JP6959596B2 - 皮膚外用剤および皮膚バリア機能改善剤 - Google Patents

Description

本発明は、皮膚外用剤および皮膚バリア機能改善剤に関する。

皮膚バリア機能の低下は、角質水分量の低下、塵埃や雑菌等の刺激物質の透過性上昇による炎症リスクの増大の他、角質形態や角質ターンオーバーの乱れ、微炎症の蓄積によるシワ、しみ、くすみ、ざらつき等の美容上の問題を引き起こし得ることが知られている。そこで、バリア機能の強化のための皮膚外用剤の開発が求められている。

バリア機能の強化には、セラミドやコレステロール等の油溶性成分の補充が効果的といわれる。しかし、バリア機能が低下し水分蒸散性が活発な皮膚や高湿度環境下で親水性を帯びた皮膚は、油溶性成分の親和性に乏しいので、油溶性成分によるバリア機能の強化が十分には得難い。また、バリア機能の正常化に重要な角質形態維持には、角質柔軟性に関与し角質細胞内のケラチン骨格を支えるＮＭＦ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）が重要であるところ、ＮＭＦ等の水溶性保湿成分を皮膚に供給する等のためには、水系成分の皮膚適用が必要である。ただし、水系成分の供給による効果は一過的になりやすく、高湿度環境後の低湿度環境により、かえってバリア機能の低下を招くおそれがある。

また、肥厚した皮膚は、バリア機能が一見高く、水分蒸散が少ないが、柔軟性に欠け、角質のひび割れ、粉ふき、ひいては乾皮症などの皮膚トラブルを招く場合がある。

したがって、皮膚を正常に保つためには、油溶性成分および水溶性成分の双方を適切に供給することが重要である。その手段として、種々の乳化製剤が開発されており、その典型例は、油溶性成分および水溶性成分が界面活性作用により互いに分散した製剤である。

他方、界面活性作用に基づく乳化は、安定性が低く、油水分離等の懸念を有することが知られている。このため、自発的に閉鎖小胞体を形成する両親媒性物質により形成された閉鎖小胞体又は水酸基を有する重縮合ポリマーの粒子が油水界面に介在する、いわゆる三相乳化に基づく乳化製剤も開発されている（例えば、特許文献１参照）。

特開２０１４−１４１４７９号公報

しかし、従来の界面活性作用に基づく製剤は、多くの界面活性剤自体によるバリア機能の低下、および低い皮膚親和性の点でも、改善の余地がある。また、特許文献１に開示される乳化製剤は、乳化安定性に優れるものの、皮膚親和性の点で改善の余地を有する。

本発明は、以上の実情に鑑みてなされたものであり、皮膚親和性に優れかつバリア機能の低下を抑制することができる皮膚外用剤および皮膚バリア機能改善剤の提供を目的とする。

本発明者らは、閉鎖小胞体を含むＯ／Ｗエマルションの内相の平均粒子径を小さくすると、皮膚親和性が向上することを見出し、本発明を完成するに至った。具体的に、本発明は以下のものを提供する。

（１） 内相は油相であり、外相は水相であり、
自発的に閉鎖小胞体を形成する両親媒性物質により形成された閉鎖小胞体を含むＯ／Ｗエマルション型であり、
前記内相の平均粒子径が１０００ｎｍ未満である皮膚外用剤。

（２） 内相は油相であり、外相は水相であり、
自発的に閉鎖小胞体を形成する両親媒性物質により形成された閉鎖小胞体を含むＯ／Ｗエマルション型であり、
前記内相の平均粒子径が１０００ｎｍ未満である皮膚バリア機能改善剤。

本発明によれば、閉鎖小胞体を含むＯ／Ｗエマルションにおける内相の平均粒子径が１０００ｎｍ未満であることで、皮膚親和性を向上しかつバリア機能の低下を抑制することができる。

本発明の実施例および比較例に係る皮膚外用剤を適用したときの、細胞間脂質リポソーム（ＳＣＬＬ）への融合性を示すグラフである。 本発明の実施例に係る皮膚外用剤を適用したときの、ＳＣＬＬへの融合性を示すグラフである。 本発明の実施例に係る皮膚外用剤を適用したときの、ＳＣＬＬへの融合性を示すグラフである。 本発明の実施例および比較例に係る皮膚外用剤を適用したときの、表皮（顆粒層〜基底層）〜真皮中のフルオレセインナトリウム量を示すグラフである。 本発明の実施例に係る皮膚外用剤を適用したときの、ＳＣＬＬへの融合性を示すグラフである。 本発明の実施例に係る皮膚外用剤を適用したときの、ＳＣＬＬへの融合性を示すグラフである。 本発明の実施例および比較例に係る皮膚外用剤を適用したときの、表皮（角層〜基底層）〜真皮中のグリチルリチン酸ジカリウム量を示すグラフである。 本発明の実施例および比較例に係る皮膚外用剤を適用したときの、表皮（顆粒層〜基底層）〜真皮中のフルオレセインナトリウム量を示すグラフである。

以下、本発明の実施形態を説明するが、これらに本発明が限定されるものではない。

本発明は、内相は油相であり、外相は水相であり、自発的に閉鎖小胞体を形成する両親媒性物質により形成された閉鎖小胞体を含むＯ／Ｗエマルション（以下、三相乳化エマルションともいう）型であり、内相の平均粒子径が１０００ｎｍ未満である皮膚外用剤である。

閉鎖小胞体は、表面が親水性の粒子であり、ファンデルワールス力によって水相と油相との界面に介在することで、乳化状態を維持する。この乳化機構は、閉鎖小胞体による三相乳化機構として公知であり、界面活性剤による乳化機構、すなわち親水性部分及び疎水性部分をそれぞれ水相及び油相に向け、油水界面張力を下げることで乳化状態を維持する乳化機構とは全く異なる（例えば特許３８５５２０３号公報参照）。

前記のように、本発明における内相の平均粒子径は、１０００ｎｍ未満である。従来の界面活性作用に基づく製剤では、仮に内相を小さくしようとすると、界面活性剤の必要量が増し、それによりバリア機能の低下を招く傾向がある。これに対し、本発明者は、三相乳化エマルションにおける内相が小さくなるにつれ、バリア機能低下が抑制されながら皮膚親和性が向上することを発見した。バリア機能低下が抑制される理由は、本発明では、両親媒性物質が、界面活性作用を呈する単分子形態ではなく、閉鎖小胞体をなすことによる。他方、閉鎖小胞体は、界面活性剤と異なって肌表面への影響が小さいため、油や水の肌への馴染みに劣ると予想されていたため、本発明の三相乳化エマルションが皮膚親和性に優れることは、予想外の効果である。また、本発明の三相乳化エマルションは、有効成分の皮膚透過性に優れるという利点も有する。これに対し、前述の特許文献１を始めとする、従来の皮膚外用剤を構成する三相乳化エマルションでは、内相の平均粒子径が１μｍ（１０００ｎｍ）以上である。

皮膚親和性向上の観点で、本発明における内相の平均粒子径は、９７０ｎｍ以下であることが好ましく、より好ましくは７５０ｎｍ以下、５００ｎｍ以下、４５０ｎｍ以下、４２０ｎｍ以下、４００ｎｍ以下、３７５ｎｍ以下、３５０ｎｍ以下、３２５ｎｍ以下である。本発明における内相の平均粒子径の下限は、三相乳化エマルションが形成される限りにおいて特に限定されず、具体的には１０ｎｍ以上、５０ｎｍ以上、１００ｎｍ以上、１５０ｎｍ以上、２００ｎｍ以上であってよい。内相の平均粒子径は、動的光散乱法に基づく測定装置「ゼータサイザー ナノ Ｓ」（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ製）により測定される。なお、内相の平均粒子径は、エマルション調製時の撹拌条件等により調整でき、例えば高圧ホモジナイザーにより本発明の平均粒子径を実現することができる。

油相は、皮膚外用剤の基剤として用いられる室温で液状の油を含んでよい。このような油は、特に限定されないが、ミリスチン酸オクチルドデシルやパルミチン酸エチルヘキシル、イソノナン酸イソノニルなどのエステル油、スクワランやミネラルオイルなどの炭化水素、イソステアリルアルコールなどの高級アルコール、オリーブ油やホホバ油、シア脂などの天然油などの１種または２種以上であってよい。中でも、ミリスチン酸オクチルドデシルやスクワランは肌馴染みにも優れ、特に好ましい。ただし、シリコーンオイルは、炭素骨格を有しない化学構造ゆえに皮膚になじみにくいため、本発明の皮膚外用剤には、皮膚外用剤に対し１質量％未満の量で含まれる、望ましくは実質的に含まれないことが好ましい。

油相の含有量は、特に限定されず、皮膚外用剤に対し、０．１〜９４質量％の範囲で適宜選択されてよい。ただし、従来の界面活性作用に基づくエマルションでは、油相の含有量が大きいと、皮膚外用剤の塗布後、多量の油分と界面活性剤分子との混合物が皮膚表面に吸着して残存するため、電気伝導度が低下し、角質水分量の早期増大が見込めない一方、油相の含有量が小さいと、塗布後早期の角質水分量の増大が期待されるが、その持続が困難である。これに対し、本発明では、油相の含有量が大きくても、閉鎖小胞体の皮膚表面への吸着が生じにくいため、角質水分量の早期増大が期待される一方、油相の含有量に対する角質水分量の増大等の効果が高いので、所望効果を得るために必要な油相の含有量を小さくすることもできる。この観点で、本発明における油相の含有量の下限は、皮膚外用剤に対し、５質量％以上であることが好ましく、より好ましくは１０質量％以上、２０質量％以上、２５質量％以上であり、また、上限は、９０質量％以下、７５質量％以下、５０質量％以下、４０質量％以下、３５質量％以下であってよい。

自発的に閉鎖小胞体を形成する両親媒性物質としては、特に限定されないが、リン脂質やリン脂質誘導体等、ポリグリセリン脂肪酸エステル等、特に疎水基と親水基とがエステル結合したものを採用してもよい。また、刺激緩和性に優れる点で、ジラウロイルグルタミン酸リシンＮａも好ましい。

リン脂質としては、下記の一般式３で示される構成のうち、炭素鎖長１２のＤＬＰＣ（１，２−Ｄｉｌａｕｒｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏ−ｒａｃ−１−ｃｈｏｌｉｎｅ）、炭素鎖長１４のＤＭＰＣ（１，２−Ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏ−ｒａｃ−１−ｃｈｏｌｉｎｅ）、炭素鎖長１６のＤＰＰＣ（１，２−Ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏ−ｒａｃ−１−ｃｈｏｌｉｎｅ）が採用可能である。

一般式３

また、下記の一般式４で示される構成のうち、炭素鎖長１２のＤＬＰＧ（１，２−Ｄｉｌａｕｒｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏ−ｒａｃ−１−ｇｌｙｃｅｒｏｌ）のＮａ塩又はＮＨ４塩、炭素鎖長１４のＤＭＰＧ（１，２−Ｄｉｍｙｒｉｓｔｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏ−ｒａｃ−１−ｇｌｙｃｅｒｏｌ）のＮａ塩又はＮＨ４塩、炭素鎖長１６のＤＰＰＧ（１，２−Ｄｉｐａｌｍｉｔｏｙｌ−ｓｎ−ｇｌｙｃｅｒｏ−３−ｐｈｏｓｐｈｏ−ｒａｃ−１−ｇｌｙｃｅｒｏｌ）のＮａ塩又はＮＨ４塩を採用してもよい。

一般式４

更に、リン脂質として卵黄レシチン又は大豆レシチン等のレシチン又はそれを水素化したものを採用してもよい。

ポリグリセリン脂肪酸エステルとしては、ポリグリセリンと直鎖脂肪酸または分岐脂肪酸のエステルであり、具体的には、モノパルミチン酸ポリグリセリル、ジパルミチン酸ポリグリセリル、トリパルミチン酸ポリグリセリル、モノステアリン酸ポリグリセリル、ジステアリン酸ポリグリセリル、トリステアリン酸ポリグリセリル、モノイソステアリン酸ポリグリセリル、ジイソステアリン酸ポリグリセリル、トリイソステアリン酸ポリグリセリル等が挙げられる。

また、両親媒性物質として、下記の一般式１で表されるポリオキシエチレン硬化ひまし油の誘導体、もしくは一般式２で表されるジアルキルアンモニウム誘導体、トリアルキルアンモニウム誘導体、テトラアルキルアンモニウム誘導体、ジアルケニルアンモニウム誘導体、トリアルケニルアンモニウム誘導体、又はテトラアルケニルアンモニウム誘導体のハロゲン塩の誘導体を採用しても良い。

一般式１

式中、エチレンオキシドの平均付加モル数であるＥは、３〜１００である。Ｅが過大になると、両親媒性物質を溶解する良溶媒の種類が制限されるため、親水性ナノ粒子の製造の自由度が狭まる。Ｅの上限は好ましくは５０であり、より好ましくは４０であり、Ｅの下限は好ましくは５である。

一般式２

式中、Ｒ１及びＲ２は、各々独立して炭素数８〜２２のアルキル基又はアルケニル基であり、Ｒ３及びＲ４は、各々独立して水素又は炭素数１〜４のアルキル基であり、ＸはＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ又はＣＨ３ＣＯＯである。

閉鎖小胞体は、エマルション形成前では平均粒子径８ｎｍ〜８００ｎｍ程度であるが、Ｏ／Ｗエマルション構造においては平均粒子径８ｎｍ〜５００ｎｍ程度である。また、閉鎖小胞体の量は、油相の量に応じて適宜設定されてよく、特に限定されないが、皮膚外用剤に対し０．０００１〜５質量％であってよく、具体的には０．１〜２．５質量％、０．５〜２質量％であってよい。

本発明における皮膚外用剤は、美容液等の化粧料、医薬部外品、皮膚疾患の治療等を目的とした医薬品等を包含する。本発明における油相および水相は、皮膚外用剤の用途に応じ、使用し得る任意の成分を含んでもよい。前述のように、本発明の三相エマルションは、成分の皮膚透過性にも優れるため、皮膚に有効成分を浸透させることが望まれる用途（例えば、医薬部外品など）が好ましい。

皮膚透過（浸透）性向上効果は、エマルションの優れた皮膚親和性（より具体的には、角層細胞間脂質へのエマルション成分の移行性）に起因するため、油溶性または水溶性の幅広い有効成分に対し皮膚透過性向上を実現することができる。この観点で、上記有効成分としては、特に限定されないが、グリチルレチン酸類やレチノール類、トコフェロール類、アスコルビン酸誘導体などの油溶性有効成分、グリチルリチン酸塩やリボフラビン類、アスコルビン酸塩、アラントインなどの水溶性有効成分が挙げられ、中でも水溶性有効成分が好ましい。

以上のエマルションは、両親媒性物質の二分子膜の層状体を水に分散させ、両親媒性物質により形成された閉鎖小胞体を含む乳化剤分散液を形成する工程と、乳化剤分散液と油剤とを混合することで、Ｏ／Ｗエマルションを形成する工程と、を有する方法により製造される。このＯ／Ｗエマルションを形成する工程において、撹拌を厳しい条件下（例えば高圧ホモジナイズ）で行うことで、本発明の小粒子径の内相を有する三相乳化エマルションを容易に製造することができる。水溶性有効成分は、Ｏ／Ｗエマルションの形成後に添加してもよく、Ｏ／Ｗエマルションの形成過程で添加してもよい一方、油溶性有効成分は、Ｏ／Ｗエマルションの形成前の油剤に添加することが好ましい。

また、閉鎖小胞体を十分に形成することで、平均粒子径の小さい油滴が得られやすくなる。このような方法としては、上記の両親媒性物質を分散媒（つまり水）中に添加して撹拌する、両親媒性物質を良溶媒に溶解した後、その溶液を水と混合する等が挙げられる（例えば、特開２００６−２４１４２４号公報参照）。

本発明は、内相は油相であり、外相は水相であり、自発的に閉鎖小胞体を形成する両親媒性物質により形成された閉鎖小胞体を含むＯ／Ｗエマルション型であり、内相の平均粒子径が１０００ｎｍ未満である皮膚バリア機能改善剤も包含する。本発明の皮膚バリア機能改善剤は、界面活性剤とは異なり、角層細胞間脂質を破壊しにくいので、バリア機能を改善することができる。また、皮膚バリア機能改善剤は、それ自体が角層細胞間脂質に融合されることで、皮膚に適用される有効成分を効率的に透過させることもできる。

有効成分は、皮膚バリア機能改善剤の適用と同時またはその前後のいずれのタイミングで適用されてもよい。このため、本発明は、皮膚バリア機能改善剤と、水溶性または油溶性の有効成分とを、二剤以上の形態で別々に含む皮膚外用キットを包含してもよい。

＜実施例１〜５、比較例２＞
ジステアリン酸デカグリセリルの溶液から閉鎖小胞体の分散液を調製した。そこに、有効成分、基剤、液状油を添加し、実施例では高圧ホモジナイザー、比較例２ではホモミキサーを用いて回転数を適宜調節して撹拌し、表１に示す処方および内相平均粒子径に、皮膚外用剤を調製した。

（比較例１）
比較例１は、ジステアリン酸デカグリセリルの溶液を用いた点を除き、実施例と同様の手順で皮膚外用剤を調製した。

（平均粒子径）
内相の平均粒子径は、動的光散乱法に基づく測定装置「ゼータサイザー ナノ Ｓ」（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ製）を用いて測定される粒度分布より算出した。

（ゼータ電位）
ゼータ電位・粒径測定システムＥＬＳ−Ｚ（大塚電子（株）製）を用いて、試料に電場を加え電気泳動を行い、粒子の移動速度をレーザードップラー速度測定法によって測定し、ヘンリーの式を適用してゼータ電位を求めた。

（細胞間脂質リポソーム（ＳＣＬＬ）の調製）
細胞間脂質リポソーム（ＳＣＬＬ）は、角層細胞間脂質の組成に基づき設計されたリポソームであり、このリポソームへの融合性によって皮膚親和性を評価できる擬似細胞間脂質として、従来使用されている（Ｋｕｎｔｓｃｈｅ Ｊ．， ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔ． Ｊ． Ｐｈａｒｍ．， ３５４，１８０−１９５（２００８）参照）。セラミド４０質量％、コレステロール２５質量％、パルミチン酸２５質量％、コレステロール硫酸１０質量％と、蛍光物質としてのＮＢＤ−ＰＥ（N-(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)-phosphatidylethanolamine）およびＲｈｏ−ＰＥ（N-(lissamine rhodamine B sulfonyl)-phosphatidylethanolamine）と、をナス型フラスコに入れ、エバポレータで溶媒を除去した。その後、ＰＢＳ（リン酸緩衝液）にて水和し、凍結融解した後、エクストルーダでリポソームのサイズを調整する（孔径１００ｎｍのフィルターを通過させた）ことで、ＳＣＬＬを得た。

（親和性評価）
上記ＳＣＬＬと、各皮膚外用剤とを適宜混合し、この混合物について、蛍光強度を指標として、融合率の測定を経時的に行った（３０分間測定。なお、混合物の温度は３２℃に保持）。測定結果を図１〜３に示す。その後、図１〜３の測定結果に基づき、このＳＣＬＬへの融合性を１（低）〜５（高）の５段階で評価した。評価結果を表１に示す。なお、図中に記載される「ｎ」の数値は、測定を行ったサンプルの数を示し、図および表中に記載される数値は、測定した全サンプルの平均値を示す（以下、同様）。
〔評価基準〕
５ ： 融合率が直線的に増加。３０分後の融合率：高
４ ： 融合率が直線的に増加。３０分後の融合率：高〜中
３ ： 融合率が緩やかに増加。３０分後の融合率：中
２ ： 融合率が緩やかに増加。３０分後の融合率：中〜やや低
１ ： 融合率はほとんど変化しない。
０ ： 数分以内に融合率が１００％となる（ＳＣＬＬが崩壊したことを意味する）

表１中の略称は、それぞれ下の成分を意味する。
２Ｓ１０Ｇ：ジステアリン酸デカグリセリル
ＭＯＤ：ミリスチン酸オクチルドデシル
ＧｌｙＳｔｅ：グリチルレチン酸ステアリル
Ｇｌｙ２Ｋ：グリチルリチン酸ジカリウム
ＢＧ：１，３−ブチレングリコール

表１に示されるように、界面活性剤を含む比較例１の皮膚外用剤は、閉鎖小胞体を含む実施例１〜５および比較例２の皮膚外用剤と異なり、ＳＣＬＬを破壊したことから、皮膚バリアの低下をもたらすことが示唆された。実施例１〜５および比較例２の皮膚外用剤の中でも、実施例１〜５の皮膚外用剤は、ＳＣＬＬ融合性つまり皮膚親和性に優れていた。実施例１と比較例２とは、組成において共通し、内相の平均粒子径の点でのみ相違することから、表１および図１で示される各実施例における優れた皮膚親和性は、内相の平均粒子径が１０００ｎｍ未満であることで得られることが示唆された。また、表１および図２に示されるように、実施例の優れた融合性は、油剤のゼータ電位にかかわらず得られたことから、本発明により奏される皮膚親和性向上およびバリア機能低下抑制効果は、油剤に依存しないことが示唆された。したがって、本発明の皮膚外用剤は、皮膚親和性向上剤又は皮膚バリア機能改善剤として有用と考えられる。

（親水性評価）
実施例１および比較例２の皮膚外用剤を、スポイトで１滴、被験者の前腕内側に滴下し、その後、液滴を皮膚になじませ、３分後の当該箇所に水を滴下した。滴下した水の親和性を、１（撥水性）〜５（親水性）の５段階で評価した結果を表２に示す。

図１に示されるように、内相平均粒子径が１０００ｎｍである比較例２では、皮膚塗布時の摩擦によりエマルションが崩壊し、油剤が油膜となって皮膚を覆い（なじませ直後）、さらになじませ３分後にも油膜が残存し、結果的に撥水性を呈した。他方、比較例２と組成面では一致し、内相平均粒子径が１０００ｎｍ未満である点で相違する実施例１は、なじませ３分後において皮膚親和性を呈して油膜は視認されず、また、水滴への親和性が高かった。実施例１では、水性成分および油性成分の双方の親和により角質の状態が整ったと推察される。

（角質水分量）
被験者の試験部（前腕内側）を洗浄した後、恒温恒湿環境下（２５℃、５０％）に３０分間順化し、製剤塗布前の角質水分量をＳＫＩＣＯＮ−２００ＥＸ（ＩＢＳ社製）を用い測定した。その後、実施例１または比較例２の皮膚外用剤を塗布し３分間放置した後、ＳＫＩＣＯＮ−２００ＥＸ（ＩＢＳ社製）を用いて角質水分量の測定を行った。その後、塗布した皮膚外用剤を水で洗い流して除去し、水分を拭き取ってから２７分間放置した後、ＳＫＩＣＯＮ−２００ＥＸ（ＩＢＳ社製）を用いて角質水分量の測定を行った。測定は１被験部位につき５回測定し、平均値を算出した。塗布前の角質水分量に対する塗布３分後および流水２７分後の角質水分量の相対値を表２に示す。

塗布３分後の角質水分量は、水溶性成分の皮膚への馴染みの指標となる。表２に示されるように、内相平均粒子径が１０００ｎｍである比較例２に比べ、組成面では一致し、内相平均粒子径が１０００ｎｍ未満である点で相違する実施例１では、塗布３分後の角質水分量が高く、角質層の保湿性増大が確認された。このことから、比較例２の皮膚外用剤に比べて、実施例１の皮膚外用剤は、水溶性成分の皮膚への馴染みに優れることが示唆された。したがって、本発明の皮膚外用剤は、水溶性成分の皮膚への馴染み改善剤、角質水分量増加剤又は保湿剤としても有用と考えられる。
一方、流水洗浄２７分後の角質水分量は、油溶性成分の皮膚への馴染みの指標となる。流水洗浄２７分後においては、水溶性成分は洗浄により除去されるか蒸発しているため、角質水分量には、皮膚に馴染んだ油溶性成分の保湿効果が反映されるためである。表２に示されるように、比較例２に比べ、実施例１の角質水分量は高かった。一般に、外用剤を流水洗浄してから３０分程度経過すると、洗浄時に皮膚に付着した水分が蒸発する際に、皮膚表面に本来あった水分も一緒に蒸発してしまうため、皮膚表面は過乾燥の状態となり、外用剤塗布前よりも角質水分量は低下すると言われている。しかしながら、実施例１及び比較例２は、流水洗浄２７分後においても塗布前よりも高い角質水分量を維持しており、特に、実施例１は、塗布前の１．３倍もの角質水分量を維持していた。これは、比較例２の１．１倍よりもさらに高い数値であった。このことから、比較例１の皮膚外用剤に比べて、実施例１の皮膚外用剤は、油溶性成分の皮膚への馴染みの点でも優れることが示唆された。したがって、本発明の皮膚外用剤は、油溶性成分の皮膚馴染み改善剤、保湿剤としても有用と考えられる。また、水溶性成分と油溶性成分の双方を適切に供給できることから、皮膚を正常に保つ効果が期待でき、肌質改善剤又は皮膚バリア機能改善剤としても有用と考えられる。

（皮膚浸透性）
実施例１および比較例２の皮膚外用剤に、フルオレセインナトリウムを終濃度０．５ｍＭになるよう添加し、１０分間撹拌することで、試料を調製した。ヘアレスマウスの皮膚（表皮（顆粒層〜基底層）〜真皮）を縦型拡散セルにセットし、ドナー側に試料を添加し、その８時間後の表皮〜真皮中のフルオレセインナトリウム量を、分光光度計（λｅｘ＝４９５ｎｍ、λｅｍ＝５２０ｎｍ）により測定したフルオレセインナトリウム蛍光強度に基づき、算出した。この結果を図４に示す。

図４に示されるように、内相平均粒子径が１０００ｎｍである比較例２に比べ、組成面では一致し、内相平均粒子径が１０００ｎｍ未満である点で相違する実施例１では、表皮〜真皮中のフルオレセインナトリウムの量が多く、皮膚透過性を向上できることが分かった。したがって、本発明の皮膚外用剤は、有効成分（特に、水溶性有効成分）の皮膚浸透性向上剤又は有効成分（特に、水溶性有効成分）の経皮デリバリーのための組成物として有用である可能性が示唆された。

＜実施例６〜１８、比較例６＞
処方及び内相平均粒子径を表３〜５のように変更した点を除き、実施例１と同様の手順で皮膚外用剤を調製した。

（比較例３）
スクワランを含めなかった点を除き、実施例１２と同様の手順で皮膚外用剤を調製した。

（比較例４、５）
ポリソルベート及びステアリン酸ソルビタンの溶液を用いた点を除き、実施例１４、１７と同様の手順で皮膚外用剤を調製した。

調製した皮膚外用剤について、上記条件に従って内相の平均粒子径を測定した。

（親和性評価）
実施例６〜１１の皮膚外用剤について、上記条件に従ってＳＣＬＬとの親和性を測定した結果を図５及び６に示す。図５及び６に示されるように、油剤の含有量が増すにつれ、ＳＣＬＬ融合性つまり皮膚親和性が向上し、その傾向の有無は油剤に依存しないことが示唆された。

（皮膚浸透性）
実施例１２〜１７及び比較例３〜５の皮膚外用剤に、グリチルリチン酸ジカリウムを終濃度３％になるよう添加し、撹拌することで、試料を調製した。ヘアレスマウスの皮膚（表皮（顆粒層〜基底層）〜真皮）を縦型拡散セルにセットし、ドナー側に試料を添加し、その２４時間後の表皮〜真皮中のグリチルリチン酸ジカリウムをメタノールで抽出し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって定量した。この結果を図７に示す。なお、ＨＰＬＣは、「Ｗａｔｅｒｓ ２６９５ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎｓ Ｍｏｄｕｌｅ」及び「Ｗａｔｅｒｓ ２４８７ Ｄｕａｌ λ Ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｏｒ」を用い、カラムとして「ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８」を、移動相としてＣＨ３ＣＮ：ＣＨ３ＣＯＯＨ＝５５：４５（ｖ／ｖ）を用い、流速０．６ｍＬ／分、温度４０℃で行った。
図７に示されるように、三相乳化技術によって乳化した場合、界面活性剤によって乳化した場合に比べて、表皮〜真皮中のグリチルリチン酸ジカリウムの量が多かった。また、油剤の含有量が増すにつれ、表皮〜真皮中のグリチルリチン酸ジカリウムの量が多く、皮膚浸透性を向上でき、その傾向の有無は油剤に依存しないことが示唆された。

実施例１８及び比較例６の皮膚外用剤について、ブタ（ユカタン・マイクロ・ピッグ）の皮膚（角質層〜真皮）を縦型拡散セルにセットし、ドナー側に試料を添加した後、８時間後の表皮〜真皮中のフルオロセインナトリウムをメタノールで抽出後、測定励起波長４９５ｎｍ／蛍光波長５２０ｎｍにて蛍光強度をすることでフルオロセインナトリウム量を算出した。
図８に示されるように、内相平均粒子径が１０００ｎｍである比較例６に比べ、組成面では一致し、内相平均粒子径が１０００ｎｍ未満である点で相違する実施例１８では、表皮〜真皮中のフルオレセインナトリウムの量が多かった。

Claims (11)

1. 内相は油相であり、外相は水相であり、
   自発的に閉鎖小胞体を形成する両親媒性物質により形成された閉鎖小胞体を含み、
   前記閉鎖小胞体が、前記油相と前記水相との界面に介在する、Ｏ／Ｗエマルション型であり、
   前記油相の含有量が３質量％以上３０質量％以下であり、
   前記内相の平均粒子径が１０００ｎｍ未満であり、
   前記油相は、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸エチルヘキシル、イソノナン酸イソノニル、スクワラン、イソステアリルアルコール、ホホバ油およびシア油からなる群より選択される１種以上を含む皮膚外用剤。
2. 内相は油相であり、外相は水相であり、
   自発的に閉鎖小胞体を形成する両親媒性物質により形成された閉鎖小胞体を含み、
   前記閉鎖小胞体が、前記油相と前記水相との界面に介在する、Ｏ／Ｗエマルション型であり、
   前記油相の含有量が３質量％以上３０質量％以下であり、
   前記内相の平均粒子径が１０００ｎｍ未満であり、
   前記水相は、グリチルリチン酸塩、リボフラビン類、アスコルビン酸塩およびアラントインからなる群より選択される１種以上を含む皮膚外用剤。
3. 前記内相の平均粒子径が１５０ｎｍ以上１０００ｎｍ未満である請求項１または２に記載の皮膚外用剤。
4. 前記油相の含有量が３質量％以上１０質量％以下である請求項１〜３のいずれか１項に記載の皮膚外用剤。
5. 前記閉鎖小胞体の平均粒子径が８ｎｍ〜５００ｎｍである請求項１〜４のいずれか１項に記載の皮膚外用剤。
6. 内相は油相であり、外相は水相であり、
   自発的に閉鎖小胞体を形成する両親媒性物質により形成された閉鎖小胞体を含み、
   前記閉鎖小胞体が、前記油相と前記水相との界面に介在する、Ｏ／Ｗエマルション型であり、
   前記油相の含有量が３質量％以上３０質量％以下であり、
   前記内相の平均粒子径が１０００ｎｍ未満であり、
   前記油相は、ミリスチン酸オクチルドデシル、パルミチン酸エチルヘキシル、イソノナン酸イソノニル、スクワラン、イソステアリルアルコール、ホホバ油およびシア油からなる群より選択される１種以上を含む皮膚バリア機能改善剤。
7. 内相は油相であり、外相は水相であり、
   自発的に閉鎖小胞体を形成する両親媒性物質により形成された閉鎖小胞体を含み、
   前記閉鎖小胞体が、前記油相と前記水相との界面に介在する、Ｏ／Ｗエマルション型であり、
   前記油相の含有量が３質量％以上３０質量％以下であり、
   前記内相の平均粒子径が１０００ｎｍ未満であり、
   前記水相は、グリチルリチン酸塩、リボフラビン類、アスコルビン酸塩およびアラントインからなる群より選択される１種以上を含む皮膚バリア機能改善剤。
8. 前記内相の平均粒子径が１５０ｎｍ以上１０００ｎｍ未満である請求項６または７に記載の皮膚外用剤。
9. 前記油相の含有量が３質量％以上１０質量％以下である請求項６〜８のいずれか１項に記載の皮膚外用剤。
10. 前記閉鎖小胞体の平均粒子径が８ｎｍ〜５００ｎｍである請求項６〜９のいずれか１項に記載の皮膚バリア機能改善剤。
11. 請求項６〜１０のいずれか１項に記載の皮膚バリア機能改善剤と、水溶性又は油溶性の有効成分とを、二剤以上の形態で別々に含む皮膚外用キット。

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