JP7631191B2

JP7631191B2 - Ｅ３リガーゼの共有結合による標的化

Info

Publication number: JP7631191B2
Application number: JP2021519602A
Authority: JP
Inventors: スプラドリン，ジェシカ; ワード，カール・シー; ノムラ，ダニエル・ケイ; シルル，マルクス; タラリコ，ジョン・エイ; マッケナ，ジェフリー; マイモニ，トーマス・ジョン; フー，シールイ
Original assignee: ザ・リージエンツ・オブ・ザ・ユニバーシテイー・オブ・カリフオルニア; ノバルティスアーゲー
Priority date: 2018-10-09
Filing date: 2019-10-09
Publication date: 2025-02-18
Anticipated expiration: 2039-10-09
Also published as: CN113164495A; WO2020076996A1; JP2022512643A; CN113164495B; JP2025072508A; EP3863642A4; CN120468320A; US20210369731A1; EP3863642A1; US20250120982A1; US12161648B2

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１０月９日に出願された米国仮特許出願第６２／７４３，３３７号の権益を主張し、参照によりその全体が全ての目的のために本明細書に組み込まれる。

ＡＳＣＩＩファイルとして提出される「配列表」、表、またはコンピュータプログラムリスト付属書類を参照
２０１９年１０月４日に作成された、１８，６７０バイトの機械フォーマット、ＩＢＭ－ＰＣ、ＭＳＷｉｎｄｏｗｓオペレーティングシステムである、ファイル０５２１０３－５１７００１ＷＯ＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ＿ＳＴ２５．ｔｘｔに記載の配列表が、参照により本明細書に組み込まれる。

標的タンパク質分解は、疾患の治療のための強力な戦略として生まれた。このアプローチでは、Ｅ３リガーゼを特定のタンパク質基質に結合してプロテアソーム依存的にこれらの基質をユビキチン化させ、分解するＥ３リガーゼリクルーターに結合したタンパク質標的化リガンドからなる二官能性分解剤を使用する。しかしながら、このアプローチの１つの課題は、標的タンパク質分解用途のために現在存在するＥ３リガーゼリクルーターが比較的少ないことである。とりわけ、当該技術分野におけるこれらおよび他の問題に対する解決策が本明細書に提供される。

一態様では、１）標的タンパク質結合剤および２）Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤を含む標的タンパク質分解剤であって、Ｅ３ユビキチンリガーゼが、ヒトＲＮＦ４またはヒトＲＮＦ１１４である、標的タンパク質分解剤である。

一態様では、実施形態を含む明細書に記載の化合物と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物が提供される。

一態様では、細胞タンパク質のレベルを低下させる（例えば、対照と比較して低下させる）方法であって、細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させることを含む、方法が提供される。実施形態では、標的タンパク質分解剤は、本明細書に記載の化合物である。

一態様では、癌を治療する方法であって、癌に関連する細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤（例えば、本明細書に記載の化合物）と接触させることを含む、方法が提供される。

一態様では、癌を治療する方法であって、実施形態を含む本明細書に記載の標的タンパク質分解剤の有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法が提供される。

一態様では、細胞タンパク質のレベルを低下させる方法であって、細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させ、それにより標的タンパク質分解剤－細胞タンパク質複合体を形成することを含み、標的タンパク質分解剤が、（ｉ）一価のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤と、（ｉｉ）一価の標的タンパク質結合剤と、（ｉｉｉ）一価のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤および標的タンパク質結合剤に直接結合した結合剤リンカーと、を含む、方法が提供される。

一態様では、標的タンパク質結合剤が接触する細胞タンパク質を同定する方法であって、（Ａ）細胞プロテオームまたは細胞の第１のサンプルを標的タンパク質結合剤と接触させ、それにより細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成することと、（Ｂ）得られたステップＡの細胞プロテオームまたは細胞の第１のサンプルと、標的タンパク質結合剤と接触していない細胞プロテオームまたは細胞の第２のサンプルの両方を、式：

を有する化合物と接触させることと、（Ｃ）得られたステップＢの第１のサンプルを第１の検出可能な薬剤と接触させ、得られたステップＢの第２のサンプルを第２の検出可能な薬剤と接触させることと、（Ｄ）選択されたタンパク質に結合した第１の検出可能な薬剤および第２の検出可能な薬剤のレベルを測定することと、（Ｅ）細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成することができる細胞タンパク質にそれぞれ結合した第１の検出可能な薬剤および第２の検出可能な薬剤のレベルの差を測定することにより、細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体中の細胞タンパク質を同定することと、を含む、方法が提供される。

一態様では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－細胞タンパク質複合体を作製する方法であって、（Ａ）Ｅ３ユビキチンリガーゼをＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成することと、（Ｂ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を細胞タンパク質と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－細胞タンパク質複合体を形成することと、を含む、方法である。

一態様では、細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を作製する方法であって、（Ａ）細胞タンパク質をＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触させ、それにより細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成することと、（Ｂ）細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体をＥ３ユビキチンリガーゼと接触させ、それにより細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を形成することと、を含む、方法が提供される。

一態様では、細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体の形成を阻害する方法であって、Ｅ３ユビキチンリガーゼをＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触させ、それにより細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体の形成を阻害することを含む、方法が提供される。

ゲルベースＡＢＰＰを用いたＲＮＦ４に対する共有結合リガンドスクリーニング。（図１Ａ）Ｅ３リガーゼＭＤＭ２、ＲＮＦ４、およびＵＢＥ３ＡのゲルベースＡＢＰＰ標識。純粋なタンパク質をＩＡ－ローダミンで３０分間室温で標識した後、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光による可視化を行った。（図１Ｂ）純粋なＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対する共有結合リガンド（５０μＭ）のゲルベースＡＢＰＰスクリーニングの概略図であり、蛍光の喪失をもたらすプローブ標識を阻害する化合物を探している。（図１Ｃ～１Ｄ）ＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対するシステイン反応性共有結合リガンドのゲルベースＡＢＰＰスクリーニング。共有結合リガンドを純粋なＲＮＦ４タンパク質と３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識（２５０ｎＭ）を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。このスクリーンからの潜在的なヒットを強調表示した。（図１Ｅ）（図１Ｃ～１Ｄ）に記載されているように実施した、再現性のあるＲＮＦ４スクリーニングヒットの構造およびゲルベースＡＢＰＰ確認。ゲルも銀染色した。ゲルベースＡＢＰＰを用いたＲＮＦ４に対する共有結合リガンドスクリーニング。（図１Ａ）Ｅ３リガーゼＭＤＭ２、ＲＮＦ４、およびＵＢＥ３ＡのゲルベースＡＢＰＰ標識。純粋なタンパク質をＩＡ－ローダミンで３０分間室温で標識した後、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光による可視化を行った。（図１Ｂ）純粋なＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対する共有結合リガンド（５０μＭ）のゲルベースＡＢＰＰスクリーニングの概略図であり、蛍光の喪失をもたらすプローブ標識を阻害する化合物を探している。（図１Ｃ～１Ｄ）ＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対するシステイン反応性共有結合リガンドのゲルベースＡＢＰＰスクリーニング。共有結合リガンドを純粋なＲＮＦ４タンパク質と３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識（２５０ｎＭ）を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。このスクリーンからの潜在的なヒットを強調表示した。（図１Ｅ）（図１Ｃ～１Ｄ）に記載されているように実施した、再現性のあるＲＮＦ４スクリーニングヒットの構造およびゲルベースＡＢＰＰ確認。ゲルも銀染色した。ゲルベースＡＢＰＰを用いたＲＮＦ４に対する共有結合リガンドスクリーニング。（図１Ａ）Ｅ３リガーゼＭＤＭ２、ＲＮＦ４、およびＵＢＥ３ＡのゲルベースＡＢＰＰ標識。純粋なタンパク質をＩＡ－ローダミンで３０分間室温で標識した後、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光による可視化を行った。（図１Ｂ）純粋なＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対する共有結合リガンド（５０μＭ）のゲルベースＡＢＰＰスクリーニングの概略図であり、蛍光の喪失をもたらすプローブ標識を阻害する化合物を探している。（図１Ｃ～１Ｄ）ＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対するシステイン反応性共有結合リガンドのゲルベースＡＢＰＰスクリーニング。共有結合リガンドを純粋なＲＮＦ４タンパク質と３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識（２５０ｎＭ）を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。このスクリーンからの潜在的なヒットを強調表示した。（図１Ｅ）（図１Ｃ～１Ｄ）に記載されているように実施した、再現性のあるＲＮＦ４スクリーニングヒットの構造およびゲルベースＡＢＰＰ確認。ゲルも銀染色した。ゲルベースＡＢＰＰを用いたＲＮＦ４に対する共有結合リガンドスクリーニング。（図１Ａ）Ｅ３リガーゼＭＤＭ２、ＲＮＦ４、およびＵＢＥ３ＡのゲルベースＡＢＰＰ標識。純粋なタンパク質をＩＡ－ローダミンで３０分間室温で標識した後、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光による可視化を行った。（図１Ｂ）純粋なＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対する共有結合リガンド（５０μＭ）のゲルベースＡＢＰＰスクリーニングの概略図であり、蛍光の喪失をもたらすプローブ標識を阻害する化合物を探している。（図１Ｃ～１Ｄ）ＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対するシステイン反応性共有結合リガンドのゲルベースＡＢＰＰスクリーニング。共有結合リガンドを純粋なＲＮＦ４タンパク質と３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識（２５０ｎＭ）を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。このスクリーンからの潜在的なヒットを強調表示した。（図１Ｅ）（図１Ｃ～１Ｄ）に記載されているように実施した、再現性のあるＲＮＦ４スクリーニングヒットの構造およびゲルベースＡＢＰＰ確認。ゲルも銀染色した。ゲルベースＡＢＰＰを用いたＲＮＦ４に対する共有結合リガンドスクリーニング。（図１Ａ）Ｅ３リガーゼＭＤＭ２、ＲＮＦ４、およびＵＢＥ３ＡのゲルベースＡＢＰＰ標識。純粋なタンパク質をＩＡ－ローダミンで３０分間室温で標識した後、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光による可視化を行った。（図１Ｂ）純粋なＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対する共有結合リガンド（５０μＭ）のゲルベースＡＢＰＰスクリーニングの概略図であり、蛍光の喪失をもたらすプローブ標識を阻害する化合物を探している。（図１Ｃ～１Ｄ）ＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対するシステイン反応性共有結合リガンドのゲルベースＡＢＰＰスクリーニング。共有結合リガンドを純粋なＲＮＦ４タンパク質と３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識（２５０ｎＭ）を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。このスクリーンからの潜在的なヒットを強調表示した。（図１Ｅ）（図１Ｃ～１Ｄ）に記載されているように実施した、再現性のあるＲＮＦ４スクリーニングヒットの構造およびゲルベースＡＢＰＰ確認。ゲルも銀染色した。ＴＲＨ１－２３は、ＲＮＦ４の亜鉛配位システインと非官能的に反応する。（図２Ａ）ＲＮＦ４へのＴＲＨ１－２３共有結合付加物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析。ＲＮＦ４をＴＲＨ１－２３（５０μＭ）とともに室温で３０分間インキュベートした。ＲＮＦ４をトリプシンで消化し、トリプシン消化物をＬＣ－ＭＳ／ＭＳで分析し、ＴＲＨ１－２３修飾付加物を検索した。示されているのは、ＴＲＨ１－２３修飾Ｃ１３２およびＣ１３５ＲＮＦ４トリプシンペプチドのＭＳ／ＭＳスペクトルである。ペプチド配列において強調表示されているのは、修飾されたシステインである。ペプチド配列は、配列番号１の残基１１８～１４７に対応する。（図２Ｂ）ＲＮＦ４のＣ１３２もしくはＣ１３５とのＴＲＨ１－２３反応性の概略図。（図２Ｃ）ＴＲＨ１－２３は、ＲＮＦ４自己ユビキチン化アッセイを阻害しない。ＲＮＦ４をＴＲＨ１－２３（１００μＭ）とプレインキュベートした後、ＵＢＡ１、Ｅ２酵素、およびＡＴＰを３７℃で４０分間加えた。反応をクエンチし、ＲＮＦ４のＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングに供した。（図２Ｃ）に示されたゲルは、ｎ＝３からの代表的なゲルである。ＴＲＨ１－２３は、ＲＮＦ４の亜鉛配位システインと非官能的に反応する。（図２Ａ）ＲＮＦ４へのＴＲＨ１－２３共有結合付加物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析。ＲＮＦ４をＴＲＨ１－２３（５０μＭ）とともに室温で３０分間インキュベートした。ＲＮＦ４をトリプシンで消化し、トリプシン消化物をＬＣ－ＭＳ／ＭＳで分析し、ＴＲＨ１－２３修飾付加物を検索した。示されているのは、ＴＲＨ１－２３修飾Ｃ１３２およびＣ１３５ＲＮＦ４トリプシンペプチドのＭＳ／ＭＳスペクトルである。ペプチド配列において強調表示されているのは、修飾されたシステインである。ペプチド配列は、配列番号１の残基１１８～１４７に対応する。（図２Ｂ）ＲＮＦ４のＣ１３２もしくはＣ１３５とのＴＲＨ１－２３反応性の概略図。（図２Ｃ）ＴＲＨ１－２３は、ＲＮＦ４自己ユビキチン化アッセイを阻害しない。ＲＮＦ４をＴＲＨ１－２３（１００μＭ）とプレインキュベートした後、ＵＢＡ１、Ｅ２酵素、およびＡＴＰを３７℃で４０分間加えた。反応をクエンチし、ＲＮＦ４のＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングに供した。（図２Ｃ）に示されたゲルは、ｎ＝３からの代表的なゲルである。ＴＲＨ１－２３は、ＲＮＦ４の亜鉛配位システインと非官能的に反応する。（図２Ａ）ＲＮＦ４へのＴＲＨ１－２３共有結合付加物のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析。ＲＮＦ４をＴＲＨ１－２３（５０μＭ）とともに室温で３０分間インキュベートした。ＲＮＦ４をトリプシンで消化し、トリプシン消化物をＬＣ－ＭＳ／ＭＳで分析し、ＴＲＨ１－２３修飾付加物を検索した。示されているのは、ＴＲＨ１－２３修飾Ｃ１３２およびＣ１３５ＲＮＦ４トリプシンペプチドのＭＳ／ＭＳスペクトルである。ペプチド配列において強調表示されているのは、修飾されたシステインである。ペプチド配列は、配列番号１の残基１１８～１４７に対応する。（図２Ｂ）ＲＮＦ４のＣ１３２もしくはＣ１３５とのＴＲＨ１－２３反応性の概略図。（図２Ｃ）ＴＲＨ１－２３は、ＲＮＦ４自己ユビキチン化アッセイを阻害しない。ＲＮＦ４をＴＲＨ１－２３（１００μＭ）とプレインキュベートした後、ＵＢＡ１、Ｅ２酵素、およびＡＴＰを３７℃で４０分間加えた。反応をクエンチし、ＲＮＦ４のＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングに供した。（図２Ｃ）に示されたゲルは、ｎ＝３からの代表的なゲルである。ゲルベースＡＢＰＰを使用したＲＮＦ４共有結合リガンドの最適化。（図３Ａ～３Ｂ）ＴＲＨ１－２３の類似体を、ゲルベースＡＢＰＰを使用してＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対して試験した。（図３Ｃ）ＣＣＷ１６を、ゲルベースＡＢＰＰを使用してＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対して試験した。（図３Ａ～３Ｃ）の場合、共有結合リガンドを純粋なＲＮＦ４タンパク質と３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。（図３Ｃ）では、ゲルをデンシトメトリーによって定量化して、ＩＣ５０値を計算した。（図３Ｃ）に示されたゲルは、ｎ＝３からの代表的なゲルである。ゲルベースＡＢＰＰを使用したＲＮＦ４共有結合リガンドの最適化。（図３Ａ～３Ｂ）ＴＲＨ１－２３の類似体を、ゲルベースＡＢＰＰを使用してＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対して試験した。（図３Ｃ）ＣＣＷ１６を、ゲルベースＡＢＰＰを使用してＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対して試験した。（図３Ａ～３Ｃ）の場合、共有結合リガンドを純粋なＲＮＦ４タンパク質と３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。（図３Ｃ）では、ゲルをデンシトメトリーによって定量化して、ＩＣ５０値を計算した。（図３Ｃ）に示されたゲルは、ｎ＝３からの代表的なゲルである。ゲルベースＡＢＰＰを使用したＲＮＦ４共有結合リガンドの最適化。（図３Ａ～３Ｂ）ＴＲＨ１－２３の類似体を、ゲルベースＡＢＰＰを使用してＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対して試験した。（図３Ｃ）ＣＣＷ１６を、ゲルベースＡＢＰＰを使用してＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対して試験した。（図３Ａ～３Ｃ）の場合、共有結合リガンドを純粋なＲＮＦ４タンパク質と３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。（図３Ｃ）では、ゲルをデンシトメトリーによって定量化して、ＩＣ５０値を計算した。（図３Ｃ）に示されたゲルは、ｎ＝３からの代表的なゲルである。ゲルベースＡＢＰＰを使用したＲＮＦ４共有結合リガンドの最適化。（図３Ａ～３Ｂ）ＴＲＨ１－２３の類似体を、ゲルベースＡＢＰＰを使用してＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対して試験した。（図３Ｃ）ＣＣＷ１６を、ゲルベースＡＢＰＰを使用してＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対して試験した。（図３Ａ～３Ｃ）の場合、共有結合リガンドを純粋なＲＮＦ４タンパク質と３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。（図３Ｃ）では、ゲルをデンシトメトリーによって定量化して、ＩＣ５０値を計算した。（図３Ｃ）に示されたゲルは、ｎ＝３からの代表的なゲルである。ＲＮＦ４リクルーターベースのＢＲＤ４分解剤。（図４Ａ）ＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１に結合したＲＮＦ４リクルーターベースの分解剤であるＣＣＷ２８－３の構造。（図４Ｂ）純粋なヒトＲＮＦ４に対するＣＣＷ２８－３のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＣＣＷ２８－３を純粋なＲＮＦ４タンパク質と３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。ゲルをデンシトメトリーによって定量化して、ＩＣ５０値を計算した。（図４Ｃ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＣＣＷ２８－３処理は、ＢＲＤ４分解をもたらす。２３１ＭＦＰ乳癌細胞をビヒクルＤＭＳＯもしくはＣＣＷ２８－３で３時間処理した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４およびＧＡＰＤＨローディング対照のウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｄ、４Ｅ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＣＣＷ２８－３処理は、プロテアソーム、Ｅ１阻害剤およびＢＲＤ４阻害剤依存性のＢＲＤ４分解をもたらす。ビヒクルＤＭＳＯまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１０μＭ）、Ｅ１阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）、またはＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１（１０μＭ）を３０分間プレインキュベートした後、ＭＺ１（１μＭ）もしくはＣＣＷ２８－３（１μＭ）で３時間処理した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４およびアクチンローディング対照のウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｆ）ＲＮＦ４野生型およびノックアウトＨｅｌａ細胞をＣＣＷ２８－３（１０μＭ）で５時間処理し、ＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４、ＲＮＦ４およびＧＡＰＤＨのウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｂ～４Ｆ）のブロットを、デンシトメトリーによって定量化した。（図４Ｂ～４Ｆ）のデータは、ｎ＝３からの代表的なゲルからのものである。棒グラフは平均±ｓｅｍ、ｎ＝３－５／群である。有意性は、ビヒクルで処理した対照と比較して＊ｐ＜０．０５、（Ｂ、Ｄ～Ｅ）のＣＣＷ２８－３で処理した群および（図４Ｆ）のＣＣＷ２８－３で処理した野生型細胞と比較して＃ｐ＜０．０５として表される。ＲＮＦ４リクルーターベースのＢＲＤ４分解剤。（図４Ａ）ＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１に結合したＲＮＦ４リクルーターベースの分解剤であるＣＣＷ２８－３の構造。（図４Ｂ）純粋なヒトＲＮＦ４に対するＣＣＷ２８－３のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＣＣＷ２８－３を純粋なＲＮＦ４タンパク質と３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。ゲルをデンシトメトリーによって定量化して、ＩＣ５０値を計算した。（図４Ｃ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＣＣＷ２８－３処理は、ＢＲＤ４分解をもたらす。２３１ＭＦＰ乳癌細胞をビヒクルＤＭＳＯもしくはＣＣＷ２８－３で３時間処理した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４およびＧＡＰＤＨローディング対照のウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｄ、４Ｅ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＣＣＷ２８－３処理は、プロテアソーム、Ｅ１阻害剤およびＢＲＤ４阻害剤依存性のＢＲＤ４分解をもたらす。ビヒクルＤＭＳＯまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１０μＭ）、Ｅ１阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）、またはＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１（１０μＭ）を３０分間プレインキュベートした後、ＭＺ１（１μＭ）もしくはＣＣＷ２８－３（１μＭ）で３時間処理した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４およびアクチンローディング対照のウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｆ）ＲＮＦ４野生型およびノックアウトＨｅｌａ細胞をＣＣＷ２８－３（１０μＭ）で５時間処理し、ＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４、ＲＮＦ４およびＧＡＰＤＨのウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｂ～４Ｆ）のブロットを、デンシトメトリーによって定量化した。（図４Ｂ～４Ｆ）のデータは、ｎ＝３からの代表的なゲルからのものである。棒グラフは平均±ｓｅｍ、ｎ＝３－５／群である。有意性は、ビヒクルで処理した対照と比較して＊ｐ＜０．０５、（Ｂ、Ｄ～Ｅ）のＣＣＷ２８－３で処理した群および（図４Ｆ）のＣＣＷ２８－３で処理した野生型細胞と比較して＃ｐ＜０．０５として表される。ＲＮＦ４リクルーターベースのＢＲＤ４分解剤。（図４Ａ）ＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１に結合したＲＮＦ４リクルーターベースの分解剤であるＣＣＷ２８－３の構造。（図４Ｂ）純粋なヒトＲＮＦ４に対するＣＣＷ２８－３のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＣＣＷ２８－３を純粋なＲＮＦ４タンパク質と３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。ゲルをデンシトメトリーによって定量化して、ＩＣ５０値を計算した。（図４Ｃ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＣＣＷ２８－３処理は、ＢＲＤ４分解をもたらす。２３１ＭＦＰ乳癌細胞をビヒクルＤＭＳＯもしくはＣＣＷ２８－３で３時間処理した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４およびＧＡＰＤＨローディング対照のウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｄ、４Ｅ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＣＣＷ２８－３処理は、プロテアソーム、Ｅ１阻害剤およびＢＲＤ４阻害剤依存性のＢＲＤ４分解をもたらす。ビヒクルＤＭＳＯまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１０μＭ）、Ｅ１阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）、またはＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１（１０μＭ）を３０分間プレインキュベートした後、ＭＺ１（１μＭ）もしくはＣＣＷ２８－３（１μＭ）で３時間処理した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４およびアクチンローディング対照のウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｆ）ＲＮＦ４野生型およびノックアウトＨｅｌａ細胞をＣＣＷ２８－３（１０μＭ）で５時間処理し、ＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４、ＲＮＦ４およびＧＡＰＤＨのウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｂ～４Ｆ）のブロットを、デンシトメトリーによって定量化した。（図４Ｂ～４Ｆ）のデータは、ｎ＝３からの代表的なゲルからのものである。棒グラフは平均±ｓｅｍ、ｎ＝３－５／群である。有意性は、ビヒクルで処理した対照と比較して＊ｐ＜０．０５、（Ｂ、Ｄ～Ｅ）のＣＣＷ２８－３で処理した群および（図４Ｆ）のＣＣＷ２８－３で処理した野生型細胞と比較して＃ｐ＜０．０５として表される。ＲＮＦ４リクルーターベースのＢＲＤ４分解剤。（図４Ａ）ＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１に結合したＲＮＦ４リクルーターベースの分解剤であるＣＣＷ２８－３の構造。（図４Ｂ）純粋なヒトＲＮＦ４に対するＣＣＷ２８－３のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＣＣＷ２８－３を純粋なＲＮＦ４タンパク質と３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。ゲルをデンシトメトリーによって定量化して、ＩＣ５０値を計算した。（図４Ｃ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＣＣＷ２８－３処理は、ＢＲＤ４分解をもたらす。２３１ＭＦＰ乳癌細胞をビヒクルＤＭＳＯもしくはＣＣＷ２８－３で３時間処理した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４およびＧＡＰＤＨローディング対照のウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｄ、４Ｅ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＣＣＷ２８－３処理は、プロテアソーム、Ｅ１阻害剤およびＢＲＤ４阻害剤依存性のＢＲＤ４分解をもたらす。ビヒクルＤＭＳＯまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１０μＭ）、Ｅ１阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）、またはＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１（１０μＭ）を３０分間プレインキュベートした後、ＭＺ１（１μＭ）もしくはＣＣＷ２８－３（１μＭ）で３時間処理した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４およびアクチンローディング対照のウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｆ）ＲＮＦ４野生型およびノックアウトＨｅｌａ細胞をＣＣＷ２８－３（１０μＭ）で５時間処理し、ＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４、ＲＮＦ４およびＧＡＰＤＨのウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｂ～４Ｆ）のブロットを、デンシトメトリーによって定量化した。（図４Ｂ～４Ｆ）のデータは、ｎ＝３からの代表的なゲルからのものである。棒グラフは平均±ｓｅｍ、ｎ＝３－５／群である。有意性は、ビヒクルで処理した対照と比較して＊ｐ＜０．０５、（Ｂ、Ｄ～Ｅ）のＣＣＷ２８－３で処理した群および（図４Ｆ）のＣＣＷ２８－３で処理した野生型細胞と比較して＃ｐ＜０．０５として表される。ＲＮＦ４リクルーターベースのＢＲＤ４分解剤。（図４Ａ）ＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１に結合したＲＮＦ４リクルーターベースの分解剤であるＣＣＷ２８－３の構造。（図４Ｂ）純粋なヒトＲＮＦ４に対するＣＣＷ２８－３のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＣＣＷ２８－３を純粋なＲＮＦ４タンパク質と３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。ゲルをデンシトメトリーによって定量化して、ＩＣ５０値を計算した。（図４Ｃ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＣＣＷ２８－３処理は、ＢＲＤ４分解をもたらす。２３１ＭＦＰ乳癌細胞をビヒクルＤＭＳＯもしくはＣＣＷ２８－３で３時間処理した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４およびＧＡＰＤＨローディング対照のウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｄ、４Ｅ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＣＣＷ２８－３処理は、プロテアソーム、Ｅ１阻害剤およびＢＲＤ４阻害剤依存性のＢＲＤ４分解をもたらす。ビヒクルＤＭＳＯまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１０μＭ）、Ｅ１阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）、またはＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１（１０μＭ）を３０分間プレインキュベートした後、ＭＺ１（１μＭ）もしくはＣＣＷ２８－３（１μＭ）で３時間処理した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４およびアクチンローディング対照のウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｆ）ＲＮＦ４野生型およびノックアウトＨｅｌａ細胞をＣＣＷ２８－３（１０μＭ）で５時間処理し、ＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４、ＲＮＦ４およびＧＡＰＤＨのウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｂ～４Ｆ）のブロットを、デンシトメトリーによって定量化した。（図４Ｂ～４Ｆ）のデータは、ｎ＝３からの代表的なゲルからのものである。棒グラフは平均±ｓｅｍ、ｎ＝３－５／群である。有意性は、ビヒクルで処理した対照と比較して＊ｐ＜０．０５、（Ｂ、Ｄ～Ｅ）のＣＣＷ２８－３で処理した群および（図４Ｆ）のＣＣＷ２８－３で処理した野生型細胞と比較して＃ｐ＜０．０５として表される。ＲＮＦ４リクルーターベースのＢＲＤ４分解剤。（図４Ａ）ＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１に結合したＲＮＦ４リクルーターベースの分解剤であるＣＣＷ２８－３の構造。（図４Ｂ）純粋なヒトＲＮＦ４に対するＣＣＷ２８－３のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＣＣＷ２８－３を純粋なＲＮＦ４タンパク質と３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。ゲルをデンシトメトリーによって定量化して、ＩＣ５０値を計算した。（図４Ｃ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＣＣＷ２８－３処理は、ＢＲＤ４分解をもたらす。２３１ＭＦＰ乳癌細胞をビヒクルＤＭＳＯもしくはＣＣＷ２８－３で３時間処理した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４およびＧＡＰＤＨローディング対照のウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｄ、４Ｅ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＣＣＷ２８－３処理は、プロテアソーム、Ｅ１阻害剤およびＢＲＤ４阻害剤依存性のＢＲＤ４分解をもたらす。ビヒクルＤＭＳＯまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１０μＭ）、Ｅ１阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）、またはＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１（１０μＭ）を３０分間プレインキュベートした後、ＭＺ１（１μＭ）もしくはＣＣＷ２８－３（１μＭ）で３時間処理した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４およびアクチンローディング対照のウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｆ）ＲＮＦ４野生型およびノックアウトＨｅｌａ細胞をＣＣＷ２８－３（１０μＭ）で５時間処理し、ＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４、ＲＮＦ４およびＧＡＰＤＨのウエスタンブロッティングに供した。（図４Ｂ～４Ｆ）のブロットを、デンシトメトリーによって定量化した。（図４Ｂ～４Ｆ）のデータは、ｎ＝３からの代表的なゲルからのものである。棒グラフは平均±ｓｅｍ、ｎ＝３－５／群である。有意性は、ビヒクルで処理した対照と比較して＊ｐ＜０．０５、（Ｂ、Ｄ～Ｅ）のＣＣＷ２８－３で処理した群および（図４Ｆ）のＣＣＷ２８－３で処理した野生型細胞と比較して＃ｐ＜０．０５として表される。ＲＮＦ４に対する追加のヒットおよびゲルベースＡＢＰＰによるＲＮＦ４ヒットのプロテオーム全体の選択性の一般的な評価。ＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対するＤＫＭ２－７６およびＴＲＨ１－７４のゲルベースＡＢＰＰ分析。共有結合リガンドを純粋なＲＮＦ４タンパク質と３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識（２５０ｎＭ）を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームのＩＡ－ローダミン標識に対する、ＲＮＦ４ヒット（ＹＰ１－４４およびＴＲＨ１－２３）のゲルベースＡＢＰＰスクリーン。ＹＰ１－４４およびＴＲＨ１－２３をプロテオームと３０分間プレインキュベートした後、ＩＡ－ローダミン標識（２５０ｎＭ）を１時間行った。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥに供し、ゲル内蛍光で可視化した。インサイチュでの２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＣＣＷ２８－３のｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。２３１ＭＦＰ細胞をＤＭＳＯビヒクルもしくはＣＣＷ２８－３（１０μＭ）で１時間インサイチュで処理した後、ＩＡ－アルキン（１００μＭ）で１時間インビトロでプロテオームを標識した。同位体的に軽い（ＤＭＳＯで処理した場合）または重い（化合物で処理した場合）ＴＥＶプロテアーゼ切断可能なビオチン－アジドタグをＣｕＡＡＣにより付加して、ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析を行った。データは３つの生物学的複製のものである。ＲＮＦ４野生型およびノックアウトＨｅｌａ細胞において低濃度で試験したＣＣＷ２８－３。ＲＮＦ４野生型およびノックアウトＨｅｌａ細胞をＤＭＳＯビヒクルもしくはＣＣＷ２８－３（５または１μＭ）で５時間処理し、ＳＤＳ／ＰＡＧＥならびにＢＲＤ４およびＧＡＰＤＨのウエスタンブロッティングに供した。ブロットを、デンシトメトリーによって定量化した。のデータは、ｎ＝３の代表的なゲルからのものである。棒グラフは平均±ｓｅｍ、ｎ＝３／群である。有意性は、ビヒクルで処理した対照と比較して＊ｐ＜０．０５、ＣＣＷ２８－３で処理した野生型細胞と比較して＃ｐ＜０．０５として表される。ニンボリドは乳癌細胞の増殖または生存を低減する。（図８Ａ）ニンボリドの構造。ニンボリドは、潜在的にシステイン反応性である環状エノンを有している。（図８Ｂ～８Ｃ）血清含有培地における２３１ＭＦＰおよびＨＣＣ３８乳癌細胞の増殖および無血清細胞生存。細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで処理し、４８時間後にヘキスト染色により細胞生存率を評価した。（図８Ｂ～８Ｃ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝６／群である。有意性は、ビヒクルで処理した対照と比較して、＊ｐ＜０．０５として表される。ニンボリドは乳癌細胞の増殖または生存を低減する。（図８Ａ）ニンボリドの構造。ニンボリドは、潜在的にシステイン反応性である環状エノンを有している。（図８Ｂ～８Ｃ）血清含有培地における２３１ＭＦＰおよびＨＣＣ３８乳癌細胞の増殖および無血清細胞生存。細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで処理し、４８時間後にヘキスト染色により細胞生存率を評価した。（図８Ｂ～８Ｃ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝６／群である。有意性は、ビヒクルで処理した対照と比較して、＊ｐ＜０．０５として表される。ニンボリドは乳癌細胞の増殖または生存を低減する。（図８Ａ）ニンボリドの構造。ニンボリドは、潜在的にシステイン反応性である環状エノンを有している。（図８Ｂ～８Ｃ）血清含有培地における２３１ＭＦＰおよびＨＣＣ３８乳癌細胞の増殖および無血清細胞生存。細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで処理し、４８時間後にヘキスト染色により細胞生存率を評価した。（図８Ｂ～８Ｃ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝６／群である。有意性は、ビヒクルで処理した対照と比較して、＊ｐ＜０．０５として表される。２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオーム中のニンボリドのｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析により、ＲＮＦ１１４が標的であることが明らかになる。（図９Ａ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームまたは細胞をＤＭＳＯまたはニンボリド（１０μＭ、インビトロで３０分またはインサイチュで１．５時間）で前処理した後、ＩＡ－アルキン（１００μＭ、１時間）でプロテオームをインビトロで標識し、続いて銅触媒アジド－アルキン付加環化（ＣｕＡＡＣ）により同位体的に軽い（ＤＭＳＯで処理した場合）または重い（ニンボリドで処理した場合）ＴＥＶプロテアーゼ切断可能なビオチン－アジドタグを付加したｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰの概略図。続いて、対照プロテオームおよび処理プロテオームを１：１の比で組み合わせ、プローブ標識タンパク質をアビジン濃縮し、トリプシンで消化し、プローブ修飾トリプシンペプチドをＴＥＶプロテアーゼで溶出し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳで分析し、軽いプローブ修飾ペプチド対重いプローブ修飾ペプチド比を定量化した。（図９Ｂ）（図９Ａ）に記載されているようにインビトロ分析された２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームにおけるニンボリド（１０μＭ）のｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。５を超える軽／重比を示した３つの標的には、ＰＴＯＶ１のＣ３０８、ＲＮＦ１１４のＣ８、およびＰＦＫＰのＣ１２３が含まれていた。（図９Ｃ）（図９Ａ）に記載されているようにインサイチュ分析された２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるニンボリド（１０μＭ）のｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。（図９Ｄ）ＲＮＦ１１４は、２３１ＭＦＰ細胞においてショートヘアピンＲＮＡオリゴヌクレオチドを使用して安定してノックダウンされた。ｓｈＲＮＦ１１４細胞におけるＲＮＦ１１４ノックダウンは、ｓｈ対照細胞と比較してｑＰＣＲによって確認した。細胞増殖は、ヘキスト染色によって細胞を播種してから４８時間後に評価した。（図９Ｅ）ニンボリドに対する２３１ＭＦＰｓｈ対照およびｓｈＲＮＦ１１４の感受性。２３１ＭＦＰｓｈ対照およびｓｈＲＮＦ１１４細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで処理し、４８時間後にヘキスト染色により細胞増殖を評価した。ニンボリド処理による％増殖を、ｓｈ対照またはｓｈＲＮＦ１１４対照群それぞれに対して正規化した。（図９Ｄ～９Ｅ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍである。（図９Ｂ～９Ｅ）に示されるデータは、ｎ＝６／群からのものである。（図９Ｄ、９Ｅ）の有意性は、ｓｈ対照群と比較して＊ｐ＜０．０５として表される。２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオーム中のニンボリドのｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析により、ＲＮＦ１１４が標的であることが明らかになる。（図９Ａ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームまたは細胞をＤＭＳＯまたはニンボリド（１０μＭ、インビトロで３０分またはインサイチュで１．５時間）で前処理した後、ＩＡ－アルキン（１００μＭ、１時間）でプロテオームをインビトロで標識し、続いて銅触媒アジド－アルキン付加環化（ＣｕＡＡＣ）により同位体的に軽い（ＤＭＳＯで処理した場合）または重い（ニンボリドで処理した場合）ＴＥＶプロテアーゼ切断可能なビオチン－アジドタグを付加したｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰの概略図。続いて、対照プロテオームおよび処理プロテオームを１：１の比で組み合わせ、プローブ標識タンパク質をアビジン濃縮し、トリプシンで消化し、プローブ修飾トリプシンペプチドをＴＥＶプロテアーゼで溶出し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳで分析し、軽いプローブ修飾ペプチド対重いプローブ修飾ペプチド比を定量化した。（図９Ｂ）（図９Ａ）に記載されているようにインビトロ分析された２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームにおけるニンボリド（１０μＭ）のｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。５を超える軽／重比を示した３つの標的には、ＰＴＯＶ１のＣ３０８、ＲＮＦ１１４のＣ８、およびＰＦＫＰのＣ１２３が含まれていた。（図９Ｃ）（図９Ａ）に記載されているようにインサイチュ分析された２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるニンボリド（１０μＭ）のｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。（図９Ｄ）ＲＮＦ１１４は、２３１ＭＦＰ細胞においてショートヘアピンＲＮＡオリゴヌクレオチドを使用して安定してノックダウンされた。ｓｈＲＮＦ１１４細胞におけるＲＮＦ１１４ノックダウンは、ｓｈ対照細胞と比較してｑＰＣＲによって確認した。細胞増殖は、ヘキスト染色によって細胞を播種してから４８時間後に評価した。（図９Ｅ）ニンボリドに対する２３１ＭＦＰｓｈ対照およびｓｈＲＮＦ１１４の感受性。２３１ＭＦＰｓｈ対照およびｓｈＲＮＦ１１４細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで処理し、４８時間後にヘキスト染色により細胞増殖を評価した。ニンボリド処理による％増殖を、ｓｈ対照またはｓｈＲＮＦ１１４対照群それぞれに対して正規化した。（図９Ｄ～９Ｅ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍである。（図９Ｂ～９Ｅ）に示されるデータは、ｎ＝６／群からのものである。（図９Ｄ、９Ｅ）の有意性は、ｓｈ対照群と比較して＊ｐ＜０．０５として表される。２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオーム中のニンボリドのｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析により、ＲＮＦ１１４が標的であることが明らかになる。（図９Ａ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームまたは細胞をＤＭＳＯまたはニンボリド（１０μＭ、インビトロで３０分またはインサイチュで１．５時間）で前処理した後、ＩＡ－アルキン（１００μＭ、１時間）でプロテオームをインビトロで標識し、続いて銅触媒アジド－アルキン付加環化（ＣｕＡＡＣ）により同位体的に軽い（ＤＭＳＯで処理した場合）または重い（ニンボリドで処理した場合）ＴＥＶプロテアーゼ切断可能なビオチン－アジドタグを付加したｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰの概略図。続いて、対照プロテオームおよび処理プロテオームを１：１の比で組み合わせ、プローブ標識タンパク質をアビジン濃縮し、トリプシンで消化し、プローブ修飾トリプシンペプチドをＴＥＶプロテアーゼで溶出し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳで分析し、軽いプローブ修飾ペプチド対重いプローブ修飾ペプチド比を定量化した。（図９Ｂ）（図９Ａ）に記載されているようにインビトロ分析された２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームにおけるニンボリド（１０μＭ）のｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。５を超える軽／重比を示した３つの標的には、ＰＴＯＶ１のＣ３０８、ＲＮＦ１１４のＣ８、およびＰＦＫＰのＣ１２３が含まれていた。（図９Ｃ）（図９Ａ）に記載されているようにインサイチュ分析された２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるニンボリド（１０μＭ）のｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。（図９Ｄ）ＲＮＦ１１４は、２３１ＭＦＰ細胞においてショートヘアピンＲＮＡオリゴヌクレオチドを使用して安定してノックダウンされた。ｓｈＲＮＦ１１４細胞におけるＲＮＦ１１４ノックダウンは、ｓｈ対照細胞と比較してｑＰＣＲによって確認した。細胞増殖は、ヘキスト染色によって細胞を播種してから４８時間後に評価した。（図９Ｅ）ニンボリドに対する２３１ＭＦＰｓｈ対照およびｓｈＲＮＦ１１４の感受性。２３１ＭＦＰｓｈ対照およびｓｈＲＮＦ１１４細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで処理し、４８時間後にヘキスト染色により細胞増殖を評価した。ニンボリド処理による％増殖を、ｓｈ対照またはｓｈＲＮＦ１１４対照群それぞれに対して正規化した。（図９Ｄ～９Ｅ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍである。（図９Ｂ～９Ｅ）に示されるデータは、ｎ＝６／群からのものである。（図９Ｄ、９Ｅ）の有意性は、ｓｈ対照群と比較して＊ｐ＜０．０５として表される。２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオーム中のニンボリドのｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析により、ＲＮＦ１１４が標的であることが明らかになる。（図９Ａ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームまたは細胞をＤＭＳＯまたはニンボリド（１０μＭ、インビトロで３０分またはインサイチュで１．５時間）で前処理した後、ＩＡ－アルキン（１００μＭ、１時間）でプロテオームをインビトロで標識し、続いて銅触媒アジド－アルキン付加環化（ＣｕＡＡＣ）により同位体的に軽い（ＤＭＳＯで処理した場合）または重い（ニンボリドで処理した場合）ＴＥＶプロテアーゼ切断可能なビオチン－アジドタグを付加したｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰの概略図。続いて、対照プロテオームおよび処理プロテオームを１：１の比で組み合わせ、プローブ標識タンパク質をアビジン濃縮し、トリプシンで消化し、プローブ修飾トリプシンペプチドをＴＥＶプロテアーゼで溶出し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳで分析し、軽いプローブ修飾ペプチド対重いプローブ修飾ペプチド比を定量化した。（図９Ｂ）（図９Ａ）に記載されているようにインビトロ分析された２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームにおけるニンボリド（１０μＭ）のｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。５を超える軽／重比を示した３つの標的には、ＰＴＯＶ１のＣ３０８、ＲＮＦ１１４のＣ８、およびＰＦＫＰのＣ１２３が含まれていた。（図９Ｃ）（図９Ａ）に記載されているようにインサイチュ分析された２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるニンボリド（１０μＭ）のｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。（図９Ｄ）ＲＮＦ１１４は、２３１ＭＦＰ細胞においてショートヘアピンＲＮＡオリゴヌクレオチドを使用して安定してノックダウンされた。ｓｈＲＮＦ１１４細胞におけるＲＮＦ１１４ノックダウンは、ｓｈ対照細胞と比較してｑＰＣＲによって確認した。細胞増殖は、ヘキスト染色によって細胞を播種してから４８時間後に評価した。（図９Ｅ）ニンボリドに対する２３１ＭＦＰｓｈ対照およびｓｈＲＮＦ１１４の感受性。２３１ＭＦＰｓｈ対照およびｓｈＲＮＦ１１４細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで処理し、４８時間後にヘキスト染色により細胞増殖を評価した。ニンボリド処理による％増殖を、ｓｈ対照またはｓｈＲＮＦ１１４対照群それぞれに対して正規化した。（図９Ｄ～９Ｅ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍである。（図９Ｂ～９Ｅ）に示されるデータは、ｎ＝６／群からのものである。（図９Ｄ、９Ｅ）の有意性は、ｓｈ対照群と比較して＊ｐ＜０．０５として表される。２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオーム中のニンボリドのｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析により、ＲＮＦ１１４が標的であることが明らかになる。（図９Ａ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームまたは細胞をＤＭＳＯまたはニンボリド（１０μＭ、インビトロで３０分またはインサイチュで１．５時間）で前処理した後、ＩＡ－アルキン（１００μＭ、１時間）でプロテオームをインビトロで標識し、続いて銅触媒アジド－アルキン付加環化（ＣｕＡＡＣ）により同位体的に軽い（ＤＭＳＯで処理した場合）または重い（ニンボリドで処理した場合）ＴＥＶプロテアーゼ切断可能なビオチン－アジドタグを付加したｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰの概略図。続いて、対照プロテオームおよび処理プロテオームを１：１の比で組み合わせ、プローブ標識タンパク質をアビジン濃縮し、トリプシンで消化し、プローブ修飾トリプシンペプチドをＴＥＶプロテアーゼで溶出し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳで分析し、軽いプローブ修飾ペプチド対重いプローブ修飾ペプチド比を定量化した。（図９Ｂ）（図９Ａ）に記載されているようにインビトロ分析された２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームにおけるニンボリド（１０μＭ）のｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。５を超える軽／重比を示した３つの標的には、ＰＴＯＶ１のＣ３０８、ＲＮＦ１１４のＣ８、およびＰＦＫＰのＣ１２３が含まれていた。（図９Ｃ）（図９Ａ）に記載されているようにインサイチュ分析された２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるニンボリド（１０μＭ）のｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。（図９Ｄ）ＲＮＦ１１４は、２３１ＭＦＰ細胞においてショートヘアピンＲＮＡオリゴヌクレオチドを使用して安定してノックダウンされた。ｓｈＲＮＦ１１４細胞におけるＲＮＦ１１４ノックダウンは、ｓｈ対照細胞と比較してｑＰＣＲによって確認した。細胞増殖は、ヘキスト染色によって細胞を播種してから４８時間後に評価した。（図９Ｅ）ニンボリドに対する２３１ＭＦＰｓｈ対照およびｓｈＲＮＦ１１４の感受性。２３１ＭＦＰｓｈ対照およびｓｈＲＮＦ１１４細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで処理し、４８時間後にヘキスト染色により細胞増殖を評価した。ニンボリド処理による％増殖を、ｓｈ対照またはｓｈＲＮＦ１１４対照群それぞれに対して正規化した。（図９Ｄ～９Ｅ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍである。（図９Ｂ～９Ｅ）に示されるデータは、ｎ＝６／群からのものである。（図９Ｄ、９Ｅ）の有意性は、ｓｈ対照群と比較して＊ｐ＜０．０５として表される。ニンボリドはＲＮＦ１１４のＣ８と共有結合的に反応する。（図１０Ａ）ニンボリドは、ＰＯＮＤＲによって評価されるように、ＲＮＦ１１４内の天然変性領域を標的とする。（図１０Ｂ）アルキン官能化ニンボリドプローブの合成経路。（図１０Ｃ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームのニンボリドプローブ標識。２３１ＭＦＰプロテオームをＤＭＳＯまたはニンボリド（１０μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ニンボリド－アルキンプローブ（１μＭ、１時間）で標識し、続いてローダミン－アジドのＣｕＡＡＣ付加、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光の分析を行った。ニンボリド競合バンドは、ＰＴＯＶ１およびＲＮＦ１１４の分子量に対応する。（図１０Ｄ）ニンボリドプローブで標識された純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のゲルベースＡＢＰＰ分析。上の２つのパネルでは、純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。下の２つのパネルでは、純粋な野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質を、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。両方の実験について、ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識および銀染色が示されている。（図１０Ｅ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をニンボリド（１００μＭ、１時間）で標識し、トリプシン消化およびＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析に供した。示されているのは、ＲＮＦ１１４のＣ８へのニンボリド修飾付加物である。ペプチド配列は、配列番号２の残基７～２６に対応する。（図１０Ｃ～１０Ｄ）に示されるデータは、ｎ＝３／群からのものである。ニンボリドはＲＮＦ１１４のＣ８と共有結合的に反応する。（図１０Ａ）ニンボリドは、ＰＯＮＤＲによって評価されるように、ＲＮＦ１１４内の天然変性領域を標的とする。（図１０Ｂ）アルキン官能化ニンボリドプローブの合成経路。（図１０Ｃ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームのニンボリドプローブ標識。２３１ＭＦＰプロテオームをＤＭＳＯまたはニンボリド（１０μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ニンボリド－アルキンプローブ（１μＭ、１時間）で標識し、続いてローダミン－アジドのＣｕＡＡＣ付加、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光の分析を行った。ニンボリド競合バンドは、ＰＴＯＶ１およびＲＮＦ１１４の分子量に対応する。（図１０Ｄ）ニンボリドプローブで標識された純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のゲルベースＡＢＰＰ分析。上の２つのパネルでは、純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。下の２つのパネルでは、純粋な野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質を、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。両方の実験について、ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識および銀染色が示されている。（図１０Ｅ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をニンボリド（１００μＭ、１時間）で標識し、トリプシン消化およびＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析に供した。示されているのは、ＲＮＦ１１４のＣ８へのニンボリド修飾付加物である。ペプチド配列は、配列番号２の残基７～２６に対応する。（図１０Ｃ～１０Ｄ）に示されるデータは、ｎ＝３／群からのものである。ニンボリドはＲＮＦ１１４のＣ８と共有結合的に反応する。（図１０Ａ）ニンボリドは、ＰＯＮＤＲによって評価されるように、ＲＮＦ１１４内の天然変性領域を標的とする。（図１０Ｂ）アルキン官能化ニンボリドプローブの合成経路。（図１０Ｃ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームのニンボリドプローブ標識。２３１ＭＦＰプロテオームをＤＭＳＯまたはニンボリド（１０μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ニンボリド－アルキンプローブ（１μＭ、１時間）で標識し、続いてローダミン－アジドのＣｕＡＡＣ付加、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光の分析を行った。ニンボリド競合バンドは、ＰＴＯＶ１およびＲＮＦ１１４の分子量に対応する。（図１０Ｄ）ニンボリドプローブで標識された純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のゲルベースＡＢＰＰ分析。上の２つのパネルでは、純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。下の２つのパネルでは、純粋な野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質を、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。両方の実験について、ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識および銀染色が示されている。（図１０Ｅ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をニンボリド（１００μＭ、１時間）で標識し、トリプシン消化およびＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析に供した。示されているのは、ＲＮＦ１１４のＣ８へのニンボリド修飾付加物である。ペプチド配列は、配列番号２の残基７～２６に対応する。（図１０Ｃ～１０Ｄ）に示されるデータは、ｎ＝３／群からのものである。ニンボリドはＲＮＦ１１４のＣ８と共有結合的に反応する。（図１０Ａ）ニンボリドは、ＰＯＮＤＲによって評価されるように、ＲＮＦ１１４内の天然変性領域を標的とする。（図１０Ｂ）アルキン官能化ニンボリドプローブの合成経路。（図１０Ｃ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームのニンボリドプローブ標識。２３１ＭＦＰプロテオームをＤＭＳＯまたはニンボリド（１０μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ニンボリド－アルキンプローブ（１μＭ、１時間）で標識し、続いてローダミン－アジドのＣｕＡＡＣ付加、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光の分析を行った。ニンボリド競合バンドは、ＰＴＯＶ１およびＲＮＦ１１４の分子量に対応する。（図１０Ｄ）ニンボリドプローブで標識された純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のゲルベースＡＢＰＰ分析。上の２つのパネルでは、純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。下の２つのパネルでは、純粋な野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質を、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。両方の実験について、ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識および銀染色が示されている。（図１０Ｅ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をニンボリド（１００μＭ、１時間）で標識し、トリプシン消化およびＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析に供した。示されているのは、ＲＮＦ１１４のＣ８へのニンボリド修飾付加物である。ペプチド配列は、配列番号２の残基７～２６に対応する。（図１０Ｃ～１０Ｄ）に示されるデータは、ｎ＝３／群からのものである。ニンボリドはＲＮＦ１１４のＣ８と共有結合的に反応する。（図１０Ａ）ニンボリドは、ＰＯＮＤＲによって評価されるように、ＲＮＦ１１４内の天然変性領域を標的とする。（図１０Ｂ）アルキン官能化ニンボリドプローブの合成経路。（図１０Ｃ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームのニンボリドプローブ標識。２３１ＭＦＰプロテオームをＤＭＳＯまたはニンボリド（１０μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ニンボリド－アルキンプローブ（１μＭ、１時間）で標識し、続いてローダミン－アジドのＣｕＡＡＣ付加、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光の分析を行った。ニンボリド競合バンドは、ＰＴＯＶ１およびＲＮＦ１１４の分子量に対応する。（図１０Ｄ）ニンボリドプローブで標識された純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のゲルベースＡＢＰＰ分析。上の２つのパネルでは、純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。下の２つのパネルでは、純粋な野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質を、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。両方の実験について、ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識および銀染色が示されている。（図１０Ｅ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をニンボリド（１００μＭ、１時間）で標識し、トリプシン消化およびＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析に供した。示されているのは、ＲＮＦ１１４のＣ８へのニンボリド修飾付加物である。ペプチド配列は、配列番号２の残基７～２６に対応する。（図１０Ｃ～１０Ｄ）に示されるデータは、ｎ＝３／群からのものである。ニンボリドは基質認識を妨害することにより、ＲＮＦ１１４活性を阻害する。（図１１Ａ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１を加えた場合、または加えていない場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチン（左）またはｐ２１（右）に対するブロッティング。ＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）をＲＮＦ１１４とプレインキュベートした後、Ｅ１およびＥ２酵素、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰを加えて反応を開始した。（図１１Ｂ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図１１Ｃ）純粋なＲＮＦ１１４およびｐ２１タンパク質のインビトロインキュベーションにおいて、Ｆｌａｇ－ＲＮＦ１１４プルダウンおよびｐ２１濃縮が、ニンボリド（１００μＭ）によって阻害された。Ｄ）２３１ＭＦＰ細胞をニンボリド（１００μＭ）で処理した。示されているのは、ＤＭＳＯ対照またはニンボリド処理細胞におけるｐ２１レベルである。（図１１Ａ～１１Ｄ）に示されるゲルは、ｎ＝３／群からの代表的な画像である。（図１１Ｃ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍである。（図１１Ｃ）に示されるデータは、ｎ＝３／群からのものである。（図１１Ｃ）の有意性は、（図１１Ｃ）ではｐ２１／ＲＮＦ１１４群と比較して、または（図１１Ｄ）では各時点についてのビヒクル処理対照群に対して、＊ｐ＜０．０５として表される。ニンボリドは基質認識を妨害することにより、ＲＮＦ１１４活性を阻害する。（図１１Ａ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１を加えた場合、または加えていない場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチン（左）またはｐ２１（右）に対するブロッティング。ＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）をＲＮＦ１１４とプレインキュベートした後、Ｅ１およびＥ２酵素、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰを加えて反応を開始した。（図１１Ｂ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図１１Ｃ）純粋なＲＮＦ１１４およびｐ２１タンパク質のインビトロインキュベーションにおいて、Ｆｌａｇ－ＲＮＦ１１４プルダウンおよびｐ２１濃縮が、ニンボリド（１００μＭ）によって阻害された。Ｄ）２３１ＭＦＰ細胞をニンボリド（１００μＭ）で処理した。示されているのは、ＤＭＳＯ対照またはニンボリド処理細胞におけるｐ２１レベルである。（図１１Ａ～１１Ｄ）に示されるゲルは、ｎ＝３／群からの代表的な画像である。（図１１Ｃ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍである。（図１１Ｃ）に示されるデータは、ｎ＝３／群からのものである。（図１１Ｃ）の有意性は、（図１１Ｃ）ではｐ２１／ＲＮＦ１１４群と比較して、または（図１１Ｄ）では各時点についてのビヒクル処理対照群に対して、＊ｐ＜０．０５として表される。ニンボリドは基質認識を妨害することにより、ＲＮＦ１１４活性を阻害する。（図１１Ａ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１を加えた場合、または加えていない場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチン（左）またはｐ２１（右）に対するブロッティング。ＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）をＲＮＦ１１４とプレインキュベートした後、Ｅ１およびＥ２酵素、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰを加えて反応を開始した。（図１１Ｂ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図１１Ｃ）純粋なＲＮＦ１１４およびｐ２１タンパク質のインビトロインキュベーションにおいて、Ｆｌａｇ－ＲＮＦ１１４プルダウンおよびｐ２１濃縮が、ニンボリド（１００μＭ）によって阻害された。Ｄ）２３１ＭＦＰ細胞をニンボリド（１００μＭ）で処理した。示されているのは、ＤＭＳＯ対照またはニンボリド処理細胞におけるｐ２１レベルである。（図１１Ａ～１１Ｄ）に示されるゲルは、ｎ＝３／群からの代表的な画像である。（図１１Ｃ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍである。（図１１Ｃ）に示されるデータは、ｎ＝３／群からのものである。（図１１Ｃ）の有意性は、（図１１Ｃ）ではｐ２１／ＲＮＦ１１４群と比較して、または（図１１Ｄ）では各時点についてのビヒクル処理対照群に対して、＊ｐ＜０．０５として表される。ニンボリドは基質認識を妨害することにより、ＲＮＦ１１４活性を阻害する。（図１１Ａ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１を加えた場合、または加えていない場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチン（左）またはｐ２１（右）に対するブロッティング。ＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）をＲＮＦ１１４とプレインキュベートした後、Ｅ１およびＥ２酵素、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰを加えて反応を開始した。（図１１Ｂ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図１１Ｃ）純粋なＲＮＦ１１４およびｐ２１タンパク質のインビトロインキュベーションにおいて、Ｆｌａｇ－ＲＮＦ１１４プルダウンおよびｐ２１濃縮が、ニンボリド（１００μＭ）によって阻害された。Ｄ）２３１ＭＦＰ細胞をニンボリド（１００μＭ）で処理した。示されているのは、ＤＭＳＯ対照またはニンボリド処理細胞におけるｐ２１レベルである。（図１１Ａ～１１Ｄ）に示されるゲルは、ｎ＝３／群からの代表的な画像である。（図１１Ｃ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍである。（図１１Ｃ）に示されるデータは、ｎ＝３／群からのものである。（図１１Ｃ）の有意性は、（図１１Ｃ）ではｐ２１／ＲＮＦ１１４群と比較して、または（図１１Ｄ）では各時点についてのビヒクル処理対照群に対して、＊ｐ＜０．０５として表される。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を動員し、ＢＲＤ４の標的タンパク質分解を行うことができる。（図１２Ａ）ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド、リンカーおよびＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１からなるニンボリドベースの分解剤であるＸＨ１およびＸＨ２を合成するための経路。（図１２Ｂ、１２Ｃ）１２時間のＸＨ１処理（図１２Ｂ）またはＸＨ２（図１２Ｃ）処理（１００ｎＭ）の３０分前およびその処理中に、ＤＭＳＯビヒクルまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１μＭ）で前処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４レベル。（図１２Ｄ）１２時間のＭＺ１またはＸＨ２処理で処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４レベル。（図１２Ｅ～１２Ｇ）１２時間のＸＨ２処理（１００ｎＭ）の前３０分間およびその処理中の、ＤＭＳＯビヒクルまたはＥ３リガーゼ阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）（Ｅ）、ＪＱ１（１μＭ）（Ｆ）またはエメチン（７５μＭ）（図１２Ｇ）で前処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のＢＲＤ４レベル。長いおよび短いＢＲＤ４アイソフォームと、ＧＡＰＤＨローディング対照とをＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングによって可視化し、デンシトメトリーによって定量化した（図１２Ｂ～１２Ｇ）。（Ｂ～Ｇ）に示すゲルは、ｎ＝３／群の代表的な画像である。（Ｂ、Ｃ、Ｅ～Ｇ）に示されているデータは、平均±ｓｅｍである。（図１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｅ～１２Ｇ）の有意性は、ビヒクル処理対照群と比較して＊ｐ＜０．０５、ＸＨ２処理群と比較して＃ｐ＜０．０５として表される。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を動員し、ＢＲＤ４の標的タンパク質分解を行うことができる。（図１２Ａ）ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド、リンカーおよびＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１からなるニンボリドベースの分解剤であるＸＨ１およびＸＨ２を合成するための経路。（図１２Ｂ、１２Ｃ）１２時間のＸＨ１処理（図１２Ｂ）またはＸＨ２（図１２Ｃ）処理（１００ｎＭ）の３０分前およびその処理中に、ＤＭＳＯビヒクルまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１μＭ）で前処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４レベル。（図１２Ｄ）１２時間のＭＺ１またはＸＨ２処理で処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４レベル。（図１２Ｅ～１２Ｇ）１２時間のＸＨ２処理（１００ｎＭ）の前３０分間およびその処理中の、ＤＭＳＯビヒクルまたはＥ３リガーゼ阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）（Ｅ）、ＪＱ１（１μＭ）（Ｆ）またはエメチン（７５μＭ）（図１２Ｇ）で前処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のＢＲＤ４レベル。長いおよび短いＢＲＤ４アイソフォームと、ＧＡＰＤＨローディング対照とをＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングによって可視化し、デンシトメトリーによって定量化した（図１２Ｂ～１２Ｇ）。（Ｂ～Ｇ）に示すゲルは、ｎ＝３／群の代表的な画像である。（Ｂ、Ｃ、Ｅ～Ｇ）に示されているデータは、平均±ｓｅｍである。（図１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｅ～１２Ｇ）の有意性は、ビヒクル処理対照群と比較して＊ｐ＜０．０５、ＸＨ２処理群と比較して＃ｐ＜０．０５として表される。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を動員し、ＢＲＤ４の標的タンパク質分解を行うことができる。（図１２Ａ）ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド、リンカーおよびＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１からなるニンボリドベースの分解剤であるＸＨ１およびＸＨ２を合成するための経路。（図１２Ｂ、１２Ｃ）１２時間のＸＨ１処理（図１２Ｂ）またはＸＨ２（図１２Ｃ）処理（１００ｎＭ）の３０分前およびその処理中に、ＤＭＳＯビヒクルまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１μＭ）で前処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４レベル。（図１２Ｄ）１２時間のＭＺ１またはＸＨ２処理で処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４レベル。（図１２Ｅ～１２Ｇ）１２時間のＸＨ２処理（１００ｎＭ）の前３０分間およびその処理中の、ＤＭＳＯビヒクルまたはＥ３リガーゼ阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）（Ｅ）、ＪＱ１（１μＭ）（Ｆ）またはエメチン（７５μＭ）（図１２Ｇ）で前処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のＢＲＤ４レベル。長いおよび短いＢＲＤ４アイソフォームと、ＧＡＰＤＨローディング対照とをＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングによって可視化し、デンシトメトリーによって定量化した（図１２Ｂ～１２Ｇ）。（Ｂ～Ｇ）に示すゲルは、ｎ＝３／群の代表的な画像である。（Ｂ、Ｃ、Ｅ～Ｇ）に示されているデータは、平均±ｓｅｍである。（図１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｅ～１２Ｇ）の有意性は、ビヒクル処理対照群と比較して＊ｐ＜０．０５、ＸＨ２処理群と比較して＃ｐ＜０．０５として表される。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を動員し、ＢＲＤ４の標的タンパク質分解を行うことができる。（図１２Ａ）ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド、リンカーおよびＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１からなるニンボリドベースの分解剤であるＸＨ１およびＸＨ２を合成するための経路。（図１２Ｂ、１２Ｃ）１２時間のＸＨ１処理（図１２Ｂ）またはＸＨ２（図１２Ｃ）処理（１００ｎＭ）の３０分前およびその処理中に、ＤＭＳＯビヒクルまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１μＭ）で前処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４レベル。（図１２Ｄ）１２時間のＭＺ１またはＸＨ２処理で処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４レベル。（図１２Ｅ～１２Ｇ）１２時間のＸＨ２処理（１００ｎＭ）の前３０分間およびその処理中の、ＤＭＳＯビヒクルまたはＥ３リガーゼ阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）（Ｅ）、ＪＱ１（１μＭ）（Ｆ）またはエメチン（７５μＭ）（図１２Ｇ）で前処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のＢＲＤ４レベル。長いおよび短いＢＲＤ４アイソフォームと、ＧＡＰＤＨローディング対照とをＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングによって可視化し、デンシトメトリーによって定量化した（図１２Ｂ～１２Ｇ）。（Ｂ～Ｇ）に示すゲルは、ｎ＝３／群の代表的な画像である。（Ｂ、Ｃ、Ｅ～Ｇ）に示されているデータは、平均±ｓｅｍである。（図１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｅ～１２Ｇ）の有意性は、ビヒクル処理対照群と比較して＊ｐ＜０．０５、ＸＨ２処理群と比較して＃ｐ＜０．０５として表される。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を動員し、ＢＲＤ４の標的タンパク質分解を行うことができる。（図１２Ａ）ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド、リンカーおよびＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１からなるニンボリドベースの分解剤であるＸＨ１およびＸＨ２を合成するための経路。（図１２Ｂ、１２Ｃ）１２時間のＸＨ１処理（図１２Ｂ）またはＸＨ２（図１２Ｃ）処理（１００ｎＭ）の３０分前およびその処理中に、ＤＭＳＯビヒクルまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１μＭ）で前処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４レベル。（図１２Ｄ）１２時間のＭＺ１またはＸＨ２処理で処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４レベル。（図１２Ｅ～１２Ｇ）１２時間のＸＨ２処理（１００ｎＭ）の前３０分間およびその処理中の、ＤＭＳＯビヒクルまたはＥ３リガーゼ阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）（Ｅ）、ＪＱ１（１μＭ）（Ｆ）またはエメチン（７５μＭ）（図１２Ｇ）で前処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のＢＲＤ４レベル。長いおよび短いＢＲＤ４アイソフォームと、ＧＡＰＤＨローディング対照とをＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングによって可視化し、デンシトメトリーによって定量化した（図１２Ｂ～１２Ｇ）。（Ｂ～Ｇ）に示すゲルは、ｎ＝３／群の代表的な画像である。（Ｂ、Ｃ、Ｅ～Ｇ）に示されているデータは、平均±ｓｅｍである。（図１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｅ～１２Ｇ）の有意性は、ビヒクル処理対照群と比較して＊ｐ＜０．０５、ＸＨ２処理群と比較して＃ｐ＜０．０５として表される。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を動員し、ＢＲＤ４の標的タンパク質分解を行うことができる。（図１２Ａ）ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド、リンカーおよびＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１からなるニンボリドベースの分解剤であるＸＨ１およびＸＨ２を合成するための経路。（図１２Ｂ、１２Ｃ）１２時間のＸＨ１処理（図１２Ｂ）またはＸＨ２（図１２Ｃ）処理（１００ｎＭ）の３０分前およびその処理中に、ＤＭＳＯビヒクルまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１μＭ）で前処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４レベル。（図１２Ｄ）１２時間のＭＺ１またはＸＨ２処理で処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４レベル。（図１２Ｅ～１２Ｇ）１２時間のＸＨ２処理（１００ｎＭ）の前３０分間およびその処理中の、ＤＭＳＯビヒクルまたはＥ３リガーゼ阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）（Ｅ）、ＪＱ１（１μＭ）（Ｆ）またはエメチン（７５μＭ）（図１２Ｇ）で前処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のＢＲＤ４レベル。長いおよび短いＢＲＤ４アイソフォームと、ＧＡＰＤＨローディング対照とをＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングによって可視化し、デンシトメトリーによって定量化した（図１２Ｂ～１２Ｇ）。（Ｂ～Ｇ）に示すゲルは、ｎ＝３／群の代表的な画像である。（Ｂ、Ｃ、Ｅ～Ｇ）に示されているデータは、平均±ｓｅｍである。（図１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｅ～１２Ｇ）の有意性は、ビヒクル処理対照群と比較して＊ｐ＜０．０５、ＸＨ２処理群と比較して＃ｐ＜０．０５として表される。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を動員し、ＢＲＤ４の標的タンパク質分解を行うことができる。（図１２Ａ）ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド、リンカーおよびＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１からなるニンボリドベースの分解剤であるＸＨ１およびＸＨ２を合成するための経路。（図１２Ｂ、１２Ｃ）１２時間のＸＨ１処理（図１２Ｂ）またはＸＨ２（図１２Ｃ）処理（１００ｎＭ）の３０分前およびその処理中に、ＤＭＳＯビヒクルまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１μＭ）で前処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４レベル。（図１２Ｄ）１２時間のＭＺ１またはＸＨ２処理で処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４レベル。（図１２Ｅ～１２Ｇ）１２時間のＸＨ２処理（１００ｎＭ）の前３０分間およびその処理中の、ＤＭＳＯビヒクルまたはＥ３リガーゼ阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）（Ｅ）、ＪＱ１（１μＭ）（Ｆ）またはエメチン（７５μＭ）（図１２Ｇ）で前処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のＢＲＤ４レベル。長いおよび短いＢＲＤ４アイソフォームと、ＧＡＰＤＨローディング対照とをＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングによって可視化し、デンシトメトリーによって定量化した（図１２Ｂ～１２Ｇ）。（Ｂ～Ｇ）に示すゲルは、ｎ＝３／群の代表的な画像である。（Ｂ、Ｃ、Ｅ～Ｇ）に示されているデータは、平均±ｓｅｍである。（図１２Ｂ、１２Ｃ、１２Ｅ～１２Ｇ）の有意性は、ビヒクル処理対照群と比較して＊ｐ＜０．０５、ＸＨ２処理群と比較して＃ｐ＜０．０５として表される。ＲＮＦ１１４に対して合成するのにより扱いやすい共有結合リガンドを同定するための、ケモプロテオミクス対応の共有結合リガンドスクリーニング。（図１３Ａ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－アルキン（１０μＭ）またはＪＮＳ２７（５０μＭ）標識に対するニンボリド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＩＡ－アルキンおよびＪＮＳ２７プローブの構造（反応性部分が赤で強調表示されている）が示されている。野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対するニンボリド（５０μＭ）競合のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。これらの実験では、ＤＭＳＯまたはニンボリドを３０分間プレインキュベートした後、１時間プローブ標識した。（図１３Ｂ）ＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識に対してシステイン反応性共有結合リガンドのライブラリーをスクリーニングしたとき、ＥＮ６２はトップヒットの１つであった。示されているのは、アクリルアミド反応性部分が赤で強調表示されているＥＮ６２の構造である。純粋なＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識に対するＥＮ６２のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。（図１３Ｃ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはＥＮ６２（５０μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図１３Ｄ）インビトロでの２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームにおけるＥＮ６２のＩｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。ＤＭＳＯまたはＥＮ６２（５０μＭ）を２３１ＭＦＰプロテオームとプレインキュベートしてから３０分後にＩＡ－アルキン標識（１００μＭ）を１時間行い、続いてｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ法を行った。（図１３Ｅ）ヘキスト染色によって評価した４８時間後のＥＮ６２による２３１ＭＦＰ細胞の生存。（図１３Ｆ）ビヒクル（１８：１：１の生理食塩水：ＰＥＧ４０：エタノール）またはＥＮ６２（５０ｍｇ／ｋｇｉｐ、１日１回、２３１ＭＦＰ細胞の皮下注射の１７日後に開始）で処理したＣ．Ｂ－１７雌ＳＣＩＤマウスにおける２３１ＭＦＰ腫瘍異種移植片の増殖。（図１３Ａ～１３Ｃ）に示されるゲルは、ｎ＝３／群からの代表的な画像である。（図１３Ｄ、１３Ｆ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝３～８／群である。（図１３Ｅ～１３Ｆ）の有意性は、ビヒクル処理対照と比較して、＊ｐ＜０．０５として表される。ＲＮＦ１１４に対して合成するのにより扱いやすい共有結合リガンドを同定するための、ケモプロテオミクス対応の共有結合リガンドスクリーニング。（図１３Ａ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－アルキン（１０μＭ）またはＪＮＳ２７（５０μＭ）標識に対するニンボリド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＩＡ－アルキンおよびＪＮＳ２７プローブの構造（反応性部分が赤で強調表示されている）が示されている。野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対するニンボリド（５０μＭ）競合のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。これらの実験では、ＤＭＳＯまたはニンボリドを３０分間プレインキュベートした後、１時間プローブ標識した。（図１３Ｂ）ＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識に対してシステイン反応性共有結合リガンドのライブラリーをスクリーニングしたとき、ＥＮ６２はトップヒットの１つであった。示されているのは、アクリルアミド反応性部分が赤で強調表示されているＥＮ６２の構造である。純粋なＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識に対するＥＮ６２のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。（図１３Ｃ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはＥＮ６２（５０μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図１３Ｄ）インビトロでの２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームにおけるＥＮ６２のＩｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。ＤＭＳＯまたはＥＮ６２（５０μＭ）を２３１ＭＦＰプロテオームとプレインキュベートしてから３０分後にＩＡ－アルキン標識（１００μＭ）を１時間行い、続いてｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ法を行った。（図１３Ｅ）ヘキスト染色によって評価した４８時間後のＥＮ６２による２３１ＭＦＰ細胞の生存。（図１３Ｆ）ビヒクル（１８：１：１の生理食塩水：ＰＥＧ４０：エタノール）またはＥＮ６２（５０ｍｇ／ｋｇｉｐ、１日１回、２３１ＭＦＰ細胞の皮下注射の１７日後に開始）で処理したＣ．Ｂ－１７雌ＳＣＩＤマウスにおける２３１ＭＦＰ腫瘍異種移植片の増殖。（図１３Ａ～１３Ｃ）に示されるゲルは、ｎ＝３／群からの代表的な画像である。（図１３Ｄ、１３Ｆ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝３～８／群である。（図１３Ｅ～１３Ｆ）の有意性は、ビヒクル処理対照と比較して、＊ｐ＜０．０５として表される。ＲＮＦ１１４に対して合成するのにより扱いやすい共有結合リガンドを同定するための、ケモプロテオミクス対応の共有結合リガンドスクリーニング。（図１３Ａ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－アルキン（１０μＭ）またはＪＮＳ２７（５０μＭ）標識に対するニンボリド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＩＡ－アルキンおよびＪＮＳ２７プローブの構造（反応性部分が赤で強調表示されている）が示されている。野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対するニンボリド（５０μＭ）競合のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。これらの実験では、ＤＭＳＯまたはニンボリドを３０分間プレインキュベートした後、１時間プローブ標識した。（図１３Ｂ）ＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識に対してシステイン反応性共有結合リガンドのライブラリーをスクリーニングしたとき、ＥＮ６２はトップヒットの１つであった。示されているのは、アクリルアミド反応性部分が赤で強調表示されているＥＮ６２の構造である。純粋なＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識に対するＥＮ６２のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。（図１３Ｃ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはＥＮ６２（５０μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図１３Ｄ）インビトロでの２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームにおけるＥＮ６２のＩｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。ＤＭＳＯまたはＥＮ６２（５０μＭ）を２３１ＭＦＰプロテオームとプレインキュベートしてから３０分後にＩＡ－アルキン標識（１００μＭ）を１時間行い、続いてｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ法を行った。（図１３Ｅ）ヘキスト染色によって評価した４８時間後のＥＮ６２による２３１ＭＦＰ細胞の生存。（図１３Ｆ）ビヒクル（１８：１：１の生理食塩水：ＰＥＧ４０：エタノール）またはＥＮ６２（５０ｍｇ／ｋｇｉｐ、１日１回、２３１ＭＦＰ細胞の皮下注射の１７日後に開始）で処理したＣ．Ｂ－１７雌ＳＣＩＤマウスにおける２３１ＭＦＰ腫瘍異種移植片の増殖。（図１３Ａ～１３Ｃ）に示されるゲルは、ｎ＝３／群からの代表的な画像である。（図１３Ｄ、１３Ｆ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝３～８／群である。（図１３Ｅ～１３Ｆ）の有意性は、ビヒクル処理対照と比較して、＊ｐ＜０．０５として表される。ＲＮＦ１１４に対して合成するのにより扱いやすい共有結合リガンドを同定するための、ケモプロテオミクス対応の共有結合リガンドスクリーニング。（図１３Ａ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－アルキン（１０μＭ）またはＪＮＳ２７（５０μＭ）標識に対するニンボリド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＩＡ－アルキンおよびＪＮＳ２７プローブの構造（反応性部分が赤で強調表示されている）が示されている。野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対するニンボリド（５０μＭ）競合のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。これらの実験では、ＤＭＳＯまたはニンボリドを３０分間プレインキュベートした後、１時間プローブ標識した。（図１３Ｂ）ＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識に対してシステイン反応性共有結合リガンドのライブラリーをスクリーニングしたとき、ＥＮ６２はトップヒットの１つであった。示されているのは、アクリルアミド反応性部分が赤で強調表示されているＥＮ６２の構造である。純粋なＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識に対するＥＮ６２のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。（図１３Ｃ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはＥＮ６２（５０μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図１３Ｄ）インビトロでの２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームにおけるＥＮ６２のＩｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。ＤＭＳＯまたはＥＮ６２（５０μＭ）を２３１ＭＦＰプロテオームとプレインキュベートしてから３０分後にＩＡ－アルキン標識（１００μＭ）を１時間行い、続いてｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ法を行った。（図１３Ｅ）ヘキスト染色によって評価した４８時間後のＥＮ６２による２３１ＭＦＰ細胞の生存。（図１３Ｆ）ビヒクル（１８：１：１の生理食塩水：ＰＥＧ４０：エタノール）またはＥＮ６２（５０ｍｇ／ｋｇｉｐ、１日１回、２３１ＭＦＰ細胞の皮下注射の１７日後に開始）で処理したＣ．Ｂ－１７雌ＳＣＩＤマウスにおける２３１ＭＦＰ腫瘍異種移植片の増殖。（図１３Ａ～１３Ｃ）に示されるゲルは、ｎ＝３／群からの代表的な画像である。（図１３Ｄ、１３Ｆ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝３～８／群である。（図１３Ｅ～１３Ｆ）の有意性は、ビヒクル処理対照と比較して、＊ｐ＜０．０５として表される。ＲＮＦ１１４に対して合成するのにより扱いやすい共有結合リガンドを同定するための、ケモプロテオミクス対応の共有結合リガンドスクリーニング。（図１３Ａ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－アルキン（１０μＭ）またはＪＮＳ２７（５０μＭ）標識に対するニンボリド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＩＡ－アルキンおよびＪＮＳ２７プローブの構造（反応性部分が赤で強調表示されている）が示されている。野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対するニンボリド（５０μＭ）競合のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。これらの実験では、ＤＭＳＯまたはニンボリドを３０分間プレインキュベートした後、１時間プローブ標識した。（図１３Ｂ）ＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識に対してシステイン反応性共有結合リガンドのライブラリーをスクリーニングしたとき、ＥＮ６２はトップヒットの１つであった。示されているのは、アクリルアミド反応性部分が赤で強調表示されているＥＮ６２の構造である。純粋なＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識に対するＥＮ６２のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。（図１３Ｃ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはＥＮ６２（５０μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図１３Ｄ）インビトロでの２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームにおけるＥＮ６２のＩｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。ＤＭＳＯまたはＥＮ６２（５０μＭ）を２３１ＭＦＰプロテオームとプレインキュベートしてから３０分後にＩＡ－アルキン標識（１００μＭ）を１時間行い、続いてｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ法を行った。（図１３Ｅ）ヘキスト染色によって評価した４８時間後のＥＮ６２による２３１ＭＦＰ細胞の生存。（図１３Ｆ）ビヒクル（１８：１：１の生理食塩水：ＰＥＧ４０：エタノール）またはＥＮ６２（５０ｍｇ／ｋｇｉｐ、１日１回、２３１ＭＦＰ細胞の皮下注射の１７日後に開始）で処理したＣ．Ｂ－１７雌ＳＣＩＤマウスにおける２３１ＭＦＰ腫瘍異種移植片の増殖。（図１３Ａ～１３Ｃ）に示されるゲルは、ｎ＝３／群からの代表的な画像である。（図１３Ｄ、１３Ｆ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝３～８／群である。（図１３Ｅ～１３Ｆ）の有意性は、ビヒクル処理対照と比較して、＊ｐ＜０．０５として表される。ＲＮＦ１１４に対して合成するのにより扱いやすい共有結合リガンドを同定するための、ケモプロテオミクス対応の共有結合リガンドスクリーニング。（図１３Ａ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－アルキン（１０μＭ）またはＪＮＳ２７（５０μＭ）標識に対するニンボリド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＩＡ－アルキンおよびＪＮＳ２７プローブの構造（反応性部分が赤で強調表示されている）が示されている。野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対するニンボリド（５０μＭ）競合のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。これらの実験では、ＤＭＳＯまたはニンボリドを３０分間プレインキュベートした後、１時間プローブ標識した。（図１３Ｂ）ＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識に対してシステイン反応性共有結合リガンドのライブラリーをスクリーニングしたとき、ＥＮ６２はトップヒットの１つであった。示されているのは、アクリルアミド反応性部分が赤で強調表示されているＥＮ６２の構造である。純粋なＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識に対するＥＮ６２のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。（図１３Ｃ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはＥＮ６２（５０μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図１３Ｄ）インビトロでの２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームにおけるＥＮ６２のＩｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。ＤＭＳＯまたはＥＮ６２（５０μＭ）を２３１ＭＦＰプロテオームとプレインキュベートしてから３０分後にＩＡ－アルキン標識（１００μＭ）を１時間行い、続いてｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ法を行った。（図１３Ｅ）ヘキスト染色によって評価した４８時間後のＥＮ６２による２３１ＭＦＰ細胞の生存。（図１３Ｆ）ビヒクル（１８：１：１の生理食塩水：ＰＥＧ４０：エタノール）またはＥＮ６２（５０ｍｇ／ｋｇｉｐ、１日１回、２３１ＭＦＰ細胞の皮下注射の１７日後に開始）で処理したＣ．Ｂ－１７雌ＳＣＩＤマウスにおける２３１ＭＦＰ腫瘍異種移植片の増殖。（図１３Ａ～１３Ｃ）に示されるゲルは、ｎ＝３／群からの代表的な画像である。（図１３Ｄ、１３Ｆ）に示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝３～８／群である。（図１３Ｅ～１３Ｆ）の有意性は、ビヒクル処理対照と比較して、＊ｐ＜０．０５として表される。２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＰＴＯＶ１およびＰＦＫＰのノックダウン。ＰＴＯＶ１およびＰＦＫＰは、ｓｈＲＮＡオリゴヌクレオチドで安定してノックダウンされ、ｑＰＣＲによって発現が確認された。２３１ＭＦＰｓｈ対照細胞は、ＧＦＰを標的とするｓｈＲＮＡオリゴヌクレオチドを使用した。２３１ＭＦＰｓｈ対照、ｓｈＰＦＫＰおよびｓｈＰＴＯＶ１細胞の増殖を、ヘキスト染色によって４８時間後に評価した。示されているデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝６／群である。有意性は、ｓｈ対照細胞と比較して＊ｐ＜０．０５として表される。ニンボリド処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるｐ５３のレベル。ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００μＭ）で処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のｐ５３レベルは、ローディング対照としてのＧＡＰＤＨレベルと共にウエスタンブロッティングによって評価した。ゲルはｎ＝３／群の代表である。ブロットは、デンシトメトリーによって定量化し、ローディング対照に対して正規化した。棒グラフに示されているデータは、平均±ｓｅｍである。ＲＮＦ１１４に対するシステイン反応性リガンドのゲルベースＡＢＰＰスクリーニング。システイン反応性共有結合リガンドは、純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対してスクリーニングした。共有結合リガンド（５０μＭ）をＲＮＦ１１４と３０分間プレインキュベートした後、ＪＮＳ２７で１時間標識した。次に、ローダミン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥで分離し、ゲル内蛍光で可視化した。プローブ標識の阻害を示したこれらのタンパク質を、以下の用量反応研究において再試験して、ＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識を再現性よく阻害したヒットを同定した。ＲＮＦ１１４に対するシステイン反応性リガンドのゲルベースＡＢＰＰスクリーニング。システイン反応性共有結合リガンドは、純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対してスクリーニングした。共有結合リガンド（５０μＭ）をＲＮＦ１１４と３０分間プレインキュベートした後、ＪＮＳ２７で１時間標識した。次に、ローダミン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥで分離し、ゲル内蛍光で可視化した。プローブ標識の阻害を示したこれらのタンパク質を、以下の用量反応研究において再試験して、ＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識を再現性よく阻害したヒットを同定した。ＲＮＦ１１４に対するシステイン反応性リガンドのゲルベースＡＢＰＰスクリーニング。システイン反応性共有結合リガンドは、純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対してスクリーニングした。共有結合リガンド（５０μＭ）をＲＮＦ１１４と３０分間プレインキュベートした後、ＪＮＳ２７で１時間標識した。次に、ローダミン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥで分離し、ゲル内蛍光で可視化した。プローブ標識の阻害を示したこれらのタンパク質を、以下の用量反応研究において再試験して、ＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識を再現性よく阻害したヒットを同定した。ＲＮＦ１１４に対するシステイン反応性リガンドのゲルベースＡＢＰＰスクリーニング。システイン反応性共有結合リガンドは、純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対してスクリーニングした。共有結合リガンド（５０μＭ）をＲＮＦ１１４と３０分間プレインキュベートした後、ＪＮＳ２７で１時間標識した。次に、ローダミン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥで分離し、ゲル内蛍光で可視化した。プローブ標識の阻害を示したこれらのタンパク質を、以下の用量反応研究において再試験して、ＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識を再現性よく阻害したヒットを同定した。ＲＮＦ１１４に対するシステイン反応性リガンドのゲルベースＡＢＰＰスクリーニング。システイン反応性共有結合リガンドは、純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対してスクリーニングした。共有結合リガンド（５０μＭ）をＲＮＦ１１４と３０分間プレインキュベートした後、ＪＮＳ２７で１時間標識した。次に、ローダミン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥで分離し、ゲル内蛍光で可視化した。プローブ標識の阻害を示したこれらのタンパク質を、以下の用量反応研究において再試験して、ＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識を再現性よく阻害したヒットを同定した。ニンボリドは乳癌細胞の増殖または生存を低減する。（図１７Ａ～１７Ｂ）血清含有培地における２３１ＭＦＰ乳癌細胞の増殖（図１７Ａ）および無血清細胞生存（図１７Ｂ）。図１７Ａ～１７Ｂに示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝６の生物学的に独立したサンプル／群である。（図１７Ｃ）２３１ＭＦＰ細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで２４時間または４８時間処理した後、フローサイトメトリーによって評価したヨウ化プロピジウムおよびアネキシンＶ陽性（ＰＩ＋／アネキシンＶ＋）細胞のパーセント。示されているのは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的なＦＡＣＳデータである。ＦＩＴＣ＋／ＰＩ＋細胞として定義されるように定義された後期アポトーシス細胞のパーセンテージの定量化が図１８Ｄに示されている。統計的有意性は、不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、ビヒクルで処理した対照と比較して、図１７Ａでは１００および１０μＭの場合、それぞれ＊Ｐ＝７．７５ｘ１０^－１４および１．１４ｘ１０^－１３であり、図１７Ｂでは、１００および１０μＭの場合、それぞれ＊Ｐ＝３．８８ｘ１０^－８および１．５３ｘ１０^－７として表される。ニンボリドは乳癌細胞の増殖または生存を低減する。（図１７Ａ～１７Ｂ）血清含有培地における２３１ＭＦＰ乳癌細胞の増殖（図１７Ａ）および無血清細胞生存（図１７Ｂ）。図１７Ａ～１７Ｂに示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝６の生物学的に独立したサンプル／群である。（図１７Ｃ）２３１ＭＦＰ細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで２４時間または４８時間処理した後、フローサイトメトリーによって評価したヨウ化プロピジウムおよびアネキシンＶ陽性（ＰＩ＋／アネキシンＶ＋）細胞のパーセント。示されているのは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的なＦＡＣＳデータである。ＦＩＴＣ＋／ＰＩ＋細胞として定義されるように定義された後期アポトーシス細胞のパーセンテージの定量化が図１８Ｄに示されている。統計的有意性は、不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、ビヒクルで処理した対照と比較して、図１７Ａでは１００および１０μＭの場合、それぞれ＊Ｐ＝７．７５ｘ１０^－１４および１．１４ｘ１０^－１３であり、図１７Ｂでは、１００および１０μＭの場合、それぞれ＊Ｐ＝３．８８ｘ１０^－８および１．５３ｘ１０^－７として表される。ニンボリドは乳癌細胞の増殖または生存を低減する。（図１７Ａ～１７Ｂ）血清含有培地における２３１ＭＦＰ乳癌細胞の増殖（図１７Ａ）および無血清細胞生存（図１７Ｂ）。図１７Ａ～１７Ｂに示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝６の生物学的に独立したサンプル／群である。（図１７Ｃ）２３１ＭＦＰ細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで２４時間または４８時間処理した後、フローサイトメトリーによって評価したヨウ化プロピジウムおよびアネキシンＶ陽性（ＰＩ＋／アネキシンＶ＋）細胞のパーセント。示されているのは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的なＦＡＣＳデータである。ＦＩＴＣ＋／ＰＩ＋細胞として定義されるように定義された後期アポトーシス細胞のパーセンテージの定量化が図１８Ｄに示されている。統計的有意性は、不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、ビヒクルで処理した対照と比較して、図１７Ａでは１００および１０μＭの場合、それぞれ＊Ｐ＝７．７５ｘ１０^－１４および１．１４ｘ１０^－１３であり、図１７Ｂでは、１００および１０μＭの場合、それぞれ＊Ｐ＝３．８８ｘ１０^－８および１．５３ｘ１０^－７として表される。ニンボリドは乳癌細胞の増殖および生存を低減し、アポトーシスを誘導する。（図１８Ａ～１８Ｂ）血清含有培地におけるＨＣＣ３８乳癌細胞の増殖（図１８Ａ）および無血清細胞生存（図１８Ｂ）。細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで処理し、４８時間後に細胞生存率を評価した。（図１８Ｃ）示されているのは、フローサイトメトリーデータのゲーティング戦略である。２つのゲーティングステップを使用した。最初のステップでは、前方散乱および側方散乱によってゲートした。２番目のゲートは、細胞死染色（ＰＩ／アネキシン）による象限への分離に基づいていた。（図１８Ｄ～１８Ｅ）２３１ＭＦＰ（図１８Ｄ）およびＨＣＣ３８（図１８Ｅ）細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで２４時間または４８時間処理した後にフローサイトメトリーによって評価したヨウ化プロピジウムおよびアネキシンＶ陽性（ＰＩ＋／アネキシンＶ＋）細胞のパーセント。図１７Ｃに示される図１８Ｄの２３１ＭＦＰ細胞およびＨＣＣ３８細胞からの代表的なＦＡＣＳデータが、（図１８Ｅ）の左側のパネルに示されている。図１８Ｄ～１８Ｅの棒グラフは、ＰＩ＋／アネキシン－Ｖ＋細胞として定義されるように定義された後期アポトーシス細胞のパーセンテージである。図１８Ａ～１８Ｂおよび図１８Ｄ～１８Ｅに示されるデータは、平均±ｓｅｍであり、図１８Ａ～１８Ｂではｎ＝６、図１８Ｄ～１８Ｅではｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、ビヒクル処理対照と比較して、図１８Ａでは、１００および１０μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝１．６４ｘ１０^－１３および２．０５ｘ１０^－１３、図１８Ｂでは、１００および１０μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝２．０９ｘ１０^－１１および７．０７ｘ１０^－１２、図１８Ｄの２４時間データでは、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝９．０５ｘ１０^－５および１．８７ｘ１０^－５、図１８Ｅの４８時間データでは、１、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝０．００１３９、０．０００１４２および７．９７ｘ１０^－９、図１８Ｅの２４時間データでは、１、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝０．００４２４、０．０１８２および２．２２ｘ１０^－１１、図１８Ｅの４８時間データでは、１、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝６．６８ｘ１０^－６、４．７０ｘ１０^－７および９．００ｘ１０^－１１として表される。ニンボリドは乳癌細胞の増殖および生存を低減し、アポトーシスを誘導する。（図１８Ａ～１８Ｂ）血清含有培地におけるＨＣＣ３８乳癌細胞の増殖（図１８Ａ）および無血清細胞生存（図１８Ｂ）。細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで処理し、４８時間後に細胞生存率を評価した。（図１８Ｃ）示されているのは、フローサイトメトリーデータのゲーティング戦略である。２つのゲーティングステップを使用した。最初のステップでは、前方散乱および側方散乱によってゲートした。２番目のゲートは、細胞死染色（ＰＩ／アネキシン）による象限への分離に基づいていた。（図１８Ｄ～１８Ｅ）２３１ＭＦＰ（図１８Ｄ）およびＨＣＣ３８（図１８Ｅ）細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで２４時間または４８時間処理した後にフローサイトメトリーによって評価したヨウ化プロピジウムおよびアネキシンＶ陽性（ＰＩ＋／アネキシンＶ＋）細胞のパーセント。図１７Ｃに示される図１８Ｄの２３１ＭＦＰ細胞およびＨＣＣ３８細胞からの代表的なＦＡＣＳデータが、（図１８Ｅ）の左側のパネルに示されている。図１８Ｄ～１８Ｅの棒グラフは、ＰＩ＋／アネキシン－Ｖ＋細胞として定義されるように定義された後期アポトーシス細胞のパーセンテージである。図１８Ａ～１８Ｂおよび図１８Ｄ～１８Ｅに示されるデータは、平均±ｓｅｍであり、図１８Ａ～１８Ｂではｎ＝６、図１８Ｄ～１８Ｅではｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、ビヒクル処理対照と比較して、図１８Ａでは、１００および１０μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝１．６４ｘ１０^－１３および２．０５ｘ１０^－１３、図１８Ｂでは、１００および１０μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝２．０９ｘ１０^－１１および７．０７ｘ１０^－１２、図１８Ｄの２４時間データでは、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝９．０５ｘ１０^－５および１．８７ｘ１０^－５、図１８Ｅの４８時間データでは、１、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝０．００１３９、０．０００１４２および７．９７ｘ１０^－９、図１８Ｅの２４時間データでは、１、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝０．００４２４、０．０１８２および２．２２ｘ１０^－１１、図１８Ｅの４８時間データでは、１、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝６．６８ｘ１０^－６、４．７０ｘ１０^－７および９．００ｘ１０^－１１として表される。ニンボリドは乳癌細胞の増殖および生存を低減し、アポトーシスを誘導する。（図１８Ａ～１８Ｂ）血清含有培地におけるＨＣＣ３８乳癌細胞の増殖（図１８Ａ）および無血清細胞生存（図１８Ｂ）。細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで処理し、４８時間後に細胞生存率を評価した。（図１８Ｃ）示されているのは、フローサイトメトリーデータのゲーティング戦略である。２つのゲーティングステップを使用した。最初のステップでは、前方散乱および側方散乱によってゲートした。２番目のゲートは、細胞死染色（ＰＩ／アネキシン）による象限への分離に基づいていた。（図１８Ｄ～１８Ｅ）２３１ＭＦＰ（図１８Ｄ）およびＨＣＣ３８（図１８Ｅ）細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで２４時間または４８時間処理した後にフローサイトメトリーによって評価したヨウ化プロピジウムおよびアネキシンＶ陽性（ＰＩ＋／アネキシンＶ＋）細胞のパーセント。図１７Ｃに示される図１８Ｄの２３１ＭＦＰ細胞およびＨＣＣ３８細胞からの代表的なＦＡＣＳデータが、（図１８Ｅ）の左側のパネルに示されている。図１８Ｄ～１８Ｅの棒グラフは、ＰＩ＋／アネキシン－Ｖ＋細胞として定義されるように定義された後期アポトーシス細胞のパーセンテージである。図１８Ａ～１８Ｂおよび図１８Ｄ～１８Ｅに示されるデータは、平均±ｓｅｍであり、図１８Ａ～１８Ｂではｎ＝６、図１８Ｄ～１８Ｅではｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、ビヒクル処理対照と比較して、図１８Ａでは、１００および１０μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝１．６４ｘ１０^－１３および２．０５ｘ１０^－１３、図１８Ｂでは、１００および１０μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝２．０９ｘ１０^－１１および７．０７ｘ１０^－１２、図１８Ｄの２４時間データでは、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝９．０５ｘ１０^－５および１．８７ｘ１０^－５、図１８Ｅの４８時間データでは、１、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝０．００１３９、０．０００１４２および７．９７ｘ１０^－９、図１８Ｅの２４時間データでは、１、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝０．００４２４、０．０１８２および２．２２ｘ１０^－１１、図１８Ｅの４８時間データでは、１、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝６．６８ｘ１０^－６、４．７０ｘ１０^－７および９．００ｘ１０^－１１として表される。ニンボリドは乳癌細胞の増殖および生存を低減し、アポトーシスを誘導する。（図１８Ａ～１８Ｂ）血清含有培地におけるＨＣＣ３８乳癌細胞の増殖（図１８Ａ）および無血清細胞生存（図１８Ｂ）。細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで処理し、４８時間後に細胞生存率を評価した。（図１８Ｃ）示されているのは、フローサイトメトリーデータのゲーティング戦略である。２つのゲーティングステップを使用した。最初のステップでは、前方散乱および側方散乱によってゲートした。２番目のゲートは、細胞死染色（ＰＩ／アネキシン）による象限への分離に基づいていた。（図１８Ｄ～１８Ｅ）２３１ＭＦＰ（図１８Ｄ）およびＨＣＣ３８（図１８Ｅ）細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで２４時間または４８時間処理した後にフローサイトメトリーによって評価したヨウ化プロピジウムおよびアネキシンＶ陽性（ＰＩ＋／アネキシンＶ＋）細胞のパーセント。図１７Ｃに示される図１８Ｄの２３１ＭＦＰ細胞およびＨＣＣ３８細胞からの代表的なＦＡＣＳデータが、（図１８Ｅ）の左側のパネルに示されている。図１８Ｄ～１８Ｅの棒グラフは、ＰＩ＋／アネキシン－Ｖ＋細胞として定義されるように定義された後期アポトーシス細胞のパーセンテージである。図１８Ａ～１８Ｂおよび図１８Ｄ～１８Ｅに示されるデータは、平均±ｓｅｍであり、図１８Ａ～１８Ｂではｎ＝６、図１８Ｄ～１８Ｅではｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、ビヒクル処理対照と比較して、図１８Ａでは、１００および１０μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝１．６４ｘ１０^－１３および２．０５ｘ１０^－１３、図１８Ｂでは、１００および１０μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝２．０９ｘ１０^－１１および７．０７ｘ１０^－１２、図１８Ｄの２４時間データでは、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝９．０５ｘ１０^－５および１．８７ｘ１０^－５、図１８Ｅの４８時間データでは、１、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝０．００１３９、０．０００１４２および７．９７ｘ１０^－９、図１８Ｅの２４時間データでは、１、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝０．００４２４、０．０１８２および２．２２ｘ１０^－１１、図１８Ｅの４８時間データでは、１、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝６．６８ｘ１０^－６、４．７０ｘ１０^－７および９．００ｘ１０^－１１として表される。ニンボリドは乳癌細胞の増殖および生存を低減し、アポトーシスを誘導する。（図１８Ａ～１８Ｂ）血清含有培地におけるＨＣＣ３８乳癌細胞の増殖（図１８Ａ）および無血清細胞生存（図１８Ｂ）。細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで処理し、４８時間後に細胞生存率を評価した。（図１８Ｃ）示されているのは、フローサイトメトリーデータのゲーティング戦略である。２つのゲーティングステップを使用した。最初のステップでは、前方散乱および側方散乱によってゲートした。２番目のゲートは、細胞死染色（ＰＩ／アネキシン）による象限への分離に基づいていた。（図１８Ｄ～１８Ｅ）２３１ＭＦＰ（図１８Ｄ）およびＨＣＣ３８（図１８Ｅ）細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで２４時間または４８時間処理した後にフローサイトメトリーによって評価したヨウ化プロピジウムおよびアネキシンＶ陽性（ＰＩ＋／アネキシンＶ＋）細胞のパーセント。図１７Ｃに示される図１８Ｄの２３１ＭＦＰ細胞およびＨＣＣ３８細胞からの代表的なＦＡＣＳデータが、（図１８Ｅ）の左側のパネルに示されている。図１８Ｄ～１８Ｅの棒グラフは、ＰＩ＋／アネキシン－Ｖ＋細胞として定義されるように定義された後期アポトーシス細胞のパーセンテージである。図１８Ａ～１８Ｂおよび図１８Ｄ～１８Ｅに示されるデータは、平均±ｓｅｍであり、図１８Ａ～１８Ｂではｎ＝６、図１８Ｄ～１８Ｅではｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、ビヒクル処理対照と比較して、図１８Ａでは、１００および１０μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝１．６４ｘ１０^－１３および２．０５ｘ１０^－１３、図１８Ｂでは、１００および１０μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝２．０９ｘ１０^－１１および７．０７ｘ１０^－１２、図１８Ｄの２４時間データでは、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝９．０５ｘ１０^－５および１．８７ｘ１０^－５、図１８Ｅの４８時間データでは、１、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝０．００１３９、０．０００１４２および７．９７ｘ１０^－９、図１８Ｅの２４時間データでは、１、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝０．００４２４、０．０１８２および２．２２ｘ１０^－１１、図１８Ｅの４８時間データでは、１、１０および１００μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝６．６８ｘ１０^－６、４．７０ｘ１０^－７および９．００ｘ１０^－１１として表される。２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオーム中のニンボリドのｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析により、ＲＮＦ１１４が標的であることが明らかになった。（図１９Ａ）図１９Ａに記載されているようにインサイチュ分析された２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるニンボリド（１０μＭ）のｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。軽い同位体プローブ修飾ペプチド対重い同位体プローブ修飾ペプチド比が左側のプロットに示されており、比が最も高い主要な標的はＲＮＦ１１４のＣ８であった。右側に示されているのは、ＲＮＦ１１４のＣ８を持つプローブ修飾ペプチドの代表的なＭＳ１の軽いピーク対重いピークである。（図１９Ｂ）ｓｉ対照２３１ＭＦＰ細胞と比較したＲＮＦ１１４のウエスタンブロッティングによって検証したＲＮＦ１１４を標的とする低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）によるＲＮＦ１１４ノックダウン。ＧＡＰＤＨ発現はローディング対照として示されている。示されているゲルは、ｎ＝３の生物学的複製／群からの代表的なゲルである。（図１９Ｃ）ｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４細胞における２４時間後の２３１ＭＦＰ細胞の増殖。（図１９Ｄ）２３１ＭＦＰｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４２３１ＭＦＰ乳癌細胞に対するニンボリドの効果。２３１ＭＦＰｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４２３１ＭＦＰ乳癌細胞に対するニンボリドの効果。細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで２４時間処理した後、増殖を評価した。ｓｉ対照またはｓｉＲＮＦ１１４群のデータは、各群のそれぞれのＤＭＳＯビヒクル対照に対して正規化した。個々の生物学的に独立したサンプルデータが示され、線は平均値を示す。図１９Ｃに示されるデータは、平均±ｓｅｍである。図１９Ａ～１９Ｂに示されるデータは、ｎ＝３からのものであり、図１８Ｄ～１８Ｅでは、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群からのものである。図１８Ｄ～１８Ｅの統計的有意性は、不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。図１８Ｄの有意性は、ｓｉ対照細胞と比較して＊Ｐ＝４．５２ｘ１０^－５として表される。図１８Ｅにおける有意性は、ｓｉ対照群からの対応するニンボリド処理濃度と比較して、１０、６、および３μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝１．９０ｘ１０^－５、２．７２ｘ１０^－４および０．００１０１として表される。２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオーム中のニンボリドのｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析により、ＲＮＦ１１４が標的であることが明らかになった。（図１９Ａ）図１９Ａに記載されているようにインサイチュ分析された２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるニンボリド（１０μＭ）のｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。軽い同位体プローブ修飾ペプチド対重い同位体プローブ修飾ペプチド比が左側のプロットに示されており、比が最も高い主要な標的はＲＮＦ１１４のＣ８であった。右側に示されているのは、ＲＮＦ１１４のＣ８を持つプローブ修飾ペプチドの代表的なＭＳ１の軽いピーク対重いピークである。（図１９Ｂ）ｓｉ対照２３１ＭＦＰ細胞と比較したＲＮＦ１１４のウエスタンブロッティングによって検証したＲＮＦ１１４を標的とする低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）によるＲＮＦ１１４ノックダウン。ＧＡＰＤＨ発現はローディング対照として示されている。示されているゲルは、ｎ＝３の生物学的複製／群からの代表的なゲルである。（図１９Ｃ）ｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４細胞における２４時間後の２３１ＭＦＰ細胞の増殖。（図１９Ｄ）２３１ＭＦＰｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４２３１ＭＦＰ乳癌細胞に対するニンボリドの効果。２３１ＭＦＰｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４２３１ＭＦＰ乳癌細胞に対するニンボリドの効果。細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで２４時間処理した後、増殖を評価した。ｓｉ対照またはｓｉＲＮＦ１１４群のデータは、各群のそれぞれのＤＭＳＯビヒクル対照に対して正規化した。個々の生物学的に独立したサンプルデータが示され、線は平均値を示す。図１９Ｃに示されるデータは、平均±ｓｅｍである。図１９Ａ～１９Ｂに示されるデータは、ｎ＝３からのものであり、図１８Ｄ～１８Ｅでは、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群からのものである。図１８Ｄ～１８Ｅの統計的有意性は、不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。図１８Ｄの有意性は、ｓｉ対照細胞と比較して＊Ｐ＝４．５２ｘ１０^－５として表される。図１８Ｅにおける有意性は、ｓｉ対照群からの対応するニンボリド処理濃度と比較して、１０、６、および３μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝１．９０ｘ１０^－５、２．７２ｘ１０^－４および０．００１０１として表される。２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオーム中のニンボリドのｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析により、ＲＮＦ１１４が標的であることが明らかになった。（図１９Ａ）図１９Ａに記載されているようにインサイチュ分析された２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるニンボリド（１０μＭ）のｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。軽い同位体プローブ修飾ペプチド対重い同位体プローブ修飾ペプチド比が左側のプロットに示されており、比が最も高い主要な標的はＲＮＦ１１４のＣ８であった。右側に示されているのは、ＲＮＦ１１４のＣ８を持つプローブ修飾ペプチドの代表的なＭＳ１の軽いピーク対重いピークである。（図１９Ｂ）ｓｉ対照２３１ＭＦＰ細胞と比較したＲＮＦ１１４のウエスタンブロッティングによって検証したＲＮＦ１１４を標的とする低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）によるＲＮＦ１１４ノックダウン。ＧＡＰＤＨ発現はローディング対照として示されている。示されているゲルは、ｎ＝３の生物学的複製／群からの代表的なゲルである。（図１９Ｃ）ｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４細胞における２４時間後の２３１ＭＦＰ細胞の増殖。（図１９Ｄ）２３１ＭＦＰｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４２３１ＭＦＰ乳癌細胞に対するニンボリドの効果。２３１ＭＦＰｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４２３１ＭＦＰ乳癌細胞に対するニンボリドの効果。細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで２４時間処理した後、増殖を評価した。ｓｉ対照またはｓｉＲＮＦ１１４群のデータは、各群のそれぞれのＤＭＳＯビヒクル対照に対して正規化した。個々の生物学的に独立したサンプルデータが示され、線は平均値を示す。図１９Ｃに示されるデータは、平均±ｓｅｍである。図１９Ａ～１９Ｂに示されるデータは、ｎ＝３からのものであり、図１８Ｄ～１８Ｅでは、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群からのものである。図１８Ｄ～１８Ｅの統計的有意性は、不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。図１８Ｄの有意性は、ｓｉ対照細胞と比較して＊Ｐ＝４．５２ｘ１０^－５として表される。図１８Ｅにおける有意性は、ｓｉ対照群からの対応するニンボリド処理濃度と比較して、１０、６、および３μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝１．９０ｘ１０^－５、２．７２ｘ１０^－４および０．００１０１として表される。２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオーム中のニンボリドのｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析により、ＲＮＦ１１４が標的であることが明らかになった。（図１９Ａ）図１９Ａに記載されているようにインサイチュ分析された２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるニンボリド（１０μＭ）のｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析。軽い同位体プローブ修飾ペプチド対重い同位体プローブ修飾ペプチド比が左側のプロットに示されており、比が最も高い主要な標的はＲＮＦ１１４のＣ８であった。右側に示されているのは、ＲＮＦ１１４のＣ８を持つプローブ修飾ペプチドの代表的なＭＳ１の軽いピーク対重いピークである。（図１９Ｂ）ｓｉ対照２３１ＭＦＰ細胞と比較したＲＮＦ１１４のウエスタンブロッティングによって検証したＲＮＦ１１４を標的とする低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）によるＲＮＦ１１４ノックダウン。ＧＡＰＤＨ発現はローディング対照として示されている。示されているゲルは、ｎ＝３の生物学的複製／群からの代表的なゲルである。（図１９Ｃ）ｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４細胞における２４時間後の２３１ＭＦＰ細胞の増殖。（図１９Ｄ）２３１ＭＦＰｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４２３１ＭＦＰ乳癌細胞に対するニンボリドの効果。２３１ＭＦＰｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４２３１ＭＦＰ乳癌細胞に対するニンボリドの効果。細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで２４時間処理した後、増殖を評価した。ｓｉ対照またはｓｉＲＮＦ１１４群のデータは、各群のそれぞれのＤＭＳＯビヒクル対照に対して正規化した。個々の生物学的に独立したサンプルデータが示され、線は平均値を示す。図１９Ｃに示されるデータは、平均±ｓｅｍである。図１９Ａ～１９Ｂに示されるデータは、ｎ＝３からのものであり、図１８Ｄ～１８Ｅでは、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群からのものである。図１８Ｄ～１８Ｅの統計的有意性は、不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。図１８Ｄの有意性は、ｓｉ対照細胞と比較して＊Ｐ＝４．５２ｘ１０^－５として表される。図１８Ｅにおける有意性は、ｓｉ対照群からの対応するニンボリド処理濃度と比較して、１０、６、および３μＭの場合、それぞれ＊ｐ＝１．９０ｘ１０^－５、２．７２ｘ１０^－４および０．００１０１として表される。ニンボリドを介した効果におけるＲＮＦ１１４の役割の解明。（図２０Ａ）ｓｉ対照２３１ＭＦＰ細胞と比較したＲＮＦ１１４のウエスタンブロッティングによって検証したＲＮＦ１１４を標的とする３つの独立したｓｉＲＮＡによるＲＮＦ１１４ノックダウン。ＧＡＰＤＨ発現はローディング対照として示されている。（図２０Ｂ）ヘキスト染色によって評価したｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４細胞における２４時間後の２３１ＭＦＰ細胞の増殖。（図２０Ｃ）２３１ＭＦＰｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４２３１ＭＦＰ乳癌細胞に対するニンボリドの効果。細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで２４時間処理した後、ヘキスト染色により増殖を評価した。各ｓｉ対照またはｓｉＲＮＦ１１４群のデータは、各群のそれぞれのＤＭＳＯビヒクル対照に対して正規化した。個々の生物学的に独立したサンプルデータが示され、線は平均値を示す。（図２０Ｄ）組換えヒトＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－ローダミン標識に対するニンボリド、ＪＮＳ２７およびヨードアセトアミド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＲＮＦ１１４タンパク質を、ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド、ＪＮＳ２７またはヨードアセトアミドで３０分間前処理した後、ＲＮＦ１１４をＩＡ－ローダミン（１００ｎＭ）で３０分間標識した。ＲＮＦ１１４のＩＡ－ローダミン標識は、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光によって評価した。示されているデータは、ｎ＝１の生物学的複製からのものである。示されているデータは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からのものである。図２０Ａおよび図２０Ｄに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的なゲルである。図２０Ｂに示されるデータは、平均±ｓｅｍであり、図２０Ｂの場合、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、図２０Ｂ、図２０Ｃの不対両側スチューデントｔ検定を用いて計算した。図２０Ｂの有意性は、ｓｉ対照細胞と比較して、ｓｉＲＮＦ１１４－１、ｓｉＲＮＦ１１４－２およびｓｉＲＮＦ１１４－３の場合、それぞれ＊ｐ＝４．５２ｘ１０^－５、０．０４２９および０．００２３０として表される。図２０Ｃの有意性は、ｓｉ対照細胞での対応するニンボリド処理濃度と比較して、ｓｉＲＮＦ１１４－１の場合、１０、６および３μＭで、それぞれ＊ｐ＝１．９０ｘ１０^－５、０．０００２７２、０．００１０１として表され、ｓｉＲＮＦ１１４－２の場合、１０、６および３μＭで、それぞれ＊ｐ＝０．０００６２６、０．００１３９、３．６６ｘ１０^－５として表され、ｓｉＲＮＦ１１４－３の場合、１０、６および３μＭで、それぞれ＊ｐ＝０．００１３４、９．１５ｘ１０^－５、０．００７６９として表される。図２０Ｆの有意性は、ビヒクル処理対照と比較して、＊ｐ＝０．０１８８として表される。ニンボリドを介した効果におけるＲＮＦ１１４の役割の解明。（図２０Ａ）ｓｉ対照２３１ＭＦＰ細胞と比較したＲＮＦ１１４のウエスタンブロッティングによって検証したＲＮＦ１１４を標的とする３つの独立したｓｉＲＮＡによるＲＮＦ１１４ノックダウン。ＧＡＰＤＨ発現はローディング対照として示されている。（図２０Ｂ）ヘキスト染色によって評価したｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４細胞における２４時間後の２３１ＭＦＰ細胞の増殖。（図２０Ｃ）２３１ＭＦＰｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４２３１ＭＦＰ乳癌細胞に対するニンボリドの効果。細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで２４時間処理した後、ヘキスト染色により増殖を評価した。各ｓｉ対照またはｓｉＲＮＦ１１４群のデータは、各群のそれぞれのＤＭＳＯビヒクル対照に対して正規化した。個々の生物学的に独立したサンプルデータが示され、線は平均値を示す。（図２０Ｄ）組換えヒトＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－ローダミン標識に対するニンボリド、ＪＮＳ２７およびヨードアセトアミド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＲＮＦ１１４タンパク質を、ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド、ＪＮＳ２７またはヨードアセトアミドで３０分間前処理した後、ＲＮＦ１１４をＩＡ－ローダミン（１００ｎＭ）で３０分間標識した。ＲＮＦ１１４のＩＡ－ローダミン標識は、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光によって評価した。示されているデータは、ｎ＝１の生物学的複製からのものである。示されているデータは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からのものである。図２０Ａおよび図２０Ｄに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的なゲルである。図２０Ｂに示されるデータは、平均±ｓｅｍであり、図２０Ｂの場合、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、図２０Ｂ、図２０Ｃの不対両側スチューデントｔ検定を用いて計算した。図２０Ｂの有意性は、ｓｉ対照細胞と比較して、ｓｉＲＮＦ１１４－１、ｓｉＲＮＦ１１４－２およびｓｉＲＮＦ１１４－３の場合、それぞれ＊ｐ＝４．５２ｘ１０^－５、０．０４２９および０．００２３０として表される。図２０Ｃの有意性は、ｓｉ対照細胞での対応するニンボリド処理濃度と比較して、ｓｉＲＮＦ１１４－１の場合、１０、６および３μＭで、それぞれ＊ｐ＝１．９０ｘ１０^－５、０．０００２７２、０．００１０１として表され、ｓｉＲＮＦ１１４－２の場合、１０、６および３μＭで、それぞれ＊ｐ＝０．０００６２６、０．００１３９、３．６６ｘ１０^－５として表され、ｓｉＲＮＦ１１４－３の場合、１０、６および３μＭで、それぞれ＊ｐ＝０．００１３４、９．１５ｘ１０^－５、０．００７６９として表される。図２０Ｆの有意性は、ビヒクル処理対照と比較して、＊ｐ＝０．０１８８として表される。ニンボリドを介した効果におけるＲＮＦ１１４の役割の解明。（図２０Ａ）ｓｉ対照２３１ＭＦＰ細胞と比較したＲＮＦ１１４のウエスタンブロッティングによって検証したＲＮＦ１１４を標的とする３つの独立したｓｉＲＮＡによるＲＮＦ１１４ノックダウン。ＧＡＰＤＨ発現はローディング対照として示されている。（図２０Ｂ）ヘキスト染色によって評価したｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４細胞における２４時間後の２３１ＭＦＰ細胞の増殖。（図２０Ｃ）２３１ＭＦＰｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４２３１ＭＦＰ乳癌細胞に対するニンボリドの効果。細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで２４時間処理した後、ヘキスト染色により増殖を評価した。各ｓｉ対照またはｓｉＲＮＦ１１４群のデータは、各群のそれぞれのＤＭＳＯビヒクル対照に対して正規化した。個々の生物学的に独立したサンプルデータが示され、線は平均値を示す。（図２０Ｄ）組換えヒトＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－ローダミン標識に対するニンボリド、ＪＮＳ２７およびヨードアセトアミド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＲＮＦ１１４タンパク質を、ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド、ＪＮＳ２７またはヨードアセトアミドで３０分間前処理した後、ＲＮＦ１１４をＩＡ－ローダミン（１００ｎＭ）で３０分間標識した。ＲＮＦ１１４のＩＡ－ローダミン標識は、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光によって評価した。示されているデータは、ｎ＝１の生物学的複製からのものである。示されているデータは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からのものである。図２０Ａおよび図２０Ｄに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的なゲルである。図２０Ｂに示されるデータは、平均±ｓｅｍであり、図２０Ｂの場合、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、図２０Ｂ、図２０Ｃの不対両側スチューデントｔ検定を用いて計算した。図２０Ｂの有意性は、ｓｉ対照細胞と比較して、ｓｉＲＮＦ１１４－１、ｓｉＲＮＦ１１４－２およびｓｉＲＮＦ１１４－３の場合、それぞれ＊ｐ＝４．５２ｘ１０^－５、０．０４２９および０．００２３０として表される。図２０Ｃの有意性は、ｓｉ対照細胞での対応するニンボリド処理濃度と比較して、ｓｉＲＮＦ１１４－１の場合、１０、６および３μＭで、それぞれ＊ｐ＝１．９０ｘ１０^－５、０．０００２７２、０．００１０１として表され、ｓｉＲＮＦ１１４－２の場合、１０、６および３μＭで、それぞれ＊ｐ＝０．０００６２６、０．００１３９、３．６６ｘ１０^－５として表され、ｓｉＲＮＦ１１４－３の場合、１０、６および３μＭで、それぞれ＊ｐ＝０．００１３４、９．１５ｘ１０^－５、０．００７６９として表される。図２０Ｆの有意性は、ビヒクル処理対照と比較して、＊ｐ＝０．０１８８として表される。ニンボリドを介した効果におけるＲＮＦ１１４の役割の解明。（図２０Ａ）ｓｉ対照２３１ＭＦＰ細胞と比較したＲＮＦ１１４のウエスタンブロッティングによって検証したＲＮＦ１１４を標的とする３つの独立したｓｉＲＮＡによるＲＮＦ１１４ノックダウン。ＧＡＰＤＨ発現はローディング対照として示されている。（図２０Ｂ）ヘキスト染色によって評価したｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４細胞における２４時間後の２３１ＭＦＰ細胞の増殖。（図２０Ｃ）２３１ＭＦＰｓｉ対照およびｓｉＲＮＦ１１４２３１ＭＦＰ乳癌細胞に対するニンボリドの効果。細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリドで２４時間処理した後、ヘキスト染色により増殖を評価した。各ｓｉ対照またはｓｉＲＮＦ１１４群のデータは、各群のそれぞれのＤＭＳＯビヒクル対照に対して正規化した。個々の生物学的に独立したサンプルデータが示され、線は平均値を示す。（図２０Ｄ）組換えヒトＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－ローダミン標識に対するニンボリド、ＪＮＳ２７およびヨードアセトアミド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＲＮＦ１１４タンパク質を、ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド、ＪＮＳ２７またはヨードアセトアミドで３０分間前処理した後、ＲＮＦ１１４をＩＡ－ローダミン（１００ｎＭ）で３０分間標識した。ＲＮＦ１１４のＩＡ－ローダミン標識は、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光によって評価した。示されているデータは、ｎ＝１の生物学的複製からのものである。示されているデータは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からのものである。図２０Ａおよび図２０Ｄに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的なゲルである。図２０Ｂに示されるデータは、平均±ｓｅｍであり、図２０Ｂの場合、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、図２０Ｂ、図２０Ｃの不対両側スチューデントｔ検定を用いて計算した。図２０Ｂの有意性は、ｓｉ対照細胞と比較して、ｓｉＲＮＦ１１４－１、ｓｉＲＮＦ１１４－２およびｓｉＲＮＦ１１４－３の場合、それぞれ＊ｐ＝４．５２ｘ１０^－５、０．０４２９および０．００２３０として表される。図２０Ｃの有意性は、ｓｉ対照細胞での対応するニンボリド処理濃度と比較して、ｓｉＲＮＦ１１４－１の場合、１０、６および３μＭで、それぞれ＊ｐ＝１．９０ｘ１０^－５、０．０００２７２、０．００１０１として表され、ｓｉＲＮＦ１１４－２の場合、１０、６および３μＭで、それぞれ＊ｐ＝０．０００６２６、０．００１３９、３．６６ｘ１０^－５として表され、ｓｉＲＮＦ１１４－３の場合、１０、６および３μＭで、それぞれ＊ｐ＝０．００１３４、９．１５ｘ１０^－５、０．００７６９として表される。図２０Ｆの有意性は、ビヒクル処理対照と比較して、＊ｐ＝０．０１８８として表される。ニンボリドはＲＮＦ１１４のＣ８と共有結合的に反応する。（図２１Ａ）ニンボリドは、ＰＯＮＤＲによって評価されるように、ＲＮＦ１１４内の天然変性領域を標的とする。（図２１Ｂ）アルキン官能化ニンボリドプローブの合成経路。（図２１Ｃ）ニンボリドプローブで標識された純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のゲルベースＡＢＰＰ分析。上の２つのパネルでは、純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。下の２つのパネルでは、純粋な野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質を、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。（図２１Ｄ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－アルキン（１０μＭ）またはＪＮＳ２７（５０μＭ）標識に対するニンボリド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＩＡ－アルキンおよびＪＮＳ２７プローブの構造（反応性部分が赤で強調表示されている）が示されている。野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対するニンボリド（５０μＭ）競合のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。これらの実験では、ＤＭＳＯまたはニンボリドを３０分間プレインキュベートした後、プローブを１時間標識した。（図２１Ｅ）２３１ＭＦＰ細胞におけるＦｌａｇ－ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識。Ｆｌａｇタグ付きＲＮＦ１１４を安定して発現する２３１ＭＦＰ細胞を、ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド－アルキンで２時間処理した。続いて、回収した細胞溶解物からＲＮＦ１１４を濃縮し、次にローダミン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加し、その後、ニンボリド－アルキン標識をＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光によって可視化した。（図２１Ｆ）２３１ＭＦＰ細胞における内因性ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識。２３１ＭＦＰ細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド－アルキン（５０μＭ）で１．５時間処理した。ビオチン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加し、その後、これらのタンパク質をアビジン濃縮した。得られたプルダウンタンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびＲＮＦ１１４のウエスタンブロッティングで分析した。図２１Ｃ～２１Ｆに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的なゲルである。ニンボリドはＲＮＦ１１４のＣ８と共有結合的に反応する。（図２１Ａ）ニンボリドは、ＰＯＮＤＲによって評価されるように、ＲＮＦ１１４内の天然変性領域を標的とする。（図２１Ｂ）アルキン官能化ニンボリドプローブの合成経路。（図２１Ｃ）ニンボリドプローブで標識された純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のゲルベースＡＢＰＰ分析。上の２つのパネルでは、純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。下の２つのパネルでは、純粋な野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質を、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。（図２１Ｄ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－アルキン（１０μＭ）またはＪＮＳ２７（５０μＭ）標識に対するニンボリド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＩＡ－アルキンおよびＪＮＳ２７プローブの構造（反応性部分が赤で強調表示されている）が示されている。野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対するニンボリド（５０μＭ）競合のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。これらの実験では、ＤＭＳＯまたはニンボリドを３０分間プレインキュベートした後、プローブを１時間標識した。（図２１Ｅ）２３１ＭＦＰ細胞におけるＦｌａｇ－ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識。Ｆｌａｇタグ付きＲＮＦ１１４を安定して発現する２３１ＭＦＰ細胞を、ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド－アルキンで２時間処理した。続いて、回収した細胞溶解物からＲＮＦ１１４を濃縮し、次にローダミン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加し、その後、ニンボリド－アルキン標識をＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光によって可視化した。（図２１Ｆ）２３１ＭＦＰ細胞における内因性ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識。２３１ＭＦＰ細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド－アルキン（５０μＭ）で１．５時間処理した。ビオチン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加し、その後、これらのタンパク質をアビジン濃縮した。得られたプルダウンタンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびＲＮＦ１１４のウエスタンブロッティングで分析した。図２１Ｃ～２１Ｆに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的なゲルである。ニンボリドはＲＮＦ１１４のＣ８と共有結合的に反応する。（図２１Ａ）ニンボリドは、ＰＯＮＤＲによって評価されるように、ＲＮＦ１１４内の天然変性領域を標的とする。（図２１Ｂ）アルキン官能化ニンボリドプローブの合成経路。（図２１Ｃ）ニンボリドプローブで標識された純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のゲルベースＡＢＰＰ分析。上の２つのパネルでは、純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。下の２つのパネルでは、純粋な野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質を、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。（図２１Ｄ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－アルキン（１０μＭ）またはＪＮＳ２７（５０μＭ）標識に対するニンボリド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＩＡ－アルキンおよびＪＮＳ２７プローブの構造（反応性部分が赤で強調表示されている）が示されている。野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対するニンボリド（５０μＭ）競合のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。これらの実験では、ＤＭＳＯまたはニンボリドを３０分間プレインキュベートした後、プローブを１時間標識した。（図２１Ｅ）２３１ＭＦＰ細胞におけるＦｌａｇ－ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識。Ｆｌａｇタグ付きＲＮＦ１１４を安定して発現する２３１ＭＦＰ細胞を、ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド－アルキンで２時間処理した。続いて、回収した細胞溶解物からＲＮＦ１１４を濃縮し、次にローダミン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加し、その後、ニンボリド－アルキン標識をＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光によって可視化した。（図２１Ｆ）２３１ＭＦＰ細胞における内因性ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識。２３１ＭＦＰ細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド－アルキン（５０μＭ）で１．５時間処理した。ビオチン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加し、その後、これらのタンパク質をアビジン濃縮した。得られたプルダウンタンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびＲＮＦ１１４のウエスタンブロッティングで分析した。図２１Ｃ～２１Ｆに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的なゲルである。ニンボリドはＲＮＦ１１４のＣ８と共有結合的に反応する。（図２１Ａ）ニンボリドは、ＰＯＮＤＲによって評価されるように、ＲＮＦ１１４内の天然変性領域を標的とする。（図２１Ｂ）アルキン官能化ニンボリドプローブの合成経路。（図２１Ｃ）ニンボリドプローブで標識された純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のゲルベースＡＢＰＰ分析。上の２つのパネルでは、純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。下の２つのパネルでは、純粋な野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質を、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。（図２１Ｄ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－アルキン（１０μＭ）またはＪＮＳ２７（５０μＭ）標識に対するニンボリド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＩＡ－アルキンおよびＪＮＳ２７プローブの構造（反応性部分が赤で強調表示されている）が示されている。野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対するニンボリド（５０μＭ）競合のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。これらの実験では、ＤＭＳＯまたはニンボリドを３０分間プレインキュベートした後、プローブを１時間標識した。（図２１Ｅ）２３１ＭＦＰ細胞におけるＦｌａｇ－ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識。Ｆｌａｇタグ付きＲＮＦ１１４を安定して発現する２３１ＭＦＰ細胞を、ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド－アルキンで２時間処理した。続いて、回収した細胞溶解物からＲＮＦ１１４を濃縮し、次にローダミン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加し、その後、ニンボリド－アルキン標識をＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光によって可視化した。（図２１Ｆ）２３１ＭＦＰ細胞における内因性ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識。２３１ＭＦＰ細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド－アルキン（５０μＭ）で１．５時間処理した。ビオチン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加し、その後、これらのタンパク質をアビジン濃縮した。得られたプルダウンタンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびＲＮＦ１１４のウエスタンブロッティングで分析した。図２１Ｃ～２１Ｆに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的なゲルである。ニンボリドはＲＮＦ１１４のＣ８と共有結合的に反応する。（図２１Ａ）ニンボリドは、ＰＯＮＤＲによって評価されるように、ＲＮＦ１１４内の天然変性領域を標的とする。（図２１Ｂ）アルキン官能化ニンボリドプローブの合成経路。（図２１Ｃ）ニンボリドプローブで標識された純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のゲルベースＡＢＰＰ分析。上の２つのパネルでは、純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。下の２つのパネルでは、純粋な野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質を、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。（図２１Ｄ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－アルキン（１０μＭ）またはＪＮＳ２７（５０μＭ）標識に対するニンボリド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＩＡ－アルキンおよびＪＮＳ２７プローブの構造（反応性部分が赤で強調表示されている）が示されている。野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対するニンボリド（５０μＭ）競合のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。これらの実験では、ＤＭＳＯまたはニンボリドを３０分間プレインキュベートした後、プローブを１時間標識した。（図２１Ｅ）２３１ＭＦＰ細胞におけるＦｌａｇ－ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識。Ｆｌａｇタグ付きＲＮＦ１１４を安定して発現する２３１ＭＦＰ細胞を、ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド－アルキンで２時間処理した。続いて、回収した細胞溶解物からＲＮＦ１１４を濃縮し、次にローダミン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加し、その後、ニンボリド－アルキン標識をＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光によって可視化した。（図２１Ｆ）２３１ＭＦＰ細胞における内因性ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識。２３１ＭＦＰ細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド－アルキン（５０μＭ）で１．５時間処理した。ビオチン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加し、その後、これらのタンパク質をアビジン濃縮した。得られたプルダウンタンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびＲＮＦ１１４のウエスタンブロッティングで分析した。図２１Ｃ～２１Ｆに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的なゲルである。ニンボリドはＲＮＦ１１４のＣ８と共有結合的に反応する。（図２１Ａ）ニンボリドは、ＰＯＮＤＲによって評価されるように、ＲＮＦ１１４内の天然変性領域を標的とする。（図２１Ｂ）アルキン官能化ニンボリドプローブの合成経路。（図２１Ｃ）ニンボリドプローブで標識された純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のゲルベースＡＢＰＰ分析。上の２つのパネルでは、純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。下の２つのパネルでは、純粋な野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質を、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。（図２１Ｄ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－アルキン（１０μＭ）またはＪＮＳ２７（５０μＭ）標識に対するニンボリド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＩＡ－アルキンおよびＪＮＳ２７プローブの構造（反応性部分が赤で強調表示されている）が示されている。野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対するニンボリド（５０μＭ）競合のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。これらの実験では、ＤＭＳＯまたはニンボリドを３０分間プレインキュベートした後、プローブを１時間標識した。（図２１Ｅ）２３１ＭＦＰ細胞におけるＦｌａｇ－ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識。Ｆｌａｇタグ付きＲＮＦ１１４を安定して発現する２３１ＭＦＰ細胞を、ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド－アルキンで２時間処理した。続いて、回収した細胞溶解物からＲＮＦ１１４を濃縮し、次にローダミン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加し、その後、ニンボリド－アルキン標識をＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光によって可視化した。（図２１Ｆ）２３１ＭＦＰ細胞における内因性ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識。２３１ＭＦＰ細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド－アルキン（５０μＭ）で１．５時間処理した。ビオチン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加し、その後、これらのタンパク質をアビジン濃縮した。得られたプルダウンタンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびＲＮＦ１１４のウエスタンブロッティングで分析した。図２１Ｃ～２１Ｆに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的なゲルである。ニンボリドはＲＮＦ１１４のＣ８と共有結合的に反応する。（図２１Ａ）ニンボリドは、ＰＯＮＤＲによって評価されるように、ＲＮＦ１１４内の天然変性領域を標的とする。（図２１Ｂ）アルキン官能化ニンボリドプローブの合成経路。（図２１Ｃ）ニンボリドプローブで標識された純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質のゲルベースＡＢＰＰ分析。上の２つのパネルでは、純粋なＲＮＦ１１４タンパク質をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００μＭ、３０分）とプレインキュベートした後、ＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。下の２つのパネルでは、純粋な野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質を、１ｍｇ／ｍｌのＢＳＡを含むＰＢＳ中のニンボリドプローブ（１０μＭ、１時間）で標識した。（図２１Ｄ）純粋なＲＮＦ１１４タンパク質のＩＡ－アルキン（１０μＭ）またはＪＮＳ２７（５０μＭ）標識に対するニンボリド競合のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＩＡ－アルキンおよびＪＮＳ２７プローブの構造（反応性部分が赤で強調表示されている）が示されている。野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質のＪＮＳ２７標識に対するニンボリド（５０μＭ）競合のゲルベースＡＢＰＰ分析も示されている。これらの実験では、ＤＭＳＯまたはニンボリドを３０分間プレインキュベートした後、プローブを１時間標識した。（図２１Ｅ）２３１ＭＦＰ細胞におけるＦｌａｇ－ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識。Ｆｌａｇタグ付きＲＮＦ１１４を安定して発現する２３１ＭＦＰ細胞を、ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド－アルキンで２時間処理した。続いて、回収した細胞溶解物からＲＮＦ１１４を濃縮し、次にローダミン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加し、その後、ニンボリド－アルキン標識をＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光によって可視化した。（図２１Ｆ）２３１ＭＦＰ細胞における内因性ＲＮＦ１１４のニンボリド－アルキン標識。２３１ＭＦＰ細胞をＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド－アルキン（５０μＭ）で１．５時間処理した。ビオチン－アジドをＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質に付加し、その後、これらのタンパク質をアビジン濃縮した。得られたプルダウンタンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびＲＮＦ１１４のウエスタンブロッティングで分析した。図２１Ｃ～２１Ｆに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的なゲルである。ニンボリドは基質認識を妨害することにより、ＲＮＦ１１４活性を阻害する。（図２２Ａ～２２Ｂ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１を加えた場合、または加えていない場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチン（図２２Ａ）またはｐ２１（図２２Ｂ）に対するブロッティング。（図２２Ｃ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図２２Ｄ）純粋なＲＮＦ１１４およびｐ２１タンパク質のインビトロインキュベーションにおいて、Ｆｌａｇ－ＲＮＦ１１４プルダウンおよびｐ２１濃縮が、ニンボリド（１００μＭ）によって阻害された。（図２２Ｅ）２３１ＭＦＰ細胞をニンボリド（１００μＭ）で処理した。示されているのは、ＤＭＳＯ対照またはニンボリド処理細胞におけるｐ２１レベルである。（図２２Ｆ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。赤で示されているのは、２倍を超えるレベルで大幅に上昇しているタンパク質である。（図２２Ｆ）に示されるデータは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群において２つ以上の固有のペプチドで定量化した６３９７個のタンパク質に関するものである。（図２２Ｇ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）、ＰＥＧ１０もしくはＣＴＧＦを加えた場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチンに対するブロッティング。ＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）をＲＮＦ１１４とプレインキュベートした後、Ｅ１およびＥ２酵素、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰを加えて反応を開始した。（図２２Ｈ）ローディング対照としてのアクチンとともに、ウエスタンブロッティングによって評価した、ｓｉ対照およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ２３１ＭＦＰ細胞におけるｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）およびｐ５７（ＣＤＫＮ１Ｃ）の発現。（図２２Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（６μＭ）で２４時間処理したｓｉ対照またはｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ細胞における２３１ＭＦＰ細胞の増殖。図２２Ａ～２２Ｅおよび図２２Ｇに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像である。図２２Ａ～２２Ｄに示されるブロットの定量化は、図２３Ａ～２３Ｄにある。生物学的に独立した３つのサンプル／群全てが図２２Ｈに示されている。図２２Ｉに示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、図２２Ｅおよび図２２Ｉの不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、図２２Ｅの各時点のビヒクル処理対照群と比較して、１、２、４、および８時間でそれぞれ＊ｐ＝０００７９９、０．０２９５、０．００９６２および０．０１３５として表され、図２２Ｉのビヒクルで処理したｓｉ対照（ｓｉＣｏｎｔｒｏｌ）およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ群と比較して、それぞれ、ｐ＝５．６５ｘ１０^－８および０．０１７３として表される。図２２Ｉにおいて、ニンボリドで処理したｓｉ対照細胞と比較して、＃ｐ＝６．７０ｘ１０^－５として表される有意性。ニンボリドは基質認識を妨害することにより、ＲＮＦ１１４活性を阻害する。（図２２Ａ～２２Ｂ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１を加えた場合、または加えていない場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチン（図２２Ａ）またはｐ２１（図２２Ｂ）に対するブロッティング。（図２２Ｃ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図２２Ｄ）純粋なＲＮＦ１１４およびｐ２１タンパク質のインビトロインキュベーションにおいて、Ｆｌａｇ－ＲＮＦ１１４プルダウンおよびｐ２１濃縮が、ニンボリド（１００μＭ）によって阻害された。（図２２Ｅ）２３１ＭＦＰ細胞をニンボリド（１００μＭ）で処理した。示されているのは、ＤＭＳＯ対照またはニンボリド処理細胞におけるｐ２１レベルである。（図２２Ｆ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。赤で示されているのは、２倍を超えるレベルで大幅に上昇しているタンパク質である。（図２２Ｆ）に示されるデータは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群において２つ以上の固有のペプチドで定量化した６３９７個のタンパク質に関するものである。（図２２Ｇ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）、ＰＥＧ１０もしくはＣＴＧＦを加えた場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチンに対するブロッティング。ＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）をＲＮＦ１１４とプレインキュベートした後、Ｅ１およびＥ２酵素、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰを加えて反応を開始した。（図２２Ｈ）ローディング対照としてのアクチンとともに、ウエスタンブロッティングによって評価した、ｓｉ対照およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ２３１ＭＦＰ細胞におけるｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）およびｐ５７（ＣＤＫＮ１Ｃ）の発現。（図２２Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（６μＭ）で２４時間処理したｓｉ対照またはｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ細胞における２３１ＭＦＰ細胞の増殖。図２２Ａ～２２Ｅおよび図２２Ｇに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像である。図２２Ａ～２２Ｄに示されるブロットの定量化は、図２３Ａ～２３Ｄにある。生物学的に独立した３つのサンプル／群全てが図２２Ｈに示されている。図２２Ｉに示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、図２２Ｅおよび図２２Ｉの不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、図２２Ｅの各時点のビヒクル処理対照群と比較して、１、２、４、および８時間でそれぞれ＊ｐ＝０００７９９、０．０２９５、０．００９６２および０．０１３５として表され、図２２Ｉのビヒクルで処理したｓｉ対照（ｓｉＣｏｎｔｒｏｌ）およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ群と比較して、それぞれ、ｐ＝５．６５ｘ１０^－８および０．０１７３として表される。図２２Ｉにおいて、ニンボリドで処理したｓｉ対照細胞と比較して、＃ｐ＝６．７０ｘ１０^－５として表される有意性。ニンボリドは基質認識を妨害することにより、ＲＮＦ１１４活性を阻害する。（図２２Ａ～２２Ｂ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１を加えた場合、または加えていない場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチン（図２２Ａ）またはｐ２１（図２２Ｂ）に対するブロッティング。（図２２Ｃ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図２２Ｄ）純粋なＲＮＦ１１４およびｐ２１タンパク質のインビトロインキュベーションにおいて、Ｆｌａｇ－ＲＮＦ１１４プルダウンおよびｐ２１濃縮が、ニンボリド（１００μＭ）によって阻害された。（図２２Ｅ）２３１ＭＦＰ細胞をニンボリド（１００μＭ）で処理した。示されているのは、ＤＭＳＯ対照またはニンボリド処理細胞におけるｐ２１レベルである。（図２２Ｆ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。赤で示されているのは、２倍を超えるレベルで大幅に上昇しているタンパク質である。（図２２Ｆ）に示されるデータは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群において２つ以上の固有のペプチドで定量化した６３９７個のタンパク質に関するものである。（図２２Ｇ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）、ＰＥＧ１０もしくはＣＴＧＦを加えた場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチンに対するブロッティング。ＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）をＲＮＦ１１４とプレインキュベートした後、Ｅ１およびＥ２酵素、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰを加えて反応を開始した。（図２２Ｈ）ローディング対照としてのアクチンとともに、ウエスタンブロッティングによって評価した、ｓｉ対照およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ２３１ＭＦＰ細胞におけるｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）およびｐ５７（ＣＤＫＮ１Ｃ）の発現。（図２２Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（６μＭ）で２４時間処理したｓｉ対照またはｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ細胞における２３１ＭＦＰ細胞の増殖。図２２Ａ～２２Ｅおよび図２２Ｇに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像である。図２２Ａ～２２Ｄに示されるブロットの定量化は、図２３Ａ～２３Ｄにある。生物学的に独立した３つのサンプル／群全てが図２２Ｈに示されている。図２２Ｉに示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、図２２Ｅおよび図２２Ｉの不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、図２２Ｅの各時点のビヒクル処理対照群と比較して、１、２、４、および８時間でそれぞれ＊ｐ＝０００７９９、０．０２９５、０．００９６２および０．０１３５として表され、図２２Ｉのビヒクルで処理したｓｉ対照（ｓｉＣｏｎｔｒｏｌ）およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ群と比較して、それぞれ、ｐ＝５．６５ｘ１０^－８および０．０１７３として表される。図２２Ｉにおいて、ニンボリドで処理したｓｉ対照細胞と比較して、＃ｐ＝６．７０ｘ１０^－５として表される有意性。ニンボリドは基質認識を妨害することにより、ＲＮＦ１１４活性を阻害する。（図２２Ａ～２２Ｂ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１を加えた場合、または加えていない場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチン（図２２Ａ）またはｐ２１（図２２Ｂ）に対するブロッティング。（図２２Ｃ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図２２Ｄ）純粋なＲＮＦ１１４およびｐ２１タンパク質のインビトロインキュベーションにおいて、Ｆｌａｇ－ＲＮＦ１１４プルダウンおよびｐ２１濃縮が、ニンボリド（１００μＭ）によって阻害された。（図２２Ｅ）２３１ＭＦＰ細胞をニンボリド（１００μＭ）で処理した。示されているのは、ＤＭＳＯ対照またはニンボリド処理細胞におけるｐ２１レベルである。（図２２Ｆ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。赤で示されているのは、２倍を超えるレベルで大幅に上昇しているタンパク質である。（図２２Ｆ）に示されるデータは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群において２つ以上の固有のペプチドで定量化した６３９７個のタンパク質に関するものである。（図２２Ｇ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）、ＰＥＧ１０もしくはＣＴＧＦを加えた場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチンに対するブロッティング。ＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）をＲＮＦ１１４とプレインキュベートした後、Ｅ１およびＥ２酵素、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰを加えて反応を開始した。（図２２Ｈ）ローディング対照としてのアクチンとともに、ウエスタンブロッティングによって評価した、ｓｉ対照およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ２３１ＭＦＰ細胞におけるｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）およびｐ５７（ＣＤＫＮ１Ｃ）の発現。（図２２Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（６μＭ）で２４時間処理したｓｉ対照またはｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ細胞における２３１ＭＦＰ細胞の増殖。図２２Ａ～２２Ｅおよび図２２Ｇに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像である。図２２Ａ～２２Ｄに示されるブロットの定量化は、図２３Ａ～２３Ｄにある。生物学的に独立した３つのサンプル／群全てが図２２Ｈに示されている。図２２Ｉに示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、図２２Ｅおよび図２２Ｉの不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、図２２Ｅの各時点のビヒクル処理対照群と比較して、１、２、４、および８時間でそれぞれ＊ｐ＝０００７９９、０．０２９５、０．００９６２および０．０１３５として表され、図２２Ｉのビヒクルで処理したｓｉ対照（ｓｉＣｏｎｔｒｏｌ）およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ群と比較して、それぞれ、ｐ＝５．６５ｘ１０^－８および０．０１７３として表される。図２２Ｉにおいて、ニンボリドで処理したｓｉ対照細胞と比較して、＃ｐ＝６．７０ｘ１０^－５として表される有意性。ニンボリドは基質認識を妨害することにより、ＲＮＦ１１４活性を阻害する。（図２２Ａ～２２Ｂ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１を加えた場合、または加えていない場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチン（図２２Ａ）またはｐ２１（図２２Ｂ）に対するブロッティング。（図２２Ｃ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図２２Ｄ）純粋なＲＮＦ１１４およびｐ２１タンパク質のインビトロインキュベーションにおいて、Ｆｌａｇ－ＲＮＦ１１４プルダウンおよびｐ２１濃縮が、ニンボリド（１００μＭ）によって阻害された。（図２２Ｅ）２３１ＭＦＰ細胞をニンボリド（１００μＭ）で処理した。示されているのは、ＤＭＳＯ対照またはニンボリド処理細胞におけるｐ２１レベルである。（図２２Ｆ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。赤で示されているのは、２倍を超えるレベルで大幅に上昇しているタンパク質である。（図２２Ｆ）に示されるデータは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群において２つ以上の固有のペプチドで定量化した６３９７個のタンパク質に関するものである。（図２２Ｇ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）、ＰＥＧ１０もしくはＣＴＧＦを加えた場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチンに対するブロッティング。ＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）をＲＮＦ１１４とプレインキュベートした後、Ｅ１およびＥ２酵素、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰを加えて反応を開始した。（図２２Ｈ）ローディング対照としてのアクチンとともに、ウエスタンブロッティングによって評価した、ｓｉ対照およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ２３１ＭＦＰ細胞におけるｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）およびｐ５７（ＣＤＫＮ１Ｃ）の発現。（図２２Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（６μＭ）で２４時間処理したｓｉ対照またはｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ細胞における２３１ＭＦＰ細胞の増殖。図２２Ａ～２２Ｅおよび図２２Ｇに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像である。図２２Ａ～２２Ｄに示されるブロットの定量化は、図２３Ａ～２３Ｄにある。生物学的に独立した３つのサンプル／群全てが図２２Ｈに示されている。図２２Ｉに示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、図２２Ｅおよび図２２Ｉの不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、図２２Ｅの各時点のビヒクル処理対照群と比較して、１、２、４、および８時間でそれぞれ＊ｐ＝０００７９９、０．０２９５、０．００９６２および０．０１３５として表され、図２２Ｉのビヒクルで処理したｓｉ対照（ｓｉＣｏｎｔｒｏｌ）およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ群と比較して、それぞれ、ｐ＝５．６５ｘ１０^－８および０．０１７３として表される。図２２Ｉにおいて、ニンボリドで処理したｓｉ対照細胞と比較して、＃ｐ＝６．７０ｘ１０^－５として表される有意性。ニンボリドは基質認識を妨害することにより、ＲＮＦ１１４活性を阻害する。（図２２Ａ～２２Ｂ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１を加えた場合、または加えていない場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチン（図２２Ａ）またはｐ２１（図２２Ｂ）に対するブロッティング。（図２２Ｃ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図２２Ｄ）純粋なＲＮＦ１１４およびｐ２１タンパク質のインビトロインキュベーションにおいて、Ｆｌａｇ－ＲＮＦ１１４プルダウンおよびｐ２１濃縮が、ニンボリド（１００μＭ）によって阻害された。（図２２Ｅ）２３１ＭＦＰ細胞をニンボリド（１００μＭ）で処理した。示されているのは、ＤＭＳＯ対照またはニンボリド処理細胞におけるｐ２１レベルである。（図２２Ｆ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。赤で示されているのは、２倍を超えるレベルで大幅に上昇しているタンパク質である。（図２２Ｆ）に示されるデータは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群において２つ以上の固有のペプチドで定量化した６３９７個のタンパク質に関するものである。（図２２Ｇ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）、ＰＥＧ１０もしくはＣＴＧＦを加えた場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチンに対するブロッティング。ＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）をＲＮＦ１１４とプレインキュベートした後、Ｅ１およびＥ２酵素、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰを加えて反応を開始した。（図２２Ｈ）ローディング対照としてのアクチンとともに、ウエスタンブロッティングによって評価した、ｓｉ対照およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ２３１ＭＦＰ細胞におけるｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）およびｐ５７（ＣＤＫＮ１Ｃ）の発現。（図２２Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（６μＭ）で２４時間処理したｓｉ対照またはｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ細胞における２３１ＭＦＰ細胞の増殖。図２２Ａ～２２Ｅおよび図２２Ｇに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像である。図２２Ａ～２２Ｄに示されるブロットの定量化は、図２３Ａ～２３Ｄにある。生物学的に独立した３つのサンプル／群全てが図２２Ｈに示されている。図２２Ｉに示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、図２２Ｅおよび図２２Ｉの不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、図２２Ｅの各時点のビヒクル処理対照群と比較して、１、２、４、および８時間でそれぞれ＊ｐ＝０００７９９、０．０２９５、０．００９６２および０．０１３５として表され、図２２Ｉのビヒクルで処理したｓｉ対照（ｓｉＣｏｎｔｒｏｌ）およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ群と比較して、それぞれ、ｐ＝５．６５ｘ１０^－８および０．０１７３として表される。図２２Ｉにおいて、ニンボリドで処理したｓｉ対照細胞と比較して、＃ｐ＝６．７０ｘ１０^－５として表される有意性。ニンボリドは基質認識を妨害することにより、ＲＮＦ１１４活性を阻害する。（図２２Ａ～２２Ｂ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１を加えた場合、または加えていない場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチン（図２２Ａ）またはｐ２１（図２２Ｂ）に対するブロッティング。（図２２Ｃ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図２２Ｄ）純粋なＲＮＦ１１４およびｐ２１タンパク質のインビトロインキュベーションにおいて、Ｆｌａｇ－ＲＮＦ１１４プルダウンおよびｐ２１濃縮が、ニンボリド（１００μＭ）によって阻害された。（図２２Ｅ）２３１ＭＦＰ細胞をニンボリド（１００μＭ）で処理した。示されているのは、ＤＭＳＯ対照またはニンボリド処理細胞におけるｐ２１レベルである。（図２２Ｆ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。赤で示されているのは、２倍を超えるレベルで大幅に上昇しているタンパク質である。（図２２Ｆ）に示されるデータは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群において２つ以上の固有のペプチドで定量化した６３９７個のタンパク質に関するものである。（図２２Ｇ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）、ＰＥＧ１０もしくはＣＴＧＦを加えた場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチンに対するブロッティング。ＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）をＲＮＦ１１４とプレインキュベートした後、Ｅ１およびＥ２酵素、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰを加えて反応を開始した。（図２２Ｈ）ローディング対照としてのアクチンとともに、ウエスタンブロッティングによって評価した、ｓｉ対照およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ２３１ＭＦＰ細胞におけるｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）およびｐ５７（ＣＤＫＮ１Ｃ）の発現。（図２２Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（６μＭ）で２４時間処理したｓｉ対照またはｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ細胞における２３１ＭＦＰ細胞の増殖。図２２Ａ～２２Ｅおよび図２２Ｇに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像である。図２２Ａ～２２Ｄに示されるブロットの定量化は、図２３Ａ～２３Ｄにある。生物学的に独立した３つのサンプル／群全てが図２２Ｈに示されている。図２２Ｉに示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、図２２Ｅおよび図２２Ｉの不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、図２２Ｅの各時点のビヒクル処理対照群と比較して、１、２、４、および８時間でそれぞれ＊ｐ＝０００７９９、０．０２９５、０．００９６２および０．０１３５として表され、図２２Ｉのビヒクルで処理したｓｉ対照（ｓｉＣｏｎｔｒｏｌ）およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ群と比較して、それぞれ、ｐ＝５．６５ｘ１０^－８および０．０１７３として表される。図２２Ｉにおいて、ニンボリドで処理したｓｉ対照細胞と比較して、＃ｐ＝６．７０ｘ１０^－５として表される有意性。ニンボリドは基質認識を妨害することにより、ＲＮＦ１１４活性を阻害する。（図２２Ａ～２２Ｂ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１を加えた場合、または加えていない場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチン（図２２Ａ）またはｐ２１（図２２Ｂ）に対するブロッティング。（図２２Ｃ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図２２Ｄ）純粋なＲＮＦ１１４およびｐ２１タンパク質のインビトロインキュベーションにおいて、Ｆｌａｇ－ＲＮＦ１１４プルダウンおよびｐ２１濃縮が、ニンボリド（１００μＭ）によって阻害された。（図２２Ｅ）２３１ＭＦＰ細胞をニンボリド（１００μＭ）で処理した。示されているのは、ＤＭＳＯ対照またはニンボリド処理細胞におけるｐ２１レベルである。（図２２Ｆ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。赤で示されているのは、２倍を超えるレベルで大幅に上昇しているタンパク質である。（図２２Ｆ）に示されるデータは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群において２つ以上の固有のペプチドで定量化した６３９７個のタンパク質に関するものである。（図２２Ｇ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）、ＰＥＧ１０もしくはＣＴＧＦを加えた場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチンに対するブロッティング。ＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）をＲＮＦ１１４とプレインキュベートした後、Ｅ１およびＥ２酵素、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰを加えて反応を開始した。（図２２Ｈ）ローディング対照としてのアクチンとともに、ウエスタンブロッティングによって評価した、ｓｉ対照およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ２３１ＭＦＰ細胞におけるｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）およびｐ５７（ＣＤＫＮ１Ｃ）の発現。（図２２Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（６μＭ）で２４時間処理したｓｉ対照またはｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ細胞における２３１ＭＦＰ細胞の増殖。図２２Ａ～２２Ｅおよび図２２Ｇに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像である。図２２Ａ～２２Ｄに示されるブロットの定量化は、図２３Ａ～２３Ｄにある。生物学的に独立した３つのサンプル／群全てが図２２Ｈに示されている。図２２Ｉに示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、図２２Ｅおよび図２２Ｉの不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、図２２Ｅの各時点のビヒクル処理対照群と比較して、１、２、４、および８時間でそれぞれ＊ｐ＝０００７９９、０．０２９５、０．００９６２および０．０１３５として表され、図２２Ｉのビヒクルで処理したｓｉ対照（ｓｉＣｏｎｔｒｏｌ）およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ群と比較して、それぞれ、ｐ＝５．６５ｘ１０^－８および０．０１７３として表される。図２２Ｉにおいて、ニンボリドで処理したｓｉ対照細胞と比較して、＃ｐ＝６．７０ｘ１０^－５として表される有意性。ニンボリドは基質認識を妨害することにより、ＲＮＦ１１４活性を阻害する。（図２２Ａ～２２Ｂ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１を加えた場合、または加えていない場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチン（図２２Ａ）またはｐ２１（図２２Ｂ）に対するブロッティング。（図２２Ｃ）野生型もしくはＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４によるＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）処理によるＲＮＦ１１４自己ユビキチン化アッセイ。（図２２Ｄ）純粋なＲＮＦ１１４およびｐ２１タンパク質のインビトロインキュベーションにおいて、Ｆｌａｇ－ＲＮＦ１１４プルダウンおよびｐ２１濃縮が、ニンボリド（１００μＭ）によって阻害された。（図２２Ｅ）２３１ＭＦＰ細胞をニンボリド（１００μＭ）で処理した。示されているのは、ＤＭＳＯ対照またはニンボリド処理細胞におけるｐ２１レベルである。（図２２Ｆ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。赤で示されているのは、２倍を超えるレベルで大幅に上昇しているタンパク質である。（図２２Ｆ）に示されるデータは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群において２つ以上の固有のペプチドで定量化した６３９７個のタンパク質に関するものである。（図２２Ｇ）純粋なＧＳＴ－Ｕｂｅ１、ＧＳＴ－ＵＢＥ２Ｄ１およびＲＮＦ１１４タンパク質、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰ（ｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）、ＰＥＧ１０もしくはＣＴＧＦを加えた場合）を用いたＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ、ならびにＦｌａｇ－ユビキチンに対するブロッティング。ＤＭＳＯまたはニンボリド（１００μＭ）をＲＮＦ１１４とプレインキュベートした後、Ｅ１およびＥ２酵素、Ｆｌａｇ－ユビキチンおよびＡＴＰを加えて反応を開始した。（図２２Ｈ）ローディング対照としてのアクチンとともに、ウエスタンブロッティングによって評価した、ｓｉ対照およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ２３１ＭＦＰ細胞におけるｐ２１（ＣＤＫＮ１Ａ）およびｐ５７（ＣＤＫＮ１Ｃ）の発現。（図２２Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはニンボリド（６μＭ）で２４時間処理したｓｉ対照またはｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ細胞における２３１ＭＦＰ細胞の増殖。図２２Ａ～２２Ｅおよび図２２Ｇに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像である。図２２Ａ～２２Ｄに示されるブロットの定量化は、図２３Ａ～２３Ｄにある。生物学的に独立した３つのサンプル／群全てが図２２Ｈに示されている。図２２Ｉに示されるデータは、平均±ｓｅｍ、ｎ＝５の生物学的に独立したサンプル／群である。統計的有意性は、図２２Ｅおよび図２２Ｉの不対両側スチューデントｔ検定を使用して計算した。有意性は、図２２Ｅの各時点のビヒクル処理対照群と比較して、１、２、４、および８時間でそれぞれ＊ｐ＝０００７９９、０．０２９５、０．００９６２および０．０１３５として表され、図２２Ｉのビヒクルで処理したｓｉ対照（ｓｉＣｏｎｔｒｏｌ）およびｓｉＣＤＫＮ１Ａ／ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ群と比較して、それぞれ、ｐ＝５．６５ｘ１０^－８および０．０１７３として表される。図２２Ｉにおいて、ニンボリドで処理したｓｉ対照細胞と比較して、＃ｐ＝６．７０ｘ１０^－５として表される有意性。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を動員し、ＢＲＤ４の標的タンパク質分解を行うことができる。（図２３Ａ）ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド、リンカーおよびＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１からなるニンボリドベースの分解剤であるＸＨ２を合成するための経路。（図２３Ｂ）ＲＮＦ１１４に対するＸＨ２のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＲＮＦ１１４をＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２と３０分間プレインキュベートした後、１時間ＪＮＳ２７標識（５０μＭ）し、続いてＣｕＡＡＣによるローダミン－アジドの付加、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ、およびゲル内蛍光の分析を行った。（図２３Ｃ～２３Ｄ）ＸＨ２（図２３Ｃ）対ＭＺ１（図２３Ｄ）処理で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。（図２３Ｅ～２３Ｆ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。１２時間のＭＺ１（１μＭ）処理またはＸＨ２（１００ｎＭ）処理（１００ｎＭ）の３０分前およびその処理中に、ＤＭＳＯビヒクルまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１μＭ）（図２３Ｅ）またはＥ１ユビキチン活性化酵素阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）（図２３Ｆ）で細胞を前処理した。（図２４Ｇ）ＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）およびノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびローディング対照ＧＡＰＤＨの発現。（図２３Ｈ）ＤＭＳＯビヒクル、ＭＺ１（１μＭ）またはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理したＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）またはノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびＢＲＤ４の発現。（図２３Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。図２３Ｃ～２３Ｈの長いおよび短いＢＲＤ４アイソフォームを、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングによって可視化し、デンシトメトリーによって定量化し、ＧＡＰＤＨローディング対照に対して正規化した。図２３Ｂ～２３Ｈに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像であり、図２３Ｃ～２３Ｆおよび図２３Ｈにおけるブロットの定量化が、図２５Ｃ～２５Ｆおよび図２５Ｉに示される。図２３Ｉに示されるデータは、３回の処理において２つ以上の固有のペプチドで定量化した５７９７個のタンパク質に関するものである。図２３Ｉの統計的有意性は、方法のセクションに記載されている。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を動員し、ＢＲＤ４の標的タンパク質分解を行うことができる。（図２３Ａ）ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド、リンカーおよびＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１からなるニンボリドベースの分解剤であるＸＨ２を合成するための経路。（図２３Ｂ）ＲＮＦ１１４に対するＸＨ２のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＲＮＦ１１４をＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２と３０分間プレインキュベートした後、１時間ＪＮＳ２７標識（５０μＭ）し、続いてＣｕＡＡＣによるローダミン－アジドの付加、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ、およびゲル内蛍光の分析を行った。（図２３Ｃ～２３Ｄ）ＸＨ２（図２３Ｃ）対ＭＺ１（図２３Ｄ）処理で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。（図２３Ｅ～２３Ｆ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。１２時間のＭＺ１（１μＭ）処理またはＸＨ２（１００ｎＭ）処理（１００ｎＭ）の３０分前およびその処理中に、ＤＭＳＯビヒクルまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１μＭ）（図２３Ｅ）またはＥ１ユビキチン活性化酵素阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）（図２３Ｆ）で細胞を前処理した。（図２４Ｇ）ＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）およびノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびローディング対照ＧＡＰＤＨの発現。（図２３Ｈ）ＤＭＳＯビヒクル、ＭＺ１（１μＭ）またはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理したＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）またはノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびＢＲＤ４の発現。（図２３Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。図２３Ｃ～２３Ｈの長いおよび短いＢＲＤ４アイソフォームを、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングによって可視化し、デンシトメトリーによって定量化し、ＧＡＰＤＨローディング対照に対して正規化した。図２３Ｂ～２３Ｈに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像であり、図２３Ｃ～２３Ｆおよび図２３Ｈにおけるブロットの定量化が、図２５Ｃ～２５Ｆおよび図２５Ｉに示される。図２３Ｉに示されるデータは、３回の処理において２つ以上の固有のペプチドで定量化した５７９７個のタンパク質に関するものである。図２３Ｉの統計的有意性は、方法のセクションに記載されている。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を動員し、ＢＲＤ４の標的タンパク質分解を行うことができる。（図２３Ａ）ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド、リンカーおよびＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１からなるニンボリドベースの分解剤であるＸＨ２を合成するための経路。（図２３Ｂ）ＲＮＦ１１４に対するＸＨ２のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＲＮＦ１１４をＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２と３０分間プレインキュベートした後、１時間ＪＮＳ２７標識（５０μＭ）し、続いてＣｕＡＡＣによるローダミン－アジドの付加、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ、およびゲル内蛍光の分析を行った。（図２３Ｃ～２３Ｄ）ＸＨ２（図２３Ｃ）対ＭＺ１（図２３Ｄ）処理で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。（図２３Ｅ～２３Ｆ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。１２時間のＭＺ１（１μＭ）処理またはＸＨ２（１００ｎＭ）処理（１００ｎＭ）の３０分前およびその処理中に、ＤＭＳＯビヒクルまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１μＭ）（図２３Ｅ）またはＥ１ユビキチン活性化酵素阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）（図２３Ｆ）で細胞を前処理した。（図２４Ｇ）ＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）およびノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびローディング対照ＧＡＰＤＨの発現。（図２３Ｈ）ＤＭＳＯビヒクル、ＭＺ１（１μＭ）またはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理したＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）またはノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびＢＲＤ４の発現。（図２３Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。図２３Ｃ～２３Ｈの長いおよび短いＢＲＤ４アイソフォームを、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングによって可視化し、デンシトメトリーによって定量化し、ＧＡＰＤＨローディング対照に対して正規化した。図２３Ｂ～２３Ｈに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像であり、図２３Ｃ～２３Ｆおよび図２３Ｈにおけるブロットの定量化が、図２５Ｃ～２５Ｆおよび図２５Ｉに示される。図２３Ｉに示されるデータは、３回の処理において２つ以上の固有のペプチドで定量化した５７９７個のタンパク質に関するものである。図２３Ｉの統計的有意性は、方法のセクションに記載されている。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を動員し、ＢＲＤ４の標的タンパク質分解を行うことができる。（図２３Ａ）ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド、リンカーおよびＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１からなるニンボリドベースの分解剤であるＸＨ２を合成するための経路。（図２３Ｂ）ＲＮＦ１１４に対するＸＨ２のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＲＮＦ１１４をＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２と３０分間プレインキュベートした後、１時間ＪＮＳ２７標識（５０μＭ）し、続いてＣｕＡＡＣによるローダミン－アジドの付加、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ、およびゲル内蛍光の分析を行った。（図２３Ｃ～２３Ｄ）ＸＨ２（図２３Ｃ）対ＭＺ１（図２３Ｄ）処理で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。（図２３Ｅ～２３Ｆ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。１２時間のＭＺ１（１μＭ）処理またはＸＨ２（１００ｎＭ）処理（１００ｎＭ）の３０分前およびその処理中に、ＤＭＳＯビヒクルまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１μＭ）（図２３Ｅ）またはＥ１ユビキチン活性化酵素阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）（図２３Ｆ）で細胞を前処理した。（図２４Ｇ）ＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）およびノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびローディング対照ＧＡＰＤＨの発現。（図２３Ｈ）ＤＭＳＯビヒクル、ＭＺ１（１μＭ）またはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理したＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）またはノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびＢＲＤ４の発現。（図２３Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。図２３Ｃ～２３Ｈの長いおよび短いＢＲＤ４アイソフォームを、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングによって可視化し、デンシトメトリーによって定量化し、ＧＡＰＤＨローディング対照に対して正規化した。図２３Ｂ～２３Ｈに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像であり、図２３Ｃ～２３Ｆおよび図２３Ｈにおけるブロットの定量化が、図２５Ｃ～２５Ｆおよび図２５Ｉに示される。図２３Ｉに示されるデータは、３回の処理において２つ以上の固有のペプチドで定量化した５７９７個のタンパク質に関するものである。図２３Ｉの統計的有意性は、方法のセクションに記載されている。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を動員し、ＢＲＤ４の標的タンパク質分解を行うことができる。（図２３Ａ）ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド、リンカーおよびＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１からなるニンボリドベースの分解剤であるＸＨ２を合成するための経路。（図２３Ｂ）ＲＮＦ１１４に対するＸＨ２のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＲＮＦ１１４をＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２と３０分間プレインキュベートした後、１時間ＪＮＳ２７標識（５０μＭ）し、続いてＣｕＡＡＣによるローダミン－アジドの付加、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ、およびゲル内蛍光の分析を行った。（図２３Ｃ～２３Ｄ）ＸＨ２（図２３Ｃ）対ＭＺ１（図２３Ｄ）処理で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。（図２３Ｅ～２３Ｆ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。１２時間のＭＺ１（１μＭ）処理またはＸＨ２（１００ｎＭ）処理（１００ｎＭ）の３０分前およびその処理中に、ＤＭＳＯビヒクルまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１μＭ）（図２３Ｅ）またはＥ１ユビキチン活性化酵素阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）（図２３Ｆ）で細胞を前処理した。（図２４Ｇ）ＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）およびノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびローディング対照ＧＡＰＤＨの発現。（図２３Ｈ）ＤＭＳＯビヒクル、ＭＺ１（１μＭ）またはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理したＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）またはノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびＢＲＤ４の発現。（図２３Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。図２３Ｃ～２３Ｈの長いおよび短いＢＲＤ４アイソフォームを、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングによって可視化し、デンシトメトリーによって定量化し、ＧＡＰＤＨローディング対照に対して正規化した。図２３Ｂ～２３Ｈに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像であり、図２３Ｃ～２３Ｆおよび図２３Ｈにおけるブロットの定量化が、図２５Ｃ～２５Ｆおよび図２５Ｉに示される。図２３Ｉに示されるデータは、３回の処理において２つ以上の固有のペプチドで定量化した５７９７個のタンパク質に関するものである。図２３Ｉの統計的有意性は、方法のセクションに記載されている。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を動員し、ＢＲＤ４の標的タンパク質分解を行うことができる。（図２３Ａ）ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド、リンカーおよびＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１からなるニンボリドベースの分解剤であるＸＨ２を合成するための経路。（図２３Ｂ）ＲＮＦ１１４に対するＸＨ２のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＲＮＦ１１４をＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２と３０分間プレインキュベートした後、１時間ＪＮＳ２７標識（５０μＭ）し、続いてＣｕＡＡＣによるローダミン－アジドの付加、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ、およびゲル内蛍光の分析を行った。（図２３Ｃ～２３Ｄ）ＸＨ２（図２３Ｃ）対ＭＺ１（図２３Ｄ）処理で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。（図２３Ｅ～２３Ｆ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。１２時間のＭＺ１（１μＭ）処理またはＸＨ２（１００ｎＭ）処理（１００ｎＭ）の３０分前およびその処理中に、ＤＭＳＯビヒクルまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１μＭ）（図２３Ｅ）またはＥ１ユビキチン活性化酵素阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）（図２３Ｆ）で細胞を前処理した。（図２４Ｇ）ＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）およびノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびローディング対照ＧＡＰＤＨの発現。（図２３Ｈ）ＤＭＳＯビヒクル、ＭＺ１（１μＭ）またはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理したＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）またはノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびＢＲＤ４の発現。（図２３Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。図２３Ｃ～２３Ｈの長いおよび短いＢＲＤ４アイソフォームを、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングによって可視化し、デンシトメトリーによって定量化し、ＧＡＰＤＨローディング対照に対して正規化した。図２３Ｂ～２３Ｈに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像であり、図２３Ｃ～２３Ｆおよび図２３Ｈにおけるブロットの定量化が、図２５Ｃ～２５Ｆおよび図２５Ｉに示される。図２３Ｉに示されるデータは、３回の処理において２つ以上の固有のペプチドで定量化した５７９７個のタンパク質に関するものである。図２３Ｉの統計的有意性は、方法のセクションに記載されている。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を動員し、ＢＲＤ４の標的タンパク質分解を行うことができる。（図２３Ａ）ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド、リンカーおよびＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１からなるニンボリドベースの分解剤であるＸＨ２を合成するための経路。（図２３Ｂ）ＲＮＦ１１４に対するＸＨ２のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＲＮＦ１１４をＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２と３０分間プレインキュベートした後、１時間ＪＮＳ２７標識（５０μＭ）し、続いてＣｕＡＡＣによるローダミン－アジドの付加、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ、およびゲル内蛍光の分析を行った。（図２３Ｃ～２３Ｄ）ＸＨ２（図２３Ｃ）対ＭＺ１（図２３Ｄ）処理で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。（図２３Ｅ～２３Ｆ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。１２時間のＭＺ１（１μＭ）処理またはＸＨ２（１００ｎＭ）処理（１００ｎＭ）の３０分前およびその処理中に、ＤＭＳＯビヒクルまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１μＭ）（図２３Ｅ）またはＥ１ユビキチン活性化酵素阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）（図２３Ｆ）で細胞を前処理した。（図２４Ｇ）ＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）およびノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびローディング対照ＧＡＰＤＨの発現。（図２３Ｈ）ＤＭＳＯビヒクル、ＭＺ１（１μＭ）またはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理したＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）またはノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびＢＲＤ４の発現。（図２３Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。図２３Ｃ～２３Ｈの長いおよび短いＢＲＤ４アイソフォームを、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングによって可視化し、デンシトメトリーによって定量化し、ＧＡＰＤＨローディング対照に対して正規化した。図２３Ｂ～２３Ｈに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像であり、図２３Ｃ～２３Ｆおよび図２３Ｈにおけるブロットの定量化が、図２５Ｃ～２５Ｆおよび図２５Ｉに示される。図２３Ｉに示されるデータは、３回の処理において２つ以上の固有のペプチドで定量化した５７９７個のタンパク質に関するものである。図２３Ｉの統計的有意性は、方法のセクションに記載されている。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を動員し、ＢＲＤ４の標的タンパク質分解を行うことができる。（図２３Ａ）ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド、リンカーおよびＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１からなるニンボリドベースの分解剤であるＸＨ２を合成するための経路。（図２３Ｂ）ＲＮＦ１１４に対するＸＨ２のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＲＮＦ１１４をＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２と３０分間プレインキュベートした後、１時間ＪＮＳ２７標識（５０μＭ）し、続いてＣｕＡＡＣによるローダミン－アジドの付加、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ、およびゲル内蛍光の分析を行った。（図２３Ｃ～２３Ｄ）ＸＨ２（図２３Ｃ）対ＭＺ１（図２３Ｄ）処理で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。（図２３Ｅ～２３Ｆ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。１２時間のＭＺ１（１μＭ）処理またはＸＨ２（１００ｎＭ）処理（１００ｎＭ）の３０分前およびその処理中に、ＤＭＳＯビヒクルまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１μＭ）（図２３Ｅ）またはＥ１ユビキチン活性化酵素阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）（図２３Ｆ）で細胞を前処理した。（図２４Ｇ）ＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）およびノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびローディング対照ＧＡＰＤＨの発現。（図２３Ｈ）ＤＭＳＯビヒクル、ＭＺ１（１μＭ）またはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理したＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）またはノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびＢＲＤ４の発現。（図２３Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。図２３Ｃ～２３Ｈの長いおよび短いＢＲＤ４アイソフォームを、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングによって可視化し、デンシトメトリーによって定量化し、ＧＡＰＤＨローディング対照に対して正規化した。図２３Ｂ～２３Ｈに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像であり、図２３Ｃ～２３Ｆおよび図２３Ｈにおけるブロットの定量化が、図２５Ｃ～２５Ｆおよび図２５Ｉに示される。図２３Ｉに示されるデータは、３回の処理において２つ以上の固有のペプチドで定量化した５７９７個のタンパク質に関するものである。図２３Ｉの統計的有意性は、方法のセクションに記載されている。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を動員し、ＢＲＤ４の標的タンパク質分解を行うことができる。（図２３Ａ）ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド、リンカーおよびＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１からなるニンボリドベースの分解剤であるＸＨ２を合成するための経路。（図２３Ｂ）ＲＮＦ１１４に対するＸＨ２のゲルベースＡＢＰＰ分析。ＲＮＦ１１４をＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２と３０分間プレインキュベートした後、１時間ＪＮＳ２７標識（５０μＭ）し、続いてＣｕＡＡＣによるローダミン－アジドの付加、ＳＤＳ／ＰＡＧＥ、およびゲル内蛍光の分析を行った。（図２３Ｃ～２３Ｄ）ＸＨ２（図２３Ｃ）対ＭＺ１（図２３Ｄ）処理で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。（図２３Ｅ～２３Ｆ）２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるＢＲＤ４発現。１２時間のＭＺ１（１μＭ）処理またはＸＨ２（１００ｎＭ）処理（１００ｎＭ）の３０分前およびその処理中に、ＤＭＳＯビヒクルまたはプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）（１μＭ）（図２３Ｅ）またはＥ１ユビキチン活性化酵素阻害剤ＴＡＫ－２４３（１０μＭ）（図２３Ｆ）で細胞を前処理した。（図２４Ｇ）ＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）およびノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびローディング対照ＧＡＰＤＨの発現。（図２３Ｈ）ＤＭＳＯビヒクル、ＭＺ１（１μＭ）またはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理したＲＮＦ１１４野生型（ＷＴ）またはノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞におけるＲＮＦ１１４およびＢＲＤ４の発現。（図２３Ｉ）ＤＭＳＯビヒクルまたはＸＨ２（１００ｎＭ）で１２時間処理した２３１ＭＦＰ乳癌細胞のタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。図２３Ｃ～２３Ｈの長いおよび短いＢＲＤ４アイソフォームを、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングによって可視化し、デンシトメトリーによって定量化し、ＧＡＰＤＨローディング対照に対して正規化した。図２３Ｂ～２３Ｈに示されるゲルは、ｎ＝３の生物学的に独立したサンプル／群からの代表的な画像であり、図２３Ｃ～２３Ｆおよび図２３Ｈにおけるブロットの定量化が、図２５Ｃ～２５Ｆおよび図２５Ｉに示される。図２３Ｉに示されるデータは、３回の処理において２つ以上の固有のペプチドで定量化した５７９７個のタンパク質に関するものである。図２３Ｉの統計的有意性は、方法のセクションに記載されている。

Ｉ．定義
本明細書で使用される略語は、化学的および生物学的分野内のそれらの従来の意味を有する。本明細書に記載の化学構造および化学式は、化学的分野で既知の化学原子価の標準規則に従って構築される。

置換基が左から右に書かれたそれらの従来の化学式によって特定される場合、それらは、右から左に構造を書くことから生じるであろう化学的に同一の置換基を等しく包含し、例えば－ＣＨ_２Ｏ－は－ＯＣＨ_２－と等しい。

「アルキル」という用語は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、特に明記しない限り、直鎖（すなわち、非分岐）または分岐炭素鎖（または炭素）、またはそれらの組み合わせを意味し、これは、完全飽和、一価または多価不飽和であってもよく、一価、二価、および多価ラジカルを含むことができる。アルキルは、指定された炭素数を含み得る（例えば、Ｃ_１－Ｃ_１０は、１～１０個の炭素を意味する）。アルキルは、非環化鎖である。不飽和アルキル基は、１つ以上の二重結合または三重結合を有するものである。アルコキシは、酸素リンカー（－Ｏ－）を介して分子の残り部分に結合しているアルキルである。アルキル部分は、アルケニル部分であり得る。アルキル部分は、アルキニル部分であり得る。アルキル部分は、完全飽和であり得る。アルケニルは、１つ以上の二重結合に加えて、１つより多くの二重結合および／または１つ以上の三重結合を含み得る。アルキニルは、１つ以上の三重結合に加えて、１つより多くの三重結合および／または１つ以上の二重結合を含み得る。「アルキレン」という用語は、単独で、または別の置換基の一部として、別途明記されない限り、アルキルに由来する二価ラジカルを意味する。「アルケニレン」という用語は、単独で、または別の置換基の一部として、別途明記されない限り、アルケンに由来する二価ラジカルを意味する。

「ヘテロアルキル」という用語は、単独で、または別の用語と組み合わせて、別途明記されない限り、少なくとも１つの炭素原子および少なくとも１個のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｐ、Ｓｉ、およびＳ）を含む安定した直鎖もしくは分岐鎖、またはそれらの組み合わせを意味し、窒素原子および硫黄原子は、任意に酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は、任意に四級化されていてもよい。ヘテロ原子（複数可）（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ、またはＰ）は、ヘテロアルキル基の任意の内部位置またはアルキル基が分子の残り部分に結合している位置に配置されていてもよい。ヘテロアルキルは、非環化鎖である。ヘテロアルキル部分は、１個のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ、またはＰ）を含み得る。ヘテロアルキル部分は、２個の任意に異なるヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ、またはＰ）を含み得る。ヘテロアルキル部分は、３個の任意に異なるヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ、またはＰ）を含み得る。ヘテロアルキル部分は、４個の任意に異なるヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ、またはＰ）を含み得る。ヘテロアルキル部分は、５個の任意に異なるヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ、またはＰ）を含み得る。ヘテロアルキル部分は、最大８個の任意に異なるヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｓ、Ｓｉ、またはＰ）を含み得る。「ヘテロアルケニル」という用語は、単独で、または別の用語と組み合わせて、別途明記されない限り、少なくとも１つの二重結合を含むヘテロアルキルを意味する。ヘテロアルケニルは、１つ以上の二重結合に加えて、１つより多くの二重結合および／または１つ以上の三重結合を任意に含み得る。「ヘテロアルキニル」という用語は、単独で、または別の用語と組み合わせて、別途明記されない限り、少なくとも１つの三重結合を含むヘテロアルキルを意味する。ヘテロアルキニルは、１つ以上の三重結合に加えて、１つより多くの三重結合および／または１つ以上の二重結合を任意に含み得る。

同様に、「ヘテロアルキレン」という用語は、単独で、または別の置換基の一部として、別途明記されない限り、ヘテロアルキルに由来する二価ラジカルを意味する。ヘテロアルキレン基については、ヘテロ原子はまた、鎖の末端のいずれかまたは両方を占有し得る（例えば、アルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノなど）。なおさらに、アルキレンおよびヘテロアルキレン連結基の場合、連結基の配向は、連結基の式が書かれた方向によって暗示されない。例えば、式－Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’－は、－Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’－および－Ｒ’Ｃ（Ｏ）_２－の両方を表す。「ヘテロアルキル」が列挙された後に特定のヘテロアルキル基、例えば、－ＮＲ’Ｒ’’等が列挙される場合、ヘテロアルキルおよび－ＮＲ’Ｒ’’という用語が冗長でも相互排他的でもないことが理解されよう。むしろ、特定のヘテロアルキル基が明確化のために列挙される。したがって、「ヘテロアルキル」という用語は、本明細書において、特定のヘテロアルキル基、例えば、－ＮＲ’Ｒ’’等を除外するものと解釈されるべきではない。

「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」という用語は、それ自体でまたは他の用語と組み合わせて、特に明記しない限り、それぞれ「アルキル」および「ヘテロアルキル」の環式バージョンを意味する。シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルは、芳香族ではない。加えて、ヘテロシクロアルキルの場合、ヘテロ原子は、複素環が分子の残り部分に結合している位置を占有し得る。「シクロアルキレン」および「ヘテロシクロアルキレン」とは、単独で、または別の置換基の一部として、それぞれ、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルに由来する二価ラジカルを意味する。

実施形態では、「シクロアルキル」という用語は、単環式、二環式または多環式シクロアルキル環系を意味する。実施形態では、単環式環系は、３～８個の炭素原子を含む環状炭化水素基であり、そのような基は、飽和または不飽和であり得るが、芳香族ではない。実施形態では、シクロアルキル基は完全に飽和している。実施形態では、架橋単環式環は、単環式環の２つの隣接していない炭素原子が１～３個の追加の炭素原子の間のアルキレン架橋（すなわち、形態（ＣＨ_２）_ｗの架橋基であり、式中、ｗは１、２または３である）によって結合されている単環式シクロアルキル環を含む。実施形態では、架橋または縮合二環式シクロアルキルは、単環式シクロアルキル環内に含まれる任意の炭素原子を介して親分子部分に結合している。実施形態では、多環式シクロアルキルは、塩基環内に含まれる任意の炭素原子を介して親分子部分に結合している。

実施形態では、シクロアルキルはシクロアルケニルである。「シクロアルケニル」という用語は、その単純な通常の意味に従って使用される。実施形態では、シクロアルケニルは、単環式、二環式または多環式シクロアルケニル環系である。実施形態では、単環式シクロアルケニル環系は、３～８個の炭素原子を含む環状炭化水素基であり、そのような基は不飽和である（すなわち、少なくとも１つの環状炭素炭素二重結合を含む）が、芳香族ではない。実施形態では、二環式シクロアルケニル環は、架橋単環式環または縮合二環式環である。実施形態では、架橋単環式環は、単環式環の２つの隣接していない炭素原子が１～３個の追加の炭素原子の間のアルキレン架橋（すなわち、形態（ＣＨ_２）_ｗの架橋基であり、式中、ｗは１、２または３である）によって結合されている単環式シクロアルケニル環を含む。実施形態では、架橋または縮合二環式シクロアルケニルは、単環式シクロアルケニル環内に含まれる任意の炭素原子を介して親分子部分に結合している。実施形態では、多環式シクロアルケニルは、塩基環内に含まれる任意の炭素原子を介して親分子部分に結合している。

実施形態では、ヘテロシクロアルキルはヘテロシクリルである。本明細書で使用される場合、「ヘテロシクリル」という用語は、単環式、二環式または多環式複素環を意味する。ヘテロシクリル単環式複素環は、環が飽和または不飽和であるが芳香族ではない、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から独立して選択される少なくとも１個のヘテロ原子を含む３、４、５、６または７員環である。３または４員環には、Ｏ、Ｎ、およびＳからなる群から選択された１個のヘテロ原子が含まれる。５員環には、０または１つの二重結合と、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から選択される１、２または３個のヘテロ原子とが含まれ得る。６または７員環には、０、１または２つの二重結合と、Ｏ、ＮおよびＳからなる群から選択される１、２または３個のヘテロ原子とが含まれ得る。ヘテロシクリル単環式複素環は、ヘテロシクリル単環式複素環内に含まれる任意の炭素原子または任意の窒素原子を介して親分子部分に接続されている。ヘテロシクリル二環式複素環は、二環式環系の単環式複素環部分内に含まれる任意の炭素原子または任意の窒素原子を介して親分子部分に接続されている。多環式ヘテロシクリルは、塩基環内に含まれる任意の炭素原子または窒素原子を介して親分子部分に結合している。

「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、特に明記しない限り、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素原子を意味する。さらに、「ハロアルキル」などの用語は、モノハロアルキルおよびポリハロアルキルを含むよう意図されている。例えば、「ハロ（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル」という用語は、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２－トリフルオロエチル、４－クロロブチル、３－ブロモプロピル等を含むが、これらに限定されない。

「アシル」という用語は、特に明記しない限り、－Ｃ（Ｏ）Ｒを意味し、式中、Ｒは、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。

「アリール」という用語は、特に明記しない限り、多価不飽和芳香族炭化水素置換基を意味し、これらは、単一の環、または一緒に縮合している（すなわち縮合環アリール）もしくは共有結合している多環（好ましくは１～３環）であり得る。縮合環アリールは、縮合環のうちの少なくとも１つがアリール環である、一緒に縮合した複数の環を指す。「ヘテロアリール」という用語は、Ｎ、Ｏ、またはＳ等の少なくとも１個のヘテロ原子を含むアリール基（または環）を指し、窒素原子および硫黄原子は任意に酸化され、窒素原子（複数可）は任意に四級化される。したがって、「ヘテロアリール」という用語は、縮合環ヘテロアリール基（すなわち、縮合環のうちの少なくとも１つが芳香族複素環である、一緒に縮合している複数の環）を含む。ヘテロアリール基は、炭素原子またはヘテロ原子を介して分子の残り部分に結合することができる。「アリーレン」および「ヘテロアリーレン」とは、単独で、または別の置換基の一部として、それぞれ、アリールおよびヘテロアリールに由来する二価ラジカルを意味する。ヘテロアリール基置換基は、環ヘテロ原子窒素に－Ｏ－結合していてもよい。

スピロ環式環は、隣接する環が単一の原子を介して結合している２つ以上の環である。スピロ環式環内の個々の環は、同一であり得るか、または異なり得る。スピロ環式環内の個々の環は、置換であっても非置換であってもよく、一組のスピロ環式環内の他の個々の環とは異なる置換基を有してもよい。スピロ環式環内の個々の環の可能な置換基は、スピロ環式環の一部ではない場合、同じ環の可能な置換基（例えば、シクロアルキル環またはヘテロシクロアルキル環の置換基）である。スピロ環式環系について言及するとき、複素環式スピロ環式環とは、少なくとも１つの環が複素環式環であり、各環が異なる環であり得る、スピロ環式環を意味する。スピロ環式環系について言及するとき、置換スピロ環式環とは、少なくとも１つの環が置換されており、各置換基が任意に異なっていてもよいことを意味する。

記号「

」は、分子または化学式の残りの部分への化学部分の結合点を示す。

本明細書で使用される「オキソ」という用語は、炭素原子に二重結合している酸素を意味する。

上記の用語（例えば、「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「シクロアルキル」、「ヘテロシクロアルキル」、「アリール」、および「ヘテロアリール」）のそれぞれは、示されたラジカルの置換および非置換形態の両方を含む。各々の種類のラジカルの好ましい置換基が以下に提供される。

アルキルおよびヘテロアルキルラジカル（しばしば、アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、およびヘテロシクロアルケニルと称されるそれらの基を含む）のための置換基は、０から（２ｍ’＋１）（式中、ｍ’が、そのようなラジカル中の炭素原子の総数である）の範囲の数で、限定されないが、－ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ－ＯＲ’、－ＮＲ’Ｒ’’、－ＳＲ’、－ハロゲン、－ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＣＯ_２Ｒ’、－ＣＯＮＲ’Ｒ’’、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＮＲ’－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、－ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’、－ＮＲ－Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’）＝ＮＲ’’’’、－ＮＲ－Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、－Ｓ（Ｏ）Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＲＳＯ_２Ｒ’、－ＮＲ’ＮＲ’’Ｒ’’’、－ＯＮＲ’Ｒ’’、－ＮＲ’Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’ＮＲ’’’Ｒ’’’’、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－ＮＲ’ＳＯ_２Ｒ’’、－ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒ’’、－ＮＲ’Ｃ（Ｏ）－ＯＲ’’、－ＮＲ’ＯＲ’’、から選択される、様々な基のうちの１つ以上であり得る。Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’、およびＲ’’’’は各々好ましくは独立して、水素、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール（例えば、１～３個のハロゲンで置換されたアリール）、置換もしくは非置換ヘテロアリール、置換もしくは非置換アルキル、アルコキシ、もしくはチオアルコキシ基、またはアリールアルキル基を指す。本明細書に記載の化合物が１つより多くのＲ基を含む場合、例えば、これらの基のうちの１個より多くが存在する場合、Ｒ基は各々独立して、各Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’、およびＲ’’’’基として選択される。Ｒ’およびＲ’’が同じ窒素原子に結合している場合、それらは、窒素原子と組み合わせられて、４、５、６、または７員環を形成してもよい。置換基についての上記の議論から、当業者であれば、「アルキル」という用語が、ハロアルキル（例えば、－ＣＦ_３および－ＣＨ_２ＣＦ_３）およびアシル（例えば、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３、－Ｃ（Ｏ）ＣＦ_３、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＯＣＨ_３等）等の水素基以外の基に結合している炭素原子を含む基を含むよう意図されていることを理解するであろう。

アルキルラジカルについて記載した置換基と同様に、アリールおよびヘテロアリール基のための置換基は変化し、例えば、芳香環系上の０から開放原子価の総数までの範囲の数において、－ＯＲ’、－ＮＲ’Ｒ’’、－ＳＲ’、－ハロゲン、－ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＣＯ_２Ｒ’、－ＣＯＮＲ’Ｒ’’、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＮＲ’－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、－ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’、－ＮＲ－Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’Ｒ’’’）＝ＮＲ’’’’、－ＮＲ－Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、－Ｓ（Ｏ）Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）_２Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ’Ｒ’’、－ＮＲＳＯ_２Ｒ’、－ＮＲ’ＮＲ’’Ｒ’’’、－ＯＮＲ’Ｒ’’、－ＮＲ’Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’ＮＲ’’’Ｒ’’’’、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｒ’、－Ｎ_３、－ＣＨ（Ｐｈ）_２、フルオロ（Ｃ_１－Ｃ_４）アルコキシ、フルオロ（Ｃ_１－Ｃ_４）アルキル、－ＮＲ’ＳＯ_２Ｒ’’、－ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒ’’、－ＮＲ’Ｃ（Ｏ）－ＯＲ’’、－ＮＲ’ＯＲ’’、から選択され、式中、Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’、およびＲ’’’’は、好ましくは独立して、水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、および置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択される。本明細書に記載の化合物が１つより多くのＲ基を含む場合、例えば、Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’、およびＲ’’’’基のうちの１個より多くが存在する場合、Ｒ基は各々独立して、各Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’、およびＲ’’’’基として選択される。

環（例えば、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、またはヘテロアリーレン）の置換基は、環の特定の原子上ではなく、環上の置換基（一般に浮遊置換基と称される）として示すことができる。このような場合、置換基は、（化学原子価の規則に従って）環原子のいずれかに結合されてもよく、縮合環またはスピロ環式環の場合、縮合環またはスピロ環式環の１員と結合されるものとして示される置換基（単環上の浮遊置換基）は、縮合環またはスピロ環式環のいずれか上の置換基（多環上の浮遊置換基）であり得る。置換基が特定の原子（浮遊置換基）ではなく環に結合しており、置換基の下付き文字が１より大きい整数である場合、複数の置換基は、同じ原子、同じ環、異なる原子、異なる縮合環、異なるスピロ環式環上にあってもよく、各置換基は任意に異なってもよい。分子の残り部分への環の結合点が単一の原子（浮遊置換基）に限定されない場合、結合点は、その環の任意の原子であってもよく、縮合環またはスピロ環式環の場合、化学原子価の規則に従って、縮合環またはスピロ環式環のうちのいずれかの任意の原子であってもよい。環、縮合環、またはスピロ環式環が１つ以上の環ヘテロ原子を含み、環、縮合環、またはスピロ環式環がもう１つの浮遊置換基（分子の残り部分への結合点を含むが、これに限定されない）とともに示される場合、浮遊置換基は、ヘテロ原子に結合してもよい。環ヘテロ原子が浮遊置換基を有する構造または式において１つ以上の水素に結合していることが示される場合（例えば、環原子への２つの結合および水素への第３の結合を有する環窒素）、ヘテロ原子が浮遊置換基に結合している場合、置換基は、化学原子価の規則に従って、水素を置き換えると理解されよう。

２つ以上の置換基が、任意に結合して、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、またはヘテロシクロアルキル基を形成し得る。このようないわゆる環形成置換基は、典型的には、必ずしもそうとは限らないが、環状塩基構造に結合していることが見出される。一実施形態では、環形成置換基は、その基礎構造の隣接する員に結合している。例えば、環状基礎構造の隣接する員に結合している２つの環形成置換基は、縮合環構造を形成する。別の実施形態では、環形成置換基は、その基礎構造の単一の員に結合している。例えば、環状基礎構造の単一の員に結合している２つの環形成置換基は、スピロ環式構造を形成する。さらに別の実施形態では、環形成置換基は、その基礎構造の隣接していない員に結合している。

本明細書で使用される場合、「ヘテロ原子」または「環ヘテロ原子」という用語は、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）、リン（Ｐ）、およびケイ素（Ｓｉ）を含むよう意図されている。

本明細書で使用される「置換基」は、以下の部分から選択される基を意味する。
（Ａ）オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、またはＣ_１－Ｃ_４アルキル）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員ヘテロアルキル、２～６員ヘテロアルキル、または２～４員ヘテロアルキル）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、またはＣ_５－Ｃ_６シクロアルキル）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員ヘテロシクロアルキル、３～６員ヘテロシクロアルキル、または５～６員ヘテロシクロアルキル）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、Ｃ_１０アリール、またはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員ヘテロアリール、５～９員ヘテロアリール、または５～６員ヘテロアリール）、および
（Ｂ）以下から選択される少なくとも１個の置換基で置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール：
（ｉ）オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、またはＣ_１－Ｃ_４アルキル）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員ヘテロアルキル、２～６員ヘテロアルキル、または２～４員ヘテロアルキル）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、またはＣ_５－Ｃ_６シクロアルキル）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員ヘテロシクロアルキル、３～６員ヘテロシクロアルキル、または５～６員ヘテロシクロアルキル）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、Ｃ_１０アリール、またはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員ヘテロアリール、５～９員ヘテロアリール、または５～６員ヘテロアリール）、および
（ｉｉ）以下から選択される少なくとも１個の置換基で置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール：
（ａ）オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、またはＣ_１－Ｃ_４アルキル）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員ヘテロアルキル、２～６員ヘテロアルキル、または２～４員ヘテロアルキル）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、またはＣ_５－Ｃ_６シクロアルキル）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員ヘテロシクロアルキル、３～６員ヘテロシクロアルキル、または５～６員ヘテロシクロアルキル）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、Ｃ_１０アリール、またはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員ヘテロアリール、５～９員ヘテロアリール、または５～６員ヘテロアリール）、および
（ｂ）以下から選択される少なくとも１個の基で置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール：オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、またはＣ_１－Ｃ_４アルキル）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員ヘテロアルキル、２～６員ヘテロアルキル、または２～４員ヘテロアルキル）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、またはＣ_５－Ｃ_６シクロアルキル）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員ヘテロシクロアルキル、３～６員ヘテロシクロアルキル、または５～６員ヘテロシクロアルキル）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、Ｃ_１０アリール、またはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員ヘテロアリール、５～９員ヘテロアリール、または５～６員ヘテロアリール）。

実施形態では、本明細書で使用される場合、「置換基」は、以下の部分から選択される基を意味する。
（Ａ）オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、またはＣ_１－Ｃ_４アルキル）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員ヘテロアルキル、２～６員ヘテロアルキル、または２～４員ヘテロアルキル）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、またはＣ_５－Ｃ_６シクロアルキル）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員ヘテロシクロアルキル、３～６員ヘテロシクロアルキル、または５～６員ヘテロシクロアルキル）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、Ｃ_１０アリール、またはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員ヘテロアリール、５～９員ヘテロアリール、または５～６員ヘテロアリール）、および
（Ｂ）以下から選択される少なくとも１個の置換基で置換されたアルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_２０、Ｃ_１－Ｃ_１２、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、ヘテロアルキル（例えば、２～２０員、２～１２員、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_１０、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、ヘテロシクロアルキル（例えば、３～１０員、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１２、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、またはヘテロアリール（例えば、５～１２員、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）：
（ｉ）オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、またはＣ_１－Ｃ_４アルキル）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員ヘテロアルキル、２～６員ヘテロアルキル、または２～４員ヘテロアルキル）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、またはＣ_５－Ｃ_６シクロアルキル）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員ヘテロシクロアルキル、３～６員ヘテロシクロアルキル、または５～６員ヘテロシクロアルキル）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、Ｃ_１０アリール、またはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員ヘテロアリール、５～９員ヘテロアリール、または５～６員ヘテロアリール）、および
（ｉｉ）以下から選択される少なくとも１個の置換基で置換されたアルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_２０、Ｃ_１－Ｃ_１２、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、ヘテロアルキル（例えば、２～２０員、２～１２員、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_１０、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、ヘテロシクロアルキル（例えば、３～１０員、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１２、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、またはヘテロアリール（例えば、５～１２員、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）：
（ａ）オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、またはＣ_１－Ｃ_４アルキル）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員ヘテロアルキル、２～６員ヘテロアルキル、または２～４員ヘテロアルキル）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、またはＣ_５－Ｃ_６シクロアルキル）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員ヘテロシクロアルキル、３～６員ヘテロシクロアルキル、または５～６員ヘテロシクロアルキル）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、Ｃ_１０アリール、またはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員ヘテロアリール、５～９員ヘテロアリール、または５～６員ヘテロアリール）、および
（ｂ）以下から選択される少なくとも１つの置換基で置換されているアルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_２０、Ｃ_１－Ｃ_１２、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、ヘテロアルキル（例えば、２～２０員、２～１２員、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_１０、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、ヘテロシクロアルキル（例えば、３～１０員、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１２、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、またはヘテロアリール（例えば、５～１２員、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）：オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｃ_１－Ｃ_６アルキル、もしくはＣ_１－Ｃ_４アルキル）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員ヘテロアルキル、２～６員ヘテロアルキル、もしくは２～４員ヘテロアルキル）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｃ_３－Ｃ_６シクロアルキル、もしくはＣ_５－Ｃ_６シクロアルキル）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員ヘテロシクロアルキル、３～６員ヘテロシクロアルキル、もしくは５～６員ヘテロシクロアルキル）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、Ｃ_１０アリール、もしくはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員ヘテロアリール、５～９員ヘテロアリール、もしくは５～６員ヘテロアリール）。

本明細書で使用される「サイズ限定置換基（ｓｉｚｅ－ｌｉｍｉｔｅｄｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）」または「サイズ限定置換基（ｓｉｚｅ－ｌｉｍｉｔｅｄｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔｇｒｏｕｐ）」は、「置換基」について上述される全ての置換基から選択される基を意味し、各置換もしくは非置換アルキルは、置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_２０アルキルであり、各置換もしくは非置換ヘテロアルキルは、置換もしくは非置換２～２０員ヘテロアルキルであり、各置換もしくは非置換シクロアルキルは、置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルであり、各置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルは、置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキルであり、各置換もしくは非置換アリールは、置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリールであり、各置換もしくは非置換ヘテロアリールは、置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールである。

本明細書で使用される「低級置換基（ｌｏｗｅｒｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）」または「低級置換基（ｌｏｗｅｒｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔｇｒｏｕｐ）」は、「置換基」について上述される全ての置換基から選択される基を意味し、各置換もしくは非置換アルキルは、置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキルであり、各置換もしくは非置換ヘテロアルキルは、置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキルであり、各置換もしくは非置換シクロアルキルは、置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_７シクロアルキルであり、各置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルは、置換もしくは非置換３～７員ヘテロシクロアルキルであり、各置換もしくは非置換アリールは、置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリールであり、各置換もしくは非置換ヘテロアリールは、置換もしくは非置換５～９員ヘテロアリールである。

本明細書で化合物の他の実施形態では、各置換もしくは非置換アルキルは、置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_２０アルキルであり得、各置換もしくは非置換ヘテロアルキルは、置換もしくは非置換２～２０員ヘテロアルキルであり、各置換もしくは非置換シクロアルキルは、置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキルであり、各置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルは、置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキルであり、各置換もしくは非置換アリールは、置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリールであり、および／または各置換もしくは非置換ヘテロアリールは、置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールである。本明細書の化合物のいくつかの実施形態では、各置換もしくは非置換アルキレンは、置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_２０アルキレンであり、各置換もしくは非置換ヘテロアルキレンは、置換もしくは非置換２～２０員ヘテロアルキレンであり、各置換もしくは非置換シクロアルキレンは、置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレンであり、各置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレンは、置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキレンであり、各置換もしくは非置換アリーレンは、置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリーレンであり、および／または各置換もしくは非置換ヘテロアリーレンは、置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリーレンである。

いくつかの実施形態では、各置換もしくは非置換アルキルは、置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキルであり、各置換もしくは非置換ヘテロアルキルは、置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキルであり、各置換もしくは非置換シクロアルキルは、置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_７シクロアルキルであり、各置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルは、置換もしくは非置換３～７員ヘテロシクロアルキルであり、各置換もしくは非置換アリールは、置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリールであり、および／または各置換もしくは非置換ヘテロアリールは、置換もしくは非置換５～９員ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、各置換もしくは非置換アルキレンは、置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキレンであり、各置換もしくは非置換ヘテロアルキレンは、置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキレンであり、各置換もしくは非置換シクロアルキレンは、置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_７シクロアルキレンであり、各置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレンは、置換もしくは非置換３～７員ヘテロシクロアルキレンであり、各置換もしくは非置換アリーレンは、置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリーレンであり、および／または各置換もしくは非置換ヘテロアリーレンは、置換もしくは非置換５～９員ヘテロアリーレンである。いくつかの実施形態では、化合物は、以下の実施例の項、図、または表に記載の化学種である。

実施形態では、置換もしくは非置換部分（例えば、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、および／または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン）は、非置換である（例えば、それぞれ、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリール、非置換アルキレン、非置換ヘテロアルキレン、非置換シクロアルキレン、非置換ヘテロシクロアルキレン、非置換アリーレン、および／または非置換ヘテロアリーレンである）。実施形態では、置換もしくは非置換部分（例えば、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換ヘテロアリール、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、および／または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン）は、置換である（例えば、それぞれ、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換アルキレン、置換ヘテロアルキレン、置換シクロアルキレン、置換ヘテロシクロアルキレン、置換アリーレン、および／または置換ヘテロアリーレンである）。

実施形態では、置換部分（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換アルキレン、置換ヘテロアルキレン、置換シクロアルキレン、置換ヘテロシクロアルキレン、置換アリーレン、および／または置換ヘテロアリーレン）は、少なくとも１つの置換基で置換され、置換部分が、複数の置換基で置換されている場合、各置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、置換部分が複数の置換基で置換されている場合、各置換基は異なる。

実施形態では、置換部分（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換アルキレン、置換ヘテロアルキレン、置換シクロアルキレン、置換ヘテロシクロアルキレン、置換アリーレン、および／または置換ヘテロアリーレン）は、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換され、置換部分が、複数の置換基で置換されている場合、各サイズ限定置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、置換部分が複数のサイズ限定置換基で置換されている場合、各サイズ限定置換基は異なる。

実施形態では、置換部分（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換アルキレン、置換ヘテロアルキレン、置換シクロアルキレン、置換ヘテロシクロアルキレン、置換アリーレン、および／または置換ヘテロアリーレン）は、少なくとも１つの低級置換基で置換され、置換部分が、複数の低級置換基で置換されている場合、各低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、置換部分が複数の低級置換基で置換されている場合、各低級置換基は異なる。

実施形態では、置換部分（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換アルキレン、置換ヘテロアルキレン、置換シクロアルキレン、置換ヘテロシクロアルキレン、置換アリーレン、および／または置換ヘテロアリーレン）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換部分が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、置換部分が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は異なる。

本開示のある特定の化合物は、不斉炭素原子（光学中心もしくはキラル中心）または二重結合を有し、絶対立体化学の観点から（Ｒ）－もしくは（Ｓ）－またはアミノ酸に関して（Ｄ）－もしくは（Ｌ）－と定義され得るエナンチオマー、ラセミ体、ジアステレオマー、互変異性体、幾何異性体、立体異性体形態、および個々の異性体は、本開示の範囲内に包含される。本開示の化合物は、合成および／または単離するには不安定すぎることが当該技術分野で知られている化合物を含まない。本開示は、ラセミ体および光学的に純粋な形態の化合物を含むよう意図されている。光学的に活性な（Ｒ）－および（Ｓ）－または（Ｄ）－および（Ｌ）－異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を使用して調製されても、従来の技法を使用して分解されてもよい。本明細書に記載の化合物がオレフィン結合または他の幾何不斉中心を含む場合、別途指定されない限り、化合物がＥ幾何異性体およびＺ幾何異性体の両方を含むよう意図されている。

本明細書で使用される場合、「異性体」という用語は、同じ数および種類の原子、ひいては同じ分子量を有するが、原子の構造配置または立体配置に関しては異なる化合物を指す。

本明細書で使用される「互変異性体」という用語は、平衡状態で存在し、ある異性体形態から別の異性体形態に容易に変換される、２つ以上の構造異性体の１つを指す。本開示のある特定の化合物が互変異性体形態で存在してもよく、化合物の全てのかかる互変異性体形態が開示の範囲内であることは、当業者には明らかであろう。

特に明記しない限り、本明細書に示される構造はまた、その構造の全ての立体化学形態、すなわち、各非対称中心に対するＲおよびＳ配置を含むことも意図する。したがって、本化合物の単一の立体化学異性体、ならびにエナンチオマーおよびジアステレオマー混合物は、本開示の範囲内である。特に明記しない限り、本明細書に示される構造はまた、１個以上の同位体濃縮原子の存在においてのみ異なる化合物を含むようにも意図されている。例えば、重水素もしくは三重水素による水素の置き換え、または^１３Ｃもしくは^１４Ｃ濃縮炭素による炭素の置き換えを除く、本構造を有する化合物は、本開示の範囲内である。本開示の化合物もまた、そのような化合物を構成する原子のうちの１個以上において非天然の割合の原子同位体も含み得る。例えば、化合物は、例えば、三重水素（^３Ｈ）、ヨウ素－１２５（^１２５Ｉ）、または炭素－１４（^１４Ｃ）等の放射性同位体で放射性標識され得る。本発明の化合物のすべての同位体変種は、放射性であるか否かにかかわらず、本発明の範囲内に包含される。

本出願を通じて、選択肢、例えば、１つより多くの可能なアミノ酸を含有する各アミノ酸位置は、マーカッシュの群で記載されることに留意すべきである。マーカッシュ群の各メンバーが別個に考慮されるべきであり、それにより、別の実施形態を含み、マーカッシュ群が単一の単位として読まれるべきではないことが特に企図される。

本明細書で使用される場合、「バイオコンジュゲート反応性部分」および「バイオコンジュゲート反応性基」という用語は、バイオコンジュゲート反応性基の原子または分子間の会合の結果としてバイオコンジュゲート（例えば、共有結合リンカー）を形成することができる部分または基を指す。会合は、直接的または間接的であり得る。例えば、本明細書で提供される、第１のバイオコンジュゲート反応性基（例えば、－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド、もしくは－マレイミド）と第２のバイオコンジュゲート反応性基（例えば、スルフヒドリル、硫黄含有アミノ酸、アミン、アミノ酸を含むアミン側鎖、もしくはカルボキシレート）との間のコンジュゲートは、例えば、共有結合もしくはリンカー（例えば、第２のリンカーの第１のリンカー）による直接的、または、例えば、非共有結合（例えば、静電相互作用（例えば、イオン結合、水素結合、ハロゲン結合）、ファンデルワールス相互作用（例えば、双極子－双極子、双極子誘起双極子、ロンドン分散）、リングスタッキング（ｐｉ効果）、疎水性相互作用）による間接的であり得る。実施形態では、バイオコンジュゲートあるいはバイオコンジュゲートリンカーは、求核置換（例えば、アミンおよびアルコールと、ハロゲン化アシル、活性エステルとの反応）、求電子置換（例えば、エナミン反応）、ならびに炭素－炭素および炭素－ヘテロ原子の多重結合への付加（例えば、マイケル反応、ディールス－アルダー付加）を含むがこれらに限定されないバイオコンジュゲート化学（すなわち、２つのバイオコンジュゲート反応性基の会合）を使用して形成される。これらおよび他の有用な反応は、例えば、Ｍａｒｃｈ，ＡＤＶＡＮＣＥＤＯＲＧＡＮＩＣＣＨＥＭＩＳＴＲＹ，３ｒｄＥｄ．，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８５；Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，ＢＩＯＣＯＮＪＵＧＡＴＥＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，１９９６；およびＦｅｅｎｅｙｅｔａｌ．，ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮＯＦＰＲＯＴＥＩＮＳ；ＡｄｖａｎｃｅｓｉｎＣｈｅｍｉｓｔｒｙＳｅｒｉｅｓ，Ｖｏｌ．１９８，ＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，１９８２において論じられている。実施形態では、第１のバイオコンジュゲート反応性基（例えば、マレイミド部分）は、第２のバイオコンジュゲート反応性基（例えば、スルフヒドリル）に共有結合している。実施形態では、第１のバイオコンジュゲート反応性基（例えば、ハロアセチル部分）は、第２のバイオコンジュゲート反応性基（例えば、スルフヒドリル）に共有結合している。実施形態では、第１のバイオコンジュゲート反応性基（例えば、ピリジル部分）は、第２のバイオコンジュゲート反応性基（例えば、スルフヒドリル）に共有結合している。実施形態では、第１のバイオコンジュゲート反応性基（例えば、－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド部分）は、第２のバイオコンジュゲート反応性基（例えば、アミン）に共有結合している。実施形態では、第１のバイオコンジュゲート反応性基（例えば、マレイミド部分）は、第２のバイオコンジュゲート反応性基（例えば、スルフヒドリル）に共有結合している。実施形態では、第１のバイオコンジュゲート反応性基（例えば、－スルホ－Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド部分）は、第２のバイオコンジュゲート反応性基（例えば、アミン）に共有結合している。

本明細書のバイオコンジュゲート化学に使用される有用なバイオコンジュゲート反応性部分の例としては、（ａ）カルボキシル基、ならびにＮ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、Ｎ－ヒドロキシベンズトリアゾールエステル、酸ハロゲン化物、アシルイミダゾール、チオエステル、ｐ－ニトロフェニルエステル、アルキル、アルケニル、アルキニルおよび芳香族エステルを含むがこれらに限定されないその様々な誘導体、（ｂ）エステル、エーテル、アルデヒドなどに変換できるヒドロキシル基、（ｃ）ハロゲン化物が、例えば、アミン、カルボキシレートアニオン、チオールアニオン、カルバニオン、またはアルコキシドイオンなどの求核基で後に置換され、それによりハロゲン原子の部位に新しい基が共有結合され得るハロアルキル基、（ｄ）例えば、マレイミドまたはマレイミド基などのディールス・アルダー反応に関与することができるジエノフィル基、（ｅ）例えば、イミン、ヒドラゾン、セミカルバゾンまたはオキシムなどのカルボニル誘導体の形成を介して、またはグリニャール付加またはアルキルリチウム付加などのメカニズムを介して、その後の誘導体化が可能であるようなアルデヒドまたはケトン基、（ｆ）例えば、その後にアミンと反応してスルホンアミドを形成するハロゲン化スルホニル基、（ｇ）ジスルフィドに変換されたり、ハロゲン化アシルと反応したり、金などの金属に結合したり、マレイミドと反応し得るチオール基、（ｈ）例えば、アシル化、アルキル化、または酸化され得るアミンまたはスルフヒドリル基（例えば、システインに存在する）、（ｉ）例えば、付加環化、アシル化、マイケル付加などを受ける可能性があるアルケン、（ｊ）例えば、アミンおよびヒドロキシル化合物と反応することができるエポキシド、（ｋ）核酸合成に有用なホスホルアミダイトおよび他の標準的な官能基、（ｌ）金属酸化ケイ素結合、（ｍ）反応性リン基（例えばホスフィン）に結合して、例えば、リン酸ジエステル結合を形成する金属、（ｎ）銅触媒による付加環化クリック化学を使用してアルキンに結合したアジド、（ｏ）アビジンまたはストレプトアビジンと反応して、アビジン－ビオチン複合体またはストレプトアビジン－ビオチン複合体を形成することができるビオチンコンジュゲートが挙げられる。バイオコンジュゲート反応性基は、それらが本明細書に記載のコンジュゲートの化学的安定性に関与しない、または干渉しないように選択することができる。あるいは、反応性官能基は、保護基の存在によって架橋反応に関与することから保護することができる。実施形態では、バイオコンジュゲートは、マレイミドなどの不飽和結合とスルフヒドリル基との反応から得られる分子実体を含む。

「類似体（Ａｎａｌｏｇ）」または「類似体（ａｎａｌｏｇｕｅ）」は、ＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｌｏｇｙ内のその平易な通常の意味に従って使用され、別の化合物（すなわち、いわゆる「参照」化合物）と構造的に類似しているが、組成、例えば、異なる元素の原子による１つの原子の置き換え、または特定の官能基の存在下、または別の官能基による１つの官能基の置き換え、または参照化合物の１つ以上のキラル中心の絶対立体化学が異なる化合物を指す。したがって、類似体は、参照化合物と機能および外観の点で同様または同等であるが、構造または起源の点では異なる化合物である。

本明細書で使用される「ａ」または「ａｎ」という用語は、１つ以上を意味する。さらに、本明細書で使用される「ａ［ｎ］で置換される」という語句は、特定の基が指定された置換基のうちのいずれかまたは全てのうちの１つ以上で置換され得ることを意味する。例えば、アルキル基またはヘテロアリール基等の基が、「非置換Ｃ_１－Ｃ_２０アルキルまたは非置換２～２０員ヘテロアルキルで置換されている」場合、その基は、１つ以上の非置換Ｃ_１－Ｃ_２０アルキルおよび／または１つ以上の非置換２～２０員ヘテロアルキルを含み得る。さらに、ある部分がＲ置換基で置換される場合、その基は、「Ｒ置換」と称され得る。ある部分がＲ置換されている場合、その部分は、少なくとも１つのＲ置換基で置換され、各Ｒ置換基は、任意に異なる。特定のＲ基が化学種（式（Ｉ）など）の説明中に存在する場合、ローマアルファベット記号が、その特定のＲ基の各外観を区別するために使用することができる。例えば、複数のＲ^１３置換基が存在する場合、各Ｒ^１３置換基は、Ｒ^１３Ａ、Ｒ^１３Ｂ、Ｒ^１３Ｃ、Ｒ^１３Ｄ等と区別され得、Ｒ^１３Ａ、Ｒ^１３Ｂ、Ｒ^１３Ｃ、Ｒ^１３Ｄ等は各々、Ｒ^１３の定義の範囲内で定義され、任意に異なる。

「検出可能な薬剤」または「検出可能な部分」は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、化学的、磁気共鳴画像法または他の物理的手段などの適切な手段によって検出可能な物質、化合物、元素、分子または組成物である。例えば、有用な検出可能な薬剤には、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^３３Ｐ、^４５Ｔｉ、^４７Ｓｃ、^５２Ｆｅ、^５９Ｆｅ、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^７７Ａｓ、^８６Ｙ、^９０Ｙ、^８９Ｓｒ、^８９Ｚｒ、^９４Ｔｃ、^９４Ｔｃ、^９９ｍＴｃ、^９９Ｍｏ、^１０５Ｐｄ、^１０５Ｒｈ、^１１１Ａｇ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１４２Ｐｒ、^１４３Ｐｒ、^１４９Ｐｍ、^１５３Ｓｍ、^{１５４－１５８１}Ｇｄ、^１６１Ｔｂ、^１６６Ｄｙ、^１６６Ｈｏ、^１６９Ｅｒ、^１７５Ｌｕ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１８９Ｒｅ、^１９４Ｉｒ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^２１１Ａｔ、^２１１Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１２Ｐｂ、^２１３Ｂｉ、^２２３Ｒａ、^２２５Ａｃ、Ｃｒ、Ｖ、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｌａ、Ｃｅ、Ｐｒ、Ｎｄ、Ｐｍ、Ｓｍ、Ｅｕ、Ｇｄ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔｍ、Ｙｂ、Ｌｕ、^３２Ｐ、フルオロフォア（蛍光色素など）、高電子密度試薬、酵素（例えば、ＥＬＩＳＡで一般的に使用されるもの）、ビオチン、ジゴキシゲニン、常磁性分子、常磁性ナノ粒子、超小型超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体、超常磁性酸化鉄（「ＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＳＰＩＯナノ粒子凝集体、単結晶酸化鉄ナノ粒子、単結晶酸化鉄、ナノ粒子造影剤、リポソーム、またはガドリニウムキレートを含むその他の送達媒体（「Ｇｄ－キレート」）分子、ガドリニウム、放射性同位元素、放射性核種（例えば、炭素－１１、窒素－１３、酸素－１５、フッ素－１８、ルビジウム－８２）、フルオロデオキシグルコース（例えば、フッ素－１８標識）、任意のガンマ線放出放射性核種、陽電子放出放射性核種、放射性標識グルコース、放射性標識水、放射性標識アンモニア、生体コロイド、マイクロバブル（例えば、アルブミン、ガラクトース、脂質、および／またはポリマーを含むマイクロバブルシェル、空気、重ガス（複数可）、パーフルオロカーボン、窒素、オクタフルオロプロパン、パーフレクサン（ｐｅｒｆｌｅｘａｎｅ）脂質ミクロスフェア、パーフルトレンなどを含むマイクロバブルガスコア）、ヨード造影剤（例、イオヘキソール、イオジキサノール、イオベルソル、イオパミドール、イオキシラン、イオプロミド、ジアトリゾエート、メトリゾエート、イオキサグレート）、硫酸バリウム、二酸化トリウム、金、金ナノ粒子、金ナノ粒子凝集体、フルオロフォア、２光子フルオロフォア、またはハプテンおよびタンパク質、または、例えば、標的ペプチドと特異的に反応するペプチドまたは抗体に放射性標識を組み込むことによって検出可能にすることができる他の実体、が含まれる。検出可能な部分は、一価の検出可能な薬剤または別の組成物と結合を形成することができる検出可能な薬剤である。

本開示の態様による造影剤および／または標識剤として使用され得る放射性物質（例えば、放射性同位体）には、^１８Ｆ、^３２Ｐ、^３３Ｐ、^４５Ｔｉ、^４７Ｓｃ、^５２Ｆｅ、^５９Ｆｅ、^６２Ｃｕ、^６４Ｃｕ、^６７Ｃｕ、^６７Ｇａ、^６８Ｇａ、^７７Ａｓ、^８６Ｙ、^９０Ｙが含まれるが、これらに限定されない。^８９Ｓｒ、^８９Ｚｒ、^９４Ｔｃ、^９４Ｔｃ、^９９ｍＴｃ、^９９Ｍｏ、^１０５Ｐｄ、^１０５Ｒｈ、^１１１Ａｇ、^１１１Ｉｎ、^１２３Ｉ、^１２４Ｉ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ、^１４２Ｐｒ、^１４３Ｐｒ、^１４９Ｐｍ、^１５３Ｓｍ、^{１５４－１５８１}Ｇｄ、^１６１Ｔｂ、^１６６Ｄｙ、^１６６Ｈｏ、^１６９Ｅｒ、^１７５Ｌｕ、^１７７Ｌｕ、^１８６Ｒｅ、^１８８Ｒｅ、^１８９Ｒｅ、^１９４Ｉｒ、^１９８Ａｕ、^１９９Ａｕ、^２１１Ａｔ、^２１１Ｐｂ、^２１２Ｂｉ、^２１２Ｐｂ、^２１３Ｂｉ、^２２３Ｒａおよび^２２５Ａｃ、が含まれる。本開示の態様に従って追加の造影剤として使用することができる常磁性イオンとしては、遷移金属およびランタニド金属（例えば、原子番号が２１～２９、４２、４３、４４、または５７～７１である金属）のイオンが挙げられるが、これらに限定されない。これらの金属には、Ｃｒ、Ｖ、Ｍｎ、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｃｕ、Ｌａ、Ｃｅ、Ｐｒ、Ｎｄ、Ｐｍ、Ｓｍ、Ｅｕ、Ｇｄ、Ｔｂ、Ｄｙ、Ｈｏ、Ｅｒ、Ｔｍ、Ｙｂ、Ｌｕのイオンが含まれる。

本開示の化合物の記載は、当業者に既知である化学結合の原理によって制限される。したがって、基がいくつかの置換基のうちの１つ以上で置換され得る場合、そのような置換は、化学結合の原理に従うように、および本質的に不安定ではない、ならびに／または水性、中性、およびいくつかの既知の生理学的条件などの周囲条件下では不安定である可能性が高いと当業者に知られている化合物をもたらすように、選択される。例えば、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリールは、当業者に公知の化学結合の原理に従って、環ヘテロ原子を介して分子の残りの部分に結合し、それによって本質的に不安定な化合物が回避される。

当業者であれば、化合物または化合物属（例えば、本明細書に記載の属）の変数（例えば、部分またはリンカー）が、全ての原子価が満たされた独立型化合物の名称または式によって記載される場合、その変数の満たされていない原子価は、変数が使用される状況によって決定されることを理解するであろう。例えば、本明細書に記載の化合物の変数が単結合を介して化合物の残りの部分に接続（例えば、結合）される場合、その変数は、独立型化合物の一価形態（すなわち、満たされていない原子価に起因して単結合を形成することができる）を表すと理解される（例えば、変数がある実施形態では「メタン」と名付けられているが、その変数が単結合によって化合物の残りの部分に結合していることが知られている場合、当業者であれば、その変数が実際にはメタンの一価形態、つまり、メチルまたは－ＣＨ_３であることを理解するであろう）。同様に、リンカー変数（例えば、本明細書に記載のＬ^１、Ｌ^２またはＬ^３）の場合、当業者であれば、その変数が独立型化合物の二価形態であることを理解するであろう（例えば、変数がある実施形態では「ＰＥＧ」または「ポリエチレングリコール」に割り当てられるが、その変数が２つの別個の結合によって化合物の残りの部分に接続されている場合、当業者であれば、その変数が、独立型化合物ＰＥＧではなく、ＰＥＧの二価（すなわち、２つの満たされていない原子価を介して２つの結合を形成することができる）形態であることを理解するであろう。

「薬学的に許容される塩」という用語は、本明細書に記載の化合物に見られる特定の置換基に応じて、比較的非毒性の酸または塩基を用いて調製される活性化合物の塩を含むよう意図されている。本開示の化合物が比較的酸性の官能基を含む場合、かかる化合物の中性形態を、無溶媒でまたは好適な不活性溶媒中のいずれかで、十分な量の所望の塩基と接触させることによって、塩基付加塩が得られ得る。薬学的に許容される塩基付加塩の例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ、もしくはマグネシウム塩、または同様の塩が挙げられる。本開示の化合物が比較的塩基性の官能基を含む場合、かかる化合物の中性形態を、無溶媒でまたは好適な不活性溶媒中のいずれかで、十分な量の所望の酸と接触させることによって、酸付加塩が得られ得る。薬学的に許容される酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、一水素炭酸、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、硫酸、一水素硫酸、ヨウ化水素酸、または亜リン酸等の無機酸に由来する塩、ならびに酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、シュウ酸、メタンスルホン酸等の比較的非毒性の有機酸に由来する塩が挙げられる。アミノ酸塩、例えば、アルギニン酸塩等、および有機酸塩、例えば、グルクロン酸またはガラクツロン酸等も含まれる（例えば、Ｂｅｒｇｅｅｔａｌ．，“ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳａｌｔｓ”，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ，１９７７，６６，１－１９を参照のこと）。本開示のある特定の化合物は、化合物が塩基付加塩または酸付加塩のいずれかに変換されることを可能にする塩基性および酸性官能基の両方を含む。したがって、本開示の化合物は、薬学的に許容される酸等との塩として存在し得る。本開示は、そのような塩を含む。かかる塩の非限定的な例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、硝酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、プロピオン酸塩、酒石酸塩（例えば、（＋）－酒石酸塩、（－）－酒石酸塩、またはラセミ混合物を含むそれらの混合物）、コハク酸塩、安息香酸塩、およびアミノ酸を有する塩、例えば、グルタミン酸、ならびに第四級アンモニウム塩（例えば、ヨウ化メチル、ヨウ化エチル等）が挙げられる。これらの塩は、当業者に既知の方法によって調製され得る。中性形態の化合物は、好ましくは、塩を塩基または酸と接触させて、従来の様式で親化合物を単離することによって再生される。化合物の親形態は、極性溶媒中での溶解性等のある特定の物理的特性の点で様々な塩形態とは異なり得る。

塩形態に加えて、本開示は、プロドラッグ形態の化合物を提供する。本明細書に記載の化合物のプロドラッグは、生理学的条件下で容易に化学変化を受けて本開示の化合物をもたらす化合物である。本明細書に記載の化合物のプロドラッグは、投与後にインビボで変換され得る。加えて、プロドラッグは、例えば、好適な酵素または化学試薬と接触したとき等に、エクスビボ環境下で化学的または生化学的方法によって本開示の化合物に変換され得る。

本開示のある特定の化合物は、非溶媒和形態、および水和形態を含む溶媒和形態で存在し得る。一般に、溶媒和形態は、非溶媒和形態と同等であり、本開示の範囲内に包含される。本開示のある特定の化合物は、複数の結晶形態または非晶形態で存在し得る。一般に、全ての物理的形態が本開示によって企図される使用について同等であり、本開示の範囲内であるよう意図されている。

「薬学的に許容される賦形剤」および「薬学的に許容される担体」は、活性薬剤の対象への投与および対象による吸収を助け、患者に重大な有害毒性作用を引き起こすことなく本開示の組成物中に含まれ得る物質を指す。薬学的に許容される賦形剤の非限定的な例としては、水、ＮａＣｌ、標準生理食塩水、乳酸化リンガー液、標準スクロース、標準グルコース、結合剤、充填剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤、食塩水（リンガー溶液等）、アルコール、油、ゼラチン、炭水化物、例えば、ラクトース、アミロース、またはデンプン、脂肪酸エステル、ヒドロキシメチルセルロース、ポリビニルピロリジン、および着色剤等が挙げられる。かかる調製物は、滅菌され得、所望の場合、滑沢剤、保存剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧に影響を及ぼすための塩、緩衝剤、着色剤、および／または本開示の化合物と有害に反応しない芳香族物質等の助剤と混合され得る。当業者であれば、他の薬学的賦形剤が本開示において有用であることを認識するであろう。

「調製」という用語は、活性化合物と、カプセルを提供する担体としてのカプセル化材料との配合を含むことが意図され、カプセル中で他の担体を含むかまたは含まない活性成分は担体に取り囲まれており、したがってそれと会合している。同様に、カシェ剤およびトローチ剤が含まれる。錠剤、粉末剤、カプセル剤、丸剤、カシェ剤、およびトローチ剤は、経口投与に好適な固体剤形として使用され得る。

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、特定の値を含む値の範囲を意味し、当業者は、特定の値に合理的に類似していると見なすであろう。実施形態では、約は、当該技術分野で一般に許容される測定値を使用する標準偏差内を意味する。実施形態では、約は、特定の値の＋／－１０％に及ぶ範囲を意味する。実施形態では、約は、特定の値を含む。

「接触させること」とは、その平易な通常の意味に従って使用され、少なくとも２つの異なる種（例えば、生体分子または細胞を含む化学化合物）が反応、相互作用、または物理的接触に十分近位になることを可能にするプロセスを指す。しかしながら、結果として生じた反応生成物が、添加された試薬間の反応から直接、または反応混合物中に生成され得る添加された試薬のうちの１つ以上由来の中間体から生成され得ることを理解されたい。「接触させること」という用語は、２つの種が反応、相互作用、または物理的接触を可能にすることを含むことができ、２つの種は、本明細書に記載の化合物およびタンパク質または酵素であり得る。いくつかの実施形態では、接触させることは、本明細書に記載の化合物がシグナル伝達経路に関与するタンパク質または酵素と相互作用することを可能にすることを含む。

本明細書で定義されるように、タンパク質－阻害剤相互作用に関して「活性化」、「活性化する」、「活性化すること」、「活性化因子」等の用語は、活性化因子の不在下でのタンパク質の活性または機能と比較して、タンパク質の活性または機能に良い影響を及ぼすこと（例えば、それを増加させること）を意味する。実施形態では、活性化とは、活性化因子の不在下でのタンパク質濃度またはレベルと比較してタンパク質濃度またはレベルにプラスの影響を与えること（例えば、それを増加させること）を意味する。これらの用語は、シグナル伝達または酵素活性またはある疾患において減少したタンパク質の量を、活性化、または活性化すること、感作させること、または上方調節することを指し得る。したがって、活性化は、少なくとも部分的に、刺激を部分的にまたは完全に増加させること、シグナル伝達または酵素活性またはある疾患に関連するタンパク質（例えば、罹患していない対照と比較してある疾患において減少したタンパク質）の量を、増加させること、または活性化を可能にすること、または活性化すること、感作させること、または上方調節することを含み得る。活性化は、少なくとも部分的に、刺激を部分的にまたは完全に増加させること、シグナル伝達または酵素活性またはタンパク質の量を、増加させること、または活性化を可能にすること、または活性化すること、感作させること、または上方調節することを含み得る

「アゴニスト」、「活性化因子」、「上方調節因子」などの用語は、所与の遺伝子またはタンパク質の発現または活性を検出可能に増大させることができる物質を指す。アゴニストは、アゴニストの不在下の対照と比較して、発現または活性を１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上増加させることができる。ある特定の例では、発現または活性は、アゴニストの不在下での発現または活性よりも１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、またはそれ以上高い。

本明細書で定義されるように、タンパク質－阻害剤相互作用に関して「阻害」、「阻害する」、「阻害すること」等の用語は、阻害剤の不在下でのタンパク質の活性または機能と比較してタンパク質の活性または機能に悪影響を及ぼすこと（例えば、それを低減させること）を意味する。実施形態では、阻害とは、阻害剤の不在下でのタンパク質濃度またはレベルと比較してタンパク質濃度またはレベルにマイナスの影響を与えること（例えば、それを減少させること）を意味する。実施形態では、阻害とは、疾患または疾患の症状の軽減を指す。実施形態では、阻害とは、特定のタンパク質標的の活性の低下を指す。したがって、阻害は、少なくとも部分的に、刺激を部分的にまたは完全に遮断すること、シグナル伝達または酵素活性またはタンパク質の量を、減少させること、阻止すること、または活性化を遅延させること、または不活性化すること、脱感作させること、または下方調節することを含む。実施形態では、阻害とは、直接相互作用に起因する標的タンパク質の活性の低下を指す（例えば、阻害剤は、標的タンパク質に結合する）。実施形態では、阻害とは、間接相互作用に起因する標的タンパク質の活性の低下を指す（例えば、阻害剤は、標的タンパク質を活性化するタンパク質に結合し、それにより、標的タンパク質の活性化を阻止する）。

「阻害剤」、「抑制因子」、または「アンタゴニスト」、または「下方調節因子」という用語は、同義に、所与の遺伝子またはタンパク質の発現または活性を検出可能に低減させることができる物質を指す。アンタゴニストは、アンタゴニストの不在下での対照と比較して、発現または活性を１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、またはそれ以上減少させることができる。ある特定の例では、発現または活性は、アンタゴニストの不在下での発現または活性よりも１．５倍、２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、またはそれ以上低い。

「ＲＮＦ４」および「ＲＩＮＧフィンガータンパク質４」という用語は、Ｅ３リガーゼタンパク質（ホモログ、アイソフォーム、およびそれらの機能的断片を含む）を指す。この用語は、（例えば、野生型ＲＮＦ４と比較して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％活性の範囲内で）ＲＮＦ４活性を維持するＲＮＦ４またはそのバリアントの任意の組換え形態または天然に存在する形態を含む。実施形態では、ＲＮＦ４遺伝子によってコードされるＲＮＦ４タンパク質は、Ｅｎｔｒｅｚ６０４７、ＵｎｉＰｒｏｔＰ７８３１７、ＲｅｆＳｅｑ（タンパク質）ＮＰ＿００２９２９、ＲｅｆＳｅｑ（タンパク質）ＮＰ＿００１１７１９３９、またはＲｅｆＳｅｑ（タンパク質）ＮＰ＿００１１７１９３８に記載されているか、またはそれに対応するアミノ酸配列を有する。実施形態では、アミノ酸配列または核酸配列は、本出願の出願時に既知の配列である。実施形態では、ＲＮＦ４は、ＲＮＦ４をもたらすヒト癌などのヒトＲＮＦ４である。実施形態では、ＲＮＦ４は、以下の配列を有する：
ＭＳＴＲＫＲＲＧＧＡＩＮＳＲＱＡＱＫＲＴＲＥＡＴＳＴＰＥＩＳＬＥＡＥＰＩＥＬＶＥＴＡＧＤＥＩＶＤＬＴＣＥＳＬＥＰＶＶＶＤ
ＬＴＨＮＤＳＶＶＩＶＤＥＲＲＲＰＲＲＮＡＲＲＬＰＱＤＨＡＤＳＣＶＶＳＳＤＤＥＥＬＳＲＤＲＤＶＹＶＴＴＨＴＰＲＮＡＲＤＥＧ
ＡＴＧＬＲＰＳＧＴＶＳＣＰＩＣＭＤＧＹＳＥＩＶＱＮＧＲＬＩＶＳＴＥＣＧＨＶＦＣＳＱＣＬＲＤＳＬＫＮＡＮＴＣＰＴＣＲＫＫＩ
ＮＨＫＲＹＨＰＩＹＩ（配列番号１）。

「ＲＮＦ１１４」および「ＲＩＮＧフィンガータンパク質１１４」および「ＺＮＦ２２８」および「ＺＮＦ３１３」という用語は、Ｅ３リガーゼタンパク質（ホモログ、アイソフォーム、およびそれらの機能的断片を含む）を指す。この用語は、（例えば、野生型ＲＮＦ１１４と比較して少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、または１００％活性の範囲内で）ＲＮＦ１１４活性を維持するＲＮＦ４またはそのバリアントの任意の組換え形態または天然に存在する形態を含む。実施形態では、ＲＮＦ４遺伝子によってコードされるＲＮＦ１１４タンパク質は、Ｅｎｔｒｅｚ５５９０５、ＵｎｉＰｒｏｔＱ９Ｙ５０８、またはＲｅｆＳｅｑ（タンパク質）ＮＰ＿０６１１５３に記載されているか、またはそれに対応するアミノ酸配列を有する。実施形態では、アミノ酸配列または核酸配列は、本出願の出願時に既知の配列である。実施形態では、ＲＮＦ１１４は、ＲＮＦ１１４をもたらすヒト癌などのヒトＲＮＦ１１４である。実施形態では、ＲＮＦ１１４は、以下の配列を有する：
ＭＡＡＱＱＲＤＣＧＧＡＡＱＬＡＧＰＡＡＥＡＤＰＬＧＲＦＴＣＰＶＣＬＥＶＹＥＫＰＶＱＶＰＣＧＨＶＦＣＳＡＣＬＱＥＣＬＫＰＫ
ＫＰＶＣＧＶＣＲＳＡＬＡＰＧＶＲＡＶＥＬＥＲＱＩＥＳＴＥＴＳＣＨＧＣＲＫＮＦＦＬＳＫＩＲＳＨＶＡＴＣＳＫＹＱＮＹＩＭＥＧ
ＶＫＡＴＩＫＤＡＳＬＱＰＲＮＶＰＮＲＹＴＦＰＣＰＹＣＰＥＫＮＦＤＱＥＧＬＶＥＨＣＫＬＦＨＳＴＤＴＫＳＶＶＣＰＩＣＡＳＭＰ
ＷＧＤＰＮＹＲＳＡＮＦＲＥＨＩＱＲＲＨＲＦＳＹＤＴＦＶＤＹＤＶＤＥＥＤＭＭＮＱＶＬＱＲＳＩＩＤＱ（配列番号２）。

「ＢＲＤ４」および「ブロモドメイン含有タンパク質４」という用語は、有糸分裂中に染色体と会合し、細胞分裂および転写調節を介したエピジェネティックな記憶の伝達において重要な役割を果たすタンパク質を指す。実施形態では、ＢＲＤ４遺伝子によってコードされるＢＲＤ４タンパク質は、Ｅｎｔｒｅｚ２３４７６、ＵｎｉＰｒｏｔＯ６０８８５、ＲｅｆＳｅｑ（タンパク質）ＮＰ＿００１３１７３１３．１、ＲｅｆＳｅｑ（タンパク質）ＮＰ＿０５５１１４．１、またはＲｅｆＳｅｑ（タンパク質）ＮＰ＿４９０５９７．１に記載されているか、またはそれに対応するアミノ酸配列を有する。実施形態では、アミノ酸配列または核酸配列は、本出願の出願時に既知の配列である。実施形態では、ＢＲＤ４は、以下の配列を有する：
ＭＳＡＥＳＧＰＧＴＲＬＲＮＬＰＶＭＧＤＧＬＥＴＳＱＭＳＴＴＱＡＱＡＱＰＱＰＡＮＡＡＳＴＮＰＰＰＰＥＴＳＮＰＮＫＰＫＲＱＴ
ＮＱＬＱＹＬＬＲＶＶＬＫＴＬＷＫＨＱＦＡＷＰＦＱＱＰＶＤＡＶＫＬＮＬＰＤＹＹＫＩＩＫＴＰＭＤＭＧＴＩＫＫＲＬＥＮＮＹＹＷ
ＮＡＱＥＣＩＱＤＦＮＴＭＦＴＮＣＹＩＹＮＫＰＧＤＤＩＶＬＭＡＥＡＬＥＫＬＦＬＱＫＩＮＥＬＰＴＥＥＴＥＩＭＩＶＱＡＫＧＲＧ
ＲＧＲＫＥＴＧＴＡＫＰＧＶＳＴＶＰＮＴＴＱＡＳＴＰＰＱＴＱＴＰＱＰＮＰＰＰＶＱＡＴＰＨＰＦＰＡＶＴＰＤＬＩＶＱＴＰＶＭＴ
ＶＶＰＰＱＰＬＱＴＰＰＰＶＰＰＱＰＱＰＰＰＡＰＡＰＱＰＶＱＳＨＰＰＩＩＡＡＴＰＱＰＶＫＴＫＫＧＶＫＲＫＡＤＴＴＴＰＴＴＩ
ＤＰＩＨＥＰＰＳＬＰＰＥＰＫＴＴＫＬＧＱＲＲＥＳＳＲＰＶＫＰＰＫＫＤＶＰＤＳＱＱＨＰＡＰＥＫＳＳＫＶＳＥＱＬＫＣＣＳＧＩ
ＬＫＥＭＦＡＫＫＨＡＡＹＡＷＰＦＹＫＰＶＤＶＥＡＬＧＬＨＤＹＣＤＩＩＫＨＰＭＤＭＳＴＩＫＳＫＬＥＡＲＥＹＲＤＡＱＥＦＧＡ
ＤＶＲＬＭＦＳＮＣＹＫＹＮＰＰＤＨＥＶＶＡＭＡＲＫＬＱＤＶＦＥＭＲＦＡＫＭＰＤＥＰＥＥＰＶＶＡＶＳＳＰＡＶＰＰＰＴＫＶＶ
ＡＰＰＳＳＳＤＳＳＳＤＳＳＳＤＳＤＳＳＴＤＤＳＥＥＥＲＡＱＲＬＡＥＬＱＥＱＬＫＡＶＨＥＱＬＡＡＬＳＱＰＱＱＮＫＰＫＫＫＥ
ＫＤＫＫＥＫＫＫＥＫＨＫＲＫＥＥＶＥＥＮＫＫＳＫＡＫＥＰＰＰＫＫＴＫＫＮＮＳＳＮＳＮＶＳＫＫＥＰＡＰＭＫＳＫＰＰＰＴＹＥ
ＳＥＥＥＤＫＣＫＰＭＳＹＥＥＫＲＱＬＳＬＤＩＮＫＬＰＧＥＫＬＧＲＶＶＨＩＩＱＳＲＥＰＳＬＫＮＳＮＰＤＥＩＥＩＤＦＥＴＬＫ
ＰＳＴＬＲＥＬＥＲＹＶＴＳＣＬＲＫＫＲＫＰＱＡＥＫＶＤＶＩＡＧＳＳＫＭＫＧＦＳＳＳＥＳＥＳＳＳＥＳＳＳＳＤＳＥＤＳＥＴＥ
ＭＡＰＫＳＫＫＫＧＨＰＧＲＥＱＫＫＨＨＨＨＨＨＱＱＭＱＱＡＰＡＰＶＰＱＱＰＰＰＰＰＱＱＰＰＰＰＰＰＰＱＱＱＱＱＰＰＰＰＰ
ＰＰＰＳＭＰＱＱＡＡＰＡＭＫＳＳＰＰＰＦＩＡＴＱＶＰＶＬＥＰＱＬＰＧＳＶＦＤＰＩＧＨＦＴＱＰＩＬＨＬＰＱＰＥＬＰＰＨＬＰ
ＱＰＰＥＨＳＴＰＰＨＬＮＱＨＡＶＶＳＰＰＡＬＨＮＡＬＰＱＱＰＳＲＰＳＮＲＡＡＡＬＰＰＫＰＡＲＰＰＡＶＳＰＡＬＴＱＴＰＬＬ
ＰＱＰＰＭＡＱＰＰＱＶＬＬＥＤＥＥＰＰＡＰＰＬＴＳＭＱＭＱＬＹＬＱＱＬＱＫＶＱＰＰＴＰＬＬＰＳＶＫＶＱＳＱＰＰＰＰＬＰＰ
ＰＰＨＰＳＶＱＱＱＬＱＱＱＰＰＰＰＰＰＰＱＰＱＰＰＰＱＱＱＨＱＰＰＰＲＰＶＨＬＱＰＭＱＦＳＴＨＩＱＱＰＰＰＰＱＧＱＱＰＰ
ＨＰＰＰＧＱＱＰＰＰＰＱＰＡＫＰＱＱＶＩＱＨＨＨＳＰＲＨＨＫＳＤＰＹＳＴＧＨＬＲＥＡＰＳＰＬＭＩＨＳＰＱＭＳＱＦＱＳＬＴ
ＨＱＳＰＰＱＱＮＶＱＰＫＫＱＥＬＲＡＡＳＶＶＱＰＱＰＬＶＶＶＫＥＥＫＩＨＳＰＩＩＲＳＥＰＦＳＰＳＬＲＰＥＰＰＫＨＰＥＳＩ
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ＭＬＤＱＱＲＥＬＡＲＫＲＥＱＥＲＲＲＲＥＡＭＡＡＴＩＤＭＮＦＱＳＤＬＬＳＩＦＥＥＮＬＦ（配列番号３）。

「発現」という用語は、転写、転写後修飾、翻訳、翻訳後修飾、および分泌を含むが、これらに限定されない、ポリペプチドの産生に関与する任意のステップを含む。発現は、タンパク質を検出するための従来の技法（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロッティング、フローサイトメトリー、免疫蛍光、免疫組織化学等）を使用して検出され得る。

「調節因子」という用語は、標的分子のレベルまたは標的分子の機能または分子の標的の物理的状態を、調節因子の不在下と比較して増加または減少させる組成物を指す。「調節する」という用語は、その平易な通常の意味に従って使用され、１つ以上の特性を変化または変動させる作用を指す。「調節」とは、１つ以上の特性を変化または変動させるプロセスを指す。

疾患に関連する物質または物質の活性もしくは機能の文脈において、「関連した」または「に関連する」という用語は、その疾患が（全体的にまたは部分的に）引き起こされるか、あるいはその疾患の症状が（全体的にまたは部分的に）物質または物質の活性もしくは機能によって引き起こされることを意味する。

本明細書で使用される「異常な」という用語は、正常とは異なることを指す。酵素活性またはタンパク質機能を説明するために使用される場合、異常とは、正常な対照または正常な非疾患対照サンプルの平均よりも大きいまたはそれより小さい活性または機能を指す。異常な活性とは、疾患をもたらす活性の量を指してもよく、（例えば、化合物を投与するか、または本明細書に記載の方法を使用することによって）異常な活性を正常なまたは非疾患関連量に戻すことにより、疾患または１つ以上の病徴の軽減がもたらされる。

本明細書で使用される「シグナル伝達経路」という用語は、１つの成分の変化を１つ以上の他の成分に伝達することができ、次いで、これが追加の成分に変化を伝達することができ、これが他のシグナル伝達経路成分に任意に伝播される、細胞成分および任意に細胞外成分（例えば、タンパク質、核酸、小分子、イオン、脂質）間の一連の相互作用を指す。

本開示において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」および「有する（ｈａｖｉｎｇ）」などは、米国特許法においてそれらに帰する意味を有することができ、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」などを意味することができる。「本質的に～からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙｏｆ）または「本質的に構成される（ｃｏｎｓｉｓｔｓｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ）」も同様に、米国特許法に帰する意味を有し、この用語は制限がなく、記載されているものの基本的または新規の特性が、記載されているものより多くの存在によって変化しない限り、記載されているものより多くの存在を可能にするが、先行技術の実施形態を含まない。

「疾患」または「状態」という用語は、本明細書で提供される化合物または方法で治療することができる患者または対象の存在状態または健康状態を指す。疾患は、癌であり得る。疾患は、自己免疫疾患であり得る。疾患は、炎症性疾患であり得る。疾患は、感染症であり得る。いくつかのさらなる例では、「癌」とは、ヒト癌および癌腫、肉腫、腺癌、リンパ腫、白血病等、例えば、固形およびリンパ球系癌、腎臓癌、乳癌、肺癌、膀胱癌、結腸癌、卵巣癌、前立腺癌、膵臓癌、胃癌、脳癌、頭頸部癌、皮膚癌、子宮癌、精巣癌、神経膠腫、食道癌、および肝臓癌、例えば、肝細胞癌、リンパ腫、例えば、Ｂ急性リンパ芽球性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫（例えば、バーキット、小細胞、および大細胞リンパ腫）、ホジキンリンパ腫、白血病（ＡＭＬ、ＡＬＬ、およびＣＭＬを含む）、または多発性骨髄腫を指す。

本明細書で使用される場合、「癌」という用語は、白血病、リンパ腫、癌腫、および肉腫を含む、哺乳動物（例えば、ヒト）に見出される全ての種類の癌、新生物、または悪性腫瘍を指す。本明細書に提供される化合物または方法で治療され得る例示的な癌には、脳癌、神経膠腫、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、前立腺癌、結腸直腸癌、膵臓癌、髄芽細胞腫、黒色腫、子宮頸癌、胃癌、卵巣癌、肺癌、頭部癌、ホジキン病、および非ホジキンリンパ腫が挙げられる。本明細書に提供される化合物または方法で治療され得る例示的な癌には、甲状腺癌、内分泌系癌、脳癌、乳癌、子宮頸癌、結腸癌、頭頸部癌、肝臓癌、腎臓癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、直腸癌、胃癌、および子宮癌が挙げられる。さらなる例としては、甲状腺癌、胆管癌、膵臓腺癌、皮膚の皮膚黒色腫、結腸腺癌、直腸腺癌、胃腺癌、食道癌、頭頸部扁平上皮癌、乳房浸潤癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、非小細胞肺癌、中皮腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、多形性膠芽細胞腫、卵巣癌、横紋筋肉腫、原発性血小板血症、原発性マクログロブリン血症、原発性脳腫瘍、悪性膵インスリノーマ（ｉｎｓｕｌａｎｏｍａ）、悪性カルチノイド、膀胱癌、前悪性皮膚病変、精巣癌、リンパ腫、甲状腺癌、神経芽細胞腫、食道癌、泌尿生殖器癌、悪性高カルシウム血症、子宮内膜癌、副腎皮質癌、内分泌もしくは外分泌膵臓新生物、甲状腺髄様癌、甲状腺髄様癌腫、黒色腫、結腸直腸癌、甲状腺乳頭癌、肝細胞癌、または前立腺癌が挙げられる。

「白血病」という用語は、造血器官の進行性の悪性疾患を広く指し、一般に血液および骨髄中での白血球およびそれらの前駆細胞の歪んだ増殖および発達により特徴付けられる。白血病は、一般に、（１）疾患の持続期間および特徴（急性または慢性）、（２）関与する細胞の種類（骨髄（骨髄性）、リンパ（リンパ行性）、または単球性、ならびに（３）血液白血性または非白血性（亜白血性）中の異常細胞数の増加または非増加に基づいて臨床的に分類される。本明細書に提供される化合物または方法で治療され得る例示的な白血病としては、例えば、急性非リンパ球性白血病、慢性リンパ球性白血病、急性顆粒球性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性前骨髄球性白血病、成人Ｔ細胞性白血病、非白血性白血病（ａｌｅｕｋｅｍｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ）、白血球性白血病、好塩基球性白血病、芽細胞白血病、ウシ白血病、慢性骨髄球性白血病、皮膚白血病、胎児性白血病、好酸球性白血病、グロス白血病、ヘアリー細胞白血病、血芽球性白血病、血球芽細胞性白血病、組織球性白血病、幹細胞性白血病、急性単球性白血病、白血球減少性白血病、リンパ性白血病、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、リンパ行性白血病、リンパ球系白血病、リンパ肉腫細胞性白血病、肥満細胞性白血病、巨核球性白血病、小骨髄芽球性白血病、単球性白血病、骨髄芽球性白血病、骨髄球性白血病、骨髄顆粒球性白血病、骨髄単球性白血病、ネーゲリ白血病、形質細胞白血病、多発性骨髄腫、形質細胞性白血病、前骨髄球性白血病、リーダー細胞白血病、シリング白血病、幹細胞性白血病、亜白血性白血病（ｓｕｂｌｅｕｋｅｍｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ）、または未分化細胞白血病が挙げられる。

本明細書で使用される場合、「リンパ腫」という用語は、造血組織およびリンパ系組織に影響を及ぼす癌の群を指す。これは、主にリンパ節、脾臓、胸腺、および骨髄に見られる血球であるリンパ球で発症する。２つの主な種類のリンパ腫は、非ホジキンリンパ腫およびホジキン病である。ホジキン病は、診断された全てのリンパ腫のおよそ１５％に相当する。これは、リードスタンバーグ悪性Ｂリンパ球に関連する癌である。非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）は、癌が増殖する速度および関与する細胞の種類に基づいて分類され得る。ＮＨＬには、急速進行型（高悪性度）および緩徐進行型（低悪性度）のＮＨＬがある。関与する細胞に基づいて、ＮＨＬには、Ｂ細胞およびＴ細胞ＮＨＬがある。本明細書に提供される化合物または方法で治療され得る例示的なＢ細胞リンパ腫としては、小リンパ球性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、節外性（ＭＡＬＴ）リンパ腫、節性（単球性Ｂ細胞）リンパ腫、脾リンパ腫、びまん性大細胞Ｂリンパ腫、バーキットリンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫、免疫芽球性大細胞リンパ腫、または前駆体Ｂリンパ芽球性リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に提供される化合物または方法で治療され得る例示的なＴ細胞リンパ腫としては、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、末梢Ｔ細胞リンパ腫、未分化大細胞リンパ腫、菌状息肉腫、および前駆体Ｔリンパ芽球性リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。

「肉腫」という用語は、一般に、胚生結合組織のような物質から構成され、一般に、線維性または均質な物質中に埋め込まれた緊密に詰め込まれた細胞から構成される腫瘍を指す。本明細書に提供される化合物または方法で治療され得る肉腫としては、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、アベメシー肉腫、脂肪性肉腫、脂肪肉腫、胞状軟部肉腫、エナメル上皮肉腫、ブドウ状肉腫、緑色肉腫、絨毛癌、胎児性肉腫、ウィルムス腫瘍性肉腫、子宮内膜肉腫、間質肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維芽細胞性肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、ホジキン肉腫、特発性多発性色素性出血性肉腫、Ｂ細胞免疫芽球性肉腫、リンパ腫、Ｔ細胞免疫芽球性肉腫、イエンセン肉腫、カポジ肉腫、クッパー細胞肉腫、血管肉腫、白血肉腫、悪性間葉腫肉腫、傍骨性骨肉腫、網赤血球性肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢腫性肉腫、滑膜肉腫、または毛細血管拡張性肉腫が挙げられる。

「黒色腫」という用語は、皮膚および他の臓器のメラニン細胞系から生じる腫瘍を意味すると解釈される。本明細書に提供される化合物または方法で治療され得る黒色腫としては、例えば、末端性黒子性黒色腫、メラニン欠乏性黒色腫、良性若年性黒色腫、クラウドマン黒色腫、Ｓ９１黒色腫、ハーディング・パッセー黒色腫、若年性黒色腫、悪性黒子型黒色腫、悪性黒色腫、結節性黒色腫、爪下黒色腫、または表在拡大型黒色腫が挙げられる。

「癌腫」という用語は、周囲組織に浸潤し、転移を生じる傾向のある上皮細胞から構成される悪性新生物を指す。本明細書に提供される化合物または方法で治療され得る例示的な癌腫としては、例えば、甲状腺髄様癌、家族性甲状腺髄様癌、細葉細胞癌、腺房細胞癌、腺細胞癌、腺様嚢胞癌、腺腫性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａａｄｅｎｏｍａｔｏｓｕｍ）、副腎皮質癌、肺胞癌、肺胞細胞癌、基底細胞癌、基底細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｂａｓｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、類基底細胞癌、基底有棘細胞癌、細気管支肺胞癌、細気管支癌、気管支原性癌、大脳様癌（ｃｅｒｅｂｒｉｆｏｒｍｃａｒｃｉｎｏｍａ）、胆管細胞癌、絨毛細胞癌、コロイド状癌、コメド癌、体癌（ｃｏｒｐｕｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、篩状癌、鎧状癌、皮膚癌、円筒状癌、円筒細胞癌、腺管癌、緻密性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｄｕｒｕｍ）、胎児性癌、脳様癌、類表皮癌、咽頭扁桃上皮癌、外方増殖性癌、潰瘍癌、繊維状癌、ゼラチン状癌、コロイド腺癌、巨細胞癌、巨細胞性癌、腺癌、顆粒膜細胞癌、毛母癌、血液様癌、肝細胞癌、ヒュルトレ細胞癌、ガラス様癌、副腎様癌、乳児性胎児性癌、上皮内癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｉｎｓｉｔｕ）、表皮内癌、上皮内癌、Ｋｒｏｍｐｅｃｈｅｒ癌（Ｋｒｏｍｐｅｃｈｅｒ’ｓｃａｒｃｉｎｏｍａ）、Ｋｕｌｃｈｉｔｚｋｙ細胞癌、大細胞癌、レンズ状癌、レンズ性癌、脂肪腫性癌、リンパ上皮癌、髄様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｍｅｄｕｌｌａｒｅ）、髄様癌（ｍｅｄｕｌｌａｒｙｃａｒｃｉｎｏｍａ）、黒色癌、軟性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｍｏｌｌｅ）、粘液性癌、粘液分泌性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｍｕｃｉｐａｒｕｍ）、粘液細胞性癌、粘液性類表皮癌、粘液性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｍｕｃｏｓｕｍ）、粘膜癌、粘液腫様癌、上咽頭癌、燕麦細胞癌、骨化性癌、骨様癌、乳頭状癌、門脈周辺癌、前浸潤癌、有棘細胞癌、糊状癌、腎臓の腎細胞癌、貯蔵細胞癌、肉腫様癌、シュナイダー癌、硬性癌、陰嚢癌、印環細胞癌、単純癌、小細胞癌、ソラノイド癌（ｓｏｌａｎｏｉｄｃａｒｃｉｎｏｍａ）、球状細胞癌、紡錘体細胞癌、多孔性癌、扁平上皮癌、扁平上皮細胞癌、ストリング癌（ｓｔｒｉｎｇｃａｒｃｉｎｏｍａ）、毛細血管拡張性癌、毛細血管拡張様癌、移行上皮癌、結節性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、結節状癌、疣状癌、および絨毛性癌が挙げられる。

本明細書で使用される場合、「転移」、「転移性」、および「転移性癌」という用語は、互換的に使用することができ、ある臓器もしくは別の隣接しない臓器または身体の一部からの、増殖性疾患または障害、例えば、癌の広がりを指す。「転移性癌」は、「ステージＩＶ癌」とも呼ばれる。

「治療すること」または「治療」という用語は、損傷、疾患、病理、または状態の治療または改善における成功の任意の兆候を指し、任意の客観的または主観的パラメータ、例えば、寛解、緩解；症状を低減すること、または患者にとって損傷、病理、もしくは状態をより許容できるものにすること；変性もしくは減退の速度を遅延させること；変性の最終点をより衰弱的でないものにすること；患者の肉体的もしくは精神的な福祉を改善することを含む。症状の治療または改善は、客観的または主観的パラメータに基づくことができ、それらは、身体検査、神経精神病学検査、および／または精神病学評価の結果を含む。「治療すること」という用語およびその活用は、損傷、病変、状態、または疾患の予防を含み得る。実施形態では、治療することは、予防することである。実施形態では、治療することは、予防することを含まない。本明細書で使用される（かつ当該技術分野で十分に理解されている）「治療すること」または「治療」は、臨床結果を含む、対象の状態における有益なまたは所望の結果を得るための任意のアプローチも広範に含む。有益なまたは所望の臨床結果としては、部分的であるか全体であるか、かつ検出可能であるか検出不可能であるかにかかわらず、１つ以上の症状または状態の緩和または改善、疾患の程度の低減、病状の安定化（すなわち、悪化させない）、疾患の感染または拡大の予防、疾患増悪の遅延または減速、病状の改善または軽減、疾患再発の減少、および寛解が挙げられ得るが、これらに限定されない。言い換えれば、本明細書で使用される「治療」は、疾患の任意の治癒、改善、または予防を含む。治療は、疾患が発症するのを防ぐか、疾患の拡散を抑制するか、疾患の症状（例えば、眼痛、光周辺で後光を見ること、目の充血、非常に高い眼圧）を軽減するか、疾患の根本原因を完全にもしくは部分的に除去するか、疾病の継続期間を短縮するか、またはこれらの組み合わせを行い得る。本明細書で使用される「治療すること」および「治療」には、予防的治療が含まれる。治療方法は、対象に、治療有効量の活性薬剤を投与することを含む。投与するステップは、単回投与からなり得るか、または一連の投与を含み得る。治療期間の長さは、状態の重症度、患者の年齢、活性薬剤の濃度、治療に使用される組成物の活性、またはそれらの組み合わせ等の様々な要因に依存する。治療または予防のために使用される薬剤の有効投薬量が特定の治療または予防計画の間に増加または減少し得ることも理解されよう。投薬量の変更は、当該技術分野で知られている標準的な診断アッセイによってもたらされ得るか、それによって明らかにされ得る。場合によっては、長期投与が必要とされ得る。例えば、組成物は、患者を治療するのに十分な量でおよび持続時間、対象に投与される。実施形態では、治療することまたは治療は、予防的治療ではない。

「予防する」という用語は、患者における病徴の発生の減少を指す。上述のように、予防は、治療なしで発症する可能性が高いであろうものよりも少ない症状が観察されるように、完全（検出可能な症状なし）または部分的であり得る。

「患者」または「それを必要とする対象」は、本明細書に提供されるような薬学的組成物の投与によって治療することができる疾患または状態に罹患しているかまたは罹患しやすい生物を指す。非限定的な例には、ヒト、他の哺乳動物、ウシ、ラット、マウス、イヌ、サル、ヤギ、ヒツジ、ウシ、シカ、および他の非哺乳動物が含まれる。いくつかの実施形態では、患者は、ヒトである。

「有効量」とは、化合物なしと比較して、化合物が規定の目的を達成する（例えば、それが投与される対象の効果を達成するか、疾患を治療するか、酵素活性を減少させるか、酵素活性を増加させるか、シグナル伝達経路を減少させるか、または疾患もしくは状態の１つ以上の症状を軽減する）のに十分な量である。「有効量」の一例は、疾患の症状または症状の治療、予防、または軽減に寄与するのに十分な量であり、「治療有効量」とも称され得る。症状（複数可）の「軽減」（およびこの語句の文法的等価物）は、症状（複数可）の重症度もしくは頻度の低下、または症状（複数可）の排除を意味する。薬物の「予防有効量」とは、対象に投与されると、意図された予防効果をもたらすであろう薬物の量、例えば、損傷、疾患、病変、もしくは状態の発症（もしくは再発）を予防もしくは遅延するか、または損傷、疾患、病変、もしくは状態、またはそれらの症状の発症（もしくは再発）の可能性を低減させる薬物の量である。完全な予防効果は、必ずしも１回用量の投与によって生じるとは限らず、一連の用量の投与後にのみ生じ得る。したがって、予防有効量は、１回以上の投与で投与され得る。本明細書で使用される「活性を減少させる量」とは、アンタゴニストなしと比較して酵素の活性を減少させるのに必要なアンタゴニストの量を指す。本明細書で使用される「機能を破壊させる量」とは、アンタゴニストなしと比較して酵素またはタンパク質の機能を破壊させるのに必要なアンタゴニストの量を指す。正確な量は、治療の目的に依存し、既知の技法を使用して当業者によって解明可能であろう（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓ（ｖｏｌｓ．１－３，１９９２）、Ｌｌｏｙｄ，ＴｈｅＡｒｔ，ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＣｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ（１９９９）、Ｐｉｃｋａｒ，ＤｏｓａｇｅＣａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ（１９９９）、およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈＥｄｉｔｉｏｎ，２００３，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓを参照のこと）。

本明細書に記載の任意の化合物については、治療有効量は、最初に細胞培養アッセイから決定され得る。標的濃度は、本明細書に記載の方法または当該技術分野で既知の方法を使用して測定される、本明細書に記載の方法を達成することが可能である活性化合物（複数可）の濃度であろう。当該技術分野で周知であるように、ヒトでの使用の治療有効量は、動物モデルからも決定され得る。例えば、ヒトに対する用量は、動物において有効であることが見出されている濃度を達成するように製剤化され得る。ヒトにおける投薬量は、上記のように、化合物の有効性を監視し、投薬量を上方または下方調整することによって調整され得る。上記の方法および他の方法に基づいてヒトにおける最大有効性を達成するように用量を調整することは、十分に当業者の能力の範囲内である。

本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、上記のように、障害を改善するのに十分な治療薬の量を指す。例えば、所与のパラメータについて、治療有効量は、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、９０％、または少なくとも１００％の増加または減少を示すであろう。治療有効性は、「倍」増加または減少としても表され得る。例えば、治療有効量は、対照よりも少なくとも１．２倍、１．５倍、２倍、５倍、またはそれ以上効果的であり得る。

投与量は、患者の必要条件および使用される化合物に応じて異なり得る。本開示との関連で、患者に投与される用量は、有益な治療応答を患者に経時的にもたらすのに十分であるべきである。用量のサイズは、任意の有害な副作用の存在、性質、および程度によっても決定されるであろう。特定の状況に対する適切な投薬量の決定は、当業者の能力の範囲内である。一般に、治療は、化合物の最適な用量未満のより少ない投薬量で開始される。その後、投薬量は、環境下で最適な効果に達するまでわずかな増分だけ増加する。投薬量および間隔は、治療される特定の臨床的適応に有効な投与された化合物のレベルを提供するように個別に調整され得る。これにより、個体の病状の重症度にふさわしい治療レジメンが提供されるであろう。

本明細書で使用される場合、「投与すること」という用語は、対象への、経口投与、坐薬としての投与、局所接触、静脈内、非経口、腹腔内、筋肉内、病巣内、髄腔内、鼻腔内、もしくは皮下投与、または徐放デバイス、例えば、小型浸透圧ポンプの移植を意味する。投与は、非経口および経粘膜（例えば、口腔、舌下、口蓋、歯肉、経鼻、膣内、直腸内、または経皮）を含む、任意の経路による。非経口投与には、例えば、静脈内、筋肉内、細動脈内、皮内、皮下、腹腔内、脳室内、および頭蓋内投与が含まれる。他の送達様式としては、リポソーム製剤、静脈内注入、経皮パッチ等の使用が挙げられるが、これらに限定されない。実施形態では、投与は、列挙された活性薬剤以外のいかなる活性薬剤の投与も含まない。

「同時投与」とは、本明細書に記載の組成物が、１つ以上のさらなる治療剤の投与と同時に、その直前に、またはその直後に投与されることを意味する。本明細書で提供される化合物は、単独で投与され得るか、または患者に同時投与され得る。同時投与は、個別にまたは組み合わせて（１つより多くの化合物）化合物の同時投与または順次投与を含むよう意図されている。したがって、調製物は、所望の場合、（例えば、代謝分解を減少させるために）他の活性物質と組み合わせられる場合もある。本開示の組成物は、局所経路によって経皮送達され得るか、またはアプリケータスティック、溶液、懸濁液、乳剤、ゲル、クリーム、軟膏、ペースト、ゼリー、塗料、粉末、およびエアロゾルとして製剤化され得る。

本明細書で使用される「細胞」は、そのゲノムＤＮＡを保存または複製するのに十分な代謝または他の機能を果たす細胞を指す。細胞は、例えば、無傷の膜の存在、特定の染料による染色、子孫を産生する能力、または配偶子の場合、第２の配偶子と組み合わせて、生存能力のある子孫を生み出す能力を含む、当該技術分野で周知の方法によって特定され得る。「幹細胞」は、有糸分裂細胞の分裂による自己複製の能力と、組織または器官に分化する可能性とを特徴とする細胞である。哺乳動物幹細胞の中で、胚性幹細胞（ＥＳ細胞）と体性幹細胞（例えば、ＨＳＣ）とは区別され得る。胚性幹細胞は胚盤胞に存在し、胚組織を生じさせるが、体性幹細胞は組織の再生および修復を目的として成体組織に存在する。

「対照」または「対照実験」は、その平易な通常の意味に従って使用され、実験の対象、試薬、または変数を省略する以外は、並行実験などの場合、実験の対象または試薬が処理される実験を指す。場合によっては、対照は、実験的効果を評価する際の比較の基準として使用される。いくつかの実施形態では、対照は、本明細書（実施形態および実施例を含む）に記載の化合物の不在下でのタンパク質の活性の測定値である。

「抗癌剤（Ａｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒａｇｅｎｔ）」および「抗癌剤（ａｎｔｉｃａｎｃｅｒａｇｅｎｔ）」は、それらの平易な通常の意味に従って使用され、抗新生物特性または細胞の成長もしくは増殖を阻害する能力を有する組成物、化合物、薬物、アンタゴニスト、阻害剤、調節因子、ペプチド、タンパク質、核酸または分子を指す。いくつかの実施形態では、抗癌剤は、化学療法薬である。いくつかの実施形態では、抗癌剤は、癌を治療する方法に有用な本明細書で特定される薬剤である。いくつかの実施形態では、抗癌剤は、癌を治療するためにＦＤＡまたは米国以外の国の同様の規制機関によって承認された薬剤である。抗癌剤の例としては、抗アンドロゲン（例えば、カソデックス、フルタミド、ＭＤＶ３１００、またはＡＲＮ－５０９）、ＭＥＫ（例えば、ＭＥＫ１、ＭＥＫ２、またはＭＥＫ１およびＭＥＫ２）阻害剤（例えば、ＸＬ５１８、ＣＩ－１０４０、ＰＤ０３５９０１、セルメチニブ／ＡＺＤ６２４４、ＧＳＫ１１２０２１２／トラメチニブ、ＧＤＣ－０９７３、ＡＲＲＹ－１６２、ＡＲＲＹ－３００、ＡＺＤ８３３０、ＰＤ０３２５９０１、Ｕ０１２６、ＰＤ９８０５９、ＴＡＫ－７３３、ＰＤ３１８０８８、ＡＳ７０３０２６、ＢＡＹ８６９７６６）、アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、イフォスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、メルファラン、メクロレタミン、ウラムスチン、チオテパ、ニトロソウレア、窒素マスタード（例えば、メクロロエタミン、シクロホスファミド、クロラムブシル、メイファラン）、エチレンイミンおよびメチルメラミン（例えば、ヘキサメチルメラミン、チオテパ）、アルキルスルホネート（例えば、ブスルファン）、ニトロソウレア（例えば、カルムスチン、ロムシテン、セムスチン、ストレプトゾシン）、トリアゼン（デカルバジン））、抗代謝物（例えば、５－アザチオプリン、ロイコボリン、カペシタビン、フルダラビン、ゲムシタビン、ペメトレキセド、ラルチトレキセド、葉酸類似体（例えば、メトトレキサート）、ピリミジン類似体（例えば、フルオロウラシル、フロキソウリジン、シタラビン）、プリン類似体（例えば、メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチンなど）、植物アルカロイド（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンデシン、ポドフィロトキシン、パクリタキセル、ドセタキセルなど）、トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、イリノテカン、トポテカン、アムサクリン、エトポシド（ＶＰ１６）、リン酸エトポシド、テニポシドなど）、抗腫瘍抗生物質（例えば、ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、エピルビシン、アクチノマイシン、ブレオマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、プリカマイシンなど）、白金系化合物（例えば、シスプラチン、オキサロプラチン、カルボプラチン）、アントラセンジオン（例えば、ミトキサントロン）、置換尿素（例えば、ヒドロキシ尿素）、メチルヒドラジン誘導体（例えば、プロカルバジン）、副腎皮質抑制剤（例えば、ミトタン、アミノグルテチミド）、エピポドフィロトキシン（例えば、エトポシド）、抗生物質（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン）、酵素（例えば、Ｌ－アスパラギナーゼ）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼシグナル伝達阻害剤（例えば、Ｕ０１２６、ＰＤ９８０５９、ＰＤ１８４３５２、ＰＤ０３２５９０１、ＡＲＲＹ－１４２８８６、ＳＢ２３９０６３、ＳＰ６００１２５、ＢＡＹ４３－９００６、ウォルトマンニン、またはＬＹ２９４００２）、ｍＴＯＲ阻害剤、抗体（例えば、リツキサン）、５－アザ－２’－デオキシシチジン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、エトポシド、ゲムシタビン、イマチニブ（Ｇｌｅｅｖｅｃ．ＲＴＭ．）、ゲルダナマイシン、１７－Ｎ－アリルアミノ－１７－デメトキシゲルダナマイシン（１７－ＡＡＧ）、ボルテゾミブ、トラスツズマブ、アナストロゾール；血管新生阻害剤；抗アンドロゲン、抗エストロゲン；アンチセンスオリゴヌクレオチド；アポトーシス遺伝子調節因子；アポトーシス調節因子；アルギニンデアミナーゼ；ＢＣＲ／ＡＢＬアンタゴニスト；ベータラクタム誘導体；ｂＦＧＦ阻害剤；ビカルタミド；カンプトテシン誘導体；カゼインキナーゼ阻害剤（ＩＣＯＳ）；クロミフェン類似体；シタラビンダクリキシマブ；デキサメタゾン；エストロゲンアゴニスト；エストロゲンアンタゴニスト；エタニダゾール；エトポシドホスフェート；エキセメスタン；ファドロゾール；フィナステリド；フルダラビン；フルオロダウノルニシン塩酸塩；ガドリニウムテキサフィリン；硝酸ガリウム；ゼラチナーゼ阻害剤；ゲムシタビン；グルタチオン阻害剤；ヘプスルファム；免疫刺激剤ペプチド（ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｎｔｐｅｐｔｉｄｅ）；インスリン様成長因子１受容体阻害剤；インターフェロンアゴニスト；インターフェロン；インターロイキン；レトロゾール；白血病阻害因子；白血球アルファインターフェロン；ロイプロリド＋エストロゲン＋プロゲステロン；リュープロレリン；マトリライシン阻害剤；マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤；ＭＩＦ阻害剤；ミフェプリストン；ミスマッチ二本鎖ＲＮＡ；モノクローナル抗体；マイコバクテリア細胞壁抽出物；一酸化窒素調節因子；オキサリプラチン；パノミフェン；ペントロゾール；ホスファターゼ阻害剤；プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤；白金錯体；白金化合物；プレドニゾン；プロテアソーム阻害剤；タンパク質Ａベースの免疫調節因子；プロテインキナーゼＣ阻害剤；タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤；プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤；ｒａｓファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；ｒａｓ阻害剤；ｒａｓ－ＧＡＰ阻害剤；リボザイム；シグナル伝達阻害剤；シグナル伝達調節因子；一本鎖抗原結合タンパク質；幹細胞阻害剤；幹細胞分裂阻害剤；ストロメリシン阻害剤；合成グリコサミノグリカン；タモキシフェンメチオダイド；テロメラーゼ阻害剤；甲状腺刺激ホルモン；翻訳阻害剤；チロシンキナーゼ阻害剤；ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト；ステロイド（例えば、デキサメタゾン）、フィナステリド、アロマターゼ阻害剤、ゴセレリンまたはロイプロリドなどのゴナドトロピン放出ホルモンアゴニスト（ＧｎＲＨ）、アドレノコルチコステロイド（例えば、プレドニゾン）、プロゲスチン（例えば、ヒドロキシプロゲステロンカプロエート、酢酸メゲストロール、酢酸メドロキシプロゲステロン）、エストロゲン（例えば、ジエスリルスチルベストロール、エチニルエストラジオール）、抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン）、アンドロゲン（例えば、プロピオン酸テストステロン、フルオキシメステロン）、抗アンドロゲン（例えば、フルタミド）、免疫刺激剤（例えば、バチルスカルメットゲリン（ＢＣＧ）、レバミソール、インターロイキン－２、アルファ－インターフェロンなど）、モノクローナル抗体（例えば、抗ＣＤ２０、抗ＨＥＲ２、抗ＣＤ５２、抗ＨＬＡ－ＤＲ、および抗ＶＥＧＦモノクローナル抗体）、免疫毒素（例えば、抗ＣＤ３３モノクローナル抗体－カリケアマイシンコンジュゲート、抗ＣＤ２２モノクローナル抗体－シュードモナスエキソトキシンコンジュゲートなど）、放射線免疫療法（例えば、^１１１Ｉｎ、^９０Ｙ、または^１３１Ｉにコンジュゲートした抗ＣＤ２０モノクローナル抗体など）、トリプトリド、ホモハリントンニン、ダクチノマイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、トポテカン、イトラコナゾール、ビンデシン、セリバスタチン、ビンクリスチン、デオキシアデノシン、セルトラリン、ピタバスタチン、イリノテカン、クロファジミン、５－ノニルオキシトリプタミン、ベムラフェニブ、ダブラフェニブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、ＥＧＦＲ阻害剤、表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）を標的とした治療または治療（例えば、Ｉｒｅｓｓａ（商標））、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（商標））、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（商標））、ラパチニブ（Ｔｙｋｅｒｂ（商標））、パニツムマブ（Ｖｅｃｔｉｂｉｘ（商標））、バンデタニブ（Ｃａｐｒｅｌｓａ（商標））、アファチニブ／ＢＩＢＷ２９９２、ＣＩ－１０３３／カネルチニブ、ネラチニブ／ＨＫＩ－２７２、ＣＰ－７２４７１４、ＴＡＫ－２８５、ＡＳＴ－１３０６、ＡＲＲＹ３３４５４３、ＡＲＲＹ－３８０、ＡＧ－１４７８、ダコミチニブ／ＰＦ２９９８０４、ＯＳＩ－４２０／デスメチルエルロチニブ、ＡＺＤ８９３１、ＡＥＥ７８８、ペリチニブ／ＥＫＢ－５６９、ＣＵＤＣ－１０１、ＷＺ８０４０、ＷＺ４００２、ＷＺ３１４６、ＡＧ－４９０、ＸＬ６４７、ＰＤ１５３０３５、ＢＭＳ－５９９６２６）、ソラフェニブ、イマチニブ、スニチニブ、ダサチニブ、ピロロベンゾジアゼピン（例えば、トマイマイシン）、カルボプラチン、ＣＣ－１０６５およびＣＣ－１０６５類似体（アミノ－ＣＢＩを含む）、窒素マスタード（クロラムブシルおよびメルファランなど）、ドラスタチンおよびドラスタチン類似体（オーリスタチンを含む：例えば、モノメチルオーリスタチンＥ）、アントラサイクリン系抗生物質（ドキソルビシン、ダウノルビシンなど）、デュオカルマイシンおよびデュオカルマイシン類似体、エンジイン（ネオカルジノスタチンおよびカリケアマイシンなど）、レプトマイシン誘導体、メイタンシノイドおよびメイタンシノイド類似体（例えば、メルタンシン）、メトトレキサート、マイトマイシンＣ、タキソイド、ビンカアルカロイド（ビンブラスチンおよびビンクリスチンなど）、エポチロン（例えば、エポチロンＢ）、カンプトテシンならびにその臨床類似体であるトポテカンおよびイリノテカンなどが挙げられるが、これらに限定されない。

化合物の「特異的」、「特異的に」、「特異性」などは、細胞内の他のタンパク質に対する作用が最小限であるか全くない状態で、特定の分子標的に対して阻害などの特定の作用を引き起こす化合物の能力を指す。

「求電子化学部分」または「求電子部分」という用語は、その平易な通常の化学的意味に従って使用され、求電子性である化学基（例えば、一価の化学基）を指す。

「不可逆的共有結合」という用語は、当該技術分野におけるその平易な通常の意味に従って使用され、解離の可能性が低い（例えば求電子性化学部分および求核性部分）の原子または分子の間で得られた会合を指す。実施形態では、不可逆的共有結合は、通常の生物学的条件下では容易に解離しない。実施形態では、不可逆的共有結合は、２つの種（例えば、求電子性化学部分および求核性部分）の間の化学反応を通して形成される。

本明細書で使用される場合、「結合することができる」という用語は、標的に測定可能に結合することができる部分（例えば、本明細書に記載の化合物）を指す（例えば、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、Ｅ３ユビキチンリガーゼのシステインと共有結合を形成することができる）。ある部分が標的に結合することができる実施形態では、当該部分は、約１０μＭ、５μＭ、１μＭ、５００ｎＭ、２５０ｎＭ、１００ｎＭ、７５ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、１ｎＭ、または約０．１ｎＭ未満のＫｄと結合することができる。

本明細書で使用される場合、「標的タンパク質分解剤」という用語は、標的タンパク質（例えば、目的のタンパク質）上でタンパク質分解を誘導することができる薬剤（例えば、化合物または組成物）を指す。通常、標的タンパク質分解剤は、Ｅ３リガーゼを特定のタンパク質標的に動員して、プロテアソーム依存的に標的をユビキチン化させ、分解することができる。標的の機能的阻害は分解剤の効力にとって必要ではないので、この戦略は、リガンドが存在するプロテオーム中の任意のタンパク質を標的にして分解する可能性がある（例えば、標的タンパク質結合剤または標的タンパク質分解剤）。

「標的タンパク質結合剤」という用語は、タンパク質（例えば、標的タンパク質）に結合することができる部分を指す。実施形態では、標的タンパク質結合剤は、タンパク質（例えば、標的タンパク質）と複合体を形成する分子または物質である。実施形態では、標的タンパク質結合剤は、タンパク質（例えば、標的タンパク質）と複合体を形成する分子または物質の一価形態である。

「結合剤リンカー」という用語は、標的タンパク質結合剤およびＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤に結合する共有結合リンカーを指す。

本明細書で使用される場合、「Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤」という用語は、Ｅ３ユビキチンリガーゼ（Ｅ３リガーゼ）（例えば、ＲＮＦ４またはＲＮＦ１１４）に測定可能に結合することができる一価の薬剤（例えば、本明細書に記載の一価の化合物）を指す。例えば、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、以下の式を有する化合物の部分または一価形態である：

（Ｉ）式中、Ｒ^２、ｚ２、Ｒ^１、ｚ１、Ｌ^３、およびＲ^４は、本明細書に記載されている通りである、

（ＩＩ）式中、Ｒ^７、ｚ７、Ｒ^５、Ｒ^２、ｚ２、Ｌ^３、Ｒ^４、Ｒ^６、Ｒ^１、およびｚ１は、本明細書に記載されている通りである、または

（ＩＩＩ）式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、およびＲ^１０は、本明細書に記載されている。

本明細書で使用される「共有結合システイン修飾因子部分」という用語は、システインアミノ酸に測定可能に結合することができる一価の求電子性部分を指す。実施形態では、共有結合システイン修飾因子部分は、不可逆的な共有結合を介して結合する。実施形態では、共有結合システイン修飾因子部分は、約１０μＭ、５μＭ、１μＭ、５００ｎＭ、２５０ｎＭ、１００ｎＭ、７５ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１５ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、１ｎＭ、または約０．１ｎＭ未満のＫｄと結合することができる。

ＩＩ．化合物
一態様では、１）標的タンパク質結合剤および２）Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤を含む標的タンパク質分解剤であって、Ｅ３ユビキチンリガーゼが、ヒトＲＮＦ４またはヒトＲＮＦ１１４である、標的タンパク質分解剤が提供される。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼはヒトＲＮＦ４である。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼは、ヒトＲＮＦ１１４である。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、Ｅ３ユビキチンリガーゼのシステインと共有結合を形成することができる。実施形態では、標的タンパク質結合剤およびＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、結合剤リンカーによって共有結合している。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（Ｉ）を有する化合物の部分である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（Ｉ）を有する一価の化合物である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（Ｉ）の一価形態である。

Ｒ^１は独立して、ハロゲン、－ＣＸ^１ _３、－ＣＨＸ^１ _２、－ＣＨ_２Ｘ^１、－ＣＮ、－ＯＲ^１Ｄ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^１Ｃ、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ^１Ｃ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^１ＡＲ^１Ｂ、－Ｎ（Ｏ）_ｍ１、－ＳＯ_ｎ１Ｒ^１Ｄ、－ＳＯ_ｖ１ＮＲ^１ＡＲ^１Ｂ、－ＮＲ^１ＡＲ^１Ｂ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ^１ＡＲ^１Ｂ、－ＮＲ^１ＡＳＯ_２Ｒ^１Ｄ、－ＮＲ^１ＡＣ（Ｏ）Ｒ^１Ｃ、－ＮＲ^１ＡＣ（Ｏ）ＯＲ^１Ｃ、－ＮＲ^１ＡＯＲ^１Ｃ、－ＯＣＸ^１ _３、－ＯＣＨ_２Ｘ^１、－ＯＣＨＸ^１ _２、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基は、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。Ｒ^２は独立して、ハロゲン、－ＣＸ^２ _３、－ＣＨＸ^２ _２、－ＣＨ_２Ｘ^２、－ＣＮ、－ＯＲ^２Ｄ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^２Ｃ、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ^２Ｃ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^２ＡＲ^２Ｂ、－Ｎ（Ｏ）_ｍ２、－ＳＯ_ｎ２Ｒ^２Ｄ、－ＳＯ_ｖ２ＮＲ^２ＡＲ^２Ｂ、－ＮＲ^２ＡＲ^２Ｂ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ^２ＡＲ^２Ｂ、－ＮＲ^２ＡＳＯ_２Ｒ^２Ｄ、－ＮＲ^２ＡＣ（Ｏ）Ｒ^２Ｃ、－ＮＲ^２ＡＣ（Ｏ）ＯＲ^２Ｃ、－ＮＲ^２ＡＯＲ^２Ｃ、－ＯＣＸ^２ _３、－ＯＣＨ_２Ｘ^２、－ＯＣＨＸ^２ _２、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^２置換基は、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。Ｌ^３は、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。Ｒ^３は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＸ^３ _３、－ＣＨＸ^３ _２、－ＣＨ_２Ｘ^３、－ＣＮ、－ＯＲ^３Ｄ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^３Ｃ、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ^３Ｃ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^３ＡＲ^３Ｂ、－Ｎ（Ｏ）_ｍ３、－ＳＯ_ｎ３Ｒ^３Ｄ、－ＳＯ_ｖ３ＮＲ^３ＡＲ^３Ｂ、－ＮＲ^３ＡＲ^３Ｂ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ^３ＡＲ^３Ｂ、－ＮＲ^３ＡＳＯ_２Ｒ^３Ｄ、－ＮＲ^３ＡＣ（Ｏ）Ｒ^３Ｃ、－ＮＲ^３ＡＣ（Ｏ）ＯＲ^３Ｃ、－ＮＲ^３ＡＯＲ^３Ｃ、－ＯＣＸ^３ _３、－ＯＣＨ_２Ｘ^３、－ＯＣＨＸ^３ _２、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合である。Ｒ^４は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＸ^４ _３、－ＣＨＸ^４ _２、－ＣＨ_２Ｘ^４、－ＣＮ、－ＯＲ^４Ｄ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^４Ｃ、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ^４Ｃ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^４ＡＲ^４Ｂ、－Ｎ（Ｏ）_ｍ４、－ＳＯ_ｎ４Ｒ^４Ｄ、－ＳＯ_ｖ４ＮＲ^４ＡＲ^４Ｂ、－ＮＲ^４ＡＲ^４Ｂ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ^４ＡＲ^４Ｂ、－ＮＲ^４ＡＳＯ_２Ｒ^４Ｄ、－ＮＲ^４ＡＣ（Ｏ）Ｒ^４Ｃ、－ＮＲ^４ＡＣ（Ｏ）ＯＲ^４Ｃ、－ＮＲ^４ＡＯＲ^４Ｃ、－ＯＣＸ^４ _３、－ＯＣＨ_２Ｘ^４、－ＯＣＨＸ^４ _２、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいはＥである。Ｅは求電子性部分である。ｚ１は、０～４の整数である。ｚ２は、０～５の整数である。Ｒ^１Ａ、Ｒ^１Ｂ、Ｒ^１Ｃ、Ｒ^１Ｄ、Ｒ^２Ａ、Ｒ^２Ｂ、Ｒ^２Ｃ、Ｒ^２Ｄ、Ｒ^３Ａ、Ｒ^３Ｂ、Ｒ^３Ｃ、Ｒ^３Ｄ、Ｒ^４Ａ、Ｒ^４Ｂ、Ｒ^４Ｃ、およびＲ^４Ｄは各々独立して、水素、－ＣＸ_３、－ＣＮ、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＣＨＸ_２、－ＣＨ_２Ｘ、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、同じ窒素原子に結合しているＲ^１Ａ置換基とＲ^１Ｂ置換基は任意に結合して、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、同じ窒素原子に結合しているＲ^２Ａ置換基とＲ^２Ｂ置換基は任意に結合して、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、同じ窒素原子に結合しているＲ^３Ａ置換基とＲ^３Ｂ置換基は任意に結合して、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、同じ窒素原子に結合しているＲ^４Ａ置換基とＲ^４Ｂ置換基は任意に結合して、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。各Ｘ、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、およびＸ^４は独立して、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、または－Ｉである。ｎ１、ｎ２、ｎ３、およびｎ４は独立して、０～４の整数である。ｍ１、ｍ２、ｍ３、ｍ４、ｖ１、ｖ２、ｖ３、およびｖ４は独立して、１または２である。唯１つのＲ^１、または１つのＲ^２、または１つのＲ^３は、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、Ｒ^１は、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、Ｒ^２は、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、Ｒ^３は、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、１つのＲ^１は独立して、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、１つのＲ^２は独立して、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、１つのＲ^３は独立して、結合剤リンカーへの結合である。１つのＲ^１、または１つのＲ^２、または１つのＲ^３は、結合剤リンカーへの結合である。

実施形態において、Ｒ^３は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＸ^３ _３、－ＣＨＸ^３ _２、－ＣＨ_２Ｘ^３、－ＣＮ、－ＯＲ^３Ｄ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^３Ｃ、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ^３Ｃ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^３ＡＲ^３Ｂ、－Ｎ（Ｏ）_ｍ３、－ＳＯ_ｎ３Ｒ^３Ｄ、－ＳＯ_ｖ３ＮＲ^３ＡＲ^３Ｂ、－ＮＲ^３ＡＲ^３Ｂ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ^３ＡＲ^３Ｂ、－ＮＲ^３ＡＳＯ_２Ｒ^３Ｄ、－ＮＲ^３ＡＣ（Ｏ）Ｒ^３Ｃ、－ＮＲ^３ＡＣ（Ｏ）ＯＲ^３Ｃ、－ＮＲ^３ＡＯＲ^３Ｃ、－ＯＣＸ^３ _３、－ＯＣＨ_２Ｘ^３、－ＯＣＨＸ^３ _２、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合である。Ｒ^３Ａ、Ｒ^３Ｂ、Ｒ^３Ｃ、Ｒ^３Ｄ、Ｘ^３、ｎ３、ｍ３、およびｖ３は、実施形態を含む本明細書に記載されている通りである。

実施形態において、Ｒ^４は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＸ^４ _３、－ＣＨＸ^４ _２、－ＣＨ_２Ｘ^４、－ＣＮ、－ＯＲ^４Ｄ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^４Ｃ、－Ｃ（Ｏ）－ＯＲ^４Ｃ、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^４ＡＲ^４Ｂ、－Ｎ（Ｏ）_ｍ４、－ＳＯ_ｎ４Ｒ^４Ｄ、－ＳＯ_ｖ４ＮＲ^４ＡＲ^４Ｂ、－ＮＲ^４ＡＲ^４Ｂ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＲ^４ＡＲ^４Ｂ、－ＮＲ^４ＡＳＯ_２Ｒ^４Ｄ、－ＮＲ^４ＡＣ（Ｏ）Ｒ^４Ｃ、－ＮＲ^４ＡＣ（Ｏ）ＯＲ^４Ｃ、－ＮＲ^４ＡＯＲ^４Ｃ、－ＯＣＸ^４ _３、－ＯＣＨ_２Ｘ^４、－ＯＣＨＸ^４ _２、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいはＥである。Ｅは、求電子性部分である。Ｒ^４Ａ、Ｒ^４Ｂ、Ｒ^４Ｃ、Ｒ^４Ｄ、Ｘ^４、ｎ４、ｍ４、およびｖ４は、実施形態を含む本明細書に記載されている通りである。

実施形態では、Ｒ^１は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基は、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。実施形態では、Ｒ^２は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^２置換基は、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。実施形態では、Ｌ^３は、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ^４は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいはＥである。Ｅは求電子性部分である。ｚ１は、０～４の整数である。ｚ２は、０～５の整数である。唯１つのＲ^１または１つのＲ^２は、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、Ｒ^１は、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、Ｒ^２は、結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（ＩＩ）を有する化合物の部分である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（ＩＩ）を有する一価の化合物である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（ＩＩ）の一価形態である。

Ｒ^１、Ｒ^２、Ｌ^３、ｚ１、ｚ２およびＲ^４は、本明細書に記載の通りである。

Ｒ^５およびＲ^６は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合である。Ｒ^７は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^７置換基が、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。記号ｚ７は、０～１０の整数である。実施形態では、唯１つのＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^５、Ｒ^６またはＲ^７は独立して、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、Ｒ^１は独立して、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、Ｒ^２は独立して、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、Ｒ^３は独立して、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、Ｒ^５は独立して、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、Ｒ^６は独立して、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、Ｒ^７は独立して、結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（ＩＩＩ）を有する化合物の部分である。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６およびＲ^７は、本明細書に記載の通りである。Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合である。唯１つのＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９またはＲ^１０は、結合剤リンカーへの結合であり、

は、単結合または二重結合である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（ＩＩＩ）を有する一価の化合物である。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は、本明細書に記載の通りである。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（ＩＩＩ）の一価形態である。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は、本明細書に記載の通りである。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（ＩＩＩａ）の一価形態である。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は、本明細書に記載の通りである。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（ＩＩＩ－１）の一価形態である。Ｒ^１、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、ｚ１およびｚ７は、本明細書に記載の通りである。Ｒ^２ｗは独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいは結合剤リンカーへの結合である。記号ｚ３は、０～３の整数である。唯１つのＲ^１、Ｒ^２ｗ、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９またはＲ^１０は、結合剤リンカーへの結合であり、

は、単結合または二重結合である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（ＩＩＩａ－１）の一価形態である。Ｒ^１、Ｒ^２ｗ、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、ｚ１、ｚ３およびｚ７は、本明細書に記載の通りである。

実施形態では、Ｒ^３は独立して、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、Ｒ^８は独立して、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、Ｒ^９は独立して、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、Ｒ^１０は独立して、結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｒ^２ｗは独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^２１置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、Ｒ^２１置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、Ｒ^２１置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^２１置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ２１置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、またはＲ^２１置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいは結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｒ^２ｗは独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、置換Ｒ^２ｗ（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換され、置換Ｒ^２ｗが、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^２ｗは、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^２ｗは、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^２ｗは、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｒ^２ｗは独立して、水素、または置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^２ｗは独立して、水素である。実施形態では、Ｒ^２ｗは独立して、置換または非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^２ｗは独立して、非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^２ｗは独立して、非置換メチルである。実施形態では、Ｒ^２ｗは独立して、非置換エチルである。実施形態では、Ｒ^２ｗは独立して、非置換ｎ－プロピルである。実施形態では、Ｒ^２ｗは独立して、非置換イソプロピルである。実施形態では、Ｒ^２ｗは独立して、非置換ｎ－ブチルである。実施形態では、Ｒ^２ｗは独立して、非置換ｔｅｒｔ－ブチルである。

実施形態では、Ｒ^３は独立して、置換または非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、非置換メチルである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、非置換エチルである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、非置換ｎ－プロピルである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、非置換イソプロピルである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、非置換ｎ－ブチルである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、非置換ｔｅｒｔ－ブチルである。

実施形態では、ｚ３は、０である。実施形態では、ｚ３は、１である。実施形態では、ｚ３は、２である。実施形態では、ｚ３は、３である。

実施形態では、Ｒ^７は独立して、置換または非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^７は独立して、非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^７は独立して、非置換メチルである。実施形態では、Ｒ^７は独立して、非置換エチルである。実施形態では、Ｒ^７は独立して、非置換ｎ－プロピルである。実施形態では、Ｒ^７は独立して、非置換イソプロピルである。実施形態では、Ｒ^７は独立して、非置換ｎ－ブチルである。実施形態では、Ｒ^７は独立して、非置換ｔｅｒｔ－ブチルである。

実施形態では、Ｒ^８は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいは結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｒ^８は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリール、または結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、置換Ｒ^８（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^８が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^８は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^８は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^８は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｒ^８は独立して、水素、または置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^８は独立して、水素である。実施形態では、Ｒ^８は独立して、置換または非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^８は独立して、非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^８は独立して、非置換メチルである。実施形態では、Ｒ^８は独立して、非置換エチルである。実施形態では、Ｒ^８は独立して、非置換ｎ－プロピルである。実施形態では、Ｒ^８は独立して、非置換イソプロピルである。実施形態では、Ｒ^８は独立して、非置換ｎ－ブチルである。実施形態では、Ｒ^８は独立して、非置換ｔｅｒｔ－ブチルである。

実施形態では、Ｒ^９は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいは結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｒ^９は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリール、または結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、置換Ｒ^９（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^９が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^９は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^９は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^９は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｒ^９は独立して、水素、または置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^９は独立して、水素である。実施形態では、Ｒ^９は独立して、置換または非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^９は独立して、非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^９は独立して、非置換メチルである。実施形態では、Ｒ^９は独立して、非置換エチルである。実施形態では、Ｒ^９は独立して、非置換ｎ－プロピルである。実施形態では、Ｒ^９は独立して、非置換イソプロピルである。実施形態では、Ｒ^９は独立して、非置換ｎ－ブチルである。実施形態では、Ｒ^９は独立して、非置換ｔｅｒｔ－ブチルである。

実施形態では、Ｒ^１０は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいは結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｒ^１０は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリール、または結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、置換Ｒ^１０（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^１０が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^１０は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^１０は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^１０は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｒ^１０は独立して、水素、または置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^１０は独立して、水素である。実施形態では、Ｒ^１０は独立して、置換または非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^１０は独立して、非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^１０は独立して、非置換メチルである。実施形態では、Ｒ^１０は独立して、非置換エチルである。実施形態では、Ｒ^１０は独立して、非置換ｎ－プロピルである。実施形態では、Ｒ^１０は独立して、非置換イソプロピルである。実施形態では、Ｒ^１０は独立して、非置換ｎ－ブチルである。実施形態では、Ｒ^１０は独立して、非置換ｔｅｒｔ－ブチルである。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

の一価形態であり、式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は、本明細書に記載されている通りである。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

の一価形態である。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

の一価形態であり、式中、Ｒ^１、Ｒ^２ｗ、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、ｚ１、ｚ３およびｚ７は、本明細書に記載されている通りである。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

の一価形態を有する化合物の部分であり、式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は、本明細書に記載されている通りである。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

の一価形態を有する化合物の部分である。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する化合物の部分である。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は、本明細書に記載の通りである。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する一価の化合物であり、式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は、本明細書に記載されている通りである。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する一価の化合物である。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する一価の化合物である。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は、本明細書に記載の通りである。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

の一価形態であり、式中、Ｌ^３およびＲ^４は、本明細書に記載されている通りである。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する化合物の部分であり、式中、Ｌ^３およびＲ^４は、本明細書に記載されている通りである。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する一価の化合物であり、式中、Ｌ^３およびＲ^４は、本明細書に記載されている通りである。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有し、式中、Ｌ^３およびＲ^４は、本明細書に記載されている通りである。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

実施形態では、Ｒ^１は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^１は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、または置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、置換Ｒ^１（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^１が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^１は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^１は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^１は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｒ^１は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^１１置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、Ｒ^１１置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、Ｒ^１１置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^１１置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^１１置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、またはＲ^１１置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基は、任意に結合して、Ｒ^１１置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^１１置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^１１置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、またはＲ^１１置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）を形成してもよい。

実施形態では、Ｒ^１は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^１１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^１１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基は、任意に結合して、Ｒ^１１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^１１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールを形成してもよい。

実施形態では、Ｒ^１は独立して、ハロゲンである。実施形態では、Ｒ^１は独立して、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^１は独立して、ハロゲンである。実施形態では、Ｒ^１は、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。

Ｒ^１１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^１１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^１１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、または置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、置換Ｒ^１１（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^１１が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^１１は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^１１は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^１１は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｒ^１１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^１２置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、Ｒ^１２置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、Ｒ^１２置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^１２置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^１２置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、またはＲ^１２置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。実施形態では、Ｒ^１１は、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^１１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^１２置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、、Ｒ^１２置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^１２置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^１２置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^１２置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^１２置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールである。実施形態では、Ｒ^１１は、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。

Ｒ^１２は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^１２は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^１２は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^２は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^２は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、または置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、置換Ｒ^２（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^２が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^２は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^２は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^２は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｒ^２は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^２１置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、Ｒ^２１置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、Ｒ^２１置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^２１置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^２１置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、またはＲ^２１置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）であり、２つのＲ^２置換基は、任意に結合して、Ｒ２１置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^２１置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^２１置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、またはＲ^２１置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）を形成してもよい。

実施形態では、Ｒ^２は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^２１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^２置換基は、任意に結合して、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^２１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールを形成してもよい。

実施形態では、Ｒ^２は独立して、ハロゲン、－ＣＦ_３、－ＮＯ_２、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_３アルキル、非置換２～３員ヘテロアルキル、または結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^２置換基は、任意に結合して、非置換フェニルを形成してもよい。

実施形態では、Ｒ^２は独立して、ハロゲン、－ＣＦ_３、－ＮＯ_２、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_３アルキル、非置換２～３員ヘテロアルキル、または結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^２置換基は、任意に結合して、非置換フェニルを形成してもよく、Ｒ^２１は独立して－ＯＨである。

実施形態では、Ｒ^２は独立して、ハロゲンである。実施形態では、Ｒ^２は独立して、－Ｃｌである。実施形態では、Ｒ^２は独立して、－Ｂｒである。実施形態では、Ｒ^２は独立して、－Ｉである。実施形態では、Ｒ^２は独立して、－Ｆである。実施形態では、Ｒ^２は独立して、－ＣＦ_３である。実施形態では、Ｒ^２は独立して、－ＮＯ_２である。実施形態では、Ｒ^２は独立して、Ｒ^２１置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^２は独立して、Ｒ^２１置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルであり、Ｒ^２１は独立して、－ＯＨである。実施形態では、Ｒ^２は独立して、－ＣＨ_２ＯＨである。実施形態では、Ｒ^２は独立して、非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^２は独立して、非置換メチルである。実施形態では、Ｒ^２は独立して、非置換エチルである。実施形態では、Ｒ^２は独立して、非置換ｎ－プロピルである。実施形態では、Ｒ^２は独立して、非置換イソプロピルである。実施形態では、Ｒ^２は独立して、非置換ｎ－ブチルである。実施形態では、Ｒ^２は独立して、非置換ｔｅｒｔ－ブチルである。実施形態では、Ｒ^２は独立して、非置換２～４員ヘテロアルキルである。実施形態では、Ｒ^２は独立して、－ＯＣＨ_３である。実施形態では、Ｒ^２は独立して、－ＯＣＨ_２ＣＨ_３である。実施形態では、Ｒ^２は独立して、結合剤リンカーへの結合である。実施形態では、２つのＲ^２置換基は、任意に結合して、非置換フェニルを形成してもよい。

Ｒ^２１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^２１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^２１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、または置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、置換Ｒ^２１（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^２１が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^２１は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^２１は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^２１は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｒ^２１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^２２置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、Ｒ^２２置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、Ｒ^２２置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^２２置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^２２置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、またはＲ^２２置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。実施形態では、Ｒ^２１は、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^２１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^２２置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^２２置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^２２置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^２２置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^２２置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^２２置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールである。

Ｒ^２２は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^２２は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^２２は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^２２は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｌ^３は、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、置換もしくは非置換アルキレン（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキレン（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリーレン（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニレン）、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｌ^３は結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、置換（例えば、少なくとも置換１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキレン、置換された（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリーレン、または置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは低級置換基）もしくは非置換ヘテロアリーレンである。

実施形態では、置換Ｌ^３（例えば、置換アルキレン、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキレン、置換ヘテロシクロアルキレン、置換アリーレン、および／または置換ヘテロアリーレン）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換され、置換Ｌ^３が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｌ^３は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｌ^３は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｌ^３は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｌ^３は、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、Ｒ^３置換もしくは非置換アルキレン（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、Ｒ^３置換もしくは非置換ヘテロアルキレン（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、Ｒ^３置換もしくは非置換シクロアルキレン（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^３置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^３置換もしくは非置換アリーレン（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニレン）、またはＲ^３置換もしくは非置換ヘテロアリーレン（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｌ^３は、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、Ｒ^３置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリーレン、またはＲ^３置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリーレンである。

実施形態では、Ｌ^３は、－Ｎ（Ｒ^３）－である。実施形態では、Ｌ^３は－Ｎ（Ｒ^３）－であり、Ｒ^３は独立して、Ｒ^３１置換メチル、非置換フェニル、もしくは非置換５～６員ヘテロアリールであり、Ｒ^３１は独立して、非置換フェニルもしくは非置換５～６員ヘテロアリールである。実施形態では、Ｌ^３は、

である。実施形態では、Ｌ^３は、

である。実施形態では、Ｌ^３は、－ＣＨ_２ＮＨ－である。

実施形態では、Ｒ^３は独立して、Ｒ^３１置換または非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、Ｒ^３１置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、Ｒ^３１置換メチルである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、Ｒ^３１置換エチルである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、Ｒ^３１置換プロピルである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、Ｒ^３１置換ブチルである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、ハロゲンである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、－Ｆである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、－Ｃｌである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、－Ｂｒである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、－Ｉである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、Ｒ^３１置換または非置換フェニルである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、Ｒ^３１置換フェニルである。実施形態では、Ｒ^３は独立して、

である。実施形態では、Ｒ^３１は独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｈ、－ＣＯＯＨ、またはＲ^３２置換もしくは非置換２～６員ヘテロアルキルである。実施形態では、Ｒ^３１は独立して、－Ｃ（Ｏ）Ｈである。実施形態では、Ｒ^３１は独立して、－ＣＯＯＨである。実施形態では、Ｒ^３１は独立して、Ｒ^３２置換２～６員ヘテロアルキルである。実施形態ではＲ^３１は独立して、非置換２～６員ヘテロアルキルである。実施形態では、Ｒ^３１は独立して、

である。実施形態では、Ｒ^３１は独立して、Ｒ^３２置換または非置換フェニルである。実施形態では、Ｒ^３１は独立して、非置換フェニルである。実施形態では、Ｒ^３２は独立して、オキソである。

実施形態では、Ｒ^３は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^３は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^３は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、または置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、置換Ｒ^３（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^３が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^３は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^３は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^３は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｒ^３は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^３１置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、Ｒ^３１置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、Ｒ^３１置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^３１置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^３１置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、またはＲ^３１置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^３は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^３１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^３１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールである。

Ｒ^３１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^３１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^３１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、または置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、置換Ｒ^３１（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^３１が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^３１は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^３１は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^３１は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｒ^３１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^３２置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、Ｒ^３２置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、Ｒ^３２置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^３２置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^３２置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、またはＲ^３２置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^３１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^３２置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^３２置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールである。

Ｒ^３２は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^３２は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^３２は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^３２は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^４は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいは結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｒ^４は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリール、または結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、置換Ｒ^４（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^４が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^４は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^４は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^４は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｒ^４は独立して、水素、または置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^４は独立して、水素である。実施形態では、Ｒ^４は独立して、置換または非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^４は独立して、非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^４は独立して、非置換メチルである。実施形態では、Ｒ^４は独立して、非置換エチルである。実施形態では、Ｒ^４は独立して、非置換ｎ－プロピルである。実施形態では、Ｒ^４は独立して、非置換イソプロピルである。実施形態では、Ｒ^４は独立して、非置換ｎ－ブチルである。実施形態では、Ｒ^４は独立して、非置換ｔｅｒｔ－ブチルである。実施形態では、Ｒ^４は独立して、Ｅであり、Ｅは、実施形態を含む本明細書に記載される通りである。

実施形態では、Ｒ^４は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^４１置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、Ｒ^４１置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、Ｒ^４１置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^４１置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^４１置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、またはＲ^４１置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいはＥである。

実施形態では、Ｒ^４は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^４１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^４１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいはＥである。

Ｒ^４１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^４１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^４１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、または置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、置換Ｒ^４１（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^４１が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^４１は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^４１は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^４１は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｒ^４１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^４２置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、Ｒ^４２置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、Ｒ^４２置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^４２置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^４２置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、またはＲ^４２置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^４１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^４２置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^４２置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールである。

Ｒ^４２は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^４２は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^４２は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｅは、共有結合システイン修飾因子部分である。

実施形態では、Ｅは、

である。Ｒ^１５、Ｒ^１６、Ｒ^１７およびＲ^１８は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。Ｘ^１７は、ハロゲンである。実施形態では、Ｘ^１７は、－Ｆである。実施形態では、Ｘ^１７は、－Ｃｌである。

実施形態では、Ｅは、

である。Ｒ^１５、Ｒ^１６およびＲ^１７は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。Ｘ^１７は、ハロゲンである。実施形態では、Ｘ^１７は、－Ｆである。実施形態では、Ｘ^１７は、－Ｃｌである。

実施形態では、Ｒ^１５、Ｒ^１６、およびＲ^１７は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^１８は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^１５、Ｒ^１６、Ｒ^１７およびＲ^１８は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、または置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^１５、Ｒ^１６およびＲ^１７は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、または置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、置換Ｒ^１５（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^１５が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^１５は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^１５は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^１５は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、置換Ｒ^１６（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^１６が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^１６は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^１６は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^１６は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、置換Ｒ^１７（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^１７が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^１７は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^１７は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^１７は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、置換Ｒ^１８（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^１８が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^１８は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^１８は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^１８は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｒ^１５、Ｒ^１６、Ｒ^１７およびＲ^１８は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^１５、Ｒ^１６およびＲ^１７は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｅは、

であり、Ｒ^１５、Ｒ^１６、Ｒ^１７およびＲ^１８は独立して、水素である。

実施形態では、Ｅは、

であり、Ｒ^１５、Ｒ^１６およびＲ^１７は独立して、水素である。実施形態では、Ｅは、

であり、Ｒ^１７は独立して、－Ｃｌである。

実施形態では、－Ｌ^３－Ｒ^４は、

である。実施形態では、－Ｌ^３－Ｒ^４は、

である。実施形態では、－Ｌ^３－Ｒ^４は、

である。

実施形態では、ｚ１は、０～２の整数である。実施形態では、ｚ２は、０～２の整数である。実施形態では、ｚ１は、０である。実施形態では、ｚ１は、１である。実施形態では、ｚ１は、２である。実施形態では、ｚ１は、３である。実施形態では、ｚ１は、４である。実施形態では、ｚ２は、０である。実施形態では、ｚ２は、１である。実施形態では、ｚ２は、２である。実施形態では、ｚ２は、３である。実施形態では、ｚ２は、４である。実施形態では、ｚ２は、５である。

実施形態では、ｚ２は１であり、Ｒ^２は、結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｒ^７は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいは結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｒ^７は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリール、または結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、置換Ｒ^７（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^７が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^７は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^７は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^７は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^７は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基、または２つのＲ^２置換基、または２つのＲ^７置換基は、任意に結合して、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールを形成してもよい。

実施形態では、Ｒ^７は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^５１置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４もしくはＣ_１－Ｃ_２）、Ｒ^５１置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、Ｒ^５１置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^５１置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^５１置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、またはＲ^５１置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^７置換基は、任意に結合して、Ｒ^５１置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^５１置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^５１置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、またはＲ^５１置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）を形成してもよい。

実施形態では、Ｒ^７は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^７置換基が、任意に結合して、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールを形成してもよい。

実施形態では、Ｒ^５は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいは結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｒ^５は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリール、または結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、置換Ｒ^５（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^５が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^５は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^５は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^５は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｒ^５は独立して、水素、または置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^５は独立して、水素である。実施形態では、Ｒ^５は独立して、置換または非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^５は独立して、非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^５は独立して、非置換メチルである。実施形態では、Ｒ^５は独立して、非置換エチルである。実施形態では、Ｒ^５は独立して、非置換ｎ－プロピルである。実施形態では、Ｒ^５は独立して、非置換イソプロピルである。実施形態では、Ｒ^５は独立して、非置換ｎ－ブチルである。実施形態では、Ｒ^５は独立して、非置換ｔｅｒｔ－ブチルである。

実施形態では、Ｒ^６は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０、もしくはフェニル）、または置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいは結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｒ^６は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリール、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリール、または結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、置換Ｒ^６（例えば、置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、および／または置換ヘテロアリール）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｒ^６が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｒ^６は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^６は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｒ^６は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｒ^６は独立して、水素、または置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^６は独立して、水素である。実施形態では、Ｒ^６は独立して、置換または非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^６は独立して、非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキルである。実施形態では、Ｒ^６は独立して、非置換メチルである。実施形態では、Ｒ^６は独立して、非置換エチルである。実施形態では、Ｒ^６は独立して、非置換ｎ－プロピルである。実施形態では、Ｒ^６は独立して、非置換イソプロピルである。実施形態では、Ｒ^６は独立して、非置換ｎ－ブチルである。実施形態では、Ｒ^６は独立して、非置換ｔｅｒｔ－ブチルである。

実施形態では、Ｒ^５およびＲ^６は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^５１置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、Ｒ^５１置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、Ｒ^５１置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^５１置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^５１置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、またはＲ^５１置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいは結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｒ^５およびＲ^６は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合である。

Ｒ^５１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^５１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^５１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、Ｒ^５１置換もしくは非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、Ｒ^５１置換もしくは非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^５１置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^５１置換もしくは非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０またはフェニル）、もしくはＲ^５１置換もしくは非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、または結合剤リンカーへの結合であり、唯１つのＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９またはＲ^１０は、結合剤リンカーへの結合であり、Ｒ^５１は独立してオキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、もしくはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、または結合剤リンカーへの結合であり、唯１つのＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９またはＲ^１０は、結合剤リンカーへの結合であり、Ｒ^５１は独立してオキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールである。

実施形態では、結合剤リンカーは、Ｌ^１１－Ｌ^１２－Ｌ^１３－Ｌ^１４である。Ｌ^１１は、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤に直接接続されている。

Ｌ^１１は、結合、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン、あるいはバイオコンジュゲートリンカーである。

Ｌ^１２、Ｌ^１３およびＬ^１４は独立して、結合、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン、あるいはバイオコンジュゲートリンカーである。

実施形態では、Ｌ^１１は、結合、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、置換もしくは非置換アルキレン（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキレン（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリーレン（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニレン）、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいはバイオコンジュゲートリンカーである。

実施形態では、Ｌ^１１は、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン、あるいはバイオコンジュゲートリンカーである。

実施形態では、Ｌ^１１は、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、置換もしくは非置換アルキレン（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキレン（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリーレン（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニレン）、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいはバイオコンジュゲートリンカーである。

実施形態では、Ｌ^１１は、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、Ｒ^６１置換もしくは非置換アルキレン（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、Ｒ^６１置換もしくは非置換ヘテロアルキレン（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、Ｒ^６１置換もしくは非置換シクロアルキレン（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^６１置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^６１置換もしくは非置換アリーレン（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニレン）、またはＲ^６１置換もしくは非置換ヘテロアリーレン（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいはバイオコンジュゲートリンカーである。実施形態では、Ｌ^１１は、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、非置換アルキレン（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、非置換ヘテロアルキレン（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、非置換シクロアルキレン（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、非置換ヘテロシクロアルキレン（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、非置換アリーレン（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニレン）、または非置換ヘテロアリーレン（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいはバイオコンジュゲートリンカーである。

実施形態では、Ｌ^１１は、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_２０アルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換２～２０員ヘテロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリーレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリーレン、またはバイオコンジュゲートリンカーである。実施形態では、Ｌ^１１は、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、非置換アルキレン、非置換ヘテロアルキレン、非置換シクロアルキレン、非置換ヘテロシクロアルキレン、非置換アリーレン、非置換ヘテロアリーレン、またはバイオコンジュゲートリンカーである。

実施形態では、Ｌ^１１は、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリーレン、または置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリーレン、あるいはバイオコンジュゲートリンカーである。

実施形態では、置換Ｌ^１１（例えば、置換アルキレン、置換ヘテロアルキレン、置換シクロアルキレン、置換ヘテロシクロアルキレン、置換アリーレン、および／または置換ヘテロアリーレン）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｌ^１１が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｌ^１１は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｌ^１１は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｌ^１１は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｌ^１２、Ｌ^１３およびＬ^１４は独立して、結合、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、Ｒ^６１置換もしくは非置換アルキレン（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、Ｒ^６１置換もしくは非置換ヘテロアルキレン（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、Ｒ^６１置換もしくは非置換シクロアルキレン（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、Ｒ^６１置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、Ｒ^６１置換もしくは非置換アリーレン（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニレン）、またはＲ^６１置換もしくは非置換ヘテロアリーレン（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）、あるいはバイオコンジュゲートリンカーである。

実施形態では、Ｌ^１２、Ｌ^１３およびＬ^１４は独立して、結合、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_２０アルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換２～２０員ヘテロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリーレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリーレン、またはバイオコンジュゲートリンカーである。実施形態では、Ｌ^１２、Ｌ^１３およびＬ^１４は独立して、結合、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、非置換アルキレン、非置換ヘテロアルキレン、非置換シクロアルキレン、非置換ヘテロシクロアルキレン、非置換アリーレン、非置換ヘテロアリーレン、またはバイオコンジュゲートリンカーである。

実施形態では、Ｌ^１２は独立して、結合、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン、あるいはバイオコンジュゲートリンカーである。

実施形態では、置換Ｌ^１２（例えば、置換アルキレン、置換ヘテロアルキレン、置換シクロアルキレン、置換ヘテロシクロアルキレン、置換アリーレン、および／または置換ヘテロアリーレン）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｌ^１２が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｌ^１２は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｌ^１２は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｌ^１２は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｌ^１３は独立して、結合、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン、あるいはバイオコンジュゲートリンカーである。

実施形態では、置換Ｌ^１３（例えば、置換アルキレン、置換ヘテロアルキレン、置換シクロアルキレン、置換ヘテロシクロアルキレン、置換アリーレン、および／または置換ヘテロアリーレン）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｌ^１３が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｌ^１３は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｌ^１３は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｌ^１３は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｌ^１４は独立して、結合、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン、あるいはバイオコンジュゲートリンカーである。

実施形態では、置換Ｌ^１４（例えば、置換アルキレン、置換ヘテロアルキレン、置換シクロアルキレン、置換ヘテロシクロアルキレン、置換アリーレン、および／または置換ヘテロアリーレン）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｌ^１４が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｌ^１４は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｌ^１４は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｌ^１４は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

Ｒ^６１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、または非置換ヘテロアリールである。

実施形態では、Ｒ^６１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換アルキル（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、非置換ヘテロアルキル（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、非置換シクロアルキル（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、非置換ヘテロシクロアルキル（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、非置換アリール（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニル）、または非置換ヘテロアリール（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｒ^６１は独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールである。

実施形態では、結合剤リンカーは式：

を有し、ｐ１は１～６の整数である。実施形態では、結合剤リンカーは式：

を有し、ｐ１は１～６の整数である。実施形態では、ｐ１は、３である。実施形態では、結合剤リンカーは、式：

を有する。実施形態では、結合剤リンカーは、式：

を有する。実施形態では、結合剤リンカーは、非置換Ｃ_１－Ｃ_１２アルキレンである。実施形態では、結合剤リンカーは、非置換Ｃ_１－Ｃ_１０アルキレンである。実施形態では、結合剤リンカーは、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキレンである。実施形態では、結合剤リンカーは、非置換Ｃ_２－Ｃ_１０アルキレンである。実施形態では、結合剤リンカーは、非置換Ｃ_２－Ｃ_６アルキレンである。実施形態では、結合剤リンカーは、非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキレンである。実施形態では、結合剤リンカーは、非置換Ｃ_１アルキレンである。実施形態では、結合剤リンカーは、非置換Ｃ_２アルキレンである。実施形態では、結合剤リンカーは、非置換Ｃ_３アルキレンである。実施形態では、結合剤リンカーは、非置換Ｃ_４アルキレンである。

実施形態では、結合剤リンカーは式：

を有する。実施形態では、結合剤リンカーは、式：

実施形態では、ｚ７は、０～２の整数である。実施形態では、ｚ７は、０である。実施形態では、ｚ７は、１である。実施形態では、ｚ７は、２である。実施形態では、ｚ７は、３である。実施形態では、ｚ７は、４である。実施形態では、ｚ７は、５である。実施形態では、ｚ７は、６である。実施形態では、ｚ７は、７である。実施形態では、ｚ７は、８である。実施形態では、ｚ７は、９である。実施形態では、ｚ７は、１０である。

実施形態では、標的タンパク質結合剤は、疾患に関連する標的タンパク質に結合することができる。実施形態では、標的タンパク質結合剤は、

であり、標的タンパク質結合剤は、ＢＲＤ４に結合する。

一態様では、式：

を有する化合物が提供され、Ｒ^１、Ｒ^２、ｚ１、ｚ２、Ｌ^３およびＲ^４は、本明細書に記載されている通りである。

一態様では、式：

を有する化合物が提供され、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｌ^３、ｚ１、ｚ２、ｚ７およびＲ^４は、本明細書に記載されている通りである。

一態様では、式：

を有する化合物が提供され、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は、本明細書に記載されている通りである。

一態様では、式：

一態様では、式：

を有する化合物が提供され、Ｒ^１、Ｒ^２ｗ、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、ｚ１、ｚ３およびｚ７は、本明細書に記載されている通りである。

一態様では、式：

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

の一価形態である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

の一価形態である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

の一価形態である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する。実施形態では、Ｒ^４は独立して、Ｅであり、Ｅは、実施形態を含む本明細書に記載される通りである。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

を有する。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、以下の式の一価形態である：

。

実施形態では、標的タンパク質分解剤は、以下の式を有する：

。

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実施形態では、標的タンパク質分解剤は、本明細書（例えば、一態様では、実施形態、実施例、表、図、または特許請求の範囲）に記載の化合物である。実施形態では、化合物は、本明細書（例えば、一態様では、実施形態、実施例、表、図、または特許請求の範囲）に記載の化合物である。実施形態では、化合物は、本明細書（例えば、一態様では、実施形態、実施例、表、図、または特許請求の範囲）に記載の標的タンパク質分解剤である。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、本明細書（例えば、一態様では、実施形態、実施例、表、図、または特許請求の範囲）に記載の化合物の一価形態である。実施形態では、標的タンパク質結合剤は、本明細書（例えば、一態様では、実施形態、実施例、表、図、または特許請求の範囲）に記載の化合物の一価形態である。

ＩＩＩ．薬学的組成物
一態様では、実施形態を含む本明細書に記載されるような化合物（本明細書に記載されるような標的タンパク質分解剤）と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む薬学的組成物が提供される。実施形態では、本明細書に記載されるような化合物は、治療有効量で含まれる。

薬学的組成物の実施形態では、化合物またはその薬学的に許容される塩は、治療有効量で含まれる。

薬学的組成物の実施形態では、薬学的組成物は、第２の薬剤（例えば、治療薬）を含む。薬学的組成物の実施形態では、薬学的組成物は、第２の薬剤（例えば、治療薬）を治療有効量で含む。薬学的組成物の実施形態では、第２の薬剤は、癌を治療するために薬剤である。実施形態では、第２の薬剤は、抗癌剤である。実施形態では、第２の薬剤は、化学療法薬である。実施形態では、第２の薬剤は、抗炎症剤である。実施形態では、投与することは、列挙される活性薬剤（例えば、本明細書に記載の化合物）以外のいずれの活性薬剤の投与も含まない。

薬学的組成物は、本明細書に開示される調節因子の光学異性体、ジアステレオマー、または薬学的に許容される塩を含み得る。薬学的組成物に含まれる化合物は、担体部分に共有結合していてもよい。あるいは、薬学的組成物に含まれる化合物は、担体部分に共有結合していない。

一態様では、標的タンパク質分解剤（例えば、本明細書に記載されるようなもの、または本明細書に記載される化合物）と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む薬学的組成物が提供される。

実施形態では、薬学的組成物は、有効量の標的タンパク質分解剤を含む。実施形態では、薬学的組成物は、治療有効量の標的タンパク質分解剤を含む。実施形態では、薬学的組成物は、第２の薬剤を含む。薬学的組成物の実施形態では、薬学的組成物は、第２の薬剤を治療有効量で含む。

ＩＶ．使用法
一態様では、細胞タンパク質のレベルを低下させる（例えば、対照と比較して低下させる）方法であって、細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させることを含む、方法が提供される。実施形態では、標的タンパク質分解剤は、本明細書に記載の化合物である。

一態様では、細胞タンパク質のレベルを低下させる（例えば、対照と比較して低下させる）方法であって、細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤（例えば、本明細書に記載の化合物、または本明細書に記載のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤）と接触させることを含む、方法が提供される。実施形態では、標的タンパク質分解剤は、本明細書に記載の化合物である。

実施形態では、この方法は、（Ａ）標的タンパク質分解剤に接触する細胞タンパク質をユビキチン化させ、それによってユビキチン化細胞タンパク質を形成するステップと、（Ｂ）ユビキチン化細胞タンパク質をプロテアソームと接触させ、それによってユビキチン化細胞タンパク質－プロテアソーム複合体を形成するステップと、プロテアソームにより細胞タンパク質をタンパク質分解するステップと、をさらに含む。

一態様では、癌を治療する方法であって、癌に関連する細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤（例えば、本明細書に記載の化合物または本明細書に記載のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤）と接触させることを含む、方法が提供される。

一態様では、癌を治療する方法であって、実施形態を含む明細書に記載の標的タンパク質分解剤の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法が提供される。

実施形態では、癌は、乳癌である。実施形態では、癌は、トリプルネガティブ乳癌である。実施形態では、癌は、腎細胞癌である。実施形態では、癌は、濾胞性リンパ腫である。実施形態では、癌は、膠芽細胞腫である。実施形態では、癌は、結腸直腸癌である。実施形態では、癌は、子宮内膜癌である。実施形態では、癌は、肺癌である。実施形態では、癌は、膵臓癌である。実施形態では、癌は、黒色腫である。実施形態では、癌は、急性骨髄性白血病である。実施形態では、癌は、子宮内膜癌である。実施形態では、癌は、非ホジキンリンパ腫である。実施形態では、癌は、マントル細胞リンパ腫である。実施形態では、この方法は、免疫調節を含む。実施形態では、この方法は、癌免疫療法（例えば、免疫刺激剤、免疫毒素、または放射免疫療法）を含む。

一態様では、細胞タンパク質のレベルを低下させる方法であって、細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させ、それにより標的タンパク質分解剤－細胞タンパク質複合体を形成することを含み、標的タンパク質分解剤が、（ｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤と、（ｉｉ）標的タンパク質結合剤と、（ｉｉｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤および標的タンパク質結合剤に直接結合した結合剤リンカーと、を含む、方法が提供される。実施形態では、この方法は、接触の前に、標的タンパク質分解剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤、結合剤リンカーおよび標的タンパク質結合剤を共有結合的に反応させて、標的タンパク質分解剤を生成することによって合成されることをさらに含む。実施形態では、この方法は、合成の前に、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤から同定されることをさらに含む。

一態様では、細胞タンパク質のレベルを低下させる方法であって、細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させ、それにより標的タンパク質分解剤－細胞タンパク質複合体を形成することを含み、標的タンパク質分解剤が、（ｉ）一価のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤と、（ｉｉ）一価の標的タンパク質結合剤と、（ｉｉｉ）一価のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤および一価の標的タンパク質結合剤に直接結合した結合剤リンカーと、を含む、方法が提供される。実施形態では、この方法は、接触の前に、標的タンパク質分解剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤、結合剤リンカーおよび標的タンパク質結合剤を共有結合的に反応させて、標的タンパク質分解剤を生成することによって合成されることをさらに含む。実施形態では、この方法は、合成の前に、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤から同定されることをさらに含む。

一態様では、細胞タンパク質のレベルを低下させる方法であって、細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させ、それにより標的タンパク質分解剤－細胞タンパク質複合体を形成することを含み、標的タンパク質分解剤が、（ｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤（例えば、本明細書に記載の化合物、または本明細書に記載のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤）と、（ｉｉ）標的タンパク質結合剤と、（ｉｉｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤および標的タンパク質結合剤に直接結合した結合剤リンカーと、を含む、方法が提供される。実施形態では、この方法は、接触の前に、標的タンパク質分解剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤、結合剤リンカーおよび標的タンパク質結合剤を共有結合的に反応させて、標的タンパク質分解剤を生成することによって合成されることをさらに含む。実施形態では、この方法は、合成の前に、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤から同定されることをさらに含む。

一態様では、細胞タンパク質のレベルを低下させる方法であって、細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させ、それにより標的タンパク質分解剤－細胞タンパク質複合体を形成することを含み、標的タンパク質分解剤が、（ｉ）一価のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤（例えば、本明細書に記載の化合物、または本明細書に記載のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤）と、（ｉｉ）一価の標的タンパク質結合剤と、（ｉｉｉ）一価のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤および一価の標的タンパク質結合剤に直接結合した結合剤リンカーと、を含む、方法が提供される。実施形態では、この方法は、接触の前に、標的タンパク質分解剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤、結合剤リンカーおよび標的タンパク質結合剤を共有結合的に反応させて、標的タンパク質分解剤を生成することによって合成されることをさらに含む。実施形態では、この方法は、合成の前に、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤から同定されることをさらに含む。

一態様では、細胞タンパク質のレベルを低下させる方法であって、細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させ、それにより細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成することを含み、標的タンパク質分解剤が、（ｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤と、（ｉｉ）標的タンパク質結合剤と、（ｉｉｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤および標的タンパク質結合剤に直接結合した結合剤リンカーと、を含む、方法が提供される。実施形態では、この方法は、接触の前に、標的タンパク質分解剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤、結合剤リンカーおよび標的タンパク質結合剤を共有結合的に反応させて、標的タンパク質分解剤を生成することによって合成されることをさらに含む。実施形態では、この方法は、合成の前に、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤から同定されることをさらに含む。

一態様では、細胞タンパク質のレベルを低下させる方法であって、細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させ、それにより細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成することを含み、標的タンパク質分解剤が、（ｉ）一価のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤と、（ｉｉ）一価の標的タンパク質結合剤と、（ｉｉｉ）一価のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤および一価の標的タンパク質結合剤に直接結合した結合剤リンカーと、を含む、方法が提供される。実施形態では、この方法は、接触の前に、標的タンパク質分解剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤、結合剤リンカーおよび標的タンパク質結合剤を共有結合的に反応させて、標的タンパク質分解剤を生成することによって合成されることをさらに含む。実施形態では、この方法は、合成の前に、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤から同定されることをさらに含む。

一態様では、細胞タンパク質のレベルを低下させる方法であって、細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させ、それにより細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成することを含み、標的タンパク質分解剤が、（ｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤（例えば、本明細書に記載の化合物、または本明細書に記載のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤）と、（ｉｉ）標的タンパク質結合剤と、（ｉｉｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤および標的タンパク質結合剤に直接結合した結合剤リンカーと、を含む、方法が提供される。実施形態では、この方法は、接触の前に、標的タンパク質分解剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤、結合剤リンカーおよび標的タンパク質結合剤を共有結合的に反応させて、標的タンパク質分解剤を生成することによって合成されることをさらに含む。実施形態では、この方法は、合成の前に、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤から同定されることをさらに含む。

一態様では、細胞タンパク質のレベルを低下させる方法であって、細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させ、それにより細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成することを含み、標的タンパク質分解剤が、（ｉ）一価のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤（例えば、本明細書に記載の化合物、または本明細書に記載のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤）と、（ｉｉ）一価の標的タンパク質結合剤と、（ｉｉｉ）一価のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤および一価の標的タンパク質結合剤に直接結合した結合剤リンカーと、を含む、方法が提供される。実施形態では、この方法は、接触の前に、標的タンパク質分解剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤、結合剤リンカーおよび標的タンパク質結合剤を共有結合的に反応させて、標的タンパク質分解剤を生成することによって合成されることをさらに含む。実施形態では、この方法は、合成の前に、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤から同定されることをさらに含む。

実施形態では、この方法は、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、（ｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質を候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤の混合物と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成するステップと、Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体から、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤を、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤として同定するステップと、を含む方法によって同定されることをさらに含む。

実施形態では、この方法は、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、（ｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質を候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤を含む化合物の混合物と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成するステップと、Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体から、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤を含む化合物を、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤を含む化合物として同定するステップと、を含む方法によって同定されることをさらに含む。

実施形態では、この方法は、（ｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質を複数のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成するステップと、Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体から、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤を、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤として同定するステップと、をさらに含む。

実施形態では、この方法は、（ｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質を複数の候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成するステップと、Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体から、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤を、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤として同定するステップと、をさらに含む。

実施形態では、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、共有結合システイン修飾因子部分を含み、Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成するための、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤のＥ３ユビキチンリガーゼタンパク質への共有結合の検出により、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤として同定される。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体の検出は、検出可能な標識または質量分析の使用を含む。実施形態では、標的タンパク質結合剤は、合成の前に同定される。

実施形態では、標的タンパク質結合剤は、（ｉ）細胞タンパク質を候補標的タンパク質結合剤のライブラリーと混合させ、それにより細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成するステップと、（ｉｉ）細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成する標的タンパク質結合剤を同定するステップと、を含む方法によって同定される。実施形態では、細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成する候補標的タンパク質結合剤は、細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体の検出により、標的タンパク質結合剤として同定される。実施形態では、細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体の検出は、検出可能な標識または質量分析の使用を含む。実施形態では、合成の前に、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤を修飾して、共有結合システイン修飾因子部分を除去する（例えば、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、化学反応を受けて、共有結合システイン修飾因子部分を除去する）。

実施形態では、標的タンパク質結合剤は、（ｉ）細胞タンパク質を候補標的タンパク質結合剤を含む化合物のライブラリーと混合させ、それにより細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成するステップと、（ｉｉ）細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成する標的タンパク質結合剤を含む化合物を同定するステップと、を含む方法によって同定される。実施形態では、細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成する候補標的タンパク質結合剤を含む化合物は、細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体の検出により、標的タンパク質結合剤を含む化合物として同定される。実施形態では、細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体の検出は、検出可能な標識または質量分析の使用を含む。実施形態では、合成の前に、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤を修飾して、共有結合システイン修飾因子部分を除去する（例えば、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、化学反応を受けて、共有結合システイン修飾因子部分を除去する）。

実施形態では、細胞タンパク質は、ＢＲＤ４である。実施形態では、ＢＲＤ４のレベルは、標的タンパク質分解剤が存在しない場合と比較して、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００を超えて、または１０，０００倍を超えて低下する。実施形態では、ＢＲＤ４のレベルは、標的タンパク質分解剤が存在しない場合と比較して、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、または約１０，０００倍低下する。実施形態では、ＢＲＤ４のレベルは、標的タンパク質分解剤が存在しない場合と比較して、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００、２０００、３０００、４０００、５０００、６０００、７０００、８０００、９０００、または１０，０００倍低下する。

（式中、Ｌ^１００は、共有結合リンカー（例えば、結合、－Ｓ（Ｏ）_２－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン）であり、Ｒ^１００は、検出可能な部分である）を有する化合物と接触させることと、（Ｃ）得られたステップＢの第１のサンプルを第１の検出可能な薬剤と接触させ、得られたステップＢの第２のサンプルを第２の検出可能な薬剤と接触させることと、（Ｄ）選択されたタンパク質に結合した第１の検出可能な薬剤および第２の検出可能な薬剤のレベルを測定することと、（Ｅ）細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成することができる細胞タンパク質に結合した第１の検出可能な薬剤および第２の検出可能な薬剤のレベルの差を測定することにより、細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体中の細胞タンパク質を同定することと、を含む方法が提供される。実施形態では、この方法は、（Ａ）第１または第２の検出可能な薬剤のうちの一方が、原子の軽い同位体を含み、第１または第２の検出可能な薬剤のうちの他方が、原子の重い同位体を含み、（Ｂ）選択されたタンパク質の第１の検出可能な薬剤および第２の検出可能な薬剤のレベルが、液体クロマトグラフィー質量分析によって測定され、（Ｃ）標的タンパク質結合剤に結合することができる細胞タンパク質が、第１の検出可能な薬剤に結合した細胞タンパク質のレベルと第２の検出可能な薬剤に結合した細胞タンパク質のレベルとの差によって同定されることをさらに含む。

実施形態では、細胞は、哺乳動物細胞である。実施形態では、細胞は、ヒト細胞である。実施形態では、細胞は、疾患細胞である。実施形態では、細胞は、癌細胞である。実施形態では、細胞は、乳癌細胞である。実施形態では、細胞は、トリプルネガティブ乳癌細胞である。実施形態では、細胞は、２３１ＭＦＰ細胞である。実施形態では、細胞は、ＨＣＣ３８細胞である。

実施形態では、化合物は、

である。実施形態では、化合物は、

である。実施形態では、Ｌ^１００は、結合、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。実施形態では、Ｒ^１００は、ローダミン部分である。実施形態では、化合物は、

であり、Ｌ^１００は、本明細書に記載の通りである。実施形態では、Ｌ^１００は、結合、置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_４アルキレンである。実施形態では、化合物は、

である。

実施形態では、Ｌ^１００は、結合、－Ｓ（Ｏ）_２－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、置換もしくは非置換アルキレン（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキレン（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリーレン（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニレン）、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。

実施形態では、Ｌ^１００は、結合、－Ｓ（Ｏ）_２－、－ＮＨ－、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリーレン、または置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリーレンである。

実施形態では、Ｌ^１００は、置換もしくは非置換アルキレン（例えば、Ｃ_１－Ｃ_８、Ｃ_１－Ｃ_６、Ｃ_１－Ｃ_４、もしくはＣ_１－Ｃ_２）、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン（例えば、２～８員、２～６員、４～６員、２～３員、もしくは４～５員）、置換もしくは非置換シクロアルキレン（例えば、Ｃ_３－Ｃ_８、Ｃ_３－Ｃ_６、Ｃ_４－Ｃ_６、もしくはＣ_５－Ｃ_６）、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン（例えば、３～８員、３～６員、４～６員、４～５員、もしくは５～６員）、置換もしくは非置換アリーレン（例えば、Ｃ_６－Ｃ_１０もしくはフェニレン）、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン（例えば、５～１０員、５～９員、もしくは５～６員）である。実施形態では、Ｌ^１００は、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリーレン、または置換（例えば、置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリーレンである。実施形態では、Ｌ^１００は、非置換アルキレン、非置換ヘテロアルキレン、非置換シクロアルキレン、非置換ヘテロシクロアルキレン、非置換アリーレン、または非置換ヘテロアリーレンである。実施形態では、Ｌ^１００は、結合である。

実施形態では、Ｌ^１００は、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換シクロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、もしくは低級置換基で置換）もしくは非置換アリーレン、または置換（例えば、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換）もしくは非置換ヘテロアリーレンである。

実施形態では、置換Ｌ^１００（例えば、置換アルキレン、置換ヘテロアルキレン、置換シクロアルキレン、置換ヘテロシクロアルキレン、置換アリーレン、および／または置換ヘテロアリーレン）は、少なくとも１つの置換基、サイズ限定置換基、または低級置換基で置換され、置換Ｌ^１００が、置換基、サイズ限定置換基、および低級置換基から選択される複数の基で置換されている場合、各置換基、サイズ限定置換基、および／または低級置換基は、任意に異なっていてもよい。実施形態では、Ｌ^１００は、置換されている場合、少なくとも１つの置換基で置換されている。実施形態では、Ｌ^１００は、置換されている場合、少なくとも１つのサイズ限定置換基で置換されている。実施形態では、Ｌ^１００は、置換されている場合、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、Ｅ３ユビキチンリガーゼシステイン残基（例えば、ヒトＲＮＦ４のシステインアミノ酸またはヒトＲＦ１１４のシステインアミノ酸）と接触する。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、Ｅ３ユビキチンリガーゼシステイン残基（例えば、ヒトＲＮＦ４のシステインアミノ酸またはヒトＲＦ１１４のシステインアミノ酸）と接触する。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼは、ヒトＲＮＦ４である。実施形態では、システイン残基は、ヒトＲＮＦ４のＣ１３２である。実施形態では、システイン残基は、ヒトＲＮＦ４のＣ１３５である。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼは、ヒトＲＮＦ１１４である。実施形態では、システイン残基は、ヒトＲＮＦ１１４のＣ８である。

一態様では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ－標的タンパク質分解剤－細胞タンパク質複合体を作製する方法であって、（Ａ）Ｅ３ユビキチンリガーゼを標的タンパク質分解剤と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼ－標的タンパク質分解剤複合体を形成することと、（Ｂ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ－標的タンパク質分解剤複合体を細胞タンパク質と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼ－標的タンパク質分解剤－細胞タンパク質複合体を形成することと、を含む、方法である。

一態様では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ－標的タンパク質分解剤－細胞タンパク質複合体を作製する方法であって、（Ａ）Ｅ３ユビキチンリガーゼを標的タンパク質分解剤（例えば、本明細書に記載の化合物、または本明細書に記載の標的タンパク質分解剤）と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼ－標的タンパク質分解剤複合体を形成することと、（Ｂ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ－標的タンパク質分解剤複合体を細胞タンパク質と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼ－標的タンパク質分解剤－細胞タンパク質複合体を形成することと、を含む、方法である。

一態様では、細胞タンパク質－標的タンパク質分解剤－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を作製する方法であって、（Ａ）細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させ、それにより細胞タンパク質－標的タンパク質分解剤複合体を形成することと、（Ｂ）細胞タンパク質－標的タンパク質分解剤複合体をＥ３ユビキチンリガーゼと接触させ、それにより細胞タンパク質－標的タンパク質分解剤－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を形成することと、を含む、方法が提供される。

一態様では、細胞タンパク質－標的タンパク質分解剤－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を作製する方法であって、（Ａ）細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤（例えば、本明細書に記載の化合物、または本明細書に記載の標的タンパク質分解剤）と接触させ、それにより細胞タンパク質－標的タンパク質分解剤複合体を形成することと、（Ｂ）細胞タンパク質－標的タンパク質分解剤複合体をＥ３ユビキチンリガーゼと接触させ、それにより細胞タンパク質－標的タンパク質分解剤－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を形成することと、を含む、方法が提供される。

一態様では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－細胞タンパク質複合体を作製する方法であって、（Ａ）Ｅ３ユビキチンリガーゼをＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤（例えば、本明細書に記載の化合物、または本明細書に記載のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤）と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成することと、（Ｂ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を細胞タンパク質と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－細胞タンパク質複合体を形成することと、を含む、方法である。

一態様では、細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を作製する方法であって、（Ａ）細胞タンパク質をＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤（例えば、本明細書に記載の化合物、または本明細書に記載のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤）と接触させ、それにより細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成することと、（Ｂ）細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体をＥ３ユビキチンリガーゼと接触させ、それにより細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を形成することと、を含む、方法が提供される。

一態様では、細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体の形成を阻害する方法であって、Ｅ３ユビキチンリガーゼをＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤（例えば、本明細書に記載の化合物、または本明細書に記載のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤）と接触させ、それにより細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体の形成を阻害することを含む、方法が提供される。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、Ｅ３ユビキチンリガーゼのシステインを共有結合する。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤の不在下で細胞タンパク質に接触して細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を形成することができるＥ３ユビキチンリガーゼのアミノ酸でＥ３ユビキチンリガーゼに接触する。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼは、ヒトＲＮＦ４である。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼはＲＮＦ４であり、システインはヒトＲＮＦ４のＣ１３２である。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼはＲＮＦ４であり、システインはヒトＲＮＦ４のＣ１３５である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（Ｉ）の一価形態である。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｌ^３、Ｒ^４、ｚ１およびｚ２は、実施形態を含む本明細書に記載の通りである。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（Ｉ）の一価形態である。Ｒ^１は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基は、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。Ｒ^２は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^２置換基は、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。Ｌ^３は、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。Ｒ^３は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。Ｒ^４は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいはＥである。Ｅは求電子性部分である。ｚ１は、０～４の整数である。ｚ２は、０～５の整数である。唯１つのＲ^１または１つのＲ^２は、結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（Ｉ）を有する。Ｒ^１は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基は、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。Ｒ^２は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^２置換基は、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。Ｌ^３は、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。Ｒ^３は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。Ｒ^４は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいはＥである。Ｅは求電子性部分である。ｚ１は、０～４の整数である。ｚ２は、０～５の整数である。唯１つのＲ^１または１つのＲ^２は、結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼは、ヒトＲＮＦ１１４である。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼはヒトＲＮＦ１１４であり、システインはヒトＲＮＦ１１４のＣ８である。実施形態では、細胞タンパク質は、ｐ２１である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（ＩＩ）の一価形態である。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｌ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、ｚ１、ｚ２およびｚ７は、実施形態を含む本明細書に記載されている通りである。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（ＩＩ）の一価形態である。Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^７は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基または２つのＲ^２置換基、または２つのＲ^４置換基は、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。Ｒ^５およびＲ^６は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合である。Ｌ^３は、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。Ｒ^３は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。Ｒ^４は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいはＥである。Ｅは求電子性部分である。ｚ１は、０～４の整数である。ｚ２は、０～５の整数である。ｚ７は、０～１０の整数である。唯１つのＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^５、Ｒ^６またはＲ^７は独立して、結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（ＩＩ）を有する。Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^７は独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基または２つのＲ^２置換基、または２つのＲ^４置換基は、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。Ｒ^５およびＲ^６は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合である。Ｌ^３は、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンである。Ｒ^３は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールである。Ｒ^４は独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいはＥである。Ｅは求電子性部分である。ｚ１は、０～４の整数である。ｚ２は、０～５の整数である。ｚ７は、０～１０の整数である。唯１つのＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^５、Ｒ^６またはＲ^７は独立して、結合剤リンカーへの結合である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（ＩＩＩ）の一価形態である。Ｒ^１、Ｒ^２ｗ、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９、Ｒ^１０、ｚ１、ｚ３およびｚ７は、本明細書に記載の通りである。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（ＩＩＩ）の一価形態である。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は、実施形態を含む本明細書に記載されている通りである。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（ＩＩＩ）の一価形態である。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合である。唯１つのＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９またはＲ^１０は、結合剤リンカーへの結合である。

は、単結合または二重結合である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

は、単結合または二重結合である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、式：

（ＩＩＩ）を有する。Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合である。唯１つのＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９またはＲ^１０は、結合剤リンカーへの結合である。

は、単結合または二重結合である。

実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤の不在下で安定な二次または三次立体配座構造を欠くＥ３ユビキチンリガーゼのアミノ酸と接触する。実施形態では、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触するアミノ酸は、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触すると、安定な二次または三次立体配座構造をとる。

本明細書に記載の実施例および実施形態は例示目的のみのためであり、それを考慮した様々な修正または変更が当業者に示唆され、本出願および添付の特許請求の範囲の範囲の趣旨および範囲内に含まれるべきである。本明細書で引用される全ての刊行物、特許、および特許出願は、全ての目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。

Ｖ．実施形態
実施形態Ｐ１．１）一価の標的タンパク質結合剤および２）一価のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤を含む標的タンパク質分解剤であって、Ｅ３ユビキチンリガーゼが、ヒトＲＮＦ４またはヒトＲＮＦ１１４である、標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ２．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼのシステインと共有結合を形成することができる、実施形態Ｐ１の標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ３．標的タンパク質結合剤およびＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、結合剤リンカーによって共有結合している、実施形態Ｐ１またはＰ２の標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ４．Ｅ３ユビキチンリガーゼが、ヒトＲＮＦ４である、実施形態Ｐ１～Ｐ３のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ５．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

（Ｉ）を有する一価の化合物であり、
式中、
Ｒ^１が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基が、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｒ^２が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^２置換基が、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｌ^３が、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり、
Ｒ^３が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Ｒ^４が独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいはＥであり、
Ｅが、求電子性部分であり、
ｚ１が、０～４の整数であり、
ｚ２が、０～５の整数であり、
唯１つのＲ^１または１つのＲ^２が、結合剤リンカーへの結合である、実施形態Ｐ１～Ｐ４のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ６．
Ｒ^１が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^１１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^１１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基が、任意に結合して、Ｒ^１１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^１１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｒ^１１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^１２置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^１２置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^１２置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^１２置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^１２置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^１２置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^１２が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^２が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^２１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^２置換基が、任意に結合して、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^２１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｒ^２１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^２２置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^２２置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^２２置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^２２置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^２２置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^２２置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^２２が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｌ^３が、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、Ｒ^３置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリーレン、またはＲ^３置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリーレンであり、
Ｒ^３が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^３１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^３１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^３１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^３２置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^３２置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^３２が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^４が独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^４１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^４１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいはＥであり、
Ｒ^４１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^４２置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^４２置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^４２が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールである、実施形態Ｐ１～Ｐ５のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ７．Ｒ^２が独立して、ハロゲン、－ＣＦ_３、－ＮＯ_２、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_３アルキル、非置換２～３員ヘテロアルキル、または結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^２置換基が、任意に結合して、非置換フェニルを形成してもよく、
Ｒ^２１が独立して、－ＯＨである、実施例Ｐ６の標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ８．Ｚ２が１であり、Ｒ^２が結合剤リンカーへの結合である、実施形態Ｐ６またはＰ７の標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ９．Ｒ^１が独立して、ハロゲンである、実施形態Ｐ６～Ｐ８のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ１０．ｚ１が０である、実施形態Ｐ６～Ｐ９のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ１１．Ｌ^３が、－Ｎ（Ｒ^３）－であり、
Ｒ^３が独立して、Ｒ^３１置換メチル、非置換フェニル、または非置換５～６員ヘテロアリールであり、
Ｒ^３１が独立して、非置換フェニル、または非置換５～６員ヘテロアリールである、実施形態Ｐ６～Ｐ１０のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ１２．Ｅが、

であり、
Ｒ^１５、Ｒ^１６およびＲ^１７が独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Ｘ^１７が、ハロゲンである、実施形態Ｐ６～Ｐ１１のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ１３．Ｅが、

であり、
Ｒ^１５、Ｒ^１６およびＲ^１７が独立して、水素である、実施形態Ｐ６～Ｐ１２のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ１４．Ｅが、

であり、Ｘ^１７が独立して、－Ｃｌである、実施形態Ｐ６～Ｐ１２のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ１５．Ｅ３ユビキチンリガーゼが、ヒトＲＮＦ１１４である、実施形態Ｐ１～Ｐ３のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ１６．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

（ＩＩ）を有する一価の化合物であり、
式中、
Ｒ^１およびＲ^２が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基または２つのＲ^２置換基が、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｒ^５およびＲ^６が独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、
Ｒ^７が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^７置換基は、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｌ^３が、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり、
Ｒ^３が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Ｒ^４が独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいはＥであり、
Ｅが、求電子性部分であり、
ｚ１が、０～４の整数であり、
ｚ２が、０～５の整数であり、
ｚ７が、０～１０の整数であり、
唯１つのＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^５、Ｒ^６またはＲ^７が独立して、結合剤リンカーへの結合である、実施形態Ｐ１～Ｐ３、およびＰ１５のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ１７．
Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^７が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基または２つのＲ^２置換基が、任意に結合して、Ｒ５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｒ^５およびＲ^６が独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、
Ｒ^７が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^７置換基が、任意に結合して、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｒ^５１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｌ^３が、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、Ｒ^３置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリーレン、またはＲ^３置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリーレンであり、
Ｒ^３が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^３１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^３１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^３１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^３２置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^３２置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^３２が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^４が独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^４１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^４１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいはＥであり、
Ｒ^４１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^４２置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^{４２置換もしくは非置換Ｃ} _３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^４２置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^４２が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールである、実施形態Ｐ１６の標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ１８．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

を有する一価の化合物である、実施形態Ｐ１７の標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ１９．Ｌ^３が－ＣＨ_２ＮＨ－である、実施形態Ｐ１７またはＰ１８の標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ２０．Ｅが、

であり、
Ｒ^１５、Ｒ^１６およびＲ^１７が独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Ｘ^１７が、ハロゲンである、実施形態Ｐ１７～Ｐ１９のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ２１．Ｅが、

であり、
Ｒ^１５、Ｒ^１６およびＲ^１７が独立して、水素である、実施形態Ｐ１７～Ｐ２０のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ２２．Ｅが、

であり、Ｒ^１５、Ｒ^１６およびＲ^１７が独立して、水素である、実施形態Ｐ１７～Ｐ２１のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ２３．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、以下の式を有する一価の化合物であり、

Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０が独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、
唯１つのＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９またはＲ^１０が、結合剤リンカーへの結合であり、

が、単結合または二重結合である、実施形態Ｐ１～Ｐ３およびＰ１５のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ２４．
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０が独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、
唯１つのＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９またはＲ^１０が、結合剤リンカーへの結合であり、
Ｒ^５１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールである、実施形態Ｐ２３の標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ２５．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

を有する一価の化合物である、実施形態Ｐ２３の標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ２６．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

を有する一価の化合物である、実施形態Ｐ２４の標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ２７．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

実施形態Ｐ２８．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

を有する、実施形態Ｐ２４の標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ２９．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

を有する、実施形態Ｐ２４の標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ３０．結合剤リンカーが、Ｌ^１１－Ｌ^１２－Ｌ^１３－Ｌ^１４であり、
Ｌ^１１が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤に直接接続し、
Ｌ^１１が、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン、あるいはバイオコンジュゲートリンカーであり、
Ｌ^１２、Ｌ^１３およびＬ^１４が独立して、結合、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン、あるいはバイオコンジュゲートリンカーである、実施形態Ｐ３～Ｐ２９のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ３１．
Ｌ^１１が、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_２０アルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換２～２０員ヘテロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリーレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリーレン、またはバイオコンジュゲートリンカーであり、
Ｌ^１２、Ｌ^１３およびＬ^１４が独立して、結合、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_２０アルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換２～２０員ヘテロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリーレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリーレン、またはバイオコンジュゲートリンカーであり、
Ｒ^６１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールである、実施形態Ｐ３０の標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ３２．標的タンパク質結合剤が、疾患に関連する標的タンパク質に結合することができる、実施形態Ｐ１～Ｐ３１のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ３３．標的タンパク質結合剤が

であり、標的タンパク質結合剤が、ＢＲＤ４に結合する、実施形態Ｐ１～Ｐ３２のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態Ｐ３４．実施形態Ｐ１～Ｐ３３のうちの１つの標的タンパク質分解剤と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。

実施形態Ｐ３５．細胞タンパク質のレベルを低下させる方法であって、細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させることを含む、方法。

実施形態Ｐ３６．細胞タンパク質のレベルを低下させる方法であって、細胞タンパク質を実施形態１～Ｐ３３のうちの１つの標的タンパク質分解剤と接触させることを含む、方法。

実施形態Ｐ３７．
Ａ）標的タンパク質分解剤に接触する細胞タンパク質をユビキチン化させ、それによってユビキチン化細胞タンパク質を形成するステップと、
Ｂ）ユビキチン化細胞タンパク質をプロテアソームと接触させ、それによってユビキチン化細胞タンパク質－プロテアソーム複合体を形成するステップと、
Ｃ）プロテアソームにより細胞タンパク質をタンパク質分解するステップと、をさらに含む、実施形態Ｐ３５またはＰ３６の方法。

実施形態Ｐ３８．癌を治療する方法であって、癌に関連する細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させることを含む、方法。

実施形態Ｐ３９．癌を治療する方法であって、実施形態Ｐ１～Ｐ３３のうちの１つの標的タンパク質分解剤の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。

実施形態Ｐ４０．細胞タンパク質のレベルを低下させる方法であって、細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させ、それにより標的タンパク質分解剤－細胞タンパク質複合体を形成することを含み、標的タンパク質分解剤が、
ｉ）一価のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤と、
ｉｉ）一価の標的タンパク質結合剤と、
ｉｉｉ）一価のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤および一価の標的タンパク質結合剤に直接結合した結合剤リンカーと、を含む、方法。

実施形態Ｐ４１．接触の前に、標的タンパク質分解剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤、結合剤リンカーおよび標的タンパク質結合剤を共有結合的に反応させて、標的タンパク質分解剤を生成することによって合成される、実施形態Ｐ４０の方法。

実施形態Ｐ４２．合成の前に、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤から同定される、実施形態Ｐ４１の方法。

実施形態Ｐ４３．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、
ｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質を候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤の混合物と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成するステップと、
ｉｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体から、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤を、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤として同定するステップと、を含む方法によって同定される、実施形態Ｐ４２の方法。

実施形態Ｐ４４．候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、共有結合システイン修飾因子部分を含み、Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成するための、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤のＥ３ユビキチンリガーゼタンパク質への共有結合の検出により、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤として同定される、実施形態Ｐ４３の方法。

実施形態Ｐ４５．Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体の検出は、検出可能な標識または質量分析の使用を含む、実施形態Ｐ４４の方法。

実施形態Ｐ４６．合成の前に、標的タンパク質結合剤が同定される、実施形態Ｐ４０の方法。

実施形態Ｐ４７．標的タンパク質結合剤が、
ｉ）細胞タンパク質を候補標的タンパク質結合剤の混合物と接触させ、それにより細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成するステップと、
ｉｉ）細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成する標的タンパク質結合剤を同定するステップと、を含む方法によって同定される、実施形態４６の方法。

実施形態Ｐ４８．細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成する候補標的タンパク質結合剤が、細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体の検出により、標的タンパク質結合剤として同定される、実施形態Ｐ４７の方法。

実施形態Ｐ４９．細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体の検出が、検出可能な標識または質量分析の使用を含む、実施形態Ｐ４８の方法。

実施形態Ｐ５０．合成の前に、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤を修飾して、共有結合システイン修飾因子部分を除去する、実施形態Ｐ４０の方法。

実施形態Ｐ５１．標的タンパク質結合剤が接触する細胞タンパク質を同定する方法であって、
Ａ）細胞プロテオームまたは細胞の第１のサンプルを標的タンパク質結合剤と接触させ、それにより細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成することと、
Ｂ）得られたステップＡの細胞プロテオームまたは細胞の第１のサンプルと、標的タンパク質結合剤と接触していない細胞プロテオームまたは細胞の第２のサンプルの両方を、式：

を有する化合物と接触させることと、
Ｃ）得られたステップＢの第１のサンプルを第１の検出可能な薬剤と接触させ、得られたステップＢの第２のサンプルを第２の検出可能な薬剤と接触させることと、
Ｄ）選択されたタンパク質に結合した第１の検出可能な薬剤および第２の検出可能な薬剤のレベルを測定することと、
Ｅ）細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成することができる細胞タンパク質に結合した第１の検出可能な薬剤および第２の検出可能な薬剤のレベルの差を測定することにより、細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体中の細胞タンパク質を同定することと、を含む、方法。

実施形態Ｐ５２．
Ａ）第１または第２の検出可能な薬剤のうちの一方が、原子の軽い同位体を含み、第１または第２の検出可能な薬剤のうちの他方が、原子の重い同位体を含み、
Ｂ）選択されたタンパク質の第１の検出可能な薬剤および第２の検出可能な薬剤のレベルが、液体クロマトグラフィー質量分析によって測定され、
Ｃ）標的タンパク質結合剤に結合することができる細胞タンパク質が、第１の検出可能な薬剤に結合した細胞タンパク質のレベルと第２の検出可能な薬剤に結合した細胞タンパク質のレベルとの差によって同定される、実施形態５１に記載の方法。

実施形態Ｐ５３．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼシステイン残基と接触する、実施形態Ｐ３５～Ｐ５２のうちの１つの方法。

実施形態Ｐ５４．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼシステイン残基と共有結合する、実施形態Ｐ５３の方法。

実施形態Ｐ５５．Ｅ３ユビキチンリガーゼが、ヒトＲＮＦ４である、実施形態Ｐ５３またはＰ５４の方法。

実施形態Ｐ５６．システイン残基が、ヒトＲＮＦ４のＣ１３２である、実施形態Ｐ５５の方法。

実施形態Ｐ５７．システイン残基が、ヒトＲＮＦ４のＣ１３５である、実施形態Ｐ５５の方法。

実施形態Ｐ５８．Ｅ３ユビキチンリガーゼが、ヒトＲＮＦ１１４である、実施形態Ｐ５３またはＰ５４の方法。

実施形態Ｐ５９．システイン残基が、ヒトＲＮＦ１１４のＣ８である、実施形態Ｐ５８の方法。

実施形態Ｐ６０．Ｅ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－細胞タンパク質複合体を作製する方法であって、
Ａ）Ｅ３ユビキチンリガーゼをＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成することと、
Ｂ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を細胞タンパク質と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－細胞タンパク質複合体を形成することと、を含む、方法。

実施形態Ｐ６１．細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を作製する方法であって、
Ａ）細胞タンパク質をＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触させ、それにより細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成することと、
Ｂ）細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体をＥ３ユビキチンリガーゼと接触させ、それにより細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を形成することと、を含む、方法。

実施形態Ｐ６２．細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体の形成を阻害する方法であって、Ｅ３ユビキチンリガーゼをＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触させ、それにより細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体の形成を阻害することを含む、方法。

実施形態Ｐ６３．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼのシステインを共有結合する、実施形態Ｐ６０～Ｐ６２のうちの１つの１つの方法。

実施形態Ｐ６４．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、細胞タンパク質と接触してＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤の不在下で細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を形成することができるＥ３ユビキチンリガーゼのアミノ酸でＥ３ユビキチンリガーゼと接触する、実施形態Ｐ６２またはＰ６３の方法。

実施形態Ｐ６５．Ｅ３ユビキチンリガーゼが、ヒトＲＮＦ４である、実施形態Ｐ６０～Ｐ６４のうちの１つの方法。

実施形態Ｐ６６．Ｅ３ユビキチンリガーゼがＲＮＦ４であり、システインがヒトＲＮＦ４のＣ１３２である、実施形態Ｐ６３またはＰ６４の方法。

実施形態Ｐ６７．Ｅ３ユビキチンリガーゼがＲＮＦ４であり、システインがヒトＲＮＦ４のＣ１３５である、実施形態Ｐ６３またはＰ６４の方法。

実施形態Ｐ６８．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

（Ｉ）を有し、
式中、
Ｒ^１が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、２つのＲ^１置換基が、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｒ^２が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、２つのＲ^２置換基が、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｌ^３が、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり、
Ｒ^３が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Ｒ^４が独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいはＥであり、
Ｅが、求電子性部分であり、
ｚ１が、０～４の整数であり、
ｚ２が、０～５の整数である、実施形態Ｐ６５～Ｐ６７のうちの１つの方法。

実施形態Ｐ６９．Ｅ３ユビキチンリガーゼが、ヒトＲＮＦ１１４である、実施形態Ｐ６０～Ｐ６４のうちの１つの方法。

実施形態Ｐ７０．Ｅ３ユビキチンリガーゼがヒトＲＮＦ１１４であり、システインがヒトＲＮＦ１１４のＣ８である、実施形態Ｐ６３またはＰ６４の方法。

実施形態Ｐ７１．細胞タンパク質が、ｐ２１である、実施形態Ｐ６９またはＰ７０の方法。

実施形態Ｐ７２．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、以下の式を有し、

Ｒ^１およびＲ^２が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、２つのＲ^１置換基または２つのＲ^２置換基が、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｒ^５およびＲ^６が独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Ｒ^７が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、２つのＲ^７置換基が、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｌ^３が、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり、
Ｒ^３が独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Ｒ^４が独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいはＥであり、
Ｅが、求電子性部分であり、
ｚ１が、０～４の整数であり、
ｚ２が、０～５の整数であり、
ｚ７が、０～１０の整数である、実施形態Ｐ６９～Ｐ７１のうちの１つの方法。

実施形態Ｐ７３．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、以下の式を有し、

Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０が独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、

が、単結合または二重結合である、実施形態Ｐ６９～Ｐ７１のうちの１つの方法。

実施形態Ｐ７４．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤の不在下で安定な二次または三次立体配座構造を欠くＥ３ユビキチンリガーゼのアミノ酸と接触する、実施形態Ｐ３５～Ｐ７３のうちの１つの方法。

実施形態Ｐ７５．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触するアミノ酸が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触すると、安定な二次または三次立体配座構造をとる、実施形態Ｐ７４の方法。

ＶＩ．追加の実施形態
実施形態１．１）標的タンパク質結合剤および２）Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤を含む標的タンパク質分解剤であって、Ｅ３ユビキチンリガーゼが、ヒトＲＮＦ４またはヒトＲＮＦ１１４である、標的タンパク質分解剤。

実施形態２．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼのシステインと共有結合を形成することができる、実施形態１の標的タンパク質分解剤。

実施形態３．標的タンパク質結合剤およびＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、結合剤リンカーによって共有結合している、実施形態１または２の標的タンパク質分解剤。

実施形態４．Ｅ３ユビキチンリガーゼが、ヒトＲＮＦ４である、実施形態１～３のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態５．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

（Ｉ）の一価形態であり、
式中、
Ｒ^１が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基が、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｒ^２が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^２置換基が、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｌ^３が、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり、
Ｒ^３が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Ｒ^４が独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいはＥであり、
Ｅが、求電子性部分であり、
ｚ１が、０～４の整数であり、
ｚ２が、０～５の整数であり、
唯１つのＲ^１または１つのＲ^２が、結合剤リンカーへの結合である、実施形態１～４のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態６．
Ｒ^１が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^１１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^１１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基が、任意に結合して、Ｒ^１１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^１１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^１１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｒ^１１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^１２置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^１２置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^１２置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^１２置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^１２置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^１２置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^１２が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^２が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^２１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^２置換基が、任意に結合して、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^２１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｒ^２１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^２２置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^２２置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^２２置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^２２置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^２２置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^２２置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^２２が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｌ^３が、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、Ｒ^３置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリーレン、またはＲ^３置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリーレンであり、
Ｒ^３が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^３１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^３１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^３１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^３２置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^３２置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^３２が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^４が独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^４１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^４１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいはＥであり、
Ｒ^４１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^４２置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^４２置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^４２が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールである、実施形態１～５のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態７．Ｒ^２が独立して、ハロゲン、－ＣＦ_３、－ＮＯ_２、Ｒ^２１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_３アルキル、非置換２～３員ヘテロアルキル、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^２置換基が、任意に結合して、非置換フェニルを形成してもよく、
Ｒ^２１が独立して、－ＯＨである、実施形態６の標的タンパク質分解剤。

実施形態８．Ｚ２が１であり、Ｒ^２が結合剤リンカーへの結合である、実施形態６または７の標的タンパク質分解剤。

実施形態９．Ｒ^１が独立して、ハロゲンである、実施形態６～８のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態１０．ｚ１が０である、実施形態６～９のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態１１．Ｌ^３が、－Ｎ（Ｒ^３）－であり、
Ｒ^３が独立して、Ｒ^３１置換メチル、非置換フェニル、もしくは非置換５～６員ヘテロアリールであり、
Ｒ^３１が独立して、非置換フェニル、もしくは非置換５～６員ヘテロアリールである、実施形態６～１０のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態１２．Ｅが、

であり、
Ｒ^１５、Ｒ^１６およびＲ^１７が独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Ｘ^１７が、ハロゲンである、実施形態６～１１のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態１３．Ｅが、

であり、
Ｒ^１５、Ｒ^１６およびＲ^１７が独立して、水素である、実施形態６～１２のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態１４．Ｅが、

であり、Ｘ^１７が独立して、－Ｃｌである、実施形態６～１２のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態１５．Ｅ３ユビキチンリガーゼが、ヒトＲＮＦ１１４である、実施形態１～３のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態１６．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

（ＩＩ）の一価形態であり、
式中、
Ｒ^１およびＲ^２が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基または２つのＲ^２置換基が、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｒ^５およびＲ^６が独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、
Ｒ^７が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^７置換基は、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｌ^３が、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり、
Ｒ^３が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Ｒ^４が独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいはＥであり、
Ｅが、求電子性部分であり、
ｚ１が、０～４の整数であり、
ｚ２が、０～５の整数であり、
ｚ７が、０～１０の整数であり、
唯１つのＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^５、Ｒ^６またはＲ^７が独立して、結合剤リンカーへの結合である、実施形態１～３および１５のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態１７．
Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^７が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^１置換基または２つのＲ^２置換基が、任意に結合して、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｒ^５およびＲ^６が独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、
Ｒ^７が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、２つのＲ^７置換基が、任意に結合して、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｒ^５１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｌ^３が、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、Ｒ^３置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキレン、Ｒ^３置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリーレン、またはＲ^３置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリーレンであり、
Ｒ^３が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^３１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^３１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^３１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^３１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^３２置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^３２置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^３２置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^３２が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^４が独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^４１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^４１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^４１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいはＥであり、
Ｒ^４１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^４２置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^４２置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^４２置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリールであり、
Ｒ^４２が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールである、実施形態１６の標的タンパク質分解剤。

実施形態１８．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

の一価形態である、実施形態１７の標的タンパク質分解剤。

実施形態１９．Ｌ^３が－ＣＨ_２ＮＨ－である、実施形態１７または１８の標的タンパク質分解剤。

実施形態２０．Ｅが、

であり、
Ｒ^１５、Ｒ^１６およびＲ^１７が独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Ｘ^１７が、ハロゲンである、実施形態１７～１９のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態２１．Ｅが、

であり、
Ｒ^１５、Ｒ^１６およびＲ^１７が独立して、水素である、実施形態１７～２０のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態２２．Ｅが、

であり、Ｒ^１５、Ｒ^１６およびＲ^１７が独立して、水素である、実施形態１７～２１のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態２３．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

の一価形態であり、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０が独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、
唯１つのＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９またはＲ^１０が、結合剤リンカーへの結合であり、

が、単結合または二重結合である、実施形態１～３および１５のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態２４．
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０が独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換２～８員ヘテロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、Ｒ^５１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、またはＲ^５１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリール、あるいは結合剤リンカーへの結合であり、
唯１つのＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９またはＲ^１０が、結合剤リンカーへの結合であり、
Ｒ^５１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールである、実施形態２３の標的タンパク質分解剤。

実施形態２５．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

の一価形態である、実施形態２３の標的タンパク質分解剤。

実施形態２６．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

の一価形態である、実施形態２４の標的タンパク質分解剤。

実施形態２７．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

実施形態２８．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

を有する、実施形態２４の標的タンパク質分解剤。

実施形態２９．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

を有する、実施形態２４の標的タンパク質分解剤。

実施形態３０．結合剤リンカーが、Ｌ^１１－Ｌ^１２－Ｌ^１３－Ｌ^１４であり、
Ｌ^１１が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤に直接接続し、
Ｌ^１１が、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン、あるいはバイオコンジュゲートリンカーであり、
Ｌ^１２、Ｌ^１３およびＬ^１４が独立して、結合、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレン、あるいはバイオコンジュゲートリンカーである、実施形態３～２９のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態３１．
Ｌ^１１が、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_２０アルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換２～２０員ヘテロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリーレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリーレン、またはバイオコンジュゲートリンカーであり、
Ｌ^１２、Ｌ^１３およびＬ^１４が独立して、結合、－Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^６１）－、－Ｎ（Ｒ^６１）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）_２－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ－、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_１－Ｃ_２０アルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換２～２０員ヘテロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換３～８員ヘテロシクロアルキレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリーレン、Ｒ^６１置換もしくは非置換５～１０員ヘテロアリーレン、またはバイオコンジュゲートリンカーであり、
Ｒ^６１が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、非置換Ｃ_１－Ｃ_８アルキル、非置換２～８員ヘテロアルキル、非置換Ｃ_３－Ｃ_８シクロアルキル、非置換３～８員ヘテロシクロアルキル、非置換Ｃ_６－Ｃ_１０アリール、または非置換５～１０員ヘテロアリールである、実施形態３０の標的タンパク質分解剤。

実施形態３２．標的タンパク質結合剤が、疾患に関連する標的タンパク質に結合することができる、実施形態１～３１のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態３３．標的タンパク質結合剤が

であり、標的タンパク質結合剤が、ＢＲＤ４に結合する、実施形態１～３２のうちの１つの標的タンパク質分解剤。

実施形態３４．実施形態１～３３のうちの１つの標的タンパク質分解剤と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。

実施形態３５．細胞タンパク質のレベルを低下させる方法であって、細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させることを含む、方法。

実施形態３６．細胞タンパク質のレベルを低下させる方法であって、細胞タンパク質を実施形態１～３３のうちの１つの標的タンパク質分解剤と接触させることを含む、方法。

実施形態３７．
Ａ）標的タンパク質分解剤に接触する細胞タンパク質をユビキチン化させ、それによってユビキチン化細胞タンパク質を形成するステップと、
Ｂ）ユビキチン化細胞タンパク質をプロテアソームと接触させ、それによってユビキチン化細胞タンパク質－プロテアソーム複合体を形成するステップと、
Ｃ）プロテアソームにより細胞タンパク質をタンパク質分解するステップと、をさらに含む、実施形態３５または３６の方法。

実施形態３８．癌を治療する方法であって、癌に関連する細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させることを含む、方法。

実施形態３９．癌を治療する方法であって、実施形態１～３３のうちの１つの標的タンパク質分解剤の治療有効量を、それを必要とする対象に投与することを含む、方法。

実施形態４０．細胞タンパク質のレベルを低下させる方法であって、細胞タンパク質を標的タンパク質分解剤と接触させ、それにより標的タンパク質分解剤－細胞タンパク質複合体を形成することを含み、標的タンパク質分解剤が、
ｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤と、
ｉｉ）標的タンパク質結合剤と、
ｉｉｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤および標的タンパク質結合剤に直接結合した結合剤リンカーと、を含む、方法。

実施形態４１．接触の前に、標的タンパク質分解剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤、結合剤リンカーおよび標的タンパク質結合剤を共有結合的に反応させて、標的タンパク質分解剤を生成することによって合成される、実施形態４０の方法。

実施形態４２．合成の前に、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤から同定される、実施形態４１の方法。

実施形態４３．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、
ｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質を候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤の混合物と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成するステップと、
ｉｉ）Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体から、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤を、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤として同定するステップと、を含む方法によって同定される、実施形態４２の方法。

実施形態４４．候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、共有結合システイン修飾因子部分を含み、Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成するための、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤のＥ３ユビキチンリガーゼタンパク質への共有結合の検出により、候補Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤として同定される、実施形態４３の方法。

実施形態４５．Ｅ３ユビキチンリガーゼタンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体の検出は、検出可能な標識または質量分析の使用を含む、実施形態４４の方法。

実施形態４６．合成の前に、標的タンパク質結合剤が同定される、実施形態４０の方法。

実施形態４７．標的タンパク質結合剤が、
ｉ）細胞タンパク質を候補標的タンパク質結合剤の混合物と接触させ、それにより細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成するステップと、
ｉｉ）細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成する標的タンパク質結合剤を同定するステップと、を含む方法によって同定される、実施形態４６の方法。

実施形態４８．細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成する候補標的タンパク質結合剤は、細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体の検出により、標的タンパク質結合剤として同定される、実施形態４７の方法。

実施形態４９．細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体の検出が、検出可能な標識または質量分析の使用を含む、実施形態４８の方法。

実施形態５０．合成の前に、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤を修飾して、共有結合システイン修飾因子部分を除去する、実施形態４０の方法。

実施形態５１．標的タンパク質結合剤が接触する細胞タンパク質を同定する方法であって、
Ａ）細胞プロテオームまたは細胞の第１のサンプルを標的タンパク質結合剤と接触させ、それにより細胞タンパク質－標的タンパク質結合剤複合体を形成することと、
Ｂ）得られたステップＡの細胞プロテオームまたは細胞の第１のサンプルと、標的タンパク質結合剤と接触していない細胞プロテオームまたは細胞の第２のサンプルの両方を、式：

実施形態５２．
Ａ）第１または第２の検出可能な薬剤のうちの一方が、原子の軽い同位体を含み、第１または第２の検出可能な薬剤のうちの他方が、原子の重い同位体を含み、
Ｂ）選択されたタンパク質の第１の検出可能な薬剤および第２の検出可能な薬剤のレベルが、液体クロマトグラフィー質量分析によって測定され、
Ｃ）標的タンパク質結合剤に結合することができる細胞タンパク質が、第１の検出可能な薬剤に結合した細胞タンパク質のレベルと第２の検出可能な薬剤に結合した細胞タンパク質のレベルとの差によって同定される、実施形態５１に記載の方法。

実施形態５３．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼシステイン残基と接触する、実施形態３５～５２のうちの１つの方法。

実施形態５４．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼシステイン残基と共有結合する、実施形態５３の方法。

実施形態５５．Ｅ３ユビキチンリガーゼが、ヒトＲＮＦ４である、実施形態５３または５４の方法。

実施形態５６．システイン残基が、ヒトＲＮＦ４のＣ１３２である、実施形態５５の方法。

実施形態５７．システイン残基が、ヒトＲＮＦ４のＣ１３５である、実施形態５５の方法。

実施形態５８．Ｅ３ユビキチンリガーゼが、ヒトＲＮＦ１１４である、実施形態５３または５４の方法。

実施形態５９．システイン残基が、ヒトＲＮＦ１１４のＣ８である、実施形態５８の方法。

実施形態６０．Ｅ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－細胞タンパク質複合体を作製する方法であって、
Ａ）Ｅ３ユビキチンリガーゼをＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成することと、
Ｂ）Ｅ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を細胞タンパク質と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－細胞タンパク質複合体を形成することと、を含む、方法。

実施形態６１．細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を作製する方法であって、
Ａ）細胞タンパク質をＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触させ、それにより細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成することと、
Ｂ）細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体をＥ３ユビキチンリガーゼと接触させ、それにより細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を形成することと、を含む、方法。

実施形態６２．細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体の形成を阻害する方法であって、Ｅ３ユビキチンリガーゼをＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触させ、それにより細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体の形成を阻害することを含む、方法。

実施形態６３．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼのシステインを共有結合する、実施形態６０～６２のうちの１つの方法。

実施形態６４．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、細胞タンパク質と接触してＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤の不在下で細胞タンパク質－Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体を形成することができるＥ３ユビキチンリガーゼのアミノ酸でＥ３ユビキチンリガーゼと接触する、実施形態６２または６３の方法。

実施形態６５．Ｅ３ユビキチンリガーゼが、ヒトＲＮＦ４である、実施形態６０～６４のうちの１つの方法。

実施形態６６．Ｅ３ユビキチンリガーゼがＲＮＦ４であり、システインがヒトＲＮＦ４のＣ１３２である、実施形態６３または６４の方法。

実施形態６７．Ｅ３ユビキチンリガーゼがＲＮＦ４であり、システインがヒトＲＮＦ４のＣ１３５である、実施形態６３または６４の方法。

実施形態６８．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、式：

（Ｉ）の一価形態であり、
式中、
Ｒ^１が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、２つのＲ^１置換基が、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｒ^２が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、２つのＲ^２置換基が、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｌ^３が、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり、
Ｒ^３が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Ｒ^４が独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいはＥであり、
Ｅが、求電子性部分であり、
ｚ１が、０～４の整数であり、
ｚ２が、０～５の整数である、実施形態６５～６７のうちの１つの方法。

実施形態６９．Ｅ３ユビキチンリガーゼが、ヒトＲＮＦ１１４である、実施形態６０～６４のうちの１つの方法。

実施形態７０．Ｅ３ユビキチンリガーゼがヒトＲＮＦ１１４であり、システインがヒトＲＮＦ１１４のＣ８である、実施形態６３または６４の方法。

実施形態７１．細胞タンパク質が、ｐ２１である、実施形態６９または７０の方法。

実施形態７２．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、以下の式の一価形態であり、

Ｒ^１およびＲ^２が独立して、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、２つのＲ^１置換基または２つのＲ^２置換基が、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｒ^５およびＲ^６が独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Ｒ^７が独立して、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、２つのＲ^７置換基が、任意に結合して、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
Ｌ^３が、結合、－Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ^３）－、－Ｎ（Ｒ^３）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｈ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｈ）－、－Ｎ（Ｈ）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、置換もしくは非置換アルキレン、置換もしくは非置換ヘテロアルキレン、置換もしくは非置換シクロアルキレン、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換アリーレン、または置換もしくは非置換ヘテロアリーレンであり、
Ｒ^３が独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
Ｒ^４が独立して、水素、オキソ、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいはＥであり、
Ｅが、求電子性部分であり、
ｚ１が、０～４の整数であり、
ｚ２が、０～５の整数であり、
ｚ７が、０～１０の整数である、実施形態６９～７１のうちの１つの方法。

実施形態７３．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、以下の式の一価形態であり、

が、単結合または二重結合である、実施形態６９～７１のうちの１つの方法。

実施形態７４．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤の不在下で安定な二次または三次立体配座構造を欠くＥ３ユビキチンリガーゼのアミノ酸と接触する、実施形態３５～７３のうちの１つの方法。

実施形態７５．Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触するアミノ酸が、Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触すると、安定な二次または三次立体配座構造をとる、実施形態７４の方法。

実施例１：共有結合リガンドスクリーニングは、標的タンパク質分解用途のためのＲＮＦ４Ｅ３リガーゼリクルーターを明らかにする
標的タンパク質分解は、プロテアソーム分解のためのアンドラッガブルなタンパク質の標的化を可能にする創薬のための強力な戦略として生まれた。このアプローチでは、Ｅ３リガーゼを特定のタンパク質基質に結合してプロテアソーム依存的にこれらの基質をユビキチン化させ、分解するＥ３リガーゼリクルーターに結合したタンパク質標的化リガンドからなる二官能性分解剤を使用する。しかしながら、このアプローチの１つの課題は、ヒトゲノムに数百の既知のＥ３リガーゼがあるにもかかわらず、標的タンパク質分解用途用に現在存在するＥ３リガーゼリクルーターが比較的少ないことである。ここで、Ｅ３ユビキチンリガーゼＲＮＦ４と反応するシステイン反応性小分子を同定するために、活性ベースタンパク質プロファイリング（ＡＢＰＰ）に基づく共有結合リガンドスクリーニングアプローチを使用した。このスクリーンからのリード共有結合リガンドは、ＲＩＮＧドメインの２つの亜鉛配位システインＣ１３２およびＣ１３５のうちの１つと反応するが、ＲＮＦ４活性には影響しない。このリードの効力をさらに最適化し、この潜在的なＲＮＦ４リクルーターを、ＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１：ＣＣＷ２８－３に結合した二官能性分解剤に組み込んだ。ＣＣＷ２８－３がプロテアソーム依存的にＢＲＤ４を分解することができること、およびこの分解がＲＮＦ４ノックアウト細胞で弱められることを示す。ケモプロテオミクス対応の共有結合リガンドスクリーニングプラットフォームを使用して、標的タンパク質分解用途に利用できるＥ３リガーゼリクルーターの範囲を拡大することの実現可能性を示す。

標的タンパク質分解は、細胞タンパク質分解機構を利用して標的タンパク質を選択的に排除することにより、アンドラッガブルなプロテオームに取り組むための画期的な創薬プラットフォームである^１，２。この技術には、Ｅ３リガーゼリクルーターに結合したタンパク質標的化リガンドからなる「分解剤」と呼ばれる二官能性分子の利用が含まれる。これらの分解剤は、Ｅ３リガーゼを特定のタンパク質標的に動員して、プロテアソーム依存的に標的をユビキチン化させ、分解することができる。標的の機能的阻害は分解剤の有効性に必要ではないため、この戦略は、リガンドが存在するプロテオーム内のいずれかのタンパク質を標的にして分解する可能性がある。しかしながら、この技術の適用における主要な課題は、Ｅ３リガーゼリクルーターの数が比較的少ないことである。約６００種類のＥ３リガーゼがあるが、セレブロン、ＶＨＬ、ＭＤＭ２、およびｃＩＡＰ用の小分子リクルーターなど、Ｅ３リガーゼリクルーターはごくわずかである^２，３。Ｅ３リガーゼに結合するリガンドを発見するための簡単な戦略を特定することは、標的タンパク質分解用途に利用できるＥ３リガーゼリクルーターのセットを拡大するために依然として重要なままである。

活性ベースタンパク質プロファイリング（ＡＢＰＰ）は、アンドラッガブルなタンパク質に対するリガンド発見のための強力なプラットフォームとして登場した^４－１０。ＡＢＰＰは、反応性ベースの化学プローブを利用して、プロテオーム全体の反応性およびリガンド結合可能なホットスポットを複雑な生物学的システムに直接マッピングする^{１１，１２}。競合的に使用すると、共有結合で作用する小分子を反応性ベースのプローブの結合と競合させて、目的のタンパク質に対する共有結合リガンドの発見を促進することができる^{４－７，９，１３－１５}。Ｅ３ユビキチンリガーゼと反応する可能性のある共有結合リガンドの発見に向けて、代表的な市販のＥ３リガーゼをシステイン反応性ヨードアセトアミド－ローダミン（ＩＡ－ローダミン）反応性ベースのプローブで標識できるかどうかを最初に調査した。ＩＡ－ローダミンは、用量反応的にＭＤＭ２、ＲＮＦ４およびＵＢＥ３Ａを標識することができた（図１Ａ）。以前の研究で既にＭＤＭ２およびＵＢＥ３Ａ小分子モジュレータを明らかにしているが^{１６－１８}、ＳＵＭＯ化タンパク質を認識し、これらのタンパク質をユビキチン化させて、後続のプロテアソーム分解を行うＥ３ユビキチンリガーゼＲＮＦ４のための化学ツールは存在しない^{１９，２０}。したがって、ＲＮＦ４の潜在的なＥ３リガーゼリクルーターの開発に注力した。

ＲＮＦ４共有結合リガンドを検索するために、ゲルベースＡＢＰＰを使用して純粋なヒトＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識に対してシステイン反応性共有結合リガンドライブラリーをスクリーニングした（図１Ｂ、表１）。このスクリーンから、ＴＲＨ１－７４、ＹＰ１－４４、ＤＫＭ２－７６、ＴＲＨ１－２３およびＴＲＨ１－１６３など、いくつかの潜在的なヒットを同定した。これらから、ＹＰ１－４４、ＴＲＨ１－１６３およびＴＲＨ１－２３は、ＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識の再現性のある用量反応性阻害を示した（図１Ｄ、図５）。これらの実験におけるＲＮＦ４の対応する銀染色に基づいて、ＴＲＨ１－１６３がタンパク質の沈殿を引き起こしている可能性があることを発見した。２３１ＭＦＰ溶解物における一般的なシステイン反応性のゲルベースＡＢＰＰ分析に基づくと、ＹＰ１－４４はＴＲＨ１－２３と比較して選択性がはるかに低かった（図５）。したがって、ＴＲＨ１－２３は最も有望なＲＮＦ４ヒットであるように見えた（図１Ｄ）。

次に、ＲＮＦ４内のＴＲＨ１－２３の修飾部位を同定しようとした。ＴＲＨ１－２３で処理したＲＮＦ４純粋タンパク質からのトリプシン消化物の液体クロマトグラフィー－タンデム質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）分析を実施し、ＴＲＨ１－２３が、ＲＮＦ４のＲＩＮＧドメインの２つの亜鉛配位システインＣ１３２およびＣ１３５の両方ではなくいずれかを共有結合的に修飾することを発見した（図２Ａ、２Ｂ）。機能的なＲＮＦ４リクルーターとしてのその有用性を支持して、以前の研究がこれらのシステインのセリンへの変異がＲＮＦ４機能を阻害することを示したので、ＴＲＨ１－２３がＲＮＦ４自己ユビキチン化活性に何らかの影響を与えたかどうかを見たかった^{２１－２３}。驚くべきことに、ＴＲＨ１－２３処理は、インビトロで再構成されたアッセイにおいてＲＮＦ４自己ユビキチン化活性を阻害しない（図２Ｃ）。ＴＲＨ１－２３治療によるＲＮＦ４阻害の欠如を説明する根本的なメカニズムはまだ理解されていないが、３つのシステインがＴＲＨ１－２３によって修飾されていないため、おそらく亜鉛がまだ配位部位に結合している可能性があるか、またはＴＲＨ１－２３が、ＲＮＦ４活性を維持するために、通常亜鉛が占める空間を埋めることがあると仮定する。それにもかかわらず、このＲＮＦ４阻害の欠如は、Ｅ３リガーゼリクルーターとしてのその潜在的な用途にとって理想的であった。

ＲＮＦ４に対する有望な非機能的リガンドである一方で、ＴＲＨ１－２３は、ＲＮＦ４リクルーターとして有用であるのに十分な効力を示さなかった。したがって、いくつかのＴＲＨ１－２３類似体を合成し、ゲルベースＡＢＰＰを使用して、ＲＮＦ４に対するそれらの効力および構造活性関係を試験した（図３Ａ～３Ｂ）。これらの類似体の中で、クロロアセトアミド足場にＮ－ベンジルおよび４－メトキシフェノキシフェニル置換を有するＣＣＷ１６が、１μＭまで観察されたＲＮＦ４のＩＡ－ローダミン標識が減少した類似体の中で最も強力であることが分かった。さらなる確認研究により、ＣＣＷ１６の５０％阻害濃度（ＩＣ５０）が１．８μＭであることが明らかになった（図３Ｃ）。ＴＲＨ１－２３類似体で観察された構造活性関係に基づいて、ＣＣＷ１６の４－メトキシ基がリンカーを拡大してＲＮＦ４ベースの分解剤を作製するための理想的な位置になると考えた。

ＣＣＷ１６を標的タンパク質分解用途のための潜在的なＲＮＦ４リクルーターとして使用できることを示すために、ＣＣＷ１６をＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１に結合する二官能性分解剤であるＣＣＷ－２８－３を合成した（図４Ａ）。ＣＣＷ－２８－３は、ＣＣＷ１６よりもＲＮＦ４に対して高い効力を示し、ＩＣ５０は０．５４μＭであった（図４Ｂ）。説得力のあることに、ＣＣＷ２８－３による処理は、２３１ＭＦＰ乳癌細胞において用量反応的にＢＲＤ４を分解し（図４Ｃ）、この分解は、細胞をプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）、ＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１、ならびにＥ１ユビキチン活性化酵素阻害剤ＴＡＫ－２４３で前処理することによって防止される（図４Ｄ～４Ｅ）。

次に、同位体タンデム直交タンパク質分解対応ＡＢＰＰ（ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ）プラットフォームを使用して、ＣＣＷ２８－３のプロテオーム全体の選択性を評価した^{４，６，７，１２}（図６）。２３１ＭＦＰ細胞をビヒクルもしくはＣＣＷ２８－３で処理し、得られたプロテオームをシステイン反応性ヨードアセトアミド－アルキン（ＩＡ－アルキン）プローブで標識した後、同位体的に軽いまたは重いＴＥＶプロテアーゼ切断可能なビオチン－アジドタグを、ビヒクル処理群およびＣＣＷ－２８－３処理群それぞれのプローブ標識タンパク質に付加した。ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰについて先に記載した方法を使用して、プローブ修飾ペプチドを濃縮し、溶出させ、分析した^{４，６，７，１２}。この実験では、おそらく他のＩＡ－アルキン標識タンパク質と比較して存在量が少ないためにＲＮＦ４のプローブ修飾ペプチドを観察できなかったが、同位体的に軽い対重い比が４を超える標的は、同定された１１１４の総定量化プローブ修飾ペプチドのうち７つしかないことを示した。最も注目すべきことに、ＣＣＷ２８－３のこれらのオフターゲットはいずれもユビキチン－プロテアソーム系の一部ではない（図６）。

ＣＣＷ－２８－３は完全に選択的ではなく、Ｅ３リガーゼのＲＩＮＧファミリー全体で保存された亜鉛配位システインを標的にしていたため、ＣＣＷ－２８－３を介したＢＲＤ４分解に対するＲＮＦ４の寄与を確認したかった。したがって、対照およびＲＮＦ４ノックアウトＨｅＬａ細胞におけるＣＣＷ２８－３を介したＢＲＤ４分解を比較した。説得力のあることに、ＨｅＬａ対照細胞で観察されたＢＲＤ４のＣＣＷ２８－３を介した分解は、ＲＮＦ４ノックアウト細胞では明らかではなかった（図４Ｆ、図７）。これらのデータはさらに、ＣＣＷ２８－３がＲＮＦ４の動員を通じてＢＲＤ４を分解することを示している。

本発明者らの研究は、ＡＢＰＰに基づく共有結合リガンドスクリーニングアプローチを使用して、Ｅ３リガーゼを標的とするエントリーポイントを迅速に発見することの実現可能性、および、これらの共有結合リガンドヒットを同定し、最適化して、標的タンパク質分解用途のための分解剤に組み込むことができることを示している。ＣＣＷ１６およびＣＣＷ－２８－３は、細胞内のＲＮＦ４に対してまだ完全に選択的ではないが、ＲＮＦ４依存的にＢＲＤ４を分解できることを示している。ＣＣＷ２８－３が、ＢＲＤ４だけでなく、ＪＱ１^２４に結合したＶＨＬリクルーターを利用するＭＺ１などの以前に報告された他のＢＲＤ４分解剤も分解しないことに留意されたい。将来の医薬品化学の努力を利用して、ＲＮＦ４に対するＣＣＷ１６の効力および選択性を最適化し、ＣＣＷ２８－３のリンカー配置および組成を最適化することにより、タンパク質基質のより良い分解を促進することができる。それにもかかわらず、ＣＣＷ１６は、セレブロン、ＶＨＬ、ＭＤＭ２およびｃＩＡＰ^２を標的とする、以前に報告された他の４つのＥ３リガーゼリクルーターを超える、ＲＮＦ４に対する新規の小分子Ｅ３リガーゼリクルーターとなる。ここで説明するアプローチは、Ｅ３リガーゼリクルーターまたは調節因子の範囲を拡大する上で、将来の用途に利用できると確信している。

実施例２：共有結合リガンドのスクリーニングおよび合成に関連する方法およびアッセイ
初期スクリーンで使用される共有結合リガンドライブラリー。ＲＮＦ４に対してスクリーニングされた共有結合リガンドの多くの合成および特徴付けは、以前に報告されている^{４－６，１３}。

ゲルベースＡＢＰＰ。ゲルベースＡＢＰＰ方法を、以前に記載されたように実施した^{５，６，２５，２６}。純粋な組換えヒトＲＮＦ４は、ＢｏｓｔｏｎＢｉｏｃｈｅｍ（Ｋ－２２０）から購入した。ＲＮＦ４（０．２５μｇ）を５０μＬのＰＢＳおよび１μＬのＤＭＳＯ（ビヒクル）または共有結合的に作用する小分子のいずれかに希釈して、目的の濃度を達成した。室温で３０分後、サンプルを２５０ｎＭＩＡ－ローダミン（ＳｅｔａｒｅｈＢｉｏｔｅｃｈ、６２２２、無水ＤＭＳＯ中で調製）で室温で１時間処理した。次に、サンプルを２０μＬの４×還元ＬａｅｍｍｌｉＳＤＳサンプルローディング緩衝液（ＡｌｆａＡｅｓａｒ）で希釈し、９０℃で５分間加熱した。サンプルを、プレキャスト４～２０％ＣｒｉｔｅｒｉｏｎＴＧＸゲル（Ｂｉｏ－ＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）で分離した。ＣｈｅｍｉＤｏｃＭＰ（Ｂｉｏ－ＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）で蛍光イメージングを実施し、ＩｍａｇｅＪを使用したデンシトメトリーによって標的標識の阻害を評価した。

ＲＮＦ４のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析。精製したＲＮＦ４（１０μｇ）を８０μＬのＰＢＳで希釈し、ＤＭＳＯまたは化合物（５０μＭ）で３０分間処理した。次に、ＤＭＳＯ対照を軽いヨードアセトアミド（ＩＡ）で処理しつつ、化合物で処理したサンプルを重いＩＡと室温でそれぞれ１時間インキュベートした（１００μＭ、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、７２１３２８）。サンプルは、２０μＬの１００％（ｗ／ｖ）ＴＣＡを加えて沈殿させ、ペアごとに組み合わせてから、－８０℃で１時間冷却した。次に、合わせたサンプルを最高速度にて４℃で２０分間回転させ、上澄みを注意深く除去し、サンプルを氷冷した０．０１ＭＨＣｌ／９０％アセトン溶液で洗浄する。次に、サンプルを、１００ｍＭの重炭酸アンモニウム緩衝液に０．１％のＰｒｏｔｅａｓｅＭａｘ（ＰｒｏｍｅｇａＣｏｒｐ．、Ｖ２０７１）を含有する２．４Ｍの尿素に再懸濁した。サンプルを、６０℃で３０分間１０ｍＭのＴＣＥＰで還元させた。次に、サンプルをＰＢＳで５０％希釈した後、シークエンシンググレードのトリプシン（サンプルあたり１μｇ、ＰｒｏｍｅｇａＣｏｒｐ、Ｖ５１１１）を加えて、３７℃で一晩インキュベートした。翌日、サンプルを１３２００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。上清を新しいチューブに移し、最終濃度が５％ギ酸になるように酸性化し、ＭＳ分析まで－８０℃で保存した。

ＲＮＦ４ユビキチン化アッセイ。インビトロ自己ユビキチン化アッセイのために、１５μＬユビキチン化アッセイ緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＭｇＣｌ_２、５ｍＭのＤＴＴ（ｐＨ７．４））中の２００ｎＭＲＮＦ４を、ＤＭＳＯビヒクルまたは共有結合的に作用する化合物と室温で３０分間プレインキュベートした。続いて、ＵＢＥ１（５０ｎＭ、ＢｏｓｔｏｎＢｉｏｃｈｅｍ、Ｅ－３０５）、ＵＢＥ２Ｄ１（４００ｎＭＢｏｓｔｏｎＢｉｃｈｅｍ、Ｅ２－６１５）、Ｆｌａｇ－ユビキチン（４０００ｎＭ、ＢｏｓｔｏｎＢｉｏｃｈｅｍ、Ｕ－１２０）およびＡＴＰ（２００μＭ）をユビキチン化アッセイ緩衝液に加えて、総量を３０μＬにした。混合物を室温で３０分間インキュベートした後、１０μＬの４×Ｌａｅｍｍｌｉ緩衝液でクエンチした。ユビキチン化活性は、前述のようにＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル上での分離およびウエスタンブロッティングによって測定した。

細胞培養。２３１ＭＦＰ細胞は、ＢｅｎｊａｍｉｎＣｒａｖａｔｔ教授から入手し、前述のようにＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞の外植腫瘍異種移植片から生成された^２７。ＲＮＦ４ノックアウトＨｅＬａ細胞は、ＥｄｉＧｅｎｅＵＳＡ（ＣＬ００３３０２５００３Ａ）から購入した。ＲＮＦ４野生型ＨｅＬａ細胞は、ＥｄｉＧｅｎｅＵＳＡまたはＵＣＢｅｒｋｅｌｅｙＣｅｌｌＣｕｌｔｕｒｅＦａｃｉｌｉｔｙから提供された。２３１ＭＦＰ細胞を、１０％（ｖ／ｖ）のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有するＬ－１５培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ）で培養し、０％のＣＯ_２で３７℃に維持した。ＨｅＬａ細胞を、１０％（ｖ／ｖ）のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有するＤＭＥＭ培地（Ｃｏｒｎｉｎｇ）で培養し、５％のＣＯ_２で３７℃に維持した。

細胞ベースの分解剤アッセイ。分解剤活性をアッセイするために、細胞を、２．０～２．５ｍＬの培地中の６ｃｍ組織培養皿（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に播種し（２３１ＭＦＰ細胞は５００，０００個、ＨｅＬａ細胞は３００，０００個）、一晩接着させた。翌朝、培地を、ＤＭＳＯ中の１０００×ストックから希釈した所望の濃度の化合物を含有する完全培地と交換した。指定された時点で、細胞を氷上でＰＢＳで１回洗浄した後、１５０μＬの溶解緩衝液をプレートに加えた（１０ｍＭリン酸ナトリウム、１５０ｍＭＮａＣｌ、０．１％ＳＤＳ、０．５％デオキシコール酸ナトリウム、１％ＴｒｉｔｏｎＸ１００）。細胞を溶解緩衝液中で５分間インキュベートした後、掻き取り、マイクロ遠心チューブに移した。次に、溶解物を－８０℃で凍結するか、または直ちにウエスタンブロッティングのために処理した。ウエスタンブロッティングの準備として、溶解物を２０，０００ｇのスピンで１０分間清澄化し、得られた上清をＢＣＡアッセイにより定量した。溶解物は、ＰＢＳで希釈することによって標準化し、最低濃度の溶解物および適切な量の４×Ｌａｅｍｍｌｉ還元緩衝液を加えた。

ウエスタンブロッティングＲＮＦ４（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ、１７８１０－１－ＡＰ、１：１０００）、ＧＡＰＤＨ（Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈ、６０００４－１－ＩＧ、１：５０００）、ＢＲＤ４（Ａｂｃａｍ、Ａｂ１２８８７４、１：１０００）、およびベータアクチン（ＰｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈＧｒｏｕｐＩｎｃ．、６６０９－１－ＩＧ、１：７０００）は、指定された商業的供給源から入手し、希釈液は、指定された希釈率にて５％ＢＳＡ／ＴＢＳＴ中で調製した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥによって分離し、ｉＢｌｏｔシステムを使用してニトロセルロース膜に移した。ブロットを、Ｔｗｅｅｎ２０（ＴＢＳＴ）溶液を含有するＴｒｉｓ緩衝生理食塩水中の５％ＢＳＡを用いて室温で１時間ブロックし、ＴＢＳＴ中で洗浄し、製造元が推奨する希釈剤で希釈した一次抗体を用いて４℃で一晩プローブした。ＴＢＳＴで洗浄した後、ブロットを、Ｌｙ－Ｃｏｒから購入した二次抗体と共に暗所でインキュベートし、ＴＢＳＴ中の５％ＢＳＡ中に１：１０，０００の希釈で室温にて使用した。さらに洗浄した後、ＯｄｙｓｓｅｙＬｉ－Ｃｏｒスキャナーを使用してブロットを可視化した。追加の一次抗体のインキュベーションが必要な場合は、ＲｅＢｌｏｔＰｌｕｓＳｔｒｏｎｇＡｎｔｉｂｏｄｙＳｔｒｉｐｐｉｎｇＳｏｌｕｔｉｏｎ（ＥＭＤＭｉｌｌｉｐｏｒｅ、２５０４）を使用して膜をストリッピングし、洗浄して再度ブロックしてから、一次抗体と再インキュベートした。

ＩｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ化学プロテオーム研究。ＩｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ研究は、以前に報告されたように行われた^{４，６，７，１２}。簡単に説明すると、細胞をＰＢＳ中でプローブ超音波処理して溶解し、タンパク質濃度をＢＣＡアッセイで測定した^２８。インサイチュ実験では、ＤＭＳＯビヒクルまたは共有結合的に作用する小分子（１０００×ＤＭＳＯストックから）のいずれかで細胞を９０分間処理してから、細胞を収集して溶解した。インビトロ実験では、ＰＢＳで希釈したプロテオームサンプル（生物学的複製あたり４ｍｇのプロテオーム）をＤＭＳＯビヒクルまたは共有結合的に作用する小分子で室温にて３０分間処理した。続いて、プロテオームをＩＡ－アルキン（１００μＭ、ＣｈｅｓｓＧｍｂＨ、３１８７）で室温にて１時間処理した。ＣｕＡＡＣは、ｔｒｉｓ（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）（１ｍＭ）、ｔｒｉｓ［（１－ベンジル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メチル］アミン（ＴＢＴＡ）（３４μＭ）、硫酸銅（ＩＩ）（１ｍＭ、Ｓｉｇｍａ）、およびビオチン－リンカー－アジドを順次加えることによって実施し、リンカーを、対照または処理プロテオームの処理のために同位体的に軽いまたは重いバリンと共にＴＥＶプロテアーゼ認識配列で官能化した。ＣｕＡＡＣ後、プロテオームを、６５００×ｇでの遠心分離によって沈殿させ、氷冷メタノール中で洗浄し、１：１の対照／処理比で混合し、再び洗浄し、次いで、変性し、１．２％ＳＤＳ／ＰＢＳ中で８０℃まで５分間加熱することによって再可溶化した。不溶性成分を、６５００×ｇでの遠心分離によって沈殿させ、可溶性プロテオームを５ｍｌの０．２％ＳＤＳ／ＰＢＳ中に希釈した。４℃で一晩回転させながら、標識タンパク質を、アビジン－アガロースビーズ（１７０μＬの再懸濁ビーズ／サンプル、ＴｈｅｒｍｏＰｉｅｒｃｅ）に結合させた。ビーズ結合タンパク質を、ＰＢＳおよび水でそれぞれ３回洗浄することにより濃縮し、次いで、６Ｍ尿素／ＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ）に再懸濁し、ＴＣＥＰ（１ｍＭ、Ｓｉｇｍａ）中で還元し、ヨードアセトアミド（ＩＡ）（１８ｍＭ、Ｓｉｇｍａ）でアルキル化し、次いで、洗浄し、２Ｍ尿素に再懸濁し、２μｇ／サンプルのシークエンシンググレードのトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ）で一晩トリプシン処理した。トリプシンペプチドを溶出した。ビーズをＰＢＳおよび水でそれぞれ３回洗浄し、ＴＥＶ緩衝液（水、ＴＥＶ緩衝液、１００μＭジチオスレイトール）で洗浄し、Ａｃ－ＴＥＶプロテアーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む緩衝液に再懸濁し、一晩インキュベートした。ペプチドを、水で希釈し、ギ酸（１．２Ｍ、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）で酸性化し、分析用に調製した。

質量分析。全てのプロテオミクス実験由来のペプチドを、４ｃｍのＡｑｕａＣ１８逆相樹脂（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ番号０４Ａ－４２９９）を充填した内径２５０μｍの溶融シリカ毛細管に加圧装填し、これは、１０分間かけて１００％緩衝液Ａから１００％緩衝液Ｂの勾配を使用したＡｇｉｌｅｎｔ６００シリーズＨＰＬＣ上で事前に平衡化し、その後、１００％緩衝液Ｂで５分間洗浄し、１００％緩衝液Ａで５分間洗浄したものであった。その後、サンプルを、ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ研究のために、１０ｃｍのＡｑｕａＣ１８逆相樹脂および３ｃｍの強カチオン交換樹脂を充填した１３ｃｍのレーザープルカラムへのＭｉｃｒｏＴｅｅＰＥＥＫ３６０μｍのフィッティング（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＃ｐ－８８８）を使用して付着させた。サンプルを、５００ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液の０％、２５％、５０％、８０％、および１００％の塩バンプを使用し、かつ緩衝液Ａ中５～５５％緩衝液Ｂの勾配（緩衝液Ａ：９５：５の水：アセトニトリル、０．１％ギ酸、緩衝液Ｂ：８０：２０のアセトニトリル：水、０．１％ギ酸）を使用した、５段階多次元タンパク質同定技術（ＭｕｄＰＩＴ）プログラムを使用したＱＥｘａｃｔｉｖｅＰｌｕｓ質量分析計（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して分析した。データを、動的排除を有効にして（６０秒）、データ依存型取得モードで収集した。１回のフルＭＳ（ＭＳ１）スキャン（４００～１８００ｍ／ｚ）を行い、続いて、ｎ番目に最も豊富なイオンの１５回のＭＳ２スキャン（ＩＴＭＳ）を行った。加熱キャピラリー温度を２００℃に設定し、ナノスプレー電圧を２．７５ｋＶに設定した。

データは、ＲａｗＥｘｔｒａｃｔｏｒ１．９．９．２（ＳｃｒｉｐｐｓＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ）を使用してＭＳ１およびＭＳ２ファイルの形式で抽出し、ＩＰ２ｖ．３（ＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＰｒｏｔｅｏｍｉｃｓＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ）のＰｒｏＬｕＣＩＤ検索方法論を用いてＵｎｉｐｒｏｔヒトデータベースに対して検索した^２９。システイン残基を、カルボキシアミノメチル化についての静的修飾（＋５７．０２１４６）およびメチオニン酸化についての最大３つの特異的修飾、および軽または重ＴＥＶタグ（それぞれ、＋４６４．２８５９６または＋４７０．２９９７７）で検索した。ペプチドは、少なくとも１つのトリプシン末端を有し、ＴＥＶ修飾を含むことが必要とされた。ＰｒｏＬＵＣＩＤデータを、ＤＴＡＳｅｌｅｃｔを通してフィルター処理して、５％未満のペプチド偽陽性率を達成した。３つの生物学的複製のうち２つ全てにおいて明らかであったプローブ修飾ペプチドのみを、それらの同位体の軽対重比について解釈した。３を超える比を示すプローブ修飾ペプチドを、共有結合的に作用する小分子の潜在的な標的としてさらに分析した。３を超える比を有する修飾ペプチドの場合、これらのヒットをフィルタリングして、３つの生物学的複製全てに存在するペプチドを探した。プローブ修飾ペプチド比が３を超える場合、３つの比が３を超えるペプチドのみを解釈し、それ以外の場合は最低の比に置き換えられた。プローブ修飾ペプチド比が４を超える場合、３つの比が４を超えるペプチドのみを解釈し、それ以外の場合は最低の比に置き換えられた。次に、３を超える比を有する、得られたプローブ修飾ペプチドのＭＳ１ピーク形状が、全ての生物学的複製にわたって解釈したペプチドに対して良好な品質であることを手動で確認した。

実施例３．ＲＮＦ４に対してスクリーニングされた共有結合リガンドの合成および特徴付け
一般的手順Ａ。アミン（１当量）をＤＣＭ（５ｍＬ／ｍｍｏｌ）中に溶解し、０℃に冷却した。この溶液に、塩化アクリロイル（１．２当量）、続いて、トリエチルアミン（１．２当量）を加えた。溶液を室温に加温させ、一晩撹拌した。その後、溶液をブラインで洗浄し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（および必要に応じて再結晶）により精製して、対応するアクリルアミドを得た。

一般的手順Ｂ。アミン（１当量）をＤＣＭ（５ｍＬ／ｍｍｏｌ）中に溶解し、０℃に冷却した。この溶液に、塩化クロロアセチル（１．２当量）、続いて、トリエチルアミン（１．２当量）を加えた。溶液を室温に加温させ、一晩撹拌した。その後、溶液をブラインで洗浄し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（および必要に応じて再結晶）により精製して、対応するアクリルアミドを得た。

Ｎ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＤＫＭ２－８４）。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の４－アミノインダン（４０２ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した。この溶液に、塩化アクリロイル（３７９ｍｇ、４．２ｍｍｏｌ）を加え、続いて、トリエチルアミン（３７９ｍｇ、３．７ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温に加温させ、一晩撹拌した。溶液をブラインで洗浄し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０％の酢酸エチル）により精製して、白色固体として、５９％の収率で、生成物（３３２ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ７．７２（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５４（ｓ，１Ｈ），７．１０（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），６．４０－６．２６（ｍ，２Ｈ），５．６９（ｄｄ，Ｊ＝１．９，９．７Ｈｚ，１Ｈ），２．９１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．７８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），２．０５（五重項，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）。^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：１６３．５，１４５．３，１３４．４，１３３．６，１３１．２，１２７．５，１２７．２，１２．０，１９．２，３３．２，３０．１，２４．８．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１８８．１０７０（Ｃ_１２Ｈ_１４ＮＯ）。観測値：１８８．１０６９

Ｎ－アリル－Ｎ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＩＧＡ１－１２）。テトラヒドロフラン（８ｍＬ）中の水素化ナトリウム（９６ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）の溶液を窒素雰囲気下に置いた。この溶液に、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）中のＮ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（１８７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を０℃に冷却し、撹拌した。３０分後に３－ブロモプロプ－１－エン（４８４ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）を加え、その後、溶液を室温まで加温させ、一晩撹拌した。溶液を水でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２０％の酢酸エチル）によって精製して、黄色結晶性固体として、収率６７％で、生成物（１５１ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．０６－７．１８（ｍ，２Ｈ），６．８０－６．８８（ｍ，１Ｈ），６．２６－６．３７（ｄｄ，Ｊ＝１６．８，２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．７６－５．９６（ｍ，２Ｈ），５．３８－５．４８（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９８－５．０８（ｍ，２Ｈ），４．４０－４．５２（ｄｄｔ，Ｊ＝１４．５，６．３，１．３Ｈｚ，１Ｈ），４．００－４．１１（ｄｄｔ，Ｊ＝１４．５，６．８，１．２Ｈｚ，１Ｈ），２．８２－２．９８（ｍ，２Ｈ），２．５９－２．７９（ｍ，２Ｈ），１．９２－２．０７（ｍ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．１，１４６．５，１４２．４，１３７．９，１３３．０，１２８．４，１２７．８，１２７．４８，１２６．１，１２４．３，１１８．１，５１．６，３３．３，３０．９，２５．０．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２２８．１３（Ｃ_１５Ｈ_１７ＮＯ）。観測値：２２８．１３８１．

Ｎ－ベンジル－Ｎ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＩＧＡ１－１４）。テトラヒドロフラン（８ｍＬ）中の水素化ナトリウム（９６ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）の溶液を窒素雰囲気下に置いた。この溶液に、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）中のＮ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（１８７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を０℃に冷却し、撹拌した。３０分後に臭化ベンジル（４７６ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）を加え、その後、溶液を室温まで加温させ、一晩撹拌した。溶液を水でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２０％の酢酸エチル）によって精製して、橙色油として、収率６３％で、生成物（１７３ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．１０－７．３５（ｍ，７Ｈ），６．７４－６．８５（ｄｄ，Ｊ＝７．８，１．１Ｈｚ，１Ｈ），６．４０－６．５５（ｄｄ，Ｊ＝１６．８，２．１Ｈｚ，１Ｈ），５．９３－６．０８（ｄｄ，Ｊ＝１６．８，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），５．４９－５．６２（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．７８－５．１０（ｍ，２Ｈ），２．８５－３．０２（ｍ，２Ｈ），２．５２－２．６７（ｍ，１Ｈ），２．２２－２．３７（ｍ，１Ｈ），１．８３－２．０１（ｍ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １４６．４，１４２．９，１３７．７，１３７．３，１２９．３，１２８．４，１２８．３，１２８．０，１２７．５，１２７．５，１２６．０，１２４．３，５２．３，３３．２，３０．６，２５．１．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２７８．１５（Ｃ_１９Ｈ_１９ＮＯ）。観測値：２７８．１５３８．

Ｎ－アリル－Ｎ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＩＧＡ１－１５）。テトラヒドロフラン（８ｍＬ）中の水素化ナトリウム（９６ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）の溶液を窒素雰囲気下に置いた。この溶液に、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）中のＮ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（１８７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を０℃に冷却し、撹拌した。３０分後に１－ブロモヘキサン（６６０ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）を加え、その後、溶液を室温まで加温させ、一晩撹拌した。溶液を水でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２０％の酢酸エチル）によって精製して、黄色油として、収率３４％で、生成物（９２ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．１１－７．２５（ｍ，２Ｈ），６．８６－６．９６（ｄｄ，Ｊ＝７．５，１．２Ｈｚ，１Ｈ），６．３０－６．４０（ｄｄ，Ｊ＝１６．８，２．１Ｈｚ，１Ｈ），５．８６－６．００（ｍ，１Ｈ），５．４１－５．５１（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，２．１Ｈｚ，１Ｈ），３．８２－３．９６（ｍ，１Ｈ），３．４２－３．５６（ｍ，１Ｈ），２．９０－３．０４（ｍ，２Ｈ），２．６５－２．８５（ｍ，２Ｈ），１．９８－２．１６（ｍ，２Ｈ），１．４７－１．６３（ｍ，２Ｈ），１．２０－１．３６（ｍ，６Ｈ），０．８０－０．９０（ｍ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．１６，１４６．５４，１４２．３８，１３８．２１，１２８．５９，１２７．５１，１２７．３５，１２６．０９，１２４．１３，４８．６７，３３．２６，３１．６２，３０．８５，２７．８５，２６．７２，２５．０１，２２．５９，１４．０５．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２７２．１９（Ｃ_１８Ｈ_２５ＮＯ）。観測値：２７２．２００７．

１－（４－（２－メチルキノリン－４－イル）ピペラジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＩＧＡ１－２６）。ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の２－メチル－４－（ピペラジン－１－イル）キノロン（４５５ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した。この溶液に、塩化アクリロイル（２１７ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を加え、続いて、トリエチルアミン（２４３ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温に加温させ、一晩撹拌した。溶液をブラインで洗浄し、粗生成物を塩基性アルミナクロマトグラフィー（１００％酢酸エチル）により精製して、黄色油として、２６％の収率で、生成物（１４５ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．９０－８．０５（ｍ，２Ｈ），７．５８－７．７０（ｄｄｄ，Ｊ＝８．４，６．８，１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４０－７．５０（ｄｄｄ，Ｊ＝８．２，６．８，１．３Ｈｚ，１Ｈ），６．６８－６．７６（ｓ，１Ｈ），６．５６－６．６７（ｄｄ，Ｊ＝１６．８，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），６．３０－６．４０（ｄｄ，Ｊ＝１６．８，２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．７０－５．８０（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，２．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７０－４．０６（ｄ，Ｊ＝５４．７Ｈｚ，４Ｈ），３．１０－３．３０（ｔ，Ｊ＝５．０Ｈｚ，４Ｈ），２．６２－２．７２（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．５，１５９．４，１５６．２，１４９．２，１２９．２６，１２９．２４，１２８．３，１２７．３，１２４．９，１２３．０，１２１．６，１０９．８，５２．３，５１．９，４５．８，４２．０，２５．６．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２８２．１７（Ｃ_１７Ｈ_１９Ｎ_３Ｏ）。観測値：２８２．１５９７．

Ｎ－（７－ブロモ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－６５）。酢酸（１０ｍＬ）中のＮ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＤＫＭ２－８４、４６９ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）の溶液に臭化アンモニウム（３０５ｍｇ、３．１ｍｍｏｌ）を加え、続いて過酸化水素溶液（水中５０％、１．９０ｍＬ）を滴下した。反応物を一晩撹拌し、その後、飽和重炭酸ナトリウムの溶液で注意深く中和し、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。次に、合わせた有機物を蒸発させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２０％の酢酸エチル）によって精製して、白色固体として６２１ｍｇの生成物を得た（９３％）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ ７．３６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），６．４９（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｄｄ，Ｊ＝１．８，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），５．７７（ｄｄ，Ｊ＝１．８，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），２．９５（ｑ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，４Ｈ），２．０８（五重項，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ １４６．５，１４０．２，１３４．２，１３２．０，１３０．８，１２８．１，１２４．３，１１６．９，１０１．４，３５．８，３２．９，２４．９．

Ｎ－メチル－Ｎ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１１５）。窒素雰囲気下、０℃で、テトラヒドロフラン（８ｍＬ）中の水素化ナトリウム（鉱油中６０％の分散液、１６７ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）の溶液に、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）中のＮ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＤＫＭ－２－８４、１８８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）溶液を加えた。３０分間撹拌した後、ヨウ化メチル（０．２５ｍＬ、４．０ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温に加温させ、一晩撹拌した。溶液を水でクエンチし、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させ、得られた粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２０％の酢酸エチル）により精製して、３５％の収率で、透明な油として、生成物（７１ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．１９－７．１３（ｍ，２Ｈ），６．９０（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），６．３２（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．９６（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．４３（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），３．２４（ｓ，３Ｈ），２．９３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．８１－２．６６（ｍ，２Ｈ），２．０８－２．００（ｍ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．６，１４６．６，１４１．７，１３９．３，１２８．２，１２７．７，１２７．４，１２５．１，１２４．２，３６．０，３３．２，３０．５，２４．９．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２０２．１２２６（Ｃ_１３Ｈ_１６ＮＯ）。観測値：２０２．１２２４．

Ｎ－（３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１２９）。０℃でエタノール（２０ｍＬ）中の４－アミノインダン（１．０ｇ、７．５ｍｍｏｌ）の溶液に無水酢酸（１．４ｍＬ、１５．０ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温に上げ、一晩撹拌した後、溶媒を蒸発させた。次に、残留物をアセトン（５０ｍＬ）に溶解し、それに１５％硫酸マグネシウム水溶液（６．７５ｍＬの水中１．２ｇ）、続いて過マンガン酸カリウム（３．４ｇ、１７．０ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を２４時間撹拌した。反応物をセライトのパッドを通して濾過し、クロロホルム、次に水で溶出した。溶離液を分離し、追加のクロロホルムで水層を数回抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させた。次に、残留物を６ＮＨＣｌ溶液（２０ｍＬ）に溶解し、９０℃に加熱した。５時間撹拌した後、溶液を冷却し、少量の炭酸カリウムで中和し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、６１０ｍｇ（３ステップで５５％）の粗７－アミノインダン－１－オンを得て、これをさらに精製することなく使用した。ジクロロメタン（１５ｍＬ）中の７－アミノインダン－１－オンの溶液に、塩化アクリロイル（０．３９ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．６７ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ）をＮ_２雰囲気下、０℃で加えた。反応混合物を室温まで加温させ、一晩撹拌した。溶液を１ＭＨＣｌ溶液（２×）およびブラインで洗浄し、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１０％～２０％の酢酸エチル）により精製して、３９０ｍｇの白色固体（４７％収率、４ステップで合わせて２６％）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １０．６４（ｓ，１Ｈ），８．４５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．４５（ｄｄ，Ｊ＝１．０，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），５．８２（ｄｄ，Ｊ＝１．０，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），３．１１（ｔ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７４－２．７１（ｍ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ２０９．３，１６４．４，１５５．９，１３８．７，１３７．０，１３１．７，１２８．０，１２３．１，１２０．８，１１６．９，３６．５，２５．５．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２０２．０８６３（Ｃ_１２Ｈ_１２ＮＯ_２）。観測値：２０２．０８６０．

Ｎ－（３－ヒドロキシ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１３３）。窒素雰囲気下、無水メタノール（７ｍＬ）中のＮ－（３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ－１－１２９、２０１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（４６．１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。３０分間撹拌した後、反応物を飽和重炭酸ナトリウム溶液でクエンチし、ＤＣＭで３回抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０～５０％の酢酸エチル）で精製して、１９０ｍｇの生成物を白色固体として得た（９４％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ８．９３（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），６．２９（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．１５（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１６．９Ｈｚ，１Ｈ），５．６６（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３２（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），２．９６（ｄｄｄ，Ｊ＝２．４，９．０，１５．７Ｈｚ），２．７３（五重項，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），２．５６－２．４８（ｍ，１Ｈ），１．９６－１．８６（ｍ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６４．１，１４３．７，１３５．６，１３２．８，１３１．６，１２９．５，１２７．３，１２１．０，１１８．５，７６．２，３６．０，２９．８．ＨＲＭＳ（－ＥＳＩ）：計算値：２０２．０８７４（Ｃ_１２Ｈ_１２ＮＯ_２）。観測値：２０２．０８７４．

Ｎ－（１－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１３４）。酢酸（２５０ｍＬ）中の４－ニトロインダン（５．３８ｇ、３３ｍｍｏｌ）の溶液に、三酸化クロム（８．９５ｇ、９０ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。２４時間撹拌した後、反応物を２ＭＮａＯＨで中和し、酢酸エチルで５回抽出した。合わせた有機物を飽和重炭酸ナトリウム溶液およびブラインで洗浄し、次に硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１０～２０％の酢酸エチル）により精製して、１．２６ｇ（約７．１ｍｍｏｌ）の４－ニトロインダノンを白色固体として得た。この中間体を、窒素バルーンの雰囲気下で無水メタノール（２１ｍＬ）に溶解した活性炭（１２５ｍｇ、１０重量％）上のパラジウムと組み合わせた。反応物を室温の水浴の冷却下で撹拌しながら、トリエチルシラン（１１．３ｍＬ、７１ｍｍｏｌ）を、添加漏斗によって１０分間にわたってゆっくりと加えた。さらに２０分間撹拌した後、反応混合物をセライトのパッドを通して濾過し、続いて濃縮して、粗４－アミノインダノンを得、これをさらに精製することなく使用した。次に、この最終中間体をＮ_２雰囲気下でＤＣＭ（２１ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した後、塩化アクリロイル（０．７７ｍＬ、９．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．１９ｍＬ、８．５ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。一晩撹拌しながら反応物を室温まで加温させ、その時点で反応物をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０～５０％の酢酸エチル）により精製して、９８９ｍｇの白色固体を得た（３ステップで１５％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ８．２０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｓ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），６．４８（ｄ，Ｊ＝１６．７Ｈｚ，１Ｈ），６．３７（ｄｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．８３（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），３．０４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．７０（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ２０６．３，１６３．９，１４６．０，１３８．０，１３５．４，１３０．７，１２８．８，１２８．７，１２７．６，１２０．４，３６．１，２３．４．ＨＲＭＳ（－ＥＳＩ）：計算値：２００．０７１７（Ｃ_１２Ｈ_１０ＮＯ_２）。観測値：２００．０７１５．

１－（４－（（３ｓ，５ｓ，７ｓ）－アダマンタン－１－イル）ピペラジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＴＲＨ１－１４３）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の１－（１－アダマンチル）ピペラジン（４４１ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）溶液に、塩化アクリロイル（０．２０ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）をＮ_２雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、２４時間撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０％～５％のメタノール）によって精製して、１３１ｍｇの褐色固体を得た（２４％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．５９（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．３１（ｄｄ，Ｊ＝１．８，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７７（ｄｄ，Ｊ＝５．７７Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｓ，４Ｈ），３．１７（ｓ，４Ｈ），２．２５（ｓ，３Ｈ），２．０６（ｓ，６Ｈ），１．７１（ｑ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，６Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．０，１２９．０，１２６．４，６３．３，４４．６，４４．１，４２．９，３９．０，３６．４，３５．５，２９．３．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２７５．２１１８（Ｃ_１７Ｈ_２７Ｎ_２Ｏ）。観測値：２７５．２１１３．

１－（４－（フラン－２－カルボニル）ピペラジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＴＲＨ１－１４５）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の１－（２－フロイル）ピペラジン（３６２ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）溶液に、塩化アクリロイル（０．２０ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）をＮ_２雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、２４時間撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の７０％～１００％の酢酸エチル）によって精製して、４４６ｍｇの黄色固体を得た（９５％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．５３（ｍ，１Ｈ），７．０６（ｄｄ，Ｊ＝０．７，３．５Ｈｚ，１Ｈ），６．６１（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．５２（ｄｄ，Ｊ＝１．８，３．５Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７５（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．８４－３．６７（ｍ，８Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．５，１５９．１，１４７．５，１４４．０，１２８．５，１２７．１，１１７．０，１１１．５，４５．６，４１．９．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２３５．１０７７（Ｃ_１２Ｈ_１５Ｎ_２Ｏ_３）。観測値：２３５．１０７５．

Ｎ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）メタクリルアミド（ＴＲＨ１－１４９）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の４－アミノインダン（０．２４ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）溶液に、Ｎ_２雰囲気下、０℃で塩化メタクリロイル（０．２３ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、３．５時間撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３５％～４０％の酢酸エチル）によって精製して、３７８ｍｇのオフホワイト色固体を得た（９４％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．７２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｓ，１Ｈ），７．１２（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），５．７９（ｓ，１Ｈ），５．４２（ｓ，１Ｈ），２．９３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７９（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），７．１２－２．０６（ｍ，２Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６６．３，１４５．１，１４０．６，１３４．５，１３３．７，１２７．０，１２０．７，１１９．８，１１８．９，３３．１，２９．９，２４．７，１８．６．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２０２．１２２６（Ｃ_１３Ｈ_１６ＮＯ）。観測値：２０２．１２２４．

Ｎ－（３－オキソイソインドリン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１５２）。ジクロロメタン（４ｍＬ）中の７－アミノイソインドリン－１－オン（９９ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化アクリロイル（０．０７ｍＬ、０．８ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．１１ｍＬ、０．８ｍｍｏｌ）をＮ_２雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、一晩撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中５０～６０％の酢酸エチル）によって精製して、５８ｍｇの白色固体を得た（４３％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １０．５０（ｓ，１Ｈ），８．５８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．４６（ｄｄ，Ｊ＝１．３，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３６（ｄｄ，Ｊ＝１０．０，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），５．８１（ｄｄ，Ｊ＝１．３，１０．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４６（ｓ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １７２．９，１６４．２，１４３．９，１３８．２，１３３．８，１３１．８，１２７．８，１１８．０，１１７．７，１１７．６，４５．６．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２０３．０８１５（Ｃ_１１Ｈ_１１Ｎ_２Ｏ_２）。観測値：２０３．０８１４．

Ｎ－（ピラジン－２－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１５６）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のアミノピラジン（１９２ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化アクリロイル（０．２０ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を、Ｎ_２雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、一晩撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中５０％～７０％の酢酸エチル）によって精製して、２２ｍｇの白色固体を得た（７％収率）。^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ９．６５（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），８．３８（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．２７（ｄｄ，Ｊ＝１．６，２．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１９（ｓ，１Ｈ），６．５４（ｄｄ，Ｊ＝０．８，１６．９Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，１６．９Ｈｚ，１Ｈ），５．９０（ｄｄ，Ｊ＝０．８，１０．３Ｈｚ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６３．５，１４８．２，１４２．２，１４０．６，１３７．４，１３０．２，１２９．８．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１５０．０６６２（Ｃ_７Ｈ_８Ｎ_３Ｏ）。観測値：１５０．０６６０．

Ｎ－（２－オキソ－２－（フェニルアミノ）エチル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１６０）。水（３０ｍＬ）中のグリシン（１．５０ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）および重炭酸ナトリウム（１．７０ｇ、２０．２ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃で、塩化アクリロイル（２．４５ｍＬ、３０．２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。３．５時間撹拌した後、反応物を酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮して油を得た。油をヘキサンで処理すると、白色固体が崩壊し、これを重力濾過によって収集して、１２４ｍｇの粗アクリロイルグリシンを得て、そのうち５８ｍｇ（粗物質の４７％）をさらに精製することなく直ちに使用した。この固体（約０．４５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２．５ｍＬ）に溶解し、ＤＭＦ（２．５ｍＬ）中のＮ－（３－ジメチルアミノプロピル）－Ｎ’－エチルカルボジイミド塩酸塩（１０４ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）および４－ジメチルアミノピリジン（６８ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の溶液、続いてアニリン（０．０５０ｍＬ、０．５４ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を一晩撹拌し、酢酸エチルで希釈し、重炭酸ナトリウムの飽和溶液およびブラインの両方で洗浄した。次に、有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０～６０％の酢酸エチル）によって精製して、１９ｍｇの表題化合物を白色固体として得た（２ステップで１％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ ７．５６－７．５３（ｍ，２Ｈ），７．３０（ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ），７．０８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｄｄ，Ｊ＝９．９，１７．１Ｈｚ，１Ｈ），６．２６（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１７．１Ｈｚ，１Ｈ），５．７１（ｄｄ，Ｊ＝２．０，９．９Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｓ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ １６９．４，１６８．６，１３９．５，１３１．７，１２９．８，１２７．２，１２５．３，１２１．２，４４．０．ＨＲＭＳ（－ＥＳＩ）：計算値：２０３．０８２６（Ｃ_１１Ｈ_１１Ｎ_２Ｏ_２）。観測値：２０３．０８２５．

Ｎ－（イソキノリン－５－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１６２）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の５－アミノイソキノリン（２８７ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化アクリロイル（０．２０ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を、Ｎ_２雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、一晩撹拌した。溶液をブラインで洗浄し、得られた水層を２：１のクロロホルム：メタノール溶液で抽出した。得られた粗製物を、塩基性アルミナ（ヘキサン中５０％の酢酸エチル～酢酸エチル中４％のエタノール）でのクロマトグラフィーによって精製して、４３ｍｇの黄色固体を得た（１１％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ ９．２３（ｓ，１Ｈ），８．４５（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．９７（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６８（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．６６（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），６．４７（ｄｄ，Ｊ＝１．５，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），５．８８（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１０．２Ｈｚ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ １６７．１，１５３．５，１４３．０，１３３．６，１３２．４，１３１．９，１３０．６，１２８．７，１２７．９，１２７．１，１１７．２．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１９９．０８６６（Ｃ_１２Ｈ_１１Ｎ_２Ｏ）。観測値：１９９．０８６３．

２－クロロ－Ｎ－（イソキノリン－５－イル）アセトアミド（ＴＲＨ１－１６３）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の５－アミノイソキノリン（２８９ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）溶液に、塩化クロロアセチル（０．１９ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を、Ｎ_２雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、一晩撹拌した。溶液を飽和重炭酸ナトリウム溶液およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物を塩基性アルミナ（ヘキサン中３０％の酢酸エチル～酢酸エチル中４％のエタノール）でのクロマトグラフィーにより精製して、１５７ｍｇの黄色固体を得た（３６％収率）。^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ ９．２６（ｓ，１Ｈ），８．４８（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），８．０３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．９１（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），７．７１（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），４．３９，（ｓ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ １６７．４，１５２．１，１４１．７，１３１．８，１３１．２，１２９．２，１２７．３，１２７．０，１２６．１，１１５．７，４２．３．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２２１．０４７６（Ｃ_１１Ｈ_１０Ｎ_２Ｏ）。観測値：２２１．０４７３．

２－クロロ－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルアセトアミド（ＴＲＨ１－１６８）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（０．４２ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）溶液に、塩化クロロアセチル（０．２９ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．５０ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）を、Ｎ_２雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、一晩撹拌した。溶液を飽和重炭酸ナトリウム溶液およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０～２０％の酢酸エチル）によって精製して、３７６ｍｇの白色固体を得た（７０％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ３．９３（ｓ，２Ｈ），３．８８－３．８２（ｍ，１Ｈ），３．３８－３．３１（ｍ，１Ｈ），１．２９（ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，６Ｈ），１．１４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，６Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．０，４９．７，４６．１，４３．２，２０．７，２０．０．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２００．０８１３（Ｃ_８Ｈ_１６ＮＯＣｌＮａ）。観測値：２００．０８１１．

Ｎ－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ペンチル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１７０）。ジクロロメタン（５ｍＬ）中の４－メトキシ－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ペンチル）アニリン（９４ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化アクリロイル（０．０５ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．０９ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）を、Ｎ_２雰囲気下、０℃で加えた。１５分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、１８時間撹拌した。溶液を飽和重炭酸ナトリウム溶液、続いてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０％～２０％の酢酸エチル）によって精製して、８２ｍｇの淡黄色油を得た（６８％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．９９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．１７（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１６．７Ｈｚ，１Ｈ），５．７６（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，１６．７Ｈｚ，１Ｈ），５．２８（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），２．１１（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．２０（ｓ，６Ｈ），０．９１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６６．３，１５９．０，１３４．３，１３１．４９，１３１．４５，１２５．６，１１４．１，６１．７，５５．５，３２．０，２７．４，９．４．ＨＲＭＳ（＋ＥＩ）：計算値：２４７．１５７２（Ｃ_１５Ｈ_２１ＮＯ_２）。観測値：２４７．１５７７．

２－クロロ－Ｎ－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ペンチル）アセトアミド（ＴＲＨ１－１７１）。ジクロロメタン（５ｍＬ）中の４－メトキシ－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ペンチル）アニリン（９５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）溶液に、塩化クロロアセチル（０．０５ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．０８５ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）を、Ｎ_２雰囲気下、０℃で加えた。１５分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、一晩撹拌した。溶液を飽和重炭酸ナトリウム溶液およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０～１０％の酢酸エチル）によって精製して、９９ｍｇの黄色油を得た（７４％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．０４（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），６．８７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，２Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ），３．６３（ｓ，２Ｈ），２．０５（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．１６（ｓ，６Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６６．０，１５９．５，１３３．２，１３１．０，１１４．５，６２．５，５５．５，４４．８，３１．８，２７．１，９．３．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２７０．１２５５（Ｃ_１４Ｈ_２１ＮＯ_２Ｃｌ）。観測値：２７０．１２５４．

Ｎ－（エキソ－ノルボルン－２－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１７６）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のエキソ－２－アミノノルボルナン（０．２４ｍＬ、２ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化アクリロイル（０．２０ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３３ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を、Ｎ_２雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、１８時間撹拌した。溶液を飽和重炭酸ナトリウム溶液、続いてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０％の酢酸エチル）によって精製して、２７１ｍｇの白色固体を得た（８２％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．４２（ｓ，１Ｈ），６．２５（ｄｄ，Ｊ＝２．３，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），６．１８（ｄｄ，Ｊ＝９．５，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），５．５８（ｄｄ，Ｊ＝２．３，９．５Ｈｚ，１Ｈ），３．８－３．７７（ｍ，１Ｈ），２．２７－２．２４（ｍ，２Ｈ），１．７８（ｄｄｄ，Ｊ＝２．１，８．１，１３．０Ｈｚ，１Ｈ），１．５５－１．３８（ｍ，３Ｈ），１．３０－１．１０（ｍ，４Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．０，１３１．４，１２５．８，５２．９，４２．４，４０．０，３５．７，３５．６，２８．２，２６．６．ＨＲＭＳ（＋ＥＩ）：計算値：１６５．１１５４（Ｃ_１０Ｈ_１５ＮＯ）。観測値：１６５．１１５５．

２－クロロ－Ｎ－（エキソ－ノルボルン－２－イル）アセトアミド（ＴＲＨ１－１７７）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のエキソ－２－アミノノルボルナン（０．２４ｍＬ、２ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化クロロアセチル（０．１９ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３３ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を、Ｎ_２雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、一晩撹拌した。溶液を飽和重炭酸ナトリウム溶液およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２０～４０％の酢酸エチル）によって精製して、３４５ｍｇの白色固体を得た（９１％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．４８（ｓ，１Ｈ），３．９３（ｓ，２Ｈ），３．６７－３．６３（ｍ，１Ｈ），２．２４－２．２２（ｍ，１Ｈ），２．１６－２．１５（ｍ，１Ｈ），１．７４（ｄｄｄ，Ｊ＝１．９，８．１，１３．０Ｈｚ，１Ｈ），１．５０－１．３６（ｍ，２Ｈ），１．３０－１．２６（ｍ，１Ｈ），１．２１－１．１４（ｍ，３Ｈ），１．０９－１．０３（ｍ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．０，５３．１，４２．６，４２．２，４０．０，３５．６，３５．５，２８．０，２６．３．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１８７．０７６４（Ｃ_９Ｈ_１４ＮＯＣｌ）。観測値：１８７．０７６５．

Ｎ－（（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－６，６－ジメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン－２－イル）メチル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１７８）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の（－）－シス－ミルタニルアミン（０．３４ｍＬ、２ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化アクリロイル（０．２０ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３３ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を、Ｎ_２雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、２１時間撹拌した。溶液を飽和重炭酸ナトリウム溶液、続いてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２０～３０％の酢酸エチル）によって精製して、３６９ｍｇの白色固体を得た（８９％収率）。^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．２６（ｄｄ，Ｊ＝１．５，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），６．１１（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，１７．０Ｈｚ，１Ｈ）５．８５（ｓ，１Ｈ），５．６１（ｄｄ，Ｊ＝１．５，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），３．３９－３．２９（ｍ，２Ｈ），２．３８－２．３４（ｍ，１Ｈ），２．２６－２．２１（ｍ，１Ｈ），１．９８－１．９０（ｍ，４Ｈ），１．８８－１．８３（ｍ，１Ｈ），１．５３－１．４７（ｍ，１Ｈ），１．１９（ｓ，３Ｈ），１．０４（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．７，１３１．２，１２６．２，４５．３，４３．９，４１．５，３８．８，３３．３，２８．１，２６．１，２３．３，１９．９．ＨＲＭＳ（－ＥＳＩ）：計算値：２０６．１５５０（Ｃ_１３Ｈ_２０ＮＯ）。観測値：２０６．１５５１．

２－クロロ－Ｎ－（（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－６，６－ジメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン－２－イル）メチル）アセトアミド（ＴＲＨ１－１７９）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の（－）－シス－ミルタニルアミン（０．３４ｍＬ、２ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化クロロアセチル（０．１９ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３３ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を、Ｎ_２雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、一晩撹拌した。溶液を飽和重炭酸ナトリウム溶液およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０～２０％の酢酸エチル）によって精製して、４０５ｍｇのオフホワイト色固体を得た（８８％収率）。^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．６１（ｓ，１Ｈ），４．０５（ｓ，２Ｈ），３．３３－３．３０（ｍ，２Ｈ），２．４０－２．３６（ｍ，１Ｈ），２．２７－２．２１（ｍ，１Ｈ），１．９９－１．８３（ｍ，５Ｈ），１．５３－１．４６（ｍ，１Ｈ），１．２０（ｓ，３Ｈ），１．０５（ｓ，３Ｈ），０．９０（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．８，４５．５，４３．８，４２．９，４１．４，４１．２，３８．８，３３．３，２８．０，２６．０，２３．３，１９．８．ＨＲＭＳ（－ＥＳＩ）：計算値：２２８．１１６１（Ｃ_１２Ｈ_１９ＮＯＣｌ）。観測値：２２８．１１６２．

Ｎ－（７－クロロ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＹＰ１－１）。ＰＥＧ４００（５．２ｍＬ）中のＮ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（１８７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却した。この溶液に、Ｎ－クロロスクシンイミド（１４０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を３０分後に室温に加温させ、一晩撹拌した。溶液を酢酸エチルで希釈し、ブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０％の酢酸エチル）により精製した。得られた異性体の混合物を再結晶により分離し、白色固体として、２２％の収率で、生成物（４７ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．７８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１５－７．１１（ｍ，２Ｈ），６．４２（ｄｄ，Ｊ＝１．４，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．２６（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７７（ｄｄ，Ｊ＝１．４，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），２．９８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．８７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．１２（五重項，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６３．４，１４３．１，１３６．１，１３２．２，１３１．０，１２８．０，１２７．２，１２６．７，１２０．９，３２．７，３１．１，２４．０．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２２０．０５３５（Ｃ_１２Ｈ_１１ＣｌＮＯ）。観測値：２２０．０５３３．

Ｎ－（ｍ－トリル）アクリルアミド（ＹＰ１－１６）。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のｏ－トルイジン（１０７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した。この溶液に、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、続いて、トリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を４０分後に室温に加温させ、一晩撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２０～４０％の酢酸エチル）によって精製して、白色固体として、収率８６％で、生成物（１３９ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．８２（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｓ，１Ｈ），７．２１－７．１７（ｍ，２Ｈ），７．１０－７．０６（ｍ，１Ｈ），６．４３－６．３８（ｍ，１Ｈ），６．２９（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１７．１Ｈｚ，１Ｈ），５．７５－５．７２（ｍ，１Ｈ），２．２５（ｓ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １３５．５，１３１．２，１３０．５，１２７．５，１２６．８，１２５．５，１２３．４，１７．８．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１６２．０９１３（Ｃ_１０Ｈ_１２ＮＯ）。観測値：１６２．０９１２．

Ｎ－（２，３－ジメチルフェニル）アクリルアミド（ＹＰ１－１８）。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の２．３－ジメチルアニリン（１２１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した。この溶液に、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、続いて、トリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を２９分後に室温に加温させ、一晩撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０～４０％の酢酸エチル）によって精製して、白色固体として、収率８８％で、生成物（１５４ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．４９（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），７．１１－７．０７（ｍ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝７．７，１Ｈ）６．４０（ｄ，Ｊ＝１７．１，１Ｈ），６．３０（ｄｄ，Ｊ＝７．３，１７．１Ｈｚ，１Ｈ），５．７４（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），２．２９（ｓ，１Ｈ），２．１３（ｓ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １３５．１，１３１．２，１２７．６，１２７．３，１２５．９，１２２．３，２０．６，１３．９．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１７６．１０７０（Ｃ_１１Ｈ_１４ＮＯ）。観測値：１７６．１０６８．

Ｎ－（１Ｈ－インドール－４－イル）アクリルアミド（ＹＰ１－１９）。ＤＣＭ（５ｍＬ）およびＤＭＦ（５ｍＬ）中の４－アミノインドール（１３２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却した。この溶液に、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、続いて、トリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を２６分後に室温に加温させ、一晩撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。粗生成物を塩基性アルミナクロマトグラフィー（ヘキサン中６０％～７５％の酢酸エチル）により精製して、白灰色固体として、収率３０％で、生成物（５６ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ ７．５１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２４－７．２２（ｍ，２Ｈ），７．０８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．６４（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，１６．７Ｈｚ，２Ｈ），６．３８（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１６．９Ｈｚ，１Ｈ），５．７８（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），４．６（ｓ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ １６５．０，１３７．２，１３１．１，１２９．２，１２６．０，１２３．８，１２１．５，１２０．９，１１２．２，１０８．４，９８．５．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１８７．０８６６（Ｃ_１１Ｈ_１１Ｎ_２Ｏ）。観測値：１８７．０８６５．

１－（４－メチルピペラジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＹＰ１－２２）。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１－メチルピペラジン（１００ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却した。この溶液に、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、続いて、トリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を３０分後に室温に加温させ、一晩撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中８５％～１００％の酢酸エチル）によって精製して、黄色ゲルとして、収率２９％で、生成物（４４ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．５６（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，１６．９Ｈｚ，１Ｈ），６．２９（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．６９（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｓ，２Ｈ），３．５８（ｓ，２Ｈ），２．４２（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，４Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．４，１２７．８，１２７．５，５５．２，５４．６，４６．０，４５．７，４１．９．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１５５．１１７９（Ｃ_８Ｈ_１５Ｎ_２Ｏ）。観測値：１５５．１１７８．

１－（４－メチル－１，４－ジアゼパン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＹＰ１－２３）。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１－メチルホモピペラジン（１１４ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却した。この溶液に、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、続いて、トリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を３２分後に室温に加温させ、一晩撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中１％～１０％のメタノール）によって精製して、黄色油として、収率５１％で、生成物（５８ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．６１－６．５３（ｍ，１Ｈ），６．３５－６．２９（ｍ，１Ｈ），５．７０－５．６６（ｍ，１Ｈ），３．７４－３．７２（ｍ，１Ｈ），３．６９（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６５－３．６１（ｍ，２Ｈ），２．６６－２．６３（ｍ，２Ｈ），２．５９－２．５４（ｍ，２Ｈ），２．３７（ｓ，３Ｈ），１．９４（五重項，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６６．４，１６６．３，１２８．０，１２７．９，１２７．８，１２７．６，５９．１，５８．０，５７．１，５６．８，４７．４，４７．１，４６．７，４６．６，４５．３，４４．８，２８．１，２６．９．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１６９．１３３５（Ｃ_９Ｈ_１７Ｎ_２Ｏ）。観測値：１６９．１３３３．

１－（４－アセチルピペラジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＹＰ１－２４）。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１－アセチルピペラジン（１２８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した。この溶液に、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、続いて、トリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を２３分後に室温に加温させ、２時間撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０％～１０％のメタノール）によって精製して、黄色油として、１８％収率で、生成物（４０ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．５７（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．８，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７５（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７２（ｓ，１Ｈ），３．６６－３．６４（ｍ，３Ｈ），３．５７（ｓ，１Ｈ），３．５１－３．４９（ｍ，２Ｈ），２．１３（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．６，１２８．７，１２７．０，４１．９，４１．４，２１．４。ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１８３．１１２８（Ｃ_９Ｈ_１５Ｎ_２Ｏ_２）。観測値：１８３．１１２６．

１－（４－（エチルスルホニル）ピペラジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＹＰ１－２５）。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１－（エタンスルホニル）ピペラジン（１７８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した。この溶液に、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、続いて、トリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を２７分後に室温に加温させ、２時間撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中１％～１０％のメタノール）によって精製して、白黄色固体として、収率７０％で、生成物（１６３ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．５７（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．３２（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７６（ｄｄ，Ｊ＝１．８，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ），３．６７（ｓ，２Ｈ），３．３２（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，４Ｈ），２．９８（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．３７（ｔ，Ｊ＝７．４，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．５，１２８．８，１２７．０，７７．４，４５．９，４５．６，４４．２，４１．９，７．８．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２３３．０９５４（Ｃ_９Ｈ_１７Ｎ_２Ｏ_３Ｓ_１）。観測値：２３３．０９５３．

２－クロロ－Ｎ－（シクロヘキシルメチル）アセトアミド（ＹＰ１－３１）。一般的手順Ｂに従って、シクロヘキサンメチルアミン（１１３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）から開始して、シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中１００％のジクロロメタン～３％のメタノール）の後、白色固体として、収率６０％で、生成物（１１２ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．７０（ｓ，１Ｈ），４．０６（ｓ，２Ｈ），３．１５（ｔ，Ｊ＝６．４７Ｈｚ，２Ｈ），１．７７－１．６５（ｍ，５Ｈ），１．５６－１．４６（ｍ，１Ｈ），１．３０－１．１０（ｍ，３Ｈ），１．００－０．９０（ｍ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．８，５８．１，４６．０，４２．８，３７．７，３０．７，２６．３，２５．７，１８．２．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１９０．０９９３（Ｃ_９Ｈ_１７ＯＮＣｌ）。観測値：１９０．０９９２．

Ｎ－（４－ブロモフェニル）アクリルアミド（ＹＰ１－３６）。一般的手順Ａに従って、４－ブロモアニリン（６８８ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）から開始して、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０％～６０％の酢酸エチル）の後、白色固体として、収率２８％で、生成物（２５０ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ ７．９０（ｓ，１Ｈ），７．６０－７．５６（ｍ，２Ｈ），７．４７－７．４４（ｍ，２Ｈ），６．４５－６．３３（ｍ，２Ｈ），５．７８（ｄｄ，Ｊ＝２．８，９．１Ｈｚ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ １６４．７，１３７．７，１３１．４，１３０．９，１２６．７，１２１．５，１１６．３，１０１．１，７８．１．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２２３．９７１６（Ｃ_９Ｈ_７ＮＯＢｒ）。観測値：２２３．９７１９．

Ｎ－（４－ブロモフェニル）－２－クロロアセトアミド（ＹＰ１－３７）。一般的手順Ｂに従って、４－ブロモアニリン（６８８ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）から開始して、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０％～６０％の酢酸エチル）の後、白色固体として、収率４９％で、生成物（４９１ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ ７．９（ｓ，１Ｈ），７．５７－７．５３（ｍ，２Ｈ），７．５０－７．４７（ｍ，２Ｈ），４．１７（ｓ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ １６６．０，１３７．２，１３１．５，１２１．６，１１６．７，９９．３，７８．１，４２．６．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２４５．９３２７（Ｃ_８Ｈ_６ＮＯＢｒＣｌ）。観測値：２４５．９３２９．

Ｎ－（３，４－ジフルオロベンジル）アクリルアミド（ＹＰ１－３８）。一般的手順Ａに従って、３，４－ジフルオロベンジルアミン（２８６ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）から開始して、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中４０％～８０％の酢酸エチル）の後、白色固体として、収率６１％で、生成物（２３９ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．５６（ｔ，Ｊ＝６．２，１Ｈ），７．０７－７．００（ｍ，２Ｈ），６．９５－６．９１（ｍ，１Ｈ），６．２１－６．２０（ｍ，２Ｈ），５．６２－５．５９（ｍ，１Ｈ），４．３５（ｄ，Ｊ＝６．１，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６６．１，１５１．４（ｄ），１５０．７（ｄ），１４８．９（ｄ），１４８．２（ｄ），１３５．５－１３５．４（ｍ），１３０．５，１２６．８，１２３．５－１２３．４（ｍ），１１７．２（ｄ），１１６．３（ｄ），４２．４．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１９６．０５７９（Ｃ_１０Ｈ_８ＮＯＦ_２）。観測値：１９６．０５８２．

２－クロロ－Ｎ－（３，４－ジフルオロベンジル）アセトアミド（ＹＰ１－３９）。一般的手順Ａに従って、３，４－ジフルオロベンジルアミン（２８６ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）から開始して、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中４０％～５０％の酢酸エチル）の後、白色固体として、収率８２％で、生成物（３５９ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．２３（ｓ，１Ｈ），７．１５－７．０８（ｍ，２Ｈ），７．０３－７．６．９９（ｍ，１Ｈ），４．４２（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ），４．０８（ｓ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６６．３，１５１．５（ｄ），１５１．０（ｄ），１４９．１（ｄ），１４８．５（ｄ），１３４．７－１３４．６（ｍ），１２３．７－１２３．６（ｍ），１１７．５（ｄ），１１６．６（ｄ），４２．６（ｄ）．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２１８．０１９０（Ｃ_９Ｈ_７ＮＯＣｌＦ_２）。観測値：２１８．０１９２

２－クロロ－１－モルホリノエタン－１－オン（ＹＰ１－４０）。一般的手順Ｂに従って、モルホリン（１７４ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）から開始して、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中８５％の酢酸エチル）の後、白色固体として、収率６１％で、生成物（２００ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ４．０１（ｓ，２Ｈ），３．６５－３．５９（ｍ，４Ｈ），３．５５－３．５２（ｍ，２Ｈ），３．４５（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．１，６６．５（ｄ），４６．６，４２．４，４０．７．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１８６．０２９２（Ｃ_６Ｈ_１０Ｏ_２ＮＣｌＮａ）。観測値：１８６．０２９２．

１－（４－モルホリノピペリジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＹＰ１－４２）。一般的手順Ａに従って、４－モルホリノピペリジン（３３６ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）から開始して、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％のメタノールおよび８０％の酢酸エチル）の後、無色油として、収率５８％で、生成物（２５９ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．４２（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．０６（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．４９（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４５（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，４Ｈ），２．９０（ｔ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），２．５５－２．４８（ｍ，１Ｈ），２．３７－２．３５（ｍ，４Ｈ），２．２６（ｔｔ，Ｊ＝３．７，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），１．７２（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２Ｈ），１．３０－１．２０（ｍ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．０，１２７．７，１２７．３，６７．１，６１．６，４９．６，４４．９，４１．１，２８．９，２７．８．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２２５．１５９８（Ｃ_１２Ｈ_２１Ｎ_２Ｏ_２）。観測値：２２５．１５９５．

１－（１Ｈ－インドール－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＹＰ１－４４）。２－メチルテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）中のインドール（１１７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した。この溶液に、水素化ナトリウム（６０ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた中間体を一般的手順Ａに供し、アルミナゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１０％～４０％の酢酸エチル）の後、白色固体として、収率８％で、生成物（１４ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ ８．４８－８．４６（ｍ，１Ｈ），７．８２（ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６１－７．５９（ｍ，１Ｈ），７．３６－７．３２（ｍ，１Ｈ），７．３１－７．２１（ｍ，２Ｈ），６．７３（ｄｄ，Ｊ＝０．８，３．８Ｈｚ，１Ｈ），６．６４（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１６．７Ｈｚ，１Ｈ），６．０９（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１０．５Ｈｚ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤ_３ＯＤ）：δ １６４．３，１３５．７，１３１．０，１３０．９，１２８．０，１２５．０，１２４．４，１２３．６，１２０．５，１１６．２，１０８．９．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１７２．０７５７（Ｃ_１１Ｈ_１０ＮＯ）。観測値：１７２．０７５６．

ＴＲＨ１－２３類似体およびＣＣＷ２８－３分解剤の合成および特徴付け。

一般的な合成方法化学薬品および試薬を主要な商業的供給業者から購入し、さらに精製することなく使用した。別途記述されない限り、反応を、窒素雰囲気下で実施した。シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーを、ＥＭＤまたはＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈシリカゲル６０（２３０～４００メッシュ）を使用して実施した。プロトンおよび炭素核磁気共鳴（^１ＨＮＭＲおよび^１３ＣＮＭＲ）データを、ｔｈｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＢｅｒｋｅｌｅｙのＢｒｕｋｅｒＡＶＢ４００、ＡＶＱ４００、またはＡＶ６００分光計で取得した。高分解能質量スペクトルを、ポジティブまたはネガティブエレクトロスプレーイオン化（＋ＥＳＩまたは－ＥＳＩ）を使用して、ＱＢ３質量分析施設から取得した。収量は、１回の実行として報告される。

一般的なクロロアセトアミド合成方法。アミン（１当量）を、２０ｍＬシンチレーションバイアル内の無水ＤＣＭ（２～１０ｍＬ）に溶解した。この溶液に、２－クロロアセチルクロリド（Ｓｉｇｍａ、１．２当量）、続いてトリエチルアミン（Ｓｉｇｍａ、１．２当量）を加えた。溶液を窒素下で一晩撹拌した。反応を、ニンヒドリン染色を伴うＴＬＣによって監視した。反応が完了したら、溶媒をロータリーエバポレーターで除去し、粗製物をフラッシュクロマトグラフィー用のシリカゲルカラムに直接適用して、対応するクロロアセトアミドを得た。

２－クロロ－Ｎ－（４－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）アセトアミド（ＣＣＷ１）。ＤＣＭ中の４－（４－（トリフルオロメチル）フェノキシ）アニリン（ＡＫＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、６３ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、２－クロロアセチルクロリド（Ｓｉｇｍａ、３４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（Ｓｉｇｍａ、３０．４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を一晩撹拌した。反応が完了したら、粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（１０～４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、６５ｍｇ（７８％）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ８．２５（ｓ，１Ｈ），７．６３－７．５１（ｍ，４Ｈ），７．１２－６．９９（ｍ，４Ｈ），４．２２（ｓ，２Ｈ）．ＨＲＭＳ：（－ＥＳＩ）：Ｃ_１５Ｈ_１０Ｏ_２ＮＦ_３Ｃｌの場合の計算値＝３２８．０３５８、実測値：３２７．０３５６。

２－クロロ－Ｎ－（４－（３－フルオロフェノキシ）フェニル）アセトアミド（ＣＣＷ２）。ＤＣＭ中の４－（３－（フルオロフェノキシ）アニリン（ＡＫＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、６３ｍｇ、０．３１ｍｍｏｌ）の溶液に、２－クロロアセチルクロリド（Ｓｉｇｍａ、４２ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（Ｓｉｇｍａ、３８ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）を加え、反応物を一晩撹拌した。反応が完了したら、粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（１０～４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、５３ｍｇ（６１％）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ８．２４（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄｑ，Ｊ＝１０．０，３．５，２．４Ｈｚ，２Ｈ），７．３３－７．２３（ｍ，１Ｈ），７．０５（ｄｑ，Ｊ＝１０．１，３．５，２．６Ｈｚ，２Ｈ），６．８５－６．７４（ｍ，２Ｈ），６．６９（ｄｑ，Ｊ＝１０．２，２．３Ｈｚ，１Ｈ），４．２１（ｓ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６４．２９，１６３．７５，１６２．６６，１５８．８５，１５８．７８，１５３．３１，１３２．６７，１３０．５１，１３０．４５，１２１．９５，１２０．１３，１１３．７１，１１３．６９，１０９．９８，１０９．８４，１０５．９２，１０５．７５，７７．１９，７６．９７，７６．７６，４２．７９．ＨＲＭＳ：（－ＥＳＩ）：Ｃ_１４Ｈ_１０Ｏ_２ＮＦＣｌの場合の計算値＝２７８．０３９０、実測値：２７８．０３８９。

２－クロロ－Ｎ－（３－クロロ－４－（４－クロロフェノキシ）フェニル）アセトアミド（ＣＣＷ３）。ＤＣＭ中の３－クロロ－４－（４－クロロフェノキシ）アニリン（Ｓｉｇｍａ、６４ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、２－クロロアセチルクロリド（Ｓｉｇｍａ、３４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（Ｓｉｇｍａ、３０．４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を一晩撹拌した。反応が完了したら、粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（１０～４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、６９ｍｇ（８３％）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ８．２８（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｄ，Ｊ＝２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４４（ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３６－７．２８（ｍ，３Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．９５－６．８９（ｍ，２Ｈ），４．２５（ｓ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６３．８５，１５５．６７，１４８．９７，１３３．５７，１２９．７２，１２８．３０，１２６．６０，１２２．５９，１２１．４８，１１９．８７，１１８．６５，７７．２０，７６．９８，７６．７７，４２．７３．ＨＲＭＳ：（－ＥＳＩ）：Ｃ_１４Ｈ_９Ｏ_２ＮＣｌの場合の計算値＝３２７．９７０４、実測値：３２７．９７０２

２－クロロ－Ｎ－（４－（４－メトキシフェノキシ）フェニル）アセトアミド（ＣＣＷ５）。ＤＣＭ中の４－（４－（メトキシフェノキシ）アニリンＨＣｌ（Ａｓｔａｔｅｃｈ、６３ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、２－クロロアセチルクロリド（Ｓｉｇｍａ、３４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（Ｓｉｇｍａ、６０．８ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を一晩撹拌した。反応が完了したら、粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（１０～４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、６９ｍｇ（９５％）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ８．１８（ｓ，１Ｈ），７．４９－７．４２（ｍ，２Ｈ），７．００－６．８４（ｍ，６Ｈ），４．１９（ｓ，２Ｈ），３．８０（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６３．６７，１５５．９２，１５５．７２，１５０．１１，１３１．２２，１２１．９５，１２０．５７，１１８．１４，１１４．８７，７７．１８，７６．９７，７６．７６，５５．６３，４２．７９．ＨＲＭＳ：（－ＥＳＩ）：Ｃ_１５Ｈ_１３Ｏ_３ＮＣｌの場合の計算値＝２９０．０５８９、実測値：２９０．０５８７。

２－クロロ－Ｎ－（４－（４－ニトロフェノキシ）フェニル）アセトアミド（ＣＣＷ６）。ＤＣＭ中の４－（４－ニトロフェノキシ）アニリン（Ｓｉｇｍａ、５０ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の溶液に、２－クロロアセチルクロリド（Ｓｉｇｍａ、２９ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（Ｓｉｇｍａ、２６ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）を加え、反応物を一晩撹拌した。反応が完了したら、粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（１０～４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、６２．５ｍｇ（９３％）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ８．２９（ｓ，１Ｈ），８．２５－８．１６（ｍ，２Ｈ），７．６７－７．５９（ｍ，２Ｈ），７．１４－７．０７（ｍ，２Ｈ），７．０５－６．９６（ｍ，２Ｈ），４．２２（ｓ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６３．９３，１６３．２７，１５１．６３，１４２．７７，１３３．９８，１２６．０１，１２２．１８，１２１．２６，１１７．０１，７７．３６，７７．０４，７６．７３，４２．８５．ＨＲＭＳ：（＋ＥＳＩ）：Ｃ_１４Ｈ_１０Ｏ_４Ｎ_２Ｃｌの場合の計算値＝３０５．０３３５、実測値：３０５．０３３２。

２－クロロ－Ｎ－（４－（ナフタレン－２－イルオキシ）フェニル）アセトアミド（ＣＣＷ７）。ＤＣＭ中の２－（４－アミノフェノキシ）ナフタレン（ＴＣＩ、１１８ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）の溶液に、２－クロロアセチルクロリド（Ｓｉｇｍａ、６７．８ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（Ｓｉｇｍａ、６０．８ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を一晩撹拌した。反応が完了したら、粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（１０～４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、１１１ｍｇ（７１％）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ８．２５（ｓ，１Ｈ），７．８３（ｄｔ，Ｊ＝７．８，３．３Ｈｚ，２Ｈ），７．６９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．５７－７．５０（ｍ，２Ｈ），７．４９－７．３７（ｍ，２Ｈ），７．３１－７．２２（ｍ，２Ｈ），７．１２－７．０３（ｍ，２Ｈ），４．２１（ｓ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６３．８６，１５５．１３，１５４．３１，１３４．３０，１３２．２２，１３０．１９，１２９．９９，１２７．７７，１２７．１４，１２６．６３，１２４．８０，１２２．１０，１１９．８４，１１９．７６，１１３．８４，７７．３９，７７．０７，７６．７５，４２．８９．ＨＲＭＳ：（＋ＥＳＩ）：Ｃ_１８Ｈ_１５Ｏ_２ＮＣｌの場合の計算値＝３１２．０７８６、実測値：３１２．０７８５。

２－クロロ－Ｎ－（４－（３，５－ジメチルフェノキシ）フェニル）アセトアミド（ＣＣＷ８）。ＤＣＭ中の４－（３，５－ジメチルフェノキシ）アニリン（Ｅｎａｍｉｎｅ、１０７ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）の溶液に、２－クロロアセチルクロリド（Ｓｉｇｍａ、６７．８ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（Ｓｉｇｍａ、６０．８ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を一晩撹拌した。反応が完了したら、粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（１０～４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、６０ｍｇ（４１％）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ８．２２（ｓ，１Ｈ），７．５３－７．４６（ｍ，２Ｈ），７．０３－６．９６（ｍ，２Ｈ），６．７４（ｓ，１Ｈ），６．６１（ｓ，２Ｈ），４．２０（ｓ，２Ｈ），２．２８（ｓ，６Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６３．８０，１５７．２１，１５４．６１，１３９．６７，１３１．７９，１２５．０９，１２１．９８，１１９．５５，１１６．３６，７７．３７，７７．０６，７６．７４，４２．８７，２１．３３．ＨＲＭＳ：（＋ＥＳＩ）：Ｃ_１８＼６Ｈ_１７Ｏ_２ＮＣｌの場合の計算値＝２９０．０９４２、実測値：２９０．０９４１。

Ｎ－ベンジル－４－（４－メトキシフェノキシ）アニリン（ＣＣＷ１４）。４－（４－メトキシフェノキシ）アニリン（Ａｓｔａｔｅｃｈ、１０８ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を、２０ｍＬシンチレーションバイアル内の無水ＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解した。ベンズアルデヒド（ＡｌｆａＡｅｓａｒ、５３ｍｇ、０．５０ｍｍｏｌ）を加え、溶液を窒素下で２時間撹拌した。トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（Ｓｉｇｍａ、１５９ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を少量ずつ加え、反応物を一晩撹拌した。ＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）は出発物質の完全な変換を示した。溶液を飽和重炭酸ナトリウムで洗浄し、続いてブラインで洗浄した。水性画分を合わせ、３×５ｍＬのＥｔＯＡｃで抽出し、全ての有機画分を合わせ、濃縮し、シリカゲルカラム（１０～４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、８９．７ｍｇ（５８．８％）を得た。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．４２－７．３３（ｍ，４Ｈ），７．３２－７．２７（ｍ，１Ｈ），６．９４－６．８１（ｍ，６Ｈ），６．６４－６．５９（ｍ，２Ｈ），４．３１（ｓ，２Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ：（＋ＥＳＩ）：Ｃ_２０Ｈ_２０Ｏ_２Ｎ_１の場合の計算値＝３０６．１４８９、実測値：３０７．１４８１。

Ｎ－ベンジル－２－クロロ－Ｎ－（４－（４－メトキシフェノキシ）フェニル）アセトアミド（ＣＣＷ１６）。ＤＣＭ中のＮ－ベンジル－４－（４－メトキシフェノキシ）アニリン（ＣＣＷ１４）（２５ｍｇ、０．０８１ｍｍｏｌ）の溶液に、２－クロロアセチルクロリド（Ｓｉｇｍａ、１１ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（Ｓｉｇｍａ、９．８ｍｇ、０．０９７ｍｍｏｌ）を加え、反応物を一晩撹拌した。反応が完了したら、粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（１０～４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、２６ｍｇ（８４％）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．２６（ｓ，３Ｈ），７．２０（ｄｄ，Ｊ＝７．３，２．３Ｈｚ，２Ｈ），７．０１－６．９６（ｍ，２Ｈ），６．９３－６．８２（ｍ，６Ｈ），４．８６（ｓ，２Ｈ），３．８７（ｓ，２Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１０１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６６．４５，１５８．９５，１５６．５４，１４８．８９，１３６．６３，１３４．７１，１２９．５４，１２９．０３，１２８．５１，１２７．７１，１２１．４７，１１７．８２，１１５．０７，７７．３６，７７．２５，７７．０５，７６．７３，５５．６９，５３．８５，４２．０９．ＨＲＭＳ：（＋ＥＳＩ）：Ｃ_２２Ｈ_２１Ｏ_３ＮＣｌの場合の計算値＝３８２．１２０４、実測値：３０７．１１９９。

２－クロロ－Ｎ－（４－（４－（ヒドロキシメチル）フェノキシ）フェニル）アセトアミド（ＪＩＫ１－３６）。ＤＣＭ中の（４－（４－アミノフェノキシ）フェニル）メタノール（Ｓｉｇｍａ、５４．８ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、２－クロロアセチルクロリド（Ｓｉｇｍａ、３４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（Ｓｉｇｍａ、３０．４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を一晩撹拌した。反応が完了したら、粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（１０～４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、５５ｍｇ（７４％）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ８．２１（ｓ，１Ｈ），７．５５－７．４８（ｍ，２Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．０５－６．９６（ｍ，４Ｈ），４．６７（ｓ，２Ｈ），４．２０（ｓ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １６３．７０，１５６．７７，１５４．３２，１３５．８２，１３２．０１，１２８．６８，１２１．９３，１１９．４６，１１８．７１，６４．８５，４２．７９．ＨＲＭＳ：（－ＥＳＩ）：Ｃ_１５Ｈ_１０ＣｌＦ_３ＮＯ_２の場合の計算値＝３２８．０３５２、実測値：３２８．０３５８。

２－クロロ－Ｎ－（４－（３－（トリフルオロメチル）フェノキシ）フェニル）アセトアミド（ＪＩＫ１－３７）。ＤＣＭ中の（４－（３－トリフルオロメチル）フェニル）アニリン（Ｓｉｇｍａ、６４．５ｍｇ、０．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、２－クロロアセチルクロリド（Ｓｉｇｍａ、３４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（Ｓｉｇｍａ、３０．４ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を一晩撹拌した。反応が完了したら、粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（１０～４０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、８０ｍｇ（９５％）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ８．２６（ｓ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），７．４４（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．２１（ｓ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １６３．７６，１５７．８１，１５３．１２，１３２．８５，１３０．３０，１２４．５１，１２２．７１，１２２．０４，１２１．３１，１２０．１０，１１９．６９，１１５．０２，４２．７８．ＨＲＭＳ：（－ＥＳＩ）：Ｃ_１５Ｈ_１３ＣｌＮＯ_３の場合の計算値＝２９０．０５８５、実測値：２９０．０５８９。

ＣＣＷ－１６＋ＪＱ１二官能性分解剤合成スキーム（ＣＣＷ２８－３）：

ｔｅｒｔ－ブチル（４－ブロモブチル）カルバメート（ＪＩＫ１－８６）。４－アミノ－１－ブタノール（ＴＣＩ；５．０ｇ、５６．０ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭ（２２ｍＬ）に溶解した。溶液に、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（Ｃｈｅｍ－ＩｍｐｅｘＩｎｔ’ｌＩｎｃ．；１７．３ｇ、７９．４ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を室温で３時間撹拌し、ＴＬＣ（１００％ＥｔＯＡｃで展開、ニンヒドリンによって可視化）によって監視した。完了したら、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中５５～１００％のＥｔＯＡｃ）で部分的に精製して、ベースライン不純物を除去した。カラムからの溶離液は次の反応に持ち越された。ＤＣＭ（２２ｍＬ、乾燥）をカラム溶離液に加え、溶液を０℃に冷却した。溶液に、四臭化炭素（Ａｌｄｒｉｃｈ；２３．９ｇ、７２．０ｍｍｏｌ）を加えて溶解し、続いてトリフェニルホスフィン（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ；２２．３ｇ、８４．９ｍｍｏｌ）を加えた。反応物を１時間撹拌し、次に室温に加温させ、一晩実行させた。２４時間後、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２～１５％のＥｔＯＡｃ）で精製して、淡黄色油として４．１ｇの生成物を得た（２回の反応で２９．６％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ４．５５（ｓ，１Ｈ），３．４２（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），３．１５（ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），１．９３－１．８３（ｍ，２Ｈ），１．６３（ｍ，１Ｈ），１．４３（ｓ，１０Ｈ）．

４－（４－アミノフェノキシ）フェノール（ＪＩＫ１－４３）。４－（４－メトキシフェノキシ）アニリン（ＡｓｔａＴｅｃｈ；２．５ｇ、１１．６ｍｍｏｌ）を、－６℃でＤＣＭ（４０ｍＬ）に溶解した。三臭化ホウ素（Ａｃｒｏｓ；３４．８ｍＬ、ＤＣＭ中１Ｍ、３４．８ｍｍｏｌ）を３時間かけて滴下し、ＴＬＣ（４０％ＥｔＯＡｃ／Ｈｅｘ、ＫＭｎＯ_４）で監視した。完了したら、溶液を１容量の重炭酸ナトリウムでクエンチした。二相混合物を一晩冷蔵し、生成物を結晶化し、濾過により除去した。水層をＮａＯＨで中和し、３×２５ｍＬのＥｔＯＡｃで逆抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、濃縮した。黄褐色固体として２．３３ｇ（８８％）の生成物が得られ、これはさらなる精製を必要としなかった。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，メタノール－ｄ_４）：δ ５．２２－５．０９（ｍ，８Ｈ），１．７３（ｐ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ：（＋ＥＳＩ）：Ｃ_１２Ｈ_１２ＮＯ_２の場合の計算値＝２０２．０８６３、実測値：２０２．０８６０。

４－（４－（ベンジルアミノ）フェノキシ）フェノール（ＣＣＷ２２）。４－（４－アミノフェノキシ）フェノール（ＪＩＫ１－４３）（６０４ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を３３℃で無水ＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解し、溶解性を促進し、ベンズアルデヒド（ＡｌｆａＡｅｓａｒ、２４０ｍｇ、３．０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を窒素下で２時間撹拌した。トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（Ｓｉｇｍａ、９５２ｍｇ、４．５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を一晩撹拌した。混合物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー用のシリカカラムに直接適用して、７８７ｍｇ（９０％）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．４１－７．２４（ｍ，５Ｈ），６．８９－６．８０（ｍ，４Ｈ），６．７８－６．７１（ｍ，２Ｈ），６．６５－６．５８（ｍ，２Ｈ），４．３１（ｓ，２Ｈ）．

ｔｅｒｔ－ブチル（４－（４－（４－（ベンジルアミノ）フェノキシ）フェノキシ）ブチル）カルバメート（ＣＣＷ２３）。４－（４－（ベンジルアミノ）フェノキシ）フェノール（ＣＣＷ２２）（４５０ｍｇ、１．５５ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ－ブチル（４－ブロモブチル）カルバメート（ＪＩＫ１－８６）（５８５ｍｇ、２．３２ｍｍｏｌ）をアセトン（２０ｍＬ）に溶解した。炭酸カリウム（６４２ｍｇ、４．６５ｍｍｏｌ）を加え、溶液を還流させ、７２時間撹拌した。混合物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー用のシリカカラム（１０～３０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）に直接適用して、３２５ｍｇ（４５．３％）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．４１－７．２７（ｍ，５Ｈ），６．９１－６．７７（ｍ，６Ｈ），６．６０（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ），４．６２（ｓ，１Ｈ），４．３０（ｓ，２Ｈ），３．９３（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），３．１９（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），１．８３－１．７４（ｍ，２Ｈ），１．６６（ｐ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ）．ＨＲＭＳ：（＋ＥＳＩ）：Ｃ_２８Ｈ_３５Ｏ_４Ｎ_２の場合の計算値＝４６３．２５９１、実測値：４６２．２５８３。

ｔｅｒｔ－ブチル（４－（４－（４－（Ｎ－ベンジル－２－クロロアセトアミド）フェノキシ）フェノキシ）ブチル）カルバメート（ＣＣＷ２４）。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のＣＣＷ２３（２００ｍｇ、０．４３ｍｍｏｌ）の溶液に、２－クロロアセチルクロリド（Ｓｉｇｍａ、５９ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（Ｓｉｇｍａ、５３ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ）を加え、反応物を一晩撹拌した。反応が完了したら、粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（２０～６０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）で精製して、２３２ｍｇ（８７．６％）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．２９（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ），７．２０（ｄｄ，Ｊ＝７．２，２．２Ｈｚ，３Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２Ｈ），６．９３－６．８３（ｍ，６Ｈ），４．８６（ｓ，２Ｈ），４．６１（ｓ，１Ｈ），３．９６（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８７（ｓ，２Ｈ），３．２０（ｑ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），１．８７－１．７７（ｍ，２Ｈ），１．６８（ｐ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ）．

（Ｓ）－２－（４－（４－クロロフェニル）－２，３，９－トリメチル－６Ｈ－チエノ［３，２－ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］［１，４］ジアゼピン－６－イル）酢酸（ＪＱ１－酸）。ｔｅｒｔ－ブチル（Ｓ）－２－（４－（４－クロロフェニル）－２，３，９－トリメチル－６Ｈ－チエノ［３，２－ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］［１，４］ジアゼピン－６－イル）アセテート（ＪＱ１）は、以前の手順^１に基づいて調製した。ＪＱ１（ｅＮｏｖａｔｉｏｎＣｈｅｍｉｃａｌｓ、２０４ｍｇ、０．４４６ｍｍｏｌ）をギ酸（３ｍＬ）に溶解し、４５℃で一晩撹拌した。混合物をＤＣＭで希釈し、溶媒を真空中で除去した。得られた黄色油を３ｍＬのＤＣＬに再溶解し、プロセスで微細な黄褐色固体（１７８ｍｇ（９９．８％））が得られるまで蒸発乾固を繰り返した。さらなる精製は必要なかった。１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．４６－７．４０（ｍ，２Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），４．５９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ），３．７５－３．５５（ｍ，２Ｈ），２．６８（ｓ，３Ｈ），２．４１（ｓ，３Ｈ），１．７４－１．６５（ｍ，３Ｈ）．ＨＲＭＳ：（－ＥＳＩ）：Ｃ_１９Ｈ_１６Ｏ_２Ｎ_４ＣｌＳの場合の計算値＝３９９．０６８８、実測値：３９９．０６８３。

（Ｓ）－Ｎ－ベンジル－２－クロロ－Ｎ－（４－（４－（４－（２－（４－（４－クロロフェニル）－２，３，９－トリメチル－６Ｈ－チエノ［３，２－ｆ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］［１，４］ジアゼピン－６－イル）アセトアミド）ブトキシ）フェノキシ）フェニル）アセトアミド（ＣＣＷ－２８－３）。トリフルオロ酢酸（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）を２０分かけてゆっくりと加え、さらに２０分間撹拌することにより、ＣＣＷ２４（１７５ｍｇ、０．３２５ｍｍｏｌ）を１：１のＤＣＭ／ＴＦＡ（５ｍＬ）で脱保護した。ＴＬＣはアミンへの完全な変換を示し、溶媒を真空中で除去し、３ｍＬのＤＣＭで３回追跡して、過剰なＴＦＡを除去した。脱保護された粗製物は、さらに精製することなくアミドカップリングに使用された。得られたＴＦＡ塩を、８ｍＬのＤＣＭ、ＪＱ１－酸（１８０ｍｇ、０．３９０ｍｍｏｌ）、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－酸化ヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（ＳｍａｌｌＭｏｌｅｃｕｌｅｓＩｎｃ．、２０１．５ｍｇ、０．５３０ｍｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、１６８ｍｇ、１．３０ｍｍｏｌ）に溶解した。一晩撹拌し、ＴＬＣ（ＤＣＭ中５％のＭｅＯＨ、１００％ＥｔＯＡｃ）で監視した。粗製物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（１～５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）用のシリカカラムに直接適用した。溶出画分は純度が不十分であり、生成物を含有する画分を合わせ、濃縮し、フラッシュシリカクロマトグラフィー（１００～０％ＥｔＯＡｃ／ＤＣＭ、続いて０～５％ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）で再度精製して、９１．４ｍｇ（３４．２％）を得た。^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．３６（ｄｄ，Ｊ＝５０．３，８．３Ｈｚ，４Ｈ），７．２６（ｓ，２Ｈ），７．２２－７．１８（ｍ，２Ｈ），６．９９－６．９５（ｍ，２Ｈ），６．９２－６．８３（ｍ，６Ｈ），６．５９（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，１Ｈ），４．８６（ｓ，２Ｈ），４．６２（ｄｄ，Ｊ＝７．９，６．１Ｈｚ，１Ｈ），３．９６（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ），３．８７（ｓ，２Ｈ），３．５７（ｄｄ，Ｊ＝１４．１，７．９Ｈｚ，１Ｈ），３．４２（ｄｑ，Ｊ＝１３．３，６．７Ｈｚ，１Ｈ），３．３２（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．２，１１．４，６．２Ｈｚ，２Ｈ），２．６７（ｓ，３Ｈ），２．４０（ｓ，３Ｈ），１．８２（ｔｄ，Ｊ＝１３．８，１３．２，６．９Ｈｚ，２Ｈ），１．７４（ｐ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），１．６７（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １７０．４６，１６６．３８，１６３．８７，１５８．９０，１５５．８４，１５５．６３，１４９．８４，１４８．８２，１３６．７９，１３６．５８，１３６．５６，１３４．６５，１３２．１０，１３０．８７，１３０．８２，１３０．４２，１２９．７６，１２９．４６，１２８．９７，１２８．６９，１２８．４４，１２７．６３，１２１．３９，１１７．７８，１１５．６４，６７．８４，５４．５３，５３．７８，４２．０１，３９．６０，３９．２０，２９．６５，２６．５９，２６．２６，１４．３２，１３．０４，１１．７８．ＨＲＭＳ：（＋ＥＳＩ）：Ｃ_４４Ｈ_４３Ｃｌ_２Ｎ_６Ｏ_４Ｓの場合の計算値＝８２１．２４３８、実測値：８２１．２４２６。

表１．ＲＮＦ４に対してスクリーニングされた共有結合リガンドの構造

２３１ＭＦＰ細胞をＤＭＳＯビヒクルもしくはＣＣＷ２８－３（１０μＭ）で１時間インサイチュで処理した後、ＩＡ－アルキン（１００μＭ）で１時間インビトロでプロテオームを標識した。同位体的に軽い（ＤＭＳＯで処理した場合）または重い（化合物で処理した場合）ＴＥＶプロテアーゼ切断可能なビオチン－アジドタグをＣｕＡＡＣにより付加して、ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析を行った。３つの生物学的複製のうち２つに存在するプローブ修飾ペプチドのみを解釈した。それらの比が３を超える場合、全ての複製比が３を超える全ての生物学的複製に存在するペプチドのみを解釈した。それらの比が４を超える場合、全ての複製比が４を超える全ての生物学的複製に存在するペプチドのみを解釈した。ＭＳ１のピーク形状の品質を手動でキュレーションして、全ての複製について良好なピーク品質を確認した。

実施例１～３に関連する参考文献
（１）Ｂｕｒｓｌｅｍ，Ｇ．Ｍ．；Ｃｒｅｗｓ，Ｃ．Ｍ．Ｓｍａｌｌ－ＭｏｌｅｃｕｌｅＭｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆＰｒｏｔｅｉｎＨｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．２０１７，１１７（１７），１１２６９－１１３０１．（２）Ｌａｉ，Ａ．Ｃ．；Ｃｒｅｗｓ，Ｃ．Ｍ．ＩｎｄｕｃｅｄＰｒｏｔｅｉｎＤｅｇｒａｄａｔｉｏｎ：ＡｎＥｍｅｒｇｉｎｇＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙＰａｒａｄｉｇｍ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ．２０１７，１６（２），１０１－１１４．（３）Ｒａｐｅ，Ｍ．ＵｂｉｑｕｉｔｙｌａｔｉｏｎａｔｔｈｅＣｒｏｓｓｒｏａｄｓｏｆＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄＤｉｓｅａｓｅ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．２０１８，１９（１），５９－７０．（４）Ｇｒｏｓｓｍａｎ，Ｅ．Ａ．；Ｗａｒｄ，Ｃ．Ｃ．；Ｓｐｒａｄｌｉｎ，Ｊ．Ｎ．；Ｂａｔｅｍａｎ，Ｌ．Ａ．；Ｈｕｆｆｍａｎ，Ｔ．Ｒ．；Ｍｉｙａｍｏｔｏ，Ｄ．Ｋ．；Ｋｌｅｉｎｍａｎ，Ｊ．Ｉ．；Ｎｏｍｕｒａ，Ｄ．Ｋ．ＣｏｖａｌｅｎｔＬｉｇａｎｄＤｉｓｃｏｖｅｒｙａｇａｉｎｓｔＤｒｕｇｇａｂｌｅＨｏｔｓｐｏｔｓＴａｒｇｅｔｅｄｂｙＡｎｔｉ－ＣａｎｃｅｒＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ．ＣｅｌｌＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１７，２４（１１），１３６８－１３７６．ｅ４．（５）Ｃｏｕｎｉｈａｎ，Ｊ．Ｌ．；Ｗｉｇｇｅｎｈｏｒｎ，Ａ．Ｌ．；Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｅ．；Ｎｏｍｕｒａ，Ｄ．Ｋ．Ｃｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ－ＥｎａｂｌｅｄＣｏｖａｌｅｎｔＬｉｇａｎｄＳｃｒｅｅｎｉｎｇＲｅｖｅａｌｓＡＬＤＨ３Ａ１ａｓａＬｕｎｇＣａｎｃｅｒＴｈｅｒａｐｙＴａｒｇｅｔ．ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１８．（６）Ｂａｔｅｍａｎ，Ｌ．Ａ．；Ｎｇｕｙｅｎ，Ｔ．Ｂ．；Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ａ．Ｍ．；Ｍｉｙａｍｏｔｏ，Ｄ．Ｋ．；Ｋｕ，Ｗ．－Ｍ．；Ｈｕｆｆｍａｎ，Ｔ．Ｒ．；Ｐｅｔｒｉ，Ｙ．；Ｈｅｓｌｉｎ，Ｍ．Ｊ．；Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ，Ｃ．Ｍ．；Ｓｋｉｂｏｌａ，Ｃ．Ｆ．；ｅｔａｌ．Ｃｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ－ＥｎａｂｌｅｄＣｏｖａｌｅｎｔＬｉｇａｎｄＳｃｒｅｅｎＲｅｖｅａｌｓａＣｙｓｔｅｉｎｅＨｏｔｓｐｏｔｉｎＲｅｔｉｃｕｌｏｎ４ＴｈａｔＩｍｐａｉｒｓＥＲＭｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄＣａｎｃｅｒＰａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．Ｃａｍｂ．Ｅｎｇｌ．２０１７，５３（５３），７２３４－７２３７．（７）Ｂａｃｋｕｓ，Ｋ．Ｍ．；Ｃｏｒｒｅｉａ，Ｂ．Ｅ．；Ｌｕｍ，Ｋ．Ｍ．；Ｆｏｒｌｉ，Ｓ．；Ｈｏｒｎｉｎｇ，Ｂ．Ｄ．；Ｇｏｎｚａｌｅｚ－Ｐａｅｚ，Ｇ．Ｅ．；Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ，Ｓ．；Ｌａｎｎｉｎｇ，Ｂ．Ｒ．；Ｔｅｉｊａｒｏ，Ｊ．Ｒ．；Ｏｌｓｏｎ，Ａ．Ｊ．；ｅｔａｌ．Ｐｒｏｔｅｏｍｅ－ＷｉｄｅＣｏｖａｌｅｎｔＬｉｇａｎｄＤｉｓｃｏｖｅｒｙｉｎＮａｔｉｖｅＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｙｓｔｅｍｓ．Ｎａｔｕｒｅ２０１６，５３４（７６０８），５７０－５７４．（８）Ｗａｎｇ，Ｃ．；Ｗｅｅｒａｐａｎａ，Ｅ．；Ｂｌｅｗｅｔｔ，Ｍ．Ｍ．；Ｃｒａｖａｔｔ，Ｂ．Ｆ．ＡＣｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃＰｌａｔｆｏｒｍｔｏＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌｙＭａｐＴａｒｇｅｔｓｏｆＬｉｐｉｄ－ＤｅｒｉｖｅｄＥｌｅｃｔｒｏｐｈｉｌｅｓ．Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２０１４，１１（１），７９－８５．（９）Ｈａｃｋｅｒ，Ｓ．Ｍ．；Ｂａｃｋｕｓ，Ｋ．Ｍ．；Ｌａｚｅａｒ，Ｍ．Ｒ．；Ｆｏｒｌｉ，Ｓ．；Ｃｏｒｒｅｉａ，Ｂ．Ｅ．；Ｃｒａｖａｔｔ，Ｂ．Ｆ．ＧｌｏｂａｌＰｒｏｆｉｌｉｎｇｏｆＬｙｓｉｎｅＲｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄＬｉｇａｎｄａｂｉｌｉｔｙｉｎｔｈｅＨｕｍａｎＰｒｏｔｅｏｍｅ．Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．２０１７，９（１２），１１８１－１１９０．（１０）Ｂａｃｋｕｓ，Ｋ．Ｍ．ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆＲｅａｃｔｉｖｅＣｙｓｔｅｉｎｅＰｒｏｆｉｌｉｎｇ．Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１８．（１１）Ｌｉｕ，Ｙ．；Ｐａｔｒｉｃｅｌｌｉ，Ｍ．Ｐ．；Ｃｒａｖａｔｔ，Ｂ．Ｆ．Ａｃｔｉｖｉｔｙ－ＢａｓｅｄＰｒｏｔｅｉｎＰｒｏｆｉｌｉｎｇ：ＴｈｅＳｅｒｉｎｅＨｙｄｒｏｌａｓｅｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１９９９，９６（２６），１４６９４－１４６９９．（１２）Ｗｅｅｒａｐａｎａ，Ｅ．；Ｗａｎｇ，Ｃ．；Ｓｉｍｏｎ，Ｇ．Ｍ．；Ｒｉｃｈｔｅｒ，Ｆ．；Ｋｈａｒｅ，Ｓ．；Ｄｉｌｌｏｎ，Ｍ．Ｂ．Ｄ．；Ｂａｃｈｏｖｃｈｉｎ，Ｄ．Ａ．；Ｍｏｗｅｎ，Ｋ．；Ｂａｋｅｒ，Ｄ．；Ｃｒａｖａｔｔ，Ｂ．Ｆ．ＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＲｅａｃｔｉｖｉｔｙＰｒｏｆｉｌｉｎｇＰｒｅｄｉｃｔｓＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＣｙｓｔｅｉｎｅｓｉｎＰｒｏｔｅｏｍｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ２０１０，４６８（７３２５），７９０－７９５．（１３）Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ａ．Ｍ．；Ｍｉｙａｍｏｔｏ，Ｄ．Ｋ．；Ｈｕｆｆｍａｎ，Ｔ．Ｒ．；Ｂａｔｅｍａｎ，Ｌ．Ａ．；Ｉｖｅｓ，Ａ．Ｎ．；Ａｋｏｐｉａｎ，Ｄ．；Ｈｅｓｌｉｎ，Ｍ．Ｊ．；Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ，Ｃ．Ｍ．；Ｒａｐｅ，Ｍ．；Ｓｋｉｂｏｌａ，Ｃ．Ｆ．；ｅｔａｌ．ＣｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆＣｏｖａｌｅｎｔＬｉｇａｎｄｓＲｅｖｅａｌｓＵＢＡ５ＡｓａＮｏｖｅｌＰａｎｃｒｅａｔｉｃＣａｎｃｅｒＴａｒｇｅｔ．ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１７，１２（４），８９９－９０４．（１４）Ｗａｎｇ，Ｃ．；Ｗｅｅｒａｐａｎａ，Ｅ．；Ｂｌｅｗｅｔｔ，Ｍ．Ｍ．；Ｃｒａｖａｔｔ，Ｂ．Ｆ．ＡＣｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃＰｌａｔｆｏｒｍｔｏＱｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌｙＭａｐＴａｒｇｅｔｓｏｆＬｉｐｉｄ－ＤｅｒｉｖｅｄＥｌｅｃｔｒｏｐｈｉｌｅｓ．Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２０１４，１１（１），７９－８５．（１５）Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｅ．；Ｔｏ，Ｍ．；Ｏｌｚｍａｎｎ，Ｊ．Ａ．；Ｎｏｍｕｒａ，Ｄ．Ｋ．Ｃｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ－ＥｎａｂｌｅｄＣｏｖａｌｅｎｔＬｉｇａｎｄＳｃｒｅｅｎｉｎｇＲｅｖｅａｌｓａＴｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ－Ｃａｓｐａｓｅ３ＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎＤｉｓｒｕｐｔｏｒＴｈａｔＩｍｐａｉｒｓＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＰａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１７，１２（１０），２５２２－２５２８．（１６）Ｖａｓｓｉｌｅｖ，Ｌ．Ｔ．；Ｖｕ，Ｂ．Ｔ．；Ｇｒａｖｅｓ，Ｂ．；Ｃａｒｖａｊａｌ，Ｄ．；Ｐｏｄｌａｓｋｉ，Ｆ．；Ｆｉｌｉｐｏｖｉｃ，Ｚ．；Ｋｏｎｇ，Ｎ．；Ｋａｍｍｌｏｔｔ，Ｕ．；Ｌｕｋａｃｓ，Ｃ．；Ｋｌｅｉｎ，Ｃ．；ｅｔａｌ．ＩｎＶｉｖｏＡｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＰ５３ＰａｔｈｗａｙｂｙＳｍａｌｌ－ＭｏｌｅｃｕｌｅＡｎｔａｇｏｎｉｓｔｓｏｆＭＤＭ２．Ｓｃｉｅｎｃｅ２００４，３０３（５６５９），８４４－８４８．（１７）Ｓｃｈｎｅｅｋｌｏｔｈ，Ａ．Ｒ．；Ｐｕｃｈｅａｕｌｔ，Ｍ．；Ｔａｅ，Ｈ．Ｓ．；Ｃｒｅｗｓ，Ｃ．Ｍ．ＴａｒｇｅｔｅｄＩｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒＰｒｏｔｅｉｎＤｅｇｒａｄａｔｉｏｎＩｎｄｕｃｅｄｂｙａＳｍａｌｌＭｏｌｅｃｕｌｅ：ＥｎＲｏｕｔｅｔｏＣｈｅｍｉｃａｌＰｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２００８，１８（２２），５９０４－５９０８．（１８）Ｍａｌｅｃｋａ，Ｋ．Ａ．；Ｆｅｒａ，Ｄ．；Ｓｃｈｕｌｔｚ，Ｄ．Ｃ．；Ｈｏｄａｗａｄｅｋａｒ，Ｓ．；Ｒｅｉｃｈｍａｎ，Ｍ．；Ｄｏｎｏｖｅｒ，Ｐ．Ｓ．；Ｍｕｒｐｈｙ，Ｍ．Ｅ．；Ｍａｒｍｏｒｓｔｅｉｎ，Ｒ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＳｍａｌｌＭｏｌｅｃｕｌｅＨｕｍａｎＰａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓＥ６Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ．ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１４，９（７），１６０３－１６１２．（１９）Ｓｔａｕｄｉｎｇｅｒ，Ｊ．Ｌ．ＴｈｅＭｏｌｅｃｕｌａｒＩｎｔｅｒｆａｃｅＢｅｔｗｅｅｎｔｈｅＳＵＭＯａｎｄＵｂｉｑｕｉｔｉｎＳｙｓｔｅｍｓ．Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２０１７，９６３，９９－１１０．（２０）Ｓｒｉｒａｍａｃｈａｎｄｒａｎ，Ａ．Ｍ．；Ｄｏｈｍｅｎ，Ｒ．Ｊ．ＳＵＭＯ－ＴａｒｇｅｔｅｄＵｂｉｑｕｉｔｉｎＬｉｇａｓｅｓ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ２０１４，１８４３（１），７５－８５．（２１）Ｔａｎ，Ｂ．；Ｍｕ，Ｒ．；Ｃｈａｎｇ，Ｙ．；Ｗａｎｇ，Ｙ．－Ｂ．；Ｗｕ，Ｍ．；Ｔｕ，Ｈ．－Ｑ．；Ｚｈａｎｇ，Ｙ．－Ｃ．；Ｇｕｏ，Ｓ．－Ｓ．；Ｑｉｎ，Ｘ．－Ｈ．；Ｌｉ，Ｔ．；ｅｔａｌ．ＲＮＦ４ＮｅｇａｔｉｖｅｌｙＲｅｇｕｌａｔｅｓＮＦ－ΚＢＳｉｇｎａｌｉｎｇｂｙｄｏｗｎ－ＲｅｇｕｌａｔｉｎｇＴＡＢ２．ＦＥＢＳＬｅｔｔ．２０１５，５８９（１９ＰｔＢ），２８５０－２８５８．（２２）Ｆｒｙｒｅａｒ，Ｋ．Ａ．；Ｇｕｏ，Ｘ．；Ｋｅｒｓｃｈｅｒ，Ｏ．；Ｓｅｍｍｅｓ，Ｏ．Ｊ．ＴｈｅＳｕｍｏ－ＴａｒｇｅｔｅｄＵｂｉｑｕｉｔｉｎＬｉｇａｓｅＲＮＦ４ＲｅｇｕｌａｔｅｓｔｈｅＬｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄＦｕｎｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅＨＴＬＶ－１ＯｎｃｏｐｒｏｔｅｉｎＴａｘ．Ｂｌｏｏｄ２０１２，１１９（５），１１７３－１１８１．（２３）Ｂｉｌｏｄｅａｕ，Ｓ．；Ｃａｒｏｎ，Ｖ．；Ｇａｇｎｏｎ，Ｊ．；Ｋｕｆｔｅｄｊｉａｎ，Ａ．；Ｔｒｅｍｂｌａｙ，Ａ．ＡＣＫ２－ＲＮＦ４ＩｎｔｅｒｐｌａｙＣｏｏｒｄｉｎａｔｅｓＮｏｎ－ＣａｎｏｎｉｃａｌＳＵＭＯｙｌａｔｉｏｎａｎｄＤｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆＮｕｃｌｅａｒＲｅｃｅｐｔｏｒＦＸＲ．Ｊ．Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．２０１７，９（３），１９５－２０８．（２４）Ｚｅｎｇｅｒｌｅ，Ｍ．；Ｃｈａｎ，Ｋ．－Ｈ．；Ｃｉｕｌｌｉ，Ａ．ＳｅｌｅｃｔｉｖｅＳｍａｌｌＭｏｌｅｃｕｌｅＩｎｄｕｃｅｄＤｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＢＥＴＢｒｏｍｏｄｏｍａｉｎＰｒｏｔｅｉｎＢＲＤ４．ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１５，１０（８），１７７０－１７７７．（２５）Ｌｏｕｉｅ，Ｓ．Ｍ．；Ｇｒｏｓｓｍａｎ，Ｅ．Ａ．；Ｃｒａｗｆｏｒｄ，Ｌ．Ａ．；Ｄｉｎｇ，Ｌ．；Ｃａｍａｒｄａ，Ｒ．；Ｈｕｆｆｍａｎ，Ｔ．Ｒ．；Ｍｉｙａｍｏｔｏ，Ｄ．Ｋ．；Ｇｏｇａ，Ａ．；Ｗｅｅｒａｐａｎａ，Ｅ．；Ｎｏｍｕｒａ，Ｄ．Ｋ．ＧＳＴＰ１ＩｓａＤｒｉｖｅｒｏｆＴｒｉｐｌｅ－ＮｅｇａｔｉｖｅＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＣｅｌｌＭｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄＰａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．ＣｅｌｌＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１６，２３（５），５６７－５７８．（２６）Ｍｅｄｉｎａ－Ｃｌｅｇｈｏｒｎ，Ｄ．；Ｂａｔｅｍａｎ，Ｌ．Ａ．；Ｆｏｒｄ，Ｂ．；Ｈｅｓｌｉｎ，Ａ．；Ｆｉｓｈｅｒ，Ｋ．Ｊ．；Ｄａｌｖｉｅ，Ｅ．Ｄ．；Ｎｏｍｕｒａ，Ｄ．Ｋ．ＭａｐｐｉｎｇＰｒｏｔｅｏｍｅ－ＷｉｄｅＴａｒｇｅｔｓｏｆＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＣｈｅｍｉｃａｌｓＵｓｉｎｇＲｅａｃｔｉｖｉｔｙ－ＢａｓｅｄＣｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃＰｌａｔｆｏｒｍｓ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１５，２２（１０），１３９４－１４０５．（２７）Ｊｅｓｓａｎｉ，Ｎ．；Ｈｕｍｐｈｒｅｙ，Ｍ．；ＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｗ．Ｈ．；Ｎｉｅｓｓｅｎ，Ｓ．；Ｍａｓｕｄａ，Ｋ．；Ｇａｎｇａｄｈａｒａｎ，Ｂ．；Ｙａｔｅｓ，Ｊ．Ｒ．；Ｍｕｅｌｌｅｒ，Ｂ．Ｍ．；Ｃｒａｖａｔｔ，Ｂ．Ｆ．ＣａｒｃｉｎｏｍａａｎｄＳｔｒｏｍａｌＥｎｚｙｍｅＡｃｔｉｖｉｔｙＰｒｏｆｉｌｅｓＡｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＢｒｅａｓｔＴｕｍｏｒＧｒｏｗｔｈｉｎＶｉｖｏ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．２００４，１０１（３８），１３７５６－１３７６１．（２８）Ｓｍｉｔｈ，Ｐ．Ｋ．；Ｋｒｏｈｎ，Ｒ．Ｉ．；Ｈｅｒｍ
ａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．；Ｍａｌｌｉａ，Ａ．Ｋ．；Ｇａｒｔｎｅｒ，Ｆ．Ｈ．；Ｐｒｏｖｅｎｚａｎｏ，Ｍ．Ｄ．；Ｆｕｊｉｍｏｔｏ，Ｅ．Ｋ．；Ｇｏｅｋｅ，Ｎ．Ｍ．；Ｏｌｓｏｎ，Ｂ．Ｊ．；Ｋｌｅｎｋ，Ｄ．Ｃ．ＭｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆＰｒｏｔｅｉｎＵｓｉｎｇＢｉｃｉｎｃｈｏｎｉｎｉｃＡｃｉｄ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８５，１５０（１），７６－８５．（２９）Ｘｕ，Ｔ．；Ｐａｒｋ，Ｓ．Ｋ．；Ｖｅｎａｂｌｅ，Ｊ．Ｄ．；Ｗｏｈｌｓｃｈｌｅｇｅｌ，Ｊ．Ａ．；Ｄｉｅｄｒｉｃｈ，Ｊ．Ｋ．；Ｃｏｃｉｏｒｖａ，Ｄ．；Ｌｕ，Ｂ．；Ｌｉａｏ，Ｌ．；Ｈｅｗｅｌ，Ｊ．；Ｈａｎ，Ｘ．；ｅｔａｌ．ＰｒｏＬｕＣＩＤ：ＡｎＩｍｐｒｏｖｅｄＳＥＱＵＥＳＴ－ｌｉｋｅＡｌｇｏｒｉｔｈｍｗｉｔｈＥｎｈａｎｃｅｄＳｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄＳｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ．Ｊ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ２０１５，１２９，１６－２４．実施例３（１）Ｚｅｎｇｅｒｌｅ，Ｍ．；Ｃｈａｎ，Ｋ．－Ｈ．；Ｃｉｕｌｌｉ，Ａ．ＳｅｌｅｃｔｉｖｅＳｍａｌｌＭｏｌｅｃｕｌｅＩｎｄｕｃｅｄＤｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＢＥＴＢｒｏｍｏｄｏｍａｉｎＰｒｏｔｅｉｎＢＲＤ４．ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２０１５，１０（８），１７７０－１７７７．

実施例４．標的タンパク質分解のための抗癌性天然物ニンボリドの利用
ニームの木に由来するテルペノイド天然物であるニンボリドは、多くの種類のヒト癌にわたって癌の病原性を低減する。しかしながら、ニンボリドの直接標的および抗癌メカニズムはよくわかっていない。ここで、活性ベースタンパク質プロファイリング（ＡＢＰＰ）化学プロテオームプラットフォームを使用して、ニンボリドがＥ３ユビキチンリガーゼＲＮＦ１１４の基質認識に重要な新規機能性システインと反応することを発見した。ニンボリドは、ＲＮＦ１１４基質認識を破壊することにより乳癌細胞の増殖を低減し、ユビキチン化の阻害および腫瘍抑制因子ｐ２１の分解を引き起こし、その結果、急速な安定化をもたらす。さらに、ＲＮＦ１１４におけるこの反応性ノードを利用して、標的タンパク質分解用途でＥ３リガーゼを動員する能力を示し、合成するのに単純な足場もこの独自の反応性部位にアクセスできることを示す。

植物および微生物などの生物由来の天然物は、治療用リード化合物の豊富な供給源である^１－５。それらの生物学的活性の特徴付けは、癌、細菌および真菌感染、炎症および糖尿病などの異なる病状のための無数の薬物療法をもたらした^１－５。天然物の中には、タンパク質内の求核性アミノ酸ホットスポットと大部分が不可逆的な反応を受けてそれらの治療活性を発揮することができる求電子性部分を有する共有結合的に作用する分子のサブセットがある。これらの天然物の例としては、抗菌活性を誘導するセリントランスペプチダーゼを不可逆的に阻害するペニシリン、またはＰＩ３－キナーゼの機能的リジンを共有結合的に修飾してその活性を阻害するワートマニンが含まれる^５－７。抗癌性および共有作用のある天然物の標的となるドラッガブルなホットスポットを発見することは、新しい抗癌剤および治療標的を生み出すだけでなく、標準的な創薬の努力ではアンドラッガブルであるか、または取り組むのが難しいと見なされることが多いタンパク質標的の天然物がアクセスするドラッガブルなモダリティへの独自の洞察を明らかにすることができる。先験的に予測するのが難しいドラッガブルなモダリティの一例は、Ｔ細胞シグナル伝達を調節するための新しいＦＫＢＰ１２－ＦＫ５０６複合体に結合して、それを作製することにより、ペプチジルプロリルイソメラーゼ活性を阻害するＦＫ５０６またはタクロリムスである^８。したがって、タンパク質標的に関与するための自然の戦略への洞察を得ることは、ドラッガビリティを管理する新しい予期しない規則へのアクセスを提供することができる。

この例では、ニームの木（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａｉｎｄｉｃａ）に由来するリモノイド天然物である天然物ニンボリドの抗癌作用機序を特徴付けした（図８Ａ）^９。ニンボリドは複数の治療効果を発揮することが示されており、システインと反応することができる環状エノンを有している^{１０－１２}。癌との関連で、ニンボリドは、広範囲の癌にわたって毒性または望ましくない副作用を引き起こすことなく、腫瘍形成および転移を阻害することが示されている^{１０，１１，１３－１７}。以前の研究では、ニンボリドが、生存、成長、浸潤、血管新生および炎症に関連するシグナル伝達経路および転写因子を調節することにより、また酸化ストレスに影響を与えることにより、癌の病原性を低減することが示唆されているが、ニンボリドの直接標的は依然として十分に特徴付けされていない^{１０，１５，１８－２２}。

複雑な天然物の直接的なタンパク質標的を同定することは依然として困難であり、光親和性および濃縮ハンドルを有するこれらの化合物の類似体を合成する必要があり、これはしばしば合成するのに困難であり、分子の活性を変える可能性がある^{２３－２５}。このようなプローブを生成しても、天然物が標的とする特定のアミノ酸部位を特定することは困難である。この研究では、活性ベースタンパク質プロファイリング（ＡＢＰＰ）化学プロテオームアプローチを利用して、乳癌細胞プロテオームにおけるニンボリドのプロテオーム全体の標的をマッピングした。ＡＢＰＰプラットフォームを使用して、乳癌細胞におけるニンボリドの主要な標的の１つがＥ３ユビキチンリガーゼＲＮＦ１１４のＣ８であることを明らかにする。ニンボリドによるＲＮＦ１１４の共有結合修飾は、認識障害、ユビキチン化障害、およびその基質である腫瘍抑制因子ｐ２１の分解を引き起こし、その急速な安定化をもたらす。興味深いことに、ニンボリドはＲＮＦ１１４内の基質認識部位に結合するため、ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を他のタンパク質基質に動員して標的タンパク質分解用途に使用できることを実証する。ケモプロテオミクス対応の共有結合リガンドスクリーニングプラットフォームを使用して、ＲＮＦ１１４のＣ８および表現型コピーニンボリド作用と同様に反応できる、合成するのにより扱いやすい化合物も同定する。

乳癌細胞の生存および増殖に対するニンボリドの効果。ニンボリドは多くの異なるタイプのヒト癌にわたって癌の病原性を低減することが示されているが、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）におけるニンボリドの役割の解明に焦点を当てることを選択した。ＴＮＢＣは、エストロゲン、プロゲステロンおよびＨＥＲ２受容体を欠いており、最も予後が悪い最も攻撃的な癌の１つである^{２６，２７}。現在、ＴＮＢＣ患者を対象とした標的療法はほとんどない。したがって、ＴＮＢＣの新しい治療法を明らかにすることは、乳癌に関連する死亡率の低下に大きく貢献する可能性がある。以前の報告と一致して、乳癌細胞における抗癌活性、２３１ＭＦＰおよびＨＣＣ３８ＴＮＢＣ細胞におけるニンボリドによる細胞増殖または無血清細胞生存の低減を示す（図８Ｂ）^{１４，１５，１７}。

ＡＢＰＰプラットフォームを使用して、乳癌細胞のニンボリドが標的とする創薬可能なホットスポットをマッピングする。ニンボリドが乳癌の病原性をどのように低減するかをよりよく理解するために、同位体タンデム直交タンパク質分解対応の活性ベースタンパク質プロファイリング（ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ）と呼ばれる化学プロテオームプラットフォームを適用して、ニンボリドが標的とするドラッガブルなホットスポットをマッピングした。ＣｒａｖａｔｔおよびＷｅｅｒａｐａｎａによって開拓されたｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰは、反応性ベースの化学プローブを使用して、複雑なプロテオーム内の反応性、機能性およびドラッガブルなホットスポットを直接マッピングする^{２８－３１}。競合的に使用される場合、共有結合的に作用する小分子は、反応性ベースのプローブ結合と競合して、標的の同定を容易にすることができる^{３１－３８}（図９Ａ）。この研究では、インビトロで乳癌細胞プロテオームを、またはインサイチュで乳癌細胞を、ビヒクルまたはニンボリドで処理した後、システイン反応性アルキン官能化ヨードアセトアミドプローブ（ＩＡ－アルキン）でプロテオームを競合標識し、その後同位体的に軽いまたは重い切断可能な濃縮ハンドルを、ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析のために、プローブ標識タンパク質に追加した。プローブ修飾トリプシンペプチドを液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）で分析し、対照対処理済みＩＡ－アルキン標識部位を表す軽対重トリプシンプローブ修飾ペプチド比を定量化した。２３１ＭＦＰＴＮＢＣプロテオームでニンボリドが標的とするリガンド結合可能なホットスポットのＩｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析は、３つの主要なインビトロ標的（ＰＴＯＶ１Ｃ３０８、ＲＮＦ１１４Ｃ８およびＰＦＫＰＣ１２３）と１つの主要なインサイチュ標的ＲＮＦ１１４Ｃ８を示した（図９Ｂ、２Ｃ；表Ｓ１）。ＲＮＡ干渉を使用したこれらの各標的のノックダウンは、ＲＮＦ１１４ノックダウンが２３１ＭＦＰ細胞におけるニンボリドの抗増殖効果に最も類似していることを明らかにした（図９Ｄ、図Ｓ１）。ＲＮＦ１１４がニンボリド作用に関与する標的であることをさらに実証すると、ＲＮＦ１１４ノックダウンは、ニンボリドを介した抗増殖効果に対して著しく高められた感受性を示した（図９Ｅ）。

ＲＮＦ１１４とのニンボリド相互作用の生化学的特徴付け。ＲＮＦ１１４は、ＲＩＮＧファミリーのＥ３ユビキチンリガーゼである^{３９，４０}。ニンボリドの標的としてｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰによって同定されたＲＮＦ１１４上の部位Ｃ８は、タンパク質のＮ末端領域内にあり、天然変性していると予測され、２つの注釈付きジンクフィンガードメインの外側に存在する（図１０Ａ）。天然物によるタンパク質の天然変性領域の明らかな選択的標的化に興味をそそられ、ニンボリドとＲＮＦ１１４との間のこの相互作用をさらに確認し、特徴付けすることを試みた。

ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰは、共有結合的に作用する分子とより広範な反応性プローブとの間の競合アッセイであるため、潜在的なニンボリドが標的とするホットスポットの間接的な読み取りである。ニンボリドがＲＮＦ１１４を直接標的としていることを確認するために、ニンボリドから３つのステップで示されるアルキン官能化プローブを合成した（図１０Ｂ）。フラン部分の選択的臭素化および４－ホルミルフェニルボロン酸との鈴木カップリングによりアルデヒド２が得られ、これはピニック酸化によって対応するカルボン酸（３）に変換された。最後に、３とプロパルギルアミン（ＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡ）のカップリングにより、標的プローブが得られた。プローブは２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームの複数のタンパク質を標識したが、これらのタンパク質のうち２つだけがニンボリド自体と競合していた。これらの競合するタンパク質の分子量は、ＰＴＯＶ１およびＲＮＦ１１４の分子量と一致していた（図１０Ｃ）。本発明者らはさらに、このニンボリドプローブが純粋なヒトＲＮＦ１１４と反応し、ニンボリドによっても競合し、この標識がＣ８ＡＲＮＦ１１４突然変異体において阻害されることを実証した（図１０Ｄ）。さらに、ＲＮＦ１１４のＣ８へのニンボリドの直接質量付加物が、純粋なタンパク質を天然物とインキュベートした後、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによって観察された（図１０Ｅ）。まとめると、これらの発見は、ニンボリドがＣ８でＲＮＦ１１４の天然変性領域を共有結合的に修飾するという説得力のある証拠となる。

インビトロおよびインサイチュでのＲＮＦ１１４活性および基質結合に対するニンボリドの効果。ＲＮＦ１１４は、基質の中でもとりわけ、腫瘍抑制因子ｐ２１をユビキチン化させ、分解することが以前に示されている^{３９，４１，４２}。インビトロで再構成された系において、ニンボリドは、ＲＮＦ１１４自己ユビキチン化およびｐ２１ユビキチン化活性の両方を阻害した（図１１Ａ）。ＲＮＦ１１４Ｃ８Ａ突然変異は、基本的なＲＮＦ１１４自己ユビキチン化活性に影響を及ぼさなかったが、ニンボリド処理で観察された阻害を弱めた（図１１Ｂ）。ＲＮＦ１１４の以前の特徴付けは、Ｎ末端が基質認識に関与している可能性があることを示唆していた^３９。この前提と一致して、本発明者らは、ｐ２１のＲＮＦ１１４プルダウンがニンボリドによって阻害されることを発見し、ＲＮＦ１１４の明らかな阻害は、活性の直接阻害ではなく、基質認識障害による可能性があることを示唆していた（図１１Ｃ）。さらに、２３１ＭＦＰ細胞におけるニンボリド処理が、ｐ５３レベルが有意に変化することなく、１時間以内にｐ２１タンパク質の発現を安定させることを示した（図１１Ｄ、図Ｓ２）。まとめると、このデータは、ニンボリドがＲＮＦ１１４の天然変性Ｃ８と反応して、ＲＮＦ１１４－ｐ２１基質認識を妨害し、ｐ２１ユビキチン化の阻害、迅速なｐ２１の安定化、および乳癌細胞の細胞増殖を低減することを示唆している。

標的タンパク質分解のためのＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリドの使用。標的タンパク質分解は、タンパク質標的化リガンド、リンカーおよびＥ３リガーゼリクルーターからなる「分解剤」と呼ばれる二官能性分子を利用してＥ３リガーゼを目的のタンパク質へと運び、プロテアソーム依存的に標的をユビキチン化させ、分解することを通じて、アンドラッガブルなプロテオームに取り組むために生まれた強力な薬物発見プラットフォームである^{４３－５１}。ニンボリドは潜在的な基質認識部位を標的とするため、ニンボリドをＲＮＦ１１４リクルーターとして使用する二官能性分解剤の開発を通じて、プロテアソーム分解のためにＲＮＦ１１４を他のタンパク質基質に動員するためにニンボリドを使用できると推測した。実現可能性を実証するために、ニンボリドをＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１に結合することによって形成された２つの分解剤を合成した（図１２Ａ）。以前の研究では、セレブロンリクルーターサリドマイドまたはＶＨＬリクルーターのいずれかに結合したＪＱ１ベースの分解剤による効率的なプロテアソーム依存性ＢＲＤ４分解が実証されている^{４４，４７，５１}。以前に調製された酸３は、より長い（ＰＥＧベースの）およびより短い（アルキルベースの）スペーサー単位の両方を含むＪＱ１官能化アミンにカップリングされ、分解剤ＸＨ１およびＸＨ２に到達した。ＸＨ１は感知できるＢＲＤ４分解を示さなかったが、２３１ＭＦＰ細胞でのＸＨ２処理（１００ｎＭ）は１２時間以内にＢＲＤ４分解を引き起こし、この分解はプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）による処理によって弱められた（図１２Ｃ）。ＸＨ２によるＢＲＤ４分解の用量反応を、ＪＱ１に結合したＶＨＬリガンドを利用する以前に報告されたＢＲＤ４分解剤ＭＺ１の用量反応と比較した（図１２Ｄ）。ＭＺ１は、１および０．１μＭでより優れたＢＲＤ４分解を示し、１０ｎＭでＸＨ２と同等の分解を示した。興味深いことに、ＸＨ２は、０．１および０．０１μＭと比較して１μＭでより少ない分解を示し、ＭＺ１を含む分解剤で以前に報告した「フック効果」に起因する^{４３，４４}。ＸＨ２を介したＢＲＤ４分解は、Ｅ１ユビキチン活性化酵素阻害剤（ＴＡＫ－２４３）による処理、またはＢＲＤ４リガンド自体（ＪＱ１）との事前競合によっても弱められた（図１２Ｅ～１２Ｆ）。しかしながら、翻訳阻害剤（エメチン）による処理は、観察されたＢＲＤ４分解の効果を発揮しなかった（図１２Ｇ）。これらの結果は、ＲＮＦ１１４のＣ８とのニンボリド反応性を利用して、このＥ３リガーゼをＢＲＤ４などの他のタンパク質基質に動員し、それらをユビキチン化させ、分解することができることを強く示唆している。

ＲＮＦ１１４に対する共有結合リガンドを同定するためのケモプロテオミクス対応の共有結合リガンドスクリーニング。ＲＮＦ１１４のＣ８は、癌治療および標的タンパク質分解用途に利用できる独自のドラッガブルモダリティであるという洞察を得て、ＲＮＦ１１４を同様に標的とする合成するのにより扱いやすい共有結合リガンドを検索した。この目標を達成するために、中程度スループットのゲルベースＡＢＰＰアプローチを使用して、ＲＮＦ１１４に対するシステイン反応性共有結合リガンドのライブラリーをスクリーニングした。ここでは、共有結合リガンドを、ＲＮＦ１１４のＩＡ－アルキン標識と競合させ、続いてローダミン－アジドを付加し、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光による分析を行う。ＲＮＦ１１４のＩＡ－アルキン標識とニンボリドを競合させる初期の研究では、おそらくＣ８を超えるＩＡ－アルキンによる複数のシステインのアルキル化が原因で、標識の完全な阻害は示されなかった。したがって、本発明者らは、Ｃ８ＡＲＮＦ１１４突然変異体タンパク質の標識の欠如およびニンボリドとの観察された完全な競合によって証明されるように、ＲＮＦ１１４上のＣ８の選択的標識を示す、より調整されたアルキン官能化環状エノンプローブＪＮＳ２７を合成した（図１３Ａ）。ＲＮＦ１１４に対してスクリーニングされた約２００個のシステイン反応性共有結合リガンドのうち、アクリルアミドＥＮ６２が有望なヒットとして出現した（図１３Ｂ；図１６Ａ～１６Ｃ）。ＥＮ６２はＣ８依存的にＲＮＦ１１４自己ユビキチン化活性を阻害し、２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームにおいてプロテオーム全体の選択性も示した（図１３Ｃ～１３Ｄ）。ＥＮ６２はまた、２３１ＭＦＰ乳癌細胞の生存を損ない、免疫不全マウスにおけるインビボでの２３１ＭＦＰ腫瘍異種移植片の増殖を弱めた（図１３Ｅ～１３Ｆ）。ＥＮ６２は効力のさらなる改善を必要とするが、この共有結合リガンドは、将来の癌治療およびタンパク質分解用途のための合成するのにより扱いやすい出発点となる。

ニンボリドがＲＮＦ１１４内のＣ８の基質認識ドメインを標的にして、ｐ２１のユビキチン化および分解を阻害し、その安定化につながることで、乳癌の病原性を部分的に低減するという説得力のある証拠を示す。ＲＮＦ１１４上のＣ８のニンボリド標的を使用して、標的タンパク質分解用途のためにＲＮＦ１１４を動員できることを実証し、ニンボリド－ＪＱ１分解剤ＸＨ２によるＢＲＤ４分解を実証する。さらに、ケモプロテオミクス対応の共有結合リガンドスクリーニングアプローチを使用して、ＥＮ６２などの合成するのにより扱いやすい共有結合リガンドを迅速に同定して、ＲＮＦ１１４のＣ８などの複雑な天然物で採用されているドラッガブルモダリティを標的とすることができるという概念を実証する。

ここでは、ニンボリドがＲＮＦ１１４とｐ２１との相互作用を妨害することを報告し、ｐ２１レベルがｐ５３に依存しない方法で乳癌細胞において急速に安定化することも示す。ＳＣＦ^Ｓｋｐ２、ＣＲＬ４^Ｃｄｔ２、ＣＨＩＰなど、他のいくつかのＥ３リガーゼも、細胞周期または外因性ストレス中、さまざまな条件下でｐ２１を分解することが報告されている^{５２－５４}。以前の研究では、ＲＮＦ１１４の発現はＧ１期後期に上昇して、ｐ２１レベルを調節し、Ｇ１期からＳ期への移行に重要であることが示されている^３９。報告されている他のＲＮＦ１１４基質には、母体から接合体への移行に関与するＴＡＢ１と、ＮＦ－κＢ活性およびＴ細胞活性化に関与するＡ２０が含まれる^{５５，５６}。したがって、癌の状況または他の細胞および組織の種類では、ニンボリドは、他のＲＮＦ１１４タンパク質基質のレベルを調節することによって追加の活性を有する可能性がある。さらに、ＲＮＦ１１４がニンボリドの主要な機能的標的の１つであることを示しているが、この方法では容易に同定できなかった可能性のある、追加の可逆的または不可逆的なタンパク質標的が存在する可能性がある。それにもかかわらず、本発明者らは、ＲＮＦ１１４過敏化細胞のニンボリドへのノックダウン以来、ＲＮＦ１１４が乳癌細胞の増殖における重要かつ機能的なニンボリド標的であることを実証している。

本発明者らの結果はまた、ニンボリドがＲＮＦ１１４内の天然変性領域を機能的に標的とすることを実証している。ニンボリドでＲＮＦ１１４の構造を解明することはこれまでのところ困難であることが証明されているが、ニンボリドがＮ末端に秩序を誘導するかどうかを調査する将来の研究は、天然変性し、かつアンドラッガブルなタンパク質標的のリガンド結合性および他のＥ３リガーゼを標的とする可能性のある戦略への洞察を提供する。

標的タンパク質分解は、プロテアソームを介した排除のためにタンパク質を標的とするための困難かつ効果的な創薬パラダイムとして浮上している^{４３，４５}。しかしながら、課題のうちの１つは、ヒトゲノムにおける約６００個のＥ３リガーゼの中で開発されたＥ３リガーゼリクルーターの数が少ないことである^５７。これらのＥ３リガーゼリクルーターには、セレブロンを動員するサリドマイド型免疫調節薬（ＩＭｉＤ）、ＶＨＬを動員するリガンド、ＭＤＭ２を動員するｎｕｔｌｉｎ、ｃＩＡＰを動員するリガンドが含まれる^{４３，４５}。ここでは、ニンボリドが標的タンパク質分解用途のための新規ＲＮＦ１１４リクルーターとして使用できる可能性があることを報告する。すでに重要であることが示されている分子の領域である、さらなるリンカー修飾により、この分解剤クラスの性能を大幅に最適化できるはずである。ＥＮ６２などのＲＮＦ１１４のＣ８を標的とすることができる合成するのにより扱いやすい共有結合リガンドをＲＮＦ１１４リクルーターとして利用することも可能かもしれない。ニンボリドはＲＮＦ１１４内の基質認識ドメインを標的とするため、ＩＭｉＤに関して報告されているように、ニンボリドが新基質を動員および分解する分子接着剤として機能し得るかどうかを判断することも将来的に興味深い^{５８－６０}。

全体として、これは、ＡＢＰＰベースの化学プロテオームプラットフォームを使用して、天然物によって利用される独自のドラッガブルモダリティを特定することの有用性を示している。興味深いことに、天然物は、潜在的な癌治療および標的タンパク質分解用途のためにＥ３リガーゼタンパク質間相互作用部位に機能的にアクセスでき、タンパク質の天然変性領域で著しくアクセスできることを示している。本発明者らの研究はまた、共有結合リガンドスクリーニングアプローチを利用して、より複雑な天然物と同様に作用する合成するのにより扱いやすい小分子を同定し、共有結合リガンドが他のＥ３リガーゼにアクセスしてＥ３リガーゼリクルーターの範囲を拡大できる可能性があることも示している。

実施例５．方法およびアッセイ
細胞培養。２３１ＭＦＰ細胞は、前述のように、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞の外植腫瘍異種移植片から生成された^６１。ＨＣＣ３８およびＨＥＫ２９３Ｔ細胞は、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手した。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、１０％（ｖ／ｖ）のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有するＤＭＥＭで培養し、５％のＣＯ_２で３７℃に維持した。２３１ＭＦＰ細胞を、１０％のＦＢＳを含有するＬ１５培地で培養し、０％のＣＯ_２で３７℃に維持した。ＨＣＣ３８細胞を、１０％のＦＢＳを含有するＲＰＭＩ培地で培養し、５％のＣＯ_２で３７℃に維持した。

生存および増殖アッセイ。細胞の生存および増殖アッセイは、製造元のプロトコルに従ってヘキスト３３３４２色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して以前に記載されたように、および以前に記載されたように実施した^６２。２３１ＭＦＰ細胞を９６ウェルプレート（生存用に４０，０００個、増殖用に２０，０００個）に１５０μｌの容量で播種し、一晩接着させた。細胞を、ＤＭＳＯ中に１：２５０で希釈した１０００倍の化合物ストックを含有する追加の５０μＬの培地で処理した。適切なインキュベーション期間の後、培地を各ウェルから除去し、１０％のホルマリンおよびＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２色素を含有する１００μｌの染色溶液を各ウェルに加え、暗所にて室温で１５分間インキュベートした。インキュベーション後、染色液を除去し、画像化する前に、ウェルをＰＢＳで洗浄した。ＨＣＣ３８細胞を用いた研究も上記のように実施したが、生存用に２０，０００個の細胞および増殖用に１０，０００個の細胞を播種した。

ＩｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰケモプロテオミクス研究。ＩｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ研究は、以前に報告されたように行った^{２８，３１，３５，６３}。細胞をＰＢＳ中でプローブ超音波処理して溶解し、タンパク質濃度をＢＣＡアッセイで測定した^６４。インサイチュ実験では、ＤＭＳＯビヒクルまたは共有結合的に作用する小分子（１０００×ＤＭＳＯストックから）のいずれかで細胞を９０分間処理してから、細胞を収集して溶解した。インビトロ実験では、ＰＢＳで希釈したプロテオームサンプル（生物学的複製あたり４ｍｇのプロテオーム）をＤＭＳＯビヒクルまたは共有結合的に作用する小分子で室温にて３０分間処理した。続いて、プロテオームをＩＡ－アルキン標識（１００μＭ）で室温にて１時間標識した。ＣｕＡＡＣは、ｔｒｉｓ（２－カルボキシエチル）ホスフィン（１ｍＭ）、ｔｒｉｓ［（１－ベンジル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メチル］アミン（３４μＭ）、硫酸銅（ＩＩ）（１ｍＭ、Ｓｉｇｍａ）、およびビオチン－リンカー－アジドを順次加えることによって使用し、リンカーを、対照または処理プロテオームの処理のために同位体的に軽いまたは重いバリンと共にＴＥＶプロテアーゼ認識配列で官能化した。ＣｕＡＡＣ後、プロテオームを、６５００×ｇでの遠心分離によって沈殿させ、氷冷メタノール中で洗浄し、１：１の対照／処理比で混合し、再び洗浄し、次いで、変性し、１．２％ＳＤＳ／ＰＢＳ中で８０℃まで５分間加熱することによって再可溶化した。不溶性成分を、６５００×ｇでの遠心分離によって沈殿させ、可溶性プロテオームを５ｍｌの０．２％ＳＤＳ／ＰＢＳ中に希釈した。４℃で一晩回転させながら、標識タンパク質を、アビジン－アガロースビーズ（１７０μＬの再懸濁ビーズ／サンプル、ＴｈｅｒｍｏＰｉｅｒｃｅ）に結合させた。ビーズ結合タンパク質を、ＰＢＳおよび水でそれぞれ３回洗浄することにより濃縮し、次いで、６Ｍ尿素／ＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ）に再懸濁し、ＴＣＥＰ（１ｍＭ、Ｓｉｇｍａ）中で還元し、ヨードアセトアミド（ＩＡ）（１８ｍＭ、Ｓｉｇｍａ）でアルキル化し、次いで、洗浄し、２Ｍ尿素に再懸濁し、０．５μｇ／μｌのシークエンシンググレードのトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ）で一晩トリプシン処理した。トリプシンペプチドを溶出した。ビーズをＰＢＳおよび水でそれぞれ３回洗浄し、ＴＥＶ緩衝液（水、ＴＥＶ緩衝液、１００μＭジチオスレイトール）で洗浄し、Ａｃ－ＴＥＶプロテアーゼを含む緩衝液に再懸濁し、一晩インキュベートした。ペプチドを、水で希釈し、ギ酸（１．２Ｍ、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）で酸性化し、分析用に調製した。

データは、ＲａｗＥｘｔｒａｃｔｏｒ１．９．９．２（ＳｃｒｉｐｐｓＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ）を使用してＭＳ１およびＭＳ２ファイルの形式で抽出し、ＩＰ２ｖ．３（ＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＰｒｏｔｅｏｍｉｃｓＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ）のＰｒｏＬｕＣＩＤ検索方法論を用いてＵｎｉｐｒｏｔヒトデータベースに対して検索した^６５。システイン残基を、カルボキシアミノメチル化についての静的修飾（＋５７．０２１４６）およびメチオニン酸化についての最大２つの特異的修飾、および軽または重ＴＥＶタグ（それぞれ、＋４６４．２８５９６または＋４７０．２９９７７）で検索した。ペプチドは、少なくとも１つのトリプシン末端を有し、ＴＥＶ修飾を含むことが必要とされた。ＰｒｏＬＵＣＩＤデータを、ＤＴＡＳｅｌｅｃｔを通してフィルター処理して、５％未満のペプチド偽陽性率を達成した。３つの生物学的複製のうち２つ全てにおいて明らかであったプローブ修飾ペプチドのみを、それらの同位体の軽対重比について解釈した。３を超える比を示すプローブ修飾ペプチドを、共有結合的に作用する小分子の潜在的な標的としてさらに分析した。３を超える比を有する修飾ペプチドの場合、これらのヒットをフィルタリングして、３つの生物学的複製全てに存在するペプチドを探した。プローブ修飾ペプチド比が３を超える場合、３つの比が３を超えるペプチドのみを解釈し、それ以外の場合は最低の比に置き換えられた。プローブ修飾ペプチド比が４を超える場合、３つの比が４を超えるペプチドのみを解釈し、それ以外の場合は最低の比に置き換えられた。次に、３を超える比を有する、得られたプローブ修飾ペプチドのＭＳ１ピーク形状が、全ての生物学的複製にわたって解釈したペプチドに対して良好な品質であることを手動で確認した。

ノックダウン株の構築。ショートヘアピンオリゴヌクレオチドを使用して、前述の方法を使用して３１ＭＦＰ細胞でＲＮＦ１１４の発現をノックダウンした^６６。安定したｓｈＲＮＡ株を生成するために、ヒトＲＮＦ１１４に対するｓｈＲＮＡ（Ｓｉｇｍａ）を含むｐＬＫＯ．１バックボーンのレンチウイルスプラスミドを、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してＨＥＫ２９３Ｔ細胞にトランスフェクトした。レンチウイルスを、濾過された培養培地から収集し、ポリブレンで標的癌細胞株を感染させるために使用した。標的細胞を、１μｇ／ｍｌのピューロマイシンで３日間にわたって選択した。ＲＮＦ１１４ノックダウン株の生成に使用したショートヘアピン配列は次の通りである。
ＣＣＧＧＣＣＡＴＧＧＣＴＧＣＣＧＴＡＡＧＡＡＴＴＴＣＴＣＧＡＧＡＡＡＴＴＣＴＴＡＣＧＧＣＡＧＣＣＡＴＧＧＴＴＴＴＴＧ（配列番号４）
（ＳｉｇｍａＲＮＦ１１４ＭＩＳＳＩＯＮｓｈＲＮＡバクテリアグリセロールストック、ＴＲＣＮ００００３１４８７７）。

対照ｓｈＲＮＡを、標的配列ＧＣＡＡＧＣＴＧＡＣＣＣＴＧＡＡＧＴＴＣＡＴ（配列番号５）を用いてＧＦＰに対して標的化した。

ノックダウンを、ｑＰＣＲによって確認した。

ｑＰＣＲによる遺伝子発現。遺伝子発現を、ＦｉｓｈｅｒＭａｘｉｍａＳＹＢＲＧｒｅｅｎの製造元のプロトコルを使用したｑＰＣＲによって確認した。ＦｉｓｈｅｒＭａｘｉｍａＳＹＢＲＧｒｅｅｎのプライマー配列は、ＰｒｉｍｅｒＢａｎｋから得た。プライマーの配列は次の通りである。
ＲＮＦ１１４フォワード：ＡＡＴＧＴＴＣＣＡＡＡＣＣＧ（配列番号６）
ＲＮＦ１１４リバース：ＴＴＧＣＡＧＴＧＴＴＣＣＡＣ（配列番号７）
シクロフィリンフォワード：ＣＣＣＡＣＣＧＴＧＴＴＣＴＴＣＧＡＣＡＴＴ（配列番号８）
シクロフィリンリバース：ＧＧＡＣＣＣＧＴＡＴＧＣＴＴＴＡＧＧＡＴＧＡ（配列番号９）

ゲルベースＡＢＰＰ。ゲルベースＡＢＰＰ方法を、以前に記載されたように実施した^{３４，６２，６３，６７}。純粋な組換えヒトタンパク質はＯｒｉｇｅｎｅから購入した。純粋なタンパク質（０．１μｇ）をＤＭＳＯビヒクルまたは共有結合的に作用する小分子で室温にて３０分間、５０μＬのＰＢＳのインキュベーション容量で前処理し、続いてＪＮＳ－１－２７（最終濃度５０μＭ）で室温にて１時間処理した。ＣｕＡＡＣを実施して、ローダミン－アジド（最終濃度１μＭ）をアルキンプローブ標識タンパク質に付加した。次に、サンプルを２０μＬの４×還元ＬａｅｍｍｌｉＳＤＳサンプルローディング緩衝液（ＡｌｆａＡｅｓａｒ）で希釈し、９０℃で５分間加熱した。サンプルを、プレキャスト４～２０％ＴＧＸゲル（Ｂｉｏ－ＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）で分離した。ＣｈｅｍｉＤｏｃＭＰ（Ｂｉｏ－ＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ）でスキャンする前に、ゲルを１０％酢酸、３０％エタノールの溶液で２時間固定した。標的標識の阻害は、ＩｍａｇｅＪを使用したデンシトメトリーによって評価した。

共有結合リガンドライブラリー。ＲＮＦ１１４に対してスクリーニングされた共有結合リガンドの大半の合成および特徴付けは、以前に報告されている^{３１，３２，３４，６３}。「ＥＮ」で始まる化合物は、ＥｎａｍｉｎｅＬＬＣから購入した。以前に報告されていない他の共有結合リガンドの合成および特徴付けは、実施例６に記載されている。

ウエスタンブロッティング。ＲＮＦ１１４（ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ、ＨＰＡ０２１１８４）、ｐ２１（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１２Ｄ１）、ＧＡＰＤＨ（ＰｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈＧｒｏｕｐＩｎｃ．、６０００４－１－Ｉｇ）、ＢＲＤ４（Ａｂｃａｍｐｌｃ、Ａｂ１２８８７４）、ＤＹＫＤＤＤＤＫタグ（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｄ６Ｗ５Ｂ）およびベータアクチン（ＰｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈＧｒｏｕｐＩｎｃ．、６６０９－１－Ｉｇ）に対する抗体は、さまざまな商業的供給元から入手し、推奨される製造元の手順に従って希釈液を調製した。タンパク質をＳＤＳ／ＰＡＧＥによって分離し、ｉＢｌｏｔシステムを使用してニトロセルロース膜に移した。ブロットを、Ｔｗｅｅｎ２０（ＴＢＳＴ）溶液を含有するＴｒｉｓ緩衝生理食塩水中の５％ＢＳＡを用いて室温で１時間ブロックし、ＴＢＳＴ中で洗浄し、製造元が推奨する希釈剤で希釈した一次抗体を用いて４℃で一晩プローブした。ＴＢＳＴで洗浄した後、ブロットを、Ｌｙ－Ｃｏｒから購入した二次抗体と共に暗所でインキュベートし、ＴＢＳＴ中の５％ＢＳＡ中に１：１０，０００の希釈で室温にて使用した。さらに洗浄した後、ＯｄｙｓｓｅｙＬｉ－Ｃｏｒスキャナーを使用してブロットを可視化した。追加の一次抗体のインキュベーションが必要な場合は、ＲｅＢｌｏｔＰｌｕｓＳｔｒｏｎｇＡｎｔｉｂｏｄｙＳｔｒｉｐｐｉｎｇＳｏｌｕｔｉｏｎ（ＥＭＤＭｉｌｌｉｐｏｒｅ、２５０４）を使用して膜をストリッピングし、洗浄して再度ブロックしてから、一次抗体と再インキュベートした。

野生型およびＣ８ＡＲＮＦ１１４の発現および精製。ＲＮＦ１１４は、いくつかの方法を使用して発現させ、精製した。いずれの場合も、ＲＮＦ１１４の活性およびニンボリドに対する感受性を確認した。最初の方法では、Ｃ末端にＦＬＡＧタグが付いた野生型哺乳動物発現プラスミドをＯｒｉｇｅｎｅ（ＯｒｉｇｅｎｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＩｎｃ．、ＲＣ２０９７５２）から購入した。ＲＮＦ１１４Ｃ８Ａ突然変異体は、製造元の指示に従って、Ｑ５部位特異的変異誘発キットを用いて（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ、Ｅ０５５４Ｓ）生成した。以前に報告されたように、発現および精製条件を最適化した^６８。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、１０％のＦＢＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）および２ｍＭのＬ－グルタミン（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＤＭＥＭ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中で６０％の密集度まで増殖させ、５％のＣＯ_２で３７℃に維持した。トランスフェクションの直前に、培地を、５％のＦＢＳを含有するＤＭＥＭと置き換えた。各プレートに、１００μｇのＰＥＩを含む２０μｇの過剰発現プラスミド（Ｓｉｇｍａ）をトランスフェクトした。４８時間後、細胞をＴＢＳに回収し、超音波処理により溶解し、抗ＤＹＫＤＤＤＤＫ樹脂（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ、Ｌ００４３２）で９０分間バッチ結合した。溶解物と樹脂を重力フローカラムに装填して洗浄した後、２５０ｎｇ／μＬの３×ＦＬＡＧペプチド（ＡｐｅｘＢｉｏ、Ａ６００１）で溶出した。純度および濃度を、ＰＡＧＥ、ＵＶ／分光法、およびＢＣＡアッセイによって確認した。

２番目の方法では、ＲＮＦ１１４の完全なヒトアイソフォーム（Ｕｎｉｐｒｏｔｉｄ：Ｑ９Ｙ５０８）をコードするＤＮＡを、Ｅ．ｃｏｌｉでの発現用にコドン最適化し、ＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＤＮＡＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによって合成した。所望の構築物は、Ｎｄｅ１制限部位とＢａｍＨ１制限部位との間にＨｉｓ_８－ＭＢＰ－ＴＥＶ配列を含むように修飾されたｐＥＴ２４ａプラスミド（Ｎｏｖａｇｅｎ）に相同な２０塩基対を含むプライマーで完全ＲＮＦ１１４配列から増幅した。ＰＣＲ産物を、プレキャスト１％アガロースゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して分析し、正しい長さのＰＣＲ産物を、ＱＩＡｑｕｉｃｋＧｅｌＥｘｔｒａｃｔｉｏｎキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して精製した。精製したＰＣＲ産物を、ＧｉｂｓｏｎＡｓｓｅｍｂｌｙ（ＮＥＢＧｉｂｓｏｎＡｓｓｅｍｂｌｙ２× ＭａｓｔｅｒＭｉｘ）を使用して線形化ベクターにアセンブルし、Ｅ．ｃｏｌｉ１０Ｇ化学的コンピテント細胞（Ｌｕｃｉｇｅｎ、ウィスコンシン州ミドルトン）に形質転換した。カナマイシン（Ｋａｎ）耐性コロニーをＬＢ培地で増殖させ、フォワードおよびリバースプライマーを使用して配列を確認する前に、Ｍｉｎｉｐｒｅｐ（Ｑｉａｇｅｎ）を介してプラスミドを単離した。

所望のＲＮＦ１１４構築物を含む１００ｎｇのｐＥＴ２４ａＨｉｓ_８－ＭＢＰプラスミドを、Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）化学的コンピテント細胞（ＮＥＢ製品番号Ｃ２５３０Ｈ）に形質転換した。翌日、単一の形質転換コロニーを使用して、カナマイシン（５０μｇ／ｍＬ）を含む栄養豊富なＬＢ培地５０ｍＬに接種し、２５０ｒｐｍで撹拌しながら３７℃で一晩インキュベートした。翌朝、５０ｍＭの３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）（ｐＨ７．５）、１ｍＭの塩化亜鉛およびカナマイシン（５０μｇ／ｍＬ）を補充した１ＬのＴｅｒｒｉｆｉｃＢｒｏｔｈ（ＴＢ）に、オーバーナイトスターター培養物を、６００ｎｍ（ＯＤ_６００）での開始光学密度が０．１になるまで接種した。ＯＤ_６００が０．８になるまで、２５０ｒｐｍで撹拌しながら３７℃で細胞を増殖させた。この段階で、ＲＮＦ１１４融合タンパク質の発現を１ｍＭのイソプロピルβ－Ｄ－１－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）で誘導し、インキュベーターの温度を１８℃に下げた。細胞を１８℃で１８時間増殖させたままにし、続いて遠心分離によって回収し、１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）緩衝液で洗浄し、－２０℃で保存した。

過剰発現したＲＮＦ１１４融合タンパク質を含有する１０ｇのＥ．ｃｏｌｉ細胞を、８０ｍＬの溶解緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２個のＲｏｃｈｅプロテアーゼ阻害剤錠剤［ＥＤＴＡ含まず］、２００ｍＭのＺｎＣｌ_２、１ｍＭのＤＴＴ）に再懸濁し、氷上で超音波処理し、サイクル時間はオン６０秒、オフ６０秒で、合計超音波処理時間は３分であった。細胞溶解物を１８，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、可溶性タンパク質を、洗浄緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２００ｍＭのＺｎＣｌ_２、１ｍＭのＤＴＴ、２５ｍＭのイミダゾール）で事前に平衡化した２ｍＬのＮｉ－ＮＴＡ樹脂とともに４℃で４時間撹拌しながらインキュベートした。細胞溶解物／Ｎｉ－ＮＴＡ樹脂混合物をディスポーザブルカラムに入れ、樹脂に結合しない全てのタグなし可溶性タンパク質を収集して、２回目の精製を行った。樹脂を洗浄緩衝液２５ｍＬで洗浄した後、Ｈｉｓ－ＭＢＰ－ＲＮＦ１１４タンパク質を、２５ｍＬの溶出緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．５）、５００ｍＭのイミダゾール、２００ｍＭのＺｎＣｌ_２、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＤＴＴ）でＮｉ－ＮＴＡ樹脂から溶出した。このプロセスを繰り返し、収集したフローを、さらに２ｍＬの事前平衡化Ｎｉ－ＮＴＡ樹脂とともに完全にインキュベートした。

Ｈｉｓ－ＭＢＰ－ＲＮＦ１１４タンパク質を、ＴＥＶプロテアーゼ（１００単位／ｍｇ（ＭＢＰ－ＲＮＦ１１４））で同時に４℃で消化し、透析緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２００ｍＭのＺｎＣｌ_２、１ｍＭのＤＴＴ）に対して一晩透析した。翌朝、タンデムに組み立てた２つの５ｍＬＨｉｓＴｒａｐＥｘｃｅｌカラムを、ＡｋｔａＡｖａｎｔ上に置き、５カラム容量の洗浄緩衝液で平衡化した。ＴＥＶで切断されたサンプルを２ｍＬ／分の速度でカラムに装填し、樹脂をさらに５カラム容量の洗浄緩衝液で洗浄した。切断されたＲＮＦ１１４を含むと同定された全ての画分を５ｍＬの容量に濃縮し、結晶学緩衝液（２５ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１３７ｍＭのＮａＣｌ）またはＮＭＲ緩衝液（２０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、１５０ｍＭのＮａＣｌ）で事前に平衡化したＨｉＬｏａｄ１６／６０Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５ゲル濾過カラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）に装填した。０．２５ｍＬ／分の流速を使用してゲル濾過カラムを実行し、２ｍＬの画分を収集した。ゲル濾過カラムから溶出するピークに対応する画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して分析し、ＲＮＦ１１４を含む全ての画分を最終濃度１０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、液体窒素で瞬間冷凍し、必要になるまで－８０℃で保存した。

ＲＮＦ１１４のＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析。５０μＬのＰＢＳ中の精製ＲＮＦ１１４（１０μｇ）を、ＤＭＳＯビヒクルまたは共有結合的に作用する化合物（１００μＭ）のいずれかとともに室温で３０分間インキュベートした。次に、ＤＭＳＯ対照を軽ＩＡで処理しつつ、化合物で処理したサンプルを重いＩＡと室温でそれぞれ１時間インキュベートした（２００μＭの最終濃度、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、７２１３２８）。１２．５μＬの１００％（ｗ／ｖ）ＴＣＡを加えてサンプルを沈殿させ、処理群と対照群をペアで組み合わせてから、－８０℃で１時間冷却した。次に、合わせたサンプルを最高速度にて４℃で１０分間回転させ、上澄みを注意深く除去し、サンプルを氷冷した０．０１ＭＨＣｌ／９０％アセトン溶液で洗浄する。ペレットを、０．１％のＰｒｏｔｅａｓｅＭａｘ（ＰｒｏｍｅｇａＣｏｒｐ．、Ｖ２０７１）を含有する４Ｍの尿素に再懸濁し、４０ｍＭの重炭酸アンモニウム緩衝液で希釈した。サンプルを、６０℃で３０分間１０ｍＭのＴＣＥＰで還元させた。次に、サンプルをＰＢＳで５０％希釈した後、シークエンシンググレードのトリプシン（サンプルあたり１μｇ、ＰｒｏｍｅｇａＣｏｒｐ、Ｖ５１１１）を加えて、３７℃で一晩インキュベートした。翌日、サンプルを１３２００ｒｐｍで３０分間遠心分離した。上清を新しいチューブに移し、最終濃度が５％ギ酸になるように酸性化し、ＭＳ分析まで－８０℃で保存した。

ＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ。組換えＭｙｃ－Ｆｌａｇ－ＲＮＦ１１４タンパク質を、上記のようにＨＥＫ２９２Ｔ細胞から精製するか、Ｏｒｉｇｅｎｅ（ＯｒｉｇｅｎｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＩｎｃ．、ＴＰ３０９７５２）から購入した。インビトロ自動ユビキチン化アッセイのために、２５μＬのＴＢＳ中の０．２μｇのＲＮＦ１１４をＤＭＳＯビヒクルまたは共有結合的に作用する化合物と室温で３０分間プレインキュベートした。続いて、２ｍＭのＡＴＰを含有する総量２５μＬのＴｒｉｓ緩衝液に０．１μｇのＵＢＥ１（ＢｏｓｔｏｎＢｉｏｃｈｅｍ．Ｉｎｃ、Ｅ－３０５）、０．１μｇのＵＢＥ２Ｄ１（ＢｏｓｔｏｎＢｉｃｈｅｍ．Ｉｎｃ、ｅ２－６１５）、５μｇのＦｌａｇ－ユビキチン（ＢｏｓｔｏｎＢｉｃｈｅｍ．Ｉｎｃ、ｕ－１２０）を加えて、５０μＬの最終容量を達成した。混合物を３７℃で１．５時間撹拌しながらインキュベートした。２０μＬのＬａｅｍｍｌｉ緩衝液を加えて反応をクエンチし、タンパク質をウエスタンブロットアッセイによって分析した。

ＲＮＦ１１４／ｐ２１プルダウン。組換えＦｌａｇタグ付きＲＮＦ１１４を餌として使用して、Ａｎｔｉ－Ｆｌａｇアガロースビーズ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔＢｉｏｔｅｃｈＣｏｒｐ．、Ｌ００４３２）を用いて純粋な組換えｐ２１（ＯｒｉｇｅｎｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＩｎｃ．、ＴＰ３０９７５２およびＴＰ７２０５６７）を沈殿させた。１マイクログラムのＦｌａｇ－ＲＮＦ１１４を５０μＬのＴＢＳに加え、続いてニンボリド（１００μＭの最終濃度、ＣａｙｍａｎＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．、１９２３０）または等量のＤＭＳＯを加えた。サンプルを室温で３０分間インキュベートした。１マイクログラムの純粋なｐ２１を各サンプルに加え、サンプルを室温で３０分間撹拌しながらインキュベートした。１０マイクロリットルのＦｌａｇアガロースビーズを各サンプルに加え、サンプルを室温で３０分間撹拌した。洗浄（３回、１ｍＬのＴＢＳ）を実施してから、２５０ｎｇ／μＬの３×ＦＬＡＧペプチド（ＡｐｅｘＢｉｏＡ６００１）を補充した５０μＬのＴＢＳを使用してタンパク質を溶出した。上清（３０μＬ）を回収し、Ｌａｅｍｍｌｉ還元剤（１０μＬ）を加えた後、サンプルを９５℃で５分間煮沸し、放冷した。上記のように、サンプルをウエスタンブロッティングによって分析した。

腫瘍異種移植片の研究。ヒト腫瘍異種移植片は、以前に記載されたように、雌のＣ．Ｂ１７重症複合免疫不全症（ＳＣＩＤ）マウス（ＴａｃｏｎｉｃＦａｒｍｓ）の脇腹に癌細胞を異所的に移植することによって確立した^{６６，６９}。手短に言えば、細胞をＰＢＳで洗浄し、トリプシン処理し、血清含有培地に回収した。回収した細胞は、無血清培地中で洗浄し、２．０×１０^４細胞／μｌの濃度で無血清培地に再懸濁し、１００μｌを各マウスの脇腹に皮下注射した。腫瘍をキャリパーで測定した。動物実験を、ｔｈｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｂｅｒｋｅｌｅｙの施設内動物管理使用委員会の指針に従って行った。

実施例６．追加の合成および特徴付けデータ
ニンボリド－アルキンプローブ（ＳＩ－２）と分解剤ＸＨ１およびＸＨ２の合成および特徴付け
一般的な手順。特に明記しない限り、全ての反応は、オーブン乾燥または火炎乾燥したＦｉｓｈｅｒｂｒａｎｄ（登録商標）ホウケイ酸ガラス管（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１４９５９２５Ａ、１３×１００ｍｍ）で、乾燥窒素雰囲気下で黒色フェノールスクリューキャップ（１３－４２５）を使用して実施した。乾燥したＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、トルエンおよびアセトニトリルは、これらの事前に脱気した溶媒を活性アルミナカラムに通すことによって得た。ニンボリドはＳｉｇｍａ－ＡｌｄｒｉｃｈもしくはＣａｙｍａｎＣｈｅｍｉｃａｌから購入し、さらに精製することなく直接使用した。プロパルギルアミンとＮ－メチルプロパルギルアミンはＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入し、さらに精製することなく直接使用した。反応を、ＴＬＣシリカゲル６０Ｆ_２５４ガラスプレート（ＥＭＤＭｉｌｌｉｐｏｒｅ）での薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって監視し、ＵＶ照射およびｐ－アニスアルデヒド、リンモリブデン酸、または過マンガン酸カリウムによる染色によって可視化した。揮発性溶媒は、ロータリーエバポレーターを使用して減圧下で除去した。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、ＳｉｌｉｃｙｃｌｅＦ６０シリカゲル（６０Å、２３０～４００メッシュ、４０～６３μｍ）を使用して実施した。酢酸エチルとヘキサンはＦｉｓｈｅｒＣｈｅｍｉｃａｌから購入し、さらに精製することなくクロマトグラフィーに使用した。プロトン核磁気共鳴^（１ＨＮＭＲ）および炭素核磁気共鳴（^１３ＣＮＭＲ）スペクトルは、^１Ｈの場合は６００および７００ＭＨｚ、^１３Ｃの場合は１５０および１７５ＭＨｚで動作するＢｒｕｋｅｒＡＶ－６００およびＡＶ－７００分光計で記録した。化学シフトは、残留溶媒シグナルＣＤＣｌ_３に関して百万分率（ｐｐｍ）で報告される（^１ＨＮＭＲ：δ＝７．２６；^１３ＣＮＭＲ：δ＝７７．１６），ＣＤ_２Ｃｌ_２（^１ＨＮＭＲ：δ＝５．３２；^１３ＣＮＭＲ：δ＝５３．８４）。ピーク多重度は次のように報告される：ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｄｄ＝二重項の二重項、ｔｔ＝三重項の三重項、ｍ＝多重項、ｂｒ＝ブロードなシグナル、ａｐｐ＝見かけの。ＩＲスペクトルは、Ｎｉｃｏｌｅｔ３８０ＦＴ－ＩＲ分光計で記録した。高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）は、カリフォルニア大学バークレー校のＱＢ３／化学質量分析施設によって取得された。旋光度は、Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ２４１旋光計で測定した。

スキームＳ１。ニンボリドアルキンプローブ（ＳＩ－２）の合成。

スキームＳ２。ニンボリド由来の二官能性分解剤ＸＨ１およびＸＨ２の合成。

ブロモフランＳＩ－１：ニンボリド（１００ｍｇ、０．２１４ｍｍｏｌ）を４つの反応管（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１３×１００ｍｍ）に均等に分割し、それぞれに撹拌棒を入れた。チューブを排気し、窒素を再充填し、乾燥ＤＭＦ（各０．２５ｍＬ）を加え、得られた溶液を氷浴で０℃に冷却した。再結晶したＮ－ブロモスクシンイミド（４０．０ｍｇ、０．２２５ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（４ｍＬ）に溶解し、溶液を各反応管（各１ｍＬ）にゆっくりと加えた。反応混合物を０℃で１時間撹拌し、次に飽和Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液（各５ｍＬ）の添加によりクエンチした。得られた混合物を合わせ、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、Ｈ_２Ｏ（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空中で濃縮した。粗混合物をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：３～１：１）によって精製して、白色フォームとしてＳＩ－１（１１１ｍｇ、９５％）を得た。

＝＋１９０．３°（ｃ０．０１０ｇ／ｍｌ，ＣＨＣｌ_３）；^１ＨＮＭＲ（７００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．３４（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），６．２９（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），５．９２（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．５６（ａｐｐ．ｔｔ，Ｊ＝７．４，１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，３．７Ｈｚ，１Ｈ），４．２７（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），３．６７（ｂｒｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），３．５６（ｓ，３Ｈ），３．２４（ｄｄ，Ｊ＝１６．３，５．５Ｈｚ，１Ｈ），３．１８（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ），２．７５（ｄｄ，Ｊ＝５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），２．３６（ｄｄ，Ｊ＝１６．３，５．５Ｈｚ，１Ｈ），２．１８－２．１３（ｍ，２Ｈ），１．６６（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，３Ｈ），１．４７（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｓ，３Ｈ），１．２２（ｓ，３Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（１７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ２００．９，１７５．０，１７３．２，１４９．８，１４５．４，１４４．２，１３６．１，１３１．２，１２５．２，１２０．３，１１２．１，８８．５，８３．１，７３．５，５２．０，５０．５，５０．０，４７．９，４５．４，４３．８，４１．２，４０．４，３２．２，１８．７，１７．３，１５．３，１３．０；ＩＲ（薄膜、ｃｍ^－１）２９７４，２９２９，２８７５，１７８３，１７３４，１６７８，１５９４，１４３８，１３９４，１３７３；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値（［Ｃ_２７Ｈ_２９Ｏ_７ＢｒＮａ］^＋（Ｍ＋Ｎａ）^＋の場合）：ｍ／ｚ５６７．０９８９、実測値：５６７．０９９０。

アルデヒド２：反応管（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１３×１００ｍｍ）に、撹拌棒、ＳＩ－１（１２ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、１当量）、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３（１０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、０．５等量）、ＳＰｈｏｓ（１０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、１当量）、無水Ｋ_３ＰＯ_４（３５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、７．５当量）および４－ホルミルフェニルボロン酸（１６ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、５当量）を入れた。チューブを排気し、窒素を再充填し、乾燥トルエン（０．５ｍＬ）を加えた。得られた混合物を６０℃で４８時間加熱し、室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のプラグに通した。濾液を真空中で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：３～１：１）によって精製して、淡黄色油としてアルデヒド２（１１．５ｍｇ、９２％）を得た。

＝＋４．８°（ｃ０．００５ｇ／ｍＬ，ＣＨＣｌ_３）；^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １０．０１（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），６．３９（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），５．９３（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．６０（ａｐｐ．ｔｔ，Ｊ＝７．３，１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６４（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３２（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．１７－４．１３（ｍ，１Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），３．２３（ｄｄ，Ｊ＝１６．４，５．５Ｈｚ，１Ｈ），３．２０（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ），２．７８（ｄｄ，Ｊ＝５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），２．４１（ｄｄ，Ｊ＝１６．４，５．５Ｈｚ，１Ｈ），２．３１－２．２７（ｍ，２Ｈ），１．６９（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，３Ｈ），１．４９（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，３Ｈ），１．２５（ｓ，３Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ２００．８，１９１．７，１７５．０，１７３．２，１４９．８，１４７．９，１４６．３，１４３．１，１３７．０，１３６．１，１３４．８，１３１．１，１３０．３，１２６．１，１２６．０，１１２．６，８８．４，８３．３，７３．４，５２．１，５０．８，５０．０，４７．９，４５．５，４３．８，４１．３，３２．５，１８．８，１７．５，１５．３，１３．４；ＩＲ（薄膜、ｃｍ^－１）２９７７，２９３５，２８７３，１７８２，１７３３，１７０２，１６７７，１６０８，１４３８，１３９３，１３７２；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値（［Ｃ_３４Ｈ_３４Ｏ_８Ｎａ］^＋（Ｍ＋Ｎａ）^＋の場合）：ｍ／ｚ５９３．２１４６、実測値：５９３．２１５４。

ニンボリドアルキンプローブＳＩ－２：ｉ．反応管（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１３×１００ｍｍ）に、撹拌棒、アルデヒド２（７．０ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、１当量）、およびｔ－ＢｕＯＨと２－メチル－２－ブテンの混合物（０．６ｍＬ、３：５ｖ／ｖ）を入れた。Ｈ_２Ｏ（０．２ｍＬ）中のＮａＣｌＯ_２（３．３ｍｇ、３当量）およびＮａＨ_２ＰＯ_４（１３．２ｍｇ、９当量）の溶液を一度に加え、得られた混合物を室温で６時間撹拌した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝２：１）によって判断されるように反応が完了した後、混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）および飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）で希釈し、水相をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗物質をさらに精製することなく直接使用した。

ｉｉ．撹拌棒、粗製３（０．０１２ｍｍｏｌを想定）、およびＨＡＴＵ（１３．７ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ、３当量）を入れた反応管（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１３×１００ｍｍ）に、ＤＭＦ（０．１ｍＬ）中のＤＩＰＥＡ（６．４μＬ、０．０３６ｍｍｏｌ、３当量）の溶液を加えた。得られた混合物を０℃に冷却し、１０分間撹拌した。次に、ＤＭＦ（０．２ｍＬ）中のプロパルギルアミン（１．６μＬ、０．０２４ｍｍｏｌ、２当量）の溶液を加え、反応混合物をさらに０～４℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝２：１）によって判断されるように、反応が完了した後、混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）および飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）で希釈し、水相をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を、Ｈ_２Ｏ（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空中で濃縮した。得られた粗製物を分取ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝２：１）によって精製して、白色固体としてＳＩ－３（３．５ｍｇ、２ステップで４６％）を得た。

＝＋２１．５°（ｃ０．００２ｇ／ｍＬ，ＣＨＣｌ_３）；^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．８３（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．６１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，２Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），６．３６（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），６．２７（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，１Ｈ），５．９３（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．６０（ａｐｐ．ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．６４（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，３．７Ｈｚ，１Ｈ），４．３１（ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，１Ｈ），４．２８（ｄｄ，Ｊ＝５．２，２．６Ｈｚ，２Ｈ），４．１１（ｂｒｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６８（ｓ，３Ｈ），３．２５－３．１８（ｍ，２Ｈ），２．７８（ｄｄ，Ｊ＝５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），２．４０（ｄｄ，Ｊ＝１６．４，５．５Ｈｚ，１Ｈ），２．３２－２．２４（ｍ，３Ｈ），１．６７（ｂｒｓ，３Ｈ），１．４９（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，３Ｈ），１．２４（ｓ，３Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ２００．８，１７５．０，１７３．２，１６６．６，１４９．８，１４８．２，１４６．１，１４２．５，１３６．３，１３４．７，１３２．１，１３１．２，１２７．６，１２６．１，１２４．８，１１２．３，８８．５，８３．２，７９．６，７３．５，７２．２，５２．１，５０．８，５０．０，４８．０，４５．５，４３．８，４１．３，４１．３，３２．５，３０．０，１８．８，１７．５，１５．３，１３．４；ＩＲ（薄膜、ｃｍ^－１）３３３７，２９５４，２９２１，２８５２，１７８１，１７３４，１６６３，１６０９；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値（［Ｃ_３７Ｈ_３７ＮＯ_８Ｎａ］^＋（Ｍ＋Ｎａ）^＋の場合）：ｍ／ｚ６４６．２４１７、実測値６４６．２４１７。

この化合物は、Ｗａｒｉｎｇおよび同僚によって報告された条件に従って調製した（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１６，５９，７８０１）。

この化合物は、Ｂｒａｄｎｅｒおよび同僚によって報告された条件（２０１７年ＰＣＴ国際特許出願第ＷＯ２０１７／０９１６７３Ａ２号）に従って調製した。

二官能性分解剤ＸＨ１およびＸＨ２の一般的な合成手順：

ｉ．反応管（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１３×１００ｍｍ）に、撹拌棒、Ｂｏｃ保護アミン（０．０４ｍｍｏｌ）、トリエチルシラン（１２μＬ、０．０７５ｍｍｏｌ）、およびＤＣＭ（０．４ｍＬ）を入れた。得られた混合物を０℃に冷却し、続いてＴＦＡ（０．１２ｍＬ）を滴下して加えた。反応混合物を室温まで加温させ、さらに２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＤＣＭ＝１：１０）で判断して反応が完了した後、混合物をトルエン（２ｍＬ）で希釈し、真空中で濃縮した。得られた粗製物を高真空下で３０分間乾燥し、さらに精製することなく次のステップで直接使用した。酸３は、前述の手順に従ってアルデヒド２から調製し、さらに精製することなく使用した。

ｉｉ．反応管（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１３×１００ｍｍ）に、撹拌棒、粗アミン（０．０４ｍｍｏｌを想定）、未精製３（０．０２ｍｍｏｌを想定）、およびＤＭＦ（０．６ｍＬ）を入れた。得られた混合物を氷浴中で０℃に冷却し、続いてＨＡＴＵ（２３．０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１１μＬ、０．０６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を４℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＤＣＭ＝１：１０）によって判断されるように反応が完了した後、混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）および飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）で希釈し、水相をＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、Ｈ_２Ｏ（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空中で濃縮した。得られた粗物質を分取ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＤＣＭ＝１：１５、２回展開）によって精製して、二官能性分解剤ＸＨ１またはＸＨ２を得た。

白色フォームＸＨ１（ＳＩ－２からの収率４５％）：

＝＋４８．７°（ｃ０．００５２ｇ／ｍＬ，ＣＨＣｌ_３）；^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ７．８７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．４０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，３Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．３４－７．２９（ｍ，２Ｈ），７．２８（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），５．９３（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．６１－５．５５（ｍ，１Ｈ），４．７３（ａｐｐ．ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），４．６４（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，３．７Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．１２－４．０８（ｍ，１Ｈ），３．７５－３．６４（ｍ，１５Ｈ），３．６４－３．５３（ｍ，３Ｈ），３．５１－３．４０（ｍ，３Ｈ），３．２５－３．１６（ｍ，２Ｈ），２．７７（ａｐｐ．ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），２．７０（ｓ，３Ｈ），２．４２－２．３６（ｍ，４Ｈ），２．２６－２．２０（ｍ，２Ｈ），１．６８－１．６５（ｍ，３Ｈ），１．６５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，３Ｈ），１．４８（ｓ，３Ｈ），１．３７（ｓ，３Ｈ），１．２４（ｓ，３Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ２００．６，１７４．８，１７３．０，１７０．１，１６７．０，１６４．４，１５５．３，１４９．９，１４９．６，１４８．３，１４６．１，１４５．６，１４２．１，１３７．２，１３６．３，１３５．８，１３３．８，１３３．０，１３１．６，１３１．２，１３１．０，１３０．６，１３０．０，１３０．０，１２８．７，１２８．７，１２７．６，１２７．６，１２５．７，１２５．７，１２４．１，１１２．０，８８．３，８３．０，７３．３，７０．５，７０．５，７０．３，７０．２，６９．７，６９．６，５４．１，５１．９，５０．５，４９．７，４７．８，４５．３，４３．６，４１．１，４１．１，３９．７，３９．４，３８．５，３２．３，１８．６，１７．３，１５．１，１４．４，１３．１，１３．１，１１．６；ＩＲ（薄膜、ｃｍ^－１）３３３９，２９２３，２８６６，１７８１，１７３４，１６５９，１５４０，１４８７，１４３７，１４１９，１３００；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値（［Ｃ_６１Ｈ_６７Ｎ_６Ｏ_１２Ｃｌ_１Ｓ_１Ｎａ］^＋（Ｍ＋Ｎａ）^＋の場合）：ｍ／ｚ１１６５．４１１８、実測値１１６５．４１４２。

白色フォームＸＨ２（ＳＩ－２からの収率４２％）：

＝＋１８．６°（ｃ０．００４ｇ／ｍＬ，ＣＨＣｌ_３）；^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ_２Ｃｌ_２）δ ７．９０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．６５－７．５７（ｍ，３Ｈ），７．４４－７．３９（ｍ，３Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），７．２５（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，１Ｈ），６．３６（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），５．８９（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．５２（ａｐｐ．ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），４．６６－４．５９（ｍ，２Ｈ），４．２６（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．１２（ｂｒｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．６３（ｓ，３Ｈ），３．５２－３．４５（ｍ，２Ｈ），３．４４－３．３４（ｍ，４Ｈ），３．２０（ｄｄ，Ｊ＝１６．４，５．５Ｈｚ，１Ｈ），３．１５（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ），２．７４（ａｐｐ．ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，１Ｈ），２．６３（ｓ，３Ｈ），２．４５－２．３７（ｍ，４Ｈ），２．２５－２．２１（ｍ，２Ｈ），１．７５－１．７０（ｍ，２Ｈ），１．６５（ｓ，６Ｈ），１．４６（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｓ，３Ｈ），１．２２（ｓ，３Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤ_２Ｃｌ_２）δ ２０１．２，１７５．６，１７３．５，１７１．９，１６６．７，１６４．５，１５６．１，１５０．５，１４９．９，１４８．８，１４６．３，１４２．５，１３７．１，１３７．０，１３６．６，１３４．２，１３３．７，１３２．７，１３１．６，１３１．３，１３１．２，１３０．８，１３０．３，１３０．３，１２９．０，１２９．０，１２７．８，１２７．８，１２６．２，１２６．２，１２４．８，１１２．６，８８．６，８３．４，７３．９，５４．９，５２．１，５１．０，５０．２，４８．２，４５．８，４４．１，４１．６，４１．５，３９．７，３６．５，３６．２，３２．７，２９．９，１８．８，１７．５，１５．４，１４．６，１３．４，１３．３，１２．０；ＩＲ（薄膜、ｃｍ^－１）３３０８，３０２３，２９３０，２８６７，１７８２，１７３４，１６５４，１５４０，１４８８，１４３７，１３０１；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値（［Ｃ_５６Ｈ_５７ＣｌＮ_６Ｏ_９Ｓ］^＋（Ｍ＋Ｈ）^＋の場合）：ｍ／ｚ１０２５．３６６９、実測値１０２５．３６６９。

ＪＮＳ２７の合成および特徴付け。ＪＮＳ２７．窒素雰囲気下、－７８℃でリチウムジイソプロピルアミド（６ｍＬ、１．２当量）の撹拌溶液に、５ｍＬのＴＨＦ中のクリクロヘキセノン（０．４８ｍＬ、１当量）の溶液を滴下した。４５分後、５ｍＬのＴＨＦ中の３－ブロモ－１－（トリメチルシリル）－プロピン（０．８５ｍＬ、２．４当量）の溶液を徐々に加えた後、反応を一晩室温に戻した。反応を飽和ＮＨ_４Ｃｌでクエンチした（２０ｍＬ）。混合物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、濃縮した。シリカゲルでの残留物のフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の１０～２０％のＥｔＯＡｃ）により、２５．４％の収率（２６１ｍｇ）でＴＭＳ－アルキンが得られた。Ｎ_２下で、５ｍＬのＴＨＦ中のＴＭＳ－アルキン（２６１ｍｇ、１当量）の溶液に、ＴＢＡＦ（０．４４ｍＬ、１当量）を加えた。室温で４時間撹拌した後、飽和ＮＨ４Ｃｌ（１５ｍＬ）を加えることにより反応をクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃ（１５ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。シリカゲルでの残留物のフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中０～２０％のＥｔＯＡｃ）により、ＪＮＳ－２７を淡黄色ワックスとして８１％の収率（１６８ｍｇ、２ステップで２０．６％）で得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ６．９９（ｍ，１Ｈ），６．０３（ｄｔ，Ｊ＝１０．０２，１．９７Ｈｚ，１Ｈ），２．７８（ｍ，１Ｈ），２．４８（ｍ，３Ｈ），２．３３（ｍ，２Ｈ），１．９８（ｔ，Ｊ＝２．６８，１Ｈ），１．８８（ｍ，１Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １５０．３０，１２９．３４，４５．７４，２７．６８，２５．７８，２０．２７；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値（［Ｃ_９Ｈ_１０ＯＮａ］^＋（Ｍ＋Ｎａ）^＋の場合）：ｍ／ｚ１３４．０７３２、実測値１３４．０７２８。

一般的な合成方法化学薬品および試薬を主要な商業的供給業者から購入し、さらに精製することなく使用した。別途記述されない限り、反応を、窒素雰囲気下で実施した。シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーを、ＥＭＤまたはＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈシリカゲル６０（２３０～４００メッシュ）を使用して実施した。プロトンおよび炭素核磁気共鳴（^１ＨＮＭＲおよび^１３ＣＮＭＲ）データを、ｔｈｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＢｅｒｋｅｌｅｙのＢｒｕｋｅｒＡＶＢ４００、ＡＶＱ４００、またはＡＶ６００分光計で取得した。高分解能質量スペクトルを、ポジティブまたはネガティブエレクトロスプレーイオン化（＋ＥＳＩまたは－ＥＳＩ）を使用して、ｔｈｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＢｅｒｋｅｌｅｙのＱＢ３質量分析施設から取得した。収量は、１回の実行として報告される。

一般的手順Ａ。アミン（１当量）をＤＣＭ（５ｍＬ／ｍｍｏｌ）中に溶解し、０℃に冷却した。この溶液に、塩化アクリロイル（１．２当量）、続いて、トリエチルアミン（１．２当量）を加えた。溶液を室温に加温させ、一晩撹拌した。その後、溶液をブラインで洗浄し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（および必要に応じて再結晶）により精製して、対応するアクリルアミドを得た。

一般的手順Ｂ。アミン（１当量）をＤＣＭ（５ｍＬ／ｍｍｏｌ）中に溶解し、０℃に冷却した。この溶液に、塩化クロロアセチル（１．２当量）、続いて、トリエチルアミン（１．２当量）を加えた。溶液を室温に加温させ、一晩撹拌した。その後、溶液をブラインで洗浄し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（および必要に応じて再結晶）により精製して、対応するクロロアセトアミドを得た。

Ｎ－（７－（ベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール－５－イル）－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－７８）。ジオキサンと水の混合物（４：１ジオキサン：水、２．１ｍＬ）中のＮ－（７－ブロモ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－６５、５５ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素雰囲気下で、３，４－（メチレンジオキシ）フェニルボロン酸（７０ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（７４ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２４ｍｇ、１０ｍｏｌ％）を連続して加えた。反応混合物を加熱還流し、一晩撹拌した。反応物を水（２０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、蒸発させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０％～２５％の酢酸エチル）によって精製して、７ｍｇの白色固体を得た（１１％収率）。^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．９３（ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｓ，１Ｈ），６．９０（ｓ，１Ｈ），６．８６（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，２Ｈ），６．４５（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．３０（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７９（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ），３．００（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．８８（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ），２．１０（五重項，７．３Ｈｚ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １４７．７，１４６．７，１４２．８４，１４２．８１，１３５．２，１３４．９，１３２．８，１３１．３，１２７．９，１２７．８，１２２．１，１１９．８，１０９．２，１０８．３，１０１．２，３６．８，３３．５，３０．５，２５．４．ＨＲＭＳ（－ＥＳＩ）：計算値：３０６．１１３６（Ｃ_１９Ｈ_１６ＮＯ_３）。観測値：３０６．１１３０．

Ｎ－（３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１２９）。０℃でエタノール（２０ｍＬ）中の４－アミノインダン（１．０ｇ、７．５ｍｍｏｌ）の溶液に無水酢酸（１．４ｍＬ、１５．０ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温に上げ、一晩撹拌した後、溶媒を蒸発させた。次に、残留物をアセトン（５０ｍＬ）に溶解し、それに１５％硫酸マグネシウム水溶液（６．７５ｍＬの水中１．２ｇ）、続いて過マンガン酸カリウム（３．４ｇ、１７．０ｍｍｏｌ）を加え、得られた溶液を２４時間撹拌した。反応物をセライトのパッドを通して濾過し、クロロホルム、次に水で溶出した。溶離液を分離し、追加のクロロホルムで水層を数回抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させた。次に、残留物を６ＮＨＣｌ溶液（２０ｍＬ）に溶解し、９０℃に加熱した。５時間撹拌した後、溶液を冷却し、少量の炭酸カリウムで中和し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、６１０ｍｇ（３ステップで５５％）の粗７－アミノインダン－１－オンを得て、これをさらに精製することなく使用した。

ジクロロメタン（１５ｍＬ）中の７－アミノインダン－１－オンの溶液に、塩化アクリロイル（０．３９ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．６７ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ）をＮ_２雰囲気下、０℃で加えた。反応混合物を室温まで加温させ、一晩撹拌した。溶液を１ＭＨＣｌ溶液（２×）およびブラインで洗浄し、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１０％～２０％の酢酸エチル）により精製して、３９０ｍｇの白色固体（４７％収率、４ステップで合わせて２６％）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １０．６４（ｓ，１Ｈ），８．４５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．４５（ｄｄ，Ｊ＝１．０，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），５．８２（ｄｄ，Ｊ＝１．０，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），３．１１（ｔ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７４－２．７１（ｍ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ２０９．３，１６４．４，１５５．９，１３８．７，１３７．０，１３１．７，１２８．０，１２３．１，１２０．８，１１６．９，３６．５，２５．５．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２０２．０８６３（Ｃ_１２Ｈ_１２ＮＯ_２）。観測値：２０２．０８６０．

Ｎ－（３－ヒドロキシ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１３３）。窒素雰囲気下、無水メタノール（７ｍＬ）中のＮ－（３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１２９、２０１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（４６．１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。３０分間撹拌した後、反応物を飽和重炭酸ナトリウム溶液でクエンチし、ＤＣＭで３回抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０～５０％の酢酸エチル）で精製して、１９０ｍｇの生成物を白色固体として得た（９４％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ８．９３（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），６．２９（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．１５（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１６．９Ｈｚ，１Ｈ），５．６６（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３２（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），２．９６（ｄｄｄ，Ｊ＝２．４，９．０，１５．７Ｈｚ），２．７３（五重項，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），２．５６－２．４８（ｍ，１Ｈ），１．９６－１．８６（ｍ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６４．１，１４３．７，１３５．６，１３２．８，１３１．６，１２９．５，１２７．３，１２１．０，１１８．５，７６．２，３６．０，２９．８．ＨＲＭＳ（－ＥＳＩ）：計算値：２０２．０８７４（Ｃ_１２Ｈ_１２ＮＯ_２）。観測値：２０２．０８７４．

Ｎ－（１－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１３４）。酢酸（２５０ｍＬ）中の４－ニトロインダン（５．３８ｇ、３３ｍｍｏｌ）の溶液に、三酸化クロム（８．９５ｇ、９０ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。２４時間撹拌した後、反応物を２ＭＮａＯＨで中和し、酢酸エチルで５回抽出した。合わせた有機物を飽和重炭酸ナトリウム溶液およびブラインで洗浄し、次に硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１０～２０％の酢酸エチル）により精製して、１．２６ｇ（約７．１ｍｍｏｌ）の４－ニトロインダノンを白色固体として得た。

この中間体を、窒素バルーンの雰囲気下で無水メタノール（２１ｍＬ）に溶解した活性炭（１２５ｍｇ、１０重量％）上のパラジウムと組み合わせた。反応物を室温の水浴の冷却下で撹拌しながら、トリエチルシラン（１１．３ｍＬ、７１ｍｍｏｌ）を、添加漏斗によって１０分間にわたってゆっくりと加えた。さらに２０分間撹拌した後、反応混合物をセライトのパッドを通して濾過し、続いて濃縮して、粗４－アミノインダノンを得、これをさらに精製することなく使用した。

次に、この最終中間体をＮ_２雰囲気下でＤＣＭ（２１ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却した後、塩化アクリロイル（０．７７ｍＬ、９．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．１９ｍＬ、８．５ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。一晩撹拌しながら反応物を室温まで加温させ、その時点で反応物をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０～５０％の酢酸エチル）により精製して、９８９ｍｇの白色固体を得た（３ステップで１５％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ８．２０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｓ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），６．４８（ｄ，Ｊ＝１６．７Ｈｚ，１Ｈ），６．３７（ｄｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．８３（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），３．０４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．７０（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ２０６．３，１６３．９，１４６．０，１３８．０，１３５．４，１３０．７，１２８．８，１２８．７，１２７．６，１２０．４，３６．１，２３．４．ＨＲＭＳ（－ＥＳＩ）：計算値：２００．０７１７（Ｃ_１２Ｈ_１０ＮＯ_２）。観測値：２００．０７１５．

Ｎ－（１－ヒドロキシ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１３５）。窒素雰囲気下、無水メタノール（５０ｍＬ）中のＮ－（１－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１３４、１．２６ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（２９２．７ｍｇ、７．７ｍｍｏｌ）を加えた。３０分間撹拌した後、反応を水でクエンチし、メタノールを真空中で除去した。残留物をＮａＣｌで飽和させ、２：１のクロロホルム：メタノール溶液で５回抽出した。合わせた有機物を３オングストロームのモレキュラーシーブで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中４０～７０％酢酸エチル）により精製して、１．０５ｇの生成物を白色固体として得た（８３％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ ７．５０（ｄｄ，Ｊ＝２．３，６．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２５－７．２０（ｍ，２Ｈ），６．５１（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），５．７７（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），５．１７（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），２．９７（ｄｄｄ，Ｊ＝４．５，８．６，１６．２，１Ｈ），２．７４（五重項，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），２．４７－２．３９（ｍ，１Ｈ），１．９５－１．８６（ｍ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ １６６．３，１４８．０，１３７．８，１３４．８，１３２．１，１２８．３，１２７．９，１２４．０，１２２．７，７６．９，３６．１，２８．６．ＨＲＭＳ（－ＥＳＩ）：計算値：２０２．０８７４（Ｃ_１２Ｈ_１２ＮＯ_２）。観測値：２０２．０８７２．

１－（４－（フラン－２－カルボニル）ピペラジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＴＲＨ１－１４５）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の１－（２－フロイル）ピペラジン（３６２ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）溶液に、塩化アクリロイル（０．２０ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）をＮ_２雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、２４時間撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の７０％から１００％酢酸エチル）によって精製して、４４６ｍｇの黄色固体を得た（９５％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．５３（ｍ，１Ｈ），７．０６（ｄｄ，Ｊ＝０．７，３．５Ｈｚ，１Ｈ），６．６１（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．５２（ｄｄ，Ｊ＝１．８，３．５Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７５（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．８４－３．６７（ｍ，８Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．５，１５９．１，１４７．５，１４４．０，１２８．５，１２７．１，１１７．０，１１１．５，４５．６，４１．９．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２３５．１０７７（Ｃ_１２Ｈ_１５Ｎ_２Ｏ_３）。観測値：２３５．１０７５．

Ｎ－（６－クロロピリダジン－３－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１５５）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の３－アミノ－６－クロロピリダジン（２６１ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）溶液に、塩化アクリロイル（０．２０ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を、Ｎ_２雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、一晩撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の４０％から５０％酢酸エチル）によって精製して、２３ｍｇの淡黄色固体を得た（６％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １０．０６（ｓ，１Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７３（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１６．８Ｈｚ，１Ｈ）６．５６（ｄｄ，Ｊ＝１．２，１６．８，１Ｈ），５．９４（ｄｄ，Ｊ＝１．２，１０．２Ｈｚ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６４．８，１５５．２，１５２．３，１３０．７，１３０．４，１３０．３，１２２．０．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１８２．０１２７（Ｃ_７Ｈ_５Ｎ_３ＯＣｌ）。観測値：１８２．０１２６．

Ｎ、Ｎ－ジイソプロピルアクリルアミド（ＴＲＨ１－１６７）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のジイソプロピルアミン（０．４２ｍＬ、３．０ｍｍｏｌ）溶液に、塩化アクリロイル（０．２９ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．５０ｍＬ、３．６ｍｍｏｌ）を、Ｎ_２雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、１９時間撹拌した。溶液を飽和重炭酸ナトリウム溶液、続いてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０％～３０％の酢酸エチル）によって精製して、３９２ｍｇの淡黄色油を得た（８４％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．３５（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．９８（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．３６（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｓ，１Ｈ），３．５６（ｓ，１Ｈ），１．１８（ｓ，６Ｈ），１．０６（ｓ，６Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．９，１３０．５，１２５．３，４７．９，４５．４，２１．１，２０．３．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１７８．１２０２（Ｃ_９Ｈ_１７ＮＯＮａ）。観測値：１７８．１２０１．

Ｎ－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ペンチル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１７０）。ジクロロメタン（５ｍＬ）中の４－メトキシ－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ペンチル）アニリン（９４ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化アクリロイル（０．０５ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．０９ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）を、Ｎ_２雰囲気下、０℃で加えた。１５分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、１８時間撹拌した。溶液を飽和重炭酸ナトリウム溶液、続いてブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、得られた粗製物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０％～２０％の酢酸エチル）によって精製して、８２ｍｇの淡黄色油を得た（６８％収率）。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．９９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．１７（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１６．７Ｈｚ，１Ｈ），５．７６（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，１６．７Ｈｚ，１Ｈ），５．２８（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），２．１１（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．２０（ｓ，６Ｈ），０．９１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６６．３，１５９．０，１３４．３，１３１．４９，１３１．４５，１２５．６，１１４．１，６１．７，５５．５，３２．０，２７．４，９．４．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２４７．１５７２（Ｃ_１５Ｈ_２１ＮＯ_２）。観測値：２４７．１５７７．

Ｎ－（１Ｈ－インドール－４－イル）アクリルアミド（ＹＰ１－１９）。ＤＣＭ（５ｍＬ）およびＤＭＦ（５ｍＬ）中の４－アミノインドール（１３２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却した。この溶液に、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、続いて、トリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を２６分後に室温に加温させ、一晩撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。粗生成物を塩基性アルミナクロマトグラフィー（ヘキサン中６０～７５％の酢酸エチル）によって精製して、白灰色固体として、収率３０％で、生成物（５６ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ ７．５１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２４－７．２２（ｍ，２Ｈ），７．０８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．６４（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，１６．７Ｈｚ，２Ｈ），６．３８（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１６．９Ｈｚ，１Ｈ），５．７８（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），４．６（ｓ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ １６５．０，１３７．２，１３１．１，１２９．２，１２６．０，１２３．８，１２１．５，１２０．９，１１２．２，１０８．４，９８．５．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１８７．０８６６（Ｃ_１１Ｈ_１１Ｎ_２Ｏ）。観測値：１８７．０８６５．

１－（４－メチルピペラジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＹＰ１－２２）。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１－メチルピペラジン（１００ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した。この溶液に、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、続いて、トリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を３０分後に室温に加温させ、一晩撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中８５％～１００％の酢酸エチル）によって精製して、黄色ゲルとして、収率２９％で、生成物（４４ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．５６（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，１６．９Ｈｚ，１Ｈ），６．２９（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．６９（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），３．７１（ｓ，２Ｈ），３．５８（ｓ，２Ｈ），２．４２（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，４Ｈ），２．３２（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．４，１２７．８，１２７．５，５５．２，５４．６，４６．０，４５．７，４１．９．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１５５．１１７９（Ｃ_８Ｈ_１５Ｎ_２Ｏ）。観測値：１５５．１１７８．

１－（４－メチル－１，４－ジアゼパム－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＹＰ１－２３）。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１－メチルホモピペラジン（１１４ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した。この溶液に、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、続いて、トリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を３２分後に室温に加温させ、一晩撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中１％～１０％のメタノール）によって精製して、黄色油として、収率５１％で、生成物（５８ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．６１－６．５３（ｍ，１Ｈ），６．３５－６．２９（ｍ，１Ｈ），５．７０－５．６６（ｍ，１Ｈ），３．７４－３．７２（ｍ，１Ｈ），３．６９（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６５－３．６１（ｍ，２Ｈ），２．６６－２．６３（ｍ，２Ｈ），２．５９－２．５４（ｍ，２Ｈ），２．３７（ｓ，３Ｈ），１．９４（五重項，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６６．４，１６６．３，１２８．０，１２７．９，１２７．８，１２７．６，５９．１，５８．０，５７．１，５６．８，４７．４，４７．１，４６．７，４６．６，４５．３，４４．８，２８．１，２６．９．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１６９．１３３５（Ｃ_９Ｈ_１７Ｎ_２Ｏ）。観測値：１６９．１３３３．

１－（４－アセチルピペラジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＹＰ１－２４）。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１－アセチルピペラジン（１２８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した。この溶液に、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、続いて、トリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を２３分後に室温に加温させ、２時間撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０％～１０％のメタノール）によって精製して、黄色油として、収率１８％で、生成物（４０ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．５７（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．８，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７５（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７２（ｓ，１Ｈ），３．６６－３．６４（ｍ，３Ｈ），３．５７（ｓ，１Ｈ），３．５１－３．４９（ｍ，２Ｈ），２．１３（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．６，１２８．７，１２７．０，４１．９，４１．４，２１．４．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１８３．１１２８（Ｃ_９Ｈ_１５Ｎ_２Ｏ_２）。観測値：１８３．１１２６．

Ｎ－（フラン－２－イルメチル）アクリルアミド（ＹＰ１－２６）。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中のフルフリルアミン（９７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃に冷却した。この溶液に、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、続いて、トリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を１７分後に室温に加温させ、２．５時間撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３５～７０％の酢酸エチル）によって精製して、白色固体として、収率８６％で、生成物（１３２ｍｇ）を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．３３（ｓ，１Ｈ），６．６０（ｓ，１Ｈ），６．３１－６．２２（ｍ，３Ｈ），６．１５（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，１６．９Ｈｚ，１Ｈ），５．６３（ｄｄ，Ｊ＝１．６，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．５，１５１．２，１４２．２，１３０．６，１２６．８，１１０．５，１０７．５，３６．５．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１５２．０７０６（Ｃ_８Ｈ_１０Ｏ_２Ｎ_１）。観測値：１５２．０７０６．

インビトロ実験では、ＤＭＳＯビヒクル、ニンボリド、またはＥＮ６２を２３１ＭＦＰ乳癌細胞プロテオームにおいて３０分間処理した後、プロテオームをＩＡ－アルキン（１００μＭ）で１時間標識した。同位体的に軽い（ＤＭＳＯで処理した場合）または重い（化合物で処理した場合）ＴＥＶプロテアーゼ切断可能なビオチン－アジドタグをＣｕＡＡＣにより付加して、ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析を行った。２３１ＭＦＰ乳癌細胞をＤＭＳＯビヒクルもしくはニンボリドで１時間インサイチュで処理した後、プロテオームをＩＡ－アルキン（１００μＭ）で１時間インビトロで標識した。同位体的に軽い（ＤＭＳＯで処理した場合）または重い（化合物で処理した場合）ＴＥＶプロテアーゼ切断可能なビオチン－アジドタグをＣｕＡＡＣにより付加して、ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析を行った。３つの生物学的複製のうち２つに存在するプローブ修飾ペプチドのみを解釈した。それらの比が３を超える場合、全ての複製比が３を超える全ての生物学的複製に存在するペプチドのみを解釈した。それらの比が４を超える場合、全ての複製比が４を超える全ての生物学的複製に存在するペプチドのみを解釈した。ＭＳ１のピーク形状の品質を手動でキュレーションして、全ての複製について良好なピーク品質を確認した。

表２．ＲＮＦ１１４に対してスクリーニングされた共有結合リガンドの構造

実施例４～６に関連する参考文献
１．Ｌａｒａｉａ，Ｌ．，Ｒｏｂｋｅ，Ｌ．＆Ｗａｌｄｍａｎｎ，Ｈ．ＢｉｏａｃｔｉｖｅＣｏｍｐｏｕｎｄＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ：ＦｒｏｍＤｅｓｉｇｎｔｏＴａｒｇｅｔＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｃｈｅｍ４，７０５－７３０（２０１８）．２．Ｋｏｅｈｎ，Ｆ．Ｅ．＆Ｃａｒｔｅｒ，Ｇ．Ｔ．Ｔｈｅｅｖｏｌｖｉｎｇｒｏｌｅｏｆｎａｔｕｒａｌｐｒｏｄｕｃｔｓｉｎｄｒｕｇｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ．４，２０６－２２０（２００５）．３．Ｋｉｎｇｓｔｏｎ，Ｄ．Ｇ．Ｉ．ＭｏｄｅｒｎＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙａｎｄｉｔｓＲｅｌｅｖａｎｃｅｔｏＢｉｏｄｉｖｅｒｓｉｔｙＣｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ．Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．７４，４９６－５１１（２０１１）．４．Ｈａｒｖｅｙ，Ａ．Ｌ．，Ｅｄｒａｄａ－Ｅｂｅｌ，Ｒ．＆Ｑｕｉｎｎ，Ｒ．Ｊ．Ｔｈｅｒｅ－ｅｍｅｒｇｅｎｃｅｏｆｎａｔｕｒａｌｐｒｏｄｕｃｔｓｆｏｒｄｒｕｇｄｉｓｃｏｖｅｒｙｉｎｔｈｅｇｅｎｏｍｉｃｓｅｒａ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ．１４，１１１－１２９（２０１５）．５．Ｎｏｍｕｒａ，Ｄ．Ｋ．＆Ｍａｉｍｏｎｅ，Ｔ．Ｊ．ＴａｒｇｅｔＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢｉｏａｃｔｉｖｅＣｏｖａｌｅｎｔｌｙＡｃｔｉｎｇＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ．Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４２０，３５１－３７４（２０１９）．６．Ｗｒｉｇｈｔ，Ｍ．Ｈ．＆Ｓｉｅｂｅｒ，Ｓ．Ａ．Ｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓａｐｐｒｏａｃｈｅｓｆｏｒｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇｔｈｅｃｅｌｌｕｌａｒｔａｒｇｅｔｓｏｆｎａｔｕｒａｌｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．Ｒｅｐ．３３，６８１－７０８（２０１６）．７．Ｄｒａｈｌ，Ｃ．，Ｃｒａｖａｔｔ，Ｂ．Ｆ．＆Ｓｏｒｅｎｓｅｎ，Ｅ．Ｊ．Ｐｒｏｔｅｉｎ－ｒｅａｃｔｉｖｅｎａｔｕｒａｌｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．ＥｄＥｎｇｌ．４４，５７８８－５８０９（２００５）．８．Ｌｉｕ，Ｊ．ｅｔａｌ．Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎｉｓａｃｏｍｍｏｎｔａｒｇｅｔｏｆｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ－ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎＡａｎｄＦＫＢＰ－ＦＫ５０６ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．Ｃｅｌｌ６６，８０７－８１５（１９９１）．９．Ｃｏｈｅｎ，Ｅ．，Ｑｕｉｓｔａｄ，Ｇ．Ｂ．＆Ｃａｓｉｄａ，Ｊ．Ｅ．Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｎｉｍｂｏｌｉｄｅ，ｅｐｏｘｙａｚａｄｉｒａｄｉｏｎｅａｎｄｏｔｈｅｒｌｉｍｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍｎｅｅｍｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅ．ＬｉｆｅＳｃｉ．５８，１０７５－１０８１（１９９６）．１０．Ｂｏｄｄｕｌｕｒｕ，Ｌ．Ｎ．，Ｋａｓａｌａ，Ｅ．Ｒ．，Ｔｈｏｔａ，Ｎ．，Ｂａｒｕａ，Ｃ．Ｃ．＆Ｓｉｓｔｌａ，Ｒ．Ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅａｎｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｆｎｉｍｂｏｌｉｄｅｉｎｃａｎｃｅｒ：ｔｈｅｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．ＶｉｔｒｏＩｎｔ．Ｊ．Ｐｕｂｌ．Ａｓｓｏｃ．ＢＩＢＲＡ２８，１０２６－１０３５（２０１４）．１１．Ｓｕｂｒａｍａｎｉ，Ｒ．ｅｔａｌ．ＮｉｍｂｏｌｉｄｅｉｎｈｉｂｉｔｓｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｇｒｏｗｔｈａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｔｈｒｏｕｇｈＲＯＳ－ｍｅｄｉａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｔｏ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ．Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．６，１９８１９（２０１６）．１２．Ｈａｏ，Ｆ．，Ｋｕｍａｒ，Ｓ．，Ｙａｄａｖ，Ｎ．＆Ｃｈａｎｄｒａ，Ｄ．Ｎｅｅｍｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓａｓｐｏｔｅｎｔｉａｌａｇｅｎｔｓｆｏｒｃａｎｃｅｒｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ１８４６，２４７－２５７（２０１４）．１３．Ｃｈｉｅｎ，Ｓ．－Ｙ．ｅｔａｌ．Ｎｉｍｂｏｌｉｄｅｉｎｄｕｃｅｓａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｈｕｍａｎｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２，２０８５－２０９２（２０１７）．１４．Ｅｌｕｍａｌａｉ，Ｐ．ｅｔａｌ．Ｎｉｍｂｏｌｉｄｅｉｎｈｉｂｉｔｓｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎ，ａｎｄｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｓｕＰＡＲｃｈｅｍｏｋｉｎｅｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｉｎｔｗｏｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓ．ＣｅｌｌＰｒｏｌｉｆ．４７，５４０－５５２（２０１４）．１５．Ｅｌｕｍａｌａｉ，Ｐ．，Ａｒｕｎｋｕｍａｒ，Ｒ．，Ｂｅｎｓｏｎ，Ｃ．Ｓ．，Ｓｈａｒｍｉｌａ，Ｇ．＆Ａｒｕｎａｋａｒａｎ，Ｊ．ＮｉｍｂｏｌｉｄｅｉｎｈｉｂｉｔｓＩＧＦ－Ｉ－ｍｅｄｉａｔｅｄＰＩ３Ｋ／ＡｋｔａｎｄＭＡＰＫｓｉｇｎａｌｌｉｎｇｉｎｈｕｍａｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｌｉｎｅｓ（ＭＣＦ－７ａｎｄＭＤＡ－ＭＢ－２３１）．ＣｅｌｌＢｉｏｃｈｅｍ．Ｆｕｎｃｔ．３２，４７６－４８４（２０１４）．１６．Ｋａｖｉｔｈａ，Ｋ．ｅｔａｌ．Ｎｉｍｂｏｌｉｄｅ，ａｎｅｅｍｌｉｍｏｎｏｉｄａｂｒｏｇａｔｅｓｃａｎｏｎｉｃａｌＮＦ－κＢａｎｄＷｎｔｓｉｇｎａｌｉｎｇｔｏｉｎｄｕｃｅｃａｓｐａｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＨｅｐＧ２）ｃｅｌｌｓ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６８１，６－１４（２０１２）．１７．Ｐｏｏｌａｄａｎｄａ，Ｖ．，Ｂａｎｄｉ，Ｓ．，Ｍｏｎｄｉ，Ｓ．Ｒ．，Ｇｏｔｔｕｍｕｋｋａｌａ，Ｋ．Ｍ．＆Ｇｏｄｕｇｕ，Ｃ．Ｎｉｍｂｏｌｉｄｅｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙｒｅｇｕｌａｔｅｓａｕｔｏｐｈａｇｙａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．ＶｉｔｒｏＩｎｔ．Ｊ．Ｐｕｂｌ．Ａｓｓｏｃ．ＢＩＢＲＡ５１，１１４－１２８（２０１８）．１８．Ｇｕｐｔａ，Ｓ．Ｃ．ｅｔａｌ．Ｎｉｍｂｏｌｉｄｅ，ａｌｉｍｏｎｏｉｄｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅ，ｉｎｈｉｂｉｔｓｇｒｏｗｔｈｏｆｈｕｍａｎｃｏｌｏｒｅｃｔａｌｃａｎｃｅｒｘｅｎｏｇｒａｆｔｓｂｙｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇｔｈｅｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｃｌｉｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．Ｏｆｆ．Ｊ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１９，４４６５－４４７６（２０１３）．１９．Ｌｉｎ，Ｈ．，Ｑｉｕ，Ｓ．，Ｘｉｅ，Ｌ．，Ｌｉｕ，Ｃ．＆Ｓｕｎ，Ｓ．Ｎｉｍｂｏｌｉｄｅｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓｎｏｎ－ｓｍａｌｌｃｅｌｌｌｕｎｇｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｉｎｖａｓｉｏｎａｎｄｍｉｇｒａｔｉｏｎｖｉａｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎｏｆＤＵＳＰ４ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＥＲＫ１／２ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．ＢｉｏｍｅｄｅｃｉｎｅＰｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ．９２，３４０－３４６（２０１７）．２０．Ｂａｂｙｋｕｔｔｙ，Ｓ．ｅｔａｌ．Ｎｉｍｂｏｌｉｄｅｒｅｔａｒｄｓｔｕｍｏｒｃｅｌｌｍｉｇｒａｔｉｏｎ，ｉｎｖａｓｉｏｎ，ａｎｄａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｂｙｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇＭＭＰ－２／９ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｉａｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇＥＲＫ１／２ａｎｄｒｅｄｕｃｉｎｇＤＮＡ－ｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＮＦ－κＢｉｎｃｏｌｏｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓ．Ｍｏｌ．Ｃａｒｃｉｎｏｇ．５１，４７５－４９０（２０１２）．２１．Ｎａｇｉｎｉ，Ｓ．ＮｅｅｍＬｉｍｏｎｏｉｄｓａｓＡｎｔｉｃａｎｃｅｒＡｇｅｎｔｓ：ＭｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆＣａｎｃｅｒＨａｌｌｍａｒｋｓａｎｄＯｎｃｏｇｅｎｉｃＳｉｇｎａｌｉｎｇ．ＴｈｅＥｎｚｙｍｅｓ３６，１３１－１４７（２０１４）．２２．Ａｌｓｈａｍｍａｒｉ，Ｇ．Ｍ．，Ｂａｌａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ａ．＆Ｃｈｉｎｎａｓａｍｙ，Ｔ．Ｎｉｍｂｏｌｉｄｅａｔｔｅｎｕａｔｅｔｈｅｌｉｐｉｄａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ，ｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｉｎｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐ．４４，４６３－４７４（２０１７）．２３．Ｌｅｓｌｉｅ，Ｂ．Ｊ．＆Ｈｅｒｇｅｎｒｏｔｈｅｒ，Ｐ．Ｊ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｅｌｌｕｌａｒｔａｒｇｅｔｓｏｆｂｉｏａｃｔｉｖｅｓｍａｌｌｏｒｇａｎｉｃｍｏｌｅｃｕｌｅｓｕｓｉｎｇａｆｆｉｎｉｔｙｒｅａｇｅｎｔｓ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｒｅｖ．３７，１３４７－１３６０（２００８）．２４．Ｐａｎ，Ｓ．，Ｚｈａｎｇ，Ｈ．，Ｗａｎｇ，Ｃ．，Ｙａｏ，Ｓ．Ｃ．Ｌ．＆Ｙａｏ，Ｓ．Ｑ．Ｔａｒｇｅｔｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｎａｔｕｒａｌｐｒｏｄｕｃｔｓａｎｄｂｉｏａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓｕｓｉｎｇａｆｆｉｎｉｔｙ－ｂａｓｅｄｐｒｏｂｅｓ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．Ｒｅｐ．３３，６１２－６２０（２０１６）．２５．Ｕｒｓｕ，Ａ．＆Ｗａｌｄｍａｎｎ，Ｈ．Ｈｉｄｅａｎｄｓｅｅｋ：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎｏｆｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌｅｐｒｏｔｅｉｎｔａｒｇｅｔｓ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２５，３０７９－３０８６（２０１５）．２６．Ｂｉａｎｃｈｉｎｉ，Ｇ．，Ｂａｌｋｏ，Ｊ．Ｍ．，Ｍａｙｅｒ，Ｉ．Ａ．，Ｓａｎｄｅｒｓ，Ｍ．Ｅ．＆Ｇｉａｎｎｉ，Ｌ．Ｔｒｉｐｌｅ－ｎｅｇａｔｉｖｅｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ：ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓａｎｄｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓｏｆａｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓｄｉｓｅａｓｅ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１３，６７４－６９０（２０１６）．２７．Ｚｅｉｃｈｎｅｒ，Ｓ．Ｂ．，Ｔｅｒａｗａｋｉ，Ｈ．＆Ｇｏｇｉｎｅｎｉ，Ｋ．ＡＲｅｖｉｅｗｏｆＳｙｓｔｅｍｉｃＴｒｅａｔｍｅｎｔｉｎＭｅｔａｓｔａｔｉｃＴｒｉｐｌｅ－ＮｅｇａｔｉｖｅＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒ．ＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＢａｓｉｃＣｌｉｎ．Ｒｅｓ．１０，２５－３６（２０１６）．２８．Ｗｅｅｒａｐａｎａ，Ｅ．ｅｔａｌ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｃｔｉｖｉｔｙｐｒｏｆｉｌｉｎｇｐｒｅｄｉｃｔｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｙｓｔｅｉｎｅｓｉｎｐｒｏｔｅｏｍｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ４６８，７９０－７９５（２０１０）．２９．Ｅｖａｎｓ，Ｍ．Ｊ．＆Ｃｒａｖａｔｔ，Ｂ．Ｆ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ－ｂａｓｅｄｐｒｏｆｉｌｉｎｇｏｆｅｎｚｙｍｅｆａｍｉｌｉｅｓ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１０６，３２７９－３３０１（２００６）．３０．Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ａ．Ｍ．，Ｗａｒｄ，Ｃ．Ｃ．＆Ｎｏｍｕｒａ，Ｄ．Ｋ．Ａｃｔｉｖｉｔｙ－ｂａｓｅｄｐｒｏｔｅｉｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｆｏｒｍａｐｐｉｎｇａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｌｙｉｎｔｅｒｒｏｇａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｏｍｅ－ｗｉｄｅｌｉｇａｎｄａｂｌｅｈｏｔｓｐｏｔｓ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４３，２５－３３（２０１７）．３１．Ｇｒｏｓｓｍａｎ，Ｅ．Ａ．ｅｔａｌ．ＣｏｖａｌｅｎｔＬｉｇａｎｄＤｉｓｃｏｖｅｒｙａｇａｉｎｓｔＤｒｕｇｇａｂｌｅＨｏｔｓｐｏｔｓＴａｒｇｅｔｅｄｂｙＡｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ．ＣｅｌｌＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２４，１３６８－１３７６．ｅ４（２０１７）．３２．Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ａ．Ｍ．ｅｔａｌ．ＣｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆＣｏｖａｌｅｎｔＬｉｇａｎｄｓＲｅｖｅａｌｓＵＢＡ５ＡｓａＮｏｖｅｌＰａｎｃｒｅａｔｉｃＣａｎｃｅｒ
Ｔａｒｇｅｔ．ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１２，８９９－９０４（２０１７）．３３．Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｅ．，Ｔｏ，Ｍ．，Ｏｌｚｍａｎｎ，Ｊ．Ａ．＆Ｎｏｍｕｒａ，Ｄ．Ｋ．Ｃｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ－ＥｎａｂｌｅｄＣｏｖａｌｅｎｔＬｉｇａｎｄＳｃｒｅｅｎｉｎｇＲｅｖｅａｌｓａＴｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ－Ｃａｓｐａｓｅ３ＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎＤｉｓｒｕｐｔｏｒＴｈａｔＩｍｐａｉｒｓＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＰａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１２，２５２２－２５２８（２０１７）．３４．Ｃｏｕｎｉｈａｎ，Ｊ．Ｌ．，Ｗｉｇｇｅｎｈｏｒｎ，Ａ．Ｌ．，Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｅ．＆Ｎｏｍｕｒａ，Ｄ．Ｋ．Ｃｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ－ＥｎａｂｌｅｄＣｏｖａｌｅｎｔＬｉｇａｎｄＳｃｒｅｅｎｉｎｇＲｅｖｅａｌｓＡＬＤＨ３Ａ１ａｓａＬｕｎｇＣａｎｃｅｒＴｈｅｒａｐｙＴａｒｇｅｔ．ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３，１９７０－１９７７（２０１８）．３５．Ｂａｃｋｕｓ，Ｋ．Ｍ．ｅｔａｌ．Ｐｒｏｔｅｏｍｅ－ｗｉｄｅｃｏｖａｌｅｎｔｌｉｇａｎｄｄｉｓｃｏｖｅｒｙｉｎｎａｔｉｖｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｙｓｔｅｍｓ．Ｎａｔｕｒｅ５３４，５７０－５７４（２０１６）．３６．Ｗａｎｇ，Ｃ．，Ｗｅｅｒａｐａｎａ，Ｅ．，Ｂｌｅｗｅｔｔ，Ｍ．Ｍ．＆Ｃｒａｖａｔｔ，Ｂ．Ｆ．Ａｃｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃｐｌａｔｆｏｒｍｔｏｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌｙｍａｐｔａｒｇｅｔｓｏｆｌｉｐｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄｅｌｅｃｔｒｏｐｈｉｌｅｓ．Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ１１，７９－８５（２０１４）．３７．Ｈａｃｋｅｒ，Ｓ．Ｍ．ｅｔａｌ．Ｇｌｏｂａｌｐｒｏｆｉｌｉｎｇｏｆｌｙｓｉｎｅｒｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｌｉｇａｎｄａｂｉｌｉｔｙｉｎｔｈｅｈｕｍａｎｐｒｏｔｅｏｍｅ．Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．９，１１８１－１１９０（２０１７）．３８．Ｗａｒｄ，Ｃ．Ｃ．，Ｋｌｅｉｎｍａｎ，Ｊ．Ｉ．＆Ｎｏｍｕｒａ，Ｄ．Ｋ．ＮＨＳ－ＥｓｔｅｒｓＡｓＶｅｒｓａｔｉｌｅＲｅａｃｔｉｖｉｔｙ－ＢａｓｅｄＰｒｏｂｅｓｆｏｒＭａｐｐｉｎｇＰｒｏｔｅｏｍｅ－ＷｉｄｅＬｉｇａｎｄａｂｌｅＨｏｔｓｐｏｔｓ．ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１２，１４７８－１４８３（２０１７）．３９．Ｈａｎ，Ｊ．ｅｔａｌ．ＺＮＦ３１３ｉｓａｎｏｖｅｌｃｅｌｌｃｙｃｌｅａｃｔｉｖａｔｏｒｗｉｔｈａｎＥ３ｌｉｇａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｃｅｌｌｕｌａｒｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅｂｙｄｅｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇｐ２１（ＷＡＦ１．）．ＣｅｌｌＤｅａｔｈＤｉｆｆｅｒ．２０，１０５５－１０６７（２０１３）．４０．Ｍａ，Ｙ．－Ｘ．ｅｔａｌ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎｏｖｅｌｈｕｍａｎｚｉｎｃｆｉｎｇｅｒｐｒｏｔｅｉｎｇｅｎｅＺＮＦ３１３．ＳｈｅｎｇＷｕＨｕａＸｕｅＹｕＳｈｅｎｇＷｕＷｕＬｉＸｕｅＢａｏＡｃｔａＢｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｓｉｎ．３５，２３０－２３７（２００３）．４１．Ｌｅｅ，Ｍ．－Ｇ．ｅｔａｌ．ＸＡＦ１ｄｉｒｅｃｔｓａｐｏｐｔｏｔｉｃｓｗｉｔｃｈｏｆｐ５３ｓｉｇｎａｌｉｎｇｔｈｒｏｕｇｈａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＨＩＰＫ２ａｎｄＺＮＦ３１３．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１１，１５５３２－１５５３７（２０１４）．４２．Ｈｕａｎｇ，Ｓ．ｅｔａｌ．ＴｈｅＵｂＬ－ＵＢＡＵｂｉｑｕｉｌｉｎ４ｐｒｏｔｅｉｎｆｕｎｃｔｉｏｎｓａｓａｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｂｙｐ５３－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔａｎｄｐ５３－ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｐ２１．ＣｅｌｌＤｅａｔｈＤｉｆｆｅｒ．２６，５１６－５３０（２０１８）．Ｂｕｒｓｌｅｍ，Ｇ．Ｍ．＆Ｃｒｅｗｓ，Ｃ．Ｍ．Ｓｍａｌｌ－ＭｏｌｅｃｕｌｅＭｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆＰｒｏｔｅｉｎＨｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１１７，１１２６９－１１３０１（２０１７）．４４．Ｚｅｎｇｅｒｌｅ，Ｍ．，Ｃｈａｎ，Ｋ．－Ｈ．＆Ｃｉｕｌｌｉ，Ａ．ＳｅｌｅｃｔｉｖｅＳｍａｌｌＭｏｌｅｃｕｌｅＩｎｄｕｃｅｄＤｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＢＥＴＢｒｏｍｏｄｏｍａｉｎＰｒｏｔｅｉｎＢＲＤ４．ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１０，１７７０－１７７７（２０１５）．４５．Ｌａｉ，Ａ．Ｃ．＆Ｃｒｅｗｓ，Ｃ．Ｍ．Ｉｎｄｕｃｅｄｐｒｏｔｅｉｎｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ：ａｎｅｍｅｒｇｉｎｇｄｒｕｇｄｉｓｃｏｖｅｒｙｐａｒａｄｉｇｍ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ．１６，１０１－１１４（２０１７）．４６．Ｎｅｋｌｅｓａ，Ｔ．Ｋ．，Ｗｉｎｋｌｅｒ，Ｊ．Ｄ．＆Ｃｒｅｗｓ，Ｃ．Ｍ．ＴａｒｇｅｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｂｙＰＲＯＴＡＣｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．１７４，１３８－１４４（２０１７）．４７．Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．Ｅ．ｅｔａｌ．ＤＲＵＧＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ．Ｐｈｔｈａｌｉｍｉｄｅｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎａｓａｓｔｒａｔｅｇｙｆｏｒｉｎｖｉｖｏｔａｒｇｅｔｐｒｏｔｅｉｎｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ３４８，１３７６－１３８１（２０１５）．４８．Ｓｈｏｒｔｔ，Ｊ．，Ｏｔｔ，Ｃ．Ｊ．，Ｊｏｈｎｓｔｏｎｅ，Ｒ．Ｗ．＆Ｂｒａｄｎｅｒ，Ｊ．Ｅ．Ａｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｂｅｔｏｏｌｂｏｘｆｏｒｄｉｓｓｅｃｔｉｎｇｔｈｅｃａｎｃｅｒｅｐｉｇｅｎｏｍｅ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ１７，１６０－１８３（２０１７）．４９．Ｓａｋａｍｏｔｏ，Ｋ．Ｍ．ｅｔａｌ．Ｐｒｏｔａｃｓ：ｃｈｉｍｅｒｉｃｍｏｌｅｃｕｌｅｓｔｈａｔｔａｒｇｅｔｐｒｏｔｅｉｎｓｔｏｔｈｅＳｋｐ１－Ｃｕｌｌｉｎ－Ｆｂｏｘｃｏｍｐｌｅｘｆｏｒｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎａｎｄｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９８，８５５４－８５５９（２００１）．５０．Ｓｃｈｎｅｅｋｌｏｔｈ，Ｊ．Ｓ．ｅｔａｌ．Ｃｈｅｍｉｃａｌｇｅｎｅｔｉｃｃｏｎｔｒｏｌｏｆｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌｓ：ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｉｎｖｉｖｏｔａｒｇｅｔｅｄｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２６，３７４８－３７５４（２００４）．５１．Ｌｕ，Ｊ．ｅｔａｌ．ＨｉｊａｃｋｉｎｇｔｈｅＥ３ＵｂｉｑｕｉｔｉｎＬｉｇａｓｅＣｅｒｅｂｌｏｎｔｏＥｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙＴａｒｇｅｔＢＲＤ４．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２２，７５５－７６３（２０１５）．５２．Ｈａｖｅｎｓ，Ｃ．Ｇ．＆Ｗａｌｔｅｒ，Ｊ．Ｃ．ＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＣＲＬ４（Ｃｄｔ２），ａＰＣＮＡ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＥ３ｕｂｉｑｕｉｔｉｎｌｉｇａｓｅ．ＧｅｎｅｓＤｅｖ．２５，１５６８－１５８２（２０１１）．５３．Ｋｉｔａｇａｗａ，Ｋ．，Ｋｏｔａｋｅ，Ｙ．＆Ｋｉｔａｇａｗａ，Ｍ．Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄｃｏｎｔｒｏｌｏｆｏｎｃｏｇｅｎｅａｎｄｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｇｅｎｅｐｒｏｄｕｃｔｓ．ＣａｎｃｅｒＳｃｉ．１００，１３７４－１３８１（２００９）．５４．Ｂｉｓｗａｓ，Ｋ．ｅｔａｌ．ＴｈｅＥ３ＬｉｇａｓｅＣＨＩＰＭｅｄｉａｔｅｓｐ２１ＤｅｇｒａｄａｔｉｏｎｔｏＭａｉｎｔａｉｎＲａｄｉｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｍｏｌ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．ＭＣＲ１５，６５１－６５９（２０１７）．５５．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，Ｍ．Ｓ．ｅｔａｌ．ＴｈｅＲＩＮＧｕｂｉｑｕｉｔｉｎＥ３ＲＮＦ１１４ｉｎｔｅｒａｃｔｓｗｉｔｈＡ２０ａｎｄｍｏｄｕｌａｔｅｓＮＦ－κＢａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄＴ－ｃｅｌｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．ＣｅｌｌＤｅａｔｈＤｉｓ．５，ｅ１３９９（２０１４）．５６．Ｙａｎｇ，Ｙ．ｅｔａｌ．ＴｈｅＥ３ｕｂｉｑｕｉｔｉｎｌｉｇａｓｅＲＮＦ１１４ａｎｄＴＡＢ１ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎａｒｅｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｍａｔｅｒｎａｌ－ｔｏ－ｚｙｇｏｔｉｃｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ．ＥＭＢＯＲｅｐ．１８，２０５－２１６（２０１７）．５７．Ｒａｐｅ，Ｍ．Ｕｂｉｑｕｉｔｙｌａｔｉｏｎａｔｔｈｅｃｒｏｓｓｒｏａｄｓｏｆｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｄｉｓｅａｓｅ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．１９，５９－７０（２０１８）．５８．Ｈｕｇｈｅｓ，Ｓ．Ｊ．＆Ｃｉｕｌｌｉ，Ａ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｏｆｔｅｒｎａｒｙｃｏｍｐｌｅｘｅｓ：ａｎｅｗｄｉｍｅｎｓｉｏｎｉｎｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ｇｕｉｄｅｄｄｅｓｉｇｎｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｇｒａｄｅｒｓ．ＥｓｓａｙｓＢｉｏｃｈｅｍ．６１，５０５－５１６（２０１７）．５９．Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎ，Ｐ．Ｐ．ｅｔａｌ．ＳｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｔｈｅｈｕｍａｎＣｅｒｅｂｌｏｎ－ＤＤＢ１－ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅｃｏｍｐｌｅｘｒｅｖｅａｌｓｂａｓｉｓｆｏｒｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓｔｏｔｈａｌｉｄｏｍｉｄｅａｎａｌｏｇｓ．Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１，８０３－８０９（２０１４）．６０．Ｋｒｏｎｋｅ，Ｊ．ｅｔａｌ．ＬｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅｉｎｄｕｃｅｓｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎａｎｄｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆＣＫ１α ｉｎｄｅｌ（５ｑ）ＭＤＳ．Ｎａｔｕｒｅ５２３，１８３－１８８（２０１５）．６１．Ｊｅｓｓａｎｉ，Ｎ．ｅｔａｌ．Ｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｓｔｒｏｍａｌｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙｐｒｏｆｉｌｅｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｂｒｅａｓｔｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈｉｎｖｉｖｏ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０１，１３７５６－１３７６１（２００４）．６２．Ｌｏｕｉｅ，Ｓ．Ｍ．ｅｔａｌ．ＧＳＴＰ１ＩｓａＤｒｉｖｅｒｏｆＴｒｉｐｌｅ－ＮｅｇａｔｉｖｅＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＣｅｌｌＭｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄＰａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．ＣｅｌｌＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２３，５６７－５７８（２０１６）．６３．Ｂａｔｅｍａｎ，Ｌ．Ａ．ｅｔａｌ．Ｃｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ－ｅｎａｂｌｅｄｃｏｖａｌｅｎｔｌｉｇａｎｄｓｃｒｅｅｎｒｅｖｅａｌｓａｃｙｓｔｅｉｎｅｈｏｔｓｐｏｔｉｎｒｅｔｉｃｕｌｏｎ４ｔｈａｔｉｍｐａｉｒｓＥＲｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｃａｎｃｅｒｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．Ｃａｍｂ．Ｅｎｇｌ．５３，７２３４－７２３７（２０１７）．６４．Ｓｍｉｔｈ，Ｐ．Ｋ．ｅｔａｌ．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆｐｒｏｔｅｉｎｕｓｉｎｇｂｉｃｉｎｃｈｏｎｉｎｉｃａｃｉｄ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５０，７６－８５（１９８５）．６５．Ｘｕ，Ｔ．ｅｔａｌ．ＰｒｏＬｕＣＩＤ：ＡｎｉｍｐｒｏｖｅｄＳＥＱＵＥＳＴ－ｌｉｋｅａｌｇｏｒｉｔｈｍｗｉｔｈｅｎｈａｎｃｅｄｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ．Ｊ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ１２９，１６－２４（２０１５）．６６．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｄ．Ｉ．ｅｔａｌ．ＥｔｈｅｒｌｉｐｉｄｇｅｎｅｒａｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅＡＧＰＳａｌｔｅｒｓｔｈｅｂａｌａｎｃｅｏｆｓｔｒｕｃｔｕｒａｌａｎｄｓｉｇｎａｌｉｎｇｌｉｐｉｄｓｔｏｆｕｅｌｃａｎｃｅｒｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１０，１４９１２－１４９１７（２０１３）．６７．Ｍｅｄｉｎａ－Ｃｌｅｇｈｏｒｎ，Ｄ．ｅｔａｌ．ＭａｐｐｉｎｇＰｒｏｔｅｏｍｅ－ＷｉｄｅＴａｒｇｅｔｓｏｆＥｎ
ｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＣｈｅｍｉｃａｌｓＵｓｉｎｇＲｅａｃｔｉｖｉｔｙ－ＢａｓｅｄＣｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃＰｌａｔｆｏｒｍｓ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２２，１３９４－１４０５（２０１５）．６８．Ｌｏｎｇｏ，Ｐ．Ａ．，Ｋａｖｒａｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｋｉｍ，Ｍ．－Ｓ．＆Ｌｅａｈｙ，Ｄ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｉｅｎｔｍａｍｍａｌｉａｎｃｅｌｌｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ（ＰＥＩ）．ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．５２９，２２７－２４０（２０１３）．６９．Ｎｏｍｕｒａ，Ｄ．Ｋ．ｅｔａｌ．Ｍｏｎｏａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｏｌｌｉｐａｓｅｒｅｇｕｌａｔｅｓａｆａｔｔｙａｃｉｄｎｅｔｗｏｒｋｔｈａｔｐｒｏｍｏｔｅｓｃａｎｃｅｒｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｃｅｌｌ１４０，４９－６１（２０１０）．

実施例７．標的タンパク質分解のための抗癌性天然物ニンボリドの利用
植物および微生物などの生物由来の天然物は、治療用リード化合物の豊富な供給源である^１。それらの生物学的活性の特性評価は、癌、細菌および真菌感染、炎症、および糖尿病を含む広範囲の病状に対する無数の薬物療法をもたらした^１。天然物の中には、タンパク質内の求核性アミノ酸と本質的に不可逆的な反応を受けてそれらの治療活性を発揮することができる求電子性部分を有する共有結合的に作用する分子のサブセットが存在する。これらの天然物の例としては、抗菌活性を誘導するセリントランスペプチダーゼを不可逆的に阻害するペニシリン、またはＰＩ３－キナーゼの機能的リジンを共有結合的に修飾してその活性を阻害するワートマニンが含まれる^１，２。抗癌性および共有作用のある天然物の標的となるドラッガブルなホットスポットを発見することは、新しい抗癌剤および治療標的を生み出すだけでなく、標準的な創薬の努力ではアンドラッガブルであるか、または取り組むのが難しいと見なされることが多いタンパク質標的の天然物がアクセスするモダリティへの独自の洞察を明らかにすることができる。先験的に予測するのが難しいドラッガブルなモダリティの一例は、ＦＫＢＰ１２に結合することによりペプチジルプロリルイソメラーゼ活性を阻害し、それによりカルシニューリンの阻害を介してＴ細胞シグナル伝達を調節するＦＫＢＰ１２－ＦＫ５０６複合体を生成するＦＫ５０６またはタクロリムスである^３。したがって、タンパク質標的に関与するための自然の戦略への洞察を得ることは、ドラッガブルであると考えられ得るものに関する新しい予想へのアクセスを提供することができる。

この研究では、ニームの木（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａｉｎｄｉｃａ）に由来するリモノイド天然物である天然物ニンボリド（１）の作用機序を調査した（図８Ａ）^４。ニンボリドは複数の治療効果を発揮することが示されており、システインと反応することができる環状エノンを有している^５－７。癌との関連で、ニンボリドは、広範囲の癌にわたって毒性または望ましくない副作用を引き起こすことなく、腫瘍形成および転移を阻害することが示されている^８。以前の研究では、ニンボリドが、生存、成長、浸潤、血管新生、炎症および酸化ストレスに関連するシグナル伝達経路および転写因子を調節することにより、またに影響を与えることにより、癌の病原性を低減することが示唆されているが、ニンボリドの直接標的は依然として十分に特徴付けされていない^８。

複雑な天然物の直接的なタンパク質標的を同定することは依然として困難であり、光親和性および濃縮ハンドルを有するこれらの化合物の類似体を合成する必要があり、これは合成するのに困難であり、分子の活性を変える可能性がある^１。このようなプローブを生成しても、天然物が標的とする特定のアミノ酸部位を特定することは困難である。この研究では、活性ベースタンパク質プロファイリング（ＡＢＰＰ）化学プロテオームアプローチを利用して、乳癌細胞プロテオームにおけるニンボリドのプロテオーム全体の標的をマッピングした。ＡＢＰＰプラットフォームを使用して、乳癌細胞におけるニンボリドの主要な標的の１つがＥ３ユビキチンリガーゼＲＮＦ１１４のシステイン－８（Ｃ８）であることを明らかにする。ニンボリドによるＲＮＦ１１４の共有結合修飾は、ユビキチン化障害、およびその基質である腫瘍抑制因子ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１）の分解を引き起こし、その急速な安定化をもたらす。興味深いことに、ＲＮＦ１１４活性のこの明らかな阻害は、基質認識障害によるものであり、標的タンパク質分解のＥ３リガーゼ動員モジュールとしてニンボリドを使用できる可能性があることを示している。細胞内の目的の標的の化学的誘発分解の戦略は、Ｅ３リガーゼリクルーターに結合して、Ｅ３リガーゼを目的のタンパク質へと運び、ユビキチン化させ、プロテアソーム依存的に分解の標的をマークするタンパク質標的化リガンドからなる「タンパク質分解標的キメラ」（ＰＲＯＴＡＣ）または「ヘテロ二官能分解剤」と呼ばれる二官能性分子の開発を含む、創薬への関心を急速に高めている^９，１０。ニンボリドを使用してＲＮＦ１１４を他のタンパク質基質に動員して標的タンパク質分解用途に使用できることを実証する。ケモプロテオミクス対応の共有結合リガンドスクリーニングプラットフォームを使用して、ＲＮＦ１１４のＣ８および表現型コピーニンボリド作用と同様に反応できる、合成するのにより扱いやすい化合物も同定する。

乳癌の表現型に対するニンボリドの影響。ニンボリドは多くの異なるタイプのヒト癌にわたって癌の病原性を低減することが示されているが、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）におけるニンボリドの役割の解明に焦点を当てることを選択した。ＴＮＢＣは、エストロゲン、プロゲステロンおよびＨＥＲ２受容体を欠いており、最も臨床予後が悪い最も攻撃的な癌の１つである^１１。現在、ＴＮＢＣ患者を対象とした標的療法はほとんどない。したがって、ＴＮＢＣの新しい治療法を明らかにすることは、乳癌に関連する死亡率の低下に大きく貢献する可能性がある。以前の報告と一致して、乳癌細胞における抗癌活性、２３１ＭＦＰおよびＨＣＣ３８ＴＮＢＣ細胞におけるニンボリドによる細胞増殖または無血清細胞生存の低減を示す（図１７Ａ～１７Ｂ、図１８Ａ～１８Ｂ）^８。また、２３１ＭＦＰおよびＨＣＣ３８の生存率に対するこれらの影響は、フローサイトメトリー分析によって評価した、ニンボリド処理によるアポトーシス細胞の有意な増加によるものであることも示している（図１７Ｃ、図１８Ｃ～１８Ｅ）。

乳癌細胞のニンボリド標的をマッピングするためのＡＢＰＰ。ニンボリドが乳癌の病原性を低減するメカニズムを調べるために、同位体タンデム直交タンパク質分解対応の活性ベースタンパク質プロファイリング（ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ）と呼ばれる化学プロテオームプラットフォームを適用して、ニンボリドの特定のタンパク質標的を決定した。ＣｒａｖａｔｔおよびＷｅｅｒａｐａｎａによって開拓されたｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰは、反応性ベースの化学プローブを使用して、複雑なプロテオーム内の反応性、機能性およびリガンド結合可能なホットスポットを直接マッピングする^{１２，１３}。競合的に使用される場合、共有結合的に作用する小分子は、広範な反応性ベースのプローブの結合と競合して、共有結合的に作用する化合物が標的とするタンパク質およびリガンド結合可能部位の両方の迅速な発見を容易にすることができる^{１４－１６}（図９Ａ）。この研究では、インサイチュで乳癌細胞をビヒクルまたはニンボリドで処理した後、システイン反応性アルキン官能化ヨードアセトアミドプローブ（ＩＡ－アルキン）でプロテオームを競合標識し、その後同位体的に軽いまたは重い切断可能な濃縮ハンドルを、ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析のために、プローブ標識タンパク質に追加した。プローブ修飾トリプシンペプチドを液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）で分析し、対照対処理済みＩＡ－アルキン標識部位を表す軽対重トリプシンプローブ修飾ペプチド比を定量化した。２３１ＭＦＰＴＮＢＣ細胞におけるインサイチュニンボリド処理の標的となるリガンド結合可能なホットスポットのＩｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ分析は、ニンボリドが有意に関与する、４を超える同位体比を示す１つの主要な標的であるＥ３ユビキチンリガーゼＲＮＦ１１４を示した（図１９Ａ）。重要なことに、３つの独立した低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を使用したＲＮＦ１１４ノックダウンは、２３１ＭＦＰ細胞におけるニンボリドの抗増殖効果に類似していた（図１９Ｂ～１９Ｃ、図２０Ａ～２０Ｂ）。ＲＮＦ１１４がニンボリドの抗増殖効果に寄与することをさらに実証して、ＲＮＦ１１４ノックダウンは、ニンボリドを介した抗増殖効果に対する有意な耐性をもたらした（図１９Ｄ、図２０Ｃ）。ニンボリドは、ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰアプローチではアクセスできないＲＮＦ１１４以外の多くの追加標的を持っている可能性があるが、本発明者らの結果は、ＲＮＦ１１４がニンボリドの新規標的であり、ＲＮＦ１１４がこの天然物の抗増殖効果に一部関与していることを示唆した。したがって、ニンボリドとＲＮＦ１１４との間の相互作用にさらに特徴付けの努力を集中させることを選択した。

ＲＮＦ１１４とのニンボリドの相互作用の特徴付け。ＲＮＦ１１４は、ＲＩＮＧファミリーのＥ３ユビキチンリガーゼである^１７。ニンボリドの標的としてｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰによって同定されたＲＮＦ１１４上の部位Ｃ８は、タンパク質のＮ末端領域内にあり、天然変性していると予測され、２つの注釈付きジンクフィンガードメインの外側に存在する（図２１Ａ）。天然物によるタンパク質の天然変性領域の明らかな標的化に興味をそそられ、ニンボリドとＲＮＦ１１４との間の相互作用を調査することを試みた。

ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰは、共有結合的に作用する分子とより広範な反応性プローブとの間の競合アッセイであるため、潜在的なニンボリドが標的とするホットスポットの間接的な読み取りである。ニンボリドがＲＮＦ１１４を直接標的としていることを確認するために、ニンボリドから３つのステップで示されるアルキン官能化プローブを合成した（図２１Ｂ）。フラン部分のＣ２での選択的臭素化および後続の４－ホルミルフェニルボロン酸との鈴木カップリングによりアリール－アルデヒド（３が得られ）、これはピニック酸化によって対応するカルボン酸（４）に変換された。最後に、（４）とプロパルギルアミン（ＨＡＴＵ、ＤＩＰＥＡ）とのカップリングにより、ニンボリド－アルキンプローブ（５）が得られた。変性ＳＤＳ／ＰＡＧＥゲル上でタンパク質を標識することにより示されるように、このニンボリドプローブが、純粋なヒトＲＮＦ１１４タンパク質と反応することを確認した。この標識イベントはまた、ニンボリドによって競合され、Ｃ８ＡＲＮＦ１１４突然変異体において阻害された（図２１Ｃ）。ニンボリド－アルキンプローブは、出発材料としてかなり高価なニンボリドを必要とする、合成するのが困難なプローブであるため、ＲＮＦ１１４のＣ８を標識できるより単純なプローブの開発も試みた。ＲＮＦ１１４とニンボリドとの相互作用を検証しようとする最初の研究では、ＲＮＦ１１４のＩＡ－アルキン標識に対してニンボリドを競合させたが、おそらくはＣ８の他に複数のシステインがＩＡ－アルキンによってアルキル化されるために、標識の完全な阻害は観察されなかった（図２１Ｄ）。したがって、本発明者らは、Ｃ８ＡＲＮＦ１１４突然変異体タンパク質の標識の欠如によって証明されるように、ＲＮＦ１１４上のＣ８の選択的標識を示す、より調整されたアルキン官能化環状エノンプローブＪＮＳ２７（６）を合成した（図２１Ｅ）。ＪＮＳ２７を用いて、本発明者らは、０．７３μＭの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を有するニンボリドによるＪＮＳ２７標識の完全な競合を実証することができた（図２１Ｅ）。ＲＮＦ１１４とのニンボリドの相互作用が反応性によって完全に駆動されるのではなく、タンパク質との追加の相互作用によっても駆動されることを示すために、ニンボリドが、それぞれ０．５５、２２および＞１００μＭのＩＣ５０を有するより単純なＪＮＳ２７プローブまたはヨードアセトアミドと比較してはるかに低い濃度でローダミン官能化ヨードアセトアミドプローブ（ＩＡ－ローダミン）によるＲＮＦ１１４の標識と競合することを示す（図２０Ｄ）。さらに、ニンボリドの直接質量付加物が、純粋なタンパク質を天然物とインキュベートした後、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳによってＲＮＦ１１４上のＣ８を含むトリプシンペプチドで検出された。共に行われたこれらの実験の全てにより、ニンボリドが、共有結合の形成により、Ｃ８でＲＮＦ１１４の天然変性領域を修飾することが証明される。

次に、２つの補完的な実験を実施して、ニンボリドが２３１ＭＦＰ乳癌細胞においてＲＮＦ１１４に直接関与していることを実証した。最初に、Ｆｌａｇタグ付きＲＮＦ１１４発現細胞をプローブで処理し、続いてＦｌａｇタグ付きＲＮＦ１１４を濃縮し、ＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質にローダミンアジドを付加し、ゲルベースＡＢＰＰ法により可視化することにより、ＲＮＦ１１４の用量反応性インサイチュニンボリド－アルキン標識を示した。（図２１Ｆ）。本発明者らは、１０μＭのプローブによりロバストなインサイチュニンボリド－アルキン標識を観察したが、１００ｎＭまで低下した場合でさえ低いが有意なプローブ標識も観察した（図２１Ｆ）。第二に、本発明者らはまた、細胞をプローブで処理し、続いてＣｕＡＡＣによってプローブ標識タンパク質にビオチン－アジドを付加し、ウエスタンブロッティングによってＲＮＦ１１４プルダウンを可視化することにより、ニンボリド－アルキンプローブによる内因性ＲＮＦ１１４のインサイチュ標識を示した（図２１Ｇ）。この場合、５０μＭのニンボリド－アルキンプローブで有意なプルダウンが観察されたが、それよりも低濃度では観察されなかった。この実験では、ＧＡＰＤＨなどの無関係のタンパク質がニンボリド－アルキンプローブによって濃縮されないことを示す（図２１Ｇ）。これらの後者の条件を使用して、相補的な定量的プロテオミクスプロファイリング研究を実施して、ニンボリド－アルキンプローブによる２３１ＭＦＰ細胞のインサイチュ標識から濃縮される可能性のある追加のタンパク質を同定した。急性の細胞毒性という問題のため、高濃度のニンボリド自体を用いたインサイチュ競合研究を実施することはできなかった。この研究では、ＲＮＦ１１４が、プローブを使用しない対照と比較して、ニンボリド－アルキンプローブによって１０倍を超えて濃縮されたタンパク質のうちの１つであることを示した。また、プローブを使用しない対照と比較して、プローブによって１０倍を超えて濃縮された１１４個の追加のタンパク質を同定した。これらのタンパク質は、ニンボリドの抗増殖効果に寄与する可能性のある追加の潜在的な共有結合標的または非共有結合標的を表している。これらの濃縮された標的は、ニンボリドとの関与の程度が低い～部分的であるタンパク質を表す場合もあるが、ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ実験は、より高い関与の標的を同定することを目的としている。さらに、これらのタンパク質には、直接的なニンボリド標識されたタンパク質との相互作用を介して間接的に濃縮される可能性のあるプローブ特異的標的またはタンパク質が含まれる場合がある。それにもかかわらず、１００ｎＭまで低下した場合でも、ＲＮＦ１１４が乳癌細胞におけるニンボリド－アルキンプローブに関与すること、およびニンボリドの抗増殖効果が少なくとも部分的にＲＮＦ１１４によって媒介されることを示す。

ＲＮＦ１１４の機能に対するニンボリドの影響。ＲＮＦ１１４は、基質の中でもとりわけ、腫瘍抑制因子ｐ２１をユビキチン化させ、分解することが以前に示されている^{１７－１９}。インビトロで再構成された系において、ニンボリドは、ＲＮＦ１１４自己ユビキチン化およびｐ２１ユビキチン化活性の両方を阻害した（図２２Ａ～２２Ｂ）。ＲＮＦ１１４Ｃ８Ａ突然変異は、基本的なＲＮＦ１１４自己ユビキチン化活性に影響を及ぼさなかったが、ニンボリド処理で観察された阻害を弱めた（図２２Ｃ）。ＲＮＦ１１４の以前の特徴付けは、Ｎ末端が基質認識に関与している可能性があることを示唆していた^１７。この前提と一致して、本発明者らは、ＲＮＦ１１４と共免疫沈降したｐ２１の量がニンボリドによって減少することを発見し、ＲＮＦ１１４の見かけの阻害は、その触媒活性の阻害ではなく、基質認識障害による可能性があることを示唆している（図２２Ｄ）。さらに、２３１ＭＦＰ細胞におけるニンボリド処理により、ＴＰ５３（ｐ５３）レベルが有意に変化することなく、１時間以内にＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１）タンパク質の発現が用量反応的に安定化することを示した（図２２Ｅ）。観察されたＣＤＫＮ１Ａレベルの上昇は、ｐ２１のｍＲＮＡレベルがニンボリド処理で変化しなかったため、ｍＲＮＡレベルの転写下方制御によるものではなかった。ＲＮＦ１１４の他の潜在的な基質を同定するために、ニンボリドで処理した２３１ＭＦＰ細胞に対してタンデム質量タグ（ＴＭＴ）ベースの定量的プロテオミクス実験も実施した。ウエスタンブロッティングデータと一致して、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１）は、ニンボリド処理により２倍を超えて有意に上昇したタンパク質の１つとして観察された（図２２Ｆ）。また、ＣＤＫＮ１Ｃ（ｐ５７）、ＰＥＧ１０およびＣＴＧＦなど、ニンボリド処理によって高められた他のいくつかの標的レベルも観察された。潜在的なＲＮＦ１１４基質として以前に報告されたＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１）およびＣＤＫＮ１Ｃ（ｐ５７）以外に^１７、本発明者らは、ＰＥＧ１０およびＣＴＧＦもＲＮＦ１１４の追加の新規基質となる可能性があると推測した（図２２Ｆ）。この前提と一致して、本発明者らは、インビトロＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイにおいて、ＲＮＦ１１４がＰＥＧ１０およびＣＴＧＦをユビキチン化させること、およびこのユビキチン化がニンボリドによって阻害されることを実証した（図２２Ｇ）。ｐ２１とｐ５７はいずれも腫瘍抑制因子であり、上昇すると細胞周期の停止およびアポトーシスを促進するため^{２０，２１}、これらの腫瘍抑制因子の両方の安定化がニンボリドの抗増殖効果の原因である可能性があると仮定した。ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１）とＣＤＫＮ１Ｃ（ｐ５７）のデュアルノックダウンにより、２３１ＭＦＰ乳癌細胞におけるニンボリドを介した抗増殖効果が大幅に低下することを示した（図２２Ｈ～２２Ｉ）。まとめると、これらのデータは、ニンボリドが乳癌細胞においてＲＮＦ１１４の天然変性Ｃ８と反応して、ＲＮＦ１１４－基質認識を妨害し、ＣＤＫＮ１ＡおよびＣＤＫＮ１Ｃなどのその基質のユビキチン化を阻害し、それらを安定化し、乳癌細胞の細胞増殖を低減することを示唆している。

ＲＮＦ１１４リクルーターとしてのニンボリド。ニンボリドは潜在的な基質認識部位を標的とするため、ニンボリドをＲＮＦ１１４リクルーターとして使用するヘテロ二官能性分解剤の開発を通じて、プロテアソーム分解のためにＲＮＦ１１４を他のタンパク質基質に動員するためにニンボリドを使用できると推測した。実現可能性を実証するために、ニンボリドをブロモドメインおよび末端外（ＢＥＴ）ファミリー阻害剤ＪＱ１に結合することによって形成された２つの分解剤を合成した（図２３Ａ）。以前の研究では、ＣＲＢＮ（セレブロン）リクルーターであるサリドマイドまたはＶＨＬリクルーターのいずれかに結合したＪＱ１ベースの分解剤による、ＢＥＴファミリーメンバー、特にＢＲＤ４、の効率的なプロテアソーム依存性分解が実証されている^{２２，２３}。以前に調製された酸（４）は、より長い（ＰＥＧベースの）（７）およびより短い（アルキルベースの）（８）スペーサー単位の両方を含むＪＱ１官能化アミンにカップリングされ、分解剤ＸＨ１（９）およびＸＨ２（１０）に到達した（図２３Ａ）。本発明者らは、ＸＨ２が依然として０．２４μＭのＩＣ５０でＲＮＦ１１４に結合することを示す（図２３Ｂ）。ＸＨ１は感知できるほどのＢＲＤ４分解を示さなかったが、２３１ＭＦＰ細胞におけるＸＨ２処理は、１２時間の処理後にＢＲＤ４分解をもたらした（図２３Ｃ）。興味深いことに、ＸＨ２は０．１および０．０１μＭと比較して１μＭでより少ない分解を示し、ＭＺ１は１０、１および０．１μＭと比較して２０μＭでより少ない分解を示した。これは、ＶＨＬリクルーターを利用するＪＱ１ベースの分解剤ＭＺ１などの他の分解剤で報告した「フック効果」に起因する^９，２２（図２３Ｃ～２３Ｄ）。ＢＲＤ４分解のプロテアソーム依存性を確認するために、本発明者らは、ＢＲＤ４のＸＨ２を介した分解が、プロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ（ＢＴＺ）による細胞の前処理によって弱められることを示した（図２３Ｅ）。ＸＨ２を介したＢＲＤ４分解は、Ｅ１ユビキチン活性化酵素阻害剤（ＴＡＫ－２４３）による前処理、またはＢＲＤ４阻害剤ＪＱ１との事前競合によっても防止された（図２３Ｆ）。しかしながら、翻訳阻害剤（エメチン）による処理は、観察されたＢＲＤ４分解の効果を発揮しなかった。ＸＨ２によるＢＲＤ４分解がＲＮＦ１１４の特異的動員によるものであることをさらに実証するために、野生型（ＷＴ）ＨＡＰ１細胞の対応物と比較して、ＲＮＦ１１４ノックアウト（ＫＯ）ＨＡＰ１細胞では、ＭＺ１ではなくＸＨ２によるＢＲＤ４の分解が観察されなかったことを示した（図２３Ｇ～２３Ｈ）。さらに、ＨＡＰ１ＲＮＦ１１４ノックアウト細胞における野生型ＲＮＦ１１４の再発現が、ＸＨ２によるＢＲＤ４分解の回復につながることを示した。ＸＨ２を介したタンパク質分解の選択性は、ＴＭＴベースの定量的プロテオミクスプロファイリング実験を使用してタンパク質発現の変化を評価することで実証された。本発明者らは、ＸＨ２が２３１ＭＦＰ乳癌細胞においてＢＲＤ４を選択的に分解する一方で、他の同定されたＢＥＴファミリーメンバーであるＢＲＤ２およびＢＲＤ３を温存することを示した（図２３Ｉ）。注目すべきことに、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＰＥＧ１０およびＣＴＧＦを含むＸＨ２処理によってレベルの増加を示すいくつかのタンパク質も観察され、ニンボリド処理のみでレベルが上昇したことが観察された（図２３Ｉ）。ＤＳＧ１、ＦＮ１、ＦＬＧ２およびＣＡＳＰ１４などの上方制御された追加のタンパク質もあった（図２３Ｉ）。これらの上方制御されたタンパク質は、ＣＤＫＮ１Ａ、ＣＤＫＮ１Ｃ、ＰＥＧ１０およびＣＴＧＦの場合と同様に、ＸＨ２のニンボリド部分に由来する安定化を伴うＲＮＦ１１４の潜在的な基質である可能性がある。他の標的は、ＪＱ１を介したＢＲＤ４の阻害および分解に起因する下流の転写効果である可能性がある。本発明者らの結果は、ＲＮＦ１１４とのニンボリドの反応性を利用して、このＥ３リガーゼをＢＲＤ４などの他のタンパク質基質に動員し、それらをユビキチン化させ、分解することができることを示している。

ＲＮＦ１１４に対する共有結合リガンド。ＲＮＦ１１４のＣ８は、癌治療および標的タンパク質分解用途に利用される可能性があるという洞察を得て、ＲＮＦ１１４を同様に標的とする、合成するのにより扱いやすい共有結合リガンドを検索した。この目標を達成するために、中程度スループットのゲルベースＡＢＰＰアプローチを使用して、ＲＮＦ１１４に対するシステイン反応性共有結合リガンドのライブラリーをスクリーニングした。ここでは、共有結合リガンドを、ＲＮＦ１１４のＪＮＳ２７標識と競合させ、続いてローダミン－アジドを付加し、ＳＤＳ／ＰＡＧＥおよびゲル内蛍光による分析を行う。ＲＮＦ１１４に対してスクリーニングされた約２００個のシステイン反応性共有結合リガンドのうち、アクリルアミドＥＮ６２（１１）が有望なヒットとして出現した。ＥＮ６２はＣ８依存的にＲＮＦ１１４の自己ユビキチン化活性を阻害した。ＥＮ６２は、細胞の透過性、効力および選択性の大幅な改善を必要とする初期のヒット化合物であるが、この共有結合リガンドは、標的タンパク質分解用途のためにＲＮＦ１１４のＣ８を標的とする、合成するのにより扱いやすい共有結合リガンド足場の出発点となる。

ニンボリドがＲＮＦ１１４内のＣ８の基質認識ドメインを標的にして、ｐ２１のユビキチン化および分解を阻害し、その安定化につながることで、乳癌の病原性を部分的に低減するという説得力のある証拠を示す。ＲＮＦ１１４上のＣ８のニンボリド標的を使用して、標的タンパク質分解用途のためにＲＮＦ１１４を動員できること、およびニンボリド－ＪＱ１分解剤ＸＨ２によるＢＲＤ４分解が可能であることを実証する。

ここでは、ニンボリドがＲＮＦ１１４と、その内因性基質の１つであるｐ２１との相互作用を妨害することを報告し、ｐ２１レベルがｐ５３に依存しない方法で乳癌細胞において急速に安定化することも示す。ＳＣＦ^ＳＫＰ２、ＣＲＬ４^ＣＤＴ２、ＣＨＩＰなど、他のいくつかのＥ３リガーゼも、細胞周期または外因性ストレス中、さまざまな条件下でｐ２１を分解することが報告されている^{２４－２６}。以前の研究では、ＲＮＦ１１４の発現はＧ１期後期に上昇して、ｐ２１およびｐ５７レベルを調節し、Ｇ１期からＳ期への移行に重要であることが示されている^１７。報告されている他のＲＮＦ１１４基質には、母体から接合体への移行に関与するＴＡＢ１と、ＮＦ－κＢ活性およびＴ細胞活性化に関与するＡ２０が含まれる^{２７，２８}。したがって、癌の状況または他の細胞および組織の種類では、ニンボリドは、他のＲＮＦ１１４タンパク質基質のレベルを調節することによって追加の活性を有する可能性がある。興味深いことに、ＣＴＧＦとＰＥＧ１０は、インサイチュでのニンボリドによる安定化とインビトロでのＲＮＦ１１４によるポリユビキチン化によって実証されるように、ＲＮＦ１１４の追加の基質となる可能性があることを示している。これらの追加のタンパク質をＲＮＦ１１４の直接的かつ内因性基質として確立するには、さらなる研究が必要である。さらに、ＲＮＦ１１４が少なくとも部分的に増殖および標的タンパク質分解に対する影響を媒介するニンボリドの１つの標的であることを示すが、ニンボリドが多くの追加のタンパク質標的を持っている可能性があることもニンボリド－アルキンプローブで示す。これらの追加の標的は、ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ実験においてＩＡ－アルキンシステイン反応性プローブによって標識されていないシステインとの他の共有相互作用を含む場合があるか、他のアミノ酸との共有結合的相互作用を表す場合があるか、追加のタンパク質標的との可逆的相互作用を表す場合があるか、直接ニンボリド標識されたタンパク質との相互作用から間接的に濃縮されるタンパク質を含む場合がある。ニンボリドが複数の潜在的な標的を持っているにもかかわらず、本発明者らは、ＲＮＦ１１４が、標的タンパク質分解用途に利用できる乳癌細胞におけるニンボリドの重要かつ機能的な標的であることを実証している。また、ニンボリドベースの分解剤を使用して観察されたＢＲＤ４分解がＲＮＦ１１４を介して駆動されることも説得力を持って示している。

本発明者らの結果はまた、ニンボリドがＲＮＦ１１４内の天然変性領域を機能的に標的とすることを実証している。ニンボリドで共有結合的に修飾されたＲＮＦ１１４の構造を解明することはこれまでのところ困難であることが証明されているが、ニンボリドがＮ末端に秩序を誘導するかどうかを調査する将来の研究は、天然変性し、かつアンドラッガブルなタンパク質標的のリガンド結合性および他のＥ３リガーゼを標的とする可能性のある戦略への洞察を提供する。

標的タンパク質分解は、プロテアソームを介した排除のためにタンパク質を標的とするための困難かつ効果的な創薬パラダイムとして浮上している^９，１０。しかしながら、課題のうちの１つは、ヒトゲノムにおける約６００個のＥ３リガーゼの中で開発されたＥ３リガーゼリクルーターの数が少ないことである^２９。これらのＥ３リガーゼリクルーターには、セレブロンを動員するサリドマイド型免疫調節薬（ＩＭｉＤ）、ＶＨＬを動員するリガンド、ＭＤＭ２を動員するｎｕｔｌｉｎ、ＢＩＲＣ２を動員するリガンドが含まれる（ｃＩＡＰ）^９，１０。ここでは、ニンボリドが標的タンパク質分解用途のための新規ＲＮＦ１１４リクルーターとして使用できることを報告する。重要であることがすでに決定されている分子の領域である、さらなるリンカー修飾により、この分解剤クラスの性能を最適化できるはずである。ＥＮ６２などのＲＮＦ１１４のＣ８を標的とすることができる合成するのにより扱いやすい共有結合リガンドをＲＮＦ１１４リクルーターとして利用することも可能かもしれない。ニンボリドはＲＮＦ１１４内の基質認識ドメインを標的とするため、ＩＭｉＤに関して報告されているように、ニンボリドが新基質を動員および分解する分子接着剤として機能し得るかどうかを判断することも将来的に興味深い^３０。

興味深いことに、それぞれのＢＥＴブロモドメインの相同性が高いにもかかわらず、ＢＲＤ４レベルの大幅な低下につながる条件下でＢＲＤ２およびＢＲＤ３の分解は観察されなかった。セレブロンおよびＶＨＬ動員モジュールを備えたＪＱ１ベースの分解剤について、ＢＥＴファミリーメンバー内でのさまざまなレベルの選択性およびその構造的基盤が報告されている^{２２，２３，３１，３２}。ＸＨ２の選択性およびその構造的基盤のより詳細な調査は、この研究の範囲外であるが、所与の基質認識モジュールに対する追加のＥ３部分の利用可能性が、目的の所与のタンパク質を標的とする分解剤の有効性および選択性の調整にどのように役立つかを示す別の例として役立つ。

全体として、本発明者らの研究は、ＡＢＰＰベースの化学プロテオームプラットフォームを使用して、天然物によって利用される独自のドラッガブルモダリティを特定することの有用性をさらに実証している。興味深いことに、天然物は、潜在的な癌治療および標的タンパク質分解用途のためにＥ３リガーゼタンパク質間相互作用部位に機能的にアクセスでき、タンパク質の天然変性領域で著しくアクセスできることを示している。本発明者らの研究はまた、共有結合リガンドスクリーニングアプローチを利用して、より複雑な天然物と同様に作用する合成するのにより扱いやすい小分子を同定し、共有結合リガンドが他のＥ３リガーゼにアクセスしてＥ３リガーゼリクルーターの範囲を拡大できる可能性があることも示している。

実施例８方法およびアッセイ
細胞培養。２３１ＭＦＰ細胞は、ＢｅｎｊａｍｉｎＣｒａｖａｔｔ教授から入手し、前述のようにＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞の外植腫瘍異種移植片から生成された^３３。ＨＣＣ３８およびＨＥＫ２９３Ｔ細胞は、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手した。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、１０％（ｖ／ｖ）のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有するＤＭＥＭで培養し、５％のＣＯ_２で３７℃に維持した。２３１ＭＦＰ細胞を、１０％のＦＢＳを含有するＬ１５培地で培養し、０％のＣＯ_２で３７℃に維持した。ＨＣＣ３８細胞を、１０％のＦＢＳを含有するＲＰＭＩ培地で培養し、５％のＣＯ_２で３７℃に維持した。ＨＡＰ１ＲＮＦ１１４野生型およびノックアウト細胞株は、ＨｏｒｉｚｏｎＤｉｓｃｏｖｅｒｙから購入した。ＲＮＦ１１４のコーディングエクソンにフレームシフト変異が含まれるように、ＲＮＦ１１４ノックアウト細胞株を、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９によって生成した。ＨＡＰ１細胞は、１０％のＦＢＳおよびペニシリン／ストレプトマイシンの存在下でＩｓｃｏｖｅ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ）で増殖させた。

生存および増殖アッセイ。細胞の生存および増殖アッセイは、製造元のプロトコルに従ってヘキスト３３３４２色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して以前に記載されたように、および以前に記載されたように実施した^１４。２３１ＭＦＰ細胞を９６ウェルプレート（生存用に４０，０００個、増殖用に２０，０００個）に１５０μｌの容量で播種し、一晩接着させた。細胞を、ＤＭＳＯ中に１：２５０で希釈した１０００倍の化合物ストックを含有する追加の５０μＬの培地で処理した。適切なインキュベーション期間の後、培地を各ウェルから除去し、１０％のホルマリンおよびＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２色素を含有する１００μｌの染色溶液を各ウェルに加え、暗所にて室温で１５分間インキュベートした。インキュベーション後、染色液を除去し、画像化する前に、ウェルをＰＢＳで洗浄した。ＨＣＣ３８細胞を用いた研究も上記のように実施したが、生存用に２０，０００個の細胞および増殖用に１０，０００個の細胞を播種した。

乳癌細胞におけるアポトーシスの評価。アポトーシス細胞は、フローサイトメトリーを使用して、ＤＭＳＯビヒクルまたは化合物を含有する無血清培地で２４時間または４８時間処理した細胞において分析した。以前に記載されているように、アネキシンＶ陽性およびヨウ化プロピジウム陰性の初期アポトーシス細胞とアネキシンＶ陽性およびヨウ化プロピジウム陽性の後期アポトーシス細胞の割合を測定した^３４。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用してデータ分析を実施した。

ＩｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰケモプロテオミクス研究。ＩｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ研究は、以前に報告されたように行った^{１２，１４，１５}。細胞をＰＢＳ中でプローブ超音波処理して溶解し、タンパク質濃度をＢＣＡアッセイで測定した^３５。インサイチュ実験では、ＤＭＳＯビヒクルまたは共有結合的に作用する小分子（１０００×ＤＭＳＯストックから）のいずれかで細胞を９０分間処理してから、細胞を収集して溶解した。続いて、プロテオームをＩＡ－アルキン標識（１００μＭ）で室温にて１時間標識した。ＣｕＡＡＣは、ｔｒｉｓ（２－カルボキシエチル）ホスフィン（１ｍＭ）、ｔｒｉｓ［（１－ベンジル－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）メチル］アミン（３４μＭ）、硫酸銅（ＩＩ）（１ｍＭ、Ｓｉｇｍａ）、およびビオチン－リンカー－アジドを順次加えることによって使用し、リンカーを、対照または処理プロテオームの処理のために同位体的に軽いまたは重いバリンと共にＴＥＶプロテアーゼ認識配列で官能化した。ＣｕＡＡＣ後、プロテオームを、６５００×ｇでの遠心分離によって沈殿させ、氷冷メタノール中で洗浄し、１：１の対照／処理比で混合し、再び洗浄し、次いで、変性し、１．２％ＳＤＳ／ＰＢＳ中で８０℃まで５分間加熱することによって再可溶化した。不溶性成分を、６５００×ｇでの遠心分離によって沈殿させ、可溶性プロテオームを５ｍｌの０．２％ＳＤＳ／ＰＢＳ中に希釈した。４℃で一晩回転させながら、標識タンパク質を、アビジン－アガロースビーズ（１７０μＬの再懸濁ビーズ／サンプル、ＴｈｅｒｍｏＰｉｅｒｃｅ）に結合させた。ビーズ結合タンパク質を、ＰＢＳおよび水でそれぞれ３回洗浄することにより濃縮し、次いで、６Ｍ尿素／ＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ）に再懸濁し、ＴＣＥＰ（１ｍＭ、Ｓｉｇｍａ）中で還元し、ヨードアセトアミド（ＩＡ）（１８ｍＭ、Ｓｉｇｍａ）でアルキル化し、次いで、洗浄し、２Ｍ尿素に再懸濁し、０．５μｇ／μｌのシークエンシンググレードのトリプシン（Ｐｒｏｍｅｇａ）で一晩トリプシン処理した。トリプシンペプチドを溶出した。ビーズをＰＢＳおよび水でそれぞれ３回洗浄し、ＴＥＶ緩衝液（水、ＴＥＶ緩衝液、１００μＭジチオスレイトール）で洗浄し、Ａｃ－ＴＥＶプロテアーゼを含む緩衝液に再懸濁し、一晩インキュベートした。ペプチドを、水で希釈し、ギ酸（１．２Ｍ、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ）で酸性化し、分析用に調製した。

質量分析。全てのケモプロテオミクス実験由来のペプチドを、４ｃｍのＡｑｕａＣ１８逆相樹脂（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ番号０４Ａ－４２９９）を充填した内径２５０μｍの溶融シリカ毛細管に加圧装填し、これは、１０分間かけて１００％緩衝液Ａから１００％緩衝液Ｂの勾配を使用したＡｇｉｌｅｎｔ６００シリーズＨＰＬＣ上で事前に平衡化し、その後、１００％緩衝液Ｂで５分間洗浄し、１００％緩衝液Ａで５分間洗浄したものであった。その後、サンプルを、ｉｓｏＴＯＰ－ＡＢＰＰ研究のために、１０ｃｍのＡｑｕａＣ１８逆相樹脂および３ｃｍの強カチオン交換樹脂を充填した１３ｃｍのレーザープルカラムへのＭｉｃｒｏＴｅｅＰＥＥＫ３６０μｍのフィッティング（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＃ｐ－８８８）を使用して付着させた。サンプルを、５００ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液の０％、２５％、５０％、８０％、および１００％の塩バンプを使用し、かつ緩衝液Ａ中５～５５％緩衝液Ｂの勾配（緩衝液Ａ：９５：５の水：アセトニトリル、０．１％ギ酸、緩衝液Ｂ：８０：２０のアセトニトリル：水、０．１％ギ酸）を使用した、５段階多次元タンパク質同定技術（ＭｕｄＰＩＴ）プログラムを使用したＱＥｘａｃｔｉｖｅＰｌｕｓ質量分析計（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して分析した。データを、動的排除を有効にして（６０秒）、データ依存型取得モードで収集した。１回のフルＭＳ（ＭＳ１）スキャン（４００～１８００ｍ／ｚ）を行い、続いて、ｎ番目に最も豊富なイオンの１５回のＭＳ２スキャン（ＩＴＭＳ）を行った。加熱キャピラリー温度を２００℃に設定し、ナノスプレー電圧を２．７５ｋＶに設定した。

データは、ＲａｗＥｘｔｒａｃｔｏｒ１．９．９．２（ＳｃｒｉｐｐｓＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ）を使用してＭＳ１およびＭＳ２ファイルの形式で抽出し、ＩＰ２ｖ．３（ＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＰｒｏｔｅｏｍｉｃｓＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｉｎｃ）のＰｒｏＬｕＣＩＤ検索方法論を用いてＵｎｉｐｒｏｔヒトデータベースに対して検索した^３６。システイン残基を、カルボキシアミノメチル化についての静的修飾（＋５７．０２１４６）およびメチオニン酸化についての最大２つの特異的修飾、および軽または重ＴＥＶタグ（それぞれ、＋４６４．２８５９６または＋４７０．２９９７７）で検索した。ペプチドは、完全にトリプシンペプチドであり、ＴＥＶ修飾を含有することが必要とされた。ＰｒｏＬＵＣＩＤデータを、ＤＴＡＳｅｌｅｃｔを通してフィルター処理して、５％未満のペプチド偽陽性率を達成した。３つの生物学的複製のうちの２つにおいて明らかであったプローブ修飾ペプチドのみを、それらの同位体の軽対重比について解釈した。２を超える比を示したプローブ修飾ペプチドについては、３つの生物学的複製全てに存在し、統計的に有意であり、全ての生物学的複製にわたって高品質のＭＳ１ピーク形状を示した標的のみを解釈した。軽い同位体プローブと重い同位体プローブで修飾されたペプチドの比は、ペプチドに関連する全てのペプチドスペクトル一致（ＰＳＭ）について、各複製の対になった軽い前駆体と重い前駆体の存在量の比の平均を取ることによって計算される。対になった存在量は、対になった存在量内の不変性および処置と対照との間の変化の有意性を推定するために、対応のあるサンプルのｔ検定のｐ値を計算するためにも使用された。Ｐ値を、Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ／Ｈｏｃｈｂｅｒｇ法を使用して補正した。

２３１ＭＦＰ細胞におけるＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）によるＲＮＦ１１４、ＣＤＫＮ１Ａ（ｐ２１）およびＣＤＫＮ１Ｃ（ｐ５７）のノックダウン。ＲＮＡｉは、デュアルノックダウン用にＤｈａｒｍａｃｏｎから購入したＲＮＦ１１４またはｐ２１およびｐ５７に特異的なｓｉＲＮＡを使用して実施した。簡単に述べると、９６ウェルフォーマットにおいて、２３１ＭＦＰ細胞を、完全培地１ｍＬあたり５×１０^４個の細胞密度で播種した。０日目に、４８時間、トランスフェクション試薬としてＤｈａｒｍａｆｅｃｔ１（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ）を使用して、対応する低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）と非標的化陰性対照（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ、ＯＮ－ＴＡＲＧＥＴｐｌｕｓＮｏｎ－ｔａｒｇｅｔｉｎｇＰｏｏｌＤ－００１８１０－１０－０５）デュプレックスを５０ｎＭ、２３１ＭＦＰ細胞にトランスフェクトした。その後（２日目）、トランスフェクション培地に新鮮なＤＭＳＯまたは化合物を含有する完全なＬ１５培地を補充し、さらに２４～４８時間培養した後、上記のように細胞生存率試験を行った。処理時（２日目）に、ｑＲＴ－ＰＣＲによる分析のためにＲＮＡを抽出し、ノックダウンのウエスタンブロッティング確認のために溶解物を取得した。

標的配列：
ｓｉＲＮＦ１１４－１：ＧＵＧＵＧＡＡＧＧＣＣＡＣＣＡＵＵＡＡ（配列番号：１０）（ＤｈａｒｍａｃｏｎＪ－００７０２４－０８－０００２）
ｓｉＲＮＦ１１４－２：ＧＣＵＵＡＧＡＧＧＵＧＵＡＣＧＡＧＡＡ（配列番号１１）（ＤｈａｒｍａｃｏｎＪ－００７０２４－０５－０００２）
ｓｉＲＮＦ１１４－３：ＧＣＡＣＧＧＡＵＡＣＣＡＡＡＵＣＵＧＵ（配列番号１２）（ＤｈａｒｍａｃｏｎＪ－００７０２４－０６－０００２）
ｓｉＣＤＫＮ１Ａ：ＡＧＡＣＣＡＧＣＡＵＧＡＣＡＧＡＵＵＵ（配列番号１３）（ＤｈａｒｍａｃｏｎＪ－００３４７１－１２－０００２）
ｓｉＣＤＫＮ１Ｃ：ＣＵＧＡＧＡＡＧＵＣＧＵＣＧＧＧＣＧＡ（配列番号１４）（ＤｈａｒｍａｃｏｎＪ－００３２４４－１３－０００２）

ｑＰＣＲによる遺伝子発現。Ｔｒｉｚｏｌ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、細胞からトータルＲＮＡを抽出した。ＭａｘｉｍａＲＴ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用してｃＤＮＡを合成し、ＣＦＸＣｏｎｎｅｃｔＲｅａｌ－ＴｉｍｅＰＣＲＤｅｔｅｃｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍ（ＢｉｏＲａｄ）上で、ＦｉｓｈｅｒＭａｘｉｍａＳＹＢＲＧｒｅｅｎ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の製造元のプロトコルを使用したｑＰＣＲによって、遺伝子発現を確認した。ＦｉｓｈｅｒＭａｘｉｍａＳＹＢＲＧｒｅｅｎのプライマー配列は、ＰｒｉｍｅｒＢａｎｋから得た。プライマーの配列は次の通りである。
ＲＮＦ１１４フォワード：ＡＡＴＧＴＴＣＣＡＡＡＣＣＧ（配列番号６）
ＲＮＦ１１４リバース：ＴＴＧＣＡＧＴＧＴＴＣＣＡＣ（配列番号７）
ＣＤＫＮ１Ａフォワード：ＴＧＴＣＣＧＴＣＡＧＡＡＣＣＣＡＴＧＣ（配列番号１５）
ＣＤＫＮ１Ａリバース：ＡＡＡＧＴＣＧＡＡＧＴＴＣＣＡＴＣＧＣＴＣ（配列番号１６）
ＰＰＩＡ（シクロフィリン）フォワード：ＣＣＣＡＣＣＧＴＧＴＴＣＴＴＣＧＡＣＡＴＴ（配列番号８）
ＰＰＩＡ（シクロフィリン）リバース：ＧＧＡＣＣＣＧＴＡＴＧＣＴＴＴＡＧＧＡＴＧＡ（配列番号９）

ｑＰＣＲによる遺伝子発現。遺伝子発現を、ＦｉｓｈｅｒＭａｘｉｍａＳＹＢＲＧｒｅｅｎの製造元のプロトコルを使用したｑＰＣＲによって確認した。ＦｉｓｈｅｒＭａｘｉｍａＳＹＢＲＧｒｅｅｎのプライマー配列は、ＰｒｉｍｅｒＢａｎｋから得た。プライマーの配列は次の通りである。
ＲＮＦ１１４フォワード：ＡＡＴＧＴＴＣＣＡＡＡＣＣＧ（配列番号６）
ＲＮＦ１１４リバース：ＴＴＧＣＡＧＴＧＴＴＣＣＡＣ（配列番号７）
ＰＰＩＡ（シクロフィリン）フォワード：ＣＣＣＡＣＣＧＴＧＴＴＣＴＴＣＧＡＣＡＴＴ（配列番号８）
ＰＰＩＡ（シクロフィリン）リバース：ＧＧＡＣＣＣＧＴＡＴＧＣＴＴＴＡＧＧＡＴＧＡ（配列番号９）

ゲルベースのＡＢＰＰ。ゲルベースのＡＢＰＰ方法を、以前に記載されたように実施した^１４。純粋な組換えヒトタンパク質はＯｒｉｇｅｎｅから購入した。純粋なタンパク質（０．１μｇ）をＤＭＳＯビヒクルまたは共有結合的に作用する小分子で室温にて３０分間、５０μＬのＰＢＳのインキュベーション容量で前処理し、続いてＪＮＳ－１－２７（最終濃度５０μＭ）で室温にて１時間処理した。ＣｕＡＡＣを実施して、ローダミン－アジド（最終濃度１μＭ）をアルキンプローブ標識タンパク質に付加した。次に、サンプルを２０μＬの４×還元ＬａｅｍｍｌｉＳＤＳサンプルローディング緩衝液（ＡｌｆａＡｅｓａｒ）で希釈し、９０℃で５分間加熱した。サンプルを、プレキャスト４～２０％ＴＧＸゲル（Ｂｉｏ－ＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）で分離した。ＣｈｅｍｉＤｏｃＭＰ（Ｂｉｏ－ＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ）でスキャンする前に、ゲルを１０％酢酸、３０％エタノールの溶液で２時間固定した。標的標識の阻害は、ＩｍａｇｅＪを使用したデンシトメトリーによって評価した。

共有結合リガンドライブラリー。ＲＮＦ１１４に対してスクリーニングされた共有結合リガンドの大半の合成および特徴付けは、以前に報告されている^{１４，３７－３９}。ＴＲＨ１－１５６、ＴＲＨ１－１６０、ＴＲＨ１－１６７、ＹＰ１－１６、ＹＰ１－２２、ＹＰ１－２６、ＹＰ１－３１、ＹＰ１－４４の合成は以前に報告されている^{４０－４７}。「ＥＮ」で始まる化合物は、ＥｎａｍｉｎｅＬＬＣから購入した。以前に報告されていない他の共有結合リガンドの合成および特徴付けは、実施例９に記載されている。

野生型およびＣ８Ａ突然変異体ＲＮＦ１１４タンパク質の発現および精製。ＲＮＦ１１４は、いくつかの方法を使用して発現させ、精製した。いずれの場合も、ＲＮＦ１１４の活性およびニンボリドに対する感受性を確認した。最初の方法では、Ｃ末端にＦＬＡＧタグが付いた野生型哺乳動物発現プラスミドをＯｒｉｇｅｎｅ（ＯｒｉｇｅｎｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＩｎｃ．、ＲＣ２０９７５２）から購入した。ＲＮＦ１１４Ｃ８Ａ突然変異体は、製造元の指示に従って、Ｑ５部位特異的変異誘発キットを用いて（ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓ、Ｅ０５５４Ｓ）生成した。以前に報告されたように、発現および精製条件を最適化した^４８。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を、１０％のＦＢＳ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）および２ｍＭのＬ－グルタミン（ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を補充したＤＭＥＭ（Ｃｏｒｎｉｎｇ）中で６０％の密集度まで増殖させ、５％のＣＯ_２で３７℃に維持した。トランスフェクションの直前に、培地を、５％のＦＢＳを含有するＤＭＥＭと置き換えた。各プレートに、１００μｇのＰＥＩを含む２０μｇの過剰発現プラスミド（Ｓｉｇｍａ）をトランスフェクトした。４８時間後、細胞をＴＢＳに回収し、超音波処理により溶解し、抗ＤＹＫＤＤＤＤＫ樹脂（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ、Ｌ００４３２）で９０分間バッチ結合した。溶解物と樹脂を重力フローカラムに装填して洗浄した後、２５０ｎｇ／μＬの３×ＦＬＡＧペプチド（ＡｐｅｘＢｉｏ、Ａ６００１）で溶出した。純度および濃度を、ＰＡＧＥ、ＵＶ／分光法、およびＢＣＡアッセイによって確認した。

２番目の方法では、ＲＮＦ１１４の完全なヒトアイソフォーム（Ｕｎｉｐｒｏｔｉｄ：Ｑ９Ｙ５０８）をコードするＤＮＡを、Ｅ．ｃｏｌｉでの発現用にコドン最適化し、ＩｎｔｅｇｒａｔｅｄＤＮＡＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓによって合成した。完全なＲＮＦ１１４配列を含む構築物は、Ｎｄｅ１制限部位とＢａｍＨ１制限部位との間にＨｉｓ_８－ＭＢＰ－ＴＥＶ配列も含むｐＥＴ２４ａプラスミド（Ｎｏｖａｇｅｎ）と相同な２０塩基対を含むプライマーを使用して増幅した。ＰＣＲ用の産物は１％アガロースゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して評価し、ＱＩＡｑｕｉｃｋＧｅｌＥｘｔｒａｃｔｉｏｎキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、正しい長さのＰＣＲ産物を精製した。精製したＰＣＲ産物を、ＧｉｂｓｏｎＡｓｓｅｍｂｌｙ（ＮＥＢＧｉｂｓｏｎＡｓｓｅｍｂｌｙ２ｘＭａｓｔｅｒＭｉｘ）を使用して線形化ベクターにアセンブルした。次に、このベクターを化学的にコンピテントなＥ．ｃｏｌｉ１０Ｇ細胞（Ｌｕｃｉｇｅｎ、ウィスコンシン州ミドルトン）に形質転換した。カナマイシン（Ｋａｎ）耐性コロニーをＬＢ培地で増殖させ、Ｍｉｎｉｐｒｅｐ（Ｑｉａｇｅｎ）キットを使用してプラスミドを単離した後、適切なプライマーで配列を確認した。

所望のＲＮＦ１１４構築物を含むｐＥＴ２４ａＨｉｓ_８－ＭＢＰプラスミド（１００ｎｇ）を、化学的にコンピテントなＥ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）細胞（ＮＥＢ製品番号Ｃ２５３０Ｈ）に形質転換した。翌日、単一の形質転換コロニーを使用して、カナマイシン（５０μｇ／ｍＬ）を含む栄養豊富なＬＢ培地５０ｍＬに接種し、撹拌しながら（２５０ｒｐｍ）３７℃で一晩インキュベートした。翌朝、一晩のスターター培養物を、５０ｍＭの３－（Ｎ－モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）（ｐＨ７．５）、１ｍＭの塩化亜鉛およびＫａｎ（５０μｇ／ｍＬ）を含有するＴｅｒｒｉｆｉｃＢｒｏｔｈ（ＴＢ）（１Ｌ）中、５００ｎＭでの開始光学密度（ＯＤ_６００）が０．１になるまで接種した。２５０ｒｐｍで撹拌しながら３７℃で、ＯＤ_６００が０．８に達するまで、細胞を増殖させた。この段階で、ＲＮＦ１１４融合タンパク質の発現を１ｍＭのイソプロピルβ－Ｄ－１－チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）で誘導し、インキュベーターの温度を１８℃に下げた。１８℃で１８時間増殖させた後、遠心分離により細胞を回収した。続いて、細胞を１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）緩衝液で洗浄し、－２０℃で保存した。

過剰発現したＲＮＦ１１４融合タンパク質を含有するＥ．ｃｏｌｉ細胞（１０ｇ）を、８０ｍＬの溶解緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２個のＲｏｃｈｅプロテアーゼ阻害剤錠剤［ＥＤＴＡ含まず］、２００ｍＭのＺｎＣｌ_２、１ｍＭのＤＴＴ）に再懸濁し、氷上で超音波処理し、サイクル時間はオン６０秒、オフ６０秒で、合計超音波処理時間は３分であった。細胞溶解物を１８，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離し、可溶性タンパク質を、洗浄緩衝液（５０ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２００ｍＭのＺｎＣｌ_２、１ｍＭのＤＴＴ、２５ｍＭのイミダゾール）で事前に平衡化した２ｍＬのＮｉ－ＮＴＡ樹脂とともに４℃で４時間撹拌しながらインキュベートした。細胞溶解物／Ｎｉ－ＮＴＡ樹脂混合物をディスポーザブルカラムに入れ、樹脂に結合しない全てのタグなし可溶性タンパク質を収集して、２回目の精製を行った。樹脂を洗浄緩衝液２５ｍＬで洗浄した後、Ｈｉｓ－ＭＢＰ－ＲＮＦ１１４タンパク質を、２５ｍＬの溶出緩衝液（５０ｍＭのｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、５００ｍＭのイミダゾール、２００ｍＭのＺｎＣｌ_２、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１ｍＭのＤＴＴ）でＮｉ－ＮＴＡ樹脂から溶出した。このプロセスを繰り返し、収集したフローを、さらに２ｍＬの事前平衡化Ｎｉ－ＮＴＡ樹脂とともに完全にインキュベートした。

Ｈｉｓ－ＭＢＰ－ＲＮＦ１１４タンパク質を、ＴＥＶプロテアーゼ（１００単位／ｍｇ（ＭＢＰ－ＲＮＦ１１４））で同時に４℃で消化し、透析緩衝液（５０ｍＭのｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭのＮａＣｌ、２００ｍＭのＺｎＣｌ_２、１ｍＭのＤＴＴ）に対して一晩透析した。翌朝、タンデムに組み立てた２つの５ｍＬＨｉｓＴｒａｐＥｘｃｅｌカラムを、ＡｋｔａＡｖａｎｔ上に置き、５カラム容量の洗浄緩衝液で平衡化した。ＴＥＶで切断されたサンプルを２ｍＬ／分の速度でカラムに装填し、樹脂をさらに５カラム容量の洗浄緩衝液で洗浄した。切断されたＲＮＦ１１４を含む全ての画分を、５ｍｌの容量に濃縮した。次に、サンプルを事前に平衡化したＨｉＬｏａｄ１６／６０Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５ゲル濾過カラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）に装填した。カラムは、２５ｍＭのＴｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１３７ｍＭのＮａＣｌまたは２０ｍＭのリン酸ナトリウム（ｐＨ６．８）、１５０ｍＭのＮａＣｌのいずれかで事前に平衡化した。０．２５ｍＬ／分の流速を使用してゲル濾過カラムを実行し、２ｍＬの画分を収集した。ゲル濾過カラムから溶出するピークに対応する画分をＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して分析し、ＲＮＦ１１４を含む全ての画分を最終濃度１０ｍｇ／ｍＬに濃縮し、液体窒素で瞬間冷凍し、必要になるまで－８０℃で保存した。

レンチウイルス形質導入による、安定して発現するＦＬＡＧ－ＲＮＦ１１４２３１ＭＦＰ細胞株の生成。ＦａｓｔＣｌｏｎｉｎｇにより、Ｃ末端にＦＬＡＧタグを有するヒトＲＮＦ１１４をｐＬｅｎｔｉベクターに挿入した^４９。ＦＬＡＧ－ＲＮＦ１１４レンチウイルスは、Ｌｉｐｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００トランスフェクション試薬（ＴｈｅｍｏＦｉｓｃｈｅｒ）を使用して、ＦＬＡＧ－ＲＮＦ１１４、ＶＳＶ．ＧおよびｐｓＰＡＸ２をＨＥＫ２９３Ｔ細胞に共トランスフェクトすることによって生成した。トランスフェクション培地を１０％熱不活化血清（ＨＩＳ）を含むＤＭＥＭに交換してから２４時間後、およびさらに２４時間後、ウイルス含有培地を収集し、１０μｇ／ｍＬのポリブレン（ＳａｎｔａＣｒｕｚ）の存在下、０．４５μＭフィルターで等量のＨＩＳＬ１５培地を含む２３１ＭＦＰ細胞に濾過した。形質導入の２４時間後、ピューロマイシン（２μｇ／ｍＬ）を細胞に加え、ピューロマイシンを７２時間選択した後、安定して発現するＦＬＡＧ－ＲＮＦ１１４が得られた。ＦＬＡＧ－ｅＧＦＰを安定して発現する２３１ＭＦＰ細胞を対照として並行作製した。

ニンボリド－アルキンプローブのインサイチュ標識およびＦＬＡＧ－ＲＮＦ１１４プルダウン。ＦＬＡＧ－ＲＮＦ１１４を安定して発現する２３１ＭＦＰ細胞を、ビヒクル（ＤＭＳＯ）または１００ｎＭ～１０μＭのニンボリドアルキンプローブで２～４時間処理した。細胞をＰＢＳで回収し、超音波処理により溶解した。溶解物の総タンパク質濃度をＢＣＡアッセイで正規化し、正規化した溶解物を５０μＬまたはＦＬＡＧ－アガローススラリーとともに４℃で１．５時間インキュベートした。インキュベーション後、サンプルをスピンカラムに移し、５００μＬのＰＢＳで３回洗浄した。２５０ｎｇ／μＬの３×ＦＬＡＧペプチド（ＡｐｅｘＢｉｏＡ６００１）を補充したＰＢＳの２５０μＬ洗浄液を使用してタンパク質を溶出した。ＣｕＡＡＣを実施して、ローダミンアジドをアルキンプローブ標識タンパク質に付加し、ローディング緩衝液の添加後、サンプルをプレキャスト４～２０％ＴＧＸゲル（Ｂｉｏ－ＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）で分離し、ＣｈｅｍｉＤｏｃＭＰ（Ｂｉｏ－ＲａｄＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ）で画像化した。

ＲＮＦ１１４ユビキチン化アッセイ。組換えＭｙｃ－Ｆｌａｇ－ＲＮＦ１１４タンパク質を、上記のようにＨＥＫ２９２Ｔ細胞から精製するか、Ｏｒｉｇｅｎｅ（ＯｒｉｇｅｎｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＩｎｃ．、ＴＰ３０９７５２）から購入した。インビトロ自動ユビキチン化アッセイのために、２５μＬのＴＢＳ中の０．２μｇのＲＮＦ１１４をＤＭＳＯビヒクルまたは共有結合的に作用する化合物と室温で３０分間プレインキュベートした。続いて、０．１μｇのＵＢＥ１（ＢｏｓｔｏｎＢｉｏｃｈｅｍ．Ｉｎｃ、Ｅ－３０５）、０．１μｇのＵＢＥ２Ｄ１（ＢｏｓｔｏｎＢｉｃｈｅｍ．Ｉｎｃ、ｅ２－６１５）、５μｇのＦｌａｇ－ユビキチン（ＢｏｓｔｏｎＢｉｃｈｅｍ．Ｉｎｃ、ｕ－１２０）を、２ｍＭのＡＴＰ、１０ｍＭのＤＴＴ、および１０ｍＭのＭｇＣｌ_２を含む総量２５μＬのＴｒｉｓ緩衝液に加えて、最終容量を５０μＬにした。基質－タンパク質ユビキチン化アッセイでは、商業的供給元から購入した０．１μｇの適切な基質タンパク質をこの段階で加えた（ｐ２１およびＰＥＧ１０：Ｏｒｉｇｅｎｅ、ＣＴＧＦ：Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ）。混合物を３７℃で１．５時間撹拌しながらインキュベートした。２０μＬのＬａｅｍｍｌｉ緩衝液を加えて反応をクエンチし、タンパク質をウエスタンブロットアッセイによって分析した。

ＲＮＦ１１４／ｐ２１の共免疫沈降。組換えＦｌａｇタグ付きＲＮＦ１１４を餌として使用して、Ａｎｔｉ－Ｆｌａｇアガロースビーズ（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔＢｉｏｔｅｃｈＣｏｒｐ．、Ｌ００４３２）を用いて純粋な組換えｐ２１（ＯｒｉｇｅｎｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓＩｎｃ．、ＴＰ３０９７５２およびＴＰ７２０５６７）を沈殿させた。１マイクログラムのＦｌａｇ－ＲＮＦ１１４を５０μＬのＴＢＳに加え、続いてニンボリド（１００μＭの最終濃度、ＣａｙｍａｎＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．、１９２３０）または等量のＤＭＳＯを加えた。サンプルを室温で３０分間インキュベートした。１マイクログラムの純粋なｐ２１を各サンプルに加え、サンプルを室温で３０分間撹拌しながらインキュベートした。１０マイクロリットルのＦｌａｇアガロースビーズを各サンプルに加え、サンプルを室温で３０分間撹拌した。洗浄（３回、１ｍＬのＴＢＳ）を実施してから、２５０ｎｇ／μＬの３×ＦＬＡＧペプチド（ＡｐｅｘＢｉｏＡ６００１）を補充した５０μＬのＴＢＳを使用してタンパク質を溶出した。上清（３０μＬ）を回収し、Ｌａｅｍｍｌｉ還元剤（１０μＬ）を加えた後、サンプルを９５℃で５分間煮沸し、放冷した。上記のように、サンプルをウエスタンブロッティングによって分析した。

ニンボリド－アルキンプローブのインサイチュ標識およびビオチン－アジドプルダウン。実験は、以前に記載されたプロトコルの適応に従って実施した^５０。２３１ＭＦＰ細胞をビヒクル（ＤＭＳＯ）または５０μＭニンボリドアルキンプローブのいずれかで９０分間処理した。細胞をＰＢＳにおいて回収し、超音波処理により溶解した。ウエスタンブロッティングサンプルの調製のために、２５μＬの１０％ＳＤＳ、５μＬの５ｍＭビオチンピコリアジド（９００９１２Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）および２５μＬのクリック反応ミックス（３部のＴＢＴＡ、ブタノール：ＤＭＳＯ（４：１、ｖ／ｖ）中５ｍＭのＴＢＴＡ、１部の５０ｍＭＣｕ（ＩＩ）ＳＯ４溶液、および１部の５０ｍＭＴＣＥＰ）を含むサンプルあたり１９５μＬの溶解物を分注した。サンプルを穏やかに撹拌しながら３７℃で２時間インキュベートした後、１．２ｍＬの氷冷アセトンを加えた。－２０℃で一晩沈殿させた後、サンプルを予冷した遠心分離機において１２５０ｇで１０分間回転させ、過剰なアセトンを吸引し、次いで、プローブ超音波処理により１％ＳＤＳを含む２００μＬのＰＢＳにおいてタンパク質ペレットを再構成した。この段階で、総タンパク質濃度をＢＣＡアッセイによって決定し、サンプルを２３０μＬの総量に対して正規化し、３０μＬが入力として予約した。２０μＬの事前に洗浄した５０％ストレプトアビジンアガロースビーズスラリーを各サンプルに加え、サンプルを穏やかに撹拌しながら室温で一晩インキュベートした。上清９０ｇを室温で２分間スピン回転させた後、各サンプルから吸引した。ビーズをスピンカラムに移し、ＰＢＳで３回洗浄した。溶出するために、ビーズを５０μＬのＬＤＳサンプル緩衝液で５分間煮沸した。遠心分離によって溶出液を収集し、イムノブロッティングによって分析した。得られたサンプルは、ＴＭＴベースの定量的プロテオミクスプロファイリングのセクションで以下に説明するように分析した。

ＴＭＴベースの定量的プロテオミクスプロファイリング。

細胞溶解、タンパク質分解および等圧標識。処理された細胞ペレットは、市販のＰｉｅｒｃｅ（商標）ＭａｓｓＳｐｅｃＳａｍｐｌｅＰｒｅｐＫｉｔｆｏｒＣｕｌｔｕｒｅｄＣｅｌｌｓ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｐ／Ｎ８４８４０）を使用して、製造元の指示に従って溶解および消化した。簡単に説明すると、各サンプルからの１００μｇのタンパク質を還元し、アルキル化し、エンドプロテイナーゼＬｙｓ－Ｃとトリプシンプロテアーゼの組み合わせを使用して一晩消化した。次に、市販のＴａｎｄｅｍＭａｓｓＴａｇ（商標）６－ｐｌｅｘ（ＴＭＴｓｉｘｐｌｅｘ（商標））（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｐ／Ｎ９００６１）またはＴＭＴ１１ｐｌｅｘ（ＴＭＴ１１ｐｌｅｘ（商標））等圧標識試薬（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｐ／Ｎ２３２７５）キットを使用して、メーカーのプロトコルに従って、個々のサンプルを等圧タグで標識した。

高ｐＨ逆相分離。次に、タンデム質量タグ標識（ＴＭＴ）サンプルを統合し、前述のように画分を収集する高ｐＨ逆相クロマトグラフィー（ＲＰ－１０）を使用して分離した^５０。画分をｓｐｅｅｄ－ｖａｃ乾燥し、再構成して２４画分を生成し、後続のオンラインナノＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析に使用した。

ナノＬＣ－ＭＳ／ＭＳによるタンパク質の同定および定量。再構成したＲＰ－１０画分を、ＥａｓｙＬＣ１２００ＨＰＬＣシステム（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に連結したＴｈｅｒｍｏＯｒｂｉｔｒａｐＦｕｓｉｏｎＬｕｍｏｓＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（Ｘｃａｌｉｂｕｒ４．１、ＴｕｎｅＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ３．０．２０４１）で分析した。ＥａｓｙＬＣ１２００には、９６ウェルプレート用にセットアップされた２０μＬのループが装備されていた。ＲｅｐｒｏＳｉｌ－Ｐｕｒ１２０Ｃ１８－ＡＱ、５μｍの材料（１５ｍｍのベッド長）を充填したＫａｓｉｌフリットトラッピングカラム（７５μｍＩＤ）を、長さ１６０ｍｍ、内径７５μｍのスプレーキャピラリーと共に使用し、Ｐ－２０００キャピラリープラー（ＳｕｔｔｅｒＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、カリフォルニア州ノバート）を使用して先端の直径を約８～１０μｍまで引き上げた。１６０ｍｍ分離カラムには、ＲｅｐｒｏＳｉｌ－Ｐｕｒ１２０Ｃ１８－ＡＱ、３μｍの材料（Ｄｒ．ＭａｉｓｃｈＧｍｂＨ、ドイツ、アンマーブーフ－エントリンゲン）を充填した。移動相は、Ａ＝０．１％ギ酸／２％アセトニトリル（ｖ／ｖ）、および移動相Ｂ＝０．１％ギ酸／９８％アセトニトリル（ｖ／ｖ）で構成されていた。サンプル（１８μＬ）を、移動相Ａを使用して２．５μＬ／分の流速でトラッピングカラムに注入した。次に、キャピラリー分離カラムで、３００ｎＬ／分の流量にて、８０分のグラジエントを使用してペプチドを溶出した（５分間は２％の移動相Ｂ、５～６５分は２％～４０％の移動相Ｂ、続いて６５～７０分は７０％の移動相Ｂ、７０～８０分は２％移動相Ｂに戻る）（質量分析計に直接スプレー）。同期プリカーサースキャンＭＳ^３モード（ＳＰＳ－ＭＳ３）を使用して、データ依存モードのＯｒｂｉｔｒａｐＦｕｓｉｏｎＬｕｍｏｓＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒでデータを取得し、ＭＳ^２は、完全なＭＳ調査スキャンイベントで検出された３００～１５００の質量電荷比（ｍ／ｚ）範囲内の１２個の最も強いプリカーサーイオンに対してトリガーされた。ＭＳスキャンは、４×１０^５個のイオンの標的値、および５０ミリ秒の最大充填時間を使用して、ｍ／ｚ４００で６０，０００の質量分解能（Ｒ）で取得された。ＭＳ^２スキャンは、１×１０^４個のイオンの標的値、５０ミリ秒の最大充填時間、および２Ｄａの分離ウィンドウを使用して、ＣＩＤイオントラップ（ＩＴ）ラピッドタイプスキャンとして取得された。データ依存的ＭＳ^３スペクトルは、ｍ／ｚ１００～５００の走査範囲で、トップ１０のＭＳ^２ドーター選択（Ｔｏｐ１０ＭＳ^２ｄａｕｇｈｔｅｒｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）、５×１０^４個のイオンの自動利得制御（ＡＧＣ）標的値を使用して、Ｏｒｂｉｔｒａｐ（ＯＴ）スキャンとして取得された。ＭＳ^３の最大注入時間は８６ミリ秒で、ＨＣＤ衝突エネルギーは６５％に設定した。ＭＳ^３の質量分解能（Ｒ）を、ＴＭＴ６ｐｌｅｘ実験ではｍ／ｚ４００で１５，０００に設定し、ＴＭＴ１１－ｐｌｅｘ実験ではｍ／ｚ４００で５０，０００に設定した。動的除外を、選択したプリカーサーを６０秒間、繰り返し回数１で除外するように設定した。ナノスプレー電圧を２．２ｋＶに設定し、加熱したキャピラリー温度を３００℃に設定し、ＳレンズのＲＦレベルは３０％に等しかった。シースまたは補助ガスフローは適用されない。

データ処理および分析。取得したＭＳデータを、ペプチドスペクトル一致フィルタリング用のパーコレーター検証ノードと共に、Ｍａｓｃｏｔｖ２．５．１検索エンジン（ＭａｔｒｉｘＳｃｉｅｎｃｅ、英国、ロンドン）を利用したＰｒｏｔｅｏｍｅＤｉｓｃｏｖｅｒｅｒｖ．２．２．０．３８８ソフトウェア（Ｔｈｅｒｍｏ）を使用して処理した^５１。一般的な汚染物質の配列を補足したＵｎｉｐｒｏｔタンパク質データベース（標準的なヒトおよびマウスの配列、ＥＢＩ、英国、ケンブリッジ）に対してデータを検索した。ペプチド検索トレランスを、前駆体では１０ｐｐｍ、断片では０．８Ｄａに設定した。トリプシン切断特異性（Ｋ、Ｒでの切断（その後にＰが続く場合を除く））により、最大２つの切断の失敗が許容された。システインのカルバミドメチル化は固定修飾、メチオニン酸化として設定され、Ｎ末端およびリジン残基のＴＭＴ修飾は可変修飾として設定された。ペプチドおよびタンパク質の同定に関するデータ検証を、ＰｒｏｔｅｏｍｅＤｉｓｃｏｖｅｒｅｒのパーコレーター検証ノードを介して、実験ごとに全ての個々のサンプルのマスコット検索結果を組み合わせた完全なデータセットのレベルで行った。レポーターイオン比の計算は、２０ｐｐｍウィンドウから選択された最も信頼できる重心を用いて合計存在量を使用して実施した。タンパク質の定量化では、データセット全体の中で同定された所与のタンパク質への一意の割り当てであるペプチドとスペクトルの一致のみが考慮される。信頼性の高いタンパク質の同定は、パーコレーターの推定＜１％の偽発見率（ＦＤＲ）カットオフを使用して報告された。調整ｐ値を決定するために、Ｂｅｎｊａｍｉｎｉ－Ｈｏｃｈｂｅｒｇ補正を使用したバックグラウンドベースのＡＮＯＶＡを使用して、存在量の有意差を推定した。

実施例９．追加の合成および特徴付けデータ
ニンボリド－アルキンプローブ（５）と分解剤ＸＨ１（９）およびＸＨ２（１０）の合成および特徴付け
一般的な手順。特に明記しない限り、全ての反応は、オーブン乾燥または火炎乾燥したＦｉｓｈｅｒｂｒａｎｄ（登録商標）ホウケイ酸ガラス管（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１４９５９２５Ａ、１３×１００ｍｍ）で、乾燥窒素雰囲気下で黒色フェノールスクリューキャップ（１３－４２５）を使用して実施した。乾燥したＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、トルエンおよびアセトニトリルは、これらの事前に脱気した溶媒を活性アルミナカラムに通すことによって得た。ニンボリドはＳｉｇｍａ－ＡｌｄｒｉｃｈもしくはＣａｙｍａｎＣｈｅｍｉｃａｌから購入し、さらに精製することなく直接使用した。プロパルギルアミンとＮ－メチルプロパルギルアミンはＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃから購入し、さらに精製することなく直接使用した。反応を、ＴＬＣシリカゲル６０Ｆ_２５４ガラスプレート（ＥＭＤＭｉｌｌｉｐｏｒｅ）での薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によって監視し、ＵＶ照射およびｐ－アニスアルデヒド、リンモリブデン酸、または過マンガン酸カリウムによる染色によって可視化した。揮発性溶媒は、ロータリーエバポレーターを使用して減圧下で除去した。フラッシュカラムクロマトグラフィーは、ＳｉｌｉｃｙｃｌｅＦ６０シリカゲル（６０Å、２３０～４００メッシュ、４０～６３μｍ）を使用して実施した。酢酸エチルとヘキサンはＦｉｓｈｅｒＣｈｅｍｉｃａｌから購入し、さらに精製することなくクロマトグラフィーに使用した。プロトン核磁気共鳴^（１ＨＮＭＲ）および炭素核磁気共鳴（^１３ＣＮＭＲ）スペクトルは、^１Ｈの場合は６００および７００ＭＨｚ、^１３Ｃの場合は１５０および１７５ＭＨｚで動作するＢｒｕｋｅｒＡＶ－６００およびＡＶ－７００分光計で記録した。化学シフトは、残留溶媒シグナルＣＤＣｌ_３に関して百万分率（ｐｐｍ）で報告される（^１ＨＮＭＲ：δ＝７．２６；^１３ＣＮＭＲ：δ＝７７．１６），ＣＤ_２Ｃｌ_２（^１ＨＮＭＲ：δ＝５．３２；^１３ＣＮＭＲ：δ＝５３．８４）。ピーク多重度は次のように報告される：ｓ＝一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｄｄ＝二重項の二重項、ｔｔ＝三重項の三重項、ｍ＝多重項、ｂｒ＝ブロードなシグナル、ａｐｐ＝見かけの。ＩＲスペクトルは、Ｎｉｃｏｌｅｔ３８０ＦＴ－ＩＲ分光計で記録した。高分解能質量スペクトル（ＨＲＭＳ）は、カリフォルニア大学バークレー校のＱＢ３／化学質量分析施設によって取得された。旋光度は、Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ２４１旋光計で測定した。

スキームＳ１。ニンボリド－アルキンプローブ（５）の合成。

ブロモニンボリド（１２）：ニンボリド（１００ｍｇ、０．２１４ｍｍｏｌ）を４つの反応管（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１３×１００ｍｍ）に均等に分割し、それぞれに撹拌棒を入れた。チューブを排気し、窒素を再充填し、乾燥ＤＭＦ（各０．２５ｍＬ）を加え、得られた溶液を氷浴で０℃に冷却した。再結晶したＮ－ブロモスクシンイミド（４０．０ｍｇ、０．２２５ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（４ｍＬ）に溶解し、溶液を各反応管（各１ｍＬ）にゆっくりと加えた。反応混合物を０℃で１時間撹拌し、次に飽和Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水溶液（各５ｍＬ）の添加によりクエンチした。得られた混合物を合わせ、ＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、Ｈ_２Ｏ（５０ｍＬ）およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空中で濃縮した。粗混合物をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：３～１：１）によって精製して、白色フォームとして（１２）（１１１ｍｇ、９５％）を得た。

アルデヒド（３）：反応管（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１３×１００ｍｍ）に、撹拌棒、（１２）（１２ｍｇ、０．０２２ｍｍｏｌ、１当量）、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３（１０ｍｇ、０．０１１ｍｍｏｌ、０．５等量）、ＳＰｈｏｓ（１０ｍｇ、０．０２４ｍｍｏｌ、１当量）、無水Ｋ_３ＰＯ_４（３５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ、７．５当量）および４－ホルミルフェニルボロン酸（１６ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ、５当量）を入れた。チューブを排気し、窒素を再充填し、乾燥トルエン（０．５ｍＬ）を加えた。得られた混合物を６０℃で４８時間加熱し、室温に冷却し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）のプラグに通した。濾液を真空中で濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝１：３～１：１）によって精製して、淡黄色油としてアルデヒド（３）（１１．５ｍｇ、９２％）を得た。

＝＋４．８°（ｃ０．００５ｇ／ｍＬ，ＣＨＣｌ_３）；^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １０．０１（ｓ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），６．３９（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），５．９３（ｄ，Ｊ＝９．７Ｈｚ，１Ｈ），５．６０（ａｐｐ．ｔｔ，Ｊ＝７．３，１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６４（ｄｄ，Ｊ＝１２．５，３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．３２（ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，１Ｈ），４．１７－４．１３（ｍ，１Ｈ），３．６９（ｓ，３Ｈ），３．２３（ｄｄ，Ｊ＝１６．４，５．５Ｈｚ，１Ｈ），３．２０（ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，１Ｈ），２．７８（ｄｄ，Ｊ＝５．５，５．５Ｈｚ，１Ｈ），２．４１（ｄｄ，Ｊ＝１６．４，５．５Ｈｚ，１Ｈ），２．３１－２．２７（ｍ，２Ｈ），１．６９（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，３Ｈ），１．４９（ｓ，３Ｈ），１．３８（ｓ，３Ｈ），１．２５（ｓ，３Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ２００．８，１９１．７，１７５．０，１７３．２，１４９．８，１４７．９，１４６．３，１４３．１，１３７．０，１３６．１，１３４．８，１３１．１，１３０．３，１２６．１，１２６．０，１１２．６，８８．４，８３．３，７３．４，５２．１，５０．８，５０．０，４７．９，４５．５，４３．８，４１．３，３２．５，１８．８，１７．５，１５．３，１３．４；ＩＲ（薄膜、ｃｍ^－１）２９７７，２９３５，２８７３，１７８２，１７３３，１７０２，１６７７，１６０８，１４３８，１３９３，１３７２；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値（［Ｃ_３４Ｈ_３４Ｏ_８Ｎａ］^＋（Ｍ＋Ｎａ）^＋の場合）：ｍ／ｚ５９３．２１４６、実測値：５９３．２１５４。
［注：アルデヒド（３））は分取ＴＬＣ条件下では安定していない］

ニンボリドアルキンプローブ（５）：ｉ．反応管（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１３×１００ｍｍ）に、撹拌棒、アルデヒド（３）（７．０ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ、１当量）、およびｔ－ＢｕＯＨと２－メチル－２－ブテンの混合物（０．６ｍＬ、３：５ｖ／ｖ）を入れた。Ｈ_２Ｏ（０．２ｍＬ）中のＮａＣｌＯ_２（３．３ｍｇ、３当量）およびＮａＨ_２ＰＯ_４（１３．２ｍｇ、９当量）の溶液を一度に加え、得られた混合物を室温で６時間撹拌した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝２：１）によって判断されるように反応が完了した後、混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）および飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）で希釈し、水相をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗カルボン酸（４）をさらに精製することなく直接使用した。

ｉｉ．撹拌棒、粗酸（４）（０．０１２ｍｍｏｌを想定）、およびＨＡＴＵ（１３．７ｍｇ、０．０３６ｍｍｏｌ、３当量）を入れた反応管（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１３×１００ｍｍ）に、ＤＭＦ（０．１ｍＬ）中のＤＩＰＥＡ（６．４μＬ、０．０３６ｍｍｏｌ、３当量）の溶液を加えた。得られた混合物を０℃に冷却し、１０分間撹拌した。次に、ＤＭＦ（０．２ｍＬ）中のプロパルギルアミン（１．６μＬ、０．０２４ｍｍｏｌ、２当量）の溶液を加え、反応混合物をさらに０～４℃で１２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝２：１）によって判断されるように、反応が完了した後、混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）および飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）で希釈し、水相をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ×２）で抽出した。合わせた有機層を、Ｈ_２Ｏ（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空中で濃縮した。得られた粗製物を分取ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：ヘキサン＝２：１）によって精製して、白色固体としてアミド（５）（３．５ｍｇ、２ステップで４６％）を得た。

ＪＮＳ２７（６）．ｉ．窒素雰囲気下、－７８℃でリチウムジイソプロピルアミド（６．０ｍＬ、１．２当量）の撹拌溶液に、ＴＨＦ（５．０ｍＬ）中のクリクロヘキセノン（０．４８ｍＬ、１当量）の溶液を滴下した。４５分後、ＴＨＦ（５．０ｍＬ）中の３－ブロモ－１－（トリメチルシリル）－プロピン（０．８５ｍＬ、２．４当量）の溶液を徐々に加えた後、反応を一晩室温に戻した。反応を飽和ＮＨ_４Ｃｌ（２０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空中で濃縮した。シリカゲルでの残留物のフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の１０～２０％のＥｔＯＡｃ）により、２５％の収率（２６１ｍｇ）でＴＭＳ－アルキンが得られた。ｉｉ．Ｎ_２下で、ＴＨＦ（５．０ｍＬ）中の本物質（２６１ｍｇ、１当量）の溶液に、ＴＢＡＦ（０．４４ｍＬ、１当量）の溶液を加えた。室温で４時間撹拌した後、飽和ＮＨ_４Ｃｌ（１５ｍＬ）を加えることにより反応をクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃ（３×１５ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥させ、真空で濃縮した。シリカゲルでの残留物のフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中０～２０％のＥｔＯＡｃ）により、ＪＮＳ－２７を淡黄色ワックス状固体として８１％の収率（１６８ｍｇ、２ステップで２１％）で得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ６．９９（ｍ，１Ｈ），６．０３（ｄｔ，Ｊ＝１０．０２，１．９７Ｈｚ，１Ｈ），２．７８（ｍ，１Ｈ），２．４８（ｍ，３Ｈ），２．３３（ｍ，２Ｈ），１．９８（ｔ，Ｊ＝２．６８，１Ｈ），１．８８（ｍ，１Ｈ）；^１３ＣＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １５０．３０，１２９．３４，４５．７４，２７．６８，２５．７８，２０．２７；ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）計算値（［Ｃ_９Ｈ_１０ＯＮａ］^＋（Ｍ＋Ｎａ）^＋の場合）：ｍ／ｚ１３４．０７３２、実測値１３４．０７２８。

この化合物（７）は、Ｂｒａｄｎｅｒおよび同僚によって報告された条件（２０１７年ＰＣＴ国際特許出願第ＷＯ２０１７／０９１６７３Ａ２）に従って調製した。

この化合物（８）は、Ｗａｒｉｎｇおよび同僚によって報告された条件に従って調製した（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１６，５９，７８０１）。

スキームＳ２。ニンボリド由来の二官能性分解剤ＸＨ１（９）およびＸＨ２（１０）の合成。

二官能性分解剤ＸＨ１（９）およびＸＨ２（１０）の一般的な合成手順：

ｉ．反応管（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１３×１００ｍｍ）に、撹拌棒、Ｂｏｃ保護アミン（７）または（８）（０．０４ｍｍｏｌ）、トリエチルシラン（１２μＬ、０．０７５ｍｍｏｌ）、およびＤＣＭ（０．４ｍＬ）を入れた。得られた混合物を０℃に冷却し、続いてＴＦＡ（０．１２ｍＬ）を滴下して加えた。反応混合物を室温まで加温させ、さらに２時間撹拌した。ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＤＣＭ＝１：１０）で判断して反応が完了した後、混合物をトルエン（２ｍＬ）で希釈し、真空中で濃縮した。得られた粗製物を高真空下で３０分間乾燥し、さらに精製することなく次のステップで直接使用した。カルボン酸（４）は、前述の手順に従ってアルデヒド（３）から調製し、さらに精製することなく使用した。

ｉｉ．反応管（ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、１３×１００ｍｍ）に、撹拌棒、粗アミン（０．０４ｍｍｏｌを想定）、未精製酸（４）（０．０２ｍｍｏｌを想定）、およびＤＭＦ（０．６ｍＬ）を入れた。得られた混合物を氷浴中で０℃に冷却し、続いてＨＡＴＵ（２３．０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（１１μＬ、０．０６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を４℃で１６時間撹拌した。ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＤＣＭ＝１：１０）によって判断されるように反応が完了した後、混合物をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）および飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１０ｍＬ）で希釈し、水相をＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、Ｈ_２Ｏ（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、真空中で濃縮した。得られた粗物質を分取ＴＬＣ（ＭｅＯＨ：ＤＣＭ＝１：１５、２回展開）によって精製して、二官能性分解剤ＸＨ１またはＸＨ２を得た。

白色フォームＸＨ１（９）（（３）からの収率４５％）：

白色フォームＸＨ２（１０）（（３）からの収率４２％）：

以前に報告されていないシステイン反応性共有結合リガンドの合成および特徴付け
一般的な合成方法化学薬品および試薬を主要な商業的供給業者から購入し、さらに精製することなく使用した。別途記述されない限り、反応を、窒素雰囲気下で実施した。シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーを、ＥＭＤまたはＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈシリカゲル６０（２３０～４００メッシュ）を使用して実施した。プロトンおよび炭素核磁気共鳴（^１ＨＮＭＲおよび^１３ＣＮＭＲ）データを、ｔｈｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＢｅｒｋｅｌｅｙのＢｒｕｋｅｒＡＶＢ４００、ＡＶＱ４００、またはＡＶ６００分光計で取得した。高分解能質量スペクトルを、ポジティブまたはネガティブエレクトロスプレーイオン化（＋ＥＳＩまたは－ＥＳＩ）を使用して、ｔｈｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＢｅｒｋｅｌｅｙのＱＢ３質量分析施設から取得した。収量は、１回の実行として報告される。

Ｎ－（３－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１２９）（１３）。ｉ．０℃でエタノール（２０ｍＬ）中の４－アミノインダン（１．０ｇ、７．５ｍｍｏｌ）の溶液に無水酢酸（１．４ｍＬ、１５．０ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温に加温させ、一晩撹拌し、その時点で溶媒を真空中で蒸発させた。次に、残留物をアセトン（５０ｍＬ）に溶解し、１５％硫酸マグネシウム水溶液（６．７５ｍＬの水中１．２ｇ）、続いて過マンガン酸カリウム（３．４ｇ、１７．０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を２４時間撹拌し、次にセライトのパッドを通して濾過し、クロロホルム、次に水で溶出した。溶離液を分離し、追加のクロロホルムで水層を数回抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させた。次に、残留物を６ＮＨＣｌ（２０ｍＬ）に溶解し、９０℃に加熱した。５時間撹拌した後、溶液を冷却し、少量の炭酸カリウムで中和し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で蒸発させて、粗７－アミノインダン－１－オン（６１０ｍｇ、３ステップで５５％）を得て、これをさらに精製することなく使用した。

ｉｉ．ジクロロメタン（１５ｍＬ）中の粗７－アミノインダン－１－オンの溶液に、塩化アクリロイル（０．３９ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．６７ｍＬ、４．８ｍｍｏｌ）をＮ_２雰囲気下、０℃で加えた。反応混合物を室温に加温させ、一晩撹拌した。次に、反応混合物を１ＭＨＣｌ溶液で２回、ブラインで洗浄し、真空中で濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１０％～２０％の酢酸エチル）により精製して、白色固体として（１３）生成物（３９０ｍｇ、４７％収率、４ステップで２６％の合計収率）を得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １０．６４（ｓ，１Ｈ），８．４５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．４５（ｄｄ，Ｊ＝１．０，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），５．８２（ｄｄ，Ｊ＝１．０，１０．１Ｈｚ，１Ｈ），３．１１（ｔ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７４－２．７１（ｍ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ２０９．３，１６４．４，１５５．９，１３８．７，１３７．０，１３１．７，１２８．０，１２３．１，１２０．８，１１６．９，３６．５，２５．５．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２０２．０８６３（Ｃ_１２Ｈ_１２ＮＯ_２）。観測値：２０２．０８６０．

Ｎ－（３－ヒドロキシ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１３３）（１４）。窒素雰囲気下、無水メタノール（７ｍＬ）中の（１３）（２０１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（４６．１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。３０分間撹拌した後、反応物を飽和重炭酸ナトリウム溶液でクエンチし、ＤＣＭで３回抽出した。合わせた有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、そして真空中で濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０～５０％酢酸エチル）により精製して、白色固体として（１４）（１９０ｍｇ、９４％収率）を得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ８．９３（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１９（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），６．２９（ｄ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．１５（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１６．９Ｈｚ，１Ｈ），５．６６（ｄ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ，１Ｈ），５．３２（ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，１Ｈ），３．６０（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，１Ｈ），２．９６（ｄｄｄ，Ｊ＝２．４，９．０，１５．７Ｈｚ），２．７３（五重項，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），２．５６－２．４８（ｍ，１Ｈ），１．９６－１．８６（ｍ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６４．１，１４３．７，１３５．６，１３２．８，１３１．６，１２９．５，１２７．３，１２１．０，１１８．５，７６．２，３６．０，２９．８．ＨＲＭＳ（－ＥＳＩ）：計算値：２０２．０８７４（Ｃ_１２Ｈ_１２ＮＯ_２）。観測値：２０２．０８７４．

Ｎ－（１－オキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１３４）（１５）。ｉ．酢酸（２５０ｍＬ）中の４－ニトロインダン（５．３８ｇ、３３ｍｍｏｌ）の溶液に、三酸化クロム（８．９５ｇ、９０ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。２４時間撹拌した後、反応物を２ＭＮａＯＨで中和し、酢酸エチルで５回抽出した。合わせた有機物を飽和重炭酸ナトリウム溶液およびブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１０～２０％の酢酸エチル）により精製して、１．２６ｇ（約７．１ｍｍｏｌ）の４－ニトロインダノンを白色固体として得た。

ｉｉ．次いで、この中間体を、窒素雰囲気下で無水メタノール（２１ｍＬ）に溶解した活性炭（１２５ｍｇ、１０重量％）上のパラジウムと組み合わせた。トリエチルシラン（１１．３ｍＬ、７１ｍｍｏｌ）を、１０分間にわたって添加漏斗によってゆっくりと室温の水浴中での反応物に加えた。さらに２０分間撹拌した後、反応混合物をセライトのパッドを通して濾過し、続いて真空中で濃縮して、４－アミノインダノンを得、これをさらに精製することなく使用した。

ｉｉｉ．前述の粗アミノインダノンを窒素雰囲気下でＤＣＭ（２１ｍＬ）に溶解し、０℃に冷却し、その時点で塩化アクリロイル（０．７７ｍＬ、９．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．１９ｍＬ、８．５ｍｍｏｌ）をゆっくりと滴下した。反応混合物を室温に加温させ、一晩撹拌し、ブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空中で濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０～５０％の酢酸エチル）により精製して、白色固体として（１５）（９８９ｍｇ、３ステップで１５％収率）を得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ８．２０（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｓ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．３９（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），６．４８（ｄ，Ｊ＝１６．７Ｈｚ，１Ｈ），６．３７（ｄｄ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．８３（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），３．０４（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ），２．７０（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ２０６．３，１６３．９，１４６．０，１３８．０，１３５．４，１３０．７，１２８．８，１２８．７，１２７．６，１２０．４，３６．１，２３．４．ＨＲＭＳ（－ＥＳＩ）：計算値：２００．０７１７（Ｃ_１２Ｈ_１０ＮＯ_２）。観測値：２００．０７１５．

Ｎ－（１－ヒドロキシ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１３５）（１６）。窒素雰囲気下、無水メタノール（５０ｍＬ）中の（１５）（１．２６ｇ、６．２５ｍｍｏｌ）の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（２９２．７ｍｇ、７．７ｍｍｏｌ）を加えた。３０分間撹拌した後、反応を水でクエンチし、メタノールを真空中で除去した。残留物をＮａＣｌで飽和させ、２：１のクロロホルム：メタノール溶液で５回抽出した。合わせた有機層を３Åモレキュラーシーブで乾燥し、濾過し、真空中で濃縮した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中４０～７０％の酢酸エチル）により精製して、白色固体として（１６）（１．０５ｇ、８３％収率）を得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ ７．５０（ｄｄ，Ｊ＝２．３，６．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２５－７．２０（ｍ，２Ｈ），６．５１（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），５．７７（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），５．１７（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，１Ｈ），２．９７（ｄｄｄ，Ｊ＝４．５，８．６，１６．２，１Ｈ），２．７４（五重項，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），２．４７－２．３９（ｍ，１Ｈ），１．９５－１．８６（ｍ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ １６６．３，１４８．０，１３７．８，１３４．８，１３２．１，１２８．３，１２７．９，１２４．０，１２２．７，７６．９，３６．１，２８．６．ＨＲＭＳ（－ＥＳＩ）：計算値：２０２．０８７４（Ｃ_１２Ｈ_１２ＮＯ_２）。観測値：２０２．０８７２．

１－（４－（フラン－２－カルボニル）ピペラジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＴＲＨ１－１４５）（１７）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の１－（２－フロイル）ピペラジン（３６２ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）溶液に、塩化アクリロイル（０．２０ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温に加温させ、さらに２４時間撹拌した。反応混合物をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中７０％～１００％の酢酸エチル）により精製して、黄色固体として（１７）（４４６ｍｇ、９５％）を得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．５３（ｍ，１Ｈ），７．０６（ｄｄ，Ｊ＝０．７，３．５Ｈｚ，１Ｈ），６．６１（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．５２（ｄｄ，Ｊ＝１．８，３．５Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７５（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．８４－３．６７（ｍ，８Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．５，１５９．１，１４７．５，１４４．０，１２８．５，１２７．１，１１７．０，１１１．５，４５．６，４１．９．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２３５．１０７７（Ｃ_１２Ｈ_１５Ｎ_２Ｏ_３）。観測値：２３５．１０７５．

Ｎ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）メタクリルアミド（ＴＲＨ１－１４９）（１８）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の４－アミノインダン（０．２４ｍＬ、２．０ｍｍｏｌ）溶液に、窒素雰囲気下、０℃で塩化メタクリロイル（０．２３ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温に加温させ、さらに３．５時間撹拌した。次いで、反応混合物をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の３５％～４０％の酢酸エチル）によって精製して、オフホワイト色固体として（１８）（３７８ｍｇ、９４％）を得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．７２（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｓ，１Ｈ），７．１２（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），５．７９（ｓ，１Ｈ），５．４２（ｓ，１Ｈ），２．９３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．７９（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），７．１２－２．０６（ｍ，２Ｈ），２．０４（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６６．３，１４５．１，１４０．６，１３４．５，１３３．７，１２７．０，１２０．７，１１９．８，１１８．９，３３．１，２９．９，２４．７，１８．６．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２０２．１２２６（Ｃ_１３Ｈ_１６ＮＯ）。観測値：２０２．１２２４．

Ｎ－（３－オキソイソインドリン－４－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１５２）（１９）。ジクロロメタン（４ｍＬ）中の７－アミノイソインドリン－１－オン（９９ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化アクリロイル（０．０７ｍＬ、０．８ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．１１ｍＬ、０．８ｍｍｏｌ）をＮ_２雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、一晩撹拌した。反応混合物をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中５０～６０％の酢酸エチル）により精製して、白色固体として表題化合物（５８ｍｇ、４３％）を得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １０．５０（ｓ，１Ｈ），８．５８（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５５（ｔ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．８２（ｓ，１Ｈ），６．４６（ｄｄ，Ｊ＝１．３，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），６．３６（ｄｄ，Ｊ＝１０．０，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），５．８１（ｄｄ，Ｊ＝１．３，１０．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４６（ｓ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １７２．９，１６４．２，１４３．９，１３８．２，１３３．８，１３１．８，１２７．８，１１８．０，１１７．７，１１７．６，４５．６．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２０３．０８１５（Ｃ_１１Ｈ_１１Ｎ_２Ｏ_２）。観測値：２０３．０８１４．

Ｎ－（６－クロロピリダジン－３－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１５５）（２０）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の３－アミノ－６－クロロピリダジン（２６１ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）溶液に、塩化アクリロイル（０．２０ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３４ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温まで加温させ、一晩撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中４０％～５０％の酢酸エチル）により精製して、淡黄色固体として（２０）（２３ｍｇ、６％）を得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １０．０６（ｓ，１Ｈ），８．７０（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，１Ｈ），６．７３（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１６．８Ｈｚ，１Ｈ）６．５６（ｄｄ，Ｊ＝１．２，１６．８，１Ｈ），５．９４（ｄｄ，Ｊ＝１．２，１０．２Ｈｚ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６４．８，１５５．２，１５２．３，１３０．７，１３０．４，１３０．３，１２２．０．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１８２．０１２７（Ｃ_７Ｈ_５Ｎ_３ＯＣｌ）。観測値：１８２．０１２６

Ｎ－（４－メトキシフェニル）－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ペンチル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１７０）（２１）。ジクロロメタン（５ｍＬ）中の４－メトキシ－Ｎ－（ｔｅｒｔ－ペンチル）アニリン（９４ｍｇ、０．４９ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化アクリロイル（０．０５ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．０９ｍＬ、０．６ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下、０℃で加えた。１５分間撹拌した後、反応混合物を室温に加温させ、さらに１８時間撹拌した。次に、反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０％～２０％の酢酸エチル）により精製して、淡黄色油として表題化合物（８２ｍｇ、６８％）を得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．９９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．１７（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１６．７Ｈｚ，１Ｈ），５．７６（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，１６．７Ｈｚ，１Ｈ），５．２８（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８１（ｓ，３Ｈ），２．１１（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．２０（ｓ，６Ｈ），０．９１（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６６．３，１５９．０，１３４．３，１３１．４９，１３１．４５，１２５．６，１１４．１，６１．７，５５．５，３２．０，２７．４，９．４．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２４７．１５７２（Ｃ_１５Ｈ_２１ＮＯ_２）。観測値：２４７．１５７７．

Ｎ－（エキソ－ノルボルン－２－イル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１７６）（２２）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のエキソ－２－アミノノルボルナン（０．２４ｍＬ、２ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化アクリロイル（０．２０ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３３ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温に加温させ、さらに１８時間撹拌した。次に、反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０％の酢酸エチル）により精製して、白色固体として表題化合物（２７１ｍｇ、８２％）を得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．４２（ｓ，１Ｈ），６．２５（ｄｄ，Ｊ＝２．３，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），６．１８（ｄｄ，Ｊ＝９．５，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），５．５８（ｄｄ，Ｊ＝２．３，９．５Ｈｚ，１Ｈ），３．８－３．７７（ｍ，１Ｈ），２．２７－２．２４（ｍ，２Ｈ），１．７８（ｄｄｄ，Ｊ＝２．１，８．１，１３．０Ｈｚ，１Ｈ），１．５５－１．３８（ｍ，３Ｈ），１．３０－１．１０（ｍ，４Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．０，１３１．４，１２５．８，５２．９，４２．４，４０．０，３５．７，３５．６，２８．２，２６．６．ＨＲＭＳ（＋ＥＩ）：計算値：１６５．１１５４（Ｃ_１０Ｈ_１５ＮＯ）。観測値：１６５．１１５５．

Ｎ－（（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）－６，６－ジメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン－２－イル）メチル）アクリルアミド（ＴＲＨ１－１７８）（２３）。ジクロロメタン（１０ｍＬ）中の（－）－ｃｉｓ－ミルタニルアミン（０．３４ｍＬ、２ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化アクリロイル（０．２０ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）、続いてトリエチルアミン（０．３３ｍＬ、２．４ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下、０℃で加えた。２０分間撹拌した後、反応混合物を室温に加温させ、さらに２１時間撹拌した。次に、反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空中で濃縮した。得られた粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２０～３０％の酢酸エチル）により精製して、白色固体として表題化合物（３６９ｍｇ、８９％）を得た。

^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．２６（ｄｄ，Ｊ＝１．５，１７．０Ｈｚ，１Ｈ），６．１１（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，１７．０Ｈｚ，１Ｈ）５．８５（ｓ，１Ｈ），５．６１（ｄｄ，Ｊ＝１．５，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），３．３９－３．２９（ｍ，２Ｈ），２．３８－２．３４（ｍ，１Ｈ），２．２６－２．２１（ｍ，１Ｈ），１．９８－１．９０（ｍ，４Ｈ），１．８８－１．８３（ｍ，１Ｈ），１．５３－１．４７（ｍ，１Ｈ），１．１９（ｓ，３Ｈ），１．０４（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．７，１３１．２，１２６．２，４５．３，４３．９，４１．５，３８．８，３３．３，２８．１，２６．１，２３．３，１９．９．ＨＲＭＳ（－ＥＳＩ）：計算値：２０６．１５５０（Ｃ_１３Ｈ_２０ＮＯ）。観測値：２０６．１５５１．

Ｎ－（７－クロロ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＹＰ１－１）（２４）。ＰＥＧ４００（５．２ｍＬ）中のＮ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（１８７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、Ｎ－クロロスクシンイミド（１４０ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加えた。３０分後、混合物を室温に加温させ、一晩撹拌した。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、ブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。揮発性物質を真空中で除去し、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０％の酢酸エチル）によって精製した。得られた異性体の混合物を再結晶して、白色固体として表題化合物（４７ｍｇ、２２％収率）を得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．７８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ），７．１５－７．１１（ｍ，２Ｈ），６．４２（ｄｄ，Ｊ＝１．４，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．２６（ｄｄ，Ｊ＝１０．２，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７７（ｄｄ，Ｊ＝１．４，１０．２Ｈｚ，１Ｈ），２．９８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），２．８７（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），２．１２（五重項，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６３．４，１４３．１，１３６．１，１３２．２，１３１．０，１２８．０，１２７．２，１２６．７，１２０．９，３２．７，３１．１，２４．０．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２２０．０５３５（Ｃ_１２Ｈ_１１ＣｌＮＯ）。観測値：２２０．０５３３．

Ｎ－（２，３－ジメチルフェニル）アクリルアミド（ＹＰ１－１８）（２５）。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の２，３－ジメチルアニリン（１２１ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を連続して加えた。反応混合物をこの温度で３０分間維持し、次に室温に加温させ、一晩撹拌した。反応混合物をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。揮発性物質を真空中で除去し、粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中３０％～４０％の酢酸エチル）によって精製して、白色固体として生成物（１５４ｍｇ、８８％）を得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．４９（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），７．１１－７．０７（ｍ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝７．７，１Ｈ）６．４０（ｄ，Ｊ＝１７．１，１Ｈ），６．３０（ｄｄ，Ｊ＝７．３，１７．１Ｈｚ，１Ｈ），５．７４（ｄ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，１Ｈ），２．２９（ｓ，１Ｈ），２．１３（ｓ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １３５．１，１３１．２，１２７．６，１２７．３，１２５．９，１２２．３，２０．６，１３．９．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１７６．１０７０（Ｃ_１１Ｈ_１４ＮＯ）。観測値：１７６．１０６８．

Ｎ－（１Ｈ－インドール－４－イル）アクリルアミド（ＹＰ１－１９）（２６）。ＤＣＭ／ＤＭＦ（１：１（ｖ：ｖ）、１０ｍＬ）中の４－アミノインドール（１３２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を連続して加えた。反応混合物をこの温度で２６分間撹拌し、次に室温に加温させ、一晩撹拌した。反応混合物をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。揮発性物質を真空中で除去し、粗生成物を塩基性アルミナクロマトグラフィー（ヘキサン中６０％～７５％の酢酸エチル）によって精製して、白灰色固体として表題化合物（５６ｍｇ、３０％）を得た。

^１ＨＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ ７．５１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２４－７．２２（ｍ，２Ｈ），７．０８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），６．６４（ｄｄ，Ｊ＝１０．１，１６．７Ｈｚ，２Ｈ），６．３８（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１６．９Ｈｚ，１Ｈ），５．７８（ｄｄ，Ｊ＝１．７，１０．３Ｈｚ，１Ｈ），４．６（ｓ，１Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＭｅＯＤ）：δ １６５．０，１３７．２，１３１．１，１２９．２，１２６．０，１２３．８，１２１．５，１２０．９，１１２．２，１０８．４，９８．５．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１８７．０８６６（Ｃ_１１Ｈ_１１Ｎ_２Ｏ）。観測値：１８７．０８６５．

１－（４－メチル－１，４－ジアゼパム－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＹＰ１－２３）（２７）。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１－メチルホモピペラジン（１１４ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を連続して加えた。溶液をこの温度で３０分間維持し、次に室温に加温させ、一晩撹拌した。反応混合物をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。揮発性物質を真空中で除去した後、粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中１％～１０％のメタノール）によって精製して、黄色油として表題化合物（５８ｍｇ、５１％）を得た（回転異性体の混合物）。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．６１－６．５３（ｍ，１Ｈ），６．３５－６．２９（ｍ，１Ｈ），５．７０－５．６６（ｍ，１Ｈ），３．７４－３．７２（ｍ，１Ｈ），３．６９（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６５－３．６１（ｍ，２Ｈ），２．６６－２．６３（ｍ，２Ｈ），２．５９－２．５４（ｍ，２Ｈ），２．３７（ｓ，３Ｈ），１．９４（五重項，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６６．４，１６６．３，１２８．０，１２７．９，１２７．８，１２７．６，５９．１，５８．０，５７．１，５６．８，４７．４，４７．１，４６．７，４６．６，４５．３，４４．８，２８．１，２６．９．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１６９．１３３５（Ｃ_９Ｈ_１７Ｎ_２Ｏ）。観測値：１６９．１３３３．

１－（４－アセチルピペラジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＹＰ１－２４）（２８）。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１－アセチルピペラジン（１２８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を連続して加えた。溶液をこの温度で２３分間撹拌し、次に室温に加温させ、さらに２時間撹拌した。反応混合物をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、揮発性物質を真空中で除去した。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中０％～１０％のメタノール）によって精製して、黄色油として表題化合物（４０ｍｇ、１８％）を得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．５７（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄｄ，Ｊ＝１．８，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７５（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７２（ｓ，１Ｈ），３．６６－３．６４（ｍ，３Ｈ），３．５７（ｓ，１Ｈ），３．５１－３．４９（ｍ，２Ｈ），２．１３（ｓ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６９．０，１６５．６，１２８．７，１２７．０，４１．９，４１．４，２１．４．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：１８３．１１２８（Ｃ_９Ｈ_１５Ｎ_２Ｏ_２）。観測値：１８３．１１２６．

１－（４－（エチルスルホニル）ピペラジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＹＰ１－２５）（２９）。ＤＣＭ（１０ｍＬ）中の１－（エタンスルホニル）ピペラジン（１７８ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を０℃に冷却し、塩化アクリロイル（１０９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１２１ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を連続して加えた。溶液をこの温度で２７分間撹拌し、次に室温に加温させ、さらに２時間撹拌した。溶液をブラインで２回洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。粗物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ＤＣＭ中１％～１０％のメタノール）によって精製して、白黄色固体として表題化合物（１６３ｍｇ、７０％）を得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．５７（ｄｄ，Ｊ＝１０．５，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．３２（ｄｄ，Ｊ＝１．９，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．７６（ｄｄ，Ｊ＝１．８，１０．５Ｈｚ，１Ｈ），３．７７（ｓ，２Ｈ），３．６７（ｓ，２Ｈ），３．３２（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，４Ｈ），２．９８（ｑ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），１．３７（ｔ，Ｊ＝７．４，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．５，１２８．８，１２７．０，７７．４，４５．９，４５．６，４４．２，４１．９，７．８．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２３３．０９５４（Ｃ_９Ｈ_１７Ｎ_２Ｏ_３Ｓ_１）。観測値：２３３．０９５３．

１－（４－モルホリノピペリジン－１－イル）プロプ－２－エン－１－オン（ＹＰ１－４２）（３０）。４－モルホリノピペリジン（３３６ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）を使用する一般的手順Ａに従って、シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中１％のメタノールおよび８０％の酢酸エチル）の後に、生成物を無色油（２５９ｍｇ、５８％）として得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ６．４２（ｄｄ，Ｊ＝１０．６，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），６．０６（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１６．８Ｈｚ，１Ｈ），５．４９（ｄｄ，Ｊ＝２．０，１０．６Ｈｚ，１Ｈ），４．４５（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），３．８６（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），３．５２（ｔ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，４Ｈ），２．９０（ｔ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，１Ｈ），２．５５－２．４８（ｍ，１Ｈ），２．３７－２．３５（ｍ，４Ｈ），２．２６（ｔｔ，Ｊ＝３．７，１１．０Ｈｚ，１Ｈ），１．７２（ｄ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，２Ｈ），１．３０－１．２０（ｍ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．０，１２７．７，１２７．３，６７．１，６１．６，４９．６，４４．９，４１．１，２８．９，２７．８．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２２５．１５９８（Ｃ_１２Ｈ_２１Ｎ_２Ｏ_２）。観測値：２２５．１５９５．

Ｎ－アリル－Ｎ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＩＧＡ１－１２）（３１）。窒素雰囲気下で、テトラヒドロフラン（８ｍＬ）中の水素化ナトリウム（９６ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）の溶液に、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）中のＮ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（１８７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃に冷却し、３－ブロモプロプ－１－エン（４８４ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）を室温に加温させ、一晩撹拌した。水を加えることにより反応をクエンチし、酢酸エチルで抽出した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２０％の酢酸エチル）によって精製して、黄色結晶性固体として生成物（１５１ｍｇ、６７％）を得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．０６－７．１８（ｍ，２Ｈ），６．８０－６．８８（ｍ，１Ｈ），６．２６－６．３７（ｄｄ，Ｊ＝１６．８，２．０Ｈｚ，１Ｈ），５．７６－５．９６（ｍ，２Ｈ），５．３８－５．４８（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，２．１Ｈｚ，１Ｈ），４．９８－５．０８（ｍ，２Ｈ），４．４０－４．５２（ｄｄｔ，Ｊ＝１４．５，６．３，１．３Ｈｚ，１Ｈ），４．００－４．１１（ｄｄｔ，Ｊ＝１４．５，６．８，１．２Ｈｚ，１Ｈ），２．８２－２．９８（ｍ，２Ｈ），２．５９－２．７９（ｍ，２Ｈ），１．９２－２．０７（ｍ，２Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．１，１４６．５，１４２．４，１３７．９，１３３．０，１２８．４，１２７．８，１２７．４８，１２６．１，１２４．３，１１８．１，５１．６，３３．３，３０．９，２５．０．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２２８．１３（Ｃ_１５Ｈ_１７ＮＯ）。観測値：２２８．１３８１．

Ｎ－アリル－Ｎ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（ＩＧＡ１－１５）（３２）。窒素雰囲気下で、テトラヒドロフラン（８ｍＬ）中の水素化ナトリウム（９６ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）の溶液に、テトラヒドロフラン（２ｍＬ）中のＮ－（２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデン－４－イル）アクリルアミド（１８７ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を０℃に冷却し、１－ブロモヘキサン（６６０ｍｇ、４．０ｍｍｏｌ）を加えた後、溶液を室温に加温させ、一晩撹拌した。溶液を水でクエンチし、酢酸エチルで抽出した。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中２０％の酢酸エチル）によって精製して、黄色油として、収率３４％で、生成物（９２ｍｇ）を得た。

^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ ７．１１－７．２５（ｍ，２Ｈ），６．８６－６．９６（ｄｄ，Ｊ＝７．５，１．２Ｈｚ，１Ｈ），６．３０－６．４０（ｄｄ，Ｊ＝１６．８，２．１Ｈｚ，１Ｈ），５．８６－６．００（ｍ，１Ｈ），５．４１－５．５１（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，２．１Ｈｚ，１Ｈ），３．８２－３．９６（ｍ，１Ｈ），３．４２－３．５６（ｍ，１Ｈ），２．９０－３．０４（ｍ，２Ｈ），２．６５－２．８５（ｍ，２Ｈ），１．９８－２．１６（ｍ，２Ｈ），１．４７－１．６３（ｍ，２Ｈ），１．２０－１．３６（ｍ，６Ｈ），０．８０－０．９０（ｍ，３Ｈ）．^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）：δ １６５．２，１４６．５，１４２．４，１３８．２，１２８．６，１２７．５，１２７．４，１２６．１，１２４．１，４８．７，３３．３，３１．６，３０．９，２７．９，２６．７，２５．０，２２．６，１４．１．ＨＲＭＳ（＋ＥＳＩ）：計算値：２７２．１９（Ｃ_１８Ｈ_２５ＮＯ）。観測値：２７２．２００７．

実施例７～９に関連する参考文献
１．Ｎｏｍｕｒａ，Ｄ．Ｋ．＆Ｍａｉｍｏｎｅ，Ｔ．Ｊ．ＴａｒｇｅｔＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢｉｏａｃｔｉｖｅＣｏｖａｌｅｎｔｌｙＡｃｔｉｎｇＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ．Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４２０，３５１－３７４（２０１８）．２．Ｄｒａｈｌ，Ｃ．，Ｃｒａｖａｔｔ，Ｂ．Ｆ．＆Ｓｏｒｅｎｓｅｎ，Ｅ．Ｊ．Ｐｒｏｔｅｉｎ－ｒｅａｃｔｉｖｅｎａｔｕｒａｌｐｒｏｄｕｃｔｓ．Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．ＥｄＥｎｇｌ．４４，５７８８－５８０９（２００５）．３．Ｌｉｕ，Ｊ．ｅｔａｌ．Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎｉｓａｃｏｍｍｏｎｔａｒｇｅｔｏｆｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ－ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎＡａｎｄＦＫＢＰ－ＦＫ５０６ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．Ｃｅｌｌ６６，８０７－８１５（１９９１）．４．Ｃｏｈｅｎ，Ｅ．，Ｑｕｉｓｔａｄ，Ｇ．Ｂ．＆Ｃａｓｉｄａ，Ｊ．Ｅ．Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｎｉｍｂｏｌｉｄｅ，ｅｐｏｘｙａｚａｄｉｒａｄｉｏｎｅａｎｄｏｔｈｅｒｌｉｍｏｎｏｉｄｓｆｒｏｍｎｅｅｍｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅ．ＬｉｆｅＳｃｉ．５８，１０７５－１０８１（１９９６）．５．Ｂｏｄｄｕｌｕｒｕ，Ｌ．Ｎ．，Ｋａｓａｌａ，Ｅ．Ｒ．，Ｔｈｏｔａ，Ｎ．，Ｂａｒｕａ，Ｃ．Ｃ．＆Ｓｉｓｔｌａ，Ｒ．Ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅａｎｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｆｎｉｍｂｏｌｉｄｅｉｎｃａｎｃｅｒ：ｔｈｅｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．ＶｉｔｒｏＩｎｔ．Ｊ．Ｐｕｂｌ．Ａｓｓｏｃ．ＢＩＢＲＡ２８，１０２６－１０３５（２０１４）．６．Ｓｕｂｒａｍａｎｉ，Ｒ．ｅｔａｌ．ＮｉｍｂｏｌｉｄｅｉｎｈｉｂｉｔｓｐａｎｃｒｅａｔｉｃｃａｎｃｅｒｇｒｏｗｔｈａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｔｈｒｏｕｇｈＲＯＳ－ｍｅｄｉａｔｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ－ｔｏ－ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ．Ｓｃｉ．Ｒｅｐ．６，１９８１９（２０１６）．７．Ｈａｏ，Ｆ．，Ｋｕｍａｒ，Ｓ．，Ｙａｄａｖ，Ｎ．＆Ｃｈａｎｄｒａ，Ｄ．Ｎｅｅｍｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓａｓｐｏｔｅｎｔｉａｌａｇｅｎｔｓｆｏｒｃａｎｃｅｒｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ１８４６，２４７－２５７（２０１４）．８．Ｇｕｐｔａ，Ｓ．Ｃ．，Ｐｒａｓａｄ，Ｓ．，Ｔｙａｇｉ，Ａ．Ｋ．，Ｋｕｎｎｕｍａｋｋａｒａ，Ａ．Ｂ．＆Ａｇｇａｒｗａｌ，Ｂ．Ｂ．Ｎｅｅｍ（Ａｚａｄｉｒａｃｈｔａｉｎｄｉｃａ）：Ａｎｉｎｄｉａｎｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｐａｎａｃｅａｗｉｔｈｍｏｄｅｒｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｂａｓｉｓ．ＰｈｙｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅＩｎｔ．Ｊ．Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ．Ｐｈｙｔｏｐｈａｒｍ．３４，１４－２０（２０１７）．９．Ｂｕｒｓｌｅｍ，Ｇ．Ｍ．＆Ｃｒｅｗｓ，Ｃ．Ｍ．Ｓｍａｌｌ－ＭｏｌｅｃｕｌｅＭｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆＰｒｏｔｅｉｎＨｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１１７，１１２６９－１１３０１（２０１７）．１０．Ｌａｉ，Ａ．Ｃ．＆Ｃｒｅｗｓ，Ｃ．Ｍ．Ｉｎｄｕｃｅｄｐｒｏｔｅｉｎｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ：ａｎｅｍｅｒｇｉｎｇｄｒｕｇｄｉｓｃｏｖｅｒｙｐａｒａｄｉｇｍ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖ．１６，１０１－１１４（２０１７）．１１．Ｂｉａｎｃｈｉｎｉ，Ｇ．，Ｂａｌｋｏ，Ｊ．Ｍ．，Ｍａｙｅｒ，Ｉ．Ａ．，Ｓａｎｄｅｒｓ，Ｍ．Ｅ．＆Ｇｉａｎｎｉ，Ｌ．Ｔｒｉｐｌｅ－ｎｅｇａｔｉｖｅｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ：ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓａｎｄｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓｏｆａｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓｄｉｓｅａｓｅ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１３，６７４－６９０（２０１６）．１２．Ｗｅｅｒａｐａｎａ，Ｅ．ｅｔａｌ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｒｅａｃｔｉｖｉｔｙｐｒｏｆｉｌｉｎｇｐｒｅｄｉｃｔｓｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｃｙｓｔｅｉｎｅｓｉｎｐｒｏｔｅｏｍｅｓ．Ｎａｔｕｒｅ４６８，７９０－７９５（２０１０）．１３．Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ａ．Ｍ．，Ｗａｒｄ，Ｃ．Ｃ．＆Ｎｏｍｕｒａ，Ｄ．Ｋ．Ａｃｔｉｖｉｔｙ－ｂａｓｅｄｐｒｏｔｅｉｎｐｒｏｆｉｌｉｎｇｆｏｒｍａｐｐｉｎｇａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｌｙｉｎｔｅｒｒｏｇａｔｉｎｇｐｒｏｔｅｏｍｅ－ｗｉｄｅｌｉｇａｎｄａｂｌｅｈｏｔｓｐｏｔｓ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．４３，２５－３３（２０１７）．１４．Ｇｒｏｓｓｍａｎ，Ｅ．Ａ．ｅｔａｌ．ＣｏｖａｌｅｎｔＬｉｇａｎｄＤｉｓｃｏｖｅｒｙａｇａｉｎｓｔＤｒｕｇｇａｂｌｅＨｏｔｓｐｏｔｓＴａｒｇｅｔｅｄｂｙＡｎｔｉ－ｃａｎｃｅｒＮａｔｕｒａｌＰｒｏｄｕｃｔｓ．ＣｅｌｌＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２４，１３６８－１３７６．ｅ４（２０１７）．１５．Ｂａｃｋｕｓ，Ｋ．Ｍ．ｅｔａｌ．Ｐｒｏｔｅｏｍｅ－ｗｉｄｅｃｏｖａｌｅｎｔｌｉｇａｎｄｄｉｓｃｏｖｅｒｙｉｎｎａｔｉｖｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓｙｓｔｅｍｓ．Ｎａｔｕｒｅ５３４，５７０－５７４（２０１６）．１６．Ｗａｎｇ，Ｃ．，Ｗｅｅｒａｐａｎａ，Ｅ．，Ｂｌｅｗｅｔｔ，Ｍ．Ｍ．＆Ｃｒａｖａｔｔ，Ｂ．Ｆ．Ａｃｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃｐｌａｔｆｏｒｍｔｏｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｌｙｍａｐｔａｒｇｅｔｓｏｆｌｉｐｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄｅｌｅｃｔｒｏｐｈｉｌｅｓ．Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ１１，７９－８５（２０１４）．１７．Ｈａｎ，Ｊ．ｅｔａｌ．ＺＮＦ３１３ｉｓａｎｏｖｅｌｃｅｌｌｃｙｃｌｅａｃｔｉｖａｔｏｒｗｉｔｈａｎＥ３ｌｉｇａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｃｅｌｌｕｌａｒｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅｂｙｄｅｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇｐ２１（ＷＡＦ１．）．ＣｅｌｌＤｅａｔｈＤｉｆｆｅｒ．２０，１０５５－１０６７（２０１３）．１８．Ｌｅｅ，Ｍ．－Ｇ．ｅｔａｌ．ＸＡＦ１ｄｉｒｅｃｔｓａｐｏｐｔｏｔｉｃｓｗｉｔｃｈｏｆｐ５３ｓｉｇｎａｌｉｎｇｔｈｒｏｕｇｈａｃｔｉｖａｔｉｏｎｏｆＨＩＰＫ２ａｎｄＺＮＦ３１３．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１１，１５５３２－１５５３７（２０１４）．１９．Ｈｕａｎｇ，Ｓ．ｅｔａｌ．ＴｈｅＵｂＬ－ＵＢＡＵｂｉｑｕｉｌｉｎ４ｐｒｏｔｅｉｎｆｕｎｃｔｉｏｎｓａｓａｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｉｎｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒｂｙｐ５３－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔａｎｄｐ５３－ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｐ２１．ＣｅｌｌＤｅａｔｈＤｉｆｆｅｒ．２６，５１６－５３０（２０１９）．２０．Ａｂｂａｓ，Ｔ．＆Ｄｕｔｔａ，Ａ．ｐ２１ｉｎｃａｎｃｅｒ：ｉｎｔｒｉｃａｔｅｎｅｔｗｏｒｋｓａｎｄｍｕｌｔｉｐｌｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ９，４００－４１４（２００９）．２１．Ｇｕｏ，Ｈ．，Ｔｉａｎ，Ｔ．，Ｎａｎ，Ｋ．＆Ｗａｎｇ，Ｗ．ｐ５７：Ａｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｐｒｏｔｅｉｎｉｎｃａｎｃｅｒ（Ｒｅｖｉｅｗ）．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．３６，１３２１－１３２９（２０１０）．２２．Ｚｅｎｇｅｒｌｅ，Ｍ．，Ｃｈａｎ，Ｋ．－Ｈ．＆Ｃｉｕｌｌｉ，Ａ．ＳｅｌｅｃｔｉｖｅＳｍａｌｌＭｏｌｅｃｕｌｅＩｎｄｕｃｅｄＤｅｇｒａｄａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＢＥＴＢｒｏｍｏｄｏｍａｉｎＰｒｏｔｅｉｎＢＲＤ４．ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１０，１７７０－１７７７（２０１５）．２３．Ｗｉｎｔｅｒ，Ｇ．Ｅ．ｅｔａｌ．ＤＲＵＧＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴ．Ｐｈｔｈａｌｉｍｉｄｅｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎａｓａｓｔｒａｔｅｇｙｆｏｒｉｎｖｉｖｏｔａｒｇｅｔｐｒｏｔｅｉｎｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．Ｓｃｉｅｎｃｅ３４８，１３７６－１３８１（２０１５）．２４．Ｈａｖｅｎｓ，Ｃ．Ｇ．＆Ｗａｌｔｅｒ，Ｊ．Ｃ．ＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＣＲＬ４（Ｃｄｔ２），ａＰＣＮＡ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔＥ３ｕｂｉｑｕｉｔｉｎｌｉｇａｓｅ．ＧｅｎｅｓＤｅｖ．２５，１５６８－１５８２（２０１１）．２５．Ｋｉｔａｇａｗａ，Ｋ．，Ｋｏｔａｋｅ，Ｙ．＆Ｋｉｔａｇａｗａ，Ｍ．Ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄｃｏｎｔｒｏｌｏｆｏｎｃｏｇｅｎｅａｎｄｔｕｍｏｒｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒｇｅｎｅｐｒｏｄｕｃｔｓ．ＣａｎｃｅｒＳｃｉ．１００，１３７４－１３８１（２００９）．２６．Ｂｉｓｗａｓ，Ｋ．ｅｔａｌ．ＴｈｅＥ３ＬｉｇａｓｅＣＨＩＰＭｅｄｉａｔｅｓｐ２１ＤｅｇｒａｄａｔｉｏｎｔｏＭａｉｎｔａｉｎＲａｄｉｏｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｍｏｌ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．ＭＣＲ１５，６５１－６５９（２０１７）．２７．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，Ｍ．Ｓ．ｅｔａｌ．ＴｈｅＲＩＮＧｕｂｉｑｕｉｔｉｎＥ３ＲＮＦ１１４ｉｎｔｅｒａｃｔｓｗｉｔｈＡ２０ａｎｄｍｏｄｕｌａｔｅｓＮＦ－κＢａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄＴ－ｃｅｌｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．ＣｅｌｌＤｅａｔｈＤｉｓ．５，ｅ１３９９（２０１４）．２８．Ｙａｎｇ，Ｙ．ｅｔａｌ．ＴｈｅＥ３ｕｂｉｑｕｉｔｉｎｌｉｇａｓｅＲＮＦ１１４ａｎｄＴＡＢ１ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎａｒｅｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｍａｔｅｒｎａｌ－ｔｏ－ｚｙｇｏｔｉｃｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ．ＥＭＢＯＲｅｐ．１８，２０５－２１６（２０１７）．２９．Ｒａｐｅ，Ｍ．Ｕｂｉｑｕｉｔｙｌａｔｉｏｎａｔｔｈｅｃｒｏｓｓｒｏａｄｓｏｆｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｄｉｓｅａｓｅ．Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｍｏｌ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．１９，５９－７０（２０１８）．３０．Ｈｕｇｈｅｓ，Ｓ．Ｊ．＆Ｃｉｕｌｌｉ，Ａ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｏｆｔｅｒｎａｒｙｃｏｍｐｌｅｘｅｓ：ａｎｅｗｄｉｍｅｎｓｉｏｎｉｎｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ｇｕｉｄｅｄｄｅｓｉｇｎｏｆｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｇｒａｄｅｒｓ．ＥｓｓａｙｓＢｉｏｃｈｅｍ．６１，５０５－５１６（２０１７）．３１．Ｇａｄｄ，Ｍ．Ｓ．ｅｔａｌ．ＳｔｒｕｃｔｕｒａｌｂａｓｉｓｏｆＰＲＯＴＡＣｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎｆｏｒｓｅｌｅｃｔｉｖｅｐｒｏｔｅｉｎｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３，５１４－５２１（２０１７）．３２．Ｎｏｗａｋ，Ｒ．Ｐ．ｅｔａｌ．Ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙｉｎｂｉｎｄｉｎｇｃｏｎｆｅｒｓｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙｉｎｌｉｇａｎｄ－ｉｎｄｕｃｅｄｐｒｏｔｅｉｎｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ．Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１４，７０６－７１４（２０１８）．３３．Ｊｅｓｓａｎｉ，Ｎ．ｅｔａｌ．Ｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｓｔｒｏｍａｌｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙｐｒｏｆｉｌｅｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｂｒｅａｓｔｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈｉｎｖｉｖｏ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１０１，１３７５６－１３７６１（２００４）．３４．Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｅ．，Ｔｏ，Ｍ．，Ｏｌｚｍａｎｎ，Ｊ．Ａ．＆Ｎｏｍｕｒａ，Ｄ．Ｋ．Ｃｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ－ＥｎａｂｌｅｄＣｏｖａｌｅｎｔＬｉｇａｎｄＳｃｒｅｅｎｉｎｇＲｅｖｅａｌｓａＴｈｉｏｒｅｄｏｘｉｎ－Ｃａｓｐａｓｅ３ＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎＤｉｓｒｕｐｔｏｒＴｈａｔＩｍｐａｉｒｓＢｒｅａｓｔＣａｎｃｅｒＰａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１２，２５２２－２５２８（２０１７）．３５．Ｓｍｉｔｈ，Ｐ．Ｋ．ｅｔａｌ．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆｐｒｏｔｅｉｎｕｓｉｎｇｂｉｃｉｎｃｈｏｎｉｎｉｃａｃｉｄ．Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．１５０，７６－８５（１９８５）．３６．Ｘｕ，Ｔ．ｅｔａｌ．ＰｒｏＬｕＣＩＤ：ＡｎｉｍｐｒｏｖｅｄＳＥＱＵＥＳＴ－ｌｉｋｅａｌｇｏｒｉｔｈｍｗｉｔｈｅｎｈａｎｃｅｄｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ．Ｊ．Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ１２９，１６－２４（２０１５）．３７．Ｂａｔｅｍａｎ，Ｌ．Ａ．ｅｔａｌ．Ｃｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ－ｅｎａｂｌｅｄｃｏｖａｌｅｎｔｌｉｇａｎｄｓｃｒｅｅｎｒｅｖｅａｌｓａｃｙｓｔｅｉｎｅｈｏｔｓｐｏｔｉｎｒｅｔｉｃｕｌｏｎ４ｔｈａｔｉｍｐａｉｒｓＥＲｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｃａｎｃｅｒｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．Ｃａｍｂ．Ｅｎｇｌ．５３，７２３４－７２３７（２０１７）．３８．Ｃｏｕｎｉｈａｎ，Ｊ．Ｌ．，Ｗｉｇｇｅｎｈｏｒｎ，Ａ．Ｌ．，Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｋ．Ｅ．＆Ｎｏｍｕｒａ，Ｄ．Ｋ．Ｃｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ－ＥｎａｂｌｅｄＣｏｖａｌｅｎｔＬｉｇａｎｄＳｃｒｅｅｎｉｎｇＲｅｖｅａｌｓＡＬＤＨ３Ａ１ａｓａＬｕｎｇＣａｎｃｅｒＴｈｅｒａｐｙＴａｒｇｅｔ．ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３（８），１９７０－１９７７（２０１８）．３９．Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ａ．Ｍ．ｅｔａｌ．ＣｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆＣｏｖａｌｅｎｔＬｉｇａｎｄｓＲｅｖｅａｌｓＵＢＡ５ＡｓａＮｏｖｅｌＰａｎｃｒｅａｔｉｃＣａｎｃｅｒＴａｒｇｅｔ．ＡＣＳＣｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１２，８９９－９０４（２０１７）．４０．Ｋｏｋｏｓｚａ，Ｋ．，Ｂａｌｚａｒｉｎｉ，Ｊ．＆Ｐｉｏｔｒｏｗｓｋａ，Ｄ．Ｇ．Ｎｏｖｅｌ５－Ａｒｙｌｃａｒｂａｍｏｙｌ－２－ｍｅｔｈｙｌｉｓｏｘａｚｏｌｉｄｉｎ－３－ｙｌ－３－ｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓａｓＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅＡｎａｌｏｇｕｅｓ．ＮｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓＮｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓ３３，５５２－５８２（２０１４）．４１．Ｔａｌａｔｙ，Ｅ．Ｒ．，Ｙｏｕｎｇ，Ｓ．Ｍ．，Ｄａｉｎ，Ｒ．Ｐ．＆Ｓｔｉｐｄｏｎｋ，Ｍ．Ｊ．Ｖ．Ａｓｔｕｄｙｏｆｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｏｎａｔｅｄａｍｉｄｅｓｏｆｓｏｍｅａｃｙｌａｔｅｄａｍｉｎｏａｃｉｄｓｂｙｔａｎｄｅｍｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ：ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆａｎｕｎｕｓｕａｌｎｉｔｒｉｌｉｕｍｉｏｎ．ＲａｐｉｄＣｏｍｍｕｎ．ＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍ．２５，１１１９－１１２９（２０１１）．４２．Ｔｉｍｏｋｈｉｎ，Ｖ．Ｉ．，Ｇａｓｔａｌｄｉ，Ｓ．，Ｂｅｒｔｒａｎｄ，Ｍ．Ｐ．＆Ｃｈａｔｇｉｌｉａｌｏｇｌｕ，Ｃ．ＲａｔｅＣｏｎｓｔａｎｔｓｆｏｒｔｈｅ β－ＥｌｉｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＴｏｓｙｌＲａｄｉｃａｌｆｒｏｍａＶａｒｉｅｔｙｏｆＳｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄＣａｒｂｏｎ－ＣｅｎｔｅｒｅｄＲａｄｉｃａｌｓ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６８，３５３２－３５３７（２００３）．４３．Ｃｅｅ，Ｖ．Ｊ．ｅｔａｌ．ＳｙｓｔｅｍａｔｉｃＳｔｕｄｙｏｆｔｈｅＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ（ＧＳＨ）ＲｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＮ－Ａｒｙｌａｃｒｙｌａｍｉｄｅｓ：１．ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＡｒｙｌＳｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５８，９１７１－９１７８（２０１５）．４４．ＬｅＳａｎｎ，Ｃ．，Ｈｕｄｄｌｅｓｔｏｎ，Ｊ．＆Ｍａｎｎ，Ｊ．ＳｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｎｏｖｅｌａｎａｌｏｇｕｅｓｏｆｑｕｉｎｄｏｌｉｎｅｓａｓｐｏｔｅｎｔｉａｌｓｔａｂｉｌｉｓｅｒｓｏｆｔｅｌｏｍｅｒｉｃＧ－ｑｕａｄｒｕｐｌｅｘＤＮＡ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ６３，１２９０３－１２９１１（２００７）．４５．Ｉｋｏｍａ，Ｍ．，Ｏｉｋａｗａ，Ｍ．＆Ｓａｓａｋｉ，Ｍ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｄｏｍｉｎｏｍｅｔａｔｈｅｓｉｓｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ７－ｏｘａｎｏｒｂｏｒｎｅｎｅａｎａｌｏｇｓｔｏｗａｒｄｃｉｓ－ｆｕｓｅｄｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｓ．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ６４，２７４０－２７４９（２００８）．４６．Ｃｈｏ，Ｓ．－Ｄ．ｅｔａｌ．ＡＯｎｅ－ＰｏｔＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＰｙｒｉｄｏ［２，３－ｂ］［１，４］ｏｘａｚｉｎ－２－ｏｎｅｓ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６８，７９１８－７９２０（２００３）．４７．Ｍａｇｏｌａｎ，Ｊ．，Ｃａｒｓｏｎ，Ｃ．Ａ．＆Ｋｅｒｒ，Ｍ．Ａ．ＴｏｔａｌＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆ（±）－Ｍｅｒｓｉｃａｒｐｉｎｅ．Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．１０，１４３７－１４４０（２００８）．４８．Ｌｏｎｇｏ，Ｐ．Ａ．，Ｋａｖｒａｎ，Ｊ．Ｍ．，Ｋｉｍ，Ｍ．－Ｓ．＆Ｌｅａｈｙ，Ｄ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｉｅｎｔｍａｍｍａｌｉａｎｃｅｌｌｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｉｍｉｎｅ（ＰＥＩ）．ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ．５２９，２２７－２４０（２０１３）．４９．Ｌｉ，Ｃ．ｅｔａｌ．ＦａｓｔＣｌｏｎｉｎｇ：ａｈｉｇｈｌｙｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ－ｆｒｅｅ，ｓｅｑｕｅｎｃｅ－ａｎｄｌｉｇａｔｉｏｎ－ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔＰＣＲｃｌｏｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄ．ＢＭＣＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１１，９２（２０１１）．５０．Ｔｈｏｍａｓ，Ｊ．Ｒ．ｅｔａｌ．ＡＰｈｏｔｏａｆｆｉｎｉｔｙＬａｂｅｌｉｎｇ－ＢａｓｅｄＣｈｅｍｏｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓＳｔｒａｔｅｇｙｆｏｒＵｎｂｉａｓｅｄＴａｒｇｅｔＤｅｃｏｎｖｏｌｕｔｉｏｎｏｆＳｍａｌｌＭｏｌｅｃｕｌｅＤｒｕｇＣａｎｄｉｄａｔｅｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．ＣｌｉｆｔｏｎＮＪ１６４７，１－１８（２０１７）．５１．Ｋａｌｌ，Ｌ．，Ｃａｎｔｅｒｂｕｒｙ，Ｊ．Ｄ．，Ｗｅｓｔｏｎ，Ｊ．，Ｎｏｂｌｅ，Ｗ．Ｓ．＆ＭａｃＣｏｓｓ，Ｍ．Ｊ．Ｓｅｍｉ－ｓｕｐｅｒｖｉｓｅｄｌｅａｒｎｉｎｇｆｏｒｐｅｐｔｉｄｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｆｒｏｍｓｈｏｔｇｕｎｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓｄａｔａｓｅｔｓ．Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ４，９２３－９２５（２００７）．

Claims

結合剤リンカーを介して標的タンパク質結合剤に共有結合しているＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤の一価形態を含む化合物またはその薬学的に許容される塩であって、前記Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤は、

であり、
式中、
Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９およびＲ^１０は独立して、水素、ハロゲン、－ＣＣｌ_３、－ＣＢｒ_３、－ＣＦ_３、－ＣＩ_３、－ＣＨＣｌ_２、－ＣＨＢｒ_２、－ＣＨＦ_２、－ＣＨＩ_２、－ＣＨ_２Ｃｌ、－ＣＨ_２Ｂｒ、－ＣＨ_２Ｆ、－ＣＨ_２Ｉ、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ_２、－ＮＯ_２、－ＳＨ、－ＳＯ_３Ｈ、－ＳＯ_４Ｈ、－ＳＯ_２ＮＨ_２、－ＮＨＮＨ_２、－ＯＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＮＨ_２、－ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ_２、－ＮＨＳＯ_２Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＣｌ_３、－ＯＣＦ_３、－ＯＣＢｒ_３、－ＯＣＩ_３、－ＯＣＨＣｌ_２、－ＯＣＨＢｒ_２、－ＯＣＨＩ_２、－ＯＣＨＦ_２、－ＯＣＨ_２Ｃｌ、－ＯＣＨ_２Ｂｒ、－ＯＣＨ_２Ｉ、－ＯＣＨ_２Ｆ、－Ｎ_３、－ＳＦ_５、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、または置換もしくは非置換ヘテロアリール、あるいは前記結合剤リンカーへの結合であり、
ここで、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５、Ｒ^６、Ｒ^７、Ｒ^８、Ｒ^９またはＲ^１０のうちの１つだけが前記結合剤リンカーへの結合であり、

は、単結合または二重結合であり、または

式中、
Ｒ ^１は、ハロゲンであり、
ｚ１は、０または１であり、
ｚ２は、１であり、およびＲ ^２は、前記結合剤リンカーへの結合であり、
Ｌ ^３は、－Ｎ（Ｒ ^３）－または－Ｎ（Ｈ）－であり、
Ｒ ^３は、Ｒ ^３１－置換メチルであり、
Ｒ ^３１は、独立して、非置換フェニルであり、
Ｒ ^４は、Ｅであり、
Ｅは、

であり、ならびに
Ｘ ^１７は、独立して、Ｃｌである、化合物またはその薬学的に許容される塩。
Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、

である、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩。
ｚ１が０である、請求項２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
Ｌ^３が、－Ｎ（Ｒ^３）－である、請求項２に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
前記Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、以下の式：

の一価形態である、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
前記Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、以下の式：

の一価形態である、請求項５に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
前記Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、以下の式：

の一価形態である、請求項５に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
前記Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、以下の式：

の一価形態である、請求項５に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
前記Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、以下の式：

を有する、請求項５に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
前記Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤が、以下の式：

を有する、請求項５に記載の化合物、またはその薬学的に許容される塩。
請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤と、を含む、薬学的組成物。
細胞タンパク質の濃度を低下させる方法において使用するための組成物であって、前記組成物は請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を含み、前記方法は、前記細胞タンパク質を、請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩と接触させることを含む、組成物。
請求項１～１０のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩の治療有効量を含む、癌を治療するための薬学的組成物。
Ｅ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－細胞タンパク質複合体を作製する方法であって、
Ａ）前記Ｅ３ユビキチンリガーゼを請求項１～１０のいずれか一項に記載のＥ３ユビキチンリガーゼ結合剤と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を形成することと、
Ｂ）前記Ｅ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤複合体を前記細胞タンパク質と接触させ、それによりＥ３ユビキチンリガーゼ－Ｅ３ユビキチンリガーゼ結合剤－細胞タンパク質複合体を形成することと、を含む、方法。