JP7628340B2 - ホウ素中性子捕捉療法（ｂｎｃｔ）プローブ - Google Patents

Description

本発明は、ホウ素中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ）プローブとして有望な新規化合物、及び当該化合物を用いたホウ素中性子捕捉療法に用いられる医薬組成物に関わる。

ホウ素同位体の１つである^１０Ｂは中性子を捕捉するとＬｉ核とα線を放出することが知られている。この^１０Ｂの性質を利用した治療法がＢＮＣＴ（Boron Neutron Capture Therapy、ホウ素中性子捕捉療法）である。ＢＮＣＴでは、まずがん細胞に対して^１０Ｂを集積させ、そこに中性子線を照射することで中性子捕捉反応を誘発する（図１参照）。

具体的には、ＢＮＣＴにおいて、^１０Ｂは中性子との反応でα線とＬｉ核を発生させ、これらは共に高ＬＥＴ（線エネルギー付与）を有することから、従来の放射線治療で用いられるようなＸ線よりも殺傷能が高い。また、その飛距離は５～９μｍと、１細胞の直径よりも短いことからα線はがん細胞のみを殺傷し、隣接した正常細胞には損傷を与えない。したがって、がん細胞のみに^１０Ｂを送達可能であれば、理論的には１細胞分解レベルでがん選択的な放射線治療が可能となる。また、ＢＮＣＴは高い殺傷能とがん細胞選択性を併せ持つことから、放射線耐性のあるような悪性度の高いがん種においても利用可能である。

ＢＮＣＴにおいて、がん部位で効率よくα線を放出させ、正常部位へのダメージを抑えるためには、（１）高濃度の^１０Ｂの集積（≒数ｍＭ）、（２）高い腫瘍選択性の２つが非常に重要となる。
現在臨床研究で用いられている薬剤はＢＳＨとＢＰＡ（ｐ－ボロノフェニルアラニン）の２種類のみであるが、いずれの薬剤も高い選択性をもってがん細胞に高濃度の^１０Ｂを集積させ、十分な時間維持させることは困難であることから、ＢＮＣＴの優れた治療効果を十分に引き出すことができていない。すなわち、正常組織への損傷を最小限に抑えた理想的ながん治療技術としてのＢＮＣＴを完成させるためには、高濃度かつ腫瘍選択的な^１０Ｂの滞留を実現するような、全く新しいＢＮＣＴ薬剤の開発が必要である。

本発明は、ホウ素中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ）用のプローブとして有望な新規化合物を提供することを目的とする。

本発明者らの研究室が開発した蛍光プローブＳＰｉＤＥＲ－βｇａｌは、β－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅと反応することでキノンメチド中間体を生成し、これが細胞内の様々な求核種にタグ化されることでβ－ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ発現細胞のみを一細胞レベルの分解能で蛍光標識できる。

さらに、本発明者らの研究室では、キノンメチドケミストリーを利用してがん選択的プロドラッグ型抗がん剤を開発した。この抗がん剤は、生成するアザキノンメチド中間体の反応性の高さを利用し、細胞内求核種を消費することで細胞内レドックスバランスを崩し、がん細胞をアポトーシスへと誘導することが示唆されている（国際公開２０１９／１７２２１０等）。

本発明者らは、これらを踏まえ、キノンメチドケミストリーを採用し、細胞内求核種との共有結合形成を細胞内滞留性機構として利用できれば、より強固な細胞内滞留型ＢＮＣＴ薬剤の開発が可能であり、既存のＢＮＣＴ薬剤が抱えるホウ素濃度の持続性の問題を解決できると考え、本発明を完成した。

即ち、本発明は、
［１］ 以下の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩。

（式中、
Ｘは、フッ素原子、エステル基（－ＯＣ（＝Ｏ）－Ｒ’）、カーボネート基（－ＯＣＯ_２－Ｒ’）、カーバメート基（－ＯＣＯＮＨ－Ｒ’）、リン酸およびそのエステル基（－ＯＰ（＝Ｏ）（－ＯＲ’）（―ＯＲ’’）、及び硫酸およびそのエステル基（―ＯＳＯ_２―ＯＲ’）からなる群から選択され、
ここで、Ｒ’、Ｒ’’は、各々独立に、置換又は無置換のアルキル基、又は、置換又は無置換のアリール基から選択され；
Ｙは、－ＮＨ－ＣＯ－Ｌ、－ＮＨ－Ｌ’又は－ＯＬ’であり、
ここで、Ｌは、アミノ酸の部分構造であり、
Ｌ’は、糖類又は糖類の部分構造、自己開裂型のリンカーを有する糖類、自己開裂型のリンカーを有するアミノ酸類又はペプチドであり；
Ｒ^１及びＲ^２は、各々独立に、水素原子又は一価の置換基から選択され；
Ｒ^３は、水素原子、又はベンゼン環上に存在する１～３個の同一又は異なる一価の置換基であり；
Ｚは、単結合又は連結基を表し：
Ｂは、^１０Ｂを含有する基を表す。）
［２］Ｂは、分子中に少なくとも１つのホウ素原子を有する化合物から誘導される基である、［１］に記載の化合物又はその塩。
［３］Ｂが、ホウ素クラスターから誘導される基である、［１］又は［２］に記載の化合物又はその塩。
［４］前記ホウ素クラスターは多面体構造を有する、［３］に記載の化合物又はその塩。
［５］Ｂが、クロソドデカボレート、クロソカルボラン、ニドカルボラン、ビスジカルボリド金属錯体、ＧＢ１０、１，２－ジカルバクロソ－ドデカルボラン、１，７－ジカルバ－クロソ－ドデカルボラン、１，１２－ジカルバ－クロソ－ドデカルボラン、ジカルバ－クロソ－デカルボラン、硫黄置換型ウンデカヒドロドデカボレートから誘導される基である、［１］～［４］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［６］前記連結基が、アルキレン基（但し、アルキレン基の１以上の－ＣＨ_２－は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、又は－ＣＯ－で置換されていてもよい。）、アリーレン（ヘテロアリーレンを含む）、シクロアルキレン、アルコキシル基、ポリエチレングリコール鎖、及び、これらの基から選択される２種以上の基が任意に結合して構成される基からなる群から選択される、［１］～［５］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［７］Ｌのアミノ酸の部分構造は、それが結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、アミノ酸の一部を構成している、［１］～［６］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［８］Ｌ’の糖類の部分構造は、それが結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している、［１］～［６］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［９］一般式（Ｉ）中の－Ｙが、－Ｃ（Ｒ^１）（Ｒ^２）Ｘに対してベンゼン環のオルト位又はパラ位上で結合している、［１］～［８］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［１０］Ｙが、以下から選択される構造を有する、［１］～［９］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。

［１１］Ｘは、フッ素原子又はエステル基（－ＯＣ（＝Ｏ）－Ｒ’）である、［１］～［１０］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［１２］Ｒ^１及びＲ^２は、各々独立に、水素原子又はフッ素原子から選択される、［１］～［１１］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［１３］Ｒ^３の一価の置換基が、アルキル基、アルコキシカルボニル基（－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＲ’）、ニトロ基、アミノ基、水酸基、アルキルアミノ基（－ＮＨＲ’、－ＮＲ’_２）、アルコキシ基（－ＯＲ’）、エステル基（－Ｏ－ＣＯ－Ｒ’）、アミド基（－ＮＨＣＯＲ’）、ハロゲン原子、ボリル基、シアノ基からなる群から選択される（Ｒ’は、置換又は無置換のアルキル基、又は、置換又は無置換のアリール基であり、Ｒ’が２以上ある場合は、各々同一又は異なっていてもよい）、［１］～［１２］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［１４］Ｒ^３の一価の置換基が、アルキル基又はアルコキシ基である、［１３］に記載の化合物又はその塩。
［１５］Ｒ^３の一価の置換基が、ハロゲン原子である、［１３］に記載の化合物又はその塩。
［１６］Ｒ^３の一価の置換基の１つ以上が、アルキル基又はアルコキシ基であり、Ｒ^３の一価の置換基の１つ以上が、ハロゲン原子である、［１３］～［１５］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［１７］Ｒ^３の全てが水素原子である、［１］～［１２］のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
［１８］［１］～［１７］のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む、医薬組成物。
［１９］ホウ素中性子捕捉療法に用いられる、［１８］に記載の医薬組成物。
［２０］がん細胞特異的な酵素活性により細胞選択的に作用することにより、がん細胞に集積させることができる、［１９］に記載の医薬組成物。
［２１］前記酵素が、ペプチダーゼ又はグリコシダーゼである、［２０］に記載の医薬組成物。
［２２］疾病または疾病に至る可能性のある症状を診断、治療、または診断および治療する方法であって、
（Ａ）疾病または症状を有する、または有する疑いのある被験体に、請求項１～１７のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む医薬組成物を投与する工程、および
（Ｂ）前記被験体の標的組織に局在した^１０Ｂ原子に中性子線を照射し、それにより、標的組織のホウ素中性子捕捉療法を行う工程
を含む、前記方法。
を提供するものである。

本発明により、ホウ素中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ）用のプローブとして有望な新規化合物を提供することができる。

ＢＮＣＴ（ホウ素中性子捕捉療法）の概念図。 本発明の化合物ががんバイオマーカー酵素との反応を経て細胞内に滞留する機構の模式図を示す。 ｇＧｌｕ－４ＯＣＢ－ＦＭＡの精製酵素との反応性を確認した結果を示す。 ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡの精製酵素との反応性を確認した結果を示す。 ＥＰ－４ＯＣＢ－ＭＡの精製酵素との反応性を確認した結果を示す。 図６は、ＣＣＫ８及びｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎの有無による２４時間のＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡ処理における細胞生存率の測定結果を示す。 図７は、３時間又は２４時間のＣＣＫ８及びｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎの有無によるＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡ処理における細胞生存率の測定結果を示す。 図８は、ＣＣＫ８及びｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎの有無による２４時間のＥＰ－４ＯＣＢ－ＭＡ処理における細胞生存率の測定結果を示す。未処理と比較した濃度の平均値±標準偏差を示す（ｎ＝３生物学的反復）。 実施例４の試験で使用したプロトコルを示す。 実施例４において細胞外ホウ素濃度の定量を行った結果を示す。 実施例４において細胞内ホウ素濃度の定量を行った結果を示す。 ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡについてのアザキノンメチド中間体と求核性基の反応性の評価結果を示す。

本明細書中において、「ハロゲン原子」とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子を意味する。

本明細書中において、「アルキル」は直鎖状、分枝鎖状、環状、又はそれらの組み合わせからなる脂肪族炭化水素基のいずれであってもよい。アルキル基の炭素数は特に限定されないが、例えば、炭素数１～６個（Ｃ１～６）、炭素数１～１０個（Ｃ１～１０）、炭素数１～１５個（Ｃ１～１５）、炭素数１～２０個（Ｃ１～２０）である。炭素数を指定した場合は、その数の範囲の炭素数を有する「アルキル」を意味する。例えば、Ｃ１～８アルキルには、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、イソペンチル、ｎｅｏ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、イソヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチル等が含まれる。本明細書において、アルキル基は任意の置換基を1個以上有していてもよい。そのような置換基としては、例えば、アルコキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、モノ若しくはジ置換アミノ基、置換シリル基、又はアシルなどを挙げることができるが、これらに限定されることはない。アルキル基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。アルキル部分を含む他の置換基（例えばアルコシ基、アリールアルキル基など）のアルキル部分についても同様である。

本明細書において、ある官能基について「置換されていてもよい」と定義されている場合には、置換基の種類、置換位置、及び置換基の個数は特に限定されず、２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。置換基としては、例えば、アルキル基、アルコキシ基、水酸基、カルボキシル基、ハロゲン原子、スルホ基、アミノ基、アルコキシカルボニル基、オキソ基などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。これらの置換基にはさらに置換基が存在していてもよい。このような例として、例えば、ハロゲン化アルキル基、ジアルキルアミノ基などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。

本明細書中において、「アリール」は単環式又は縮合多環式の芳香族炭化水素基のいずれであってもよく、環構成原子としてヘテロ原子（例えば、酸素原子、窒素原子、又は硫黄原子など）を１個以上含む芳香族複素環であってもよい。この場合、これを「ヘテロアリール」または「ヘテロ芳香族」と呼ぶ場合もある。アリールが単環および縮合環のいずれである場合も、すべての可能な位置で結合しうる。単環式のアリールの非限定的な例としては、フェニル基（Ｐｈ）、チエニル基（２－又は３－チエニル基）、ピリジル基、フリル基、チアゾリル基、オキサゾリル基、ピラゾリル基、２－ピラジニル基、ピリミジニル基、ピロリル基、イミダゾリル基、ピリダジニル基、３－イソチアゾリル基、３－イソオキサゾリル基、１，２，４－オキサジアゾール－５－イル基又は１，２，４－オキサジアゾール－３－イル基等が挙げられる。縮合多環式のアリールの非限定的な例としては、１－ナフチル基、２－ナフチル基、１－インデニル基、２－インデニル基、２，３－ジヒドロインデン－１－イル基、２，３－ジヒドロインデン－２－イル基、２－アンスリル基、インダゾリル基、キノリル基、イソキノリル基、１，２－ジヒドロイソキノリル基、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリル基、インドリル基、イソインドリル基、フタラジニル基、キノキサリニル基、ベンゾフラニル基、２，３－ジヒドロベンゾフラン－１－イル基、２，３－ジヒドロベンゾフラン－２－イル基、２，３－ジヒドロベンゾチオフェン－１－イル基、２，３－ジヒドロベンゾチオフェン－２－イル基、ベンゾチアゾリル基、ベンズイミダゾリル基、フルオレニル基又はチオキサンテニル基等が挙げられる。本明細書において、アリール基はその環上に任意の置換基を１個以上有していてもよい。該置換基としては、例えば、アルコキシ基、ハロゲン原子、アミノ基、モノ若しくはジ置換アミノ基、置換シリル基、又はアシルなどを挙げることができるが、これらに限定されることはない。アリール基が２個以上の置換基を有する場合には、それらは同一でも異なっていてもよい。アリール部分を含む他の置換基（例えばアリールオキシ基やアリールアルキル基など）のアリール部分についても同様である。

本明細書中において、「アルコキシ基」とは、前記アルキル基が酸素原子に結合した構造であり、例えば直鎖状、分枝状、環状又はそれらの組み合わせである飽和アルコキシ基が挙げられる。例えば、メトキシ基、エトキシ基、ｎ－プロポキシ基、イソプロポキシ基、シクロプロポキシ基、ｎ－ブトキシ基、イソブトキシ基、ｓ－ブトキシ基、ｔ－ブトキシ基、シクロブトキシ基、シクロプロピルメトキシ基、ｎ－ペンチルオキシ基、シクロペンチルオキシ基、シクロプロピルエチルオキシ基、シクロブチルメチルオキシ基、ｎ－ヘキシルオキシ基、シクロヘキシルオキシ基、シクロプロピルプロピルオキシ基、シクロブチルエチルオキシ基又はシクロペンチルメチルオキシ基等が好適な例として挙げられる。

本明細書中において、「アルキレン」とは、直鎖状または分枝状の飽和炭化水素からなる二価の基であり、例えば、メチレン、１－メチルメチレン、１，１－ジメチルメチレン、エチレン、１－メチルエチレン、１－エチルエチレン、１，１－ジメチルエチレン、１，２－ジメチルエチレン、１，１－ジエチルエチレン、１，２－ジエチルエチレン、１－エチル－２－メチルエチレン、トリメチレン、１－メチルトリメチレン、２－メチルトリメチレン、１，１－ジメチルトリメチレン、１，２－ジメチルトリメチレン、２，２－ジメチルトリメチレン、１－エチルトリメチレン、２－エチルトリメチレン、１，１－ジエチルトリメチレン、１，２－ジエチルトリメチレン、２，２－ジエチルトリメチレン、２－エチル－２－メチルトリメチレン、テトラメチレン、１－メチルテトラメチレン、２－メチルテトラメチレン、１，１－ジメチルテトラメチレン、１，２－ジメチルテトラメチレン、２，２－ジメチルテトラメチレン、２，２－ジ－ｎ－プロピルトリメチレン等が挙げられる。

１．一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩
本発明の１つの実施態様は、以下の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩である（以下「本発明の化合物」とも言う）。

理論に拘束されることを意図するものではないが、本発明においては、がんバイオマーカー酵素を標的とし、その基質部位を薬剤分子内に組み込み、酵素反応によってこれが切断されて初めてキノンメチド中間体を露出させ、細胞内求核種によりタグ化させることで、細胞内に滞留させることが可能であると考えて、化合物の分子設計をした。その結果、上記の一般式（Ｉ）で表される化合物が、がん細胞選択的かつ持続的に高いホウ素濃度を維持することが可能であり、新規なＢＮＣＴ用のプローブとして有用であることを見出した。図２に本発明の化合物ががんバイオマーカー酵素との反応を経て細胞内に滞留する機構の模式図を示す。

一般式（Ｉ）において、Ｙは、酵素認識部位であり、がん細胞特異的な酵素活性によってその一部が切断されてキノンメチドの形成を誘起する部位である。
Ｙは標的酵素の種類に応じて選択することができる。標的酵素であるがんバイオマーカー酵素がグリコシダーゼである場合は、Ｙは糖類に由来する基から選択され、標的酵素がペプチダーゼである場合は、Ｙはアミノ酸類に由来する基、アミノ酸類を含む基から選択される。

一般式（Ｉ）において、Ｙは、好ましくは、－ＮＨ－ＣＯ－Ｌ、－ＮＨ－Ｌ’又は－ＯＬ’である。
ここで、Ｌは、アミノ酸の部分構造である。Ｌのアミノ酸の部分構造とは、Ｌが結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸、アミノ酸残基、ペプチド、アミノ酸の一部を構成していることを意味する

本明細書において、「アミノ酸」は、アミノ基とカルボキシル基の両方を有する化合物であれば任意の化合物を用いることができ、天然及び非天然のものを含む。中性アミノ酸、塩基性アミノ酸、又は酸性アミノ酸のいずれであってもよく、それ自体が神経伝達物質などの伝達物質として機能するアミノ酸のほか、生理活性ペプチド（ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドのほか、オリゴペプチドを含む）やタンパク質などのポリペプチド化合物の構成成分であるアミノ酸を用いることができ、例えばαアミノ酸、βアミノ酸、γアミノ酸などであってもよい。アミノ酸としては、光学活性アミノ酸を用いることが好ましい。例えば、αアミノ酸についてはＤ－又はＬ－アミノ酸のいずれを用いてもよいが、生体において機能する光学活性アミノ酸を選択することが好ましい場合がある。

本明細書において、「アミノ酸残基」とは、アミノ酸のカルボキシル基からヒドロキシル基を除去した残りの部分構造に対応する構造をいう。
アミノ酸残基には、αアミノ酸の残基、βアミノ酸の残基、γアミノ酸の残基が含まれる。好ましいアミノ酸残基としては、ＧＧＴ基質のγ―グルタミル基やＤＰＰ４基質のジペプチド（アミノ酸－プロリン）からなるジペプチド）などが挙げられる。

本明細書において、「ペプチド」とは、２個以上のアミノ酸がペプチド結合でつながった構造をいう。
好ましいペプチドとしては、上記したＤＰＰ４基質のジペプチド（アミノ酸―プロリンからなるジペプチド；ここで、アミノ酸は、例えば、グリシン、グルタミン酸、プロリン）等が挙げられる。等が挙げられる。

Ｌが結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸の一部を構成している場合としては、例えば、上記したγ―グルタミル基のように、アミノ酸の側鎖のカルボキシル基が－ＮＨ_２と結合してカルボニル基となりアミノ酸の一部となっている構造が挙げられる。

Ｌ’は、糖類又は糖類の部分構造、自己開裂型のリンカーを有する糖類、自己開裂型のリンカーを有するアミノ酸類又はペプチドである。
Ｌ’の糖類の部分構造は、Ｌ’が結合しているＯと一緒になって、糖類、糖類の一部を構成している。

糖類としては、β－Ｄ－グルコース、β－Ｄ－ガラクトース、β－Ｌ－ガラクトース、β－Ｄ－キシロース、α－Ｄ－マンノース、β－Ｄ－フコース、α－Ｌ－フコース、β－Ｌ－フコース、β－Ｄ－アラビノース、β－Ｌ－アラビノース、β－Ｄ－Ｎ－アセチルグルコサミン、β－Ｄ－Ｎ－アセチルガラクトサミン等が挙げられ、好ましくは、β－Ｄ－ガラクトースである。

自己開裂型のリンカーとは、自発的に切断・分解されるリンカーを意味し、例えば、カルバメート、ウレア、パラアミノベンジルオキシ基、エステル基等が挙げられる。

本発明の１つの好ましい側面において、Ｙは、以下から選択される構造を有する。
Ｙが、以下から選択される構造を有する、請求項１～９のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。

一般式（Ｉ）において、Ｘは、Ｙの酵素認識部位ががん細胞特異的な酵素活性によってその一部が切断されることにより、ベンゼン環から脱離する脱離基として作用し、その結果、キノンメチドが形成される。

Ｘは、フッ素原子、エステル基（－ＯＣ（＝Ｏ）－Ｒ’）、カーボネート基（－ＯＣＯ_２－Ｒ’）、カーバメート基（－ＯＣＯＮＨ－Ｒ’）、リン酸およびそのエステル基（－ＯＰ（＝Ｏ）（－ＯＲ’）（―ＯＲ’’）、及び硫酸およびそのエステル基（―ＯＳＯ_２―ＯＲ’）からなる群から選択される。
ここで、Ｒ’、Ｒ’’は、各々独立に、置換又は無置換のアルキル基、又は、置換又は無置換のアリール基から選択される。

Ｘとしては、フッ素原子又はエステル基（－ＯＣ（＝Ｏ）－Ｒ’）が好ましい。理論に拘束されることを意図するものではないが、Ｘがフッ素原子又はエステル基（－ＯＣ（＝Ｏ）－Ｒ’）である場合は、Ｙが切断されると速やかにキノンメチドが形成される。

Ｒ^１及びＲ^２は、各々独立に、水素原子又は一価の置換基から選択される。一価の置換基としては、ハロゲン原子、炭素数１以上のアルキル基（例えば、炭素数１～６程度のアルキル基）である。
Ｒ^１及びＲ^２は、好ましくは、各々独立に、水素原子又はフッ素原子から選択される。

一般式（Ｉ）中の－Ｙは、－Ｃ（Ｒ^１）（Ｒ^２）Ｘに対してベンゼン環のオルト位又はパラ位上で結合していることが好ましい。－Ｙと－Ｃ（Ｒ^１）（Ｒ^２）Ｘがベンゼン環上でこのような位置関係にあると、Ｙが切断された際にキノンメチド構造を形成可能である。

Ｒ^３は、水素原子、又はベンゼン環上に存在する１～３個の同一又は異なる一価の置換基である。
Ｒ^３の一価の置換基としては、炭素数１以上のアルキル基（例えば、炭素数１～６程度のアルキル基）、アルコキシカルボニル基（－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＲ’）、ニトロ基、アミノ基、水酸基、アルキルアミノ基（－ＮＨＲ’、－ＮＲ’_２）、アルコキシ基（－ＯＲ’）、エステル基（－Ｏ－ＣＯ－Ｒ’）、アミド基（－ＮＨＣＯＲ’）、ハロゲン原子、ボリル基、シアノ基からなる群から選択される。ここで、Ｒ’は、置換又は無置換のアルキル基、又は、置換又は無置換のアリール基である。Ｒ’が２以上ある場合は、各々のＲ’は同一又は異なっていてもよい。

本発明の化合物の１つの側面において、Ｒ^３の一価の置換基としては、アルキル基（例えば、メチル基）又はアルコキシ基（例えば、メトキシ基）である。電子供与性基であるアルキル基やアルコキシ基をベンゼン環に導入すると細胞内滞留性に優れることから好ましい。

本発明の化合物の１つの側面において、Ｒ^３の一価の置換基は、ハロゲン原子（好ましくは、ヨウ素原子）である。Ｒ^３が、ハロゲン原子（好ましくは、ヨウ素原子）である場合は、細胞へのトラップ効果を高めることが可能である。

本発明の化合物の１つの側面において、Ｒ^３の一価の置換基の１つ以上が、アルキル基（例えば、メチル基）又はアルコキシ基（例えば、メトキシ基）であり、Ｒ^３の一価の置換基の１つ以上が、ハロゲン原子である、

Ｒ^３が上記した一価の置換基、特に、アルキル基、アルコキシ基である場合、Ｒ^３の位置としては、－Ｃ（Ｒ^１）（Ｒ^２）Ｘのパラ位にあたる５位、及び／又は、メタ位にあたる４位が好ましい。

本発明の化合物のもう１つの側面においては、Ｒ^３の全てが水素原子である。

一般式（Ｉ）において、Ｂは、^１０Ｂを含有する基を表す。Ｂとしては、^１０Ｂを含有する基であればどのようなものでもよく、ホウ酸残基（^１０Ｂ（ＯＨ）_２－）のように分子中に一つホウ素原子を持つ化合物から誘導される基でもよいが、ホウ素クラスターから誘導される基が好ましい。

ホウ素クラスターは、ホウ素中性子捕捉療法に用いることができる多面体構造のものであればどのようなものでもよい。例えば、クロソドデカボレート（［Ｂ_１２Ｈ_１２］^２－）、イオン性クロソカルボラン（［ＣＢ_１１Ｈ_１２］^－）、脂溶性クロソカルボラン（［Ｃ_２Ｂ_１０Ｈ_１２］）、ニドカルボラン（［Ｃ_２Ｂ_９Ｈ_１１］^－）、ビスジカルボリド金属錯体（［（Ｃ_２Ｂ_９Ｈ_１１）_２Ｍ］（Ｍは金属）、ＧＢ１０（［Ｂ_１０Ｈ_１２］^２－）、１，２－ジカルバクロソ－ドデカルボラン、１，７－ジカルバ－クロソ－ドデカルボラン、１，１２－ジカルバ－クロソ－ドデカルボラン、ジカルバ－クロソ－デカルボラン（［Ｃ_２Ｂ_８Ｈ_１０］）、硫黄置換型ウンデカヒドロドデカボレートなどを挙げることができるが、これらに限定されるものではない。

ホウ素クラスター中に含まれるホウ素原子は、すべて^１０Ｂであってもよいが、一部のみが^１０Ｂであってもよい。
なお、本明細書中では、「ホウ素クラスターから誘導される基」というように「誘導される基」という表現が用いられているが、これは、例えば、ホウ素クラスター中の一つの水素原子を除去することによって誘導される基を意味する。

一般式（Ｉ）において、Ｚは、単結合又は連結基を表す。
ここで、Ｚが「単結合」である場合は、Ｂが連結基を介さずにベンゼン環に直接結合していることを意味する。

連結基としては、リンカーとしての機能を持つものであり、代謝的に安定であればどのようなものでよいが、好ましくは、アルキレン基（但し、アルキレン基の１以上の－ＣＨ_２－は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、又は－ＣＯ－で置換されていてもよい。）、アリーレン（ヘテロアリーレンを含む）、シクロアルキレン（例えば、シクロへキシレン）、アルコキシル基、ポリエチレングリコール鎖、及び、これらの基から選択される２種以上の基が任意に結合して構成される基からなる群から選択される。
アルキレン基の炭素数は特に限定されないが、５～２０であることが好ましく、５～１５であることがより好ましい。なお、アルキレン基中の－ＣＨ_２－は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、又は－ＣＯ－で置換した場合も、これらの基は１つの炭素を持つものとして、前記した「アルキレン基の炭素数」に含める。
また、アリーレンには、フェニレン基などベンゼン環をリンカーとするものや、複素環を含む芳香族、環状炭化水素由来の２価のリンカーが含まれる。

本発明の化合物の１つの好ましい態様においては、連結基は、アルキレン基（但し、アルキレン基の１以上の－ＣＨ_２－は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、又は－ＣＯ－で置換されていてもよい。）である。

Ｂ－Ｚ－を導入する位置としては、特に限定されないが、代謝的に安定であること、酵素認識部位にあまりに近いと標的酵素の基質にならなくなる可能性もあることから、Ｙに対してベンゼン環のメタ位又はパラ位上で結合していることが好ましい。

本発明の化合物の非限定的例を以下に示すが、本発明の化合物はこれらに限定されるものではない。

は、クロソカルボラン（ｏ－カルボラン）から誘導される基である（式中、灰色の原子がＢＨ、黒色の原子がＣである）。

一般式（Ｉ）で表される化合物は、特に断らない限り、その互変異性体、幾何異性体（例えば、Ｅ体、Ｚ体など）、鏡像異性体等の立体異性体も含まれる。すなわち、一般式（Ｉ）で表される化合物中に、１個又は２個以上の不斉炭素が含まれる場合、不斉炭素の立体化学については、それぞれ独立して（Ｒ）体又は（Ｓ）体のいずれかをとることができ、該誘導体の鏡像異性体又はジアステレオ異性体などの立体異性体として存在することがある。従って、本発明のＢＮＣＴ）用のプローブの有効成分としては、純粋な形態の任意の立体異性体、立体異性体の任意の混合物、ラセミ体などを用いることが可能であり、いずれも本発明の範囲に包含される。

一般式（Ｉ）で表される化合物の製造方法は特に限定されないが、一般式（Ｉ）に包含される化合物のうち代表的化合物についての合成方法を本明細書の実施例に具体的に示した。当業者は本明細書の実施例及び下記のスキームを参照しつつ、必要に応じて出発原料、反応試薬、反応条件などを適宜改変ないし修飾することにより、式（Ｉ）に包含される化合物を製造することができる。

２．医薬組成物
本発明のもう１つの実施態様は、本発明の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む、医薬組成物である（以下「本発明の医薬組成物」とも言う）。
本発明の医薬組成物の好ましい態様は、ホウ素中性子捕捉療法に用いられる医薬組成物である。

本発明の医薬組成物は、好ましくは、がん細胞特異的な酵素活性により細胞選択的に作用することにより、がん細胞に集積させることができる、ホウ素中性子捕捉療法に用いられる医薬組成物である。

がん細胞特異的な酵素としては、ペプチダーゼ又はグリコシダーゼである。
ペプチダーゼとしては、ペプチダーゼが、γ-グルタミルトランスペプチダーゼ（ＧＧＴ）、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－ＩＶ）、カルパインが挙げられる。
グリコシダーゼとしては、β-ガラクトシダーゼ、β-グルコシダーゼ、α-マンノシダーゼ、α－Ｌ－フコシダーゼ、β－ヘキソサミニダーゼ、β－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼ等が挙げられる。

本発明の医薬組成物は、一般式（Ｉ）で表される化合物のみならず、その塩又はそれらの溶媒和物若しくは水和物を含むものであってもよい。塩としては、医薬的に許容される塩であれば特に限定されないが、例えば、塩基付加塩、酸付加塩、アミノ酸塩などを挙げることができる。塩基付加塩としては、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、又はトリエチルアミン塩、ピペリジン塩、モルホリン塩などの有機アミン塩を挙げることができ、酸付加塩としては、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩などの鉱酸塩；メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パラトルエンスルホン酸、酢酸、プロピオン酸塩、酒石酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、ケイ皮酸、乳酸、グリコール酸、グルクロン酸、アスコルビン酸、ニコチン酸、サリチル酸などの有機酸塩を挙げることができる。アミノ酸塩としてはグリシン塩、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩などを例示することができる。また、アルミニウム塩等の金属塩であってもよい。

溶媒和物を形成する溶媒の種類は特に限定されないが、例えば、エタノール、アセトン、イソプロパノールなどの溶媒を例示することができる。

本発明の医薬組成物は、ホウ素中性子捕捉療法に用いられる。即ち、本発明の医薬組成物をヒト又はヒト以外の動物（マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サルなど）に投与し、その後、低エネルギー熱中性子を照射し、それにより腫瘍細胞を選択的に破壊する。治療対象とする疾患としては、悪性腫瘍、例えば、脳腫瘍、悪性黒色腫、頭頚部癌、肺癌、肝癌、甲状腺癌、皮膚癌、膀胱癌、中皮腫、膵癌、乳癌、髄膜腫、肉腫などを挙げることができるが、これらに限定されるわけではない。

一般式（Ｉ）で表される化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む医薬組成物として使用する場合、公知の方法に従い薬学的に許容される担体又は希釈剤と混合することにより、製剤化することができる。剤型は特に限定されず、注射剤、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤、坐剤、徐放剤などとすることができる。投与方法も特に限定されず、経口的又は非経口的（皮内、腹腔内、静脈、動脈、又は脊髄液への注射又は点滴等による投与）に投与することができる。
これらの製剤は常法に従って調製される。なお、液体製剤にあっては、用時、水又は他の適当な溶媒に溶解又は懸濁する形であってもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティングしてもよい。注射剤の場合には、本発明の化合物を水に溶解させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水あるいはブドウ糖溶液に溶解させてもよく、また緩衝剤や保存剤を添加してもよい。

本発明の医薬組成物の投与量は、投与対象、投与方法などにより異なるが、例えば、成人に対して、注射剤として投与する場合、１回当たり、前記化合物が１０～１０００ｍｇ／ｋｇとなるように１度の治療に１～数回に分けて投与することができる。

本発明のもう１つの実施態様は、疾病または疾病に至る可能性のある症状を診断、治療、または診断および治療する方法であって、
（Ａ）疾病または症状を有する、または有する疑いのある被験体に、本発明の医薬組成物を投与する工程、および
（Ｂ）前記被験体の標的組織に局在した^１０Ｂ原子に中性子線を照射し、それにより、標的組織のホウ素中性子捕捉療法を行う工程
を含む、前記方法である（以下「本発明の方法」とも言う）。

本発明の方法における、本発明の医薬組成物の投与量は上記した通りである。

本発明の方法において、被験体の標的組織に局在した^１０Ｂ原子に中性子線を照射するには、ＢＮＣＴで通常用いられている原子炉または加速器型中性子発生装置を用い、中性子線量と中性子スペクトル、照射時間等、治療に必要な諸条件を決定する。照射する中性子線のエネルギーとしては、通常、熱中性子では０．０２５ｅＶ程度、熱外中性子は０．５ｅＶ～４０ｋｅＶである。

以下、本発明を実施例により説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。

一般的手順と材料
全ての試薬及び乾燥溶媒は、市販の供給業者（東京化成工業株式会社、富士フイルム和光純薬株式会社、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、関東化学株式会社、株式会社同仁化学研究所、渡辺化学工業株式会社、Ｇｉｂｃｏ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｔｈｅｒｍｏ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｍｅｒｃｋ）から購入し、それ以上精製せずに使用した。

使用計器
反応の進行は、ＴＬＣシリカゲル６０Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｃ．）およびＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ／ＭＳシステム（ＷａｔｅｒｓＩｎｃ．）で観察した。
^１ＨＮＭＲおよび^１３ＣＮＭＲスペクトルはＪＥＯＬ ＪＮＭ－ＥＣＺ４００（^１Ｈ ＮＭＲについては４００ＭＨｚ、^１３ＣＮＭＲについては１００ＭＨｚ）で測定した；σ値はテトラメチルシラン（ＴＭＳ）に対するｐｐｍである。
質量スペクトル（ＭＳ）はＪＥＯＬ ＪＭＳ－Ｔ１００ ＬＣ ＡｃｃｕＴｏＦ（ＥＳＩ）で測定した。
シリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィーは、ＭＰＬＣシステム（Ｙａｍａｚｅｎ Ｓｍａｒｔ Ｆｌａｓｈ ＥＰＣＬＣ Ｗ－Ｐｒｅｐ ２ＸＹ（日本、東京））で行った。
逆相ＭＰＬＣ精製は、ＳＮＡＰ Ｕｌｔｒａ Ｃ１８（Ｂｉｏｔａｇｅ）を装備したＩｓｏｌｅｒａＴＭ Ｏｎｅ（Ｂｉｏｔａｇｅ）で行った。
分取ＨＰＬＣは、３又は５ｍＬ／分の流速で、溶離液Ａ（０．１％ＴＦＡ（ｖ／ｖ） を含むＨ_２Ｏ）および溶離液Ｂ（０．１％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）を含む２０％Ｈ_２Ｏを含むＣＨ_３ＣＮ）または溶離液Ｃ（（１００ｍＭ ＴＥＡＡ、すなわち１００ｍＭトリメチルアミンおよび酢酸水溶液を含むＨ_２Ｏ）および溶離液Ｄ（１００ｍＭ ＴＥＡＡを含む２０％Ｈ_２Ｏを含むＣＨ_３ＣＮ）を用いた、ポンプ（ＰＵ－２０８６（ＪＡＳＣＯ））および検出器（ＭＤ－２０１５またはＦＰ－２０２５、ＪＡＳＣＯ）からなるＨＰＬＣシステムを用いて、Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ－３（１０．０×２５０ｍｍ）カラム（ＧＬ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．）で行った。

酵素アッセイ（ＬＣ／ＭＳ分析）
ＬＣ／ＭＳ分析用スクリューキャップバイアル（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．）において、阻害剤（ＧＧＴに対して１００μＭ、ＤＰＰ－ＩＶに対して２００μＭのＧＧｓＴｏｐ（登録商標））の存在下又は非存在下のプロドラッグ（１００μＭ）および共溶媒としてのＤＭＳＯ（１％）を含むリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）又は０．１Ｍ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）を調製した。酵素（ＧＧＴでは１Ｕ／ｍＬ、ＤＰＰ－ＩＶでは＞０．１ｍＵ／ｍＬ）を添加し、次いで３７℃で１２時間培養した。ＬＣ／ＭＳ分析（ＳＩＭ）は、以下の条件で実施した（溶離液Ａ：０．０１Ｍギ酸アンモニウムを含むＨ_２Ｏ、溶離液Ｂ：８０％アセトニトリル／０．０１Ｍギ酸アンモニウムを含むＨ_２Ｏ、１２分でＡ／Ｂ＝９０／１０→０／１００）。
アザキノンメチドと求核試薬（ＧＳＨ、ｌ－Ｃｙｓ）との反応を評価する実験においては、５ｍＭの各求核試薬を含む０．１Ｍ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）を調製して使用した。

細胞培養
Ｈ２２６、Ｈ４６０、ＳＨＩＮ３およびＳＫＯＶ３細胞を、１０％のウシ胎児血清 （Ｇｉｂｃｏ）および１％のペニシリンストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地（ロズウェルパーク記念研究所１６４０培地、Ｇｉｂｃｏ）中で培養した。Ａ５４９，ＨｅｌａおよびＨｅｐＧ２細胞を、１０％のウシ胎児血清および１％のペニシリンストレプトマイシンを含むＤＭＥＭ（ダルベッコ改変イーグル培地、Ｇｉｂｃｏ）中で培養した。Ｃａｃｏ－２細胞を、２０％のウシ胎児血清、１％のペニシリンストレプトマイシンと１％のＭＥＭ非必須アミノ酸溶液（１００ Ｘ）を含むＤＭＥＭ中で培養した。すべての細胞を、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーター中で培養した。

細胞生存率試験（ＣＣＫ－８アッセイ）
細胞（１．０×１０^４細胞／ウェル）を９６ウェルプレート中で２４時間増殖させ、一定範囲の濃度（０［コントロール］または１、２．５、５、１０、２５、５０）にわたってプロドラッグで処理した。２４時間後、細胞増殖の程度をＣＣＫ－８アッセイ（日本、東京、株式会社同仁化学研究所）を用いて評価した。ＣＣＫ－８溶液（１０μＬ）を各ウェルに添加し、続いて５％ＣＯ_２中３７℃で２時間インキュベートした。４４０ｎｍにおける吸光度を、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ２１０３マルチラベルリーダー （Ｐｒｅｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）によって測定した。細胞生存率は対照細胞のパーセンテージで表した。プロドラッグの各濃度について、 ３つのウェルからの平均吸収率の平均値を計算した。

細胞の取り込み
細胞取り込みを評価するために、Ｈ２２６細胞を６ウェルプレート（２．５×１０^５細胞／ｍＬ、５．０×１０^５細胞／ウェル）に播種し、２４時間インキュベートした。培地を除去した後、ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡ（１０μＭ）および１％のＤＭＳＯを含む培地中で、ｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ（１００μＭ）の存在下または非存在下で、細胞を３時間インキュベートした。次に、上清１００μＬを採取し、５．５％の硝酸９００μＬで希釈して試料「上清」として用いた。残りの上清を除去した後、細胞をＰＢＳで洗浄し、０．２ｍｌの０．０５％のトリプシン／ＥＤＴＡ溶液中でインキュベートすることによって細胞を剥がした。細胞懸濁液を２ｍＬの培地と混合し、遠心分離によって細胞を回収した。上清を慎重に除去した後、培地２ｍＬを加え、細胞数を計測した。次いで、６０％の硝酸４００μＬ中で溶解し、溶解物を９０℃に加熱して灰化した。灰化した試料を超純水４．４ｍＬで希釈して、試料「セル」として用いた。試料中のホウ素量をＭＰ－ＡＥＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ ４１００ ＭＰ－ＡＥＳ、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．、カリフォルニア州サンタクララ）を用いて定量した。細胞内ホウ素保持を評価する実験においては、まず、細胞を上記のようにｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎなしでＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡと３時間インキュベートした。次いで、細胞をＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡを含まない新鮮な培地中で３０分間インキュベートして細胞内ホウ素を放出させ、続いて０．０５％のトリプシン／ＥＤＴＡで回収した。その後の手順は前述の測定方法と同じであった。

［合成実施例１］
以下の合成スキーム１により、ＧＧＴ候補薬剤として本発明の化合物であるｇＧｌｕ－４ＯＣＢ－ＦＭＡ（化合物１８）を合成した。各反応工程の詳細は以下に記載する。

合成スキーム１

（１）化合物１０の合成
ｏ－カルボラン（５３４ｍｇ、３．７０ｍｍｏｌ）を１２ｍＬの脱水ＴＨＦに溶解した。－７８℃に冷却した後、溶液に１．６Ｍｎ－ＢｕＬｉのＴＨＦ溶液（２．５ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を滴下した。アルゴン雰囲気下、－７８℃で３０分間攪拌した後、１．２ＭエチレンオキシドのＴＨＦ溶液（５．０ｍＬ、６．０ｍｍｏｌ）を１０分かけて滴下し、次いで反応溶液を０℃に加温した。１時間攪拌した後、４ｍＬのＮＨ_４Ｃｌ飽和水溶液を添加した。数１０分間攪拌した後、反応溶液をＡｃＯＥｔで３回抽出した。合わせた有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して、淡黄色油状物（３７５．３ｍｇ、１．９８ｍｍｏｌ、５４％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 3.98 (s, 1H), 3.79 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.49 (t, J = 5.9 Hz, 2H),1.68 (s, 1H), 1.2-3.2 (br, 10H) ¹³C-NMR (101 MHz, CDCl₃) δ73.10, 60.74, 60.49, 39.85

（２）化合物１１の合成
５－ブロモ－２－ニトロベンズアルデヒド（１．００ｇ、４．３５ｍｍｏｌ）を２０ ｍＬの乾燥ＭｅＯＨに溶解し、次いで水素化ホウ素ナトリウム（１６３ｍｇ、４．３０ｍｍｏｌ）を０℃で部分的に添加した。溶液を室温で３０分間撹拌した。室温に加温した後、１０分間攪拌を続けた。反応を水でクエンチした後、溶媒を蒸発濃縮した。混合物をＡｃＯＥｔで抽出し、次いで有機層を食塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して白色固体（１２１１ｍｇ、５．２２ｍｍｏｌ、定量的収率）を得た。

（３）化合物１２の合成
化合物１１（６０２ｍｇ、２．５９ｍｍｏｌ）、ＴＢＳＣｌ（７８１ｍｇ、５．１８ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（５３１ｍｇ、７．８０ｍｍｏｌ）を、２５ｍＬの乾燥トルエンおよび５ｍＬの乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２に添加した。溶液をアルゴン雰囲気下室温で１６時間撹拌した。溶媒にＡｃＯＥｔを加え、有機層を水で２回洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して橙色の油（８３８ｍｇ、２．４２ｍｍｏｌ、９３％）を得た。

（４）化合物１３の合成
化合物１２（４０１ｍｇ、１．１６ｍｍｏｌ）および化合物１０（２８３ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）を２ｍＬの乾燥トルエンに溶解し、次いでＣｓ_２ＣＯ_３（５４９ｍｇ、 １．７５ｍｍｏｌ）および２－ジ－ｔ－ブチルホスフィノ－２’、４’、６’－トリイソプロピル－１，１’－ビフェニル（６．４ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）を添加した。凍結－ポンプ－解凍サイクルによる脱気後、溶液にＰｄ_２（ｄｂａ）_３（６．９ｍｇ、０．００７５ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液をアルゴン雰囲気下８５℃で２時間撹拌した。溶媒にＡｃＯＥｔを加え、有機層を水で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して橙色の固体（３８４ｍｇ、０．８４５ｍｍｏｌ、７３％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.18 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 6.82 (dd, J = 9.0, 3.2 Hz, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.17 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.79 (s, 1H), 2.79 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 1.40-3.20 (br, 10H), 1.00 (s, 9H), 0.16 (s, 6H). ¹³C-NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 162.1, 142.5, 140.1, 127.8, 113.1, 112.7, 72.1, 66.1, 62.4, 60.8, 37.1, 26.1, 18.5, -5.3; HRMS Calcd for ¹²C₁₇ ¹H₃₄ ¹⁰B₂ ¹¹B₈ ¹⁴N¹⁶O₄ ²⁸Si : 452.32603 [M-H]^- ; Found: 452.32608 (+0.05 mDa).

（５）化合物１４の合成
化合物１３（３８４ｍｇ、０．８４６ｍｍｏｌ）をエタノール１３ｍＬ及び水１２ｍＬに溶解し、次いで塩化アンモニウム（１４４ｍｇ、２．６８ｍｍｏｌ）及びＦｅ（１９５ｍｇ、３．４９ｍｍｏｌ）を添加した。室温で１時間攪拌した後、溶媒を７５℃で３時間攪拌した。エタノールを蒸発により除去した。残りの溶液をＡｃＯＥｔで抽出し、有機層をＮａＨＣＯ_３飽和水溶液で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して橙色の固体（１９６ｍｇ、０．４６３ｍｍｏｌ、５５％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.61-6.64 (m, 3H), 4.63 (s, 2H), 3.98 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.90 (s, 1H), 2.68 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 1.40-3.20 (br, 10H), 0.91 (s, 9H), 0.09 (s, 6H). ¹³C-NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 150.2, 140.4, 127.0, 116.9, 115.2, 114.6, 73.0, 66.4, 64.4, 60.3, 37.41, 26.0, 18.4, -5.4

（６）化合物１５の合成
化合物１４（１７７ｍｇ、０．４１８ｍｍｏｌ）およびＮ－Ａｌｌｏｃ－Ｇｌｕ（ＯＨ）－ＯＡｌｌｙｌ（１４１ｍｇ、０．５２０ｍｍｏｌ）を６ｍＬの乾燥ＴＨＦに溶解し、続いてＨＡＴＵ（４９０ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）及びＤＩＥＡ（２２５μＬ、１．２９ｍｍｏｌ）を添加した。溶液をアルゴン雰囲気下室温で８時間撹拌した。溶媒を蒸発により除去した。残渣にＡｃＯＥｔを加え、有機層を水で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して白色固体（２７６ｍｇ、０．４０８ｍｍｏｌ、９８％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.64 (s, 1H), 7.99 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 8.8, 3.0 Hz, 1H), 6.66 (d, J = 3.0 Hz, 1H), 5.84-5.94 (m, 2H), 5.63 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 5.18-5.35 (m, 4H), 4.68 (s, 2H), 4.65 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 4.56 (d, J = 4.6 Hz, 2H), 4.43 (m, 1H), 4.04 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.84 (s, 1H), 2.71 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.31-2.53 (m, 3H), 2.07-2.15 (m, 1H), 0.92 (s, 9H), 0.10 (s, 6H)

（７）化合物１６の合成
化合物１５（２４３ｍｇ、０．３５９ｍｍｏｌ）を２０ｍＬの乾燥ＴＨＦに溶解し、続いてＴＢＡＦ（ＴＨＦ溶液中、約１Ｍ）（９１４μＬ、０．９１４ｍｍｏｌ）および酢酸（３４．９μＬ、０．６１０ｍｍｏｌ）を添加した。溶液をアルゴン雰囲気下室温で４５分間撹拌し、溶媒を蒸発により除去した。残渣にＡｃＯＥｔを加え、有機層を水で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ （ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して白色固体（１３２ｍｇ、０．２３５ｍｍｏｌ、６５％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.49 (s, 1H), 7.73 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.77-6.80 (m, 2H), 5.83-5.95 (m, 2H), 5.70 (brs, 1H), 5.20-5.36 (m, 4H), 4.54-4.65 (m, 6H), 4.42 (m, 1H), 4.04 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.85 (s, 1H), 3.22 (brs, 1H), 2.71 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.33-2.50 (m, 3H), 1.98-2.07 (m, 1H), 1.40-3.20 (br, 10H). ¹³C-NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 171.68, 171.03, 156.57, 154.78, 132.40, 131.37, 130.47, 125.33, 119.36, 118.20, 115.28, 114.10, 72.68, 66.42, 66.21, 65.79, 63.59, 60.41, 53.58, 37.21, 33.46, 29.00.

（８）化合物１７の合成
化合物１６（４８ｍｇ、０．０８５ｍｍｏｌ）を３ｍＬの乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２に溶解し、次いで０℃で２ｍＬのＤｅｏｘｏｆｌｕｏｒ（登録商標）（３１．６μＬ、０．１７１ ｍｍｏｌ）の乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液を添加した。溶液をアルゴン雰囲気下室温で３０分間撹拌し、反応溶液にＣＨ_２Ｃｌ_２を添加し、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して白色固体（３４ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ、７１％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.80 (s, 1H), 7.63 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 6.85 (m, 2H), 5.85-5.95 (m, 2H), 5.63 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 5.20-5.47 (m, 6H), 4.65 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 4.57 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 4.44-4.47 (m, 1H), 4.06 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.83 (s, 1H), 2.72 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.50 (m, 2H), 2.31-2.38 (m, 1H), 1.96-2.07 (m, 1H), 1.40-3.20 (br, 10H).¹³C-NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 171.64, 170.83, 156.42, 155.17, 132.49, 131.40, 130.57, 130.43, 129.64, 126.46, 119.31, 118.13, 115.28, 114.84, 114.77, 83.44, 81.80, 72.59, 66.37, 66.15, 65.88, 60.42, 53.50, 37.22, 33.11, 29.00.

（９）化合物１８の合成
化合物１７（１７ｍｇ、０．０３０ｍｍｏｌ）を５ｍＬの乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２に溶解し、次いで１，３－ジメチルバルビツール酸（４６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）およびテトラキス（９．７ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）を添加した。溶液をアルゴン雰囲気下室温で４時間撹拌した。反応溶液を蒸発により濃縮した。残渣をＨＰＬＣ（溶離液：Ａ：Ｈ_２Ｏ、０．１％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）、溶離液Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ＝８０／２０、０．１％ＴＦＡ（ｖ／ｖ））で精製し、白色固体（８．６ｍｇ、０．０２０ｍｍｏｌ、６５％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, MeOH-D4) δ 7.25 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.94 (dd, J = 8.7, 2.7 Hz, 1H), 5.34 (d, J = 47.6 Hz, 2H), 4.59 (s, 1H), 4.11 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 4.03 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 2.78 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.19-2.30 (m, 2H). ¹³C-NMR (101 MHz, MeOH-D4) δ 172.32, 170.35, 156.73, 133.89, 133.72, 127.83, 114.65, 114.63, 113.74, 113.66, 81.75, 80.12, 73.36, 65.67, 61.94, 52.26, 36.77, 31.05, 25.78.

［実施例１］
ｇＧｌｕ－４ＯＣＢ－ＦＭＡの精製酵素との反応性の確認
上記で合成したｇＧｌｕ－４ＯＣＢ－ＦＭＡがＧＧＴの基質となり得るか検証するため、精製酵素との酵素反応を行い、ＬＣ／ＭＳにより生成物解析を行った。
その結果、ＧＧＴ添加によりｇＧｌｕ－４ＯＣＢ－ＦＭＡは完全に消費され、ベンジルアルコール体が生成物として確認された（図３）。これは生成したアザキノンメチド中間体にバッファー中の水分子が求核剤となって反応したものと考えられ、アザキノンメチド中間体の生成を間接的に示す結果である。また、ＧＧＴの阻害剤であるＧＧｓＴｏｐ（登録商標）存在下では酵素反応が進行していないことから、ｇＧｌｕ－４ＯＣＢ－ＦＭＡがＧＧＴの基質となることを確認した。
図３は、ｇＧｌｕ－４ＯＣＢ－ＦＭＡ（１００μＭ）の酵素反応のＬＣ／ＭＳ分析：ＧＧＴ（１Ｕ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、ＧＧｓＴｏｐ（登録商標）（１００μＭ）の存在下又は非存在下で、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）（共溶媒として１％ＤＭＳＯ）中、３７℃で１２時間インキュベートした後のｇＧｌｕ－４ＯＣＢ－ＦＭＡおよび生成物化合物のマスクロマトグラムの結果である。

［合成実施例２］
次に、候補化合物の標的酵素を、種々のがん細胞で活性亢進が報告されているアミノペプチダーゼであるジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ－ＩＶ）へと変更し、同様の薬剤デザインに基づき、以下の合成スキーム２により、本発明の化合物であるＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡ（化合物２５）を合成した。ここで、ＤＰＰ－ＩＶは様々なアミノ酸２残基を基質認識することが知られているが、Ｇｌｕ－Ｐｒｏ配列は、中でも水溶性の高い構造であると考えられるので、本配列を基質部位として採用した。

合成スキーム２

（１）化合物２２の合成
化合物１４（１２５．４ｍｇ、０．２９６０ｍｍｏｌ）およびＢｏｃ－Ｅ（ＯｔＢｕ）－Ｐ－ＯＨ（１４２．４ｍｇ、０．３５５６ｍｍｏｌ）を２ｍＬの乾燥ＴＨＦに溶解し、続いてＨＡＴＵ（３４１．２ｍｇ、０．８９７３ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１５５μＬ、０．８８８ｍｍｏｌ）を添加した。溶液をアルゴン雰囲気下室温で３時間撹拌した。溶媒を蒸発により除去した。残渣にＡｃＯＥｔを加え、有機層を食塩水で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して白色固体（２２７．８ｍｇ、０．２８３ｍｍｏｌ、９６％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.82 (s, 1H), 7.81 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.72 (dd, J = 8.7, 2.7 Hz, 1H), 5.23 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 4.75 (d, HBn, J_gem = 13.3 Hz, 1H), 4.51-4.64 (m, 3H), 4.03 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.85 (s, 1H), 3.75-3.78 (m, 2H), 2.71 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.27-2.42 (m, 3H), 2.15-2.24 (m, 1H), 1.98-2.11 (m, 3H), 1.69-1.79 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.43(s, 9H), 1.40-3.20 (br, 10H), 0.93 (s, 9H), 0.13 (s, 3H), 0.09 (s, 3H). ¹³C-NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 172.20, 172.09, 169.37, 155.67, 154.33, 133.45, 130.01, 124.25, 113.72, 113.14, 80.69, 79.82, 72.74, 65.75, 63.44, 60.88, 60.28, 51.22, 47.48, 37.19, 30.98, 28.41, 28.30, 28.16, 28.03, 25.94, 25.25, 18.36, -5.12; LRMS 806.58 [C₃₆H₆₇ ¹⁰B₂ ¹¹B₈N₃O₈Si+H]⁺

（２）化合物２３の合成
化合物２２（２０３ｍｇ、０．２５２ｍｍｏｌ）を１５ｍＬの乾燥ＴＨＦに溶解し、続いてＴＢＡＦ（ＴＨＦ溶液中、約１Ｍ）（７５７μＬ、０．７５７ｍｍｏｌ）およびＡｃＯＨ（２８．９μＬ、０．５０５ｍｍｏｌ）を添加した。溶液をアルゴン雰囲気下室温で４５分間撹拌し、溶媒を蒸発により除去した。残渣にＡｃＯＥｔを加え、有機層を食塩水で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して白色固体（１０９．６ｍｇ、０．１５８ｍｍｏｌ、６３％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.10 (s, 1H), 7.78 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.74-6.78 (m, 2H), 5.29 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.73 (dd, J = 7.8, 2.7 Hz, 1H), 4.55-4.58 (m, 3H), 4.03 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.73-3.84 (m, 4H), 2.71 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.05-2.41 (m, 5H), 1.78-1.85 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.41 (s, 9H), 1.40-3.20 (br, 10H). ¹³C-NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 173.16, 172.66, 169.73, 155.55, 154.56, 133.28, 130.50, 124.81, 115.15, 113.91, 81.37, 80.08, 72.72, 65.75, 63.55, 61.24, 60.28, 51.22, 47.65, 37.22, 30.91, 28.41, 28.30, 28.08, 27.89, 25.17

（３）化合物２４の合成
化合物２３（９６．５ｍｇ、０．１３９ｍｍｏｌ）を６ｍＬの乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２に溶解し、次いで０℃でＤｅｏｘｏｆｌｕｏｒ（登録商標）（５１．４μＬ、０．２７９ｍｍｏｌ）を添加した。溶液をアルゴン雰囲気下室温で１時間撹拌した。反応溶液にＣＨ_２Ｃｌ_２を加え、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して、透明な固体（７９．８ｍｇ、０．１１５ｍｍｏｌ、８３％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.81 (s, 1H), 7.67 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.84 (m, 2H), 5.27-5.39 (m, 3H), 4.76 (dd, J = 7.8, 2.3 Hz, 1H), 4.55 (td, J = 9.0, 3.8 Hz, 1H), 4.05 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.84 (s, 1H), 3.74 (m, 2H), 1.40-3.20 (br, 10H), 2.72 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.46-2.51 (m, 1H), 2.27-2.43 (m, 2H), 1.95-2.20 (m, 4H), 1.75-1.81 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.42 (s, 9H). ¹³C-NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 173.22, 172.20, 169.53, 155.63, 154.93, 130.00, 129.62, 125.78, 115.22, 114.80, 114.72, 82.85, 81.20, 80.86, 79.98, 72.63, 65.83, 60.70, 60.34, 51.21, 47.67, 37.20, 31.03, 28.40, 28.13, 28.01, 27.24, 25.30; LRMS 806.58 [C₃₀H₅₂ ¹⁰B₂ ¹¹B₈FN₃O₇+H]⁺

（４）化合物２５の合成
化合物２４（５０．８ｍｇ、０．０７３２ｍｍｏｌ）を１ｍＬのＴＦＡに溶解した。溶液を室温で１０分間撹拌した。反応溶液をＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈し、蒸発により濃縮した。残渣をＨＰＬＣ（溶離液：Ａ：Ｈ_２Ｏ、０．１％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）、溶離液Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ＝８０／２０、０．１％ＴＦＡ（ｖ／ｖ））で精製して、白色固体（３４．３ｍｇ、０．０６３８ｍｍｏｌ、８７％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, MeOH-D4) δ 7.22 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.93 (dd, J = 8.7, 2.3 Hz, 1H), 5.24-5.48 (m, 2H), 4.58-4.63 (m, 2H), 4.38 (dd, J = 7.3, 5.0 Hz, 1H), 4.10 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.69-3.78 (m, 2H), 1.40-3.20 (br, 10H), 2.77 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.59 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.36-2.42 (m, 1H), 2.00-2.24 (m, 5H). ¹³C-NMR (101 MHz, Acetonitrile-d3) δ 175.16, 170.76, 167.49, 156.20, 133.20, 133.04, 128.19, 128.14, 127.32, 115.00, 114.23, 114.15, 82.27, 80.65, 73.83, 65.80, 62.04, 60.93, 51.51, 47.49, 36.66, 29.11, 28.98, 24.98, 24.84; HRMS Calcd for ¹²C₂₁ ¹H₃₇ ¹⁰B₂ ¹¹B₈ ¹⁹F¹⁴N₃ ¹⁶O₅: 538.37204 [M+H]⁺ ; Found: 538.37055 (-1.49 mDa).

［参考合成例１］
以下の合成スキーム３により、コントロール化合物であるＥＰ－４ＯＣＢ－ＭＡ（化合物２６）を合成した。各反応工程の詳細は以下に記載する。

合成スキーム３

（１）化合物２６の合成
化合物２０（６２ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）およびＮ－Ｂｏｃ－Ｅ（ＯｔＢｕ）－Ｐ－ＯＨ（１２４ｍｇ、０．３１０ｍｍｏｌ）を数ｍＬの乾燥ＴＨＦに溶解し、続いてＨＡＴＵ（２４１ｍｇ、０．６３４ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１１０．５μＬ、０．６３３ｍｍｏｌ）を添加した。溶液をアルゴン雰囲気下室温で３時間撹拌した。溶媒を蒸発により除去した。残渣にＡｃＯＥｔと水を加え、有機層を抽出した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、低圧下で濃縮した。粗化合物を２ｍＬのＴＦＡに溶解した。溶液を室温で１０分間撹拌し、反応溶液を蒸発により濃縮した。残渣をＨＰＬＣ （溶離液：Ａ：Ｈ_２Ｏ、０．１％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）、溶離液Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ＝８０／２０、０．１％ＴＦＡ（ｖ／ｖ））で精製し、白色固体（８４ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ、７６％、２段階）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, MeOH-D4) δ 7.16 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 6.73 (dd, J = 8.6, 2.7 Hz, 1H), 4.65 (dd, J = 8.2, 5.5 Hz, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.38 (dd, J = 7.3, 5.0 Hz, 1H), 4.05 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 3.68-3.79 (m, 2H), 2.75 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 2.59 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.36-2.41 (m, 1H), 2.02-2.26 (m, 8H), 1.40-3.20 (br, 10H). ¹³C-NMR (101 MHz, MeOH-D4) δ 174.66, 171.77, 167.22, 156.59, 135.64, 128.52, 127.35, 115.93, 111.69, 73.46, 65.44, 61.86, 60.58, 50.92, 48.31, 48.10, 47.88, 47.67, 47.46, 47.25, 47.03, 36.80, 29.60, 28.12, 25.28, 24.91, 17.05

［実施例２］
ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡの精製酵素との反応性の確認
上記で合成したＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡ、ＥＰ－４ＯＣＢ－ＭＡが、まずはＤＰＰ－ＩＶの基質となるかを評価するべく、精製酵素と反応させた後、ＬＣ／ＭＳにより生成物の解析を行った。
まず、ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡの結果を以下に示す。ＤＰＰ－ＩＶ添加によりＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡは完全に消費され、ベンジルアルコール体が生成物として確認された（図４）。これは生成したアザキノンメチド中間体にバッファー中の水分子が求核剤となって反応したものと考えられ、アザキノンメチド中間体の生成を間接的に示す結果である。また、ＤＰＰ－ＩＶの阻害剤であるｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ存在下では酵素反応が抑えられたことから、ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡがＤＰＰ－ＩＶの基質となることを確認した。
ここで、図４は、ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡ（１００μＭ）の酵素反応のＬＣ／ＭＳ分析：ＤＰＰ－ＩＶ（＞０．１Ｕ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、ｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ（２００μＭ）の存在下又は非存在下で、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）（共溶媒として１％ＤＭＳＯ）中、３７℃で１２時間インキュベートした後のＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡおよび生成物化合物のマスクロマトグラムの結果である。

ＥＰ－４ＯＣＢ－ＭＡについても同様に、ＤＰＰ－ＩＶ添加によりトルイジン体が生成し、阻害剤添加により酵素反応が阻害されることが確認された（図５）。
ここで、図５は、ＥＰ－４ＯＣＢ－ＭＡ（１００μＭ）の酵素反応のＬＣ／ＭＳ分析：ＤＰＰ－ＩＶ（＞０．１Ｕ／ｍＬ）の存在下又は非存在下、ｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ（２００μＭ）の存在下又は非存在下で、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）（共溶媒として１％ＤＭＳＯ）中、３７℃で１２時間インキュベートした後のＥＰ－４ＯＣＢ－ＭＡおよび生成物化合物のマスクロマトグラムの結果である。

［実施例３］
ＣＣＫ－８アッセイによる細胞膜透過性、細胞選択性及び細胞毒性の評価
次に、ＤＰＰ－ＩＶ高発現／低発現細胞株を用いたＣＣＫ－８アッセイを行った。
まず、ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡの結果を以下に示す。ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡ投与後２４時間において細胞生存率の評価を行ったところ、ＤＰＰ－ＩＶ高発現株であるＨ２２６細胞、ＨｅｐＧ２細胞、Ｃａｃｏ－２細胞では濃度依存的な細胞生存率の低下が確認された。結果を図６に示す。
図６は、ＣＣＫ８及びｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎの有無による２４時間のＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡ処理における細胞生存率の測定結果である。未処理と比較した濃度の平均値±標準偏差を示す（ｎ＝３生物学的反復）。

一方、ＤＰＰ－ＩＶ発現株であるＨ４６０細胞においては５０μＭという高濃度の投与でも細胞生存率がほとんど低下しないことが明らかとなった。また、ＤＰＰ－ＩＶ高発現株においても、阻害剤であるｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎの投与により生存率が大幅に回復していることから、ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡの細胞毒性はＤＰＰ－ＩＶ依存的であることが示唆される結果となった。このことは、酵素反応前の化合物は細胞膜透過性が低いが酵素反応後に疎水性が向上し、細胞膜透過性が向上することに起因するものであると考えられる。

また、ＤＰＰ－ＩＶ高発現であるＨ２２６細胞においてＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡ投与後３時間で同様の評価を行ったところ、時間依存的な細胞生存率の低下が確認された。結果を図７に示す。
図７は、３時間又は２４時間のＣＣＫ８及びｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎの有無によるＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡ処理における細胞生存率の測定結果を示す。未処理と比較した濃度の平均値±標準偏差を示す（ｎ＝３生物学的反復）。
２５μＭ投与群と５０μＭ投与群とで、細胞生存率に違いが無いことから、ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡが細胞膜上のＤＰＰ－ＩＶによって徐々に代謝されており、投与後３時間の段階ではまだ途中であると考えることにより説明ができる。

一方コントロール化合物であるＥＰ－４ＯＣＢ－ＭＡについては、ＤＰＰ－ＩＶ高発現／低発現に関わらず濃度依存的な細胞生存率の低下が確認された。結果を図８に示す。
図８は、ＣＣＫ８及びｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎの有無による２４時間のＥＰ－４ＯＣＢ－ＭＡ処理における細胞生存率の測定結果である。未処理と比較した濃度の平均値±標準偏差を示す（ｎ＝３生物学的反復）。
阻害剤ｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ添加でも細胞生存率が回復しないことも踏まえると、ＤＰＰ－ＩＶ非依存的に毒性が発揮していることが示唆された。

［実施例４］
培養細胞系における選択性・Cellular uptakeの評価
ＢＮＣＴ薬剤がどの程度細胞内や腫瘍組織内に集積しているのかを評価する際、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏのいずれの系においてもＩＣＰ－ＭＳ（誘導結合プラズマ質量分析計）やＩＣＰ－ＡＥＳ（誘導結合プラズマ発光分光分析）といった無機元素分析法によるホウ素定量法が広く用いられている。中でもＭＰ－ＡＥＳ（マイクロ波窒素プラズマ発光分光分析装置）は、高価なガスや可燃性のガスを使うことなく、安全で簡便にホウ素の定量が可能な装置である。
上記の実施例により、ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡは酵素反応前後で細胞膜透過性が変化することによりＤＰＰ－ＩＶ高発現細胞選択的に集積していることが予想されるが、これをより詳細に評価するため、ＭＰ－ＡＥＳを用いて、ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡ投与後３時間における細胞内ホウ素濃度を定量した。使用したプロトコルを図９に示す。Ｈ２２６細胞におけるＣＣＫ－８アッセイの結果から、細胞が死なないと考えられる条件として１０μＭでの投与３時間後が適切であると考え、細胞内ホウ素濃度の定量を行った。
細胞外ホウ素の定量の結果を図１０に示す。Ｈ２２６細胞をＤＰＰ－ＩＶ阻害剤（ｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ）無し／有りでＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡと３時間培養した。ブランク評価のために、細胞を播種せず、薬剤を含有する培地のみを添加した。結果は平均値±標準偏差（ｎ＝３、生物学的反復）で示す。

ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡ投与後３時間において、まずは細胞外液のホウ素濃度を定量したところ、薬剤投与群は、細胞なしで薬剤だけ入れたｂｌａｎｋ（ブランク）群よりもホウ素濃度が減少している様子が確認された。また、ＤＰＰ－ＩＶ阻害剤であるｓｉｇａｔｇｌｉｐｔｉｎ存在下では、細胞外液のホウ素濃度低下はほとんど確認されなかったことから、やはりＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡが細胞膜上のＤＰＰ－ＩＶと酵素反応することで初めて細胞内へと取り込まれることが示唆された。

さらに、細胞内ホウ素濃度も定量したところ、ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡはＤＰＰ－ＩＶ高発現が知られているＨ２２６細胞において、１０^６ｃｅｌｌｓあたり０．２７μｇｂｏｒｏｎ（ホウ素）という高濃度で細胞内に集積していることが明らかとなった（図１１）。試験条件等は以下の通りである。
図１１（ａ）：ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡの細胞取り込み。Ｈ２２６細胞をＤＰＰ－ＩＶ阻害剤（ｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎ）無し／有りでＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡと３時間培養した。結果は平均値±標準偏差（ｎ＝３、生物学的反復）で示す。＊＊Ｐ＜０．００１（スチューデントのt検定）。
図１１（ｂ）：ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡの細胞内保持。細胞をＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡと共に、ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡを含まない新鮮な培地中でのさらなる培養無し／有りで３時間培養した。追加培養を行わない場合の結果は（ａ）と同じである。結果は平均値±標準偏差（ｎ＝３、生物学的反復）で示す。

さらにＤＰＰ－ＩＶ阻害剤ｓｉｔａｇｌｉｐｔｉｎの添加によって細胞内ホウ素濃度が４分の１程度まで低下し、ＤＰＰ－ＩＶ依存的な細胞内集積が明らかとなった（図１２（ａ）参照）。ＢＮＣＴを実施できる目安となるＴ／Ｎ（Ｔｕｍｏｒ／Ｎｏｒｍａｌ）は３であると言われており、ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡがＢＮＣＴ薬剤として有望であることが示唆された。
また薬剤を含む培地を除去し、新鮮な培地に置き換えてから３０分間のインキュベーションをｗａｓｈ操作として行った後で同様に細胞内ホウ素濃度を定量したところ、ｗａｓｈ操作前とその濃度はほとんど変化することはなかった（図１１（ｂ）参照）。
このように、ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡが優れた細胞内滞留性を有することが示唆された。

［実施例５］
アザキノンメチド中間体と求核性基の反応性評価
ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡの薬剤戦略では、ＤＰＰ－ＩＶと酵素反応後生じるアザキノンメチド中間体が細胞内求核種と反応することにより細胞内滞留性を獲得する。この機能がワークすることを確認するための検討として、精製酵素を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏの検討を行った。具体的には、Ｌ－システインやグルタチオン存在下でＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡとＤＰＰ－ＩＶ精製酵素とを反応させることで、これら求核種がアザキノンメチド中間体と反応しているかどうかＬＣ／ＭＳを用いて評価することとした。
使用したプロトコルは、実施例２のＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡの精製酵素との反応性の確認で用いたのと同様のプロトコルに、以下の操作を加えたものである。
・アザキノンメチドと求核試薬（ＧＳＨ、ｌ－Ｃｙｓ）との反応を評価する実験においては、５ｍＭの各求核試薬を含む０．１Ｍ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．４）を調製して使用した。

結果を以下に示す（図１２）。５ｍＭシステイン共存下において精製酵素とインキュベーションし、１２時間後の反応物解析を行ったところ、システインがアザキノンメチド中間体へ求核付加したと思われる化合物のＭＳピークが検出された。また、同時に検出された水付加体のＭＳピークはシステインを入れなかった場合よりも大きく強度が下がっていることから、水分子とシステインが競合してアザキノンメチド中間体と反応していることが示唆された。
また、システインを入れなかった場合、ｍ／ｚ＝５９９のＭＳピークが検出されており、その値とカルボランに由来する同位体ピークの形状より、以下のような化合物に由来するものと推定されるが、システイン共存下ではこのシグナルは殆ど検出されなかった。

５ｍＭグルタチオン存在下では、グルタチオンのＳＨ基の反応性がシステインよりも低いためか、システインの場合よりも水付加体が多く形成されたものの、こちらもやはりグルタチオン付加体と思われるＭＳシグナルが検出された。
以上よりアザキノンメチド中間体が細胞内求核種であるシステインやグルタチオンと反応し、共有結合を形成することが明らかとなり、設計通りホウ素薬剤が細胞内求核種によってトラップされる可能性が示唆された。

図１２は、ＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡ（１００μＭ）の酵素反応のＬＣ／ＭＳ分析：ＤＰＰ－ＩＶ（＞０．１Ｕ／ｍＬ）の存在下又は非存在下で、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）（共溶媒として１％ＤＭＳＯ）中、３７℃で１２時間インキュベートした後のＥＰ－４ＯＣＢ－ＦＭＡおよび生成物化合物のマスクロマトグラムの結果である。

［合成実施例３］
以下の合成スキーム４により、アルキル基にてカルボラン部位とベンゼン環部分を繋いだ本発明の化合物であるＥＰ－４ＡＣＢ－ＦＭＡ（化合物３６）を合成した。各反応工程の詳細は以下に記載する。

合成スキーム４

（１）化合物２７（[３－（トリメチルシリル）プロプ－２－インイル]－ｏ－カルボラン）の合成
ｏ－カルボラン（６８９ｍｇ、４．７８ｍｍｏｌ）を１５ｍＬの乾燥ＴＨＦに溶解した。－２０℃に冷却した後、溶液に１．６Ｍ ｎ－ＢｕＬｉのヘキサン溶液（３．６ ｍＬ、５．８ｍｍｏｌ）を滴下した。アルゴン雰囲気下－２０℃で３０分間撹拌した後、２ｍＬの３－ブロモ－１－（トリメチルシリル）－１－プロピン（１．０ｇ、５．２ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ溶液を滴下した。－２０℃で攪拌した後、反応溶液を室温に温めた。２．５時間撹拌後、反応をＨ_２Ｏでクエンチした。混合物を低圧下で濃縮した。残渣をＡｃＯＥｔおよび食塩水で希釈し、有機層を抽出し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して、淡黄色油状物（８８８ｍｇ、３．４９ｍｍｏｌ、７３％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 3.93 (s, 1H), 3.20 (s, 2H), 0.18 (s, 9H), 1.40-3.20 (br, 10H).

（２）化合物２８（プロプ－２－インイル－ｏ－カルボラン）の合成
化合物２７（７８２ｍｇ、３．０７ｍｍｏｌ）を７ｍＬの乾燥ＴＨＦに溶解し、続いてＴＢＡＦ（ＴＨＦ溶液中、約１Ｍ）（３．３８ｍＬ、３．３８ｍｍｏｌ）および酢酸（２２９μＬ、４．００ｍｍｏｌ）を添加した。溶液をアルゴン雰囲気下室温で１時間撹拌した。溶媒を蒸発により除去した。残渣にＡｃＯＥｔを加え、有機層を食塩水で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して、透明な固体（３９３ｍｇ、２．１６ｍｍｏｌ、７０％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 4.01 (s, 1H), 3.21 (d, J = 2.7 Hz, 2H), 2.37 (t, J = 2.7 Hz, 1H), 1.40-3.20 (br, 10H). ¹³C-NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 76.35, 75.01, 69.65, 59.61, 28.31.

（３）化合物２９の合成
２－アミノ－５－ヨード安息香酸（２．０ｇ、４．３５ｍｍｏｌ）を１５ｍＬの乾燥ＴＨＦに溶解し、続いて０℃でＬｉＡｌＨ_４（ＴＨＦ溶液中２．５Ｍ）（６ｍＬ、１５ｍｍｏｌ）を滴下した。室温に加温した後、溶液を室温で４時間撹拌した。ＡｃＯＥｔによる反応を慎重にクエンチングした後、溶媒をＨ_２Ｏで希釈した。混合物を濃縮してＴＨＦを除去し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）で濾過した。沈殿物をＡｃＯＥｔで洗浄した後、濾液をＡｃＯＥｔで抽出し、有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して黄色粉末（７０７ｍｇ、２．８４ｍｍｏｌ、３８％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 7.38 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.30 (dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 1H), 6.53 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.49 (s, 2H).

（４）化合物３０の合成
化合物２９（６０１ｍｇ、２．４１ｍｍｏｌ）、ＴＢＳＣｌ（５９１ｍｇ、３．９２ｍｍｏｌ）およびイミダゾール（３９９ｍｇ、５．８６ｍｍｏｌ）を乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２１０ｍＬ中に添加した。溶液をアルゴン雰囲気下室温で２時間撹拌した。溶媒にＡｃＯＥｔを加え、有機層を水で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して黄色油状物（８５５ｍｇ、２．３５ｍｍｏｌ、９８％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.34 (dd, J = 8.5, 2.3 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.44 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.60 (s, 2H), 4.22 (br, 2H), 0.89 (s, 9H), 0.07 (s, 6H).

（５）化合物３１の合成
化合物３０（５８２ｍｇ、１．６０ｍｍｏｌ）および化合物２０（３４０ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）を５ｍＬのＤＩＥＡに溶解し、次いでヨウ化銅（Ｉ）（３３ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を添加した。凍結－ポンプ－解凍サイクルによる脱気後、溶液にＰｄＣｌ_２（ＰＰｈ_３）_２（５６ｍｇ、０．０８０ｍｍｏｌ）を添加した。反応溶液をアルゴン雰囲気下７０℃で６時間撹拌した。溶媒にＡｃＯＥｔを加え、有機層を水および食塩水で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して黄色固体（３７０ ｍｇ、０．８７７ｍｍｏｌ、５５％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 7.15 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 7.08 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.58 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.63 (s, 2H), 4.43 (s, 2H), 4.04 (s, 1H), 3.38 (s, 2H), 1.40-3.20 (br, 10H), 0.90 (s, 9H), 0.08 (s, 6H). ¹³C-NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 147.27, 132.51, 131.95, 124.98, 115.46, 110.00, 87.28, 79.17, 71.23, 64.56, 59.58, 29.38, 25.92, 18.31, -5.17

（６）化合物３２の合成
化合物３１（３２１ｍｇ、０．７６９ｍｍｏｌ）をメタノール１０ｍＬに溶解し、続いて少量のＰｄ／Ｃ（１０％、５５％水）を添加した。Ｈ_２下室温で３時間撹拌した後、反応混合物をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）で濾過し、濾液を低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して黄色油状物（３２１ｍｇ、０．７６１ｍｍｏｌ、９９％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 6.85 (dd, J = 7.8, 1.8 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.65 (s, 2H), 3.51 (s, 1H), 2.47 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.14-2.19 (m, 2H), 1.70-1.74 (m, 2H), 1.40-3.20 (br, 10H), 0.90 (s, 9H), 0.07 (s, 6H). ¹³C-NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 144.47, 129.64, 128.45, 128.35, 125.54, 116.03, 75.38, 64.90, 61.19, 37.44, 34.11, 31.14, 25.97, 18.36, -5.11.

（７）化合物３３の合成
化合物３２（１３９ｍｇ、０．３３０ｍｍｏｌ）およびＮ－Ｂｏｃ－Ｅ（ＯｔＢｕ）－Ｐ－ＯＨ（１７１ｍｇ、０．４３０ｍｍｏｌ）を２ｍＬの乾燥ＴＨＦに溶解し、続いてＨＡＴＵ（３７７ｍｇ、０．９９１ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１７３μＬ、０．９９０ｍｍｏｌ）を添加した。溶液をアルゴン雰囲気下室温で３時間撹拌した。溶媒を蒸発により除去した。残渣にＡｃＯＥｔを加え、有機層を食塩水で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製し、白色粉末（２０９ｍｇ、０．２６０ｍｍｏｌ、７９％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.99 (s, 1H), 7.95 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.01 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 5.23 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.79 (d, HBn, J_gem = 12.8 Hz, 1 H), 4.61 (d, HBn, J_gem = 12.8 Hz, 1H), 4.51-4.56 (m, 2H), 3.80 (m, 2H), 3.52 (s, 1H), 2.55 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.30-2.42 (m, 2H), 2.00-2.28 (m, 6H), 1.69-1.80 (m, 4H), 1.44 (s, 9H), 1.43 (s, 9H), 1.40-3.20 (br, 10H), 0.92 (s, 9H), 0.12 (s, 3H), 0.07 (s, 3H). ¹³C-NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 172.23, 171.81, 169.44, 155.69, 136.04, 135.12, 130.47, 128.12, 127.44, 122.34, 80.62, 79.76, 75.16, 64.34, 61.35, 61.07, 51.20, 47.44, 37.32, 34.38, 31.00, 30.76, 28.72, 28.42, 28.18, 28.01, 25.94, 25.25, 18.35, -5.07

（８）化合物３４の合成
化合物３３（１８２ｍｇ、０．２２６ｍｍｏｌ）を３ｍＬの乾燥ＴＨＦに溶解し、続いてＴＢＡＦ（ＴＨＦ溶液中、約１Ｍ）（７２６μＬ、０．７２６ｍｍｏｌ）および酢酸（２７．７μＬ、０．４８４ｍｍｏｌ）を添加した。溶液をアルゴン雰囲気下室温で４０分間撹拌し、溶媒を蒸発により除去した。残渣にＡｃＯＥｔを加え、有機層を水で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ （ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して白色固体（１３２ｍｇ、０．１９１ｍｍｏｌ、８５％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 9.29 (s, 1H), 7.89 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 5.32 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.73 (dd, J = 7.8, 2.7 Hz, 1H), 4.61 (s, 2H), 4.56 (td, J = 8.7, 3.7 Hz, 1H), 3.87 (brs, 1H), 3.73-3.83 (m, 2H), 3.54 (s, 1H), 2.53 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.23-2.40 (m, 3H), 2.05-2.19 (m, 6H), 1.71-1.85 (m, 3H), 1.44 (s, 9H), 1.41 (s, 9H), 1.40-3.20 (br, 10H). ¹³C-NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 173.25, 172.62, 169.69, 155.57, 136.72, 135.19, 130.78,

（９）化合物３５の合成
化合物３４（１１２ｍｇ、０．１６２ｍｍｏｌ）を６ｍＬの乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２に溶解し、次いでＤｅｏｘｏ－Ｆｌｕｏｒ（登録商標）（５９．７μＬ、０．３２４ｍｍｏｌ）溶液を４ｍＬの乾燥ＣＨ_２Ｃｌ_２に０℃で滴下した。反応溶液をアルゴン雰囲気下室温で１時間撹拌した。反応溶液にＣＨ_２Ｃｌ_２を添加し、ＮａＨＣＯ_３飽和水溶液で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で脱水し、低圧下で濃縮した。残渣をＭＰＬＣ（ＯＨシリカゲル、ＡｃＯＥｔ／ヘキサン）で精製して、透明な固体（８８ｍｇ、０．１２７ｍｍｏｌ、７８％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, CDCl₃) δ 8.95 (s, 1H), 7.83 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.13 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.08 (s, 1H), 5.30-5.42 (m, 3 H), 4.78 (dd, J = 8.0, 2.1 Hz, 1H), 4.55 (td, J = 9.4, 3.5 Hz, 1H), 3.75 (dd, J = 7.8, 5.0 Hz, 2H), 3.54 (s, 1H), 2.48-2.58 (m, 3H), 2.28-2.42 (m, 2H), 2.16-2.20 (m, 2H), 1.94-2.11 (m, 3H), 1.71-1.81 (m, 4H), 1.44 (s, 9H), 1.43 (s, 9H), 1.40-3.20 (br, 10H). ¹³C-NMR (101 MHz, CDCl₃) δ 173.33, 172.19, 169.37, 155.64, 137.15, 134.75, 134.72, 129.83, 129.80, 129.30, 129.24, 127.37, 127.21, 123.68, 83.32, 81.68, 80.83, 79.97, 77.46, 77.15, 76.83, 75.03, 61.36, 60.84, 51.18, 47.67, 37.43, 34.35, 31.05, 30.76, 28.41, 28.14, 28.06, 27.18, 25.31.

（１０）化合物３６の合成
化合物３５（５３ｍｇ、０．０７７ｍｍｏｌ）を１ｍＬのＴＦＡに溶解した。溶液を室温で１０分間撹拌し、反応溶液をＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈し、蒸発により濃縮した。残渣をＨＰＬＣ（溶離液：Ａ：Ｈ_２Ｏ、０．１％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）、溶離液：Ｂ：ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２Ｏ＝８０／２０、０．１％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）で精製し、白色粉末（２４ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ、５８％）を得た。
¹H-NMR (400 MHz, MeOH-D4) δ 7.19-7.30 (m, 3H), 5.24-5.49 (m, 2H), 4.63 (dd, J = 8.2, 5.5 Hz, 1H), 4.52 (s, 1H), 4.38 (dd, J = 7.4, 4.9 Hz, 1H), 3.68-3.80 (m, 2H), 2.55-2.64 (m, 4H), 1.98-2.42 (m, 8H), 1.76-1.84 (m, 2H), 1.40-3.20 (br, 10H). ¹³C-NMR (101 MHz, Acetonitrile-d3) δ 175.17, 170.52, 167.60, 139.29, 133.30, 133.26, 130.64, 130.48, 129.36, 128.84, 128.77, 125.27, 82.56, 80.96, 76.29, 62.37, 61.00, 51.47, 47.50, 36.79, 33.85, 30.67, 29.00, 24.96, 24.88

Claims (20)

1. 以下の一般式（Ｉ）で表される化合物又はその塩。
   
   

   

   
   （式中、
   Ｘは、フッ素原子、エステル基（－ＯＣ（＝Ｏ）－Ｒ’）、カーボネート基（－ＯＣＯ_２－Ｒ’）、カーバメート基（－ＯＣＯＮＨ－Ｒ’）、リン酸およびそのエステル基（－ＯＰ（＝Ｏ）（－ＯＲ’）（―ＯＲ’’）、及び硫酸およびそのエステル基（―ＯＳＯ_２―ＯＲ’）からなる群から選択され、
   ここで、Ｒ’、Ｒ’’は、各々独立に、置換又は無置換のアルキル基、又は、置換又は無置換のアリール基から選択され；
   Ｙは、酵素認識部位であって、グリコシダーゼ又はペプチダーゼの酵素活性によってその一部が切断されてキノンメチドの形成を誘起する部位であり、
   Ｙは、－ＮＨ－ＣＯ－Ｌ又は－ＮＨ－Ｌ’であり、
   ここで、Ｌは、それが結合しているＣ＝Ｏと一緒になって、アミノ酸残基又はペプチドを構成しており、
   Ｌ’は、自己開裂型のリンカーを有する糖類の部分構造、自己開裂型のリンカーを有するアミノ酸残基又はペプチドであり；
   ここで、糖類の部分構造は、糖類から１つの水酸基を除去した構造であり、
   Ｒ^１及びＲ^２は、各々独立に、水素原子又は一価の置換基から選択され；
   Ｒ^３は、水素原子、又はベンゼン環上に存在する１～３個の同一又は異なる一価の置換基であり；
   Ｚは、単結合又は連結基を表し：
   Ｂは、^１０Ｂを含有する基を表し、ホウ素クラスターから誘導される基である。）
2. Ｂは、分子中に少なくとも１つのホウ素原子を有する化合物から誘導される基である、請求項１に記載の化合物又はその塩。
3. 前記ホウ素クラスターは多面体構造を有する、請求項１又は２に記載の化合物又はその塩。
4. Ｂが、クロソドデカボレート、クロソカルボラン、ニドカルボラン、ビスジカルボリド金属錯体、ＧＢ１０、１，２－ジカルバクロソ－ドデカルボラン、１，７－ジカルバ－クロソ－ドデカルボラン、１，１２－ジカルバ－クロソ－ドデカルボラン、ジカルバ－クロソ－デカルボラン、硫黄置換型ウンデカヒドロドデカボレートから誘導される基である、請求項１～３のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
5. 前記連結基が、アルキレン基（但し、アルキレン基の１以上の－ＣＨ_２－は、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、又は－ＣＯ－で置換されていてもよい。）、アリーレン（ヘテロアリーレンを含む）、シクロアルキレン、アルコキシル基、ポリエチレングリコール鎖、及び、これらの基から選択される２種以上の基が任意に結合して構成される基からなる群から選択される、請求項１～４のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
6. 前記糖類は、β－Ｄ－グルコース、β－Ｄ－ガラクトース、β－Ｌ－ガラクトース、β－Ｄ－キシロース、α－Ｄ－マンノース、β－Ｄ－フコース、α－Ｌ－フコース、β－Ｌ－フコース、β－Ｄ－アラビノース、β－Ｌ－アラビノース、β－Ｄ－Ｎ－アセチルグルコサミン、又はβ－Ｄ－Ｎ－アセチルガラクトサミンである、請求項１～５のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
7. 一般式（Ｉ）中の－Ｙが、－Ｃ（Ｒ^１）（Ｒ^２）Ｘに対してベンゼン環のオルト位又はパラ位上で結合している、請求項１～６のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
8. Ｙが、以下から選択される構造を有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
   
   

   
9. Ｘは、フッ素原子又はエステル基（－ＯＣ（＝Ｏ）－Ｒ’）である、請求項１～８のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
10. Ｒ^１及びＲ^２は、各々独立に、水素原子又はフッ素原子から選択される、請求項１～９のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
11. Ｒ^３の一価の置換基が、アルキル基、アルコキシカルボニル基（－Ｃ（＝Ｏ）－ＯＲ’）、ニトロ基、アミノ基、水酸基、アルキルアミノ基（－ＮＨＲ’、－ＮＲ’_２－ＮＨＣＯＲ’）、アルコキシ基（－ＯＲ’）、エステル基（－Ｏ－ＣＯ－Ｒ’）、アミド基（－ＮＨＣＯＲ’）、ハロゲン原子、ボリル基、シアノ基からなる群から選択される（Ｒ’は、置換又は無置換のアルキル基、又は、置換又は無置換のアリール基であり、Ｒ’が２以上ある場合は、各々同一又は異なっていてもよい）、請求項１～１０のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
12. Ｒ^３の一価の置換基が、アルキル基又はアルコキシ基である、請求項１１に記載の化合物又はその塩。
13. Ｒ^３の一価の置換基が、ハロゲン原子である、請求項１１に記載の化合物又はその塩。
14. Ｒ^３の一価の置換基の１つ以上が、アルキル基又はアルコキシ基であり、Ｒ^３の一価の置換基の１つ以上が、ハロゲン原子である、請求項１１～１３のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
15. Ｒ^３の全てが水素原子である、請求項１～１０のいずれか１項に記載の化合物又はその塩。
16. 請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む、医薬組成物。
17. ホウ素中性子捕捉療法に用いられる、請求項１６に記載の医薬組成物。
18. がん細胞特異的な酵素活性により細胞選択的に作用することにより、がん細胞に集積させることができる、請求項１７に記載の医薬組成物。
19. 前記酵素が、ペプチダーゼ又はグリコシダーゼである、請求項１８に記載の医薬組成物。
20. 疾病または疾病に至る可能性のある症状を診断、治療、または診断および治療する方法であって、
    （Ａ）疾病または症状を有する、または有する疑いのある被験体（但し、ヒトを除く）に、請求項１～１５のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬的に許容可能な塩を含む医薬組成物を投与する工程、および
    （Ｂ）前記被験体の標的組織に局在した^１０Ｂ原子に中性子線を照射し、それにより、標的組織のホウ素中性子捕捉療法を行う工程
    を含む、前記方法。