JP7610364B2

JP7610364B2 - ノロウイルス不活化剤

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Publication number: JP7610364B2
Application number: JP2020118575A
Authority: JP
Inventors: 悠記石田; 淑貴伊藤; 勢造八城
Original assignee: Kao Corp
Current assignee: Kao Corp
Priority date: 2020-07-09
Filing date: 2020-07-09
Publication date: 2025-01-08
Anticipated expiration: 2040-07-09
Also published as: JP2022015621A

Description

本発明は、ノロウイルス不活化剤に関する。

ノロウイルスは、カリシウイルス科、ノロウイルス属に分類されているエンベロープ（膜状構造）を持たないＲＮＡウイルスであり、酸性（胃酸）に対して強い抵抗力を有し、少量（１０～１００個程度）で感染することが知られている。
現状では、ノロウイルスに対するワクチンや治療薬は存在しないことから、ウイルスが付着し得る調理器具、衣服、手指等を洗浄・消毒することによる除ウイルスやウイルス不活性化により感染を予防することが重要である。

ノロウイルスは、物理化学的抵抗性が強いため、多くの細菌類に対して有効であるエタノールやカチオン界面活性剤を含む消毒剤等もノロウイルスに対しては一般的な使用法において十分な効果を得られない場合がある。そのため、ノロウイルスの不活化には、塩素系消毒剤（次亜塩素酸ナトリウム等）やヨード剤（ポビドンヨード等）、アルデヒド剤（グルタラール等）、過酢酸製剤等が使用されている。しかし、塩素系消毒剤等では繊維の色柄等を漂白する作用があり、繊維製品や衣類への使用においては制限が生じるという問題がある。

ところで、従来、ヒトに感染するヒトノロウイルス（ＨＮＶ）は、実験室における培養系が確立されていなかったため、ノロウイルスの不活化効果を評価するために、その代替ウイルスとして、同じカリシウイルス科のネコカリシウイルス（ＦＣＶ）や、マウスノロウイルス（ＭＮＶ）が用いられていた。しかしながら、ＦＣＶは下痢症感染症でなく呼吸器感染症を引き起こすウイルスであり酸やアルカリに弱く、ＨＮＶとの違いも多数報告されている。また、ＭＮＶはＨＮＶを初めとする他のエンベロープウイルスと比較してアルコールに著しく弱いことが報告されている（非特許文献１）。実際に、非特許文献２では昨今確立されたＨＮＶの培養系において、一部の代替ウイルスにおいて効果があるように思われてきたアルコールはＨＮＶの不活化には不十分であることが報告された。
したがって、実際にＨＮＶに対してその効果を十分に発揮し得る素材を見出すことが求められている。

一方、ホウ素のオキソ酸であるホウ酸やその塩の一つであるホウ砂（硼砂）は、殺菌作用や洗浄作用があるため、医薬品（眼科領域）として使用される他、洗剤や防腐剤などに使われている。
しかしながら、ホウ酸やホウ砂にノロウイルス不活化作用があることは全く知られていない。

特開２０１５－７８４７９号公報

Cromeans Theresa et al., Appl. Environ. Microbiol. 80.18 (2014): 5743-5751. Costantini, Veronica, et al. "Human norovirus replication in human intestinal enteroids as model to evaluate virus inactivation." Emerging infectious diseases 24.8 (2018): 1453. Seiichi Tobe et al., J. Oleo Sci. 61, (4) 211-216 (2012) 高木弘隆,杉山知良・医学と薬学・第57巻第3号311-312・2007年3月

本発明は、ノロウイルスの不活化に有効なノロウイルス不活化剤を提供することに関する。

本発明者らは、ノロウイルスの不活化には不十分と考えられていたエタノールに、ホウ酸又はその塩を併用することにより、ノロウイルスに対する不活化効果が向上し、エタノールとホウ酸又はその塩の組み合わせがＨＮＶを含めたノロウイルスの不活化のために有効であることを見出した。

すなわち、本発明は、以下の１）～３）に係るものである。
１）エタノール、並びにホウ酸及びその塩から選ばれる１種以上を有効成分とするノロウイルス不活化剤。
２）エタノール、並びにホウ酸及びその塩から選ばれる１種以上を含有し、組成物のｐＨが８以上であるノロウイルス不活化剤。
３）１）のノロウイルス不活化剤をノロウイルス汚染が懸念される対象に接触させる、ノロウイルスの不活化方法。

本発明によれば、衣類、繊維品、調理器具等に付着したノロウイルスを確実に不活化でき、ノロウイルス感染の拡大を防止又は低減することができる。

本発明のノロウイルス不活化剤は、エタノール、並びにホウ酸及びその塩から選ばれる１種以上を有効成分とする。
本発明のノロウイルス不活化剤は、一態様として、エタノール並びにホウ酸及びその塩から選ばれる１種以上を含有する組成物が挙げられる。
ここで、当該組成物のｐＨは、ＨＮＶ不活化効果の点から、２５℃におけるｐＨが、好ましくは８以上、より好ましくは９以上、より好ましくは１０以上で、好ましくは１３以下、より好ましくは１２以下である。また、好ましくは８～１３、より好ましくは９～１２、より好ましくは１０～１２である。
ｐＨの調整は、下記アルカリ剤、酸剤及び無機塩等の配合比率を変えることにより行うことができる。

本発明のノロウイルス不活化剤における組成物中のエタノールの含有量は、ノロウイルス不活化効果の点から、好ましくは３０質量％以上、より好ましくは３５質量％以上、より好ましくは４０質量％以上であり、また、好ましくは８０質量％以下、より好ましくは７８質量％以下、より好ましくは７５質量％以下である。また、好ましくは３０～８０質量％、より好ましくは３５～７８質量％、より好ましくは４０～７５質量％である。

原料エタノールとしては、発酵エタノール、合成エタノール、バイオエタノール、精製エタノール等の通常のものを使用可能であるが、消毒殺菌用途に応じた安全性を担保できる品質のものを採用することが好適である。

本発明において、ホウ酸（ｂｏｒｉｃａｃｉｄ）としては、オルトホウ酸、メタホウ酸、四ホウ酸のいずれでもよいが、好ましくはオルトホウ酸及び四ホウ酸が挙げられる。これらのホウ酸は、１種単独で使用してもよく、また２種以上を組み合わせて使用してもよい。

ホウ酸の塩としては、例えば、ホウ酸の無機酸塩、好ましくはホウ酸のアルカリ金属塩（ナトリウム塩、カリウム塩等）、アルカリ土類金属塩（カルシウム塩、マグネシウム塩）等が挙げられる。ホウ酸又はその塩は、ホウ砂等のように、水和物の形態であってもよい。
ホウ酸塩としては、好ましくは、ホウ酸ナトリウム、ホウ酸カリウム、ホウ酸カルシウム、ホウ酸マグネシウム、ホウ酸マンガン等が挙げられ、より好ましくはホウ酸ナトリウムであり、より好ましくはホウ砂である。なお、ホウ砂（硼砂、Ｂｏｒａｘ）とは、四ホウ酸ナトリウム十水和物（Ｎａ_２Ｂ_４Ｏ_７．１０Ｈ_２Ｏ）を意味する。
ホウ酸及びその塩の中でも、好ましくはホウ酸及びホウ砂の少なくとも１種、より好ましくはオルトホウ酸及びホウ砂の少なくとも１種であり、更に好ましくはホウ砂である。

本発明のノロウイルス不活化剤における組成物中のホウ酸及びその塩から選ばれる１種以上の含有量は、ノロウイルス不活化効果の点から、好ましくは０．０２質量％以上、より好ましくは０．０３質量％以上、より好ましくは０．０５質量％以上であり、また、好ましくは０．８質量％以下、より好ましくは０．５質量％以下、より好ましくは０．４質量％以下、より好ましくは０．２質量％以下である。また、０．０２～０．８質量％、好ましくは０．０３～０．５質量％、より好ましくは０．０５～０．４質量％、より好ましくは０．０５～０．２質量％である。

好ましい態様として、ホウ酸及びその塩から選ばれる１種以上の含有量は、エタノールの含有量が４０質量％未満である場合は、０．７～０．８質量％が好ましい。
また、エタノールの含有量が４０質量％以上５０質量％未満である場合は、ホウ酸及びその塩から選ばれる１種以上の含有量は、０．０２～０．４質量％が好ましく、エタノールの含有量が５０質量％以上８０質量％以下である場合は、ホウ酸及びその塩から選ばれる１種以上の含有量は、０．０２～０．４質量％が好ましく、０．０５～０．４質量％がより好ましく、０．０５～０．２質量％がより好ましい。

本発明のノロウイルス不活化剤は、さらにアルカリ剤を含むことができる。
アルカリ剤としては、炭酸塩、炭酸水素塩、リン酸二水素塩、リン酸水素二塩、リン酸三塩、アルカリ金属の水酸化物（例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等）及びアルカリ土類金属の水酸化物（例えば水酸化マグネシウム、水酸化カルシウム等）、アルカリ金属カルボン酸塩（例えば酢酸ナトリウム、酢酸カリウム等）等から選ばれる１種以上が挙げられる。このうち、炭酸塩、炭酸水素塩、リン酸二水素塩、リン酸水素二塩、リン酸三塩から選ばれる１種以上であるのが好ましい。
また、塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩又はアンモニウム塩等が挙げられる。

アルカリ剤として、より具体的には、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸アンモニウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素アンモニウム、リン酸二水素ナトリウム、リン酸三カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、酢酸ナトリウム、酢酸カリウム等が挙げられ、このうち、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸三カリウム、及びリン酸二水素ナトリウムから選ばれる１種以上が好ましく、より好ましくは、炭酸水素ナトリウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムである。

本発明のノロウイルス不活化剤は、さらに酸剤を含むことができる。
酸剤としては、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、酒石酸、フィチン酸、アジピン酸、グルコン酸及びコハク酸等の有機酸やリン酸、塩酸等の無機酸から選ばれる１種以上が挙げられる。酸剤を含むことで、ウイルス不活性化効果の向上、ウイルス不活性化剤のｐＨ調整が容易となる。

本発明のノロウイルス不活化剤における組成物中の上記酸剤の含有量は、皮膚上での安全性の点から、好ましくは０．０１質量％以上、より好ましくは０．０３質量％以上、より好ましくは０．０５質量％以上であり、また、好ましくは２質量％以下、より好ましくは１質量％以下、より好ましくは０．５質量％以下である。また、好ましくは０．０１～２質量％、より好ましくは０．０３～１質量％、より好ましくは０．０５～０．５質量％である。

また、本発明のノロウイルス不活化剤は、各種無機塩を含んでいてもよい。
無機塩としては、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、塩化アンモニウム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、臭化カルシウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸アンモニウム、硫酸鉄、硫酸銅、硫酸アルミニウムカリウム、硫酸アルミニウムアンモニウム、硝酸ナトリウム、硝酸カリウム、硝酸アンモニウム、亜硝酸ナトリウム、亜硝酸カリウム、亜硝酸アンモニウム、チオシアン酸ナトリウム、チオシアン酸カリウム、チオシアン酸アンモニウム、ヨウ化ナトリウム等が挙げられる。

また、本発明のノロウイルス不活化剤は、上記の成分以外に、例えば、キレート剤、シリコーン類、増粘剤、油分、天然抽出物、色素、香料等の添加剤を適宜配合することができる。

エタノール並びにホウ酸及びその塩から選ばれる１種以上を含有する組成物は、後述する実施例に示すとおり、ノロウイルス（ＨＮＶ、ＦＣＶ）に対して優れたウイルス不活性化効果を示す。したがって、当該組成物はＨＮＶを含むノロウイルスを不活化するためのノロウイルス不活化剤となり得る。そして、当該ノロウイルス不活化剤を、ノロウイルス汚染が懸念される対象に適用することにより、当該対象物に対してノロウイルスの不活化が可能となる。

本発明において、ノロウイルスとは、カリシウイルス科、ノロウイルス属に分類されるエンベロープを持たないＲＮＡウイルスを意味し、ＨＮＶ（ヒトノロウイルス）、ＦＣＶ（ネコカリシウイルス）、ＭＮＶ（マウスノロウイルス）等が包含される。
ノロウイルスは、ゲノム塩基配列の相同性に基づき７つの遺伝子群（ｇｅｎｏｇｒｏｕｐ、ＧＩ～ＧVII）に分けられ、ヒトに感染するＨＮＶはＧＩ９種（ＧＩ.1、ＧＩ.２、ＧＩ.３、ＧＩ.４、ＧＩ.５、ＧＩ.６、ＧＩ.７、ＧＩ.８、ＧＩ.９）、ＧII１９種（ＧII.１、ＧII.２、ＧII.３、ＧII.４、ＧII.５、ＧII.６、ＧII.７、ＧII.８、ＧII.９、ＧII.１０、ＧII.１２、ＧII.１３、ＧII.１４、ＧII.１５、ＧII.１６、ＧII.１７、ＧII.２０、ＧII.２１、ＧII.２２）、ＧIV１種（ＧIV.１）であるが、本発明におけるＨＮＶは、これらのいずれの遺伝子型のものであっても良い。
なお、本発明において、ＨＮＶ不活化効果は、ヒト小腸オルガノイド（ｈＳＩＯ）を細胞外マトリクス上で３Ｄ培養後、分化誘導して得られる腸管上皮細胞にＨＮＶを感染させた系により評価できる（実施例参照）。

本発明のノロウイルス不活化剤を用いたノロウイルスの不活化は、ノロウイルス汚染が懸念される対象、例えば、台所（厨房の床、壁等の厨房スペース等）、流し台、冷蔵庫等の食品を取り扱う場所、包丁、鍋等の調理器具、皿等の食器類、冷蔵庫、トイレ、バス、洗面所、居室、寝室等の居住空間、ソファー、クッション、寝具、カーテン等の繊維製品等に対して、これらに接触させることにより用いることができる。ここで、接触は、特に限定するものではなく、本発明のノロウイルス不活化剤を対象へ直接かけること、トリガーやエアゾール等の噴霧装置に充填し噴霧することなどが挙げられる。
接触時間は限定されないが、例えば好ましくは５秒以上、より好ましくは１０秒以上で、好ましくは６０分以下放置することが挙げられる。

本発明のノロウイルス不活化剤を接触させるに際しての使用形態に特に制限はない。例えば、液状、ゲル状、又はペースト状とすることができる。
液状の場合には、特にスプレー、ローション等として用いることができる。例えば、トリガースプレー容器（直圧又は蓄圧型）やディスペンサータイプのポンプスプレー容器等の公知のスプレー容器に充填し、噴霧量を調整して、ウイルスが存在する、又は存在すると考えられる場所に噴霧できるようにしたもの等が挙げられる。

また、ウェット拭取り用品（ぬれナプキン等）として使用することもできる。例えば、天然繊維、レーヨン等の再生繊維、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリエステル等の合成繊維、又は天然繊維と合成繊維との混合物の織布又は不織布ウェブを含む基材に、本発明のノロウイルス不活化剤、可溶化キャリア、及び必要に応じて各種添加剤を含ませて使用することができる。具体的には、ペットの手入れ用品、家庭の台所やバスルーム等の表面、運動器具等の表面の殺菌等に使用することができる。また、手洗い液、中性洗剤、消臭剤、皮膚コンディショナー等に加えて使用することもできる。

水溶性ゲルや油性ゲルを用いてゲル状にしたり、ペースト状とした場合には、医療用品として、人体、ペット等に直接塗布して使用したり、紙や不織布等に担持させたものを、空気清浄器のフィルターとして用いることもできる。

さらに、本発明のノロウイルス不活化剤を樹脂に混練して使用することもできる。混練しうる樹脂としては、天然系、石油系、合成系のワックス、ロジン系樹脂、エチレン－酢酸ビニル共重合体、エチレン－ビニルアルコール共重合体、ポリエステル、ポリオレフィン、アクリル系樹脂等の合成樹脂等が挙げられる。
上記の混練物は、そのまま用いることもできるし、多孔質担体に担持させたり、シート状にしたり、該シート状物を積層体にして用いることもできる。多孔質担体としては、例えば、セルロース、キトサン等の天然高分子、上記の合成樹脂、ケイ酸カルシウム等の無機多孔性物質等を、粒状、シート状等の任意の形状にしたものが挙げられる。上記の混練物や積層体は、例えば、空調設備、トイレ、浴室、居間、病室、病院の待合室、ダストボックス等に設置して、抗ウイルス剤組成物を徐々に揮散させながら利用することもできる。

表１に示す処方に従い、エタノール、ホウ酸又はその塩、及びその他の成分を混合して本発明組成物（実施例１～１５）及び比較組成物（比較例１～４）を調製し、以下に示す方法により、ＨＮＶ及びＦＣＶに対する不活化効果を評価した。結果を表１に併せて示す。表中、溶解性の項は、ホウ酸及びホウ砂の溶解性を示しており、〇：完全に溶解、×：未溶解物が存在、と定義した。

＜評価法＞
１．ＨＮＶ不活化効果の評価
（１）ｈｕｍａｎＳｍａｌｌＩｎｔｅｓｔｉｎｅＯｒｇａｎｏｉｄ（ｈＳＩＯ）の培養
ｈＳＩＯは２４ウェルプレート上でマトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ，３５６２３１）に包埋し３Ｄ培養した。培地はＩｎｔｅｓｔｉＣｕｌｔＯｒｇａｎｏｉｄＧｒｏｗｔｈＭｅｄｉｕｍ（Ｈｕｍａｎ）（ＳＴＥＭＣＥＬＬＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＳＴ－０６０１０）を用いた。培地交換・継代・９６ウェルプレートを用いた単層化の手技はユーザーマニュアルに従った。トリプシン処理後２日間はアノイキスを阻害するために培地に終濃度１０μＭとなるようにＲＯＣＫ（Ｒｈｏ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄｃｏｉｌｅｄ－ｃｏｉｌｆｏｒｍｉｎｇｋｉｎａｓｅ／Ｒｈｏ結合キナーゼ）阻害剤であるＣｕｌｔｕｒｅＳｕｒｅＹ－２７６３２（富士フィルム和光純薬，０３６－２４０２３）を添加した。５００ｍＬのＡｄｖａｎｃｅｄＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｇｉｂｃｏ，１２６３４０１０）に５ｍＬのＧｌｕｔａＭＡＸＩ（１００×）（Ｇｉｂｃｏ，３５０５０－０６１）、５ｍＬの１ＭＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ，１５６３００８０）、５ｍＬのＰｅｎｉｃｉｌｌｉｎ－Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ（Ｇｉｂｃｏ，１５１４０１２２）を添加することで基本培地を作成した。基本培地とＩｎｔｅｓｔｉＣｕｌｔＯｒｇａｎｏｉｄＧｒｏｗｔｈＭｅｄｉｕｍのコンポーネントＡとを等量混合することで分化培地を作成した。９６ウェルプレートで単層化させた腸管上皮細胞に分化培地を１ｗｅｌｌあたり２００μＬずつ２日間隔で交換しながら計７日間分化を誘導した。

（２）ＨＮＶ（ＨｕＮｏＶ）含有糞便の１０％乳剤の作成
糞便の１０％乳剤はＧII．４型のＨＮＶ罹患者糞便から作成した。プロテアーゼ阻害剤であるｃＯｍｐｌｅｔｅｐｒｏｔｅａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｃｏｃｋｔａｉｌｔａｂｌｅｔｓ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，１１６９７４９８００１）１錠を５０ｍＬのＤ－ＰＢＳ（－）に懸濁した。糞便１ｇに対して１０ｍＬのｃＯｍｐｌｅｔｅ含有Ｄ－ＰＢＳ（－）で懸濁し、試験管ミキサーでよく混合した。４℃で２０分間静置した後に、２，０００×ｇ４℃で１０分間遠心した。上清を新たなチューブに回収し、感染実験に供するまで－８０℃に保存した。

（３）ＨＮＶの不活化処理と分化ｈＳＩＯへの感染
ＨＮＶ含有１０％糞便乳剤を分化培地で１０倍に希釈し、１ｍＬのシリンジとＭｉｌｌｅｘＨＶＦｉｌｔｅｒｕｎｉｔ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，ＳＬＨＶＲ０４ＮＬ）を用いて濾過した。ＰＡ微量遠心チューブ（Ｂｅｃｋｍａｎｃｏｕｌｔｅｒ，３５７４４８）中で濾過した糞便溶液５μＬ（２．８×１０^６ＨＮＶｇｅｎｏｍｅｃｏｐｙ相当）と表１に示す所定の組成物の懸濁液（処理液）４５μＬとを混合し室温で、３０秒間反応させた。次いでこの薬剤処理された糞便溶液に、１ｍｇ／ｍＬのｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ,Ａ９６４７）を含む基本培地１．４５ｍＬを添加した。遠心チューブを固定角ロータＴＬＡ－５５（Ｂｅｃｋｍａｎｃｏｕｌｔｅｒ）にセットしＯｐｔｉｍａＭＡＸ－ＴＬ（Ｂｅｃｋｍａｎｃｏｕｌｔｅｒ）を用いてＲｍａｘにおいて１８６０４７×ｇの遠心力（５５，０００ｒｐｍ相当）で１．５時間超遠心した後に上清を除去した。ペレットを１００μＬの分化培地で懸濁し、ｈＳＩＯへの感染溶液とした。ウェル中の既存の培地を除去した７日間分化誘導後のｈＳＩＯに上述の方法で調製した感染溶液をアプライした。インキュベートは３７℃で３時間実施した。３００μＬの基本培地で３回洗浄した後に、終濃度が１２５ｐｐｍとなるようにブタ胆汁抽出物（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｂ８６３１－１００Ｇ）を加えた分化培地を２５０μＬ添加し３７℃ ５％ＣＯ_２の条件下でサンプリングのタイミングまで培養した。培養開始直後（ｄａｙ０）と培養３日後（ｄａｙ３）に１０μＬの上清を回収した。回収した上清はＲＴ－ｑＰＣＲに供するまで－８０℃で保存した。尚、薬剤溶液に代わり基本培地を用いて同様の操作を行い調製したｈＳＩＯへの感染溶液を薬剤非処理のコントロールとした。

（４）ＲＴ－ｑＰＣＲ
回収した上清中のＨＮＶｇｅｎｏｍｅｃｏｐｙ数の定量にはノロウイルス検出キットＧ１／Ｇ２（東洋紡，ＦＩＫ－２７３）を用いた。操作はプロトコールに従った。ＰＣＲ増幅とデータ測定はＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ４８０II（Ｒｏｃｈｅ）を用いた。
測定されたウイルス量に基づき、Ａ：ＨＮＶが検出下限にまで不活化されている、Ｂ：ＨＮＶを検出するがコントロール（薬剤処理無し）よりも減少、Ｃ：コントロール（薬剤処理無し）と同等にＨＮＶが増殖している、の３段階で評価した。

２．ＦＣＶ不活化効果の評価
ウイルスの不活性化評価の標準法として一般的に知られている「平成２７年度ノロウイルスの不活化条件に関する調査報告書」（国立医薬品食品衛生研究所）とＪＩＳＬ１９２２を参考に行った。
５００μＬ容サンプルチューブにて、表１に示す所定の組成物の懸濁液（処理液）２７μＬと１．０×１０^７ＰＦＵ／ｍＬに調整したネコカリシウイルス液（Ｆ－９株、ＡＴＣＣＶＲ－７８２）３μＬを入れ、よく混合した。３０秒経過後に、クエンチ液（Ｄ／ＥＮｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇＢｒｏｔｈ）で１／１０希釈して反応を停止した。尚、ブランクとして、処理液の代わりにＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）２７μＬを用い同様の操作を行った。反応停止後、混合物をＤＭＥＭ培地（ダルベッコ改変イーグル培地）でさらに１／１０希釈し、その０．５ｍＬを、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で洗ったＣＲＦＫ細胞（ネコ腎由来株化細胞）（ＡＴＣＣＣＣＬ－９４）に感染させ、１時間後にメチルセルロース含有培地に置換した。２日後に、それぞれの所定時間のサンプルをクリスタルバイオレットで細胞を染色し、プラーク数をカウントして、対数減少量を求めた。
対数減少量＝ｌｏｇ（ブランクのプラーク数）－ｌｏｇ（試験サンプルのプラーク数）本明細書において対数減少量は、例えば、対数減少量＝４の場合、Δ４ｌｏｇと表記する。判定基準は、以下の通りとし、結果を表に示した。
＜判定基準＞
４：プラークが１点も存在しない（検出下限以下：Δ４ｌｏｇよりも大きい）
３：Δ２～３ｌｏｇ
２：Δ１～２ｌｏｇ
１：Δ１ｌｏｇ未満

Claims

エタノール、並びにホウ酸及びその塩から選ばれる１種以上を含有し、組成物のｐＨが８－１０であるノロウイルス不活化剤。
エタノールの含有量が４０～８０質量％で、ホウ酸及びその塩から選ばれる１種以上の含有量が０．０２～０．８質量％である、請求項１記載のノロウイルス不活化剤。
ノロウイルスがヒトノロウイルスである、請求項１又は２記載のノロウイルス不活化剤。
ホウ酸の塩がホウ砂である、請求項１～３のいずれか１項記載のノロウイルス不活化剤。
請求項１～４のいずれか１項記載のノロウイルス不活化剤をノロウイルス汚染が懸念される対象に接触させる、ノロウイルスの不活化方法。