その後、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去し減圧乾固させた。得られた粗生成物をアミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルムとメタノールの混液，クロロホルム：メタノール＝９８：２，ｖ／ｖ）を用いて精製した（（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＴＰＰ），４０ｍｇ，０．３７ｍｍｏｌ，３７％）。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.42-8.40 (t, 1H), 8.15-8.13 (d, 1H), 8.08-8.04 (d, 2H), 7.88-7.62 (m, 21H), 7.48-7.44 (d, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.11-7.07 (m, 2H), 6.72-6.76 (m, 3H), 6.70-6.60 (m, 6H), 3.70-3.64 (q, 2H), 3.19-3.17(d, 2H)
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.42-8.40 (t, 1H), 8.15-8.13 (d, 1H), 8.08-8.04 (d, 2H), 7.88-7.62 (m, 21H), 7.48-7.44 (d, 2H), 7.36 (s, 1H), 7.11-7.07 (m, 2H), 6.72-6.76 (m, 3H), 6.70-6.60 (m, 6H), 3.70-3.64 (q, 2H), 3.19-3.17(d, 2H)
〔実施例５〕
下記式で表されるイリジウム錯体（以下、「（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）３Ｉｒ」とも称する）を以下の合成経路に従って合成した。なお、（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）３Ｉｒにおける式中の窒素原子とイリジウム原子との間の実線は配位結合である。
下記式で表されるイリジウム錯体（以下、「（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）３Ｉｒ」とも称する）を以下の合成経路に従って合成した。なお、（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）３Ｉｒにおける式中の窒素原子とイリジウム原子との間の実線は配位結合である。
（６−フェニルピリジン−３−イル）メタノール（０．４１ｇ，２．２ｍｍｏｌ）及び塩化イリジウム・３水和物（０．３５ｇ，１ｍｍｏｌ）を、２−エトキシエタノール（３０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）の混合液に懸濁させ、１５時間還流を行った。これを室温に冷却後、生成した沈殿をろ別し、この固形物をメタノール及びヘキサンで洗浄し、［Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）２Ｃｌ］２を得た（０．４８ｇ，０．４ｍｍｏｌ，８０％）。［Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）２Ｃｌ］２（０．６ｇ，０．５０ｍｍｏｌ）及び（６−フェニルピリジン−３−イル）メタノール（０．４ｇ，１．６６ｍｍｏｌ）を２−エトキシエタノール（５０ｍＬ）に溶解させ、２０分間窒素バブリングを行った。その後、トリフルオロ酢酸銀（０．３６ｇ，１．６４ｍｍｏｌ）を素早く加え、窒素ガス雰囲気下１１０℃で溶液を１８時間撹拌した。これを室温に冷却後、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去した。得られた粗生成物をジオールシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルムとメタノールの混液，クロロホルム：メタノール＝９８：２，ｖ／ｖ）を用いて精製した。さらにリサイクル型分取クロマトグラフィーを用いて精製した（（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）３Ｉｒ，１００ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ，１３％）。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.11-8.09 (d, 3H), 7.74-7.70 (t, 6H), 7.51-7.50 (d, 2H), 7.48 (s, 1H), 6.81-6.87 (m, 3H), 6.70-6.60 (m, 6H), 5.22-5.20 (q, 3H), 4.37-4.35 (d, 1H), 4.34-4.33 (d, 2H)
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.11-8.09 (d, 3H), 7.74-7.70 (t, 6H), 7.51-7.50 (d, 2H), 7.48 (s, 1H), 6.81-6.87 (m, 3H), 6.70-6.60 (m, 6H), 5.22-5.20 (q, 3H), 4.37-4.35 (d, 1H), 4.34-4.33 (d, 2H)
〔実施例６〕
下記式で表されるイリジウム錯体（以下、「（ｐｐｙ）Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）２」とも称する）を以下の合成経路に従って合成した。なお、（ｐｐｙ）Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）２における式中の窒素原子とイリジウム原子との間の実線は配位結合である。
下記式で表されるイリジウム錯体（以下、「（ｐｐｙ）Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）２」とも称する）を以下の合成経路に従って合成した。なお、（ｐｐｙ）Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）２における式中の窒素原子とイリジウム原子との間の実線は配位結合である。
[Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）２Ｃｌ]２（０．６９ｇ，０．５８ｍｍｏｌ）及び２−フェニルピリジン（０．２７ｇ，１．７５ｍｍｏｌ）を２−エトキシエタノール（５０ｍＬ）に溶解させ、２０分間窒素バブリングを行った。その後、トリフルオロ酢酸銀（０．４２ｇ，１．９０ｍｍｏｌ）を素早く加え、窒素ガス雰囲気下１１０℃で溶液を１８時間撹拌した。これを室温に冷却後、ロータリーエバポレーターを用いて溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルムとメタノールの混液，クロロホルム：メタノール＝９６：４，ｖ／ｖ）を用いて精製した。さらにリサイクル型分取クロマトグラフィーを用いて精製した（（ｐｐｙ）Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）２，１５０ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ，１８％）。
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.13-8.07 (m, 3H), 7.79-7.70 (m, 6H), 7.50-7.48 (d, 3H), 7.15-7.12 (t, 1H), 6.71-6.77 (3H), 6.70-6.60 (m, 6H), 5.22-5.20 (t, 2H), 4.34-4.33 (d, 4H)
1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 8.13-8.07 (m, 3H), 7.79-7.70 (m, 6H), 7.50-7.48 (d, 3H), 7.15-7.12 (t, 1H), 6.71-6.77 (3H), 6.70-6.60 (m, 6H), 5.22-5.20 (t, 2H), 4.34-4.33 (d, 4H)
〔試験例１ 吸収スペクトル及びりん光スペクトル〕
ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３、実施例１〜５で得たイリジウム錯体の吸収スペクトル及びりん光スペクトルを以下の条件で測定した。結果を図１−１、図１−２に示す。
（吸収スペクトル測定条件）
装置：紫外可視分光光度計（Ｊａｓｃｏ製Ｕｂｅｓｔ−Ｖ５５０）
溶媒：アセトニトリル（空気飽和下）
測定温度：２２℃
（りん光スペクトル測定条件）
装置：蛍光光度計（浜松ホトニクス製Ｃ１００２７−０１）、絶対発光量子収率測定装置（浜松ホトニクス製Ｃ９９２０−０１）、蛍光寿命計（浜松ホトニクス製Ｃ１１３６７）
溶媒：アセトニトリル（真空脱気、空気飽和下）
測定温度：２２℃
ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３、実施例１〜５で得たイリジウム錯体の吸収スペクトル及びりん光スペクトルを以下の条件で測定した。結果を図１−１、図１−２に示す。
（吸収スペクトル測定条件）
装置：紫外可視分光光度計（Ｊａｓｃｏ製Ｕｂｅｓｔ−Ｖ５５０）
溶媒：アセトニトリル（空気飽和下）
測定温度：２２℃
（りん光スペクトル測定条件）
装置：蛍光光度計（浜松ホトニクス製Ｃ１００２７−０１）、絶対発光量子収率測定装置（浜松ホトニクス製Ｃ９９２０−０１）、蛍光寿命計（浜松ホトニクス製Ｃ１１３６７）
溶媒：アセトニトリル（真空脱気、空気飽和下）
測定温度：２２℃
図１−１、図１−２に示すとおり、実施例１〜５で得たイリジウム錯体は、ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３と非常によく似た吸収スペクトル、りん光スペクトルを示した。特に、実施例１〜５で得たイリジウム錯体は、りん光極大波長が５１０〜５４０ｎｍ付近にあり、ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３と同様の緑色りん光を発することがわかった。
〔試験例２ 光物理特性〕
ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３、実施例１〜６で得たイリジウム錯体をアセトニトリルにそれぞれ溶解させ、絶対発光量子収率測定装置（浜松ホトニクス製Ｃ９９２０−０１）及び蛍光寿命計（浜松ホトニクス製Ｃ１１３６７）を使用し真空脱気下又は空気飽和下で、真空脱気下のりん光寿命（τｐ ０ （μｓ））、空気飽和下のりん光寿命（τｐ （ｎｓ））、真空脱気下のりん光量子収率（Φｐ ０）、空気飽和下のりん光量子収率（Φｐ）をそれぞれ測定した。そして、真空脱気下のりん光寿命と空気飽和下のりん光寿命からτｐ ０／τｐを算出し、真空脱気下のりん光量子収率と空気飽和下のりん光量子収率からΦｐ ０／Φｐを算出した。
結果を表１に示す。なお、τｐ ０／τｐ又はΦｐ ０／Φｐの値が５を超えていれば低酸素応答性は概ね充分といえる。
ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３、実施例１〜６で得たイリジウム錯体をアセトニトリルにそれぞれ溶解させ、絶対発光量子収率測定装置（浜松ホトニクス製Ｃ９９２０−０１）及び蛍光寿命計（浜松ホトニクス製Ｃ１１３６７）を使用し真空脱気下又は空気飽和下で、真空脱気下のりん光寿命（τｐ ０ （μｓ））、空気飽和下のりん光寿命（τｐ （ｎｓ））、真空脱気下のりん光量子収率（Φｐ ０）、空気飽和下のりん光量子収率（Φｐ）をそれぞれ測定した。そして、真空脱気下のりん光寿命と空気飽和下のりん光寿命からτｐ ０／τｐを算出し、真空脱気下のりん光量子収率と空気飽和下のりん光量子収率からΦｐ ０／Φｐを算出した。
結果を表１に示す。なお、τｐ ０／τｐ又はΦｐ ０／Φｐの値が５を超えていれば低酸素応答性は概ね充分といえる。
表１に示すとおり、実施例１〜６で得たイリジウム錯体は、ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３と同様にτｐ ０／τｐ、Φｐ ０／Φｐの値が大きく、低酸素応答性が良好だった。
〔試験例３ 細胞内移行性（スフェロイド内移行性）〕
ＨＴ２９細胞（１．２×１０６個）と１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地１０ｍＬを混合して細胞懸濁液を調製した。次いで、３次元培養プレート（ＳＣＩＶＡＸライフサイエンス社製ＮＣＰ−ＬＨ３８４）のウェルに、細胞数が３，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように上記細胞懸濁液を添加し、５％炭酸ガス雰囲気下、３７℃で６日間培養した。その後、ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３を５．０μＭの最終濃度でウェルに添加し、ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３の添加から２４時間経過後、ＮｅｘＣｅｌｏｍｅ社製Ｃｅｌｉｇｏ（蛍光チャネル：Ｇｒｅｅｎ）を用いてりん光顕微画像を撮影し（ｅｘ／ｅｍ：４８３ｎｍ／５３６ｎｍ、露光時間：１００００μｓ）、スフェロイド内移行性を確認した。
また、実施例１〜４で得たイリジウム錯体についても、上記と同様の操作を行い、スフェロイド内移行性を確認した。さらに、実施例１〜４で得たイリジウム錯体については最終濃度１０．０μＭの試験も行った。
結果を図２−１〜図２−５に示す。なお、スフェロイドのサイズは約１００μｍになっていた。
ＨＴ２９細胞（１．２×１０６個）と１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地１０ｍＬを混合して細胞懸濁液を調製した。次いで、３次元培養プレート（ＳＣＩＶＡＸライフサイエンス社製ＮＣＰ−ＬＨ３８４）のウェルに、細胞数が３，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように上記細胞懸濁液を添加し、５％炭酸ガス雰囲気下、３７℃で６日間培養した。その後、ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３を５．０μＭの最終濃度でウェルに添加し、ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３の添加から２４時間経過後、ＮｅｘＣｅｌｏｍｅ社製Ｃｅｌｉｇｏ（蛍光チャネル：Ｇｒｅｅｎ）を用いてりん光顕微画像を撮影し（ｅｘ／ｅｍ：４８３ｎｍ／５３６ｎｍ、露光時間：１００００μｓ）、スフェロイド内移行性を確認した。
また、実施例１〜４で得たイリジウム錯体についても、上記と同様の操作を行い、スフェロイド内移行性を確認した。さらに、実施例１〜４で得たイリジウム錯体については最終濃度１０．０μＭの試験も行った。
結果を図２−１〜図２−５に示す。なお、スフェロイドのサイズは約１００μｍになっていた。
この結果、ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３はスフェロイド内への移行性に劣るものであることが判明した（図２−１）。
これに対し、実施例１〜４で得たイリジウム錯体については、スフェロイド内への移行が確認された（図２−２〜図２−５）。
特に、実施例１で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）、実施例２で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＣＯＯＨ）は、５．０μＭ、１０．０μＭいずれの濃度でも非常に高い移行性を示した（図２−２、図２−３）。また、実施例１で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）は、バックグラウンドの上昇もみられなかった（図２−２）。
これに対し、実施例１〜４で得たイリジウム錯体については、スフェロイド内への移行が確認された（図２−２〜図２−５）。
特に、実施例１で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）、実施例２で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＣＯＯＨ）は、５．０μＭ、１０．０μＭいずれの濃度でも非常に高い移行性を示した（図２−２、図２−３）。また、実施例１で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）は、バックグラウンドの上昇もみられなかった（図２−２）。
〔試験例４ 細胞内移行性（平面培養細胞内移行性）〕
ＨｅＬａ細胞と１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地４ｍＬを混合して細胞懸濁液を調製した。次いで、平面培養シャーレ（グライナー社製４区画シャーレ）のウェルに上記細胞懸濁液を添加した。次に、実施例１で得たイリジウム錯体を５００ｎＭの最終濃度でウェルに添加し、常酸素条件下（酸素濃度：２１体積％）、３７℃で２時間培養した。その後、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地、ＤＭＥＭ培地（ＦＢＳ（−））でそれぞれ２回ずつ洗浄し、オリンパス社製ＩＸ−７１及びＰＨＯＴＯＭＥＴＲＩＣＳ社製Ｅｖｏｌｖｅ５１２を用いてりん光顕微画像を撮影し（励起波長：４５０〜５００ｎｍ、観測波長：５１５〜５６５ｎｍ、対物レンズ×１００）、平面培養細胞内移行性を確認した。
また、実施例２〜４で得たイリジウム錯体についても、上記と同様の操作を行い、平面培養細胞内移行性を確認した。
結果を図３に示す。
ＨｅＬａ細胞と１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地４ｍＬを混合して細胞懸濁液を調製した。次いで、平面培養シャーレ（グライナー社製４区画シャーレ）のウェルに上記細胞懸濁液を添加した。次に、実施例１で得たイリジウム錯体を５００ｎＭの最終濃度でウェルに添加し、常酸素条件下（酸素濃度：２１体積％）、３７℃で２時間培養した。その後、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地、ＤＭＥＭ培地（ＦＢＳ（−））でそれぞれ２回ずつ洗浄し、オリンパス社製ＩＸ−７１及びＰＨＯＴＯＭＥＴＲＩＣＳ社製Ｅｖｏｌｖｅ５１２を用いてりん光顕微画像を撮影し（励起波長：４５０〜５００ｎｍ、観測波長：５１５〜５６５ｎｍ、対物レンズ×１００）、平面培養細胞内移行性を確認した。
また、実施例２〜４で得たイリジウム錯体についても、上記と同様の操作を行い、平面培養細胞内移行性を確認した。
結果を図３に示す。
この結果、実施例１〜４で得たイリジウム錯体は平面培養細胞内への移行性を有することが確認された。また、発光顕微画像の形態解析から、実施例１及び２で得たイリジウム錯体は小胞体に局在し、実施例３で得たイリジウム錯体はリソソームに局在し、実施例４で得たイリジウム錯体はミトコンドリアに局在することがわかった。
〔試験例５ 平面培養細胞内りん光強度〕
ＨｅＬａ細胞（４．５×１０６個）と１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地１５ｍＬを混合して細胞懸濁液を調製した。次いで、平面培養プレート（グライナー社製９６穴ブラックプレート）のウェルに、細胞数が３．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように上記細胞懸濁液を添加した。次に、実施例１で得たイリジウム錯体を５００ｎＭの最終濃度でウェルに添加し、常酸素条件下（酸素濃度：２１体積％）、３７℃で２時間培養した。その後、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地、ＤＭＥＭ培地（ＦＢＳ（−））でそれぞれ２回ずつ洗浄し、Ｔｅｃａｎ社製Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｐｒｏ ２００を用いてりん光強度測定を実施した（励起波長：４５０ｎｍ、観測波長：５３０ｎｍ）。
また、実施例２〜４で得たイリジウム錯体についても、上記と同様の操作を行い、平面培養細胞内りん光強度を測定した。
その結果、実施例１、２、３で得たイリジウム錯体はりん光強度が特に強く、実施例４で得たイリジウム錯体の約３．７倍（実施例１）、約２．６倍（実施例２）、約１２．２倍（実施例３）のりん光強度を示した。
ＨｅＬａ細胞（４．５×１０６個）と１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地１５ｍＬを混合して細胞懸濁液を調製した。次いで、平面培養プレート（グライナー社製９６穴ブラックプレート）のウェルに、細胞数が３．０×１０４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように上記細胞懸濁液を添加した。次に、実施例１で得たイリジウム錯体を５００ｎＭの最終濃度でウェルに添加し、常酸素条件下（酸素濃度：２１体積％）、３７℃で２時間培養した。その後、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地、ＤＭＥＭ培地（ＦＢＳ（−））でそれぞれ２回ずつ洗浄し、Ｔｅｃａｎ社製Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｐｒｏ ２００を用いてりん光強度測定を実施した（励起波長：４５０ｎｍ、観測波長：５３０ｎｍ）。
また、実施例２〜４で得たイリジウム錯体についても、上記と同様の操作を行い、平面培養細胞内りん光強度を測定した。
その結果、実施例１、２、３で得たイリジウム錯体はりん光強度が特に強く、実施例４で得たイリジウム錯体の約３．７倍（実施例１）、約２．６倍（実施例２）、約１２．２倍（実施例３）のりん光強度を示した。
〔試験例６ 平面培養細胞内低酸素応答性〕
実施例１、３で得たイリジウム錯体について、平面培養細胞内低酸素応答性を確認した。
すなわち、試験例５におけるりん光強度の測定を行った後に、実施例１、３で得たイリジウム錯体を添加したＨｅＬａ細胞を、酸素濃度１０体積％、３７℃で２時間更に培養し、Ｔｅｃａｎ社製Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｐｒｏ ２００を用いてりん光強度を求めた（ｅｘ／ｅｍ：４５０ｎｍ／５３０ｎｍ）。次に、酸素濃度２．５体積％、３７℃で２時間更に培養し、Ｔｅｃａｎ社製Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｐｒｏ ２００を用いてりん光強度を求めた（ｅｘ／ｅｍ：４５０ｎｍ／５３０ｎｍ）。その後、試験例５で求めたりん光強度（常酸素条件下（酸素濃度：２１体積％））を１００％として、酸素濃度１０体積％、酸素濃度２．５体積％で培養した後のりん光強度の相対値をそれぞれ算出した。
結果を表２に示す。
実施例１、３で得たイリジウム錯体について、平面培養細胞内低酸素応答性を確認した。
すなわち、試験例５におけるりん光強度の測定を行った後に、実施例１、３で得たイリジウム錯体を添加したＨｅＬａ細胞を、酸素濃度１０体積％、３７℃で２時間更に培養し、Ｔｅｃａｎ社製Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｐｒｏ ２００を用いてりん光強度を求めた（ｅｘ／ｅｍ：４５０ｎｍ／５３０ｎｍ）。次に、酸素濃度２．５体積％、３７℃で２時間更に培養し、Ｔｅｃａｎ社製Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｐｒｏ ２００を用いてりん光強度を求めた（ｅｘ／ｅｍ：４５０ｎｍ／５３０ｎｍ）。その後、試験例５で求めたりん光強度（常酸素条件下（酸素濃度：２１体積％））を１００％として、酸素濃度１０体積％、酸素濃度２．５体積％で培養した後のりん光強度の相対値をそれぞれ算出した。
結果を表２に示す。
〔試験例７ 細胞毒性〕
ＨＴ２９細胞又はＰＡＮＣ−１細胞（１．２×１０６個）と１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地１０ｍＬを混合して細胞懸濁液を調製した。次いで、３次元培養プレート（ＳＣＩＶＡＸライフサイエンス社製ＮＣＰ−ＬＨ３８４）のウェルに、細胞数が３，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように上記細胞懸濁液を添加した。次に、ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３を０．５μＭ又は５．０μＭの最終濃度でウェルに添加し、５％炭酸ガス雰囲気下、３７℃で７日間培養した。その後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標） Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙを使用し、このキットのプロトコルに従って、イリジウム錯体を添加していないネガティブコントロールに対する細胞生存率を求めた。
また、実施例１、２、５で得たイリジウム錯体についても、上記と同様の操作を行い、細胞生存率を求めた。
結果を表３〜６に示す。
ＨＴ２９細胞又はＰＡＮＣ−１細胞（１．２×１０６個）と１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地１０ｍＬを混合して細胞懸濁液を調製した。次いで、３次元培養プレート（ＳＣＩＶＡＸライフサイエンス社製ＮＣＰ−ＬＨ３８４）のウェルに、細胞数が３，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように上記細胞懸濁液を添加した。次に、ｆａｃ−Ｉｒ（ｐｐｙ）３を０．５μＭ又は５．０μＭの最終濃度でウェルに添加し、５％炭酸ガス雰囲気下、３７℃で７日間培養した。その後、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標） Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙを使用し、このキットのプロトコルに従って、イリジウム錯体を添加していないネガティブコントロールに対する細胞生存率を求めた。
また、実施例１、２、５で得たイリジウム錯体についても、上記と同様の操作を行い、細胞生存率を求めた。
結果を表３〜６に示す。
〔試験例８ スフェロイド内りん光強度〕
Ａ５４９細胞（１．２×１０６個）と１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地１０ｍＬを混合して細胞懸濁液を調製した。次いで、３次元培養プレート（ＳＣＩＶＡＸライフサイエンス社製ＮＣＰ−ＬＨ３８４）のウェルに、細胞数が３，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように上記細胞懸濁液を添加し、５％炭酸ガス雰囲気下、３７℃で６日間培養した。その後、実施例１で得たイリジウム錯体を、１．０μＭ、２．０μＭ、５．０μＭ、７．５μＭ又は１０．０μＭの最終濃度でウェルに添加し、イリジウム錯体の添加から２４時間経過後、ＮｅｘＣｅｌｏｍｅ社製Ｃｅｌｉｇｏ（蛍光チャネル：Ｇｒｅｅｎ）を用いてりん光顕微画像を撮影し（ｅｘ／ｅｍ：５３１ｎｍ／６２９ｎｍ、露光時間：１００００μｓ）、ＮｅｘＣｅｌｏｍｅ社製Ｃｅｌｉｇｏの解析プログラムを使用して、直径４０〜１１０μｍの範囲のスフェロイド、直径１〜４０μｍの範囲のスフェロイドについて、スフェロイド内りん光強度をそれぞれ数値化した。
また、実施例５で得たイリジウム錯体を用いて上記と同様の操作を行い、直径４０〜１１０μｍの範囲のスフェロイド、直径１〜４０μｍの範囲のスフェロイドについて、スフェロイド内りん光強度をそれぞれ数値化した。
直径４０〜１１０μｍの範囲のスフェロイドについて解析した結果を図４−１に示し、直径１〜４０μｍの範囲のスフェロイドについて解析した結果を図４−２に示す。
なお、図４−１、図４−２の縦軸Ｔｏｔａｌ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙは、スフェロイドの個数とＩｎｔｅｎｓｉｔｙとの積である（ｎ＝２の平均値）。
Ａ５４９細胞（１．２×１０６個）と１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地１０ｍＬを混合して細胞懸濁液を調製した。次いで、３次元培養プレート（ＳＣＩＶＡＸライフサイエンス社製ＮＣＰ−ＬＨ３８４）のウェルに、細胞数が３，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように上記細胞懸濁液を添加し、５％炭酸ガス雰囲気下、３７℃で６日間培養した。その後、実施例１で得たイリジウム錯体を、１．０μＭ、２．０μＭ、５．０μＭ、７．５μＭ又は１０．０μＭの最終濃度でウェルに添加し、イリジウム錯体の添加から２４時間経過後、ＮｅｘＣｅｌｏｍｅ社製Ｃｅｌｉｇｏ（蛍光チャネル：Ｇｒｅｅｎ）を用いてりん光顕微画像を撮影し（ｅｘ／ｅｍ：５３１ｎｍ／６２９ｎｍ、露光時間：１００００μｓ）、ＮｅｘＣｅｌｏｍｅ社製Ｃｅｌｉｇｏの解析プログラムを使用して、直径４０〜１１０μｍの範囲のスフェロイド、直径１〜４０μｍの範囲のスフェロイドについて、スフェロイド内りん光強度をそれぞれ数値化した。
また、実施例５で得たイリジウム錯体を用いて上記と同様の操作を行い、直径４０〜１１０μｍの範囲のスフェロイド、直径１〜４０μｍの範囲のスフェロイドについて、スフェロイド内りん光強度をそれぞれ数値化した。
直径４０〜１１０μｍの範囲のスフェロイドについて解析した結果を図４−１に示し、直径１〜４０μｍの範囲のスフェロイドについて解析した結果を図４−２に示す。
なお、図４−１、図４−２の縦軸Ｔｏｔａｌ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙは、スフェロイドの個数とＩｎｔｅｎｓｉｔｙとの積である（ｎ＝２の平均値）。
この結果、図４−１では、実施例５で得た（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）３Ｉｒは、実施例１で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）の約３倍のりん光強度を示しており、実施例５で得た（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）３Ｉｒは大きいサイズのスフェロイドに移行しやすいことがわかった。
〔試験例９ 低酸素領域検出能〕
実施例１で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）の低酸素領域検出能を、市販の低酸素プローブ（ＳＣＩＶＡＸライフサイエンス社製ＬＯＸ−１）と比較した。なお、ＳＣＩＶＡＸライフサイエンス社製ＬＯＸ−１は、赤色りん光を発するイリジウム錯体を含有する低酸素プローブである。
すなわち、ＨＴ２９細胞又はＰＡＮＣ−１細胞（１．２×１０６個）と１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地１０ｍＬを混合して細胞懸濁液を調製した。次いで、３次元培養プレート（ＳＣＩＶＡＸライフサイエンス社製ＮＣＰ−ＬＨ３８４）のウェルに、細胞数が３，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように上記細胞懸濁液を添加し、５％炭酸ガス雰囲気下、３７℃で６日間培養した。その後、実施例１で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）とＬＯＸ−１をそれぞれ２．５μＭの最終濃度でウェルに添加し、当該添加から２４時間経過後、ＮｅｘＣｅｌｏｍｅ社製Ｃｅｌｉｇｏを用いて以下の条件でりん光顕微画像を撮影した。
（（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）のりん光顕微画像撮影条件）
蛍光チャネル：Ｇｒｅｅｎ、ｅｘ／ｅｍ：４８３ｎｍ／５３６ｎｍ、露光時間：４０００μｓ
（ＬＯＸ−１のりん光顕微画像撮影条件）
蛍光チャネル：Ｒｅｄ、ｅｘ／ｅｍ：５３１ｎｍ／６２９ｎｍ、露光時間：４００００μｓ
実施例１で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）によるＨＴ２９細胞の低酸素領域検出結果を図５−１に示し、ＬＯＸ−１によるＨＴ２９細胞の低酸素領域検出結果を図５−２に示す。
また、実施例１で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）によるＰＡＮＣ−１細胞の低酸素領域検出結果を図５−３に示し、ＬＯＸ−１によるＰＡＮＣ−１細胞の低酸素領域検出結果を図５−４に示す。
実施例１で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）の低酸素領域検出能を、市販の低酸素プローブ（ＳＣＩＶＡＸライフサイエンス社製ＬＯＸ−１）と比較した。なお、ＳＣＩＶＡＸライフサイエンス社製ＬＯＸ−１は、赤色りん光を発するイリジウム錯体を含有する低酸素プローブである。
すなわち、ＨＴ２９細胞又はＰＡＮＣ−１細胞（１．２×１０６個）と１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地１０ｍＬを混合して細胞懸濁液を調製した。次いで、３次元培養プレート（ＳＣＩＶＡＸライフサイエンス社製ＮＣＰ−ＬＨ３８４）のウェルに、細胞数が３，０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌとなるように上記細胞懸濁液を添加し、５％炭酸ガス雰囲気下、３７℃で６日間培養した。その後、実施例１で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）とＬＯＸ−１をそれぞれ２．５μＭの最終濃度でウェルに添加し、当該添加から２４時間経過後、ＮｅｘＣｅｌｏｍｅ社製Ｃｅｌｉｇｏを用いて以下の条件でりん光顕微画像を撮影した。
（（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）のりん光顕微画像撮影条件）
蛍光チャネル：Ｇｒｅｅｎ、ｅｘ／ｅｍ：４８３ｎｍ／５３６ｎｍ、露光時間：４０００μｓ
（ＬＯＸ−１のりん光顕微画像撮影条件）
蛍光チャネル：Ｒｅｄ、ｅｘ／ｅｍ：５３１ｎｍ／６２９ｎｍ、露光時間：４００００μｓ
実施例１で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）によるＨＴ２９細胞の低酸素領域検出結果を図５−１に示し、ＬＯＸ−１によるＨＴ２９細胞の低酸素領域検出結果を図５−２に示す。
また、実施例１で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）によるＰＡＮＣ−１細胞の低酸素領域検出結果を図５−３に示し、ＬＯＸ−１によるＰＡＮＣ−１細胞の低酸素領域検出結果を図５−４に示す。
この結果、実施例１で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）が低酸素プローブとして有用であることが確認された。
〔試験例１０ 細胞内多色イメージング〕
ＨｅＬａ細胞と１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地４ｍＬを混合して細胞懸濁液を調製した。次いで、平面培養シャーレ（グライナー社製４区画シャーレ）のウェルに上記細胞懸濁液を添加した。次に、実施例１で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）と下記式で表されるＢＴＰＤＭ１（赤色りん光を発し、リソソームに局在化するイリジウム錯体）をそれぞれ５００ｎＭの最終濃度でウェルに添加し、常酸素条件下（酸素濃度：２１体積％）、３７℃で２時間培養した。
ＨｅＬａ細胞と１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地４ｍＬを混合して細胞懸濁液を調製した。次いで、平面培養シャーレ（グライナー社製４区画シャーレ）のウェルに上記細胞懸濁液を添加した。次に、実施例１で得た（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）と下記式で表されるＢＴＰＤＭ１（赤色りん光を発し、リソソームに局在化するイリジウム錯体）をそれぞれ５００ｎＭの最終濃度でウェルに添加し、常酸素条件下（酸素濃度：２１体積％）、３７℃で２時間培養した。
その後、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地、ＤＭＥＭ培地（ＦＢＳ（−））でそれぞれ２回ずつ洗浄し、オリンパス社製ＩＸ−７１及びＰＨＯＴＯＭＥＴＲＩＣＳ社製Ｅｖｏｌｖｅ５１２を用いてりん光顕微画像を撮影した（励起波長：４５０〜５００ｎｍ、観測波長：５１５〜５６５ｎｍ）。次に、励起波長：４８０〜５５０ｎｍ、観測波長：＞５９０ｎｍのフィルタ（オリンパス社製Ｕ−ＭＳＷＧ２）に変更してりん光顕微画像を再度撮影した。
（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）とＢＴＰＤＭ１でイメージングしたりん光顕微画像を、図６−１、図６−２に示す。
また、実施例５で得た（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）３Ｉｒを用いて、上記と同様の操作で（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）３ＩｒとＢＴＰＤＭ１による多色イメージングを行った。
（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）３ＩｒとＢＴＰＤＭ１でイメージングしたりん光顕微画像をを、図６−３、図６−４に示す。
なお、図６−１〜図６−４の（ａ）は、励起波長：４５０〜５００ｎｍ、観測波長：５１５〜５６５ｎｍのフィルタを用いたりん光顕微画像であり、図６−１〜図６−４の（ｂ）は、励起波長：４８０〜５５０ｎｍ、観測波長：＞５９０ｎｍのフィルタを用いたりん光顕微画像である。
（ｐｐｙ）２Ｉｒ（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）とＢＴＰＤＭ１でイメージングしたりん光顕微画像を、図６−１、図６−２に示す。
また、実施例５で得た（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）３Ｉｒを用いて、上記と同様の操作で（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）３ＩｒとＢＴＰＤＭ１による多色イメージングを行った。
（ｐｐｙ−５−ＣＨ２ＯＨ）３ＩｒとＢＴＰＤＭ１でイメージングしたりん光顕微画像をを、図６−３、図６−４に示す。
なお、図６−１〜図６−４の（ａ）は、励起波長：４５０〜５００ｎｍ、観測波長：５１５〜５６５ｎｍのフィルタを用いたりん光顕微画像であり、図６−１〜図６−４の（ｂ）は、励起波長：４８０〜５５０ｎｍ、観測波長：＞５９０ｎｍのフィルタを用いたりん光顕微画像である。
この結果、実施例１、５で得たイリジウム錯体が、共染色、多色イメージングに有用であることが確認された。また、実施例１、５で得たイリジウム錯体は小胞体に局在していた。
Claims (10)
- 下記式（１）で表されるイリジウム錯体。
Ｒ1 は、下記式（２）で表される１価の基を示し、Ｒ 2 及びＲ 3 は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は下記式（２）で表される１価の基を示し、Ｒ 4 〜Ｒ 24 は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示す。〕
Ｘは、下記式（３）で表される１価の基を示し、
Ｚ1及びＺ2は、水素原子を示し、
＊は、結合手を示す。〕
Ｒ 25 は、単結合、炭素数１〜６のアルカンジイル基、又は炭素数１〜６のアルカンジイル基の炭素原子の一部がアミド結合に置き換わった基を示し、
Ｙは、ヒドロキシ基、カルボキシ基、第１級アミノ基、Ｃ１〜３アルキルアミノ基、Ｎ，Ｎ−ジＣ１〜３アルキルアミノ基又は下記式（４）で表される基を示し、
＊は、結合手を示す。〕
Ｒ 26 〜Ｒ 28 は、それぞれ独立して、非置換の炭素数６〜１２の芳香族炭化水素基又はハロゲン原子が置換している炭素数６〜１２の芳香族炭化水素基を示し、
＊は、結合手を示す。〕 - Ｙが、ヒドロキシ基、カルボキシ基、第１級アミノ基、Ｃ１〜３アルキルアミノ基又はＮ，Ｎ−ジＣ１〜３アルキルアミノ基である、請求項１に記載のイリジウム錯体。
- Ｙが、ヒドロキシ基、カルボキシ基又はＮ，Ｎ−ジＣ１〜３アルキルアミノ基である、請求項１に記載のイリジウム錯体。
- Ｒ 25 が、単結合、又は炭素数１〜６のアルカンジイル基の炭素原子の一部がアミド結合に置き換わった基である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のイリジウム錯体。
- 請求項１〜４のいずれか１項に記載のイリジウム錯体を含む、酸素濃度測定試薬。
- 請求項１〜４のいずれか１項に記載のイリジウム錯体を含む、スフェロイド内酸素濃度測定試薬。
- 請求項１〜４のいずれか１項に記載のイリジウム錯体を用いる、酸素濃度測定方法。
- 請求項１〜４のいずれか１項に記載のイリジウム錯体を用いる、スフェロイド内の酸素濃度を測定する方法。
- 下記式（５）で表されるイリジウム錯体。
Ｒ31 は、下記式（６）で表される１価の基を示し、Ｒ 32 及びＲ 33 は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜６のアルキル基、又は下記式（６）で表される１価の基を示し、Ｒ 34 〜Ｒ 54 は、それぞれ独立して、水素原子又は炭素数１〜６のアルキル基を示す。〕
Ｒ55は、炭化水素基を示し、
Ｚ3及びＺ4は、水素原子を示し、
＊は、結合手を示す。〕 - Ｒ 55 が、炭素数１〜１２のアルキル基である、請求項９に記載のイリジウム錯体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2017045545A JP6934164B2 (ja) | 2017-03-10 | 2017-03-10 | 新規イリジウム錯体、酸素濃度測定試薬、酸素濃度測定方法及び合成中間体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2017045545A JP6934164B2 (ja) | 2017-03-10 | 2017-03-10 | 新規イリジウム錯体、酸素濃度測定試薬、酸素濃度測定方法及び合成中間体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2018150245A JP2018150245A (ja) | 2018-09-27 |
| JP6934164B2 true JP6934164B2 (ja) | 2021-09-15 |
Family
ID=63681508
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2017045545A Active JP6934164B2 (ja) | 2017-03-10 | 2017-03-10 | 新規イリジウム錯体、酸素濃度測定試薬、酸素濃度測定方法及び合成中間体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6934164B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111675737A (zh) * | 2020-05-25 | 2020-09-18 | 苏州科技大学 | 用于生物标记物的电中性均配环金属铱配合物 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE430789T1 (de) * | 2004-12-23 | 2009-05-15 | Ciba Holding Inc | Elektrolumineszierende metallkomplexe mit nukleophilen carbenliganden |
| EP1961743A1 (en) * | 2005-12-15 | 2008-08-27 | Chuo University | Metal complex compound and organic electroluminescent device using same |
| JP2007257897A (ja) * | 2006-03-20 | 2007-10-04 | Seiko Epson Corp | 発光素子の製造方法、発光装置の製造方法および電子機器の製造方法 |
| JP4777109B2 (ja) * | 2006-03-28 | 2011-09-21 | キヤノン株式会社 | 有機発光素子 |
| JP4930943B2 (ja) * | 2007-05-11 | 2012-05-16 | 国立大学法人群馬大学 | 酸素濃度測定試薬および酸素濃度測定方法 |
| TW200932751A (en) * | 2007-08-17 | 2009-08-01 | Georgia Tech Res Inst | Norbornene-based copolymers with iridium complexes and exiton transport groups in their side-chains and use thereof |
| JP5708656B2 (ja) * | 2010-11-11 | 2015-04-30 | コニカミノルタ株式会社 | 有機エレクトロルミネッセンス素子、照明装置及び表示装置 |
| JP6396297B2 (ja) * | 2012-08-29 | 2018-09-26 | ドンジン セミケム カンパニー リミテッド | 白色発光量子ドット |
| JP2017032274A (ja) * | 2013-12-13 | 2017-02-09 | Ｏｒｇａｎｏｇｅｎｉｘ株式会社 | スフェロイド内酸素濃度測定試薬およびこれを用いたスフェロイド内酸素濃度測定方法 |
-
2017
- 2017-03-10 JP JP2017045545A patent/JP6934164B2/ja active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2018150245A (ja) | 2018-09-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108440475B (zh) | 一种区分不同极性脂滴的比率型荧光探针及其制备方法和应用 | |
| Dasari et al. | Dual-sensitized luminescent europium (III) and terbium (III) complexes as bioimaging and light-responsive therapeutic agents | |
| CN104220438B (zh) | 用于检测过氧亚硝酸盐的二芳基胺‑基荧光探针 | |
| JP6522339B2 (ja) | カルボキシｘローダミン類似体 | |
| White et al. | Multifunctional Pt (II) reagents: covalent modifications of Pt complexes enable diverse structural variation and in-cell detection | |
| WO2020207260A1 (zh) | 一种cdk激酶抑制剂及其应用 | |
| Saito et al. | Synthesis of 1, 8-naphthalimide-based probes with fluorescent switch triggered by flufenamic acid | |
| EP3096143B1 (en) | Iron(ii) ion detection agent and detection method using same | |
| JP6081152B2 (ja) | テトラフェニルエテン誘導体から成る発蛍光性化合物 | |
| JPWO2010126077A1 (ja) | 近赤外蛍光化合物 | |
| KR20220017518A (ko) | 아릴 하이드로카본 수용체 조절자 | |
| CN103820104B (zh) | 一类以尼罗蓝为母体的近红外荧光探针、其制法及应用 | |
| KR101524915B1 (ko) | 타이로신 인산화효소를 감지하는 형광 프로브 및 이의 용도 | |
| TWI382179B (zh) | 癌症診斷用之螢光咔唑化合物 | |
| CN106632264A (zh) | 一种能够用两种荧光颜色清楚区分和同时成像细胞膜脂筏与非脂筏微区的探针及其应用 | |
| CN104861039B (zh) | 一种酞菁基化合物、制备方法及作为单、双光子荧光探针在癌症靶向及线粒体标记中的应用 | |
| CN108299438A (zh) | pH响应性近红外荧光探针化合物及其制备方法和应用 | |
| Ou et al. | Novel triazole and morpholine substituted bisnaphthalimide: Synthesis, photophysical and G-quadruplex binding properties | |
| CN105367566B (zh) | 取代的香豆素-噻唑橙衍生物及其制备方法和用途 | |
| JP6934164B2 (ja) | 新規イリジウム錯体、酸素濃度測定試薬、酸素濃度測定方法及び合成中間体 | |
| CN105399775A (zh) | 具有线粒体靶向功能的磷光铱配合物的制备与应用 | |
| CN107501221A (zh) | 一种对生物体内硫化氢快速响应的荧光探针及其制备方法和用途 | |
| US10759994B2 (en) | Luminogenic transition metal-based pyridyl complex and its use | |
| CN105348268B (zh) | 取代的咔唑-吲哚磺酸盐衍生物及其制备方法和用途 | |
| JP2019528080A (ja) | 組織サンプルにおける癌細胞を検出するための組成物および方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20170907 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170907 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20171018 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20200227 |
|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20200227 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20200227 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20210128 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210209 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210401 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210803 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210806 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6934164 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |