JP7570640B2 - Ｃｄ２２特異的なｔ細胞受容体およびｂ細胞悪性腫瘍の処置のための養子ｔ細胞療法 - Google Patents

Description

本発明は免疫療法の分野、特にがんに対する養子Ｔ細胞療法またはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）遺伝子療法に関する。本発明は、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１の文脈において、Ｂ細胞系列特異的な抗原ＣＤ２２に由来する配列番号１のペプチドに、特異的に結合し得る少なくとも１つのＴＣＲコンストラクトのＴＣＲα鎖またはβ鎖コンストラクトをコードする核酸を提供する。本発明はまた、対応するタンパク質および該ＴＣＲコンストラクトを発現する宿主細胞、好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞、を提供すると共に、かかる核酸、タンパク質または宿主細胞の医学的使用、特に、ＣＤ２２ポジティブ性を、抗原の細胞表面および細胞内における発現の両者に適用することによる、ＣＤ２２ポジティブなＢ細胞リンパ腫またはＢ細胞白血病の予防および／または処置における医学的使用を提供する。

Ｂ細胞由来腫瘍は依然として西洋における主な死因である。ドイツにおける年間の新規高グレードＢ細胞リンパ腫は約１５００～２０００件とされている。それらの患者の４０％におよぶ患者は初期通常治療後に再発する、あるいはそもそも応答しないため、代替の処置選択肢の切迫した必要性が提示されている。リンパ腫の発症率は年齢と共に急に増加し、７５歳以上の多くの患者においては予後がさらに悪い。急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）の約７５％のケースは形質転換したＢリンパ球由来である（Ｂ系列ＡＬＬ）。ドイツでは年間に約１０００人がＢ系列ＡＬＬだとされている。ＡＬＬの子供はしばしば回復するのに対し、ＡＬＬの老人（この病気は８０歳前後に２回目の発症ピークを有する）は、老年個体における疾患の生物学的な攻撃性、ならびにしばしばおこる併存疾患および脆弱性という両者の理由から、処置が困難である。毒性および耐性獲得という制限があるものの、化学療法はがんの大半の種類において依然主要な処置選択肢である。幹細胞レスキューによる高用量化学療法であっても、第１選択治療後の再発性／難治性疾患の患者の３分の１以下しか救えない。高用量の化学療法に適さない再発性または原発性難治性のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫の患者であって、救命治療に失敗した患者は治療の選択肢をほとんど有さず、その疾患は通常数か月以内に致命的となる。

抗体（ヒト化単独抗体または異なる免疫コンジュゲート）またはＢ細胞系列特異的細胞表面タンパク質、例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０またはＣＤ２２を標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は悪性Ｂリンパ腫を排除するために使用されてきたが、代償として正常Ｂ細胞を枯渇させる。

ＣＡＲは細胞表面の抗原を認識できる、抗体の抗原結合ドメインとＴＣＲドメインを組み合わせたキメラである。よってＣＡＲを発現するように操作されたＴ細胞は、ＣＡＲが結合する抗原を発現している細胞を、ＨＬＡの制限と関係なく標的にする。

例えば、ＣＤ１９を標的とするＣＡＲ Ｔ細胞は再発性のびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）患者において約５０％の成功率を示し、養子Ｔ細胞療法の可能性を実証した。近年、Ｂ細胞抗原ＣＤ１９に対するキメラ抗原受容体遺伝子導入を用いた養子Ｔ細胞療法（ＡＴＴ）の臨床研究がすばらしい成功をおさめ、「がん療法のブレイクスルー」だと称された。いくつかのグループが、主にＢ細胞系列の抗原としてＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ２２を標的とした、同様の戦略を発展させている。

ＣＤ２２は、Ｂリンパ球細胞接着分子またはＢＬ－ＣＡＭとも呼ばれ、正常および腫瘍性Ｂ細胞で強く発現している有効な標的抗原である。この抗原は完全に系列特異的であると長く考えられてきたが、近年、ｉｎ ｖｉｔｒｏの分化後マクロファージおよび樹状細胞における弱い発現が報告された(Jahn et al., 2016 Oncotargets 7:71536-71546)。例えば、エプラツズマブといった抗ＣＤ２２モノクローナル抗体(Dorner et al., 2015, Autoimmun Rev. 14(12):1079-86)、Ｂｓ２０ｘ２２といった二重特異性抗体(Tuscano et al., 2011, Cancer Immunol.Immunother. 60:771-80)、イノツズマブ、オゾガマイシンといった免疫毒素(Dang NH et al., 2018, Br J Haemtol. 182:583-586)、またはＣＤ２２特異的なＣＡＲがこれまで報告され、臨床試験されてきた（ＷＯ２０１２０７９０００Ａ１、ＷＯ２０１３０５９５９３Ａ１、ＷＯ２０１４０１１５１８Ａ１）。最初の臨床試験におけるＣＤ２２特異的なＣＡＲの使用は成功した(Fry et al., 2018, Nat. Med. 24: 20-28)。しかし、標的抗原の細胞表面での発現減少による腫瘍エスケープはＣＡＲを含むすべての抗体基盤戦略の主要な限界であり、高い費用にも関わらず、処置患者の少なくとも５０％が再発する。魅力的な代替案はＭＨＣクラスＩ分子の文脈で提示されるペプチドを認識するＴ細胞受容体によって抗原のエピトープを標的とすることである：表面での発現が減少またはほとんど完全に消失していたとしても、ほとんどの場合該抗原の細胞内における発現は残存している。

ＴＣＲは免疫グロブリンスーパーファミリーのヘテロダイマー性細胞表面タンパク質で、シグナル伝達の仲介に関与するＣＤ３複合体のインバリアントタンパク質と結合する。ＴＣＲは構造的に似ているαβまたはγδの形態で存在するが、かなり異なった解剖学的な局在および推定の機能を持つ。天然にヘテロダイマー性のαβＴＣＲのα鎖およびβ鎖は膜貫通タンパク質であり、それぞれ２つの細胞外ドメイン、膜近位の定常ドメイン、および膜遠位の可変ドメインを含む。各定常ドメインおよび可変ドメインは、鎖内にジスルフィド結合を含む。可変ドメインは抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）に類似した、認識特異性を与える高度な多型ループを含む。

各ＴＣＲ鎖の可変領域は可変セグメントおよび結合セグメントを含み、β鎖の場合は多様性セグメントも含む。各可変領域はフレームワーク配列に埋め込まれた３つのＣＤＲ（相補性決定領域）を含み、１つはＣＤＲ３と呼ばれる超可変領域である。自身のフレームワーク配列、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２、および部分的に定義されたＣＤＲ３配列によって、様々の種類のα鎖可変領域（Ｖα）およびβ鎖可変領域（Ｖβ）が区別される。固有の「ＴＲＡＶ」または「ＴＲＢＶ」番号はＩＭＧＴ（国際免疫遺伝学情報システム）命名法によってＶαまたはＶβに与えられる。Ｔ細胞受容体の抗原エピトープに対する特異性は主にＣＤＲ３領域で決定される(Danska et al., 1990. J. Exp. Med. 172:27-33; Garcia et al., 2005. Cell 122(3): 333-336)。

ＴＣＲ遺伝子療法の使用は患者自身のＴ細胞に、その疲弊を避けつつ、望みの特異性を備え、短期間に多数のＴ細胞を生産することを可能にする。ＴＣＲが中央記憶Ｔ細胞または幹細胞様の特徴を持つＴ細胞（Ｔｓｃｍ）に導入されたなら、導入によってさらなる持続性と機能を確かにし得る。例えば化学療法、または放射線療法でリンパ球が減少したがん患者にＴＣＲを用いたＴ細胞を注入したなら、恒常的なＴ細胞の増殖を促進し、および免疫介在性の拒絶反応を阻害し得る。

ＣＤ２２-エピトープを標的とするＴＣＲは２０１６年にＪａｈｎらによって公開された（Oncotargets 7:71536-71546)。このＴＣＲはＣＤ２２ペプチドに結合するＨＬＡ－Ｂ７四量体を用いてＨＬＡーＢ７ネガティブな個人から単離された。この戦略によると、人口の約１５－２０％程度である、ＨＬＡーＢ７ＭＨＣハプロタイプをもつ個人のみがこのＴＣＲを用いた治療に適している。

この観点から、本発明者らはより高い割合の、Ｂ細胞リンパ腫またはＢ細胞白血病の患者の処置に適したＣＤ２２エピトープを特異的に標的とし得る有利なＴＣＲコンストラクトの提供という問題に取り組んだ。この問題は請求の範囲の対象によって解決される。

本発明者らは白人／西欧人の人口の約４５％に発現するＭＨＣハプロタイプであるＨＬＡ－Ａ^＊０２に関連するＣＤ２２のエピトープを認識するＴＣＲコンストラクトを提供する。特に、好ましい本発明で提供されるＴＣＲコンストラクトは、ＨＬＡ－Ａ^＊０２の文脈で配列番号１のペプチドを認識し、ここで、ＴＣＲα鎖コンストラクトが配列番号４のＣＤＲ３配列を含む、および／またはＴＣＲβ鎖コンストラクトが配列番号２２のＣＤＲ３配列を含む。その他の本発明で提供されるＴＣＲコンストラクトはＨＬＡ－Ａ^＊０２の文脈で配列番号１のペプチドを認識し、ここで、ＴＣＲα鎖コンストラクトは配列番号４のＣＤＲ３配列を含む、および／または、ここで、ＴＣＲβ鎖コンストラクトは配列番号７のＣＤＲ３配列を含む。

本発明の文脈において、ＨＬＡ－Ａ^＊０２はいかなるＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１、 ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０４、０５、０７、１０、および有り得る他のＨＬＡ－Ａ^＊０２のサブタイプを意味するが、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０２および０８は意味しない。以下の詳細に記載するように、当業者に知られた方法で、親和性および特異性がさらに最適化されるであろうことによって、本発明はまた、ＨＬＡ－Ａ^＊０２の文脈で配列番号１のペプチドに特異的に結合し得るＴＣＲコンストラクトの少なくとも１つのＴＣＲα鎖またはβ鎖コンストラクトをコードする核酸を提供する。
ａ）ここで、ＴＣＲα鎖コンストラクトは配列番号４と少なくとも８３％、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸（ａａ－）配列同一性を有するＣＤＲ３配列を含む、および／または、ここで、ＴＣＲβ鎖コンストラクトは配列番号２２と少なくとも８３％、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性、または配列番号７と少なくとも８３％、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ３配列を含む。

したがって、発明者らは２つの別個な、しかし非常に似たＴＣＲβ鎖コンストラクトであって、両者が同じＴＣＲα鎖コンストラクトと対になる、および特異的に配列番号１のペプチドを認識し、好ましくは非ＣＤ２２自己ペプチドへの顕著な交差反応性を持たないＴＣＲコンストラクトを形成する、ＴＣＲβ鎖コンストラクトを提供する。本発明のＴＣＲβ鎖コンストラクトは唯一、ＣＤＲ３の２つのアミノ酸において互いに異なる。

有利には、本発明者らは、本発明のＴＣＲコンストラクトが、患者由来のＣＤ２２発現腫瘍細胞または腫瘍細胞株（実施例を参照）を含む、異なるレベルのＣＤ２２を発現する標的細胞の認識および殺傷から示されるような、高機能なアビディティを有する事を示し得る。好ましい本発明のＴＣＲコンストラクトは、約５^＊１０^－８、好ましくは１．１×１０^－８またはそれ以下のＫｄ値を有する。Ｋｄ値は実験の章で開示するように、Ｔ２細胞におけるペプチド滴定によって決定され得る。本発明のＴＣＲコンストラクトを発現するＴ細胞はまた、ｐｒｅ－ＡＬＬ異種移植マウスモデルにおいて顕著に、腫瘍の成長を減少させ、生存期間を延長させる事ができた。

第１の実施形態では、本発明の核酸において、コードされるＴＣＲα鎖コンストラクトは
１）配列番号２と少なくとも８３％、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ１配列、
２）配列番号３と少なくとも８３％、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ２配列、
３）および配列番号４と少なくとも８３％、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ３配列、
を含む、ならびに／または、ＴＣＲβ鎖コンストラクトは、
４）配列番号５と少なくとも８３％、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ１配列、
５）配列番号６と少なくとも８３％、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ２配列、
６）および配列番号７と少なくとも８３％、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ３配列、
を含む。

好ましくは、それぞれのＣＤＲに対する全てのアミノ酸同一性が少なくとも９０％である。

好ましくは、本発明の核酸において、コードされるＴＣＲα鎖コンストラクトは、配列番号２と少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ１配列、配列番号３と少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ２配列、および配列番号４のＣＤＲ３配列を含む、ならびに／または、ＴＣＲβ鎖コンストラクトは、配列番号５と少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ１配列、配列番号６と少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ２配列、および配列番号７のＣＤＲ３配列を含む。

任意には、本発明の核酸において、コードされるＴＣＲα鎖コンストラクトは、配列番号２と少なくとも９５％の配列同一性を有するＣＤＲ１配列、配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性を有するＣＤＲ２配列、および配列番号４のＣＤＲ３配列を含む、ならびに／または、ＴＣＲβ鎖コンストラクトは、配列番号５と少なくとも９５％の配列同一性を有するＣＤＲ１配列、配列番号６と少なくとも９５％の配列同一性を有するＣＤＲ２配列、および配列番号７のＣＤＲ３配列を含む。

好ましくは、本発明の核酸において、コードされるＴＣＲα鎖コンストラクトは配列番号２のＣＤＲ１配列、配列番号３のＣＤＲ２配列、および配列番号４のＣＤＲ３配列を含む、ならびに／または、ＴＣＲβ鎖コンストラクトは配列番号５のＣＤＲ１配列、配列番号６のＣＤＲ２配列、配列番号７のＣＤＲ３配列を含む。

本発明の核酸において、コードされるＴＣＲα鎖コンストラクトは、配列番号１６と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変領域を含んでいてもよく（リーダー配列を除く、すなわち、ａａ１－２０を除く）、および／またはＴＣＲβ鎖コンストラクトは配列番号１９と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変領域を含んでいてもよい（ａａ１－２５を除く）。リーダー配列はａａ１２－２５である。ＴＣＲ鎖は典型的にはリーダー配列を含まない。実験では、この配列を持つＴＣＲをＣＤ２２ ＴＣＲと呼ぶ。

任意には、本発明の核酸において、ＴＣＲα鎖コンストラクトは、配列番号１６と少なくとも９５％の配列同一性を有する可変領域を含む（リーダー配列を除く、すなわち、ａａ１－２０を除く）、および／またはＴＣＲβ鎖コンストラクトは配列番号１９と少なくとも９５％の配列同一性を有する可変領域を含む（ａａ１－２５を除く）。好ましくは、このような核酸において、定義されたＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域への配列同一性が１００％である。

好ましくは、本発明の核酸において、コードされるＴＣＲα鎖コンストラクトは配列番号１６の可変領域を含む（リーダー配列を除く、すなわち、ａａ１－２０を除く）、および／または
ＴＣＲβ鎖コンストラクトは配列番号１９の可変領域を含む（ａａ１－２５を除く）。

ＴＣＲα鎖の可変領域は配列番号１４、または好ましくは配列番号１５（コドン最適化済み）によってコードされていてもよい。ＴＣＲβ鎖の可変領域は配列番号１７、または好ましくは配列番号１８（コドン最適化済み）によってコードされていてもよい。

発明者らは、本発明のさらなるＴＣＲコンストラクトを同定し、ＣＤ２２ ＴＣＲ ３２２５と名付けた。注目すべきことに、該α鎖コンストラクトは第１のＴＣＲコンストラクトで見られるものと同じである。該β鎖コンストラクトは、配列番号７と少なくとも８３％の配列同一性を有するＣＤＲ３を含む、すなわち、第１のＴＣＲコンストラクトのβ鎖コンストラクトの最適化されたバリアントであると考えられ得る。好ましい第２のＴＣＲコンストラクトのβ鎖コンストラクトは、ＣＤＲ３における２つのアミノ酸の違いを除いて、第１のＴＣＲコンストラクトの好ましいβ鎖コンストラクトと一致する。

したがって、第２に、好ましい実施形態では、本発明の核酸において、コードされるＴＣＲα鎖コンストラクトは、
１） 配列番号２と少なくとも８３％、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ１配列、
２） 配列番号３と少なくとも８３％、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ２配列、
３） および配列番号４と少なくとも８３％、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ３配列、
を含む、ならびに／または、ＴＣＲβ鎖コンストラクトは、
４） 配列番号２０と少なくとも８３％、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ１配列、
５） 配列番号２１と少なくとも８３％、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ２配列、
６） および配列番号２２と少なくとも８３％、好ましくは少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ３配列、を含む。

β鎖コンストラクトのＣＤＲ３における２つのアミノ酸が異なる、本発明の第１および第２のＴＣＲコンストラクトの比較は、ＣＤＲの配列、例えばＣＤＲ３の配列は、標的エピトープへの親和性を維持、または増加さえさせながら、最大２つのアミノ酸まで変更し得ることを示す。
任意には、第１および第２ＴＣＲβ鎖コンストラクトのＣＤＲ３で異なる２つのアミノ酸、すなわちポジション５および／もしくは６、またはＣＤＲ３配列は、変異される、好ましくは保存的置換のような他のアミノ酸によって置換される（例えば負に荷電するアミノ酸ＥおよびＤは互いに置換され得る、または正に荷電するアミノ酸Ｒ、Ｈ、およびＬは互いに置換され得る、または極性側鎖をもつアミノ酸Ｓ、Ｔ、Ｎ、もしくはＱは互いに置換され得る（好ましくは、ＳおよびＴは互いに置換され得る、またはＮおよびＱは互いに置換され得る）、または疎水性側鎖を持つアミノ酸Ｇ、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｖは互いに置換され得る、または芳香族側鎖を持つアミノ酸は互いに置換され得る、または疎水性の非芳香族側鎖を持つアミノ酸は互いに置換され得る）。

例えば、ＣＤＲ３のポジション５はＰ、Ｅ、およびＤ、好ましくはＥおよびＤ、最も好ましくはＥ、を含む群より選択され得る。

ポジション６はＡ、Ｇ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｖ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、またはＱ、好ましくは、Ａ、Ｖ、Ｉ、およびＬ、最も好ましくはＡを含む群より選択され得る。

したがって、本発明はまたβ鎖コンストラクト、および同じものを含むＴＣＲコンストラクトであって、ここで、ＣＤＲ３のポジション５および６がＰＡまたはＥＳであり、ここで、ＣＤＲ３の他のポジションは配列番号７および２２と対応する、β鎖コンストラクト、および同じものを含むＴＣＲコンストラクトを提供する。

好ましくは、それぞれのＣＤＲへの全てのアミノ酸同一性は少なくとも９０％である。

好ましくは、本発明の核酸において、コードされるＴＣＲα鎖コンストラクトは、配列番号２と少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ１配列、配列番号３と少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ２配列、および配列番号４のＣＤＲ３配列を含む、ならびに／または、ＴＣＲβ鎖コンストラクトは、配列番号２０と少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ１配列、配列番号２１と少なくとも９０％の配列同一性を有するＣＤＲ２配列、および配列番号２２のＣＤＲ３配列を含む。

任意には、本発明の核酸において、コードされるＴＣＲα鎖コンストラクトは、配列番号２と少なくとも９５％の配列同一性を有するＣＤＲ１配列、配列番号３と少なくとも９５％の配列同一性を有するＣＤＲ２配列、および配列番号４のＣＤＲ３配列を含む、ならびに／または、ＴＣＲβ鎖コンストラクトは、配列番号２０と少なくとも９５％の配列同一性を有するＣＤＲ１配列、配列番号２１と少なくとも９５％の配列同一性を有するＣＤＲ２配列、および配列番号２２のＣＤＲ３配列を含む。

好ましくは、本発明の核酸において、コードされるＴＣＲα鎖コンストラクトは、配列番号２のＣＤＲ１配列、配列番号３のＣＤＲ２配列、および配列番号４のＣＤＲ３配列を含む、ならびに／または、ＴＣＲβ鎖コンストラクトは、配列番号５のＣＤＲ１配列、配列番号６のＣＤＲ２配列、および配列番号７のＣＤＲ３配列を含む。

本発明の核酸において、コードされるＴＣＲα鎖コンストラクトは、配列番号１６と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変領域を含んでいてもよく（リーダー配列を除く、すなわち、ａａ１－２０を除く）、および／またはＴＣＲβ鎖コンストラクトは配列番号２５と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変領域を含んでいてもよい（リーダー配列を除く、すなわち、ａａ１－１４を除く）。任意には、本発明の核酸において、ＴＣＲα鎖コンストラクトは、配列番号１６と少なくとも９５％の配列同一性を有する可変領域を含む（リーダー配列を除く、すなわち、ａａ１－２０を除く）、および／またはＴＣＲβ鎖コンストラクトは配列番号２５と少なくとも９５％の配列同一性を有する可変領域を含む（リーダー配列を除く、すなわち、ａａ１－１４を除く）。好ましくは、このような核酸において、定義されたＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３領域との配列同一性は１００％である。

好ましくは、本発明の核酸において、コードされるＴＣＲα鎖コンストラクトは、配列番号１６の可変領域を含む（リーダー配列を除く、すなわち、ａａ１－２０を除く）、および／またはＴＣＲβ鎖コンストラクトは配列番号２５の可変領域を含む（リーダー配列を除く、すなわち、ａａ１－１４を除く）。

該β鎖コンストラクトはヒトＴＲＢＶ２０－１^＊０１－ＴＲＢＪ２－１^＊０１－ＴＲＢＤ２^＊０２Ｆを含んでいてもよい。

ＴＣＲα鎖コンストラクトの可変領域は配列番号１４、または好ましくは配列番号１５（コドン最適化済み）によってコードされ得る。ＴＣＲβ鎖コンストラクトの可変領域は配列番号１７、または好ましくは配列番号１８（コドン最適化済み）によってコードされ得る。ＴＣＲβ鎖コンストラクトのＣＤＲ３領域は配列番号２６、または好ましくは配列番号２７（コドン最適化済み）によってコードされ得る。

好ましくは本発明の核酸は１つのＴＣＲα鎖コンストラクトおよび１つのＴＣＲβ鎖コンストラクトをコードする。本発明の文脈において、「１つの（ａ）」とは、別段の表現の言及がない限り、「１以上の」を意味することが理解される。したがって、例えば、本発明のＴＣＲコンストラクトはα鎖およびβ鎖コンストラクトの両者を含むため、それは１つまたは２つの核酸どちらにコードされていてもよい。α鎖およびβ鎖コンストラクトは合わせて、ＨＬＡ－Ａ^＊０２と複合した配列番号１のペプチドに特異的に結合し得る。中間体として、α鎖およびβ鎖コンストラクトおよびそれらをコードする核酸もまた、それ自体が本発明の対象物である。

好ましくは、全ての本発明のＴＣＲα鎖および／またはβ鎖コンストラクトにおいて、本明細書で定義されるＣＤＲ領域との配列同一性は１００％である。

しかし、本発明で提供する定義されたＣＤＲ３および可変領域の配列に基づいて、ＴＣＲ配列の親和性成熟の実行が可能である。(Chervin et al. 2008. J Immunol Methods. 339(2):175-84; Robbins et al., 2008. J Immunol. 180:6116)。ＣＤＲ３配列内でアミノ酸の交換を誘導する、非同義語の核酸置換はＴＣＲの標的抗原への親和性の増強を誘導し得る。さらに、可変ＴＲＡおよびＴＲＢ領域の他の部分でのＴＣＲ配列の変更はＴＣＲの、ペプチド－ＭＨＣ複合体への親和性を変更し得る。これは、ペプチド－ＭＨＣへのＴＣＲの全体の親和性を増強し得るが、しかし、非特異的に認識すること、および交差反応性が増強するリスクがある（Linette et al. 2013. Blood 122(6): 863-72)。重要なのは提供された特定の配列によって変化するＴＣＲが、提供された標的抗原への排他的な特異性を維持していること、すなわち、それらが交差反応性を持たないことであり、最も重要なのは、ヒトの自己ペプチドへの交差反応性を持たないことである。正しいＭＨＣアレルを持つ細胞に搭載された既知の自己ペプチドに対する、ＴＣＲの潜在的な交差反応性が試験され得る(Morgan et al., 2013, J. Immunother. 36, 133-151)。したがって、本発明のＴＣＲコンストラクトを発現するＴ細胞の養子移入が、健康な組織に全くまたは顕著な負の影響を及ぼさないことが重要である。

本発明のＴＣＲα鎖および／またはβ鎖コンストラクトは、それらの天然物に対応する全ての特徴またはドメインを含んでいてもよいが、必須ではない。好ましくは、ＴＣＲα鎖および／またはβ鎖コンストラクトは少なくとも１つの可変領域、または可変領域および定常領域を含み、例えば、該可変および／または定常領域がヒト可変または定常ＴＣＲ領域と少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％の配列同一性を有する。養子ＴＣＲ療法のためには、ＴＣＲコンストラクトは可変領域、定常領域および膜貫通領域を含む全長ＴＣＲα鎖およびβ鎖を含むことが好ましい。該ＴＣＲコンストラクトは、免疫原性を最小化するために、好ましくは本質的にヒト由来である。それはまた、完全にヒト由来であってよい。したがって、ＴＣＲα鎖およびβ鎖コンストラクトをコードする核酸は配列番号１０および配列番号１３（両者ヒト由来、コドン最適化済み）、それぞれを含み得る。しかし内在性ＴＣＲ鎖と対になるのを防ぐために、本発明のコンストラクトは、好ましくはヒト配列と比較して１以上の、例えば１～５、１～１０、または１～２０のアミノ酸の交換、挿入または欠失を含み、例えば、追加のシステインを挿入する事で追加のジスルフィド結合を形成し得る(Kuball et al., 2007, Blood 106(6), 2331-8)。かかるＴＣＲの定常領域は最小限にはマウス定常領域であってよく、これはSommermeyeret al.,2010, J. Immunol. 184, 6223-31.において定義されるようにＴＣＲβ定常領域内の５つのアミノ酸およびＴＣＲα定常領域内の４つのアミノ酸がマウスの対応アミノ酸と交換される、ということを意味する。したがって、ＴＣＲα鎖およびβ鎖コンストラクトをコードする核酸は配列番号９および配列番号１２、それぞれを含み得る（どちらも最小限のマウスを含む、コドン最適化済み）。このために、ＴＣＲα鎖およびβ鎖コンストラクトの定常領域はまた、例えば配列番号８および配列番号１１（どちらもコドン最適化済み）それぞれによってコードされる、マウス定常領域で有り得る。

一本鎖コンストラクト（ｓｃＴＣＲ）はヘテロ二量体ＴＣＲコンストラクトと同様に埋め込まれる。ｓｃＴＣＲは第１ＴＣＲ鎖コンストラクト（例えば、α鎖）の可変領域および第２ＴＣＲ鎖（例えば、β鎖）の全体（全長）を含み得、またはその逆を含み得る。さらに、該ｓｃＴＣＲは任意に２つ以上のポリペプチドを一緒に連結する１つ以上のリンカーを含み得る。該リンカーは、例えば本明細書に記載するような、２つの一本鎖を一緒に連結するペプチドであり得る。サイトカイン、例えばＩＬ－２、ＩＬ－７、またはＩＬ－１５などのヒトサイトカインと融合する、本発明のかかるｓｃＴＣＲもまた提供される。

本発明のＴＣＲコンストラクトはまた、少なくとも２つのｓｃＴＣＲ分子を含む、多量体複合体の形で提供され得、ここで、該ｓｃＴＣＲ分子はそれぞれ少なくとも１つのビオチン部分と融合しており、およびここで該ｓｃＴＣＲは該多量体複合体の形成を可能にするためにビオチン―ストレプトアビジン相互作用によって内部結合している。２つ以上の、例えば４つの本発明のｓｃＴＣＲを含む、より高次の多量体複合体もまた提供される。

本発明のＴＣＲコンストラクトは例えば、放射性同位体、蛍光体（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ））、酵素（例えば、アルカリフォスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ）および粒子（例えば、金粒子または磁性粒子）などの検出可能な標識を含むように修飾され得る。

本発明の核酸は、特にそれがＴＣＲコンストラクトの少なくとも１つのＴＣＲα鎖およびβ鎖コンストラクトをコードしている場合には、ウイルスベクター、トランスポゾン、またはＣａｓ９、ＣＤ２２ ＴＣＲタンパク、およびｓｇＲＮＡを発現する自己不活化レンチウイルスベクターＬｅｎｔｉＣｒｉｓｐｒＢ２－ＣＤ２２ ＴＣＲなどの、ＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳに基づく組み換えに適したベクター、またはＴ７プロモーターを持つｐｃＤＮＡ３．１などのｉｎ ｖｉｔｒｏ ＲＮＡ転写に適したプラスミド、または宿主ゲノムへの挿入に適した任意の核酸、であってよい。

好ましくは、本発明のＴＣＲα鎖コンストラクト、および／またはＴＣＲβ鎖コンストラクトまたはＴＣＲコンストラクトはベクターである。適切なベクターには、プラスミドおよびウイルスなど、伝播および増殖、または発現またはその両方のために設計されたものが含まれる。該ベクターは、ヒトＴ細胞、またはヒトＴ細胞前駆体、好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞、例えばＣＤ８＋中央記憶Ｔ細胞、ＣＤ８＋エフェクター記憶Ｔ細胞、ＣＤ８＋幹細胞様Ｔ細胞などのヒトＴ細胞を含む群より選択された宿主細胞での発現に適した発現ベクターであり得る。該ベクターはウイルスベクター、例えば、レトロウイルス、特にガンマレトロウイルス、またはレンチウイルスベクターで有り得る。適切な発現ベクターの例にはレトロウイルスベクターＭＰ７１を含む。

発現ベクターは、該ベクターが導入される、および本発明の核酸の発現が実行されるべき宿主細胞（例えば、細菌、真菌、植物または動物細胞、例えば上記に定義するようなヒトＣＤ８＋Ｔ細胞）の種類に特異的な、転写および翻訳開始および終止コドンなどの制御配列を含む。さらに、本発明のベクターは、トランスフォーメーションまたはトランスフェクションされた宿主の選別を可能にする、１つ以上のマーカー遺伝子を含んでもよい。該発現ベクターは本発明のコンストラクトをコードする核酸配列と、または本発明のコンストラクトをコードする核酸配列と相補的、もしくはハイブリダイズする核酸配列と、動作可能に連結した、天然の、もしくは好ましくは異種のプロモーターを含み得る。プロモーターの選択には、例えば、強い、弱い、誘導可能な、組織特異的な、および発達特異的なプロモーターを含む。該プロモーターは非ウイルスプロモーターまたはウイルスプロモーターであり得る。好ましくは、それは異種のプロモーター、すなわち、ヒトＴ細胞における発現に適した、長い末端反復プロモーターなどの、ヒトＴ細胞内でＴＣＲと天然には連結していないプロモーターである。本発明の発現ベクターは、一過性発現、安定発現、またはその両方、の何れかのために設計され得る。また、該発現ベクターは、構成的な発現、または誘導可能な発現のために製造され得る。該ベクターはまた、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＲＮＡ転写を可能にし得る。本発明の核酸、好ましくはヒトＣＤ８＋Ｔ細胞における本発明のＴＣＲコンストラクトの発現に適した発現ベクターは、安全タグとして、さらに、該Ｔ細胞における細胞表面タンパク質の発現に適したプロモーターの制御下で、典型的にはＢ細胞で発現し、天然ヒトＴ細胞では顕著な程発現しない細胞表面タンパク質、例えばＣＤ２０、または、短縮型の上皮成長因子（ＥＧＦ－）受容体などの短縮型の受容体をコードしてもよい。患者が任意の問題、例えば、本発明の核酸、タンパク質、または宿主細胞を用いた治療後の自己免疫など、を有する場合、その際該患者は、本発明の宿主細胞を排除し得る、安全タグを標的とする治療剤、例えばＣＤ２０または抗ＥＧＦＰ抗体、で処置される。適切な安全タグについてはまた、Philip et al., 2014, Blood 124(8), 1277-87; Paszkiewicz et al., 2016, JCI 126(11), 4262-72; Wang et al., 2011, Blood 118(5), 1255-1263に記載されている。

本発明はまた、タンパク質、すなわち、α鎖もしくはβ鎖コンストラクト、または好ましくは、配列番号１のエピトープと組み合わさったＨＬＡ－Ａ^＊０２と特異的に結合し得る、α鎖およびβ鎖コンストラクト両方を含むＴＣＲ受容体コンストラクトを提供する。該タンパク質は好ましくは本発明の核酸によってコードされる。それは好ましくは宿主細胞において膜貫通タンパク質として発現する。ＨＬＡ－Ａ^＊０２の文脈において配列番号１のペプチドに特異的に結合し得るＴＣＲコンストラクトのＴＣＲα鎖および／またはβ鎖コンストラクトであって、ＴＣＲα鎖コンストラクトは配列番号４と少なくとも８３％の配列同一性を有するＣＤＲ３配列を含む、および／または、ＴＣＲβ鎖コンストラクトは配列番号２２と少なくとも８３％の配列同一性を有するＣＤＲ３配列を含む、ＴＣＲα鎖および／またはβ鎖コンストラクトが好ましい。

本発明はまた、本発明の核酸またはタンパク質を含む宿主細胞を提供する。該宿主細胞は真核細胞、例えば、植物、動物、菌類、もしくは藻類であり得る、または、原核細胞、例えば、細菌もしくは原生動物であり得る。該宿主細胞は培養細胞、または初代細胞すなわち、ヒトなどの生物から直接単離された細胞、であり得る。該宿主細胞は接着細胞、または浮遊細胞、すなわち浮遊状態で成長する細胞、であり得る。組み換えＴＣＲ、ポリペプチド、またはタンパク質を生産する目的のためには、宿主細胞は好ましくは哺乳類の細胞である。最も好ましくは、該宿主細胞はヒト細胞である。該宿主細胞は任意の種類の細胞であって、任意の種類の組織に由来し、および任意の発達段階であり得るが、好ましくは、宿主細胞は末梢血白血球（ＰＢＬ）または末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。より好ましくは、該宿主細胞はＴ細胞またはＴ細胞前駆体であり、特にヒトＴ細胞である。該Ｔ細胞は培養Ｔ細胞などの任意のＴ細胞であり得、例えば、初代Ｔ細胞、または培養Ｔ細胞株由来のＴ細胞、または哺乳類から取得したＴ細胞で、好ましくは、それはヒト患者由来のＴ細胞またはＴ細胞前駆体であり得る。該Ｔ細胞は、血液、骨髄、リンパ節、胸腺、または他の組織、または体液など、さまざまな供給源から取得し得る。Ｔ細胞はまた、濃縮または精製し得る。好ましくは、該Ｔ細胞はヒトＴ細胞である。より好ましくは、該Ｔ細胞は、例えば、同種移植を受けた患者の場合は、ヒト患者またはドナーなどのヒトから単離されたＴ細胞である。該Ｔ細胞は任意の種類のＴ細胞で有り得る、しかしそれは好ましくは、ＣＤ８＋細胞である。Ｔ細胞は、腫瘍浸潤細胞（ＴＩＬ）、エフェクター細胞、セントラルエフェクター細胞、メモリーＴ細胞、ナイーブＴ細胞などを含むが、限定されない、任意の発達段階のものであることができ、好ましくは、セントラルメモリーＴ細胞である

本発明の宿主細胞は、好ましくは、本発明の核酸、および／または本発明のタンパク質を含み、ここで、該宿主細胞は好ましくはＣＤ８＋Ｔ細胞であり、任意には、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞である。この場合の核酸は典型的には、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞において本発明のα鎖およびβ鎖コンストラクトを構成的に発現させるのに適した発現ベクターである。

本発明はよって、ＨＬＡ－Ａ^＊０２の文脈において配列番号１のペプチドに特異的に結合し得るＴＣＲコンストラクトの、ＴＣＲα鎖および／またはβ鎖コンストラクトをコードする核酸を含む、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞を提供し、ここで、ＴＣＲα鎖コンストラクトが配列番号４と少なくとも８３％の配列同一性を有するＣＤＲ３配列を含む、および／または、ここで、ＴＣＲβ鎖コンストラクト配列番号２２と少なくとも８３％の配列同一性を有するＣＤＲ３配列を含むことが好ましい。α鎖およびβ鎖は両者が共同でＨＬＡ－Ａ２の文脈におけるＣＤ２２エピトープを特異的に認識し得る。

本発明はまた、以下を含む医薬組成物を提供する
：ａ）ＨＬＡ－Ａ＊０２の文脈において、配列番号１のペプチドに特異的に結合し得るＴＣＲコンストラクトをコードする本発明の核酸（上記に規定する）；または
ｂ）ＨＬＡ－Ａ＊０２の文脈において配列番号１のペプチドに特異的に結合し得るＴＣＲコンストラクトを含む本発明のタンパク質（上記に規定する）；または
ｃ）ＨＬＡ－Ａ^＊０２の文脈において配列番号１のペプチドに特異的に結合し得るＴＣＲコンストラクトを発現する本発明の宿主細胞（上記に規定する）。

好ましくは、医薬組成物は、本明細書で定義される本発明のヒトＣＤ８＋宿主細胞を含む。該宿主細胞は、例えば、ＨＬＡ－Ａ^＊０２の文脈において、配列番号１のペプチドを特異的に認識し得るＴＣＲα鎖コンストラクトおよびＴＣＲβ鎖コンストラクトを含むＴＣＲコンストラクトをコードするベクターを含んでいてもよい。好ましくは、該ベクターは、例えばｐ２Ａエレメントによって隔てられた、核酸上のα鎖およびβ鎖コンストラクトの両者を発現するための発現ベクターである。本明細書で定義するＴＣＲ鎖の可変領域は、定常領域と連結されており、好ましくは、最小限のマウス定常領域と連結される。

あるいは、患者はまた、ｉｎ ｖｉｖｏにおいてＴ細胞のトランスダクションに用いるために、本発明の核酸、特に発現ベクター、を投与されてもよい。

医薬組成物はまた、さらなる治療剤、例えば、リツキシマブなどの抗体；またはＣＡＲ、好ましくは、ＣＤ８＋Ｔ細胞、典型的には本発明のＴＣＲコンストラクトを発現するＴ細胞とは異なるＣＤ８＋Ｔ細胞によって発現されるＣＡＲであって、ここで、該ＣＡＲはＢ細胞系列抗原を標的としてもよく、（例えば、ＣＤ１９、ＣＤ２０またはＣＤ２２）、好ましくは、ＣＤ１９を標的とし得るＣＡＲ；または化学療法剤、例えば、高用量化学療法；または腫瘍細胞で発現する他の抗原、例えば、ＭｙＤ８８－Ｌ２６５Ｐを標的とし得るＴＣＲコンストラクトを発現するＴ細胞；または、免疫チェックポイント阻害剤（例えばＣＴＬＡ－４、ＰＤ１、ＰＤＬ１遮断抗体）などの免疫療法薬、を含むキットの一部であってよい。最もあり得ることには、ＣＡＲまたは他のＴＣＲと組み合わされた、かかるＴＣＲは１つの剤形として投与され、よって例えば、１つの医薬組成物に含まれるだろう。該医薬組成物は、任意の上記のさらなる治療剤と組み合わせて使用し得る、ここで、さらなる治療剤としては、例えば、同じもしくは異なる組成物を同時に投与してよく、または同じもしくは異なる組成物を短い時間間隔の内、例えば、１日、２日、もしくは１週間の内に投与してよい。

本発明の医薬組成物または本発明のキットは、Ｂ細胞またはＢ細胞前駆体の異常な増殖および／または活性化に関連した疾患の予防および／または処置における使用、特に、Ｂ細胞リンパ腫またはＢ細胞白血病を有する患者における使用のためであってよい。好ましい実施形態においては、腫瘍細胞はＨＬＡ－Ａ^＊０２が発現する事が確かめられている。それらはさらにＣＤ２２を発現するが、細胞表面での発現である場合、またはそうでない場合もある。（ＦＡＣＳ－染色または免疫組織学によって検出）。好ましくは、該疾患は処置される。

該患者は、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、免疫細胞性リンパ腫、ワルデンストーム・マクログロブリン血症などの低悪性度Ｂ細胞リンパ腫、または、バーキットリンパ腫または活性化型Ｂ細胞リンパ腫、胚中心型Ｂ細胞リンパ腫、分類不能型Ｂ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、原発性ＣＮＳリンパ腫、皮膚型ＤＬＢＣＬ、脚型ＤＬＢＣＬ、もしくは精巣型ＤＬＢＣＬ、を含むあらゆるバリアントのびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、および移植後リンパ増殖性障害（ＰＴＬＤ）などの「高悪性度」リンパ腫を含む、Ｂ細胞系列の非ホジキンリンパ腫を有し得る。Ｂ細胞系列のすべての白血病はまた、処置に適しており、これにはｐｒｅ－ＡＬＬなどのＢ細胞型急性リンパ芽球性白血病（Ｂ－ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）、Ｂ細胞型前リンパ球性白血病（ＰＬＬ）、およびヘアリー細胞白血病を含む。

好ましくは、疾患は既に処置されたことがある、および１以上の選択治療後に再発するまたは１次治療に抵抗性である。本発明はまた、上記に規定する疾患、特に本明細書で記載する腫瘍または腫瘍性疾患に侵されている対象を処置するための方法であって、本発明の核酸、タンパク質、宿主細胞の投与を含む方法を提供する。好ましくは、該対象は係る処置を必要とする対象、すなわち患者である。好ましい実施形態における対象は、哺乳類の対象、好ましくは腫瘍または腫瘍性疾患を患うヒト患者である。作用剤は有効量投与される。

本発明の好ましい医療的な使用は免疫療法、特に養子Ｔ細胞療法に関連する。本発明の製品および方法は養子Ｔ細胞療法の文脈において使用される。本発明の化合物の投与は、例えば、投与、例えば該患者への本発明のＴ細胞の注入などに関連し得る。好ましくはかかるＴ細胞は本発明の核酸をｉｎ ｖｉｔｒｏで導入された、該患者の自家Ｔ細胞である。好ましくは、患者はＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１またはＨＬＡ－Ａ^＊０２：０４、０５、０７、もしくは１０などのＨＬＡ－Ａ^＊０２を発現する。

宿主細胞は自身のＨＬＡ－Ａ２を発現してもよく、例えば、このことは通常、本発明のＴＣＲコンストラクトを発現するような変更のみを受けた自家Ｔ細胞の場合でおこる。しかし、このことは必要ではない。本発明の宿主Ｔ細胞はまた、ＨＬＡ－Ａ２を発現しないＴ細胞であってもよい。例えば同種移植またはミスマッチ移植（ハプロ一致）Ｔ細胞療法の文脈において、または、例えば、ＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳを用いたＨＬＡ－Ａ２のノックアウト、または限定しないが、ｓｉＲＮＡ／ｍｉＲＮＡ分子などの適切な抑制性核酸によるノックダウン、によってＨＬＡ－Ａ２を発現しないように遺伝子的に変更された自家Ｔ細胞の形態においてである。例えば、何れのＨＬＡも発現しないように変更されたＴ細胞は、宿主細胞として使用でき、これは免疫反応を誘起せず、任意の患者における使用に適している。

本発明の処置は患者の第１選択処置であってよい。好ましくは、本発明の処置は患者の第２または後期選択処置であって、例えば患者が１以上の代替薬剤による治療（例えば、化学療法レジメンおよび、Ｂ細胞特異的モノクローナル抗体の投与またはＣＡＲに基づく治療、例えばＣＤ１９、ＣＤ２０、もしくはＣＤ２２などのＢ細胞系列抗原に対しての抗体投与または治療、の組み合わせとして定義される化学免疫療法を含む化学療法。）に対して再発性、または難治性である場合の処置である。好ましくは、該患者は、自家または同種幹細胞移植を含む、さらなる化学療法に適さない上記に示すような再発性または原発性難治性のＢ細胞リンパ腫または白血病を有する。

本発明はまた、本発明の宿主細胞を調製する方法であって、本発明のＴＣＲコンストラクトをコードする発現ベクターを適切な宿主細胞、好ましくは患者から単離したヒトＣＤ８＋Ｔ細胞に導入する事を含む方法に関連する。そして、該宿主細胞は患者に再導入され得る。

本発明は、添付の図および配列を参照して、以下の実施例でさらに説明されるが、その内容に限定されない。本発明の目的のために、本明細書で引用される全ての文献は、参照によりその全体が組みこまれる。

図１。ＣＤ２２ ＴＣＲの単離および評価。ａ）ヒトＴＣＲ遺伝子座トランスジェニックマウス（ｈＴＣＲｌｏｃｉ－ｔｇ）(Li et al., 2010, Nat. Med. 16, 1029-35)に遺伝子銃を用いてＤＮＡで被覆した金粒子をワクチン接種した。ワクチン接種から一週間後、ＣＤ２２に対する反応性を、血液中のＴ細胞および脾臓細胞において、ＣＤ２２を発現するように改変されたＮＩＨ３Ｔ３＋ＨＨＤ細胞（＋ＣＤ２２）またはＣＤ２２未導入のＮＩＨ３Ｔ３＋ＨＨＤ細胞（未導入）との共培養によって試験した。反応性を細胞内ＩＦＮγ染色によって解析した（左側パネル）。続いて、脾臓細胞を、ペプチド－ライブラリーおよびｉｎ ｓｉｌｉｃｏ予測ペプチドで１２時間試験し、ＦＬＳＮＤＴＶＱＬペプチドへの（ＦＬＳ－ペプチドとも呼ばれる、配列番号１）エピトープ特異性を同定した。細胞内ＩＦＮγ染色において、特異的なペプチド（＋ＦＬＳペプチド）との、またはペプチドなし（ネガティブコントロール）での共培養のみを示す（右上パネル）。Ｔ細胞を対応するペプチドで１０日間、ｉｎ ｖｉｔｒｏで濃縮した。ＦＬＳペプチドは以前に記載されている。そのＩＣ５０はＮｅｔＭＨＣ３．４(http://www.cbs.dtu.dk/services/NetMHC-3.4/)で１１ｎＭと決定された。１０日目に細胞をＦＬＳペプチドで４時間再度刺激し、およびＩＦＮγ捕捉アッセイの後、ＩＦＮγポジティブな細胞をＦＡＣＳで選別した。ネガティブコントロールとして、細胞をＩＦＮ捕捉抗体とインキュベートしなかった（右下パネル）。選別した細胞から、ＲＮＡを単離し、そしてＲＡＣＥ ＰＣＲ法によって、該ＴＣＲ配列を同定した。ｂ）該ＴＣＲを、ウイルスペプチドリンカー（ｐ２Ａ）で連結し、ＴＣＲ－ｐ２ａ－ＴＣＲという配置でγ－レトロウイルスベクターにクローニングした。全配列をコドン最適化した。ＴＣＲ定常領域はマウスに由来である（ｍＴＲＢＣ，ｍＴＲＡＣ）が、しかしまた、ヒト由来または少数のアミノ酸がマウス配列由来（最小限のマウス化）で有り得る。ｃ）ＣＤ２２ ＴＣＲを発現するγレトロウイルスベクターＭＰ７１を用いたヒトＴ細胞へのレトロウイルストランスダクション。細胞をヒトＣＤ８およびマウスＴＣＲβ定常領域について染色した。ｄ）ペプチド滴定のためにＴＣＲを導入したＴ細胞を、ペプチドを添加したＴ２細胞と共にインキュベートした。１８～２０時間後、ＥＬＩＳＡ法により細胞上清におけるＩＦＮγを検出した。１０μＭのペプチドを添加したＴ２細胞と共にした場合のＩＦＮγの量を１００％に設定した。Ｋｄ値を最大ＩＦＮγ放出の５０％で計算した。その曲線およびデータポイントは４人の個体のＴ細胞ドナーを用いた４回の実験から得た。

図２。ＣＤ２２ ＴＣＲは、ａ）ＣＤ２２遺伝子変更されたＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１ポジティブな腎細胞がん細胞株、ならびにｂ）ＣＤ２２およびＨＬＡ－Ａ^＊０２を発現する異なるタイプのホジキンリンパ腫およびＰｒｅ－Ｂ－ＡＬＬ、またはｃ）ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１を発現するために遺伝子的に変更されたバーキットリンパ腫細胞株およびｄ）びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）株、を認識する。ａ－ｄ）ヒト末梢血リンパ球（ｈＰＢＬｓ）に、レトロウイルス介在的にＣＤ２２ ＴＣＲ（黒色バー）またはコントロールＴＣＲ（黒色ドットバー）を導入し、または未導入のまま維持し（ｎｅｇ；白色バー）、および標的細胞との共培養アッセイで試験した。ａ－ｃ）１８～２０時間後、ＥＬＩＳＡ法により細胞上清におけるＩＦＮγを検出した。表示するデータは少なくとも３人のＰＢＬドナーの代表的なものである。ａ）腎細胞がん細胞株Ｋｔ１９５＋ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１およびＲＣＣ２６について全長ＣＤ２２、または短縮型ＣＤ２２であって、細胞内および膜貫通部分を持たないために、細胞内で発現する、エピトープを含んだままの短縮型ＣＤ２２（＋ＣＤ２２細胞内型）、を用いて遺伝子変更を行った。下のＦＡＣＳドットプロットは、未導入のまたはＣＤ２２を導入した、標的細胞Ｋｔ１９５＋ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１およびＲＣＣ２６の発現プロファイルを示す。抗ＣＤ２２（ｃｌｏｎｅＩＳ７，Ｂｉｏｚｏｌ）抗体および抗ＨＬＡ－Ａ２抗体（ｃｌｏｎｅＢＢ７．２，ＢＤ）を用いて細胞染色を行った。ＣＤ２２細胞内型を発現する細胞を、細胞内において、ＣＤ２２に対して染色した。ｃ）バーキットリンパ腫細胞株Ｌ５９１およびＲａｊｉにレトロウイルス介在的に導入し、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１発現を得た。ｄ）２４時間のＤＬＢＣＬ株ＨＢＬ－１（ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１ポジティブ）およびＯＣＩ－Ｌｙ１０（ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１－ネガティブ）との共培養の後，ｈＰＢｌをＣＤ８（ＢＤ）およびマウス定常ＴＣＲｂ領域（ｍＴＣＲβ）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）および細胞内ＩＦＮγ（ＢＤ）発現について染色した。ＣＤ８およびｍＴＣＲβポジティブな細胞の内、ＩＦＮγポジティブな細胞の割合を示した。 同上

図３。ＣＤ２２は、ａ－ｂ）ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１ポジティブなリンパ芽球性細胞株（ＬＣＬ）およびｃ）二人の前駆体型急性リンパ芽球性白血病のサンプル（１，２；ｐｒｅＡＬＬ）および一人の非ホジキンリンパ腫（３；ＮＨＬ）患者を認識する。ヒト末梢血リンパ球に、レトロウイルス介在的にＣＤ２２ ＴＣＲを導入し（黒色バー）、またはコントロールＴＣＲを導入し（網掛けのバー）または未導入（ｎｅｇ；白色バー）で、標的細胞との共培養アッセイによって試験した。ａ），ｃ）１８～２０時間後、細胞上清中のＩＦＮγをＥＬＩＳＡ法により検出した。示したデータは少なくとも２人のＰＢＬドナーの代表的なものである。ｂ）ＬＣＬは異なるエフェクター（ＴＣＲポジティブＴ細胞）対標的（Ｅ：Ｔ）比での、標準的な４時間のクロム放出アッセイにおける標的として用いた。示したデータは２人のＰＢＬドナーの代表的なものである。ｃ）患者サンプル１－３にはさらにＦＬＳペプチドを加えた。 同上

図４。ＣＤ２２ ＴＣＲは、異種移植したマウスモデルにおいて、腫瘍の成長を遅らせる。５～６週齢のメスのＮＯＧマウスに、ホタルのルシフェラーゼおよびＣＤ９０．１を発現する５ｘ１０＾５個のＮａｌｍ６細胞を注入した。４日目に、未導入、またはＣＤ２２ ＴＣＲ（３９％）を導入した５．６ｘ１０＾６個のｈＰＢＬを、１群あたり３匹のマウスに、静脈から注入した。２匹のマウスは未処置のままにした。７，１４，２１，２８，４２および５５日目にマウスのルシフェラーゼシグナルを測定した。血液を定期的に採取し、および腫瘍細胞と移入されたＴ細胞について解析した。体重は定期的に確認した。ａ）生存率のカプラン・マイヤープロットおよび各郡の示される生存日数の中央値：未処置（長鎖線）、未導入（短鎖線）およびＣＤ２２ ＴＣＲを導入したｈＰＢＬ（実線）。

図５。ＣＤ２２ ＴＣＲを導入したｈＰＢＬを、ＣＤ２２および異なるＨＬＡサブタイプを発現するＬＣＬの一団を用いて、同種抗原反応性について試験した。ＣＤ２２ ＴＣＲは他のＨＬＡ型（ＨＬＡ－Ａ^＊ＸＸ）について同種抗原反応性を示さず、しかしＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１の他に、ＨＬＡ－Ａ２サブタイプ（ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０４、０５、０７、１０では認識し、およびＨＬＡ－Ａ^＊０２の他のサブタイプでは可能性がある、しかし、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０２および０８は認識しない。参照：ＨＬＡ－Ａ^＊０２：ＸＸ）を発現するＬＣＬを認識する。ＣＤ２２ ＴＣＲ導入（黒色バー）または未導入（ｎｅｇ；白色バー）Ｔ細胞をＬＣＬと一緒にインキュベートし、およびつづけて１８～２０時間後、ＥＬＩＳＡ法によりＩＦＮγを測定した。示したデータは３人のＰＢＬドナーの代表的なものである。

図６。ＣＤ２２ ＴＣＲおよびＣＤ２２ ＴＣＲ ３２２５の両者はａ）異なる型のホジキンリンパ腫ならびにＣＤ２２およびＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１を発現するＰｒｅ－Ｂ－ＡＬＬ、またはＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１を発現するように遺伝子的に改変されたびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）株、およびバーキットリンパ腫細胞株、ならびにｂ）ＣＤ２２およびＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１を発現するＬＣＬ細胞を認識する。ａ＆ｂ）ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１ネガティブ（上のパネル）またはポジティブ（下のパネル）なドナー由来のヒト末梢血リンパ球（ｈＰＢＬ）に、レトロウイルス介在的に、ＣＤ２２ ＴＣＲ（黒色バー）、ＣＤ２２ ＴＣＲ ３２２５（ストライプバー）またはコントロールＴＣＲ（黒色ドットバー）を導入し、または未導入（ｎｅｇ；白色バー：ネガティブコントロール）で、標的細胞との共培養アッセイにおいて試験した。１８～２０時間後、細胞上清中のＩＦＮγをＥＬＩＳＡ法により検出した。３人のドナーの内１人の代表的なデータを示す。 同上

ａ）において、バーキットリンパ腫細胞株Ｒａｊｉは通常ＨＬＡ－Ａ２を発現せず、そのためこれらの細胞は認識されない。並行して、Ｒａｊｉ細胞にＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１発現を獲得するようにレトロウイルス介在的に導入すると、これらの細胞は認識される。ＫＧ１細胞はＨＬＡ－Ａ２またはＣＤ２２のどちらも発現せず、よって認識されなかった。ＣＤ２２を発現しないため、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１を発現するよう導入したＪｕｒｋａｔＴ細胞は認識されなかった。ｂ）において、ＩＥ３細胞およびＧＯＥＬＫはＣＤ２２を発現するが、ＨＬＡ－Ａ２を発現しない、そのためそれらは認識されない。ＨＬＡ－Ａ２ネガティブな宿主Ｔ細胞を用いて行った、上のパネルに示す実験はＣＤ２２ ＴＣＲおよびＣＤ２２ ＴＣＲ ３２２５は同等の機能的なアビディティを有することを示す。下のパネルは、ＨＬＡ－Ａ２ポジティブな宿主Ｔ細胞を用いた第２のＣＤ２２ ＴＣＲ ３２２５の追加確認実験を示す。

ｃ）３人のドナーの、ＴＣＲを導入したｈＰＢＬを、滴定された配列番号１のＣＤ２２ペプチドを加えたＴ２細胞と共に、１：１のエフェクター：標的比で、インキュベートした。１８～２０時間後、細胞上清中のＩＦＮγをＥＬＩＳＡ法により検出した。１０μＭのペプチドを加えたＴ２細胞におけるＩＦＮγの量を１００％に設定した。最大ＩＦＮγ放出の５０％に対し、ＴＣＲ ３２２５のＫｄ値が２．２＊１０^－８と算出された。曲線とデータポイントは、３人の個人ドナーの平均結果である。この実験は、ＣＤ２２ ＴＣＲ ３２２５が、最初のＣＤ２２ ＴＣＲよりもさらに高い親和性を有することを示している。

実施例１：ＣＤ２２特異的なＴＣＲの生産
自家抗原に対するＴ細胞は、自己免疫疾患を避けるために、甲状腺で負の選択を受ける。ＣＤ２２特異的なＴＣＲを得るためにマウスモデルを用いたが、これは、ヒトＴＣＲをもつマウスＴ細胞を得ることを目的として、ヒトＴＣＲαおよびＴＣＲβ遺伝子座についてトランスジェニック (Li, et al., 2010, Nat. Med. 16, 1029-35)であり、および適切なエピトープ提示のためにヒトＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１についてトランスジェニックである。ヒトＣＤ２２と非相同性のｃＤＮＡを用いた遺伝子銃による免疫付与によるワクチン接種の後、ヒトＨＬＡ－Ａ２およびＣＤ２２を発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞と血液または脾臓細胞との共培養によって試験されたＣＤ２２に特異的な免疫反応が得られた。ＣＤ２２にまたがるペプチドライブラリー、およびｉｎ ｓｉｌｉｃｏで予測された９残基を用いたさらなる反応性Ｔ細胞の評価によって、ペプチドの特異性が明らかになった。このエピトープはまた、Hassan et al., (2013, Mol. Cell Proteomics 12(7), 1829-43)に記載されており、彼らはＬＣＬからそれを溶出させた。本明細書に記載のＴＣＲは、遺伝子銃を用いて全長ＣＤ２２ＤＮＡを４回ワクチン接種させたマウスから単離した。脾臓細胞を、細胞内ＩＦＮγ染色による最初の反応性試験のために、対応するペプチドと共に一晩培養した。脾臓細胞からＣＤ４Ｔ細胞を除去し、非ＣＤ４－Ｔ細胞を１００ｎＭのペプチドで１０日間培養し、特異的なＴ細胞を濃縮した。１０日目にＩＦＮγ捕捉アッセイを行い、ＩＮＦγ－ポジティブな細胞をＦＡＣＳにより選別した（図１ａ）。選別した細胞からＲＮＡを単離し、ｃＤＮＡ合成、およびＲＡＣＥ-ＰＣＲを行い、その後ＰＣＲ断片の平滑末端ＴＯＰＯクローニングを行った。ＴＣＲの配列は、ＩＭＧＴのウェブサイトを参照し、サンガーシーケンシングにより同定した。同定した可変ＴＣＲ領域をコドン最適化した配列として合成し、マウス定常領域およびＴＣＲ鎖間のペプチド２ａリンカーと組み合わせ、γ－レトロウイルスベクターＭＰ７１に分子的にクローニングした（図１ｂ）。該ＣＤ２２ ＴＣＲをレトロウイルス介在的にヒト末梢血単球に導入し、およびその発現をマウス定常ＴＣＲβ鎖に対する抗体を用いた染色により確認した（図１ｃ）。あるいは、その対応する可変ＴＣＲβ鎖、すなわち、Ａｒｄｅｎの命名法に従うところのｖβ２、を染色することもできる。Ｔ２細胞におけるペプチド滴定から、Ｋｄ値１．１×１０^ー８が得られた（図１ｄ）。

実施例２：ＣＤ２２ ＴＣＲはＣＤ２２を発現する細胞株および初代腫瘍細胞に対する反応性を付与する。
ＣＤ２２ ＴＣＲの、組み換えおよび天然ＣＤ２２発現細胞に対する反応性を試験した。ＴＣＲのトランスダクション後、ヒト末梢血リンパ球（ｈＰＢＬ）を、ＣＤ２２を全長型として発現する、または、エピトープは保持しているが、膜貫通および細胞内配列が消失した短縮型分子として発現する、２つの腎細胞がん細胞株と共培養した。第２の型のＣＤ２２は細胞内でのみ発現している。１８～２０時間後、ＥＬＩＳＡ法により、共培養上清に分泌されたＩＦＮγを試験した。ＣＤ２２ ＴＣＲを導入したｈＰＢＬは、ＣＤ２２を全長型、または細胞内型のどちらかで発現する腎細胞がん細胞株両方を認識した。（図２ａ）。ＣＤ２２を天然に発現する細胞の認識をさらに試験するために、ＣＤ２２ ＴＣＲを導入したｈＰＢＬを異なる悪性度のＢ細胞株の一団と共培養した（図２ｂ－ｄ）。ホジキンリンパ腫（ＨＤＭＬ２、Ｌ１２３６）、Ｐｒｅ－Ｂ－ＡＬＬ細胞（Ｎａｌｍ６、ＲＥＨ）に加えて、バーキットリンパ腫（ＢＪＡＢ、Ｌ５９１、Ｒａｊｉ）などの非ホジキンリンパ腫、およびＤＬＢＣＬ（ＨＢＬ－１）もまた、分泌されたＩＦＮγ（図２ｂおよびｃ）または細胞内のＩＦＮγ染色（図２ｄ）によって測定して、それらがまたＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１ポジティブである場合には認識された。Ｌ５９１およびＲａｊｉ細胞は、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１を導入した場合にのみ認識された。ＤＬＢＣＬ株のＯＣＩ－Ｌｙ１０はＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１ネガティブであり、認識されなかった。同様に、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１ポジティブの健康なドナー由来である、ｉｎ ｖｉｔｒｏで不死化された初代Ｂ細胞（リンパ芽球細胞株、ＬＣＬ）は、ＩＮＦγ分泌（図３ａ）に示すように、ＣＤ２２ ＴＣＲを導入したｈＰＢＬに認識された。加えて、それらは、クロム放出アッセイ（図３ｂ）に示すように、エフェクターとターゲットの比率に依存したやり方で殺傷された。ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１ネガティブなＬＣＬは認識されず、および殺傷されなかった。二人のｐｒｅ－ＡＬＬ（１および２）患者、および一人のＮＨＬ（３）患者由来のＣＤ２２およびＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１を発現する細胞サンプルは、共培養でＩＦＮγの分泌を誘導した。ポジティブコントロールとして、サンプルにＣＤ２２ペプチドを加えた（図３ｃ）。

実施例３：異種移植したマウスモデルにおいてＣＤ２２ ＴＣＲは腫瘍の成長を遅らせる。
ＣＤ２２ ＴＣＲを導入したｈＰＢＬのｉｎ ｖｉｖｏにおける腫瘍細胞を殺傷する能力を試験するために、ＮＯＧマウスに、ホタルのルシフェラーゼおよびコンジェニックマーカーＣＤ９０．１を導入したｐｒｅ－ＡＬＬＢ細胞株Ｎａｌｍ６を注入し、４日後にｈＰＢＬで処置した。腫瘍の成長をホタルのルシフェラーゼのシグナル測定によって測定し、ならびに血液を、腫瘍細胞に発現されるコンジェニックマーカーＣＤ９０．１について解析し、および移入Ｔ細胞について、ＣＤ８とＴＣＲｖβ鎖染色によって解析した。ＣＤ２２ ＴＣＲを導入したｈＰＢＬを移入したマウスの生存の中央値は５３±７日であり、一方、無処置で放置した、またはＣＤ２２ ＴＣＲ未導入のｈＰＢＬを移入したマウスは、それぞれわずか３０±３日または２８±０日の生存であった（図４）。

実施例４：ＣＤ２２ ＴＣＲ認識性能の安全性解析
ＣＤ２２ ＴＣＲがＣＤ２２／ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１を発現する腫瘍細胞に対して、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで非常に効果的であることを示した。ＣＤ２２ ＴＣＲがＣＤ２２を発現しない、および／または、他のＨＬＡ型を持つ他の通常細胞を認識しないかどうかを観察するために、いくつかのアッセイを行った。第１に、ＨＬＡ－Ａ^＊０２以外の他のＨＬＡに対する潜在的な同種抗原反応性を解析するために、ＣＤ２２ ＴＣＲを導入したｈＰＢＬを、広範囲の異なるＨＬＡ型を発現する、ＬＣＬの一団と共培養した（表２ａおよびｂ）。

ＬＣＬはＣＤ２２ポジティブであるため、ＩＦＮγの分泌はＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１および他の特定のＨＬＡ－Ａ^＊０２サブタイプ（ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０４、０５、０７、１０）にポジティブなＬＣＬと共培養したときにのみ観察されたが、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０２および０８、ならびに解析した他の非ＨＬＡ－Ａ２型の認識は観察されなかった（図５）。

実施例５：CD22－ＴＣＲ ３２２５は、ＣＤ２２ ＴＣＲに近い、CD22発現細胞株に対する反応性を付与する。
第２のＴＣＲを、実施例１に記載する同様の方法で生産した。ＣＤ２２ ＴＣＲ ３２２５はＣＤ２２ ＴＣＲと同一のＴＣＲｖα鎖を含むが、そのＴＣＲｖβ鎖のＣＤＲ３領域が２アミノ酸において異なる。ＴＣＲを導入したｈＰＢＬと、異なる悪性度のＢ細胞株の一団（図６ａ）またはＥＶＢ－不死化されたＢ細胞株（図６ｂ）との共培養における、天然に処理されたＣＤ２２エピトープの認識を示した。

ＨＬＡ－Ａ２^＊０２：０１ネガティブな（上段）またはポジティブな（下段）ドナー由来の、ＴＣＲを導入したｈＰＢＬを、異なる悪性度のＢ細胞株の一団と共培養した（図６ａ）。ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１ポジティブなｐｒｅ－Ｂ－ＡＬＬ細胞（ＲＥＨ）、バーキットリンパ腫（ＢＪＡＢ）およびＤＬＢＣＬ（ＳＵ－ＤＨＬ６）などの非ホジキンリンパ腫はＣＤ２２ ＴＣＲと同様に、ＣＤ２２ ＴＣＲ ３２２５によって認識され、およびバーキットリンパ腫Ｒａｊｉ細胞はＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１を導入した場合にのみ認識された。ＣＤ２２ネガティブな細胞（ＫＧ１およびＪｕｒｋａｔ＋ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１）は認識されなかった。ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１－ポジティブの健康なドナー由来のリンパ芽球性細胞株（ＬＣＬ）は、ＩＮＦγ分泌に示すように、ＣＤ２２ ＴＣＲ ３２２５を導入したｈＰＢＬによって認識された（図６ｂ）（上段：ＨＬＡ－Ａ２^＊０２：０１^－ドナー／下段：ＨＬＡ－Ａ２^＊０２：０１^＋ドナー）。

ＣＤ２２ ＴＣＲおよびＣＤ２２ ＴＣＲ ３２２５をさらに、同族ペプチドに対する親和性について、Ｔ２細胞におけるペプチド滴定によって試験し（図６ｃ）、ＣＤ２２ ＴＣＲ ３２２５におけるＫ_ｄ値を２．２×１０^ー８と計算した、すなわち、ＣＤ２２ ＴＣＲ ３２２５の親和性はＣＤ２２ ＴＣＲの親和性よりも高い。Ｔ２細胞はＴＡＰ欠損型で有り、よって内在性ペプチドを提示しない。配列番号１の外在性ペプチドをＴ２細胞に滴定した。

一般的には、５＊１０^－４個の標的細胞を、５＊１０^－４個のＴＣＲを導入したｈＰＢＬ Ｔ細胞と１８－２０時間接触させ、その後上清中のＩＮＦγをＥＬＩＳＡで定量した。

Claims (16)

1. ＨＬＡ－Ａ^＊０２拘束性の配列番号１のペプチドに特異的に結合し得るＴＣＲコンストラクトの少なくとも１つのＴＣＲα鎖およびβ鎖コンストラクトをコードする１つまたは２つの核酸を含む組成物であって、
   ここで該ＴＣＲα鎖コンストラクトが配列番号２の配列を有するＣＤＲ１配列、配列番号３の配列を有するＣＤＲ２配列および配列番号４の配列を有するＣＤＲ３配列を含む、および
   ここで該ＴＣＲβ鎖コンストラクトが、
   ａ）配列番号２０の配列を有するＣＤＲ１配列、配列番号２１の配列を有するＣＤＲ２配列および配列番号２２の配列を有するＣＤＲ３配列を含む；または
   ｂ）配列番号５の配列を有するＣＤＲ１配列、配列番号６の配列を有するＣＤＲ２配列および配列番号７の配列を有するＣＤＲ３配列を含む、組成物。
2. ＴＣＲβ鎖コンストラクトが、配列番号２０の配列を有するＣＤＲ１配列、配列番号２１の配列を有するＣＤＲ２配列および配列番号２２の配列を有するＣＤＲ３配列を含む、請求項１に記載の組成物。
3. ＴＣＲα鎖コンストラクトがａａ１－２０を除いた配列番号１６と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変領域を含む、および／または、ＴＣＲβ鎖コンストラクトがａａ１－１４を除いた配列番号２５と少なくとも９０％の配列同一性を有する可変領域を含む、請求項１または２に記載の組成物。
4. ＴＣＲβ鎖コンストラクトが、配列番号５の配列を有するＣＤＲ１配列、配列番号６の配列を有するＣＤＲ２配列および配列番号７の配列を有するＣＤＲ３配列を含む、請求項１に記載の組成物。
5. ＴＣＲα鎖コンストラクトおよび／またはＴＣＲβ鎖コンストラクトがさらに、ヒト定常領域、マウス定常領域、またはキメラ定常領域、を含む群より選択された定常領域を含む、請求項１～４の何れか１項に記載の組成物。
6. ＴＣＲコンストラクトの少なくとも１つのＴＣＲα鎖およびβ鎖コンストラクトをコードする１つの核酸を含む、請求項１～５の何れか１項に記載の組成物。
7. 核酸が、ウイルスベクター、トランスポゾン、ＣＲＩＳＰＲ／ＣＡＳに基づく組み換えに適したベクターまたはｉｎ ｖｉｔｒｏＲＮＡ転写に適したプラスミド、を含む群より選択される、請求項１～６の何れか１項に記載の組成物。
8. 核酸が、Ｔ細胞において細胞表面タンパク質の発現に適したプロモーターの制御下にある、ＣＤ２０および短縮型の上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体、からなる群より選択される細胞表面タンパク質をさらにコードする、請求項１～７の何れか１項に記載の組成物。
9. ＨＬＡ－Ａ^＊０２拘束性の配列番号１のペプチドに特異的に結合し得るＴＣＲコンストラクトを含む、請求項１～８の何れか１項に記載の組成物中の核酸によりコードされるタンパク質。
10. 請求項１～８の何れか１項に記載の組成物および／または請求項９に記載のタンパク質を含む、宿主細胞。
11. 宿主細胞がヒトＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項１０に記載の宿主細胞。
12. 請求項１～８の何れか１項に記載の組成物、請求項９に記載のタンパク質、または請求項１０もしくは１１に記載の宿主細胞、を含む医薬組成物。
13. Ｂ細胞リンパ腫またはＢ細胞白血病を有する患者の処置における使用のための、請求項１２に記載の医薬組成物。
14. 患者がＨＬＡ－Ａ^＊０２を発現する、請求項１３に記載の医薬組成物。
15. 免疫療法、養子Ｔ細胞療法またはＴＣＲ遺伝子療法において使用するための、請求項１３または１４に記載の医薬組成物。
16. 患者が再発性もしくは原発性難治性のＢ細胞リンパ腫もしくはＢ細胞白血病を有する、または患者がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫を有する、請求項１３～１５の何れか１項に記載の医薬組成物。

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