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JP7253283B2 - Cosmetics and Food and Beverage Compositions - Google Patents
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Description

本発明は、発酵により得られる新規組成物、これを用いた抗炎症剤、抗老化剤、美白剤、育毛剤、化粧料および飲食品組成物に関するものである。 TECHNICAL FIELD The present invention relates to novel compositions obtained by fermentation, anti-inflammatory agents, anti-aging agents, whitening agents, hair growth agents, cosmetics, and food and beverage compositions using the same.

炎症性疾患、例えば、接触性皮膚炎(かぶれ)、乾癬、尋常性天疱瘡、アトピー性皮膚炎、その他肌荒れを伴う各種皮膚炎症性疾患、関節リウマチ、変形性関節症、喘息等の原因及び発症機構は、多種多様である。その原因として、主にヒアルロニダーゼの活性の亢進によるもの、マクロファージから産生される腫瘍壊死因子(TNF-α)によるものなどが知られている。 Causes and development of inflammatory diseases such as contact dermatitis (rash), psoriasis, pemphigus vulgaris, atopic dermatitis, various skin inflammatory diseases accompanied by rough skin, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, asthma, etc. Mechanisms vary widely. It is known that the cause is mainly due to enhancement of hyaluronidase activity, tumor necrosis factor (TNF-α) produced from macrophages, and the like.

ヒアルロニダーゼは、ヒアルロン酸の加水分解酵素である。体組織への親和性を保つヒアルロン酸塩は、含水系の中では紫外線、酸素等によって分解され、分子量の低下に伴って保水効果も減少する。また、ヒアルロン酸は、生体内において細胞間組織として存在し、血管透過性にも関与している。さらに、ヒアルロニダーゼは、肥満細胞中に存在するが、その活性化により起こる脱顆粒により遊離され、炎症系ケミカルメディエーターとして作用する。したがって、ヒアルロニダーゼの活性を阻害することで、保湿の強化及び炎症の予防・軽減が期待される。ヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有するものとして、例えば、オスベッキア属植物からの抽出物(特許文献1参照)等が知られている。 Hyaluronidase is an enzyme that hydrolyzes hyaluronic acid. Hyaluronate, which maintains affinity for body tissue, is decomposed by ultraviolet light, oxygen, etc. in a water-containing system, and its water-retaining effect decreases as its molecular weight decreases. In addition, hyaluronic acid exists as intercellular tissue in vivo and is also involved in vascular permeability. Furthermore, hyaluronidase, which is present in mast cells, is released by degranulation caused by its activation and acts as an inflammatory chemical mediator. Therefore, inhibition of hyaluronidase activity is expected to enhance moisturization and prevent/reduce inflammation. As substances having hyaluronidase activity inhibitory action, for example, extracts from plants of the genus Osbechia (see Patent Document 1) are known.

TNF-αは、腫瘍を壊死させる因子として見出されたが、最近では腫瘍に対してだけでなく、正常細胞の機能を調節するメディエーター的な役割を担うサイトカインであると考えられている。TNF-αは、炎症の初発から終息までの過程において重要な役割を担っているが、その持続的かつ過剰な産生は、皮膚を含む組織の障害を引き起こし、全身的には発熱やカケクシアの原因となり、炎症の悪化を引き起こす。したがって、病的な炎症においては、TNF-αの過剰な産生を抑制することが重要となる。TNF-α産生抑制作用を有するものとして、例えば、土貝母からの抽出物(特許文献2参照)等が知られている。 TNF-α was found as a factor causing tumor necrosis, but recently it is considered to be a cytokine that plays a mediator role in regulating not only tumor but also normal cell functions. TNF-α plays an important role in the process from the onset to the end of inflammation, but its persistent and excessive production causes damage to tissues including the skin, and systemically causes fever and chalkia. resulting in exacerbation of inflammation. Therefore, suppression of excessive production of TNF-α is important in pathological inflammation. For example, extracts from mother earthen shells (see Patent Document 2) are known to have a TNF-α production inhibitory effect.

皮膚の表皮および真皮は、表皮細胞、線維芽細胞ならびにこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するコラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸等の細胞外マトリックスにより構成されている。若い皮膚においては線維芽細胞の増殖は活発であり、線維芽細胞、細胞外マトリックス成分等の皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。 The epidermis and dermis of the skin are composed of epidermal cells, fibroblasts, and extracellular matrices such as collagen, elastin, and hyaluronic acid that are outside these cells and support the skin structure. In young skin, the proliferation of fibroblasts is active, and the interaction of skin tissue such as fibroblasts and extracellular matrix components maintains homeostasis, ensuring moisture retention, flexibility, elasticity, etc. The appearance is maintained in a fresh state with tension and luster.

ところが、紫外線の照射、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり、加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲン、エラスチンおよびヒアルロン酸の産生量が減少するとともに、分解や変質を引き起こす。その結果、皮膚の保湿機能や弾力性が低下し、角質の異常剥離が生じるため、肌は張りや艶を失い、肌荒れ、シワ等の老化症状を呈するようになる。このように、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの変化、弾力性の低下等には、コラーゲン、エラスチン、ヒアルロン酸等のマトリックス成分の減少・変性等が関与している。したがって、コラーゲン、エラスチンまたはヒアルロン酸の産生を促進することは、皮膚の老化を予防、治療または改善する上で重要である。 However, under the influence of certain external factors, such as exposure to ultraviolet rays, extreme dryness of the air, and excessive skin washing, or with advanced aging, collagen, elastin, and hyaluron, which are the main constituents of the extracellular matrix, As the amount of acid produced decreases, it causes decomposition and alteration. As a result, the moisturizing function and elasticity of the skin are reduced, and abnormal exfoliation of keratin occurs, so that the skin loses its firmness and luster, and exhibits aging symptoms such as rough skin and wrinkles. Thus, changes associated with aging of the skin, ie, wrinkles, dullness, changes in texture, reduction in elasticity, etc., are associated with reduction or denaturation of matrix components such as collagen, elastin, and hyaluronic acid. Therefore, promoting the production of collagen, elastin or hyaluronic acid is important in preventing, treating or improving skin aging.

ここで、これらの細胞外マトリックス成分のうち、エラスチンは、皮膚組織に弾力性を与える線維である。エラスチンの産生を促進することができれば、しわ、たるみが起こりにくくなり、張りの消失、弾力性の低下等の皮膚の老化症状を予防、治療または改善できると考えられる。 Here, among these extracellular matrix components, elastin is a fiber that gives elasticity to skin tissue. If the production of elastin can be promoted, wrinkles and sagging are less likely to occur, and it is thought possible to prevent, treat, or ameliorate skin aging symptoms such as loss of tension and loss of elasticity.

また、エラスチンは皮膚組織の他に、肺や血管等、身体において弾力性を要する組織に広く発現している。加齢に伴ってこれらの組織から正常なエラスチンが減少すると、肺や血管等において弾力性が低下し、肺気腫等の肺疾患や高血圧、動脈瘤等の血管性疾患の原因となることが知られている。そのため、エラスチンの産生を促進することができれば、肺や血管等における弾力性の低下が起こりにくくなり、肺気腫等の肺疾患や高血圧、動脈瘤等の血管性疾患等を予防・治療できると考えられる。エラスチン産生促進作用を有するものとして、例えば、グミ科ヒッポファエ属に属する植物からの抽出物が知られている(特許文献3参照)。 In addition to skin tissue, elastin is widely expressed in tissues that require elasticity in the body, such as lungs and blood vessels. It is known that the decrease in normal elastin from these tissues with aging reduces the elasticity of the lungs and blood vessels, leading to pulmonary diseases such as emphysema, hypertension, and vascular diseases such as aneurysms. ing. Therefore, if the production of elastin can be promoted, the elasticity of the lungs and blood vessels is less likely to decrease, and pulmonary diseases such as emphysema, hypertension, and vascular diseases such as aneurysms can be prevented and treated. . For example, extracts from plants belonging to the genus Hippophae of the family Gummiaceae are known to have elastin production-promoting activity (see Patent Document 3).

一方、前述した細胞外マトリックス成分のうち、ヒアルロン酸は、ムコ多糖の一種であり、細胞間の間隙に充填されることにより細胞を保持する機能を有し、さらに細胞間隙への水分の保持、組織への潤滑性や柔軟性の付与、機械的障害等の外力に対する抵抗等、数多くの機能を有している。ヒアルロン酸の産生を促進することができれば、皮膚の荒れ、しわ、くすみ、きめの変化、弾力性の低下及び保湿機能の低下等といった皮膚の老化症状を予防、治療または改善できると考えられる。また、表皮ヒアルロン酸の合成促進に関与するヒアルロン酸合成酵素3(HAS3)の発現を促進することで、皮膚の老化を予防、治療または改善することができるものと考えられる。 On the other hand, among the extracellular matrix components described above, hyaluronic acid is a type of mucopolysaccharide, and has the function of retaining cells by being filled in the intercellular spaces, and further retaining water in the intercellular spaces. It has many functions such as lubricity and flexibility to tissues, and resistance to external forces such as mechanical damage. If the production of hyaluronic acid can be promoted, skin aging symptoms such as rough skin, wrinkles, dullness, changes in texture, loss of elasticity and loss of moisturizing function can be prevented, treated or improved. In addition, by promoting the expression of hyaluronic acid synthase 3 (HAS3) involved in promoting the synthesis of epidermal hyaluronic acid, it is believed that skin aging can be prevented, treated or improved.

さらに、ヒアルロン酸は、皮膚組織の他にも、軟骨、関節液、臍帯、眼硝子体、その他の結合組織に存在する。このうち、関節液に含まれるヒアルロン酸は、関節軟骨の表面を覆い、ヒアルロン酸が有する潤滑機能、軟骨に対する被覆・保護機能等により、関節の円滑な作動に役立っている。一方、慢性関節リウマチ等の関節炎において、関節液におけるヒアルロン酸の濃度が低下していることが知られている。したがって、ヒアルロン酸の産生を促進することで、慢性関節リウマチ、変形性関節炎、化膿性関節炎、痛風性関節炎、外傷性関節炎、または骨関節炎等の関節炎を予防または治療することができると考えられる。さらに、創傷または熱傷の治癒過程において、肉芽(組織)が形成するが、肉芽中にヒアルロン酸が著しく増加することが知られている。そのため、ヒアルロン酸の産生を促進することで、創傷または熱傷の治癒を促進することができると考えられる。ヒアルロン酸産生促進作用を有するものとしては、クスノハガシワからの抽出物(特許文献4参照)等が知られている。また、ヒアルロン酸合成酵素3(HAS3)mRNA発現促進作用を有するものとして、甘草葉部抽出物(特許文献5参照)等が知られている。 In addition to skin tissue, hyaluronic acid is present in cartilage, synovial fluid, umbilical cord, vitreous body of the eye, and other connective tissues. Among them, hyaluronic acid contained in synovial fluid covers the surface of articular cartilage and contributes to the smooth operation of joints due to its lubricating function, covering and protecting cartilage, and the like. On the other hand, in arthritis such as rheumatoid arthritis, it is known that the concentration of hyaluronic acid in synovial fluid is decreased. Therefore, by promoting the production of hyaluronic acid, arthritis such as rheumatoid arthritis, osteoarthritis, septic arthritis, gouty arthritis, traumatic arthritis, or osteoarthritis can be prevented or treated. Furthermore, it is known that granulation (tissue) is formed during the healing process of wounds or burns, and hyaluronic acid is significantly increased in the granulation. Therefore, it is believed that promoting the production of hyaluronic acid can promote healing of wounds or burns. As a substance having a hyaluronic acid production-promoting effect, an extract from Camphorella camphorata (see Patent Document 4) and the like are known. In addition, licorice leaf extract (see Patent Document 5) and the like are known to have a hyaluronic acid synthase 3 (HAS3) mRNA expression promoting effect.

他方、前述の細胞外マトリックス成分のうち、コラーゲンは、皮膚組織の構造および機械的強度の維持に寄与する繊維状タンパク質である。コラーゲンの産生を促進することができれば、しわ、たるみが起こりにくくなり、きめが粗くなり、張りが消失し、弾力性が低下する等といった皮膚の老化症状を予防、治療または改善することができると考えられる。 On the other hand, among the aforementioned extracellular matrix components, collagen is a fibrous protein that contributes to maintaining the structure and mechanical strength of skin tissue. If the production of collagen can be promoted, it is possible to prevent, treat, or improve aging symptoms such as wrinkles and sagging, rough texture, loss of tension, and decreased elasticity. Conceivable.

また、コラーゲンは、骨、腱、靱帯、角膜、血管等にも多く存在し、加齢等によるコラーゲン産生の低下が、骨粗鬆症等の原因になることが知られている。さらに、創傷の治癒過程において、コラーゲンの産生量が亢進し、線維芽細胞等の足場となることで、創傷の治癒を促進することが知られている。そのため、コラーゲンの産生を促進することは、骨粗鬆症等の予防または治療、創傷治癒の促進といった観点からも重要である。コラーゲン産生促進作用を有するものとしては、例えば、クスノハガシワからの抽出物(前述した特許文献4)等が知られている。 Also, collagen is abundantly present in bones, tendons, ligaments, corneas, blood vessels, etc., and it is known that a decrease in collagen production due to aging causes osteoporosis and the like. Furthermore, it is known that during the wound healing process, the amount of collagen produced is increased, and it serves as a scaffold for fibroblasts and the like, thereby promoting wound healing. Therefore, promotion of collagen production is also important from the viewpoint of prevention or treatment of osteoporosis and the like and promotion of wound healing. For example, an extract from Camphorella camphorata (Patent Document 4 mentioned above) is known as a substance having a collagen production-promoting action.

表皮は、外部刺激を緩和し、水分等の体内成分の逸失を制御する働きをしており、最下層である基底層から始まって、有棘層、顆粒層、角質層へと連なる4層構造から構成されている。各層に存在する大部分の細胞は、基底層から分化した角化細胞である。基底層で分裂、増殖した角化細胞は、有棘層、顆粒層を通過しながら分化し角質細胞となって、強固な架橋結合をもったケラチン蛋白線維で構成された角質層を構成し、最終的には垢として角質層から脱落する。 The epidermis has the function of relieving external stimuli and controlling the loss of body components such as water. It has a four-layer structure starting from the basal layer, which is the lowest layer, followed by the stratum spinosum, the stratum granulosum, and the stratum corneum. consists of Most of the cells present in each layer are keratinocytes differentiated from the basal layer. The keratinocytes, which divide and proliferate in the basal layer, differentiate while passing through the stratum spinosum and the stratum granulosum to become keratinocytes. Eventually, it falls off from the stratum corneum as dirt.

角質層は皮膚の最外殻に存在しており、外界からの刺激に対する物理的なバリアとしての役割を果たしている。皮膚ではこのバリア機能を持たせるため、角化細胞が基底層で産生されてから垢となって剥がれ落ちるまでのサイクル(角化)を通常4週間の周期で繰り返し、表皮の新陳代謝を行っている。しかしながら、この角質層も加齢によって新陳代謝機能が衰え、こじわ、くすみ、色素沈着、肌荒れ等の皮膚トラブルを発生することになる。そのため、角化細胞の増殖を促進し、肌の新陳代謝機能を回復させることにより、こじわ、くすみ、色素沈着等の皮膚の老化を改善できるものと考えられる。従来、表皮角化細胞増殖促進作用を有するものとして、土貝母抽出物(前述した特許文献2参照)等が知られている。 The stratum corneum is the outermost layer of the skin and serves as a physical barrier against external stimuli. In order for the skin to have this barrier function, the cycle (keratinization) from the production of keratinocytes in the basal layer to the exfoliation of the skin as dirt (keratinization) is repeated in a cycle of 4 weeks, and the metabolism of the epidermis is carried out. . However, this stratum corneum also loses its metabolic function with aging, and causes skin troubles such as wrinkles, dullness, pigmentation, and rough skin. Therefore, it is thought that skin aging such as wrinkles, dullness and pigmentation can be improved by promoting the proliferation of keratinocytes and restoring the metabolic function of the skin. Conventionally, an extract of mother earthen shell (see Patent Literature 2 mentioned above) and the like have been known as substances having an effect of promoting proliferation of epidermal keratinocytes.

また、表皮を構成する基底層、有棘層、顆粒層、および角質層のうち、特に、顆粒層においては、細胞膜が肥厚して肥厚細胞膜を形成するとともに、トランスグルタミナーゼ-1の作用により、蛋白分子間がグルタミル-リジン架橋され、強靭なケラチン蛋白線維が形成される。さらに、その一部にセラミド等が共有結合し、疎水的な構造をとることで、細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し、角質バリア機能の基礎が形成される。 Among the stratum basale, stratum spinosum, stratum granulosum, and stratum corneum, which constitute the epidermis, the cell membrane of the stratum granulosum in particular thickens to form a thickened cell membrane. Intermolecular glutamyl-lysine cross-links form tough keratin protein fibers. Furthermore, ceramide or the like is covalently bonded to a part of it to form a hydrophobic structure, which provides a base for the lamellar structure of intercellular lipids and forms the basis for the stratum corneum barrier function.

しかし、加齢とともに表皮におけるトランスグルタミナーゼ-1の産生量が減少すると、角質バリア機能及び皮膚の保湿機能が低下するため、肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状を呈したり、乾燥性皮膚疾患(例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬等)を発症したりするようになる。そのため、表皮におけるトランスグルタミナーゼ-1の産生を促進することにより、皮膚の老化症状や乾燥性皮膚疾患等を予防、治療または改善することができると考えられる。トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用を有するものとして、湖南甜茶からの抽出物(特許文献6参照)等が知られている。 However, when the amount of transglutaminase-1 produced in the epidermis decreases with aging, the keratin barrier function and the moisturizing function of the skin decrease, resulting in skin aging symptoms such as rough skin and dry skin, and dry skin diseases ( For example, atopic dermatitis, psoriasis, ichthyosis, etc.) will develop. Therefore, it is thought that aging symptoms of the skin, dry skin diseases, etc. can be prevented, treated or improved by promoting the production of transglutaminase-1 in the epidermis. An extract from Hunan sweet tea (see Patent Document 6) and the like are known to have a transglutaminase-1 production-promoting effect.

セラミドは、表皮細胞の角化の過程においてセリンとパルミトイル-CoAとを基に、セラミド合成の律速酵素として知られるセリンパルミトイルトランスフェラーゼ(SPT)をはじめとする酵素の働きにより生成される。セラミドは、皮膚最外層を覆う角質細胞間脂質の主成分として特異的に存在し、皮膚本来が持つ生体と外界とのバリア膜としての機能維持に重要な役割を果たしている。 Ceramide is produced from serine and palmitoyl-CoA in the process of keratinization of epidermal cells through the actions of enzymes including serine palmitoyltransferase (SPT) known as the rate-limiting enzyme for ceramide synthesis. Ceramide exists specifically as a major component of intercorneocyte lipids that cover the outermost layer of the skin, and plays an important role in maintaining the skin's original function as a barrier film between the living body and the outside world.

角質層の構造は、レンガとモルタルとに例えられ、15層ほどに積み重なった角質細胞を細胞間脂質が繋ぎ止める形で強固なバリア膜を形成している。角質細胞は、アミノ酸を主成分とする天然保湿因子を細胞内に含有することによって水分を保持し、一方、角質細胞間脂質は、約50%のセラミドを主成分とし、コレステロール、脂肪酸等の両親媒性脂質から構成されており、疎水性部分と親水性部分とが交互に繰り返される層板構造、いわゆるラメラ構造を特徴としている。 The structure of the stratum corneum is likened to a brick and a mortar, and forms a strong barrier film in the form of intercellular lipids connecting corneocytes, which are piled up in about 15 layers. Corneocytes retain moisture by containing natural moisturizing factors whose main components are amino acids, while intercorneocyte lipids are mainly composed of about 50% ceramide, and contain cholesterol, fatty acids, and other parent substances. It is composed of lipophilic lipids and is characterized by a so-called lamellar structure in which hydrophobic and hydrophilic portions are alternately repeated.

様々な内的・外的要因による皮膚のバリア機能の低下は、経表皮水分蒸散量を増加させ、皮膚のかさつき、落屑、掻痒感等を惹き起こし、いわゆる乾燥肌に陥る。また、皮膚のバリア機能の低下は、皮膚の炎症を増大させ、外界からの様々な刺激に対する防御機能が低下するという悪循環に陥る。最近の研究において、加齢により、またはバリア障害として知られるアトピー性皮膚炎患者において、角質セラミド成分(いわゆる細胞間脂質)の減少や組成変化が報告されており(非特許文献1参照)、皮膚のバリア機能の維持、改善にセラミドが重要であることが広く知られるようになっている。皮膚のバリア機能を改善する方法として、セラミドを外部から補う方法(非特許文献2参照)や皮膚内部においてセラミド産生能を高める方法(非特許文献3参照)等が知られている。 Deterioration of the skin barrier function due to various internal and external factors increases transepidermal water loss, causing dry skin, desquamation, itching, and the like, resulting in so-called dry skin. In addition, the deterioration of the skin barrier function leads to a vicious cycle in which skin inflammation increases and the defense function against various external stimuli decreases. In recent studies, it has been reported that keratin ceramide components (so-called intercellular lipids) decrease or change in composition due to aging or in patients with atopic dermatitis known as barrier disorder (see Non-Patent Document 1). It has become widely known that ceramide is important for maintaining and improving the barrier function of the skin. Known methods for improving the barrier function of the skin include a method of supplementing ceramide from the outside (see Non-Patent Document 2) and a method of increasing ceramide-producing ability inside the skin (see Non-Patent Document 3).

皮膚細胞では、水チャンネルとして知られるアクアポリンが、細胞膜上に発現して、細胞間隙の水をはじめとする低分子物質を細胞内へ取り込む役割を担っていることが知られている。ヒトでは、13種類のアクアポリン(AQP0~AQP12)の存在が知られている。表皮細胞においては、主としてAQP3が存在しており、水に加えて、水分保持作用に関与するグリセロールや尿素等の低分子化合物をも取り込む役割を担っていると考えられている。 It is known that in skin cells, aquaporins, known as water channels, are expressed on the cell membrane and play a role in the uptake of low-molecular-weight substances, including intercellular water, into the cells. In humans, 13 kinds of aquaporins (AQP0 to AQP12) are known to exist. Epidermal cells mainly contain AQP3, which is thought to play a role in taking up not only water but also low-molecular-weight compounds such as glycerol and urea that are involved in water retention.

しかしながら、AQP3は加齢とともに減少し、このことが水分保持機能の低下の一因であることが示唆されているため、AQP3の発現を促進することにより、加齢による水分保持能やバリア機能等を制御することが可能であると考えられる(非特許文献4参照)。AQP3発現促進作用を有するものとして、例えば、スターフルーツの葉部からの抽出物(特許文献7参照)等が知られている。 However, AQP3 decreases with age, and it has been suggested that this is one of the reasons for the decline in water retention function. can be controlled (see Non-Patent Document 4). For example, an extract from star fruit leaves (see Patent Document 7) is known to have an AQP3 expression promoting effect.

グルタチオンは、グルタミン酸、システイン及びグリシンの3つのアミノ酸からなるトリペプチドであり、細胞内の主要なシステイン残基を有する化合物である。細胞内におけるグルタチオンは、ラジカルの捕捉、酸化還元による細胞機能の調節、異物代謝、各種酵素のSH供与体としての機能を果たすものであり、活性酸素等に対する抗酸化成分としても知られている。その作用発現は、システイン残基に由来すると考えられている。しかしながら、過剰な酸化ストレスや異物の付加、加齢などにより、細胞内のグルタチオン量が欠乏または低下することが報告されており、このことが細胞の酸化ストレスに対する防御能を低下させ、細胞のDNA及びタンパク質等の構成成分にダメージを与える一因であると考えられている。 Glutathione is a tripeptide consisting of three amino acids, glutamic acid, cysteine and glycine, and is the compound with the major cysteine residue in cells. Glutathione in cells functions as a radical scavenger, regulates cell functions by oxidation-reduction, metabolizes foreign substances, and acts as an SH donor for various enzymes, and is also known as an antioxidant component against active oxygen and the like. Its action is believed to be derived from cysteine residues. However, it has been reported that the amount of intracellular glutathione is depleted or decreased due to excessive oxidative stress, addition of foreign substances, aging, etc. This reduces the defense ability of cells against oxidative stress, and increases the DNA content of cells. and is considered to be one of the causes of damage to constituents such as proteins.

このような、細胞内のグルタチオン量の低下または欠乏が病態と関連することが知られている疾患として、皮膚のシミ等の色素沈着、皮膚の老化、酸化ストレスが原因となって誘発される前述した疾患群のほか、肝障害(アルコールの多飲、または重金属や化学物質等の異物の摂取が原因となる)等が知られている。すなわち、グルタチオンの産生を促進することは、細胞の酸化ストレスに対する防御能を高め、細胞内のグルタチオン量が低下または欠乏することに起因する上記の疾患群を予防・治療することができると考えられる。グルタチオン産生促進作用を有するものとして、琥珀熱水抽出物(特許文献8参照)等が知られている。 Diseases in which a decrease or deficiency in the amount of intracellular glutathione is known to be associated with pathological conditions include pigmentation such as skin spots, aging of the skin, and oxidative stress. In addition to the group of diseases listed above, liver disorders (caused by excessive alcohol consumption or ingestion of foreign substances such as heavy metals and chemical substances) are known. That is, promoting the production of glutathione is thought to increase the ability of cells to defend against oxidative stress, and prevent and treat the above-mentioned groups of diseases caused by a decrease or deficiency in the amount of intracellular glutathione. . Amber hot water extract (see Patent Document 8) and the like are known to have a glutathione production promoting effect.

毛髪は、成長期、退行期及び休止期からなる周期的なヘアサイクル(毛周期)に従って成長及び脱落を繰り返している。このヘアサイクルのうち、休止期から成長期にかけての新たな毛包が形成されるステージが、発毛に最も重要であると考えられており、このステージにおける毛包上皮系細胞の増殖・分化に重要な役割を果たしているのが、毛乳頭細胞であると考えられている。毛乳頭細胞は、毛根近傍にある外毛根鞘細胞とマトリックス細胞とからなる毛包上皮系細胞の内側にあって、基底膜に包まれている毛根の根幹部分に位置する細胞であり、毛包上皮系細胞に働きかけてその増殖を促進する等、毛包上皮系細胞の増殖・分化及び毛髪の形成において重要な役割を担っている(非特許文献5参照)。 Hair repeats growth and shedding according to a periodic hair cycle (hair cycle) consisting of a growth phase, a regression phase and a telogen phase. Within this hair cycle, the stage from the resting phase to the anagen phase, in which new hair follicles are formed, is considered to be the most important for hair growth. Dermal papilla cells are thought to play an important role. Dermal papilla cells are cells located inside hair follicle epithelial cells consisting of outer root sheath cells and matrix cells in the vicinity of the hair root, and located at the root portion of the hair root surrounded by the basement membrane. It plays an important role in proliferation/differentiation of hair follicle epithelial cells and hair formation, such as acting on epithelial cells to promote their proliferation (see Non-Patent Document 5).

このように、毛乳頭細胞は、毛包上皮系細胞の増殖・分化及び毛髪の形成において重要な役割を果たしており、毛乳頭細胞の増殖を促進することで、脱毛症を予防・改善することができると考えられる。これまでに、毛乳頭細胞増殖促進作用を有するものとしては、例えば、ワイルドタイム抽出物(特許文献9参照)等が知られている。 Thus, dermal papilla cells play an important role in the proliferation and differentiation of hair follicle epithelial cells and hair formation, and promoting the proliferation of dermal papilla cells can prevent and improve alopecia. It is possible. So far, for example, wild thyme extract (see Patent Document 9) and the like are known to have an effect of promoting the proliferation of dermal papilla cells.

毛髪に関する問題としては、抜け毛、薄毛等といった毛根・毛包の状態に関するもののほかに、毛髪が硬い、柔らかい、細い、はり・こしがない、枝毛、くせ毛等といった毛髪の髪質に関するもの等がある。さらに、毛髪の髪質に関する問題としても、日常のヘアケア、ヘアメイク、紫外線暴露等による毛髪の損傷に起因するものや、毛幹形成における問題に起因するものなどがあり、極めて多様な要因が関与している。 Problems related to hair include those related to the state of hair roots and hair follicles such as hair loss and thinning hair, as well as those related to hair quality such as hard, soft, thin, lack of elasticity, split ends, and frizzy hair. . Furthermore, problems related to the quality of hair are caused by hair damage caused by daily hair care, hair makeup, exposure to ultraviolet rays, etc., and by problems in hair shaft formation. ing.

毛髪は、その表面を覆うキューティクル(毛小皮)、その内部にある毛皮質(コルテックス)及び毛髪の中心を占める毛髄質(メデュラ)から構成されている。このうち、毛髪の損傷においては、その表面を覆うキューティクルがもっとも影響を受けやすく、また毛髪の硬さ、はり・こし等にはキューティクルが重要な役割を担っていることが知られている(例えば、非特許文献6参照)。そのため、キューティクルを効果的に再生することができれば、毛髪の硬さ、はり・こし等の髪質の改善が可能になると考えられる。 Hair is composed of a cuticle covering its surface, a cortex inside it, and a medulla occupying the center of the hair. Among these, it is known that the cuticle that covers the surface of the hair is most susceptible to damage to the hair, and that the cuticle plays an important role in the hardness, stiffness, stiffness, etc. of the hair (for example, , Non-Patent Document 6). Therefore, if the cuticle can be effectively regenerated, it is considered possible to improve the hair quality such as hardness, elasticity, and stiffness of the hair.

ここで、最近、ケラチン関連タンパク質(Keratin-associated protein;KAP)のうち、KAP5ファミリー遺伝子のmRNA発現量と毛髪のはり・こしの強さとの間に相関関係があることが明らかにされた(例えば、特許文献10参照)。また、KAP5ファミリーの一つであるKAP5.1が、成長過程にあるキューティクルに局在することも報告されている(例えば、非特許文献7参照)。このため、KAP5ファミリー、特にKAP5.1mRNAの発現を促進することができれば、キューティクルの再生、ひいては毛髪の硬さ、はり・こし等の髪質の改善につながると期待されている。 Here, recently, among keratin-associated proteins (KAP), it has been clarified that there is a correlation between the mRNA expression level of the KAP5 family gene and the strength of hair elasticity and stiffness (for example, , see Patent Document 10). It has also been reported that KAP5.1, one of the KAP5 families, is localized in the growing cuticle (see, for example, Non-Patent Document 7). Therefore, if the expression of the KAP5 family, especially KAP5.1 mRNA can be promoted, it is expected to lead to regeneration of the cuticle and, in turn, improvement of hair quality such as hardness, elasticity, and stiffness of the hair.

このような中、KAP5.1mRNAの発現を促進するものとして、甘草葉部抽出物等が報告されている(特許文献11参照)。 Under such circumstances, a licorice leaf extract or the like has been reported as a substance that promotes the expression of KAP5.1 mRNA (see Patent Document 11).

特開2003-055242号公報JP 2003-055242 A 特開2006-056854号公報JP 2006-056854 A 特開2005-022993号公報JP-A-2005-022993 特開2003-146837号公報JP-A-2003-146837 特開2010-090035号公報JP 2010-090035 A 特開2007-099698号公報JP 2007-099698 A 特開2009-191039号公報JP 2009-191039 A 特開2010-235551号公報JP 2010-235551 A 特開2006-219407号公報JP 2006-219407 A 特開2006-014721号公報JP 2006-014721 A 特開2013-193959号公報JP 2013-193959 A

J. Dermatol.,1993年,Vol.20,No.1,p.1-6J. Dermatol., 1993, Vol.20, No.1, p.1-6 「フレグランスジャーナル」,2004年,Vol.32,No.11,p.23-32"Fragrance Journal", 2004, Vol.32, No.11, p.23-32 Br. J. Dermatol.,2000年,Vol.143,Issue 3,p.524-531Br. J. Dermatol., 2000, Vol.143, Issue 3, p.524-531 「フレグランスジャーナル」,2006年,Vol.34,No.10,p.19-23"Fragrance Journal", 2006, Vol.34, No.10, p.19-23 Trends Genet.,1992年,Vol.8,Issue 2,p.55-61Trends Genet., 1992, Vol.8, Issue 2, p.55-61 曽我部敦ら,日本化粧品技術者会誌,2002年,第36巻,第3号,p.207-216Atsushi Sogabe et al., Journal of the Society of Cosmetic Engineers of Japan, 2002, Vol.36, No.3, p.207-216 Jones LN. et al.,Int J Trichology,2010年,Vol.2,No.2,p.89-95Jones LN. et al., Int J Trichology, 2010, Vol.2, No.2, p.89-95

本発明は、天然物に由来し、優れた抗炎症作用、抗老化作用、美白作用または育毛作用を有する新規組成物を提供することを目的とする。合わせて、本発明は、当該新規組成物を有効成分とするる抗炎症剤、抗老化剤、美白剤および育毛剤、ならびに当該新規組成物を配合した化粧料および飲食品組成物を提供することを、さらなる目的とする。 An object of the present invention is to provide a novel composition derived from a natural product and having excellent anti-inflammatory, anti-aging, whitening or hair-restoring effects. In addition, the present invention provides an anti-inflammatory agent, an anti-aging agent, a whitening agent, and a hair restorer containing the novel composition as an active ingredient, as well as cosmetic and food and beverage compositions containing the novel composition. is a further object.

上記課題を解決するために、本発明は、天然物由来成分として、シロキクラゲ抽出発酵物を提供する。また、本発明の抗炎症剤、抗老化剤、美白剤および育毛剤は、シロキクラゲ抽出発酵物を有効成分とすることを特徴とする。さらに、本発明の化粧料および飲食品組成物は、シロキクラゲ抽出発酵物を配合したことを特徴とする。 In order to solve the above problems, the present invention provides a fermented extract of Tremella fungus as a natural product-derived component. Further, the anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent and hair restorer of the present invention are characterized by containing a fermented extract of Tremella fungus as an active ingredient. Furthermore, the cosmetic and food/drink compositions of the present invention are characterized by blending a fermented extract of Tremella fungus.

本発明によれば、抗炎症作用、抗老化作用、美白作用または育毛作用に優れた天然物由来成分として、シロキクラゲ抽出発酵物を提供することができる。また、シロキクラゲ抽出発酵物を有効成分とすることにより、作用効果に優れた抗炎症剤、抗老化剤、美白剤および育毛剤を提供することができる。さらに、シロキクラゲ抽出発酵物を配合することにより、上記作用に優れた化粧料および飲食品組成物を提供することができる。 INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, it is possible to provide a fermented Tremella fungus extract as a natural product-derived component excellent in anti-inflammatory action, anti-aging action, whitening action or hair growth action. Moreover, by using the fermented extract of Tremella as an active ingredient, it is possible to provide an anti-inflammatory agent, an anti-aging agent, a whitening agent and a hair restorer with excellent effects. Furthermore, by blending the fermented extract of Tremella fungus, it is possible to provide cosmetics and food and beverage compositions that are excellent in the above effects.

以下、本発明の実施の形態について説明する。
〔シロキクラゲ抽出発酵物〕
本実施形態に係るシロキクラゲ抽出発酵物は、シロキクラゲからの抽出物の、微生物による発酵物である。
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Embodiments of the present invention will be described below.
[Fermented tremella extract]
The fermented extract of Tremella Tremella according to the present embodiment is a fermented product of an extract from Tremella tremella by microorganisms.

ここで、本明細書における「シロキクラゲ抽出発酵物」には、別段の記載がある場合を除き、シロキクラゲ抽出物を発酵原料として得られる発酵液、当該発酵液の希釈液もしくは濃縮液、当該発酵液を乾燥して得られる乾燥物、またはこれらの粗精製物もしくは精製物のいずれもが含まれる。また、本明細書における「シロキクラゲ抽出物」には、シロキクラゲを抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、またはこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。 Here, unless otherwise specified, the term “tremella fungus extract fermented product” in the present specification includes a fermentation broth obtained by using a tremella fungus extract as a fermentation raw material, a diluted or concentrated solution of the fermentation broth, and the fermentation broth. Dried products obtained by drying, or crudely purified products or purified products thereof are included. In addition, the "white fungus extract" in this specification includes an extract obtained from white fungus as an extraction raw material, a diluted or concentrated liquid of the extract, a dried product obtained by drying the extract, or a crude Both purified and purified products are included.

本実施形態において使用する原料は、シロキクラゲ(学名:Tremella fuciformis)である。 The raw material used in this embodiment is white fungus (scientific name: Tremella fuciformis).

シロキクラゲ(学名:Tremella fuciformis)は、シロキクラゲ科シロキクラゲ属に属する担子菌(キノコ)であり、日本や中国において食用とされており、これらの地域から容易に入手することが出来る。原料として使用する部位は特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、子実体が好ましい。 Tremella fuciformis (scientific name: Tremella fuciformis) is a basidiomycete (mushroom) belonging to the genus Tremella of the family Tremella, is edible in Japan and China, and can be easily obtained from these regions. The part used as a raw material is not particularly limited and can be appropriately selected according to the purpose, but the fruiting body is preferred.

上記シロキクラゲからの抽出物は、抽出原料を乾燥した後、そのまままたは粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。 The extract from the white fungus can be obtained by drying the raw material for extraction, either as it is or pulverizing it using a coarse crusher, and subjecting it to extraction with an extraction solvent. Drying may be performed in the sun or using a commonly used dryer. In addition, it may be used as an extraction raw material after being subjected to pretreatment such as degreasing with a non-polar solvent such as hexane. By performing pretreatment such as degreasing, the extraction treatment with a polar solvent can be efficiently performed.

抽出溶媒としては、極性溶媒を使用することが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独でまたは2種以上を組み合わせて、室温または溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。 As the extraction solvent, it is preferable to use a polar solvent, for example, water, hydrophilic organic solvents, etc., which are used alone or in combination of two or more at room temperature or at a temperature below the boiling point of the solvent. is preferred.

抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本実施形態において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。 Water that can be used as an extraction solvent includes pure water, tap water, well water, mineral spring water, mineral water, hot spring water, spring water, fresh water, and the like, as well as those subjected to various treatments. Treatments applied to water include, for example, purification, heating, sterilization, filtration, ion exchange, osmotic adjustment, buffering, and the like. Therefore, water that can be used as an extraction solvent in the present embodiment includes purified water, hot water, ion-exchanged water, physiological saline, phosphate buffer, phosphate buffered physiological saline, and the like.

抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数1~5の低級脂肪族アルコール;アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン;1,3-ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数2~5の多価アルコール等が挙げられる。 Hydrophilic organic solvents that can be used as extraction solvents include lower aliphatic alcohols having 1 to 5 carbon atoms such as methanol, ethanol, propyl alcohol and isopropyl alcohol; lower aliphatic ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; 1,3-butylene. Examples include polyhydric alcohols having 2 to 5 carbon atoms such as glycol, propylene glycol and glycerin.

2種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を抽出溶媒として使用する場合には、水と低級脂肪族アルコールとの混合比が9:1~1:9(容量比)であることが好ましく、7:3~2:8(容量比)であることがさらに好ましい。また、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水と低級脂肪族ケトンとの混合比が9:1~2:8(容量比)であることが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水と多価アルコールとの混合比が7:3~1:9(容量比)であることが好ましい。 When using a mixture of two or more polar solvents as the extraction solvent, the mixture ratio can be adjusted as appropriate. For example, when a mixture of water and a lower aliphatic alcohol is used as the extraction solvent, the mixing ratio of water and the lower aliphatic alcohol is preferably 9: 1 to 1: 9 (volume ratio), More preferably, it is 7:3 to 2:8 (volume ratio). When using a mixture of water and lower aliphatic ketone, the mixing ratio of water and lower aliphatic ketone is preferably 9:1 to 2:8 (volume ratio). When using a mixed solution with a hydric alcohol, the mixing ratio of water and polyhydric alcohol is preferably 7:3 to 1:9 (volume ratio).

抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の5~15倍量(質量比)の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温、還流加熱下または加圧下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。 The extraction treatment is not particularly limited as long as the soluble components contained in the raw material for extraction can be eluted into the extraction solvent, and can be carried out according to a conventional method. For example, the extraction raw material is immersed in an extraction solvent of 5 to 15 times the amount (mass ratio) of the extraction raw material, and the soluble components are extracted at room temperature, under reflux heating or under pressure, and then filtered to remove the extraction residue. Thus, an extract can be obtained. A paste-like concentrate is obtained by distilling off the solvent from the obtained extract, and a dried product is obtained by further drying the concentrate.

以上のようにして得られたシロキクラゲ抽出物は、微生物による発酵に付される。発酵処理は、例えば、濃縮乾固したシロキクラゲ抽出物を水に溶解し、またはシロキクラゲ抽出液を濃縮乾固せずにそのまま用い、発酵を行う微生物を接種することにより行うことができる。 The white fungus extract obtained as described above is subjected to fermentation by microorganisms. Fermentation treatment can be carried out, for example, by dissolving a concentrated and dried white fungus extract in water, or by using the white fungus extract as it is without concentrating and drying, and inoculating the fermenting microorganism.

発酵を行う微生物は、特に限定されず、乳酸菌、酵母、麹菌などが挙げられる。具体的に、乳酸菌としては、ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス・カゼイ(Lactobacillus casei)等のラクトバチルス(Lactobacillus)属;ビフィドバクテリウム・ビフィドゥム(Bifidobacterium bifidum)、ビフィドバクテリウム・ブレビ(Bifidobacterium breve)等のビフィドバクテリウム(Bifidobacterium)属;などに属する乳酸菌が例示される。また、酵母としては、サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae,パン酵母)、サッカロミセス・ヴェローナ(Saccharomyces veronae)等のサッカロミセス(Saccharomyces)属;シゾサッカロミセス・ポンベ(Schizosaccharomyces pombe)等のシゾサッカロミセス(Schizosaccharomyces)属;クルイヴェロミセス・サーモトレランス(Kluyveromyces thermotolerans)等のクルイヴェロミセス(Kluyveromyces)属;ジゴサッカロミセス・サーモトレランス(Zygosaccharomyces thermotolerans)等のジゴサッカロミセス(Zygosaccharomyces)属;ラカンセア・サーモトレランス(Lachancea thermotolerans)等のラカンセア属;などが好ましく例示される。麹菌としては、アスペルギルス・オリゼー(Aspergillus oryzae)、アスペルギルス・ソヤ(Aspergillus sojae)等のアスペルギルス属(Aspergillus);モナスカス・プルプレウス(Monascus purpureus)等のモナスカス属(Monascus)などが例示される。本実施形態において、これらの微生物は1種を単独でまたは2種以上を併用して用いることができる。2種以上を併用する場合には、2種以上の微生物により同時に発酵を行ってもよく、また、先に麹菌による1次発酵を行ったのち、乳酸菌および/または酵母による2次発酵を行ってもよい。 Microorganisms that perform fermentation are not particularly limited, and examples thereof include lactic acid bacteria, yeast, and koji mold. Specifically, the lactic acid bacteria include Lactobacillus plantarum, Lactobacillus casei and other genus Lactobacillus; Examples include lactic acid bacteria belonging to the genus Bifidobacterium such as Bifidobacterium breve. Examples of yeast include Saccharomyces genus such as Saccharomyces cerevisiae (baker's yeast) and Saccharomyces veronae; and Schizosaccharomyces genus such as Schizosaccharomyces pombe Kluyveromyces genus such as Kluyveromyces thermotolerans; Zygosaccharomyces genus such as Zygosaccharomyces thermotolerans; Lacanthea such as Lachancea thermotolerans and the like are preferably exemplified. Examples of koji mold include Aspergillus oryzae, Aspergillus sojae and other Aspergillus species; Monascus purpureus and other Monascus species, and the like. In this embodiment, these microorganisms can be used individually by 1 type or in combination of 2 or more types. When two or more kinds of microorganisms are used in combination, fermentation may be carried out simultaneously with two or more kinds of microorganisms, or primary fermentation with koji mold is first carried out, and then secondary fermentation with lactic acid bacteria and/or yeast is carried out. good too.

本実施形態において用いる微生物は、これらの中でも、安全性の観点や、後述するシロキクラゲ抽出発酵物が奏する作用の観点から、ラクトバシルス・プランタラム(Lactobacillus plantarum)およびサッカロミセス・ヴェローナ(Saccharomyces veronae)のうち1種以上であることが好ましい。 Among these, the microorganism used in the present embodiment is one of Lactobacillus plantarum and Saccharomyces veronae from the viewpoint of safety and the viewpoint of the action exhibited by the fermented product extracted from white fungus described later. Seeds or more are preferred.

ここで、ラクトバシルス・プランタラムは、乳酸菌の一種であるが、主として野菜漬物、キムチ、味噌などの植物性の発酵食品から分離されることから植物性乳酸菌に包含され、ヨーグルト等の発酵乳や乳酸菌飲料の製造に用いられる動物性乳酸菌とは異なるものである。また、サッカロミセス・ヴェローナ(Saccharomyces veronae)(別名:ラカンセア・サーモトレランス(Lachancea thermotolerans))は、実質的にアルコール発酵を行わない点において、サッカロミセス・セレビシエといった他の酵母とは異なるものである。 Here, Lactobacillus plantarum is a kind of lactic acid bacteria, but it is mainly isolated from fermented vegetable foods such as vegetable pickles, kimchi, and miso, so it is included in vegetable lactic acid bacteria, and fermented milk such as yogurt and lactic acid bacteria. It is different from animal lactic acid bacteria used in the production of beverages. Saccharomyces veronae (also known as Lachancea thermotolerans) differs from other yeasts such as Saccharomyces cerevisiae in that it does not substantially undergo alcoholic fermentation.

さらに、ラクトバシルス・プランタラムを用いる場合、ラクトバシルス・プランタラム 22A-1(FERM P-21409)、ラクトバシルス・プランタラム 22A-3(FERM P-21411)、およびラクトバシルス・プランタラム 22B-2(FERM P-21410)からなる群より選択される1または2以上を用いることが好ましく、ラクトバシルス・プランタラム 22A-3(FERM P-21411)を用いることが特に好ましい。ここで、上記ラクトバシルス・プランタラム 22A-1(FERM P-21409)、ラクトバシルス・プランタラム 22A-3(FERM P-21411)、およびラクトバシルス・プランタラム 22B-2(FERM P-21410)の3株は、本出願人により漬物から単離・同定された株であり、独立行政法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに寄託されている。 Furthermore, when using Lactobacillus plantarum, Lactobacillus plantarum 22A-1 (FERM P-21409), Lactobacillus plantarum 22A-3 (FERM P-21411), and Lactobacillus plantarum 22B-2 (FERM P- 21410), and particularly preferably Lactobacillus plantarum 22A-3 (FERM P-21411). Here, the three strains of Lactobacillus plantarum 22A-1 (FERM P-21409), Lactobacillus plantarum 22A-3 (FERM P-21411), and Lactobacillus plantarum 22B-2 (FERM P-21410) are , is a strain isolated and identified from pickles by the applicant of the present application, and has been deposited at the Independent Administrative Institution National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Patent Organism Depositary.

上記微生物を用いた発酵処理は、例えば、シロキクラゲ抽出物水溶液と上記微生物とを発酵槽に入れ、25~35℃、好ましくは28~32℃の温度範囲で、12~72時間、好ましくは18~48時間処理することにより、行うことができる。また、発酵処理の開始時において、反応液のpHが5.0~7.0に、好ましくは5.5~6.5に調整されていると、発酵処理が好適に進行する。かかる発酵処理は、発酵液を冷却、加熱殺菌、ろ過などの所望の手段に付し、発酵菌を不活性化させることで終了させる。 Fermentation treatment using the above-mentioned microorganisms is carried out, for example, by placing an aqueous solution of Tremella fungus extract and the above-mentioned microorganisms in a fermenter at a temperature range of 25 to 35 ° C., preferably 28 to 32 ° C., for 12 to 72 hours, preferably 18 to 18. It can be done by treating for 48 hours. Further, when the pH of the reaction solution is adjusted to 5.0 to 7.0, preferably 5.5 to 6.5 at the start of the fermentation process, the fermentation process proceeds favorably. Such fermentation treatment is completed by subjecting the fermented liquid to desired means such as cooling, heat sterilization, and filtration to inactivate the fermenting bacteria.

このようにして得られた発酵液は、そのまま発酵物として用いてもよく、または適宜希釈しもしくは濃縮して、発酵物として用いてもよい。さらには、濃縮物をさらに乾燥してもよく、粗精製などを行ってもよい。 The fermented liquid thus obtained may be used as it is as a fermented product, or may be diluted or concentrated as appropriate and used as a fermented product. Furthermore, the concentrate may be further dried, and crude purification and the like may be performed.

なお、前述した抽出処理や発酵処理の前に、抽出原料や抽出物(発酵原料)に対し、抽出効率や発酵効率を高めるための処理を行ってもよい。このような処理としては、例えば、グルカナーゼ、セルラーゼ等を用いた酵素処理が好ましく例示される。例えば、抽出処理により得られた抽出物に酵素処理を行うと、その後の発酵処理の効率が高まるため、特に好ましい。 In addition, before the extraction process and fermentation process described above, the raw material for extraction or the extract (raw material for fermentation) may be subjected to a process for increasing the efficiency of extraction or fermentation. Preferred examples of such treatment include enzymatic treatment using glucanase, cellulase, and the like. For example, it is particularly preferable to subject the extract obtained by the extraction treatment to an enzyme treatment, since the efficiency of the subsequent fermentation treatment is increased.

このようにして得られるシロキクラゲ抽出発酵物は、優れた抗炎症作用、抗老化作用、美白作用および育毛作用を示すため、以下に述べる抗炎症剤、抗老化剤、美白剤または育毛剤の有効成分として、また化粧料または飲食品組成物の配合成分として特に好適である。 The fermented extract of Tremella fungus obtained in this manner exhibits excellent anti-inflammatory, anti-aging, whitening and hair growth effects, and therefore the active ingredient of the anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent or hair restorer described below. as a component of cosmetics or food and drink compositions.

〔抗炎症剤,抗老化剤,美白剤,育毛剤〕
本実施形態に係る抗炎症剤、抗老化剤、美白剤および育毛剤は、前述のようにして得られるシロキクラゲ抽出発酵物を有効成分とするものである。本実施形態の抗炎症剤、抗老化剤、美白剤および育毛剤は、医薬品、医薬部外品、化粧品等の幅広い用途に使用することができる。
[Anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent, hair restorer]
The anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent and hair restorer according to the present embodiment contain the fermented extract of Tremella fungus obtained as described above as an active ingredient. The anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent and hair restorer of this embodiment can be used in a wide range of applications such as pharmaceuticals, quasi-drugs and cosmetics.

ここで、シロキクラゲ抽出発酵物が有する抗炎症作用は、例えば、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用および/または腫瘍壊死因子(TNF-α)産生抑制作用に基づいて発揮される。ただし、シロキクラゲ抽出発酵物が有する抗炎症作用は、上記作用に基づいて発揮される抗炎症作用に限定されるものではない。また、シロキクラゲ抽出発酵物は、そのヒアルロニダーゼ活性阻害作用またはTNF-α産生抑制作用を利用して、それぞれヒアルロニダーゼ活性阻害剤またはTNF-α産生抑制剤の有効成分として使用してもよい。 Here, the anti-inflammatory effect of the fermented extract of white fungus is exerted based on, for example, hyaluronidase activity inhibitory effect and/or tumor necrosis factor (TNF-α) production inhibitory effect. However, the anti-inflammatory action of the fermented product of Tremella fungus extract is not limited to the anti-inflammatory action exhibited based on the above action. In addition, the fermented extract of white fungus may be used as an active ingredient of a hyaluronidase activity inhibitor or a TNF-α production inhibitor, respectively, by utilizing its hyaluronidase activity inhibitory action or TNF-α production inhibitory action.

シロキクラゲ抽出発酵物が有する抗老化作用は、例えば、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖作用、トランスグルタミナーゼ-1(TG-1)産生促進作用、プロフィラグリンmRNA発現促進作用、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ(SPT)mRNA発現促進作用、アクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用およびヒアルロン酸合成酵素3(HAS3)mRNA発現促進作用からなる群より選択される1種または2種以上の作用に基づいて発揮される。ただし、シロキクラゲ抽出発酵物が有する抗老化作用は、上記作用に基づいて発揮される抗老化作用に限定されるものではない。 The anti-aging effect of the fermented product of Tremella fungus extract includes, for example, elastin production promoting action, hyaluronic acid production promoting action, type IV collagen production promoting action, epidermal keratinocyte proliferation action, and transglutaminase-1 (TG-1) production promoting action. , profilaggrin mRNA expression promoting action, serine palmitoyltransferase (SPT) mRNA expression promoting action, aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting action and hyaluronic acid synthase 3 (HAS3) mRNA expression promoting action. Alternatively, it is exerted based on two or more types of action. However, the anti-aging action of the fermented product of the fungus extract is not limited to the anti-aging action exhibited based on the above action.

また、シロキクラゲ抽出発酵物は、そのエラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖作用、TG-1産生促進作用、プロフィラグリンmRNA発現促進作用、SPTmRNA発現促進作用、AQP3mRNA発現促進作用またはHAS3mRNA発現促進作用を利用して、それぞれエラスチン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、IV型コラーゲン産生促進剤、表皮角化細胞増殖剤、TG-1産生促進剤、プロフィラグリンmRNA発現促進剤、SPTmRNA発現促進剤、AQP3mRNA発現促進剤またはHAS3mRNA発現促進剤の有効成分として使用してもよい。 In addition, the fermented tremella fungus extract has elastin production-promoting action, hyaluronic acid production-promoting action, type IV collagen production-promoting action, epidermal keratinocyte proliferation action, TG-1 production-promoting action, profilaggrin mRNA expression-promoting action, and SPT mRNA expression. Elastin production promoter, hyaluronic acid production promoter, type IV collagen production promoter, epidermal keratinocyte proliferator, TG-1 production promoter, and It may be used as an active ingredient of profilaggrin mRNA expression promoter, SPT mRNA expression promoter, AQP3 mRNA expression promoter or HAS3 mRNA expression promoter.

シロキクラゲ抽出発酵物が有する美白作用は、例えば、グルタチオン産生促進作用に基づいて発揮される。ただし、シロキクラゲ抽出発酵物が有する美白作用は、上記作用に基づいて発揮される美白作用に限定されるものではない。また、シロキクラゲ抽出発酵物は、そのグルタチオン産生促進作用を利用して、グルタチオン産生促進剤の有効成分として使用してもよい。 The whitening effect of the fermented product of the fungus extract is exhibited based on, for example, the effect of promoting glutathione production. However, the whitening action of the fermented product of the fungus extract is not limited to the whitening action exhibited based on the above action. Moreover, the fermented extract of Tremella fungus may be used as an active ingredient of a glutathione production promoter by utilizing its glutathione production promoting action.

シロキクラゲ抽出発酵物が有する育毛作用は、例えば、毛乳頭細胞増殖促進作用および/またはケラチン関連タンパク質5.1(KAP5.1)mRNA発現促進作用に基づいて発揮される。ただし、シロキクラゲ抽出発酵物が有する育毛作用は、上記作用に基づいて発揮される育毛作用に限定されるものではない。また、シロキクラゲ抽出発酵物は、その毛乳頭細胞増殖促進作用またはKAP5.1mRNA発現促進作用を利用して、それぞれ毛乳頭細胞増殖促進剤またはKAP5.1mRNA発現促進剤の有効成分として使用してもよい。 The hair-restoring action of the fermented extract of Tremella fungus is exerted based on, for example, dermal papilla cell proliferation-promoting action and/or keratin-associated protein 5.1 (KAP5.1) mRNA expression-promoting action. However, the hair-restoring action of the fermented extract of white fungus is not limited to the hair-restoring action exhibited based on the above action. In addition, the fermented extract of Tremella fungus may be used as an active ingredient of a dermal papilla cell proliferation-promoting agent or a KAP5.1 mRNA expression-promoting agent, respectively, by utilizing its dermal papilla cell proliferation-promoting action or KAP5.1 mRNA expression-promoting action. .

本実施形態の抗炎症剤、抗老化剤、美白剤または育毛剤は、シロキクラゲ抽出発酵物のみからなるものでもよいし、シロキクラゲ抽出発酵物を製剤化したものでもよい。 The anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent, or hair restorer of the present embodiment may consist of only the fermented extract of Tremella fungus, or may be a formulation of the fermented extract of Tremella fungus.

本実施形態の抗炎症剤、抗老化剤、美白剤および育毛剤は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味・矯臭剤等を用いることができる。抗炎症剤、抗老化剤、美白剤および育毛剤は、他の組成物(例えば、後述する化粧料、飲食品組成物等)に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。 The anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent and hair restorer of the present embodiment can be prepared in the form of powder or granules using a pharmaceutically acceptable carrier such as dextrin, cyclodextrin or any other adjuvant according to a conventional method. , tablets, and liquids. At this time, as auxiliary agents, for example, excipients, binders, disintegrants, lubricants, stabilizers, flavoring agents and the like can be used. Anti-inflammatory agents, anti-aging agents, whitening agents and hair restorers can be used by blending with other compositions (for example, cosmetics, food and drink compositions described later), ointments, external liquids, It can be used as a patch or the like.

本実施形態の抗炎症剤、抗老化剤、美白剤または育毛剤を製剤化した場合、シロキクラゲ抽出発酵物の含有量は、特に限定されるものではなく、目的に応じて適宜設定することができる。 When the anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent, or hair restorer of the present embodiment is formulated, the content of the fermented extract of Tremella fungus is not particularly limited, and can be appropriately set according to the purpose. .

なお、本実施形態の抗炎症剤、抗老化剤、美白剤または育毛剤は、必要に応じて、抗炎症作用、抗老化作用、美白作用または育毛作用を有する他の天然抽出物等を、シロキクラゲ抽出発酵物とともに配合して有効成分として用いることができる。 It should be noted that the anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent or hair restorer of the present embodiment may, if necessary, contain other natural extracts having anti-inflammatory, anti-aging, whitening or hair-restoring effects. It can be blended with the fermented extract and used as an active ingredient.

本実施形態の抗炎症剤、抗老化剤、美白剤または育毛剤の患者に対する投与方法としては、経皮投与、経口投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。また、本実施形態の抗炎症剤、抗老化剤、美白剤または育毛剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。 Methods of administering the anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent or hair restorer of the present embodiment to patients include transdermal administration, oral administration and the like. A suitable method may be selected as appropriate. In addition, the dosage of the anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent, or hair restorer of the present embodiment may also be appropriately increased or decreased depending on the type and severity of disease, individual patient differences, administration method, administration period, and the like.

本実施形態の抗炎症剤は、有効成分であるシロキクラゲ抽出発酵物が有するヒアルロニダーゼ活性阻害作用および/またはTNF-α産生抑制作用を通じて、接触性皮膚炎(かぶれ)、乾癬、尋常性天疱瘡、アトピー性皮膚炎、その他肌荒れに伴う各種皮膚炎症性疾患を予防、治療または改善することができる。ただし、本実施形態の抗炎症剤は、これらの用途以外にもヒアルロニダーゼ活性阻害作用またはTNF-α産生抑制作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。 The anti-inflammatory agent of the present embodiment has contact dermatitis (rash), psoriasis, pemphigus vulgaris, atopic dermatitis, psoriasis, pemphigus vulgaris, and atopic dermatitis through hyaluronidase activity inhibitory action and/or TNF-α production inhibitory action possessed by the fermented extract of white fungus, which is an active ingredient. It is possible to prevent, treat or ameliorate various skin inflammatory diseases associated with dermatitis and other rough skin. However, in addition to these uses, the anti-inflammatory agent of the present embodiment can be used for all uses that are significant in exhibiting hyaluronidase activity inhibitory action or TNF-α production inhibitory action.

例えば、本実施形態の抗炎症剤または前述したヒアルロニダーゼ活性阻害剤もしくはTNF-α産生抑制剤は、シロキクラゲ抽出発酵物が有するヒアルロニダーゼ活性阻害作用またはTNF-α産生抑制作用を通じて、関節リウマチ、変形性関節症、喘息などを予防、治療または改善することができる。 For example, the anti-inflammatory agent of the present embodiment or the hyaluronidase activity inhibitor or TNF-α production inhibitor described above is effective for rheumatoid arthritis and osteoarthritis through the hyaluronidase activity inhibitory action or TNF-α production inhibitory action possessed by the fermented product of the white fungus extract. disease, asthma, etc., can be prevented, treated or ameliorated.

本実施形態の抗老化剤は、有効成分であるシロキクラゲ抽出発酵物が有するエラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖作用、TG-1産生促進作用、プロフィラグリンmRNA発現促進作用、SPTmRNA発現促進作用、AQP3mRNA発現促進作用およびHAS3mRNA発現促進作用からなる群より選択される1または2以上の作用を通じて、皮膚のシワの形成、弾力性の低下、保湿機能の低下等の皮膚の老化症状を予防、治療または改善することができる。ただし、本実施形態の抗老化剤は、これらの用途以外にもエラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖作用、TG-1産生促進作用、プロフィラグリンmRNA発現促進作用、SPTmRNA発現促進作用、AQP3mRNA発現促進作用またはHAS3mRNA発現促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。 The anti-aging agent of the present embodiment has an elastin production-promoting action, a hyaluronic acid production-promoting action, a type IV collagen production-promoting action, an epidermal keratinocyte proliferation action, and a TG-1 production-promoting action possessed by the fermented extract of Tremella fungus, which is an active ingredient. , profilaggrin mRNA expression promoting action, SPT mRNA expression promoting action, AQP3 mRNA expression promoting action and HAS3 mRNA expression promoting action, through one or more actions selected from the group consisting of skin wrinkle formation, skin elasticity reduction, moisturizing function It can prevent, treat or improve skin aging symptoms such as a decrease in However, in addition to these uses, the anti-aging agent of the present embodiment has elastin production-promoting action, hyaluronic acid production-promoting action, type IV collagen production-promoting action, epidermal keratinocyte proliferation action, TG-1 production-promoting action, It can be used for all applications that are significant in exhibiting filaggrin mRNA expression-enhancing action, SPT mRNA expression-enhancing action, AQP3 mRNA expression-enhancing action, or HAS3 mRNA expression-enhancing action.

例えば、本実施形態の抗老化剤または前述したエラスチン産生促進剤は、そのエラスチン産生促進作用により、肺気腫等の肺疾患;高血圧、動脈瘤等の血管性疾患;などの予防、治療または改善の用途に用いることができる。また、本実施形態の抗老化剤または前述したヒアルロン酸産生促進剤は、そのヒアルロン酸産生促進作用により、慢性関節リウマチ、変形性関節炎、化膿性関節炎、痛風性関節炎、外傷性関節炎、骨関節炎等の関節炎の予防、治療または改善;創傷または熱傷の治癒の促進;などの用途に用いることができる。さらに、本実施形態の抗老化剤または前述したコラーゲン産生促進剤は、シロキクラゲ抽出発酵物が有するIV型コラーゲン産生促進作用を通じて、骨粗鬆症等のコラーゲン産生の低下に起因する疾患の予防、治療または改善;損傷した腱や靱帯の再生促進;創傷または熱傷の治癒の促進;等の用途に用いることができる。 For example, the anti-aging agent of the present embodiment or the elastin production-enhancing agent described above is used for the prevention, treatment, or improvement of pulmonary diseases such as emphysema; vascular diseases such as hypertension and aneurysm; can be used for In addition, the anti-aging agent of the present embodiment or the hyaluronic acid production promoter described above is effective for rheumatoid arthritis, osteoarthritis, septic arthritis, gouty arthritis, traumatic arthritis, osteoarthritis, etc., due to its hyaluronic acid production promoting action. prevention, treatment or amelioration of arthritis; promotion of healing of wounds or burns; Furthermore, the anti-aging agent of the present embodiment or the collagen production promoter described above prevents, treats, or improves diseases caused by decreased collagen production such as osteoporosis through the type IV collagen production-promoting action of the fermented extract of white fungus; It can be used for applications such as promotion of regeneration of injured tendons and ligaments; promotion of healing of wounds or burns.

前述した用途の他、本実施形態の抗老化剤または前述した表皮角化細胞増殖促進剤は、シロキクラゲ抽出発酵物が有する表皮角化細胞増殖促進作用を通じて、肌の新陳代謝を回復させ、こじわ、くすみ、色素沈着等の予防、治療または改善;再生医療;などの用途に使用することができる。 In addition to the above-mentioned uses, the anti-aging agent of the present embodiment or the above-mentioned epidermal keratinocyte proliferation-promoting agent restores skin metabolism through the epidermal keratinocyte proliferation-promoting action possessed by the fermented product of the Tremella fungus extract, It can be used for purposes such as prevention, treatment or improvement of dullness and pigmentation; regenerative medicine;

前述した用途の他、本実施形態の抗老化剤または前述したTG-1産生促進剤もしくはSPTmRNA発現促進剤は、シロキクラゲ抽出発酵物が有するTG-1産生促進作用またはSPTmRNA発現促進作用を通じて、皮膚のバリア機能を強化し、肌荒れ、乾燥肌等のほか、乾燥性皮膚疾患(例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬等)を予防、治療または改善することができる。また、本実施形態の抗老化剤または前述したAQP3mRNA発現促進剤は、シロキクラゲ抽出発酵物が有するAQP3mRNA発現促進作用を通じて、加齢による水分保持能やバリア機能等を改善することができる。 In addition to the above-mentioned uses, the anti-aging agent of the present embodiment or the above-mentioned TG-1 production promoter or SPTmRNA expression promoter has the effect of promoting TG-1 production or SPTmRNA expression, which is possessed by the fermented product of the white fungus extract. It can strengthen the barrier function and prevent, treat, or improve rough skin, dry skin, and dry skin diseases (eg, atopic dermatitis, psoriasis, ichthyosis, etc.). In addition, the anti-aging agent of the present embodiment or the AQP3 mRNA expression promoter described above can improve age-related water retention capacity, barrier function, etc. through the AQP3 mRNA expression promoting action of the fermented product of the Tremella fungus extract.

本実施形態の美白剤は、有効成分であるシロキクラゲ抽出発酵物が有するグルタチオン産生促進作用を通じて、皮膚の黒化、シミ、ソバカス等の色素沈着を予防・改善することができる。ただし、本実施形態の美白剤は、これらの用途以外にもグルタチオン産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。 The whitening agent of the present embodiment can prevent and improve pigmentation such as darkening of the skin, dark spots, and freckles through the glutathione production-promoting action of the fermented extract of white fungus, which is the active ingredient. However, the whitening agent of the present embodiment can be used for all uses other than these uses that are significant in exhibiting the action of promoting glutathione production.

例えば、本実施形態の美白剤または前述したグルタチオン産生促進剤は、シロキクラゲ抽出発酵物が有するグルタチオン産生促進作用を通じて、肝障害(アルコールの多飲,または重金属や化学物質等の異物の摂取が原因となる)等の細胞内グルタチオン量の低下または欠乏が病態と関連することが知られている疾患などを予防、治療または改善することができる。 For example, the whitening agent of the present embodiment or the glutathione production enhancer described above can be used to promote glutathione production of the fermented extract of the white fungus extract, through liver damage (drinking alcohol excessively, or intake of foreign substances such as heavy metals and chemicals). It is possible to prevent, treat, or ameliorate diseases in which a decrease or deficiency of intracellular glutathione is known to be associated with pathology, such as

本実施形態の育毛剤は、有効成分であるシロキクラゲ抽出発酵物が有する毛乳頭細胞増殖促進作用を通じて、男性型脱毛症、円形脱毛症、トリコチロマニア等の脱毛症等を予防、治療または改善することができ、特に男性型脱毛症の予防、治療または改善に好適である。また、本実施形態の育毛剤は、有効成分であるシロキクラゲ抽出発酵物が有するKAP5.1mRNA発現促進作用を通じて、毛髪の髪質、特に毛髪のはり・こしを改善することができる。ただし、本発明の育毛剤は、これらの用途以外にも毛乳頭細胞増殖促進作用またはKAP5.1mRNA発現促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。 The hair restorer of the present embodiment prevents, treats, or improves alopecia such as androgenic alopecia, alopecia areata, and trichotillomania through the dermal papilla cell proliferation-promoting action of the fermented extract of Tremella fungus, which is an active ingredient. It is particularly suitable for preventing, treating or improving male pattern baldness. In addition, the hair restorer of the present embodiment can improve the quality of hair, particularly the elasticity and stiffness of hair, through the KAP5.1 mRNA expression-enhancing action of the fermented extract of white fungus, which is an active ingredient. However, the hair restorer of the present invention can be used for all uses other than these uses that are significant in exhibiting the dermal papilla cell proliferation-promoting action or the KAP5.1 mRNA expression-promoting action.

例えば、本実施形態の育毛剤または前述した毛乳頭細胞増殖促進剤は、シロキクラゲ抽出発酵物が有する毛乳頭細胞増殖促進作用を通じて、毛乳頭細胞を用いた毛髪再生等の再生医療分野への応用に使用することもできる。 For example, the hair restorer of the present embodiment or the aforementioned dermal papilla cell proliferation-promoting agent can be applied to the field of regenerative medicine such as hair regeneration using dermal papilla cells through the dermal papilla cell proliferation-promoting action of the fermented extract of Tremella fungus. can also be used.

また、本実施形態抗炎症剤、抗老化剤、美白剤または育毛剤は、優れた抗炎症作用、抗老化作用、美白作用または育毛作用を有するため、例えば、皮膚外用剤等に配合するのに好適である。この場合に、シロキクラゲ抽出発酵物をそのまま配合してもよいし、シロキクラゲ抽出発酵物から製剤化した抗炎症剤、抗老化剤、美白剤または育毛剤を配合してもよい。 In addition, since the anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent, or hair restorer of the present embodiment has excellent anti-inflammatory, anti-aging, whitening, or hair-growth effects, it can be blended, for example, in external preparations for skin. preferred. In this case, the fermented product of the fungus extract may be blended as it is, or an anti-inflammatory agent, an anti-aging agent, a whitening agent, or a hair restorer formulated from the fermented product of the fungus extract may be blended.

ここで、皮膚外用剤としては、その区分に制限はなく、後述する皮膚化粧料のほか、経皮的に使用される医薬部外品、医薬品等を幅広く含むものである。 Here, the category of external preparations for skin is not limited, and includes a wide range of skin cosmetics, quasi-drugs used transdermally, pharmaceuticals, and the like, which will be described later.

また、本実施形態の抗炎症剤、抗老化剤、美白剤または育毛剤は、優れた抗炎症作用、抗老化作用、美白作用または育毛作用を有するので、これらの作用機構に関する研究のための試薬としても好適に利用することができる。 In addition, since the anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent or hair restorer of the present embodiment has excellent anti-inflammatory action, anti-aging action, whitening action or hair growth action, reagents for research on these mechanisms of action It can also be suitably used as

〔化粧料〕
本実施形態の化粧料は、前述したシロキクラゲ抽出発酵物が配合されるものである。本実施形態に係る化粧料には、シロキクラゲ抽出発酵物をそのまま配合してもよいし、シロキクラゲ抽出発酵物から製剤化した抗炎症剤、抗老化剤、美白剤または育毛剤を配合してもよい。
[Cosmetics]
The cosmetic of the present embodiment contains the above-described fermented extract of Tremella fungus. The cosmetic according to the present embodiment may contain the fermented extract of Tremella as it is, or may contain an anti-inflammatory agent, an anti-aging agent, a whitening agent, or a hair restorer formulated from the fermented extract of Tremella. .

シロキクラゲ抽出発酵物、または上記抗炎症剤、抗老化剤、美白剤もしくは育毛剤を配合し得る化粧料の種類は特に限定されるものではないが、シロキクラゲ抽出発酵物の作用をより効果的に発揮させる観点から、皮膚化粧料または頭髪化粧料であることが好ましい。皮膚化粧料または頭髪化粧料の形態は、特に限定されるものではないが、皮膚化粧料としては、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ファンデーション等が挙げられ、また、頭髪化粧料としては、例えば、ヘアトニック、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、ポマード、リンス等が挙げられる。 The fermented product of Tremella fungus extract, or the type of cosmetics in which the above anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent or hair restorer can be blended is not particularly limited, but the action of the fermented product of Tremella fungus extract is exhibited more effectively. It is preferably a skin cosmetic or a hair cosmetic, from the viewpoint of making the skin smoother. The form of skin cosmetics or hair cosmetics is not particularly limited. include, for example, hair tonics, hair creams, hair liquids, shampoos, pomades, rinses and the like.

シロキクラゲ抽出発酵物、または上記抗炎症剤、抗老化剤、美白剤もしくは育毛剤を化粧料に配合する場合、その配合量は、化粧料の種類に応じて適宜調整することができるが、好適な配合率は、シロキクラゲ抽出発酵物の固形分に換算して約0.0001~10質量%であり、特に好適な配合率は約0.001~1質量%である。 When the fermented tremella fungus extract, or the above anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent, or hair restorer is blended into the cosmetic, the blending amount can be appropriately adjusted according to the type of the cosmetic, but is preferably The blending ratio is about 0.0001 to 10% by mass in terms of the solid content of the fermented extract of the fungus extract, and a particularly preferred blending ratio is about 0.001 to 1% by mass.

本実施形態の化粧料は、シロキクラゲ抽出発酵物が有する抗炎症作用、TNF-α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、抗老化作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖作用、トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用、プロフィラグリンmRNA発現促進作用、SPTmRNA発現促進作用、AQP3mRNA発現促進作用、HAS3mRNA発現促進作用、美白作用、グルタチオン産生促進作用、育毛作用、毛乳頭細胞増殖促進作用、またはKAP5.1mRNA発現促進作用を妨げない限り、通常の化粧料の製造に用いられる主剤、助剤またはその他の成分、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等を併用することができる。このように併用することで、より一般性のある製品となり、また、併用された他の有効成分との間の相乗作用が通常期待される以上の優れた効果をもたらすことがある。 The cosmetic of this embodiment has an anti-inflammatory action, TNF-α production inhibitory action, hyaluronidase activity inhibitory action, anti-aging action, elastin production promotion action, hyaluronic acid production promotion action, and type IV collagen production promotion that the fermented product of Tremella fungus extract has. action, epidermal keratinocyte proliferation action, transglutaminase-1 production promotion action, profilaggrin mRNA expression promotion action, SPT mRNA expression promotion action, AQP3 mRNA expression promotion action, HAS3 mRNA expression promotion action, whitening action, glutathione production promotion action, hair growth action, Main ingredients, auxiliaries or other ingredients used in the production of ordinary cosmetics, such as astringents, bactericidal / antibacterial agents, whitening agents, as long as they do not interfere with the action of promoting dermal papilla cell proliferation or the action of promoting KAP5.1 mRNA expression. UV absorbers, moisturizers, cell activators, anti-inflammatory/anti-allergic agents, antioxidants/active oxygen removers, oils and fats, waxes, hydrocarbons, fatty acids, alcohols, esters, surfactants, fragrances, etc. can be used together. Such combination may result in a more generalized product and may provide greater benefits than would normally be expected due to synergy between the other active ingredients used in combination.

シロキクラゲ抽出発酵物または上記抗炎症剤、抗老化剤、美白剤もしくは育毛剤は、化粧料に配合されることにより、抗炎症作用、TNF-α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、抗老化作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖作用、トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用、プロフィラグリンmRNA発現促進作用、SPTmRNA発現促進作用、AQP3mRNA発現促進作用、HAS3mRNA発現促進作用、美白作用、グルタチオン産生促進作用、育毛作用、毛乳頭細胞増殖促進作用、またはKAP5.1mRNA発現促進作用を化粧料に付与することができる。 When the fermented white fungus extract or the anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent or hair restorer is incorporated in cosmetics, it exhibits anti-inflammatory action, TNF-α production inhibitory action, hyaluronidase activity inhibitory action, anti-aging action, promotion of elastin production, promotion of hyaluronic acid production, promotion of type IV collagen production, proliferation of epidermal keratinocytes, promotion of transglutaminase-1 production, promotion of profilaggrin mRNA expression, promotion of SPT mRNA expression, promotion of AQP3 mRNA expression, HAS3 mRNA expression promoting action, whitening action, glutathione production promoting action, hair growth action, dermal papilla cell proliferation promoting action, or KAP5.1 mRNA expression promoting action can be imparted to cosmetics.

これらの作用は、いずれも化粧料に付与されることで好ましい作用を発揮するものであるが、中でも、化粧料が皮膚化粧料である場合に、抗炎症作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、TNF-α産生抑制作用、抗老化作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖作用、トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用、プロフィラグリンmRNA発現促進作用、SPTmRNA発現促進作用、AQP3mRNA発現促進作用、HAS3mRNA発現促進作用、美白作用、またはグルタチオン産生促進作用が皮膚化粧料に付与されると、それらの作用が発揮されやすいため、特に好適である。 All of these actions exhibit favorable actions when applied to cosmetics. Among them, when the cosmetic is a skin cosmetic, anti-inflammatory action, hyaluronidase activity inhibitory action, and TNF-α Production inhibitory action, anti-aging action, elastin production promotion action, hyaluronic acid production promotion action, type IV collagen production promotion action, epidermal keratinocyte proliferation action, transglutaminase-1 production promotion action, profilaggrin mRNA expression promotion action, SPT mRNA expression It is particularly preferable to impart a stimulating action, AQP3 mRNA expression promoting action, HAS3 mRNA expression promoting action, whitening action, or glutathione production promoting action to the skin cosmetic, since these actions are likely to be exhibited.

また、化粧料が頭髪化粧料である場合には、育毛作用、毛乳頭細胞増殖促進作用、KAP5.1mRNA発現促進作用、抗炎症作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、TNF-α産生抑制作用、抗老化作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、またはHAS3mRNA発現促進作用が頭髪化粧料に付与されると、それらの作用が発揮されやすいため、特に好適である。 In addition, when the cosmetic is a hair cosmetic, hair growth action, dermal papilla cell proliferation promotion action, KAP5.1 mRNA expression promotion action, anti-inflammatory action, hyaluronidase activity inhibitory action, TNF-α production inhibitory action, and anti-aging action. , elastin production-promoting action, hyaluronic acid production-promoting action, type IV collagen production-promoting action, or HAS3 mRNA expression-promoting action is imparted to the hair cosmetic, since these actions are easily exhibited, and thus it is particularly preferable.

本実施形態の化粧料は、シロキクラゲ抽出発酵物が有する抗炎症作用、TNF-α産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、抗老化作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、IV型コラーゲン産生促進作用、表皮角化細胞増殖作用、トランスグルタミナーゼ-1産生促進作用、プロフィラグリンmRNA発現促進作用、SPTmRNA発現促進作用、AQP3mRNA発現促進作用、HAS3mRNA発現促進作用、美白作用、グルタチオン産生促進作用、育毛作用、毛乳頭細胞増殖促進作用、およびKAP5.1mRNA発現促進作用からなる群より選択される1または2以上の作用を通じて、接触性皮膚炎(かぶれ)、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れに伴う各種皮膚炎症性疾患の予防、治療または改善;皮膚のシワの形成、弾力性の低下、保湿機能の低下等の皮膚の老化症状の予防、治療または改善;肌荒れ、乾燥肌等のほか、乾燥性皮膚疾患(例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬等)の予防、治療または改善;皮膚の黒化、シミ、ソバカス等の色素沈着の予防、治療または改善;男性型脱毛症、円形脱毛症、トリコチロマニア等の脱毛症の予防、治療または改善;毛髪のはり・こしの改善;などをすることができる。 The cosmetic of this embodiment has an anti-inflammatory action, TNF-α production inhibitory action, hyaluronidase activity inhibitory action, anti-aging action, elastin production promotion action, hyaluronic acid production promotion action, and type IV collagen production promotion that the fermented product of Tremella fungus extract has. action, epidermal keratinocyte proliferation action, transglutaminase-1 production promotion action, profilaggrin mRNA expression promotion action, SPT mRNA expression promotion action, AQP3 mRNA expression promotion action, HAS3 mRNA expression promotion action, whitening action, glutathione production promotion action, hair growth action, Contact dermatitis (rash), psoriasis, pemphigus vulgaris, various types of skin associated with rough skin through one or more actions selected from the group consisting of dermal papilla cell proliferation promoting action and KAP5.1 mRNA expression promoting action Prevention, treatment, or improvement of inflammatory diseases; prevention, treatment, or improvement of skin aging symptoms such as wrinkle formation, decreased elasticity, and decreased moisturizing function; rough skin, dry skin, etc., and dry skin diseases Prevention, treatment or improvement of (e.g., atopic dermatitis, psoriasis, ichthyosis, etc.); Prevention, treatment or improvement of pigmentation such as skin darkening, age spots, freckles; Androgenetic alopecia, alopecia areata, trichoderma Prevention, treatment or improvement of alopecia such as tiromania; improvement of hair elasticity and elasticity; and the like.

〔飲食品組成物〕
本実施形態の飲食品組成物は、前述したシロキクラゲ抽出発酵物が配合されるものである。本実施形態に係る飲食品組成物には、シロキクラゲ抽出発酵物をそのまま配合してもよいし、シロキクラゲ抽出発酵物から製剤化した抗炎症剤、抗老化剤、美白剤または育毛剤を配合してもよい。
[Food and drink composition]
The food and drink composition of the present embodiment contains the aforementioned fermented extract of Tremella fungus. The food and drink composition according to the present embodiment may contain the fermented extract of Tremella as it is, or may contain an anti-inflammatory agent, an anti-aging agent, a whitening agent, or a hair restorer formulated from the fermented extract of Tremella fungus. good too.

ここで、飲食品とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口または消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品等の区分に制限されるものではない。したがって、本実施形態における「飲食品組成物」は、経口的に摂取される一般食品、健康食品(機能性飲食品)、保健機能食品(特定保健用食品,栄養機能食品,機能性表示食品)、医薬部外品、医薬品等を構成する組成物を幅広く含むものである。本実施形態に係る飲食品組成物は、当該組成物からなる飲食品またはその包装に、シロキクラゲ抽出発酵物が有する好ましい作用が表示される飲食品を構成する組成物であることが好ましく、当該飲食品は、保健機能食品(特定保健用食品,機能性表示食品、栄養機能食品)、医薬部外品および医薬品であることが特に好ましい。 Here, “food and drink” refers to those that are less likely to harm human health and are taken orally or through the gastrointestinal tract in normal social life. It is not limited to categories such as Therefore, the "food and beverage composition" in the present embodiment includes orally ingested general foods, health foods (functional foods and drinks), and foods with health claims (foods for specified health uses, foods with nutrient claims, foods with functional claims). , quasi-drugs, pharmaceuticals, etc. The food and drink composition according to the present embodiment is preferably a food and drink made of the composition or a composition that constitutes a food and drink in which the preferred effects of the fermented product of the fungus extract are indicated on the package. It is particularly preferable that the product is a food with health claims (food for specified health use, food with function claims, food with nutrient function claims), quasi-drugs, and pharmaceuticals.

シロキクラゲ抽出発酵物、またはシロキクラゲ抽出発酵物から製剤化した抗炎症剤、抗老化剤、美白剤もしくは育毛剤を飲食品組成物に配合する場合、それらにおける有効成分の配合量は、使用目的、症状、性別等を考慮して適宜変更することができるが、添加対象となる飲食品組成物の一般的な摂取量を考慮して、成人1日あたりの抽出物摂取量が約1~1000mgになるようにするのが好ましい。なお、添加対象飲食品組成物が顆粒状、錠剤状またはカプセル状の飲食品組成物の場合、シロキクラゲ抽出発酵物、またはシロキクラゲ抽出発酵物から製剤化した抗炎症剤、抗老化剤、美白剤もしくは育毛剤の添加量は、添加対象飲食品組成物に対して通常0.1~100質量%であり、好ましくは5~100質量%である。 When the fermented product of Tremella fungus extract, or the anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent or hair restorer formulated from the fermented product of Tremella fungus extract is blended into food and drink compositions, the amount of the active ingredient in them depends on the purpose of use, symptoms , Although it can be changed as appropriate in consideration of gender, etc., considering the general intake of the food and drink composition to be added, the extract intake per day for adults will be about 1 to 1000 mg. It is preferable to In addition, when the food and drink composition to be added is a granular, tablet or capsule-shaped food and drink composition, an anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent or The amount of the hair restorer to be added is usually 0.1 to 100% by mass, preferably 5 to 100% by mass, relative to the food or drink composition to which it is added.

本実施形態の飲食品組成物は、シロキクラゲ抽出発酵物をその活性を妨げないような任意の飲食品組成物に配合したものであってもよいし、シロキクラゲ抽出発酵物を主成分とする栄養補助食品であってもよい。 The food and drink composition of the present embodiment may be any food or drink composition that does not interfere with the activity of the fermented Tremella fungus extract, or may be a nutritional supplement containing the fermented Tremella fungus extract as a main ingredient. Food may be used.

本実施形態の飲食品組成物を製造する際には、例えば、デキストリン、デンプン等の糖類;ゼラチン、大豆タンパク、トウモロコシタンパク等のタンパク質;アラニン、グルタミン、イソロイシン等のアミノ酸類;セルロース、アラビアゴム等の多糖類;大豆油、中鎖脂肪酸トリグリセリド等の油脂類などの任意の助剤を添加して任意の形状の飲食品組成物にすることができる。 When producing the food and drink composition of the present embodiment, for example, sugars such as dextrin and starch; proteins such as gelatin, soybean protein and corn protein; amino acids such as alanine, glutamine and isoleucine; polysaccharides of; soybean oil, oils and fats such as medium-chain fatty acid triglycerides can be added to make food and drink compositions of any shape.

シロキクラゲ抽出発酵物を配合し得る飲食品組成物は特に限定されないが、その具体例としては、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料(これらの飲料の濃縮原液及び調整用粉末を含む);アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓;そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類;飴、チューインガム、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子等の菓子類;かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品;加工乳、発酵乳等の乳製品;サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品;ソース、たれ等の調味料;スープ、シチュー、サラダ、惣菜、漬物;その他種々の形態の健康・栄養補助食品;錠剤、カプセル剤、ドリンク剤などが挙げられる。これらの飲食品組成物にシロキクラゲ抽出発酵物を配合するときには、通常用いられる補助的な原料や添加物を併用することができる。 The food and drink composition in which the fermented product of the fungus extract can be blended is not particularly limited, but specific examples include beverages such as soft drinks, carbonated drinks, nutritional drinks, fruit drinks, and lactic acid drinks (concentrated undiluted solutions and preparations of these drinks). frozen desserts such as ice cream, ice sherbet, and shaved ice; noodles such as buckwheat, udon, vermicelli, gyoza skin, shumai skin, Chinese noodles, instant noodles; candy, chewing gum, candy, gum, chocolate, Confectionery such as tablets, snacks, biscuits, jellies, jams, creams, and baked goods; processed marine and livestock foods such as fish cakes, hams, and sausages; dairy products such as processed milk and fermented milk; salad oil, tempura oil, margarine, Oils and fats such as mayonnaise, shortening, whipped cream, and dressings; seasonings such as sauces and sauces; soups, stews, salads, side dishes, and pickles; health and nutritional supplements in various forms; tablets, capsules, drinks and the like. When the fermented extract of Tremella fungus is incorporated into these food and drink compositions, commonly used supplementary raw materials and additives can be used together.

なお、本実施形態の抗炎症剤、抗老化剤、美白剤、育毛剤、化粧料、および飲食品組成物は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物(例えば,マウス,ラット,ハムスター,イヌ,ネコ,ウシ,ブタ,サル等)に対して適用することもできる。 The anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent, hair restorer, cosmetic, and food and drink composition of the present embodiment are preferably applied to humans, but their respective effects are achieved. It can also be applied to non-human animals (eg, mice, rats, hamsters, dogs, cats, cows, pigs, monkeys, etc.) as long as they are available.

以下、製造例および試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。 The present invention will be specifically described below with reference to Production Examples and Test Examples, but the present invention is not limited to the following examples.

〔製造例1〕シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物の製造
乾燥したシロキクラゲ(9g)に水(300mL)を加え、還流冷却器を用いて、80~90℃にて2時間抽出を行った後、滅菌処理を行い、シロキクラゲ抽出液を得た(300g)。
[Production Example 1] Production of fermented product of lactic acid bacteria extracted from Tremella fungus Water (300 mL) is added to dried Tremella fungus (9 g), extraction is performed at 80 to 90 ° C. for 2 hours using a reflux condenser, and then sterilization is performed. to obtain a white fungus extract (300 g).

得られたシロキクラゲ抽出液(100g)にラクトバシルス・プランタラム(Lactobacillus plantarum)22A-3株(受託番号:FERM P-21411)を植菌し、30℃で24時間発酵させた。得られた発酵液を濾過し、濾液を濃縮乾固することにより、シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(1.6g,試料1)を得た。 Lactobacillus plantarum 22A-3 strain (accession number: FERM P-21411) was inoculated into the resulting white fungus extract (100 g) and fermented at 30° C. for 24 hours. The resulting fermented liquid was filtered, and the filtrate was concentrated to dryness to obtain a fermented product of lactic acid bacteria extracted from white fungus (1.6 g, sample 1).

〔製造例2〕シロキクラゲ抽出酵母発酵物の製造
製造例1の過程で得られたシロキクラゲ抽出液を用い、当該シロキクラゲ抽出液(100g)に発酵用酵母(サッカロミセス・ヴェローナ,秋田今野商店社製)を植菌し、30℃で24時間発酵させた。得られた発酵液を濾過し、濾液を濃縮乾固することにより、シロキクラゲ抽出酵母発酵物(1.5g,試料2)を得た。
[Production Example 2] Production of fermented product with yeast extract from Tremella fungus Using the extract obtained in the process of Production Example 1, yeast for fermentation (Saccharomyces verona, manufactured by Akita Konno Shoten Co., Ltd.) was added to the extract (100 g) of Tremella japonicum. Inoculated and fermented at 30° C. for 24 hours. The resulting fermented liquid was filtered, and the filtrate was concentrated to dryness to obtain a fermented product of white fungus extract yeast (1.5 g, sample 2).

〔試験例1〕ヒアルロニダーゼ活性阻害作用試験
製造例1で得られたシロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)および製造例2で得られたシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)について、以下のようにしてヒアルロニダーゼ活性阻害作用を試験した。
[Test Example 1] Hyaluronidase activity inhibitory action test The lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract obtained in Production Example 1 (Sample 1) and the fermented product of yeast extract of Tremella tremosa obtained in Production Example 2 (Sample 2) were treated as follows. Hyaluronidase activity inhibitory action was tested.

0.1mol/L酢酸緩衝液(pH3.5)に溶解した被験試料(試料1および2,試料濃度は下記表1を参照)0.2mLに、ヒアルロニダーゼ溶液(SIGMA社製,Type IV-S,from bovine testes,400 NF units/mL)0.1mLを加え、37℃で20分間静置した。さらに、活性化剤として2.5mmol/L塩化カルシウム0.2mLを加え、37℃で20分間静置した。これに0.8mg/mLヒアルロン酸ナトリウム溶液(from rooster comb)0.5mLを加え、37℃で40分間反応した。その後、0.4mol/L水酸化ナトリウム0.2mLを加えて反応を止め冷却した後、各反応溶液にホウ酸溶液0.2mLを加え、3分間煮沸した。氷冷後、p-DABA試薬6mLを加え、37℃で20分間反応した。その後、波長585nmにおける吸光度を測定した。 Hyaluronidase solution (manufactured by SIGMA, Type IV-S, from bovine tests, 400 NF units/mL) was added and allowed to stand at 37°C for 20 minutes. Furthermore, 0.2 mL of 2.5 mmol/L calcium chloride was added as an activator, and the mixture was allowed to stand at 37° C. for 20 minutes. To this, 0.5 mL of 0.8 mg/mL sodium hyaluronate solution (from rooster comb) was added and reacted at 37° C. for 40 minutes. Thereafter, 0.2 mL of 0.4 mol/L sodium hydroxide was added to stop the reaction, and after cooling, 0.2 mL of boric acid solution was added to each reaction solution and boiled for 3 minutes. After cooling with ice, 6 mL of p-DABA reagent was added and reacted at 37° C. for 20 minutes. After that, absorbance at a wavelength of 585 nm was measured.

また、ブランクとして、酵素溶液を添加しない場合についても同様の操作および吸光度の測定を行った。さらに、コントロールとして、試料を添加しない0.1mol/L酢酸緩衝液(pH3.5)を用いて同様の操作および測定を行った。
得られた結果から、下記式によりヒアルロニダーゼ活性阻害率(%)を算出した。
ヒアルロニダーゼ活性阻害率(%)={1-(A-B)/(C-D)}×100
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
A:被験試料添加・酵素添加での波長585nmにおける吸光度
B:被験試料添加・酵素無添加での波長585nmにおける吸光度
C:試料無添加・酵素添加での波長585nmにおける吸光度
D:試料無添加・酵素無添加での波長585nmにおける吸光度
結果を表1に示す。
In addition, as a blank, the same operation and absorbance measurement were performed in the case where no enzyme solution was added. Furthermore, as a control, the same operation and measurement were performed using 0.1 mol/L acetate buffer (pH 3.5) to which no sample was added.
From the obtained results, the hyaluronidase activity inhibition rate (%) was calculated according to the following formula.
Hyaluronidase activity inhibition rate (%) = {1-(A-B) / (C-D)} × 100
Each term in the formula represents the following.
A: Absorbance at wavelength 585 nm with test sample added/enzyme added B: Absorbance at wavelength 585 nm with test sample added/enzyme added C: Absorbance at wavelength 585 nm with sample not added/enzyme added D: Sample not added/enzyme Table 1 shows the absorbance results at a wavelength of 585 nm without addition.

Figure 0007253283000001
Figure 0007253283000001

表1に示すように、シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)およびシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)は、いずれも優れたヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有することが確認された。 As shown in Table 1, it was confirmed that both the lactic acid bacterium fermented product of Tremella fungus extract (Sample 1) and the fermented product of yeast extract of Tremella fungus (Sample 2) had excellent hyaluronidase activity inhibitory action.

〔試験例2〕腫瘍壊死因子(TNF-α)産生抑制作用試験
製造例1で得られたシロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)および製造例2で得られたシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)について、以下のようにしてTNF-α産生抑制作用を試験した。
[Test Example 2] Tumor necrosis factor (TNF-α) production inhibitory action test The lactic acid bacteria fermented product from the Tremella fungus extract obtained in Production Example 1 (Sample 1) and the fermented product from the yeast extract of Tremella tremosa obtained in Production Example 2 (Sample 2) was tested for TNF-α production inhibitory action as follows.

マウスマクロファージ細胞(RAW264.7)を、10%FBS含有ダルベッコMEM培地を用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を1.0×10cells/mLの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、96ウェルマイクロプレートに1ウェル当たり100μLずつ播種し、4時間培養した。 After culturing mouse macrophage cells (RAW264.7) using 10% FBS-containing Dulbecco's MEM medium, the cells were collected with a cell scraper. After diluting the collected cells with the above medium to a cell density of 1.0×10 6 cells/mL, 100 μL of each well was seeded in a 96-well microplate and cultured for 4 hours.

培養終了後、培地を除去し、終濃度0.5%DMSOを含む10%FBS含有ダルベッコMEM培地で溶解した被験試料(試料1および2,試料濃度は下記表2を参照)を各ウェルに100μL添加し、終濃度1μg/mLで10%FBS含有ダルベッコMEMに溶解したリポポリサッカライド(LPS)(DIFCO社製,E.coli 0111;B4)を100μL加え、24時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加の終濃度0.5%DMSOを含む10%FBS含有ダルベッコMEM培地等を用いて同様の操作を行った。培養終了後、各ウェルの培養上清中のTNF-α量を、サンドイッチELISA法を用いて測定した。得られた結果から、下記式によりTNF-α産生抑制率(%)を算出した。 After the culture was completed, the medium was removed, and 100 μL of test samples (Samples 1 and 2, see Table 2 below for sample concentrations) dissolved in Dulbecco's MEM medium containing 10% FBS with a final concentration of 0.5% DMSO was added to each well. 100 μL of lipopolysaccharide (LPS) (DIFCO, E. coli 0111; B4) dissolved in Dulbecco's MEM containing 10% FBS at a final concentration of 1 μg/mL was added and cultured for 24 hours. As a control, Dulbecco's MEM medium containing 10% FBS containing a final concentration of 0.5% DMSO to which no sample was added was used in the same manner. After completion of the culture, the amount of TNF-α in the culture supernatant of each well was measured using the sandwich ELISA method. From the obtained results, the TNF-α production inhibition rate (%) was calculated by the following formula.

TNF-α産生抑制率(%)={(B-A)/B}×100
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
A:被験試料添加でのTNF-α量
B:試料無添加でのTNF-α量
結果を表2に示す。
TNF-α production suppression rate (%) = {(B-A) / B} × 100
Each term in the formula represents the following.
A: Amount of TNF-α with addition of test sample B: Amount of TNF-α with no addition of sample Table 2 shows the results.

Figure 0007253283000002
Figure 0007253283000002

表2に示すように、シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)およびシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)は、いずれも優れたTNF-α産生抑制作用を有することが確認された。 As shown in Table 2, it was confirmed that both the lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract (Sample 1) and the fermented product of yeast extract of Tremella Tremella (Sample 2) had an excellent TNF-α production inhibitory effect.

〔試験例3〕エラスチン産生促進作用試験
製造例1で得られたシロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)および製造例2で得られたシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)について、以下のようにしてエラスチン産生促進作用を試験した。
[Test Example 3] Elastin production promoting effect test The lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract obtained in Production Example 1 (Sample 1) and the fermented product of Tremella fungus extract obtained in Production Example 2 (Sample 2) were treated as follows. Elastin production promoting action was tested.

正常ヒト皮膚線維芽細胞(NB1RGB)を、10%FBS含有ダルベッコMEM培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を2.2×10cells/mLの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、96ウェルマイクロプレートに1ウェル当たり100μLずつ播種し、一晩培養した。 Normal human skin fibroblasts (NB1RGB) were cultured using 10% FBS-containing Dulbecco's MEM medium, and then the cells were collected by trypsinization. After diluting the recovered cells with the above medium to a cell density of 2.2×10 5 cells/mL, 100 μL of each well was seeded in a 96-well microplate and cultured overnight.

培養終了後、培地を除去し、0.25%FBS含有ダルベッコMEM培地に溶解した被験試料(試料1および2,試料濃度は下記表3を参照)を各ウェルに150μL添加し、5日間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加の0.25%FBS含有ダルベッコMEM培地を用いて同様に培養した。培養終了後、上清を回収し、培養上清に遊離したエラスチン量をELISA法により測定した。測定結果から、下記式によりエラスチン産生促進率(%)を算出した。 After the culture was completed, the medium was removed, and 150 μL of test samples dissolved in 0.25% FBS-containing Dulbecco's MEM medium (Samples 1 and 2, see Table 3 below for sample concentrations) were added to each well and cultured for 5 days. . As a control, Dulbecco's MEM medium containing 0.25% FBS to which no sample was added was used and cultured in the same manner. After the culture was completed, the supernatant was recovered, and the amount of elastin released in the culture supernatant was measured by ELISA. From the measurement results, the elastin production promotion rate (%) was calculated by the following formula.

エラスチン産生促進率(%)=A/B×100
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
A:被験試料添加でのエラスチン量
B:試料無添加でのエラスチン量
結果を表3に示す。
Elastin production promotion rate (%) = A/B x 100
Each term in the formula represents the following.
A: Amount of elastin with addition of test sample B: Amount of elastin with no addition of sample Table 3 shows the results.

Figure 0007253283000003
Figure 0007253283000003

表3に示すように、シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)およびシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)は、いずれも優れたエラスチン産生促進作用を有することが確認された。 As shown in Table 3, it was confirmed that both the lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract (Sample 1) and the fermented product of yeast extract of Tremella Tremella (Sample 2) had an excellent elastin production promoting effect.

〔試験例4〕表皮ヒアルロン酸産生促進作用試験
製造例1で得られたシロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)および製造例2で得られたシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)について、以下のようにして表皮ヒアルロン酸産生促進作用を試験した。
[Test Example 4] Epidermal hyaluronic acid production promotion test Regarding the lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract obtained in Production Example 1 (Sample 1) and the fermented product of Tremella fungus extract obtained in Production Example 2 (Sample 2), the following was performed. The effect of promoting epidermal hyaluronic acid production was tested.

正常ヒト新生児表皮角化細胞(NHEK)を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地(KGM)を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を1×10cells/mLの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、96ウェルプレートに1ウェルあたり100μLずつ播種し、24時間培養した。 After culturing normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK) using normal human epidermal keratinocyte growth medium (KGM), the cells were collected by trypsinization. After diluting the collected cells with the above medium to a cell density of 1×10 5 cells/mL, 100 μL of each well was seeded in a 96-well plate and cultured for 24 hours.

培養終了後、培地を除去し、KGM培地に溶解した被験試料(試料1および2,試料濃度は下記表4を参照)を各ウェルに100μLずつ添加し、7日間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のKGM培地を用いて同様に培養した。培養後、各ウェルの培地中のヒアルロン酸量を、ヒアルロン酸結合タンパク(HABP)を用いたサンドイッチ法により測定した。測定結果から、下記式により表皮ヒアルロン酸産生促進率(%)を算出した。 After the culture was completed, the medium was removed, and 100 μL of test samples (Samples 1 and 2, see Table 4 below for sample concentrations) dissolved in KGM medium were added to each well and cultured for 7 days. As a control, a KGM medium containing no sample was cultured in the same manner. After culturing, the amount of hyaluronic acid in the medium of each well was measured by the sandwich method using hyaluronic acid binding protein (HABP). From the measurement results, the epidermal hyaluronic acid production promotion rate (%) was calculated by the following formula.

表皮ヒアルロン酸産生促進率(%)=A/B×100
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
A:被験試料添加でのヒアルロン酸量
B:試料無添加でのヒアルロン酸量
結果を表4に示す。
Epidermal hyaluronic acid production promotion rate (%) = A / B × 100
Each term in the formula represents the following.
A: Amount of hyaluronic acid with addition of test sample B: Amount of hyaluronic acid with no addition of sample Table 4 shows the results.

Figure 0007253283000004
Figure 0007253283000004

表4に示すように、シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)およびシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)は、いずれも優れた表皮ヒアルロン酸産生促進作用を有していると認められた。 As shown in Table 4, both the lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract (Sample 1) and the fermented product of yeast extract of Tremella Tremella (Sample 2) were found to have excellent epidermal hyaluronic acid production-promoting action.

〔試験例5〕IV型コラーゲン産生促進作用試験
製造例2で得られたシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)について、以下のようにしてIV型コラーゲン産生促進作用を試験した。
[Test Example 5] Type IV Collagen Production Promotion Effect Test The fermented product of white fungus extract yeast (Sample 2) obtained in Production Example 2 was tested for type IV collagen production promotion effect in the following manner.

正常ヒト皮膚線維芽細胞(NB1RGB)を、10%FBS含有ダルベッコMEM培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を1.6×10cells/mLの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、96ウェルマイクロプレートに1ウェルあたり100μLずつ播種し、一晩培養した。 Normal human skin fibroblasts (NB1RGB) were cultured using 10% FBS-containing Dulbecco's MEM medium, and then the cells were collected by trypsinization. After diluting the recovered cells with the above medium to a cell density of 1.6×10 5 cells/mL, 100 μL of each well was seeded in a 96-well microplate and cultured overnight.

培養終了後、培地を除去し、0.25%FBS含有ダルベッコMEM培地に溶解した被験試料(試料1および2,試料濃度は下記表5を参照)を各ウェルに150μLずつ添加し、3日間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加の0.25%FBS含有ダルベッコMEM培地を用いて同様に培養した。培養後、各ウェルの培地中のIV型コラーゲン量をELISA法により測定した。測定結果から、下記式によりIV型コラーゲン産生促進率(%)を算出した。 After the culture was completed, the medium was removed, and 150 μL of test samples dissolved in 0.25% FBS-containing Dulbecco's MEM medium (Samples 1 and 2, see Table 5 below for sample concentrations) were added to each well and cultured for 3 days. bottom. As a control, Dulbecco's MEM medium containing 0.25% FBS to which no sample was added was used and cultured in the same manner. After culturing, the amount of type IV collagen in the medium of each well was measured by ELISA. From the measurement results, the promotion rate (%) of type IV collagen production was calculated according to the following formula.

IV型コラーゲン産生促進率(%)=A/B×100
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
A:被験試料添加でのIV型コラーゲン量
B:試料無添加でのIV型コラーゲン量
結果を表5に示す。
Promotion rate of type IV collagen production (%) = A/B x 100
Each term in the formula represents the following.
A: Amount of type IV collagen with test sample added B: Amount of type IV collagen with no sample added Table 5 shows the results.

Figure 0007253283000005
Figure 0007253283000005

表5に示すように、シロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)は、優れたIV型コラーゲン産生促進作用を有していた。 As shown in Table 5, the fermented yeast extract from Tremella tremella (Sample 2) had an excellent type IV collagen production promoting effect.

〔試験例6〕表皮角化細胞増殖促進作用試験
製造例1で得られたシロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)および製造例2で得られたシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)について、以下のようにして表皮角化細胞増殖促進作用を試験した。
[Test Example 6] Epidermal Keratinocyte Proliferation Activation Test Regarding the lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract obtained in Production Example 1 (Sample 1) and the fermented product of Tremella fungus extract obtained in Production Example 2 (Sample 2), the following Epidermal keratinocyte proliferation-promoting action was tested in this manner.

正常ヒト新生児表皮角化細胞(NHEK)を、正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地(KGM)を用いて培養した後、トリプシン処理にて細胞を回収した。回収した細胞を3.0×10cells/mLの細胞密度になるようにKGM培地で希釈した後、コラーゲンコートした96ウェルプレートに1ウェルあたり100μLずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、KGM培地に溶解した被験試料(試料1および2,試料濃度は下記表6を参照)を各ウェルに100μL添加し、3日間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のKMG培地を用いて同様に培養した。 After culturing normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK) using a normal human epidermal keratinocyte growth medium (KGM), the cells were collected by trypsinization. After diluting the collected cells with KGM medium to a cell density of 3.0×10 4 cells/mL, 100 μL of each well was seeded on a collagen-coated 96-well plate and cultured overnight. After completion of the culture, 100 μL of test samples (Samples 1 and 2, see Table 6 below for sample concentrations) dissolved in KGM medium were added to each well and cultured for 3 days. As a control, KMG medium containing no sample was cultured in the same manner.

表皮角化細胞増殖促進作用は、MTTアッセイ法を用いて測定した。すなわち、3日間培養後、培地を除去し、終濃度0.4mg/mLでPBS(-)緩衝液に溶解したMTTを各ウェル100μLずつ添加した。2時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを2-プロパノール100μLで抽出した。抽出後、波長570nmにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長650nmにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。得られた結果から、下記式により表皮角化細胞増殖促進率(%)を算出した。 Epidermal keratinocyte proliferation-promoting activity was measured using the MTT assay method. That is, after culturing for 3 days, the medium was removed, and 100 μL of MTT dissolved in PBS(−) buffer at a final concentration of 0.4 mg/mL was added to each well. After culturing for 2 hours, intracellularly produced blue formazan was extracted with 100 μL of 2-propanol. After extraction, absorbance was measured at a wavelength of 570 nm. At the same time, absorbance at a wavelength of 650 nm was measured as turbidity, and the difference between the two was taken as the amount of blue formazan produced. From the obtained results, the epidermal keratinocyte proliferation promotion rate (%) was calculated by the following formula.

表皮角化細胞増殖促進率(%)=A/B×100
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
A:被験試料添加でのブルーホルマザン生成量
B:試料無添加でのブルーホルマザン生成量
結果を表6に示す。
Epidermal keratinocyte proliferation promotion rate (%) = A/B x 100
Each term in the formula represents the following.
A: Amount of blue formazan produced with addition of test sample B: Amount of blue formazan produced with no addition of sample Table 6 shows the results.

Figure 0007253283000006
Figure 0007253283000006

表6に示すように、シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)およびシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)は、いずれも優れた表皮角化細胞増殖促進作用を有することが確認された。 As shown in Table 6, it was confirmed that both the lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus (Sample 1) and the fermented product of yeast extract of Tremella tremella (Sample 2) had an excellent epidermal keratinocyte proliferation-promoting effect.

〔試験例7〕トランスグルタミナーゼ-1(TG-1)産生促進作用試験
製造例1で得られたシロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)および製造例2で得られたシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)について、以下のようにTG-1産生促進作用を試験した。
[Test Example 7] Transglutaminase-1 (TG-1) production promoting effect test The lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract obtained in Production Example 1 (Sample 1) and the fermented product of Tremella japonicum extract obtained in Production Example 2 (Sample 2 ) was tested for TG-1 production promoting effect as follows.

正常ヒト新生児表皮角化細胞(NHEK)を、正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地(KGM)を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を1×10cells/mLの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、96ウェルプレートに1ウェルあたり100μLずつ播種し、2日間培養した。 After culturing normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK) using a normal human epidermal keratinocyte growth medium (KGM), the cells were collected by trypsinization. After diluting the collected cells with the above medium to a cell density of 1×10 5 cells/mL, 100 μL of each well was seeded in a 96-well plate and cultured for 2 days.

培養終了後、KGM培地に溶解した被験試料(試料1および2,試料濃度は下記表7を参照)を各ウェルに100μLずつ添加し、24時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のKGM培地を用いて同様に培養した。培養終了後、培地を除去し、細胞をプレートに固定させ、細胞表面に発現したトランスグルタミナーゼ-1の量を、モノクローナル抗ヒトトランスグルタミナーゼ-1抗体(Biomedical Technologies Inc.社製)を用いたELISA法により測定した。得られた測定結果から、下記式によりトランスグルタミナーゼ-1産生促進率(%)を算出した。 After completion of the culture, 100 μL of test samples (Samples 1 and 2, see Table 7 below for sample concentrations) dissolved in KGM medium were added to each well and cultured for 24 hours. As a control, a KGM medium containing no sample was cultured in the same manner. After culturing, the medium was removed, the cells were fixed on a plate, and the amount of transglutaminase-1 expressed on the cell surface was measured by ELISA using a monoclonal anti-human transglutaminase-1 antibody (manufactured by Biomedical Technologies Inc.). Measured by From the obtained measurement results, the promotion rate (%) of transglutaminase-1 production was calculated according to the following formula.

トランスグルタミナーゼ-1産生促進率(%)=A/B×100
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
A:被験試料添加でのトランスグルタミナーゼ-1量
B:試料無添加でのトランスグルタミナーゼ-1量
結果を表7に示す。
Transglutaminase-1 production promotion rate (%) = A/B x 100
Each term in the formula represents the following.
A: amount of transglutaminase-1 with addition of test sample B: amount of transglutaminase-1 with no addition of sample Table 7 shows the results.

Figure 0007253283000007
Figure 0007253283000007

表7に示すように、シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)およびシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)は、いずれも優れたTG-1産生促進作用を有していると認められた。 As shown in Table 7, both the lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus (Sample 1) and the fermented product of yeast extract of Tremella tremella (Sample 2) were found to have an excellent TG-1 production promoting effect.

〔試験例8〕プロフィラグリンmRNA発現促進作用試験
製造例1で得られたシロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)および製造例2で得られたシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)について、以下のようにしてプロフィラグリンmRNA発現促進作用を試験した。
[Test Example 8] Profilaggrin mRNA expression promoting effect test The lactic acid bacterium fermented product of Tremella fungus extract obtained in Production Example 1 (Sample 1) and the fermented product of Tremella fungus extract obtained in Production Example 2 (Sample 2) were tested as follows. Then, profilaggrin mRNA expression promoting action was tested.

正常ヒト新生児表皮角化細胞(NHEK)を、正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地(KGM)を用いて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を15×10cells/mLの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、35mmシャーレに2mLずつ播種し(30×10cells/シャーレ)、一晩培養した。 Normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK) were pre-cultured using normal human epidermal keratinocyte growth medium (KGM), and the cells were collected by trypsinization. After diluting the collected cells with the above medium to a cell density of 15×10 4 cells/mL, 2 mL of each was seeded in a 35 mm petri dish (30×10 4 cells/dish) and cultured overnight.

培養後に培地を除去し、正常ヒト表皮角化細胞基礎培地(KBM,上記KGM培地に増殖因子(hEGF,BPE,インスリン)を添加していないもの)に溶解した被験試料(試料1および2,試料濃度は下記表8を参照)を各シャーレに2mLずつ添加し、37℃・5%COの条件下にて24時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のKBM培地を用いて同様に培養した。培養後、培地を除去し、ISOGEN II(ニッポンジーン社製,Cat. No. 311-07361)にて総RNAを抽出し、それぞれのRNA量を分光光度計にて測定し、200ng/μLになるように総RNAを調製した。 After culturing, the medium was removed and the test samples (samples 1 and 2, sample See Table 8 below for the concentration) was added to each petri dish by 2 mL, and cultured for 24 hours under conditions of 37° C. and 5% CO 2 . As a control, a KBM medium to which no sample was added was used and cultured in the same manner. After culturing, the medium was removed, total RNA was extracted with ISOGEN II (manufactured by Nippon Gene, Cat. No. 311-07361), and the amount of each RNA was measured with a spectrophotometer so as to reach 200 ng/μL. Total RNA was prepared at .

この総RNAを鋳型とし、プロフィラグリンおよび内部標準であるGAPDHについて、mRNAの発現量を測定した。検出はリアルタイムPCR装置Smart Cycler(Cepheid社製)を用いて、TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit(Perfect Real Time)(タカラバイオ社製,code No. RR063A)によるリアルタイム2Step RT-PCR反応により行った。プロフィラグリンmRNAの発現量は、「被験試料添加」および「試料無添加」にてそれぞれ培養した細胞から調製した総RNA標品を基にして、GAPDHの値で補正値を求めた。得られた値から、下記式によりプロフィラグリンmRNA発現促進率(%)を算出した。 Using this total RNA as a template, the mRNA expression levels of profilaggrin and GAPDH as an internal standard were measured. Detection was performed by real-time 2-Step RT-PCR reaction using a real-time PCR device Smart Cycler (manufactured by Cepheid) and TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit (Perfect Real Time) (manufactured by Takara Bio Inc., code No. RR063A). . The expression level of profilaggrin mRNA was corrected with the value of GAPDH based on total RNA preparations prepared from cells cultured with "test sample added" and "sample not added". From the obtained values, profilaggrin mRNA expression promotion rate (%) was calculated by the following formula.

プロフィラグリンmRNA発現促進率(%)=A/B×100
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
A:被験試料添加での補正値
B:試料無添加での補正値
結果を表8に示す。
Profilaggrin mRNA expression promotion rate (%) = A/B x 100
Each term in the formula represents the following.
A: Correction value with addition of test sample B: Correction value with no addition of sample Table 8 shows the results.

Figure 0007253283000008
Figure 0007253283000008

表8に示すように、シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)およびシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)は、いずれも優れたプロフィラグリンmRNA発現促進作用を有していた。 As shown in Table 8, both the fermented product of lactic acid bacteria extracted from Tremella fungus (Sample 1) and the fermented product of yeast extract from Tremella Tremella (Sample 2) had an excellent profilaggrin mRNA expression promoting effect.

〔試験例9〕セリンパルミトイルトランスフェラーゼ(SPT)mRNA発現促進作用試験
製造例1で得られたシロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)および製造例2で得られたシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)について、以下のようにしてSPTmRNA発現促進作用を試験した。
[Test Example 9] Serine palmitoyltransferase (SPT) mRNA expression promoting effect test Regarding the lactic acid bacteria fermented product of Tremella lucidum extract obtained in Production Example 1 (Sample 1) and the fermented product of yeast extract of Tremella tremosa obtained in Production Example 2 (Sample 2) , the SPT mRNA expression promoting effect was tested as follows.

正常ヒト新生児表皮角化細胞(NHEK)を、正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地(KGM)を用いて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を15×10cells/mLの細胞密度になるようにKGM培地で希釈した後、35mmシャーレに2mLずつ播種し(30×10cells/シャーレ)、37℃・5%COの条件下で一晩培養した。培養後、培地を正常ヒト表皮角化細胞基礎培地(KBM,上記KGM培地に増殖因子(hEGF,BPE,インスリン)を添加していないもの)に交換し、さらに24時間培養した。 Normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK) were pre-cultured using normal human epidermal keratinocyte growth medium (KGM), and the cells were collected by trypsinization. After diluting the collected cells with KGM medium to a cell density of 15 × 10 4 cells / mL, seeding 2 mL each in a 35 mm petri dish (30 × 10 4 cells / petri dish), 37 ° C., 5% CO 2 conditioned overnight. After culturing, the medium was replaced with a normal human epidermal keratinocyte basal medium (KBM, the above KGM medium without addition of growth factors (hEGF, BPE, insulin)), and the cells were further cultured for 24 hours.

24時間培養後、培地を除去し、KBM培地に溶解した被験試料(試料1および2,試料濃度は下記表9を参照)を各シャーレに2mLずつ添加し、37℃、5%COの条件下にて24時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のKBM培地を用いて同様に培養した。培養後、培地を除去し、ISOGEN II(ニッポンジーン社製,Cat. No. 311-07361)にて総RNAを抽出し、それぞれのRNA量を分光光度計にて測定し、200ng/μLになるように総RNAを調製した。 After culturing for 24 hours, the medium was removed, and 2 mL of test samples dissolved in KBM medium (Samples 1 and 2, see Table 9 below for sample concentrations) were added to each petri dish and incubated at 37°C and 5% CO 2 conditions. It was cultured for 24 hours in the bottom. As a control, a KBM medium to which no sample was added was used and cultured in the same manner. After culturing, the medium was removed, total RNA was extracted with ISOGEN II (manufactured by Nippon Gene, Cat. No. 311-07361), and the amount of each RNA was measured with a spectrophotometer so as to reach 200 ng/μL. Total RNA was prepared at .

この総RNAを鋳型とし、SPTおよび内部標準であるGAPDHについて、mRNAの発現量を測定した。検出はリアルタイムPCR装置Smart Cycler(Cepheid社製)を用い、TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit(Perfect Real Time)(タカラバイオ社製,code No. RR063A)によるリアルタイム2Step RT-PCR反応により行った。SPTの発現量は、「被験試料添加」および「試料無添加」にてそれぞれ培養した細胞から調製した総RNA標品を基にして、GAPDHの値で補正値を求めた。得られた値から、下記式によりSPTmRNA発現促進率(%)を算出した。 Using this total RNA as a template, the expression level of mRNA was measured for SPT and GAPDH as an internal standard. Detection was performed by real-time 2-Step RT-PCR reaction using a real-time PCR device Smart Cycler (manufactured by Cepheid) and TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit (Perfect Real Time) (manufactured by Takara Bio, code No. RR063A). The expression level of SPT was corrected with the value of GAPDH based on total RNA preparations prepared from cells cultured with "test sample added" and "sample not added". From the obtained values, the SPT mRNA expression promotion rate (%) was calculated according to the following formula.

SPT mRNA発現促進率(%)=A/B×100
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
A:被験試料添加での補正値
B:試料無添加での補正値
結果を表9に示す。
SPT mRNA expression promotion rate (%) = A/B x 100
Each term in the formula represents the following.
A: Correction value with addition of test sample B: Correction value with no addition of sample Table 9 shows the results.

Figure 0007253283000009
Figure 0007253283000009

表9に示すように、シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)およびシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)は、いずれも優れたSPTmRNA発現促進作用を有することが確認された。 As shown in Table 9, it was confirmed that both the lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract (Sample 1) and the fermented product of yeast extract of Tremella tremella (Sample 2) had an excellent SPT mRNA expression promoting effect.

〔試験例10〕アクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用試験
製造例1で得られたシロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)および製造例2で得られたシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)について、以下のようにしてAQP3mRNA発現促進作用を試験した。
[Test Example 10] Aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting effect test Regarding the lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract obtained in Production Example 1 (Sample 1) and the fermented product of Tremella fungus extract obtained in Production Example 2 (Sample 2), AQP3 mRNA expression promoting action was tested as follows.

正常ヒト新生児表皮角化細胞(NHEK)を、正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地(KGM)を用いて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を15×10cells/mLの細胞密度になるようにKGM培地で希釈した後、35mmシャーレに2mLずつ播種し(30×10cells/シャーレ)、37℃・5%COの条件下で一晩培養した。培養後、培地を正常ヒト表皮角化細胞基礎培地(KBM,上記KGM培地に増殖因子(hEGF,BPE,インスリン)を添加していないもの)に交換し、さらに24時間培養した。 Normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK) were pre-cultured using normal human epidermal keratinocyte growth medium (KGM), and the cells were collected by trypsinization. After diluting the collected cells with KGM medium to a cell density of 15 × 10 4 cells / mL, seeding 2 mL each in a 35 mm petri dish (30 × 10 4 cells / petri dish), 37 ° C., 5% CO 2 conditioned overnight. After culturing, the medium was replaced with a normal human epidermal keratinocyte basal medium (KBM, the above KGM medium without addition of growth factors (hEGF, BPE, insulin)), and the cells were further cultured for 24 hours.

24時間培養後、培地を除去し、KBM培地に溶解した被験試料(試料1および2,試料濃度は下記表10を参照)を各シャーレに2mLずつ添加し、37℃・5%COの条件下にて24時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のKBM培地を用いて同様に培養した。培養後、培地を除去し、ISOGEN II(ニッポンジーン社製,Cat. No. 311-07361)にて総RNAを抽出し、それぞれのRNA量を分光光度計にて測定し、200ng/μLになるように総RNAを調製した。 After culturing for 24 hours, the medium was removed, and 2 mL of test samples (Samples 1 and 2, see Table 10 below for sample concentrations) dissolved in KBM medium were added to each petri dish, and the conditions were 37°C and 5% CO2 . It was cultured for 24 hours in the bottom. As a control, a KBM medium to which no sample was added was used and cultured in the same manner. After culturing, the medium was removed, total RNA was extracted with ISOGEN II (manufactured by Nippon Gene, Cat. No. 311-07361), and the amount of each RNA was measured with a spectrophotometer so as to reach 200 ng/μL. Total RNA was prepared at .

この総RNAを鋳型とし、AQP3および内部標準であるGAPDHについて、mRNAの発現量を測定した。検出はリアルタイムPCR装置Smart Cycler(Cepheid社製)を用いて、TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit(Perfect Real Time)(タカラバイオ社製,code No. RR063A)によるリアルタイム2Step RT-PCR反応により行った。AQP3mRNAの発現量は、「被験試料添加」および「試料無添加」にてそれぞれ培養した細胞から調製した総RNA標品を基にして、GAPDHの値で補正値を求めた。得られた値から、下記式によりAQP3mRNA発現促進率(%)を算出した。 Using this total RNA as a template, the mRNA expression levels of AQP3 and GAPDH as an internal standard were measured. Detection was performed by real-time 2-Step RT-PCR reaction using a real-time PCR device Smart Cycler (manufactured by Cepheid) and TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit (Perfect Real Time) (manufactured by Takara Bio Inc., code No. RR063A). . The expression level of AQP3 mRNA was corrected with the value of GAPDH based on total RNA preparations prepared from cells cultured with "test sample added" and "sample not added". From the obtained values, the AQP3 mRNA expression promotion rate (%) was calculated according to the following formula.

AQP3 mRNA発現促進率(%)=A/B×100
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
A:被験試料添加での補正値
B:試料無添加での補正値
結果を表10に示す。
AQP3 mRNA expression promotion rate (%) = A/B x 100
Each term in the formula represents the following.
A: Correction value with addition of test sample B: Correction value with no addition of sample Table 10 shows the results.

Figure 0007253283000010
Figure 0007253283000010

表10に示すように、シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)およびシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)は、いずれも優れたAQP3mRNA発現促進作用を有することが確認された。 As shown in Table 10, it was confirmed that both the lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract (Sample 1) and the fermented product of yeast extract of Tremella Tremella (Sample 2) had an excellent AQP3 mRNA expression promoting effect.

〔試験例11〕ヒアルロン酸合成酵素3(HAS3)mRNA発現促進作用試験
製造例1で得られたシロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)および製造例2で得られたシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)について、以下のようにしてHAS3mRNA発現促進作用を試験した。
[Test Example 11] Hyaluronic acid synthase 3 (HAS3) mRNA expression promoting action test The lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract obtained in Production Example 1 (Sample 1) and the fermented product of Tremella fungus extract obtained in Production Example 2 (Sample 2 ) was tested for the HAS3 mRNA expression promoting effect as follows.

正常ヒト新生児表皮角化細胞(NHEK)を、正常ヒト表皮角化細胞用増殖培地(KGM)を用いて前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を15×10cells/mLの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、35mmシャーレに2mLずつ播種し(30×10cells/シャーレ)、37℃・5%COの条件下で一晩培養した。培養後、培地を正常ヒト表皮角化細胞基礎培地(KBM,上記KGM培地に増殖因子(hEGF,BPE,インスリン)を添加していないもの)に交換し、さらに24時間培養した。 Normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK) were pre-cultured using normal human epidermal keratinocyte growth medium (KGM), and the cells were collected by trypsinization. After diluting the collected cells with the above medium to a cell density of 15×10 4 cells/mL, seeding 2 mL each on a 35 mm petri dish (30×10 4 cells/dish), 37° C., 5% CO 2 conditioned overnight. After culturing, the medium was replaced with a normal human epidermal keratinocyte basal medium (KBM, the above KGM medium without addition of growth factors (hEGF, BPE, insulin)), and the cells were further cultured for 24 hours.

24時間培養後、培地を除去し、KBM培地に溶解した被験試料(試料1および2,試料濃度は下記表11を参照)を各シャーレに2mLずつ添加し、37℃・5%COの条件下にて24時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のKBM培地を用いて同様に培養した。培養後、培地を除去し、ISOGEN II(ニッポンジーン社製,Cat. No. 311-07361)にて総RNAを抽出し、それぞれのRNA量を分光光度計にて測定し、200ng/μLになるように総RNAを調製した。 After culturing for 24 hours, the medium was removed, and 2 mL of test samples dissolved in KBM medium (samples 1 and 2, see Table 11 below for sample concentrations) were added to each petri dish, and the conditions were 37°C and 5% CO2. It was cultured for 24 hours in the bottom. As a control, a KBM medium to which no sample was added was used and cultured in the same manner. After culturing, the medium was removed, total RNA was extracted with ISOGEN II (manufactured by Nippon Gene, Cat. No. 311-07361), and the amount of each RNA was measured with a spectrophotometer so as to reach 200 ng/μL. Total RNA was prepared at .

この総RNAを鋳型とし、HAS3および内部標準であるGAPDHについて、mRNAの発現量を測定した。検出はリアルタイムPCR装置Smart Cycler(Cepheid社製)を用いて、TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit(Perfect Real Time)(タカラバイオ社製,code No. RR063A)によるリアルタイム2Step RT-PCR反応により行った。HAS3mRNAの発現量は、「被験試料添加」および「試料無添加」にてそれぞれ培養した細胞から調製した総RNA標品を基にして、GAPDHの値で補正値を求めた。得られた値から、下記式によりHAS3mRNA発現促進率(%)を算出した。 Using this total RNA as a template, expression levels of mRNA were measured for HAS3 and GAPDH as an internal standard. Detection was performed by real-time 2-Step RT-PCR reaction using a real-time PCR device Smart Cycler (manufactured by Cepheid) and TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit (Perfect Real Time) (manufactured by Takara Bio Inc., code No. RR063A). . The expression level of HAS3 mRNA was corrected with the value of GAPDH based on total RNA preparations prepared from cells cultured with "test sample added" and "sample not added". From the obtained values, the HAS3 mRNA expression promotion rate (%) was calculated according to the following formula.

HAS3 mRNA発現促進率(%)=A/B×100
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
A:被験試料添加での補正値
B:試料無添加での補正値
結果を表11に示す。
HAS3 mRNA expression promotion rate (%) = A/B x 100
Each term in the formula represents the following.
A: Correction value with addition of test sample B: Correction value with no addition of sample Table 11 shows the results.

Figure 0007253283000011
Figure 0007253283000011

表11に示すように、シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)およびシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)は、いずれも優れたHAS3mRNA発現促進作用を有していた。 As shown in Table 11, both the lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract (Sample 1) and the fermented product of yeast extract of Tremella Tremella (Sample 2) had an excellent HAS3 mRNA expression promoting effect.

〔試験例12〕グルタチオン産生促進作用試験
製造例1で得られたシロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)および製造例2で得られたシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)について、以下のようにしてB16メラノーマ細胞に対するグルタチオン産生促進作用を試験した。
[Test Example 12] Glutathione production promoting effect test The white fungus extract lactic acid bacterium fermented product (sample 1) obtained in Production Example 1 and the white fungus extract yeast fermented product (sample 2) obtained in Production Example 2 were treated as follows. The glutathione production promoting effect on B16 melanoma cells was tested.

B16メラノーマ細胞を、10%FBS含有ダルベッコMEM培地を用いて前培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を10×10cells/mLの細胞密度になるように10%FBS含有ダルベッコMEM培地で希釈した後、48ウェルプレートに1ウェル当たり200μLずつ播種し、一晩培養した。 B16 melanoma cells were precultured using 10% FBS-containing Dulbecco's MEM medium, and then the cells were harvested by trypsinization. The collected cells were diluted with 10% FBS-containing Dulbecco's MEM medium to a cell density of 10×10 4 cells/mL, then seeded in 48-well plates at 200 μL per well and cultured overnight.

培養後、培地を除去し、1%FBS含有ダルベッコMEM培地に溶解した被験試料(試料1および2,試料濃度は下記表12を参照)を各ウェルに200μL添加し、24時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加の1%FBS含有ダルベッコMEM培地を用いて同様に培養した。培養終了後、各ウェルから培地を除去し、400μLのPBS(-)緩衝液にて洗浄後、150μLのM-PER(PIERCE社製)を使用して細胞を溶解した。 After culturing, the medium was removed, and 200 μL of test samples (Samples 1 and 2, see Table 12 below for sample concentrations) dissolved in Dulbecco's MEM medium containing 1% FBS was added to each well and cultured for 24 hours. As a control, Dulbecco's MEM medium containing 1% FBS to which no sample was added was used and cultured in the same manner. After the culture was completed, the medium was removed from each well, washed with 400 μL of PBS(-) buffer, and the cells were lysed using 150 μL of M-PER (manufactured by PIERCE).

このうちの100μLを使用して総グルタチオンの定量を行った。すなわち、96ウェルプレートに溶解した細胞抽出液100μL、0.1mmol/Lリン酸緩衝液50μL、2mmol/L NADPH25μL及びグルタチオンレダクターゼ25μL(終濃度17.5unit/mL)を加え37℃で10分間加温した後、10mMの5,5'-dithiobis(2-nitrobenzoic acid)25μLを加え、5分後までの波長412nmにおける吸光度を測定し、ΔOD/minを求めた。総グルタチオン濃度は、酸化型グルタチオン(和光純薬社製)を使用して作成した検量線をもとに算出した。得られた値を総タンパク量当たりのグルタチオン量に補正した後、下記式によりグルタチオン産生促進率(%)を算出した。 100 μL of this was used to quantify total glutathione. That is, 100 μL of cell extract dissolved in a 96-well plate, 50 μL of 0.1 mmol/L phosphate buffer, 25 μL of 2 mmol/L NADPH and 25 μL of glutathione reductase (final concentration 17.5 units/mL) were added and heated at 37° C. for 10 minutes. After that, 25 μL of 10 mM 5,5′-dithiobis(2-nitrobenzoic acid) was added, and the absorbance at a wavelength of 412 nm was measured up to 5 minutes later to obtain ΔOD/min. The total glutathione concentration was calculated based on a calibration curve prepared using oxidized glutathione (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). After correcting the obtained value to the amount of glutathione per total protein amount, the glutathione production acceleration rate (%) was calculated by the following formula.

グルタチオン産生促進率(%)=A/B×100
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
A:被験試料を添加した細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量
B:試料無添加の細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量(対照)
結果を表12に示す。
Glutathione production promotion rate (%) = A / B × 100
Each term in the formula represents the following.
A: Glutathione amount per total protein amount in cells added with test sample B: Glutathione amount per total protein amount in cells without sample addition (control)
Table 12 shows the results.

Figure 0007253283000012
Figure 0007253283000012

表12に示すように、シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)およびシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)は、いずれもB16メラノーマ細胞に対して優れたグルタチオン産生促進作用を有することが確認された。 As shown in Table 12, both the lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract (Sample 1) and the fermented product of yeast extract of Tremella Tremella (Sample 2) were confirmed to have an excellent glutathione production-promoting effect on B16 melanoma cells.

〔試験例13〕毛乳頭細胞増殖促進作用試験
製造例1で得られたシロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)および製造例2で得られたシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)について、以下のようにして毛乳頭細胞増殖促進作用を試験した。
[Test Example 13] Dermal Papilla Cell Proliferation Activation Test The lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract obtained in Production Example 1 (Sample 1) and the fermented product of yeast extract of Tremella Tremoli obtained in Production Example 2 (Sample 2) were tested as follows. The dermal papilla cell growth promoting action was tested.

正常ヒト頭髪毛乳頭細胞(HFDPC,男性頭頂部由来)を、1%FCSおよび増殖添加剤を含有する毛乳頭細胞用増殖培地(PCGM,東洋紡社製)を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、10%FBS含有DMEM培地を用いて1.0×10cells/mLの細胞密度になるように希釈した後、コラーゲンコートした96ウェルプレートに1ウェルあたり200μLずつ播種し、3日間培養した。 Normal human hair dermal papilla cells (HFDPC, derived from male vertex) were cultured using a growth medium for dermal papilla cells (PCGM, manufactured by Toyobo Co., Ltd.) containing 1% FCS and growth additives, and then treated with trypsin. recovered. The collected cells were diluted with 10% FBS-containing DMEM medium to a cell density of 1.0×10 4 cells/mL, and then seeded at 200 μL per well on a collagen-coated 96-well plate. cultured for days.

その後、培地を除去し、無血清DMEM培地に溶解した被験試料(試料1および2,試料濃度は下記表13を参照)200μLを各ウェルに添加し、さらに4日間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加の無血清DMEM培地を用いて同様に培養した。培養終了後、MTTアッセイにより毛乳頭細胞増殖促進作用を測定した。すなわち、培地を除去し、無血清DMEM培地で調製した0.4mg/mL MTT200μLを添加し、さらに2時間培養した後、細胞内に生成したブルーホルマザンを2-プロパノール100μLで抽出した。この抽出液について、ブルーホルマザンの吸収極大点がある570nmの吸光度を測定した。同時に濁度として波長650nmにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。測定結果から、下記式に基づいて、毛乳頭細胞増殖促進率(%)を算出した。 Thereafter, the medium was removed, and 200 μL of test samples (Samples 1 and 2, see Table 13 below for sample concentrations) dissolved in serum-free DMEM medium were added to each well, and the cells were further cultured for 4 days. As a control, cells were cultured in the same manner using a serum-free DMEM medium to which no sample was added. After completion of the culture, the dermal papilla cell proliferation-promoting action was measured by MTT assay. Specifically, the medium was removed, 200 μL of 0.4 mg/mL MTT prepared in serum-free DMEM medium was added, and the cells were further cultured for 2 hours, after which blue formazan produced in cells was extracted with 100 μL of 2-propanol. The absorbance of this extract was measured at 570 nm where the absorption maximum of blue formazan exists. At the same time, absorbance at a wavelength of 650 nm was measured as turbidity, and the difference between the two was taken as the amount of blue formazan produced. From the measurement results, the dermal papilla cell proliferation promotion rate (%) was calculated based on the following formula.

毛乳頭細胞増殖促進率(%)=A/B×100
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
A:被験試料添加でのブルーホルマザン生成量
B:試料無添加でのブルーホルマザン生成量
結果を表13に示す。
Dermal papilla cell proliferation promotion rate (%) = A/B x 100
Each term in the formula represents the following.
A: Amount of blue formazan produced with test sample added B: Amount of blue formazan produced with no sample added Table 13 shows the results.

Figure 0007253283000013
Figure 0007253283000013

表13に示すように、シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)およびシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)は、いずれも優れた毛乳頭細胞増殖促進作用を有していると認められた。 As shown in Table 13, both the lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract (Sample 1) and the fermented product of yeast extract of Tremella Tremella (Sample 2) were found to have an excellent dermal papilla cell proliferation promoting effect.

〔試験例14〕ケラチン関連タンパク質5.1(KAP5.1)mRNA発現促進作用試験
製造例1で得られたシロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)および製造例2で得られたシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)について、以下のようにしてKAP5.1mRNA発現促進作用を試験した。
[Test Example 14] Keratin-related protein 5.1 (KAP5.1) mRNA expression promoting action test Tremella fungus extract lactic acid bacterium fermented product obtained in Production Example 1 (Sample 1) and Tremella fungus extract yeast fermented product obtained in Production Example 2 (Sample 2) was tested for the KAP5.1 mRNA expression promoting effect as follows.

正常ヒト新生児表皮角化細胞(NHEK)を、正常ヒト表皮角化細胞増殖培地(KGM)を用いて37℃・5%COの条件下で前培養し、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を15×10cells/mLの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、35mmシャーレに2mLずつ播種し(30×10cells/シャーレ)、37℃・5%COの条件下で24時間培養した。培養後、培地を正常ヒト表皮角化細胞基礎培地(KBM,上記KGM培地に増殖因子(hEGF,BPE,インスリン)を添加していないもの)に交換し、さらに24時間培養した。 Normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK) were precultured using normal human epidermal keratinocyte growth medium (KGM) under conditions of 37°C and 5% CO 2 , and the cells were collected by trypsinization. After diluting the collected cells with the above medium to a cell density of 15×10 4 cells/mL, seeding 2 mL each on a 35 mm petri dish (30×10 4 cells/dish), 37° C., 5% CO 2 It was cultured under these conditions for 24 hours. After culturing, the medium was replaced with a normal human epidermal keratinocyte basal medium (KBM, the above KGM medium without addition of growth factors (hEGF, BPE, insulin)), and the cells were further cultured for 24 hours.

24時間培養後、培地を除去し、KBM培地に溶解した被験試料(試料1および2,試料濃度は下記表14を参照)を各シャーレに2mLずつ添加し、37℃・5%COの条件下にて24時間培養した。なお、コントロールとして、試料無添加のKBM培地を用いて同様に培養した。培養後、培地を除去し、ISOGEN II(ニッポンジーン社製,Cat. No. 311-07361)にて総RNAを抽出し、それぞれのRNA量を分光光度計にて測定し、200ng/μLになるように総RNAを調製した。 After culturing for 24 hours, the medium was removed, and 2 mL of test samples dissolved in KBM medium (Samples 1 and 2, see Table 14 below for sample concentrations) were added to each petri dish, and the conditions were 37°C and 5% CO2. It was cultured for 24 hours in the bottom. As a control, a KBM medium to which no sample was added was used and cultured in the same manner. After culturing, the medium was removed, total RNA was extracted with ISOGEN II (manufactured by Nippon Gene, Cat. No. 311-07361), and the amount of each RNA was measured with a spectrophotometer so as to reach 200 ng/μL. Total RNA was prepared at .

この総RNAを鋳型とし、KAP5.1及び内部標準であるGAPDHのmRNAの発現量を測定した。検出はリアルタイムPCR装置Smart Cycler(Cepheid社製)を用いて、TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit(Perfect Real Time)(タカラバイオ社製,code No.RR063A)によるリアルタイム2 Step RT-PCR反応により行った。KAP5.1mRNAの発現量は、「被験試料添加」、「試料無添加」にてそれぞれ培養した細胞から調製した総RNA標品を基にして、GAPDHの値で補正値を求めた。得られた結果から、下記式によりKAP5.1mRNA発現促進率(%)を算出した。 Using this total RNA as a template, the expression levels of KAP5.1 and internal standard GAPDH mRNA were measured. Detection was performed by real-time 2-Step RT-PCR reaction using a real-time PCR device Smart Cycler (manufactured by Cepheid) and TaKaRa SYBR PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (manufactured by Takara Bio Inc., code No. RR063A). . The expression level of KAP5.1 mRNA was corrected with the value of GAPDH based on total RNA preparations prepared from cells cultured with "test sample added" and "sample not added". From the obtained results, the KAP5.1 mRNA expression promotion rate (%) was calculated according to the following formula.

KAP5.1 mRNA発現促進率(%)=A/B×100
式中の各項はそれぞれ以下を表す。
A:被験試料添加時の補正値
B:試料無添加時の補正値
結果を表14に示す。
KAP5.1 mRNA expression promotion rate (%) = A/B x 100
Each term in the formula represents the following.
A: Correction value when test sample was added B: Correction value when no sample was added Table 14 shows the results.

Figure 0007253283000014
Figure 0007253283000014

表14に示すように、シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(試料1)およびシロキクラゲ抽出酵母発酵物(試料2)は、いずれもKAP5.1mRNA発現促進作用を有していると認められた。 As shown in Table 14, both the lactic acid bacteria fermented product of Tremella fungus extract (Sample 1) and the fermented product of yeast extract of Tremella Tremella (Sample 2) were found to have a KAP5.1 mRNA expression promoting effect.

〔配合例1〕
下記組成に従い、乳液を常法により製造した。
シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(製造例1) 0.01g
ホホバオイル 4.00g
1,3-ブチレングリコール 3.00g
アルブチン 3.00g
ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.) 2.50g
オリーブオイル 2.00g
スクワラン 2.00g
セタノール 2.00g
モノステアリン酸グリセリル 2.00g
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O.) 2.00g
パラオキシ安息香酸メチル 0.15g
グリチルリチン酸ステアリル 0.10g
黄杞エキス 0.10g
グリチルリチン酸ジカリウム 0.10g
イチョウ葉エキス 0.10g
コンキオリン 0.10g
オウバクエキス 0.10g
カミツレエキス 0.10g
香料 0.05g
精製水 残部(全量を100gとする)
[Formulation Example 1]
A milky lotion was prepared by a conventional method according to the following composition.
White fungus extract lactic acid fermented product (Production Example 1) 0.01 g
Jojoba oil 4.00g
1,3-butylene glycol 3.00 g
Arbutin 3.00g
Polyoxyethylene cetyl ether (20E.O.) 2.50g
2.00 g olive oil
2.00 g of squalane
Cetanol 2.00g
Glyceryl monostearate 2.00g
Polyoxyethylene sorbitan oleate (20E.O.) 2.00g
Methyl paraoxybenzoate 0.15g
Stearyl glycyrrhizinate 0.10 g
Huangji extract 0.10g
Dipotassium glycyrrhizinate 0.10 g
Ginkgo biloba extract 0.10g
Conchiolin 0.10g
Phellodendron bark extract 0.10g
Chamomile extract 0.10g
Perfume 0.05g
Remainder of purified water (total amount is 100 g)

〔配合例2〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
シロキクラゲ抽出酵母発酵物(製造例2) 0.05g
クジンエキス 0.1g
オウゴンエキス 0.1g
流動パラフィン 5.0g
サラシミツロウ 4.0g
スクワラン 10.0g
セタノール 3.0g
ラノリン 2.0g
ステアリン酸 1.0g
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O.) 1.5g
モノステアリン酸グリセリル 3.0g
油溶性甘草エキス 0.1g
1,3-ブチレングリコール 6.0g
パラオキシ安息香酸メチル 1.5g
香料 0.1g
精製水 残部(全量を100gとする)
[Formulation Example 2]
A cream having the following composition was produced by a conventional method.
Tremella fungus extract yeast fermented product (manufacturing example 2) 0.05 g
Kujin extract 0.1g
Scutellaria root extract 0.1g
Liquid paraffin 5.0g
Bleached beeswax 4.0g
Squalane 10.0g
Cetanol 3.0g
Lanolin 2.0g
1.0 g of stearic acid
Polyoxyethylene sorbitan oleate (20E.O.) 1.5g
Glyceryl monostearate 3.0g
Oil-soluble licorice extract 0.1g
1,3-butylene glycol 6.0 g
Methyl paraoxybenzoate 1.5g
Perfume 0.1g
Remainder of purified water (total amount is 100 g)

〔配合例3〕
下記組成の美容液を常法により製造した。
シロキクラゲ抽出酵母発酵物(製造例2) 0.01g
カミツレエキス 0.1g
ニンジンエキス 0.1g
キサンタンガム 0.3g
ヒドロキシエチルセルロース 0.1g
カルボキシビニルポリマー 0.1g
1,3-ブチレングリコール 4.0g
グリチルリチン酸ジカリウム 0.1g
グリセリン 2.0g
水酸化カリウム 0.25g
香料 0.01g
防腐剤(パラオキシ安息香酸メチル) 0.15g
エタノール 2.0g
精製水 残部(全量を100gとする)
[Formulation Example 3]
A beauty essence having the following composition was prepared by a conventional method.
Tremella fungus extract yeast fermented product (manufacturing example 2) 0.01 g
Chamomile extract 0.1g
carrot extract 0.1g
xanthan gum 0.3g
0.1 g of hydroxyethyl cellulose
Carboxyvinyl polymer 0.1g
1,3-butylene glycol 4.0 g
Dipotassium glycyrrhizinate 0.1g
2.0 g of glycerin
Potassium hydroxide 0.25g
Perfume 0.01g
Preservative (methyl paraoxybenzoate) 0.15g
2.0 g of ethanol
Remainder of purified water (total amount is 100 g)

〔配合例4〕
下記組成のヘアトニックを常法により製造した。
シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(製造例1) 0.4g
酢酸トコフェロール 適量
セファラチン 0.002g
イソプロピルメチルフェノール 0.1g
ヒアルロン酸ナトリウム 0.15g
グリセリン 15.0g
エタノール 15.0g
香料 適量
キレート剤(エデト酸ナトリウム) 適量
防腐剤(ヒノキチオール) 適量
可溶化剤(ポリオキシエチレンセチルエーテル) 適量
精製水 残部(全量を100gとする)
[Formulation Example 4]
A hair tonic having the following composition was produced by a conventional method.
Tremella fungus extract lactic acid fermented product (Production Example 1) 0.4 g
Tocopherol acetate Appropriate amount Cephalatine 0.002g
Isopropylmethylphenol 0.1g
Sodium hyaluronate 0.15g
15.0 g of glycerin
Ethanol 15.0g
Perfume Appropriate amount Chelating agent (edetate sodium) Appropriate amount Preservative (hinokitiol) Appropriate amount Solubilizer (polyoxyethylene cetyl ether) Appropriate amount Purified water Balance

〔配合例5〕
下記組成のシャンプーを常法により製造した。
シロキクラゲ抽出酵母発酵物(製造例2) 0.5g
マジョラム抽出物 1.0g
ウメ果実部抽出物 0.2g
ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム 10.0g
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン 10.0g
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム 20.0g
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド 4.0g
プロピレングリコール 2.0g
香料 適量
精製水 残部(全量を100gとする)
[Formulation Example 5]
A shampoo having the following composition was produced by a conventional method.
Tremella fungus extract yeast fermented product (manufacturing example 2) 0.5 g
Marjoram extract 1.0g
Plum fruit part extract 0.2g
Coconut fatty acid methyl taurate sodium 10.0 g
Coconut fatty acid amidopropyl betaine 10.0g
Sodium polyoxyethylene alkyl ether sulfate 20.0 g
Coconut fatty acid diethanolamide 4.0 g
Propylene glycol 2.0 g
Fragrance Appropriate amount Purified water Remainder (Total amount is 100g)

〔配合例6〕
常法により、以下の組成を有する錠剤を製造した。
シロキクラゲ抽出乳酸菌発酵物(製造例1) 5.0mg
ドロマイト(カルシウム20%、マグネシウム10%含有) 83.4mg
カゼインホスホペプチド 16.7mg
ビタミンC 33.4mg
マルチトール 136.8mg
コラーゲン 12.7mg
ショ糖脂肪酸エステル 12.0mg
[Formulation Example 6]
A tablet having the following composition was produced by a conventional method.
Tremella fungus extract lactic acid fermented product (manufacturing example 1) 5.0 mg
Dolomite (containing 20% calcium and 10% magnesium) 83.4mg
Casein phosphopeptide 16.7mg
Vitamin C 33.4mg
Maltitol 136.8mg
Collagen 12.7mg
Sucrose fatty acid ester 12.0mg

〔配合例7〕
常法により、以下の組成を有する経口液状製剤を製造した。
<1アンプル(1本100mL)中の組成>
シロキクラゲ抽出酵母発酵物(製造例2) 0.3質量%
ソルビット 12.0質量%
安息香酸ナトリウム 0.1質量%
香料 1.0質量%
硫酸カルシウム 0.5質量%
精製水 残部(100質量%)
[Formulation Example 7]
An oral liquid preparation having the following composition was prepared by a conventional method.
<Composition in 1 ampoule (100 mL per bottle)>
Tremella fungus extract yeast fermented product (Production Example 2) 0.3% by mass
Sorbit 12.0% by mass
Sodium benzoate 0.1% by mass
Perfume 1.0% by mass
Calcium sulfate 0.5% by mass
Remainder of purified water (100% by mass)

本発明の抗炎症剤、抗老化剤、美白剤および育毛剤は、各種皮膚炎症性疾患の予防、治療または改善;皮膚の老化症状の予防、治療または改善;創傷または熱傷の治癒の促進;乾燥性皮膚疾患の予防、治療または改善;皮膚の黒化、シミ、ソバカス等の色素沈着の予防、治療または改善;脱毛症、特に男性型脱毛症の予防、治療または改善;毛髪のはり・こしの改善;などに大きく貢献できる。 The anti-inflammatory agent, anti-aging agent, whitening agent and hair restorer of the present invention are useful for preventing, treating or improving various skin inflammatory diseases; preventing, treating or improving skin aging symptoms; promoting healing of wounds or burns; prevention, treatment or improvement of sexual skin diseases; prevention, treatment or improvement of pigmentation such as blackening of the skin, age spots and freckles; prevention, treatment or improvement of alopecia, especially male pattern baldness; improvement; and so on.

Claims (4)

シロキクラゲ抽出物のラクトバシルス・プランタラム(Lactobacillus plantarum)による発酵物を加熱殺菌および/またはろ過してシロキクラゲ抽出発酵物を得て、
得られたシロキクラゲ抽出発酵物を有効成分とする
ことを特徴とする抗老化剤の製造方法。
heat sterilizing and/or filtering a fermented product of a white fungus extract with Lactobacillus plantarum to obtain a white fungus extract fermented product,
A method for producing an anti-aging agent, characterized by using the obtained fermented extract of white fungus as an active ingredient.
シロキクラゲ抽出物のラクトバシルス・プランタラム(Lactobacillus plantarum)による発酵物を加熱殺菌および/またはろ過してシロキクラゲ抽出発酵物を得て、
得られたシロキクラゲ抽出発酵物を有効成分とする
ことを特徴とする美白剤の製造方法。
heat sterilizing and/or filtering a fermented product of a white fungus extract with Lactobacillus plantarum to obtain a white fungus extract fermented product,
A method for producing a whitening agent, characterized by using the obtained fermented extract of Tremella as an active ingredient.
抗老化用途および/または美白用途に用いられる化粧料の製造方法であって、
シロキクラゲ抽出物のラクトバシルス・プランタラム(Lactobacillus plantarum)による発酵物を加熱殺菌および/またはろ過してシロキクラゲ抽出発酵物を得て、
得られたシロキクラゲ抽出発酵物を配合する
ことを特徴とする化粧料の製造方法。
A method for producing a cosmetic used for anti-aging applications and/or whitening applications,
heat sterilizing and/or filtering a fermented product of a white fungus extract with Lactobacillus plantarum to obtain a white fungus extract fermented product,
A method for producing a cosmetic, comprising blending the obtained fermented extract of Tremella fungus.
抗老化用途および/または美白用途に用いられる飲食品組成物の製造方法であって、
シロキクラゲ抽出物のラクトバシルス・プランタラム(Lactobacillus plantarum)による発酵物を加熱殺菌および/またはろ過してシロキクラゲ抽出発酵物を得て、
得られたシロキクラゲ抽出発酵物を配合する
ことを特徴とする飲食品組成物の製造方法。
A method for producing a food and drink composition for use in anti-aging applications and/or whitening applications,
heat sterilizing and/or filtering a fermented product of a white fungus extract with Lactobacillus plantarum to obtain a white fungus extract fermented product,
A method for producing a food or drink composition, comprising blending the obtained fermented extract of Tremella fungus.
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JP2009507863A (en) 2005-09-16 2009-02-26 上海市新文達生物科技有限公司 New use of white jellyfish miscellaneous polysaccharide or its extract
JP2010095465A (en) 2008-10-16 2010-04-30 House Wellness Foods Kk Immunostimulating composition containing lactic acid bacterium
JP2015177748A (en) 2014-03-19 2015-10-08 株式会社バイオジェノミクス Method for producing lactic acid bacteria producing substance, lactic acid bacteria producing substance and allergic dermatitis inhibitor

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