JP7574430B2 - マンゴスチンを含む抗コクシジウム用組成物およびその用途 - Google Patents

Description

[関連出願の相互参照]
本出願は、２０２０年９月２５日付の韓国特許出願第１０－２０２０－０１２５２４５号に基づく優先権の利益を主張し、当該韓国特許出願の文献に開示された全ての内容は本明細書の一部として含まれる。

本発明は、マンゴスチンを含む抗コクシジウム用組成物およびその用途に関する。

コクシジウム症は、アイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）というアピコンプレックス門（ｐｈｙｌｕｍａ ｐｉｃｏｍｐｌｅｘａｎ）に属する原生動物寄生虫によって引き起こされる腸関連疾患であって、コクシジウム症に感染すると、消化障害、下痢、体重減少の症状を呈し、ひいては家畜の斃死まで起こし、全世界の農家に経済的に大きな影響を及ぼす（Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＲＢ．Ａ ｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌｉｓｅｄ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｓｔ ｏｆ ｃｏｃｃｉｄｉｏｓｉｓ ｔｏ ｔｈｅ ｗｏｒｌｄ’ｓ ｃｈｉｃｋｅｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎｄｕｓｔｒｙ．Ｉｎｔ Ｊ Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．１９９９；２９（８）：１２０９－１２２９）。

ここ数年間、多くの研究関係者によって、コクシジウム症を治療するための治療剤としてオーシスト細胞壁の形成あるいは原虫の無性および有性生殖を阻害可能なイオノフォア（ｉｏｎｏｐｈｏｒｅ）または化学的合成製剤（ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｃｏｕｍｐｏｕｎｄｓ）などの抗コクシジウム剤が開発された。しかし、イオノフォアと化学的合成製剤を交互に処理するシャトルプログラム（ｓｈｕｔｔｌｅ ｐｒｏｇｒａｍ）の長期的な使用による薬剤耐性を持つ原虫などが出現するなどの副作用が発生した。

特に、抗生剤の誤用・乱用により動物に蓄積された抗生剤は、肉類を通して人間が抗生剤を摂取することで深刻な問題となっており、畜産物内の抗生剤残留問題により世界各国で抗生剤の投薬を禁止する傾向にある。したがって、薬剤に耐性を持つ菌株の出現および体内残留問題などの副作用を示す既存の抗コクシジウム剤の代替剤に関する開発および研究が急がれるのが現状である。

米国公開特許第２００３－００９１５８９号

本発明の一実施形態は、マンゴスチンを含む、コクシジウム症の予防、または改善用飼料組成物を提供する。

本発明の他の実施形態は、マンゴスチンを含む、コクシジウム症の予防、または治療用薬学組成物を提供する。

本発明のさらに他の実施形態は、マンゴスチンを含む、アイメリア属原虫に対する抗原虫用組成物を提供する。

本発明のさらに他の実施形態は、前記組成物を動物に投与する段階を含む、コクシジウム症の予防、改善、または治療方法を提供する。

本発明のさらに他の実施形態は、マンゴスチンのコクシジウム症の予防、改善、および／または治療用組成物（例えば、飼料組成物、薬学組成物）または抗原虫用組成物の製造に使用するための用途；マンゴスチンのコクシジウム症の予防、改善、および／または治療に使用するための用途；および／またはマンゴスチンのアイメリア属原虫に対する抗原虫（例えば、アイメリア属原虫の死滅；および／またはアイメリア属原虫の細胞侵入および／または増殖抑制）に使用するための用途を提供する。

本発明に係るマンゴスチンを含む組成物は、抗コクシジウム活性および／またはコクシジウム症を誘導する原虫に対する抗原虫活性に優れている。

本発明において、抗コクシジウム効能（活性、効果）に優れているのは、下記の（１）～（５）からなる群の中から選択される１種以上（例えば、１種以上、２種以上、３種以上、４種以上、または５種全て）を意味するものであってもよい：
（１）抗コクシジウム総合指数（Ａｎｔｉｃｏｃｃｉｄｉａｌ ｉｎｄｅｘ；ＡＣＩ）が対照群に比べて高い；
（２）コクシジウム症が誘導された動物個体に投与されて、対照群に比べて斃死率、病変スコア（ｌｅｓｉｏｎ ｓｃｏｒｅ）、および／または糞便中のオーシスト（ｏｏｃｙｓｔ）排出量を減少させる；
（３）コクシジウム症の誘導による体重減少を抑制する；
（４）対照群に比べてコクシジウム症を誘導する原虫に対する殺虫活性が高い；および
（５）対照群に比べてコクシジウム症を誘導する原虫の細胞侵入および／または細胞内の前記原虫の増殖抑制効果が高い。

本発明において、対照群は、陰性対照群（何ら処理されない群であるか、水および／またはバッファー処理群）および／または既存の公知の抗コクシジウム剤（例えば、ジクラズリル（ｄｉｃｌａｚｕｒｉｌ）および／またはサリノマイシン（ｓａｌｉｎｏｍｙｃｉｎ））を含む陽性対照群を意味する。

一実施形態による組成物は、下記の（１）～（６）からなる群の中から選択される１種以上（例えば、１種以上、２種以上、３種以上、４種以上、５種以上、または６種すべて）の特性を持つことができ、その特性は対照群より優れたものであり得る。
（１）抗コクシジウム活性に優れる；
（２）コクシジウム症を誘導する原虫に対する抗原虫効果に優れる；
（３）耐酸性に優れる；
（４）耐熱性に優れる；
（５）生体内安定性および／または安全性に優れる；および
（６）増体量改善効果に優れる。

一実施形態による組成物は、耐酸性および／または耐熱性に優れ、体内に投与されて優れた抗コクシジウム活性を長期間維持することができ、生体内安定性に優れ、多様な温度および／またはｐＨ範囲の環境でも優れた抗コクシジウム活性を維持することができ、多様な製品（例えば、飼料添加剤）への適用が可能であり、保管安定性に優れることができる。

一実施形態による組成物は、体内投与時、腸以外の他の組織および臓器（例えば、血液、肝、腎臓、および／または脾臓など）などに吸収されず、体内残留量が少なくて、生体内安全性に優れることができる。

一実施形態において、増体量改善効果に優れるというのは、個体に投与されて個体の体重を増加させる効果に優れていることを意味することができ、一例において、前記増体量は、１日あたりの増体量を意味することができ、前記個体は、コクシジウム症が誘導された個体であってもよい。

一実施形態による組成物は、既存の公知の抗コクシジウム剤（例えば、スルファキノキサリン、スルファクロロピラジン、およびスルファメタジンなどのスルファ剤、サリノマイシンおよびモネンシンナトリウムなどのポリエーテルイオノフォア抗生物質、アンプロリウム、ジクラズリル、および／またはトルトラズリル）より同等以上の抗コクシジウム活性を示しながらも、副作用や薬物耐性を誘発せず、毒性が低い天然物（マンゴスチン）を含んでいるので、長期間使用しても安全であり得る。

本発明において、「予防」とは、一実施形態による組成物の投与によって疾患の発病を抑制または遅延させるすべての行為を意味し、「治療」とは、一実施形態による組成物の投与によって疾患の疑いおよび発病個体の症状が好転または有利に変更されるすべての行為を意味し、「改善」とは、一実施形態による組成物の投与で疾患が治療される状態に関連するパラメータ、例えば、症状の程度を少なくとも減少させるすべての行為を意味することができる。前記疾患は、コクシジウム症を意味することができる。

一実施形態は、マンゴスチン（ｍａｎｇｏｓｔｅｅｎ）を含む、コクシジウム症の予防、または改善用飼料組成物を提供することができる。

一実施形態による組成物は、抗コクシジウム活性を示す有効成分としてマンゴスチンを含んでもよく、前記マンゴスチンは、マンゴスチン果実であってもよい。マンゴスチン（Ｇａｒｃｉｎｉａ ｍａｎｇｏｓｔａｎａ Ｌ．）は、マレーシア原産のムクロジ目ミツバウツギ科に属する双子葉植物の果実で平らなボール状のピンポン玉よりやや大きいサイズの果実を結ぶ。マンゴスチンの果実は、ポリフェノールの一種であるキサントン（ｘａｎｔｈｏｎｅ）という代表的な抗酸化剤成分を含有していて、優れた抗酸化力を有することが知られており、タイをはじめとする東南アジアでは、古くから民間薬として炎症や創傷などの傷の治療などに使用されてきたことが知られている。

一例によれば、前記マンゴスチンは、マンゴスチン果皮（ｐｅｒｉｃａｒｐ）、マンゴスチン果肉、またはその組み合わせ（果皮および果肉）であってもよく、一例によって、マンゴスチン果皮を含む組成物は、抗コクシジウム活性に優れたものであり得る。マンゴスチン果皮は、通常摂取せずに捨てられる部分で、それを活用した一例による組成物は、不用になった資源リサイクル、環境保存、および／または経済性の側面から長所を有する。

一例による組成物は、前記マンゴスチンに含まれている個別成分（例えば、キサントン（ｘａｎｔｈｏｎｅ）、α－マンゴスチン（ａｌｐｈａ－ｍａｎｇｏｓｔｉｎ）、エピカテキン（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ）、および／またはケルセチン（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ））より抗コクシジウム活性に優れたものであり得る。

一例において、前記マンゴスチンは、マンゴスチンそのもの、乾燥物、粉砕物、および抽出物からなる群より選択される１種以上（例えば、１種以上、２種以上、３種以上、または全て）であり得る。

前記マンゴスチンそのものは、加工（例えば、乾燥、粉砕および／または抽出）しないマンゴスチンを意味する。

前記マンゴスチン乾燥物は、前記マンゴスチンそのものを乾燥して得られるものであり、減圧乾燥、真空乾燥、沸騰乾燥、常温乾燥、および／または凍結乾燥などの方法によって得られる。

前記マンゴスチン粉砕物は、前記マンゴスチンそのものおよび／または前記マンゴスチン乾燥物を粉砕および／または破砕して得られるものであり、粉砕機を使用して得られたものであり得る。

本明細書において、「抽出物（ｅｘｔｒａｃｔ）」とは、生薬を適切な浸出液に絞り出して浸出液を蒸発、濃縮させて製したものを意味し、抽出処理によって得られる抽出液、抽出液の稀釈液または濃縮液、抽出液を乾燥して得られる乾燥物、これらの調整剤、および／または錠剤であり得る。前記マンゴスチン抽出物は、当業界で公知の通常の抽出方法、分離および精製方法を使用して製造することができる。前記抽出方法としては、具体的には、熱湯抽出、熱水抽出、冷浸抽出、還流冷却抽出または超音波抽出などの方法を使用することができる。

一例において、前記マンゴスチン抽出物は、市販のものを購入するか、医薬または食品業界にて通常知られている抽出方法および抽出溶媒を適宜選択して製造することができる。例えば、通常の抽出方法は、溶媒抽出法、超音波抽出法、ろ過法および／または還流抽出法などを含んでもよい。一例において、前記マンゴスチン抽出物は、抽出溶媒で抽出するか、または抽出溶媒で抽出して製造した抽出物に溶媒分画を加えて分画することによって製造することができる。例えば、前記マンゴスチン抽出物は、水、炭素数１～４の直鎖または分岐鎖アルコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、グリセリン、アセトン、酢酸エチル、ブチルアセテート、クロロホルム、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、ヘキサンおよびこれらの混合物からなる群より選択される抽出溶媒を用いた溶媒抽出方法で抽出されたものであり得る。具体的には、前記炭素数１～４のアルコールは、エタノール、メタノール、イソプロパノール、プロパノール、ブタノール、および／またはｔｅｒｔ－ブタノールであってもよい。前記抽出溶媒を、乾燥したマンゴスチン（例えば、マンゴスチン果皮）の分量に１～１０倍を添加して抽出することができ、具体的には、２～３倍を添加して抽出することができる。抽出温度は３０℃～１００℃、５０℃～９０℃、または６０℃～８０℃であってもよい。また、抽出時間は１０時間～４８時間、１２時間～３０時間、または１８時間～２４時間であってもよい。さらに、抽出回数は１回～５回、または２回～４回、繰り返し抽出することができる。

一実施形態において、前記マンゴスチンは、マンゴスチン果皮抽出物であってもよく、例えば、マンゴスチン果皮のエタノール抽出物であってもよく、前記エタノールは、５０～１００％（ｖ／ｖ）、６０～１００％（ｖ／ｖ）、６５～１００％（ｖ／ｖ）、７０～１００％（ｖ／ｖ）、７５～１００％（ｖ／ｖ）、８０～１００％（ｖ／ｖ）、５０～９５％（ｖ／ｖ）、６０～９５％（ｖ／ｖ）、６５～９５％（ｖ／ｖ）、７０～９５％（ｖ／ｖ）、７５～９５％（ｖ／ｖ）、８０～９５％（ｖ／ｖ）、５０～９０％（ｖ／ｖ）、６０～９０％（ｖ／ｖ）、６５～９０％（ｖ／ｖ）、７０～９０％（ｖ／ｖ）、７５～９０％（ｖ／ｖ）、８０～９０％（ｖ／ｖ）、５０～８５％（ｖ／ｖ）、６０～８５％（ｖ／ｖ）、６５～８５％（ｖ／ｖ）、７０～８５％（ｖ／ｖ）、７５～８５％（ｖ／ｖ）、８０～８５％（ｖ／ｖ）、５０～８０％（ｖ／ｖ）、６０～８０％（ｖ／ｖ）、６５～８０％（ｖ／ｖ）、７０～８０％（ｖ／ｖ）、７５～８０％（ｖ／ｖ）、５０～７５％（ｖ／ｖ）、６０～７５％（ｖ／ｖ）、６５～７５％（ｖ／ｖ）、または７０～７５％（ｖ／ｖ）であり得る。

本発明において、「コクシジウム症（ｃｏｃｃｉｄｉｏｓｉｓ、コクシジア症）」は、コクシジウム原虫（コクシジウム症を誘導可能な原虫、例えば、アイメリア属コクシジウム原虫）が消化管上皮で粘膜下組織の細胞質内に寄生し、上皮を破壊させ、腸炎を起こす疾患であって、肉鶏農場で水っぽい便、下痢および血便で増体率の低下と出荷日齢の延長で経済的被害をもたらす原虫性疾病である。コクシジウム症は、肉鶏だけでなく、鳥類、魚類、爬虫類およびほ乳動物でも発現し、具体的には、前記コクシジウム症は、ウシ、ウサギ、ヤギ、イヌ、ネコ、実験動物であるマウス、およびラットなどにも感染することがあり、特に、ニワトリ、アヒル、ガチョウ、七面鳥、ウズラ、キジなどの家禽類に致命的な損傷をきたしうる。一例において、前記コクシジウム症は、急性型コクシジウム症、亜急性型コクシジウム症、および慢性型コクシジウム症などを含むことができる。前記急性型コクシジウム症は、感染後４８時間以内に血便、元気消失、貧血を呈し、感染した個体が斃死することがあり、前記亜急性型コクシジウム症は、感染後に血液性下痢および／または貧血症状を呈し、前記慢性型コクシジウム症は、感染後１～２日間下痢後に水っぽい便および／または体重減少の症状を呈することがある。

コクシジウム原虫種のオーシスト（Ｏｏｃｙｓｔ、嚢胞、虫卵）が高い湿度と温度で胞子虫（Ｓｐｏｒｕｌａｔｅｄ Ｏｏｃｙｓｔ）に成熟する場合に感染性があり、個体の体内で一定の生活史（ｌｉｆｅ ｃｙｃｌｅ）を経た後、糞便からオーシストを排泄すれば伝播が行われやすく、オーシスト生活史が繰り返される。コクシジウム原虫種のオーシスト（嚢胞）は外部環境に対して抵抗性が大きく、嚢胞壁は内外の２層から構成されていることが知られている。嚢胞壁の外層はゼラチン物質として物理的な外圧に強く抵抗し、内層は核蛋白に豊富で化学的刺激、例えば、消毒剤に強く抵抗することができる。コクシジウム原虫種のオーシストは４個の胞子嚢（ｓｐｏｒｏｃｙｓｔｓ）を含むことができ、前記胞子嚢は各２つの胞子小体（ｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅｓ）を含むことができ、オーシスト形態で動物に感染後、胞子嚢と胞子小体形態で放出されて細胞内で増殖し、有性生殖および／または無性生殖を経た胞子小体はオーシストを形成して糞便から排出される。一例において、胞子小体は原虫と同一の意味で使われ、前記胞子小体（原虫）は病変を起こしうる。

一例によれば、前記コクシジウム症は、アイメリア属（Ｅｉｍｅｒｉａ ｓｐ．）原虫によって誘導されるものであってもよい。一例において、前記アイメリア属原虫は、アイメリア・アセルブリナ（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ：砂嚢球胞子虫）、アイメリア・テネラ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ：鶏盲腸球胞子虫）、アイメリア・マキシマ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍａｘｉｍａ：マキシマ球胞子虫）、アイメリア・ネカトリックス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｎｅｃａｔｒｉｘ：ネカトル球胞子虫）、アイメリア・ブルネッチィ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｂｒｕｎｅｔｔｉ：ブルネット球胞子虫）、アイメリア・ハガニ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｈａｇａｎｉ：ハガニ球胞子虫）、アイメリア・ミチス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍｉｔｉｓ：ミチス球胞子虫）、アイメリア・プレコックス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｐｒａｅｃｏｘ：早熟球胞子虫）、アイメリア・ミバティ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍｉｖａｔｉ：ミバト球胞子虫）、アイメリア・アウラチ（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｕｒａｔｉ）、アイメリア・バウエリ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｂａｕｅｒｉ）、アイメリア・レピドシレニス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｌｅｐｉｄｏｓｉｒｅｎｉｓ）、アイメリア・ロイシスシ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｌｅｕｃｉｓｃｉ）、アイメリア・ルチル（Ｅｉｍｅｒｉａ ｒｕｔｉｌｅ）、アイメリア・バナシ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｖａｎａｓｉ）、アイメリア・アンフィスバエニアルム（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｍｐｈｉｓｂａｅｎｉａｒｕｍ）、アイメリア・ウィッチェリ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｗｉｔｃｈｅｒｙ）、アイメリア・イエメネンサエ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｙｅｍｅｎｅｎｓａｅ）、アイメリア・アデノエイデス（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｄｅｎｏｅｉｄｅｓ）、アイメリア・コルキシ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｃｏｌｃｈｉｃｉ）、アイメリア・クルバタ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｃｕｒｖａｔａ）、アイメリア・ディスパーサ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｄｉｓｐｅｒｓａ）、アイメリア・デュオデナリス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｄｕｏｄｅｎａｌｉｓ）、アイメリア・フラテルクラエ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｆｒａｔｅｒｃｕｌａｅ）、アイメリア・ガロパボニス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｇａｌｌｏｐａｖｏｎｉｓ）、アイメリア・インノクア（Ｅｉｍｅｒｉａ ｉｎｎｏｃｕａ）、アイメリア・メレアグリディス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍｅｌｅａｇｒｉｄｉｓ）、アイメリア・メレアグリミチス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍｅｌｅａｇｒｉｍｉｔｉｓ）、アイメリア・ファシアニ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｐｈａｓｉａｎｉ）、アイメリア・プロセラ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｐｒｏｃｅｒａ）、アイメリア・プルプレイセファリ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｐｕｒｐｕｒｅｉｃｅｐｈａｌｉ）、アイメリア・アーサタ（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｈｓａｔａ）、アイメリア・アラバメンシス（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｌａｂａｍｅｎｓｉｓ）、アイメリア・アリジェビ（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｌｉｊｅｖｉ）、アイメリア・アスフェロニカ（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｓｐｈｅｒｏｎｉｃａ）、アイメリア・アルロインギ（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｒｌｏｉｎｇｉ）、アイメリア・アルンデリ（Ｅｉｍｅｒｉａ ａｒｕｎｄｅｌｉ）、アイメリア・バクエンシス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｂａｋｕｅｎｓｉｓ）、アイメリア・ボビス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｂｏｖｉｓ）、アイメリア・カメリ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｃａｍｅｌｉ）、アイメリア・カプリナ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｃａｐｒｉｎａ）、アイメリア・カプロビナ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｃａｐｒｏｖｉｎａ）、アイメリア・クリステンセニ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎｉ）、アイメリア・クレトリオノミイス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｃｌｅｔｈｒｉｏｎｏｍｙｉｓ）、アイメリア・コエシコラ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｃｏｅｃｉｃｏｌａ）、アイメリア・コントルタ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｃｏｎｔｏｒｔａ）、アイメリア・コウエシー（Ｅｉｍｅｒｉａ ｃｏｕｅｓｉｉ）、アイメリア・クランダリス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｃｒａｎｄａｌｌｉｓ）、アイメリア・ダマヘンシス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｄａｍｍａｈｅｎｓｉｓ）、アイメリア・ドウレリ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｄｏｗｌｅｒｉ）、アイメリア・エキシグア（Ｅｉｍｅｒｉａ ｅｘｉｇｕａ）、アイメリア・ファルシホルミス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｆａｌｃｉｆｏｒｍｉｓ）、アイメリア・ファラサニ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｆａｒａｓａｎｉｉ）、アイメリア・フェリシ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｆｅｒｒｉｓｉ）、アイメリア・フラベセンス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｆｌａｖｅｓｃｅｎｓ）、アイメリア・ガラチ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｇａｌｌａｔｉｉ）、アイメリア・グラヌロサ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｇｒａｎｕｌｏｓａ）、アイメリア・ヒルシ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｈｉｒｃｉ）、アイメリア・インテスチナリス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｉｓ）、アイメリア・イレシドュア（Ｅｉｍｅｒｉａ ｉｒｒｅｓｉｄｕａ）、アイメリア・イントリカタ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｉｎｔｒｉｃａｔａ）、アイメリア・ジョルチジェビ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｊｏｌｃｈｉｊｅｖｉ）、アイメリア・クリグスマニ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｋｒｉｊｇｓｍａｎｎｉ）、アイメリア・ラリメレンシス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｌａｒｉｍｅｒｅｎｓｉｓ）、アイメリア・マクサニエンシス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍａｃｕｓａｎｉｅｎｓｉｓ）、アイメリア・マグナ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍａｇｎａ）、アイメリア・マルコニ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍａｒｃｏｎｉｉ）、アイメリア・メディア（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍｅｄｉａ）、アイメリア・メラヌリ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍｅｌａｎｕｒｉ）、アイメリア・ミオキシ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｍｙｏｘｉ）、アイメリア・ナグプレンシス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｎａｇｐｕｒｅｎｓｉｓ）、アイメリア・ニーシュルジ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｎｉｅｓｃｈｕｌｚｉ）、アイメリア・ニナコリアヤキモバエ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｎｉｎａｋｏｈｌｙａｋｉｍｏｖａｅ）、アイメリア・オビノイダリス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｏｖｉｎｏｉｄａｌｉｓ）、アイメリア・パリダ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｐａｌｌｉｄａ）、アイメリア・パルストリス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｐａｌｕｓｔｒｉｓ）、アイメリア・パピラタ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｐａｐｉｌｌａｔａ）、アイメリア・パーフォランス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｐｅｒｆｏｒａｎｓ）、アイメリア・フォカエ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｐｈｏｃａｅ）、アイメリア・ピレアタ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｐｉｌｅａｔａ）、アイメリア・ピピストレルス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｐｉｐｉｓｔｒｅｌｌｕｓ）、アイメリア・ピリホルミス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｐｉｒｉｆｏｒｍｉｓ）、アイメリア・プリオノテムニ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｐｒｉｏｎｏｔｅｍｎｉ）、アイメリア・プロシオニス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｐｒｏｃｙｏｎｉｓ）、アイメリア・プンクタテ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｐｕｎｃｔａｔｅ）、アイメリア・ローブロウキ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｒｏｏｂｒｏｕｃｋｉ）、アイメリア・サウジエンシス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｓａｕｄｉｅｎｓｉｓ）、アイメリア・セアランデリ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｓｅａｌａｎｄｅｒｉ）、アイメリア・セパラタ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｓｅｐａｒａｔａ）、アイメリア・スチデ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｓｔｉｅｄａｅ）、アイメリア・ウルシニ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｕｒｓｉｎｉ）、アイメリア・ヴェルミフォルミス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｖｅｒｍｉｆｏｒｍｉｓ）、アイメリア・ウェイブリゲンシス（Ｅｉｍｅｒｉａ ｗｅｙｂｒｉｄｇｅｎｓｉｓ）、アイメリア・ウォバチ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｗｏｂａｔｉ）、およびアイメリア・ツェルニ（Ｅｉｍｅｒｉａ ｚｕｅｒｎｉｉ）からなる群の中から選択される１種以上（例えば、１種以上、２種以上、３種以上、または４種以上）であってもよい。

一実施形態による組成物は、下記表１に記載されたアイメリア属原虫からなる群より選択される１種以上（例えば、１種以上、２種以上、３種以上、または４種以上）の原虫によって誘導されたコクシジウム症の予防、改善、および／または治療効果に優れたものであり、下記表１に記載されたアイメリア属原虫は、それぞれ表１に記載された動物のコクシジウム症を誘導するものであってもよい。

一例による組成物は、アイメリア・テネラ、アイメリア・アセルブリナ、および／またはアイメリア・マキシマによって誘導されたコクシジウム症の予防、改善、および／または治療に効果が優れたものであり、特に、アイメリア・テネラによって誘導されたコクシジウム症の予防、改善、および／または治療に効果が優れたものであり得る。

一例において、前記コクシジウム症の予防または改善は、下記の（１）～（４）からなる群より選択される１種以上（例えば、１種以上、２種以上、３種以上、または４種すべて）を意味することができ、例えば、対照群（陰性対照群および／または陽性対照群）より下記の（１）～（４）からなる群より選択される１種以上が減少、抑制、および／または増加したものであってもよい：
（１）病変スコア（例えば、盲腸病変スコア）、糞便中のオーシスト排出量、および斃死率からなる群より選択される１種以上が減少；
（２）コクシジウム症による体重減少の抑制；
（３）抗コクシジウム総合指数（Ａｎｔｉｃｏｃｃｉｄｉａｌ ｉｎｄｅｘ；ＡＣＩ）が増加；および
（４）アイメリア属原虫の細胞侵入、細胞内の前記原虫の増殖、またはこれらすべてが減少。

一例において、前記病変スコアを決定する病変スコアリング方法は、Ｊｏｈｎｓｏｎ ＪＫ＆Ｒｅｉｄ ＷＭ（１９７０）文献（Ｊｏｙｃｅ Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｗ．Ｍａｌｃｏｌｍ Ｒｅｉｄ，Ａｎｔｉｃｏｃｃｉｄｉａｌ ｄｒｕｇｓ：Ｌｅｓｉｏｎ ｓｃｏｒｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ ｂａｔｔｅｒｙ ａｎｄ ｆｌｏｏｒ－ｐｅｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｉｃｋｅｎｓ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，１９７０）を参照して行われ、前記病変スコアは０～４等級であってもよい。一例において、前記病変スコアは、盲腸、十二指腸、および／または空腸で測定された病変スコアを意味することができ、各器官（盲腸、十二指腸、および／または空腸）で測定されたそれぞれの病変スコアの合計で計算される。

一例において、前記糞便中のオーシスト排出量は、個体から排出された糞便を収集して、顕微鏡を用いるか、カウンティングチャンバ（例えば、ＭｃＭａｓｔｅｒ ｃｈａｍｂｅｒ）などを用いて測定される。

一例において、前記斃死率は、コクシジウム症が誘導された動物個体の斃死率を意味するものであってもよく、死後剖検を行って、コクシジウム症以外の原因で死亡した個体の数は除外できる。

一例において、コクシジウム症が誘導された個体は、コクシジウム症が誘導されていない個体より体重が減少することができ、一例による組成物は、コクシジウム症が誘導による体重減少を抑制することができる。

一例において、前記抗コクシジウム総合指数は、下記の数式１で計算され、数式１で病変スコアは上述した方法のように計算される。

（数式１）
抗コクシジウム総合指数（ＡＣＩ）＝（攻撃接種後の生存率（％））＋（陰性対照群に対する１日あたりの増体量（％））－（病変スコア×１０）－（糞便中のオーシスト排出量指数）

前記攻撃接種は、コクシジウム症を誘導可能な原虫の投与（例えば、口腔接種など）を意味することができる。一例において、前記生存率は、攻撃接種後５～１０日目、７～１０日目、８～１０日目、７～９日目、７～８日目、または７日目に測定された生存率であり、死後剖検を行って、コクシジウム症以外の原因で死亡した個体の数は除いて生存率を測定することができる。

前記数式１中、陰性対照群に対する増体量は、陰性対照群（例えば、コクシジウム原虫が非感染した陰性対照群）の値を基準として百分率で計算された値であってもよい。

前記数式１での病変スコアは前述した通りである。

前記数式１中、糞便中のオーシスト排出量指数は、陰性対照群（例えば、原虫が感染した陰性対照群）の値を基準に百分率を計算して、計算した結果値が０％以上～１％未満の水準であれば０、１％以上～２６％未満の水準であれば５、２６％以上～５１％未満の水準であれば１０、５１％以上～７６％未満の水準であれば２０、７６％以上～１００％以下の水準は４０で数値化された値であってもよい。

一例において、前記マンゴスチンは、飼料組成物に１ｗ／ｗ％以下、１ｗ／ｗ％未満、１０^－１ｗ／ｗ％以下、５×１０^－２ｗ／ｗ％以下、２．５×１０^－２ｗ／ｗ％以下、２×１０^－２ｗ／ｗ％以下、１．２５×１０^－２ｗ／ｗ％以下、１０^－２ｗ／ｗ％以下、９×１０^－３ｗ／ｗ％以下、８×１０^－３ｗ／ｗ％以下、６．２５×１０^－３ｗ／ｗ％以下、７×１０^－３ｗ／ｗ％以下、６×１０^－３ｗ／ｗ％以下、５×１０^－３ｗ／ｗ％以下、４×１０^－３ｗ／ｗ％以下、１０^－７ｗ／ｗ％以上、１０^－６ｗ／ｗ％以上、１０^－５ｗ／ｗ％以上、１０^－４ｗ／ｗ％以上、５×１０^－４ｗ／ｗ％以上、１０^－３ｗ／ｗ％以上、１．５×１０^－３ｗ／ｗ％以上、２×１０^－３ｗ／ｗ％以上、３×１０^－３ｗ／ｗ％以上、４×１０^－３ｗ／ｗ％以上、５×１０^－３ｗ／ｗ％以上、６．２５×１０^－３ｗ／ｗ％以下、１０^－７～１ｗ／ｗ％、１０^－７～１０^－１ｗ／ｗ％、１０^－７～５×１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－７～１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－７～５×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－７～４×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－７～１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－７～５×１０^－４ｗ／ｗ％、１０^－７～１０^－４ｗ／ｗ％、１０^－７～１０^－５ｗ／ｗ％、１０^－６～１ｗ／％、１０^－６～１０^－１ｗ／ｗ％、１０^－６～５×１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－６～１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－６～５×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－６～４×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－６～１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－６～５×１０^－４ｗ／ｗ％、１０^－６～１０^－４ｗ／ｗ％、１０^－６～１０^－５ｗ／ｗ％、１０^－５～１ｗ／ｗ％、１０^－５～１０^－１ｗ／ｗ％、１０^－５～５×１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－５～１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－５～５×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－５～４×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－５～１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－５～５×１０^－４ｗ／ｗ、１０^－５～１０^－４ｗ／ｗ％、１０^－４～１ｗ／ｗ％、１０^－４～１０^－１ｗ／ｗ％、１０^－４～５×１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－４～１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－４～５×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－４～４×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－４～１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－４～５×１０^－４ｗ／ｗ％、１０^－３～１ｗ／ｗ％、１０^－３～１０^－１ｗ／ｗ％、１０^－３～５×１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－３～１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－３～５×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－３～４×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－３～２×１０^－３ｗ／ｗ％、または１０^－３～１．５×１０^－３ｗ／ｗ％で含まれる。一例において、前記飼料組成物は、前記有効成分を、全体重量を基準として上記の範囲で含む飼料（例えば、動物に最終的に摂取される配合飼料および／または単味飼料）であってもよい。

一例において、前記マンゴスチン（例えば、マンゴスチン抽出物）は、飼料組成物に１０００ｐｐｍ以下、５００ｐｐｍ以下、４００ｐｐｍ以下、３００ｐｐｍ以下、２５０ｐｐｍ以下、２００ｐｐｍ以下、１２５ｐｐｍ以下、１２５ｐｐｍ未満、１００ｐｐｍ以下、９０ｐｐｍ以下、８０ｐｐｍ以下、７０ｐｐｍ以下、６５ｐｐｍ以下、６２．５ｐｐｍ以下、６０ｐｐｍ以下、５０ｐｐｍ以下、０．１ｐｐｍ以上、１ｐｐｍ以上、５ｐｐｍ以上、１０ｐｐｍ以上、１５ｐｐｍ以上、２０ｐｐｍ以上、３０ｐｐｍ以上、４０ｐｐｍ以上、５０ｐｐｍ以上、６２．５ｐｐｍ以上、０．１～１０００ｐｐｍ、０．１～５００ｐｐｍ、０．１～４００ｐｐｍ、０．１～３００ｐｐｍ、０．１～２５０ｐｐｍ、０．１～２００ｐｐｍ、０．１～１２５ｐｐｍ、０．１～１００ｐｐｍ、０．１～９０ｐｐｍ、０．１～８０ｐｐｍ、０．１～７０ｐｐｍ、０．１～６５ｐｐｍ、０．１～６０ｐｐｍ、０．１～５０ｐｐｍ、１～１０００ｐｐｍ、１～５００ｐｐｍ、１～４００ｐｐｍ、１～３００ｐｐｍ、１～２５０ｐｐｍ、１～２００ｐｐｍ、１～１２５ｐｐｍ、１～１００ｐｐｍ、１～９０ｐｐｍ、１～８０ｐｐｍ、１～７０ｐｐｍ、１～６５ｐｐｍ、１～６０ｐｐｍ、１～５０ｐｐｍ、５～１０００ｐｐｍ、５～５００ｐｐｍ、５～４００ｐｐｍ、５～３００ｐｐｍ、５～２５０ｐｐｍ、５～２００ｐｐｍ、５～１２５ｐｐｍ、５～１００ｐｐｍ、５～９０ｐｐｍ、５～８０ｐｐｍ、５～７０ｐｐｍ、５～６５ｐｐｍ、５～６０ｐｐｍ、５～５０ｐｐｍ、１０～１０００ｐｐｍ、１０～５００ｐｐｍ、１０～４００ｐｐｍ、１０～３００ｐｐｍ、１０～２５０ｐｐｍ、１０～２００ｐｐｍ、１０～１２５ｐｐｍ、１０～１００ｐｐｍ、１０～９０ｐｐｍ、１０～８０ｐｐｍ、１０～７０ｐｐｍ、１０～６５ｐｐｍ、１０～６０ｐｐｍ、１０～５０ｐｐｍ、２０～１０００ｐｐｍ、２０～５００ｐｐｍ、２０～４００ｐｐｍ、２０～３００ｐｐｍ、２０～２５０ｐｐｍ、２０～２００ｐｐｍ、２０～１２５ｐｐｍ、２０～１００ｐｐｍ、２０～９０ｐｐｍ、２０～８０ｐｐｍ、２０～７０ｐｐｍ、２０～６５ｐｐｍ、２０～６０ｐｐｍ、２０～５０ｐｐｍ、３０～１０００ｐｐｍ、３０～５００ｐｐｍ、３０～４００ｐｐｍ、３０～３００ｐｐｍ、３０～２５０ｐｐｍ、３０～２００ｐｐｍ、３０～１２５ｐｐｍ、３０～１００ｐｐｍ、３０～９０ｐｐｍ、３０～８０ｐｐｍ、３０～７０ｐｐｍ、３０～６５ｐｐｍ、３０～６０ｐｐｍ、３０～５０ｐｐｍ、４０～１０００ｐｐｍ、４０～５００ｐｐｍ、４０～４００ｐｐｍ、４０～３００ｐｐｍ、４０～２５０ｐｐｍ、４０～２００ｐｐｍ、４０～１２５ｐｐｍ、４０～１００ｐｐｍ、４０～９０ｐｐｍ、４０～８０ｐｐｍ、４０～７０ｐｐｍ、４０～６５ｐｐｍ、４０～６０ｐｐｍ、４０～５０ｐｐｍ、５０～１０００ｐｐｍ、５０～５００ｐｐｍ、５０～４００ｐｐｍ、５０～３００ｐｐｍ、５０～２５０ｐｐｍ、５０～２００ｐｐｍ、５０～１２５ｐｐｍ、５０～１００ｐｐｍ、５０～９０ｐｐｍ、５０～８０ｐｐｍ、５０～７０ｐｐｍ、５０～６５ｐｐｍ、または５０～６０ｐｐｍの濃度で含まれる。

一例において、上記の範囲でマンゴスチン（例えば、マンゴスチン抽出物）を含む場合、上記の範囲外のマンゴスチンを含む場合より抗コクシジウム活性が優れたものであり得る。

一例によれば、マンゴスチン抽出物（例えば、マンゴスチン果皮抽出物）は、マンゴスチン抽出物に含まれている各個別性分（例えば、キサントン（ｘａｎｔｈｏｎｅ）、α－マンゴスチン（ａｌｐｈａ－ｍａｎｇｏｓｔｉｎ）、エピカテキン（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ）、および／またはケルセチン（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ））より（１）同じ濃度で処理時、抗コクシジウム活性に優れ、（２）毒性が低く（例えば、細胞毒性を示す最小濃度がさらに高い）、安全性に優れている。一例によるマンゴスチン（例えば、マンゴスチン抽出物）は、マンゴスチンに含まれている個別成分より組成物中に含まれている濃度を高めても安全的に優れた抗コクシジウム活性を示すことができ、長期間摂取しても別途の副作用が現れないことがある。

本発明において、「飼料」とは、動物が食べて、摂取し、消化させるための、またはこれに適当な任意の天然または人工規定食、一片食など、または前記一片食の成分を意味することができる。一例による飼料組成物には、濃厚飼料、および／または特殊飼料がさらに含まれる。前記濃厚飼料は、小麦、燕麦、トウモロコシなどの穀類を含む種子果実類、穀物を精製して得られる副産物として米ぬか、ふすま、大麦ぬかなどを含むぬか類、豆、油菜、胡麻、アマニ、ココヤシなどを採油して得られる副産物である油かす類と、サツマイモ、ジャガイモなどからデンプンを抜いた残りであるデンプンかすの主成分である残存デンプン質類などのかす類、魚粉、魚かす、魚類から得られた新鮮な液状物を濃縮させたものであるフィッシュソリュブル（ｆｉｓｈ ｓｏｌｕｂｌｅ）、肉粉、血粉、羽毛粉、脱脂粉乳、牛乳からチーズ、脱脂乳からカゼインを製造する際の残液であるホエー（ｗｈｅｙ）を乾燥した乾燥ホエーなどの動物質飼料、酵母、クロレラ、および／または海藻類などであってもよい。

一例による飼料組成物は、最終的に動物が摂取する形態の飼料、飼料に配合可能な食餌補助剤、および／または飼料添加剤を意味することができる。前記食餌補助剤とは、例えば、治療剤または消化剤を動物に提供する製剤含有組成物で、通常、生体の熱量摂取供給源、つまり、エネルギー供給源ではなく、通常の動物飼料に追加して摂取される組成物を意味することができる。前記飼料添加剤とは、栄養素の補充および体重減少の予防、飼料内繊維素の消化利用性増進、乳質改善、繁殖障害の予防および受胎率の向上、夏期高温ストレスの予防などの多様な効果を目的として飼料に添加する物質を意味する。一例において、コクシジウム症の予防、改善、または治療を目的として添加される物質を意味することができる。

一例において、前記飼料組成物は、飼料添加剤であってもよく、一例による飼料添加剤が飼料（例えば、動物に最終的に摂取される配合飼料および／または単味飼料）に配合される時、全体の飼料重量を基準として、０．００１％以上、０．００５％以上、０．０１％以上、０．０５％以上、０．１％以上、０．５％以上、１％以下、０．５％以下、０．１％以下、０．０５％以下、０．０１％以下、０．００５％以下、０．００１～１％、０．００１～０．５％、０．００１～０．１％、０．００１～０．０５％、０．００１～０．０１％、０．００１～０．００５％、０．００５～１％、０．００５～０．５％、０．００５～０．１％、０．００５～０．０５％、０．００５～０．０１％、０．０１～１％、０．０１～０．５％、０．０１～０．１％、０．０１～０．０５％、０．０５～１％、０．０５～０．５％、０．０５～０．１％、０．１～１％、０．１～０．５％、または０．５～１％の重量で添加されて、飼料原料、補助飼料、補助剤、および／または一例による有効成分以外の他の種類の添加剤などと配合されてもよい。

他の態様は、マンゴスチンを含む、コクシジウム症の予防、または治療用薬学組成物を提供することができ、薬学組成物に含まれるマンゴスチンについては上述した通りである。

他の一実施形態による薬学組成物は、マンゴスチン果皮、マンゴスチン果肉、またはその組み合わせ（マンゴスチン果皮および果肉）を含んでもよい。

他の一実施形態による薬学組成物は、マンゴスチンそのもの、乾燥物、粉砕物、および抽出物からなる群より選択される１種以上（例えば、１種以上、２種以上、３種以上、または４種全て）を含んでもよい。

他の一実施形態による薬学組成物は、マンゴスチン果皮抽出物（例えば、マンゴスチン果皮からのエタノール抽出物）を含んでもよい。

一実施形態による薬学組成物は、単一剤として使用することもでき、公認されたコクシジウム症の予防または治療効果を持つことが知られた薬学組成物をさらに含み、合製剤として製造して使用してもよい。薬学的に許容可能な担体、賦形剤、または希釈剤を追加して薬剤学的単位投与型で剤形化することができる。

本発明において、「薬学的に許容可能な」とは、生物体を大きく刺激せず、投与活性物質の生物学的活性および特性を阻害しないことを意味する。一例により、薬学的に許容可能な担体を含む前記薬学組成物は、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、懸濁剤、内容液剤、乳剤、シロップ剤、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、および坐剤からなる群より選択されるいずれか１つの剤形を有することができる。

前記薬学組成物は、経口または非経口の様々な剤形であってもよい。製剤化する場合には、通常使用する充填剤、増量剤、結合剤、湿潤剤、崩壊剤、界面活性剤などの希釈剤、または賦形剤を用いて調製されてもよい。

経口投与のための固形製剤には、錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤などが含まれ、このような固形製剤は、１つ以上の化合物に少なくとも１つ以上の賦形剤、例えば、デンプン、炭酸カルシウム、スクロース（ｓｕｃｒｏｓｅ）またはラクトース（ｌａｃｔｏｓｅ）、ゼラチンなどを混合して調製されてもよい。また、単純な賦形剤のほか、ステアリン酸マグネシウム、タルクなどの潤滑剤も使用可能である。経口投与のための液状製剤としては、懸濁剤、内容液剤、乳剤、シロップ剤などが該当するが、よく使用される単純希釈剤である水、リキッドパラフィンのほか、様々な賦形剤、例えば、湿潤剤、甘味剤、芳香剤、保存剤などが含まれる。

非経口投与のための製剤には、滅菌された水溶液、非水性溶剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥製剤、坐剤が含まれる。非水性溶剤、懸濁溶剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブオイルなどの植物性油、エチルオレエートなどの注射可能なエステルなどを使用することができる。坐剤の基剤としては、ウィテップゾール（ｗｉｔｅｐｓｏｌ）、マクロゴール、トゥイーン（ｔｗｅｅｎ）６１、カカオ脂、ラウリン脂、グリセロゼラチンなどを使用することができる。

一例において、前記薬学組成物は、それぞれの使用目的に合わせて、通常の方法により、散剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、エマルジョン、シロップ、エアゾールなどの経口剤形、滅菌注射溶液の注射剤などの多様な形態で剤形化して使用することができ、経口投与するか、静脈内、腹腔内、皮下、直腸、局所投与などを含む多様な経路を通して投与されてもよい。

一例において、前記薬学組成物には担体、賦形剤または希釈剤などをさらに含むことができ、含有できる適した担体、賦形剤または希釈剤の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、キシリトール、エリスリトール、マルチトール、デンプン、アカシアガム、アルギネート、ゼラチン、リン酸カルシウム、ケイ酸カルシウム、セルロース、メチルセルロース、非晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、水、メチルヒドロキシベンゾエート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、マグネシウムステアレート、および鉱物油などが挙げられる。また、前記薬学組成物は充填剤、抗凝集剤、潤滑剤、湿潤剤、香料、乳化剤、防腐剤などをさらに含むことができる。

一例において、前記薬学組成物中の有効成分（マンゴスチン（例えば、マンゴスチン抽出物））の有効量は、患者（個体）の年齢、性別、体重により異なり、一般には、体重１ｋｇあたり、０．０００１～０．００１ｍｇ／ｋｇ、０．０００１～０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．０００１～０．１ｍｇ／ｋｇ、０．０００１～１ｍｇ／ｋｇ、０．０００１～１０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．０００１～２３１ｍｇ／ｋｇ、０．０００１～２５０ｍｇ／ｋｇ、０．０００１～５００ｍｇ／ｋｇ、０．０００１～１０００ｍｇ／ｋｇ、０．００１～０．０１ｍｇ／ｋｇ、０．００１～０．１ｍｇ／ｋｇ、０．００１～１ｍｇ／ｋｇ、０．００１～１０ｍｇ／ｋｇ、０．００１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．００１～２３１ｍｇ／ｋｇ、０．００１～２５０ｍｇ／ｋｇ、０．００１～５００ｍｇ／ｋｇ、０．００１～１０００ｍｇ／ｋｇ、０．０１～０．１ｍｇ／ｋｇ、０．０１～１ｍｇ／ｋｇ、０．０１～１０ｍｇ／ｋｇ、０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．０１～２５０ｍｇ／ｋｇ、０．０１～５００ｍｇ／ｋｇ、０．０１～１０００ｍｇ／ｋｇ、０．１～１ｍｇ／ｋｇ、０．１～１０ｍｇ／ｋｇ、０．１～１００ｍｇ／ｋｇ、０．１～２３１ｍｇ／ｋｇ、０．１～２５０ｍｇ／ｋｇ、０．１～５００ｍｇ／ｋｇ、０．１～１０００ｍｇ／ｋｇ、１～１０ｍｇ／ｋｇ、１～１００ｍｇ／ｋｇ、１～２３１ｍｇ／ｋｇ、１～２５０ｍｇ／ｋｇ、１～５００ｍｇ／ｋｇ、１～１０００ｍｇ／ｋｇ、１０～１００ｍｇ／ｋｇ、１０～２３１ｍｇ／ｋｇ、１０～２５０ｍｇ／ｋｇ、１０～５００ｍｇ／ｋｇ、１０～１０００ｍｇ／ｋｇ、１００～２３１ｍｇ／ｋｇ、１００～２５０ｍｇ／ｋｇ、１００～５００ｍｇ／ｋｇ、１００～１０００ｍｇ／ｋｇ、２５０～５００ｍｇ／ｋｇ、または２５０～１０００ｍｇ／ｋｇを毎日または隔日投与するか、１日１～３回に分けて投与することができる。しかし、投与経路、疾病の重症度、性別、体重、年齢などによって増減できるので、前記投与量がいかなる方法でも本発明の範囲を限定するものではない。一例において、前記組成物が腹腔投与される場合、０．００１～２５０ｍｇ／ｋｇの濃度で投与されてもよい。

一例において、前記薬学組成物の投与量は、患者の体重、年齢、性別、健康状態、食餌、投与時間、投与方法、排泄率、および疾患の重症度などに応じてその範囲が多様であり得る。

一例において、前記マンゴスチンは、薬学組成物に１ｗ／ｗ％以下、１ｗ／ｗ％未満、１０^－１ｗ／ｗ％以下、５×１０^－２ｗ／ｗ％以下、２．５×１０^－２ｗ／ｗ％以下、２×１０^－２ｗ／ｗ％以下、１．２５×１０^－２ｗ／ｗ％以下、１０^－２ｗ／ｗ％以下、９×１０^－３ｗ／ｗ％以下、８×１０^－３ｗ／ｗ％以下、６．２５×１０^－３ｗ／ｗ％以下、７×１０^－３ｗ／ｗ％以下、６×１０^－３ｗ／ｗ％以下、５×１０^－３ｗ／ｗ％以下、４×１０^－３ｗ／ｗ％以下、１０^－７ｗ／ｗ％以上、１０^－６ｗ／ｗ％以上、１０^－５ｗ／ｗ％以上、１０^－４ｗ／ｗ％以上、５×１０^－４ｗ／ｗ％以上、１０^－３ｗ／ｗ％以上、１．５×１０^－３ｗ／ｗ％以上、２×１０^－３ｗ／ｗ％以上、３×１０^－３ｗ／ｗ％以上、４×１０^－３ｗ／ｗ％以上、５×１０^－３ｗ／ｗ％以上、６．２５×１０^－３ｗ／ｗ％以下、１０^－７～１ｗ／ｗ％、１０^－７～１０^－１ｗ／ｗ％、１０^－７～５×１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－７～１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－７～５×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－７～４×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－７～１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－７～５×１０^－４ｗ／ｗ％、１０^－７～１０^－４ｗ／ｗ％、１０^－７～１０^－５ｗ／ｗ％、１０^－６～１ｗ／％、１０^－６～１０^－１ｗ／ｗ％、１０^－６～５×１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－６～１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－６～５×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－６～４×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－６～１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－６～５×１０^－４ｗ／ｗ％、１０^－６～１０^－４ｗ／ｗ％、１０^－６～１０^－５ｗ／ｗ％、１０^－５～１ｗ／ｗ％、１０^－５～１０^－１ｗ／ｗ％、１０^－５～５×１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－５～１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－５～５×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－５～４×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－５～１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－５～５×１０^－４ｗ／ｗ、１０^－５～１０^－４ｗ／ｗ％、１０^－４～１ｗ／ｗ％、１０^－４～１０^－１ｗ／ｗ％、１０^－４～５×１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－４～１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－４～５×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－４～４×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－４～１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－４～５×１０^－４ｗ／ｗ％、１０^－３～１ｗ／ｗ％、１０^－３～１０^－１ｗ／ｗ％、１０^－３～５×１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－３～１０^－２ｗ／ｗ％、１０^－３～５×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－３～４×１０^－３ｗ／ｗ％、１０^－３～２×１０^－３ｗ／ｗ％、または１０^－３～１．５×１０^－３ｗ／ｗ％で含まれる。

一例において、前記マンゴスチン（例えば、マンゴスチン抽出物）は、薬学組成物に１０００ｐｐｍ以下、５００ｐｐｍ以下、４００ｐｐｍ以下、３００ｐｐｍ以下、２５０ｐｐｍ以下、２００ｐｐｍ以下、１２５ｐｐｍ以下、１２５ｐｐｍ未満、１００ｐｐｍ以下、９０ｐｐｍ以下、８０ｐｐｍ以下、７０ｐｐｍ以下、６５ｐｐｍ以下、６０ｐｐｍ以下、６２．５ｐｐｍ以下、５０ｐｐｍ以下、０．１ｐｐｍ以上、１ｐｐｍ以上、５ｐｐｍ以上、１０ｐｐｍ以上、１５ｐｐｍ以上、２０ｐｐｍ以上、３０ｐｐｍ以上、４０ｐｐｍ以上、５０ｐｐｍ以上、６２．５ｐｐｍ以上、０．１～１０００ｐｐｍ、０．１～５００ｐｐｍ、０．１～４００ｐｐｍ、０．１～３００ｐｐｍ、０．１～２５０ｐｐｍ、０．１～２００ｐｐｍ、０．１～１２５ｐｐｍ、０．１～１００ｐｐｍ、０．１～９０ｐｐｍ、０．１～８０ｐｐｍ、０．１～７０ｐｐｍ、０．１～６５ｐｐｍ、０．１～６０ｐｐｍ、０．１～５０ｐｐｍ、１～１０００ｐｐｍ、１～５００ｐｐｍ、１～４００ｐｐｍ、１～３００ｐｐｍ、１～２５０ｐｐｍ、１～２００ｐｐｍ、１～１２５ｐｐｍ、１～１００ｐｐｍ、１～９０ｐｐｍ、１～８０ｐｐｍ、１～７０ｐｐｍ、１～６５ｐｐｍ、１～６０ｐｐｍ、１～５０ｐｐｍ、５～１０００ｐｐｍ、５～５００ｐｐｍ、５～４００ｐｐｍ、５～３００ｐｐｍ、５～２５０ｐｐｍ、５～２００ｐｐｍ、５～１２５ｐｐｍ、５～１００ｐｐｍ、５～９０ｐｐｍ、５～８０ｐｐｍ、５～７０ｐｐｍ、５～６５ｐｐｍ、５～６０ｐｐｍ、５～５０ｐｐｍ、１０～１０００ｐｐｍ、１０～５００ｐｐｍ、１０～４００ｐｐｍ、１０～３００ｐｐｍ、１０～２５０ｐｐｍ、１０～２００ｐｐｍ、１０～１２５ｐｐｍ、１０～１００ｐｐｍ、１０～９０ｐｐｍ、１０～８０ｐｐｍ、１０～７０ｐｐｍ、１０～６５ｐｐｍ、１０～６０ｐｐｍ、１０～５０ｐｐｍ、２０～１０００ｐｐｍ、２０～５００ｐｐｍ、２０～４００ｐｐｍ、２０～３００ｐｐｍ、２０～２５０ｐｐｍ、２０～２００ｐｐｍ、２０～１２５ｐｐｍ、２０～１００ｐｐｍ、２０～９０ｐｐｍ、２０～８０ｐｐｍ、２０～７０ｐｐｍ、２０～６５ｐｐｍ、２０～６０ｐｐｍ、２０～５０ｐｐｍ、３０～１０００ｐｐｍ、３０～５００ｐｐｍ、３０～４００ｐｐｍ、３０～３００ｐｐｍ、３０～２５０ｐｐｍ、３０～２００ｐｐｍ、３０～１２５ｐｐｍ、３０～１００ｐｐｍ、３０～９０ｐｐｍ、３０～８０ｐｐｍ、３０～７０ｐｐｍ、３０～６５ｐｐｍ、３０～６０ｐｐｍ、３０～５０ｐｐｍ、４０～１０００ｐｐｍ、４０～５００ｐｐｍ、４０～４００ｐｐｍ、４０～３００ｐｐｍ、４０～２５０ｐｐｍ、４０～２００ｐｐｍ、４０～１２５ｐｐｍ、４０～１００ｐｐｍ、４０～９０ｐｐｍ、４０～８０ｐｐｍ、４０～７０ｐｐｍ、４０～６５ｐｐｍ、４０～６０ｐｐｍ、４０～５０ｐｐｍ、５０～１０００ｐｐｍ、５０～５００ｐｐｍ、５０～４００ｐｐｍ、５０～３００ｐｐｍ、５０～２５０ｐｐｍ、５０～２００ｐｐｍ、５０～１２５ｐｐｍ、５０～１００ｐｐｍ、５０～９０ｐｐｍ、５０～８０ｐｐｍ、５０～７０ｐｐｍ、５０～６５ｐｐｍ、または５０～６０ｐｐｍの濃度で含まれる。

一例によれば、マンゴスチン（例えば、マンゴスチン抽出物および／またはマンゴスチン果皮抽出物）は、マンゴスチンに含まれている個別成分（例えば、キサントン（ｘａｎｔｈｏｎｅ）、α－マンゴスチン（ａｌｐｈａ－ｍａｎｇｏｓｔｉｎ）、エピカテキン（Ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ）、および／またはケルセチン（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ））より（１）同じ濃度で処理時、抗コクシジウム活性に優れ、（２）毒性が低く（例えば、細胞毒性を示す最小濃度がさらに高い）、安全性に優れている。一例によるマンゴスチン（例えば、マンゴスチン抽出物）は、マンゴスチンに含まれている個別成分より組成物中に含まれている濃度を高めても安全的に優れた抗コクシジウム活性を示すことができ、長期間摂取しても別途の副作用が現れないことがある。

一例において、前記薬学組成物は、多様な経路を通して対象に投与可能である。前記投与は、任意の適切な方法で個体（患者）に所定の物質を提供することを意味することができ、前記薬学組成物の投与経路は、目的組織に到達できる限り、一般的なすべての経路を通して経口投与および／または非経口投与できる。非経口投与時、皮膚外用、腹腔内注射、直腸内注射、皮下注射、静脈注射、筋肉内注射、および／または胸部内注射を選択することができる。また、一例による組成物は、有効成分を標的細胞に伝達できる任意の装置を用いて投与されてもよい。

さらに他の態様は、マンゴスチンを含む、アイメリア属原虫に対する抗原虫用組成物を提供することができる。前記マンゴスチン、および／またはアイメリア属原虫に関する説明は上述した通りである。

一例による抗原虫用組成物は、マンゴスチン果皮、マンゴスチン果肉、またはその組み合わせ（マンゴスチン果皮および果肉）を含んでもよい。

一例による抗原虫用組成物は、マンゴスチンそのもの、乾燥物、粉砕物、および抽出物からなる群より選択される１種以上（例えば、１種以上、２種以上、３種以上、または４種すべて）を含んでもよい。

一実施形態による抗原虫用組成物は、マンゴスチン果皮抽出物（例えば、マンゴスチン果皮からのエタノール抽出物）を含んでもよい。

一例において、前記アイメリア属原虫に対する抗原虫活性（効果、効能）に優れているのは、下記の（１）および／または（２）の特性を意味することができ、例えば、対照群（陰性対照群および／または陽性対照群）に比べて下記の（１）および／または（２）の特性を示すものであってもよい：
（１）アイメリア属原虫を死滅させる効果に優れる；および／または
（２）アイメリア属原虫の細胞侵入効果および／または細胞内の前記原虫の増殖効果抑制。

一例において、前記マンゴスチン（例えば、マンゴスチン抽出物）は、抗原虫用組成物に飼料組成物および／または薬学組成物で上述したような濃度範囲で含まれる。一例において、上述した濃度範囲で有効成分を含む組成物は、上記の濃度範囲以外の範囲で含む場合より抗原虫活性に優れたものであり得る。

さらに他の態様は、前記組成物（例えば、前記飼料組成物、前記飼料添加剤、前記薬学組成物、および／または前記抗原虫用組成物）を動物（例えば、ヒトを除いた動物）に投与する段階を含む、コクシジウム症の予防、改善、または治療方法を提供することができる。一例において、前記組成物を投与する段階の前に、前記コクシジウム症の予防、改善、または治療を必要とする個体（患者）を確認（選別）する段階をさらに含むことができる。前記組成物およびコクシジウム症については上述した通りである。一例によれば、前記個体を確認する段階は、個体から分離された糞便からコクシジウムを誘導可能な原虫のオーシストを検出する段階を含むことができる。一例によるコクシジウム症の予防、改善、または治療方法において、前記組成物の投与方法、投与経路、および／または投与量については上述した通りである。

一例によれば、前記組成物は、薬学的に有効な量で投与することができる。本発明において、「薬学的に有効な量」は、医学的治療に適用可能な合理的なベネフィット／リスクの比率で疾患を治療するのに十分な量を意味し、有効用量の水準は、患者の疾患の種類、重症度、薬物の活性、薬物に対する敏感度、投与時間、投与経路および排出比率、治療期間、同時使用される薬物を含む要素およびその他の医学分野でよく知られている要素に応じて決定可能である。一例によれば、前記組成物は、個別治療剤として投与するか、他の抗コクシジウム剤と併用して投与されてもよく、従来の治療剤とは同時に、別途に、または順次に投与されてもよいし、単一または多重投与されてもよい。前記要素をすべて考慮して副作用なしに最小限の量で最大の効果が得られる量を投与することが重要であり、これは当業者によって容易に決定可能である。

一例において、前記コクシジウム症の予防、改善、または治療方法が適用される対象は、コクシジウム症が発病するか、または発病しうる動物を意味し、前記動物は、ヒト、ウマ、ウシ、マウス、ラット、イヌ、ネコなどを含む哺乳類、家禽類（例えば、種鶏、肉鶏、および／または産卵鶏など）などを含む鳥類、魚類、両生類、および／または爬虫類などであってもよい。

一例において、前記コクシジウム症の予防、改善、または治療方法が適用される動物は、前記表１に記載された動物からなる群より選択される１種以上（例えば、１種以上、２種以上、または３種以上）であってもよく、例えば、ヒト、ニワトリ、カモ、ガチョウ、シチメンチョウ、ウズラ、キジ、ハト、オウム、ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、ウマ、レイヨウ、オリックス、サル、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、タヌキ、リス、コウモリ、モルモット、ラクダ、リマ、アルパカ、ウォンバット、トカゲ、キンギョ、フナ、ティラピア、バーベル、ハイギョ、およびヨーロッパのチャブからなる群より選択される１種以上（例えば、１種以上、２種以上、または３種以上）であってもよい。一例において、前記動物は、ヒトを除いた動物であってもよい。

他の態様は、マンゴスチンのコクシジウム症の予防、改善、および／または治療用組成物（例えば、飼料組成物、薬学組成物）または抗原虫用組成物の製造に使用するための用途；マンゴスチンのコクシジウム症の予防、改善、および／または治療に使用するための用途；および／またはマンゴスチンのアイメリア属原虫に対する抗原虫（例えば、アイメリア属原虫の死滅；および／またはアイメリア属原虫の細胞侵入および／または増殖抑制）に使用するための用途を提供する。前記用途において、マンゴスチンについては上述した通りであり、例えば、マンゴスチンは、マンゴスチンそのもの、乾燥物、粉砕物、および／または抽出物であってもよい。前記用途において、コクシジウム症、抗原虫、およびアイメリア属原虫については上述した通りである。

本発明に係るマンゴスチンを含む組成物は、コクシジウム症を誘導可能な原虫に対する直接死滅効果、前記原虫の細胞侵入抑制効果、および／または細胞内の前記原虫の増殖抑制効果に優れ、生体内コクシジウム症の予防、改善、および治療効果に優れている。

マンゴスチン、キサントン、および抗コクシジウム剤（ジクラズリル、サリノマイシン）の処理による原虫の細胞侵入率抑制効果を示す図である。 マンゴスチン、キサントン、および抗コクシジウム剤（ジクラズリル、サリノマイシン）の処理による細胞内の原虫の増殖抑制効果を示す図である。 マンゴスチン抽出物の耐酸性を測定した結果を示す図である。 マンゴスチン抽出物の耐熱性を測定した結果を示す図である。

以下、本発明の実施例によってより詳しく説明するが、以下の実施例によって本発明の範囲が限定されるものではない。

実施例１．マンゴスチンの生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）抗コクシジウム活性

実施例１－１．実験施設
大韓民国の慶尚南道（キョンサンナムド）所在の動物実験施設で生体内（ｉｎ ｖｉｖｏ）抗コクシジウム効能評価試験を行った。１日齢の雌のロス（Ｒｏｓｓ）肉鶏の体重を個別的に測定し、ランダムに群を分けて実験に使用した。実験設計に関する事項および条件は表２に記載した。

韓国養鶏仕様管理指針に従って飼育場を管理した。試験開始前にケージ（ｃａｇｅ）および飼育場は洗浄および消毒した。飼育場の温度４０～４１℃および４０～５０％の湿度を維持し、連続してモニタリングした。

実施例１－２．マンゴスチン抽出物の製造
マンゴスチン（Ｇａｒｃｉｎｉａ ｍａｎｇｏｓｔａｎａ Ｌ．出処：Ｈｅｕｎｇ－ｉｌｌ ｈｅｒｂ．Ｃｏ．，Ｌｔｄ；原産地：Ｃｈｉｎａ，Ｃｈａｎｇｓｈａ，Ｗａｎｇｃｈｅｎｇ ｄｉｓｔｒｉｃｔのＣｈａｎｇｓｈａ ｈｅｒｂｗａｙ ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｃｏ．，Ｌｔｄ；２０２０年６月に購入）の果皮を乾燥粉砕した原末１２０ｋｇを７５％エタノール（ｇｒａｉｎ ａｌｃｏｈｏｌ、精製されたエチルアルコール）を溶媒として６０℃の恒温水槽に浸漬して２回抽出した。抽出後、ろ紙を用いてろ過後、回転減圧濃縮機を用いて減圧濃縮し、粉末化して、最終的に約１ｋｇの抽出粉末を得て、後の実験に使用した。

実施例１－３．実験設計
飼料は大韓飼料Ａ１－初餌製品を使用し、飼料に各素材（サリノマイシン（チェイルバイオ社のチェイルサリノ－６０製品）、キサントン（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社のＸ６００製品）、前記実施例１－２で製造したマンゴスチン抽出物）を下記表３に記載された濃度でそれぞれ添加して自家配合した。一般飼料および配合された飼料には抗生剤と補充剤を使用せず、各素材以外に抗コクシジウム剤を添加しなかった。実験期間にわたって肉鶏に飼料を自由食で摂取させた。対照群または試験群別にランダムに配置されたケージに１日齢肉鶏を２０頭ずつ入れて飼育し、一般飼料を７日間給餌後、上記で製造した配合飼料を対照群または試験群別に区分して摂取させた。

対照群（陰性対照群または陽性対照群）および試験群に投与された飼料のフォーミュレーションとアイメリア・テネラによるコクシジウム症誘導の有無は下記表３に記載した。試験群別にランダムに配置されたケージに１日齢肉鶏を２０頭ずつ入れて飼育し、一般飼料を７日間給餌後、表３に記載の通り、配合飼料を試験群別に区分して摂取させた。

コクシジウム症誘導は、９０％以上成熟した（ｓｐｏｒｕｌａｔｉｏｎ）アイメリア・テネラのオーシスト（ｏｏｃｙｓｔ、虫卵）を、１４日齢肉鶏に個体１匹あたり１０，０００個のオーシストを経口チューブ式で口腔接種（攻撃接種）して行った。

実施例１－４．マンゴスチンの抗コクシジウム活性の測定
前記実施例１－３で設計した試験群別の抗コクシジウム効能は抗コクシジウム総合指数（Ａｎｔｉｃｏｃｃｉｄｉａｌ ｉｎｄｅｘ；ＡＣＩ）として示し、抗コクシジウム総合指数は下記の数式２によって計算した。ＡＣＩ点数は２００点満点であり、ＡＣＩ点数が高いほど、抗コクシジウム能に優れていることを意味し、１２０点以上１４０点未満であれば、抗コクシジウム素材として効果があると判断し、１４０点以上～１６０点未満であれば、抗コクシジウム素材として優れていると判断し、１６０点以上の場合、抗コクシジウム効果が非常に優れていると判断した（Ｌｕｉｓ Ｍｉｇｕｅｌ Ｄｅ Ｐａｂｌｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｃｏｃｃｉｄｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍａｓｌｉｎｉｃ ａｃｉｄ ａｇａｉｎｓｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ ｉｎ ｃｈｉｃｋｅｎｓ，Ｐａｒａｓｉｔｏｌ Ｒｅｓ，２０１０）。

（数式２）
抗コクシジウム総合指数（ＡＣＩ）＝（攻撃接種後の生存率（％））＋（陰性対照群に対する１日あたりの増体量（ＲＷＧ、％））－（病変スコア×１０）－（糞便中のオーシスト排出指数）

１）生存率：斃死個体数を毎日記録し、斃死の原因を把握するために死後剖検を行って、コクシジウム症以外の原因で死亡した個体の数は除外した。攻撃接種後８日目までの生存率（％）を抗コクシジウム総合指数の計算に使用した。

２）１日あたりの増体量：個体に原虫を攻撃接種する前と攻撃接種後７日目までの体重をケージ別に測定し、その差を日数で割って１日あたりの増体量（ＡＤＧ、ｇ／ｄ）を計算した。各実験群の１日あたりの増体量（ＡＤＧ、ａｖｅｒａｇｅ ｄａｉｌｙ ｇａｉｎ；ｇ／ｄ）を非感染した陰性対照群の増体量（ＡＤＧ、ｇ／ｄ）で割り、１００を掛けて計算した「陰性対照群に対する１日あたりの増体量（ＲＷＧ、％）」を抗コクシジウム総合指数の計算に使用した。

各対照群および試験群で測定した１日あたりの増体量（ＡＤＧ、ｇ／ｄ）および陰性対照群に対する１日あたりの増体量（ＲＷＧ、％）を下記表４に示した。

３）病変スコアリング：攻撃接種後８日目にケージ別に肉鶏を４匹ずつ剖検し、腸を切開開放した。肉鶏の盲腸部位におけるそれぞれのコクシジウム病変に対してスコアリングした。病変スコアリング方法はＪｏｈｎｓｏｎ ＪＫ＆Ｒｅｉｄ ＷＭ（１９７０）文献（Ｊｏｙｃｅ Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｗ．Ｍａｌｃｏｌｍ Ｒｅｉｄ，Ａｎｔｉｃｏｃｃｉｄｉａｌ ｄｒｕｇｓ：Ｌｅｓｉｏｎ ｓｃｏｒｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ ｂａｔｔｅｒｙ ａｎｄ ｆｌｏｏｒ－ｐｅｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｉｃｋｅｎｓ，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ，１９７０）を参照して行った。病変スコア（Ｌｅｓｉｏｎ ｓｃｏｒｅ）は０～４等級があり、０点は正常な盲腸、１点は軽微な感染症状、２点は重症度の感染症状、３点の場合は深刻な感染症状、および４点は非常に深刻な感染症状を呈すか、または斃死を起こした場合に相当する。各対照群および試験群で測定された盲腸病変スコアを下記表５に記載した。測定された盲腸病変スコアに１０を掛けて抗コクシジウム総合指数の計算に使用した。

４）糞便中のオーシスト排出量：攻撃接種６～８日目の全体糞便をケージ別に回収して均一にミキシングした後、１ｇずつ計３回にわたってランダムにサンプリングを行った。塩水を用いて糞便１ｇ中のオーシストを浮かべた後、ＭｃＭａｓｔｅｒ ｃｈａｍｂｅｒを用いてオーシスト排出量を測定し、その結果を下記表６に記載した。

各グループ別のオーシスト排出量を感染した陰性対照群のオーシスト排出量で割り、１００を掛けて、感染した陰性対照群に対するオーシスト排出量（％）を計算した。計算した感染した陰性対照群に対するオーシスト排出量が０％～１％未満であれば０、１％以上～２６％未満は５、２６％以上～５１％未満は１０、５１％以上～７６％未満は２０、７６％以上～１００％以下は４０とオーシスト排出指数を算出し、これを抗コクシジウム総合指数の計算に使用した。

上述のように、前記数式２によって測定した各試験群別の抗コクシジウム総合指数を下記表７に示した。表７に示すように、マンゴスチン抽出物摂取群における抗コクシジウム総合指数が、陽性対照群であるサリノマイシン摂取群より高いので、優れた抗コクシジウム効能を示すことが分かった。

実施例２．マンゴスチンのアイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）原虫に対する直接死滅効果

実施例２－１．マンゴスチン原虫の直接死滅効果の測定
本実施例において大多数の農家に感染していると知られている代表的なアイメリア３種（Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ、Ｅ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ、Ｅ．ｍａｘｉｍａ）に対して原虫（胞子小体（ｓｐｏｒｏｚｏｉｔｅｓ））の直接死滅能評価を行った。

各原虫のオーシストの一定量をガラスビーズの入ったチューブに入れて粉砕した後、破砕されたオーシスト細胞壁およびその他の残骸を除去するために、パーコール比重差原理（ｐｅｒｃｏｌｌ ｄｅｎｓｉｔｙ ｇｒａｄｉｅｎｔ）を利用して内部胞子嚢（ｓｐｏｒｏｃｙｓｔｓ）を精製し、ＰＢＳ溶液で洗浄した。内部原虫の脱嚢のために、アイメリア・テネラ、アイメリア・アセルブリナおよびアイメリア・マキシマの胞子嚢にそれぞれタウロコール酸ナトリウム（ｓｏｄｉｕｍ ｔａｕｒｏｃｈｏｌｉｃ ａｃｉｄ、Ｓｉｇｍａ ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＳＡ）およびトリプシン（ｔｒｙｐｓｉｎ、Ｇｉｂｃｏ、ＵＳＡ）を含む試薬を処理してインキュベーション後、ＰＢＳ溶液で１回洗浄し、原虫を得た。

マンゴスチン果皮抽出物、エピカテキン、α－マンゴスチン、キサントン、および抗コクシジウム剤であるサリノマイシンとジクラズリル（以下、素材）をそれぞれ１～５００ｐｐｍの様々な濃度でアイメリア３種の原虫と反応させた後、顕微鏡観察によって生きている原虫のみをカウントした。この時、ＰＢＳで処理した陰性対照群に対する各素材処理時の原虫の死滅率（％）を計算して表８～表１０、および表１２にそれぞれ示し、原虫を１００％直接死滅させた最小濃度を下記表１１に示した。

表１１に示すように、キサントン処理群では５００ｐｐｍまでコクシジウムを誘導可能な原虫に対する１００％直接死滅効果が現れず、ジクラズリルの場合にも、アイメリア・テネラおよびアイメリア・マキシマに対して５００ｐｐｍまで原虫に対する１００％直接死滅効果が現れなかった。マンゴスチン抽出物処理群において、他の群より顕著に低い濃度でもアイメリア・テネラ、アイメリア・アセルブリナまたはアイメリア・マキシマを１００％死滅させることが可能で、原虫死滅効果が顕著に優れていることを確認することができた。

表１２に示すように、マンゴスチン抽出物は、マンゴスチンに含まれている個別性分であるエピカテキン、α－マンゴスチンよりも顕著に低濃度である１５．６ｐｐｍでアイメリア・テネラ原虫を１００％死滅させることができ、原虫死滅効果が顕著に優れていることを確認することができた。ＬＣ－ＭＳ分析（ＬＣ－ＭＳの分析条件は以下の通りである：ＬＣはｗａｔｅｒｓ ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ ｉ－ｃｌａｓｓであり、ＭＳはｗａｔｅｒｓ ｘｅｖｏ Ｇ２－ＸＳ（Ｑ－ＴＯＦ）製品を使用した。使用したｃｏｌｕｍｎ情報はｗａｔｅｒｓ ａｃｑｕｉｔｙ ＢＥＨ Ｃ１８ ｃｏｌｕｍｎを使用した。）によって前記マンゴスチン抽出物中の成分および含有量を分析して、その結果を表１３に示した。表１３に示すように、マンゴスチン抽出物中のα－マンゴスチンの含有量は約１２％であり、これを考慮すると、α－マンゴスチンに対するマンゴスチン抽出物自体の抗コクシジウム効果はより優れている。

実施例３．マンゴスチンのアイメリア（Ｅｉｍｅｒｉａ）原虫に対する細胞侵入および増殖抑制効果
本実施例において、アイメリア感染および増殖されると知られている代表的な動物細胞のＭＤＢＫ細胞株を用いて、マンゴスチンの細胞内の原虫侵入および細胞内の増殖抑制能を調べた。

実施例３－１．マンゴスチン処理による原虫の細胞侵入抑制効果
ＭＤＢＫ細胞（ＡＴＣＣ購入）１００，０００個を２４ウェルプレートに分注した後、温度３７℃で１２時間インキュベーションした。前記実施例２と同様の方法でアイメリア・テネラ原虫を獲得した。１つのウェルに原虫を２００，０００匹ずつ細胞が分注されたウェルに添加し、それぞれの素材（マンゴスチン、キサントン、抗コクシジウム剤であるサリノマイシンおよびジクラズリル）を濃度別（１または１０ｐｐｍ）に細胞に処理して、温度４１℃で２４時間培養した。陰性対照群は、原虫で感染させたＭＤＢＫ細胞であり、陽性対照群は、サリノマイシンまたはジクラズリル溶液を原虫と共にインキュベーションしたグループを意味する。その後、細胞に侵襲しない原虫を除去するために、ＰＢＳ溶液を用いて細胞を２回洗浄した。ピペッティングにより細胞と細胞中に入っている原虫を切り離した後、細胞からＤＮＡを抽出し、Ｅ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ ＡＣＥ遺伝子特異的プライマーを用いてＰＣＲを行った。使用したプライマーの配列は下記表１４に記載した。

素材別に洗浄前／後のＣｔ値を比較し、陰性対照群の△Ｃｔ値で補正して、それぞれの素材処理による原虫の細胞侵入抑制率（％）を計算し、その結果を図１に示した。図１に示すように、マンゴスチン抽出物処理群においてアイメリア・アセルブリナに対する細胞侵入抑制効能が優れていることを確認することができた。

実施例３－２．マンゴスチン処理による細胞内原虫の増殖抑制効果
ＭＤＢＫ細胞（ＡＴＣＣ購入）１００，０００個を２４ウェルプレートに分注した後、温度３７℃で１２時間インキュベーションした。前記実施例２と同様の方法でアイメリア・テネラ原虫を獲得した。１つのウェルに原虫を２００，０００匹ずつ細胞が分注されたウェルに添加し、温度４１℃で２４時間培養後、細胞に付いていない原虫を除去するために、ＰＢＳ溶液を用いて細胞を２回洗浄した。濃度別にそれぞれの素材（マンゴスチン、キサントン、抗コクシジウム剤であるサリノマイシンおよびジクラズリル）を細胞に処理した後、温度４１℃で２４時間さらに培養した。陰性対照群は、原虫で感染させたＭＤＢＫ細胞であり、陽性対照群は、サリノマイシンおよびジクラズリル溶液を原虫と共にインキュベーションしたグループを意味する。ピペッティングにより細胞と細胞内で増殖した原虫を切り離した後、細胞からＤＮＡを抽出し、Ｅ．ｔｅｎｅｌｌａ ＩＴＳ－１（Ｉｎｔｅｒｎａｌ ｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄ ｓｐａｃｅｒ－１）遺伝子特異的プライマーを用いてＰＣＲを行った。使用したプライマーの配列は上記表１４に記載した。

陰性対照群に対する素材処理群においての△Ｃｔ値を比較して素材処理による細胞内の原虫（胞子小体）の増殖抑制率（％）を計算して、その結果を図２に示した。

図２に示すように、マンゴスチン抽出物処理群は、他の群より顕著に優れたアイメリア・テネラの細胞内原虫の増殖抑制効果を示した。

実施例４．マンゴスチンの細胞毒性評価
本実施例において、ＭＴＳ分析方法（３－（４，５－ｄｉｍｅｔｈｙｌ－２－ｙｌ）－５－（３－ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）－２－（４－ｓｕｌｆｏｐｈｅｎｙｌ）－２Ｈ－ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ、ｐｒｏｍｅｇａ、ＵＳＡ）を用いてマンゴスチン抽出物が細胞の生存に及ぼす影響を調べた。

細胞毒性評価に活用された細胞株は、（１）ＭＤＢＫ（Ｍａｄｉｎ－Ｄａｒｂｙ Ｂｏｖｉｎｅ Ｋｉｄｎｅｙ Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ）および（２）ＲＡＷ２６４．７（Ｍｏｕｓｅ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｅｌｌ）であり、全てＡＴＣＣで購入して使用した。

各細胞を９６ウェル細胞培養プレートに１×１０^５細胞／ウェルの濃度で分注し、温度３７℃で２４時間培養した後、それぞれの素材（マンゴスチン抽出物、キサントン、α－マンゴスチンおよびエピカテキン）を濃度別（３．１～５００ｐｐｍ／ｗｅｌｌ）に処理して温度３７℃で培養した。２４時間後、細胞培養液にＭＴＳ溶液を添加して２時間インキュベーションし、マイクロプレートリーダーを用いて波長４９０ｎｍで吸光度を測定して、陰性対照群である５％ＤＭＳＯ処理区に対する細胞生存率（％）を計算し、５０％以上の細胞が生存する細胞毒性の最小濃度を測定して、その結果を下記表１５に示した。また、前記実施例２－１と同様の方法で、それぞれの素材のアイメリア・テネラ原虫を１００％死滅させる濃度を測定して、その結果を表１５に示した。

表１５に示すように、マンゴスチン抽出物の場合、約６２．５ｐｐｍまで細胞毒性を示さないので、細胞の安全性に優れていることを確認することができるだけでなく、マンゴスチン抽出物は、細胞毒性を示す濃度より顕著に低濃度で優れた原虫の死滅効果を示すことを確認することができた。

実施例５．マンゴスチンの耐酸性評価
本実施例においてマンゴスチン自体の耐酸性を評価した。前記実施例１－２で製造したマンゴスチン抽出物に塩酸（ＨＣｌ）溶液を添加して、ｐＨ２、３および５．５となるように調整した後、温度４０℃で１時間静置した。その後、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）溶液を添加して中性化（ｐＨ７．０）させ、ＰＢＳ溶液を用いて希釈した１～１００ｐｐｍの様々な濃度のマンゴスチン抽出物溶液にアイメリア・アセルブリナ（Ｅ．ａｃｅｒｖｕｉｌｎａ）原虫２００，０００匹を露出させて４時間の間４１℃の温度で反応させた。その後、前記実施例２と同様の方法で原虫の死滅率（％）を測定して、これを図３に示した。図３に示すように、マンゴスチン抽出物は、強い酸性条件でもコクシジウム症を誘導する原虫に対する死滅効能が無くならないことを確認することができた。

実施例６．マンゴスチンの耐熱性評価
本実施例においてマンゴスチンの耐熱性を評価した。前記実施例１－２で製造したマンゴスチン抽出物を温度８５～９５℃で１０分間露出させた後、熱を冷却し、ＰＢＳ溶液で１、１０、５０、１００ｐｐｍの濃度にそれぞれ希釈した。アイメリア・アセルブリナ（Ｅ．ａｃｅｒｖｕｌｉｎａ）原虫２００，０００匹を１～１００ｐｐｍの様々な濃度でマンゴスチン抽出物に４時間の間温度４１℃で反応させ、前記実施例２と同様の方法で原虫の死滅率（％）を測定して、これを図４に示した。

図４に示すように、マンゴスチン抽出物は、高温の悪条件の中でもコクシジウム症を誘導する原虫に対する死滅効能が無くならないことを確認することができた。

実施例７．マンゴスチン抽出物摂取による肉鶏成長の影響評価
本実施例においてマンゴスチン抽出物が肉鶏成長に及ぼす影響（改善あるいは低下）を評価した。

実施例７－１．実験施設
大韓民国の慶尚南道（キョンサンナムド）所在の動物実験施設で効能評価試験を行った。１日齢の雌のロス（Ｒｏｓｓ）肉鶏の体重を個別的に測定し、ランダムに群を分けて実験に使用した。実験設計に関する事項および条件は表１６に記載した。

韓国養鶏仕様管理指針に従って飼育場を管理した。試験開始前にケージ（ｃａｇｅ）および飼育場は洗浄および消毒した。飼育場の温度４０～４１℃および４０～５０％の湿度を維持し、連続してモニタリングした。

実施例７－２．実験設計
飼料は大韓飼料Ａ１－初餌製品を使用し、飼料に各素材（サリノマイシン（チェイルバイオ社のチェイルサリノ－６０製品）、キサントン（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ社のＸ６００製品）、前記実施例１－２で製造したマンゴスチン抽出物）を下記表１７に記載された濃度でそれぞれ添加して自家配合した。一般飼料および配合された飼料には抗生剤と補充剤を使用せず、各素材以外に抗コクシジウム剤を添加しなかった。実験期間にわたって肉鶏に飼料を自由食で摂取させた。対照群または試験群別にランダムに配置されたケージに１日齢肉鶏を２０頭ずつ入れて飼育し、一般飼料を７日間給餌後、上記で製造した配合飼料を対照群または試験群別に区分して摂取させた。対照群（陰性対照群または陽性対照群）および試験群に投与された飼料のフォーミュレーションは下記表１７に記載した。

実施例７－３．肉鶏の１日あたりの増体量の計算
個体に上記表１６の飼料を給餌する前と給餌後７日目の体重をケージ別に測定し、その差を日数で割って１日あたりの増体量（ＡＤＧ、ｇ／ｄ）を計算して、その結果を表１８に示した。６つの処理区間の比較のためにＤｕｎｃａｎの事後検定多重比較法を用い、ＳＡＳ統計プログラムを活用して統計的有意性を検証し、その結果を表１８に示した。

表１８に示すように、マンゴスチン抽出物摂取群において陰性対照群、陽性対照群およびキサントン摂取群に対する１日あたりの増体量が有意に増加した。それに対して、キサントン摂取群の場合、むしろ陰性対照群より１日あたりの増体量が減少した。

Claims (12)

1. マンゴスチンを含む、コクシジウム症の予防または改善用飼料組成物。
2. 前記マンゴスチンは、マンゴスチン果皮、マンゴスチン果肉、またはその組み合わせである、請求項１に記載の飼料組成物。
3. 前記マンゴスチンは、マンゴスチンそのもの、乾燥物、粉砕物、および抽出物からなる群より選択される１種以上である、請求項１に記載の飼料組成物。
4. 前記マンゴスチン抽出物は、水、炭素数１～４の直鎖または分岐鎖アルコール、プロピレングリコール、ブチレングリコール、グリセリン、アセトン、酢酸エチル、ブチルアセテート、クロロホルム、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、ヘキサンおよびこれらの混合物からなる群より選択される抽出溶媒を用いた溶媒抽出方法で抽出される、請求項３に記載の飼料組成物。
5. 前記マンゴスチン抽出物は、マンゴスチン果皮抽出物である、請求項４に記載の飼料組成物。
6. 前記コクシジウム症は、アイメリア属（Ｅｉｍｅｒｉａ ｓｐ．）原虫によって誘導される、請求項１に記載の飼料組成物。
7. 前記コクシジウム症の予防または改善は、下記の（１）～（４）からなる群より選択される１種以上である、請求項１に記載の飼料組成物：
   （１）病変スコア、糞便中のオーシスト排出量、および斃死率からなる群より選択される１種以上が減少；
   （２）コクシジウム症による体重減少の抑制；
   （３）抗コクシジウム総合指数（Ａｎｔｉｃｏｃｃｉｄｉａｌ ｉｎｄｅｘ；ＡＣＩ）が増加；および
   （４）アイメリア属原虫の細胞侵入、細胞内の前記原虫の増殖、またはこれらすべてが減少。
8. 前記マンゴスチンを全体重量を基準として１％（ｗ／ｗ）以下で含む、請求項１に記載の飼料組成物。
9. 前記飼料組成物は、飼料添加剤である、請求項１～７のいずれか一項に記載の飼料組成物。
10. マンゴスチンを含む、コクシジウム症の予防または治療用薬学組成物。
11. マンゴスチンを含む、アイメリア属原虫に対する抗原虫用組成物。
12. 請求項１～８のいずれか一項に記載の飼料組成物、請求項１０に記載の薬学組成物、および請求項１１に記載の抗原虫用組成物からなる群より選択される組成物をヒトを除いた動物に投与する段階を含む、コクシジウム症の予防、改善、または治療方法。

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