JP7627468B2 - Composition for improving skin barrier function, composition for promoting tight junction formation, and composition for promoting synthesis of ceramide precursor in stratum corneum - Google Patents
Composition for improving skin barrier function, composition for promoting tight junction formation, and composition for promoting synthesis of ceramide precursor in stratum corneum Download PDFInfo
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Description
本発明は、皮膚バリア機能改善用組成物、タイトジャンクション形成促進用組成物及び角層セラミド前駆体合成促進用組成物、並びにその応用品に関する。 The present invention relates to a composition for improving skin barrier function, a composition for promoting the formation of tight junctions, and a composition for promoting the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum, as well as applications thereof.
皮膚は、表皮、真皮、皮下組織の３層から構成され、その中でも表皮は、皮膚の最外層として外界と接している。表皮は、表面側から順に角層、顆粒層、有棘層、及び基底層の４層から構成され、皮膚の水分量を保持したり、外部からの異物が生体内に侵入するのを防ぐ、バリア機能を有する。 The skin is composed of three layers: the epidermis, dermis, and subcutaneous tissue. Of these, the epidermis is the outermost layer of the skin and is in contact with the outside world. The epidermis is composed of four layers, from the surface side: the stratum corneum, stratum granulosum, stratum spinosum, and stratum basale, and has a barrier function that maintains the skin's moisture content and prevents foreign substances from entering the body from the outside.
一般的に、皮膚におけるバリア機能は、経皮水分蒸散量（Ｔｒａｎｓｅｐｉｄｅｒａｍａｌ ｗａｔｅｒ ｌｏｓｓ、ＴＥＷＬ）によって評価される。経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）は、皮膚からの水分蒸散量であり、生体内から角層を通じて揮発する水分量のことを表す。皮膚のバリア機能が低下すると、経皮水分蒸散量が増加し、皮膚からの水分の喪失が増える。 Generally, the barrier function of the skin is evaluated by transepidermal water loss (TEWL). Transepidermal water loss (TEWL) is the amount of water lost from the skin, and represents the amount of water that evaporates from the body through the stratum corneum. When the barrier function of the skin is weakened, the amount of transepidermal water loss increases, and water loss from the skin increases.
一方、皮膚のバリア機能には、角層に基づくバリア機能（セラミドやヒアルロン酸等）と角層に隣接する顆粒層に基づくバリア機能（タイトジャンクション）がある。タイトジャンクションによるバリア機能が低下すると、角層に基づくバリア機能にも影響し、肌の乾燥や肌荒れ、さらには皮膚老化等の問題が起こるため、近年では、皮膚のバリア機能として、角層に基づくバリア機能だけでなく、タイトジャンクションによるバリア機能も注目されている。 On the other hand, the skin's barrier function consists of a barrier function based on the stratum corneum (ceramides, hyaluronic acid, etc.) and a barrier function based on the granular layer adjacent to the stratum corneum (tight junctions). If the barrier function based on the tight junctions is weakened, it also affects the barrier function based on the stratum corneum, causing problems such as dry skin, rough skin, and even skin aging. Therefore, in recent years, attention has been focused not only on the barrier function based on the stratum corneum, but also on the barrier function based on tight junctions as a barrier function of the skin.
例えば、タイトジャンクション形成を促進するものとして、サボテン科ウチワサボテン属に属する植物の果実から得られるカクタスフルーツ果実抽出物からなる皮膚バリア機能改善剤（特許文献１）、ツバメの巣エキスを有効成分とするタイトジャンクション形成促進剤（特許文献２）等が報告されている。 For example, as agents that promote the formation of tight junctions, a skin barrier function improving agent made from a cactus fruit extract obtained from the fruit of a plant belonging to the genus Opuntia of the Cactaceae family (Patent Literature 1), and a tight junction formation promoter containing bird's nest extract as an active ingredient (Patent Literature 2) have been reported.
また、角層に基づくバリア機能においても、セラミド合成を促進するもの等が研究されている。例えば、米ぬか、米胚芽等の植物素材から得られたグルコシルセラミドが皮膚中に内因性セラミド（角層セラミド）を増加させること（特許文献３）、ムラサキバレンギク、ラベンダーから選択される１種又は２種を有効成分とする、セラミド産生促進剤(特許文献４)等が報告されている。 In addition, research is being conducted into substances that promote ceramide synthesis in the barrier function based on the stratum corneum. For example, it has been reported that glucosylceramide obtained from plant materials such as rice bran and rice germ increases endogenous ceramide (stratum corneum ceramide) in the skin (Patent Document 3), and a ceramide production promoter containing one or two active ingredients selected from Echinacea purpurea and lavender (Patent Document 4).
特許文献１，２で開示されているように、植物等に由来される皮膚バリア機能改善剤やタイトジャンクション形成促進剤が報告され、特許文献３，４に開示されているように、植物等に由来されるセラミド合成を促進する種々のセラミド合成促進剤が報告されている。このように、皮膚のバリア機能改善等に対する需要は高まっており、皮膚バリア機能改善作用、タイトジャンクション形成促進作用、角層セラミド前駆体合成促進作用ついての新たな成分の開発が求められている。 As disclosed in Patent Documents 1 and 2, skin barrier function improvers and tight junction formation promoters derived from plants and the like have been reported, and as disclosed in Patent Documents 3 and 4, various ceramide synthesis promoters that promote ceramide synthesis derived from plants and the like have been reported. Thus, there is an increasing demand for improving the skin barrier function, and there is a demand for the development of new ingredients that improve the skin barrier function, promote the formation of tight junctions, and promote the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum.
かかる状況下、本発明の目的は、皮膚バリア機能改善用組成物、タイトジャンクション形成促進用組成物及び角層セラミド前駆体合成促進用組成物、並びにその応用品を提供することである。 Under these circumstances, the object of the present invention is to provide a composition for improving skin barrier function, a composition for promoting the formation of tight junctions, and a composition for promoting the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum, as well as applications thereof.
本発明者は、上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物が皮膚バリア機能改善、タイトジャンクション形成促進、角層セラミド前駆体合成促進に優れた効果を有することを見出し、本発明に至った。 As a result of intensive research aimed at solving the above problems, the inventors discovered that asparagus extract or a fraction of said extract has excellent effects on improving skin barrier function, promoting the formation of tight junctions, and promoting the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum, and thus arrived at the present invention.
すなわち、本発明は、以下の発明に係るものである。
＜１＞ アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物を含有する皮膚バリア機能改善用組成物。
＜２＞ 皮膚バリア機能改善作用が、タイトジャンクション形成促進作用及び角層セラミド前駆体合成促進作用のいずれか一方に基づく＜１＞に記載の組成物。
＜３＞ 前記アスパラガス抽出物が、アスパラガスの水、エタノール及びブチレングリコールから選択される１種以上の抽出溶媒による溶媒抽出物である＜１＞又は＜２＞に記載の組成物。
＜４＞ アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物を含有するタイトジャンクション形成促進用組成物。
＜５＞ クローディン１発現及び／又はクローディン４発現を促進するための＜４＞に記載のタイトジャンクション形成促進用組成物。
＜６＞ アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物を含有する角層セラミド前駆体合成促進用組成物。
＜７＞ セリンパルミトイルトランスフェラーゼ発現、セラミドシンセサーゼ発現、及びスフィンゴミエリンシンセサーゼ発現から選択される１種以上を促進するための＜６＞に記載の角層セラミド前駆体合成促進用組成物。
＜８＞ 医薬用である、＜１＞から＜７＞のいずれかに記載の組成物。
＜９＞ 皮膚外用用（但し、医薬用である場合を除く。）である、＜１＞から＜７＞のいずれかに記載の組成物。
＜１０＞ 経口用（但し、医薬用である場合を除く。）である、＜１＞から＜７＞のいずれかに記載の組成物。
That is, the present invention relates to the following inventions.
<1> A composition for improving skin barrier function, comprising an asparagus extract or a fraction of the extract.
<2> The composition according to <1>, wherein the skin barrier function improving effect is based on either one of an effect of promoting the formation of tight junctions or an effect of promoting the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum.
<3> The composition according to <1> or <2>, wherein the asparagus extract is a solvent extract of asparagus with one or more extraction solvents selected from water, ethanol, and butylene glycol.
<4> A composition for promoting tight junction formation, comprising an asparagus extract or a fraction of the extract.
<5> The composition for promoting tight junction formation according to <4>, for promoting claudin 1 expression and/or claudin 4 expression.
<6> A composition for promoting synthesis of a ceramide precursor in the stratum corneum, comprising an asparagus extract or a fraction of the extract.
<7> The composition for promoting synthesis of a ceramide precursor in the stratum corneum according to <6>, for promoting one or more selected from the expression of serine palmitoyltransferase, ceramide synthesase, and sphingomyelin synthesase.
<8> The composition according to any one of <1> to <7>, which is for pharmaceutical use.
<9> The composition according to any one of <1> to <7>, which is for external use on the skin (excluding cases where it is for pharmaceutical use).
<10> The composition according to any one of <1> to <7>, which is for oral use (excluding cases where it is for pharmaceutical use).
＜１ａ＞ アスパラガスと、抽出溶媒とを接触させることにより、アスパラガス抽出物を得る抽出工程を有することを特徴とする皮膚バリア機能改善用組成物の製造方法。
＜２ａ＞ アスパラガスと、抽出溶媒とを接触させることにより、アスパラガス抽出物を得る抽出工程を有することを特徴とするタイトジャンクション形成促進用組成物の製造方法。
＜３ａ＞ アスパラガスと、抽出溶媒とを接触させることにより、アスパラガス抽出物を得る抽出工程を有することを特徴とする角層セラミド前駆体合成促進用組成物の製造方法。
<1a> A method for producing a composition for improving skin barrier function, comprising an extraction step of obtaining an asparagus extract by contacting asparagus with an extraction solvent.
<2a> A method for producing a composition for promoting tight junction formation, comprising an extraction step of obtaining an asparagus extract by contacting asparagus with an extraction solvent.
<3a> A method for producing a composition for promoting synthesis of a ceramide precursor in the stratum corneum, comprising an extraction step of obtaining an asparagus extract by contacting asparagus with an extraction solvent.
本発明によれば、皮膚バリア機能改善用組成物、タイトジャンクション形成促進用組成物及び角層セラミド前駆体合成促進用組成物、並びにその応用品が提供される。 The present invention provides a composition for improving skin barrier function, a composition for promoting tight junction formation, and a composition for promoting the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum, as well as applications thereof.
以下、本発明について例示物等を示して詳細に説明するが、本発明は以下の例示物等に限定されるものではなく、本発明の要旨を逸脱しない範囲において任意に変更して実施できる。なお、本明細書において、「～」という表現を用いた場合、その前後の数値または物理値を含む意味で用いることとする。また、本明細書において、「Ａ及び／又はＢ」という表現には、「Ａのみ」、「Ｂのみ」、「Ａ及びＢの双方」が含まれる。 The present invention will be described in detail below with reference to examples, but the present invention is not limited to the examples below and can be modified as desired without departing from the spirit of the present invention. In this specification, the expression "~" is used to include the numerical or physical values before and after it. In this specification, the expression "A and/or B" includes "A only," "B only," and "both A and B."
＜１．本発明の皮膚バリア機能改善用組成物＞
本発明は、アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物を含有する皮膚バリア機能改善用組成物（以下、「本発明の皮膚バリア機能改善用組成物」と記載する場合がある）に関する。
<1. Composition for improving skin barrier function of the present invention>
The present invention relates to a composition for improving skin barrier function containing an asparagus extract or a fraction of said extract (hereinafter, may be referred to as "the composition for improving skin barrier function of the present invention").
アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物は、皮膚バリア機能を改善する作用を有し、皮膚バリア機能改善組成物の有効成分として利用することができる。
なお、本発明において、「皮膚バリア機能の改善」は、正常な皮膚バリア機能を維持すること、正常な皮膚バリア機能を向上させること、低下した皮膚バリア機能を回復させることのみならず、皮膚バリア機能の低下を抑制すること、皮膚バリア機能の低下を予防することを含むものとする。
本発明の皮膚バリア機能改善用組成物は、皮膚バリア機能が低下することにより引き起こされる疾患や症状（シワ、肌荒れ、かゆみ、炎症、敏感肌など）の予防、治療、症状の改善の少なくとも一つに対して有用である。すなわち、「予防」には、当該疾患または症状の発症の抑制および遅延が含まれる。また、「治療」には、当該疾患または症状の病態の改善および寛解、並びに当該疾患または症状の進展の抑制が含まれる。
An asparagus extract or a fraction of said extract has the effect of improving the skin barrier function, and can be used as an active ingredient of a composition for improving skin barrier function.
In the present invention, "improving skin barrier function" not only includes maintaining normal skin barrier function, improving normal skin barrier function, and restoring impaired skin barrier function, but also includes suppressing impairment of skin barrier function and preventing impairment of skin barrier function.
The composition for improving skin barrier function of the present invention is useful for at least one of preventing, treating, and improving a disease or symptom (wrinkles, rough skin, itchiness, inflammation, sensitive skin, etc.) caused by a decrease in skin barrier function. That is, "prevention" includes suppressing and delaying the onset of the disease or symptom. Furthermore, "treatment" includes improving and relieving the pathology of the disease or symptom, and suppressing the progression of the disease or symptom.
また、アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物は、皮膚バリア機能改善の効果を有するため、皮膚を保湿する効果を有する。そのため、本発明の組成物は、皮膚保湿用組成物として用いることができる。 In addition, asparagus extract or a fraction of said extract has the effect of improving the skin barrier function, and therefore has the effect of moisturizing the skin. Therefore, the composition of the present invention can be used as a skin moisturizing composition.
本発明において、「皮膚バリア機能」は、経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）を指標として判断することができる。ＴＥＷＬは、皮膚バリア機能が低下すると増加し、皮膚バリア機能が増加すると低下する。ＴＥＷＬの評価方法は実施例における＜２－２．経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）測定における評価＞にて後述する。 In the present invention, the "skin barrier function" can be determined using the transepidermal water loss (TEWL) as an index. TEWL increases when the skin barrier function decreases, and decreases when the skin barrier function increases. The method for evaluating TEWL will be described later in the Examples section <2-2. Evaluation in Transepidermal Water Loss (TEWL) Measurement>.
皮膚バリア機能改善作用は、含有するアスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物に起因してタイトジャンクション形成促進作用及び角層セラミド前駆体合成促進作用のいずれか一方に基づくものである。これらは、どちらか一方でもよく、両方でもよい。 The skin barrier function improving effect is based on either the effect of promoting the formation of tight junctions or the effect of promoting the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum, which is attributable to the asparagus extract or a fraction of said extract contained therein. Either one of these effects or both may be achieved.
また、アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物は、顆粒層に存在するタイトジャンクションの形成を促進する作用を有する。そのため、アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物は、タイトジャンクション形成促進用組成物の有効成分として使用できる。 In addition, asparagus extract or a fraction of said extract has the effect of promoting the formation of tight junctions present in the granular layer. Therefore, asparagus extract or a fraction of said extract can be used as an active ingredient of a composition for promoting the formation of tight junctions.
すなわち、本発明のタイトジャンクション形成促進用組成物は、アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物を有効成分として含有する。
アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物は、角層直下の顆粒層に局在する細胞間結合であるタイトジャンクションの形成を促進することにより、体内からの水分の蒸散を阻害することができるため、皮膚バリア機能が改善される。
That is, the composition for promoting tight junction formation of the present invention contains an asparagus extract or a fraction of said extract as an active ingredient.
Asparagus extract or a fraction of said extract promotes the formation of tight junctions, which are intercellular bonds localized in the granular layer just below the stratum corneum, thereby inhibiting the evaporation of water from the body, thereby improving the skin barrier function.
タイトジャンクション形成促進作用は、タイトジャンクション関連遺伝子の発現を評価することにより判断することができ、具体的には、後述する実施例の評価方法＜２－３－１．タイトジャンクション形成促進作用における評価＞によって評価することができる。 The effect of promoting the formation of tight junctions can be determined by evaluating the expression of tight junction-related genes, and specifically, can be evaluated by the evaluation method described in the Examples below (2-3-1. Evaluation of the effect of promoting the formation of tight junctions).
本発明のタイトジャンクション形成促進用組成物は、タイトジャンクション関連遺伝子のうち、少なくとも一つについての形成促進作用を奏すればよい。タイトジャンクション形成促進の対象となるタイトジャンクション関連遺伝子としては、例えば、クローディン（Ｃｌａｕｄｉｎ）、オクルディン（Ｏｃｃｌｕｄｉｎ）、ＺＯ（Ｚｏｎｕｌａ Ｏｃｃｌｕｄｅｎｓ）等が挙げられる。
この中でもＣｌａｕｄｉｎ１、Ｃｌａｕｄｉｎ４が特に好適な対象である。すなわち、本発明のタイトジャンクション形成促進用組成物は、Ｃｌａｕｄｉｎ１及び／又はＣｌａｕｄｉｎ４の発現が促進されることが好ましく、これらの両方の発現が促進されることが特に好ましい。
The composition for promoting tight junction formation of the present invention may have an effect of promoting the formation of at least one of tight junction-associated genes, such as claudin, occludin, and ZO (Zonula Occludens).
Among these, Claudin 1 and Claudin 4 are particularly preferred targets. That is, the composition for promoting tight junction formation of the present invention preferably promotes the expression of Claudin 1 and/or Claudin 4, and particularly preferably promotes the expression of both of these.
また、アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物は、皮膚の構成要素である有棘層や顆粒層に存在する角層セラミド前駆体の合成を促進する作用を有する。そのため、アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物は、角層セラミド前駆体合成促進用組成物の有効成分としても使用できる。 In addition, asparagus extract or a fraction of said extract has the effect of promoting the synthesis of stratum corneum ceramide precursors present in the stratum spinosum and stratum granulosum, which are components of the skin. Therefore, asparagus extract or a fraction of said extract can also be used as an active ingredient in a composition for promoting the synthesis of stratum corneum ceramide precursors.
すなわち、本発明の角層セラミド前駆体合成促進用組成物は、アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物を有効成分として含有する。アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物は、表皮を構成する４層（角層、顆粒層、有棘層、及び基底層）のうち、顆粒層及び有棘層に存在する角層セラミド前駆体の合成を促進することにより、皮膚の水分保持能を向上させることができるため、皮膚バリア機能が改善される。 That is, the composition for promoting synthesis of stratum corneum ceramide precursors of the present invention contains asparagus extract or a fraction of said extract as an active ingredient. Of the four layers that make up the epidermis (stratum corneum, stratum granulosum, stratum spinosum, and stratum basale), asparagus extract or a fraction of said extract promotes synthesis of stratum corneum ceramide precursors present in the stratum granulosum and stratum spinosum, thereby improving the moisture retention ability of the skin and thereby improving the skin barrier function.
本発明において、「角層セラミド前駆体」は、以下に説明する角層セラミドの合成経路において、角層セラミドを合成する前段階で合成されるものを含む。すなわち、角層セラミド前駆体は、角層セラミドが合成する過程で合成されるジヒドロスフィンゴシン、セラミド、スフィンゴミエリン、グリコシルセラミドから選択される１種以上を含む。
なお、以下の説明において、角層セラミドを合成する前段階で合成される「セラミド」を「角層セラミド」と区別するために、「セラミド（角層外）」と記載する。
In the present invention, the "stratum corneum ceramide precursor" includes those synthesized in a stage prior to the synthesis of stratum corneum ceramide in the synthetic pathway of stratum corneum ceramide described below. That is, the stratum corneum ceramide precursor includes one or more selected from dihydrosphingosine, ceramide, sphingomyelin, and glycosylceramide, which are synthesized in the process of synthesizing stratum corneum ceramide.
In the following description, the "ceramide" synthesized in the stage prior to the synthesis of stratum corneum ceramide is referred to as "ceramide (outside the stratum corneum)" to distinguish it from "stratum corneum ceramide".
以下、表皮における角層セラミドの合成経路について図１に基づいて説明する。
表皮の角層セラミドの合成には、様々な酵素が関与している。まず基底層から有棘層にかけて、角層セラミド合成の第一段階であるセリンとパルミトイル－ＣｏＡの縮合が、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ（Ｓｅｒｉｎｅ ｐａｌｍｉｔｏｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（ＳＰＴ））の働きにより起こり、結果として、ジヒドロスフィンゴシンが合成される。そして、セラミドシンセサーゼ（Ｃｅｒａｍｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ（ＣｅｒＳ））の脂肪酸のＮ－アシル化によりジヒドロスフィンゴシンからセラミド（角層外）が形成される。
The synthetic pathway of stratum corneum ceramide in the epidermis will be described below with reference to FIG.
Various enzymes are involved in the synthesis of stratum corneum ceramide in the epidermis. First, from the basal layer to the spinous layer, the first step of stratum corneum ceramide synthesis, condensation of serine and palmitoyl-CoA, occurs by the action of serine palmitoyltransferase (SPT), resulting in the synthesis of dihydrosphingosine. Then, ceramide (outside the stratum corneum) is formed from dihydrosphingosine by N-acylation of fatty acid by ceramide synthase (CerS).
セラミド（角層外）から角層セラミドが合成される経路は二つある。一つの経路はグルコシルセラミドシンセサーゼ（ＧＣＳ）の働きにより、セラミド（角層外）がグルコシルセラミドに変化して顆粒層に蓄積される。その後、βグルコセレブロシダーゼ（ＧＢＡ）により角層で角層セラミドに合成される経路である（図１の右側経路）。
もう一つの経路はスフィンゴミエリンシンセサーゼ（Ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎ ｓｙｎｔｈａｓｅ（ＳＭＳ））の働きにより、セラミド（角層外）がスフィンゴミエリンに変化して顆粒層に蓄積される。その後、スフィンゴミエリナーゼ（Ａｃｉｄ ｓｐｈｉｎｇｏｍｙｅｌｉｎａｓｅ（ＳＭａｓｅ））により角層で角層セラミドに合成される経路である（図１の左側経路）。
There are two pathways by which ceramide (outside the stratum corneum) is synthesized into stratum corneum ceramide. In one pathway, ceramide (outside the stratum corneum) is converted to glucosylceramide by the action of glucosylceramide synthesase (GCS) and accumulated in the granular layer. Then, β-glucocerebrosidase (GBA) synthesizes stratum corneum ceramide in the stratum corneum (right pathway in Figure 1).
In the other pathway, ceramide (outside the stratum corneum) is converted to sphingomyelin by the action of sphingomyelin synthase (SMS), which accumulates in the granular layer, and then synthesized into sphingomyelin in the stratum corneum by sphingomyelinase (acid sphingomyelinase (SMase)) (the pathway on the left side of Figure 1).
本発明の角層セラミド前駆体合成促進用組成物は、角層セラミド前駆体の合成を促進するものである。本発明の角層セラミド前駆体合成促進用組成物は、角層セラミド前駆体の中でも特に、ジヒドロスフィンゴシン、セラミド（角層外）、スフィンゴミエリンを促進するものが好ましい。 The composition for promoting synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum of the present invention promotes the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum. Among ceramide precursors in the stratum corneum, the composition for promoting synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum of the present invention preferably promotes dihydrosphingosine, ceramide (outside the stratum corneum), and sphingomyelin.
本発明の角層セラミド前駆体合成促進用組成物は、角層セラミド前駆体関連遺伝子のうち、少なくとも一つについての合成促進作用を奏すればよい。
角層セラミド前駆体合成促進の対象となる角層セラミド前駆体関連遺伝子としては、例えば、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ（ＳＰＴ）、セラミドシンセサーゼ（ＣｅｒＳ）、スフィンゴミエリンシンセサーゼ（ＳＭＳ）、グルコシルセラミドシンセサーゼ（ＧＣＳ）等が挙げられる。
この中でもＳＰＴ（ＳＰＴ１、ＳＰＴ２）、ＣｅｒＳ３、ＳＭＳ（ＳＭＳ１、ＳＭＳ２）が特に好適な対象である。すなわち、本発明の角層セラミド前駆体合成促進用組成物は、ＳＰＴ（ＳＰＴ１、ＳＰＴ２）、ＣｅｒＳ３、ＳＭＳ（ＳＭＳ１、ＳＭＳ２）から選択される１種以上の発現が促進されることが好ましく、これらのすべて発現が促進されることが特に好ましい。
The composition for promoting synthesis of a stratum corneum ceramide precursor of the present invention may have the effect of promoting the synthesis of at least one of the stratum corneum ceramide precursor-related genes.
Examples of stratum corneum ceramide precursor-related genes that are targets for promoting the synthesis of stratum corneum ceramide precursors include serine palmitoyltransferase (SPT), ceramide synthesase (CerS), sphingomyelin synthesase (SMS), and glucosylceramide synthesase (GCS).
Among these, SPT (SPT1, SPT2), CerS3, and SMS (SMS1, SMS2) are particularly preferred targets. That is, the composition for promoting synthesis of a ceramide precursor in the stratum corneum of the present invention preferably promotes the expression of one or more selected from SPT (SPT1, SPT2), CerS3, and SMS (SMS1, SMS2), and particularly preferably promotes the expression of all of these.
角層セラミド前駆体合成促進作用は、対象となる角層セラミド前駆体関連遺伝子の発現を評価することにより判断することができ、具体的には、後述する実施例の評価方法＜２－３―２．角層セラミド前駆体合成促進作用における評価＞によって評価することができる。 The effect of promoting synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum can be determined by evaluating the expression of the target ceramide precursor-related gene in the stratum corneum, and specifically, it can be evaluated by the evaluation method described in the Examples below (2-3-2. Evaluation of the effect of promoting synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum).
以下、本発明の皮膚バリア機能改善用組成物、本発明のタイトジャンクション形成促進用組成物及び本発明の角層セラミド前駆体合成促進用組成物についてより詳細に説明する。なお、以下、「本発明の皮膚バリア機能改善用組成物」、「本発明のタイトジャンクション形成促進用組成物」および「本発明の角層セラミド前駆体合成促進用組成物」をまとめて、「本発明の組成物」と称する。 The composition for improving skin barrier function of the present invention, the composition for promoting the formation of tight junctions of the present invention, and the composition for promoting the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum of the present invention will be described in more detail below. Note that hereinafter, the "composition for improving skin barrier function of the present invention," the "composition for promoting the formation of tight junctions of the present invention," and the "composition for promoting the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum of the present invention" will be collectively referred to as the "composition of the present invention."
（アスパラガス）
本発明の組成物の原料として使用される「アスパラガス」は、一般に食用で用いられているアスパラガス・オフィシナリス（Ａｓｐａｒａｇｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）の茎部、切下部及び擬葉を含む概念である。
「茎部」は、アスパラガスの若茎の部分であり、可食部である。また、「切下部」は、アスパラガスの規格外の根元部分とされる部分であり、通常、下から２ｃｍ程度である。これらは、通常廃棄されている。また、「擬葉」は、茎部がさらに伸びた後、枝分かれしてできる茎であり、葉に代わり光合成で養分を作る部分である。
(asparagus)
The "asparagus" used as a raw material for the composition of the present invention is a concept including the stem, cut portion and pseudo-leaves of Asparagus officinalis, which is generally used for food.
The "stalk" is the young stem of asparagus and is the edible part. The "cut part" is the base part of asparagus that does not meet the standard, usually about 2 cm from the bottom. These are usually discarded. The "pseudo-leaves" are stems that branch out after the stem has grown further, and are the part that produces nutrients through photosynthesis in place of leaves.
アスパラガスは、その使用部位に応じて、未加工、又は適当な形状に加工されて使用される。すなわち、アスパラガスの茎部、切下部及び擬葉をそのまま、スライス、粉砕、圧搾またはすりおろす等により、細粒物として使用することもできる。 Asparagus is used either unprocessed or processed into a suitable form depending on the part to be used. That is, the stems, cut parts and pseudo-leaves of asparagus can be used as they are, sliced, crushed, pressed or grated into fine particles.
アスパラガスは、事前処理せずにそのまま溶媒抽出物に使用することもできるが、通常、抽出効率を高めるため、スライス、粉砕、圧搾またはすりおろし等により、細粒物として使用する。 Asparagus can be used for solvent extraction without prior treatment, but is usually prepared in small particles by slicing, crushing, squeezing, or grating to increase the efficiency of the extraction.
本発明において、「抽出物」とは、対象となる原料植物、又はこれを必要に応じて前処理（乾燥、細切）したものを、圧搾又は溶媒抽出する等して、有効成分の含有量を高めた形態のものを総括した概念である。 In the present invention, the term "extract" refers to a general concept that encompasses a form in which the active ingredient content is increased by compressing or solvent extraction of the target raw plant, or a product thereof that has been pretreated (dried or chopped) as necessary.
アスパラガス抽出物は、アスパラガスを抽出原料として得られる抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。なお、抽出液を乾燥して得られる乾燥物も、抽出物に該当するものとする。 Asparagus extract includes any of the extracts obtained using asparagus as the extraction raw material, dilutions or concentrates of the extracts, or crude or refined products thereof. In addition, dried products obtained by drying the extracts are also considered to be extracts.
アスパラガス抽出物を溶媒抽出で得る場合、抽出溶媒は、アスパラガスに含有される皮膚バリア機能改善作用（特には、タイトジャンクション形成促進作用や角層セラミド前駆体合成促進作用）を発現する成分を抽出できるものであればよい。
具体例としては、水、エタノール、イソプロピルアルコール、アセトン、グリセリン、エチレングリコール、ブチレングリコール、プロピレングリコール、メタノール、ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、ヘキサン、エチルアセテート等が挙げられる。また、抽出溶媒としての水は、本発明の効果を損なわない限り、冷水、常温水、温水、熱水等を用いることができる。
これらの抽出溶媒は単独又はこれら２種以上の混合物として使用することができ、２種以上の溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。
When an asparagus extract is obtained by solvent extraction, the extraction solvent should be one that can extract the components contained in asparagus that have the effect of improving skin barrier function (in particular, the effect of promoting the formation of tight junctions and the synthesis of stratum corneum ceramide precursors).
Specific examples include water, ethanol, isopropyl alcohol, acetone, glycerin, ethylene glycol, butylene glycol, propylene glycol, methanol, dichloromethane, dichloroethane, chloroform, hexane, ethyl acetate, etc. As the extraction solvent, cold water, room temperature water, warm water, hot water, etc. can be used as long as the effects of the present invention are not impaired.
These extraction solvents can be used alone or as a mixture of two or more of them. When a mixture of two or more solvents is used as the extraction solvent, the mixing ratio can be appropriately adjusted.
なお、抽出溶媒には、本発明の効果を損なわない範囲で添加剤を含んでいてもよい。例えば、ｐＨ調整剤、粘度調整剤などが挙げられる。 The extraction solvent may contain additives as long as they do not impair the effects of the present invention. Examples include pH adjusters and viscosity adjusters.
抽出効率、環境や生体への安全性及び製造コストの観点等から、アスパラガス抽出物の好適な例は、アスパラガスの水、エタノール及びブチレングリコールから選択される１種以上の抽出溶媒による溶媒抽出物である。
抽出溶媒として、水、エタノール及びブチレングリコールから選択される１種以上の抽出溶媒を使用することにより、優れた皮膚バリア機能改善作用（特には、タイトジャンクション形成促進作用や角層セラミド前駆体合成促進作用）を有するアスパラガス抽出物を得ることができる。
From the viewpoints of extraction efficiency, safety to the environment and living organisms, and production costs, a suitable example of an asparagus extract is a solvent extract of asparagus with one or more extraction solvents selected from water, ethanol, and butylene glycol.
By using one or more extraction solvents selected from water, ethanol, and butylene glycol as the extraction solvent, it is possible to obtain an asparagus extract having excellent skin barrier function improving effects (particularly, the effect of promoting the formation of tight junctions and the effect of promoting the synthesis of stratum corneum ceramide precursors).
抽出溶媒として水とエタノールの混合溶媒を用いる場合、水とエタノールの混合割合は、アスパラガスに含有される皮膚バリア機能改善作用（特には、タイトジャンクション形成促進作用や角層セラミド前駆体合成促進作用）を発現する成分を抽出できる範囲で適宜調整すればよい。例えば、水及びエタノールの混合溶媒を１００体積％とした時に、エタノールの割合が、０．１～９５体積％である。 When using a mixed solvent of water and ethanol as the extraction solvent, the mixing ratio of water and ethanol may be adjusted appropriately within a range that allows extraction of the components contained in asparagus that have the effect of improving skin barrier function (particularly the effect of promoting the formation of tight junctions and the effect of promoting the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum). For example, when the mixed solvent of water and ethanol is 100% by volume, the ratio of ethanol is 0.1 to 95% by volume.
原料であるアスパラガスに対する抽出溶媒の量は特に制限はないが、通常、アスパラガスに対して重量比で１～１００倍量程度である。 There is no particular limit to the amount of extraction solvent used relative to the raw asparagus, but it is usually about 1 to 100 times the amount of asparagus by weight.
アスパラガスから溶媒抽出物を抽出する方法は、アスパラガスに含有される皮膚バリア機能改善作用（特には、タイトジャンクション形成促進作用や角層セラミド前駆体合成促進作用）を発現する成分を抽出できる方法であればよい。
好適なアスパラガス抽出物の製造方法を例示すると、アスパラガスと、抽出溶媒とを接触させ、抽出溶媒中に、アスパラガスから有効成分が十分に抽出されるまで一定時間撹拌する方法が挙げられる。
抽出時間は、抽出溶媒の種類や、アスパラガスと抽出溶媒との割合を考慮し適宜選択されるが、抽出溶媒が水及びエタノールの混合溶媒の場合は、例えば、１～２４時間が挙げられる。
The method for extracting a solvent extract from asparagus may be any method that can extract the components contained in asparagus that have the effect of improving skin barrier function (in particular, the effect of promoting tight junction formation and the effect of promoting the synthesis of stratum corneum ceramide precursors).
A suitable example of a method for producing an asparagus extract includes contacting asparagus with an extraction solvent and stirring for a certain period of time until the active ingredients are sufficiently extracted from the asparagus in the extraction solvent.
The extraction time is appropriately selected taking into consideration the type of extraction solvent and the ratio of asparagus to the extraction solvent. When the extraction solvent is a mixed solvent of water and ethanol, the extraction time may be, for example, 1 to 24 hours.
抽出工程における抽出操作は品質劣化を避けるために常温で行うが、抽出効率を上げるために加温状態にして行うことができる。また、必要に応じて、アスパラガス抽出物の有効成分の割合を高めるために減圧濃縮や凍結乾燥により溶媒除去してもよい。 The extraction process is carried out at room temperature to avoid deterioration of quality, but it can be carried out under heated conditions to increase the extraction efficiency. If necessary, the solvent can be removed by vacuum concentration or freeze-drying to increase the proportion of active ingredients in the asparagus extract.
また、抽出物に含まれる残渣を取り除くため、濾過や遠心分離を行ってもよい。また、得られた抽出液はそのまま利用してもよいが、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。また、必要に応じて、減圧濃縮や凍結乾燥、噴霧乾燥等の濃縮・乾燥により溶媒除去してもよい。 In order to remove any residues contained in the extract, filtration or centrifugation may be performed. The resulting extract may be used as is, or may be subjected to treatments such as dilution, concentration, drying, and purification according to standard methods. If necessary, the solvent may be removed by concentration and drying such as vacuum concentration, freeze drying, and spray drying.
本発明の組成物の有効成分は、原料であるアスパラガスから得られた抽出物を分画したものであってもよい。
本発明において、「抽出物の分画物」は、アスパラガス抽出物に対して、通常用いられるろ過、遠心分離又は精製分離処理等の分画方法によって得ることができる。
また、得られた抽出物の分画物は、アスパラガスに含有される皮膚バリア機能改善作用（特には、タイトジャンクション形成促進作用や角層セラミド前駆体合成促進作用）を発現する成分を少なくとも一つの成分含んでいればよく、その他の成分を含んでいてもよい。
The active ingredient of the composition of the present invention may be a fraction of an extract obtained from the raw asparagus.
In the present invention, the "fraction of the extract" can be obtained by a fractionation method such as filtration, centrifugation, or purification/separation treatment that is commonly used for asparagus extracts.
Furthermore, the fraction of the obtained extract only needs to contain at least one component contained in asparagus that exhibits the effect of improving skin barrier function (in particular, the effect of promoting the formation of tight junctions and the effect of promoting the synthesis of stratum corneum ceramide precursors), and may also contain other components.
分画方法としては、アスパラガスに含有される皮膚バリア機能改善作用（特には、タイトジャンクション形成促進作用や角層セラミド前駆体合成促進作用）を発現する成分が分離できるものであればよい。
分画方法としては、各種クロマトグラフィーを用いることができ、例えば、ゲルろ過カラムクロマトグラフィー、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー等が挙げられる。
これらの分画方法は、単独又はこれら２種以上の方法を組み合わせて使用することができる。
The fractionation method may be any method that can separate the components contained in asparagus that have the effect of improving skin barrier function (particularly the effect of promoting the formation of tight junctions and the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum).
As a fractionation method, various types of chromatography can be used, for example, gel filtration column chromatography, silica gel column chromatography, thin layer chromatography, high performance liquid chromatography, etc.
These fractionation methods can be used alone or in combination of two or more of them.
＜２．本発明の組成物の応用＞
本発明の組成物は、本発明におけるアスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物をそのまま使用してもよいが、通常、本発明の効果を損なわないその他の成分を組み合わせて使用される。
その他の成分としては、ヒトが安全に使用できる成分であればよく、後述する使用形態（医薬用、皮膚外用用、経口用）を考慮して適宜決定される。
その他の成分の配合割合は、本発明の効果を損なわない限りその目的に応じて適宜選択して決定することができる。
2. Application of the composition of the present invention
The composition of the present invention may contain the asparagus extract of the present invention or a fraction of said extract as is, but is usually used in combination with other ingredients that do not impair the effects of the present invention.
The other ingredients may be any ingredients that can be used safely by humans, and are appropriately determined taking into consideration the form of use (medicinal use, topical use on the skin, oral use) described below.
The blending ratio of the other components can be appropriately selected and determined depending on the purpose as long as it does not impair the effect of the present invention.
本発明の組成物は、含有するアスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物に起因して皮膚バリア機能改善作用に対して優れた効果を奏するため、「皮膚バリア機能改善用組成物」として用いることができる。 The composition of the present invention exhibits an excellent effect in improving the skin barrier function due to the asparagus extract or a fraction of said extract contained therein, and therefore can be used as a "composition for improving the skin barrier function."
本発明の組成物は、含有するアスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物に起因してタイトジャンクション形成促進作用及び角層セラミド前駆体合成促進作用に対して優れた効果を奏するため、上述の通り、皮膚バリア機能改善用組成物として使用できる他、「タイトジャンクション形成促進用組成物」、「角層セラミド前駆体合成促進用組成物」として個別に用いることができる。 The composition of the present invention exhibits excellent effects in promoting the formation of tight junctions and the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum due to the asparagus extract or a fraction of said extract contained therein, and therefore, as described above, it can be used as a composition for improving skin barrier function, and can also be used individually as a "composition for promoting the formation of tight junctions" and a "composition for promoting the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum."
本発明の組成物は、その目的に応じて任意の形態で使用することができる。すなわち、医薬用組成物、及び医薬用組成物に該当しない皮膚外用用組成物（化粧料組成物等）、経口用組成物（サプリメント、機能性食品等）等への使用が可能である。 The composition of the present invention can be used in any form depending on the purpose. That is, it can be used in pharmaceutical compositions, compositions for external use on the skin (such as cosmetic compositions) that do not fall under the category of pharmaceutical compositions, oral compositions (such as supplements and functional foods), etc.
本発明の組成物を皮膚バリア機能改善用として用いる場合、含有するアスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物の量は、皮膚バリア機能が関与する症状の種類及び程度、本発明の組成物の形態、使用方法を考慮して、必要量が摂取できるような範囲で適宜決定される。 When the composition of the present invention is used to improve the skin barrier function, the amount of asparagus extract or a fraction of said extract contained therein is appropriately determined within a range that allows the necessary amount to be ingested, taking into consideration the type and severity of symptoms related to the skin barrier function, the form of the composition of the present invention, and the method of use.
また、本発明の組成物をタイトジャンクション形成促進用として用いる場合、含有するアスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物の量は、タイトジャンクション形成が関与する症状の種類及び程度、本発明の組成物の形態、使用方法を考慮して、必要量が摂取できるような範囲で適宜決定される。 When the composition of the present invention is used to promote the formation of tight junctions, the amount of asparagus extract or a fraction of said extract contained therein is appropriately determined within a range that allows the required amount to be ingested, taking into consideration the type and severity of symptoms in which tight junction formation is involved, the form of the composition of the present invention, and the method of use.
また、本発明の組成物を角層セラミド前駆体合成促進用として用いる場合、含有するアスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物の量は角層セラミド前駆体合成が関与する症状の種類及び程度、本発明の組成物の形態、使用方法を考慮して、必要量が摂取できるような範囲で適宜決定される。 When the composition of the present invention is used to promote synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum, the amount of asparagus extract or a fraction of said extract contained therein is appropriately determined within a range that allows the necessary amount to be ingested, taking into consideration the type and severity of symptoms in which synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum is involved, the form of the composition of the present invention, and the method of use.
（医薬組成物）
本発明の組成物の好適な形態の一つは、アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物の有効量を薬学的に許容される基材とともに配合した医薬用の組成物（以下、「本発明の医薬組成物」と記載する場合がある。）である。
Pharmaceutical Compositions
One suitable form of the composition of the present invention is a pharmaceutical composition comprising an effective amount of an asparagus extract or a fraction of said extract formulated together with a pharma- ceutical acceptable carrier (hereinafter, sometimes referred to as the "pharmaceutical composition of the present invention").
本明細書において、「医薬組成物」とは、対象となる疾患の予防、治療、症状の改善の少なくとも一つに対して有用な薬剤を意味する。また、本明細書において、「医薬組成物」には、医薬品のみならず、医薬部外品も含む。 In this specification, the term "pharmaceutical composition" refers to a drug that is useful for at least one of preventing, treating, and improving symptoms of a target disease. In addition, in this specification, the term "pharmaceutical composition" includes not only pharmaceutical products but also quasi-drugs.
本発明の医薬組成物は、アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物以外にもその効能を損なわない範囲で他の薬剤や薬理学的に許容される任意の成分を含んでもよい。 The pharmaceutical composition of the present invention may contain other drugs or any pharmacologically acceptable ingredients in addition to the asparagus extract or a fraction of said extract, as long as the efficacy of the composition is not impaired.
本発明の医薬組成物は、皮膚バリア機能が関与する疾患の予防、治療、症状の改善の少なくとも一つに対して有用である。すなわち、「予防」には、当該疾患または症状の発症の抑制および遅延が含まれる。また、「治療」には、当該疾患または症状の病態の改善および寛解、並びに当該疾患または症状の進展の抑制が含まれる。 The pharmaceutical composition of the present invention is useful for at least one of preventing, treating, and improving symptoms of diseases involving skin barrier function. In other words, "prevention" includes suppressing and delaying the onset of the disease or symptoms. Furthermore, "treatment" includes improving and remitigating the pathology of the disease or symptoms, as well as suppressing the progression of the disease or symptoms.
本発明の医薬組成物の対象となる皮膚バリア機能が関与する疾患又は症状には制限はないが、具体例として例えば、アトピー性皮膚炎、炎症性皮膚炎、ニキビ炎症、アレルギー疾患、湿疹、乾癬等が挙げられる。 There are no limitations on the diseases or symptoms involving skin barrier function that are the subject of the pharmaceutical composition of the present invention, but specific examples include atopic dermatitis, inflammatory dermatitis, acne inflammation, allergic diseases, eczema, psoriasis, etc.
本発明の医薬組成物は、アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物を含有していればよく、どのような形態の薬剤であっても構わない。本発明の医薬組成物の形態としては、錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤、又はカプセル剤等の剤型がある。本発明の医薬組成物の形態は、固体又は液体同士でもよいし、固体と液体でも良いし、特に限定されない。投与方法としては、経口又は非経口であってもよい。本発明の医薬組成物の好適な態様としては、経口剤や皮膚外用剤が挙げられる。 The pharmaceutical composition of the present invention may be in any form as long as it contains an asparagus extract or a fraction of said extract. The pharmaceutical composition of the present invention may be in the form of a tablet, pill, granule, powder, liquid, suspension, syrup, capsule, or the like. The pharmaceutical composition of the present invention may be in the form of a solid or liquid, or a solid and a liquid, and is not particularly limited. The method of administration may be oral or parenteral. Suitable embodiments of the pharmaceutical composition of the present invention include oral preparations and topical preparations for skin.
本発明の医薬組成物は、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。そのため、動物用の医薬組成物とすることもできる。 The pharmaceutical composition of the present invention can also be applied to animals other than humans. Therefore, it can also be made into a pharmaceutical composition for animals.
本発明の医薬組成物の摂取量は、本発明の効果を発揮できる量であれば、特に限定されず、摂取させる対象者の性別、体重、健康状態等に応じて適宜決定される。当該摂取量は、１回で摂取してもよく、１日数回に分けて摂取してもよい。また、対象となる疾患の予防、治療、症状の改善の観点から、本発明の医薬組成物は、持続して摂取することが好ましい。 The amount of intake of the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited as long as it is an amount that can exert the effects of the present invention, and is appropriately determined depending on the sex, weight, health condition, etc. of the subject to be ingested. The intake amount may be taken in one dose, or may be taken in divided doses several times a day. From the viewpoint of prevention, treatment, and improvement of symptoms of the target disease, it is preferable to take the pharmaceutical composition of the present invention continuously.
＜医薬組成物以外の形態＞
上述の通り、アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物は、医薬品、医薬部外品以外の製品に配合してもよい。そのような形態のうち、好適な具体例としては、皮膚外用用組成物や経口用組成物（但し、医薬組成物である場合は除く）が挙げられる。
<Forms other than pharmaceutical compositions>
As mentioned above, the asparagus extract or a fraction thereof may be incorporated into products other than pharmaceuticals and quasi-drugs. Among such forms, preferred examples include compositions for topical application to the skin and compositions for oral administration (excluding pharmaceutical compositions).
（皮膚外用用組成物）
本発明の組成物の好適な形態の一つは、アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物を配合した皮膚外用用組成物（以下、「本発明の皮膚外用用組成物」と記載する場合がある。）である。
(Composition for external use on the skin)
One suitable form of the composition of the present invention is a composition for external application to the skin containing an asparagus extract or a fraction of said extract (hereinafter, sometimes referred to as the "composition for external application to the skin of the present invention").
以下、本発明の皮膚外用用組成物の典型例である化粧料組成物について説明するが、本発明の皮膚外用組成物は化粧料組成物に限定されない。 Below, we will explain a cosmetic composition, which is a typical example of the composition for external application to the skin of the present invention, but the composition for external application to the skin of the present invention is not limited to a cosmetic composition.
本発明の皮膚外用用組成物は、優れた皮膚バリア機能改善作用（特には、タイトジャンクション形成促進作用や角層セラミド前駆体合成促進作用）を有し、上述の通り、皮膚バリア機能が関与する症状を予防又は改善することができる。例えば、皮膚のハリや弾力低下、皮膚の保湿、皮膚のしわの形成等に対する美容効果を得ることができる。 The composition for external application to the skin of the present invention has an excellent effect of improving the skin barrier function (particularly the effect of promoting the formation of tight junctions and the synthesis of stratum corneum ceramide precursors), and as described above, can prevent or improve symptoms involving the skin barrier function. For example, it can provide cosmetic effects against loss of skin firmness and elasticity, skin moisturization, and formation of skin wrinkles.
本発明の皮膚外用用組成物は、慣用の化粧料基材を適宜配合し、所望の剤型とすることができる。その形態は特に制限はないが、化粧水、乳液、ジェル、クリーム、パック、ヘアトニック、ヘアクリームファンデーション、水性軟膏、スプレー等の形態が挙げられる。また、本発明において、化粧料組成物は、入浴剤、ボディーソープ、シャンプー等の入浴用組成物も含む概念である。 The composition for external application to the skin of the present invention can be formulated into a desired formulation by appropriately blending a conventional cosmetic base material. There are no particular limitations on the form, but examples include lotion, milky lotion, gel, cream, pack, hair tonic, hair cream foundation, aqueous ointment, spray, etc. In addition, in the present invention, the cosmetic composition is a concept that also includes bath compositions such as bath additives, body soap, and shampoo.
また、本発明の皮膚外用用組成物には、本発明の効果を損なわない範囲で通常化粧料や皮膚外用医薬、入浴用製品で使用される任意の成分を添加することができる。かかる任意成分の具体例としては、増粘・ゲル化剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、色素剤、金属封鎖剤、防腐剤、ｐＨ調整剤、香料、ミツロウ等が挙げられる。これら任意成分の配合割合は、その目的に応じて適宜選択して決定することができる。 In addition, any ingredient normally used in cosmetics, skin medicines, and bath products can be added to the composition for external use of the present invention, so long as it does not impair the effects of the present invention. Specific examples of such optional ingredients include thickening/gelling agents, antioxidants, UV absorbers, colorants, sequestering agents, preservatives, pH adjusters, fragrances, beeswax, etc. The blending ratio of these optional ingredients can be appropriately selected and determined depending on the purpose.
アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物を、皮膚外用用組成物に配合する割合は任意であるが、皮膚バリア機能改善作用（特には、タイトジャンクション形成促進作用や角層セラミド前駆体合成促進作用）に寄与できる範囲で配合割合が選択される。 The asparagus extract or a fraction of said extract may be mixed into a composition for topical application to the skin at any ratio, but the ratio is selected within a range that contributes to improving the skin barrier function (particularly promoting the formation of tight junctions and the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum).
本発明の皮膚外用用組成物は、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。そのため、動物用の皮膚外用用組成物とすることもできる。 The composition for external application to the skin of the present invention can also be applied to animals other than humans. Therefore, it can also be made into a composition for external application to the skin for animals.
（経口用組成物）
本発明の組成物の好適な形態の一つは、アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物を配合した経口用組成物（以下、「本発明の経口用組成物」と記載する場合がある。）である。
本発明の経口用組成物は、優れた皮膚バリア機能改善作用（特には、タイトジャンクション形成促進作用や角層セラミド前駆体合成促進作用）を有するため、機能性食品、サプリメント等へ好適に使用される。
(Oral Composition)
One suitable form of the composition of the present invention is an oral composition containing an asparagus extract or a fraction of said extract (hereinafter, sometimes referred to as the "oral composition of the present invention").
The oral composition of the present invention has an excellent effect of improving skin barrier function (particularly, the effect of promoting the formation of tight junctions and the effect of promoting the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum), and is therefore suitable for use in functional foods, supplements, and the like.
以下、本発明の経口用組成物の典型例である機能性食品、サプリメント、食品添加剤について説明するが、本発明の経口用組成物は機能性食品、サプリメント、食品添加剤に限定されない。 Below, functional foods, supplements, and food additives, which are typical examples of the oral composition of the present invention, are described, but the oral composition of the present invention is not limited to functional foods, supplements, and food additives.
本発明の経口用組成物の摂取量は、本発明の効果を発揮できる量であれば、特に限定されず、本発明の経口用組成物の形態、摂取させる対象者の性別、体重、健康状態等に応じて適宜決定される。当該摂取量は、１回で摂取してもよく、１日数回に分けて摂取してもよい。また、本発明の経口用組成物の有する作用又は効能を得るために、本発明の経口組成物は、持続して摂取することが好ましい。 The amount of intake of the oral composition of the present invention is not particularly limited as long as it is an amount that can exert the effects of the present invention, and is appropriately determined depending on the form of the oral composition of the present invention, and the sex, weight, health condition, etc. of the subject to be ingested. The intake amount may be taken in one dose, or may be taken in divided doses several times a day. In order to obtain the action or efficacy of the oral composition of the present invention, it is preferable to take the oral composition of the present invention continuously.
本発明の組成物は、日常的に経口摂取しやすいように、各種の食品、飲料と混ぜて機能性食品とすることで、長期的に摂取することも容易である。
ここでいう「機能性食品」とは、一般食品に加えて、健康の維持の目的で摂取する食品及び／又は飲料を意味し、保健機能食品（特定保健用食品、栄養機能食品又は機能性表示食品）や、健康食品、栄養補助食品、栄養保険食品等を含む概念である。この中でも保健機能食品である特定保健用食品、栄養機能食品、機能性表示食品が好ましい機能性食品の態様である。なお、機能性食品として製品化する場合には、食品に用いられる様々な添加剤、具体的には、着色料、保存料、増粘安定剤、酸化防止剤漂白剤、防菌防黴剤、酸味料、調味料、乳化剤、強化剤、製造用剤、香料等を添加していてもよい。
The composition of the present invention can be mixed with various foods and beverages to form functional foods that can be easily taken orally on a daily basis, and can also be easily taken over a long period of time.
The term "functional food" as used herein means, in addition to general foods, foods and/or beverages that are taken for the purpose of maintaining health, and is a concept that includes health functional foods (specified health foods, nutrient functional foods, or functional food), health foods, nutritional supplements, nutritional insurance foods, etc. Among these, health functional foods, such as specified health foods, nutrient functional foods, and functional food, are preferred forms of functional foods. When commercializing functional foods, various additives used in foods, specifically colorants, preservatives, thickening stabilizers, antioxidants, bleaching agents, antibacterial and antifungal agents, acidulants, seasonings, emulsifiers, strengthening agents, manufacturing agents, flavors, etc. may be added.
機能性食品の対象となる、食品、飲料は特に限定されるものではない。例えば、食品として、ソーセージ、ハム、魚介加工品、ゼリー、キャンディー、チューインガムなどの食品類が挙げられる。また、飲料としては、各種の茶類、青汁飲料、清涼飲料水、酒類、栄養ドリンクなどが挙げられる。 There are no particular limitations on the foods and beverages that can be considered functional foods. For example, food products include sausages, ham, processed seafood products, jellies, candies, chewing gum, and other foods. Beverages include various types of tea, green juice drinks, soft drinks, alcoholic beverages, and nutritional drinks.
また、本発明の経口用組成物は、サプリメントの形態として使用することも可能である。サプリメントの形態は、特に制限されず、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、糖衣錠、フィルム剤、トローチ剤、チュアブル剤、溶液、乳濁液、懸濁液等の任意の形態でよい。
本発明のサプリメントは、本発明の組成物以外に、サプリメントとして通常使用される任意の成分を含んでいてもよい。そのような成分としては、例えば、アミノ酸、ペプチド；ビタミンＥ、ビタミンＣ、ビタミンＡ、ビタミンＢ、葉酸等のビタミン類；ミネラル類；糖類；無機塩類；クエン酸またはその塩；茶エキス；油脂；プロポリス、ローヤルゼリー、タウリン等の滋養強壮成分；ショウガエキス、高麗人参エキス等の生薬エキス；ハーブ類：コラーゲン等が挙げられる。
The oral composition of the present invention can also be used in the form of a supplement. The form of the supplement is not particularly limited, and may be any form such as a tablet, powder, granule, capsule, sugar-coated tablet, film, lozenge, chewable, solution, emulsion, suspension, etc.
The supplement of the present invention may contain any ingredient that is generally used as a supplement other than the composition of the present invention.Such ingredients include, for example, amino acids, peptides, vitamins such as vitamin E, vitamin C, vitamin A, vitamin B, folic acid, minerals, sugars, inorganic salts, citric acid or its salts, tea extract, oils and fats, tonic ingredients such as propolis, royal jelly, taurine, herbal extracts such as ginger extract, ginseng extract, herbs: collagen, etc.
アスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物を、機能性食品やサプリメントに配合する割合は任意であるが、皮膚バリア機能改善作用（特には、タイトジャンクション形成促進作用や角層セラミド前駆体合成促進作用）に寄与できる範囲で配合割合が選択される。 The asparagus extract or a fraction of said extract may be mixed into functional foods or supplements at any ratio, but the ratio is selected within a range that contributes to improving the skin barrier function (particularly promoting the formation of tight junctions and the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum).
本発明の経口組成物を保健機能食品として用いる場合、製品において本発明に係るアスパラガス抽出物又は前記抽出物の分画物によりもたらされる作用又は効能が表示されていてもよい。例えば、本発明に係る製品の本体、包装、容器、パッケージ等の収納物、又はその広告等への表示が挙げられる。 When the oral composition of the present invention is used as a health food, the product may display the action or efficacy brought about by the asparagus extract of the present invention or a fraction of said extract. For example, the action or efficacy may be displayed on the product itself, on the contents such as wrapping, container, or packaging of the product of the present invention, or in its advertisements, etc.
また、製品化の際に付される作用又は効能に関する表示としては、例えば、「紫外線に負けない肌に」、「潤いのある肌へ」、「肌の水分を保持する」、「肌をバリアする」、「肌を守る」、「肌のはり低下を防止する」、「シワを防止する」、「肌の水分を保持する」等が挙げられる。 In addition, examples of claims regarding the effects or efficacy that are added to products when they are commercialized include "for skin that can withstand UV rays," "for moisturized skin," "retains moisture in the skin," "provides a skin barrier," "protects the skin," "prevents loss of skin elasticity," "prevents wrinkles," "retains moisture in the skin," etc.
また、本発明の組成物は、それ自体またはこれに他の成分を添加して食品添加剤として使用することも可能である。他の成分は、飲食品添加剤として使用可能であるならば特に制限はない。食品添加剤の添加対象となる飲料、食品についても任意であり、特に制限はない。 The composition of the present invention can also be used as a food additive, either by itself or by adding other ingredients to it. There are no particular limitations on the other ingredients, so long as they can be used as food and beverage additives. There are also no particular limitations on the beverages and foods to which the food additive can be added.
本発明の組成物を、食品添加剤に配合する割合は任意であるが、皮膚バリア機能改善作用（特には、タイトジャンクション形成促進作用や角層セラミド前駆体合成促進作用）に寄与できる範囲で配合割合が選択される。 The composition of the present invention may be mixed into a food additive at any ratio, but the ratio is selected within a range that contributes to improving the skin barrier function (particularly promoting the formation of tight junctions and the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum).
本発明の経口用組成物は、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。そのため、ペットフード等の動物用の経口用組成物とすることもできる。 The oral composition of the present invention can also be applied to animals other than humans. Therefore, it can also be used as an oral composition for animals, such as pet food.
以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
また、実施例の混合溶媒において示す「％」は、特に明示しない限り「体積％」を示す。また、抽出溶媒が混合溶媒の場合、バランスである水は省略して記載する。例えば、「５０％エタノール」と記載した場合、５０体積％エタノールと５０体積％水との混合溶媒を意味する。
The present invention will be described in more detail below with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
In addition, the "%" shown in the mixed solvent in the examples indicates "volume %" unless otherwise specified. In addition, when the extraction solvent is a mixed solvent, the balance of water is omitted. For example, "50% ethanol" means a mixed solvent of 50 volume % ethanol and 50 volume % water.
１．アスパラガス抽出物の調製
以下の方法で、実施例１のアスパラガス抽出物を製造した。
1. Preparation of Asparagus Extract The asparagus extract of Example 1 was produced in the following manner.
＜１－１．アスパラガス乾燥物の調製＞
原料アスパラガスとして、佐賀県産アスパラガス（Ａｓｐａｒａｇｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）を使用した。また、原料アスパラガスとしては、原料アスパラガスを穂先（上部）から２５ｃｍの部分で切り分け、その下部（茎部や切下部）を使用した。原料アスパラガスは、スチームコンベクションオーブンを用いて、１００℃の水蒸気で７分間加熱処理した後、凍結乾燥させた。得られた乾燥物は粉砕し、アスパラガス乾燥粉砕物を得た。
<1-1. Preparation of dried asparagus>
Asparagus (Asparagus officinalis) from Saga Prefecture was used as the raw asparagus. The raw asparagus was cut at a portion 25 cm from the tip (upper part) and the lower part (stalk part and cut part) was used as the raw asparagus. The raw asparagus was heat-treated with steam at 100°C for 7 minutes using a steam convection oven and then freeze-dried. The obtained dried product was pulverized to obtain dried pulverized asparagus.
＜１－２．アスパラガス抽出物の調製＞
上記＜１－１．アスパラガス乾燥物の調製＞で得られたアスパラガス乾燥粉砕物に対して重量比で２０倍量の８０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液を加え、室温で４時間撹拌抽出を行った。その後、遠心分離（１２，０００×ｇ，３０分，４℃）し、得られた上澄み液をアスパラガス抽出物とし、実施例１のアスパラガス抽出物を得た。
<1-2. Preparation of asparagus extract>
To the dried and ground asparagus product obtained in the above <1-1. Preparation of dried asparagus product>, 20 times the weight of 80% (v/v) ethanol solution was added, and extraction was carried out at room temperature for 4 hours by stirring. After that, the mixture was centrifuged (12,000×g, 30 minutes, 4° C.), and the resulting supernatant was used as the asparagus extract, and the asparagus extract of Example 1 was obtained.
２．評価方法
＜２－１．ヒト３次元培養表皮を用いた試験＞
ＬａｂＣｙｔｅ ＥＰＩ－ＭＯＤＥＬ２４（Ｊ－ＴＥＣ）の培養カップを５００μＬのアッセイ培地（Ｊ－ＴＥＣ）を分注したアッセイプレートに移し、ＣＯ２インキュベーター内で培養した。１８時間培養後、培養カップをアッセイ培地または実施例１のアスパラガス抽出物を含むアッセイ培地を分注したアッセイプレートに移し、ＣＯ２インキュベーター内で培養した。４時間培養後、これにＵＶＢ（２８０－３２０ｎｍ，ランプ：Ｔｏｓｈｉｂａ ＳＨ１００２ＭＡ，フィルター：Ａｓａｈｉ ｓｐｅｃｔｒａ ＳＨ０３２５）を１５０ｍＪ／ｃｍ２の強度で照射し、新しく１．０ｍＬのアッセイ培地又は実施例１のアスパラガス抽出物を含むアッセイ培地を分注したアッセイプレートに培養カップを移し、ＣＯ２インキュベーター内で２日間又は８日間培養した。また、アッセイ培地をアスパラガス抽出物の代わりに添加し、かつＵＶＢ未照射のものをコントロールとした。２日間又は８日間培養した培養表皮は、経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）、ＲＴ－ｑＰＣＲ法による遺伝子解析に使用した。
なお、図示していないが、ヒト３次元培養表皮を用いて、ＭＴＴアッセイ（細胞生存アッセイ）を行い、すべての群で細胞生存率に影響を与えないことを確認した。
2. Evaluation method <2-1. Test using human 3D cultured epidermis>
The culture cup of LabCyte EPI-MODEL24 (J-TEC) was transferred to an assay plate dispensed with 500 μL of assay medium (J-TEC) and cultured in a CO 2 incubator. After 18 hours of culture, the culture cup was transferred to an assay plate dispensed with assay medium or assay medium containing the asparagus extract of Example 1 and cultured in a CO 2 incubator. After 4 hours of culture, the culture cup was irradiated with UVB (280-320 nm, lamp: Toshiba SH1002MA, filter: Asahi spectrum SH0325) at an intensity of 150 mJ/cm 2 , and the culture cup was transferred to a new assay plate dispensed with 1.0 mL of assay medium or assay medium containing the asparagus extract of Example 1 and cultured in a CO 2 incubator for 2 or 8 days. In addition, the assay medium was added instead of the asparagus extract and the epidermis was not irradiated with UVB as a control. The cultured epidermis cultured for 2 or 8 days was used for transepidermal water loss (TEWL) and gene analysis by RT-qPCR.
Although not shown, an MTT assay (cell viability assay) was performed using three-dimensionally cultured human epidermis, and it was confirmed that there was no effect on cell viability in all groups.
＜２－２．経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）測定における評価＞
ヒト３次元培養表皮ＬａｂＣｙｔｅ ＥＰＩ－ＭＯＤＥＬ２４を用いて経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）の測定を行った。
測定には、２日間又は８日間培養後の培養表皮を使用した。
<2-2. Evaluation in Transepidermal Water Loss (TEWL) Measurement>
Transepidermal water loss (TEWL) was measured using human three-dimensional cultured epidermis LabCyte EPI-MODEL24.
For the measurement, cultured epidermis after 2 or 8 days of culture was used.
２日間又は８日間培養後のＬａｂＣｙｔｅ ＥＰＩ－ＭＯＤＥＬ２４を３２℃に保ったＨＩＥＮＡＩ ＭＡＴ（コスモ・バイオ）上で５分間フタを空けて静置した。その後、Ｔｅｗｉｔｒｏ ＴＷ２４（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ ＧｍｂＨ）をセットし、箱（Ｗ３４０ｍｍ×Ｈ３２０ｍｍ×Ｄ２７５ｍｍ）で覆った後、９００秒間経皮水分蒸散量を測定した。解析には測定値が安定する８８１～９００秒の２０秒間の経皮水分蒸散量を使用した。なお、これらの操作は、テーブルコーチ（興研）を用いた無菌環境下で行った。 After 2 or 8 days of incubation, the LabCyte EPI-MODEL24 was left uncovered for 5 minutes on a HIENAI MAT (Cosmo Bio) kept at 32°C. A Tewitro TW24 (Courage+Khazaka electronic GmbH) was then placed on the plate and covered with a box (W340mm x H320mm x D275mm), after which the transepidermal water loss was measured for 900 seconds. For analysis, the transepidermal water loss for 20 seconds from 881 to 900 seconds, when the measured value stabilized, was used. These operations were carried out in a sterile environment using a table coach (Koken).
コントロールの経皮水分蒸散量を１００として、実施例１のアスパラガス抽出物を添加した試験群の経皮水分蒸散量の相対値を算出した。結果を図２（ａ）及び図２（ｂ）に示す。なお、図２において、＊はｐ＜０．０５（いずれもＴｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ ｔｅｓｔによる）を示す。 The transepidermal water loss of the control was set at 100, and the relative value of the transepidermal water loss of the test group to which the asparagus extract of Example 1 was added was calculated. The results are shown in Figures 2(a) and 2(b). In Figure 2, * indicates p<0.05 (both based on the Tukey-Kramer test).
図２（ａ）及び図２（ｂ）に示すように、ＵＶＢを照射したものは、未照射のもの（コントロール）と比較して、ＴＥＷＬが上昇するのに対し、実施例１のアスパラガス抽出物（２００μｇ／ｍＬ）を添加した試験区については、ＴＥＷＬの上昇が抑制される傾向にあった。特に、図２（ｂ）に示すように、８日間培養後のヒト３次元培養表皮では、実施例１のアスパラガス抽出物を添加することによって、ＵＶＢ照射によるＴＥＷＬの上昇が著しく抑制されることが確認された。したがって、アスパラガス抽出物は経皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）の上昇抑制に有用であることが示された。 As shown in Figures 2(a) and 2(b), TEWL increased in the UVB-irradiated samples compared to the non-irradiated samples (control), whereas the increase in TEWL tended to be suppressed in the test group to which the asparagus extract of Example 1 (200 μg/mL) was added. In particular, as shown in Figure 2(b), it was confirmed that the increase in TEWL caused by UVB irradiation was significantly suppressed by adding the asparagus extract of Example 1 in the human 3D cultured epidermis after 8 days of culture. Therefore, it was demonstrated that the asparagus extract is useful for suppressing an increase in transepidermal water loss (TEWL).
＜２－３．ＲＴ－ｑＰＣＲ法による遺伝子解析＞
ヒト３次元培養表皮ＬａｂＣｙｔｅ ＥＰＩ－ＭＯＤＥＬ２４を用いてＲＴ－ｑＰＣＲ法による遺伝子解析を行った。
２日間培養後の培養表皮をバイオマッシャーＩＩを用いて破砕した。破砕後、ＴＲＩｚｏｌ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ）を用いて総ＲＮＡを抽出した。
<2-3. Genetic analysis by RT-qPCR method>
Genetic analysis was performed by RT-qPCR using human 3D cultured epidermis LabCyte EPI-MODEL24.
After 2 days of culture, the cultured epidermis was disrupted using a BioMasher II. After disruption, total RNA was extracted using TRIzol Reagent (Thermo).
ｃＤＮＡの合成は、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｔａｋａｒａ）を用い、製造元プロトコルに従い、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭ ＲＴ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ、総ＲＮＡ５００ｎｇに滅菌超純水を混合し１０μＬ反応溶液として逆転写反応を行った。リアルタイムＰＣＲは、ＴＢ Ｇｒｅｅｎ Ｐｒｅｍｉｘ ＥＸ ＴａｑＴＭ（Ｔａｋａｒａ）を用いて行った。リアルタイムＰＣＲに使用したプライマーセットを表１に示す。 cDNA synthesis was performed using PrimeScript ™ RT Master Mix (Takara) according to the manufacturer's protocol, by mixing PrimeScript ™ RT Master Mix, 500 ng of total RNA with sterilized ultrapure water to prepare a 10 μL reaction solution, and performing reverse transcription. Real-time PCR was performed using TB Green Premix EX Taq ™ (Takara). The primer set used for real-time PCR is shown in Table 1.
ＰＣＲ反応はＢＩＯ－ＲＡＤ、ｃ１０００ ＴｏｕｃｈＴＭ Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ，ＣＦＸ ９６ＴＭ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ Ｓｙｓｔｅｍを用いて行った。また、解析はＢＩＯ－ＲＡＤ ＣＦＸ Ｍａｎａｇｅｒ ｖｅｒｓｉｏｎ３．１を用いて、ＧＡＰＤＨを内部標準として比較ＣＴ法（Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ＣＴ法）により行った。 PCR reaction was carried out using BIO-RAD c1000 Touch ™ Thermal Cycler, CFX 96 ™ Real-Time System. Analysis was carried out by the comparative CT method using GAPDH as an internal standard using BIO-RAD CFX Manager version 3.1.
＜２－３－１．タイトジャンクション形成促進作用における評価＞
ヒト３次元培養表皮ＬａｂＣｙｔｅ ＥＰＩ－ＭＯＤＥＬ２４を用いて実施例１のアスパラガス抽出物のタイトジャンクション形成への影響を調べた。
上記＜２－３．ＲＴ－ｑＰＣＲ法による遺伝子解析＞の方法でＲＴ－ｑＰＣＲを行い、タイトジャンクション形成に関わる遺伝子（Ｃｌａｕｄｉｎ）の発現を解析した。
なお、タイトジャンクション形成の評価は、表１に示すＣｌａｕｄｉｎ１、Ｃｌａｕｄｉｎ４、ＧＡＰＤＨを用いて行った。
<2-3-1. Evaluation of the effect of promoting the formation of tight junctions>
The effect of the asparagus extract of Example 1 on the formation of tight junctions was examined using human three-dimensional cultured epidermis LabCyte EPI-MODEL24.
RT-qPCR was performed by the method described above in <2-3. Genetic analysis by RT-qPCR method> to analyze the expression of a gene (Claudin) involved in the formation of tight junctions.
The tight junction formation was evaluated using Claudin 1, Claudin 4, and GAPDH shown in Table 1.
コントロールのＣｌａｕｄｉｎ１遺伝子又はＣｌａｕｄｉｎ４遺伝子の発現量を１００として、実施例１のアスパラガス抽出物を添加した試験群のＣｌａｕｄｉｎ１遺伝子又はＣｌａｕｄｉｎ４遺伝子の発現量の相対値を算出した。結果を図３（ａ）及び図３（ｂ）に示す。なお、図３において、有意差検定はアッセイ培地をアスパラガス抽出物の代わりに添加し、かつＵＶＢ照射したものに対して行い、＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜０．０１（いずれもＴｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ ｔｅｓｔによる）を示す。 The expression level of the Claudin 1 gene or Claudin 4 gene in the control was set to 100, and the relative expression level of the Claudin 1 gene or Claudin 4 gene in the test group to which the asparagus extract of Example 1 was added was calculated. The results are shown in Figure 3(a) and Figure 3(b). In Figure 3, the significance test was performed on the sample to which the assay medium was added instead of the asparagus extract and which was irradiated with UVB, with * indicating p<0.05 and ** indicating p<0.01 (both based on the Tukey-Kramer test).
図３（ａ）に示すように、ＵＶＢ照射したヒト３次元培養表皮ではＣｌａｕｄｉｎ１の発現量が低下したのに対し、実施例１のアスパラガス抽出物を添加した培地で培養したものは、発現量の低下が抑制された。また、図３（ｂ）に示すように、Ｃｌａｕｄｉｎ４の場合でも、実施例１のアスパラガス抽出物を添加した培地で培養したものは、同様に発現量の低下が抑制された。そのため、アスパラガス抽出物はＣｌａｕｄｉｎの発現量低下を抑制したり、もしくは発現量を増強することにより、タイトジャンクションの維持や向上に有用であることが示された。 As shown in Figure 3(a), the expression level of Claudin 1 decreased in UVB-irradiated human 3D cultured epidermis, whereas the decrease in the expression level was suppressed in the case of cultured in a medium supplemented with the asparagus extract of Example 1. Similarly, as shown in Figure 3(b), the decrease in the expression level of Claudin 4 was suppressed in the case of cultured in a medium supplemented with the asparagus extract of Example 1. Therefore, it was demonstrated that asparagus extract is useful for maintaining and improving tight junctions by suppressing the decrease in the expression level of Claudin or enhancing the expression level.
＜２－３－２．角層セラミド前駆体合成促進作用における評価＞
ヒト３次元培養表皮ＬａｂＣｙｔｅ ＥＰＩ－ＭＯＤＥＬ２４を用いて実施例１のアスパラガス抽出物の角層セラミド前駆体合成への影響を調べた。
上記＜２－３．ＲＴ－ｑＰＣＲ法による遺伝子解析＞の方法でＲＴ－ｑＰＣＲを行い、角層セラミド前駆体の合成に関わる遺伝子（ＣｅｒＳ、ＳＭＳ、ＳＰＴ）の発現を解析した。
なお、角層セラミド前駆体合成の評価は、表１に示すＣｅｒＳ３、ＳＭＳ１、ＳＭＳ２、ＳＰＴ１、ＳＰＴ２、ＧＡＰＤＨを用いて行った。
<2-3-2. Evaluation of the effect of promoting synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum>
The effect of the asparagus extract of Example 1 on the synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum was investigated using three-dimensionally cultured human epidermis LabCyte EPI-MODEL24.
RT-qPCR was performed by the method described above in <2-3. Genetic analysis by RT-qPCR method> to analyze the expression of genes involved in the synthesis of stratum corneum ceramide precursors (CerS, SMS, SPT).
The synthesis of ceramide precursors in the stratum corneum was evaluated using CerS3, SMS1, SMS2, SPT1, SPT2, and GAPDH shown in Table 1.
コントロールのＣｅｒＳ３遺伝子、ＳＭＳ１遺伝子、ＳＭＳ２遺伝子、ＳＰＴ１遺伝子又はＳＰＴ２遺伝子の発現量を１００として、実施例１のアスパラガス抽出物を添加した試験群のＣｅｒＳ３遺伝子、ＳＭＳ１遺伝子、ＳＭＳ２遺伝子、ＳＰＴ１遺伝子又はＳＰＴ２遺伝子の発現量の相対値を算出した。結果を図４（ａ）～（ｅ）に示す。なお、図４において、有意差検定はアッセイ培地をアスパラガス抽出物の代わりに添加し、かつＵＶＢ照射したものに対して行い、＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜０．０１（いずれもＴｕｋｅｙ－Ｋｒａｍｅｒ ｔｅｓｔによる）を示す。 The expression levels of the CerS3 gene, SMS1 gene, SMS2 gene, SPT1 gene or SPT2 gene in the control were set at 100, and the relative values of the expression levels of the CerS3 gene, SMS1 gene, SMS2 gene, SPT1 gene or SPT2 gene in the test group to which the asparagus extract of Example 1 was added were calculated. The results are shown in Figures 4(a) to (e). In Figure 4, the significance test was performed on the samples to which the assay medium was added instead of the asparagus extract and which were irradiated with UVB, with * indicating p<0.05 and ** indicating p<0.01 (both based on the Tukey-Kramer test).
図４（ａ）～（ｅ）に示すように、ＵＶＢを照射したヒト３次元培養表皮を比較すると、実施例１のアスパラガス抽出物を含む培地で培養した培養表皮では、角層セラミド前駆体の合成に関わる遺伝子（ＣｅｒＳ３、ＳＭＳ１、ＳＭＳ２、ＳＰＴ１、ＳＰＴ２）の発現量は濃度依存的に増加した。特に、図４（ａ）、図４（ｃ）及び図４（ｅ）に示すように、ＣｅｒＳ３遺伝子、ＳＭＳ２遺伝子、ＳＰＴ２遺伝子の発現量は著しく増加した。これらの結果から、アスパラガス抽出物はＣｅｒＳ３遺伝子、ＳＭＳ２遺伝子、ＳＰＴ２遺伝子等の角層セラミド前駆体の合成に関わる遺伝子の発現量低下を抑制したり、発現量を増強することにより、生体の角層セラミド前駆体の維持や向上に有用であることが示された。 As shown in Figures 4(a) to (e), when comparing human 3D cultured epidermis irradiated with UVB, the expression levels of genes involved in the synthesis of stratum corneum ceramide precursors (CerS3, SMS1, SMS2, SPT1, SPT2) increased in a concentration-dependent manner in the cultured epidermis cultured in a medium containing the asparagus extract of Example 1. In particular, as shown in Figures 4(a), 4(c), and 4(e), the expression levels of the CerS3 gene, SMS2 gene, and SPT2 gene increased significantly. These results indicate that asparagus extract is useful for maintaining and improving stratum corneum ceramide precursors in the body by suppressing the decrease in the expression levels of genes involved in the synthesis of stratum corneum ceramide precursors, such as the CerS3 gene, SMS2 gene, and SPT2 gene, or by enhancing the expression levels.
本発明の組成物は、優れた皮膚バリア機能改善作用、タイトジャンクション形成促進作用、角層セラミド前駆体合成促進作用を有するため、皮膚のハリや弾力、しわ、保湿等に対して効果がある。また、本発明の組成物は、各種医薬組成物、皮膚外用用組成物、経口用組成物等に好適に使用することができる。 The composition of the present invention has excellent effects of improving skin barrier function, promoting the formation of tight junctions, and promoting the synthesis of stratum corneum ceramide precursors, and is therefore effective in improving skin firmness, elasticity, wrinkles, moisturizing, etc. Furthermore, the composition of the present invention can be suitably used in various pharmaceutical compositions, compositions for external use on the skin, compositions for oral administration, etc.
Claims (6)
前記アスパラガス抽出物はアスパラガスの水、エタノール及びブチレングリコールから選択される１種以上の抽出溶媒による溶媒抽出物である、
経皮水分蒸散量を指標とした皮膚バリア機能改善用組成物（但し、スフィンゴ脂質と併せて使用される場合を除く。）。 Contains asparagus extract as an active ingredient .
The asparagus extract is a solvent extract of asparagus with one or more extraction solvents selected from water, ethanol and butylene glycol;
A composition for improving skin barrier function using transepidermal water loss as an indicator (excluding cases where it is used in combination with sphingolipids) .
前記アスパラガス抽出物はアスパラガスの水、エタノール及びブチレングリコールから選択される１種以上の抽出溶媒による溶媒抽出物である、クローディン１発現及び／又はクローディン４発現を促進するための組成物。A composition for promoting claudin 1 expression and/or claudin 4 expression, wherein the asparagus extract is a solvent extract of asparagus using one or more extraction solvents selected from water, ethanol and butylene glycol.
前記アスパラガス抽出物はアスパラガスの水、エタノール及びブチレングリコールから選択される１種以上の抽出溶媒による溶媒抽出物である、The asparagus extract is a solvent extract of asparagus with one or more extraction solvents selected from water, ethanol and butylene glycol;
セリンパルミトイルトランスフェラーゼ発現、セラミドシンセサーゼ発現、及びスフィンゴミエリンシンセサーゼ発現から選択される１種以上を促進するための組成物。A composition for promoting one or more of serine palmitoyltransferase expression, ceramide synthesase expression, and sphingomyelin synthesase expression.
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