JP7618384B2 - Ｐｐａｒアゴニストとｆｘｒアゴニストとの組合せ - Google Patents

Description

Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（３１版、２００４年、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ及びＷｉｌｋｉｎｓ）によれば、肝障害は、種々の疾患群に分類することができ、特に、ウイルス性疾患、薬物及びアルコール関連肝疾患、免疫介在性肝疾患、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患のような様々な疾患、及び肝機能不全（劇症肝不全又は肝細胞癌のような）の合併症に分類することができる。

特に、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）は、アルコールを殆ど又は全く摂取しない個体におけるアルコール誘発性脂肪肝疾患の組織学的特徴を有する一般的な肝障害である（Ｙｅｈ Ｍら、２００７年；Ｍａｒｃｈｅｓｉｎｉら、２００３年）。ＮＡＦＬＤは、細胞内の異常な脂質保持（一般に脂肪化と定義される）が原因であり、この事象は、肝臓が脂質代謝を主として担当するので、この器官内においてより頻繁である。ＮＡＦＬＤは、肝細胞の破壊に起因する肝臓の炎症、脂肪化、壊死及び線維化を特徴とする、脂肪肝及び非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を含む、一連の組織学的形態を有する。ＮＡＦＬＤに関連する状態は様々であり、２型糖尿病、肥満、脂質異常症、メタボリックシンドローム、肝毒性薬物での治療、毒素、感染性因子又は他の外因性原因を含む。

ＮＡＦＬＤは、典型的に、良性の非進行性の臨床経過を辿るが、ＮＡＳＨは、重症になる可能性のある状態であり、２５％もの患者が、高度の線維化、硬変へと進行し、門脈圧亢進症、肝不全及び肝細胞癌の合併症を経験することがあり、このため、早期の正しい評定が必須となる（Ｙｅｈ Ｍら、２００７年）。

肝イメージングシステムは、肝臓構造及び脂肪化の存在も評価するのに有用である。しかし、肝生検は、依然として、肝線維化を評価するための究極の判断基準であるが、この分析方法は、その侵襲性のため、１つ１つの研究に行うことができない。非侵襲的な肝臓生化学及び代謝評価は、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨにおけるような、肝疾患を定義するために使用されることが多い（Ｇｒｅｓｓｎｅｒ Ａら、２００９年；Ｖｕｐｐａｌａｎｃｈｉ Ｒ及びＣｈａｌａｓａｎｉ Ｎ、２００９年）。血漿を使用することにより、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＡＴ）、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＡＴ）、アルカリホスファターゼ（ＡＰ）及び／又はガンマグルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）のような酵素の高いレベル、並びに肝臓に由来する他のタンパク質（ハプトグロビン、総ビリルビン、アルファ－２－ミクログロブリン、レジスチン、切断型又はインタクト型サイトケラチン－１８を含む）の存在が、血清グルコース及びインスリン抵抗性パラメーターに加えて、一般に測定される。ＡＬＡＴ活性レベルは、ＮＡＳＨ患者において増加されることが多い（Ａｎｇｕｌｏ Ｐら、２００２年）ので、この判定基準は、肝損傷を測定するための代替マーカーと見なされる。実際に、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨを正しく診断するための信頼できる非侵襲的方法は得られておらず、組織学的特徴でさえ、ＮＡＦＬＤ又はＮＡＳＨをアルコール性肝疾患のような他の状態と適切に区別するのに必ずしも十分であるとは限らない（Ｙｅｈ Ｍら、２００７年；Ｖｕｐｐａｌａｎｃｈｉ Ｒ及びＣｈａｌａｓａｎｉ Ｎ、２００９年）。

肝線維性疾患、特に、ＮＡＦＬＤ及びＮＡＳＨを有効に治療するための手段は、いまだに不十分である。ＮＡＳＨを有する患者のための治療は確立されておらず、幾つかの治療選択肢が、臨床試験において試験される（Ｖｕｐｐａｌａｎｃｈｉ Ｒ及びＣｈａｌａｓａｎｉ Ｎ、２００９年；Ｄｏｗｍａｎ Ｊ．Ｋら、２００９年）。これらの研究は、多くの異なる化学物質ファミリー（フィブレート、チアゾリジンジオン、ビグアニド、スタチン、カンナビノイド）及び治療標的ファミリー（核内受容体、アンジオテンシン受容体、カンナビノイド受容体、ＨＭＧ－ＣｏＡレダクターゼ）の使用を伴う。最近、チアゾリジンジオン（ロシグリタゾン及びピオグリタゾン）を伴う研究により、これらの薬物は、肝臓の状態を向上させ得ること、しかし、これらの薬物での治療には、より高いうっ血性心不全及び骨粗鬆症リスク、並びに患者に対する精神的影響に伴う体重増加のような、望ましくない効果がないわけではないことが示された（Ｄｏｗｍａｎ Ｊ．Ｋら、２００９年；Ｓｈｉｒｉ－Ｓｖｅｒｄｌｏｖ Ｒら、２００６年；Ｎｅｕｓｃｈｗａｎｄｅｒ－Ｔｅｔｒｉら、２００３年）。カンナビノイドの投与を伴う臨床試験は、神経精神崩壊の懸念を生じさせた（Ｖｕｐｐａｎｃｈｉ Ｒ及びＣｈａｌａｓａｎｉ Ｎ、２００９年）。現在行われている他の治療法は、ＮＡＳＨ薬に関して抗酸化剤としての評定を模索しているが、これらの治療で確信的証拠を示したものはまだない（Ｎｅｌｓｏｎ Ａら、２００９年）。

現在、ＮＡＳＨのための認可された治療はないが、異なる作用機序を有する２つの化合物－オベチコール酸（ＯＣＡ、ＦＸＲアゴニスト）及びエラフィブラノール－が、現在、第３相臨床試験中である。

ＷＯ２００４００５２３３に開示されているＰＰＡＲ－アルファ／デルタ二重アゴニストである、１－［４－メチルチオフェニル］－３－［３，５－ジメチル－４－カルボキシジメチルメチルオキシフェニル］プロパ－２－エン－１－オン（エラフィブラノール、又はＥＬＡ、旧名ＧＦＴ５０５）は、多数の消化器病及び肝疾患、特に、ＰＢＣ（原発性胆汁性胆管炎（ｐｒｉｍａｒｙ ｂｉｌｉａｒｙ ｃｈｏｌａｎｇｉｔｉｃ））及びＰＳＣ（原発性硬化性胆管炎）のような胆汁うっ滞性疾患、又は肝疾患、特に、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）のような非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の治療に有利であり得る特性を有する。

エラフィブラノールは、ＮＡＳＨに関して今までに行われた最大の介入研究である、肝生検に基づく１年の第２ｂ相試験（ＧＦＴ５０５－２１２７）において、ＮＡＳＨにおける臨床的有効性について試験された。今までに８００名を超える患者及び健常ボランティアに投与されたエラフィブラノールは、ＮＡＳＨに有益な特性、特に、ＡＬＡＴ、ＡＳＡＴ、γＧＴ、ＡＬＰを含む、肝機能障害マーカーの向上；インスリン感受性及びグルコース恒常性の向上；血漿トリグリセリド及びＬＤＬ－Ｃの低下並びにＨＤＬ－Ｃレベルの上昇を含む、血漿脂質に対する好適な効果；抗炎症特性；動物疾患モデルにおける組織学的ＮＡＳＨパラメーター（脂肪化、炎症、線維化）に対する有効性－抗線維化活性を含む特性を明示し、２年に及ぶ完全な毒性学的総合発癌性研究において安全性の懸念がないことが確認された。エラフィブラノールは、現在、臨床第３相研究においてＮＡＳＨの治療について評価されている。臨床第２相研究におけるＰＢＣの治療についてのこの分子の評価も開始された。

国際公開第２００４／００５２３３号

Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（３１版、２００４年、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ及びＷｉｌｋｉｎｓ） Ｙｅｈ Ｍら、２００７年 Ｍａｒｃｈｅｓｉｎｉら、２００３年 Ｇｒｅｓｓｎｅｒ Ａら、２００９年 Ｖｕｐｐａｌａｎｃｈｉ Ｒ及びＣｈａｌａｓａｎｉ Ｎ、２００９年 Ａｎｇｕｌｏ Ｐら、２００２年 Ｄｏｗｍａｎ Ｊ．Ｋら、２００９年 Ｓｈｉｒｉ－Ｓｖｅｒｄｌｏｖ Ｒら、２００６年 Ｎｅｕｓｃｈｗａｎｄｅｒ－Ｔｅｔｒｉら、２００３年 Ｎｅｌｓｏｎ Ａら、２００９年

（発明の要旨）
本発明は、
（ｉ）ＰＰＡＲアゴニスト、及び
（ｉｉ）ＦＸＲアゴニスト
を含む、組合せ物に関する。

特定の実施形態において、ＰＰＡＲアゴニストは、エラフィブラノール（以降の説明ではＥＬＡ）のようなＰＰＡＲα／δアゴニスト又はこの薬学的に許容される塩である。

特定の実施形態において、ＦＸＲアゴニストは、胆汁酸ＦＸＲアゴニスト又は非胆汁酸ＦＸＲアゴニストである。さらなる特定の実施形態において、非胆汁酸ＦＸＲアゴニストは、Ｔｒｏｐｉｆｅｘｏｒ（又はＬＪＮ４５２、以降の説明ではＬＪＮ４５２）である。

さらなる特定の実施形態において、ＦＸＲアゴニストは、オベチコール酸（又はＯＣＡ、以降の説明ではＯＣＡ）のような半合成胆汁酸誘導体のような、胆汁酸誘導体、又はこの薬学的に許容される塩、若しくはＩＮＴ－７６７、又はこの薬学的に許容される塩である。

特定の実施形態において、ＦＸＲアゴニストは、ＦＸＲ及びＴＧＲ５（Ｇタンパク質共役型胆汁酸受容体である）に対する二重活性を有する。すなわち、化合物ＩＮＴ－７６７のような二重ＦＸＲ／ＴＧＲ５アゴニスト、又はこの薬学的に許容される塩である。

さらなる特定の実施形態において、本発明の組合せ物は、
（ｉ）ＰＰＡＲ、特に、ＥＬＡのようなＰＰＡＲα／δアゴニスト、又はこの薬学的に許容される塩、
（ｉｉ）ＦＸＲアゴニスト、特に、ＯＣＡ又はこの薬学的に許容される塩、及び
薬学的に許容される担体
を含む組成物である。

別の特定の実施形態において、組合せ物は、
（ｉ）ＰＰＡＲ、特に、ＥＬＡのようなＰＰＡＲα／δアゴニスト又はこの薬学的に許容される塩、及び
（ｉｉ）ＦＸＲアゴニスト、特にＯＣＡ又はこの薬学的に許容される塩
を含む、キットオブパーツ（ｋｉｔ ｏｆ ｐａｒｔｓ）である。

さらなる特定の実施形態において、本発明の組合せ物は、
（ｉ）ＰＰＡＲアゴニスト、特に、ＥＬＡのようなＰＰＡＲα／δアゴニスト又はこの薬学的に許容される塩、
（ｉｉ）二重ＦＸＲ／ＴＧＲ５アゴニスト、特にＩＮＴ－７６７又はこの薬学的に許容される塩、及び
薬学的に許容される担体
を含む組成物である。

別の特定の実施形態において、組合せ物は、
（ｉ）ＰＰＡＲアゴニスト、特に、ＥＬＡのようなＰＰＡＲα／δアゴニスト又はこの薬学的に許容される塩、及び
（ｉｉ）二重ＦＸＲ／ＴＧＲ５アゴニスト、特に、ＩＮＴ－７６７又はこの薬学的に許容される塩
を含むキットオブパーツである。

さらなる特定の実施形態において、本発明の組合せ物は、
（ｉ）ＰＰＡＲアゴニスト、特に、ＥＬＡのようなＰＰＡＲα／δアゴニスト又はこの薬学的に許容される塩、
（ｉｉ）非胆汁酸ＦＸＲアゴニスト、特に、ＬＪＮ４５２又はこの薬学的に許容される塩、
及び薬学的に許容される担体
を含む組成物である。

別の特定の実施形態において、組合せ物は、
（ｉ）ＰＰＡＲアゴニスト、特に、ＥＬＡのようなＰＰＡＲα／δアゴニスト又はこの薬学的に許容される塩、及び
（ｉｉ）非胆汁酸ＦＸＲアゴニスト、特に、ＬＪＮ４５２又はこの薬学的に許容される塩
を含むキットオブパーツである。

本発明のキットオブパーツは、本明細書において言及される疾患のいずれかについての治療における、特に、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、肝硬変、ＰＢＣ又はＰＳＣの治療のための、逐次的使用、別々の使用又は同時使用ためのものである。

本発明は、炎症性、代謝性、線維性及び胆汁うっ滞性疾患を含む、多数の疾患の治療のための方法であって、本発明の組合せ物を、それを必要とする対象に投与することを含む方法にも関する。

特定の実施形態において、個別に投与される（ｉ）及び（ｉｉ）の量の治療効果の合計よりも（ｉ）及び（ｉｉ）の量の併用効果が大きい、相乗的有効量で、（ｉ）及び（ｉｉ）が使用される。本発明のおかけで、患者に投与される化合物（ｉ）及び（ｉｉ）の各々についての量を、個別に投与される前記化合物（ｉ）及び（ｉｉ）の量と比較して、少なくとも１．５分の１、少なくとも２分の１又はさらには少なくとも３分の１以下、例えば少なくとも４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１又は１０分の１に、低減させることができる。例えば、臨床試験において患者に投与されるＥＬＡの量は、８０又は１２０ｍｇ／日であり、臨床試験において患者に投与されるＯＣＡの量は、１０又は２５ｍｇ／日であり、本発明による相乗的量は、３分の１への低減で、２７ｍｇ又は４０ｍｇ／日のＥＬＡ量並びに３及び８ｍｇ／日のＯＣＡ量であり得る。

特定の実施形態において、本発明の組合せ物で治療される患者は、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、肝硬変、ＰＢＣ又はＰＳＣを有する患者である。

別の態様において、本発明は、炎症性、代謝性、線維性又は胆汁うっ滞性疾患のような疾患の治療のための方法における使用のための、本発明の組合せ物に関する。この態様において、組合せ物の成分の各々を、相乗的有効量で使用することができる。さらなる実施形態において、疾患は、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、肝硬変、ＰＢＣ又はＰＳＣである。

さらなる態様において、本発明は、炎症性、代謝性、線維性又は胆汁うっ滞性疾患のような疾患の治療のための医薬品の製造における本発明の組合せ物の使用に関する。この態様において、組合せ物の成分の各々を、相乗的有効量で使用することができる。さらなる実施形態において、疾患は、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、肝硬変、ＰＢＣ又はＰＳＣである。

ＣＤＡＡ／ｃｈｏｌ摂取ラット（ｎ＝１０／群）における肝線維症に対するエラフィブラノール（ＧＦＴ５０５）、ＯＣＡ及びこれらの組合せの効果の図である。 線維化面のパーセンテージは、肝臓断面積に対するピクロシリウス陽性領域の形態学的定量により評定した。データは、平均±ＳＤとして表示されている。スチューデントｔ検定を使用して、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１。クラスカル・ウォリス及び未補正ダン事後検定を使用して、§ｐ＜０．０５、§§ｐ＜０．０１、§§§ｐ＜０．００１、§§§§ｐ＜０．０００１。ＨＳＡ、最高単剤モデル。 ＣＤＡＡ／ｃｈｏｌ摂取ラット（ｎ＝１０／群）における肝コラーゲン含量に対するエラフィブラノール（ＧＦＴ５０５）、ＯＣＡ及びこれらの組合せの効果の図である。 データは、平均±ＳＤとして表示されている。スチューデントｔ検定を使用して、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１。一元配置ＡＮＯＶＡ及び未補正フィッシャー事後検定を使用して、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。クラスカル・ウォリス及び未補正ダン事後検定を使用して、§ｐ＜０．０５、§§ｐ＜０．０１、§§§ｐ＜０．００１、§§§§ｐ＜０．０００１。ＨＳＡ、最高単剤モデル。 ＣＤＡＡ／ｃｈｏｌ摂取ラット肝臓（ｎ＝１０／群）における組織再構築及び炎症に関与する遺伝子の発現に対するエラフィブラノール（ＧＦＴ５０５）、ＯＣＡ及びこれらの組合せの効果の図である。 αＳＭＡ（ＡＣＴＡ２）、ＴＩＭＰ１及びＴＧＦβの発現を、リアルタイム定量的ＰＣＲにより評定した。データは、平均±ＳＤとして表示されている。スチューデントｔ検定を使用して、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１。一元配置ＡＮＯＶＡ及び未補正フィッシャー事後検定を使用して、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。クラスカル・ウォリス及び未補正ダン事後検定を使用して、§ｐ＜０．０５、§§ｐ＜０．０１、§§§ｐ＜０．００１、§§§§ｐ＜０．０００１。ＨＳＡ、最高単剤モデル。 ＣＤＡＡ／ｃｈｏｌ摂取ラット肝臓（ｎ＝１０／群）における組織再構築及び炎症に関与する遺伝子の発現に対するエラフィブラノール（ＧＦＴ５０５）、ＯＣＡ及びこれらの組合せの効果の図である。 αＳＭＡ（ＡＣＴＡ２）、ＴＩＭＰ１及びＴＧＦβの発現を、リアルタイム定量的ＰＣＲにより評定した。データは、平均±ＳＤとして表示されている。スチューデントｔ検定を使用して、＃ｐ＜０．０５、＃＃ｐ＜０．０１、＃＃＃ｐ＜０．００１。一元配置ＡＮＯＶＡ及び未補正フィッシャー事後検定を使用して、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１。クラスカル・ウォリス及び未補正ダン事後検定を使用して、§ｐ＜０．０５、§§ｐ＜０．０１、§§§ｐ＜０．００１、§§§§ｐ＜０．０００１。ＨＳＡ、最高単剤モデル。 ＴＧＦβ誘発性ｈＨＳＣにおけるエラフィブラノール及びＩＮＴ－７６７の差次的抗線維化効果の図である。 血清欠乏性ＨＳＣを、１時間、エラフィブラノール（Ａ）及びＩＮＴ－７６７（Ｂ）と共にプレインキュベートし、その後、線維形成促進性サイトカインＴＧＦβ１（１ｎｇ／ｍｌ）で活性化した。４８時間のインキュベーション後、α－ＳＭＡの発現をＥＬＩＳＡにより測定した。得られた値を、ＴＧＦβ１対照に対する阻害パーセンテージに変換した。データは、平均（４回反復）±標準偏差（ＳＤ）として表示されている。 エラフィブラノールとＩＮＴ－７６７の組合せがＴＧＦβ１誘発性ｈＨＳＣにおけるα－ＳＭＡ産生を相乗的に阻害することを示す図である。 組合せを用量応答行列形式で検定し、エクセス・オーバー・ブリス（ＥＯＢ：Ｅｘｃｅｓｓ Ｏｖｅｒ Ｂｌｉｓｓ）相加作用モデルに従って分析した。エラフィブラノール（行）及びＩＮＴ－７６７（列）の希釈系列を、それらのそれぞれのＤＭＳＯ対照を含めて、調製した。得られた混合物を血清欠乏性ＨＳＣに添加し、１時間後に線維形成促進性サイトカインＴＧＦβ１（１ｎｇ／ｍｌ）で活性化した。（Ａ）全ての組合せペアについてのＴＧＦβ１対照に対するα－ＳＭＡ阻害パーセンテージ。データは、４回反復の平均として表示されている。（Ｂ）ＥＯＢスコアは、材料及び方法における記載の通りに算出した。ＥＯＢ値＞１０を有するいずれの化合物ペアも、相乗的と考えられた（薄灰色から黒色に着色されている）。全ての組合せを含む総ＥＯＢスコアも算出した。（Ｃ）相乗的組合せペアから導出したデータ値を棒グラフ表示でプロットした。データは、平均（４回反復）±標準偏差（ＳＤ）として表示されている。最高単剤に対する組合せ群の比較のためにスチューデントｔ検定を使用して、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１ ＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。

上文で使用の用語「投与すること」は、経口、皮下、舌下、経粘膜、非経口、静脈内、動脈内、頬側、舌下、局所、膣、直腸、眼科的、耳、鼻、吸入、筋肉内、骨内、くも膜下腔内及び経皮投与又はこれらの組合せのような、あらゆる投与方法を含む。好ましい実施形態において、化合物は、経口投与され、特に、１つ以上の錠剤の形態で投与される。

「投与すること」は、特定の化合物を含む剤形を処方すること、又はそのような剤形の処方箋の調剤をすることも、含むことができる。「投与すること」は、特定の化合物又はこの化合物を含む剤形を伴う方法を行うために指示を与えることも含むことができる。

本明細書において使用される場合、用語「疾患」は、疾患、障害、状態、症状又は適応症を指す。この用語は、語句「疾患又は障害」と同義で使用される。

上文で及び本開示を通して用いられる場合、用語「治療有効量」は、関連する障害、状態又は副作用の治療に関して所望の結果を達成するために必要な投薬量で、必要な期間にわたって、有効な量を指す。本発明の成分の有効量が、選択される特定の化合物、成分又は組成物、投与経路、及び個体において所望の応答を惹起する成分の能力によってばかりでなく、緩和すべき状態の病状又は重症度、個体のホルモンレベル、年齢、性別、体重、患者の存在状態、及び治療される状態の重症度、併用薬物療法又はそのときに特定の患者が従う特別食のような因子、並びに当業者が認知する他の因子によっても、患者ごとに異なり、適切な投薬量が最終的には担当医の自由裁量であることは、理解される。投薬レジメンは、治療応答の向上が得られるように調整することができる。有効量は、成分のいかなる毒性又は有害効果よりも治療有益効果のほうが上回る量でもある。

用語「相乗的」は、本明細書において使用される場合、本発明の組合せ物及び方法で達成される効果が、組合せの成分から又は成分の１つを含む方法から、別々に、本明細書の方法及び組成物で用いられる量で得られる効果の合計より、大きいことを意味する。そのような相乗作用は、エクセス・オーバー・ブリス（ＥＯＢ）法を使用することによる方法のような、当技術分野において周知の方法に従って、判定することができる。

本発明の組合せ物は、別々に使用されるその成分の各々に関して達成可能な効果より良好な効果を、特に、相乗的有効量で使用されたとき、達成することができる。「相乗的有効量」は、それを必要とする対象に投与されたとき相乗的効果の達成を可能にする、組合せ物の成分の各々についての量である。言い換えると、成分（ｉ）及び（ｉｉ）が相乗的有効量で使用されたとき、（ｉ）及び（ｉｉ）の量の併用効果は、個別に投与される（ｉ）及び（ｉｉ）の量の治療効果の合計より大きい。上述のように、患者に投与される化合物（ｉ）及び（ｉｉ）の各々についての量を、個別に投与される前記化合物（ｉ）及び（ｉｉ）の量と比較して低減させることができる。例えば、各成分の量は、少なくとも１．５分の１、少なくとも２分の１又はさらには少なくとも３分の１以下、例えば、少なくとも４分の１、５分の１、６分の１、７分の１、８分の１、９分の１又は１０分の１に、低減させることができる。例えば、臨床試験において患者に投与されるＥＬＡの量は、８０又は１２０ｍｇ／日であり、臨床試験において患者に投与されるＯＣＡの量は、１０又は２５ｍｇ／日であり、本発明による相乗的量は、３分の１への低減で、２７ｍｇ又は４０ｍｇ／日のＥＬＡ量及び３又は８ｍｇ／日のＯＣＡ量であり得る。

特定の実施形態によれば、ＰＰＡＲアゴニストは、ＰＰＡＲ－アルファアゴニスト、ＰＰＡＲ－ガンマアゴニスト、ＰＰＡＲ－デルタアゴニスト、ＰＰＡＲ－アルファ／ガンマ二重アゴニスト、ＰＰＡＲアルファ／デルタ二重アゴニスト、ＰＰＡＲガンマ／デルタ二重アゴニスト又はＰＰＡＲ－アルファ／ガンマ／デルタ汎アゴニストである。

特定の実施形態において、組合せ物の成分（ｉｉ）は、
－ 少なくとも１つのＰＰＡＲ－アルファアゴニスト、
－ 少なくとも１つのＰＰＡＲ－ガンマアゴニスト、
－ 少なくとも１つのＰＰＡＲ－デルタアゴニスト、
－ 少なくとも１つのＰＰＡＲ－アルファ／デルタ二重アゴニスト、
－ 少なくとも１つのＰＰＡＲ－アルファアゴニスト及び少なくとも１つのＰＰＡＲデルタアゴニスト、
－ 少なくとも１つのＰＰＡＲ－アルファ／ガンマ二重アゴニスト、
－ 少なくとも１つのＰＰＡＲ－アルファアゴニスト及び少なくとも１つのＰＰＡＲガンマアゴニスト、
－ 少なくとも１つのＰＰＡＲ－ガンマ／デルタ二重アゴニスト、
－ 少なくとも１つのＰＰＡＲ－ガンマアゴニスト及び少なくとも１つのＰＰＡＲデルタアゴニスト、
－ 少なくとも１つのＰＰＡＲ－アルファ／ガンマ／デルタ汎アゴニスト、並びに
－ 少なくとも１つのＰＰＡＲ－アルファアゴニスト、少なくとも１つのＰＰＡＲ－ガンマアゴニスト及び少なくとも１つのＰＰＡＲ－デルタアゴニスト
である。

本発明によれば、用語「ＰＰＡＲアゴニスト」は、脂質及びグルコース恒常性において中心的役割を果たす薬物のクラスである、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アゴニストを指す。ＰＰＡＲαは、主として脂肪酸代謝に影響を与え、その活性化は、脂質レベルを低下させ、その一方で、ＰＰＡＲγは、脂肪生成、エネルギーバランス及び脂質生合成の調節に主として関与する。ＰＰＡＲδは、主に骨格筋及び心筋における、脂肪酸酸化に関与するが、血中グルコース及びコレステロールレベルも調節する。

本発明によれば、用語「ＰＰＡＲアルファアゴニスト」は、本明細書において使用される場合、これらに限定されないが、フェノフィブレート、シプロフィブレート、ペマフィブレート、ゲムフィブロジル、クロフィブレート、ビニフィブレート、クリノフィブレート、クロフィブリン酸、ニコフィブレート、ピリフィブレート、プラフィブリド、ロニフィブレート、テオフィブレート、トコフィブレート及びＳＲ１０１７１を含む。

本発明によれば、用語「ＰＰＡＲガンマアゴニスト」は、本明細書において使用される場合、これらに限定されないが、ロシグリタゾン、ピオグリタゾン、重水素化ピオグリタゾン、エファツタゾン、ＡＴｘ０８－００１、ＯＭＳ－４０５、ＣＨＳ－１３１、ＴＨＲ－０９２１、ＳＥＲ－１５０－ＤＮ、ＫＤＴ－５０１、ＧＥＤ－０５０７－３４－Ｌｅｖｏ、ＣＬＣ－３００１及びＡＬＬ－４を含む。

本発明によれば、用語「ＰＰＡＲデルタアゴニスト」は、本明細書において使用される場合、これらに限定されないが、ＧＷ５０１５１６（Ｅｎｄｕｒａｂｏｌ、すなわち（｛４－［（｛４－メチル－２－［４－（トリフルオロメチル）フェニル］－１，３－チアゾール－５－イル｝メチル）スルファニル］－２－メチルフェノキシ｝酢酸））又はＭＢＸ８０２５（Ｓｅｌａｄｅｌｐａｒ、すなわち｛２－メチル－４－［５－メチル－２－（４－トリフルオロメチル－フェニル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾール－４－イルメチルスルファニル（ｓｙｌｆａｎｙｌ）］－フェノキシ｝－酢酸）又はＧＷ０７４２（［４－［［［２－［３－フルオロ－４－（トリフルオロメチル）フェニル］－４－メチル－５－チアゾリル］メチル］チオ］－２－メチルフェノキシ］酢酸）又はＬ１６５０４１又はＨＰＰ－５９３又はＮＣＰ－１０４６を含む。

本発明によれば、本明細書において使用される用語「ＰＰＡＲアルファ／ガンマアゴニスト」（別名グリタザール）は、これらに限定されないが、サログリタザール、アレグリタザール、ムラグリタザール、テサグリタザール、ＤＳＰ－８６５８を含む。

本発明によれば、本明細書において使用される用語「ＰＰＡＲアルファ／デルタアゴニスト」は、これらに限定されないが、ＥＬＡ又はＴ９１３６５９を含む。

本発明によれば、本明細書において使用される用語「ＰＰＡＲガンマ／デルタアゴニスト」は、これらに限定されないが、共役リノール酸（ＣＬＡ）、Ｔ３Ｄ－９５９を含む。

本発明によれば、本明細書において使用される用語「ＰＰＡＲアルファ／ガンマ／デルタアゴニスト」は、これらに限定されないが、ＩＶＡ３３７（Ｌａｎｉｆｉｂｒａｎｏｒ）又はＴＴＡ（テトラデシルチオ酢酸）又はＢａｖａｃｈｉｎｉｎ又はＧＷ４１４８又はＧＷ９１３５又はベンザフィブラート又はロベグリタゾン又はＣＳ０３８を含む。さらなる実施形態において、ＰＰＡＲアルファ／ガンマ／デルタアゴニストは、２－（４－（５，６－メチレンジオキシベンゾ［ｄ］チアゾール－２－イル）－２－メチルフェノキシ）－２－メチルプロパン酸（ＭＨＹ２０１３）である。

ＰＰＡＲアゴニストは、塩、水和物、溶媒和物、多形又は共結晶の形態であってもよい。ＰＰＡＲアゴニストはまた、塩の水和物、溶媒和物、多形又は共結晶の形態であってもよい。

より特定の実施形態において、ＰＰＡＲアゴニストは、式（Ｉ）の化合物：

（式中、
Ｙ１は、ハロゲン、Ｒａ又はＧａ－Ｒａ基を表し、
Ａは、ＣＨ＝ＣＨ又はＣＨ２－ＣＨ２基を表し、
Ｙ２は、Ｇｂ－Ｒｂ基を表し、
Ｇａ及びＧｂは、同一であり又は異なり、酸素又は硫黄原子を表し、
Ｒａは、水素原子、非置換（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表し、１個以上のハロゲン原子、（Ｃ１～Ｃ６）アルコキシ若しくは（Ｃ１～Ｃ６）アルキルチオ基で置換されている、（Ｃ６～Ｃ１４）アリール基若しくは（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表し、（Ｃ３～Ｃ１４）シクロアルキル基、（Ｃ３～Ｃ１４）シクロアルキルチオ基又は複素環基を表し、
Ｒｂは、少なくとも１つの－ＣＯＯＲｃ基（ここで、Ｒｃは、水素原子を表す）により置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、又は１個以上のハロゲン原子で置換されている若しくは置換されていない（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、又は（Ｃ３～Ｃ１４）シクロアルキル基、又は複素環基を表し、
Ｙ４及びＹ５は、同一であり又は異なり、１個以上のハロゲン原子により置換されている若しくは置換されていない（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基、又は（Ｃ３～Ｃ１４）シクロアルキル基、又は複素環基を表す）
又はこの薬学的に許容される塩である。

式（ＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、
Ｙ１は、ハロゲン、Ｒａ又はＧａ－Ｒａ基を表し、
Ａは、ＣＨ＝ＣＨ基を表し、
Ｙ２は、Ｇｂ－Ｒｂ基を表し、
Ｇａ及びＧｂは、同一であり又は異なり、酸素又は硫黄原子を表し、
Ｒａは、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル又は（Ｃ３～Ｃ１４）シクロアルキル基を表し、特に、１個以上のハロゲン原子により置換されている又は置換されていない、（Ｃ１～Ｃ７）アルキル又は（Ｃ３～Ｃ１４）シクロアルキル基を表し、
Ｒｂは、－ＣＯＯＲ３基により置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表し、ここでのＲｃは、水素原子を表し、又は１～４個の炭素原子を有するアルキル基を表し、
Ｙ４及びＹ５は、独立して、（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基を表す。

式（ＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、
Ｙ１は、Ｒａ又はＧａ－Ｒａ基を表し、
Ａは、ＣＨ２－ＣＨ２基を表し、
Ｙ２は、Ｇｂ－Ｒｂ基を表し、
Ｇａは、酸素又は硫黄原子を表し、Ｇｂは、酸素原子を表し、
Ｒａは、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル又は（Ｃ３～Ｃ７）シクロアルキル基を表し、
Ｒｂは、少なくとも１つの－ＣＯＯＲｃ基により置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表し、ここでのＲｃは、水素原子又は（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基を表し、
Ｙ４及びＹ５は、独立して、（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基を表す。

式（ＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、
Ｙ１は、ハロゲン原子又はＲａ若しくはＧａ－Ｒａ基を表し、
Ａは、ＣＨ２－ＣＨ２基を表し、
Ｙ２は、Ｇｂ－Ｒｂ基を表し、
Ｇａは、酸素又は硫黄原子を表し、Ｇｂは、酸素原子を表し、
Ｒａは、１個以上のハロゲン原子により置換されている、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル又は（Ｃ３～Ｃ１４）シクロアルキル基を表し、
Ｒｂは、１個以上のハロゲン原子で置換されている若しくは置換されていない、及び少なくとも１つの－ＣＯＯＲｃ基により置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を表し、ここでのＲｃは、水素原子又は（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基を表し、
Ｙ４及びＹ５は、（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基を表す。

式（ＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｇｂは、酸素原子であり、Ｒｂは、－ＣＯＯＲｃ基により置換されている（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基であり、ここでのＲｃは、水素原子、又は非置換直鎖若しくは分岐（Ｃ１～Ｃ４）アルキル基を表す。

式（ＩＩＩ）の化合物の特定の実施形態において、Ｙ１は、１個以上のハロゲン原子により置換されている又は置換されていない、直鎖状である又は分岐している、（Ｃ１～Ｃ６）アルキル基を含む、（Ｃ１～Ｃ６）アルキルチオ基である。

特定の実施形態において、式（ＩＩＩ）の化合物は、１－［４－メチルチオフェニル］－３－［３，５－ジメチル－４－カルボキシジメチルメチルオキシフェニル］プロパ－２－エン－１－オン（ＥＬＡ）、１－［４－メチルチオフェニル］－３－［３，５－ジメチル－４－イソプロピルオキシカルボニルジメチルメチルオキシフェニル］プロパ－２－エン－１－オン、１－［４－メチルチオフェニル］－３－［３，５－ジメチル－４－ｔｅｒｔブチルオキシカルボニルジメチルメチルオキシフェニル］プロパ－２－エン－１－オン、１－［４－トリフルオロメチルフェニル］－３－［３，５－ジメチル－４－ｔｅｒｔブチルオキシカルボニルジメチルメチルオキシフェニル］プロパ－２－エン－１－オン、１－［４－トリフルオロメチルフェニル］－３－［３，５－ジメチル－４－カルボキシジメチルメチルオキシフェニル］プロパ－２－エン－１－オン、１－［４－トリフルオロメチルオキシフェニル］－３－［３，５－ジメチル－４－ｔｅｒｔブチルオキシカルボニルジメチルメチルオキシフェニル］プロパ－２－エン－１－オン、１－［４－トリフルオロメチルオキシフェニル］－３－［３，５－ジメチル－４－カルボキシジメチルメチルオキシフェニル］プロパ－２－エン－１－オン、２－［２，６－ジメチル－４－［３－［４－（メチルチオ）フェニル］－３－オキソ－プロピル］フェノキシ］－２－メチルプロパン酸、及び２－［２，６－ジメチル－４－［３－［４－（メチルチオ）フェニル］－３－オキソ－プロピル］フェノキシ］－２－メチル－プロパン酸イソプロピルエステルからなる群の中から選択される。

より特定の実施形態において、ＰＰＡＲアゴニストは、ＥＬＡ又はこの薬学的に許容される塩である。ＥＬＡは、次の構造を有する：

ＥＬＡは、ＷＯ２００４／００５２３３、ＷＯ２００５／００５３６９又はＷＯ２０１１／１４４５７９に記載されている方法により調製することができる。

本発明に従って使用されるＦＸＲアゴニストは、ステロイド性ＦＸＲアゴニストであってもよく、又は非ステロイド性ＦＸＲアゴニストであってもよい。

本発明の実施の際に有用な、説明に役立つ非限定的ＦＸＲアゴニストは、ＷＯ０２０７２５９８、ＷＯ２００５０８２９２５、ＷＯ０３０８０８０３、ＷＯ０４００７５２１、ＷＯ０４０４６１６２、ＷＯ０４０４５５１１、ＷＯ０４０４８３４９、ＷＯ０５０８２９２５、ＷＯ０７１４０１７４、ＷＯ０８０００６４３、ＷＯ０８０２５５４０、ＷＯ０８０２５５３９、ＷＯ０７１４０１８３、ＷＯ０８１５７２７０、ＷＯ０９００５９９８、ＷＯ０９０２７２６４、ＷＯ０９０６２８７４、ＷＯ０９０８０５５５、ＷＯ０９１４９７９５、ＷＯ１００３４６４９、ＷＯ１００３４６５７、ＷＯ１１０２０６１５、ＷＯ１１０３９１３０、ＷＯ１２０８７５１９、ＷＯ１３００７３８７、ＷＯ１４１８４２７１、ＷＯ１５１３８９８６、ＷＯ１６０７３７６７、ＷＯ１６０８６１１５、ＷＯ１６０８６１３４、ＷＯ１６０８６１６９及びＷＯ１６０８６２１８において開示されている。本発明によれば、これらの参考文献において開示されている各々の実施形態及び各々の具体的なＦＸＲアゴニストは、ＰＰＡＲアゴニストと組み合わせて本明細書において個々に開示される。

特定の実施形態によれば、ＦＸＲアゴニストは、オベチコール酸（ＩＮＴ－７４７）、ＧＳ－９６７４、ＬＪＮ－４５２又はＬＪＮ４５２、ＬＪＮ－７６３、ＬＭＢ７６３、ＥＤＰ－３０５、ＡＫＮ－０８３、ＩＮＴ－７６７、ＧＮＦ－５１２０、ＬＹ２５６２１７５、ＩＮＶ－３３、ＮＴＸ－０２３－１、ＥＰ－０２４２９７、ＥＰＹ－００１、Ｐｘ－１０３及びＳＲ－４５０２３からなる群の中から選択される。さらなる特定の実施形態において、ＰＰＡＲアゴニストは、ＥＬＡであり、ＦＸＲアゴニストは、オベチコール酸（ＩＮＴ－７４７）、ＧＳ－９６７４、ＬＪＮ－４５２又はＬＪＮ４５２、ＬＪＮ－７６３、ＬＭＢ－７６３、ＥＤＰ－３０５、ＡＫＮ－０８３、ＩＮＴ－７６７、ＧＮＦ－５１２０、ＬＹ－２５６２１７５、ＩＮＶ－３３、ＮＴＸ－０２３－１、ＥＰ－０２４２９７、ＥＰＹ－００１、Ｐｘ－１０３及びＳＲ－４５０２３からなる群の中から選択される。

特定の実施形態において、ＦＸＲアゴニストは、次の構造を有するＩＮＴ－７６７である：

特定の実施形態において、ＦＸＲアゴニストは、次の構造を有するＬＪＮ４５２である：

別の実施形態において、ＦＸＲアゴニストは、次の構造を有するＬＹ２５６２１７５である：

特定の実施形態において、ＦＸＲアゴニストは、オベチコール酸（ＯＣＡ；６α－エチルケノデオキシコール酸；ＩＮＴ－７４７）又はこの薬学的に許容される塩である。ＯＣＡは、次の化学構造を有する：

ＯＣＡは、ＷＯ２００６１２２９７７に記載されている方法により調製することができる。

本発明の組合せ物は、コラーゲン線維の産生に関与する及び／又は細胞外基質の産生に関与する線維芽細胞の増殖及び／又は活性化の阻害に使用することができる。

本発明の組合せ物は、免疫（例えば、自己免疫）、炎症性、代謝性、線維性又は胆汁うっ滞性疾患のような、疾患の治療に使用することができる。

本発明によれば、用語「自己免疫疾患」は、体内に通常存在する物質及び組織に対する身体の異常な免疫応答から生じる状態を示すために使用される。この疾患は、ある特定の器官に限定されることもあり（例えば、Ｉ型糖尿病若しくは自己免疫性甲状腺炎の場合）、又は異なる位置の特定の組織を侵すこともある（例えば、グッドパスチャー病、肺及び腎臓における基底膜罹患の場合）。

用語「炎症」は、宿主細胞が関与する保護応答、血管が関与する保護応答、並びに細胞／組織損傷の原因を除去する役割、最初の傷害の結果として生じる壊死細胞／組織を除去する役割、及び修復過程を開始させる役割を果たすことができる、タンパク質及び他の媒介因子が関与する保護応答から生じる、状態を示すために使用される。炎症反応は、疼痛、発熱、発赤、腫脹、血管拡張、血流増加及び機能喪失によって顕在化され得る。

用語「線維症」、「線維性疾患」、「線維性障害」及びこれらの悪化は、器官又は組織における線維性結合組織の病的な過剰蓄積状態を意味する。より具体的には、線維症は、組織損傷に対する応答としての、結合組織による、持続的線維性瘢痕形成及び細胞外基質の過剰産生を含む、病態形成過程である。生理学的には、結合組織の蓄積は、基礎となる器官又は組織の構造及び機能を完全に破壊し得る。

本発明によれば、線維症は、いずれの器官又は組織線維症であってもよい。特定の器官線維症の説明に役立つ非限定的な例としては、肝、腎、皮膚、表皮、内皮、筋、腱、軟骨、心、膵、肺、子宮、神経系、精巣、卵巣、副腎、動脈、静脈、結腸、腸（例えば、小腸）、胆管、軟部組織（例えば、縦隔若しくは後腹膜）、骨髄、関節又は胃線維症が挙げられる。

好ましい実施形態において、線維性障害は、肝、消化管、肺、心、腎、筋、皮膚、軟部組織（例えば、縦隔又は後腹膜）、骨髄、腸及び関節（例えば、膝、肩又は他の関節）線維症からなる群の中から選択される。

より好ましい実施形態において、線維性障害は、肝、肺、皮膚、腎及び小腸線維症からなる群の中から選択される。

本発明のより好ましい実施形態において、治療される線維性障害は、次の非網羅的線維性障害リストからなる群の中から選択される：非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肺線維症、特発性肺線維症、皮膚線維症、眼線維症、心内膜心筋線維症、縦隔線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、進行性塊状線維症（炭鉱夫塵肺の合併症）、増殖性線維症、腫瘍性線維症；慢性炎症性気道疾患（ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者肺、結核、ＩＰＦ）に続いての肺線維症；アルコール又は薬物誘発性肝線維症、肝硬変、感染誘発性肝線維症、放射線又は化学療法誘発性線維症、腎性全身性線維症、クローン病、潰瘍性大腸炎、ケロイド、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性強皮症、関節線維症；粘着性関節包炎の一部の形態；原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）及び原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）のような慢性線維化性胆嚢症；胆道閉塞症、家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、着床前後線維症並びに石綿肺。

胆汁うっ滞は、肝細胞による分泌不全（肝細胞胆汁うっ滞）に起因する、又は肝内若しくは肝外胆管を通る胆汁の流れの閉塞（閉塞性胆汁うっ滞）に起因する、胆汁の流れの減少と定義される。臨床診療において、胆汁うっ滞は、肝臓からの胆汁の流れが緩徐化又は遮断される、あらゆる状態である。

炎症性疾患、線維性疾患、代謝性疾患及び胆汁うっ滞性疾患の例としては、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物誘発性肝疾患、アルコール誘発性肝疾患、感染性因子誘発性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能障害媒介肝疾患、脂質異常症、心血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、高血圧；原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）のような、慢性胆管症；胆道閉塞症、家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、ケロイド、陳旧性心筋梗塞、強皮症／全身性強皮症、炎症性疾患、神経変性疾患、がん、肝がん、肝細胞癌、消化器がん、胃がん；神経線維腫症に関連する髄膜腫；膵神経内分泌腫瘍、膵外分泌腫瘍、白血病、骨髄増殖性／骨髄異形成（ｍｙｅｌｏｄｉｓｐｌａｓｔｉｃ）疾患、肥満細胞症、皮膚線維肉腫；乳、肺、甲状腺又は結腸直腸がんを含む、固形腫瘍；前立腺がん、任意の起源の肝線維症又は硬変、代謝性疾患誘発性肝線維症又は硬変、ＮＡＦＬＤ誘発性線維症又は硬変、ＮＡＳＨ誘発性線維症又は硬変、アルコール誘発性肝線維症又は硬変、薬物誘発性肝線維症又は硬変、感染性因子誘発性肝線維症又は硬変、寄生虫感染誘発性肝線維症又は硬変、細菌感染誘発性肝線維症又は硬変、ウイルス感染誘発性線維症又は硬変、ＨＢＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＣＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、二重ＨＣＶ・ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、放射線又は化学療法誘発性線維症又は硬変、胆管線維症；あらゆる慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は硬変；あらゆる原因の消化管線維症；クローン病誘発性線維症、潰瘍性大腸炎誘発性線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、皮膚線維症、表皮線維症、内皮線維症；強皮症／全身性強皮症に起因する皮膚線維症；肺線維症；ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者肺、結核、肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）のような、慢性炎症性気道疾患に続いての、肺線維症；心線維症、腎線維症、腎性全身性線維症、筋線維症、軟部組織（例えば、縦隔又は後腹膜）線維症、骨髄線維症、関節線維症、腱線維症、軟骨線維症、膵線維症、子宮線維症、神経系線維症、精巣線維症、卵巣線維症、副腎線維症、動脈線維症、静脈線維症、眼線維症、心内膜心筋線維症、縦隔線維症、骨髄線維症、後腹膜線維症、進行性塊状線維症（炭鉱夫塵肺の合併症）、増殖性線維症、腫瘍性線維症、着床前後線維症、及び石綿肺、関節線維症、粘着性関節包炎が挙げられる。

特定の実施形態において、疾患は、代謝性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、薬物誘発性肝疾患、アルコール誘発性肝疾患、感染性因子誘発性肝疾患、炎症性肝疾患、免疫系機能障害媒介肝疾患、脂質異常症、心血管疾患、再狭窄、シンドロームＸ、メタボリックシンドローム、糖尿病、肥満、高血圧；原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）のような、慢性胆管症；胆道閉塞症、家族性肝内胆汁うっ滞症３型（ＰＦＩＣ３）、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、肝がん、肝細胞癌、消化器がん、胃がん、結腸直腸がん、代謝性疾患誘発性肝線維症又は硬変、ＮＡＦＬＤ誘発性線維症又は硬変、ＮＡＳＨ誘発性線維症又は硬変、アルコール誘発性肝線維症又は硬変、薬物誘発性肝線維症又は硬変、感染性因子誘発性肝線維症又は硬変、寄生虫感染誘発性肝線維症又は硬変、細菌感染誘発性肝線維症又は硬変、ウイルス感染誘発性線維症又は硬変、ＨＢＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＣＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、二重ＨＣＶ・ＨＩＶ感染誘発性肝線維症又は硬変、放射線又は化学療法誘発性線維症又は硬変、胆管線維症；あらゆる慢性胆汁うっ滞性疾患に起因する肝線維症又は硬変；あらゆる原因の消化管線維症；クローン病誘発性線維症、潰瘍性大腸炎誘発性線維症、腸（例えば、小腸）線維症、結腸線維症、胃線維症、肺線維症；ＣＯＰＤ、喘息、肺気腫、喫煙者肺、結核、肺線維症、特発性肺線維症（ＩＰＦ）のような、慢性炎症性気道疾患に続いての、肺線維症からなる群の中から選択される。

さらなる実施形態において、疾患は、ＮＡＦＬＤ、ＮＡＳＨ、肝線維症、肝硬変、ＰＢＣ又はＰＳＣである。

用語「治療」又は「治療すること」は、それを必要とする対象における障害の治療、予防又は発病予防を指す。治療は、明言された障害を有する対象（例えば、患者）への本発明の組合せ物の投与であって、障害を予防する、治癒させる、遅延させる、好転させる、又は障害の進行を緩徐化し、それによって患者の状態を向上させるための投与を含む。治療は、健常である対象に投与されることもあり、又は免疫（例えば、自己免疫）、炎症性、線維性若しくは胆汁うっ滞性障害を発症するリスクがある対象に投与されることもある。

用語「対象」は、哺乳動物、さらに特にヒトを指す。本発明に従って治療される対象は、過去の及び／又は現行の薬物治療、随伴病態、遺伝子型、リスク因子への曝露のような、免疫（例えば、自己免疫）、炎症性、線維性及び胆汁うっ滞性病態形成過程に関連する幾つかの判定基準に基づいて、並びに任意の適切な免疫学的、生化学的又は酵素的方法によって評価することができる任意の他の関連バイオマーカーに基づいて、適切に選択することができる。

本発明者らは、本明細書において、ＰＰＡＲアゴニストの及びＦＸＲアゴニストの組合せ、特に、ＥＬＡ及びＯＣＡ又はＩＮＴ－７６７の組合せ、特に、ＥＬＡ及びＯＣＡの組合せは、より幅広い患者集団に恩恵をもたらし、相乗的効果を有することができ、それによって、治療用量低減が可能になることを示す。付随する治療用量の低減は、有害薬物効果の発生率を低下させることができる。したがって、本発明は、有害薬物効果の発生率低下を伴う、上文で定義されたような疾患の治療のための方法にも関する。

投与に関する頻度及び／又は量を、当業者は、患者、病態、投与形態等の関数で適応させることができる。典型的に、本発明の組合せ物は、疾患の治療のために、５０ｍｇ／日～５００ｍｇ／日、特に、７０ｍｇ／日～１５０ｍｇ／日のような、１０ｍｇ／日～１０００ｍｇ／日のＥＬＡの用量で、投与することができる。ＯＣＡの用量は、約１０ｍｇ／日～約５０ｍｇ／日の用量のような、５ｍｇ／日～約１００ｍｇ／日に含まれ得る。本発明の特定の実施形態において、ＯＣＡは、ＥＬＡと組み合わせて、ＯＣＡについては１０ｍｇ／日～２５ｍｇ／日の用量、及びＥＬＡについては８０～１２０ｍｇ／日の用量で、使用される。特定の実施形態において、ＯＣＡは、１０又は２５ｍｇ／日で使用され、ＥＬＡは、８０又は１２０ｍｇ／日で使用される。

別の実施形態において、ＰＰＡＲアゴニストとＦＸＲアゴニストの両方の量は、相乗的有効量である。特定の実施形態は、ＰＰＡＲアゴニスト及び／又はＦＸＲアゴニストの１．５分の１、２分の１、２．５分の１、３分の１、３．５分の１、４分の１、４．５分の１、５分の１、５．５分の１、６分の１、６．５分の１、７分の１、７．５分の１、８分の１、８．５分の１、９分の１、８．５分の１、１０分の１への低減又は１０分の１以下への低減を含む。さらなる特定の実施形態において、ＥＬＡ（又はこの薬学的有効量）をＰＰＡＲアゴニストとして、及びＯＣＡ若しくはこの薬学的に許容される塩、又はＩＮＴ－７６７若しくはこの薬学的に許容される塩、又はＬＪＮ４５２若しくはこの薬学的に許容される塩をＦＸＲアゴニストとして組み込むことは、ＥＬＡアゴニスト及び／又はＦＸＲアゴニストの１．５分の１、２分の１、２．５分の１、３分の１、３．５分の１、４分の１、４．５分の１、５分の１、５．５分の１、６分の１、６．５分の１、７分の１、７．５分の１、８分の１、８．５分の１、９分の１、８．５分の１、１０分の１への低減又は１０分の１以下への低減を含む。ＥＬＡ（又はこの薬学的に許容される塩）をＰＰＡＲアゴニストとして組み込み、ＯＣＡ（又はこの薬学的に許容される塩）をＦＸＲアゴニストとして組み込む、さらなる特定の実施形態は、
－ ＥＬＡが５～８０ｍｇ／日の用量で使用され、ＯＣＡが７～１７ｍｇ／日の用量で使用される、両方の成分の量の１．５分の１への低減、
－ ＥＬＡが４０～６０ｍｇ／日の用量で使用され、ＯＣＡが５～１２．５ｍｇ／日の用量で使用される、両方の成分の量の２分の１への低減、
－ ＥＬＡが３２～４８ｍｇ／日の用量で使用され、ＯＣＡが４～１０ｍｇ／日の用量で使用される、両方の成分の量の２．５分の１への低減、
－ ＥＬＡが２７～４０ｍｇ／日の用量で使用され、ＯＣＡが３～８ｍｇ／日の用量で使用される、両方の成分の量の３分の１への低減、
－ ＥＬＡが１６～２４ｍｇ／日の用量で使用され、ＯＣＡが２～５ｍｇ／日の用量で使用される、両方の成分の量の５分の１への低減、
－ ＥＬＡが８～１２ｍｇ／日の用量で使用され、ＯＣＡが１～２．５ｍｇ／日の用量で使用される、両方の成分の量の１０分の１への低減、
等を含む。

特定の実施形態において、本発明の組合せ物の成分の各々についての量は、単一投薬量として１日１回投与され、又は成分を複数回投与することにより、例えば、１日量の半分を、食事中（例えば、昼食及び夕食中に）のように、１日２回、投与することにより投与される。

特定の実施形態において、ＰＰＡＲアゴニスト及びＦＸＲアゴニストは、同時に、逐次的に又は別々に投与される。特定の実施形態において、ＰＰＡＲアゴニスト及びＦＸＲアゴニストは、逐次的に投与され、ＰＰＡＲアゴニストが先ず投与され、次いでＦＸＲアゴニストが投与される、又はＦＸＲアゴニストが先ず投与され、次いでＰＰＡＲアゴニストが投与される。

治療の期間は、治療される状態及び前記状態の病期に依存して大幅に変わり得る。例えば、組合せ物を、少なくとも７、８、９若しくは１０日以上のような、少なくとも２日以上連日；少なくとも１、２、３、４、５、１０、２０、５０、６０、７０若しくは７２週間以上のような、少なくとも１週間以上；少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０若しくは２４カ月以上のような、少なくとも１カ月以上；又は少なくとも１、２、３、４若しくは５年以上のような、少なくとも１年以上、投与することができる。

本発明は、以下の非限定的実施例に関連してさらに説明される。

材料及び方法
慢性ＣＤＡＡ＋１％コレステロールモデル（１２週間）におけるエラフィブラノール、ＯＣＡ、及び組合せエラフィブラノール＋ＯＣＡの評価
単独でのエラフィブラノール（ＧＦＴ５０５）、単独でのＯＣＡ、及び両方の組合せの予防効果を、ＣＤＡＡ＋１％コレステロール飼料を摂取したラットの線維化ＮＡＳＨモデルにおいて評定した。１５０～１７５ｇ雄ウィスターラットに、対照（ＣＳＡＡ）飼料、ＣＤＡＡ＋１％コレステロール飼料、又はエラフィブラノール １、３及び１０ｍｇ／ｋｇ／日、ＯＣＡ １０及び３０ｍｇ／ｋｇ／日若しくは組み合わせた薬物（ＯＣＡ １０ｍｇ／ｋｇ／日と組み合わせたエラフィブラノール １、３及び１０ｍｇ／ｋｇ／日）を補足したＣＤＡＡ＋１％コレステロール飼料を、１２週間にわたって給餌した。

体重及び食物摂取量を、週２回、モニターした。治療の最終日に、ラットを６時間の絶食期間後に屠殺した。肝臓を、生化学的研究及び組織学的研究のために、迅速に切除した。

全ての動物手順は、標準的プロトコールに従って行い、実験動物の適正なケア及び使用に関する基準勧告に従って行った。

組織診断
組織包埋及び切片作製：
肝臓薄片を、先ず、１２時間、ホルマリン４％溶液中で固定した。次いで、肝臓片を、３０分間、ＰＢＳで洗浄し、エタノール溶液（７０、８０、９５及び１００％エタノールでの連続浴）において脱水した。肝臓片を、キシレン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ カタログ番号５３４０５６）の３つの異なる浴においてインキュベートし、続いて２つの浴の流動パラフィン（５６℃）中でインキュベートした。次いで、肝臓片をラックに入れ、組織を完全に覆うようにラックにＨｉｓｔｏｗａｘ（登録商標）を穏やかに充填した。

組織片を含有するパラフィンブロックをラックから取り出し、室温で保管した。肝臓ブロックを３μｍの薄片に切断した。

ヘマトキシリン／エオシン染色
肝臓切片を脱パラフィンし、再水和し、３分間、Ｍａｙｅｒのヘマトキシリン（Ｍｉｃｒｏｍ、カタログ番号Ｆ／Ｃ０３０３）中でインキュベートした。次いで、肝臓切片を水ですすぎ、１分間、エオシンＧ（ＶＷＲ、カタログ番号１．０９８４４．１０００）中でインキュベートした。切片を水ですすぎ、次いで脱水し、ＣＶ Ｍｏｕｎｔ媒体（Ｌｅｉｃａ、カタログ番号１４０４６４３００１１）を使用してマウントした。

ピクロシリウスレッド染色
肝臓切片を脱パラフィンし、再水和し、１５分間、Ｆａｓｔ Ｇｒｅｅｎ ＦＣＦ ０．１％（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、カタログ番号Ｆ７２５８）の溶液中でインキュベートし、その後、０．５％酢酸（Ｐａｎｒｅａｃ、カタログ番号１３１００８．１６１１）浴ですすいだ。次いで、肝臓切片を水ですすぎ、３０分間、飽和ピクリン酸水溶液（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈカタログ番号Ｐ６７４４）中の０．１％シリウスレッド（Ｄｉｒｅｃｔ Ｒｅｄ ８０、Ｆｌｕｋａ カタログ番号４３６６５）の溶液中でインキュベートした。次いで、切片を脱水し、ＣＶ Ｍｏｕｎｔ媒体（Ｌｅｉｃａ、カタログ番号１４０４６４３００１１）を使用してマウントした。

組織学的検査
各肝臓切片源について知らされていない技術者が、組織学的検査を行った。３Ｄ ＨｉｓｔｅｃｈからのＰａｎｎｏｒａｍｉｃ ２５０スキャナーを使用して、バーチャルスライドを生成した。動物ごとに、ＮＡＳＨの主要な組織学的病変を要約するスコアを、ＮＡＳＨ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｎｅｔｗｏｒｋに従って帰属させた（Ｋｌｅｉｎｅｒ ２００５年、Ｂｒｕｎｔ １９９９年）。簡単に言うと、脂肪化、小葉炎症及び肝細胞のバルーニングを点数化した。ＮＡＦＬＤ活動性スコア（ＮＡＳスコア）を、各個体について、脂肪化、小葉炎症及びバルーン傷害等級付けの非重み付き合計として確立した。

Ｑｕａｎｔ Ｃｅｎｔｅｒソフトウェア（３Ｄ Ｈｉｓｔｅｃｈ、このソフトウェアはＰａｔｔｅｒｎ Ｑｕａｎｔモジュール及びＨｉｓｔｏ Ｑｕａｎｔモジュールを含む）を使用して、コラーゲン染色領域を定量した。簡単に言うと、Ｐａｔｔｅｒｎ Ｑｕａｎｔを使用して組織を検出し、その表面を測定した。次いで、Ｈｉｓｔｏ Ｑｕａｎｔを使用して、染色されたコラーゲン含量を検出し、カラー閾値法に基づいてその表面を測定した。次いで、線維化領域を、動物１匹当たりの全組織に対するコラーゲン表面のパーセンテージとして表示した。

肝コラーゲン含量の測定
適切なＱｕｉｃｋＺｙｍｅキット（Ｔｏｔａｌ ｃｏｌｌａｇｅｎ ａｓｓａｙ、カタログ番号ＱＺＢ－ｔｏｔｃｏｌ２）を使用して、肝コラーゲン含量を判定した。このアッセイは、コラーゲンの三重らせんにおいて主として見いだされる非タンパク質構成アミノ酸であるヒドロキシプロリンの検出に基づく。したがって、組織加水分解物中のヒドロキシプロリンを、組織中に存在するコラーゲン（プロコラーゲン、成熟コラーゲン及びコラーゲン分解産物間の区別なく）の量の直接的尺度として使用することができる。

ヒドロキシプロリンを投与する前に、９５℃で６Ｍ ＨＣｌ中での組織試料の完全加水分解が必要とされる。アッセイは、５７０ｎｍで最大吸光度を有する色原体の生成をもたらす。結果を肝臓１ｇ当たりのコラーゲンのｍｇとして表示する。

肝臓遺伝子発現分析
ＲＮｅａｓｙ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を製造業者の説明書に従って使用して、全ＲＮＡをラット肝臓から単離した。１×ＲＴ緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、０．５ｍＭ ＤＴＴ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、０．１８ｍＭ ｄＮＴＰｓ（Ｐｒｏｍｅｇａ）、２００ｎｇ ｐｄＮ６（Ａｍｅｒｓｈａｍ）及び３０ＵのＲＮａｓｅ阻害剤（Ｐｒｏｍｅｇａ）中の、Ｍ－ＭＬＶ ＲＴ（モロニーマウス白血病ウイルス逆転写酵素）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ カタログ番号２８０２５）を使用して、全ＲＮＡをｃＤＮＡに逆転写した。

次いで、ＣＦＸ９６ Ｔｏｕｃｈ（商標）Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏｒａｄ）を使用して、定量的ＰＣＲを行った。簡単に言うと、ＰＣＲ反応は、１μＬの逆転写反応物、０．５μＬのリバース及びフォワードプライマー（各１０ｐｍｏｌ）並びに１２．５μｌの２×ｉＱ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（ＢｉｏＲａｄ）を含有する、２５μｌの全体積で、９６－ＷＰ形式で行い、下記のプライマー配列を使用した：

試料におけるＲｐｌｐ０遺伝子の発現を基準として使用して、発現レベルを正規化した。１００％に近いＰＣＲ反応効率及び１に近い補正係数を有するために最良の点（少なくとも３点）を選択することにより、遺伝子ごとに標準曲線を描いた。ハウスキーピング遺伝子と標的遺伝子の両方についての標準曲線方程式を使用して（各標的遺伝子の特異的ＰＣＲ効率を考慮に入れて）、発現レベルを決定した。

肝線維形成のインビトロモデル（ａ ｖｉｔｒｏ ｍｏｄｅｌ）におけるエラフィブラノールと別のＦＸＲアゴニストの組合せの評価
ｈＨＳＣ培養
ヒト初代肝星状細胞（ｈＨＳＣ）（Ｉｎｎｏｐｒｏｔ）を、２％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ、ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ カタログ番号００１０）、１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ カタログ番号０５０３）及び星状細胞増殖サプリメント（ＳｔｅＣＧＳ；ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ カタログ番号５３５２）を補足したＳＴｅＣＭ培地（ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ カタログ番号５３０１）中で、培養した。細胞培養フラスコを、よりよい接着のために、ポリ－Ｌリシン（Ｓｉｇｍａ カタログ番号Ｐ４７０７）でコーティングした。

組成物の調製：２成分組合せ行列（ＦＸＲアゴニスト／エラフィブラノール）
ＦＸＲアゴニストＩＮＴ－７６７（ＣＡＳ番号１０００４０３－０３－１、カタログ番号ＨＹ－１２４３４、バッチ番号１９２４９）を、Ｈａｏｙｕａｎ Ｃｈｅｍｅｘｐｒｅｓｓから購入した。これらの実験のために、チェッカーボード行列を生成した。ＩＮＴ－７６７及びエラフィブラノールをジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ、Ｆｌｕｋａ カタログ番号４１６４０）に溶解し、３８４ウェルプレートの行（エラフィブラノール）において５点系列で及び列（ＩＮＴ－７６７）おいて１１点系列で系列希釈した。その後、全単剤濃度の１：１混合により、５×１１組合せ行列を生成した。各化合物についての試験濃度は、文献（Ｒｉｚｚｏら；ＭｃＭａｈａｎら）に基づいて選択した。

ＴＧＦ－β１及び化合物治療でのｈＨＳＣの活性化
ｈＨＳＣを、３８４ウェルプレートに、細胞６．５×１０^３個／ウェルの密度で蒔いた。翌日、細胞培養培地を除去し、細胞をＰＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ カタログ番号１４１９０）で洗浄した。２４時間、無血清・無ＳｔｅＣＧＳ培地において、ｈＨＳＣを欠乏させた。ＩＮＴ－７６７及びエラフィブラノール並びにこれらの組合せでの治療のために、血清欠乏性ｈＨＳＣを１時間それらの化合物と共にプレインキュベートし、続いて、さらに４８時間にわたって線維形成促進性刺激剤ＴＧＦ－β１（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ カタログ番号１００－２１、１ｎｇ／ｍＬ）を無血清・無ＳｔｅＣＧＳ培地に添加した。

α－ＳＭＡ ＥＬＩＳＡ
サンドイッチＥＬＩＳＡを使用して、α－ＳＭＡレベルを測定した。簡単に言うと、ＥＬＩＳＡプレートのウェルを、先ず、捕捉抗体（マウスモノクローナル抗ＡＣＴＡ２、Ａｂｎｏｖａ）で、４℃で終夜、コーティングした。ＰＢＳ＋０．２％Ｔｗｅｅｎ２０で３回洗浄した後、ＰＢＳ＋０．２％ＢＳＡからなるブロッキング溶液を１時間にわたって添加し、続いて別の洗浄サイクルを行った。細胞溶解物を捕捉抗体との結合のために２時間にわたって室温でウェルに移入した。洗浄手順後、検出抗体（ビオチン標識マウスモノクローナル抗ＡＣＴＡ２、Ａｂｎｏｖａ）を２時間にわたって室温で添加し、続いて３回洗浄した。検出のために、ストレプトアビジンＨＲＰコンジュゲート（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ カタログ番号ＤＹ９９８）を、先ず、３０分間、室温で適用した。洗浄後、ＨＲＰ基質ＴＭＢ（ＢＤ＃５５５２１４）を添加し、７分間、室温で、暗所でインキュベートした。酸化し次第、ＴＭＢは、水溶性青色反応生成物を形成し、硫酸を添加（溶解停止）するとその反応生成物は黄色になり、これにより、分光光度計を使用する４５０ｎｍでの強度の正確な測定が可能になる。発生する色は、溶解物中に存在するα－ＳＭＡの量と正比例する。

エクセス・オーバー・ブリス（ＥＯＢ）法による相乗作用の判定
αＳＭＡ ＥＬＩＳＡアッセイにおいて得た値を、先ず、ＴＧＦ－β１対照に対する阻害パーセンテージに変換した。次いで、これらの阻害パーセンテージを使用して、ＥＯＢ（エクセス・オーバー・ブリス）を決定して、薬の組合せの相乗効果を定義した。期待ブリス相加作用スコア（Ｅ）を、先ず、方程式：
Ｅ＝（Ａ＋Ｂ）－（Ａ×Ｂ）
（式中、Ａ及びＢは、所与の用量でのエラフィブラノール（Ａ）及びＩＮＴ－７６７（Ｂ）の阻害パーセンテージである）
により決定した。同じ用量での組み合わせたＩＮＴ－７６７／エラフィブラノールについてのブリス期待値と阻害実測値との差が、「エクセス・オーバー・ブリス」スコアである。
－ エクセス・オーバー・ブリススコア＝０は、併用治療が相加的（独立した経路の効果について期待通り）であることを示し、
－ エクセス・オーバー・ブリススコア＞０は、相加的より大きい活性（相乗作用）を示し、
－ エクセス・オーバー・ブリススコア＜０は、組合せが相加的未満（拮抗作用）であることを示す。

組合せＩＮＴ－７６７／エラフィブラノールについて、さらなる総ブリススコアを、全ＥＯＢの総和により算出した。

相乗作用を検証するために、ＦＸＲアゴニスト／エラフィブラノール組合せについての最高ＥＯＢスコアに対応する実験値を棒グラフにプロットした。

最高単剤に対するＩＮＴ－７６７／エラフィブラノール間の差の実測値の有意性を、スチューデントｔ検定により判定した。＊：ｐ＜０．０５；＊＊：ｐ＜０．０１；＊＊＊：ｐ＜０．００１。

結果及び考察
慢性ＣＤＡＡ＋１％コレステロールモデル（１２週間）におけるエラフィブラノール、ＯＣＡ、及び組合せエラフィブラノール＋ＯＣＡの評価
結果を次の表及び図１～３において報告する。

西洋の生活様式は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）（肝線維症及び硬変に進行することが多く、最終的に肝細胞癌に至ることもある、慢性肝疾患）高い発生率に、常に結び付けられる。現在、ＮＡＳＨのための認可されている治療法はない。複数の治療標的に同時に指向される薬の組合せには、薬物応答を劇的に向上させる可能性、及び最も幅広い患者集団に恩恵をもたらす可能性がある。薬の組合せは、高血圧、脂質異常症又は２型糖尿病のような、他の全身性疾患において以前に試験され、基礎疾患のより良好な制御を示し、罹患率及び死亡率を低下させた。最近の第２Ｂ相研究において、エラフィブラノール（ＰＰＡＲα／δアゴニスト）とＯＣＡ（ＦＸＲアゴニスト）の両方が、ＮＡＳＨ及び線維症エンドポイントに対する有効性を示した。本発明者らは、有意義なＮＡＳＨ病態アウトカムに対するそれらの作用を比較すること、および組合せの治療的恩恵を探すことを望んだ。

この目的を達成するために、コレステロールを補足したコリン欠乏Ｌ－アミノ酸規定食（ＣＤＡＡ／ｃｈｏｌ飼料）をウィスターラットに給餌することにより、線維化ＮＡＳＨを誘発した。介入群の動物は、全研究期間にわたってエラフィブラノール若しくはＯＣＡのどちらか、又は両方の化合物を摂取した。ＮＡＳＨ及び線維症発症を組織診断により評価した。異なる関連バイオマーカーを用いて、さらなる生化学分析及び分子分析も行った。

ＣＤＡＡ／ｃｈｏｌ飼料を摂取したウィスターラットは、ＮＡＳＨ関連組織像及び線維化を発生し、重症疾患の浸透率が高かった。高度の脂肪化、小葉炎症及びバルーニングが全ての動物に存在し、ＮＡＳスコア［最小０～最大８］は、６～８であった。肝組織診断（ピクロシリウス陽性領域）及び生化学検査（肝コラーゲン濃度）は、平均で、肝線維化含量の４倍増加を示し、線維化スコアは、薬物治療を受けていないＣＤＡＡ／ｃｈｏｌ飼料を続けた全ての動物について、３又は４のどちらかであった（図１～２）。炎症、組織再構築及び線維化に関連する遺伝子の発現は増加され、疾患が重症であるＮＡＳＨ患者において以前に報告された遺伝子シグネチャーと一致した（図３）。

単独でのエラフィブラノール投与は、線維症発症を減弱させたが、単独でのＯＣＡ投与は、線維症を有意には減弱させない（図１～２）。併用治療は、線維化を低減させる点でより強力であり、これにより、用量の低減が可能であり、ＯＣＡ １０ｍｇ／ｋｇと組み合わせたＧＦＴ５０５ １ｍｇ／ｋｇと３ｍｇ／ｋｇの両方が、線維症に対して同様の有効性を達成した（図１～２）。単独でのどちらか薬物候補の投与は、組織再構築の増加をある程度しか減弱させなかったが、両方の化合物の組合せは、任意の単剤と比較して、より効率的であった（図３）。

したがって、ＣＤＡＡ／ｃｈｏｌ飼料誘発性ＮＡＳＨモデルにおける肝線維症に対するエラフィブラノール及びＯＣＡの相乗作用が、任意の単剤と比較して、両方の薬物候補の有意により低い用量で同等の治療的恩恵を生じさせたことを、本明細書において示す。この研究から、両方の薬物候補の用量を、少なくとも１．５分の１、２分の１、２．５分の１又はさらには少なくとも３分の１に低下させて、個別に使用される各化合物の最初の用量と同様の結果を得ることができることが、確実に予想される。加えて、エラフィブラノールは、肝損傷に対する明確な防御効果を示した。バルーニング及び小葉炎症に対するＯＣＡの効果は、このモデルではかなり小規模であった。この研究から、エラフィブラノール／ＯＣＡの組合せは、より幅広い患者集団に恩恵をもたらし、付随する治療用量の低減は、有害副作用の発生率を低下させると、結論付けることができる。

肝線維形成のインビトロモデル（ａ ｖｉｔｒｏ ｍｏｄｅｌ）におけるエラフィブラノール及び別のＦＸＲアゴニストの組合せの評価
結果を図４～５において報告する。

分化筋線維芽細胞の異常な存続は、多くの線維性疾患の特徴である。
肝損傷後、静止ＨＳＣは、（α－ＳＭＡ）陽性筋線維芽細胞への分化を特徴とする活性化過程を辿る。

ＰＰＡＲアゴニストエラフィブラノールは、線維形成促進性サイトカインＴＧＦβ１で活性化されたｈＨＳＣにおいて抗線維化活性を明示した。α－ＳＭＡマーカーは、試験したエラフィブラノールの最高用量（５μＭ）を用いて６８％まで低減された（図４Ａ）。単独でのＩＮＴ－７６７は、試験した最高用量（３０μＭ）でα－ＳＭＡの産生をわずかに１３％しか阻害しなかった（図４Ｂ）。エラフィブラノールとＩＮＴ－７６７の組合せが線維化を相乗的に低減させることができるかどうかを評価するために、組合せ行列実験をＴＧＦβ誘発ＨＳＣにおいて行った。簡単に言うと、ＩＮＴ－７６７及びエラフィブラノール溶液をチェッカーボード形式で系列希釈して、ＩＮＴ－７６７／エラフィブラノール比の大パネルを包含する５５組合せ行列を生成した。相乗作用を、先ず、エクセス・オーバー・ブリススコアを算出するにより判定した。これらの実験は、エラフィブラノールが、ＩＮＴ－７６７と相乗作用して活性化ＨＳＣにおけるα－ＳＭＡ産生を低減させることができることを明らかにした（図５）。２．５μＭのエラフィブラノール及び１．９μＭのＩＮＴ－７６７を用いた、相乗作用の最高の例の１つを、図５Ｃに示す。１．９μＭの単独のＩＮＴ－７６７は、抗線維化活性を一切示さないが、２．５μＭのエラフィブラノールへのその添加は、エラフィブラノールの活性を相乗的に増大させ、（２．５μＭの単独でのエラフィブラノールに関する２６％と比較して）６９％までの阻害に達した。

結論として、線維形成に対するエラフィブラノールと異なるクラスのＦＸＲアゴニストの相乗作用は、複数のタイプの線維性疾患におけるそのような組合せの潜在的利点を示す。

Claims (8)

1. 線維性疾患を治療するための方法において使用するための組合せ物であって、該組合せ物は、
   （ｉ）エラフィブラノール（ＥＬＡ）又はこの薬学的に許容される塩、及び
   （ｉｉ）ＦＸＲアゴニスト
   を含み、
   前記ＦＸＲアゴニストが、オベチコール酸（ＯＣＡ）又はこの薬学的に許容される塩である、組合せ物。
2. 線維性疾患を治療するための方法において使用するための組合せ物であって、該組合せ物は、
   （ｉ）エラフィブラノール（ＥＬＡ）又はこの薬学的に許容される塩、及び
   （ｉｉ）ＦＸＲアゴニスト
   を含み、
   前記ＦＸＲアゴニストが、ＩＮＴ－７６７又はこの薬学的に許容される塩である、組合せ物。
3. 肝線維症を治療するための方法において使用するための組合せ物であって、該組合せ物は、
   （ｉ）エラフィブラノール（ＥＬＡ）又はこの薬学的に許容される塩、及び
   （ｉｉ）ＦＸＲアゴニスト
   を含み、
   前記ＦＸＲアゴニストが、オベチコール酸（ＯＣＡ）又はこの薬学的に許容される塩である、組合せ物。
4. 肝線維症を治療するための方法において使用するための組合せ物であって、該組合せ物は、
   （ｉ）エラフィブラノール（ＥＬＡ）又はこの薬学的に許容される塩、及び
   （ｉｉ）ＦＸＲアゴニスト
   を含み、
   前記ＦＸＲアゴニストが、ＩＮＴ－７６７又はこの薬学的に許容される塩である、組合せ物。
5. （ｉ）、（ｉｉ）及び薬学的に許容される担体の組成物である、請求項１～４のいずれか一項に記載の組合せ物。
6. （ｉ）及び（ｉｉ）を含むキットオブパーツである、請求項１～５のいずれか一項に記載の組合せ物。
7. （ｉ）及び（ｉｉ）が、疾患の治療のための相乗的有効量で存在する、請求項１～６のいずれか一項に記載の組合せ物。
8. ＥＬＡが、５～８０ｍｇ／日の用量で投与され、ＯＣＡが、７～１７ｍｇ／日の用量で投与される、
   ＥＬＡが、４０～６０ｍｇ／日の用量で投与され、ＯＣＡが、５～１２．５ｍｇ／日の用量で投与される、
   ＥＬＡが、３２～４８ｍｇ／日の用量で投与され、ＯＣＡが、４～１０ｍｇ／日の用量で投与される、
   ＥＬＡが、２７～４０ｍｇ／日の用量で投与され、ＯＣＡが、３～８ｍｇ／日の用量で投与される、
   ＥＬＡが、１６～２４ｍｇ／日の用量で投与され、ＯＣＡが、２～５ｍｇ／日の用量で投与される、又は
   ＥＬＡが、８～１２ｍｇ／日の用量で投与され、ＯＣＡが、１～２．５ｍｇ／日の用量で投与される、
   請求項１～７のいずれか一項に記載の組合せ物。

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