JP7496112B2 - プロドラッグ及び医薬組成物 - Google Patents

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特許法第３０条第２項適用 ［１］ ウェブサイト掲載日 平成３１年３月２５日 ウェブサイトのアドレス ｈｔｔｐｓ：／／ｅｐｒｉｎｔｓ．ｌｉｂ．ｈｏｋｕｄａｉ．ａｃ．ｊｐ／ｄｓｐａｃｅ／ｈａｎｄｌｅ／２１１５／７４１４６ ＜資 料＞『北海道大学学術成果コレクション』ウェブサイト公開資料 ［２］ 開催日 令和元年１１月１６日 集会名 Ｔｈｅ ４ｔｈ Ｔａｉｗａｎ－Ｊａｐａｎ Ｂｉｌａｔｅｒａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ 開催場所 Ｊｕｓｔ Ｓｌｅｅｐ Ｔａｉｐｅｉ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔａｉｗａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （台北市） ＜資 料＞学術集会プログラム及び要旨集抜粋 ＜資 料＞学術集会発表資料 ［３］ 開催日 令和元年１１月２５日～２６日 集会名 Ｔｈｅ １５ｔｈ Ｎａｎｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ－Ｈｏｋｋａｉｄｏ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ－ＮＩＭＳ Ｊｏｉｎｔ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ 開催場所 Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｎａｎｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ （南京市） ＜資 料＞学術集会プログラム及び要旨集の該当箇所抜粋 ＜資 料＞学術集会発表資料

本発明は、ＰＰＭ１ファミリーに属するＰＰＭ１Ｄ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ‐Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ １、 Ｄｅｌｔａ）に対する新規のプロテインホスファターゼ阻害剤に関する。

プロテインホスファターゼはリン酸化タンパク質を脱リン酸化する酵素であり、生体内で糖代謝、平滑筋収縮、細胞周期、ＤＮＡ複製、転写、翻訳、細胞接着、細胞活性化・分化などの制御、生体の免疫系や神経系の維持に作用しているといわれている。従って、プロテインホスファターゼ阻害剤は種々の医薬になる可能性があることから広く探索されている。プロテインホスファターゼの中でもセリン／スレオニンホスファターゼ（Ｓｅｒ／Ｔｈｒホスファターゼ）は、化学的性質及び遺伝子構造よりＰＰ１、ＰＰ２Ａ、ＰＰ２Ｂ、ＰＰ２Ｃ（ＰＰＭ１）ファミリーの４種に分類されている。このＰＰＭ１ファミリーは、特にＤＮＡ修復機構、ストレス応答、シグナル伝達、細胞増殖などの細胞機能の制御に関与していることから、特にその阻害剤の開発は注目されている。

ＰＰＭ１Ｄ／Ｗｉｐ１は、癌抑制タンパク質ｐ５３によって発現誘導されるＳｅｒ／Ｔｈｒホスファターゼとして同定された（例えば、非特許文献１参照。）。ＰＰＭ１Ｄは、ｐ５３経路やＤＮＡ損傷応答に関与するタンパク質を脱リン酸化するネガティブフィードバック機構を介して細胞周期を制御している。ＰＰＭ１Ｄは、多様な悪性腫瘍で変異や過剰発現が見つかっており、癌化学療法の標的として注目を浴びている（例えば、非特許文献２～４参照。）。さらに、ＰＰＭ１Ｄは生体内において恒常的に発現していること、また、ノックアウトマウスを用いた研究から、ＰＰＭ１Ｄが、精子形成や老化、免疫応答にも関与していることが示唆されている（非特許文献５）。

現在まで、数種の有力なＰＰＭ１Ｄ阻害剤が発表されている。ＰＰＭ１Ｄ阻害剤としては、例えば、非特許文献６に記載の多環式化合物、ＧＳＫ２８３０３７１（CAS No.1404456-53-6）（非特許文献７）、非特許文献８、９、特許文献１に記載の第一級アルコールを有するケイ素化合物等が報告されている。

国際公開第２０１０／０４１４０１号

Fiscella et al.，Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，1997，vol.94(12)，p. 6048-6053. Tan et al.，Clinical Cancer Research，2009，vol. 15(7)，p. 2269-2280. Yap et al.，Nature Reviews Cancer，2009，vol. 9，p. 167-181. Busque et al.，STEM CELLS，2018，vol.36，p. 1287-1294. Choi et al.，Molecular and Cellular Biology, 2002, vol. 22(4), p.1094-1105. Rayter et al.，Oncogene, 2008, vol.27, p. 1036-1044. Gilmartin et al.，Nature Chemical Biology, 2014, vol.10, p. 181-187. Yagi et al.，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2012, vol.22(1), p.729-732. Ogasawara et al.，Bioorganic & Medicinal Chemistry, 2015, vol.23(19), p.6246-6249 Simonin et al.，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2012, vol.22(2), p.1151-1155.

非特許文献６～９、特許文献１等に記載されているＰＰＭ１Ｄ阻害剤は、癌細胞内で阻害効果を発揮し、また優れたがん細胞増殖抑制効果を発揮することから、悪性腫瘍治療薬として有用である。しかし、細胞透過性が不十分であり、より細胞への透過性が高く、ＰＰＭ１Ｄ阻害活性も十分であるＰＰＭ１Ｄ阻害剤が求められている。すなわち、本発明は、細胞透過性が高いＰＰＭ１Ｄ阻害剤を提供することを目的とする。

本発明者らは、非特許文献８、９、又は特許文献１に記載のケイ素化合物のうち、カルボキシ基を有するケイ素化合物について、カルボキシ基をアミノアルキルエステル化することにより、ＰＰＭ１Ｄ阻害活性を低下させ、かつ細胞透過性を高められること、この誘導体は、細胞内に取り込まれると、分解されて元のカルボキシ基となり、高いＰＰＭ１Ｄ阻害活性を示すことを見出し、本発明を完成させた。

すなわち、本発明は、以下の、ＰＰＭ１Ｄ阻害剤等を提供するものである。
［１］ 下記一般式（１）

［式中、Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ独立して、炭素数１～１２の炭化水素基であり；ｎは１又は２であり；ｐは１～６の整数であり；Ｘは、置換基を有していてもよい炭素数３～３６の炭化水素基又は置換基を有していてもよい複素環式基である。］
で表される化合物からなる、ＰＰＭ１Ｄ阻害剤。
［２］ 前記Ｘが、デカヒドロナフタレン環から誘導された脂環式基である、前記［１］のＰＰＭ１Ｄ阻害剤。
［３］ 細胞内のＰＰＭ１Ｄ活性を阻害するために用いられる、前記［１］又は［２］のＰＰＭ１Ｄ阻害剤。
［４］ 前記［１］～［３］のいずれかのＰＰＭ１Ｄ阻害剤を有効成分とする、医薬用組成物。
［５］ 癌治療に用いられる、前記［４］の医薬用組成物。

本発明に係るＰＰＭ１Ｄ阻害剤は、ＰＰＭ１Ｄ阻害活性に重要なカルボキシ基が、アミノアルキルエステル化された化合物からなる。アミノアルキルエステル化によってカルボキシ基がブロックされたことにより、ＰＰＭ１Ｄ阻害活性は低下し、かつ細胞透過性が向上する。このため、当該ＰＰＭ１Ｄ阻害剤は、in vivoにおけるＰＰＭ１Ｄ阻害剤として好適であり、ＰＰＭ１Ｄの阻害により治療又は予防効果が期待される疾患の治療に用いられる医薬用組成物の有効成分として非常に有用である。

実施例２において、化合物ＳＬ－１７６、ＳＬ－１８０、及びＳＬ－１８３のＰＰＭ１Ｄ活性のin vitroアッセイの結果を示した図である。 実施例２において、化合物ＳＬ－１７６、ＳＬ－１８０、及びＳＬ－１８３のヒト乳癌細胞株ＭＣＦ７を用いた細胞生存性アッセイの結果を示した図である。 実施例２において、５－ＣＦＤＡ又は５－ＡＢＦＤＡで処理したＭＣＦ７細胞の、処理後２、５、又は１５分後の蛍光画像である。 実施例２において、化合物ＳＬ－１７６で処理したＭＣＦ７細胞の細胞抽出物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳクロマトグラムである。 実施例２において、化合物ＳＬ－１８３で処理したＭＣＦ７細胞の細胞抽出物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳクロマトグラムである。 実施例２において、抗癌剤エトポシド、化合物ＳＬ－１７６、及びＳＬ－１８３のＨ１２９９細胞及びＨ１２９９（ＰＭＤ－９）細胞を用いた細胞生存性アッセイの結果を示した図である。

本発明及び本願明細書において、「Ｃ_ｙ－ｚ（ｙ及びｚは、ｙ＜ｚを充たす正の整数である。）」は、炭素数がｙ以上ｚ以下であることを意味する。

本発明に係るＰＰＭ１Ｄ阻害剤は、下記一般式（１）で表される化合物（以下、「化合物（１）」ということがある。）からなる。当該化合物中のアミノアルキルエステル部分、すなわち、ＮＨ_２－（ＣＨ_２）ｐ－Ｏ－ＣＯ－基がカルボキシ基である化合物は、in vitroの反応系において、ＰＰＭ１Ｄ阻害活性を示す化合物である。なお、一般式（１）中、ｐは１～６の整数である。

一般式（１）中、Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は、それぞれ独立して、炭素数１～１２の炭化水素基である。当該炭化水素基としては、直鎖状、分岐状又は環状の飽和又は不飽和の炭化水素基が挙げられ、さらに直鎖状、分岐状又は環状のアルキル基、アラルキル基、又は芳香族炭化水素基が好ましい。さらに、炭素数１～８の直鎖状又は分岐状のアルキル基、炭素数６～１４の芳香族炭化水素基、又はＣ_６－１０アリール－Ｃ_１－６アルキル基（炭素数６～１０のアリール基で置換された炭素数１～６のアルキル基）が好ましい。より詳細には、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基等の炭素数１～６のアルキル基が好ましい。また、フェニル基、ナフチル基等の炭素数６～１０のアリール基が好ましい。さらに、ベンジル基、フェネチル基等のフェニル－Ｃ_１－４アルキル基（フェニル基で置換された炭素数１～４のアルキル基）が好ましい。これらのシリル基上の置換基Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３は、同一でもよく、互いに異なっていてもよい。

一般式（１）中、(Ｒ^１)(Ｒ^２)(Ｒ^３)Ｓｉ－の具体例としては、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリ（n－プロピル）シリル基、トリイソプロピルシリル基、トリ（ｎ－ブチル）シリル基、トリ（ｓｅｃ－ブチル）シリル基、トリイソブチルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基、ジメチルフェニルシリル基、メチルジフェニルシリル基、トリフェニルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル基等が挙げられる。

一般式（１）中、Ｘは、置換基を有していてもよい炭素数３～３６の炭化水素基又は置換基を有していてもよい複素環式基を示す。ここで、炭素数３～３６の炭化水素基としては、直鎖、分岐鎖又は環状の炭化水素いずれでもよく、また飽和でも不飽和でもよい。より好ましくは、炭素数３～２４の直鎖、分岐鎖又は環状の炭化水素基であり、さらに好ましくは、炭素数６～２４の環状の脂肪族炭化水素基（脂環式基）である。

当該炭化水素基の例としては、Ｃ_３－２４アルキル基、Ｃ_３－２４アルケニル基、Ｃ_３－２４アルキニル基、炭素数３～２４の環状構造を有する飽和又は不飽和炭化水素基が挙げられる。Ｃ_３－２４アルキル基の例としては、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、イソブチル基、ｎ－ペンチル基、ｎ－ヘキシル基等のＣ_３－６アルキル基が好ましい。Ｃ_３－２４アルケニル基としては、１－プロペン－１－イル基、２－プロペン－１－イル基、イソプロペニル基、１－ブテン－１－イル基、２－ブテン－１－イル基、３－ブテン－１－イル基、１－ブテン－２－イル基、２－ブテン－２－イル基、３－ブテン－２－イル基等のＣ_３－８アルケニル基が好ましい。Ｃ_３－２４アルキニル基としては、プロピニル基、ペンチニル基、ヘキシニル基、オクチニル基等のＣ_３－８アルキニル基が好ましい。

炭素数３～２４の環状構造を有する飽和又は不飽和炭化水素基としては、例えば、５又は６員環状の飽和又は不飽和の炭化水素を１～３個有する環状構造を有する炭化水素基が挙げられる。当該炭化水素基としては、脂環式基であってもよく、アリール基であってもよい。脂環式基としては、例えば、シクロペンタン、シクロヘキサン、シクロペンテン、シクロヘキセン、ビシクロウンデカン、デカヒドロナフタレン（デカリン）、ノルボルナン、ピネン、ノルボルネン、ノルボルナジエン、リモネン、テトラヒドロナフタレン等の環化合物から誘導される脂環式基が挙げられる。アリール基としては、例えば、フェニル基、ナフチル基、ビフェニル基等の炭素数６～１０のアリール基が挙げられる。

これらの炭化水素基には、ヒドロキシ基、ニトリル基、カルボキシル基、アルコキシカルボニル基、シアノ基、アルコキシ基、アルキルチオ基、置換スルホニル基、ハロゲン原子、トリ置換シリル基及びトリ置換シリルオキシ基から選ばれる１～４個の置換基を有していてもよい。ここで、アルコキシ基及びアルキルチオ基の炭素数は１～６が好ましい。アルコキシカルボニル基の炭素数は２～７が好ましい。また、トリ置換シリルオキシ基としては、前記の(Ｒ^１)(Ｒ^２)(Ｒ^３)Ｓｉ－Ｏ－基が好ましい。置換スルホニル基としては、メタンスルホニル基等のＣ 1-4アルカンスルホニル基、ベンゼンスルホニル基、トルエンスルホニル基等が挙げられる。これらの置換基は１～４個有していてもよい。

Ｘで表される複素環式基としては、窒素原子又は酸素原子を含む５又は６員の複素環式基が挙げられる。具体的にはピロリル基、ピロリジニル基、ピリジル基、フラニル基、テトラヒドロフラニル基、ピラニル基、テトラヒドロピラニル基等が挙げられる。

当該複素環には、アリール基、アラルキル基、アルキル基、アミノ基、アルキルアミノ基、アルケニルアミノ基、アシルオキシ基及びアラルキルオキシ基から選ばれる１～５個の置換基を有していてもよい。アリール基としては、フェニル基、ナフチル基等が挙げられる。アラルキル基としてはベンジル基、フェネチル基等が挙げられる。アルキル基としては、メチル基、エチル基等の炭素数１～６のアルキル基が挙げられる。アルキルアミノ基としてはメチルアミノ基、エチルアミノ基等の炭素数１～６のアルキルアミノ基が挙げられる。アルケニルアミノ基としては、プロペニルアミノ基、２－メチレン－プロピルアミノ基等が挙げられる。アシルオキシ基としてはアセトキシ基、プロピオニルオキシ基等が挙げられる。アラルキルオキシ基としてはベンジルオキシ基等が挙げられる。

一般式（１）中、ｎは１又は２である。すなわち、化合物（１）は、炭素数３～３６の炭化水素又は複素環が、アミノアルキルエステル基に加えて、１個又は２個の(Ｒ^１)(Ｒ^２)(Ｒ^３)Ｓｉ－Ｏ－基で置換された化合物である。ｎが２の場合、２個の(Ｒ^１)(Ｒ^２)(Ｒ^３)Ｓｉ－Ｏ－基は、同種の基であってもよく、異種の基であってもよい。

化合物（１）としては、Ｒ^１、Ｒ^２及びＲ^３がそれぞれ独立して、炭素数１～８の直鎖状又は分岐状のアルキル基、炭素数６～１４の芳香族炭化水素基、又はＣ_６－１０アリール－Ｃ_１－６アルキル基であり、Ｘが、炭素数３～２４の環状構造を有する飽和又は不飽和炭化水素基である化合物が好ましく；(Ｒ^１)(Ｒ^２)(Ｒ^３)Ｓｉ－が、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリ（ｎ－プロピル）シリル基、トリイソプロピルシリル基、トリ（ｎ－ブチル）シリル基、トリ（ｓｅｃ－ブチル）シリル基、トリイソブチルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基、ジメチルフェニルシリル基、メチルジフェニルシリル基、トリフェニルシリル基、又はｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル基であり、Ｘが炭素数６～２４の脂環式基又はアリール基であり、ｎが１又は２であり、ｐが１～６の整数である化合物がより好ましく；(Ｒ^１)(Ｒ^２)(Ｒ^３)Ｓｉ－が、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリ（ｎ－プロピル）シリル基、トリイソプロピルシリル基、トリ（ｎ－ブチル）シリル基、トリ（ｓｅｃ－ブチル）シリル基、トリイソブチルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基、ジメチルフェニルシリル基、メチルジフェニルシリル基、トリフェニルシリル基、又はｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル基であり、Ｘが炭素数６～２４の脂環式基であり、ｎが１又は２であり、ｐが１～６の整数である化合物がさらに好ましく；(Ｒ^１)(Ｒ^２)(Ｒ^３)Ｓｉ－が、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリ（n－プロピル）シリル基、トリイソプロピルシリル基、トリ（ｎ－ブチル）シリル基、トリ（ｓｅｃ－ブチル）シリル基、トリイソブチルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基、ジメチルフェニルシリル基、メチルジフェニルシリル基、トリフェニルシリル基、又はｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル基であり、Ｘがデカヒドロナフタレン基（デカヒドロナフタレンから誘導された脂環式基）又はテトラデカヒドロフェナントレン基（テトラデカヒドロフェナントレンから誘導された脂環式基）であり、ｎが１又は２であり、ｐが１～６の整数である化合物がよりさらに好ましい。

本発明の化合物としては、例えば、下記一般式（２－１）で表される化合物が挙げられる。一般式（２－１）中、(Ｒ^１)(Ｒ^２)(Ｒ^３)Ｓｉ－基及びｐは、それぞれ、一般式（１）と同じである。一分子中、２個ある(Ｒ^１)(Ｒ^２)(Ｒ^３)Ｓｉ－基は、同種の基であってもよく、異種の基であってもよい。

一般式（２－１）中、(Ｒ^１)(Ｒ^２)(Ｒ^３)Ｓｉ－基は、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、トリ（ｎ－プロピル）シリル基、トリイソプロピルシリル基、トリ（ｎ－ブチル）シリル基、トリ（ｓｅｃ－ブチル）シリル基、トリイソブチルシリル基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基、ジメチルフェニルシリル基、メチルジフェニルシリル基、トリフェニルシリル基、又はｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル基が好ましい。

化合物（１）は、例えば、少なくとも第３級カルボキシ基と１又は２個のヒドロキシ基を備える炭素数３～３６の炭化水素又は複素環に対して、当該ヒドロキシ基をシリル化して(Ｒ^１)(Ｒ^２)(Ｒ^３)Ｓｉ－基を導入した後、当該第３級カルボキシ基をアミノアルキルエステル化することにより合成できる。炭素数３～３６の炭化水素又は複素環のヒドロキシ基への(Ｒ^１)(Ｒ^２)(Ｒ^３)Ｓｉ－基の導入は、例えば、非特許文献８、９、又は特許文献１に記載の方法で合成できる。シリル化後の第３級カルボキシ基を有するケイ素化合物のアミノアルキルエステル化反応は、常法により行うことができる。

化合物（１）は、塩を形成してもよく、その塩を形成する酸又は塩基としては、塩酸、硫酸などの鉱酸；酢酸、コハク酸、クエン酸等の有機酸；ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属；カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属等が挙げられる。また、本発明のアミノアルキルエステル化合物は、水和物等の形態であってもよい。

化合物（１）は、第３級カルボキシ基がアミノアルキルエステル化されていることにより、細胞膜への親和性が高く、細胞透過性に優れている。加えて、当該第３級カルボキシ基はＰＰＭ１Ｄ阻害活性に重要な部位であり、アミノアルキルエステル化されてブロックされることによって、ブロックされる前の化合物よりもＰＰＭ１Ｄ阻害活性は低下している。当該化合物が細胞内へ取り込まれると、恐らくは細胞内の酵素によりアミノアルキルエステル部分が加水分解され、第３級カルボキシ基を有するケイ素化合物となる。このケイ素化合物は非常に高いＰＰＭ１Ｄ阻害活性を有する。つまり、化合物（１）は、細胞外ではＰＰＭ１Ｄ阻害活性は低いが、細胞透過性に優れており、細胞内に取り込まれると高いＰＰＭ１Ｄ阻害活性を示す。このため、細胞内のＰＰＭ１Ｄ活性を阻害するために用いられるＰＰＭ１Ｄ阻害剤として非常に有用である。

化合物（１）は、ＰＰＭ１Ｄを阻害すること及び癌細胞の増殖を抑制することから、悪性腫瘍治療薬に代表される医薬の有効成分として有用である。また、化合物（１）又はその塩は、低分子化合物であることから、免疫原性等の問題がない。また、経口投与も可能であり、投与経路もあまり制限されないため、特に、ヒトを含む哺乳類に対する医薬の有効成分として有用である。

化合物（１）又はその塩を医薬組成物に含有せしめる場合、必要に応じて薬学的に許容される担体と配合し、予防又は治療目的に応じて各種の投与形態を採用可能である。該形態としては、例えば、経口剤、注射剤、坐剤、軟膏剤、貼付剤等が挙げられるが、経口剤が好ましい。これらの投与形態は、各々当業者に公知慣用の製剤方法により製造できる。

薬学的に許容される担体としては、固形製剤における賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤；液状製剤における溶剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、無痛化剤等が用いられる。また、必要に応じて防腐剤、抗酸化剤、着色剤、甘味剤、安定化剤等の製剤添加物を用いることもできる。

経口用固形製剤を調製する場合は、化合物（１）に賦形剤、必要に応じて、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味・矯臭剤等を加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等を製造することができる。

経口用液体製剤を調製する場合は、化合物（１）に、矯味剤、緩衝剤、安定化剤、矯臭剤等を加えて、常法により内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤等を製造することができる。

注射剤を調製する場合は、化合物（１）に、ｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤等を添加し、常法により皮下、筋肉内及び静脈内用注射剤を製造することができる。

坐剤を調製する場合は、化合物（１）に当業界において公知の製剤用担体、例えば、ポリエチレングリコール、ラノリン、カカオ脂、脂肪酸トリグリセリド等を加えた後、常法により製造することができる。
軟膏剤を調製する場合は、化合物（１）に通常使用される基剤、安定剤、湿潤剤、保存剤等が必要に応じて配合され、常法により混合、製剤化される。
貼付剤を調製する場合は、通常の支持体に前記軟膏、クリーム、ゲル、ペースト等を常法により塗布すればよい。

前記の各製剤中の化合物（１）の含有量は、患者の症状、その剤形等により一定ではないが、一般に経口剤では約０．０５～１０００ｍｇ、注射剤では約０．０１～５００ｍｇ、坐剤では約１～１０００ｍｇ程度である。

また、これらの製剤の１日あたりの投与量は、患者の症状、体重、年齢、性別等によって異なり一概には決定できないが、通常成人（体重６０ｋｇ）１日あたり約０．０５～５０００ｍｇ程度であり、０．１～１０００ｍｇが好ましく、これを１日１回又は２～３回程度に分けて投与するのが好ましい。

化合物（１）は、ＰＰＭ１Ｄの阻害により治療又は予防効果が期待される疾患の治療に用いられる医薬用組成物の有効成分として非常に有用である。当該疾患としては、例えば、悪性腫瘍（癌）が挙げられ、例えば、頭頚部癌、食道癌、胃癌、結腸癌、直腸癌、肝臓癌、胆嚢・胆管癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、子宮頚癌、子宮体癌、腎癌、膀胱癌、前立腺癌、精巣腫瘍、骨・軟部肉腫、白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫、皮膚癌、脳腫瘍等が挙げられる。

化合物（１）は、免疫抑制剤や抗ホルモン薬の有効成分としても有用である。例えば、化合物（１）は臓器移植などにおける免疫抑制剤としても有用である。

化合物（１）を有効成分とするＰＰＭ１Ｄ阻害剤及び医薬用組成物が投与される動物は、特に限定されるものではなく、ヒトであってもよく、ヒト以外の動物であってもよい。非ヒト動物としては、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、サル、イヌ、ネコ、ウサギ、マウス、ラット、ハムスター、モルモット等の哺乳動物や、ニワトリ、ウズラ、カモ等の鳥類等が挙げられる。

次に実施例を示して本発明をさらに詳細に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

＜Ｈｉｓ－ＰＰＭ１Ｄ（１－４２０）の調製＞
ＰＰＭ１Ｄタンパク質（Ｐｒｏｔｅｉｎ ＩＤ：Ｏ１５２９７／ｃＤＮＡ ＩＤ：Ｕ７０３８５）は、触媒ドメイン（１位から４２０位）をコードしたｃＤＮＡをｐＣｏｌｄＩ ベクター（ＴａＫａＲａ社）に導入し、Ｈｉｓタグ融合タンパク質として大腸菌を用いて発現させた。精製はＢＤ－ＴＡＬＯＮ樹脂（ＣＬＯＮＴＥＣＨ社）を用いた金属アフィニティークロマトグラフィーによって行い、溶出バッファー（１５０ｍＭ イミダゾール、ＰＢＳ（ｐＨ７．５）、５００ｍＭ ＮａＣｌ、１０% グリセロール、０．２% エタノール、１ｍＭ ２－メルカプトエタノール）を用いて目的タンパク質の溶出を行った。溶出されたＰＰＭ１Ｄタンパク質は透析バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、０．１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０２% ２－メルカプトエタノール）に対して１６時間透析した後、５０% グリセロールストック（酵素濃度１μＭ）として－８０℃で保存した。
このＰＰＭ１Ｄの触媒ドメインのＨｉｓタグ融合タンパク質（Ｈｉｓ－ＰＰＭ１Ｄ（１－４２０））を、ＰＰＭ１Ｄ活性の測定に用いた。

＜ＰＰＭ１Ｄ活性（ホスファターゼ活性）のin vitroアッセイ＞
基質には、ｐ５３の１５位リン酸化Ｓｅｒ含有ペプチド（Ａｃ－Ｖａｌ－Ｇｌｕ－Ｐｒｏ－Ｐｒｏ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ（Ｐ）－Ｇｌｎ－Ｇｌｕ－Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｓｅｒ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｔｒｐ－ＮＨ_２：Ｓｅｒ（Ｐ）はリン酸化Ｓｅｒを示す）を用いた。当該ペプチドは、Ｆｍｏｃアミノ酸（Novabiochem社製）を用いたＦｍｏｃ固相法によって、固相ペプチド合成した。ペプチド画分は、Vydac C8（２２×２５０ｍｍ）を使用した逆相ＨＰＬＣにより手動で精製した。ＨＰＬＣピークは、ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ－ＭＳで分析した。

ホスファターゼ活性は、放出された遊離リン酸塩を、BIOMOL GREEN Reagent（Enzo life sciences社製）を使用して測定することにより実施した。全てのアッセイは、２ｎＭ Ｈｉｓ－ＰＰＭ１Ｄ（１－４２０）を含む反応用バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、５０ｍＭ ＮａＣｌ、３０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、０．１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０２％ ２－メルカプトエタノール、０．５％ ＤＭＳＯ）中で、３０℃、６分間実施した。

＜細胞生存性アッセイ＞
ヒト乳癌細胞株ＭＣＦ７及びヒト非小細胞肺癌細胞株Ｈ１２９９（いずれも、ＡＴＣＣから入手）を用いた。Ｈ１２９９にＨＡ－ＰＰＭ１Ｄを過剰発現させた形質転換細胞Ｈ１２９９（ＰＭＤ－９）株は、非特許文献９に記載の方法で樹立した。
まず、９６ウェルの平底プレートに、１×１０^４個／ウェルの細胞を播種し、２４時間インキュベートした。２４時間インキュベート後の細胞を被験化合物で処理した。処理から３日後に、細胞の生存率を、ＭＴＳアッセイ又はビルケルチュルク計算盤（Erma社製）を用いて調べた。データのフィッティングは、KaleidaGraph4.0（HUKINKS）によって実施した。

＜蛍光プローブを使用した細胞内取り込み率アッセイ＞
まず、ＭＣＦ７細胞を３５ｍｍディッシュに播種し、２４時間インキュベートした。２４時間インキュベート後、細胞を０．１μＭ ５－ＣＦＤＡ又は５－ＡＢＦＤＡで処理した。細胞は、蛍光顕微鏡（BZ-9000、キーエンス社製）で観察した。

＜代謝分析＞
代謝産物抽出物は、被験化合物で６時間処理した後に、１０ｃｍディッシュで９０％コンフルエンシーであるＭＣＦ７細胞から、１０％のＰＢＳを含む１０ｍＬの氷冷アセトンを使用して調製した。当該代謝産物抽出物を、室温で一晩インキュベートした後、上澄みを乾燥させた。乾燥した抽出物を、１００μＬのアセトンで再懸濁させたものを、超音波処理した後、１５，０００ｒｐｍで５分間遠心処理して不溶性画分を沈殿除去した。得られた蒸発濃縮上清を、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳシステムに注入して分析した。当該システムでは、１０×１ｍｍ ガードカラムを備えたInertSustainSwift C18（１００×１ｍｍ、３μｍ）を用いてクロマトグラフィーを実施した。ＦＴ－ＭＳ及びＦＴ－ＭＳ／ＭＳは、ネガティブＥＳＩモードで、LTQ-Orbitrap XLにより３００－１２００ｍ／ｚのスキャンで実施した。

［実施例１］
カルボキシ基がブロックされていない化合物ＳＬ－１７６、化合物ＳＬ－１７６のアルキルシリルエーテルがヒドロキシ基に置換された化合物ＳＬ－１８８、化合物ＳＬ－１７６のカルボキシ基がアミノアルキル基に置換された化合物ＳＬ－１７７、及び化合物ＳＬ－１７６のカルボキシ基がアミノアルキルエステル基に置換された化合物ＳＬ－１８０、ＳＬ－１８３を合成した。化合物Ａ～Ｉ、及び化合物ＳＬ－１７６は、非特許文献１０に記載の方法で合成した。

上記式中、ＴＥＳはトリエチルシリル基であり、ＴＢＳはｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル基であり、Ｐｈｔｈはフタロイル基であり、Ｂｏｃはｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基である。

５ｍＬ容試験管に化合物ＳＬ－１７６（１６．６ｍｇ、３６．３μｍｏｌ）と炭酸セシウム（２３．７ｍｇ、７２．６μｍｏｌ）を入れて、当該試験管内の空気をアルゴンで置換した後、乾燥ジメチルホルムアミド（０．２４ｍＬ）に溶解させた。当該試験管に、遮光下でＮ－（２－ブロモエチル）フタルイミド（１９．４ ｍｇ、７６．３μｍｏｌ）を加え、室温で５．５時間撹拌した。その後、氷冷して飽和塩化アンモニウム水溶液を加えることによって、反応を停止させた。次いで、反応液をジエチルエーテルで３回抽出し、有機層を水洗した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。除媒後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル＝４／１）で精製して、不純物を含有する化合物Ｋが得られた。これを再度、プレパラティブ薄層クロマトグラフィー（ヘキサン／ジエチルエーテル＝４／１）精製し、純粋な化合物Ｋ（２１．１ｍｇ、９２％）を淡黄色液体として得た。化合物Ｋの分析結果は以下の通りであった。

IR (ATR): ν 2950, 2932, 2876, 2854, 1777, 1716, 1468, 1428, 1391, 1227, 1202, 1068, 1026, 836, 717 cm^-1;
¹H NMR (500 MHz, CDCl₃): δ 0.00 (6H, s), 0.54 (6H, q, J = 8.1 Hz), 0.86 (9H, s), 0.92 (9H, t, J = 7.5 Hz), 0.95-1.04 (1H, m), 1.19 (3H, s), 1.20-1.34 (5H, m), 1.52-1.68 (4H, m), 1.73 (1H, dd, J = 13.8, 2.9 Hz), 1.96 (1H, td, J = 11.5, 2.9 Hz), 3.71 (1H, brs), 3.93 (1H, ddd, J = 14.3, 6.3, 4.6 Hz), 3.98 (1H, ddd, J = 14.3, 6.3, 4.6 Hz), 4.07-4.12 (1H, m), 4.28 (1H, ddd, J = 11.5, 5.7, 4.6 Hz), 4.35 (1H, ddd, J = 11.5, 6.3, 4.6 Hz), 7.70-7.74 (2H, m), 7.83-7.87 (2H, m);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃): δ -5.01, 5.04, 7.00, 17.97, 18.28, 19.86, 25.83, 27.87, 34.42, 35.57, 37.02, 37.36, 39.31, 42.41, 46.32, 61.07, 67.49, 71.18, 123.28, 131.99, 133.96, 167.94, 178.25;
HRMS (FD): Calcd for C₃₄H₅₆NO₆Si₂ (M+H)⁺: 630.3646, found: 630.3627.

５ｍＬ容試験管に化合物Ｋ（２１．１ｍｇ、３３．５μｍｏｌ）を入れて、当該試験管内の空気をアルゴンで置換した後、無水エタノール（０．６７ｍＬ）に溶解させた。当該試験管に、エチレンジアミン（２２μＬ、３３．５μｍｏｌ）を加え、５０℃で２時間撹拌した。その後、放冷して、減圧下で揮発性成分を除去した後、残渣をベンゼンで希釈して減圧濃縮する操作を３回行った。得られた粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル＝５／１の後、塩化メチレン／メタノール／トリエチルアミン＝１：０：０～２０：１：０～４０：２：１）で精製し、化合物ＳＬ－１８０（１４．９ ｍｇ、８８％）を無色液体として得た。化合物ＳＬ－１８０の分析結果は以下の通りであった。

IR (ATR): ν 2950, 2934, 2876, 2858, 2360, 1726, 1462, 1229, 1068, 1007, 860, 773 cm^-1;
¹H NMR (500 MHz, CDCl₃): δ 0.02 (6H, s), 0.58 (6H, q, J = 8.1 Hz), 0.88 (9H, s), 0.96 (9H, t, J = 8.0 Hz), 1.05-1.16 (1H, m), 1.29 (3H, s), 1.25-1.45 (5H, m), 1.57-1.76 (4H, m), 1.83 (1H, dd, J = 13.8, 3.5 Hz), 2.08 (1H, td, J = 11.5, 3.5 Hz), 2.92 (2H, t, J = 5.8 Hz), 3.76 (1H, brs), 4.02-4.11 (2H, m), 4.12-4.16 (1H, m);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃): δ -5.01, 5.08, 7.01, 17.97, 18.46, 20.04, 25.82, 28.02, 34.43, 35.66, 37.37, 39.48, 41.12, 42.61, 46.49, 66.68, 67.43, 71.16, 178.52;
HRMS (FD): Calcd for C₂₆H₅₄NO₄Si₂ (M+H)⁺: 500.3591, found: 500.3613.

５０ｍＬ容ナスフラスコに、化合物ＳＬ－１７６（２１５ ｍｇ、０．４７１ ｍｍｏｌ）と炭酸セシウム（３０７ ｍｇ、０．９４２ ｍｍｏｌ）を入れて、当該ナスフラスコ内の空気をアルゴンで置換した後、乾燥ジメチルホルムアミド（４．０ｍＬ）に溶解させた。当該ナスフラスコに、ｔｅｒｔ－ブチルＮ－（４－ブロモブチル）カルバマート（２３８ ｍｇ、０．９４２ ｍｍｏｌ）（非特許文献１０）の乾燥ジメチルホルムアミド（３．４ｍＬ）溶液を加え、乾燥ジメチルホルムアミド（２．０ｍＬ）で洗い込んだ後、室温で１９時間撹拌した。その後、飽和塩化アンモニウム水溶液を加えることによって、反応を停止させた。次いで、反応液をジエチルエーテルで３回抽出し、有機層を水洗した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。除媒後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル＝５／１）で精製し、化合物Ｌ（２８７ｍｇ、９７％）を無色液体として得た。化合物Ｌの分析結果は以下の通りであった。

IR (ATR): ν 2935, 2876, 1718, 1365, 1230, 1178, 1133, 1068, 1025, 1007, 908, 773, 733 cm^-1;
¹H NMR (500 MHz, CDCl₃): δ 0.02 (6H, s), 0.59 (6H, q, J = 8.0 Hz), 0.88 (9H, s), 0.96 (9H, t, J = 8.0 Hz), 1.04-1.14 (1H, m), 1.26 (3H, s), 1.28-1.46 (5H, m), 1.43 (9H, s), 1.50-1.73 (8H, m), 1.80 (1H, dd, J = 13.2, 2.9 Hz), 2.08 (1H, td, J = 11.5, 2.9 Hz), 3.14 (2H, d, J = 6.3 Hz), 3.74-3.78 (1H, brs), 4.05 (2H, q, J = 5.7 Hz), 4.12-4.15 (1H, m);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃): δ -5.01, 5.09, 7.01, 17.97, 18.43, 20.01, 25.82, 26.01, 26.03, 26.67, 27.98, 28.37, 28.54, 34.45, 35.66, 37.39, 39.38, 40.16, 42.55, 46.35, 63.82, 67.47, 71.19, 79.11, 155.90, 178.53;
HRMS (FD): Calcd for C₃₃H₆₆NO₆Si₂ (M+H)⁺: 628.4429, found: 628.4413.

５０ｍＬ容ナスフラスコに、化合物Ｌ（２８７ ｍｇ、０．４５６ｍｍｏｌ）と２，６－ルチジン（０．４８ｍＬ、４．１ｍｍｏｌ）を入れて、当該ナスフラスコ内の空気をアルゴンで置換した後、乾燥ジクロロメタン（９．９ｍＬ）に溶解させた。当該ナスフラスコを－５０℃に冷却した後、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホナート（０．４９６ ｍＬ、２．７４ｍｍｏｌ）を加え、０℃で２時間撹拌した。その後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えることによって、反応を停止させた。次いで、反応液を酢酸エチルで３回抽出し、有機層を水洗した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。除媒後、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー（富士シリシア製NH Silica Gel (DM 1020)、 ヘキサン／酢酸エチル＝１／１～０／１の後、クロロホルム／メタノール＝４０：１～２０：１～１０：１～３：１）で精製し、化合物ＳＬ－１８３（２０４ｍｇ、８５％）を無色液体として得た。化合物ＳＬ－１８３の分析結果は以下の通りであった。

IR (ATR): ν 2932, 2875, 2857, 1724, 1463, 1230, 1180, 1134, 1068, 1025, 961, 835, 742, 723 cm^-1;
¹H NMR (500 MHz, CDCl₃): δ 0.02 (6H, s), 0.59 (6H, q, J = 8.0 Hz), 0.88 (9H, s), 0.96 (9H, t, J = 8.0 Hz), 1.04-1.14 (1H, m), 1.27 (3H, s), 1.28-1.44 (5H, m), 1.48-1.74 (8H, m), 1.81 (1H, dd, J = 13.8, 2.9 Hz), 2.08 (1H, td, J = 11.5, 2.9 Hz), 2.72 (2H, m), 3.76 (1H, brs), 4.00-4.09 (2H, m), 4.13-4.16 (1H, m);
¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃): δ -5.07, 5.03, 6.95, 14.05, 17.91, 18.38, 19.97, 22.58, 25.76, 25.98, 27.93, 30.10, 31.52, 34.40, 35.61, 37.35, 39.30, 41.70, 42.51, 46.29, 64.06, 67.43, 71.15, 178.52;
HRMS (FD): Calcd for C₂₈H₅₈NO₄Si₂ (M+H)⁺: 528.3904, found: 528.3923.

［参考例１］
第３級カルボン酸を有する下記式で表される化合物について、in vitroにおけるホスファターゼ活性と細胞生存性を調べた（ｎ＝３）。ＣｌｏｇＤ（分布係数の計算値）は、親油性の最も一般的に使用される測定パラメーターであり、オンラインプラットフォーム「chemicalize」（ChemAxon社製）を用いて求めた。測定結果を表１に示す。表中のＩＣ_５０は、平均±S.D.である。

デカヒドロナフタレン基に結合している－ＯＲ^１０１及び－ＯＲ^１０２が、水素である化合物ＳＬ－１８８や嵩の小さいｔｅｒｔ－ブチル基である化合物ＳＬ－１８９は、in vitroのホスファターゼ活性アッセイの結果得られたＩＣ_５０が大きく、ＰＰＭ１Ｄ阻害活性が非常に小さかった。また、細胞生存アッセイで得られたＩＣ_５０も大きく、細胞増殖に対する阻害活性も比較的小さかった。これに対して、第３級カルボン酸を有する化合物のうち、－ＯＲ^１０１及び－ＯＲ^１０２が疎水性の嵩高い基である化合物ＳＬ－１７６、ＳＬ－１９４、ＳＬ－１９５、及びＳＬ－１９６は、ＰＰＭ１Ｄ阻害活性が高く、細胞増殖に対する阻害活性が高かった。特に、－ＯＲ^１０１及び－ＯＲ^１０２の両方がトリアルキルシリル基である化合物ＳＬ－１７６及びＳＬ－１９６は、in vitro においてＰＰＭ１Ｄ特異的に脱リン酸化活性を抑制し、癌由来の細胞の細胞生存率を大きく低下させた。これらの結果から、第３級カルボン酸を有し、かつ立体的に嵩高い疎水性分子であることが、ＰＰＭ１Ｄ阻害活性に重要であることがわかった。

［実施例２］
ＳＬ－１７６等の第３級カルボン酸をアミノアルキルエステル化した化合物について、in vitroにおけるホスファターゼ活性と細胞生存性を調べた（ｎ＝９）。測定結果を表２、図１及び図２に示す。表中のＩＣ_５０は、平均±S.D.であり、「構造」欄には、ＳＬ－１９６中の第一級カルボン酸に相当する部分の構造を示す。

図１及び表１に示すように、第３級カルボキシ基がアミノアルキルエステル化又はアミノアルキル化した化合物ＳＬ－１７７、ＳＬ－１８０及びＳＬ－１８３は、in vitroのホスファターゼ活性はほとんどなかった。当該結果から、ＰＰＭ１Ｄ阻害剤ＳＬ－１７６の第３級カルボキシ基をアミノアルキルエステル化した化合物は、それ自身のＰＰＭ１Ｄ阻害活性は失われており、このアミノアルキルエステル化はＰＰＭ１Ｄ阻害活性をマスクすることが明らかとなった。

一方で、化合物ＳＬ－１７７、ＳＬ－１８０及びＳＬ－１８３の細胞生存アッセイで得られたＩＣ_５０は、化合物ＳＬ－１７６と同様に小さく、細胞増殖抑制能を有することが示された。特に、アミノアルキルエステル化した化合物ＳＬ－１８０及びＳＬ－１８３は、化合物ＳＬ－１７６よりも細胞増殖に対する阻害活性は高かった。また、図２に示すように、化合物ＳＬ－１８０及びＳＬ－１８３は、用量反応曲線の閾値の濃度範囲が狭く、シャープな細胞増殖抑制効果を示した。当該結果から、これらの化合物は、狭い濃度範囲で効果的に作用可能な癌細胞増殖抑制能をもつＰＰＭ１Ｄ阻害剤であることがわかった。

ＭＣＦ７細胞を、０．１μＭの５－ＣＦＤＡ（５－カルボキシフルオレセインジアセテート）又は５－ＡＢＦＤＡ（５－アミノブチルフルオレセインジアセテート）で処理し、処理後２、５、又は１５分後に、蛍光顕微鏡を用いて蛍光イメージングを観察した。結果を図３に示す。この結果、５－ＡＢＦＤＡは処理直後に細胞に取り込まれ、５－ＡＢＦＤＡは５－ＣＦＤＡよりも非常に速い取り込みを示した。当該結果から、アミノアルキルエステル基を持つ化合物は、カルボキシ基を持つ化合物よりも、細胞への取り込み効率が高いことが示された。アミノアルキルエステル化した化合物ＳＬ－１８０及びＳＬ－１８３が化合物ＳＬ－１７６よりも高い細胞増殖抑制能を示したのは、アミノアルキルエステル基部分によって細胞透過性が高くなり、細胞への取り込み効率が向上したためと推察された。

化合物ＳＬ－１８３の細胞内代謝物を調べた。ＭＣＦ７細胞を化合物ＳＬ－１８３で６時間処理し、得られた細胞懸濁液をアセトンに加えて抽出物を得た。得らえた抽出物を、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳで直接分析した。比較対象として、化合物ＳＬ－１７６についても同様にして細胞内代謝物を調べた。図４に、化合物ＳＬ－１７６で処理した細胞の抽出物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳクロマトグラムを示し、図５に、化合物ＳＬ－１８３で処理した細胞の抽出物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳクロマトグラムを示す。

図４に示すように、化合物ＳＬ－１７６処理細胞の抽出物では、リテンション時間が１９．６６分であり、ＭＳスペクトルは、ｍ／ｚ ４５５の質量を示した。ＭＳ／ＭＳスペクトルでは、２つのイオン、ｍ／ｚ １３１．０８及び２０９．１１が検出された。一方で、図５に示すように、化合物ＳＬ－１８３処理細胞の抽出物では、リテンション時間が１８．９２分であり、ＭＳスペクトルは、ｍ／ｚ ４５５の質量を示した。ＭＳ／ＭＳスペクトルでは、2つのイオン、ｍ／ｚ １３１．０８及び２０９．１１が検出された。つまり、化合物ＳＬ－１８３処理細胞の抽出物のＭＳスペクトル及びＭＳ／ＭＳスペクトルでは、化合物ＳＬ－１７６処理細胞の抽出物と同じＭＳフラグメントが観察された。当該結果から、細胞内に取り込まれた化合物ＳＬ－１８３は、化合物ＳＬ－１７６に変換されて高いＰＰＭ１Ｄ阻害機能を発揮することがわかった。すなわち、化合物ＳＬ－１７６等の第３級カルボン酸をもつＰＰＭ１Ｄ阻害剤を、そのカルボキシ基をアミノアルキルエステル化した化合物（１）は、細胞内に取り込まれる前にはＰＰＭ１Ｄ阻害活性を示さず、標的細胞内に取り込まれると高いＰＰＭ１Ｄ阻害活性を示すプロドラッグとして好適であることが示された。

さらに、化合物ＳＬ－１８３で処理したＨ１２９９細胞及びＨ１２９９（ＰＭＤ－９）細胞の細胞生存性を調べた。比較対象として、化合物ＳＬ－１７６又は抗癌剤エトポシドを用いて同様に細胞生存性を調べた。Ｈ１２９９細胞及びＨ１２９９（ＰＭＤ－９）細胞を、それぞれ、１０ｍｇ／ｍＬのエトポシド、１０μＭの化合物ＳＬ－１７６、又は１０μＭの化合物ＳＬ－１８３で処理し、処理から３日後の細胞の生存率を調べた。結果を図６に示す（ｎ＝３、平均値±標準偏差）。図中、「＊＊＊」は、ｐ＜０．００１（ｔ検定）を示す。

図６に示すように、抗癌剤エトポシドは、Ｈ１２９９（ＰＭＤ－９）細胞よりもＨ１２９９細胞の生存率を有意に抑制した。これに対して、化合物ＳＬ－１７６とＳＬ－１８３はいずれも、Ｈ１２９９細胞よりもＨ１２９９（ＰＭＤ－９）細胞に対して、強力な細胞増殖阻害を示した。この細胞増殖阻害能は、化合物ＳＬ－１８３のほうが化合物ＳＬ－１７６よりも強力であった。当該結果は、化合物ＳＬ－１８３が、細胞レベルでＰＰＭ１Ｄ特異性を発揮することを示す。

Claims (4)

1. 下記式（１ａ）で表される化合物からなる、細胞内に取り込まれるとＰＰＭ１Ｄ阻害活性を示す、プロドラッグ。
   

   

   ［式中、Ｒ ^１０１ は（Ｃ _２ Ｈ _５ ） _３ Ｓｉ－基であり、Ｒ ^１０２ はｔＢｕ（ＣＨ _３ ） _２ Ｓｉ－基であり、ｐは１～６の整数である。］
2. 細胞内のＰＰＭ１Ｄ活性を阻害するために用いられる、請求項１に記載のプロドラッグ。
3. 請求項１又は２に記載のプロドラッグを有効成分とする、医薬用組成物。
4. 癌治療に用いられる、請求項３に記載の医薬用組成物。

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