JP7617012B2 - Ｃ５ａＲを標的とする抗体 - Google Patents

Description

本開示は、Ｃ５ａＲと、特にヒトＣ５ａＲと相互作用する抗体に関する。本開示はまた、核酸組成物、ベクター組成物及び前記抗体を発現可能な宿主細胞、前記抗体を含む医薬組成物、及び特異的な疾患の処置のため及び／又は診断目的のための前記抗体の使用にも関する。

Ｃ５ａアナフィラトキシン走化性受容体１（Ｃ５ａＲ）（ＣＤ８８としても知られる）は、ロドプシンファミリーに属するＧ－タンパク質カップリング受容体（ＧＰＣＲ）であり、補体応答のコアエフェクター成分の１つとして血清中で産生される、リガンド、Ｃ５ａに対する２つの高親和性受容体の１つである。生理的条件下で、Ｃ５ａは、炎症細胞に対する走化性物質として作用し、それらの呼吸バースト並びにサイトカイン及びケモカイン放出及び血管透過性を向上させるための機能を刺激する。

Ｃ５ａＲは、様々な細胞型によって広く発現されると思われる。最大Ｃ５ａＲ発現レベルは、好中球に対して記載されている。低～中程度の発現レベルがマクロファージ／単球、樹状細胞、肥満細胞、好酸球、肺血管平滑筋細胞、星状膠細胞、ミクログリア、骨芽細胞、破骨細胞、上皮及び内皮細胞に対して示されている（（非特許文献１）、（非特許文献２））。ヒトＴ細胞に対して、低発現レベルが観察されている（非特許文献３）。

Ｃ５ａに対する細胞応答は、リガンド誘導性受容体内部移行によって厳しく調節されている。Ｃ５ａＲは、Ｃ５ａ処置時に急速に及び用量依存的に内部移行することが記載されており、受容体のうち最大９０％が再循環されて細胞表面に戻る。したがって、Ｃ５ａＲの高発現レベルは、その速いターンオーバー速度と相まって、標的介在性薬物消失（ＴＭＤＤ）効果ゆえに効率という観点で制限的であり得る。

Ｃ５ａとのＣ５ａＲの相互作用は、多くの異なる疾患設定で記載されており；それらの殆どが炎症及び自己免疫疾患に関与している（（非特許文献４）、（非特許文献５））。Ｃ５ａが腫瘍成長を刺激する基礎的機序を同定するためにいくつかの初期研究が行われてきた（（非特許文献６）、（非特許文献７）、（非特許文献８））。データの殆どが、Ｃ５ａが癌細胞増殖、腫瘍内血管新生を増大させ、腫瘍侵襲性及び転移を促進することを示唆する。より新しいデータは、固体腫瘍の状況での免疫抑制性の環境の生成におけるＣ５ａ／Ｃ５ａＲに対する役割も示唆し（（非特許文献９）、（非特許文献１０）、（非特許文献１１））、その結果、抗腫瘍応答（例えば骨髄由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）又はＭ２マクロファージなどのＣ５ａＲ発現骨髄細胞の動員増加）を阻害することにより原発腫瘍増殖が促進される。これらの知見に基づき、免疫抑制微小環境を減少させることにより対象の免疫応答を促進するための免疫チェックポイントタンパク質阻害剤などの既知の抗腫瘍剤との組み合わせストラテジーは、研究及び臨床開発の焦点である（非特許文献１２）。

今まで、特異的な補体治療はただ１つしか承認されておらず、これはＣ５ａの上流分子、即ちＣ５を標的とする。ヒト化抗Ｃ５ ｍＡｂエクリズマブは、Ｃ５に結合し、Ｃ５ａ及びＣ５ｂタンパク質のその切断及び形成、続くＭＡＣ形成を防ぐことが可能である。様々な他の治療用モノクローナルＣ５特異的抗体、例えばＡＬＸＮ１２１０又はＬＦＧ３１６などは臨床評価中である（非特許文献５）。しかし、感染リスクの上昇は慢性的Ｃ５処置に伴う大きな関心事であるので、他の補体成分の生物学的活性を防ぎながら下流分子を特異的に標的化することは明らかに有利である。したがって、多くのアンタゴニスト性Ｃ５ａ特異的モノクローナル抗体の開発が進行中である。

Ｃ５ａＲの直接的な標的化は、それぞれＣ５又はＣ５ａを標的化することを凌ぐ多くの長所を有する。第１に、受容体のみの阻害はＭＡＣ活性を保ち、それにより感染リスクの可能性が低下する。第２に、Ｃ５ａＲ遮断は、その第２の受容体Ｃ５Ｌ２とのＣ５ａ相互作用継続を可能にする。Ｃ５Ｌ２は、抗炎症効果を有することが報告されているので、有効なＣ５Ｌ２シグナル伝達経路を維持すると、その結果、有効性が向上し得るか又は投与の必要条件を減少させ得る。第３に、直接的なＣ５ａＲ標的化は、低分子量であり、ターンオーバー速度が高いことにより、可溶性Ｃ５ａの阻害を凌ぐ薬力学的長所を提供し得る。全体的に、前臨床及び臨床試験で試験されているアプタマー、ペプチド及び非ペプチド低分子など、Ｃ５ａＲ阻害剤の開発に強い関心が集まっている。

ヒトＣ５ａＲのＮ末端細胞外領域に対するものであり、Ｃ５ａＲ－Ｃ５ａ相互作用を妨害可能である中和ポリクローナル抗血清又はモノクローナル抗体が、当技術分野で記載されている（例えば（非特許文献１３）、（非特許文献１４））。

しかし、これらのＣ５ａＲ特異的抗体は、特にそれらが動物由来であり（ヒト患者においてそれが免疫原性になる）、クローン性であり、及び／又は関連動物種に対する交差反応性を欠くため、ヒトでの臨床開発及び治療での使用に適切ではない。

Ｃ５ａＲを標的とする治療用抗体は臨床開発について検討されている。しかし、アンタゴニスト性Ｃ５ａＲ特異的抗体ニュートラズマブ（Ｎｅｕｔｒａｚｕｍａｂ）、ヒト化ＩｇＧ４ ｍＡｂの臨床開発は、免疫細胞枯渇及び免疫原性を伴う問題のために第ＩＩ相臨床試験で中止された（非特許文献１５）。Ｃ５ａＲは様々な細胞型において構成的に発現されると思われるので、アンタゴニスト性抗体が標的細胞の枯渇を全く誘導しないことは重要である。

ニュートラズマブ（Ｎｅｕｔｒａｚｕｍａｂ）の欠点を克服するために、Ｃ５ａＲ特異的抗体の第２世代、即ちＮＮＣ０２１５－０３８４（（特許文献１）（ＮＯＶＯ ＮＯＲＤＩＳＫ）；クローン３２Ｆ３Ａ６ＧＬ）が作製された。この抗体は、トランスジェニックマウス由来のヒトＩｇＧ１抗体であり、癌分野でＩＰＨ５４０１として現在臨床開発中である（非特許文献１６）。ＩＰＨ５４０１は、抗体のエフェクター機能誘導能を排除するために、発現抑制されたヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を保有する。この抗体は、本明細書中でＲｅｆＭＡＢ＃１と呼ばれる。

米国特許出願公開第２０１３／０２９５１１６号明細書

Ｍｏｎｋ ＰＮ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００７，１５２：４２９－４４８ Ｗｅｔｓｅｌ ＲＡ，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ．１９９５，４４：１８３－１８７ Ｎａｔａｆ Ｓ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９９，１６２：４０１８－４０２３ Ｍｏｒｇａｎ ＢＰ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．２０１５，１４：８５７－８７７ Ｈａｗｋｓｗｏｒｔｈ ＯＡ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１７，８９：３６－４３ Ｍａｒｋｉｅｗｓｋｉ ＭＭ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８，９：１２２５－１２３５ Ｃｏｒｒａｌｅｓ Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１２，１８９：４６７４－４６８３ Ｃｈｏ ＭＳ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．２０１４，６：１０８５－１０９５ Ｓａｙｅｇｈ ＥＴ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｍｅｄ．２０１４，３：７４７－７５８ Ｄａｒｌｉｎｇ ＶＲ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１５，１１：２５５－２６３ Ｍａｒｋｉｅｗｓｋｉ ＭＭ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００９，６９：６３６７－６３７０ Ｗａｎｇ Ｙ，ｅｔ ａｌ．：Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．２０１６，６：１０２２－１０３５ Ｍｏｒｇａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ １５１，３７７－３８８．Ｎｏ．１，Ｊｕｌｙ １，１９９３； Ｏｐｐｅｒｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ １５１，３７８５－３７９４，Ｎｏ．７，Ｏｃｔｏｂｅｒ １，１９９３ Ｄａｎｉｌｕｋ Ｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅ．２０１４，７３：６８４－６８５ Ｏｌｉｖｉｅｒ Ｄｅｍａｒｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ ２０１７．Ｐｏｓｔｅｒ＃Ｂ１８４．ＣＲＩ－ＣＩＭＴ－ＥＡＴＩ－ＡＡＣＲ Ｍａｉｎｚ

本開示は、新規抗体及び抗体断片を提供する。

本明細書中で開示される抗体及び抗体断片は、ヒトＣ５ａＲに特異的に結合し得、好ましくはカニクイザル由来のＣ５ａＲと交差反応する。したがって、いくつかの実施形態では、開示される抗体は、ヒトＣ５ａＲ及びカニクイザルＣ５ａＲに特異的である。いくつかの他の実施形態では、開示される抗体又は抗体断片は、ヒト及びカニクイザルＣ５ａＲのＮ末端細胞外領域に結合する。

これは、ヒトＣ５ａＲの第２の細胞外ループに結合し、その結果、一般的に使用される適切な毒性学の種であるカニクイザルＣ５ａＲに対する結合を欠く、上記で参照される先行技術抗体ＩＰＨ５４０１とは対照的である。

さらに、本発明の発明者らは、驚くべきことに、今回主張されるＣ５ａＲ特異的抗体が、ＩＰＨ５４０１と比較したときに、病態生理学的なＣ５ａ濃度を中和することにおいて顕著により強力であることを見出しただけでなく、インビトロで好中球のＣ５介在性の活性化を阻害することにおいて長期にわたり効力が上昇していることも明らかにした。

したがって、いくつかの実施形態では、開示される抗体は、特に注目すべきは病態生理学的なＣ５ａ濃度において、Ｃ５ａ誘導性Ｃ５ａＲ活性をインビトロで効率的に阻害し得る。開示される抗体又は抗体断片は、顆粒球及び／又は単球においてＣＤ１１ｂのＣ５ａ誘導性上方制御を阻害するそれらの能力により決定される場合、インビトロでＣ５ａ誘導性白血球活性化も阻害し得る。いくつかの実施形態では、開示される抗体又は抗体断片は、インビトロで１５０ｎＭヒトＣ５ａ存在下において、４２ｎＭのＩＣ_５０濃度でヒト顆粒球においてヒトＣ５ａ誘導性ＣＤ１１ｂ発現を阻害する。いくつかの他の実施形態では、開示される抗体は、長時間の温置時間後に顆粒球及び／又は単球においてＣＤ１１ｂのＣ５ａ誘導性上方制御を阻害する効力の上昇を示し得る。開示される抗体は、Ｃ５ａ誘導性好中球遊走を阻害することにおいても有効であり得る。

まとめると、本開示は、当技術分野からの公知のＣ５ａＲ特異的抗体よりも優れている新規抗体を提供する。特に、本開示の抗体は、ヒトＣ５ａＲに対して高い親和性結合を有するヒト抗体であり、これは、好ましくはカニクイザルＣ５ａＲと交差反応し、以前に観察されていない、都合のよい機能及び安全特性を有する。これらの特性により、本開示の抗体は、炎症及び自己免疫疾患並びに癌を予防及び／又は処置するためなどの治療用途に対して非常に望ましいものとなる。

本開示は、本明細書の表１又は表２によるＣＤＲ領域を有する、ヒトＣ５ａＲに特異的に結合する単離抗体又は抗体断片を提供する。本開示は、本明細書の表１又は表２によるアミノ酸配列を含む可変重鎖領域（ＶＨ）及び可変軽鎖領域（ＶＬ）を有する、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片も提供する。本開示はまた、本明細書の表１又は表２によるアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を有する、Ｃ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片も提供する。

本開示の単離抗体は、インビトロで実質的にエフェクター機能を誘導しない。このようなエフェクター機能は、ＡＤＣＰ、ＡＤＣＣ又はＣＤＣを含み得る。さらに、本開示の単離抗体又は抗体断片は、ＥＵインデックスに従い付番されるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む。特に、本開示の単離抗体又は抗体断片は、変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含み、これは次のアミノ酸置換：ＥＵインデックスに従い付番されるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓを含む。

本開示はまた、医薬での使用のための、本開示の単離抗体又は抗体断片も提供する。

本開示はまた、本開示の抗体又は抗体断片の有効量を前記対象に投与することによる、炎症又は自己免疫疾患又は癌などの疾患に罹患している対象を処置するための方法も提供する。好ましくは、前記対象はヒトである。

本開示はまた、本開示の単離抗体又は抗体断片と、薬学的に許容可能な担体と、を含む医薬組成物も提供する。

本開示はまた、本開示の単離抗体又は抗体断片をコードする核酸組成物も提供する。本開示はまた、本開示の単離抗体又は抗体断片をコードする核酸組成物を含むベクター組成物も提供する。本開示はまた、本開示の単離抗体又は抗体断片をコードするベクター組成物又は核酸組成物を含む、宿主細胞も提供する。

本開示はまた、炎症性疾患、自己免疫疾患又は癌などの疾患に罹患している対象に本開示の単離抗体又は抗体断片の有効量を投与することによる、炎症疾患、自己免疫疾患又は癌などの疾患に罹患している対象を処置するための方法も提供する。好ましくは、前記対象はヒトである。

本開示はまた、本開示の単離抗体又は抗体断片と、薬学的に許容可能な担体と、を含む医薬組成物も提供する。

主張される抗体又は抗体断片には有用性がある。さらに、このような抗体又は抗体断片を同定するための主張される方法には有用性がある。

主張される抗体又は抗体断片の利用は、ヒトＣ５ａＲの生物学的活性を変化させることである。特に、主張される抗体又は抗体断片は、炎症性若しくは自己免疫疾患又は癌の処置などの治療的用途のためである。

ＦＡＣＳを介して決定されるヒト及びカニクイザルＣ５ａＲに対する、ＭＡＢ＃１、ＭＡＢ＃２、ＲｅｆＭＡＢ＃１及び陰性アイソタイプ対照ＭＯＲ０３２０７の細胞結合。Ａ Ｆｌｐ－ＩｎＣＨＯ細胞上で過剰発現されるヒトＣ５ａＲに対する用量反応結合。Ｂ Ｆｌｐ－Ｉｎ ＣＨＯ細胞上で過剰発現されるカニクイザルＣ５ａＲに対する用量反応結合。Ｃ ３種類の異なるドナーの全血から得た精製ヒト好中球に対する平均用量反応結合。Ｄ ３種類の異なるサル由来の全血から得た精製カニクイザル好中球に対する平均用量反応結合。 ６００ｎＭのＩｇＧ濃度でＦＡＣＳを介して決定した、ヒト、カニクイザル及びげっ歯類Ｃ５ａＲに対する、並びにＣ５ａＲ関連ＧＰＣＲヒトＣ５Ｌ２、ヒトＣ３ａＲ、ヒトＦＰＲ１及びヒトＣｈｅｍＲ２３に対する、ＭＡＢ＃１、ＭＡＢ＃２、ＲｅｆＭＡＢ＃１及び陰性アイソタイプ対照ＭＯＲ０３２０７の細胞結合。 ヒトＣ５ａＲの２つの天然変異体に対する、並びにウイルス様粒子（ＶＬＰ）上で発現されるマウスＣ５ａＲに対する、ＭＡＢ＃１のＥＬＩＳＡ結合。 ＤｉｓｃｏｖｅＲｘからのＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）－β－アレスチンアッセイ。ヒトＣ５ａ誘導性β－アレスチン動員の中和。Ａ ＭＡＢ＃１（５０ｎＭ）、ＭＡＢ＃２（５０ｎＭ）及びＲｅｆＭＡＢ＃１（５０ｎＭ）の非存在下又は存在下での組み換えヒトＣ５ａの漸増濃度に対するＬｏｇ用量反応曲線。Ｂ ５０ｎＭの最終ＩｇＧ濃度でのヒトＣ５ａの３段階の漸増濃度（それぞれ１．２ｎＭ、１１ｎＭ及び１００ｎＭ）に対して％阻害を計算した。 定型的及び病態生理学的なＣ５ａ濃度でのヒト顆粒球におけるヒトＣ５ａ誘導性ＣＤ１１ｂ上方制御の阻害。Ａ＋Ｂ ＣＤ１１ｂ全血アッセイにおけるＭＡＢ＃１、ＭＡＢ＃２及びＲｅｆＭＡＢ＃１の比較。Ｌｏｇ用量阻害曲線が示される。標的細胞としてヒト顆粒球をゲーティングした。定量的読み取りとして、ＣＤ１１ｂ上方制御の５０％阻害に到達するために必要なＩｇＧ濃度を計算した（ＩＣ_５０濃度）。各ＩｇＧに対するＩＣ_５０濃度をｘ軸の下で示す。Ａ ＩｇＧの漸増濃度及び１５ｎＭヒトＣ５ａに対するＬｏｇ用量反応曲線。Ｂ ＩｇＧの漸増濃度及び１５０ｎＭヒトＣ５ａに対するＬｏｇ用量反応曲線。 長時間の温置時間にわたり決定される、ヒト顆粒球及び単球におけるヒトＣ５ａ誘導性ＣＤ１１ｂ上方制御の阻害。２０分又は３００分の何れかの標的細胞とのＩｇＧの温置後のＣＤ１１ｂ全血アッセイにおけるＭＡＢ＃１及びＲｅｆＭＡＢ＃１の比較。ＩｇＧを連続希釈で添加し、２０分又は３００分の何れかにわたり温置し、その後、１５ｎＭヒトＣ５ａで刺激した。標的細胞として顆粒球（図６Ａ及びＢ）又は単球（図６Ｃ及びＤ）の何れかをゲーティングした。ＣＤ１１ｂレベルを決定した。Ｌｏｇ用量阻害曲線を示す。データは、１５ｎＭヒトＣ５ａでのＣＤ１１ｂ上方制御の％阻害として表す。図６Ａ及びＣでＭＡＢ＃１に対する結果を示し、ＲｅｆＭＡＢ＃１に対する結果を図６Ｂ及びＤで提供する。 ヒトＣ５ａ誘導性ヒト好中球遊走の阻害。１０ｎＭヒトＣ５ａの存在下で２種類のＩｇＧ濃度（それぞれ１００ｎＭ及び６００ｎＭ）にてＭＡＢ＃１及び陰性対照ＭＯＲ０３２０７をそれぞれ試験した。３回の異なる時間点（１５分、２５分、３５分）での３つの独立したアッセイ実行からの平均値を示す。３回の異なるヒトドナーから好中球を得た。抗体非存在下で好中球遊走に基づいて％阻害を計算した。 Ｐｒｏｍｅｇａ ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰレポーターバイオアッセイ。ＭＡＢ＃１及び、野生型（非抑制）ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域、又はＭＡＢ＃１のＦｃ領域と同一である変異（抑制）Ｆｃ領域の何れかを保有するモノクローナル抗Ｃ５ａＲ対照ＩｇＧの比較。さらに、変異体又は野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域の何れかを有するアイソタイプ対照抗体ＭＯＲ０３２０７が含まれた。ＡＤＣＰ経路を模倣するためのＦｃγＲＩＩａ＿Ｈを発現する改変Ｊｕｒｋａｔ細胞又はＦｃγＲＩＩＩａ、ＡＤＣＣ経路を模倣するためのＶ１５８高親和性変異体を発現するＪｕｒｋａｔ細胞の何れか及びＣ５ａＲ発現ＣＨＯ細胞を使用して、供給者の指示書に従い、アッセイを行った。Ａ １０μｇ／ｍｌのＩｇＧ濃度でのＡＤＣＰレポーターバイオアッセイからの結果。Ｂ １０μｇ／ｍｌのＩｇＧ濃度でのＡＤＣＣレポーターバイオアッセイからの結果。データは、バックグラウンドに対する平均蛍光シグナルとして提供される。 １０ｍｇ／ｋｇ ＩｇＧの単回静脈内投与後のＨａｎ ＷｉｓｔａｒラットにおけるＭＡＢ＃１の群平均薬物動態プロファイル。データは平均値（経時的なＩｇＧ濃度）±標準偏差（Ｓ）（ｎ＝３）として提供する。 ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２に対するタンパク質パネルプロファイリング（３Ｐ）結果。各抗体に対する数は、アイソタイプ陰性対照抗体ＭＯＲ０３２０７の結合と比較した、各抗体及び試験したタンパク質に対する得られた結合シグナルを表す。それぞれ１０ｎＭ及び１００ｎＭの濃度で抗体を試験した。 単球由来のインビトロ成熟Ｍ１及びＭ２マクロファージによるサイトカイン放出。ＭＡＢ＃１での処置及びＣ５ａとの一晩温置の後、ＥＬＩＳＡによって、ＩＬ－１０及びＩＬ－１２レベルを決定した。

本開示は、ヒトＣ５ａＲを認識する、多くのヒト抗体に関する。

定義
「Ｃ５ａＲ」という用語は、Ｃ５ａアナフィラトキシン走化性受容体１又はＣＤ８８として知られるタンパク質を指す。

ヒトＣ５ａＲ（Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ２１７３０｜１－３５０）（本明細書中で「Ｄ／Ｋ変異体」と呼ぶ）は、
ＭＤＳＦＮＹＴＴＰＤＹＧＨＹＤＤＫＤＴＬＤＬＮＴＰＶＤＫＴＳＮＴＬＲＶＰＤＩＬＡＬＶＩＦＡＶＶＦＬＶＧＶＬＧＮＡＬＶＶＷＶＴＡＦＥＡＫＲＴＩＮＡＩＷＦＬＮＬＡＶＡＤＦＬＳＣＬＡＬＰＩＬＦＴＳＩＶＱＨＨＨＷＰＦＧＧＡＡＣＳＩＬＰＳＬＩＬＬＮＭＹＡＳＩＬＬＬＡＴＩＳＡＤＲＦＬＬＶＦＫＰＩＷＣＱＮＦＲＧＡＧＬＡＷＩＡＣＡＶＡＷＧＬＡＬＬＬＴＩＰＳＦＬＹＲＶＶＲＥＥＹＦＰＰＫＶＬＣＧＶＤＹＳＨＤＫＲＲＥＲＡＶＡＩＶＲＬＶＬＧＦＬＷＰＬＬＴＬＴＩＣＹＴＦＩＬＬＲＴＷＳＲＲＡＴＲＳＴＫＴＬＫＶＶＶＡＶＶＡＳＦＦＩＦＷＬＰＹＱＶＴＧＩＭＭＳＦＬＥＰＳＳＰＴＦＬＬＬＫＫＬＤＳＬＣＶＳＦＡＹＩＮＣＣＩＮＰＩＩＹＶＶＡＧＱＧＦＱＧＲＬＲＫＳＬＰＳＬＬＲＮＶＬＴＥＥＳＶＶＲＥＳＫＳＦＴＲＳＴＶＤＴＭＡＱＫＴＱＡＶ（配列番号１）
のアミノ酸配列を有する。

ヒトＣ５ａＲの２つの天然のミスセンス突然変異が記載されている（（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｐ２１７３０）：参照ＳＮＰ（ｒｅｆＳＮＰ）クラスターレポート：ｒｓ４４６７１８５（ＭＡＦ：０．０３）及びクラスターレポート：ｒｓ１１８８００９７（ＭＡＦ：０．０３）。１つの突然変異がヒトＣ５ａＲのＮ末端細胞外領域内に位置し（配列番号１の位置２）、その結果、ＤからＮへの置換が起こる。

その配列中の両方の天然ミスセンス突然変異を含むヒトＣ５ａＲタンパク質（本明細書中で「Ｎ／Ｎ変異体」とも呼ぶ）は、
ＭＮＳＦＮＹＴＴＰＤＹＧＨＹＤＤＫＤＴＬＤＬＮＴＰＶＤＫＴＳＮＴＬＲＶＰＤＩＬＡＬＶＩＦＡＶＶＦＬＶＧＶＬＧＮＡＬＶＶＷＶＴＡＦＥＡＫＲＴＩＮＡＩＷＦＬＮＬＡＶＡＤＦＬＳＣＬＡＬＰＩＬＦＴＳＩＶＱＨＨＨＷＰＦＧＧＡＡＣＳＩＬＰＳＬＩＬＬＮＭＹＡＳＩＬＬＬＡＴＩＳＡＤＲＦＬＬＶＦＫＰＩＷＣＱＮＦＲＧＡＧＬＡＷＩＡＣＡＶＡＷＧＬＡＬＬＬＴＩＰＳＦＬＹＲＶＶＲＥＥＹＦＰＰＫＶＬＣＧＶＤＹＳＨＤＫＲＲＥＲＡＶＡＩＶＲＬＶＬＧＦＬＷＰＬＬＴＬＴＩＣＹＴＦＩＬＬＲＴＷＳＲＲＡＴＲＳＴＫＴＬＫＶＶＶＡＶＶＡＳＦＦＩＦＷＬＰＹＱＶＴＧＩＭＭＳＦＬＥＰＳＳＰＴＦＬＬＬＮＫＬＤＳＬＣＶＳＦＡＹＩＮＣＣＩＮＰＩＩＹＶＶＡＧＱＧＦＱＧＲＬＲＫＳＬＰＳＬＬＲＮＶＬＴＥＥＳＶＶＲＥＳＫＳＦＴＲＳＴＶＤＴＭＡＱＫＴＱＡＶ（配列番号２）
のアミノ酸配列を有する。

カニクイザル（マカカ・ファスシキュラリス（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））Ｃ５ａＲは、
ＭＤＰＦＳＳＴＴＬＤＹＥＨＹＤＧＫＮＶＬＤＳＤＴＰＶＤＫＴＳＮＴＬＲＶＰＤＩＬＡＬＶＶＦＡＶＶＦＬＶＧＶＬＧＮＡＬＶＶＷＶＴＡＦＥＶＫＲＴＩＮＡＩＷＦＬＮＬＡＶＡＤＦＬＳＣＬＡＬＰＩＬＦＴＳＩＶＱＨＨＨＷＰＦＧＧＴＡＣＲＩＬＰＳＬＩＬＬＮＭＹＡＳＩＬＬＬＡＴＩＳＡＤＲＦＬＬＶＦＮＰＩＷＣＱＮＦＲＧＡＧＬＡＷＩＡＣＡＶＡＷＧＬＡＬＬＬＴＩＰＳＦＬＹＲＡＶＲＱＥＥＹＳＰＫＶＬＣＧＶＤＹＮＮＤＴＲＲＥＲＡＶＡＩＶＲＬＶＬＧＦＬＷＰＬＬＴＬＭＩＣＹＴＦＬＬＬＲＴＷＳＲＲＡＴＲＳＴＫＴＬＫＶＶＶＡＶＶＡＳＦＦＩＦＷＬＰＹＱＶＴＧＴＭＭＳＦＬＲＰＳＳＰＴＹＬＱＬＫＫＬＤＳＬＳＩＳＦＡＹＩＮＣＣＩＮＰＶＩＹＶＶＡＧＱＧＦＱＧＲＬＲＫＳＬＰＳＬＬＲＮＶＬＴＥＥＳＶＶＲＥＳＫＳＦＴＲＳＴＶＤＴＭＴＥＫＴＱＡＶ（配列番号３）
のアミノ酸配列を有する。

マウス（ムス・ムスクルス（Ｍｕｓ ｍｕｓｃｕｌｕｓ））Ｃ５ａＲは、
ＭＤＰＩＤＮＳＳＦＥＩＮＹＤＨＹＧＴＭＡＰＮＩＰＡＤＧＩＨＬＰＫＲＱＰＧＤＶＡＡＬＩＩＹＳＶＶＦＬＶＧＶＰＧＮＡＬＶＶＷＶＴＡＦＥＡＲＲＡＶＮＡＩＷＦＬＮＬＡＶＡＤＬＬＳＣＬＡＬＰＶＬＦＴＴＶＬＮＨＮＹＷＹＦＤＡＴＡＣＩＶＬＰＳＬＩＬＬＮＭＹＡＳＩＬＬＬＡＴＩＳＡＤＲＦＬＬＶＦＫＰＩＷＣＱＫＶＲＧＴＧＬＡＷＭＡＣＧＶＡＷＶＬＡＬＬＬＴＩＰＳＦＶＹＲＥＡＹＫＤＦＹＳＥＨＴＶＣＧＩＮＹＧＧＧＳＦＰＫＥＫＡＶＡＩＬＲＬＭＶＧＦＶＬＰＬＬＴＬＮＩＣＹＴＦＬＬＬＲＴＷＳＲＫＡＴＲＳＴＫＴＬＫＶＶＭＡＶＶＩＣＦＦＩＦＷＬＰＹＱＶＴＧＶＭＩＡＷＬＰＰＳＳＰＴＬＫＲＶＥＫＬＮＳＬＣＶＳＬＡＹＩＮＣＣＶＮＰＩＩＹＶＭＡＧＱＧＦＨＧＲＬＬＲＳＬＰＳＩＩＲＮＡＬＳＥＤＳＶＧＲＤＳＫＴＦＴＰＳＴＴＤＴＳＴＲＫＳＱＡＶ（配列番号４）
のアミノ酸配列を有する。

ラット（ラトゥス・ノルベジクス（Ｒａｔｔｕｓ ｎｏｒｖｅｇｉｃｕｓ））Ｃ５ａＲは、
ＭＤＰＩＳＮＤＳＳＥＩＴＹＤＹＳＤＧＴＰＮＰＤＭＰＡＤＧＶＹＩＰＫＭＥＰＧＤＩＡＡＬＩＩＹＬＡＶＦＬＶＧＶＴＧＮＡＬＶＶＷＶＴＡＦＥＡＫＲＴＶＮＡＩＷＦＬＮＬＡＶＡＤＬＬＳＣＬＡＬＰＩＬＦＴＳＩＶＫＨＮＨＷＰＦＧＤＱＡＣＩＶＬＰＳＬＩＬＬＮＭＹＳＳＩＬＬＬＡＴＩＳＡＤＲＦＬＬＶＦＫＰＩＷＣＱＫＦＲＲＰＧＬＡＷＭＡＣＧＶＴＷＶＬＡＬＬＬＴＩＰＳＦＶＦＲＲＩＨＫＤＰＹＳＤＳＩＬＣＮＩＤＹＳＫＧＰＦＦＩＥＫＡＩＡＩＬＲＬＭＶＧＦＶＬＰＬＬＴＬＮＩＣＹＴＦＬＬＩＲＴＷＳＲＫＡＴＲＳＴＫＴＬＫＶＶＭＡＶＶＴＣＦＦＶＦＷＬＰＹＱＶＴＧＶＩＬＡＷＬＰＲＳＳＳＴＦＱＳＶＥＲＬＮＳＬＣＶＳＬＡＹＩＮＣＣＶＮＰＩＩＹＶＭＡＧＱＧＦＨＧＲＬＲＲＳＬＰＳＩＩＲＮＶＬＳＥＤＳＬＧＲＤＳＫＳＦＴＲＳＴＭＤＴＳＴＱＫＳＱＡＶ（配列番号５）
のアミノ酸配列を有する。

「Ｃ５ａ」という用語は、ヒト補体成分Ｃ５ａとして知られるタンパク質を指す。

ヒトＣ５ａ（Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１０３１｜６７８－７５１）は、
ＴＬＱＫＫＩＥＥＩＡＡＫＹＫＨＳＶＶＫＫＣＣＹＤＧＡＣＶＮＮＤＥＴＣＥＱＲＡＡＲＩＳＬＧＰＲＣＩＫＡＦＴＥＣＣＶＶＡＳＱＬＲＡＮＩＳＨＫＤＭＱＬＧＲ（配列番号６）
のアミノ酸配列を有する。

「Ｃ５Ｌ２」という用語は、Ｃ５ａアナフィラトキシン走化性受容体２として知られるタンパク質を指す。

ヒトＣ５Ｌ２は、
ＭＧＮＤＳＶＳＹＥＹＧＤＹＳＤＬＳＤＲＰＶＤＣＬＤＧＡＣＬＡＩＤＰＬＲＶＡＰＬＰＬＹＡＡＩＦＬＶＧＶＰＧＮＡＭＶＡＷＶＡＧＫＶＡＲＲＲＶＧＡＴＷＬＬＨＬＡＶＡＤＬＬＣＣＬＳＬＰＩＬＡＶＰＩＡＲＧＧＨＷＰＹＧＡＶＧＣＲＡＬＰＳＩＩＬＬＴＭＹＡＳＶＬＬＬＡＡＬＳＡＤＬＣＦＬＡＬＧＰＡＷＷＳＴＶＱＲＡＣＧＶＱＶＡＣＧＡＡＷＴＬＡＬＬＬＴＶＰＳＡＩＹＲＲＬＨＱＥＨＦＰＡＲＬＱＣＶＶＤＹＧＧＳＳＳＴＥＮＡＶＴＡＩＲＦＬＦＧＦＬＧＰＬＶＡＶＡＳＣＨＳＡＬＬＣＷＡＡＲＲＣＲＰＬＧＴＡＩＶＶＧＦＦＶＣＷＡＰＹＨＬＬＧＬＶＬＴＶＡＡＰＮＳＡＬＬＡＲＡＬＲＡＥＰＬＩＶＧＬＡＬＡＨＳＣＬＮＰＭＬＦＬＹＦＧＲＡＱＬＲＲＳＬＰＡＡＣＨＷＡＬＲＥＳＱＧＱＤＥＳＶＤＳＫＫＳＴＳＨＤＬＶＳＥＭＥＶ（配列番号７）
のアミノ酸配列を有する。

「Ｃ３ａＲ」という用語は、Ｃ３ａアナフィラトキシン走化性受容体として知られるタンパク質を指す。

ヒトＣ３ａＲは、
ＭＡＳＦＳＡＥＴＮＳＴＤＬＬＳＱＰＷＮＥＰＰＶＩＬＳＭＶＩＬＳＬＴＦＬＬＧＬＰＧＮＧＬＶＬＷＶＡＧＬＫＭＱＲＴＶＮＴＩＷＦＬＨＬＴＬＡＤＬＬＣＣＬＳＬＰＦＳＬＡＨＬＡＬＱＧＱＷＰＹＧＲＦＬＣＫＬＩＰＳＩＩＶＬＮＭＦＡＳＶＦＬＬＴＡＩＳＬＤＲＣＬＶＶＦＫＰＩＷＣＱＮＨＲＮＶＧＭＡＣＳＩＣＧＣＩＷＶＶＡＣＶＭＣＩＰＶＦＶＹＲＥＩＦＴＴＤＮＨＮＲＣＧＹＫＦＧＬＳＳＳＬＤＹＰＤＦＹＧＤＰＬＥＮＲＳＬＥＮＩＶＱＰＰＧＥＭＮＤＲＬＤＰＳＳＦＱＴＮＤＨＰＷＴＶＰＴＶＦＱＰＱＴＦＱＲＰＳＡＤＳＬＰＲＧＳＡＲＬＴＳＱＮＬＹＳＮＶＦＫＰＡＤＶＶＳＰＫＩＰＳＧＦＰＩＥＤＨＥＴＳＰＬＤＮＳＤＡＦＬＳＴＨＬＫＬＦＰＳＡＳＳＮＳＦＹＥＳＥＬＰＱＧＦＱＤＹＹＮＬＧＱＦＴＤＤＤＱＶＰＴＰＬＶＡＩＴＩＴＲＬＶＶＧＦＬＬＰＳＶＩＭＩＡＣＹＳＦＩＶＦＲＭＱＲＧＲＦＡＫＳＱＳＫＴＦＲＶＡＶＶＶＶＡＶＦＬＶＣＷＴＰＹＨＩＦＧＶＬＳＬＬＴＤＰＥＴＰＬＧＫＴＬＭＳＷＤＨＶＣＩＡＬＡＳＡＮＳＣＦＮＰＦＬＹＡＬＬＧＫＤＦＲＫＫＡＲＱＳＩＱＧＩＬＥＡＡＦＳＥＥＬＴＲＳＴＨＣＰＳＮＮＶＩＳＥＲＮＳＴＴＶ（配列番号８）
のアミノ酸配列を有する。

「ＦＰＲ１」という用語は、ｆＭｅｔ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ受容体として知られるタンパク質を指す。

ヒトＦＰＲ１は、
ＭＥＴＮＳＳＬＰＴＮＩＳＧＧＴＰＡＶＳＡＧＹＬＦＬＤＩＩＴＹＬＶＦＡＶＴＦＶＬＧＶＬＧＮＧＬＶＩＷＶＡＧＦＲＭＴＨＴＶＴＴＩＳＹＬＮＬＡＶＡＤＦＣＦＴＳＴＬＰＦＦＭＶＲＫＡＭＧＧＨＷＰＦＧＷＦＬＣＫＦＬＦＴＩＶＤＩＮＬＦＧＳＶＦＬＩＡＬＩＡＬＤＲＣＶＣＶＬＨＰＶＷＴＱＮＨＲＴＶＳＬＡＫＫＶＩＩＧＰＷＶＭＡＬＬＬＴＬＰＶＩＩＲＶＴＴＶＰＧＫＴＧＴＶＡＣＴＦＮＦＳＰＷＴＮＤＰＫＥＲＩＮＶＡＶＡＭＬＴＶＲＧＩＩＲＦＩＩＧＦＳＡＰＭＳＩＶＡＶＳＹＧＬＩＡＴＫＩＨＫＱＧＬＩＫＳＳＰＰＬＲＶＬＳＦＶＡＡＡＦＦＬＣＷＳＰＹＱＶＶＡＬＩＡＴＶＲＩＲＥＬＬＱＧＭＹＫＥＩＧＩＡＶＤＶＴＳＡＬＡＦＦＮＳＣＬＮＰＭＬＹＶＦＭＧＱＤＦＲＥＲＬＩＨＡＬＰＡＳＬＥＲＡＬＴＥＤＳＴＱＴＳＤＴＡＴＮＳＴＬＰＳＡＥＶＡＬＱＡＫ（配列番号９）
のアミノ酸配列を有する。

「ＣｈｅｍＲ２３」という用語は、ケモカイン様受容体１として知られるタンパク質を指す。

ヒトＣｈｅｍＲ２３は、
ＭＲＭＥＤＥＤＹＮＴＳＩＳＹＧＤＥＹＰＤＹＬＤＳＩＶＶＬＥＤＬＳＰＬＥＡＲＶＴＲＩＦＬＶＶＶＹＳＩＶＣＦＬＧＩＬＧＮＧＬＶＩＩＩＡＴＦＫＭＫＫＴＶＮＭＶＷＦＬＮＬＡＶＡＤＦＬＦＮＶＦＬＰＩＨＩＴＹＡＡＭＤＹＨＷＶＦＧＴＡＭＣＫＩＳＮＦＬＬＩＨＮＭＦＴＳＶＦＬＬＴＩＩＳＳＤＲＣＩＳＶＬＬＰＶＷＳＱＮＨＲＳＶＲＬＡＹＭＡＣＭＶＩＷＶＬＡＦＦＬＳＳＰＳＬＶＦＲＤＴＡＮＬＨＧＫＩＳＣＦＮＮＦＳＬＳＴＰＧＳＳＳＷＰＴＨＳＱＭＤＰＶＧＹＳＲＨＭＶＶＴＶＴＲＦＬＣＧＦＬＶＰＶＬＩＩＴＡＣＹＬＴＩＶＣＫＬＨＲＮＲＬＡＫＴＫＫＰＦＫＩＩＶＴＩＩＩＴＦＦＬＣＷＣＰＹＨＴＬＮＬＬＥＬＨＨＴＡＭＰＧＳＶＦＳＬＧＬＰＬＡＴＡＬＡＩＡＮＳＣＭＮＰＩＬＹＶＦＭＧＱＤＦＫＫＦＫＶＡＬＦＳＲＬＶＮＡＬＳＥＤＴＧＨＳＳＹＰＳＨＲＳＦＴＫＭＳＳＭＮＥＲＴＳＭＮＥＲＥＴＧＭＬ（配列番号１０）
のアミノ酸配列を有する。

「抗体」という用語は、本明細書中で使用される場合、ジスルフィド結合により相互連結される少なくとも２本の重（Ｈ）鎖及び２本の軽（Ｌ）鎖を含み、抗原と相互作用するタンパク質を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書中でＶＨと略す）及び重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、３個のドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３から構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書中でＶＬと略す）及び軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１個のドメイン、ＣＬから構成される。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存的である領域に散在する、超可変性の相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる領域にさらに分類され得る。各ＶＨ及びＶＬは、次の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４でアミノ末端からカルボキシ末端に並べられる、３個のＣＤＲ及び４個のＦＲから構成される。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。本抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えばエフェクター細胞）及び古典的な補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）を含め、宿主組織又は因子への免疫グロブリンの結合に介在し得る。「抗体」という用語は、例えば、モノクローナル抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、ラクダ化抗体及びキメラ抗体を含む。本抗体は、あらゆるアイソタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）又はサブクラスであり得る。軽鎖及び重鎖の両方とも、構造及び機能相同性の領域に分けられる。

「抗体断片」という句は、本明細書中で使用される場合、（例えば結合、立体障害、安定化空間分布により）抗原と特異的に相互作用する能力を保持する抗体の１つ以上の部分を指す。結合断片の例としては、Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインからなる一価断片；Ｆ（ａｂ）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結される２つのＦａｂ断片を含む二価断片；ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；抗体のシングルアームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片；ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）；及び分離される相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられるが限定されない。さらに、Ｆｖ断片、ＶＬ及びＶＨのうち２つのドメインは個別の遺伝子によりコードされるものの、これらは、それらを、ＶＬ及びＶＨ領域が対形成して一価分子を形成する１本鎖タンパク質とすることを可能にする合成リンカーにより、組み換え法を使用して連結され得る（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えばＢｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；及びＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：５８７９－５８８３参照）。このような単鎖抗体は、「抗体断片」という用語内に包含されるものでもある。これらの抗体断片は、当業者にとって公知の従来技術を使用して得られ、断片は、インタクトな抗体と同じような有用性についてスクリーニングされる。抗体断片は、単ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲ及びｂｉｓ－ｓｃＦｖ（例えばＨｏｌｌｉｎｇｅｒ及びＨｕｄｓｏｎ，（２００５）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１２６－１１３６を参照）にも組み込まれ得る。ＩＩＩ型フィブロネクチン（Ｆｎ３）などのポリペプチドに基づく骨格に抗体断片が移植され得る（フィブロネクチンポリペプチドモノボディを記載する米国特許第６，７０３，１９９号明細書を参照）。相補的な軽鎖ポリペプチドと一緒に、抗原－結合部位の対を形成するタンデムＦｖセグメント（ＶＨ－ＣＨ１－ＶＨ－ＣＨ１）の対を含む単鎖分子に抗体断片が組み込まれ得る（Ｚａｐａｔａ ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８：１０５７－１０６２；及び米国特許第５，６４１，８７０号明細書）。

「ヒト抗体」又は「ヒト抗体断片」は、本明細書中で使用される場合、フレームワーク及びＣＤＲ領域の両方がヒト起源の配列由来である可変領域を有する抗体及び抗体断片である。ヒト抗体はまた、合成ライブラリ由来、又はトランスジェニックマウス（例えばＸｅｎｏｍｏｕｓｅ）由来でもあり得るが、ただし、個々の系はフレームワーク及びＣＤＲ領域の両方がヒト起源の配列由来である可変領域を有する抗体を生じさせるものとする。さらに、本抗体が定常領域を含有する場合、定常領域もまたこのような配列由来である。ヒト起源としては、例えば、ヒト生殖細胞系列配列又はヒト生殖細胞系列配列の突然変異バージョン又は、例えばＫｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６：５７－８６）に記載のようなヒトフレームワーク配列分析由来のコンセンサスフレームワーク配列を含有する抗体が挙げられる。

免疫グロブリン可変ドメイン、例えばＣＤＲの構造及び位置は、周知の付番スキーム、例えばＫａｂａｔ付番スキーム、Ｃｈｏｔｈｉａ付番スキーム又はＫａｂａｔ及びＣｈｏｔｈｉａの組み合わせを使用して定義され得る（例えばＳｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１），ｅｄｓ．Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．；Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ． ２７３：９２７－９４８）；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ ｅｄｉｔ．，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ｎｏ．９１－３２４２ Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８３；ａｎｄ Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８を参照。

「ヒト化抗体」又は「ヒト化抗体断片」は、本明細書中で、ヒト起源の配列由来の定常抗体領域を有し、可変抗体領域若しくはその一部、又はＣＤＲのみが別の種由来である、抗体分子として定義される。例えば、ヒト化抗体にはＣＤＲが移植され得、ここで、可変ドメインのＣＤＲは非ヒト起源由来であり、一方で可変ドメインの１つ以上のフレームワークはヒト起源であり、定常ドメイン（もしあれば）はヒト起源である。

「キメラ抗体」又は「キメラ抗体断片」という用語は、本明細書中で、ある１つの種で見られる配列に由来するか又は対応する定常抗体領域及び別の種由来の可変抗体領域を有する、抗体分子として定義される。好ましくは、定常抗体領域は、ヒトで見られる配列由来であるか又はこれに対応し、可変抗体領域（例えばＶＨ、ＶＬ、ＣＤＲ又はＦＲ領域）は、非ヒト動物、例えばマウス、ラット、ウサギ又はハムスターで見られる配列由来である。

「単離抗体」という用語は、異なる抗原特異性を有する他の抗体又は抗体断片を実質的に含まない抗体又は抗体断片を指す。さらに、単離抗体又は抗体断片は、他の細胞性物質及び／又は化学物質を実質的に含み得ない。したがって、いくつかの態様では、提供される抗体は単離抗体であり、これは、異なる特異性を持つ抗体から分離されている。単離抗体はモノクローナル抗体であり得る。単離抗体は組み換えモノクローナル抗体であり得る。しかし、標的のエピトープ、アイソフォーム又は変異体に特異的に結合する単離抗体は、他の関連する抗原、例えば他の種由来のもの（例えば種相同体）、に対して交差反応性を有し得る。

「組み換え抗体」という用語は、本明細書中で使用される場合、自然に存在しない手段によって調製、発現、作製、若しくは分離される全ての抗体を含む。例えば、本抗体を発現させるために形質転換された宿主細胞から単離される抗体、リコンビナント、コンビナトリアルヒト抗体ライブラリから選択され、単離される抗体、及び、ヒト免疫グロブリン遺伝子、他のＤＮＡ配列に対する配列、の全て又は一部のスプライシングを含む何らかの他の手段により調製、発現、作製、若しくは単離される抗体、又はヒト免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニック又はトランスクロモソームである動物（例えばマウス）若しくはそこから調製されるハイブリドーマから単離される抗体。好ましくは、このような組み換え抗体は、フレームワーク及びＣＤＲ領域がヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列由来である可変領域を有する。しかし、ある一定の実施形態では、このような組み換えヒト抗体をインビトロ突然変異誘発（又はヒトＩｇ配列に対してトランスジェニックである動物が使用される場合はインビボ体細胞突然変異誘発）に供し得、したがって、組み換え抗体のＶＨ及びＶＬ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖細胞系列ＶＨ及びＶＬ配列由来であり、それに関連する一方で、インビボでヒト抗体生殖細胞系列レパートリー内に天然に存在し得ない配列である。組み換え抗体はモノクローナル抗体であり得る。一実施形態では、本明細書中で開示される抗体及び抗体断片は、ＨｕＣＡＬライブラリから単離される（Ｒｏｔｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２００８）３７６，１１８２－１２００）。

本明細書中で使用される場合、このような抗体が、このような抗原と１つ以上の参照抗原とを区別可能であるとき、結合特異性は絶対的ではないが、相対的特性なので、抗体が「特異的に結合する（ｂｉｎｄｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｔｏ、ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｓ ｔｏ）」は、抗原、例えばヒトＣ５ａＲなど「に対して特異的」であるか又はそれを「特異的に認識」する。例えば、標準的なＥＬＩＳＡアッセイが行われ得る。標準的な発色（例えばホースラディッシュペルオキシダーゼとの二次抗体及び過酸化水素とのテトラメチルベンジジン）によってスコア化が行われ得る。この反応を、ある一定のウェルにおいて、光学密度、例えば４５０ｎｍによりスコア化する。典型的なバックグラウンド（＝陰性反応）は０．１ＯＤであり得；典型的な陽性反応は１ＯＤであり得る。これは、陽性／陰性の相違が１０倍超であり得ることを意味する。一般的には、単一の参照抗原ではなく、一連の約３～５種類の非関連抗原、例えば粉乳、ＢＳＡ、トランスフェリンなどを使用することによって、結合特異性の決定が行われる。

本明細書中で使用される場合、「親和性」という用語は、単一部位でのポリペプチドとその標的との間の相互作用の強度を指す。各部位内で、ポリペプチドの結合領域は、多くの部位でその標的と弱い非共有結合力を通じて相互作用し；相互作用が多いほど、親和性が強くなる。

「Ｋ_Ｄ」という用語は、本明細書中で使用される場合、解離定数を指し、これはＫ_ｏｎに対するｋ_ｏｆｆの比率から得られ（即ちｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ）、モル濃度（Ｍ）として表される。例えばモノクローナル抗体のような抗原結合部分に対するＫ_Ｄ値は、当技術分野でよく確立されている方法を使用して決定され得る。例えばモノクローナル抗体のような抗原結合部分のＫ_Ｄを決定するための方法は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサー系を使用したＳＥＴ（溶液平衡滴定）又は表面プラズモン共鳴である。本開示では、Ｃ５ａＲに特異的な抗体は一般的に、５×１０^－２Ｍ未満、１０^－２Ｍ未満、５×１０^－３Ｍ未満、１０^－３Ｍ未満、５×１０^－４Ｍ未満、１０^－４Ｍ未満、５×１０^－５Ｍ未満、１０^－５Ｍ未満、５×１０^－６Ｍ未満、１０^－６Ｍ未満、５×１０^－７Ｍ未満、１０^－７Ｍ未満、５×１０^－８Ｍ未満、１０^－８Ｍ未満、５×１０^－９Ｍ未満、１０^－９Ｍ未満、５×１０^－１０Ｍ未満、１０^－１０Ｍ未満、５×１０^－１１Ｍ未満、１０^－１１Ｍ未満、５×１０^－１２Ｍ未満、１０^－１２Ｍ未満、５×０^－１３Ｍ未満、１０^－１３Ｍ未満、５×１０^－１４Ｍ未満、１０^－１４Ｍ未満、５×１０^－１５Ｍ未満若しくは１０^－１５Ｍ未満又はそれより低い解離速度定数（Ｋ_Ｄ）（ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎ）を有する。

「エピトープ」という用語は、抗体若しくはそれらの抗体断片により特異的に認識されるか又はそうでなければ分子と相互作用する何らかのタンパク質性の領域を含む。一般に、エピトープは、アミノ酸又は炭水化物又は糖側鎖などの分子の化学的に活性である表面基であり、一般に特異的な三次元構造の特徴並びに特異的な電荷の特徴を有し得る。当業者により認識されるであろうように、実際に抗体が特異的に結合するものは何れもエピトープであり得る。

本開示の「組成物」は治療又は予防適用のために使用され得る。したがって、本開示は、本明細書中で開示されるような抗体又は抗体断片と、それに対する薬学的に許容可能な担体又は賦形剤と、を含有する医薬組成物を含む。関連する態様では、本開示は、癌を処置するための方法を提供する。このような方法は、本明細書中に記載のような抗体又は抗体断片を含有する医薬組成物の有効量を、それを必要とする対象に投与する段階を含有する。

本開示は、このような処置を必要とする対象に本明細書中で開示されるような抗体又は抗体断片の治療的有効量の投与を含む治療方法を提供する。「治療的有効量」又は「有効量」は、本明細書中で使用される場合、所望の生物学的応答を誘発するのに必要なＣ５ａＲ抗体の量を指す。本開示によれば、治療的有効量は、疾患を処置及び／又は予防するために必要なＣ５ａＲ抗体の量である。

「投与される（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ）」又は「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」は、注射可能な形態、例えば静脈内、筋肉内、皮内又は皮下経路又は粘膜経路などによる、例えば吸入のための鼻腔スプレー若しくはエアロゾルとしての、又は摂取可能な溶液、カプセル又は錠剤としての、薬物の送達を含むが限定されない。好ましくは、投与は注射可能形態による。

本明細書中で使用される場合、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置する（ｔｒｅａｔ）」又は「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」などは、処置されている対象における疾患の自然な経過を変化させるための試みにおける臨床介入を指し、予防のため又は一連の臨床病態中の何れかで行われ得る。処置の所望の効果としては、疾患の発症又は再発を予防すること、症状の軽減、疾患の何らかの直接的又は間接的な病理的結果の減弱、転移の予防、疾患進行速度の低下、疾患状態の寛解又は緩和及び予後の軽快又は改善が挙げられるが限定されない。いくつかの実施形態では、本開示による抗体又は抗体断片は、疾患発症の遅延又は疾患進行の緩徐化のために使用される。

「エフェクター機能」という用語は、抗体のＦｃ領域に起因し得る生物学的活性を指し、これは抗体アイソタイプで変動する。抗体エフェクター機能の非限定例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合及び抗体依存的な細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）及び／又は抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）；細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体）の下方制御；及びＢ細胞活性化が挙げられる。

「抗体依存性細胞介在性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、ある種の細胞傷害性細胞（例えばＮＫ細胞、好中球及びマクロファージ）上に存在するＦｃ受容体（ＦｃＲ）上に結合される抗体によって、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が抗原保有標的細胞に特異的に結合し、その後標的細胞を細胞傷害性により死滅させることが可能になるという、細胞傷害性の形態を指す。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現し、一方で単球はＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。

「補体依存性細胞傷害」又は「ＣＤＣ」は、補体存在下での標的細胞の溶解を指す。古典的補体経路の活性化は、それらの同種抗原に結合される、本開示の（適切なサブクラスの）抗体への補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）の結合により開始される。

「抗体依存性細胞食作用」又は「ＡＤＣＰ」は、食作用細胞、例えばマクロファージ又は樹状細胞などによる内部移行による、抗体被覆標的細胞の排除の機序を指す。

「予防すること（Ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ）」又は「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」は、疾患を得るか又は発症するリスクの低下（即ち、疾患原因物質に曝露され得るか又は疾患発症に先立って疾患に罹患し易い対象において、疾患の臨床症状の少なくとも１つが発症しないようにすること）を指す。「予防（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）」は、疾患又はその症状の開始を予防するか又は疾患若しくはその症状の開始を遅延させることを目的とする方法も指す。

「対象」又は「種」又は、これに関連して使用される場合、げっ歯類、例えばマウス又はラットなど、及び霊長類、例えばカニクイザル（マカカ・ファスシキュラリス（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ））、アカゲザル（マカカ・ムラッタ（Ｍａｃａｃａ ｍｕｌａｔｔａ））又はヒト（ホモ・サピエンス（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ））を含む何らかの哺乳動物を指す。好ましくは、対象は、霊長類、最も好ましくはヒトである。

本明細書を通して、文脈から別段求められない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「有する（ｈａｖｅ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」及び、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有すること（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含むこと（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などのそれらの個々の変形物は、述べられる要素若しくは整数、又は要素若しくは整数の群の包含を示すと理解されるが、何らかの他の要素若しくは整数、又は要素若しくは整数の群の排除ではない。

「改変される（ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ）」又は「修飾される（ｍｏｄｉｆｉｅｄ）」という用語は、本明細書中で使用される場合、合成手段による（例えば組み換え技術、インビトロペプチド合成による、ペプチドの酵素性若しくは化学カップリングによる、又はこれらの技術のいくつかの組み合わせによる）核酸又はポリペプチドの操作を含む。好ましくは、本開示による抗体又は抗体断片は、抗原結合、安定性、半減期、エフェクター機能、免疫原性、安全性などの１つ以上の特性を改善するために改変又は修飾される。

「変異体」は、本明細書中で使用される場合、１つ以上の修飾、例えばアミノ酸置換、挿入又は欠失により参照ポリペプチドとは異なるポリペプチドを指す。

「アミノ酸突然変異」という用語は、本明細書中で使用される場合、アミノ酸置換、欠失、挿入及び修飾を包含することを意味する。最終的なコンストラクトが所望の特徴、例えばＦｃ受容体への結合低下などを保持する限り、置換、欠失、挿入及び修飾のあらゆる組み合わせを行い得る。アミノ酸配列の欠失及び挿入は、アミノ酸残基のＮ及び／又はＣ末端欠失及び挿入を含む。特定のアミノ酸突然変異はアミノ酸置換である。アミノ酸置換は、非天然のアミノ酸によるか又は、２０種類の標準的アミノ酸の天然のアミノ酸誘導体による置き換えを含む。アミノ酸突然変異は、当技術分野で周知の遺伝学的又は化学的方法を使用して作製され得る。遺伝学的方法は、部位特異的突然変異誘発、ＰＣＲ、遺伝子合成などを含み得る。化学的修飾などの遺伝子改変以外の方法によってアミノ酸残基の側鎖基を変化させる方法も有用であり得ることが企図される。同じアミノ酸突然変異を示すために様々な命名法が本明細書中で使用され得る。例えば、Ｆｃ領域の位置３２７でのグリシンからアラニンへの置換は、２３７Ａ、Ｇ３３７、Ｇ３３７Ａ又はＧｌｙ３２９Ａｌａとして示され得る。

「ＥＣ_５０」という用語は、本明細書中で使用される場合、抗体又は抗体断片又はリガンドの濃度を指し、これは、ベースラインと最大との間の真ん中の、アッセイにおける応答を誘導する。したがって、これは最大効果の５０％が観察される抗体又はリガンド濃度に相当する。

「ＩＣ_５０」という用語は、本明細書中で使用される場合、最大応答とベースラインとの間の真ん中の、アッセイにおける応答を阻害する抗体又は抗体断片の濃度を指す。これは、与えられる応答が５０％低下する抗体濃度に相当する。

「阻害（ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）」又は「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」又は「低下（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）」又は「低下する（ｒｅｄｕｃｅ）」又は「中和（ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ）」又は「中和する（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ）」という用語は、何らかの表現型の特徴（結合又は生物学的活性又は機能など）の減弱若しくは停止又はその特徴の発生率、程度若しくは可能性の低下若しくは停止を指す。「阻害（ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）」、「低下（ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ）」又は「中和（ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ）」は、適切なアッセイを使用してそれが検出可能である限り、完全である必要はない。いくつかの実施形態では、「低下する（ｒｅｄｕｃｅ）」又は「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」又は「中和する（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ）」は、２０％以上の低下を引き起こす能力を意味する。別の実施形態では、「低下する（ｒｅｄｕｃｅ）」又は「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」又は「中和する（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ）」は、５０％以上の低下を引き起こす能力を意味する。また別の実施形態では、「低下する（ｒｅｄｕｃｅ）」又は「阻害する（ｉｎｈｉｂｉｔ）」又は「中和する（ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅ）」は、７５％、８５％、９０％、９５％又はそれを超える全体的な低下を引き起こす能力を意味する。

「アンタゴニスト」抗体という用語は、本明細書中で使用される場合、抗原と相互作用し、生物学的活性若しくは機能又は標的抗原の何らかの他の表現型の特徴を部分的又は完全に阻害若しくは中和する抗体又は抗体断片を指す。

「野生型」タンパク質は、それが天然で見られるようなタンパク質のバージョン又は変異体である。野生型タンパク質、例えばヒトＩｇＧ１抗体のＦｃ領域、のアミノ酸配列は、それが天然で生じるとおりのタンパク質のアミノ酸配列である。アロタイプの相違ゆえに、野生型タンパク質に対して複数のアミノ酸配列があり得る。例えば天然のヒトＩＧｇ１重鎖定常領域のいくつかのアロタイプがある（例えばＪｅｆｆｒｉｅｓ ｅｔ ａｌ．（２００９）ｍＡｂｓ １：１参照）。

「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。免疫グロブリンのＦｃ領域は一般に２つの定常ドメイン、ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメインを含む。ＩｇＧ重鎖のＦｃ領域の境界は僅かに変動し得るものの、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は通常、Ｃｙｓ２２６から、又はＰｒｏ２３０から重鎖のＣ末端まで伸びるものと定義される。しかしＦｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は存在してもよいし又は存在しなくてもよい。本明細書中で別段指定されない限り、Ｆｃ領域中のアミノ酸残基の付番は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載されるような、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ付番システムに従う。

実施形態：
一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域を含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域を含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域を含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域を含む。

一実施形態では、本開示は、表１又は表２で開示される抗体の何れか１つのＫａｂａｔにより定義される６個のＣＤＲを含むヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指す。

一実施形態では、本開示は、本単離抗体又は抗体断片は、表１又は表２で開示される抗体の何れか１つのＣｈｏｔｈｉａにより定義される６個のＣＤＲを含むヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指す。

本開示の一実施形態では、本単離抗体又は抗体断片は、モノクローナル抗体又は抗体断片である。本開示の一実施形態では、本単離抗体又は抗体断片は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。本開示の別の実施形態では、本単離抗体又は抗体断片は、組み換え抗体又は抗体断片である。本開示の一実施形態では、本単離抗体又は抗体断片はＩｇＧアイソタイプである。本開示の一実施形態では、本単離抗体又は抗体断片はＩｇＧ１クラスである。本開示の別の実施形態では、本単離抗体又は抗体断片はインビトロで実質的にエフェクター機能を誘導しない。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域を含み、配列番号３５のＶＨ又は配列番号３６のＶＬをさらに含むか、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域を含み、配列番号３５のＶＨ又は配列番号３６のＶＬをさらに含むか、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域を含み、配列番号４２のＶＨ又は配列番号４３のＶＬをさらに含むか、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域を含み、配列番号４２のＶＨ又は配列番号４３のＶＬをさらに含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ
を含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬを含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬを含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣを含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣを含む。

一実施形態では、本開示は、表１又は表２で開示される抗体の何れか１つの可変重鎖（ＶＨ）及び可変軽鎖（ＶＬ）を含むヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指す。

一実施形態では、本開示は、表１又は表２で開示される抗体の何れか１つの重鎖（ＨＣ）及び軽鎖（ＬＣ）を含むヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指す。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域を含み、配列番号３５のＶＨ又は配列番号３６のＶＬをさらに含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域を含み、配列番号４２のＶＨ又は配列番号４３のＶＬをさらに含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域を含み、配列番号３５のＶＨ又は配列番号３６のＶＬをさらに含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域を含み、配列番号４２のＶＨ又は配列番号４３のＶＬをさらに含む。

本開示の一実施形態では、本単離抗体又は抗体断片は、モノクローナル抗体又は抗体断片である。本開示の一実施形態では、本単離抗体又は抗体断片はヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。本開示の別の実施形態では、本単離抗体又は抗体断片は組み換え抗体又は抗体断片である。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は
配列番号３５又は配列番号４２のＶＨ及び配列番号３６又は配列番号４３のＶＬに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬ
を含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は、配列番号３５のＶＨに対して及び配列番号３６のＶＬに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬを含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は、配列番号４２のＶＨに対して及び配列番号４３のＶＬに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬを含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は
ｂ）配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は
配列番号３７若しくは配列番号４４のＨＣに対して及び配列番号３８若しくは配列番号４５のＬＣに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％の同一性を有するＨＣ及びＬＣ
を含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は、配列番号３７のＨＣに対して及び配列番号３８のＬＣに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％の同一性を有するＨＣ及びＬＣを含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は、配列番号４４のＨＣに対して及び配列番号４５のＬＣに対して少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％の同一性を有するＨＣ及びＬＣを含む。

本開示の一実施形態では、本単離抗体又は抗体断片は、モノクローナル抗体又は抗体断片である。本開示の一実施形態では、本単離抗体又は抗体断片はヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。本開示の別の実施形態では、本単離抗体又は抗体断片は組み換え抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片はヒト若しくはヒト化抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片はヒト抗体又は抗体断片である。

一実施形態では、本開示のヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片は組み換え若しくは合成抗体又は抗体断片である。さらなる実施形態では、本開示によるＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片は、単離組み換えモノクローナル抗体又は抗体断片である。さらなる実施形態では、本開示によるＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片は、単離組み換えモノクローナルヒト抗体又は抗体断片である。

一実施形態では、本開示によるＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片はＩｇＧアイソタイプである。別の実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片はＩｇＧ１クラスである。別の実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片はヒトＩｇＧ１クラスである。

核酸
一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記単離前記抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域
を含む。

別の実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片の重鎖配列及び軽鎖配列をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記核酸配列又は複数の核酸配列は、
ａ）配列番号４６のＨＣＤＲ１領域、配列番号４７のＨＣＤＲ２領域、配列番号４８のＨＣＤＲ３領域、配列番号５１のＬＣＤＲ１領域、配列番号５２のＬＣＤＲ２領域及び配列番号５３のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号４９のＨＣＤＲ１領域、配列番号５０のＨＣＤＲ２領域、配列番号４８のＨＣＤＲ３領域、配列番号５１のＬＣＤＲ１領域、配列番号５２のＬＣＤＲ２領域及び配列番号５３のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号５８のＨＣＤＲ１領域、配列番号５９のＨＣＤＲ２領域、配列番号６０のＨＣＤＲ３領域、配列番号６３のＬＣＤＲ１領域、配列番号６４のＬＣＤＲ２領域及び配列番号６５のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号６１のＨＣＤＲ１領域、配列番号６２のＨＣＤＲ２領域、配列番号６０のＨＣＤＲ３領域、配列番号６３のＬＣＤＲ１領域、配列番号６４のＬＣＤＲ２領域及び配列番号６５のＬＣＤＲ３領域
を含む。

別の実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片の重鎖配列及び軽鎖配列をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記核酸配列又は複数の核酸配列は、
ａ）配列番号７０のＨＣＤＲ１領域、配列番号７１のＨＣＤＲ２領域、配列番号７２のＨＣＤＲ３領域、配列番号７５のＬＣＤＲ１領域、配列番号７６のＬＣＤＲ２領域及び配列番号７７のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号７３のＨＣＤＲ１領域、配列番号７４のＨＣＤＲ２領域、配列番号７２のＨＣＤＲ３領域、配列番号７５のＬＣＤＲ１領域、配列番号７６のＬＣＤＲ２領域及び配列番号７７のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号８２のＨＣＤＲ１領域、配列番号８３のＨＣＤＲ２領域、配列番号８４のＨＣＤＲ３領域、配列番号８７のＬＣＤＲ１領域、配列番号８８のＬＣＤＲ２領域及び配列番号８９のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号８５のＨＣＤＲ１領域、配列番号８６のＨＣＤＲ２領域、配列番号８４のＨＣＤＲ３領域、配列番号８７のＬＣＤＲ１領域、配列番号８８のＬＣＤＲ２領域及び配列番号８９のＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記核酸配列又は複数の核酸配列は、配列番号５４のＶＨ及び配列番号５５のＶＬ、又は、配列番号５４のＶＨ及び／又は配列番号５５のＶＬに対して少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬを含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記核酸配列又は複数の核酸配列は、配列番号６６のＶＨ及び配列番号６７のＶＬ、又は、配列番号６６のＶＨ及び／又は配列番号６７のＶＬに対して少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬを含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記核酸配列又は複数の核酸配列は、配列番号７８のＶＨ及び配列番号７９のＶＬ、又は、配列番号７８のＶＨ及び／又は配列番号７９のＶＬに対して少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬを含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記核酸配列又は複数の核酸配列は、配列番号９０のＶＨ及び配列番号９１のＶＬ、又は、配列番号９０のＶＨ及び／又は配列番号９１のＶＬに対して少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬを含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記核酸配列又は複数の核酸配列は、配列番号５６のＨＣ及び配列番号５７のＬＣ、又は、配列番号５６のＨＣ及び／又は配列番号５７のＬＣに対して少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣを含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記核酸配列又は複数の核酸配列は、配列番号６８のＨＣ及び配列番号６９のＬＣ、又は、配列番号６８のＨＣ及び／又は配列番号６９のＬＣに対して少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣを含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記核酸配列又は複数の核酸配列は、配列番号８０のＨＣ及び配列番号８１のＬＣ、又は、配列番号８０のＨＣ及び／又は配列番号８１のＬＣに対して少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣを含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記核酸配列又は複数の核酸配列は、配列番号９２のＨＣ及び配列番号９３のＬＣ、又は、配列番号９２のＨＣ及び／又は配列番号９３のＬＣに対して少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣを含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記核酸配列又は複数の核酸配列は、配列番号５６のＨＣ及び配列番号５７のＬＣを含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記核酸配列又は複数の核酸配列は、配列番号６８のＨＣ及び配列番号６９のＬＣを含む。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記核酸配列又は複数の核酸配列は、配列番号８０のＨＣ及び配列番号８１のＬＣを含む。

一実施形態では、本開示は、本明細書中で開示されるヒトＣ５ａＲに特異的な抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記核酸配列又は複数の核酸配列は、配列番号９２のＨＣ及び配列番号９３のＬＣを含む。

別の実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記核酸配列又は複数の核酸配列は、表１又は表２で開示される抗体の何れか１つのＶＨ及びＶＬを含む。

一実施形態では、本開示は、表１又は表２で開示される核酸配列又は複数の核酸配列の何れか１つによりコードされるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を提供する。

一実施形態では、本開示は、表１又は表２で開示される単離抗体又は抗体断片の何れか１つをコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を提供する。

一実施形態では、本開示は、本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片の何れか１つをコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を提供する。

別の実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を指し、前記核酸配列又は複数の核酸配列は、表１又は表２で開示される抗体又は抗体断片の何れか１つのＨＣ及びＬＣを含む。

一実施形態では、前記核酸組成物及び／又は前記核酸配列及び／又は複数の核酸配列は単離されている。

ベクター
一実施形態では、本開示は、本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を含むベクター又は複数のベクターを含むベクター組成物を提供する。

一実施形態では、本開示は、表１又は表２で開示されるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片の何れか１つをコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を含むベクター又は複数のベクターを含むベクター組成物を提供する。

一実施形態では、本開示は、表１又は表２で開示される核酸配列又は複数の核酸配列を含むベクター又は複数のベクターを含むベクター組成物を提供する。

一実施形態では、前記ベクター組成物及び／又はベクター及び／又は複数のベクターは単離されている。

宿主細胞
一実施形態では、本開示は、本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を含むベクター又は複数のベクターを含むベクター組成物を含む宿主細胞を提供する。

一実施形態では、本開示は、表１又は表２で開示されるＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を含むベクター又は複数のベクターを含むベクター組成物を含む宿主細胞を指す。

一実施形態では、本開示による宿主細胞は、ベクター組成物又は核酸組成物によりコードされるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を発現させることが可能である。

さらなる実施形態では、宿主細胞は単離宿主細胞である。さらなる実施形態では、前記宿主細胞は哺乳動物細胞である。一実施形態では、前記哺乳動物細胞はヒト細胞である。別の実施形態では、前記哺乳動物細胞はＣＨＯ細胞である。一実施形態では、前記細胞はＨＥＫ細胞である。別の実施形態では、前記細胞はＰＥＲＣ．６細胞である。一実施形態では、前記細胞はＨＫＢ１１細胞である。

熟練者は、本開示の抗体又は抗体断片の重鎖及び／又は軽鎖をコードする核酸配列又は複数の核酸配列が異なるベクターに又は同じベクターにクローニングされ得ることを認めるであろう。

本ベクターは、当技術分野で周知の方法により原核（例えば細菌）又は真核（例えば酵母又は哺乳動物）細胞などの適切な宿主細胞に導入され得る（例えば“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ”，Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃ．ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９及び１９９２を参照）。多くのクローニングベクターが当業者にとって公知であり、適切なクローニングベクターの選択は選択できる問題である。本遺伝子は、プロモーター、リボソーム結合部位（細菌発現の場合）及び任意選択的にオペレーター（まとめて本明細書中で「制御」エレメントと呼ぶ）の制御下に置かれ得、所望のタンパク質をコードする核酸配列がこの発現構成を含有するベクターにより形質転換される宿主細胞においてＲＮＡに転写されるようになる。本コード配列は、シグナルペプチド又はリーダー配列を含有してもよいし又は含有しなくてもよい。宿主細胞での発現時に、本開示の抗体又は抗体断片が得られる。これらの段階は、当業者により公知であろうように異なる方法で達成され得る。一般に、このような段階は、一般的には、本抗体又は抗体断片をコードする、核酸組成物又はベクター組成物又は感染性粒子で適切な宿主細胞に対して形質転換又は遺伝子移入を行うことを含む。さらに、このような段階は、一般的には、前記宿主細胞の増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）（増大、増殖（ｇｒｏｗｔｈ））に適切な条件下で前記宿主細胞を培養すること及びコードされる抗体又は抗体断片の産生（発現、合成）に適切な条件下での培養段階を含む。増殖又は発現に適切な条件下での宿主細胞の培養は、一般的には細胞増殖又は発現誘導に適切な成分を含む培地の存在下で完遂される。特定の実施形態では、本開示の抗体又は抗体断片の産生のための方法は、産生される抗体又は抗体断片を宿主細胞又は培地から、単離し、精製する段階をさらに含む。発現系がタンパク質を増殖培地に分泌する場合、タンパク質は培地から直接精製され得る。このタンパク質が分泌されない場合、これは、細胞溶解液から単離されるか、又は細胞膜分画から回収される。適切な増殖条件及び回収方法の選択は、当技術分野の技術内である。次に、当業者にとって公知であるような多くの技術によって本開示の抗体又は抗体断片が精製され得る。

一実施形態では、本開示は、表１又は表２で開示される抗体の何れかの、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を産生させる方法を指す。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片を産生する方法が提供され、この方法は、本開示による抗体又は抗体断片をコードする核酸配列又は複数の核酸配列を含む核酸組成物を含むベクター又は複数のベクターを含むベクター組成物を含む宿主細胞を、抗体又は抗体断片の発現に適切な条件下で培養すること及び宿主細胞又は宿主細胞の培地から抗体又は抗体断片を単離することを含む。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル電気泳動、アフィニティークロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーなど、当技術分野で公知の技術によって、本明細書中で記載のように単離される抗体又は抗体断片を精製し得る。特定の抗体又は抗体断片を精製するために使用される条件は、一部、全体的な電荷、疎水性、親水性などの因子に依存し、これは当業者にとって明らかであろう。アフィニティークロマトグラフィー精製に対して、本抗体若しくは抗体断片が結合する抗体、リガンド、受容体又は抗原が使用され得る。例えば本開示による抗体又は抗体断片のアフィニティークロマトグラフィー精製に対して、プロテインＡ又はプロテインＧとのマトリクスが使用され得る。抗体又は抗体断片の純度は、ゲル電気泳動、高圧液体クロマトグラフィーなどを含む様々な周知の分析方法の何れかにより決定され得る。

特異性
一実施形態では、本開示は、表１又は表２で開示されるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片に関する。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片はヒトＣ５ａＲに特異的である。

一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、配列番号１及び／又は配列番号２のアミノ酸配列によりコードされるヒトＣ５ａＲに特異的である。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、配列番号１及び／又は配列番号２のアミノ酸配列を含むポリペプチドに特異的である。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、配列番号１及び／又は配列番号２のアミノ酸配列からなるポリペプチドに特異的である。

一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、細胞外領域ヒトＣ５ａＲに特異的に結合する。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、ヒトＣ５ａＲのＮ末端細胞外領域に特異的に結合する。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、ヒトＣ５ａＲのＮ末端細胞外領域に特異的に結合し、このＮ末端細胞外領域は配列番号１３のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むヒトＣ５ａＲのＮ末端に特異的に結合する。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むペプチドに特異的に結合する。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、配列番号１３のアミノ酸配列からなるペプチドに特異的に結合する。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は
配列番号３５若しくは４２のＶＨに対して及び配列番号３６若しくは４３のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は
ｂ）配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は
配列番号３７若しくは４４のＨＣに対して及び配列番号３８若しくは４５のＬＣに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、モノクローナル抗体又は抗体断片である。一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、組み換え抗体又は抗体断片である。一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、単離組み換えヒトモノクローナル抗体又は抗体断片である。

種交差反応性
さらなる実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、カニクイザル（シノモルグス（ｃｙｎｏｍｏｌｇｕｓ））Ｃ５ａＲに対して交差反応性がある。別の実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、ヒトＣ５ａＲ及びカニクイザルＣ５ａＲに特異的である。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、交差反応性にカニクイザルＣ５ａＲに結合する。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、ヒトＣ５ａＲ及びカニクイザルＣ５ａＲの細胞外領域に特異的に結合する。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、ヒトＣ５ａＲ及びカニクイザルＣ５ａＲのＮ末端細胞外領域に結合する。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、ヒトＣ５ａＲ及びカニクイザルＣ５ａＲのＮ末端細胞外領域に結合し、Ｃ５ａＲのＮ末端細胞外領域は、配列番号１３又は配列番号１４のアミノ酸配列を含む。

また別の実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、マウス又はラットＣ５ａＲなどのげっ歯類Ｃ５ａＲに結合しない。

一実施形態では、本開示による抗体又は抗体断片は、配列番号１３及び／又は配列番号１４のアミノ酸配列を含むペプチドに結合する。

一実施形態では、本開示による抗体又は抗体断片は、配列番号１３及び／又は配列番号１４のアミノ酸配列からなるペプチドに結合する。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲ及びカニクイザルＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は
配列番号３５若しくは４２のＶＨに対して及び配列番号３６若しくは４３のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は
ｂ）配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は
配列番号３７若しくは４４のＨＣに対して及び配列番号３８若しくは４５のＬＣに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片はモノクローナル抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は組み換え抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。

Ｃ５ａＲペプチドに対する一価親和性
さらなる実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、１００ｎＭ以下、例えば９０ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、７０ｎＭ以下、６０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ又は１ｎＭ未満などのＫ_Ｄで、配列番号１３を含むヒトＣ５ａＲペプチドに対して一価親和性を有する。

一実施形態では、前記一価親和性はＩｇＧ方式で決定される。ある一定の実施形態では、前記一価親和性は、本明細書中で実施例４に記載のように表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により決定される。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は
配列番号３５若しくは４２のＶＨに対して及び配列番号３６若しくは４３のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％の同一性を有するＶＨ及びＶＬ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は
ｂ）配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は
配列番号３７若しくは４４のＨＣに対して及び配列番号３８若しくは４５のＬＣに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片はモノクローナル抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は組み換え抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。

Ｃ５ａＲペプチドに対する見かけの親和性（二価）
一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記単離抗体は、０．５ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、９０ｐＭ以下、８０ｐＭ以下、７０ｐＭ以下、６０ｐＭ以下、５０ｐＭ以下、４０ｐＭ以下、３０ｐＭ以下、２０ｐＭ以下、１０ｐＭ以下、５ｐＭ以下又は１ｐＭ以下など、１ｎＭ以下のＫ_Ｄでの、配列番号１３を含むヒトＣ５ａＲペプチドに対する見かけの親和性を有する。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記単離抗体は、２５０ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、１５０ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、９０ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、７０ｎＭ以下、６０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ又は１ｎＭ以下など、３００ｎＭ以下のＫ_Ｄでの、配列番号１４を含むカニクイザルＣ５ａＲペプチドに対する見かけの親和性を有する。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記単離抗体は、０．３ｎＭ以下のＫ_Ｄでの、配列番号１３を含むヒトＣ５ａＲペプチドに対する、及び、１５０ｎＭ以下のＫ_Ｄでの、配列番号１４を含むカニクイザルＣ５ａＲペプチドに対する見かけの親和性を有する。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記単離抗体は、０．０５ｎＭ以下のＫ_Ｄでの、配列番号１３を含むヒトＣ５ａＲペプチドに対する、及び、８０ｎＭ以下のＫ_Ｄでの、配列番号１４を含むカニクイザルＣ５ａＲペプチドに対する見かけの親和性を有する。

ある一定の実施形態では、前記見かけの親和性はＩｇＧ方式で決定される。一実施形態では、前記見かけの親和性は、本明細書中の実施例５に記載のようにバイオレイヤー・インターフェロメトリー（ｂｉｏｌａｙｅｒ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ）（ＢＬＩ）により決定される。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は
配列番号３５若しくは４２のＶＨに対して及び配列番号３６若しくは４３のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は
ｂ）配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は
配列番号３７若しくは４４のＨＣに対して及び配列番号３８若しくは４５のＬＣに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片はモノクローナル抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は組み換え抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。

全長Ｃ５ａＲに対する見かけの親和性（二価）
さらなる実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記単離抗体は、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下又は０．１ｎＭ以下など、１０ｎＭ以下のＫ_Ｄでの、ヒトＣ５ａＲに対する見かけの親和性を有する。

実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記単離抗体は、９ｎＭ以下、８ｎＭ以下、７ｎＭ以下、６ｎＭ以下、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下又は１ｎＭ以下など、１０ｎＭ以下のＫ_Ｄでの、カニクイザルＣ５ａＲに対する見かけの親和性を有する。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記単離抗体は、０．５ｎＭ以下のＫ_ＤでのヒトＣ５ａＲに対する、及び５ｎＭ以下のＫ_ＤでのカニクイザルＣ５ａＲに対する、見かけの親和性を有する。

一実施形態では、前記ヒトＣ５ａＲは配列番号１のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、前記ヒトＣ５ａＲは、配列番号２のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、前記カニクイザルＣ５ａＲは配列番号３のアミノ酸配列を含む。

ある一定の実施形態では、前記見かけの親和性はＩｇＧ方式で決定される。実施形態では、前記ヒトＣ５ａＲ又はカニクイザルＣ５ａＲは細胞上で発現される。実施形態では、前記ヒトＣ５ａＲ又はカニクイザルＣ５ａＲは、全長ヒトを発現する改変ＣＨＯ細胞上で発現される。実施形態では、前記ＣＨＯ細胞はＦｌｐ－Ｉｎ ＣＨＯ細胞である。

ある一定の実施形態では、前記見かけの親和性は本明細書中で実施例６において記載のように決定される。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は
配列番号３５若しくは４２のＶＨに対して及び配列番号３６若しくは４３のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は
ｂ）配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は
配列番号３７若しくは４４のＨＣに対して及び配列番号３８若しくは４５のＬＣに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片はモノクローナル抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は組み換え抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。

全長Ｃ５ａＲに対する見かけのＥＣ_５０
さらなる実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記単離抗体は、２０ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．５ｎＭ以下、０．４ｎＭ以下、０．３ｎＭ以下、０．２ｎＭ以下又は０．１ｎＭ以下のＥＣ_５０濃度でヒトＣ５ａＲに結合する。

実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記単離抗体は、２０ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、９ｎＭ以下、８ｎＭ以下、７ｎＭ以下、６ｎＭ以下、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下又は１ｎＭ以下のＥＣ_５０濃度でカニクイザルＣ５ａＲに結合する。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記単離抗体は、１０ｎＭ以下のＫ_ＤのＥＣ_５０濃度でヒトＣ５ａＲ及びカニクイザルＣ５ａＲに結合する。

一実施形態では、前記ヒトＣ５ａＲは、配列番号１のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、前記ヒトＣ５ａＲは配列番号２のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、前記カニクイザルＣ５ａＲは配列番号３のアミノ酸配列を含む。

ある一定の実施形態では、前記ＥＣ_５０濃度はＩｇＧ方式で決定される。実施形態では、前記ヒトＣ５ａＲ又はカニクイザルＣ５ａＲは細胞上で発現される。実施形態では、前記ヒトＣ５ａＲ又はカニクイザルＣ５ａＲは、全長ヒトを発現する改変ＣＨＯ細胞上で発現される。実施形態では、前記ＣＨＯ細胞はＦｌｐ－Ｉｎ ＣＨＯ細胞である。ある一定の実施形態では、前記ヒトＣ５ａＲ又はカニクイザルＣ５ａＲは好中球上で発現される。実施形態では、前記ヒトＣ５ａＲはヒト好中球上で発現される。実施形態では、前記カニクイザルＣ５ａＲはカニクイザル好中球上で発現される。ある一定の実施形態では、前記好中球は全血由来である。ある一定の実施形態では、前記ＥＣ_５０濃度は、本明細書中で実施例７に記載のように決定される。

さらなる実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、ヒトＣ５Ｌ２、ヒトＣｈｅｍＲ２３、ヒトＦＰＲ１及びＣ３ａＲからなる群から選択されるＣ５ａＲ関連抗原に実質的に結合しない。ある一定の実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、３００ｎＭのＩｇＧ濃度でヒトＣ５Ｌ２、ヒトＣｈｅｍＲ２３、ヒトＦＰＲ１及びＣ３ａＲからなる群から選択されるＣ５ａＲ関連抗原に実質的に結合しない。一実施形態では、前記結合は実施例７に記載のように決定される。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は
配列番号３５若しくは４２のＶＨに対して及び配列番号３６若しくは４３のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は
ｂ）配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は
配列番号３７若しくは４４のＶＨに対して及び配列番号３８若しくは４５のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片はモノクローナル抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は組み換え抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を指し、前記抗体又は抗体断片は、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下又は０．５ｎＭ以下など、５ｎＭ以下のＥＣ_５０濃度で、配列番号１及び／又は配列番号２を含むヒトＣ５ａＲに結合する。

ある一定の実施形態では、前記ヒトＣ５ａＲはウイルス様粒子上で提示される。ある一定の実施形態では、前記ヒトＣ５ａＲは融合タンパク質として発現される。ある一定の実施形態では、前記ヒトＣ５ａＲはＧＡＧタンパク質に融合される。実施形態では、前記融合タンパク質は、表８で開示されるアミノ酸配列を含む。ある一定の実施形態では、前記結合は、実施例８に記載のようなＥＬＩＳＡにより決定される。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は
配列番号３５若しくは４２のＶＨに対して及び配列番号３６若しくは４３のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬ。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は
ｂ）配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は
配列番号３７若しくは４４のＨＣに対して及び配列番号３８若しくは４５のＬＣに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣ。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片はモノクローナル抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は組み換え抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。

機能性－Ｃ５ａＲのＣ５Ａ誘導性活性化
一般に、本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片は、ヒトＣ５ａＲとヒトＣ５ａとの間の相互作用を防ぐか又は阻害するために使用され得、それにより、Ｃ５ａＲが介在するシグナル伝達経路を防ぐか、阻害するか、中和するか、又は軽減し、及び／又はＣ５ａＲが関与する生体経路及び機序を調整する。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片に関し、前記単離抗体又は抗体断片は、Ｃ５ａＲ介在性シグナル形質導入を特異的に妨害する。

本開示のさらなる実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片は、Ｃ５ａと細胞上で発現されるＣ５ａＲとの相互作用を特異的に妨害する。またさらなる実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、Ｃ５ａＲが介在するＣ５ａ誘導性シグナル形質導入を特異的に妨害可能である。

Ｃ５ａＲ特異的な抗体の機能活性についてアッセイするための方法は、結合アッセイ、例えば酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、放射性免疫アッセイ（ＲＩＡ）、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）及び当技術分野で周知の他の方法を利用し得る（Ｈａｍｐｔｏｎ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．（１９９０；Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＡＰＳ Ｐｒｅｓｓ，Ｓｔ Ｐａｕｌ，ＭＮ）及びＭａｄｄｏｘ，Ｄ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９８３；Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５８：１２１１－１２１６）を参照）。或いは、アッセイは、インビボ又はインビトロの何れかで、Ｃ５ａＲへの結合の結果として生体応答を誘発することにおける本開示の単離抗体又は抗体断片の能力を試験し得る。このようなアッセイは、本明細書中で開示される実施例に記載される。他の適切なアッセイは当業者にとって公知である。

ある一定の実施形態では、本開示の単離抗体又は抗体断片は、ヒトＣ５ａＲ活性に拮抗する。一実施形態では、本単離抗体又は抗体断片は、ヒトＣ５ａＲ活性を中和する。一実施形態では、本開示の単離抗体又は抗体断片は、ヒトＣ５ａＲ活性を阻害する。一実施形態では、本開示の単離抗体又は抗体断片は、ヒトＣ５ａＲシグナル伝達を阻害する。一実施形態では、前記ヒトＣ５ａＲ活性又はヒトＣ５ａＲシグナル伝達は、Ｃ５ａにより誘導される。一実施形態では、前記ヒトＣ５ａＲ活性又はヒトＣ５ａＲシグナル伝達は、ヒトＣ５ａとヒトＣ５ａＲとの相互作用により誘導される。一実施形態では、前記Ｃ５ａＲ活性又はＣ５ａＲシグナル伝達は、ヒトＣ５ａのヒトＣ５ａＲへの結合により誘導される。一実施形態では、前記Ｃ５ａＲは細胞上で発現される。一実施形態では、前記ヒトＣ５ａＲ活性又はヒトＣ５ａＲシグナル伝達はインビトロ及び／又はエクスビボ及び／又はインビボで阻害される。

Ｃ５Ａ誘導性β－アレスチン動員
実施例１４に記載のようにβ－アレスチン動員アッセイにおいて、Ｃ５ａ誘導性Ｃ５ａＲ活性化を阻害するための本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片の能力を試験し、先行技術の抗体ＲｅｆＭＡＢ＃１と比較した場合に、特に高い病態生理学的なＣ５ａ濃度で、両抗体がＣ５ａＲ活性のさらにより強力なアンタゴニストであることを明らかにした。

したがって、本開示の一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片は、Ｃ５ａＲ活性を誘導するためのＣ５ａの能力を阻害する。一実施形態では、前記Ｃ５ａ誘導性Ｃ５ａＲ活性は、実施例１４に記載のようにβ－アレスチン動員アッセイにおいて決定される。一実施形態では、前記Ｃ５ａ誘導性Ｃ５ａＲ活性はインビトロで決定される。

このような一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を提供し、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒトＣ５ａＲ介在性β－アレスチン動員を誘導するためのヒトＣ５ａの能力を阻害する。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒトＣ５ａ誘導性β－アレスチン動員を阻害する。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒトＣ５ａＲ介在性β－アレスチン動員を阻害する。

本開示のさらなる実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片は、β－アレスチンとのヒトＣ５ａ誘導性ヒトＣ５ａＲ相互作用を阻害する。このような一実施形態では、β－アレスチンとの前記ヒトＣ５ａ誘導性ヒトＣ５ａＲ相互作用及び／又はそのヒトＣ５ａ誘導性β－アレスチン動員は、β－ガラクトシダーゼ酵素断片コンプリメンテーション（ｅｎｚｙｍｅ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ）を使用して測定される。一実施形態では、β－アレスチンとの前記ヒトＣ５ａ誘導性ヒトＣ５ａＲ相互作用及び／又はそのヒトＣ５ａ誘導性β－アレスチン動員は、実施例１４に記載のように決定される。このような一実施形態では、β－アレスチンとの前記ヒトＣ５ａ誘導性ヒトＣ５ａＲ相互作用及び／又はそのヒトＣ５ａ誘導性β－アレスチン動員は５０ｎＭのＩｇＧ濃度で試験される。

β－アレスチンとのヒトＣ５ａ誘導性ヒトＣ５ａＲ相互作用及び／又はヒトＣ５ａ誘導性ヒトＣ５ａＲ介在性β－動員を阻害することなど、ヒトＣ５ａ誘導性ヒトＣ５ａＲ活性を阻害するための本開示による単離抗体又は抗体断片の能力は、ヒトＣ５ａの漸増濃度及びＩｇＧの固定濃度に対する用量反応曲線を作成することにより、及び個々のＥＣ５０濃度を計算することにより決定され得る。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を提供し、前記単離抗体又は抗体断片は、前記単離抗体又は抗体断片の非存在下で決定されるＥＣ_５０濃度と比較した場合、５０ｎＭのＩｇＧ濃度で、β－アレスチン動員アッセイにおいてヒトＣ５ａに対して決定されるＥＣ_５０濃度を、少なくとも５倍以上、例えば少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１１倍、少なくとも１２倍又は少なくとも１３倍など、上昇させる。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を提供し、前記単離抗体又は抗体断片は、前記単離抗体又は抗体断片の非存在下で決定されるＥＣ_５０濃度と比較した場合、５０ｎＭのＩｇＧ濃度でβ－アレスチン動員アッセイにおいてヒトＣ５ａに対して決定されるＥＣ_５０濃度を、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１１倍、約１２倍又は約１３倍上昇させる。

一実施形態では、本開示は、ヒトＣ５ａＲに特異的な抗体又は抗体断片を提供し、前記抗体又は抗体断片の非存在下でヒトＣ５ａの濃度と比較した場合、５０ｎＭのＩｇＧ濃度でβ－アレスチン動員アッセイにおいて同じヒトＣ５ａＲ活性を誘導するためには、前記ヒトＣ５ａは、少なくとも５倍以上、例えば少なくとも６倍以上、少なくとも７倍以上、少なくとも８倍以上、少なくとも９倍以上、少なくとも１０倍以上、少なくとも１１倍以上、少なくとも１２倍以上又は少なくとも１３倍以上の濃度で存在する必要がある。

一実施形態では、前記β－アレスチン動員アッセイは実施例１４に記載のように行われる。一実施形態では、前記β－アレスチン動員アッセイはインビトロで行われる。

或いは、Ｃ５ａ誘導性Ｃ５ａＲ介在性β－アレスチン動員を阻害するための本開示によるＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片の能力は、異なるヒトＣ５ａ濃度に対して％阻害を計算することにより決定され得る。

このような一実施形態では、本開示によるＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片は、１．２ｎＭ又は１１ｎＭヒトＣ５ａの存在下及び前記抗体又は抗体断片の非存在下でのヒトＣ５ａ誘導性ヒトＣ５ａＲ介在性β－アレスチン動員のレベルと比較して、５０ｎＭのＩｇＧ濃度で、１．２ｎＭ又は１１ｎＭヒトＣ５ａの存在下において、ヒトＣ５ａ誘導性ヒトＣ５ａＲ介在性β－アレスチン動員を、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％阻害する。

このような一実施形態では、本開示によるＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片は、１００ｎＭヒトＣ５ａの存在下及び前記抗体又は抗体断片の非存在下でのヒトＣ５ａ誘導性ヒトＣ５ａＲ介在性β－アレスチン動員のレベルと比較して、５０ｎＭのＩｇＧ濃度で、及び１．２ｎＭ又は１１ｎＭヒトＣ５ａの存在下で、ヒトＣ５ａ誘導性ヒトＣ５ａＲ介在性β－アレスチン動員を、少なくとも２５％、例えば少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％又は少なくとも５０％など、阻害する。

一実施形態では、前記β－アレスチン動員アッセイは実施例１４に記載のように行う。一実施形態では、前記β－アレスチン動員アッセイはインビトロで行う。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は
配列番号３５若しくは４２のＶＨに対して及び配列番号３６若しくは４３のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は
ｂ）配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は
配列番号３７若しくは４４のＨＣに対して及び配列番号３８若しくは４５のＬＣに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片はモノクローナル抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は組み換え抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。

ＣＤ１１ｂ発現のＣ５Ａ誘導性上方制御
Ｃ５ａは、ヒト好中球及び単球の強力な活性化因子として、このような細胞において細胞表面抗原ＣＤ１１ｂの上方制御を誘導する。したがって、顆粒球及び／又は単球のＣ５ａ誘導性の活性化を阻害するための本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片の能力は、このような細胞においてＣＤ１１ｂ発現レベルを決定することにより評価され得る。

顆粒球及び／又は単球でのＣＤ１１ｂ発現を阻害するための本開示による単離抗体又は抗体断片の能力は、ＩｇＧの漸増濃度及びヒトＣ５ａの固定濃度に対する用量反応曲線を作成し、個々のＩＣ_５０濃度を計算することにより決定され得る。或いは、顆粒球及び／又は単球Ｃ５ａにおけるＣＤ１１ｂ発現を阻害するための本開示による単離抗体又は抗体断片の能力は、異なるＩｇＧ濃度に対するＣＤ１１ｂ発現の％阻害を計算することにより決定され得る。

このような一実施形態では、本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片は、１５ｎＭヒトＣ５ａの存在下において、３０ｎＭ以下、２５ｎＭ以下、２０ｎＭ以下、１５ｎＭ以下、１０ｎＭ以下又は５ｎＭ以下のＩＣ_５０濃度で、ヒト顆粒球及び／又はヒト単球におけるヒトＣ５ａ誘導性のＣＤ１１ｂ発現を阻害する。

別の実施形態では、本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片は、１５ｎＭヒトＣ５ａの存在下及び前記抗体又は抗体断片の非存在下でのＣＤ１１ｂ発現レベルと比較して、１５ｎＭヒトＣ５ａ及び６００ｎＭのＩｇＧ濃度の存在下で、ヒト顆粒球及び／又はヒト単球におけるヒトＣ５ａ誘導性のＣＤ１１ｂ発現を少なくとも７０％、少なくとも７５％、８０％、少なくとも８５％又は少なくとも９０％阻害する。

さらなる実施形態では、本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片は、１５０ｎＭヒトＣ５ａの存在下において、１５０ｎＭ以下、１２５ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、９０ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、７０ｎＭ以下、６０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下又は４０ｎＭ以下のＩＣ_５０濃度で、ヒト顆粒球におけるヒトＣ５ａ誘導性のＣＤ１１ｂ発現を阻害する。

一実施形態では、本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片は、１５０ｎＭヒトＣ５ａの存在下において４２ｎＭのＩＣ_５０濃度で、ヒト顆粒球におけるヒトＣ５ａ誘導性のＣＤ１１ｂ発現を阻害する。

さらなる実施形態では、本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片は、１５０ｎＭヒトＣ５ａの存在下及び前記抗体又は抗体断片の非存在下でのＣＤ１１ｂ発現レベルと比較して、１５０ｎＭヒトＣ５ａ及び６００ｎＭのＩｇＧ濃度の存在下で、ヒト顆粒球におけるヒトＣ５ａ誘導性ＣＤ１１ｂ発現を少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％又は少なくとも９０％阻害する。

一実施形態では、本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片は、１５０ｎＭヒトＣ５ａの存在下及び前記抗体又は抗体断片の非存在下でのＣＤ１１ｂ発現レベルと比較して、１５０ｎＭヒトＣ５ａ及び１００ｎＭのＩｇＧ濃度の存在下で、ヒト顆粒球におけるＣ５ａ誘導性ＣＤ１１ｂ発現を少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％又は少なくとも６５％阻害する。

一実施形態では、ＣＤ１１ｂ発現の前記決定は実施例１５に記載のように行う。一実施形態では、ＣＤ１１ｂ発現の前記決定はインビトロ及び／又はエクスビボで行う。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は
配列番号３５若しくは４２のＶＨに対して及び配列番号３６若しくは４３のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は
ｂ）配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は
配列番号３７若しくは４４のＨＣに対して及び配列番号３８若しくは４５のＬＣに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片はモノクローナル抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は組み換え抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。

さらに、長時間にわたり、ヒトＣ５ａ誘導性ＣＤ１１ｂ発現における本開示による単離抗体又は抗体断片の阻害活性をさらに分析したが、これはヒトＣ５ａの添加前に様々な長さの時間にわたり（例えば３００分対２０分）全血中に存在する顆粒球及び／又は単球とともに抗体を予備温置したことを意味する。驚くべきことに、本実験から、特に先行技術の抗体ＲｅｆＭＡＢ＃１と比較した場合、本開示による単離抗体は、より長時間、例えば長時間の温置時間にわたりＣ５ａＲ活性のさらにより強力なアンタゴニストであることが明らかになった。

したがって、長時間にわたる顆粒球及び／又は単球においてヒトＣ５ａ誘導性ＣＤ１１ｂ発現を阻害するための本開示による単離抗体又は抗体断片の能力は、ＩｇＧの漸増濃度及びヒトＣ５ａの固定濃度に対して用量反応曲線を作成することにより、及び異なる温置時間にわたり前記単離抗体を前記顆粒球及び／又は単球と温置した後、個々のＥＣ_５０値を計算することにより、決定され得る。

図６Ａ及びＣで示されるように、本開示の単離抗体又は抗体断片は、温置２０分後に決定される用量反応曲線と比較した場合、温置３００分後に決定すると、より低いＩｇＧ濃度への、決定される用量反応曲線の明らかなシフトを示した。興味深いことに、ＲｅｆＭＡＢ＃１は、経時的な効力上昇がなかったことを明らかにした（図６Ｂ及びＤ参照）。

したがって、一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、前記細胞との長い温置時間の後にヒト顆粒球及び／又はヒト単球におけるＣ５ａ誘導性のＣＤ１１ｂ発現を阻害することにおいてより強力である。

このような一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、２０分の温置時間後に決定されるＩＣ_５０濃度と比較した場合、５０分、１００分、１５０分、２００分、２５０分又は３００分の長い温置時間後に決定すると、少なくとも２分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１又は少なくとも６分の１に低下したＩＣ_５０濃度で、ヒト顆粒球及び／又はヒト単球におけるヒトＣ５ａ誘導性ＣＤ１１ｂ発現を阻害する。

一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、２０分の温置時間後に決定されるＩＣ_５０濃度と比較した場合、３００分の長い温置時間後に決定すると、約５分の１に低下したＩＣ_５０濃度で、ヒト顆粒球及び／又はヒト単球におけるヒトＣ５ａ誘導性ＣＤ１１ｂ発現を阻害する。

一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、ＲｅｆＭＡＢ＃１の対応するＩＣ_５０濃度と比較した場合、３００分の長い温置時間後に決定すると、少なくとも３分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも１５分の１又は少なくとも１９分の１に低下したＩＣ_５０濃度で、ヒト顆粒球及び／又はヒト単球におけるヒトＣ５ａ誘導性ＣＤ１１ｂ発現を阻害する。

一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、前記細胞との３００分の長い温置時間後に、３ｎＭ以下、２．５ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１．５ｎＭ以下又は１ｎＭ以下のＩＣ_５０濃度で、ヒト顆粒球及び／又はヒト単球におけるヒトＣ５ａ誘導性ＣＤ１１ｂ発現を阻害する。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は
配列番号３５若しくは４２のＶＨに対して及び配列番号３６若しくは４３のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は
ｂ）配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は
配列番号３７若しくは４４のＨＣに対して及び配列番号３８若しくは４５のＬＣに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片はモノクローナル抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は組み換え抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。

好中球のＣ５Ａ誘導性遊走
さらなるアッセイにおいて、ヒト好中球のヒトＣ５ａ誘導性遊走を阻害するための本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片の能力を評価し、インビトロでＭＡＢ＃１が効率的にＣ５誘導性好中球遊走を阻害したことが明らかになった。

したがって、本開示の一実施形態では、本開示のヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、インビトロでヒト好中球のヒトＣ５ａ誘導性遊走を阻害する。

さらなる実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、インビトロで、１０ｎＭヒトＣ５ａの存在下及び前記単離抗体又は抗体断片の非存在下での遊走レベルと比較して、ヒト好中球のヒトＣ５ａ誘導性遊走を少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５又は少なくとも８０％阻害する。

一実施形態では、ヒト好中球の前記遊走は１５分後、２５分後及び／又は３５分後に決定される。ある一定の実施形態では、１００ｎＭ及び／又は６００ｎＭのＩｇＧ濃度で本開示による前記単離抗体又は抗体断片を試験する。

一実施形態では、本開示の前記単離抗体又は抗体断片は、１０ｎＭヒトＣ５ａの存在下及び前記抗体又は抗体断片の非存在下での３５分後の遊走レベルと比較して、３５分後に１００ｎＭのＩｇＧ濃度でヒト好中球のヒトＣ５ａ誘導性遊走を少なくとも２５％阻害する。

一実施形態では、本開示の前記単離抗体又は抗体断片は、１０ｎＭヒトＣ５ａの存在下及び前記抗体又は抗体断片の非存在下での２５分後の遊走レベルと比較して、２５分後に１００ｎＭ及び／又は６００ｎＭのＩｇＧ濃度でヒト好中球のヒトＣ５ａ誘導性遊走を少なくとも６０％阻害する。

一実施形態では、本開示の前記単離抗体又は抗体断片は、１０ｎＭヒトＣ５ａの存在下及び前記抗体の非存在下での３５分後の遊走レベルと比較して、３５分後に６００ｎＭのＩｇＧ濃度でヒト好中球のヒトＣ５ａ誘導性遊走を少なくとも４０％阻害する。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は
配列番号３５若しくは４２のＶＨに対して及び配列番号３６若しくは４３のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は
ｂ）配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は
配列番号３７若しくは４４のＨＣに対して及び配列番号３８若しくは４５のＬＣに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片はモノクローナル抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は組み換え抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。

エフェクター機能
免疫グロブリンのＦｃ領域は、一般に、血清半減期の延長などの抗体の好ましい薬物動態特性及び、細胞上で発現されるＦｃ受容体への結合を介したエフェクター機能を誘導するための能力を付与する。一方で、Ｆｃ受容体への結合の結果、ある種の細胞表面受容体の望ましくない活性化もまた起こり得、これは、全身投与時の望まれないサイトカイン放出及び重篤な副作用につながる。

したがって、ある種の治療状況に対して、エフェクター機能を誘導させるための抗体の能力を低下又は消失させるために、Ｆｃ受容体の１つ以上若しくは全てへの、野生型ＩｇＧ Ｆｃ領域などの抗体の野生型Ｆｃ領域の正常な結合及び／又はＣ１ｑなどの補体成分への結合を減少又は消失させることが所望される。例えば、Ｆｃγ受容体、例えばＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａなどの１つ以上又は全てに対する抗体のＦｃ領域の結合を減少又は消失させることが望まれ得る。

エフェクター機能は、次のものの１つ以上を含み得るが限定されない：補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、サイトカイン分泌、抗原提示細胞による免疫複合体介在性抗原取り込み、ＮＫ細胞への結合、マクロファージへの結合、単球への結合、多形核細胞への結合、アポトーシスを含む直接的シグナル伝達、標的結合抗体の架橋、樹状細胞成熟又はＴ細胞プライミング。

ＩｇＧ１ Ｆｃ領域など、より具体的にはヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域などの野生型Ｆｃ領域を突然変異させ、その結果、前記野生型Ｆｃ領域の変異又は改変Ｆｃ領域、例えば変異ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域が得られることによって、Ｆｃ受容体に対する及び／又はＣ１ｑに対するＦｃ領域の結合の減少又は消失が一般的に達成される。結合を低減させる置換は有用であり得る。Ｆｃ受容体へのＦｃ領域の結合特性を減少又は消失させるために、非保存的アミノ酸置換、即ちあるアミノ酸を異なる構造及び／又は化学特性を有する別のアミノ酸に置換すること、は好ましい。

したがって、一実施形態では、本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片は、野生型Ｆｃ領域と比較した場合、Ｆｃ受容体に対する、及び／又はＣ１ｑに対する結合が減少又は消失した変異体Ｆｃ領域を含む。このような一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、エフェクター機能を誘導するための抗体の能力を低下又は消失させる変異Ｆｃ領域を含む。さらなる実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、実質的にエフェクター機能を誘導しない。

ある一定の実施形態では、エフェクター機能は、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰからなる群から選択される１つ以上である。一実施形態では、エフェクター機能はＡＤＣＣである。一実施形態では、エフェクター機能はＣＤＣである。一実施形態では、エフェクター機能はＡＤＣＰである。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ及び／又はＡＤＣＰを実質的に誘導しない。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、インビトロでＡＤＣＣ又はＡＤＣＰを誘導しない。

一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片の変異Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域と比較した場合、１つ以上のＦｃ受容体への及び／又はＣ１ｑへの変異Ｆｃ領域の結合を減少又は消失させる１つ以上のアミノ酸置換を含む。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片の変異Ｆｃ領域は、野生型Ｆｃ領域と比較した場合、エフェクター機能を誘導するための抗体の能力を低下又は消失させる１つ以上のアミノ酸置換を含む。

特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、野生型Ｆｃ領域と比較した場合、１つ以上のＦｃ受容体に対する及び／又はＣ１ｑに対する変異Ｆｃ領域の結合親和性を少なくとも２分の１、少なくとも５分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも２０分の１又はさらには少なくとも５０分の１に低下させ得る。代替的な実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換は、野生型Ｆｃ領域と比較した場合、エフェクター機能を誘導するための本開示による単離抗体又は抗体断片の能力を少なくとも２分の１、少なくとも５分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも２０分の１又はさらに少なくとも５０分の１に低下させ得る。

一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片の変異Ｆｃ領域は、１つ以上のＦｃ受容体及び／又はＣ１ｑに実質的に結合しない。一実施形態では、本開示による抗体の変異Ｆｃ領域は、エフェクター機能を誘導するための前記抗体の能力を実質的に消失させる。一実施形態では、本開示による抗体又は抗体断片は、エフェクター機能を実質的に誘導しない。一実施形態では、前記エフェクト機能は、ＡＤＣＣ及び／又はＡＤＣＰ及び／又はＣＤＣである。一実施形態では、本開示による抗体又は抗体断片は、エフェクター機能を実質的に誘導せず、これは、前記抗体の非存在下で測定したときに、誘導されるエフェクター機能のレベルがバックグラウンドを顕著に上回らないことを意味する。

一実施形態では、Ｆｃ受容体はヒトＦｃ受容体である。一実施形態では、Ｆｃ受容体はＦｃγ受容体である。一実施形態では、Ｆｃ受容体はヒトＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ及び／又はＦｃγＲＩＩｂである。

一実施形態では、エフェクター機能は、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰの群から選択される１つ以上である。特定の実施形態では、エフェクター機能はＡＤＣＣ、ＣＤＣ及びＡＤＣＰである。より特定の実施形態では、エフェクター機能はＡＤＣＣ及びＡＤＣＰである。

一実施形態では、野生型Ｆｃ領域はＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。一実施形態では、野生型Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。一実施形態では、野生型Ｆｃ領域はヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。一実施形態では、野生型Ｆｃ領域は、
ＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１）のアミノ酸配列を含むヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域である。

一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、１つ以上のアミノ酸置換を含む変異ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。一実施形態では、その１つ以上のアミノ酸置換は、野生型Ｆｃ領域と比較した場合、変異Ｆｃ領域のＦｃ受容体への及び／又はＣ１ｑへの結合を減少又は消失させる、及び／又はエフェクター機能を誘導するための前記抗体の能力を低下させる。

一実施形態では、本開示による抗体又は抗体断片の変異ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、ＥＵインデックスに従い付番される２３４、２３５、２３７、３３０及び３３１の群から選択される１つ以上の位置でアミノ酸置換を含む。

一実施形態では、前記変異ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、ＥＵインデックスに従い付番されるＬ２３４、Ｌ２３５及びＧ２３７の群から選択される１つ以上の位置でアミノ酸置換を含む。

一実施形態では、変異ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、ＥＵインデックスに従い付番されるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ Ｇ２３７Ａの群から選択される１つ以上の位置でアミノ酸置換を含む。

一実施形態では、変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、ＥＵインデックスに従い付番されるアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ｅを含む。

一実施形態では、変異ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、ＥＵインデックスに従い付番されるアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ及びＧ２３７Ａを含む。

一実施形態では、変異ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、ＥＵインデックスに従い付番されるＡ３３０及びＰ３３１の群から選択される１つ以上の位置でアミノ酸置換を含む。

一実施形態では、変異ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、ＥＵインデックスに従い付番されるＡ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの群から選択される１つ以上の位置でアミノ酸置換を含む。

一実施形態では、変異ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、ＥＵインデックスに従い付番されるアミノ酸置換Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓを含む。

一実施形態では、変異体ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、ＥＵインデックスに従い付番されるアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓを含む。

一実施形態では、本開示による抗体又は抗体断片は、変異ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含み、これは、配列番号１１の配列を含む野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、１つ以上のＦｃ受容体へ及び／又はＣ１ｑへの変異Ｆｃ領域の結合親和性を低下若しくは消失させる、及び／又は前記抗体のエフェクター機能誘導能を低下させる、１つ以上のアミノ酸置換を含み、ここでこの１つ以上のアミノ酸置換は、ＥＵインデックスに従い付番されるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓである。

一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片はヒトＩｇＧ１クラスである。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、変異ヒトＩｇＧ１クラスである。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、インビトロでエフェクター機能を実質的に誘導しない。一実施形態では、変異ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域は、１つ以上のＦｃ受容体及び／又はＣ１ｑに実質的に結合しない。このような一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、ＥＵインデックスに従い付番されるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの群から選択されるアミノ酸置換を含む。

一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、ＥＵインデックスに従い付番されるアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓを含むヒトＩｇＧ１クラスである。

一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、ＥＵインデックスに従い付番されるアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓを含む。

一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む野生型ＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、ＥＵインデックスに従い付番されるアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓを含む。

このような一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、ＥＵインデックスに従い付番されるアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓを含み、インビトロでエフェクター機能を実質的に誘導しない。一実施形態では、エフェクター機能は、ＣＤＣ、ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰの群から選択される１つ以上である。

このような一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、配列番号１１のアミノ酸配列を含む野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、ＥＵインデックスに従い付番されるアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓを含み、インビトロで１つ以上のＦｃ受容体及び／又はＣ１ｑに実質的に結合しない。

一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片はヒトＩｇＧ１クラスである。一実施形態では、本開示に対する単離抗体又は抗体断片は、インビトロでエフェクター機能を実質的に誘導しない。一実施形態では、本開示による単離抗体又は抗体断片は、ＥＵインデックスに従い付番されるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は
配列番号３５若しくは４２のＶＨに対して及び配列番号３６若しくは４３のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は
ｂ）配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は
配列番号３７若しくは４４のＨＣに対して及び配列番号３８若しくは４５のＬＣに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片はモノクローナル抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は組み換え抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。

例えば、ＥＬＩＳＡによって、又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）などの標準的な機器を使用した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって、そのＦｃ領域を介したＦｃ受容体に対する抗体の結合を容易に決定し得、Ｆｃ受容体は組み換え発現により得られ得る。或いは、Ｆｃ領域の結合親和性は、ＦｃγＩＩＩａ受容体を発現するＮＫ細胞など、特定のＦｃ受容体を発現することが知られている細胞株を使用して評価され得る。抗体のエフェクター機能は、当技術分野で公知の方法により測定され得る。関心のある分子のＡＤＣＣ活性を評価するための適切なインビトロアッセイは、例えば国際公開第２０１２１３０８３１号パンフレットに記載されている。このようなアッセイに対する有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。或いは又はさらに、例えばＣｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９５，６５２－６５６（１９９８）で開示されるものなどの動物モデルにおいて、関心のある分子のＡＤＣＣ活性をインビボで評価し得る。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行い得る（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２，１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１，１０４５－１０５２（２００３）；及びＣｒａｇｇ ａｎｄ Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３，２７３８－２７４３（２００４）を参照）。Ｃ１ｑ結合アッセイ（ＥＬＩＳＡなど）は抗体がＣ１ｑに結合可能であり、ゆえにＣＤＣ活性を有するか否かを決定するために行われ得る（例えば国際公開第２００６／０２９８７９号パンフレットを参照）。Ｆｃ受容体への結合を評価するための又は免疫エフェクター機能を評価するためのインビトロ法は本明細書中の実施例１０～１３に記載されている。

融合タンパク質
本開示による単離抗体又は抗体断片は、１つ以上の他のアミノ酸残基、ポリペプチド又は部分に融合させられてもよいし又は融合されなくてもよい。このような融合タンパク質は、遺伝学的又は化学的アプローチを含め、適切に調製され得る。前記連結される部分は、分泌又はリーダー配列、検出、発現、分離若しくは精製を促進する配列、又は例えば組み換え産生中にタンパク質安定性を向上させる配列を含有し得る。可能性のある部分の非限定例としては、ベータ－ガラクトシダーゼ、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ、ルシフェラーゼ、Ｔ７ポリメラーゼ断片、分泌シグナルペプチド、抗体若しくは抗体断片、毒素、レポーター酵素、ポリヒスチジンタグのような金属イオンに結合可能である部分、検出及び／又は精製に適切なタグ、ホモ又はヘテロ会合ドメイン、タンパク質の溶解度を向上させる部分又は酵素切断部位を含む部分が挙げられる。

したがって、本開示による単離抗体又は抗体断片は、他の標的又は関心のある標的タンパク質への結合のための１つ以上の部分を任意選択的に含有し得る。このようなさらなる部分は、抗体にさらなる機能性を提供してもよいし又は提供しなくてもよく、本開示による単離抗体又は抗体断片の特性を修飾してもよいし又は修飾しなくてもよいことが明らかとなるはずである。診断用途

一実施形態では、本開示は、疾患診断のための本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片の使用を提供する。一実施形態では、本開示は、Ｃ５ａＲ、特にヒトＣ５ａＲ及び／又はカニクイザルＣ５ａＲの検出のための、本開示による抗体又は抗体断片の使用を提供する。一実施形態では、本開示は、対象又は試料を本開示のヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を接触させる段階を含む、前記対象又は試料中のＣ５ａＲを検出するための方法を提供する。一実施形態では、本開示は、対象又は試料を本開示による単離抗体又は抗体断片と接触させる段階を含む、前記対象において疾患を診断するための方法を提供する。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は
配列番号３５若しくは４２のＶＨに対して及び配列番号３６若しくは４３のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は
ｂ）配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は
配列番号３７若しくは４４のＨＣに対して及び配列番号３８若しくは４５のＬＣに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片はモノクローナル抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は組み換え抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。

治療方法
本開示による単離抗体又は抗体断片は、治療方法において使用され得る。本開示による抗体又は抗体断片は、疾患、例えば癌、自己免疫疾患又は炎症性疾患などの処置のために使用され得る。

一実施形態では、本開示は、疾患の処置のための方法を提供する。

一実施形態では、本開示は、疾患の処置のための本開示による単離抗体又は抗体断片を提供する。一実施形態では、本開示は、疾患の処置での使用のための本開示による単離抗体又は抗体断片を提供する。一実施形態では、本開示は、疾患の処置を必要とする対象における疾患の処置での使用のための本開示による単離抗体又は抗体断片を提供する。

一実施形態では、本開示は、薬剤の製造のための本開示による単離抗体又は抗体断片の使用を提供する。一実施形態では、本開示は、薬剤としての使用のための本開示による単離抗体又は抗体断片を提供する。一実施形態では、本開示は、医薬品での使用のための本開示による単離抗体又は抗体断片を提供する。一実施形態では、本開示は、処置を必要とする対象の処置のための薬剤としての使用のための本開示による単離抗体又は抗体断片を提供する。

一実施形態では、本疾患は、Ｃ５ａＲ、特にヒトＣ５ａＲの望ましくない存在と関連する。一実施形態では、本疾患は、Ｃ５ａ、特にヒトＣ５ａの望ましくない存在と関連する。

一実施形態では、処置しようとする疾患は増殖性疾患である。特定の実施形態では、本疾患は癌である。癌の非限定例としては、膀胱癌、脳の癌、頭頸部癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、卵巣癌、子宮癌、子宮頸癌、子宮内膜癌、食道癌、結腸癌、結直腸癌、直腸癌、胃癌、前立腺癌、血液癌、肉腫、皮膚癌、扁平上皮癌、骨癌、メラノーマ、腎細胞癌及び腎臓癌が挙げられる。

一実施形態では、処置しようとする疾患は自己免疫又は炎症性疾患である。自己免疫又は炎症性疾患の非限定例としては、関節リウマチ（ＲＡ）、乾癬、乾癬性関節炎、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、狼瘡腎炎、Ｉ型糖尿病、グレーブズ病、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病（ＣＤ）、潰瘍性大腸炎（ＵＣ）、過敏性腸症候群、多発性硬化症（ＭＳ）、自己免疫心筋炎、川崎病、冠動脈疾患、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、間質性肺疾患、自己免疫性甲状腺炎、強皮症、全身性硬化症、変形性関節症、アトピー性皮膚炎、白斑、移植片対宿主病、シェーグレン症候群、自己免疫腎炎、グッドパスチャー症候群、慢性炎症脱髄性多発ニューロパチー、ＡＮＣＡ関連脈管炎、ブドウ膜炎、強皮症、水疱性類天疱瘡、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン舞踏病、嚢胞性線維症、痛風、加齢性黄斑変性、アレルギー、喘息、抗リン脂質抗体症候群（ＡＰＳ）、アテローム性動脈硬化症、Ｃ３糸球体症及びＩｇＡ腎症、虚血／再かん流傷害、腹膜炎、敗血症及び急性又は慢性の何れかの炎症の結果である他の自己免疫疾患が挙げられる。

一実施形態では、本開示は、治療的有効量の本開示による抗体又は抗体断片を対象に投与することを含む、疾患を有する対象を処置する方法での使用のための、本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な単離抗体又は抗体断片を提供する。

一実施形態では、治療的有効量の少なくとも１つのさらなる治療剤を対象に投与することをさらに含む。処置を必要とする対象は、一般的には哺乳動物、より具体的にはヒトである。治療方法での使用のために、本開示による単離抗体又は抗体断片は、適正な医療行為と適合する方法で、処方され、服用され、及び投与される。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は
配列番号３５若しくは４２のＶＨに対して及び配列番号３６若しくは４３のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は
ｂ）配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は
配列番号３７若しくは４４のＨＣに対して及び配列番号３８若しくは４５のＬＣに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片はモノクローナル抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は組み換え抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。

医薬組成物
一実施形態では、本開示は、本開示による単離抗体又は抗体断片と、薬学的に許容可能な担体又は賦形剤と、を含む医薬組成物を提供する。

本医薬組成物は、少なくとも１つの他の薬学的に活性のある化合物をさらに含み得る。本開示による医薬組成物は、Ｃ５ａＲ、特にヒトＣ５ａＲの望ましくない存在と関連する疾患の診断、予防及び／又は処置で使用され得る。特に、本開示は、哺乳動物、より具体的にはヒトでの予防、治療及び／又は診断用途に適切である本開示による抗体又は抗体断片を含む医薬組成物を提供する。

一般に、本開示による抗体又は抗体断片は、少なくとも１つの本開示による抗体又は抗体断片と、少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体又は賦形剤と、任意選択的に、１つ以上のさらなる薬学的に活性のある化合物と、を含む医薬組成物として処方され得る。このような処方物は、経口、非経口、局所投与に対して、又は吸入による投与に対して適切であり得る。したがって、少なくとも１つの本開示による抗体又は抗体断片を含む医薬組成物は、静脈内又は筋肉内又は皮下など、非経口的に投与され得る。或いは、本発明の抗体は、経口で、又は局所などの非経口経路を介して投与され得る。好ましい実施形態では、本開示による抗体又は抗体断片を含む医薬組成物は、静脈内又は皮下投与される。

特に、本開示による抗体又は抗体断片は、関心のある標的抗原が関与する疾患の予防及び／又は処置のために使用されるか又は使用され得る、１つ以上の薬学的に活性のある化合物と組み合わせて使用され得、その結果として、相乗的効果が得られてもよいし、又は得られなくてもよい。このような化合物、並びにそれらを投与するための経路、方法及び製剤処方物又は組成物の例は臨床家にとって明白である。

一実施形態では、本開示は、Ｃ５ａＲの望ましくない存在が関連する疾患の予防及び／又は処置での使用のための本開示による抗体又は抗体断片を含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、本開示は、薬剤としての使用のための本開示による抗体又は抗体断片を含む医薬組成物を提供する。一実施形態では、本開示は、自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患及び／又は癌の予防及び／又は処置での使用のための本開示による抗体又は抗体断片を含む医薬組成物を提供する。

一実施形態では、本開示は、本開示による抗体又は抗体断片を含む医薬組成物を使用した、自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患及び／又は癌の処置を必要とする対象における、自己免疫疾患及び／又は炎症性疾患及び／又は癌の処置のための方法を提供する。

インビボで投与するために適切な形態で本開示による抗体又は抗体断片を産生する方法がさらに提供され、この方法は、（ａ）本開示による方法により抗体又は抗体断片を得ること及び（ｂ）少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体又は賦形剤とともに前記抗体又は抗体断片を処方することを含み、それにより抗体又は抗体断片の調製物がインビボでの投与用に処方されることを含む。本開示による医薬組成物は、薬学的に許容可能な担体又は賦形剤中で溶解される１つ以上の本開示による抗体又は抗体断片の治療的有効量を含む。

一実施形態では、本開示によるヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号２８のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｂ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号３１のＨＣＤＲ２領域、配列番号２９のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｃ）配列番号２７のＨＣＤＲ１領域、配列番号３９のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域、又は
ｄ）配列番号３０のＨＣＤＲ１領域、配列番号４１のＨＣＤＲ２領域、配列番号４０のＨＣＤＲ３領域、配列番号３２のＬＣＤＲ１領域、配列番号３３のＬＣＤＲ２領域及び配列番号３４のＬＣＤＲ３領域
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３５のＶＨ及び配列番号３６のＶＬ、又は
ｂ）配列番号４２のＶＨ及び配列番号４３のＶＬ、又は
配列番号３５若しくは４２のＶＨに対して及び配列番号３６若しくは４３のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＶＨ及びＶＬ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片は、
ａ）配列番号３７のＨＣ及び配列番号３８のＬＣ、又は
ｂ）配列番号４４のＨＣ及び配列番号４５のＬＣ、又は
配列番号３７若しくは４４のＶＨに対して及び配列番号３８若しくは４５のＶＬに対して少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％若しくは少なくとも９５％同一性を有するＨＣ及びＬＣ
を含む。

一実施形態では、ヒトＣ５ａＲに特異的な前記単離抗体又は抗体断片はモノクローナル抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は組み換え抗体又は抗体断片である。一実施形態では、前記単離抗体又は抗体断片は、ヒト、ヒト化又はキメラ抗体又は抗体断片である。

抗体配列

実施例１：抗原作製及び品質管理
公開されているソース（例えばＵｎｉｐｒｏｔ）から様々な種由来のＣ５ａＲ及びＣ５ａＲ関連ＧＰＣＲのアミノ酸配列を検索し、検証し、社内で又は外部業者が作製した。

合成ペプチド
最初のパニング及びスクリーニング用の抗原として、ヒトＣ５ａＲのＮ末端細胞外領域をカバーする直鎖状ペプチドを使用した。このペプチドは、ビオチンタグとともに化学的に合成され（ＪＰＴ）、ＲＰ－ＨＰＬＣ精製され、凍結乾燥物質として送達された。凍結乾燥ペプチドを－８０℃で保管した。或いは、このペプチドをトランスフェリン又はウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と複合化した。

後の結合試験のための抗原として、ヒト及びカニクイザルＣ５ａＲのＮ末端領域を含む直鎖状ペプチドを使用した。本ペプチドは、ビオチンタグとともに化学的に合成され（Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔ）、ＲＰ－ＨＰＬＣ精製され、凍結乾燥物質として送達された。凍結乾燥ペプチドを－８０℃で保管した。再構成のためにペプチドを所望の体積のＰＢＳ中で溶解し、－８０℃で保管した。

組み換えタンパク質
Ｃ１ｑタンパク質
プールされた正常ヒト血漿から精製されるＣ１ｑタンパク質はＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（Ｃａｔａｌｏｇ＃Ａ０９９）から購入した。

ヒトＣ５ａタンパク質
組み換えヒトＣ５ａは、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＣＡＴ＃：２０３７－Ｃ５）から購入したか、又は社内で作製したかの何れかであった。

社内作製産生に対して、Ｎ末端ｏｍｐＡシグナル配列とそれに続くマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）をコードする配列、ＦＸａ切断部位及びＧＳリンカーとともに、ヒトＣ５ａ（Ｕｎｉｐｒｏｔ：Ｐ０１０３１｜Ｌｙｓ６７９－Ａｒｇ７５１）のアミノ酸をコードするＤＮＡをｐＥＴ２１ａ発現ベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ）にインフレームでクローニングした。

Ｎ末端タグ付加マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）融合タンパク質として、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＢＬ２１（ＤＥ３）細胞（Ｎｏｖａｇｅｎ）中でヒトＣ５ａ（ｈＣ５ａ）を発現させた。ＩＰＴＧの付加によりタンパク質発現を誘導し、培養物を２０～２３時間、さらに培養した。遠心分離により細胞を回収し、溶解緩衝液（ＰＢＳ緩衝液＋２ｍＭ ＭｇＣｌ_２、２０Ｕ／ｍｌ Ｂｅｎｚｏｎａｓｅ（Ｒｏｃｈｅ）及び１錠／５０ｍＬ ｃＯｍｐｌｅｔｅ、ＥＤＴＡ不含プロテアーゼ阻害剤カクテル錠剤（Ｒｏｃｈｅ））中でペレットを再懸濁した。化学的溶解又は高圧ホモジナイズ処理の何れかにより細胞を破壊した。得られた懸濁液を遠心分離し、さらなる精製段階のために上清を滅菌ろ過した。

ＭＢＰ－Ｔｒａｐカラム（ＧＥ－Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してデキストリン－セファロースアフィニティークロマトグラフィーによってｈＣ５ａ－ＭＢＰ－融合タンパク質を精製し、任意選択的にＨｉ－Ｔｒａｐ ＳＰ ＦＦカラム（ＧＥ ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して陽イオン交換クロマトグラフィーによってポリッシュした。ＰＤ１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって精製ＭＢＰ融合物をＦＸａ－消化緩衝液（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ ｐＨ８．０；１００ｍＭ ＮａＣｌ；２ｍＭ ＣａＣｌ２）へと緩衝液交換した。第Ｘａ因子（１：１００（ｗ／ｗ））の添加によりマルトース結合タンパク質からｈＣ５ａタンパク質を放出させ、室温にて回転式振盪器においてＯ／Ｎで温置した。Ｈｉ－Ｔｒａｐ ＳＰ ＦＦカラム（ＧＥ ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、陽イオン交換クロマトグラフィーによって、放出ｈＣ５ａを精製した。ＡＫＴＡ Ａｖａｎｔ ２５分取クロマトグラフィーシステムを使用して、全てのアフィニティークロマトグラフィー段階を行った。

ＰＤ１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、ＰＢＳへの緩衝液交換を行った。試料を滅菌ろ過し、ＵＶ－分光光度法によってｈＣ５ａ濃度を決定した。変性、還元又は非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ及び質量分析において試料の純度及び完全性を分析した。

Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）及びＦｃＲｎ受容体
ヒトＦｃγＲＩ、ヒトＦｃγＲＩＩａ（１３１Ｈ）、ヒトＦｃγＲＩＩａ（１３１Ｒ）、ヒトＦｃγＲＩＩｂ、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ（１５８Ｆ）及びヒトＦｃγＲＩＩＩａ（１５８Ｖ）の細胞外領域をコードするＤＮＡをインフレームでＮ末端Ｖκリーダー配列及びＣ末端６ｘＨｉｓ－タグとともに、ｐｃＤＮＡ３．１（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）に基づく修飾発現ベクターであるｐＭＡＸ発現ベクターへとクローニングした。

ヒト、カニクイザル、マウス又はラットＦｃＲｎ大サブユニットｐ５１の細胞外領域をコードするＤＮＡを、インフレームでＮ末端Ｖκリーダー配列及びＣ末端ＡＶＩ－６ｘＨｉｓ－タグとともに、ｐｃＤＮＡ３．１（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）に基づく修飾発現ベクターであるｐＭＡＸ発現ベクターへとクローニングした。さらに、ヒト、カニクイザル、マウス又はラットＦｃＲｎ小サブユニットｐ１４（＝ベータ－２ミクログロブリンと同一）タンパク質をコードするＤＮＡを第２のオープンリーディングフレームに、インフレームでＮ末端Ｖｋリーダー配列とともにクローニングした。産生される受容体のアミノ酸配列を表６及び７でまとめる。

ＨＥＫ２９３－６Ｅ細胞株は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｏｕｎｃｉｌ ｏｆ Ｃａｎａｄａ（ＮＲＣ）により開発された。加湿ＣＯ２－インキュベーターにおいて３７℃及び６％ＣＯ_２でＦｒｅｅｓｔｙｌｅ Ｆ１７培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で細胞を維持した。ＨＫＢ１１（親クローン：米国特許第６，１３６５９９号明細書。Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｓｃｉ．２００２；９：６３１－６３８）は、ＨＥＫ２９３ヒト胚腎臓及び２Ｂ８バーキットリンパ腫細胞の融合から得られるヒトハイブリッド細胞株である。加湿ＣＯ_２インキュベーターにおいて３７℃及び６％ＣＯ_２で１％ＦＣＳを含有するＭＡＣ１．０培地中でＨＫＢ１１＃５２細胞を維持した。

製造者の説明書に従い、ＨＫＢ１１＃５２又はＨＥＫ２９３－６Ｅ細胞に対して、市販の遺伝子移入試薬とともに播種してから１日後に一過性遺伝子移入を行った。細胞を３日間培養し、馴化した細胞培養上清を遠心分離とそれに続く滅菌ろ過（０．２２μｍ）により回収した。細胞の遺伝子移入とそれに続く８００μｇ／ｍＬ Ｇ４１８（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）での選択によって、安定的に遺伝子移入されたＨＫＢ１１＃５２プールを作製した。播種から４日後に安定プールからの抗原の発現を行った。遠心分離によって馴化細胞培養上清を回収し、続いて滅菌ろ過した（０．２２μｍ）。

Ｐｒｏｔｉｎｏ Ｎｉ－ＮＴＡカラム（Ｍａｃｈｅｒｅｙ－Ｎａｇｅｌ）を使用して、ＩＭＡＣによって、個々のタンパク質を精製した。ＡＫＴＡクロマトグラフィーシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して全てのクロマトグラフィー段階を行った。ＰＤ１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、試料に対してＤ－ＰＢＳへと緩衝液交換を行った。一部の例で、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して、Ｄ－ＰＢＳ中でポリッシュする分取ＳＥＣ段階を行った。

ＢｉｒＡ Ｋｉｔ（Ａｖｉｄｉｔｙ）を使用して、インビトロビオチン化によって、ＦｃＲｎヘテロ二量体のビオチン化を行い、続いてＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して分取ＳＥＣを行った。

変性、還元又は非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ストレプトアビジン－シフトアッセイ、ＨＰ－ＳＥＣ及びＤＬＳによって、試料の品質を分析した。

ウイルス様粒子（ＶＬＰ）
国際公開第２０１５／１９３１４３号パンフレットに記載のように、ヒトＣ５ａＲ（Ｄ／Ｋ変異体又はＮ／Ｎ変異体）並びにマウスＣ５ａＲの２つの天然変異体の何れか１つを安定して発現するＶＬＰを社内で作製した。標準的技術を使用して、全てのクローニング実験を行った。哺乳動物細胞での発現用の適切な２つのベクター系において、関心のある抗原をクローニングした。この系において、１つのベクターはＧＡＧを発現し、他のベクターはＧＰＣＲ－ＧＡＧ融合タンパク質を発現する。これらのベクターにおける発現はＣＭＶプロモーターの制御下にある。その後、宿主細胞に対してこの２つのベクターを用いて遺伝子移入を行った。作製されるコンストラクトは融合タンパク質として作製され、関心のある抗原がＧＡＧ－タンパク質にＮ末端で融合されている（ＨＶ１Ｂ１（Ｕｎｉ－Ｐｒｏｔ ＩＤ：Ｐ０３３４７））。懸濁培養中で標準的な条件下において、タンパク質の発現及びＶＬＰの産生を行った。本実験で使用される宿主細胞はＨＫＢ１１細胞（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ－１２５６８）及びＨＥＫ細胞（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）であった。遺伝子移入から３日後、ＶＬＰを含有する上清を回収し、標準的手順（沈殿及びイオン交換クロマトグラフィーを含む）を使用して精製した。単離したタンパク質をＳＤＳ－ＰＡＧＥクロマトグラフィーに供した。市販の抗ＧＡＧ抗体又は市販の抗Ｃ５ａＲ抗体を用いて上清を調べ、ＧＡＧ及びＧＰＣＲ－ＧＡＧ融合タンパク質の同時発現の結果、ＶＬＰ中のＧＡＧ及びＧＰＣＲ－ＧＡＧの発現レベルが高くなったことが明らかになった。これにより、Ｃ５ａＲ抗原が効率的にＶＬＰへと組み込まれたこと及びＣ５ａＲ抗原が抗体で検出可能であったことが確認された。産生される融合タンパク質のアミノ酸配列を表８でまとめる。

細胞株
全長ヒトＣ５ａＲ、カニクイザルＣ５ａＲ、マウスＣ５ａＲ、ラットＣ５ａＲ及びＣ５ａＲ関連ＧＰＣＲヒトＣ５Ｌ２、ヒトＣ３ａＲ、ヒトＦＰＲ１及びヒトＣｈｅｍＲ２３を安定して発現するＣＨＯ Ｆｌｐ－Ｉｎ細胞を作製した。Ｆｌｐ－Ｉｎ ＣＨＯ細胞の作製のために、様々なベクターコンストラクトを社内で遺伝子合成し、インストラクターのマニュアル（Ｔｈｅｒｍｏｆｉｓｃｈｅｒ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に従い細胞の遺伝子移入を行った。全てのコンストラクトがＮ末端Ｖ５／Ｈｉｓタグを含有した。市販の特異的な抗ＧＰＣＲツール抗体の非存在下においても、細胞株の表面上での個々のＧＰＣＲの発現を確認するために、市販の抗Ｈｉｓ（例えばＤｉａｎｏｖａ ＣＡＴ＃ＤＩＡ－９１０）又は抗Ｖ５（例えばＡｂＤ Ｓｅｒｏｔｅｃ ＣＡＴ＃ＭＣＡ２２８５ＧＡ）検出抗体を使用した。

実施例２：ＨｕＣＡＬ ＰＬＡＴＩＮＵＭ（登録商標）ライブラリからのヒトＣ５ａＲ特異的抗体の作製
抗体作製に対して、ＨｕＣＡＬ Ｐｌａｔｉｎｕｍ（登録商標）ライブラリを使用して、ヒトＣ５ａＲに対して特異性がある抗体を選択した。ＨｕＣＡＬ ＰＬＡＴＩＮＵＭ（登録商標）ライブラリは、ＨｕＣＡＬコンセプト（Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６：５７－８６）に基づくファージミドライブラリであり、ファージ表面上でＦａｂを提示するためにＣｙｓＤｉｓｐｌａｙ（登録商標）技術を使用する（Ｌｏｈｎｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，国際公開第２００１／０５９５０号パンフレット）。

ヒトＣ５ａＲ特異的抗体を同定するために、ヒト及びカニクイザルＣ５ａＲ抗原物質を使用してパニングストラテジーを行い、種交差反応抗体を選択した。それぞれ行われたパニングは、様々なＣ５ａＲ抗原（可溶性組み換え抗原又は細胞上で過剰発現されるものとしての何れか）に対する少なくとも３回の個々の選択ラウンドから構成された。

カニクイザルとヒトＣ５ａＲとの間の全体的な相同性は９０％とかなり高いものの、細胞外ドメインは、タンパク質配列の同一性が７５％しかない。実際に、カニクイザルＣ５ａＲ交差反応抗体の同定は困難であることが判明し、ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の祖先抗体は、細胞上で発現されるヒトＣ５ａＲに特異的な細胞結合、カニクイザルＣ５ａＲに対する交差反応性及び他の関連ＧＰＣＲに対する結合なしを明らかにする数個の候補の１つである。

ヒトＣ５ａＲのＮ末端（ＮＴ）に相当するペプチドに対するビーズに基づく溶液パニングを行い、その結果、ヒト及びカニクイザルＣ５ａＲに対して特異性があり、細胞上で発現される全長ヒトＣ５ａＲに結合可能である、ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の祖先抗体が同定された。

ヒト及びカニクイザルＣ５ａＲに対する親和性及び特異性をさらに向上させるために、ヒト又はカニクイザルＣ５ａＲの何れかを過剰発現するように改変されたＣＨＯ Ｆｌｐ－Ｉｎ細胞を使用して、このクローンを２回の連続的に行われる親和性成熟パニングに供した。さらに、特異性をさらに向上させるために、可能性のある翻訳後修飾部位（ＰＴＭモチーフ）を除去するために、及び生殖細胞系列目的のために、抗体改変を行った。

改変工程のこの最後の段階で、可能性のある治療薬候補としてＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２を同定した。ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の両候補とも同じ祖先由来なので、これらは、類似のアミノ酸配列及びインビトロでの特徴を共有する。

これらの２つの抗体は、以下で概説されるように実施例でさらに記載される。

実施例３：ヒトＣ５ａＲ特異的抗体の産生
ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の両方とも、ヒトＩｇＧ１ｆアイソタイプであるが、抗体の免疫エフェクター機能媒介能を消失させるためにＦｃ領域において改変されている。Ｆｃ領域は、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域と比較して、５つのアミノ酸置換、即ちＥＵインデックスに従い付番されるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓ（ｈ＿ＩｇＧ１ｆ＿ＡＥＡＳＳ）を含む。

本抗体は、重鎖フレームワークＶＨ３－１５及び抗体軽鎖フレームワークラムダ１からなる。

一過性抗体産生－アドバンスト・ミクロ（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍｉｃｒｏ）スケール産生ＨＫＢ１１
それぞれＭＡＢ＃１又はＭＡＢ＃２（ヒトＩｇＧ１＿ＡＥＡＳＳ）の重及び軽鎖をコードする哺乳動物発現ベクターを用いて、真核ＨＫＢ１１＃５２細胞に対して一過性遺伝子移入を行った。遺伝子移入から７日後に細胞培養上清を回収し、液体操作ステーションを使用して、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ│ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に供した。試料は中和された溶出緩衝液（ＮａＰＳ：１３７ｍＭ ＮａＰｈｏｓｐｈａｔｅ、８１ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７）中に残留した。試料を滅菌ろ過した（０．２μｍ孔径）。２８０ｎｍでのＵＶ－分光光度法によってタンパク質濃度を決定し、ＣＥ－ＳＤＳ（ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩ│Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して、変性、還元条件下でＩｇＧの純度を分析した。ネイティブ状態でＩｇＧ調製物を分析するために、ＵＨＰ－ＳＥＣを行った。

一過性抗体産生－ＣＨＯでの探索スケール産生
それぞれＭＡＢ＃１又はＭＡＢ＃２（ヒトＩｇＧ１＿ＡＥＡＳＳ）の重及び軽鎖をコードする哺乳動物発現ベクターを用いてＣＨＯ３－Ｅ７細胞に対して一過性遺伝子移入を行った。遺伝子移入から６日後に細胞培養上清を回収し、標準的なプロテインＡアフィニティークロマトグラフィー（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ│ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に供した。別段述べられない場合、１×ダルベッコＰＢＳ（ｐＨ７．２│Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）へと緩衝液交換を行い、試料を滅菌ろ過した（０．２μｍ孔径）。２８０ｎｍでＵＶ－分光光度法によりタンパク質濃度を決定し、ＣＥ－ＳＤＳ（ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩ│Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して、変性、還元及び非還元条件下でＩｇＧの純度を分析した。ネイティブ状態でＩｇＧ調製物を分析するためにＵＨＰ－ＳＥＣを行った。

結果 一過性産生
産生品質（ＳＥＣ単量体含量）及びＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の生産性におけるデータを表９でまとめる。全体的に、許容可能な単量体含量（＞９５％）及び収量（ＨＫＢ１１細胞において＞５５ｍｇ／Ｌ）を達成した。ＣＨＯ３Ｅ－７一過性探索スケール産生由来の体積収量も予想範囲であった。

安定なＨＫＢ１１プールの作製
ＭＡＢ＃１又はＭＡＢ＃２を安定して発現するＨＫＢ１１＃５２プールの作製のために、同時遺伝子移入用に２つのベクター系を使用した。

プール選択を促進するために、これらのベクターは、ゼオシン及びネオシン耐性カセットを含有する。この２つのベクターを１：１比で活発に分裂するＨＫＢ１１＃５２細胞へと一過性同時遺伝子移入した。遺伝子移入の１日後に、細胞懸濁液への１６０μｇ／ｍＬゼオシン及び８００μｇ／ｍＬジェネテシンの添加によって選択を開始した。選択中に、細胞数及び生存能が最初に低下した。遺伝子移入の２０日後に、細胞回収を開始した。約８０％の生存能に到達したら、必要とされる量に依存して所望の体積まで安定なプールを拡大した。バッチ産生の細胞培養上清を播種後第６日に回収した。

ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の大規模精製
溶出緩衝液として１００ｍＭクエン酸、１５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ３．５を使用して、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィー（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳＵＲＥ│ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を介したＨＫＢ１１＃５２の安定なプールの細胞培養上清からのＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の精製を行った。ｐＨ３．５で６０分の温置後、試料を中和した。１５０ｍＭヒスチジン、ｐＨ６．０へと緩衝液交換を行い、試料を滅菌ろ過した（０．２μｍ孔径）。２８０ｎｍでのＵＶ－分光光度法によりタンパク質濃度を決定し、ＣＥ－ＳＤＳ（ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸＩＩ│Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して、変性、還元及び非還元条件下でＩｇＧの純度を分析した。ネイティブ状態でＩｇＧ調製物を分析するためにＵＨＰ－ＳＥＣを行った。

結果 大規模産生
表１０でまとめられるように、ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の産生の結果、好ましい収量、純度及び完全性となった。

対照抗体
様々な対照抗体を作製し、比較目的で実験に含めた。

ＲｅｆＭＡＢ＃１：ベンチマーク抗体
ヒトＣ５ａＲ特異的な抗体“ＩＰＨ５４０１”からのＶＨ及びＶＬ領域をコードするヌクレオチド配列を米国特許出願公開第２０１３／０２９５１１６号明細書（ＮＯＶＯ ＮＯＲＤＩＳＫ－クローン３２Ｆ３Ａ６ＧＬ）から検索した。社内で又は外部業者によっての何れかで、適切な隣接領域（例えば適切な制限酵素認識部位、リンカー配列）とともに直鎖状ＤＮＡ断片としてヌクレオチド配列を遺伝子合成した。標準的な分子生物学的方法を使用することによって、上記のようにヒトＩｇＧ１＿ＡＥＡＳＳの重及び軽鎖をコードする適切な哺乳動物ＩｇＧ発現ベクターへとＤＮＡ断片をクローニングした。上記のようにＲｅｆＭＡＢ＃１を一過性産生させた。ＲｅｆＭＡＢ＃１の重及び軽鎖アミノ酸配列を表３で示す。

さらなる対照抗体：
ヒトＩｇＧ１又はヒトＩｇＧ１＿ＡＥＡＳＳフォーマットの何れかで、鶏卵リゾチームに対する特異性がある社内陰性アイソタイプ対照抗体（ＭＯＲ０３２０７）並びにヒトＣ５ａＲのＮ末端に対する特異性がある社内陽性対照抗体（抗Ｃ５ａＲ抗体）を上記のように一過性に産生させた。

ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の結合特性の特徴評価
実施例４：ＳＰＲを用いたＣ５ａＲＮ末端ペプチドに対するＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２についての一価親和性決定
方法
Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００機器（Ｂｉａｃｏｒｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて２５℃でＩｇＧ捕捉設定を介したＫ_Ｄ決定を行った。標準的なＥＤＣ－ＮＨＳアミンカップリング化学を用いて、抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）とともに固定化したＣＭ５チップ（Ｂｉａｃｏｒｅ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上で、ＨＢＳ－ＥＰ＋、ｐＨ７．４中で希釈したおよそ５００ＲＵのＩｇＧを捕捉した。参照フローセル１は単に活性化及び脱活性化した。ランニング緩衝液としてＨＢＳ－ＥＰ＋（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて、６つの異なるヒト又はカニクイザルＣ５ａＲ＿ＮＴ－バイオペプチド濃度を使用して動態学的測定を行った（それぞれ配列番号１３又は配列番号１４）（２ｎ連続希釈、２０００～６２．５ｎＭ）（注入時間３００ｓ；解離時間６００ｓ；流速３０μＬ／ｍｉｎ）。各サイクル後、３ｍＭ ＭｇＣｌ_２の３×２０ｓの注入で、結合したペプチド／抗体複合体を除去するためにセンサーチップを再生した。二重参照のためにランニング緩衝液のブランク注入を使用した。ｋ_ｏｎ及びｋ_ｏｆｆ速度定数を決定するために、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ３．１（Ｂｉａｃｏｒｅ，ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して全てのセンサーグラムをフィットさせ、これらを使用してＫ_Ｄを計算した。生データを１：１結合モデルにフィットさせ、パラメーターＲ_ｍａｘをローカルに設定し、ＲＩを０に設定した。

結果
結果を表１１でまとめる。両抗体は、ヒトＣ５ａＲペプチドに対する結合が類似しており、Ｋ_Ｄ値が低い２桁ナノモル範囲であり、カニクイザルＣ５ａＲペプチドに対する結合がより弱かったことを明らかにした。

実施例５：Ｏｃｔｅｔを使用したＣ５ａＲＮ末端ペプチドに対するＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の見かけの親和性（二価）決定
方法
Ｏｃｔｅｔ ＨＴＸ機器（ＦｏｒｔｅＢＩＯ，Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、Ｃ５ａＲ＿ＮＴ－ｂｉｏペプチド捕捉設定を介した見かけのＫ_Ｄ決定を２７℃で行った。ＰＢＳ、ｐＨ７．４中で希釈したおよそ０．０３ｎｍのペプチドをストレプトアビジン（ＳＡ）センサー（ＦｏｒｔｅＢＩＯ，Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上に載せた。７つの異なるＩｇＧ濃度（３倍連続希釈、Ｏｃｔｅｔ緩衝液（ＰＢＳ、０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ－２０、０．１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ）中、ヒトＣ５ａＲ＿ＮＴ－ｂｉｏペプチド（配列番号１３）に対して２００～０．２７ｎＭ及びカニクイザルＣ５ａＲ＿ＮＴ－ｂｉｏペプチド（配列番号１４）に対して１０００～１．４ｎＭを使用し、４８０ｓ会合時間及び９００ｓ解離時間で、動態学的測定を行った。各解離段階後、結合した抗体（３×３０ｓ Ｇｌｙ／ＨＣｌ、ｐＨ１．５）を除去するためにセンサーを再生した。見かけのｋ_ｏｎ及び見かけのｋ_ｏｆｆ速度定数を決定するために、Ｏｃｔｅｔ Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ １０．０（ＦｏｒｔｅＢＩＯ）を使用して全てのセンサーグラムをフィットさせ、これらを使用して見かけのＫ_Ｄを計算した（１：１結合モデル使用）。

結果
結果を表１２でまとめる。両抗体は、２桁～３桁ピコモル範囲の見かけのＫ_Ｄ値での二価方式でのヒトＣ５ａＲペプチドへの強い結合を明らかにした。カニクイザルＣ５ａＲペプチドへの結合はおよそ１０００分の１であった。カニクイザルＣ５ａＲペプチドに対する観察されるより弱い結合は主に速いｋ_ｏｆｆ速度ゆえであると思われる。ヒトＣ５ａＲ＿ＮＴに対する見かけの親和性に関して、ＭＡＢ＃２は、ＭＡＢ＃１と比較した場合、約１０分の１に低下した結合親和性を示した（Ｋ_Ｄ：２９０ｐＭ対２０ｐＭ）。

実施例６：ＫｉｎＥｘＡを使用することによる、細胞上で発現される全長Ｃ５ａＲにおけるＭＡＢ＃１に対する見かけの親和性（二価）決定
Ｃ５ａＲはＧＰＣＲファミリーに属するので、ＳＰＲ測定のために使用され得る組み換え全長抗原物質を作製することは非常に困難である。したがって、ヒトＣ５ａＲ又はカニクイザルＣ５ａＲを安定して発現するＦｌｐ－Ｉｎ ＣＨＯ細胞及びＫｉｎＥｘＡ測定を行った。

方法
ＫｉｎＥｘＡ３２００機器（Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して、ＲＴでＣ５ａＲ発現細胞における見かけのＫ_Ｄ決定を行った。ＢＳＡ（１ｍｇ／ｍＬ）及び０．０２％（ｖ／ｖ）ＮａＮ_３を補給したＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏ）をアッセイ緩衝液として使用した。ＭＡＢ＃１（濃度：２ｎＭ及び３０ｐＭ）を検体として及び、滴定物としてＦｌｉｐ－Ｉｎ ＣＨＯ ｈＣ５ａＲ＿Ｖ５／Ｈｉｓ細胞（最終濃度３個のＭｉｏ細胞／ｍＬ及び１個のＭｉｏ細胞／ｍＬ、２ｎ連続希釈）又はＦｌｉｐ－Ｉｎ ＣＨＯ ｃｙＣ５ａＲ＿Ｖ５／Ｈｉｓ細胞（最終濃度２５個のＭｉｏ細胞／ｍｌ及び６個のＭｉｏ細胞／ｍｌ、２ｎ連続希釈）を使用し、オーバーヘッドシェーカー中でＲＴにて一晩平衡化した。平衡化後、試料を遠心分離し、上清を分析のために使用した。ＭａｂＳＳＬ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）でコーティングされたポリメチルメタクリラート（ＰＭＭＡ）ビーズを使用して、ＭＡＢ＃１の遊離濃度を決定し、抗ヒトＦａｂ２ Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（５００ｎｇ／ｍＬ）を検出のために使用した。ＫｉｎＥｘＡソフトウェアを使用し、単一Ｋ_Ｄ値に対してある一定の曲線の全てに同時にフィットする「ｎ－ｃｕｒｖｅ分析」によって見かけのＫ_Ｄを得た。

結果
結果を表１３でまとめる。ＭＡＢ＃１は、１３０ｐＭの見かけのＫ_Ｄ値での全長ヒトＣ５ａＲに対する強い結合を明らかにした。全長カニクイザルＣ５ａＲに対する結合は、およそ３ｎＭの見かけのＫ_Ｄ値で約２０×弱いと思われる。カニクイザルＣ５ａＲに対する結合に関する同様の知見は、Ｏｃｔｅｔ及びＢｉａｃｏｒｅ測定で以前に観察可能であった（実施例４及び実施例５参照）。

実施例７：Ｆｌｐ－Ｉｎ ＣＨＯ細胞及び全血由来好中球上で発現される全長Ｃ５ａＲに対するＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の結合（ＦＡＣＳ分析）
ＦＡＣＳを介して、様々な全長Ｃ５ａＲ抗原及び関連ＧＰＣＲを安定して発現するＣＨＯ Ｆｌｐ－Ｉｎ細胞株に結合する、並びに、ヒト又はカニクイザルＣ５ａＲを内因的に発現する精製ヒト又はカニクイザル好中球に結合する細胞を調べた。カニクイザル好中球を３匹の異なる動物由来のカニクイザル全血から得た（ＬＰＴ Ｈａｍｂｕｒｇ）。

方法
Ｃ５ａＲ－ＣＨＯ Ｆｌｐ－Ｉｎ細胞株をブロッキング処理し、連続希釈又は３００ｎＭの単一（高）濃度の何れかでＩｇＧを添加した。ＩｇＧ結合の検出について、Ｒ－フィコエリスリン（Ｒ－ＰＥ）複合化抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ－ｇａｍｍａ断片特異的）２抗体を添加し、ＦＡＣＳアレイ又はＮｏｖｏｃｙｔｅ装置を使用して蛍光を測定した。

Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＢｉｏｔｅｃからのＭＡＣＳｅｘｐｒｅｓｓ Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｃｏｃｋｔａｉｌを使用して、ＥＤＴＡ全血試料から好中球を精製した。簡潔に述べると、このキットを使用して、磁気標識及び陰性磁気分離を用いて細胞を単離した。赤血球の除去後、連続希釈のＩｇＧ、続いてＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７複合化抗ヒトＦ（ａｂ）２断片に特異的な検出抗体を添加することによって、この細胞を染色した。ＦＡＣＳアレイ装置で測定を行った。ＦｌｏｗＪｏを使用してＦＡＣＳデータを評価し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ｖ４．０）に入力し、非線形回帰を使用してシグモイド用量反応曲線にフィットさせ、ＥＣ５０を計算した。

結果
結果を表１４及び図１及び２でまとめる。図１Ａ及びＣは、個々の全長受容体を発現する改変ＣＨＯ細胞上に存在するヒト及びカニクイザルＣ５ａＲに対するＭＡＢ＃１、ＭＡＢ＃２及びＲｅｆＭＡＢ＃１の結合を示す。全体的に、ＥＣ_５０濃度が殆ど同一である、ヒトＣ５ａＲに対する極めて同等の結合曲線が、ＭＡＢ＃１、ＭＡＢ＃２及びＲｅｆＭＡＢ＃１について決定された。ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２については、カニクイザルＣ５ａＲに対して同様の結果が得られた。予想されるように、ＲｅｆＭＡＢ＃１は、ＣＨＯ細胞上で発現されるカニクイザルＣ５ａＲへの結合がないことを明らかにした。

ヒト又はカニクイザル全血から得た精製好中球を使用して、カニクイザル及びヒトＣ５ａＲへの結合も確認した（図１Ｂ及びＤ）。再び、ヒト及びカニクイザル好中球におけるＥＣ_５０値が殆ど同一である極めて類似の結合曲線がＭＡＢ＃１について観察可能であった。興味深いことに、ＭＡＢ＃２は、ＭＡＢ＃１と比較した場合、カニクイザル好中球においてバックグラウンドレベルに対して全体的にシグナルがより低いことを明らかにした。この知見は、ＣＨＯ細胞上で発現されるカニクイザルＣ５ａＲへの結合を分析した場合には観察可能ではなかった。ＲｅｆＭＡＢ＃１については、カニクイザル好中球への結合の欠如が確認された。

げっ歯類Ｃ５ａＲに対しては、配列相同性が低いので（６６％全体的同一性）、ラット及びマウスＣ５ａＲに対する非交差反応性が予想された。実際に、３００ｎＭのＩｇＧ濃度で試験される場合、ＭＡＢ＃１もＭＡＢ＃２の何れも、ＣＨＯ－Ｆｌｐ細胞上で発現されるラット又はマウスＣ５ａＲへの顕著な結合を全く示さなかった（図２）。Ｃ５ａＲサブファミリーのあらゆる他のメンバーに対する交差反応性を排除するために、ＦＡＣＳを介してＣＨＯ Ｆｌｐ－Ｉｎ細胞上で発現される全長ヒトＣ５Ｌ２、ＣｈｅｍＲ２３、ＦＰＲ１及びＣ３ａＲへの結合も決定された（非遺伝子移入親ＣＨＯ Ｆｌｐ－Ｉｎ細胞と比較）。図２で示されるように、３００ｎＭのＩｇＧ濃度でも、Ｃ５ａＲ関連ＧＰＣＲの何れかに対する又は親ＣＨＯ細胞に対するＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の顕著な細胞結合は検出可能ではなかった。

まとめると、ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の両方が、ヒト及びカニクイザルＣ５ａＲに対する特異的結合を明らかにした。

実施例８：ウイルス様粒子（ＶＬＰ）上で提示される全長ヒトＣ５ａＲに対するＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の結合－ヒトＣ５ａＲの天然変異体に対する結合
ヒトＣ５ａＲの２つの天然変異体（配列番号１；Ｄ／Ｋ変異体及び配列番号２；Ｎ／Ｎ変異体）を報告する。

２つの天然変異体に対するＭＡＢ＃１及びＭａｂ＃２の結合を比較するために、実施例１に記載のように、この２つのＣ５ａＲ変異体の何れかを発現するＶＬＰを作製した。ＭＡＢ＃１及びＭａｂ＃２がマウスＣ５ａＲに対して交差反応しないので、陰性対照として、マウスＣ５ａＲを発現するＶＬＰを含めた。

方法
結合の評価のために、作製したＶＬＰを一晩コーティングし、ブロッキング処理段階の後、翌日、ＩｇＧ滴定物を添加した。基質としてアルカリホスファターゼ複合化抗ヒトＩｇＧ２抗体及びＡｔｔｏＰｈｏｓを使用して、コーティングされた抗原へのＩｇＧの結合を検出した。

結果
結果を表１５でまとめ、図３で示す。ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の両方とも、ヒトＣ５ａＲの両天然変異体に対して同等な滴定曲線を明らかにし、ＥＣ_５０濃度が等しかった。予想されるように、マウスＣ５ａＲへの結合は検出されなかった。これらのデータに基づき、個々の標的細胞上に存在する天然変異体とは独立に、ヒトＣ５ａＲへのＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の高親和性結合がインビボで予想され得る。

実施例９：タンパク質パネルプロファイリング（３Ｐ）
一般的な３Ｐアッセイにおいて、ＭＡＢ＃１に対する可能性のある非特異的オフターゲット結合を決定した。

方法：
タンパク質パネルプロファイリングは、主にＦｒｅｓｅ ｅｔ ａｌ．（ｍＡｂｓ ５：２、２７９－２８７；Ｍａｒｃｈ／Ａｐｒｉｌ ２０１３）により記載されるように行った。４℃で一晩、１．０μｇ／ｍＬの濃度で、２枚の３８４ウェルＭＳＤ標準プレート上で３２個の異なるタンパク質及び対照をコーティングした。コーティング溶液を廃棄し、マイクロタイタープレート振盪器（約５００ｒｐｍ）上でＲＴにて１時間にわたりＰＢＳ中５０μＬ３％（ｗ／ｖ）ＢＳＡでプレートをブロッキング処理し、続いて５０μＬ洗浄緩衝液（０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０入りのＰＢＳ）で３回洗浄した。アッセイ緩衝液（０．５％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ、０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０入りＰＢＳ）中の１００ｎＭ及び１０ｎＭへとＩｇＧ試料を希釈した。対照として、アイソタイプ対照抗体ＭＯＲ０３２０７（ＩｇＧ１ｆ＿ＡＥＡＳＳ）及びアッセイ緩衝液を使用した。試料及び対照を３０μＬ／ウェルで添加し、マイクロタイタープレート振盪器上でＲＴにて３時間温置した。プレートを３回洗浄し、３０μＬ検出抗体（ＥＣＬ標識抗ヒトＦａｂ）をウェルごとに添加し、マイクロタイタープレート振盪器上で１時間温置した（約５００ｒｐｍ）。ＭＳＤプレートの洗浄及び３５μＬ／ウェルの界面活性剤入りのＭＳＤリード緩衝液Ｔの添加後、ＳＥＣＴＯＲ Ｉｍａｇｅｒ Ｓ６００機器（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を使用して、電気－化学発光シグナルを検出した。

評価のために、ある一定のタンパク質に対する抗体試料の結合シグナルを参照抗体ＭＯＲ０３２０７の個々の結合シグナルにより除し、その結果、結合率（ＢＲ）を得た。次に、対照を除く（全部で２５）全タンパク質の累積結合率（ＣＢＲ）を計算した：１５０以下のＣＢＲは、検出可能な非特異的結合がないＩｇＧを示す。１５０を上回る値は、参照抗体ＭＯＲ０３２０７と比較して、非特異的結合が増加しているＩｇＧを示す。

結果
ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２に対する結果を図１０でまとめる。要するに、試験したタンパク質の何れに対しても、検出可能である重大な非特異的結合はなかった。ウシトランスフェリンに対する非常に低い（ＭＡＢ＃２）及び低い（ＭＡＢ＃１）結合が観察された。Ｏｃｔｅｔに基づく結合アッセイにおいてウシトランスフェリンに対する結合が確認されたが、ラット及びカニクイザルトランスフェリンに対する結合は検出されなかった（データは示さない）。したがって、ウシトランスフェリンに対する観察される結合は重要ではないものとみなした。

最終的な抗体フォーマット及び安全性
Ｃ５ａＲは、白血球、好中球及びリンパ球などの様々な免疫細胞上で発現され、このような細胞のヒトＩｇＧ１ Ｆｃ介在性枯渇は、不要な副作用を回避するために防ぐ必要がある。したがって、抗Ｃ５ａＲ抗体の最終ＩｇＧフォーマットは、治療介入中の何らかのエフェクター機能の誘導能について抑制的である必要がある。

ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の両方とも、抗体誘導性エフェクター機能を消失させるために、ヒトＩｇＧ１ｆのＦｃ領域において５個のアミノ酸置換、即ちＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓ（ｈＩｇＧ１ｆ＿ＡＥＡＳＳ、ＥＵインデックスに従い付番）を含有する。Ｃ５ａＲ抗体治療に関するこのフォーマットの臨床安全性が当技術分野で記載された（Ｗａｇｎｅｒ Ｆ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ．２０１４；７３：４９９．ｄｏｉ：１０．１１３６／ａｎｎｒｈｅｕｍｄｉｓ－２０１４－ｅｕｌａｒ．２１５６）。

以下で概説されるように、Ｆｃγ受容体又はＣ１ｑに対する結合試験並びにインビトロＡＤＣＣ及びＡＤＣＰアッセイなど、様々なアッセイにおいて、エフェクター機能誘導能がＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２では欠如していることが確認された。

実施例１０：Ｏｃｔｅｔを用いたＦｃＲｎ受容体へのＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の結合
方法
Ｏｃｔｅｔ ＨＴＸ機器（ＦｏｒｔｅＢＩＯ，Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、異なる種からの固定化新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に対する見かけのＫ_Ｄ決定を２７℃にてｐＨ６．０及び７．２で行った。ストレプトアビジン（ＳＡ）センサー（ＦｏｒｔｅＢＩＯ，Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で、０．５ｎｍのビオチン化ヒト、カニクイザル、マウス及びラットＦｃＲｎを捕捉した。２４０ｓ会合時間及び１８０ｓ解離時間で、Ｏｃｔｅｔ緩衝液（ＰＢＳ、０．０５％／ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ－２０、０．１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ中で、８種類の異なる濃度のＩｇＧ（３ｎ連続希釈、１０００～０．４６ｎＭ）を使用して、動態学的測定を行った。各サイクル後、結合したリガンド／抗体複合体（ＨＢＳ－ＥＰ＋、ｐＨ８．０中の２×３０ｓ）を除去するために、センサーを再生した。見かけの親和性を決定するために、Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ １０．０（ＦｏｒｔｅＢＩＯ，Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、全てのセンサーグラムをフィットさせ、データを定常状態モデルとフィットさせた。

結果
結果を表１６でまとめる。ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２は、予想される親和性範囲の異なる種からのＦｃＲｎに対する見かけの結合親和性を明らかにした。（アイソタイプ対照抗体ＭＯＲ０３２０７ ＩｇＧ１ｆと同等、及び両ＩｇＧ分子に対してヒトＦｃＲｎに対する結合についての生理学的な結合挙動が確認され得、即ち、中性ｐＨ（７．２）での結合は検出可能ではなかった。したがって、抗体のＦｃ領域に導入される５つの突然変異はヒトＦｃＲｎ結合に悪影響を及ぼさなかった。

実施例１１：Ｏｃｔｅｔを使用したヒトＦｃγ受容体に対するＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の結合
方法
Ｏｃｔｅｔ（ＦｏｒｔｅＢＩＯ，Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、２７℃でＩｇＧ捕捉設定を介したＫ_Ｄ決定を行った。プロテインＡセンサー（ＦｏｒｔｅＢＩＯ，Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上で、Ｏｃｔｅｔアッセイ緩衝液（ＰＢＳ、０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ－２０、０．１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ）中で希釈した２．０ｎｍのＩｇＧを捕捉した。アッセイ緩衝液中でＦｃガンマ受容体の７つの濃度（２ｎ連続希釈）を使用して動態学的測定を行った。各サイクル後、結合したリガンド／抗体複合体を除去するためにセンサーを再生した（１０ｍＭ Ｇｌｙ／ＨＣｌ、ｐＨ１．５中２×３０ｓ）。Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ １０．０（ＦｏｒｔｅＢＩＯ，Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、全てのセンサーグラムをフィットさせ、ｋ_ｏｎ及びｋ_ｏｆｆ速度定数を決定し、Ｋ_Ｄを計算するために使用した。パラメーターＲ_ｍａｘをローカルにセットして、１：１結合モデルと生データをフィットさせた。

結果
結果を表１７でまとめる。試験したＦｃγ受容体の何れに対しても、ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の結合は、全く検出され得なかったか又は非常に弱い結合しか検出され得ず、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域への導入される突然変異がＦｃγ受容体結合の消失において有効であることが確認され得た。

実施例１２：Ｏｃｔｅｔを用いたＣ１ｑに対するＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の結合
方法
Ｏｃｔｅｔ（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、２７℃でＩｇＧ捕捉設定を介した見かけの（二価）Ｋ_Ｄ決定を行った。ストレプトアビジン（ＳＡ）センサー（ＦｏｒｔｅＢＩＯ，Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）上に固定化された抗ｈｕ Ｆａｂ ＣＨ１カッパ／ラムダ（ＢＡＣ）上に、Ｏｃｔｅｔ緩衝液中で希釈した２．０ｎＭ ＩｇＧを捕捉した。２４０ｓ会合時間及び２４０ｓ解離時間で、Ｏｃｔｅｔアッセイ緩衝液（上記参照）中でＣ１ｑの８つの濃度（３ｎ連続希釈、５００～０．６９ｎＭ）を使用して動態学的測定を行った。各サイクル後、結合したリガンド／抗体複合体を除去するために、センサーを再生した（２×５０ｍＭ ＮａＯＨ、１×１０ｍＭ Ｇｌｙ／ＨＣｌ、ｐＨ１．５、各３０ｓ）。見かけの親和性を決定するために、Ｄａｔａ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ ９（ＦｏｒｔｅＢＩＯ，Ｐａｌｌ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して全てのセンサーグラムをフィットさせた。定常状態モデルとデータをフィットさせた。

結果
結果を表１８でまとめる。予想されるように、Ｃ１ｑ（プールしたヒト血漿から単離）に対するＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の結合は観察可能ではなく、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に導入された突然変異がＣ１ｑ結合消失に有効であることを確認した。

実施例１３：ＭＡＢ＃１のＡＤＣＣ及びＡＤＣＰインビトロ活性
方法
製造者の説明書に従い、Ｐｒｏｍｅｇａ ＡＤＣＣ及びＡＤＣＰレポーターバイオアッセイを使用して、ＭＡＢ＃１に対するＡＤＣＣ及びＡＤＣＰ活性を試験した（それぞれＣａｔ＃Ｇ７０１７及びＣａｔ＃Ｇ９８８Ａ）。本キットは、エフェクター細胞として改変Ｊｕｒｋａｔ細胞を使用する。この細胞は、ＡＤＣＣの場合はＦｃｙＲＩＩＩａ受容体、Ｖ１５８（高親和性）変異体及びＡＤＣＰの場合はＦｃγＲＩＩａ＿Ｈ受容体、並びに蛍ルシフェラーゼ発現を推進するＮＦＡＴ応答エレメントを、何れかで安定して発現する。標的細胞として、ヒトＣ５ａＲを発現するＣＨＯ Ｆｌｐ－Ｉｎ細胞を使用した。抗体ブリッジを通じた（例えばＭＡＢ＃１又はＭＡＢ＃２を通じた）標的へのエフェクター細胞の結合は、ＮＦＡＴ経路における事象のカスケードを開始させ、その結果、蛍ルシフェラーゼタンパク質の発現が起こる。この酵素反応により発光が起こるが、これはルシフェラーゼ濃度に比例し、この濃度はＡＤＣＣ又はＡＤＣＰ活性と直接相関する。バックグラウンド値に対して平均シグナルをプロットすることによって、ＭＡＢ＃１に対してＡＤＣＣ又はＡＤＣＰ活性を分析した。

ＭＡＢ＃１の場合、野生型ヒトＩｇＧ１ｆバージョンが利用可能ではなかったので、野生型ＩｇＧ１ｆ並びに社内ヒト抗Ｃ５ａＲ対照抗体のＦｃ－サイレントヒトＩｇＧ１ｆ＿ＡＥＡＳＳバージョンを陽性対照として含めた。さらに、アイソタイプ対照抗体ＭＯＲ０３２０７のＦｃ－サイレント（ｈＩｇＧ１＿ＡＥＡＳＳ）及び野生型バージョン（ｈＩｇＧ１ｆ）バージョンを陰性対照として含めた。

結果
結果を表１９でまとめ、１０μｇ／ｍｌのＩｇＧ濃度に対して図８Ａ（ＡＤＣＰ）及びＢ（ＡＤＣＣ）で示した。ＭＡＢ＃１は、抗Ｃ５ａＲ対照抗体のＦｃ－サイレントバージョン及びＭＯＲ０３２０７のＦｃ－サイレントバージョンと同様に、Ｃ５ａＲ過剰発現ＣＨＯ細胞の存在下で改変エフェクター細胞においてＮＦＡＴ経路のＦｃγＲＩＩＩａ又はＦｃγＲＩＩａ＿Ｈ活性化を誘導しなかった。Ｃ５ａＲ特異的な対照抗体の野生型（非サイレント）バージョンは、Ｃ５ａＲ発現ＣＨＯ細胞の存在下で改変Ｊｕｒｋａｔ細胞において、ルシフェラーゼ産生を明らかに誘導した。

まとめると、この実験によって、野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に導入された突然変異がＡＤＣＣ及びＡＤＣＰ活性を妨げることにおいて効率的であることが明確に確認された。

ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の機能的特徴
Ｃ５ａＲのＣ５ａ誘導性活性化を監視する異なるインビトロアッセイにおいて、ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の中和活性を分析した。

病態生理学的な条件下で高レベルのＣ５ａが記載されているので、疾患部位に局所的に存在し得る高濃度Ｃ５ａを中和するためのＣ５ａＲ拮抗抗体の能力は、インビボで有益な治療効果を提供すると予想される。したがって、このようなインビボの病理状態を反映させるためのインビトロ実験も設定した。

実施例１４：ＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）β－アレスチンアッセイ（ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ）
方法：
製造者の説明書に従い、ＤｉｓｃｏｖｅＲｘからのＰａｔｈＨｕｎｔｅｒ（登録商標）β－アレスチンアッセイを行った。簡潔に述べると、活性化Ｃ５ａＲとβ－アレスチンの相互作用の検出によって、β－ガラクトシダーゼ酵素断片コンプリメンテーション（ｅｎｚｙｍｅ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ）を使用して、ヒトＣ５ａ誘導性ヒトＣ５ａＲ活性を測定した。

組み換えヒトＣ５ａを使用してβ－アレスチン動員を誘導し、ＤｉｓｃｏｖｅｒＲｘからの化学発光検出試薬を使用して酵素活性を測定した。ヒトＣ５ａＲの改変バージョンを発現するチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）細胞を一晩播種し、ヒトＣ５ａ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）の連続希釈液を添加し、３７℃及び５％ＣＯ２で１．５ｈ温置した（アンタゴニスト非存在下で滴定曲線を作成）。並行して、Ｃ５ａＲ特異的な抗体の存在下でヒトＣ５ａの滴定曲線を決定した（固定ＩｇＧ濃度５０ｎＭ）。そのようにするために、細胞にＩｇＧを添加し、その後、ヒトＣ５ａで刺激し、３７℃及び５％ＣＯ_２で１時間温置した。結果は相対発光単位として表した。ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを介して拮抗的ＩｇＧの存在及び非存在下でのヒトＣ５ａに対する滴定曲線を作成した。

β－アレスチンアッセイに対して、ヒトＣ５ａに対する用量反応曲線におけるより高い用量へのシフト（即ち用量軸上で水平に右へ）を、ＭＡＢ＃１、ＭＡＢ＃２及びＲｅｆＭＡＢ＃１に対して比較した（図４Ａ）。さらに、３つの漸増Ｃ５ａ濃度での％阻害（１．２ｎＭ、１１ｎＭ及び１００ｎＭ）を計算し、比較した（図４Ｂ）。

結果
β－アレスチンアッセイからの結果を図４Ａ及び４Ｂで示し、表２０及び表２１でまとめる。抗体の非存在下で、平均ＥＣ_５０濃度が２．９ｎＭであるヒトＣ５ａに対する用量反応曲線を得た（図４Ａ）。

５０ｎＭの最終ＩｇＧ濃度でヒトＣ５ａにＭＡＢ＃１又はＭＡＢ＃２を添加した結果、ヒトＣ５ａのより高い用量へと１２倍超の用量反応曲線の顕著なシフトが起こった。より正確には、５０ｎＭＭＡＢ＃１又はＭＡＢ＃２の存在下で、平均ＥＣ_５０濃度が３７ｎＭであるヒトＣ５ａに対する用量反応曲線を得た（図４Ａ、表２０）。言い換えると、ＭＡＢ＃１又はＭＡＢ＃２の存在によって、ヒトＣ５のＣ５ａＲ活性化誘導能が顕著に低下するか、又は或いはＭＡＢ＃１又はＭＡＢ＃２の存在下で、ヒトＣ５ａは、抗体非存在下でのその活性と比較した場合、同じＣ５ａＲ活性を誘導するためには少なくとも１２倍より高い濃度を添加する必要がある。

３つの漸増Ｃ５ａ濃度での％阻害が計算された場合もこの観察が反映された（図４Ｂ）。１．２ｎＭヒトＣ５ａで、全３種類の試験抗体、ＭＡＢ＃１、ＭＡＢ＃２及びＲｅｆＭＡＢ＃１は、５０ｎＭのＩｇＧ濃度で８０％を超えるＣ５ａ誘導性Ｃ５ａＲ活性の同等な阻害を明らかにした。しかし、ヒトＣ５ａの約１０倍高い濃度（１１ｎＭ）をＣ５ａＲの活性化のために使用した場合、ＲｅｆＭＡＢ＃１は、Ｃ５ａ誘導性Ｃ５ａＲ活性の約５０％しか中和できなかった。これは、Ｃ５ａ誘導性Ｃ５ａＲ活性の最大８０％を依然として中和可能であったＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２とはかなり異なった。

Ｃ５ａＲ活性化のためにヒトＣ５ａの１００倍高い濃度（１００ｎＭ）を使用した場合、この効果はさらにより顕著であった。ここで、ＲｅｆＭＡＢ＃１については中和活性が殆ど検出可能ではなく、一方でＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２は、ヒトＣ５ａ誘導性Ｃ５ａＲ活性をそれぞれ約４０％及び３０％、依然として中和可能であった。

したがって、ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の両方とも、インビトロで病態生理学的なＣ５ａ濃度を中和するために効果的であり、ＲｅｆＭＡＢ＃１と比較して、顕著により強力である。

実施例１５：ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２による好中球及び単球活性化の阻害－ＣＤ１１ｂアッセイ
より生理的な設定に相当する機能ＣＤ１１ｂ全血アッセイにおいて、ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の中和効力をさらに決定した。ＣＤ１１ｂは、インテグリンＭａｃ－１複合体を形成するために、ＣＤ１８と組み合わせ、これはマルチリガンド受容体として作用する。ＣＤ１１ｂは、＞５０％の末梢血白血球の表面上で構成的に発現され；白血球活性化時に、その発現は、細胞膜へのＣＤ１１ｂ含有分泌性顆粒の融合を通じて上方制御される。したがって、ＣＤ１１ｂ発現は、インビボ及びインビトロ両方の白血球活性化のマーカーとして広く使用される。

Ｃ５ａは、ヒト好中球及び単球の強力な活性化因子として、表面抗原ＣＤ１１ｂの上方制御を誘導する。したがって、全血由来顆粒球及び単球におけるＣＤ１１ｂレベルを評価することにより、顆粒球及び単球のＣ５ａ誘導性活性化を防ぐためのＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の能力を調べた。この実験は、基本的に米国特許出願公開第２０１３／０２９５１１６号明細書（ＮＯＶＯ ＮＯＲＤＩＳＫ）に記載のように行った。

方法
第１のアッセイ設定において、ヘパリン処理全血をＩｇＧ（連続希釈液）と混合し、３７℃、５％ＣＯ_２で２０分間温置した。１５ｎＭの標準的な濃度でヒトＣ５ａを添加し、３７℃、５％ＣＯ_２で２０分間温置した。抗ＣＤ１１ｂ－ＰＥ又はアイソタイプ対照抗体ＭＯＲ０３２０７を添加し、プレートを３７℃、５％ＣＯ_２で２０分間温置した。最後に、赤血球細胞溶解緩衝液を添加し、室温にて１５分間暗所で温置し、細胞を洗浄し、溶解緩衝液中で再び再懸濁した。

第２の実験設定において、上記のように、残りのアッセイ設定を改変せずに、１５０ｎＭというより臨床に関連する病態生理学的な濃度でヒトＣ５ａを添加した。

ＭＡＢ＃１の受容体滞在時間を調べるために、２０分から３００分へとＩｇＧとのヘパリン処理全血の温置時間を延長することにより、アッセイをさらに適応させた。

ＦＡＣＳアレイ又はＮｏｖｏｃｙｔｅ装置を使用して、蛍光を測定した。死細胞及び残屑を排除するために、試料をゲーティングした。それらのＦＳＣ及びＳＳＣプロファイルに従い単球及び顆粒球を同定し、ゲーティングした。ＣＤ１１ｂ－ＰＥチャネル（Ｙｅｌｌｏｗ－Ａ）におけるゲーティングされた顆粒球及び／又は単球の中央蛍光強度（ＭＦＩ）を計算した。結果は、阻害のパーセンテージ（％阻害）として表した。最大ＣＤ１１ｂ発現（ＭＦＩ_Ｍａｘ）は、Ｃ５ａとともに、しかしＩｇＧなしで温置した細胞の平均ＭＦＩであった。最小（バックグラウンド）ＣＤ１１ｂ発現（ＭＦＩ_Ｍｉｎ）は、Ｃ５ａなし及びＩｇＧなしで温置した細胞の平均ＭＦＩであった。各試料に対する％阻害を計算するために使用した式は以下のとおりであった：
％阻害＝１００－（（（ＭＦＩ_試料－ＭＦＩ_Ｍｉｎ））／（（ＭＦＩ_Ｍａｘ－ＭＦＩ_Ｍｉｎ））×１００）

ＦｌｏｗＪｏを使用してデータを評価し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ（ｖ４．０）に入力し、非線形回帰を使用してシグモイド用量反応曲線にフィットさせて、ＩＣ_５０を計算した。

１５ｎＭ Ｃ５ａリガンドを使用したＭＡＢ＃１に対する結果
ＣＤ１１ｂ全血アッセイからのＭＡＢ＃１に対する結果を表２２でまとめる。両方のゲーティング細胞集団（単球及び顆粒球）に対して、１桁ｎＭ範囲のＩＣ_５０値が決定され、顆粒球に対してほぼ８８％及び単球に対して８３％の最大阻害があった。

１５ｎＭ対１５０ｎＭ Ｃ５ａリガンドを使用した、ＭＡＢ＃１、ＭＡＢ＃２及びＲｅｆＭＡＢ＃１に対する結果
（上記のような）顆粒球の刺激のための１５ｎＭのヒトＣ５ａの添加に加えて、より高い病態生理学的なリガンド濃度を模倣するために１０倍高い濃度（１５０ｎＭ）のリガンドを使用した。

再び、ＭＡＢ＃１、ＭＡＢ＃２及びＲｅｆＭＡＢ＃１の用量滴定を行い、非線形回帰関数を介してＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して阻害曲線を作成した。その結果を定量的に「阻害５０％を誘導するために必要なアンタゴニスト濃度」として表す。

このＣＤ１１ｂ全血アッセイからの結果を図５Ａ及びＢで示す。

図５Ａは、１５ｎＭ Ｃ５ａでのＭＡＢ＃１、ＭＡＢ＃２及びＲｅｆＭＡＢ＃１の中和活性を示し、図５Ｂは、１５０ｎＭ Ｃ５ａでの個々の中和活性を示す。定量的読み取りとして、ＣＤ１１ｂ上方制御の５０％阻害を達成するためのＩｇＧ濃度を計算し、両図のｘ軸の下にその結果を示す。

全体的に、初期標的細胞として顆粒球上でゲーティングされたＣＤ１１ｂ全血アッセイにおいて漸増Ｃ５ａ濃度を使用した場合、β－アレスチンアッセイ（実施例１４）に関する同様の観察がなされた。１５ｎＭヒトＣ５ａの効果を５０％まで遮断するためには、ＭＡＢ＃１及びＲｅｆＭＡＢ＃１については１２ｎＭのＩｇＧ濃度が必要であったが、一方でＭＡＢ＃２の場合、１７ｎＭのＩｇＧ濃度で十分であった。しかし、１０倍高いＣ５ａ濃度（１５０ｎＭ）により誘導されるＣＤ１１ｂ上方制御の５０％を遮断するために、顕著に異なる量のアンタゴニストを必要とした。ＭＡＢ＃１に対して、Ｃ５ａＲのＣ５ａ誘導性活性化の５０％を阻害するために４２ｎＭのＩｇＧ濃度で今回十分であった一方で、同じ遮断効果を達成するために７倍高い濃度のＲｅｆＭＡＢ＃１（２９１ｎＭ）が必要であった。ＭＡＢ＃２の場合、１１４ｎＭのＩｇＧ濃度で十分であった。

したがって、ｂ－アレスチンアッセイにおいて既に見られるものと同じである、効力に関する３つのＩｇＧの順位付け（ＭＡＢ＃１＞ＭＡＢ＃２＞ＲｅｆＭＡＢ＃１）が行われ得、ＭＡＢ＃１及びＭＡＢ＃２の両方がインビトロで病態生理学的なＣ５ａ濃度を中和することにおいて非常に有効であると思われ、ＲｅｆＭＡＢ＃１と比較して顕著により強力であった。

ＭＡＢ＃１に対する結果－受容体滞留時間における影響
Ｓｅｏｗ及び共同研究者（Ｓｅｏｗ Ｖ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．２０１６；６：２４５７５）は、Ｃ５ａの生成が細胞膜に局在し、短いが反復される期間にわたり顕著に高いものであり得ることを報告した。したがって、滞留時間が長いＣ５ａＲのアンタゴニストは急速な一過性シグナル伝達を伴う系において有利であり得ることが示唆された。インビトロで測定される受容体滞留時間の延長は、作用の持続時間及びインビボでの有効性の度合いにも読み替えられ得ることも結論付けられた。

Ｓｅｏｗ及び共同研究者により公開されているような同様の設定で２つの抗体の受容体滞留時間を比較するために、全血中に存在する顆粒球及び単球との２０分及び３００分のＩｇＧ温置にわたる対数用量阻害曲線を上記のように評価した。

ＣＤ１１ｂ全血アッセイのこの実験設定からの結果を図６Ａ～Ｄで示す。驚くべきことに、長期の温置時間にわたる中和活性の顕著な上昇がＭＡＢ＃１で観察可能であった。図６Ａ及びＣで示されるように、顆粒球及び単球集団の両方について、ＭＡＢ＃１に対して計算されるＩＣ_５０濃度が経時的に約６分の１に低下した（ＩＣ_５０値を表２３でまとめる）。ＲｅｆＭＡＢ＃１の場合、３００分後、阻害曲線のシフト又は低下は観察できなかった（図６Ｂ及びＤ）。

要するに、病態生理学的なＣ５ａレベルの効果的な中和及び長期にわたる効力上昇の両方の組み合わせは、インビボで有益であると予想される。

実施例１６：好中球のＣ５ａ誘導性遊走
精製好中球のＣ５ａ誘導性化学走性を分析した。この実験は基本的に米国特許出願公開第２０１３／０２９５１１６号明細書に記載のように行った。

方法
ＭＡＣＳｘｐｒｅｓｓ Ｗｈｏｌｅ Ｂｌｏｏｄ Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ，ｈｕｍａｎ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ Ｃａｔ＃１３０－１０４－４３４及びＭＡＣＳｘｐｒｅｓｓ Ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ Ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ Ｋｉｔ，ｈｕｍａｎ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ，ＣＡＴ＃１３０－０９８－１９６）を使用して、３名の異なるヒトドナーの全血から、好中球を単離し、精製した。

ＦｌｕｏｒｏＢｌｏｋ（登録商標）３．０μＭ孔径９６ウェルプレートを使用して、Ｂｏｙｄｅｎチャンバー技術によって、ｈＣ５ａ依存性好中球遊走を阻害するためのＩｇＧの効力を分析した。Ｂｏｙｄｅｎチャンバー孔の膜を３７℃で２時間、１ｍｇ／ｍＬヒトフィブリノーゲンでコーティングした。洗浄後、２％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する溶液で３７℃にて１時間、膜をブロッキング処理した。次に、精製好中球をカルセインで染色し、アンタゴニスト性ＩｇＧ（１００及び６００ｎＭ）あり又はなしで１０^５個の染色細胞をＢｏｙｄｅｎチャンバーの上の区画に添加した。ｈＣ５ａ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，１０ｎＭ）をＢｏｙｄｅｎチャンバーの下の区画に適用した。プレートリーダー（Ｔｅｃａｎ Ｍ１０００Ｐｒｏ）において、６０分にわたり、３７℃で５分ごとにこのプレートを４８５／５３８ｎｍで測定した。フルオロブロック膜を通過したカルセイン染色好中球を測定して、好中球の下のチャンバーへの移動能を決定する。選択した時間点（１５、２５及び３５分）で計算した場合の動態学的遊走曲線（５～６０分）並びにパーセンテージ阻害としてこの結果を表す。

％阻害を計算するために使用される式は以下のとおりであった。
％阻害＝１００－（（（ＲＦＵ_試料－ＲＦＵ_Ｍｉｎ））／（（ＲＦＵ_Ｍａｘ－ＲＦＵ_Ｍｉｎ））×１００）

結果
３名の異なるヒトドナーからの好中球を使用して、２つの試験ＩｇＧ濃度での選択された時間点における好中球遊走の平均パーセンテージ阻害を３回の独立した試験から計算した。

図７で示されるように、遊走１５分後、Ｃ５ａ誘導性好中球遊走の殆ど完全な阻害がＭＡＢ＃１について達成された。遊走３５分後、及び試験した最大ＩｇＧ濃度（６００ｎＭ）で、ＭＡＢ＃１は依然として＞５０％阻害を明らかにした。陰性アイソタイプ対照抗体ＭＯＲ０３２０７は、好中球遊走に対して阻害効果を示さなかった。

実施例１７：マクロファージによるサイトカインのＣ５ａ誘導性放出
マクロファージは、それらの極性化に依存して、活性化時に炎症促進又は抗炎症サイトカインを放出する。ゆえに、ＭＡＢ＃１とのＣ５ａ／Ｃ５ａＲ相互作用の遮断がＭ１及びＭ２マクロファージによるサイトカインのＣ５ａ誘導性放出に影響するか否かを評価した。Ｍ２マクロファージによる抗炎症性ＩＬ－１０及びＭ１マクロファージによる炎症促進性ＩＬ－１２の産生を検出するために、サイトカインＥＬＩＳＡを行った。

方法
簡潔に述べると、Ｂｉｏｃｏｌｌ分離溶液及びＳｅｐＭａｔｅチューブ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ）を用いた密度勾配遠心分離によって、健康なヒトドナーの全血から、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を調製した。ＣＤ１４＋選択キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いて単球をＰＢＭＣから単離し、９６ウェルプレートにおいて１０％ＦＣＳ及び１×ＧｌｕｔａＭａｘを補給したＲＰＭＩ中で培養した。ＬＰＳ（２０ｎｇ／ｍｌ）及びＩＦＮγ（５０ｎｇ／ｍｌ）を使用して、一晩プレーティングした単球を３７℃で２４時間、Ｍ１マクロファージへと極性化し、３０分間にわたりＭＡＢ＃１（３０ｎＭ）とともに予め温置し、続いてさらに２４時間、Ｃ５ａ（１５ｎＭ）を添加した。ＭＡＢ＃１の非存在下においてＣ５ａで刺激したＭ１マクロファージ及び未処理対照を含めた。２４時間後、製造者の説明書に従い、ＩＬ－１２／ＩＬ２３ ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって、細胞上清を分析した。Ｍ２マクロファージの生成のために、Ｍ－ＣＳＦを補給したＲＰＭＩ／１０％ＦＣＳ中での５日間の培養によって、単球をマクロファージに予め分化させ、第５日にＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＩＬ－１３及びＩＬ－６（各４０ｎｇ／ｍｌ）を添加した。第５日から第９日までＣ５ａ（１５ｎＭ）＋／－ＭＡＢ＃１（３０ｎＭ）を毎日添加した。第９日に、製造者の説明書に従い、ＩＬ－１０ ＤｕｏＳｅｔ ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）によって細胞上清を分析した。

結果
Ｃ５ａとの温置がＭ１マクロファージのＩＬ－１２産生低下につながる一方で、未処理対照との比較において、ＭＡＢ＃１での前処置後にＩＬ－１２レベルの低下は観察できなかった。一方で、ＭＡＢ＃１での処置は、Ｍ２マクロファージにおけるＣ５ａ誘導性ＩＬ－１０産生を阻害した（図１１参照）。

結論として、ＭＡＢ＃１は、Ｍ２マクロファージによる抗炎症ＩＬ－１０のＣ５ａ誘導性産生を効率的に阻害し、Ｍ１マクロファージによる炎症促進性ＩＬ－１２の産生を回復させ、それによりインビトロでのＭＡＢ＃１の作用方式が明らかになった。

薬物動態学
実施例１８：薬物動態学
１０ｍｇ／ｋｇ ＩｇＧの単回静脈内（ｉ．ｖ．）投与後、雄Ｈａｎ－Ｗｉｓｔａｒラット（ｎ＝３匹）においてＭＡＢ＃１の薬物動態プロファイルを評価した。

方法
次の時間点で眼窩静脈叢又は下顎静脈穿刺を介して各動物から血漿試料を回収した：投与前、投与後０．０８３、１、３、８、２４、４８、７２、９６、１６８、２４０、３３６及び５０４時間。

ＭＳＤに基づくリガンド結合アッセイを使用して、ラット血漿中の遊離生体活性ＭＡＢ＃１濃度を決定した。簡潔に述べると、９６ウェルストレプトアビジン－ＭＳＤプレートの表面上でビオチン化Ｎ末端ヒトＣ５ａＲペプチドのコーティングを行った。薬物特異的な抗イディオティピックＥＣＬ標識抗体を使用して、結合検体を検出した。血漿中の遊離薬物濃度に基づき、ノンコンパートメントデータ分析（ＮＣＡ）を使用して、ＭＡＢ＃１の薬物動態学的特性を評価した。

結果
経時的な平均血漿濃度を図９で示す。全部で３匹の動物において、投与から５分後（即ち０．０８３時間）に、単回ｉ．ｖ．投与後のＭＡＢ＃１の平均最大血漿濃度を観察した（Ｔ_ｍａｘ）（即ち投与後の最初の試料採取時間点）。１０６ｍＬ／ｋｇの分布の平均体積（Ｖｚ）は、血漿体積と細胞外体積との間であった（Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９３）。ｉ．ｖ．投与後の平均最終排泄半減期は９．０日と決定され、平均総クリアランスは０．３４１ｍＬ／ｈ／ｋｇと決定された。

全体的に、ＭＡＢ＃１は、げっ歯類Ｃ５ａＲに対する交差反応なく、ラット血漿におけるヒトＩｇＧ１抗体の典型的な薬物動態プロファイルを明らかにした。抗薬物抗体（ＡＤＡ）介在性クリアランスの兆候は検出され得なかった。

Claims (27)

1. ヒト及びカニクイザル補体Ｃ５ａ受容体１（Ｃ５ａＲ）に特異的な単離抗体又は抗体断片であって、
   ａ）配列番号２７の重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）１、配列番号２８のＨＣＤＲ２、配列番号２９のＨＣＤＲ３、配列番号３２の軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）１、配列番号３３のＬＣＤＲ２及び配列番号３４のＬＣＤＲ３、又は
   ｂ）配列番号２７のＨＣＤＲ１、配列番号３９のＨＣＤＲ２、配列番号４０のＨＣＤＲ３、配列番号３２のＬＣＤＲ１、配列番号３３のＬＣＤＲ２及び配列番号３４のＬＣＤＲ３
   を含む、単離抗体又は抗体断片。
2. ａ）配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する可変重鎖ドメイン（ＶＨ）及び配列番号３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）、又は
   ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＬ
   を含む、請求項１に記載の単離抗体又は抗体断片。
3. ａ）配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＬ、又は
   ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号４３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＬ
   を含む、請求項１又は２に記載の単離抗体又は抗体断片。
4. ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号３６のアミノ酸配列を有するＶＬ、又は
   ｂ）配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＨ及び配列番号４３のアミノ酸配列を有するＶＬ
   を含む、請求項１～３の何れか１項に記載の単離抗体又は抗体断片。
5. ａ）配列番号３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）及び配列番号３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）、又は
   ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＨＣ及び配列番号４５のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＬＣ
   を含む、請求項１～４の何れか１項に記載の単離抗体又は抗体断片。
6. ａ）配列番号３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＨＣ及び配列番号３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＬＣ、又は
   ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＨＣ及び配列番号４５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＬＣ
   を含む、請求項１～５の何れか１項に記載の単離抗体又は抗体断片。
7. ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を有するＨＣ及び配列番号３８のアミノ酸配列を有するＬＣ、又は
   ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有するＨＣ及び配列番号４５のアミノ酸配列を有するＬＣ
   を含む、請求項１～６の何れか１項に記載の単離抗体又は抗体断片。
8. 請求項１～７の何れか１項に記載の単離抗体又は抗体断片であって、前記抗体又は抗体断片がヒトＩｇＧ１アイソタイプである、単離抗体又は抗体断片。
9. 請求項１～８の何れか１項に記載の単離抗体又は抗体断片であって、前記抗体又は抗体断片がインビトロでエフェクター機能を誘導しない、単離抗体又は抗体断片。
10. 請求項１～９の何れか１項に記載の単離抗体又は抗体断片であって、前記抗体又は抗体断片が、ＥＵインデックスに従い付番されるＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ及びＰ３３１Ｓの群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を含むヒトＩｇＧ１抗体又は抗体断片である、単離抗体又は抗体断片。
11. インビトロにおいて１５０ｎＭヒトＣ５ａの存在下で、４２ｎＭのＩＣ_５０濃度でヒト顆粒球におけるヒトＣ５ａ誘導性ＣＤ１１ｂ発現を阻害する、請求項１～１０の何れか１項に記載の単離抗体又は抗体断片。
12. モノクローナル抗体又は抗体断片である、請求項１～１１の何れか１項に記載の単離抗体又は抗体断片。
13. ヒト抗体又は抗体断片である、請求項１～１２の何れか１項に記載の単離抗体又は抗体断片。
14. 請求項１～１３の何れか１項に記載の単離抗体又は抗体断片を含む、医薬での使用のための、医薬組成物。
15. 請求項１～１３の何れか１項に記載の抗体又は抗体断片をコードする、少なくとも１つの核酸。
16. 請求項１５に記載の少なくとも１つの核酸を含む、少なくとも１つのベクター。
17. 請求項１６に記載の少なくとも１つのベクター又は請求項１５に記載の少なくとも１つの核酸を含む、宿主細胞。
18. 請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離抗体又は抗体断片と、薬学的に許容可能な担体又は賦形剤と、を含む、医薬組成物。
19. （ａ）抗体又は抗体断片の発現に適切な条件下で、請求項１７に記載の宿主細胞を得る工程、及び
    （ｂ）宿主細胞または宿主細胞培養培地から、抗体又は抗体断片を単離する工程
    を含む、
    請求項１～１３の何れか１項に記載の単離抗体又は抗体断片を産生する方法。
20. 単離抗体又は抗体断片を精製する工程をさらに含む、請求項１９に記載の方法。
21. 精製工程が、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、イオン交換クロマトグラフィー（ＩＥＣ）、ゲル電気泳動、アフィニティークロマトグラフィー及び／又はサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を使用して実行される、請求項２０に記載の方法。
22. 処置を必要とする対象における、Ｃ５ａＲの望ましくない存在と関連する疾患又は障害の処置における医薬の製造のための、請求項１～１３の何れか１項に記載の単離抗体又は抗体断片の使用。
23. 前記疾患又は障害が、自己免疫若しくは炎症性疾患又は増殖性疾患である、請求項２２に記載の使用。
24. 前記疾患又は障害が、関節リウマチ、乾癬、乾癬性関節炎、全身性紅斑性狼瘡、狼瘡腎炎、Ｉ型糖尿病、グレーブズ病、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、過敏性腸症候群、多発性硬化症、自己免疫心筋炎、川崎病、冠動脈疾患、慢性閉塞性肺疾患、間質性肺疾患、自己免疫性甲状腺炎、強皮症、全身性硬化症、変形性関節症、アトピー性皮膚炎、白斑、移植片対宿主病、シェーグレン症候群、自己免疫腎炎、グッドパスチャー症候群、慢性炎症脱髄性多発ニューロパチー、ＡＮＣＡ関連脈管炎、ブドウ膜炎、強皮症、水疱性類天疱瘡、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン舞踏病、嚢胞性線維症、痛風、加齢性黄斑変性、アレルギー、喘息、抗リン脂質抗体症候群、アテローム性動脈硬化症、Ｃ３糸球体症及びＩｇＡ腎症、虚血／再かん流傷害、腹膜炎又は敗血症である、請求項２３に記載の使用。
25. 前記抗体又は抗体断片が、少なくとも１つのさらなる治療剤と共に投与するために処方される、請求項２２～２４の何れか１項に記載の使用。
26. インビトロでの、細胞におけるＣ５ａＲが介在するシグナル伝達の調整のための、請求項１～１３の何れか１項に記載の単離抗体又は抗体断片の使用。
27. 試料を請求項１～１３の何れか１項に記載の単離抗体又は抗体断片と接触させる工程を含む、試料においてＣ５ａＲを検出するインビトロの方法。