JP7545690B2 - ペプチド及びその製造方法 - Google Patents

Description

本発明は、フルオロアルキル基が側鎖に導入されたアミノ酸残基を含むペプチド及びその製造方法に関する。
本願は、２０１９年７月２日に日本に出願された特願２０１９－１２４０１６号、及び２０１９年１１月２０日に日本に出願された特願２０１９－２０９９０８号に基づき優先権を主張し、その内容をここに援用する。

抗体医薬、ペプチド医薬、核酸医薬等は、標的分子に対する特異性が高く、副作用が少ないという優れた点がある。しかし、いずれも細胞内に存在する標的分子に到達させることが困難であるという問題がある。当該問題を解決するために、様々な手法が検討されている。なかでも、細胞膜透過性ペプチド（Cell Penetrating Peptides:ＣＰＰ）が有望視されている。ＣＰＰとしては、ＨＩＶウイルスのＴＡＴタンパク質に由来するペプチド（特許文献１）や、ポリＡｒｇ配列のペプチド（特許文献２）が代表的なものとして挙げられる。これを薬効ペプチドと結合させて薬効ペプチドを細胞内に輸送できる（たとえば、特許文献３、非特許文献１）。

一方、含フッ素アミノ酸は特異な生理活性を示すことが報告され、注目を集めている。例えば、３，３，３－トリフルオロアラニン及びその誘導体は、ピリドキサール酵素の自殺型阻害剤(suicide inhibitor)として作用することが報告されている（非特許文献２）。また、グラム陰性菌Salmonella typhimurium及びグラム陽性菌Bacillus stearothermophilusのアラニンラセマーゼが、３，３，３－トリフルオロアラニンで不活性化されることが報告されている（非特許文献３）。含フッ素アミノ酸及びそれを含有するペプチドは、生理活性物質として、医薬分野での利用が期待される。

ポリフルオロ構造を有する化合物は、生体内で安定かつ毒性が低く、細胞内への取り込みとエンドソームからの脱出に優れていることが知られている（非特許文献４）。この性質を利用して、構成アミノ酸として側鎖のアミノ基をペルフルオロアシル化したリシンを用いたペプチドデンドリマーを遺伝子のデリバリーに用いることができることが報告されている（非特許文献５）。しかし、デンドリマーであるため、ＣＰＰのように薬効活性ペプチドや核酸や抗体医薬となるタンパク質と結合させたハイブリッドを形成することができない。

米国特許第６，３１６，００３号明細書 米国特許第６，３０６，９９３号明細書 国際公開第２００８／０８９４９１号

Miyaji et. al., Drug Metabolism and Disposition, 2011, vol.39, p.1946-1953. Sakai et al., Tetrahedron, 1996, vol.52(1), p.233-244. Faraci and Walsh, Biochemistry, 1989, vol.28(2), p.431-437. Zhang et al., MRS Communications, 2018, vol.8, p.303-313. Cai et al., ACS Applied Materials and Interfaces, 2016, vol.8, p.5821-5832.

特許文献１等に記載されているＣＰＰは、細胞内への輸送効率や、生体内でのペプチダーゼによる分解など様々な問題がある。
本発明は、フルオロアルキル基が側鎖に導入されたアミノ酸残基を含むペプチド及びその製造方法を提供することを目的とする。

本発明者らは、フルオロアルキル基が側鎖に導入されたアミノ酸残基を含むペプチドを製造したところ、当該ペプチドが細胞膜透過性に優れていることを見出し、本発明を完成させた。

すなわち、本発明は以下の通りである。
［１］ 下記一般式（６－２）又は（６－４）

（式中、アスタリスクは、アスタリスクを付した不斉炭素原子の絶対配置がＳ又はＲであることを表し、
Ｒｆは、少なくとも２個のフッ素原子で置換された、フッ素原子以外のハロゲン原子でさらに置換されていてもよいＣ_１－３０アルキル基（当該Ｃ_１－３０アルキル基がＣ_２－３０アルキル基である場合には、炭素原子間に１～５個のエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい）であり、
Ｒ^２は、アミノ基の保護基である）
で表される化合物を、カルボキシ基が保護された含フッ素アミノ酸、カルボキシ基が保護されたアミノ酸、Ｃ末端が保護された含フッ素ペプチド、又はＣ末端が保護されたペプチドと縮合させる、フルオロアルキル基含有ペプチドの製造方法。

［２］ 下記一般式（６－１）又は（６－３）

（式中、アスタリスクは、アスタリスクを付した不斉炭素原子の絶対配置がＳ又はＲであることを表し、
Ｒｆは、少なくとも２個のフッ素原子で置換された、フッ素原子以外のハロゲン原子でさらに置換されていてもよいＣ_１－３０アルキル基（当該Ｃ_１－３０アルキル基がＣ_２－３０アルキル基である場合には、炭素原子間に１～５個のエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい）であり、
Ｒ^１は、下記一般式（ｐ－１）

（式中、Ｒ^３は、置換されていてもよいＣ_６－１４アリール基であり、Ｒ^４及びＲ^５は、それぞれ独立して、水素原子又は置換されていてもよいＣ_６－１４アリール基であり、黒丸は結合手を意味する）
で表される基、２－（９，１０－ジオキソ）アントリルメチル基、ベンジルオキシメチル基、及びフェナシル基から選ばれる保護基である）
で表される化合物を、アミノ基が保護された含フッ素アミノ酸、アミノ基が保護されたアミノ酸、Ｎ末端が保護された含フッ素ペプチド、又はＮ末端が保護されたペプチドと縮合させる、フルオロアルキル基含有ペプチドの製造方法。

［３］ 下記一般式（７）又は（７－１）

（式中、アスタリスクは、アスタリスクを付した不斉炭素原子の絶対配置がＳ又はＲであることを表し、
Ｒｆは、少なくとも２個のフッ素原子で置換された、フッ素原子以外のハロゲン原子でさらに置換されていてもよいＣ_１－３０アルキル基（当該Ｃ_１－３０アルキル基がＣ_２－３０アルキル基である場合には、炭素原子間に１～５個のエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい）である）
で表される化合物を、
アミノ基を保護基で保護した後、カルボキシ基が保護された含フッ素アミノ酸、カルボキシ基が保護されたアミノ酸、Ｃ末端が保護された含フッ素ペプチド、又はＣ末端が保護されたペプチドと縮合させる、又は、
カルボキシ基を保護基で保護した後、アミノ基が保護された含フッ素アミノ酸、アミノ基が保護されたアミノ酸、Ｎ末端が保護された含フッ素ペプチド、又はＮ末端が保護されたペプチドと縮合させる、
フルオロアルキル基含有ペプチドの製造方法。
［４］ さらに、製造されたフルオロアルキル基含有ペプチドのアミノ基又はカルボキシ基の保護基を脱保護する、前記［１］～［３］のいずれかのフルオロアルキル基含有ペプチドの製造方法。

［５］ ２個以上のアミノ酸がペプチド結合したペプチドであって、
当該ペプチドを構成するアミノ酸残基の少なくとも１個が、側鎖に、少なくとも２個のフッ素原子で置換されたＣ_１－３０アルキル基（当該Ｃ_１－３０アルキル基がＣ_２－３０アルキル基である場合には、炭素原子間に１～５個のエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい）を有している、ペプチド。
［６］ 前記少なくとも２個のフッ素原子で置換されたＣ_１－３０アルキル基が、フッ素原子以外のハロゲン原子でさらに置換されていてもよい、前記［５］のペプチド。

［７］ 前記少なくとも２個のフッ素原子で置換されたＣ_１－３０アルキル基を有する側鎖が、下記一般式（ｆ－１）又は（ｆ－２）

（式中、Ｒｆ^Ｐは、少なくとも２個以上のフッ素原子を含む完全ハロゲン化Ｃ_１－１０アルキル基（当該Ｃ_１－１０アルキル基は炭素原子が２以上の場合に、炭素原子間にエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい）を表し、ｎ１は、０～１０の整数であり、ｎ２は、０～９の整数であり、黒丸は結合手を意味する）
で表される基である、前記［５］又は［６］のペプチド。
［８］ Ｃ末端又はＮ末端が保護基で保護されていてもよい、前記［５］～［７］のいずれかのペプチド。

［９］ 下記一般式（１０１）又は（１０２）

（式中、Ｒｆ^Ｐは、少なくとも２個以上のフッ素原子を含む完全ハロゲン化Ｃ_１－１０アルキル基（当該Ｃ_１－１０アルキル基は炭素原子が２以上の場合に、炭素原子間にエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい）を表し、ｎ１は、０～１０の整数であり、ｎ２は、０～９の整数であり、Ｒ^１１及びＲ^１２は、それぞれ独立して、Ｃ_１－６アルキル基又はベンジル基であり、Ｘは、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基又はｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基であり、Ｚは、Ｃ_１－６アルコキシ基である）
で表されるトリペプチドである、前記［５］～［８］のいずれかのペプチド。
［１０］ 細胞膜透過性である、前記［５］～［９］のいずれかのペプチド。

本発明に係る製造方法によれば、フルオロアルキル基が側鎖に導入されたペプチドを製造できる。
また、本発明に係るペプチドは、フルオロアルキル基が側鎖に導入されているため、細胞膜透過性に優れている。このため、当該ペプチドは、生理活性物質として、医薬分野での利用が期待される。

試験例１において、ペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）、ペプチド蛍光コンジュゲート３（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ｎｌｅ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）又はペプチド蛍光コンジュゲート４（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）で処理したＨｅＬａ細胞のフローサイトメトリーの結果を示した図である。 試験例２において、ペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）、ペプチド蛍光コンジュゲート２（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）、ペプチド蛍光コンジュゲート３（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ｎｌｅ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）又はペプチド蛍光コンジュゲート４（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）で処理したＨｅＬａ細胞のフローサイトメトリーの結果を示した図である。

本発明及び本願明細書において、「含フッ素アミノ酸」とは、側鎖に少なくとも２個のフッ素原子を含有するアミノ酸を意味する。「含フッ素ペプチド」とは、側鎖に少なくとも２個のフッ素原子を含有するアミノ酸を含有するペプチドを意味する。

本発明及び本願明細書において、「Ｃ_{ｐ１－ｐ２}」（ｐ１及びｐ２は、ｐ１＜ｐ２を満たす正の整数である）は、炭素数がｐ１～ｐ２の基であることを意味する。

本発明及び本願明細書において、「Ｃ_１－１０アルキル基」は、炭素数１～１０のアルキル基であり、直鎖であっても分岐鎖であってもよい。「Ｃ_２－１０アルキル基」は、炭素数２～１０のアルキル基であり、直鎖であっても分岐鎖であってもよい。Ｃ_１－１０アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基等が挙げられる。

本発明及び本願明細書において、「Ｃ_１－３０アルキル基」は、炭素数１～３０のアルキル基であり、直鎖であっても分岐鎖であってもよい。「Ｃ_２－３０アルキル基」は、炭素数２～３０のアルキル基であり、直鎖であっても分岐鎖であってもよい。Ｃ_１－３０アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、ヘキシル基、ヘプチル基、オクチル基、ノニル基、デシル基、ウンデシル基、ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ペンタデシル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基、オクタデシル基、ノナデシル基、エイコシル基、ヘンエイコシル基、ドコシル基、トリコシル基、テトラコシル基、ペンタコシル基、ヘキサコシル基、ヘプタコシル基、オクタコシル基、ノナコシル基、トリアコンチル基等が挙げられる。

本発明及び本願明細書において、「Ｃ_１－６アルキル基」は、炭素数１～６のアルキル基であり、直鎖であっても分岐鎖であってもよい。Ｃ_１－６アルキル基の例としては、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ－ブチル基、ｔｅｒｔ－ブチル基、ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｔｅｒｔ－ペンチル基、ヘキシル基等が挙げられる。

本発明及び本願明細書において、「Ｃ_６－１４アリール基」は、炭素数６～１４の芳香族炭化水素基であり、Ｃ_６－１２アリール基が特に好ましい。Ｃ_６－１４アリール基の例としては、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、９－フルオレニル基等が挙げられ、フェニル基が特に好ましい。

本発明及び本願明細書において、「置換されていてもよいＣ_６－１４アリール基」は、Ｃ_６－１４アリール基の炭素原子に結合している水素原子の１又は複数個、好ましくは１～３個が、他の官能基に置換されている基である。２個以上の置換基を有する場合、置換基同士は互いに同種であってもよく、異種であってよい。当該置換基としては、ニトロ基、ハロゲン原子（フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子）、Ｃ_１－６アルキル基、Ｃ_１－６アルコキシ基、及びメチレンジオキシ基（－Ｏ－ＣＨ_２－Ｏ－）等が挙げられる。「置換されていてもよいＣ_６－１４アリール基」の例としては、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、４－ニトロフェニル基、４－メトキシフェニル基、２，４－ジメトキシフェニル基、３，４－ジメトキシフェニル基、４－メチルフェニル基、２，６－ジメチルフェニル基、３－クロロフェニル基、１，３－ベンゾジオキソール－５－イル基等が挙げられる。

本発明及び本願明細書において、「Ｃ_６－１４アリール－Ｃ_１－６アルキル基」は、Ｃ_１－６アルキル基の炭素原子に結合している１個の水素原子がＣ_６－１４アリール基に置換された基である。Ｃ_６－１４アリール－Ｃ_１－６アルキル基におけるＣ_６－１４アリール基としては、フェニル基、ナフチル基、アントリル基、９－フルオレニル基等を例示でき、フェニル基又は９－フルオレニル基が特に好ましい。Ｃ_６－１４アリール－Ｃ_１－６アルキル基におけるＣ_１－６アルキル基としては、Ｃ_１－４アルキル基が好ましい。Ｃ_６－１４アリール－Ｃ_１－６アルキル基の例としては、ベンジル基、ジフェニルメチル基、トリフェニルメチル基、２－フェニルエチル基、９－アントリルメチル基、９－フルオレニルメチル基等が挙げられる。

本発明及び本願明細書において、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子をいう。「フッ素原子以外のハロゲン原子」とは、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子をいう。「フッ素原子以外のハロゲン原子」の例としては、塩素原子又は臭素原子が好ましく、塩素原子が特に好ましい。

本発明及び本願明細書において、「Ｃ_１－６アルコキシ基」とは、炭素数１～６のＣ_１－６アルキル基の結合末端に酸素原子が結合した基をいう。Ｃ_１－６アルコキシ基は直鎖であっても分岐鎖であってもよい。Ｃ_１－６アルコキシ基の例としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基、ブトキシ基、ｔｅｒｔ－ブトキシ基、ペンチルオキシ基、ヘキシルオキシ基等が挙げられる。

本発明及び本願明細書において、「エーテル結合性の酸素原子」とは、炭素原子間を連結する酸素原子であり、酸素原子同士が直列に連結された酸素原子は含まれない。炭素数Ｎｃ（Ｎｃは２以上の整数）のアルキル基が有し得るエーテル結合性の酸素原子は、最大Ｎｃ－１個である。

また、以降において、「化合物ｎ」は式（ｎ）で表される化合物を意味する。

＜フルオロアルキル基含有アミノ酸の合成反応＞
フルオロアルキル基が側鎖に導入されたアミノ酸であるフルオロアルキル基含有アミノ酸は、例えば、下記の合成反応により製造できる。

Ｒｆは、Ｃ_１－３０アルキル基のうち、炭素原子に結合している水素原子の少なくとも２個がフッ素原子で置換された基であり、炭素原子に結合している１個以上の水素原子が、フッ素原子以外のハロゲン原子でさらに置換されていてもよい。ここで、ＲｆのＣ_１－３０アルキル基としては、Ｃ_１－２０アルキル基が好ましく、Ｃ_１－１０アルキル基がより好ましく、Ｃ_２－１０アルキル基がさらに好ましく、Ｃ_２－８アルキル基がよりさらに好ましい。当該Ｃ_１－３０アルキル基がＣ_２－３０アルキル基である場合には、炭素原子間に１～５個のエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい。Ｒｆにおいて、フッ素原子に置換されている水素原子の数は、２個以上であれば特に限定されるものではなく、例えば、３個以上が好ましく、６個以上がより好ましく、７個以上がさらに好ましい。

Ｒｆの例としては、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ペルフルオロペンチル基、ペルフルオロヘキシル基、ペルフルオロヘプチル基、ペルフルオロオクチル基、ペルフルオロノニル基、ペルフルオロデシル基、ジフルオロメチル基、１，１－ジフルオロエチル基、２，２－ジフルオロエチル基、１，１，２，２－テトラフルオロエチル基、１，１，２，２，３，３－ヘキサフルオロプロピル基、１，１，２，３，３，３－ヘキサフルオロプロピル基、１，１，２，２，３，３－ヘキサフルオロヘキシル基、１，１，２，２，３，３－ヘキサフルオロオクチル基、１，１，２，２，３，３－ヘキサフルオロデシル基、１，１，２，２，３，３－ヘキサフルオロオクタデシル基、１，１，２，２，３，３－ヘキサフルオロヘキサコシル基等が挙げられる。

Ｒｆが炭素数２の基である場合、化合物２におけるＲｆとしては、１，１，１－トリフルオロエチル基（ＣＦ_３－ＣＨ_２－）よりも、ペンタフルオロエチル基のように、炭素原子に結合している水素原子の少なくとも４個以上がフッ素原子に置換されている基が好ましい。また、Ｒｆが炭素数３の基である場合、化合物２におけるＲｆとしては、直鎖状の基が好ましく、分岐鎖状の基の場合には、１，１，１，３，３，３－ヘキサフルオロプロパン－２－イル基（（ＣＦ_３）_２－ＣＨ－）のようにトリフルオロメチル基を２個有する基よりも、トリフルオロメチル基は０又は１個である基の方が好ましい。Ｒｆが炭素数４の基である場合、化合物２におけるＲｆとしては、直鎖状の基が好ましく、分岐鎖状の基の場合には、アルキレン基部分を構成する炭素原子に結合する水素原子がフッ素原子に置換された基、又は完全フッ素化された基であることが好ましい。

Ｒｆとしては、具体的には、後記の一般式（ｆ－１）又は（ｆ－２）で表される基が好ましい。

Ｒ^１は、カルボキシ基の保護基であり、具体的には、下記一般式（ｐ－１）で表される基、２－（９，１０－ジオキソ）アントリルメチル基、ベンジルオキシメチル基、及びフェナシル基から選ばれる保護基である。一般式（ｐ－１）中、Ｒ^３は、置換されていてもよいＣ_６－１４アリール基であり、Ｒ^４及びＲ^５は、それぞれ独立して、水素原子又は置換されていてもよいＣ_６－１４アリール基である。また、黒丸は結合手を意味する。

Ｒ^１で表されるカルボキシ基の保護基としては、ベンジル基、ジフェニルメチル基、トリフェニルメチル基、４－ニトロベンジル基、４－メトキシベンジル基、２，４－ジメトキシベンジル基、３，４－ジメトキシベンジル基、４－メチルベンジル基、２，６－ジメチルベンジル基、３－クロロベンジル基、９－アントリルメチル基、ピペロニル基、２－（９，１０－ジオキソ）アントリルメチル基、ベンジルオキシメチル基、フェナシル基等が挙げられる。穏やかな条件で脱保護できる点で、Ｒ^１は、好ましくはベンジル基、トリフェニルメチル基であり、より好ましくはベンジル基である。

当該製造方法は、カルボキシ基の保護基Ｒ^１として、ベンジル基、トリフェニルメチル基等のアラルキル保護基を使用することにより、穏やかな条件でＲ^１を脱保護でき、アミノ酸の官能基を分解することなく、含フッ素アミノ酸の合成や含フッ素ペプチドの合成を行うことができる点で有利である。

Ｒ^６は、シリル保護基である。Ｒ^６としては、トリメチルシリル（ＴＭＳ）基、トリエチルシリル（ＴＥＳ）基、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）基、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）基、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）基等が挙げられる。好ましくは、Ｒ^６は、トリメチルシリル（ＴＭＳ）基である。

Ｒ^２は、アミノ基の保護基である。Ｒ^２としては、ペプチド合成で使用されるアミノ基の保護基であれば、特に限定されない。アミノ基の保護基としては、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基、ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）基、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）基、２，２，２－トリクロロエトキシカルボニル（Ｔｒｏｃ）基等のカルバメート系保護基が挙げられる。穏やかな条件で脱保護できる点で、Ｒ^２は、好ましくは、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）基又は９－フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基である。

［工程１］
化合物２と化合物８を、金属フッ化物の存在下で反応させることにより、化合物２－２を得ることができる。一般式（８）であるＲｆ－Ｒ^６で表される化合物８は、入手容易なＲｆ－Ｉ（フルオロアルキルヨージド）から１工程で合成できるため、導入できるＲｆ基の範囲が広い。

金属フッ化物としては、フッ化セシウム、フッ化リチウム、フッ化ナトリウム等のアルカリ金属フッ化物を使用することができ、フッ化セシウムが好ましい。
反応は、反応に不活性な溶媒中で行うことができる。溶媒としては、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、アセトニトリル、ベンゼン、トルエン、ジエチルエーテル、１，４－ジオキサン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド等の不活性溶媒が挙げられ、テトラヒドロフランが好ましい。

化合物８の量は、１モルの化合物２に対して、０．５～１０モルが好ましい。金属フッ化物の量は、１モルの化合物２に対して、０．０１～２モルが好ましい。工程１の反応は、１０℃以下の温度で行うことが好ましい。１０℃以下の温度で反応を行うことにより、高収率で化合物２－２を製造できる。反応温度は、好ましくは－７８℃～１０℃、より好ましくは－５０℃～－１０℃、特に好ましくは－４０℃～－２０℃である。反応時間は、好ましくは１～４８時間、より好ましくは６～３６時間である。

化合物２は、シュウ酸を公知の方法でジエステル化することにより製造することができ、又は市販品を使用してもよい。

［工程１－１］
工程１の反応において、化合物２－１（ヒドロキシ基の一方がＲ^６で保護された化合物）、又は化合物２－２と化合物２－１の混合物が得られることがある。その場合、化合物２－１のシリル保護基Ｒ^６を脱保護することにより、化合物２－２を得ることができる。
工程１－１の反応は、工程１と同様の方法で行うことができる。

［工程１－２］
化合物２－１のシリル保護基Ｒ^６を脱保護することにより、化合物２－２を得ることができる。
脱保護は、フッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）、フッ化セシウム、フッ化水素酸塩等のフッ化物塩、又は塩酸、酢酸、パラトルエンスルホン酸等の酸の存在下で行うことができる。

反応は、反応に不活性な溶媒中で行うことができる。溶媒としては、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、アセトニトリル、ベンゼン、トルエン、ジエチルエーテル、１，４－ジオキサン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド等の不活性溶媒が挙げられ、テトラヒドロフランが好ましい。酢酸を添加して行うことが好ましい。

フッ化物塩の量は、１モルの化合物２－１（化合物２－２と化合物２－１の混合物の場合は、混合物１モル）に対して、０．１～１０モルが好ましい。酸の量は、１モルの化合物２－１（化合物２－２と化合物２－１の混合物の場合は、混合物１モル）に対して、０．１～１０モルが好ましい。工程１－２の反応は、５０℃以下の温度で行うことが好ましい。５０℃以下の温度で反応を行うことにより、高収率で化合物２－２を製造できる。反応温度は、好ましくは－８０℃～５０℃、より好ましくは－４０℃～３０℃、特に好ましくは－２０℃～３０℃である。反応時間は、好ましくは１～４８時間、より好ましくは６～３６時間である。

［工程２］
化合物２－２を脱水反応に付すことにより、化合物３を得ることができる。
脱水反応は、五酸化二リン、濃硫酸、塩化カルシウム、硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、硫酸カルシウム、モレキュラーシーブ（合成ゼオライト）、シリカゲル等の脱水剤の存在下で、行うことができる。脱水剤としては、五酸化二リンが好ましい。脱水剤の量は、化合物２－２の１００重量％に対して、１０～１００重量％が好ましい。脱水反応は、化合物２－２を、脱水剤の存在下で蒸留することにより行うことができる。蒸留は、３０℃～１５０℃の温度で行うことが好ましい。蒸留温度が高すぎると、化合物３が分解する可能性がある。蒸留温度が低すぎると、化合物３を凝縮できず、回収率が低下する可能性がある。蒸留は、減圧、常圧、加圧のいずれの圧力でも実施でき、化合物３の沸点が上記の好ましい温度の範囲に入るように適宜決定できる。圧力は、好ましくは０．１ｍｍＨｇから５気圧（３８００ｍｍＨｇ）である。

［工程３］
化合物３を、化合物９又は化合物１０と反応させることにより、化合物４を得ることができる。

一般式（９）中、Ｒ^２は、前記の通り、アミノ基の保護基である。Ｒ^７、Ｒ^８及びＲ^９は、それぞれ独立して、Ｃ_６－１４アリール基である。Ｒ^７、Ｒ^８又はＲ^９で表されるＣ_６－１４アリール基としては、フェニル基、ナフチル基等が挙げられる。好ましくは、Ｒ^７、Ｒ^８及びＲ^９は、それぞれフェニル基である。

反応は、反応に不活性な溶媒中で行うことができる。溶媒としては、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、アセトニトリル、ベンゼン、トルエン、１，４－ジオキサン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド等の不活性溶媒が挙げられ、ジエチルエーテルが好ましい。

化合物９又は化合物１０の量は、１モルの化合物３に対して、０．５～１０モルが好ましい。反応温度は、好ましくは－７８℃～１００℃、より好ましくは０℃～４０℃である。反応時間は、好ましくは１分間～２４時間、より好ましくは１０分間～４時間である。

好適な態様において、アミノ基の保護基Ｒ^２として、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基、９－フルオレニルメチルオキシカルボニル基等のカルバメート系保護基を使用することにより、穏やかな条件でＲ^２を脱保護でき、化合物の分解やラセミ化を抑制しながら含フッ素アミノ酸の合成を行うことができる。

［工程４］
化合物４を還元反応に付すことにより、化合物５を得ることができる。
還元反応は、還元剤を使用する方法、又は金属触媒の存在下で還元する方法で行うことができる。

（１）還元剤を使用する方法
還元剤としては、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素亜鉛、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化トリエチルホウ素リチウム、水素化トリ(ｓｅｃ－ブチル)ホウ素リチウム、水素化トリ(ｓｅｃ－ブチル)ホウ素カリウム、水素化ホウ素リチウム、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム等の水素化ホウ素試薬を使用できる。還元剤としては、水素化ホウ素ナトリウム又は水素化ホウ素亜鉛が好ましく、水素化ホウ素ナトリウムがより好ましい。還元剤の量は、１モルの化合物４に対して、０．５～１０モルが好ましい。

反応は、反応に不活性な溶媒中で行うことができる。溶媒としては、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ハイドロクロロフルオロカーボン（ＨＣＦＣ）（例、アサヒクリン（登録商標）ＡＫ－２２５（３，３－ジクロロ－１，１，１，２，２－ペンタフルオロプロパンと１，３－ジクロロ－１，１，２，２，３－ペンタフルオロプロパンの混合物、ＡＧＣ株式会社））、ジクロロメタン、アセトニトリル、１，４－ジオキサン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド等の不活性溶媒が挙げられ、ジエチルエーテルが好ましい。
反応温度は、好ましくは－７８℃～１００℃、より好ましくは－１０℃～４０℃である。反応時間は、好ましくは１～４８時間、より好ましくは６～３６時間である。

（２）金属触媒の存在下で還元する方法
金属触媒としては、パラジウム触媒（例、パラジウム炭素、水酸化パラジウム、パールマン触媒、リンドラー触媒、シリカゲル担持パラジウム触媒、アルミナ担持パラジウム触媒、酸化パラジウム）、ニッケル触媒（例、ラネーニッケル）、白金触媒（例、白金炭素、酸化白金、シリカゲル担持白金触媒、アルミナ担持白金触媒）、ロジウム触媒（例、ロジウム炭素、アルミナ担持ロジウム触媒、酸化ロジウム）、ルテニウム触媒（例、ルテニウム炭素、アルミナ担持ルテニウム触媒、酸化ルテニウム）、コバルト触媒（例、ラネーコバルト）等が挙げられ、パラジウム触媒が好ましい。金属触媒の量は、１モルの化合物４に対して、０．０００１～０．１モルが好ましく、０．０００５～０．０２モルがより好ましい。

反応は、反応に不活性な溶媒中で行うことができる。溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、ジクロロメタン、アセトニトリル、１，４－ジオキサン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド等の不活性溶媒が挙げられる。

還元反応は、水素ガスの存在下で行われる。還元反応は常圧で行っても、加圧下で行ってもよい。水素ガスの圧力は、好ましくは０．５気圧～１０気圧である。反応温度は、好ましくは０℃～１００℃、より好ましくは１０℃～５０℃である。反応時間は、好ましくは１～４８時間、より好ましくは６～３６時間である。

［工程５－１］
化合物５の保護基Ｒ^２を脱保護することにより、化合物６－１を得ることができる。
脱保護は、保護基Ｒ^２の種類に応じて行うことができる。
Ｒ^２がＢｏｃ基の場合、酸性条件下で脱保護できる。使用する酸としては、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、塩酸等が挙げられる。酸の量は、１モルの化合物５に対して、１～１０００モルが好ましい。

反応は、反応に不活性な溶媒中で行うことができる。溶媒としては、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、アセトニトリル、ベンゼン、トルエン、１，４－ジオキサン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド等の不活性溶媒が挙げられ、ジクロロメタン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドが好ましい。酸を溶媒として使用することもできる。溶媒としては、塩酸、酢酸、トリフルオロ酢酸等の無機酸、有機酸が挙げられ、トリフルオロ酢酸が好ましい。反応温度は、好ましくは－７８℃～５０℃、より好ましくは０℃～４０℃である。反応時間は、好ましくは１～４８時間、より好ましくは６～３６時間である。

Ｒ^２がＦｍｏｃ基の場合、塩基性条件下で脱保護できる。使用する塩基としては、ピペリジン、モルホリン、ピロリジン等の二級アミンが挙げられる。塩基の量は、１モルの化合物５に対して、１～１００モルが好ましい。
反応は、反応に不活性な溶媒中で行うことができる。溶媒としては、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、アセトニトリル、ベンゼン、トルエン、１，４－ジオキサン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド等の不活性溶媒が挙げられる。反応温度は、好ましくは－２０℃～８０℃、より好ましくは０℃～４０℃である。反応時間は、好ましくは１分間～２４時間、より好ましくは５分間～２時間である。

［工程６－１］
化合物６－１の保護基Ｒ^１を脱保護することにより、化合物７を得ることができる。
脱保護は、保護基Ｒ^１の種類に応じて行うことができる。Ｒ^１がベンジル基、トリフェニルメチル基、９－アントリルメチル基、ピペロニル基、２－（９，１０－ジオキソ）アントリルメチル基、ベンジルオキシメチル基、フェナシル基の場合、金属触媒の存在下で還元する方法により、脱保護できる。還元反応は、工程４の金属触媒の存在下で還元する方法と同様の方法で行うことができる。

［工程５－２］
化合物５の保護基Ｒ^１を脱保護することにより、化合物６－２を得ることができる。脱保護は、工程６－１と同様の方法で行うことができる。

［工程６－２］
化合物６－２の保護基Ｒ^２を脱保護することにより、化合物７を得ることができる。脱保護は、工程５－１と同様の方法で行うことができる。

一般式（４）で表されるイミン（化合物４）の不斉還元を行うことにより、光学活性な含フッ素アミノ酸（フルオロアルキル基含有化合物）を合成できる。下記反応式中、アスタリスク（＊）は、アスタリスクを付した不斉炭素原子の絶対配置がＳ又はＲであることを表す。また、Ｒｆ、Ｒ^１、及びＲ^２は、前記で定義した通りである。

当該製造方法においては、カルボキシ基の保護基Ｒ^１として、ベンジル基、トリフェニルメチル基等のアラルキル保護基を使用することにより、穏やかな条件でＲ^１を脱保護でき、光学活性を保持したまま含フッ素アミノ酸の合成や含フッ素ペプチドの合成を行うことができる点で有利である。

［工程７］
化合物４を不斉還元反応に付すことにより、化合物５－１を得ることができる。
不斉還元反応は、化合物４を不斉還元触媒の存在下で還元することにより、行うことができる。

不斉還元触媒としては、遷移金属に不斉配位子が配位した遷移金属錯体を使用できる。遷移金属としては、パラジウム、ロジウム、ルテニウム、イリジウム、ニッケル、コバルト、白金、鉄等が挙げられる。遷移金属錯体としては、パラジウム錯体、ロジウム錯体、ルテニウム錯体、イリジウム錯体、ニッケル錯体等が挙げられる。

不斉配位子としては、dpen（１，２－ジフェニルエチレンジアミン）、daipen（１，１－ジ（４－アニシル）－２－イソプロピル－１，２－エチレンジアミン）、光学活性なホスフィン配位子が挙げられる。光学活性なホスフィン配位子としては、２，２’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－１，１’－ビナフチル（ＢＩＮＡＰ）、２，２’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－５，５’，６，６’，７，７’，８，８’－オクタヒドロ－１，１’－ビナフチル（Ｈ_８－ＢＩＮＡＰ）、２，２’－ビス（ジ－ｐ－トリルホスフィノ）－１，１’－ビナフチル（Ｔｏｌ－ＢＩＮＡＰ）、２，２’－ビス［ビス（３，５－ジメチルフェニル）ホスフィノ］－１，１’－ビナフチル（Ｘｙｌ－ＢＩＮＡＰ）、２，２’－ビス［ビス（３，５－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－４－メトキシフェニル）ホスフィノ］－１，１’－ビナフチル（ＤＴＢＭ－ＢＩＮＡＰ）、１，２－ビス（アニシルホスフィノ）エタン（ＤＩＰＡＭＰ）、２，３－ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（ＣＨＩＲＡＰＨＯＳ）、１－シクロヘキシル－１，２－ビス（ジフェニルホスフィノ）エタン（ＣＹＣＰＨＯＳ）、１，２－ビス（ジフェニルホスフィノ）プロパン（ＰＲＯＰＨＯＳ）、２，３－ビス（ジフェニルホスフィノ）－５－ノルボルネン（ＮＯＲＰＨＯＳ）、２，３－Ｏ－イソプロピリデン－２，３－ジヒドロキシ－１，４－ビス（ジフェニルホスフィノ）ブタン（ＤＩＯＰ）、１－［１’，２－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセニル］エチルアミン（ＢＰＰＦＡ）、１－［１’，２－ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセニル］エチルアルコール（ＢＰＰＦＯＨ）、２，４－ビス－（ジフェニルホスフィノ）ペンタン（ＳＫＥＷＰＨＯＳ）、１，２－ビス（置換ホスホラノ）ベンゼン（ＤｕＰＨＯＳ）、５，５’－ビス（ジフェニルホスフィノ）－４，４’－ビ－１，３－ベンゾジオキソール（ＳＥＧＰＨＯＳ）、５，５’－ビス［ジ（３，５－キシリル）ホスフィノ］－４，４’－ビ－１，３－ベンゾジオキソール（ＤＭ－ＳＥＧＰＨＯＳ）、５，５’－ビス［ビス（３，５－ジ－ｔｅｒｔ－ブチル－４－メトキシフェニル）ホスフィノ］－４，４’－ビ－１，３－ベンゾジオキソール（ＤＴＢＭ－ＳＥＧＰＨＯＳ）、１－［２－（２置換ホスフィノ）フェロセニル］エチル－２置換ホスフィン（Ｊｏｓｉｐｈｏｓ）、１－［２－（２’－２置換ホスフィノフェニル）フェロセニル］エチル－２置換ホスフィン（Ｗａｌｐｈｏｓ）等が挙げられる。

不斉還元触媒の量は、１モルの化合物４に対して、０．０００１～０．１モルが好ましく、０．０００５～０．０２モルがより好ましい。
反応は、反応に不活性な溶媒中で行うことができる。溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、ジクロロメタン、アセトニトリル、１，４－ジオキサン、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド等の不活性溶媒が挙げられる。
還元反応は、水素ガスの存在下で行われる。還元反応は常圧で行ってもよく、加圧下で行ってもよい。水素ガスの圧力は、好ましくは０．５気圧～１０気圧である。反応温度は、好ましくは０℃～１００℃、より好ましくは１０℃～５０℃である。反応時間は、好ましくは１～４８時間、より好ましくは６～３６時間である。

［工程８－１］
化合物５－１の保護基Ｒ^２を脱保護することにより、化合物６－３を得ることができる。脱保護は、工程５－１と同様の方法で行うことができる。

［工程９－１］
化合物６－３の保護基Ｒ^１を脱保護することにより、化合物７－１を得ることができる。脱保護は、工程６－１と同様の方法で行うことができる。

［工程８－２］
化合物５－１の保護基Ｒ^１を脱保護することにより、化合物６－４を得ることができる。脱保護は、工程６－１と同様の方法で行うことができる。

［工程９－２］
化合物６－４の保護基Ｒ^２を脱保護することにより、化合物７－１を得ることができる。脱保護は、工程５－１と同様の方法で行うことができる。

光学活性な含フッ素アミノ酸（フルオロアルキル基含有化合物）の合成は、下記反応によっても行うことができる。下記反応式中、アスタリスクは、アスタリスクを付した不斉炭素原子の絶対配置がＳ又はＲであることを表す。また、Ｒｆ、Ｒ^１、及びＲ^２は、前記で定義した通りである。

［工程１０－１］
化合物６－１を光学分割することにより、化合物６－３を得ることができる。
光学分割は、公知の手法で行うことができる。例えば、キラルカラムを使用する方法、結晶化による方法、ジアステレオマー法等で行うことができる。

（１）キラルカラムを使用する方法
キラルカラムを使用する液体クロマトグラフィー、超臨界流体クロマトグラフィー（ＳＦＣ）により、ラセミ体を光学活性体に分割できる。キラルカラムは、CHIRALPAK（登録商標）（株式会社ダイセル）、CHIRALCEL（登録商標）（株式会社ダイセル）等を使用できる。

（２）結晶化による方法
ラセミ体と光学活性なアミン又は光学活性な酸との塩を形成させ、結晶性のジアステレマー塩に誘導して分別結晶する。再結晶を繰り返すことにより、単一のジアステレマー塩を得ることができる。必要に応じて、ジアステレオマー塩を中和して、遊離体の光学活性体を得る。光学活性なアミンとしては、ブルシン、シンコニジン、シンコニン、１－フェネチルアミン等が挙げられる。光学活性な酸としては、カンファースルホン酸、酒石酸、マンデル酸等が挙げられる。

（３）ジアステレオマー法
ラセミ体に光学活性な試薬を反応させて、ジアステオマーの混合物を得て、これを分別結晶、クロマトグラフィーにより、単一のジアステオマーを分離する。得られた単一のジアステレオマーから光学活性な試薬部分を除去して、目的の光学異性体を得る。

［工程１１－１］
化合物６－３の保護基Ｒ^１を脱保護することにより、化合物７－１を得ることができる。脱保護は、工程６－１と同様の方法で行うことができる。

［工程１０－２］
化合物６－２を光学分割することにより、化合物６－４を得ることができる。光学分割は、工程１０－１と同様の方法で行うことができる。

［工程１１－２］
化合物６－４の保護基Ｒ^２を脱保護することにより、化合物７－１を得ることができる。脱保護は、工程５－１と同様の方法で行うことができる。

［工程１２］
化合物７を光学分割することにより、化合物７－１を得ることができる。光学分割は、工程１０－１と同様の方法で行うことができる。

＜フルオロアルキル基含有ペプチドの製造方法＞
フルオロアルキル基含有ペプチドは、側鎖にフルオロアルキル基が導入されたアミノ酸を原料として製造できる。例えば、化合物６－１、化合物６－２、化合物６－３、又は化合物６－４を原料とすることにより、フルオロアルキル基含有ペプチドを製造できる。

例えば、化合物６－２又は６－４を、カルボキシ基が保護された含フッ素アミノ酸、カルボキシ基が保護されたアミノ酸、Ｃ末端が保護された含フッ素ペプチド、又はＣ末端が保護されたペプチドと縮合させることにより、フルオロアルキル基含有ペプチドを製造できる。また、化合物６－１又は化合物６－３を、アミノ基が保護された含フッ素アミノ酸、アミノ基が保護されたアミノ酸、Ｎ末端が保護された含フッ素ペプチド、又はＮ末端が保護されたペプチドと縮合させることにより、フルオロアルキル基含有ペプチドを製造できる。

また、化合物７又は化合物７－１を、そのアミノ基又はカルボキシ基を保護した後、同様にしてフルオロアルキル基含有ペプチドを製造できる。具体的には、アミノ基を保護基で保護した後、カルボキシ基が保護された含フッ素アミノ酸、カルボキシ基が保護されたアミノ酸、Ｃ末端が保護された含フッ素ペプチド、又はＣ末端が保護されたペプチドと縮合させる。また、カルボキシ基を保護基で保護した後、アミノ基が保護された含フッ素アミノ酸、アミノ基が保護されたアミノ酸、Ｎ末端が保護された含フッ素ペプチド、又はＮ末端が保護されたペプチドと縮合させることもできる。

ペプチドの製造は、一般的なペプチド合成法により行うことができる。例えば、ペプチド固相合成法により行うことができる。フルオロアルキル基含有ペプチドは、側鎖にフルオロアルキル基が導入されたアミノ酸を原料として、ペプチド自動合成機を用いて容易に合成できる。

Ｃ末端を固相に結合したアミノ酸に、アミノ基を保護したアミノ酸を順次縮合させ、ペプチドを固相から脱離させることにより、ペプチドを製造できる。アミノ酸原料は、アミノ基がＢｏｃ基又はＦｍｏｃ基で保護されたものを使用することが好ましい。アミノ酸原料の側鎖官能基は、保護基で保護されているものを使用することが好ましい。側鎖官能基の保護基としては、Ｂｏｃ基、トリフェニルメチル基、ベンジル基、２，２，５，７，８－ペンタメチルクロマン－６－スルホニル（Ｐｍｃ）基等が挙げられる。

ペプチド結合を形成する縮合剤としては、例えば、Ｎ，Ｎ－ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１－エチル－３－（３’－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＷＳＣ）、ベンゾトリアゾール－１－イルオキシ－トリスジメチルアミノホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール－１－イルオキシトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（ｐｙＢＯＰ）、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＨＢＴＵ）、２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート等が挙げられる。また、Ｎ－ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）と上記縮合剤を好ましい割合で混合して用いることもできる。

ペプチド結合の形成にはカルボキシ末端を活性化する方法を用いてもよく、その活性化剤としては、例えば、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、ｐ－ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル等が挙げられる。ペプチド結合を形成する際に用いる塩基としては、例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）等が挙げられる。ペプチド結合形成反応に用いる溶媒としては、例えば、クロロホルム、ジクロロメタン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド等が挙げられる。

ペプチド又はアミノ酸のアミノ末端アミノ基の保護基であるＢｏｃ基及びＦｍｏｃ基は、それぞれトリフルオロ酢酸又はピペリジンにより除去できる。ペプチドのアミノ酸残基の側鎖官能基の保護基は、例えば、トリフルオロ酢酸、フッ化水素（ＨＦ）、トリフルオロメタンスルホン酸等により除去できる。

また、ペプチド固相合成法において、ペプチド又はアミノ酸残基の側鎖官能基に保護基が付いているペプチドをペプチド固相合成樹脂より脱離させる方法としては、例えば、ＴＦＡを用いることができる。ペプチド固相樹脂からのペプチドの脱離と、アミノ酸残基の側鎖官能基の保護基の脱離は、それぞれ同一反応系内で同時に行うこともできる。あるいは、それぞれ独立に行うこともできる。ペプチド固相合成用のペプチド固相合成樹脂としては、例えば、４－ヒドロキシメチル－３－メトキシフェノキシ酪酸－ベンズヒドリルアミン－ポリスチレン樹脂、ｐ－ベンジルオキシベンジルアルコール－ポリスチレン樹脂、オキシム樹脂等の通常市販されているものを用いることができる。

目的のペプチド又はその中間体は、例えば、イオンクロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、順相クロマトグラフィー、再結晶、抽出、分別結晶化等、種々の方法により単離、精製を行うことができる。また、こうして得られたペプチドは、常法によってそれぞれの塩に変換できる。

製造されたフルオロアルキル基含有ペプチドのアミノ基又はカルボキシ基の保護基は、必要に応じて脱保護することもできる。脱保護は、保護基の種類に応じて常法により行うことができる。

＜フルオロアルキル基含有ペプチド＞
本発明に係るフルオロアルキル基含有ペプチドは、２個以上のアミノ酸からなるペプチドであって、当該ペプチドを構成するアミノ酸残基の少なくとも１個が、側鎖に、少なくとも２個のフッ素原子で置換されたＣ_１－３０アルキル基を有している。少なくとも２個のフッ素原子で置換されたＣ_１－３０アルキル基は、フッ素原子以外のハロゲン原子でさらに置換されていてもよい。また、当該Ｃ_１－３０アルキル基がＣ_２－３０アルキル基の場合、炭素原子間に１～５個のエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい。

本発明に係るフルオロアルキル基含有ペプチドとしては、側鎖が前記Ｒｆであるアミノ酸残基であるペプチドが挙げられる。当該ペプチドを構成するアミノ酸残基のうち、少なくとも１個の側鎖がＲｆであればよく、全てのアミノ酸残基の側鎖がＲｆであってもよい。一分子のペプチドに側鎖がＲｆであるアミノ酸残基が２個以上ある場合、これ等の複数のＲｆは、互いに同種であってもよく、異種であってもよい。また、ペプチドのうち、側鎖がＲｆであるアミノ酸残基は、Ｎ末端にあってもよく、Ｃ末端にあってもよく、末端以外にあってもよい。

Ｒｆとしては、下記一般式（ｆ－１）又は（ｆ－２）で表される基が好ましい。ここで、Ｒｆ^Ｐは、少なくとも２個以上のフッ素原子を含む完全ハロゲン化Ｃ_１－１０アルキル基を表す。Ｒｆ^Ｐは、Ｃ_１－１０アルキル基の水素原子の全てがハロゲン原子に置換されており、これらのハロゲン原子のうち少なくとも２個以上がフッ素原子である基である。Ｒｆ^Ｐが炭素数２以上の場合、すなわち、完全ハロゲン化Ｃ_２－１０アルキル基の場合、炭素原子間に１～５個のエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい。一般式（ｆ－２）において、２個のＲｆ^Ｐは、互いに同種の基であってもよく、異種の基であってもよい。

下記一般式（ｆ－１）又は（ｆ－２）において、ｎ１は、０～１０の整数であり、ｎ２は、０～９の整数である。ｎ１及びｎ２が０の場合、いずれも単結合を表す。すなわち、ｎ１が０の場合、一般式（ｆ－１）で表される基は、Ｒｆ^Ｐ－であり、ｎ２が０の場合、一般式（ｆ－２）で表される基は、（Ｒｆ^Ｐ）_２－ＣＨ－である。

Ｒｆが一般式（ｆ－１）で表される基である場合、Ｒｆは、Ｒｆ^Ｐが、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ペルフルオロペンチル基、ペルフルオロヘキシル基、ペルフルオロヘプチル基、ペルフルオロオクチル基、ペルフルオロノニル基、又はペルフルオロデシル基であり、ｎ１が０～４の整数である基が好ましく、Ｒｆ^Ｐが、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ペルフルオロペンチル基、ペルフルオロヘキシル基、ペルフルオロヘプチル基、ペルフルオロオクチル基、ペルフルオロノニル基、又はペルフルオロデシル基であり、ｎ１が０～２の整数である基がより好ましく、Ｒｆ^Ｐが、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ペルフルオロペンチル基、又はペルフルオロヘキシル基であり、ｎ１が０～２の整数である基（ただし、ｎ１が１であり、Ｒｆ^Ｐがトリフルオロメチル基である基を除く）がさらに好ましい。

Ｒｆが一般式（ｆ－２）で表される基である場合、Ｒｆは、Ｒｆ^Ｐが、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ペルフルオロペンチル基、ペルフルオロヘキシル基、ペルフルオロヘプチル基、ペルフルオロオクチル基、ペルフルオロノニル基、又はペルフルオロデシル基であり、ｎ２が０～４の整数である基が好ましく、Ｒｆ^Ｐが、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ペルフルオロペンチル基、ペルフルオロヘキシル基、ペルフルオロヘプチル基、ペルフルオロオクチル基、ペルフルオロノニル基、又はペルフルオロデシル基であり、ｎ２が０～２の整数である基がより好ましく、Ｒｆ^Ｐが、トリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ペルフルオロペンチル基、又はペルフルオロヘキシル基であり、ｎ２が０～２の整数である基（ただし、ｎ２が０又は１であり、Ｒｆ^Ｐがトリフルオロメチル基である基を除く）がさらに好ましい。

Ｒｆの例としては、ジフルオロメチル基、１，１－ジフルオロエチル基、２，２－ジフルオロエチル基、１，１，２，２－テトラフルオロエチル基、１，１，２，２，３，３－ヘキサフルオロプロピル基、１，１，２，３，３，３－ヘキサフルオロプロピル基等であってもよい。

２個以上のアミノ酸からなるペプチドとしては、３個以上のアミノ酸からなるペプチドが好ましい。好ましくは、２～４０個のアミノ酸からなるペプチドであり、より好ましくは、３～２０個のアミン酸からなるペプチドである。

本発明に係るフルオロアルキル基含有ペプチドのＣ末端は、Ｒ^１で表される保護基で保護されていてもよい。Ｒ^１は、好ましくは、ベンジル基である。また、本発明に係るフルオロアルキル基含有ペプチドのＮ末端は、Ｒ^２で表されるアミノ基の保護基で保護されていてもよい。Ｒ^２は、好ましくは、Ｂｏｃ基又はＦｍｏｃ基である。

本発明に係るフルオロアルキル基含有ペプチドとしては、例えば、下記一般式（１０１）又は（１０２）で表されるトリペプチドが挙げられる。一般式（１０１）及び（１０２）中、Ｒ^１１及びＲ^１２は、それぞれ独立して、Ｃ_１－６アルキル基又はベンジル基であり、それぞれ独立してメチル基又はベンジル基であることが好ましく、Ｒ^１１がメチル基であり、Ｒ^１２がベンジル基であることが特に好ましい。Ｘは、Ｆｍｏｃ又はＢｏｃである。Ｚは、Ｃ_１－６アルコキシ基であり、メトキシ基が特に好ましい。

一般式（１０１）及び（１０２）中、Ｒｆ^Ｐ、ｎ１、及びｎ２は、一般式（ｆ－１）及び（ｆ－２）と同様である。前記一般式（１０１）又は（１０２）で表される基としては、Ｒｆ^Ｐが完全フッ素化Ｃ_１－１０アルキル基であり、ｎ１又はｎ２が０～４の整数であることが好ましく、Ｒｆ^Ｐがトリフルオロメチル基、ペンタフルオロエチル基、ヘプタフルオロプロピル基、ノナフルオロブチル基、ペルフルオロペンチル基、ペルフルオロヘキシル基、ペルフルオロヘプチル基、又はペルフルオロオクチル基であり、ｎ１又はｎ２が０～２の整数であることがより好ましく、Ｒｆ^Ｐがノナフルオロブチル基、ペルフルオロペンチル基、ペルフルオロヘキシル基、ペルフルオロヘプチル基、又はペルフルオロオクチル基であり、ｎ１又はｎ２が０～２の整数であることがさらに好ましい。

フルオロアルキル基は、細胞膜への親和性が高い。このため、本発明に係るフルオロアルキル基含有ペプチドは、細胞膜透過性に優れている。また、天然ペプチドと構造が大幅に異なるため、ペプチターゼにより分解されにくい。これらの性質を利用して、本発明に係るフルオロアルキル基含有ペプチドは、生理活性物質として、医薬分野での利用が期待される。例えば、本発明に係るフルオロアルキル基含有ペプチドは、薬効成分を標的細胞へ運ぶＤＤＳキャリアとしての利用が期待できる。例えば、生体内の標的細胞内に取り込まれることにより何等かの生理活性を示す機能性ペプチドに、その機能を損なわないように本発明に係るフルオロアルキル基含有ペプチドを付加することにより、当該機能性ペプチドの標的細胞への取り込み効率を改善できる。また、生理活性を示す機能性ペプチドの疎水性アミノ酸残基のうちの一部の側鎖を、当該機能性ペプチドの機能を損なわない範囲で、Ｒｆ、好ましくは前記一般式（１０１）又は（１０２）で表される基に置換することにより、当該機能性ペプチドの細胞膜透過性や細胞内での滞留時間を改善できる。

以下、本発明を実施例により説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されない。

実施例、比較例の分析に使用したＮＭＲ装置は日本電子製ＪＮＭ－ＥＣＺ４００Ｓ（４００ＭＨｚ）であり、^１Ｈ ＮＭＲではテトラメチルシランを０ＰＰＭ、^１９Ｆ ＮＭＲではＣ_６Ｆ_６を－１６２ＰＰＭの基準値とした。

本願明細書において、以下の略号を使用する。
Ｂｎ：ベンジル
Ｂｏｃ：ｔ－ブトキシカルボニル
Ａｌｌ：アリル
Ｅｔ_２Ｏ：ジエチルエーテル
Ｆｍｏｃ：９－フルオレニルメチルオキシカルボニル
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン
ＴＭＳ：トリメチルシリル
Ｃ_４Ｆ_９：１，１，２，２，３，３，４，４，４－ノナフルオロブチル
Ｃ_８Ｆ_１７：１，１，２，２，３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，８－ヘプタデカフルオロオクチル

［製造例１］
トリメチル（ノナフルオロブチル）シランとシュウ酸ジベンジルから、２－（（ｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－３，３，４，４，５，５，６，６，６－ノナフルオロヘキサン酸を合成した。

［工程１］

オーブンで乾燥した１００ｍＬ容の二口フラスコに撹拌子を入れ、窒素雰囲気下、シュウ酸ジベンジル（５．４１ｇ，２０．０ｍｍｏｌ）、フッ化セシウム（２５５ｍｇ，１．６８ｍｍｏｌ）、及びＴＨＦ（５４ｍＬ）を加えて撹拌し、－３０℃に冷却してからトリメチル（ノナフルオロブチル）シラン（４．５０ｍＬ，２０．２ｍｍｏｌ）を加えて－３０℃で２４時間撹拌を続けた。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液（３０ｍＬ）を加えて、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾別し、濾液を減圧留去して２－（ベンジロキシ）－３，３，４，４，５，５，６，６，６－ノナフルオロ－２－（（トリメチルシリル）オキシ）ヘキサン酸ベンジルと３，３，４，４，５，５，６，６，６－ノナフルオロ－２，２－ジヒドロキシヘキサン酸ベンジルの混合粗体を得た。得られた粗体は精製することなく次工程に用いた。

［工程１－２］

オーブンで乾燥した１００ｍＬ容の二口フラスコに撹拌子を入れ、窒素雰囲気下、工程１で得られた粗体全量とフッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）１ｍｏｌ／Ｌ ＴＨＦ溶液（１０．５ｍＬ，１０．５ｍｍｏｌ）、酢酸（１ｍＬ）、及びＴＨＦ（５０ｍＬ）を加えて０℃で撹拌した。その後、室温に昇温して２４時間撹拌後に飽和重曹水（３０ｍＬ）を加えてクエンチし、酢酸エチル（３×５０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を水（５０ｍＬ）及び飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄後に硫酸ナトリウムで乾燥した後、濾別し、濾液を減圧留去して３，３，４，４，５，５，６，６，６－ノナフルオロ－２，２－ジヒドロキシヘキサン酸ベンジルの粗体を得た。得られた粗体は精製することなく次工程に用いた。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ７．３９（ｂｒｓ，５Ｈ），５．３７（ｓ，２Ｈ）．
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ－８０．７９（ｂｒｓ，３Ｆ），－１２１．０９（ｂｒｓ，２Ｆ），－１２１．２４－１２１．２６（ｍ，２Ｆ），－１２６．１２－１２６．２１（ｍ，２Ｆ）．

［工程２］

オーブンで乾燥した２０ｍＬ容のフラスコに撹拌子を入れ、窒素雰囲気下、工程２で得られた粗体全量と五酸化リン（粗体の２２重量％）を加え、減圧蒸留を行った。２ｍｍＨｇ、７７℃で得られた留分を集め、３，３，４，４，５，５，６，６，６－ノナフルオロ－２－オキソヘキサン酸ベンジルを無色の液体として得た（工程１から工程３まで通して収率７３％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ７．４１（ｂｒｓ，５Ｈ），５．４０（ｓ，２Ｈ）．
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ－８０．７９（ｂｒｓ，３Ｆ），－１１７．７８－１１７．８５０（ｔ，２Ｆ，Ｊ_Ｆ－Ｆ＝１３Ｈｚ），－１２２．０１（ｂｒｓ，２Ｆ），－１２５．５８（ｂｒｓ，２Ｆ）．

工程１の温度を０℃に変更した以外は、工程１～工程２と同様にして、３，３，４，４，５，５，６，６，６－ノナフルオロ－２－オキソヘキサン酸ベンジルを無色の液体として得た。工程１から工程２まで通しての収率は６９％であった。

［工程３］

オーブンで乾燥した３０ｍＬ容のシュレンクフラスコに撹拌子を入れ、窒素雰囲気下、３，３，４，４，５，５，６，６，６－ノナフルオロ－２－オキソヘキサン酸ベンジル（１ｇ，２．６ｍｍｏｌ）、ｔ－ブチル（トリフェニルホスファネイリデン）カルバメート（２．６ｍｍｏｌ）、及びＥｔ_２Ｏ（１０ｍＬ）を加えた。反応液を室温で１時間撹拌後に濾過し、ろ物をＥｔ_２Ｏ（２×２ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機相を減圧留去して２－（（ｔ－ブトキシカルボニル）イミノ）－３，３，４，４，５，５，６，６，６－ノナフルオロヘキサン酸ベンジルの粗体を得た。得られた粗体をシリカゲルクロマトグラフィー（Ｅｔ_２Ｏ／ヘキサン＝１／４）で精製し、２－（（ｔ－ブトキシカルボニル）イミノ）－３，３，４，４，５，５，６，６，６－ノナフルオロヘキサン酸ベンジルを無色液体として得た（収率８７％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ７．４１０－７．３５２（ｍ，５Ｈ），５．３５０（ｓ，２Ｈ），１．５０４（ｓ，９Ｈ）．
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ－８０．７６－８０．７８（ｔ，３Ｆ，Ｊ_Ｆ－Ｆ＝９Ｈｚ），－１１２．３７（ｂｒｓ，２Ｆ），－１２１．０（ｂｒｓ，２Ｆ），－１２５．３６（ｂｒｓ，２Ｆ）．

［工程４］

オーブンで乾燥した３０ｍＬ容のシュレンクフラスコに撹拌子を入れ、窒素雰囲気下、２－（（ｔ－ブトキシカルボニル）イミノ）－３，３，４，４，５，５，６，６，６－ノナフルオロヘキサン酸ベンジル（０．２ｇ，０．４２ｍｍｏｌ）をＥｔ_２Ｏ（１５ｍＬ）に溶解して０℃で撹拌した。水素化ホウ素ナトリウム（０．４６ｍｍｏｌ）を３回に分けて０℃で加え、その後、室温に昇温して２４時間撹拌した。氷水を加えてクエンチし、１ｍｏｌ／Ｌの塩酸を加えてｐＨを７未満にした。水相をＥｔ_２Ｏ（２×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機相を減圧留去して２－（（ｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－３，３，４，４，５，５，６，６，６－ノナフルオロヘキサン酸ベンジルの粗体を得た。得られた粗体をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１／４）で精製し、２－（（ｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－３，３，４，４，５，５，６，６，６－ノナフルオロヘキサン酸ベンジルを無色液体として得た（収率６１％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ７．４０－７．３３（ｍ，５Ｈ），５．４１－５．３９（ｄ，２Ｈ，Ｊ_Ｈ－Ｈ＝１０Ｈｚ），５．２８－５．２０（ｍ，３Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）．
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ－８０．８６－８０．８９（ｔ，３Ｆ，Ｊ_Ｆ－Ｆ＝９Ｈｚ），－１１５．３６－１１８．５５（ｍ，２Ｆ），－１２１．５０－１２３．１７（ｍ，２Ｆ），－１２５．００－１２６．７７（ｍ，２Ｆ）．

Ｅｔ_２Ｏ及び水素化ホウ素ナトリウムの代わりに、表１に記載の溶媒及び還元剤（当量）を使用して、前記工程４と同様の反応を行った。収率を表１に示す。表中、「ＡＫ２２５」は、「アサヒクリン（登録商標）ＡＫ－２２５」（３，３－ジクロロ－１，１，１，２，２－ペンタフルオロプロパンと１，３－ジクロロ－１，１，２，２，３－ペンタフルオロプロパンの混合物、ＡＧＣ株式会社）である。

［工程５－２］

オーブンで乾燥した２５ｍＬ容の二口フラスコに撹拌子を入れ、２－（（ｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－３，３，４，４，５，５，６，６，６－ノナフルオロヘキサン酸ベンジル（７３．６ｍｇ，０．１５ｍｍｏｌ）、パラジウム／炭素（Ｐｄ５％、約５５％水湿潤品、２０ｍｇ）、酢酸エチル（１ｍＬ）、及びエタノール（７ｍＬ）を加え、常圧の水素雰囲気下、室温で撹拌した。室温で２４時間撹拌後にセライト濾過を行い、ろ物をエタノール（３×５ｍＬ）で洗浄し、合わせた有機相を減圧留去して２－（（ｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－３，３，４，４，５，５，６，６，６－ノナフルオロヘキサン酸の粗体を得た。得られた粗体をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１／１）で精製し、２－（（ｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－３，３，４，４，５，５，６，６，６－ノナフルオロヘキサン酸を無色液体として得た（収率８６％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ７．７２（ｂｒ，１Ｈ），５．４９－５．４７（ｄ，２Ｈ，Ｊ_Ｈ－Ｈ＝１０Ｈｚ），５．２４－５．１５（ｍ，１Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）．
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ－８０．３０（ｂｒｓ，３Ｆ），－１１４．６４－１１８．０３（ｍ，２Ｆ），－１２０．７０－１２２．４０（ｍ，２Ｆ），－１２４．５２－１２６．２２（ｍ，２Ｆ）．

［工程５－１］

オーブンで乾燥した２５ｍＬ容の二口フラスコに撹拌子を入れ、Ｂｏｃ－ＲＦＡＡ－ＯＢｎ（３７６ｍｇ，０．７８ｍｍｏｌ）、４Ｍ ＨＣｌ、１，４－ジオキサン溶液（３ｍＬ）を０℃で加えた。室温で１８時間撹拌後に飽和炭酸ナトリウム水溶液を加えてｐＨを７より大きくなるように調整し、酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄して硫酸ナトリウムで乾燥した。有機相を濾過し、濾液を減圧留去してＨ－ＲＦＡＡ－ＯＢｎの塩酸塩を白色固体として得た（収率７８％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ） δ７．３１（ｂｒｓ，２Ｈ），６．８１‐６．７７（ｍ，５Ｈ），５．２７（ｍ，１Ｈ），３．７１‐３．６７（ｍ、２Ｈ）．
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ） δ－８０．３８（ｔ，３Ｆ），－１１８．２９－１２１．００（ｍ，２Ｆ），－１２１．００－１２３．８０（ｍ，２Ｆ），－１２６．１２－１２８．１２（ｍ，２Ｆ）．

以降において、アミノ酸は、三文字表記で表記することがある。例えば、「Ｐｈｅ」はフェニルアラニン、「Ｇｌｙ」はグリシンである。また、ペプチドは、（Ｎ側保護基）－アミノ酸三文字表記－（Ｃ側保護基）と表記する。「Ｈ－ＡＡ－ＯＭｅ」は、Ｎ末端側が未保護であり、Ｃ末端側はメチルエステルであることを意味する。Ｃ末端側が未保護の場合は、「ＯＭｅ」にかえて「ＯＨ」と表す。

［実施例１］
ノナフルオロブチル基を有するジペプチドを合成した。

オーブンで乾燥した２５ｍＬ容の二口フラスコに撹拌子を入れ、２－（（ｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－３，３，４，４，５，５，６，６，６－ノナフルオロヘキサン酸（３３．４ｍｇ，０．０８５ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（０．１３ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（３ｍＬ）、Ｌ－フェニルアラニンメチルエステル（０．１３ｍｍｏｌ）、及びベンゾトリアゾール－１－オール・一水和物（０．０８５ｍｍｏｌ）を室温で加え、０℃に冷却後にＢＯＰ（０．０８５ｍｍｏｌ）を加えた。室温で２４時間撹拌後に溶媒を減圧留去し、酢酸エチルで希釈し、有機相を飽和クエン酸水溶液、飽和炭酸ナトリウム水溶液、及び飽和食塩水で洗浄して硫酸ナトリウムで乾燥した。有機相を濾過し、濾液を減圧留去してＢｏｃ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅの粗体を得た。得られた粗体をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１／４）で精製し、２種類のＢｏｃ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅジアステレオマーをそれぞれ無色液体として得た（２種類のジアステレオマーを合わせて収率２２％）。

ジアステレオマーＡ
^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ７．３１－７．２５（ｍ，５Ｈ），６．４１－６．４０（ｄ，Ｎ－Ｈ，Ｊ_Ｈ－Ｈ＝７Ｈｚ），５．４８－５．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ_Ｈ－Ｈ＝９Ｈｚ），４．９９－４．９１（ｍ，１Ｈ），４．９１－４．８６（ｍ，１Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），３．２３－３．１０（ｍ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）．
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ－８０．９８（ｔ，３Ｆ，Ｊ_Ｆ－Ｆ＝７Ｈｚ），－１１４．５６－１１９．８０（ｍ，２Ｆ），－１２１．４０－１２３．２２（ｍ，２Ｆ），－１２５．０３－１２７．１５（ｍ，２Ｆ）．

ジアステレオマーＢ
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ７．３０－７．０７（ｍ，５Ｈ），６．４２－６．４０（ｄ，Ｎ－Ｈ，Ｊ_Ｈ－Ｈ＝９Ｈｚ），５．５１－５．４８（ｄ，１Ｈ，Ｊ_Ｈ－Ｈ＝８Ｈｚ），５．００－４．９５（ｍ，１Ｈ），４．９３－４．８８（ｍ，１Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），３．１５－３．１３（ｍ，２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）．
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ－８０．７７（ｔ，３Ｆ，Ｊ_Ｆ－Ｆ＝９Ｈｚ），－１１３．７４－１１９．３０（ｍ，２Ｆ），－１２１．２２－１２２．９４（ｍ，２Ｆ），－１２４．８２－１２７．０５（ｍ，２Ｆ）．

Ｌ－フェニルアラニンメチルエステルの代わりに、表２に記載のアミノ酸メチルエステルを使用して、同様の反応を行った。収率を表２に示す。表中、「ＤＣＭ」はジクロロメタン、「ＢＯＰ」はベンゾトリアゾール－１－イルオキシ－トリスジメチルアミノホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩、「ＥＤＣ」は１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩を表す。

［実施例２］
実施例１で合成したペプチドのＮ末端側の保護基を脱保護した。

オーブンで乾燥した２５ｍＬ容の二口フラスコに撹拌子を入れ、Ｂｏｃ－ＲＦＡＡ－Ｇｌｙ－ＯＭｅ（２１．２ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（１．５ｍＬ）、及びＴＦＡ（０．４ｍＬ）を加えた。室温で２４時間撹拌後に飽和炭酸ナトリウム水溶液を加えてｐＨを７より大きくなるように調整し、ＤＣＭで抽出した。有機相を飽和食塩水で洗浄して、硫酸ナトリウムで乾燥した。有機相を濾過し、濾液を減圧留去してＨ－ＲＦＡＡ－Ｇｌｙ－ＯＭｅの粗体を得た（収率６６％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ７．０８（ｂｒｓ，１Ｈ），４．１５－４．０７（ｍ，２Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ）．
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ－８０．７１（ｔ，３Ｆ，Ｊ_Ｆ－Ｆ＝７Ｈｚ），－１１５．１３－１１９．９４（ｍ，２Ｆ），－１１９．９４－１２１．９３（ｍ，２Ｆ），－１２５．０２－１２６．８２（ｍ，２Ｆ）．

［実施例３］
ノナフルオロブチル基を有するトリペプチドを合成した。

オーブンで乾燥したＮＭＲ試験管に、Ｈ－ＲＦＡＡ－Ｇｌｙ－ＯＭｅ（１０．９ｍｇ，０．０３ｍｍｏｌ）、ＤＣＭ（０．５ｍＬ）、ＤＩＰＥＡ（０．１３ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＯＨ（０．０３ｍｍｏｌ）、及びベンゾトリアゾール－１－イルオキシ－トリスジメチルアミノホスホニウム塩（０．０８５ｍｍｏｌ）を室温で加えた。室温で２４時間静置後に溶媒を減圧留去し、酢酸エチルで希釈し、有機相を飽和クエン酸水溶液、飽和炭酸ナトリウム水溶液、及び飽和食塩水で洗浄して硫酸ナトリウムで乾燥した。有機相を濾過し、濾液を減圧留去してＦｍｏｃ－Ｇｌｙ－ＲＦＡＡ－Ｇｌｙ－ＯＭｅの粗体を得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ７．７８－７．２７（ｍ，８Ｈ），δ７．３０（ｂｒｓ，１Ｈ），７．１３（ｂｒｓ，１Ｈ），５．６３－５．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ_Ｈ－Ｈ＝７Ｈｚ），５．６４－５．５４（ｍ，１Ｈ），４．４２－４．４１（ｄ，２Ｈ，Ｊ_Ｈ－Ｈ＝７Ｈｚ），４．２４－４．２０（ｍ，１Ｈ），４．０８－３．９８（ｍ，４Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ）．
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ－８０．７８（ｔ，３Ｆ，Ｊ_Ｆ－Ｆ＝１０Ｈｚ），－１１４．６１－１１８．７４（ｍ，２Ｆ），－１２１．２２－１２３．０９（ｍ，２Ｆ），－１２４．８９－１２６．９０（ｍ，２Ｆ）．

［実施例４］
ノナフルオロブチル基を有するトリペプチド（Ｂｏｃ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）を合成した。

２５ｍＬ容の二口フラスコに撹拌子を入れ、一方にＢｏｃ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅジアステレオマーＡ（ＤＲ＞９５，０．１１ｍｍｏｌ）とＤＣＭ（５ｍＬ）を加えた。この反応混合物を０℃に冷却した後、ＴＦＡ（１．２５ｍＬ）を添加し、室温まで温めた。４時間攪拌した後、炭酸水素ナトリウム水溶液を添加して反応を終了させた。水相をＤＣＭで抽出し、合わせた有機相を減圧留去して、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル：トリエチルアミン＝２：１：１％）により精製して、Ｈ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅを得た（３３．９ｍｇ、収率７０．０％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ＝１．７７（ｂｒ ｓ，２Ｈ），３．１０－３．１４（ｍ，２Ｈ），３．７４（ｓ，３Ｈ），３．９３－３．９９（ｄｄ，１Ｈ），４．９０－４．９５（ｄｄ，１Ｈ），６．８１－６．８３（ｄ，ＮＨ），７．２７（ｍ，５Ｈ）
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ＝－１２６．２－１２５．７（ｍ，２Ｆ），－１２１．２－１１９．７（ｍ，２Ｆ），－１２０．５－１１４．４（ｍ，２Ｆ），－８０．７（ｔ，３Ｆ）

２５ｍＬ容の二口フラスコに撹拌子を入れ、一方に、３ｍＬのＤＣＭに、Ｂｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ（１．１等量）と１－ヒドロキシ－７－アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ、１．１等量）、ＤＩＰＥＡ（１．３等量）、１－［Ｂｉｓ（ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏ）ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ］－１Ｈ－１,２,３-ｔｒｉａｚｏｌｏ〔４,５－ｂ〕ｐｙｒｉｄｉｎｉｕｍ ３－Ｏｘｉｄｅ Ｈｅｘａｆｌｕｏｒｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ（ＨＡＴＵ、１．１等量）、及びジペプチド（Ｈ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ、ｄｒ＞９５：５,３８μｍｏｌ）を添加し、０℃とした。この混合物を室温まで温めた後、１．５時間攪拌した。その後、ＨＣｌ（１Ｎ）を添加して反応を終了させた。反応液を、ＨＣｌ（１Ｎ）とＤＣＭで分液し、合わせた有機相を減圧留去して、次いで酢酸エチル希釈した。有機相を、ＨＣｌ（１Ｎ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液、及びブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、蒸発させて白色固体を得た。粗混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）で精製して、トリペプチドを得た（ｄｒ＞９５：５、１８．２ｍｇ、収率７５．１％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ａｃｅｔｏｎｅ ｄ６） δ＝１．３０（ｄ，３Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ），３．０４－３．１６（ｍ，２Ｈ），３．６６（ｓ，３Ｈ），４．２６－４．２９（ｍ，１Ｈ），４．６８－４．７７（ｍ，１Ｈ），５．５３－５．６１（ｍ，１Ｈ），６．２３（ｄ，Ｎ－Ｈ），７．１９－７．２９（ｍ，５Ｈ），７．８２（ｄ，Ｎ－Ｈ），８．３０（ｄ，Ｎ－Ｈ）．
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ａｃｅｔｏｎｅ ｄ６） δ＝－１２６．９－１２６．３（ｍ，２Ｆ），－１２３．１－１２１．９（ｍ，２Ｆ），－１２０．１－１１５．０（ｍ，２Ｆ），－８１．５（ｔ，３Ｆ）

［実施例５］
ノナフルオロブチル基を有するトリペプチド（Ｈ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）を合成した。

２５ｍＬ容の二口フラスコに撹拌子を入れ、一方にＢｏｃ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅジアステレオマーＡ（ＤＲ＞９５，２９μｍｏｌ）とＤＣＭ（２ｍＬ）を加えた。この反応混合物を０℃に冷却した後、ＴＦＡ（０．４ｍＬ）を添加し、室温まで温めた。４時間攪拌した後、炭酸水素ナトリウム水溶液を添加して反応を終了させた。水相をＤＣＭで抽出し、合わせた有機相を減圧留去して、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製して、Ｈ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅを得た（ｄｒ＞９５、１３．８ｍｇ、収率９０．６％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ａｃｅｔｏｎｅ ｄ６） δ＝１．１６（ｄ，３Ｈ），２．８１（ｂｒ ｓ，２Ｈ），３．００－３．１４（ｍ，２Ｈ），３．６７（ｓ，３Ｈ），３．９４－３．９９（ｍ，１Ｈ），４．６８－４．７４（ｍ，１Ｈ），５．４９－５．５６（ｍ，１Ｈ），７．１９－７．２７（ｍ，５Ｈ），８．１６（ｄ，Ｎ－Ｈ），８．３３（ｄ，Ｎ－Ｈ）．
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，Ａｃｅｔｏｎｅ ｄ６） δ＝－１２６．９－１２５．６（ｍ，２Ｆ），－１２３．１－１２２．１（ｍ，２Ｆ），－１２０．０－１１５．３（ｍ，２Ｆ），－８１．７（ｔ，３Ｆ）

［実施例６］
実施例５で合成したノナフルオロブチル基を有するトリペプチド（Ｈ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）のＮ末端に、蛍光物質Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７を融合させた。

１．５ｍＬ容の黒色チューブに、乾燥ＤＭＳＯ（１５μＬ）に溶解させたＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（２５０μｇ）、乾燥ＤＭＳＯ（１５μＬ）に溶解させたＨ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（１．５当量）、及びＤＩＰＥＡ（１．５当量）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し続けた。当該混合物を逆相クロマトグラフィー（アセトニトリル／水／ＴＦＡ＝３０：７０：０．１～９５：５：０．１）で精製し、凍結乾燥して蛍光コンジュゲート１を青色固体として得た（蛍光計で計算して収率３２．３％）。なお、蛍光は、Ｎａｎｏ Ｄｒｏｐ（登録商標）分光光度計ＮＤ－１０００を用い、発光波長＝６５０ｎｍで測定した。

ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ
［Ｍ］^－：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_５５Ｈ_６３Ｆ_９Ｎ_５Ｏ_１７Ｓ_４ ^－ １３６４．２９６４，ｆｏｕｎｄ １３６４．７２５２

［実施例７］
ヘプタデカフルオロオクチル基を有するトリペプチド（Ｈ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）を合成した。

ペルフルオロアルキル化反応は、既報（Journal of Fluorine Chemistry，1984, vol.26, p.341-358）に従って実施した。
得られた粗生成物を昇華（７２℃、０．５ｍｍＨｇ）により精製した。得られた白色固体を１００ｍＬ容の三口丸底フラスコに直接移し、Ｅｔ_２Ｏ（１０ｍＬ）で溶解し、ｔｅｒｔ－ブチル（トリフェニルホスファニリデン）カルバメート（５．５ｍｍｏｌ）と室温で１時間反応させた。粗生成物を濾過し、濾液を蒸発させた。得られた白色固体をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１０：１ｗ／ ０．４％ ＮＥｔ_３）で精製し、α－イミノエステル（３１１ｍｇ、３工程収率：８．２％）を得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３） δ＝１．５０（ｓ，９Ｈ），５．３６（ｓ，２Ｈ），７．３６－７．３８（ｍ，５Ｈ）
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ＝－１２６．３（ｍ，２Ｆ），－１２２．８（ｍ，２Ｆ），－１２１．８－１２２．０（ｍ，４Ｆ），－１２１．２（ｍ，２Ｆ），－１２０．２（ｍ，２Ｆ），－１１２．６（ｍ，２Ｆ），－８１．０（ｔ，３Ｆ）

２５ｍＬ容の二口丸底フラスコに撹拌子を入れ、α－イミノエステル（３１１ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）及びＴＨＦ（５ｍＬ）を加えた。この反応混合物にナトリウムトリアセトキシボロヒドリド（０．５９ｍｍｏｌ）を０℃で加え、次いで室温で２４時間攪拌した。反応混合物を直接蒸発させ、水とＤＣＭの間で分配した。合わせた有機相を減圧留去して粗混合物を得た。粗混合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１：１０）により精製して、白色固体（Ｂｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－ＯＢｎ）を得た（収率４９．６％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ ＣＤＣｌ_３） δ＝１．２８（ｓ，９Ｈ），５．０７（ｓ，２Ｈ），５．１３７（ｍ，１Ｈ），７．１８（ｍ，５Ｈ）
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ ＣＤＣｌ_３） δ＝－１２６．３（ｍ，２Ｆ），－１２２．９（ｍ，２Ｆ），－１２１．５－１２２．１（ｍ，８Ｆ），－１１５．３－１１８．８（ｍ，２Ｆ），－８１．０（ｔ，３Ｆ）

トリペプチドに対する手順は上記と同じであった。ＨＰＬＣにより精製した０．２３ｍｍｏｌのＢｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－ＯＢｎから、製造例１の工程５－２と同様にしてＢｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－ＯＨを得、次いで実施例１と同様にしてＢｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－ＯＨからＢｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｐｎｅ－ＯＭｅを得、さらに実施例４と同様にしてＢｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｐｎｅ－ＯＭｅから４６ｍｇのトリペプチド（Ｈ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）を得た（総収率２７．８％）。
ＥＳＩ－ＭＳ
［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ ７２６．１３，ｆｏｕｎｄ ７２６．５２

［実施例８］
実施例７で合成したヘプタデカフルオロオクチル基を有するトリペプチド（Ｈ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）のＮ末端に、蛍光物質Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（Thermo Fisher Scientific社製）を融合させた。

１．５ｍＬ容の黒色チューブに、乾燥ＤＭＳＯ（１５μＬ）に溶解させたＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（１２５μｇ）、乾燥ＤＭＳＯ（１５μＬ）に溶解させたＨ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（１．５当量）、及びＤＩＰＥＡ（１．５当量）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し続けた。当該混合物を逆相クロマトグラフィー（アセトニトリル／水／ＴＦＡ＝５：９５：０．１～１０：９５：０．１）で精製し、凍結乾燥して蛍光コンジュゲート２を青色固体として得た（蛍光計で計算して収率５．７％、発光波長＝６５０ｎｍ）。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ
［Ｍ］^－：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_５５Ｈ_７２Ｎ_５Ｏ_１７Ｓ_４ ^－ １５６４．２８３６，ｆｏｕｎｄ １５６４．５７０１

［比較例１］
ブチル基を有するジペプチド（Ｈ－Ｎｌｅ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）を合成した。

既報（Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1987, vol.35, p.468）に従って、Ｂｏｃ－Ｎｌｅ－Ｐｈｅ－Ｏｍｅを合成した（収量５５６ｍｇ、収率４０．２％）。

２５ｍＬ容の二口フラスコに撹拌子を入れ、一方にＢｏｃ－Ｎｌｅ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（１．４２ｍｍｏｌ）とＤＣＭ（１０ｍＬ）を加えた。この反応混合物を０℃に冷却した後、ＴＦＡ（２ｍＬ）を添加し、室温まで温めた。４時間攪拌した後、炭酸水素ナトリウム水溶液を添加して反応を終了させた。水相をＤＣＭで抽出し、合わせた有機相を減圧留去して、化学量論量のＨ－Ｎｌｅ－Ｐｈｅ－ＯＭｅを得た。生成物は、それ以上精製せずに使用した。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＡＣＥＴＯＮＥ－Ｄ６）
Ｒｏｔａｍｅｒ Ａ
Δ８．０９－７．８８（ｍ，１Ｈ），７．４２－７．０４（ｍ，５Ｈ），４．６７（ｄｄ，Ｊ＝１１．０，４．６Ｈｚ，１Ｈ），４．５９（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），３．２２（ｄｄ，Ｊ＝１３．７，４．６Ｈｚ，１Ｈ），３．００（ｄｄ，Ｊ＝１４．０，１０．７Ｈｚ，１Ｈ），２．００－１．８０（ｍ，２Ｈ），１．４８－１．１８（ｍ，２Ｈ），０．８３－０．７３（ｍ，３Ｈ）
Ｒｏｔａｍｅｒ Ｂ
７．６０（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．４２－７．０４（ｍ，５Ｈ），４．７５（ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），４．２５（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６４（ｓ，３Ｈ），３．１０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．００－１．８０（ｍ，２Ｈ），１．４８－１．１８（ｍ，２Ｈ），０．８６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）

［比較例２］
ブチル基を有するトリペプチド（Ｈ－Ａｌａ－Ｎｌｅ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）を合成した。

５０ｍＬ容の二口丸底フラスコに、Ｆｍｏｃ－Ａｌａ－ＯＨ（１．１当量）、ＨＯＡｔ（１．１当量）、及びＤＩＰＥＡ（１．３当量）を加えた。２０ｍＬのＤＣＭに溶解させたＨＡＴＵ（１．１当量）及びジペプチド（Ｈ－Ｎ１－Ｐｈｅ－ＯＭｅ、１．４２ｍｍｏｌ）を０℃で混合物に添加した。当該混合物を室温まで温め、次いで１．５時間撹拌した後、ＨＣｌ（１Ｎ）を加えて反応を停止させた。 当該混合物をＨＣｌ（１Ｎ）とＤＣＭとの間で分配した。合わせた有機相を減圧留去させ、次いで酢酸エチルで希釈した。有機相をＨＣｌ（１Ｎ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液、及びブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、蒸発させて白色固体を得た。粗混合物に、２５ｍＬの２０％ピペリジンＤＭＦ溶液を加え、室温で１時間撹拌した。 溶媒を真空乾燥により除去して白色固体を得、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｅｔ_２Ｏ：ＤＣＭ＝１：３）により精製して、Ｈ－Ａｌａ－Ｎｌｅ－Ｐｈｅ－ＯＭｅを得た（ｄｒ＞９５、１１６ｍｇ、収率２３．０％）。

ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ
［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ ３６４．２２，ｆｏｕｎｄ ３６４．０７
［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ ３８６．２１，ｆｏｕｎｄ ３８６．０６

［比較例３］
比較例２で合成したブチル基を有するトリペプチド（Ｈ－Ａｌａ－Ｎｌｅ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）のＮ末端に、蛍光物質Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７を融合させた。

１．５ｍＬ容の黒色チューブに、乾燥ＤＭＳＯ（１５μＬ）に溶解させたＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（２５０μｇ）、乾燥ＤＭＳＯ（１５μＬ）に溶解させたＨ－Ａｌａ－Ｎｌｅ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（１．５当量）、及びＤＩＰＥＡ（１．５当量）を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し続けた。当該混合物を逆相クロマトグラフィー（アセトニトリル／水／ＴＦＡ＝３０：７０：０．１～９５：５：０．１）で精製し、凍結乾燥して蛍光コンジュゲート３を青色固体として得た（蛍光計で計算して収率７４．５％、発光波長＝６５０ｎｍ）。
ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ
［Ｍ］^－：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_５５Ｈ_７２Ｎ_５Ｏ_１７Ｓ_４ ^－ １２０２．３８１２，ｆｏｕｎｄ １２０２．１４４９

［試験例１］
実施例６で合成したペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）と比較例３で合成したペプチド蛍光コンジュゲート３（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ｎｌｅ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）を培養細胞に接触させ、細胞内への取り込み効率を調べた。さらに、比較対象として、ブチル基を有さないトリペプチド（Ｈ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）のＮ末端に、蛍光物質Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒｏ ６４７を融合させたペプチド蛍光コンジュゲート４（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）も用いた。

ＨｅＬａ細胞は、ペプチド処理の２４時間前にカバーガラスチャンバーに播種した（０．５×１０^５細胞／ウェル）。
細胞取り込みアッセイは、培地（１０％ＦＢＳ及び１％ペニシリン-ストレプトマイシン溶液を含有させたＤＭＥＭ低グルコース培地）に、最終濃度が３．３μＭとなるようにペプチド蛍光コンジュゲート１又は２を添加した０．４％ＤＭＳＯ培地（添加剤なし）で培地交換することによって行った。培地交換後の細胞を３７℃で１時間インキュベートし、細胞培養培地及びＰＢＳ（リン酸生理食塩水）で洗浄した。

細胞をTrypLETM Express（Gibco社製）で処理した後に回収し、次いでフローサイトメトリー（guava easyCyte（商標）8）により分析した。赤色２蛍光（６６１／１９ｎｍ）を測定した。結果を図１に示す。縦軸が細胞数（ｃｏｕｎｔ）、横軸が各細胞の蛍光強度である。図１に示すように、ペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）は、ペプチド蛍光コンジュゲート３よりも、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７の蛍光を発する細胞の割合がおよそ２倍以上も多かった。この結果から、フルオロアルキル基を有するペプチドであるＡｌｅｘａ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅは、フルオロアルキル基を有さないペプチドよりも、細胞内への取り込み効率が高く、細胞膜透過性に優れることが示唆された。

［試験例２］
実施例８で合成したペプチド蛍光コンジュゲート２（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）の細胞内への取り込み効率を調べた。比較対象として、ペプチド蛍光コンジュゲート１（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）、ペプチド蛍光コンジュゲート３（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ｎｌｅ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）、及びペプチド蛍光コンジュゲート４（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）も用いた。

ＨｅＬａ細胞は、ペプチド処理の２４時間前に１２ウェルカバーガラスチャンバーに播種した（１．０×１０^５細胞／ウェル）。
細胞取り込みアッセイは、培地に、ペプチド蛍光コンジュゲート１、２、３、又は４を、最終濃度が１．５μＭとなるように添加した以外は、試験例１と同様にして行った。次いで、試験例１と同様にして、細胞を回収してフローサイトメトリーにより分析した。

結果を図２に示す。縦軸が細胞数（ｃｏｕｎｔ）、横軸が各細胞の蛍光強度である。図２に示すように、ペプチド蛍光コンジュゲート２（Ａｌｅｘａ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）は、ペプチド蛍光コンジュゲート３及び４よりも、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７の蛍光を発する細胞の割合がおよそ１６倍以上も多かった。また、ペプチド蛍光コンジュゲート２は、ペプチド蛍光コンジュゲート１よりも、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７の蛍光を発する細胞の割合がおよそ６倍以上も多かった。この結果から、フルオロアルキル基を有するペプチドであるＡｌｅｘａ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅは、フルオロアルキル基を有さないペプチドよりも、細胞内への取り込み効率が高く、細胞膜透過性に優れることが示唆された。

［実施例９］
トリデカフルオロヘキシル基を有するトリペプチド（Ｈ－Ａｌａ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）を合成した。

ＴＨＦ（１ｍＬ）に溶解させた化合物１（２００ｍｇ）をＬＤＡ（２．２当量）に添加し、アルゴン下で３０分間、乾燥ＴＨＦ（１ｍＬ）中で－７８℃に保った。次いで、ＲＦＣＨ_２ＣＨ_２Ｉ（１．１当量）を混合物に添加して、３時間撹拌した。その後、混合物をゆっくりと－３０℃にし、一晩撹拌した後、０℃で当該混合物に水（５ｍＬ）を加えて反応を停止させた。次いで、当該混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（２００ｍＬ×３）で抽出した。生成物をアルミナ上で、カラムによって白色の固体を得た（収率５４．１％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ ＣＤＣｌ_３） δ＝１．４５（ｓ，９Ｈ），２．７８－２．６６（ｍ，２Ｈ），３．２３－３．２７（ｍ，２Ｈ），４．０３（ｔ，１Ｈ），７．２－７．７（ｍ，１０Ｈ）
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ ＣＤＣｌ_３） δ＝－１２６．２（ｍ，２Ｆ），－１２３．４（ｍ，２Ｆ），－１２２．９（ｍ，２Ｆ），－１２１．９（ｍ，２Ｆ），１１４．９（ｍ，１Ｆ），１１４．２（ｍ，１Ｆ），－８０．８（ｔ，３Ｆ）

ＨＣｌ（６Ｍ、５０ｍＬ）及び１，４－ジオキサン（２００ｍＬ）に溶解した化合物２（５０．８ｍｍｏｌ）の溶液を、８０℃で２４時間加熱した。当該溶液を濾過し、沈殿物をアセトンで数回洗浄した。得られた白色固体は、さらに精製することなく次の工程で使用するのに十分な純度であった（収率５０．２％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ ＭｅＯＨ－ｄ４） δ＝２．１１（ｍ，２Ｈ），２．３５（ｍ，１Ｈ），２．５２（ｍ，１Ｈ），３．６８（ｍ，１Ｈ）
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ ＭｅＯＨ－ｄ４） δ＝－１２７．２（ｍ，２Ｆ），－１２４．４（ｍ，２Ｆ），－１２３．８（ｍ，２Ｆ），－１２２．８（ｍ，２Ｆ），－１１５．７（ｍ，２Ｆ），－８２．３（ｔ，３Ｆ）

５０ｍＬ容の二口丸底フラスコに撹拌子を添加し、化合物３（１００ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）及びＤＣＭ（１０ｍＬ）を加えた。Ｆｍｏｃ－ＯＳｎ（０．２４ｍｍｏｌ）及びＤＩＰＥＡ（１．３当量）を室温で加え、次いで反応混合物を室温で２０時間撹拌した。反応混合物を直接蒸発させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３＝１／９）により白色固体として精製した（６４．２％収率）。

２５ｍＬ容の二口丸底フラスコに、Ｆｍｏｃ－ＲＦＡＡ－ＯＨ（９０．４ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（１．２当量）、及びＤＩＰＥＡ（１．３当量）を加えた。当該混合物に、ＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解させたＨＡＴＵ（１．２当量）及びＨ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（ＨＣｌ塩、１．２当量）を０℃で添加し、当該混合物を室温まで温め、次いで４時間撹拌した。次いで、ＨＣｌ（１Ｎ）を加えて反応を停止させた後、混合物をＨＣｌ（１Ｎ）とＤＣＭとの間で分配した。合わせた有機相を蒸発させ、次いで酢酸エチルで希釈した。有機相をＨＣｌ（１Ｎ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液、及びブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、蒸発させて白色固体を得た。 粗混合物に、２０％ピペリジンＤＭＦ溶液（２５ｍＬ）を加え、室温で１時間撹拌した。溶媒を真空乾燥により除去して白色固体を得、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ＝１０：１）により精製してＨ－ＲＦＡＡ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ（４１．４ｍｇ、収率６４．８％）を得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ Ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ６） δ＝１．９６（ｍ，２Ｈ），２．３２（ｍ，２Ｈ），２．８１（ｂｒ ｓ，ＮＨ２），２．９９－３．１５（ｍ，２Ｈ），３．１５（ｓ，３Ｈ），４．０５（ｔ，１Ｈ），４．７１（ｍ，１Ｈ）７．２－７．７（ｍ，５Ｈ）
^１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ Ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ６） δ＝－１２６．７（ｍ，２Ｆ），－１２３．８（ｍ，２Ｆ），－１２３．４（ｍ，２Ｆ），－１２２．４（ｍ，２Ｆ），－１１４．６（ｍ，２Ｆ），－８１．４（ｔ，３Ｆ）

２５ｍＬ容の二口丸底フラスコに、Ｆｍｏｃ－ＲＦＡＡ－ＯＨ（４４．８μｍｏｌ）、ＨＯＡｔ（１．２当量）、及びＤＩＰＥＡ（１．３当量）を加えた。ＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解させたＨＡＴＵ（１．２当量）、及びＦｍｏｃ－ＡｌａＯＨ（１．２当量）を０℃で混合物に添加した後、混合物を室温まで温め、次いで４時間撹拌した。ＨＣｌ（１Ｎ）を加えて反応を停止させた後、当該混合物をＨＣｌ（１Ｎ）とＤＣＭとの間で分配した。合わせた有機相を蒸発させ、次いで酢酸エチルで希釈した。有機相をＨＣｌ（１Ｎ）、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液、及びブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、蒸発させて白色固体を得た。 粗混合物に５ｍＬの２０％ピペリジンＤＭＦ溶液を加え、室温で１時間撹拌した。溶媒を減圧留去して白色固体を得て、それをＨＰＬＣにより精製した。
ＥＳＩ－ＭＳ
［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ ７５４．１６，ｆｏｕｎｄ ６５４．５２

［比較例４］
オクチル基を有するトリペプチド（Ｂｏｃ－ｎＯｃｔｙｌ－Ｐｈｅ－ＯＭｅ）を合成した。

Ｂｏｃ－ｎＯｃｔｙｌ－Ｐｈｅ－ＯＭｅは、既報（Liebigs Annalen der Chemie，1990, 12p, p. 1175-1183）に記載の方法で製造した。当該ジペプチドのＢｏｃ脱保護は、上記と同じ標準的手順で行った（歩留まり１００％）。また、トリペプチドの合成は、前述の手順に従って行った。
ＥＳＩ－ＭＳ
［Ｍ＋Ｈ］^＋：ｍ／ｚ ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ ４２０．２９，ｆｏｕｎｄ ４２０．７２

［実施例１０］
ヘプタデカフルオロオクチル基を有するジペプチド（Ｂｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｇｌｙ－ＯＭｅ）を合成した。

シュウ酸ジベンジルの代わりにシュウ酸ジアリル（３．４ｇ）を用いた以外は実施例７と同様にして、３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１０－ヘキサデカフルオロ－２，２－ジヒドロデカン酸アリルの粗生成物を、収率８０．９％で得た。得られた生成物は、精製することなく、次工程に用いた。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ Ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ６） δ＝６．２５－５．７１（ｍ，１Ｈ），５．６５－５．０３（ｍ，２Ｈ），４．９７－４．５２（ｍ，２Ｈ）
^１９Ｆ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ Ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ６） δ＝８１．７２（ｍ，３Ｆ），－１２０．３０（ｓ，４Ｆ），－１２２．２４（ｓ，６Ｆ），－１２３．２６（ｓ，２Ｆ），－１２６．７９（ｄ，Ｊ＝５４．５Ｈｚ，２Ｆ）

得られた粗生成物を、６４℃、２．２ｍｍＨｇで昇華精製した以外は実施例７と同様にして、３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１０－ヘキサデカフルオロ－２－オキソデカン酸アリルを、収率６０．３％で得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ＝６．０８－５．７９（ｍ，１Ｈ），５．５９－５．１３（ｍ，２Ｈ），４．８９－４．８０（ｍ，２Ｈ）
^１９Ｆ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ＝－８１．０３（ｔ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，３Ｆ），－１１７．８８（ｔ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，２Ｆ），－１２１．２５（ｍ，４Ｆ），－１２１．９６（ｍ４Ｆ），－１２２．８５（ｓ，２Ｆ），－１２６．３１（ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｆ）

次に、シリカゲルクロマトグラフィーにおいてヘキサン：酢酸エチル＝９：１に対して１％のトリエチルアミンを加えたものを溶離液とした以外は実施例７と同様にして、α－イミノエステルを、収率９５．１％で得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ＝６．０１－５．８２（ｍ，１Ｈ），５．４９－５．３０（ｍ，２Ｈ），４．８１（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ），１．６３－１．４９（ｍ，９Ｈ）
^１９Ｆ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ＝－７９．９８～－８２．００（ｍ，３Ｆ），－１１２．５８（ｍ，２Ｆ），－１２０．１０（ｓ，２Ｆ），－１２１．１１（ｓ，２Ｆ），－１２１．８０（ｍ，４Ｆ），－１２２．７１（ｓ，２Ｆ），－１２６．３８（ｍ，２Ｆ）

得られたイミノエステル（２．０ｇ，３．２ｍｍｏｌ）の乾燥ジエチルエーテル（３０ｍＬ）溶液に、攪拌しながら、２－ピコリンボラン（１当量）を０℃で加えた。反応混合物を室温で１．５時間攪拌した後、ＨＣｌ（１Ｎ）（２０ｍＬ）で希釈した。有機相をＨＣｌ（１Ｎ）で２回洗浄し、減圧濃縮して得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝９：１）で精製して、α－ブトキシカルボニルアミノエステルを黄色固体として得た（収率５４％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ６．０１－５．７９（ｍ，１Ｈ），５．５１－４．９７（ｍ，４Ｈ），４．８４－４．６２（ｍ，２Ｈ），１．５７－１．３５（ｍ，９Ｈ）
^１９Ｆ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ－８０．９６（ｔ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，３Ｆ），－１１５．８１（ｄ，Ｊ＝２８０Ｈｚ，１Ｆ），－１１８．１０（ｄ，Ｊ＝２８１Ｈｚ，１Ｆ），－１２０．８８～－１２３．３９（ｍ，１０Ｆ），－１２６．２３（ｍ，２Ｆ）

得られたα－ブトキシカルボニルアミノエステル（１．２ｇ、１．９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１８ｍＬ）溶液に、フェニルシラン（２当量）とテトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（５ｍｏｌ％）を０℃で加えて、室温で２時間攪拌した。反応混合物をＨＣｌ（１Ｎ）（１０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭで２回抽出した。有機相を減圧濃縮し、得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝６：１／１％酢酸）で精製して、２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１０－ヘプタデカフルオロドデカン酸を淡黄色液体として得た（収率７４％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ＝５．０３（ｍ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），１．３８（ｓ，９Ｈ）
^１９Ｆ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３） δ＝－８０．８７（ｔ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，３Ｆ），－１１５．７８（ｄ，Ｊ＝２８１．１Ｈｚ，１Ｆ），－１１８．１２（ｄ，Ｊ＝２８１．１Ｈｚ，１Ｆ），－１２０．１６～－１２３．４３（ｍ，１０Ｆ），－１２６．１９（ｓ，２Ｆ）

乾燥させた２５ｍＬ容の二つ口なすフラスコ中で、２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１０－ヘプタデカフルオロドデカン酸（１５．４ｍｇ、２６．０μｍｏｌ）、ＤＣＭ（２ｍＬ）、ＤＩＰＥＡ（５７μｍｏｌ）、グリシン メチルエステル塩酸塩（２９μｍｏｌ）、及び（ヒドロキシイミノ）シアノ酢酸エチル（ｏｘｙｍａ）（CAS RN：3849-21-6）（２９μｍｏｌ）を、混合して攪拌した。反応混合物を０℃に冷却し、（１－シアノ－２－エトキシ－２－オキソエチリデンアミノオキシ）ジメチルアミノモルフォリノカルベニウムヘキサフルオロホスファート（ＣＯＭＵ）（CAS RN：1075198-30-9）（２９μｍｏｌ）を加え、室温にして１．５時間攪拌した。その後、反応混合物をＨＣｌ（１Ｎ）でクエンチし、ＤＣＭで３回抽出した。合わせた有機相を減圧濃縮した後、酢酸エチルで希釈し、ＨＣｌ（１Ｎ）、飽和重曹水、及び飽和食塩水で洗浄した。洗浄後の有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過した後、減圧濃縮してＢｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｇｌｙ－ＯＭｅの粗生成物を得た。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン＝１／３）で精製して、Ｂｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｇｌｙ－ＯＭｅを得た。（収率９２％）

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ６） δ＝８．２５（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），６．６６（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ），５．４４－５．１９（ｍ，１Ｈ），４．０７（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ）
^１９Ｆ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ６） δ＝－８１．５３（ｓ，３Ｆ），－１１５．３１（ｄ，Ｊ＝２８１．１Ｈｚ，１Ｆ），－１１９．１５～－１２０．９２（ｍ，１Ｆ），－１２０．９２～－１２４．３８（１０Ｆ），－１２５．５４～－１２７．８２（ｍ，２Ｆ）

［実施例１１］
ヘプタデカフルオロオクチル基を有するジペプチド（Ｂｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ａｌａ－ＯＭｅ）を合成した。

グリシン メチルエステル塩酸塩に代えてアラニン メチルエステル塩酸塩を用いた以外は実施例１０と同様にして、２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１０－ヘプタデカフルオロドデカン酸（１５μｍｏｌ）からＢｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ａｌａ－ＯＭｅ（ジアステレオマーの４７：５３混合物）を得た（収率７４％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ６） δ＝８．２２－８．２７（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８２－６．４３（ｍ，１Ｈ），５．４４－５．１９（ｍ，１Ｈ），４．６４－４．４０（ｍ，１Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ），１．３８－１．４０（ｄ，３Ｈ）
^１９Ｆ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ６） δ＝－８０．９１（ｔ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，３Ｆ），－１１３．８７～－１１５．７７（ｍ，１Ｆ），－１１９．２２～－１１９．９８（ｍ，１Ｆ），－１２０．６７～－１２１．３５（ｍ，２Ｆ），－１２１．４８（ｍ，６Ｆ），－１２２．０３～－１２２．８１（ｍ，２Ｆ），－１２６．００（ｍ，２Ｆ）

［実施例１２］
ヘプタデカフルオロオクチル基を有するジペプチド（Ｂｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｌｅｕ－ＯＭｅ）を合成した。

グリシン メチルエステル塩酸塩に代えてロイシン メチルエステル塩酸塩を用い、かつシリカゲルクロマトグラフィーを行わなかった以外は実施例１０と同様にして、２－（（ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－３，３，４，４，５，５，６，６，７，７，８，８，９，９，１０，１０，１０－ヘプタデカフルオロドデカン酸（１５μｍｏｌ）からＢｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｌｅｕ－ＯＭｅ（ジアステレオマーの４９：５１混合物）を得た（収率８３％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ６） δ＝８．１９（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．６４（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），５．４５－５．１３（ｍ，１Ｈ），４．６８－４．４７（ｍ，１Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），１．８１－１．６６（ｍ，１Ｈ），１．４２（ｓ，９Ｈ），０．９６－０．８８（ｍ，６Ｈ）
^１９Ｆ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ａｃｅｔｏｎｅ－ｄ６） δ＝－８１．５６（ｔ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，３Ｆ），－１１５．４９（ｍ，Ｊ＝２７２．５１Ｆ），－１１９．４０～－１２０．８８（ｍ，１Ｆ），－１２１．３３～－１２３．０４（ｍ，１０Ｆ），－１２６．６３（ｍ，２Ｆ）

［実施例１３］
ヘプタデカフルオロオクチル基を有するジペプチド（Ｂｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＭｅ）を合成した。

グリシン メチルエステル塩酸塩に代えてリジン（Ｂｏｃ）メチルエステル塩酸塩を用いた以外は実施例１０と同様にして、Ｂｏｃ－ＲＦＡＡ（Ｃ８）－Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）－ＯＭｅを得た（収率６９％）。

^１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．７１（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），７．５１－７．５４（ｍ，１Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），５．６７（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），５．１３（ｓ，１Ｈ），４．５７－４．６２（ｍ，２Ｈ），３．７５（ｓ，３Ｈ），１．４５（ｓ，１８Ｈ），１．１０－１．９０（ｍ，６Ｈ）
^１９Ｆ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ －８０．６３（ｓ，３Ｆ），－１１４．５６（ｄ，Ｊ＝２８１．１Ｈｚ，１Ｆ），－１１９．１０（ｄ，Ｊ＝２８４．０Ｈｚ，１Ｆ），－１２２．６１―－１２０．８６（ｍ，１０Ｆ），－１２６．０２（ｓ，２Ｆ）

ＬＲＭＳ（ＥＳＩ－ＴＯＦ）
［Ｍ＋Ｎａ］^＋：ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_２７Ｈ_３４Ｆ_１７Ｎ_３ＮａＯ_７ ８５８．２０，ｆｏｕｎｄ ８５８．０３

［比較例５］
Ａｃ－Ｌ－Ａｌａ－Ｌ－Ａｌａ－ＮＨＢｎを合成した。

化合物２２０（６１ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）及び化合物２２２（６８ｍｇ）を３ｍＬのメタノールに溶解させ、当該溶液にＤＭＴＭＭ（４－（４，６－ジメトキシ－１,３,５－トリアジン－２－イル）－４－メチルモルホリニウムクロリド）・３．２Ｈ_２Ｏ（１３５ｍｇ）を加えた。当該反応混合物を室温で１２時間撹拌し、真空で蒸発させた。当該反応混合物にＤＣＭを加え、当該溶液を１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液、水、１Ｍ ＨＣｌ水溶液、水、及びブラインで洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で蒸発させて、化合物２４０（９２ｍｇ、収率８３％）を得た。

化合物２４０（９２ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ４ｍＬとＴＨＦ １ｍＬに溶解させた。当該溶液に１．２５ｍＬのＴＦＡを０℃で加え、当該混合物を１５分間撹拌した。次に、反応混合物を室温まで温め、３時間撹拌した。当該反応混合物に１Ｍ ＮａＨＣＯ_３水溶液を加え、得られた溶液を２時間撹拌した。この混合物をＤＣＭで４回抽出した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で蒸発させて化合物２４１を得た。

３ｍＬ ＤＣＭ中の化合物２４１（７３ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）に、無水酢酸（３３μＬ）を加えた。当該反応混合物を室温で２４時間撹拌し、次いで真空で蒸発させた。残渣を１０ｍＬの４０％ アセトニトリル水溶液に溶解させ、ＨＰＬＣの逆相カラムを用いて精製し、化合物２４２（９ｍｇ、収率１１％）を得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００ＭＨｚ）：δ７．３３－７．２０（ｍ，５Ｈ），４．４２－４．３３（ｍ，３Ｈ），４．２９（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），１．９６（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｄ，Ｊ＝６．８７Ｈｚ，３Ｈ），１．３３（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）．
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ．ｍ／ｚ）
［Ｍ＋Ｎａ］^＋：ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_１５Ｈ_２１Ｎ_３Ｏ_３Ｎａ ３１４．１５，ｆｏｕｎｄ ３１３．８８．

［実施例１４］
Ａｃ－Ｄ，Ｌ－Ａｌａ（Ｆ_３）－Ｌ－Ａｌａ－ＮＨＢｎを合成した。

Ｄ，Ｌ－トリフルオロアラニン塩酸塩（化合物２４３）（５２ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を３ｍＬのアセトニトリルに溶解した。当該溶液に、ＤＩＰＥＡ（５７μＬ）と二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（７７μＬ）を０℃で加えた。当該反応混合物を２１時間かけて室温まで温めた。当該溶液を真空で蒸発させ、水を残渣に加えた。当該溶液をジエチルエーテルで３回抽出した。水相に１Ｍ ＨＣｌ水溶液を加え、当該溶液をジエチルエーテルで３回抽出した。合わせた有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空中で蒸発させて、化合物２４４を白色の固体として得た（６２ｍｇ、収率９１％）。

化合物２４４（４０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）及び化合物２２２（２９ｍｇ）を１．５ｍＬのメタノールに溶解させ、当該溶液にＤＭＴＭＭ・３．２Ｈ_２Ｏ（６２ｍｇ）を加えた。反応混合物を室温で１１．５時間撹拌し、真空で蒸発させた。当該反応混合物にＤＣＭを加え、得られた溶液を１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液、水、１Ｍ ＨＣｌ水溶液、水、及びブラインで洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で蒸発させて、化合物２４５（４５ｍｇ、収率６８％）を得た。

化合物２４５（４５ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）をＤＣＭ ４ｍＬとＴＨＦ １ｍＬに溶解させた。当該溶液に１．２５ ｍＬのＴＦＡを０℃で加え、混合物を１５分間撹拌した。次に、反応混合物を室温まで温め、３時間撹拌した。当該反応混合物に１Ｍ ＮａＨＣＯ_３水溶液を加え、得られた溶液を２時間撹拌した。この混合物をＤＣＭで４回抽出した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で蒸発させて、化合物２４６（４１ｍｇ、定量的収率）を得た。

３ｍＬ ＤＣＭ中の化合物２４６（４１ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）に、無水酢酸（６７μＬ）を加えた。当該反応混合物を室温で２４時間撹拌し、次いで真空で蒸発させた。残渣を１０ｍＬの４６％ アセトニトリル水溶液に溶解させ、ＨＰＬＣの逆相カラムを用いて精製し、化合物２４７を白色の固体（０．３ｍｇ、収率１％）として得た。当該分子は、ジアステレオ混合物として得られ、そのまま透過性アッセイに使用した。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００ＭＨｚ）：δ７．３３－７．２２（ｍ，５Ｈ），５．３７－５．２９（ｍ，１Ｈ），４．４５－４．３８（ｍ，３Ｈ），２．６６（ｓ，３Ｈ），１．４０－１．３８（ｍ，３Ｈ）．
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ．ｍ／ｚ）
［Ｍ＋Ｎａ］^＋：ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_１５Ｈ_１８Ｆ_３Ｎ_３Ｏ_３Ｎａ ３６８．１２，ｆｏｕｎｄ ３６７．９２．

［比較例６］
Ａｃ－Ｌ－Ａｌａ－Ｌ－Ｐｈｅ－ｉＢｕを合成した。

化合物２０１（７００ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ）及びイソブチルアミン（１８１μＬ）を２３ｍＬのメタノールに溶解させ、当該溶液にＤＭＴＭＭ・１．３Ｈ_２Ｏ（８３８ｍｇ）を加えた。当該反応混合物を室温で５時間撹拌し、真空で蒸発させた。当該反応混合物にＤＣＭを加え、得られた溶液を１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液、水、１Ｍ ＨＣｌ水溶液、水、及びブラインで洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＝４：６）で精製し、化合物２４８（５２３ｍｇ、収率６５％）を得た。

回収フラスコに化合物２４８（５２３ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）、パラジウム炭素１０％（５５ｍｇ）及び７．４ｍＬ メタノールを加えた。当該フラスコにＨ_２を導入し、当該混合物を室温で１５時間撹拌した。当該反応混合物をセライトで濾過した。溶媒を減圧下で除去して、化合物２４９（３１９ｍｇ、収率９８％）を得た。

化合物２０５（４５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及び化合物２４９（５３ｍｇ）を２ｍＬのメタノールに溶解させ、当該溶液を室温で撹拌した。当該溶液にＤＭＴＭＭ・１．３Ｈ_２Ｏ（７４ｍｇ）を加えた。当該反応混合物を室温で２３時間撹拌し、真空で蒸発させた。当該反応混合物にＤＣＭを加え、得られた溶液を１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液、水、１Ｍ ＨＣｌ水溶液、水、及びブラインで洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／メタノール＝１９：１）で精製し、化合物２５０（９．１ｍｇ、収率１１％）を得た。

回収フラスコに、化合物２５０（９．１ｍｇ、２１μｍｏｌ）、１０％ パラジウム炭素（２．８ｍｇ）、２ｍＬのメタノールを加えた。当該フラスコにＨ_２を導入し、混合物を室温で２２時間撹拌した。当該反応混合物をセライトで濾過した。溶媒を減圧下で除去して、化合物２５１（７．４ｍｇ、定量的収率）を得た。

１ｍＬ ＤＣＭ及び０．２ｍＬ ＮＭＰ（Ｎ－メチルピロリドン）中の化合物２５１（４ｍｇ、１４μｍｏｌ）に、無水酢酸（２３μＬ）を加えた。当該反応混合物を室温で１．５時間撹拌し、次いで真空で蒸発させた。残渣を３．５ｍＬの１４％ アセトニトリル水溶液に溶解させ、ＨＰＬＣの逆相カラムを用いて精製し、化合物２５２（２．０ｍｇ、収率４３％）を得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）：δ７．３２－７．１９（ｍ，１０Ｈ），６．６２（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），５．９０－５．８６（ｍ，２Ｈ），４．５７（ｑ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），４．３９（ｄｑ，Ｊ＝６．９，７．１Ｈｚ，１Ｈ），３．１４（ｄｄ，Ｊ＝６．４，１３．９Ｈｚ，１Ｈ），３．０６－２．９８（ｍ，３Ｈ），１．９４（ｓ，３Ｈ），１．７０－１．６２（ｍ，１Ｈ），１．３３（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），０．７９（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，６Ｈ）．
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ．ｍ／ｚ）
［Ｍ＋Ｎａ］^＋：ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_１８Ｈ_２７Ｎ_３Ｏ_３Ｎａ ３５６．２０，ｆｏｕｎｄ ３５６．２３．

［実施例１５］
Ａｃ－Ｄ，Ｌ－Ａｌａ（Ｆ_３）－Ｌ－Ｐｈｅ－ｉＢｕを合成した。

化合物２４４（４１ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）及び化合物２４９（４５ｍｇ）を１ｍＬのメタノールと０．７ｍＬのＤＣＭに溶解させ、当該溶液にＤＭＴＭＭ・１．３Ｈ_２Ｏ（５９ｍｇ）を加えた。当該反応混合物を室温で一晩撹拌し、真空で蒸発させた。当該反応混合物にＤＣＭを加え、得られた溶液を１Ｍ ＮａＨＣＯ_３水溶液、飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液、及びブラインで洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／メタノール＝１９：１）で精製し、化合物２５３（４７ｍｇ、収率６３％）を得た。

酢酸エチル３ｍＬ中の化合物２５３（４７ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）に、酢酸エチル中の４Ｍ ＨＣｌ（３ｍＬ）を加え、次いで当該溶液を室温で２０分間撹拌した。当該溶液を真空で蒸発させて、化合物２５４（４５ｍｇ、定量的収率）を得た。

２ｍＬ ＤＣＭ中の化合物２５４（３０ｍｇ、７９μｍｏｌ）に、無水酢酸（４５μＬ）を加えた。当該反応混合物を室温で３時間撹拌し、次いで真空で蒸発させた。残渣をアセトニトリル／Ｈ_２Ｏ／ＭｅＯＨ（＝２．４ｍＬ：３．６ｍＬ：２ｍＬ）に溶解させ、ＨＰＬＣの逆相カラムを用いて精製し、化合物２５５（９．４ｍｇ、収率３０％）を得た。当該分子は、ジアステレオ混合物として得られ、そのまま透過性アッセイに使用した。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）：δ７．３４－７．２１（ｍ，５Ｈ），６．８２－６．７６（ｍ，１Ｈ），６．４１（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），５．３（ｓ，１Ｈ），５．１７（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），４．５９－４．５３（ｍ，１Ｈ），３．２１－３．１２（ｍ，１Ｈ），３．０１－２．９２（ｍ，３Ｈ），１．４２（ｄｄ，Ｊ＝６．９，１２．４Ｈｚ，１Ｈ），０．７６（ｄｄ，Ｊ＝６．４，１０．５Ｈｚ，６Ｈ）．
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ．ｍ／ｚ）
［Ｍ＋Ｎａ］^＋：ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_１８Ｈ_２４Ｆ_３Ｎ_３Ｏ_３Ｎａ ４１０．１７，ｆｏｕｎｄ ４１０．１９．

［比較例７］
Ａｃ－Ｌ－Ｖａｌ－Ｌ－Ａｌａ－ＮＭｅ_２を合成した。

Ｎ－カルボベンゾキシ－Ｌ－バリン（化合物２５６）（６０ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）及び化合物２１３（３３ｍｇ）を２．２ｍＬのメタノールに溶解させ、当該溶液にＤＭＴＭＭ・１．３Ｈ_２Ｏ（９１ｍｇ）を加えた。当該反応混合物を室温で一晩撹拌し、真空で蒸発させた。当該反応混合物にＤＣＭを加え、得られた溶液を１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液、水、１Ｍ ＨＣｌ水溶液、水、及びブラインで洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で蒸発させて化合物２５７（７５ｍｇ、収率８９％）を得た。

回収フラスコに、化合物２５７（７７３ｍｇ、３．１０ｍｍｏｌ）、パラジウム炭素１０％（７．５ｍｇ）、及び２．１ｍＬのメタノールを加えた。当該フラスコにＨ_２を導入し、当該混合物を室温で１８時間撹拌した。当該反応混合物をセライトで濾過した。溶媒を減圧下で除去して、化合物２５８（３５ｍｇ、収率７６％）を得た。

０．８ｍＬ ＤＣＭ中の化合物２５８（３５ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）に、無水酢酸（１８μＬ）を加えた。当該反応混合物を室温で２０時間撹拌し、次いで真空で蒸発させた。残渣を４ｍＬの１０％ アセトニトリル水溶液に溶解させ、ＨＰＬＣの逆相カラムを用いて精製し、化合物２５９を白色固体（２７ｍｇ、収率６５％）として得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）：δ７．１０（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），６．４１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），４．８７（ｑｕｉｎ，Ｊ＝６．９，１Ｈ），４．３７（ｄｄ，Ｊ＝６．１，２．６Ｈｚ，１Ｈ），３．０９（ｓ，３Ｈ），２．９９（ｓ，３Ｈ），２．１０－２．０２（ｍ，４Ｈ），１．３４（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，３Ｈ），０．９４（ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ），０．９２（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，３Ｈ）．
ＭＳ（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ．ｍ／ｚ）
［Ｍ＋Ｎａ］^＋：ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_１２Ｈ_２３Ｎ_３Ｏ_３Ｎａ ２８０．１６，ｆｏｕｎｄ ２８０．０５．

［実施例１６］
Ａｃ－Ｄ，Ｌ－Ｖａｌ（Ｆ_６）－Ｌ－Ａｌａ－ＮＭｅ_２を合成した。

Ｄ，Ｌ－ヘキサフルオロバリン（化合物２６０）（５０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）を２．５ｍＬのアセトニトリルに溶解させた。この溶液に、ジ－ｔｅｒｔ－ブチルジカーボネート（４９μＬ）を０℃で加えた。当該反応混合物を１１．５時間かけて室温まで温めた。当該溶液にＤＩＰＥＡ（３８μＬ）を加え、当該反応混合物を室温で６．５時間攪拌した。当該溶液を真空で蒸発させ、水を残渣に加えた。当該溶液をジエチルエーテルで抽出した。 水相に１Ｍ ＨＣｌ水溶液を加え、得られた溶液をジエチルエーテルで３回抽出した。合わせた有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で蒸発させて、化合物２６１（６３ｍｇ、収率８７％）を得た。

化合物２６１（５０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）及び化合物２１３（２１ｍｇ）を０．７ｍＬのメタノールに溶解させ、当該溶液にＤＭＴＭＭ・１．３Ｈ_２Ｏ（５６ｍｇ）を加えた。当該反応混合物を室温で１７時間撹拌し、真空で蒸発させた。当該反応混合物にＤＣＭを加え、得られた溶液を１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液、水、１Ｍ ＨＣｌ水溶液、水、及びブラインで洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で蒸発させて、化合物２６２（５０ｍｇ、収率７７％）を得た。

化合物２６２（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）に、酢酸エチル中の４Ｍ ＨＣｌ（２．５ｍＬ）を加えた後、当該溶液を室温で２時間撹拌した。当該反応混合物に酢酸エチルを加え、得られた溶液を１ Ｍ ＨＣｌ水溶液で２回抽出した。水相に１ Ｍ ＮａＯＨ水溶液をｐＨが１１になるまで加えた。当該溶液をＤＣＭで３回抽出し、有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥した。溶媒を減圧下で除去して、化合物２６３（３８ｍｇ、定量的収率）を得た。

ＤＣＭ（１．２ｍＬ）中の化合物２６３（３８ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）に、無水酢酸（１３μＬ）を加えた。当該反応混合物を室温で１３時間撹拌し、次いで真空で蒸発させた。残渣を８ｍＬの３０％ アセトニトリル水溶液に溶解させ、ＨＰＬＣの逆相カラムを用いて精製し、化合物２６４を白色固体（２７ｍｇ、収率６３％）として得た。当該分子は、ジアステレオ混合物として得られ、そのまま透過性アッセイに使用した。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）：δ７．５７（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，０．５Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，０．５Ｈ），６．２２（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，０．５Ｈ），６．０８（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，０．５Ｈ），５．４１（ｔ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），４．８６－４．７５（ｍ，１Ｈ），４．３５－４．２２（ｍ，１Ｈ），３．０７（ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，３Ｈ），２．９８（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，３Ｈ），２．１４（ｄ，Ｊ＝２．１４Ｈｚ，３Ｈ），１．３２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）．

ＭＳ（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ．ｍ／ｚ）
［Ｍ＋Ｎａ］^＋：ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_１２Ｈ_１７Ｆ_６Ｎ_３Ｏ_３Ｎａ ３８８．１１，ｆｏｕｎｄ ３８８．１８．

［比較例８］
Ａｃ－Ｌ－Ｖａｌ－Ｌ－Ｐｈｅ－ｉＢｕを合成した。

化合物２５６（５２ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及び化合物２４９（５３ｍｇ）を２ｍＬのメタノールに溶解し、溶液を室温で撹拌した。 当該溶液にＤＭＴＭＭ・１．３Ｈ_２Ｏ（７２ｍｇ）を加えた。当該反応混合物を室温で２３時間撹拌し、真空で蒸発させた。当該反応混合物にＤＣＭを加え、得られた溶液を１Ｍ Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液、水、１Ｍ ＨＣｌ水溶液、水、及びブラインで洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／メタノール＝１９：１）で精製し、化合物２６５（６０ｍｇ、収率６７％）を得た。

回収フラスコに、化合物２６５（６０ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）、パラジウム炭素１０％（６ｍｇ）、及び１．３ｍＬのメタノールを加えた。当該フラスコにＨ_２を導入し、混合物を室温で２２時間撹拌した。当該反応混合物をセライトで濾過した。溶媒を減圧下で除去して、化合物２６６（３９ｍｇ、収率９２％）を得た。

化合物２６６（１５ｍｇ、４７μｍｏｌ）を１ｍＬ ＤＣＭ、０．４ｍＬ ＮＭＰ及び０．２ｍＬ ＴＨFに溶解させた。当該溶液に無水酢酸（２３μＬ）を加えた。当該反応混合物を室温で１．５時間撹拌し、次いで真空で蒸発させた。残渣をアセトニトリル／Ｈ_２Ｏ／ＭｅＯＨ（＝１．８ｍＬ：２．９ｍＬ：１．５ｍＬ）に溶解させ、ＨＰＬＣの逆相カラムを用いて精製し、化合物２６７（７．２ｍｇ、収率４３％）を得た。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）：δ７．３０－７．１８（ｍ，５Ｈ），６．５１（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），５．９２（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７５（ｓ，１Ｈ），４．５８（ｄｔ，Ｊ＝６．０，８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．２０（ｄｄ，Ｊ＝６．０，８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．１１（ｄｄ，Ｊ＝６．０，１３．７Ｈｚ，１Ｈ），３．０２－２．９２（ｍ，３Ｈ），２．１０－２．０３（ｍ，１Ｈ），１．９７（ｓ，３Ｈ），１．６６－１．５９（ｍ，１Ｈ），０．８８（ｄｄ，Ｊ＝６．９，１１．５Ｈｚ，６Ｈ），０．７６（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６Ｈ）．

ＭＳ（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ．ｍ／ｚ）
［Ｍ＋Ｎａ］^＋：ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_２０Ｈ_３１Ｎ_３Ｏ_３Ｎａ ３８４．２３，ｆｏｕｎｄ ３８４．１３．

［実施例１７］
Ａｃ－Ｄ，Ｌ－Ｖａｌ（Ｆ_６）－Ｌ－Ｐｈｅ－ｉＢｕを合成した。

化合物２６１（７０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）及び化合物２４９（５７ｍｇ）を１．２ｍＬのメタノールに溶解し、当該溶液にＤＭＴＭＭ・１．３Ｈ_２Ｏ（８３ｍｇ）を加えた。当該反応混合物を室温で５時間撹拌し、真空で蒸発させた。当該反応混合物にＤＣＭを加え、得られた溶液を飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液、１Ｍ ＨＣｌ水溶液、及びブラインで洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／メタノール＝１９：１）で精製し、化合物２６８（７９ｍｇ、収率６９％）を得た。

３ｍＬの酢酸エチル中の化合物２６８に、酢酸エチル中の４Ｍ ＨＣｌ（３ｍＬ）を加えた。当該溶液を室温で１．５時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、化合物２６９（５３ｍｇ、収率７６％）を得た。

２ｍＬ ＤＣＭ中の化合物２６９（４０ｍｇ、８６μｍｏｌ）に、ＤＩＰＥＡ（１６μＬ）及び無水酢酸（４５μＬ）を加えた。当該反応混合物を室温で８．５時間撹拌し、次いで真空で蒸発させた。残渣をアセトニトリル／Ｈ_２Ｏ／ＭｅＯＨ（＝３ｍＬ：３ｍＬ：８ｍＬ）に溶解させ、ＨＰＬＣの逆相カラムを用いて精製し、化合物２７０を白色固体として得た（５．７ｍｇ、収率１３％）。当該分子は、ジアステレオ混合物として得られ、そのまま透過性アッセイに使用した。

^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ_３，４００ＭＨｚ）：δ７．２９－７．１７（ｍ，５Ｈ），５．２９（ｄｑ，Ｊ＝７．８，２３．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６３－４．５８（ｍ，１Ｈ），３．１５－３．０５（ｍ，１Ｈ），３．０１－２．８６（ｍ，３Ｈ），２．０１（ｄ，Ｊ＝４．６ｈｚ，３Ｈ），１．７２－１．６２（ｍ，１Ｈ），０．８２－０．７８（ｍ，６Ｈ）．

ＭＳ（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ ＭＳ．ｍ／ｚ）
［Ｍ＋Ｎａ］^＋：ｃａｌｃｄ．ｆｏｒ Ｃ_２０Ｈ_２５Ｆ_６Ｎ_３Ｏ_３Ｎａ ４９２．１７，ｆｏｕｎｄ ４９１．９７．

［試験例３］
実施例１５～１７及び比較例６～８で合成したペプチドについて、ＰＡＭＰＡアッセイを行った。また、実施例１４、１５、１７及び比較例５、６、８で合成したペプチドについて、ＭＤＣＫ－IIアッセイを行った。ＭＤＣＫ－IIアッセイでは、ポジティブコントロール（「ＰＣ」）としてPropranolol（CAS No：318-98-9）を、ネガティブコントロール（「ＮＣ」）としてNorfloxacin（CAS No：70458-96-7）をそれぞれ用いた。

＜ＰＡＭＰＡ（パラレル人工膜透過性アッセイ）アッセイ＞
ペプチドの透過性は、ＰＡＭＰＡによって測定した。ＰＡＭＰＡアッセイでは、３００μＬの５％ ＤＭＳＯ含有ＰＢＳをアクセプタープレート（ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ ９６ウェルトランスポートレシーバープレート、Ｍｅｒｃｋ社製）の各ウェルに加えた。次いで、５％ ＤＭＳＯ／ＰＢＳに溶解した１５０μＬのペプチド溶液（２０μＭ）をドナープレート（ＭｕｌｔｉＳｃｒｅｅｎ－ＩＰフィルタープレート、０．４５μｍ、Ｍｅｒｃｋ社製）の各ウェルに加えた。１％ レシチン（大豆由来）のドデカン液を使用前に３０分間超音波処理し、５μＬの当該溶液をドナープレートの各ウェルの膜支持体（ＰＶＤＦ）に塗布した。ドナープレートをアクセプタープレート上に置き、当該プレートをインキュベーター内で、２５℃で１８時間放置した。ペプチドの濃度は、ＬＣ／ＭＳを用いて決定した 。実験は３回繰り返して実施した。透過率値（Ｐ_ｅ）は、次の式を使用して計算された。

Ａ：フィルター面積（０．３ｃｍ^２）
ＶＤ：ドナーウェルの体積（０．１５ｃｍ^３）
ＶＡ：アクセプターウェルの体積（０．３ｃｍ^３）
ｔ：インキュベーション時間（s）（１８時間＝ ６４８００ｓ）
ＣＤ（ｔ）：時間ｔでのドナーウェルの化合物濃度
ＣＡ（ｔ）：時間ｔにおけるアクセプターウェルの化合物濃度

＜ＭＤＣＫ－IIアッセイ＞
細胞培養インサート（Ｆａｌｃｏｎ社製）にＭＤＣＫ－II細胞を５．０４×１０^４細胞／ｍＬで播種してから５日後に、細胞単層アッセイ（ＭＤＣＫ－IIアッセイ）を実施した。ペプチドのストック溶液は、ＤＭＳＯ溶液中に２ｍＭで調製し、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５を含むＨＢＳＳによって希釈して、ドナー溶液として、０．１％ＤＭＳＯ／ＨＢＳＳ（＋）を溶媒とした２μＭ ペプチド溶液を調製した。アクセプター溶液は、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ ７．５を含むＨＢＳＳ（＋）を溶媒とした０．１％ ＤＭＳＯ溶液とした。見かけの透過性（Ｐ_ａｐｐ）は、３７℃、５％ ＣＯ_２で２時間、ペプチド溶液で、頂端から側底へのインキュベーションにおいて決定された。ペプチド濃度は、ＬＣ／ＭＳで分析した。実験は３回繰り返して実施した。透過率値（Ｐ_ａｐｐ）は、次の式を用いて算出された。

Ａ：フィルター面積（０．３ｃｍ^２）
ＶＢ：側底ウェル容積（０．７５ｃｍ^３）
ｔ：インキュベーション時間（s）（２時間＝７２００ｓ）
Ｃ０：頂端チャンバーの初期濃度（２μＭ）
ＣＢ（ｔ）：時間ｔでの側底の化合物濃度

ＰＡＭＰＡアッセイの結果を表３に、ＭＤＣＫ－IIアッセイの結果を表４に、それぞれ示す。この結果、比較例５～８のペプチドよりも、それらの側鎖のフッ素原子を導入した実施例１４～１７の含フッ素ペプチドのほうが、細胞膜透過性が向上していた。

本発明は、フルオロアルキル基を側鎖に備えるアミノ酸残基を有するペプチド及びその製造方法を提供する。本発明に係るペプチドは、細胞膜透過性に優れているため、例えば、薬効成分を標的細胞へ導入するためのキャリア等、生理活性物質として、医薬分野での利用が期待される。

Claims (5)

1. 下記一般式（４）
   

   

   （式中、Ｒｆは、少なくとも２個のフッ素原子で置換された、フッ素原子以外のハロゲン原子でさらに置換されていてもよいＣ_１－３０アルキル基（当該Ｃ_１－３０アルキル基がＣ_２－３０アルキル基である場合には、炭素原子間に１～５個のエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい）であり、
   Ｒ^２は、アミノ基の保護基であり、Ｒ^１は、カルボキシル基の保護基である）
   で表される化合物を還元反応に付した後、前記Ｒ^１を脱保護することにより、下記一般式（６－２）
   

   

   （式中、Ｒｆ及びＲ^２は、前記と同じである）
   で表される化合物を合成し、さらに前記一般式（６－２）で表される化合物を、カルボキシル基が保護された含フッ素アミノ酸、カルボキシル基が保護されたアミノ酸、Ｃ末端が保護された含フッ素ペプチド、又はＣ末端が保護されたペプチドと縮合させる、フルオロアルキル基含有ペプチドの製造方法。
2. 下記一般式（４）
   

   

   （式中、Ｒｆは、少なくとも２個のフッ素原子で置換された、フッ素原子以外のハロゲン原子でさらに置換されていてもよいＣ _１－３０ アルキル基（当該Ｃ _１－３０ アルキル基がＣ _２－３０ アルキル基である場合には、炭素原子間に１～５個のエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい）であり、
   Ｒ ^２ は、アミノ基の保護基であり、Ｒ ^１ は、カルボキシル基の保護基である）
   で表される化合物を還元反応に付した後、前記Ｒ ^１ を脱保護することにより、下記一般式（６－２）
   

   

   （式中、Ｒｆ及びＲ ^２ は、前記と同じである）
   で表される化合物を合成し、
   前記一般式（６－２）で表される化合物を、前記Ｒ^２を脱保護することにより、下記一般式（７）
   

   

   （Ｒｆは、前記と同じである）
   で表される化合物を合成し、さらに前記一般式（７）で表される化合物を、
   アミノ基を保護基で保護した後、カルボキシル基が保護された含フッ素アミノ酸、カルボキシル基が保護されたアミノ酸、Ｃ末端が保護された含フッ素ペプチド、又はＣ末端が保護されたペプチドと縮合させる、又は、
   カルボキシ基を保護基で保護した後、アミノ基が保護された含フッ素アミノ酸、アミノ基が保護されたアミノ酸、Ｎ末端が保護された含フッ素ペプチド、又はＮ末端が保護されたペプチドと縮合させる、フルオロアルキル基含有ペプチドの製造方法。
3. 下記一般式（４）
   

   

   （式中、Ｒｆは、少なくとも２個のフッ素原子で置換された、フッ素原子以外のハロゲン原子でさらに置換されていてもよいＣ_１－３０アルキル基（当該Ｃ_１－３０アルキル基がＣ_２－３０アルキル基である場合には、炭素原子間に１～５個のエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい）であり、
   Ｒ^２は、アミノ基の保護基であり、Ｒ^１は、カルボキシル基の保護基である）
   で表される化合物を還元反応に付した後、前記Ｒ^１を脱保護することにより、下記一般式（６－４）
   

   

   （式中、アスタリスクは、アスタリスクを付した不斉炭素原子の絶対配置がＳ又はＲであることを表し、
   Ｒｆ及びＲ^２は、前記と同じである）
   で表される化合物を合成し、さらに前記一般式（６－４）で表される化合物を、カルボキシル基が保護された含フッ素アミノ酸、カルボキシル基が保護されたアミノ酸、Ｃ末端が保護された含フッ素ペプチド、又はＣ末端が保護されたペプチドと縮合させる、フルオロアルキル基含有ペプチドの製造方法。
4. 下記一般式（４）
   

   

   （式中、Ｒｆは、少なくとも２個のフッ素原子で置換された、フッ素原子以外のハロゲン原子でさらに置換されていてもよいＣ _１－３０ アルキル基（当該Ｃ _１－３０ アルキル基がＣ _２－３０ アルキル基である場合には、炭素原子間に１～５個のエーテル結合性の酸素原子を有していてもよい）であり、
   Ｒ ^２ は、アミノ基の保護基であり、Ｒ ^１ は、カルボキシル基の保護基である）
   で表される化合物を還元反応に付した後、前記Ｒ ^１ を脱保護することにより、下記一般式（６－４）
   

   

   （式中、アスタリスクは、アスタリスクを付した不斉炭素原子の絶対配置がＳ又はＲであることを表し、
   Ｒｆ及びＲ ^２ は、前記と同じである）
   で表される化合物を合成し、
   前記一般式（６－４）で表される化合物を、前記Ｒ^２を脱保護することにより、下記一般式（７－１）
   

   

   （式中、アスタリスクは、アスタリスクを付した不斉炭素原子の絶対配置がＳ又はＲであることを表し、
   Ｒｆは、前記と同じである）
   で表される化合物を合成し、さらに前記一般式（７－１）で表される化合物を、
   アミノ基を保護基で保護した後、カルボキシル基が保護された含フッ素アミノ酸、カルボキシル基が保護されたアミノ酸、Ｃ末端が保護された含フッ素ペプチド、又はＣ末端が保護されたペプチドと縮合させる、又は、
   カルボキシ基を保護基で保護した後、アミノ基が保護された含フッ素アミノ酸、アミノ基が保護されたアミノ酸、Ｎ末端が保護された含フッ素ペプチド、又はＮ末端が保護されたペプチドと縮合させる、フルオロアルキル基含有ペプチドの製造方法。
5. さらに、製造されたフルオロアルキル基含有ペプチドのアミノ基又はカルボキシル基の保護基を脱保護する、請求項１～４のいずれか一項に記載のフルオロアルキル基含有ペプチドの製造方法。

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