JP7650966B2 - 心房細動の評価における、循環中の総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ（グリコシル化および非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）ならびにそのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ（非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）との比率 - Google Patents

Description

発明の分野
本発明は、対象における心房細動を診断するための方法であって、ａ）対象由来のサンプル中の総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量を決定する工程、ｂ）対象由来のサンプル中の非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量を決定する工程、ｃ）工程ａ）およびｂ）で決定された量のスコアを算出する工程、ｄ）算出したスコアを基準スコアと比較する工程、ならびにｅ）対象における心房細動を診断する工程を含む、方法に関する。

発明の背景
心房細動は、最も一般的な心不整脈である。しかしながら、心房細動（ＡＦ）は患者に認識されていないことが多い。これにより、約４０％の患者において、心房細動の診断において病歴聴取が心房細動の診断に対して非感受性であることが示唆される（Ｋａｍｅｌ Ｈ．ら，Ｃｕｒｒ Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒ Ｒｅｐ ２０１１：１３：３３８－３４３）。

心房細動を見つけるための標準的検査法は、好ましくは２４時間ＥＣＧ（ホルダー心電図）として行われる心電図（ＥＣＧ）である。しかしながら、ホルター心電図は、不整脈がＥＣＧ記録の２４時間の期間に発生した場合にのみ心房細動を検出し得る。

いくつかの刊行物は、増強されたレベルのバイオマーカーと心房細動との関連性を示唆している（Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ Ａｔｒｉａｌ Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇ Ｂｉｏｌｏｇｉｃ Ｐｌａｕｓｉｂｉｌｉｔｙ，Ｃａｕｓｅ，ａｎｄ Ｅｆｆｅｃｔ Ｒ．Ｂｅｃｋｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｓｉｓ １９（１），７１－７５，２００５）。

例えば、Ｂｕｅｔｔｎｅｒらは、Ｎ末端（ＮＴ）－ｐｒｏＢＮＰおよびＮＴ－ｐｒｏＡＮＰレベルと３つの心房細動（ＡＦ）進行表現型との関連性を調査している。ナトリウム利尿ペプチドは、ＡＦ進行の表現型に対して異なる感受性を示すことが示された（Ｒｏｌｅ ｏｆ ＮＴ－ｐｒｏＡＮＰ ａｎｄ ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ：Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａｔｒｉａｌ ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ，Ｂuｔｔｎｅｒ，Ｐｅｔｒａら．Ｈｅａｒｔ Ｒｈｙｔｈｍ，Ｖｏｌｕｍｅ １５，Ｉｓｓｕｅ ８，１１３２－１１３７）。

国際公開第２０１４／０７２５００号には、最近の心房細動の評価にＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを用い得ることが開示されている。

Ｃｈａｎｇらは、心房細動（Ａｆｉｂ）の評価においてＮＴｐｒｏＢＮＰ（および他のバイオマーカー）を使用することを開示している。ＢＮＰおよびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰは、心房細動発生率、術後心房細動発生率、および心房細動の予後に関連することが示されている（Ｃｈａｎｇら：Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ Ａｔｒｉａｌ Ｆｉｂｒｉｌｌａｔｉｏｎ，Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ １３０，Ｎｏ １２，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０１７）。

脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）は、３２アミノ酸のポリペプチドである。ＢＮＰは、１３４アミノ酸のプレ－プロホルモン（「プレ－ｐｒｏＢＮＰ」）として合成される。２６アミノ酸の長さを有するＮ末端シグナルペプチドを除去することにより、プロホルモン（「ｐｒｏＢＮＰ」、１０８ａａ長）が作製される。その後、プロホルモンは、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ（プロホルモン脳性ナトリウム利尿ペプチドのＮ末端、長さ７６ａａ）および生物学的に活性な脳性ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）に切断される。ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＢＮＰは等モル量で産生される。いくつかの研究は、ＢＮＰおよびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのアッセイが心不全の診断に確実に使用され得ることを示した（例えば、Ｐｒｏｎｔｅｒａら，Ｃｌｉｎｉｃａ Ｃｈｉｍｉｃａ Ａｃｔａ ４００（２００９）７０－７３を参照されたい）。

Ｂ型ナトリウム利尿ペプチド（ＢＮＰ）およびＮ末端ｐｒｏＢＮＰ（ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）は、壁の伸長および体積負荷の増大に応答して心臓において産生されるペプチドである（例えば、Ｓｅｍｅｎｏｗら，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ６５：９（２０１９）１０７０－７２を参照されたい）。

Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらは、Ｂ型ナトリウム利尿ペプチドの前駆体がＯ結合型糖タンパク質であることを報告した（Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら，Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ ２００６；４５１）。現在までに、ｐｒｏＢＮＰおよびＮＴｐｒｏＢＮＰには、９つの既知のＯ－グリコシル化部位が存在することが知られている（Ｈａｌｆｉｎｇｅｒら：Ｕｎｒａｖｅｌｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙ ｏｆ Ｏ－Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ（Ｎ－Ｔｅｒｍｉｎａｌ）ｐｒｏ－Ｂ－ＴｙｐｅＮａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｆｏｒｍｓ ｉｎ Ｂｌｏｏｄ Ｐｌａｓｍａ ｏｆ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｓｅｖｅｒｅ Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌｕｒｅ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ６３：１，３５９－３６８（２０１７））。

最近、アミノ末端（ＮＴ）－ｐｒｏＢＮＰおよびＢＮＰの産生における潜在的な調節機構として、ｐｒｏＢＮＰグリコシル化が浮上してきた（例えば、Ｖｏｄｏｖａｒら，Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅａｒｔ Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｖｏｌｕｍｅ ３５，Ｉｓｓｕｅ ４８，２１ Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０１４，Ｐａｇｅｓ ３４３４－３４４１を参照されたい）。ｐｒｏＢＮＰ分子内の９つの同定されたグリカン結合部位の中で、ｐｒｏＢＮＰ切断部位に近い領域のグリコシル化は、ｐｒｏＢＮＰの酵素媒介プロセシングの調節において極めて重要な役割を果たすことが示された（Ｓｅｍｅｎｏｗら，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ６５：９（２０１９）１０７１）。慢性ＨＦを有する患者は、急性非代償性ＨＦおよび非急性非代償性ＨＦを有する患者と比較して、グリコシル化ｐｒｏＢＮＰの割合が最も高かった（例えば、Ｖｏｄｏｖａｒら）。Ｓｅｍｅｎｏｗらは、慢性ＨＦでは、ＢＮＰに十分に変換されないグリコシル化ＰｒｏＢＮＰの放出の増加は、ｐｒｏＢＮＰの測定濃度が高いにもかかわらず、比較的少量の活性ホルモンをもたらすと仮定している。

Ｒｏｓｓｊｉらは、選択されていない呼吸困難患者におけるＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの診断および予後精度に対するグリコシル化の影響を調べ、呼吸困難を呈する患者、特に心不全が確認された患者の血漿サンプル中の脱グリコシル化酵素の使用によって、ＮＴｐｒｏＢＮＰ１～７６から糖部分を除去すると、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ濃度が高くなることを見出した。（Ｈｅｌｇｅ Ｒoｓｊoら：Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｏｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ａｎｄ Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ Ａｃｃｕｒａｃｙ ｏｆ Ｎ－Ｔｅｒｍｉｎａｌ Ｐｒｏ－Ｂ－Ｔｙｐｅ Ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎ Ａｃｕｔｅ Ｄｙｓｐｎｅａ：Ｄａｔａ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ａｋｅｒｓｈｕｓ Ｃａｒｄｉａｃ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ２．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ６１：８，１０８７－１０９７（２０１５）．

Ｌｅｗｉｓらの研究では、全ｐｒｏＢＮＰ（グリコシル化＋非グリコシル化ｐｒｏＢＮＰ）、トレオニン７１でグリコシル化されていないｐｒｏＢＮＰ、および中央領域でグリコシル化されていないｐｒｏＢＮＰを区別するためのアッセイが開発された。トレオニン７１でグリコシル化されていないｐｒｏＢＮＰは、心不全の患者において肥満と共に減少することが示された（Ｓｅｍｅｎｏｗら，２０１９；Ｌｅｗｉｓら，Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ ２０１９；６５：１１１５－２４）。

これまでのところ、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ（またはその前駆体ｐｒｏＢＮＰ）のグリコシル化が心房細動において役割を果たしているかどうかは評価されていない。有利には、本発明の基礎となる研究において、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよび非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの両方の測定、ならびに総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよび非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量（比率など）に基づくスコアの計算により、心房細動の信頼性の高い評価が可能になることが見出された。興味深いことに、２つのバイオマーカー、すなわち総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよび非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに基づく評価は、単独で測定した場合のバイオマーカーに基づく評価よりも良好である。

したがって、対象における心房細動を診断するための方法であって、
ａ）対象由来のサンプル中の総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量を決定する工程、
ｂ）対象由来のサンプル中の非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量を決定する工程、
ｃ）工程ａ）およびｂ）で決定された量のスコアを算出する工程、
ｄ）算出したスコアを基準スコアと比較する工程
を含む、方法に関する。

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、
ｅ）対象における心房細動を診断する工程をさらに含む。

好ましくは、工程ｅ）は、比較工程ｄ）の結果に基づく。したがって、工程ｅ）は以下の通りであり得る。
ｅ）工程ｄ）における比較の結果に基づいて対象における心房細動を診断する工程。

本発明によって言及される方法は、本質的に上述の工程からなる方法、または更なる工程を含む方法、を含む。さらに、本発明の方法は、好ましくは、エクスビボ、より好ましくはインビトロの方法である。さらに、前記方法は、先に明示的に述べられたものに加えて、複数の工程を含んでもよい。例えば、さらなる工程は、さらなるマーカーの決定および／またはサンプル前処理または方法によって得られた結果の評価に関連し得る。この方法は、手動で実行されてもよく、自動化によって補助されてもよい。好ましくは、工程（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）および／または（ｅ）は、全体的または部分的に、例えば、工程（ａ）および（ｂ）における決定のための適切なロボットおよび感覚機器、または工程（ｃ）におけるコンピュータ実装計算、または工程（ｄ）におけるコンピュータ実装比較による自動化によって、支援されてもよい。本発明の方法は、コンピュータ実装されていてもよい。

発明の詳細な説明

本明細書で使用される場合、「診断する」という用語は、本発明の方法に従って言及される対象が心房細動（ＡＦ）に罹患しているか否かを評価することを意味する。好ましくは、本明細書で使用される場合、「心房細動を診断する」という表現は、心房細動の診断を「支援する」または「補助する」と理解されるものとする。例えば、医師は、追加の情報および／または装置によって心房細動の診断を補助され得る。したがって、実際の診断は医師によって実行され得る。

当業者によって理解されるように、本発明の診断は、通常、試験される対象の１００％に対して正しいことを意図するものではない。「診断する」という用語は、好ましくは、対象の統計的に有意な部分に対して正しい診断を行い得ることを必要とする。前記一部が統計的に有意であるかどうかは、例えば、信頼区間の決定、ｐ値の決定、スチューデントｔ検定、マン－ホイットニー検定等の様々な周知の統計評価ツールを使用して、当業者がさらに苦労することなく決定し得る。詳細は、ＤｏｗｄｙおよびＷｅａｒｄｅｎ，Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８３に見出される。好ましい信頼区間は、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である。ｐ値は、好ましくは、０．４、０．１、０．０５、０．０１、０．００５、または０．０００１である。

本発明の方法は、心房細動の診断に役立つものである。「心房細動」という用語（ＡＦまたはＡＦｉｂと略記）は、当該技術分野において周知である。本明細書で使用される場合、この用語は、好ましくは、心房の機械的機能の結果としての悪化を伴う、非協調的な心房活動を特徴とする上室性頻拍性不整脈を指す。特に、この用語は、急速で不規則な鼓動を特徴とする異常な心臓のリズムを指す。心房細動は、心臓の２つの上部房と関連する。正常な心臓のリズムでは、洞房結節によって作製されたインパルスが心臓全体に広がり、心筋の収縮と血液のポンピングを引き起こす。心房細動では、洞房結節の規則的な電気インパルスが、不規則な心拍および心房容積の増加をもたらす不規則で急速な電気インパルスに置き換えられる。体積の増加は、ナトリウム利尿ペプチドを放出する組織の伸長をもたらす。心房細動の症状は、心臓の動悸、失神、息切れ、または胸痛である。しかし、発症しても、多くの場合、症状がない。心電図（ＥＣＧ）では、心房細動は、房室伝導が損なわれていない場合に不規則で頻繁に急速な心室応答を伴う、振幅、形状、およびタイミングが異なる急速な振動またはフィブリル波による一貫したＰ波の置き換えを特徴とする。

欧州心臓病学会（ＥＳＣ）は、以下の分類システム：すなわち初めて診断されたＡＦ、発作性ＡＦ、持続性ＡＦ、長期持続性および永続性ＡＦを提案している（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｈｉｎｄｒｉｃｋｓ Ｇら、ｄｏｉ：１０．１０９３／ｅｕｒｈｅａｒｔｊ／ｅｈａａ ６１２を参照されたい。例えば引用文献の表４を参照。）。

ＡＦの人々は全て、最初は、初めて診断されたＡＦと呼ばれるカテゴリにある。ただし、対象は、以前に検出されなかった症状を持っている場合と持っていない場合があってもよい。ＡＦが１年を超えて持続し、患者および医師によって受け入れられた場合、対象は永久的なＡＦに罹患しており、洞調律を回復／維持するためのさらなる試みは行われない。特に、洞調律へ戻る変換は、行われない（または医学的介入によってのみ）。ＡＦが７日を超えて続く場合、対象は持続性ＡＦに罹患している。対象が、心房細動を終止させるには、薬理学的介入または電気的介入のいずれかを要することがある。したがって、持続性ＡＦは発症中に起こるが、不整脈は自発的に洞調律に戻ることはない。発作性心房細動は、好ましくは、発症から７日以内に自発的に（または介入によって）終結する心房細動の断続性の発症を指す。発作性のＡＦのほとんどの場合、症状が続くのは、２４時間未満である。発作性心房細動の発症は、自発的に、すなわち医学的介入なしに終結することが多い。発作性ＡＦは、無症候性であり、診断が不十分である（無症候性ＡＦ）ことが多い。本発明の好ましい発症の長さは、４８時間、２４時間または１２時間より短い（発作性ＡＦ）。したがって、本明細書で使用される場合、「発作性心房細動」という用語は、好ましくは４８時間未満で、より好ましくは２４時間未満で、最も好ましくは１２時間未満で自己終結するＡＦの発症として定義される。好ましくは、前記発症は再発性である。さらに、発症は６時間未満で自己終結することが想定される。

持続性ＡＦおよび発作性ＡＦはいずれも、数週間または数ヶ月以内に再発することがあり、それによって発作性ＡＦおよび持続性ＡＦの区別がＥＣＧ記録によって行われる。患者に２回以上の発症があった場合、ＡＦは再発性であると見なされる。不整脈が自然に終止する場合、ＡＦ、特に再発性ＡＦは発作性と呼ばれる。ＡＦは、７日を超えて持続する場合、持続性と呼ばれる。

本発明の方法のいくつかの実施形態では、診断される心房細動は、発作性または持続性心房細動である。上記方法のいくつかの実施形態では、心房細動は持続性心房細動である。

本発明によれば、診断対象となる心房細動は進行中の心房細動であることが想定される。したがって、心房細動に罹患している対象は、試験時（またはより正確には試験サンプルが得られた時点）に心房細動の症状を示す。

「サンプル」という用語は、体液のサンプル、分離された細胞のサンプル、または組織もしくは器官由来のサンプルを指す。体液のサンプルは、周知の技術によって得ることが可能であり、好ましくは、血液、血漿、血清または尿のサンプル、より好ましくは、血液、血漿または血清のサンプルを含む。組織または器官のサンプルは、例えば生検によって、任意の組織または器官から入手し得る。分離された細胞を、体液または組織もしくは器官から、遠心分離または細胞選別等の分離技術によって得てもよい。例えば、バイオマーカーを発現または産生する細胞、組織、器官から、細胞、組織、器官のサンプルを採取してもよい。

本発明の方法のいくつかの実施形態では、サンプルは、血液サンプル（すなわち、全血サンプル）、血清サンプルまたは血漿サンプルである。
本発明の方法のいくつかの実施形態では、サンプルは右心耳組織サンプルである。

本明細書でいう「対象」とは、好ましくは哺乳動物である。哺乳動物としては、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌおよびウマ）、霊長類（例えば、ヒトおよび非ヒト霊長類、例えば、サル）、ウサギおよびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。対象は男性であっても女性であってもよい。「患者」 および 「対象」 という用語は、本明細書では互換的に使用される。

一実施形態では、対象は女性対象である。一実施形態では、対象は男性対象である。

いくつかの実施形態では、対象は、心房細動の少なくとも１つの危険因子、例えば、降圧薬を必要とする高血圧症などの高血圧症、心不全ＡＨＡステージＡ～Ｃなどの心不全、脳卒中の病歴を有し得る。

いくつかの実施形態では、試験される対象は、５０歳以上、例えば６０歳以上である。いくつかの実施形態では、対象は７０歳以上である。

好ましくは、試験される対象は、心房細動に罹患していると疑われる対象である。心房細動を患っている疑いがある対象は、心房細動の評価方法を実施する前に、心房細動の少なくとも１つの症状を示す、かつ／または心房細動の少なくとも１つの症状を示した対象である。当該症状は通常一過性であり、数秒で発生し、同じくらい早く消えることがある。心房細動の症状には、めまい、失神、息切れ、特に心臓の動悸が含まれる。したがって、心房細動の少なくとも１つの症状は、眩暈、失神、息切れ、および、特に、心臓の動悸から選択される。好ましくは、対象は、サンプルを得る前の６ヶ月以内、より好ましくは１ヶ月以内、さらにより好ましくは２週間以内、最も好ましくは１週間以内に心房細動の少なくとも１つの症状を示した。特に、対象は、サンプルを得る前の２日以内にＡＦの少なくとも１つの症状を示したことが想定される。また、対象は、サンプルを得る前の２４時間以内、またはさらには１２時間以内にＡＦの少なくとも一つの症状を示したことが想定される。したがって、対象は、これらの期間のうちの１つの期間内に心房細動、すなわち心房細動の症状を示したことが疑われる。

本発明によれば、心房細動に罹患していると疑われる対象が心房細動の病歴、すなわち心房細動の既知の病歴を有することが想定される。したがって、対象は、以前に、すなわち本発明の方法を実施する前に（特に対象からサンプルを得る前に）心房細動に罹患していると診断されているものとする。さらに、対象は、心房細動の未診断の症状を以前に有していた可能性がある。

本発明の方法の工程ａ）によれば、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量は、対象由来のサンプルにおいて決定、すなわち測定される。工程ｂ）によれば、非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量は、対象由来のサンプル（例えば、血液、血清または血漿サンプル）において決定される。工程ａ）およびｂ）は、任意の順序で実施し得ることを理解されたい。また、各工程を同時に行ってもよい。

「ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ」（プロ脳ナトリウム利尿ペプチドのＮ末端断片）という用語は、当技術分野で周知である。本明細書中で使用される場合、この用語は、切断後に心臓ホルモンとして機能する分泌タンパク質であるプロ脳ナトリウム利尿ペプチド（ｐｒｏＢＮＰ）の７６アミノ酸のＮ末端断片に関する。ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを測定する方法は市販されており、Ｒｏｃｈｅ Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ｐｒｏＢＮＰ ＩＩの名称で販売されているなど、臨床診療で使用されている。

ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの配列は当技術分野で周知であり、先行技術、例えば国際公開第０２／０８９６５７号、国際公開第０２／０８３９１３号、Ｂｏｎｏｗ １９９６，Ｎｅｗ Ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｃａｒｄｉａｃ ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９３：１９４６－１９５０に既に詳細に記載されている。好ましくは、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰは、配列番号１に示されるアミノ酸配列を有する。

上記のように、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびその前駆体ｐｒｏＢＮＰはＯ－グリコシル化され得る。概要は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびｐｒｏＢＮＰのＯ－グリコシル化に関するものであり、例えば、ＳｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒらおよびＨａｌｆｌｉｎｇｅｒらによって提供され、これらはいずれも、それらの全開示内容（Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら，Ａｒｃｈ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ ２００６；４５１；Ｈａｌｆｉｎｇｅｒら，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ６３：１，３５９－３６８（２０１７））が参照により本明細書に組み込まれる。

「Ｏ結合型グリコシル化」という用語は当技術分野で周知である（本明細書では「グリコシル化」とも呼ばれる）。Ｏ結合型グリコシル化は、糖分子、すなわち炭水化物のセリンまたはトレオニン残基への結合である。Ｏ結合型グリコシル化は、タンパク質が合成された後に起こる翻訳後修飾である。ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびｐｒｏＢＮＰがどのようにグリコシル化されるかは、例えば、Ｓｃｈｅｌｌｅｎｂｅｒｇｅｒら、およびＨａｌｆｌｉｎｇｅｒら（上記引用）に記載されている。

ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのＯ－グリコシル化部位に関する概要を本明細書中下記に提供する。以下の配列は、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ配列（ここでは基準配列としての役割を果たす配列番号１）である。Ｏ－グリコシル化部位に下線が引かれている。
His Pro Leu Gly Ser Pro Gly Ser Ala Ser Asp Leu Glu Thr Ser Gly
1 5 10 15
Leu Gln Glu Gln Arg Asn His Leu Gln Gly Lys Leu Ser Glu Leu Gln
20 25 30
Val Glu Gln Thr Ser Leu Glu Pro Leu Gln Glu Ser Pro Arg Pro Thr
35 40 45
Gly Val Trp Lys Ser Arg Glu Val Ala Thr Glu Gly Ile Arg Gly His
50 55 60
Arg Lys Met Val Leu Tyr Thr Leu Arg Ala Pro Arg（配列番号１）
65 70 75

したがって、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ（配列番号１に示される）は、少なくとも以下のグリコシル化部位：Ｔ３６、Ｓ３７、Ｓ４４、Ｔ４８、Ｓ５３、Ｔ５８およびＴ７１を含む。

好ましくは、本明細書で使用される場合、「非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ」という用語は、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのＴ３６、Ｓ３７、Ｓ４４、Ｔ４８、Ｓ５３、Ｔ５８およびＴ７１からなる群から選択される１つ以上の位置でグリコシル化されていない（すなわち、Ｏ－グリコシル化されていない）ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを指す。したがって、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの以下のアミノ酸残基：Ｔ３６、Ｓ３７、Ｓ４４、Ｔ４８、Ｓ５３、Ｔ５８およびＴ７１の少なくとも１つはグリコシル化されていない、すなわち、Ｏ－グリコシル化を含まない。

いくつかの実施形態では、「非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ」という用語は、前述のアミノ酸残基（すなわち、Ｔ３６、Ｓ３７、Ｓ４４、Ｔ４８、Ｓ５３、Ｔ５８およびＴ７１）の少なくとも２つがグリコシル化されていないＮＴｐｒｏＢＮＰを指す。いくつかの実施形態では、「非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ」という用語は、前述のアミノ酸残基の少なくとも３つがグリコシル化されていないＮＴｐｒｏＢＮＰを指す。いくつかの実施形態では、「非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ」という用語は、上記アミノ酸残基の少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、または全てがグリコシル化されていないＮＴｐｒｏＢＮＰを指す。いくつかの実施形態では、「非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ」という用語は、少なくとも４４位のセリン残基（すなわちＳ４４）がグリコシル化されていないＮＴｐｒｏＢＮＰを指す。したがって、非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰは、Ｓ４４位（すなわち、Ｓｅｒ４４）でグリコシル化されていない可能性がある。

好ましい実施形態では、対象由来のサンプル中の非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量を決定することは、サンプルを、非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを特異的に検出する抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む。好ましくは、非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを特異的に検出する抗体またはその抗原結合断片は、エピトープがグリコシル化部位を含むが、そのグリコシル化部位ではグリコシル化されていないＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのエピトープに特異的に結合する。抗体（または断片）とバイオマーカーとの間に形成される複合体は、非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量に比例するはずである。

いくつかの実施形態では、非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを特異的に検出する抗体またはその抗原結合断片は、エピトープがＴ３６アミノ酸残基を含むＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのエピトープに特異的に結合し、前記Ｔ３６アミノ酸残基はグリコシル化されていない。好ましくは、前記抗体または断片は、グリコシル化Ｔ３６アミノ酸残基を含むＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに実質的に結合しない。

いくつかの実施形態では、前記抗体またはその断片は、エピトープがＳ３７アミノ酸残基を含み、前記Ｓ３７アミノ酸残基がグリコシル化されていないＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのエピトープに特異的に結合する。好ましくは、前記抗体または断片は、グリコシル化Ｓ３７アミノ酸残基を含むＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに実質的に結合しない。

いくつかの実施形態では、前記抗体またはその断片は、エピトープがＳ４４アミノ酸残基を含むＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのエピトープに特異的に結合し、前記Ｓ４４アミノ酸残基はグリコシル化されていない。好ましくは、前記抗体または断片は、グリコシル化Ｓ４４アミノ酸残基を含むＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに実質的に結合しない。いくつかの実施形態では、前記抗体のエピトープまたはその抗原結合断片は、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ（配列番号１に示すように、図２も参照）のアミノ酸残基４２～４６を含む。

好ましい実施形態では、非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを特異的に検出する抗体は、国際公開第２００４０９９２５３号に開示されているモノクローナル抗体ＭＡＢ１．２１．３、または前記抗体の６つのＣＤＲを含む抗体である。さらに、前記抗体の抗原結合断片を使用することが想定される。

いくつかの実施形態では、前記抗体またはその断片は、エピトープがＴ４８アミノ酸残基を含むＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのエピトープに特異的に結合し、前記Ｔ４８アミノ酸残基はグリコシル化されていない。好ましくは、前記抗体または断片は、グリコシル化Ｔ４８アミノ酸残基を含むＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに実質的に結合しない。

いくつかの実施形態では、前記抗体またはその断片は、エピトープがＳ５３アミノ酸残基を含むＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのエピトープに特異的に結合し、前記Ｓ５３アミノ酸残基はグリコシル化されていない。好ましくは、前記抗体または断片は、グリコシル化Ｓ５３アミノ酸残基を含むＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに実質的に結合しない。

いくつかの実施形態では、前記抗体またはその断片は、エピトープがＴ５８アミノ酸残基を含むＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのエピトープに特異的に結合し、前記Ｔ５８アミノ酸残基はグリコシル化されていない。好ましくは、前記抗体または断片は、グリコシル化Ｔ５８アミノ酸残基を含むＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに実質的に結合しない。

いくつかの実施形態では、前記抗体またはその断片は、エピトープがＴ７１アミノ酸残基を含むＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのエピトープに特異的に結合し、前記Ｔ７１アミノ酸残基はグリコシル化されていない。好ましくは、前記抗体または断片は、グリコシル化Ｔ７１アミノ酸残基を含むＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに実質的に結合しない。

好ましくは、本明細書で使用される場合、「グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ」という用語は、好ましくは、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのＴ３６、Ｓ３７、Ｓ４４、Ｔ４８、Ｓ５３、Ｔ５８およびＴ７１からなる群から選択される１つ以上の位置（すなわち、アミノ酸残基）でグリコシル化（すなわち、Ｏ－グリコシル化）したＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを指す。したがって、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの以下のアミノ酸残基：Ｔ３６、Ｓ３７、Ｓ４４、Ｔ４８、Ｓ５３、Ｔ５８およびＴ７１の少なくとも１つがグリコシル化されており、すなわち、Ｏ－グリコシル化を含む。

さらに、適切なエピトープが図２に開示されている。

いくつかの実施形態では、「グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ」という用語は、前述のアミノ酸残基（すなわち、Ｔ３６、Ｓ３７、Ｓ４４、Ｔ４８、Ｓ５３、Ｔ５８およびＴ７１）の少なくとも２つがグリコシル化されているＮＴｐｒｏＢＮＰを指す。いくつかの実施形態では、「グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ」という用語は、前述のアミノ酸残基の少なくとも３つがグリコシル化されているＮＴｐｒｏＢＮＰを指す。いくつかの実施形態では、「グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ」という用語は、上述のアミノ酸残基の少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、または全てがグリコシル化されているＮＴｐｒｏＢＮＰを指す。いくつかの実施形態では、「グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ」という用語は、少なくとも４４位のセリン残基（すなわちＳ４４）がグリコシル化されているＮＴｐｒｏＢＮＰを指す。

「ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの総量」は、好ましくは、グリコシル化および非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量である。したがって、この用語は、グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよび非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の合計を指す。

好ましくは、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の決定は、サンプルを、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを特異的に検出する抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む。より好ましくは、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを特異的に検出する前記抗体またはその抗原結合断片は、グリコシル化され得ないヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの領域に結合する。したがって、前記抗体（またはその断片）は、グリコシル化部位、すなわちＯ－グリコシル化部位を持たないＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの領域、特にヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの領域に特異的に結合するはずである。抗体（または断片）とバイオマーカーとの間に形成される複合体は、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量に比例するものとする。

特に、前記抗体（またはその断片）は、（ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの）Ｔ３６、Ｓ３７、Ｓ４４、Ｔ４８、Ｓ５３、Ｔ５８またはＴ７１のグリコシル化部位を持たないＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの領域に特異的に結合するものとする。例えば、最初の３５アミノ酸残基、すなわちＮ末端アミノ酸残基１～３５は、Ｏ－グリコシル化部位を持たないことが知られている。好ましくは、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを特異的に検出する抗体またはその抗原結合断片は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの最初の３５アミノ酸内に存在するエピトープに結合し、より好ましくは、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの最初の２０アミノ酸内に存在するエピトープに結合し、最も好ましくは、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのアミノ酸残基１０～２０内に存在するエピトープに結合する。好ましい実施形態では、前記抗体のエピトープまたはその抗原結合断片は、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのアミノ酸残基１３～１６を含む。ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの配列を上に示す（配列番号１を参照されたい）。

好ましい実施形態では、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを特異的に検出する抗体は、国際公開第２００４０９９２５３号に開示されているモノクローナル抗体ＭＡＢ１７．３．１、または前記抗体の６つのＣＤＲを含む抗体である。さらに、前記抗体の抗原結合断片を使用することが想定される。

「抗体」という用語は当技術分野で公知である。本明細書で使用される場合、この用語は、４本のポリペプチド鎖、２本の重（Ｈ）鎖および２本の軽（Ｌ）鎖を含む任意の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子を指す。本明細書で使用される場合、「抗体」という用語はまた、抗体の抗原結合断片を含む。本明細書で使用される場合、抗体の抗原結合断片は、抗原（特に上記のＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）に特異的に結合し得るものとする。したがって、抗体の抗原結合断片は、抗原（例えば、非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰまたは総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ）に特異的に結合する（全長）抗体の能力を保持する断片である。抗体断片は、好ましくは完全長抗体の一部、好ましくはその可変ドメイン、または少なくともその抗原結合部位を含む。一実施形態では、抗原結合断片は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｃｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ｓｃＦｖ断片、Ｆｖ断片からなる群から選択される。例えば、抗原結合断片はＦ（ａｂ’）２断片である。抗原結合断片の産生方法は当該技術分野で周知である。例えば、断片は、本発明の抗体の酵素的切断によって産生され得る。さらに、断片は、合成または組換え技術によって作製され得る。Ｆａｂ断片は、好ましくは、抗体のパパイン消化、ペプシン消化および部分還元によるＦａｂ’断片、ペプシン消化によるＦ（ａｂ’）２断片、およびプラスミン消化によるｆａｃｂ断片によって作製される。ＦｖまたはｓｃＦｖ断片は、好ましくは分子生物学技術によって産生される。

本発明の方法による抗体は、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であり得る。好ましい実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。「モノクローナル抗体」という用語は当技術分野で周知である。本明細書中で使用される場合、この用語は、好ましくは、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体のことを指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、モノクローナル抗体の産生中に生じ得る可能性のある変異体を除いて同一であり、かつ／または同一のエピトープに結合し、そのような変異体は一般に少量で存在するものである。本発明のモノクローナル抗体は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）に記載されている周知のハイブリドーマ法によって作製し得る。また、組換えＤＮＡ法によっても作製し得る。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体は、ヒツジモノクローナル抗体、マウスモノクローナル抗体、ウサギモノクローナル抗体、ヤギモノクローナル抗体、ウマモノクローナル抗体、ニワトリモノクローナル抗体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、モノクローナル抗体はマウスモノクローナル抗体である。

本発明の方法の工程ａ）およびｂ）で使用される抗体（または断片）は、異なる、すなわちさらなるＮＴ－ｐｒｏＢＮＰエピトープに結合する少なくとも１つの他の抗体と組み合わせて、捕捉抗体としてサンドイッチアッセイで使用し得る。好ましくは、前記少なくとも１つの他の抗体は、上記のようにグリコシル化されていないＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの領域に結合する。

抗体は、サンドイッチアッセイに使用し得る。「サンドイッチアッセイ」は、最も有用かつ通常使用されるアッセイの１つであり、サンドイッチアッセイ技術のいくつかのバリエーションを包含する。例えば、典型的なアッセイでは、非標識（捕捉）結合剤が固体基質に固定化されるかまたは固定化され得、試験されるサンプルを捕捉結合剤と接触させる。結合剤－バイオマーカー複合体の形成を可能にするのに十分な時間の、適切なインキュベート時間の後、検出可能なシグナルを生成できるレポーター分子で標識した第２の（検出）結合剤を添加し、結合剤－バイオマーカーで標識した結合剤という別の複合体の形成に十分な時間を許容してインキュベートする。任意の未反応物質を洗い流してもよく、バイオマーカーの存在は、検出結合剤に結合したレポーター分子によって生成されるシグナルの観察によって決定される。結果は、目に見えるシグナルの単純な観察による定性的なものであってもよく、または例えば、（本明細書の他の箇所に記載されるような標準またはキャリブレータとしての）決定されるべきバイオマーカーの既知量を含有する対照サンプルとの比較によって定量されるものであってもよい。

典型的なサンドイッチアッセイのインキュベーション工程は、必要に応じて、また適切に変更し得る。このような変更には、例えば、２つ以上の結合剤およびバイオマーカーが共インキュベートされる同時インキュベーションが含まれる。例えば、分析されるサンプルおよび標識化された結合剤の両方が同時に、固定化された捕捉結合剤に添加される。また、分析されるサンプルおよび標識化された結合剤を最初にインキュベートし、その後、固相に結合した抗体、または固相に結合し得る抗体を添加することも可能である。

特異的な結合剤およびバイオマーカーの間で形成される複合体は、サンプル中に存在するバイオマーカーの量に比例するものとする。適用される結合剤の特異性および／または感度が、サンプル中に含まれる、少なくとも１つのマーカーのうち、特異的に結合し得る比率の程度を規定することは理解されるであろう。測定を実行し得る方法の詳細については、本明細書の別の箇所にも記載されている。形成された複合体の量は、サンプル中に実際に存在する量を反映するバイオマーカーの量へと変換されるものとする。

本明細書で使用される場合、「量」という用語は、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰまたは非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの絶対量、前記総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰまたは非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの相対量または相対濃度、ならびにそれに相関するかまたはそれから誘導し得る任意の値またはパラメータを包含する。このような値またはパラメータは、直接的な測定により当該ペプチドから得られる、全ての具体的な物理的または化学的特性に由来する強度シグナル値、例えば、質量スペクトルまたはＮＭＲスペクトルにおける強度値を含む。さらに、本明細書の他の箇所で指定される間接測定によって得られる全ての値またはパラメータ、例えば、特異的に結合したリガンドから得られるペプチドまたは強度シグナルに応答して生物学的読み出しシステムから決定される応答レベルが包含される。上述の量またはパラメータと相関する値は、全ての標準的な数学的演算によっても得ることが可能であるということを理解されたい。本発明の好ましい実施形態によれば、「量」の決定は、開示されたシステムによって実行され、それによって、コンピューティングデバイスは、前記システムの１つ以上の分析装置ユニットによって実行される接触および測定工程に基づいて「量」を決定する。

本発明の方法の工程ｃ）において、工程ａ）およびｂ）で決定された量のスコア、すなわち、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量および非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量が算出される。

本明細書で使用される場合、「算出する」という用語は、スコアを評価することを指し、これは、対象のサンプル中で決定された総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量および非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量に基づいている。例えば、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量および非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量に基づいて、スコア、すなわち単一のスコアを算出し、このスコアを参照スコアと比較することが想定される。算出されたスコアは、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量および非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量に関する情報を組み合わせたものである。さらに、バイオマーカーは、診断の確立への寄与に応じて、スコアで重み付けされていてもよい。このスコアは、心房細動を診断するための分類器パラメータとみなし得る。特に、このスコアは、基準スコアとの比較に基づいてＡＦの診断を可能にするものとする。基準スコアは、好ましくは、ＡＦに罹患している被験者とＡＦに罹患していない被験者とを区別することを可能にする値、特にカットオフ値である。

好ましくは、スコアは、比率、すなわち、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量および非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の比率である。したがって、工程ｃ）で算出された比率を、基準比率と比較する。一実施形態では、比は、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量に対する比率である。別の実施形態では、比率は、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量に対する非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の比率である。

本発明の方法の工程ｄ）では、工程ｃ）で算出されたスコアを基準スコアと比較するものとする。例えば、算出された比率を、基準比率と比較するものとする。

本明細書で使用される場合、「比較する」 という用語は、本明細書の他の箇所で指定された適切な参照源である試験対象からのサンプルについて算出されたスコアを比較することを包含する。比較は、好ましくは、自動化によって支援される。例えば、算出された対象のスコアと基準スコアとを比較するためのアルゴリズムを含む適切なコンピュータプログラムを使用し得る。そのようなコンピュータプログラムおよびアルゴリズムは、当技術分野で周知である。上記にもかかわらず、比較は手動でも行い得る。コンピュータプログラムは、比較の結果をさらに評価し得る。すなわち、適切な出力形式で所望の評価、すなわち診断結果を自動的に提供し得る。前記診断結果は、好ましくは、例えば医師による心房細動の最終診断を確立するための補助として役立ち得る。

算出工程および／または比較工程は、処理ユニットを備えるコンピュータを使用して実行し得る。

算出されたスコアと基準スコアとの比較に基づいて、対象が心房細動に罹患しているか否かを評価することが可能であるものとする。例えば、比較の結果は、生データとして、場合によっては、特定の診断を示し得る単語、句、記号、または数値の形態のインジケータとして与えられる場合がある。算出されたスコアと算出されたスコアの差または同一性のいずれかによって、心房細動に罹患している対象の群に属するか否かを識別することが可能になるように、基準スコアを選択することが必要である。この方法により、心房細動に罹患している対象の除外（除外）または同定（除外）のいずれかが可能になる。スコアの差、すなわち増加または減少は、本明細書で使用する場合、好ましくは統計的に有意な差である。

好ましくは、基準比などの基準スコアは、対象が心房細動に罹患しているか否かを区別することを可能にするものとする。好ましくは、診断は、対象のスコアが基準スコアを上回るか下回るかを評価することによって行われる。正確な基準スコアを提供する必要はない。関連する基準スコアは、任意のスコアに対する感度および特異性ならびに感度／特異性を相関させることによって得ることが可能である。高い感度をもたらす基準スコアは、より低い特異性をもたらし、逆もまた同様である。

いくつかの実施形態では、基準スコアは、心房細動に罹患していることが知られている対象（または対象のサンプル群）からのサンプルに由来する。

いくつかの実施形態では、基準スコアは、心房細動に罹患していないことが知られている対象（または対象のサンプル群）から得られたサンプルに由来する。

以下に好ましい診断アルゴリズムが提供される。

上記のように、工程ｃ）で算出されたスコアは、比率であってもよい。一実施形態では、比は、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量に対する比率である。この場合、基準比よりも低い比率（すなわち、算出された比率）は、心房細動に罹患している対象を示す。基準比よりも大きい比率は、心房細動に罹患していない対象を示す。

別の実施形態では、算出された比率は、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量に対する非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の比率である。この場合、基準値より大きい比率（すなわち、算出された比率）は、心房細動に罹患している対象を示す。基準比率よりも低い比率は、心房細動に罹患していない対象を示す。

本発明の方法の好ましい実施形態では、本方法は、心房細動であると診断された場合、適切な治療を推奨する工程をさらに含む。あるいは、この方法は、心房細動が診断された場合、適切な治療を開始する工程をさらに含む。

本明細書で使用される場合、「推奨する」という用語は、対象に適用できる治療法の提案を確立することを意味する。しかしながら、実際の治療法を適用することは、どんなものであれ、この用語に含まれないことを理解されたい。推奨される治療法は、本発明の方法によって提供される診断の結果に依存する。上記の推奨工程は、好ましくは自動化もし得る。好ましくは、本発明の方法によって得られた診断、すなわち本方法の診断結果は、個々の可能な診断結果に対する治療手段の推奨を含むデータベースを検索するために使用される。

一実施形態では、推奨または開始される治療は、少なくとも１種の抗凝固薬の投与、すなわち抗凝固療法である。抗凝固療法は、好ましくは、血液の凝固および関連する脳卒中を低減または予防することを目的とする療法である。好ましい一実施形態では、少なくとも１種の抗凝固剤は、ヘパリン、クマリン誘導体（すなわち、ビタミンＫアンタゴニスト）、特にワルファリンまたはジクマロール、経口抗凝固剤、特にダビガトラン、リバーロキサバンまたはアピキサバン、組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）、アンチトロンビンＩＩＩ、第ＩＸａ因子阻害剤、第Ｘａ因子阻害剤、第Ｖａ因子と第ＶＩＩＩａ因子の阻害剤、およびトロンビン阻害剤（抗ＩＩａ型）からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の抗凝固薬は、直接第Ｘａ因子阻害剤、直接トロンビン阻害剤およびＰＡＲ－１アンタゴニストからなる群から選択される。したがって、対象は、（心房細動に罹患していると診断された場合）前述の薬剤の少なくとも１種を摂取することが想定される。

いくつかの実施形態では、抗凝固薬は、アピキサバン、リバーロキサバン、ダレキサバンまたはエドキサバンなどの直接第Ｘａ因子阻害剤である。いくつかの実施形態では、抗凝固薬は、ダビガトランなどの直接トロンビン阻害剤である。いくつかの実施形態では、抗凝固薬は、ボラパキサルまたはアトパクサールなどのＰＡＲ－１アンタゴニストである。

別の実施形態では、推奨または開始される治療は電気的除細動である。したがって、患者は電気的除細動を受けることがある。電気的除細動は、電気または薬物を使用して心不整脈を正常な律動に変換する医療処置である。

いくつかの実施形態では、電気的除細動は、同期電気的除細動などの電気的除細動である。

いくつかの実施形態では、電気的除細動は薬物誘発性電気的除細動である。したがって、少なくとも１種の抗不整脈薬が投与される。いくつかの実施形態では、少なくとも１種の抗不整脈薬は、アミオダロン、フレカイニド、イブチリド、リドカイン、プロカインアミド、プロパフェノン、キニジンおよびトカイニドから選択される。

有利には、心不全の報告において、グリコシル化されていないＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ／総－ＮＴｐｒｏＢＮＰの比率が低いことがさらに示された（実施例を参照されたい）。したがって、本明細書で言及されるスコアにより、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ上昇の原因として心房細動対心不全を区別することが可能になり、そのため、心房細動対心不全を区別することが可能になる。

上記の本明細書で与えられる定義および説明は、本発明の以下の方法に準用されることが好ましい。

本発明の方法はまた、コンピュータ実装発明として実施されてもよい。一実施形態では、比較工程および／または算出工程などの１つ以上の工程は、処理ユニット（すなわち、コンピュータ）を含むコンピュータによって実行される。別の実施形態では、全ての工程は、処理ユニットを備えるコンピュータによって実行される。

したがって、本発明は、対象の心房細動を診断するためのコンピュータ実装方法であって、
（ａ）処理ユニットにおいて、
（ａ１）前記対象由来のサンプル中の総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量についての値、および
（ａ２）前記対象由来のサンプル中の非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の値
を受信する工程、
（ｂ）工程（ａ）で受信された前記値を前記処理ユニットにより処理する工程であって、
（ｂ１）工程ａ）で受信した値（ａ１）および（ａ２）のスコアを算出すること、
（ｂ２）算出したスコアを基準スコアと比較することを含む、値を処理する工程、ならびに
（ｃ）場合により、出力装置を介して前記診断を提供する工程であって、前記診断が工程ｂ）の結果に基づく、診断を提供する工程
を含む、コンピュータ実装方法に関する。

いくつかの実施形態では、処理ユニットはコンピュータに含まれる。

いくつかの実施形態では、工程ｂ）は、処理ユニットにおいて、メモリから基準スコア、すなわちＡＦの診断に適した基準スコアを検索することをさらに含む。

本発明の方法の一実施形態では、診断に関する情報（本発明の方法の最後の工程による）は、評価を提示するように構成されたディスプレイを介して提供される。したがって、本明細書の他の箇所に記載されているように、対象が心房細動に罹患しているか否かにかかわらず、情報が提供され得る。さらに、適切な治療法の推奨を表示し得る。本明細書の他の箇所に記載されているように、様々な治療手段が推奨され得る。この場合、処置の選択肢をディスプレイに表示し得る。

本発明の方法の一実施形態では、該方法は、本発明の方法の評価に関する情報を対象の電子医療記録に転送するさらなる工程を含み得る。

あるいは、本発明の方法の最後の工程で行われた評価を、プリンタによって印刷し得る。印刷出力は、患者にリスクがあるか、リスクがないか、および／または適切な治療措置の推奨に関する情報を含むものとする。

本発明はさらに、心房細動を診断するための、ｉ）バイオマーカーとしての、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよび非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの使用、またはｉｉ）非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに特異的に結合する少なくとも１種の薬剤、および総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに特異的に結合する少なくとも１種の薬剤の使用に関する。好ましくは、前記使用はインビトロにおける使用であり、すなわち対象からのサンプル中で実施される。

好ましい薬剤は、本明細書の他の箇所に開示されている（例えば、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ内の特定のエピトープに結合する抗体またはその抗原結合断片）。

最後に、本発明は、非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに特異的に結合する少なくとも１種の薬剤と、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに特異的に結合する少なくとも１種の薬剤と、を含む、キットに関する。

本明細書で使用される場合、「キット」 という用語は、例えば、別々にまたは単一の容器内に提供される前述の手段の集合を指す。容器は、本発明の方法を実施するための説明書を含み得る。

実施形態の一覧
以下に、好ましい実施形態を要約する。上記の本明細書で与えられる定義および説明は、好ましくは以下の実施形態に準用される。

１．対象における心房細動を診断するための方法であって、
ａ）前記対象由来のサンプル中の総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量を決定する工程、
ｂ）前記対象由来のサンプル中の非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量を決定する工程、
ｃ）工程ａ）およびｂ）で決定された量のスコアを算出する工程、
ｄ）算出したスコアを基準スコアと比較する工程、ならびに
ｅ）前記対象における心房細動を診断する工程
を含む、方法。

２．前記サンプルが、血液、血清、または血漿のサンプルである、実施形態１に記載の方法。

３．前記対象がヒト対象である、実施形態１および２に記載の方法。

４．前記対象が心房細動に罹患している疑いがある、実施形態１～３のいずれか１つに記載の方法。

５．心房細動に罹患している疑いがある前記対象が心房細動の病歴を有する、実施形態４に記載の方法。

６．非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰが、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのＴ３６、Ｓ３７、Ｓ４４、Ｔ４８、Ｓ５３、Ｔ５８および／またはＴ７１からなる群から選択される１つ以上の位置でグリコシル化されていない、実施形態１～５のいずれか１つに記載の方法。

７．非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰが少なくとも位置Ｓ４４でグリコシル化されていない、実施形態６に記載の方法。

８．前記非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の決定が、前記サンプルを、非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを特異的に検出する抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、実施形態１～７のいずれか１つに記載の方法。

９．前記抗体またはその抗原結合断片のエピトープが、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのアミノ酸残基４２～４６を含む、実施形態８に記載の方法。

１０．総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量が、グリコシル化および非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量である、実施形態１～９のいずれか１つにキシの方法。

１１．総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の決定が、前記サンプルを、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを特異的に検出する抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、実施形態１～１０のいずれか１つに記載の方法。

１２．総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを特異的に検出する前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｏ－グリコシル化部位を持たないヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの領域に結合する、実施形態１１に記載方法。

１３．抗体またはその抗原結合断片が、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの最初の３５アミノ酸が存在するエピトープに結合する、実施形態１２に記載の方法。

１４．抗体またはその抗原結合断片のエピトープが、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのアミノ酸残基１３～１６を含む、実施形態１３に記載の方法。

１５．スコアが比率である、実施形態１～１４のいずれか１つに記載の方法。

１６．比率が、非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量に対する総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の比率である、実施形態１５に記載の方法。

１７．基準比率よりも低い比率が、心房細動に罹患している対象を示す、実施形態１６に記載の方法。

１８．比率が、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量に対する非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の比率である、実施形態１５に記載の方法。

１９．基準比率よりも高い比率が、心房細動に罹患している対象を示す、実施形態１８に記載の方法。

２０．心房細動が、発作性または持続性の心房細動である、実施形態１～１９のいずれか１つに記載の方法。

２１．対象の心房細動を診断するためのコンピュータ実装方法であって、
（ａ）処理ユニットにおいて、
（ａ１）前記対象由来のサンプル中の総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量についての値、および
（ａ２）前記対象由来のサンプル中の非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の値
を受信する工程、
（ｂ）工程（ａ）で受信された前記値を前記処理ユニットにより処理する工程であって、
（ｂ１）工程ａ）で受信した値（ａ１）および（ａ２）のスコアを算出すること、
（ｂ２）算出したスコアを基準スコアと比較することを含む、工程（ａ）で受信された前記値を処理する工程、ならびに
（ｃ）場合により、出力装置を介して前記診断を提供する工程であって、前記診断が工程ｂ）の結果に基づく、診断を提供する工程
を含む、コンピュータ実装方法。

２２．心房細動を診断するための、ｉ）バイオマーカーとしての、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよび非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの使用、またはｉｉ）非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに特異的に結合する少なくとも１種の薬剤、および総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに特異的に結合する少なくとも１種の薬剤の使用。

２３．非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに特異的に結合する少なくとも１種の薬剤と、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに特異的に結合する少なくとも１種の薬剤と、を含む、キット。

右心耳組織におけるＮＰＰＢの発現の差：Ａ）持続性型Ａｆｉｂ；Ｂ）発作性Ａｆｉｂ。 右心耳組織におけるＮＰＰＢの発現の差：Ａ）持続性型Ａｆｉｂ；Ｂ）発作性Ａｆｉｂ。 ｐｒｏＢＮＰエピトープにおけるＯ－グリコシル化部位の概略。ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの配列には２回下線を付している。本発明の基礎となる研究では、以下の２つの抗体：（総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰについて）ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのエピトープａａ１３～１６に結合する１つの抗体、およびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、すなわち非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰについてのＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのエピトープａａ４２～４６に結合する１つの抗体を使用した。他のエピトープに結合する他の抗体、例えば、図に示されるようにエピトープに結合するＨｙｔｅｓｔからの抗体も同様に使用し得る。抗体は、米国特許出願公開第２００９０１６３４１５号にも開示されている。 総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに基づく心房細動が進行中の患者と洞調律の患者との間の差。 総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに基づく心房細動が進行中の患者と洞調律の患者との間の差。 進行中の心房細動を有する患者と非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに基づく洞調律の患者との間の差。 進行中の心房細動を有する患者と非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに基づく洞調律の患者との間の差。 ［非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ］／［総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ］の比率に基づく、進行中の心房細動を有する患者と洞調律の患者との差。 ［非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ］／［総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ］の比率に基づく、進行中の心房細動を有する患者と洞調律の患者との差。

本発明は、以下の実施例によって単に例示されるものである。当該実施例は、いかなる場合でも、本発明の範囲を制限する様式で解釈されないものとする。

実施例１：右心耳組織におけるヒトＮＰＰＢの発現の差（マッピング試験）
ＣＡＢＧまたは弁手術のための開胸手術中に右心耳組織をサンプリングした。ＡＦまたはＳＲ（対照、洞調律）のエビデンスは、手術中に、同時心内膜－心外膜高密度活性化マッピングを用いて得た。手術中に組織サンプルを採取した。ＡＦおよび対照の患者は、性別、年齢、併存疾患に関して一致させた。

以下について、心房組織サンプルを調製した。
● 発作性ＡＦ患者；ｎ＝１４人の患者
持続性ＡＦ患者；ｎ＝８人の患者
● ＳＲの対照患者；ｎ＝２７人の患者

ＮＰＰＢの発現の差は、アルゴリズムＲＳＥＭおよびＤＥＳＥＱ２を適用したＲＮＡｓｅｑ分析で決定した。結果を図１［Ａ）持続性ＡｆｉｂＢ）発作性Ａｆｉｂ］に示す。

図１に示すように、発作性および持続性ＡＦ患者の分析した右心耳組織では、洞調律で対照患者と比較してＮＰＰＢの発現が上方制御されていることが分かった。持続性ＡＦ患者において最高レベルが観察された。これらのデータにより、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの心耳依存性および疾患重症度に伴うその増加の仮説が支持される。

実施例２：ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの検出
総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量を、サンドイッチアッセイによって測定した。ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのアミノ酸１３～１６に対する抗体（モノクローナル抗体１７．３．１）を捕捉抗体として用いて、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを測定した。ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのアミノ酸４２～４６に対する抗体（モノクローナル抗体１．２１．０３）を捕捉抗体として用いて、Ｒｏｃｈｅ Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）ｐｒｏＢＮＰ ＩＩ ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰアッセイを使用し、製造業者の説明書に従って、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを測定した。この抗体は、Ｏ－グリコシル化位置Ｓ４４ではないＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを検出する。

両方のアッセイについて、アミノ酸２７～３１に結合する検出抗体（モノクローナル抗体１８．４．３４、図２参照）を使用した。

エピトープを図２に示す。

位置Ｓ４４でのＯ－グリコシル化の検出阻害によって引き起こされる影響の排除に起因して、グリコシル化されていない総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰアッセイでより高い値が得られた。臨床現場では、本発明は感度を高め、種々の実体の検出により特異性の改善および感度が向上する。

総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰと非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰとの比を形成し得、これにより正規化が可能になる。

実施例３：ＧＩＳＳＩ－ＡＦ治験のバイオマーカーサブ試験における心房細動の検出
ＧＩＳＳＩ－ＡＦ治験のバイオマーカー部分試験では、血液サンプルは、試験の登録時、ならびに経過観察６か月後および１２か月後に収集した。ＧＩＳＳＩ－ＡＦ治験の詳細については、主刊行物：ＧＩＳＳＩ－ＡＦ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｏｒｓ，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００９；３６０：１６０６－１７を参照されたい。バイオマーカーサブ試験のさらなる詳細については、Ｌａｔｉｎｉ Ｒら，Ｊ Ｉｎｔｅｒｎ Ｍｅｄ ２０１１；２６９：１６０－７１を参照されたい。

３８２人の患者について、血漿サンプル由来の総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ値をベースラインで得た。２４週間後、３６０人の患者のうち３８人が発作性心房細動を発症した。５２週間後、３５７人中４８人が心房細動を発症した。

ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよび総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを、ＧＩＳＳＩ ＡＦ試験から選択された心房細動サブコホートにおいて測定した。対照に対して進行中の心房細動を有する対象からのサンプルにおいて、循環ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよび総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰレベルの上昇が観察された。

考慮されるサンプルサイズは、ベースラインでのＮＴｐｒｏＢＮＰの測定値を有する３８２人の患者で構成される。ＳＲ（洞調律）対ＡＦ（心房細動）の変数は、ＣＲＦの変数「ｒｉｔｍｏ ａｌｌ’ＥＣＧ」から記録した。

結論：総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよびＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの測定により、分析時に、両方のパラメータの組み合わせが各単一マーカーよりもはるかに良好な診断値をもたらすことが示された。

試験されたバイオマーカーと進行中のＡＦ（すなわち、ＡＦ律動が記録されている間にアッセイされたバイオマーカー）との間の関連の強さを評価するために、ＲＯＣ分析を行った。６ヶ月および１２ヶ月において、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ／総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの比率について観察されたＡＵＣは、各バイオマーカー単独についてのＡＵＣと比較してより高かった：ＮＴｐｒｏＢＮＰ／総ＮＴｐｒｏＢＮＰの比率（ＡＵＣ６ｍ＝０．９３およびＡＵＣ１２ｍ＝０．９１）、総ＮＴｐｒｏＢＮＰ（ＡＵＣ６Ｍ＝０．７８およびＡＵＣ１２Ｍ＝０．７７）、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ（ＡＵＣ６Ｍ＝０．８７およびＡＵＣ１２Ｍ＝０．８６）。

表２ならびに図３、図４および図５において、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ／総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの比率は、ナトリウム利尿ペプチド単独のいずれか１つよりも、進行中のＡＦの流行／進行の予測に優れていることが証明された。

ＧＩＳＳＩ ＡＦ試験では、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ／総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの比率がインシデント／再発性ＡＦと関連していることがさらに観察された（ｐ＝０．０５８）。

結論として、進行中のＡＦを有する患者では、洞調律の患者と比較して、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのグリコシル化がより低いことが分かった。ＮＴｐｒｏＢＮＰ／総ＮＴｐｒｏＢＮＰの比率の決定は、各ナトリウム利尿ペプチド単独に対して診断精度をさらに改善するのに適している。

女性患者および男性患者における試験バイオマーカー（すなわち、ＡＦ律動が記録されている間にアッセイされたバイオマーカー）と進行中のＡＦとの間の関連の強さを評価するために、ＲＯＣ分析を男性および女性試験参加者に対して別々に行った。ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ／総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの比率について、６ヶ月および１２ヶ月で観察されたＡＵＣは、男性患者と比較して女性患者において高かった：女性患者におけるＮＴｐｒｏＢＮＰ／総ＮＴｐｒｏＢＮＰ比率（ＡＵＣ６ｍ＝０．９４およびＡＵＣ１２ｍ＝０．９５）、男性患者におけるＮＴｐｒｏＢＮＰ／総ＮＴｐｒｏＢＮＰ比率（ＡＵＣ６Ｍ＝０．９２およびＡＵＣ１２Ｍ＝０．９２）であった。

表３に示すように、ＮＴｐｒｏＢＮＰ／総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの比率は、試験の女性参加者のサブグループにおける進行中のＡＦの検出において特に良好に機能することが分かった。ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ／ｔｏｔａｌ－ＮＴｐｒｏ ＢＮＰの比率は、Ａｆｉｂでは約０．１５であったが（表２）、心不全の報告ではより高かった（０．１９～０．３１；Ｖｏｄｏｖａｒ Ｎらｌ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅａｒｔ Ｊｏｕｒｎａｌ（２０１４）３５，３４３４－３４４１）が、ＡＦｉｂにおけるＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ／ｔｏｔａｌ－ＮＴｐｒｏ ＢＮＰの比を使用する本発明は、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ上昇の供給源としてＡＦｉｂ対ＨＦをより良好に区別することを可能にし、したがって、ＡＦｉｂ対心不全をより良好に区別することが可能になる。

結論として、女性におけるＡＦの検出のために、ＮＴｐｒｏＢＮＰ／総ＮＴｐｒｏ－ＢＮＰの比率が非常に有用であり得る。

ＧＩＳＳＩＡＦ試験では：臨床的にＨＦと診断された、またはＬＶＥＦが４０％より低い（１１％）こと、脳卒中の病歴（４％）、糖尿病（１３％）、高血圧の病歴（８４％）、実証されたＣＡＤ（１１％）という中等度の重度の併存症を有する患者を含む。ＡＦの発生率は、観察された併存症のいずれかを有する患者と、それぞれの併存症を有しない患者とで有意差は認められなかった。

結論として、ＡＦが発生した患者またはＡＦの病歴を有する患者は、洞調律の患者と比較して、ＮＴｐｒｏＢＮＰのグリコシル化の程度が低いことが分かった。

全体として、ＮＴｐｒｏＢＮＰ／総ＮＴｐｒｏＢＮＰ比率は、ＡＦの病歴またはインシデントＡＦ再発の他の危険因子を有する患者のＡＦの一般的な診断を改善することが可能であることが観察された。

Claims (18)

1. 対象における心房細動を決定するための方法であって、
   ａ）前記対象由来のサンプル中の総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量を決定する工程、
   ｂ）前記対象由来のサンプル中の非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量を決定する工程、
   ｃ）工程ａ）および工程ｂ）で決定された量からスコアを算出する工程、ならびに
   ｄ）前記算出したスコアを基準スコアと比較する工程、
   を含む、方法。
2. 前記サンプルが、血液、血清、もしくは血漿のサンプルであり、かつ／または前記対象がヒト対象である、請求項１に記載の方法。
3. 前記対象が心房細動に罹患している疑いがある、請求項１または２に記載の方法。
4. 心房細動に罹患している疑いがある前記対象が、心房細動の病歴を有する、請求項３に記載の方法。
5. 非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰが、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのＴ３６、Ｓ３７、Ｓ４４、Ｔ４８、Ｓ５３、Ｔ５８および／またはＴ７１からなる群から選択される１つ以上の位置でグリコシル化されていない、請求項１～４のいずれか一項に記載の方法。
6. 非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰが少なくとも位置Ｓ４４でグリコシル化されていない、請求項５に記載の方法。
7. 前記非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の決定が、前記サンプルを、非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを特異的に検出する抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、請求項１～６のいずれか一項に記載の方法。
8. 前記抗体またはその抗原結合断片のエピトープが、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのアミノ酸残基４２～４６を含む、請求項７に記載の方法。
9. 総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量が、グリコシル化および非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量である、請求項１～８のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の決定が、前記サンプルを、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを特異的に検出する抗体またはその抗原結合断片と接触させることを含む、請求項９に記載の方法。
11. 総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰを特異的に検出する前記抗体またはその抗原結合断片が、Ｏ－グリコシル化部位を持たないヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの領域に結合する、請求項１０に記載の方法。
12. 前記抗体またはその抗原結合断片が、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの最初の３５アミノ酸が存在するエピトープに結合し、
    前記抗体またはその抗原結合断片のエピトープが、ヒトＮＴ－ｐｒｏＢＮＰのアミノ酸残基１３～１６を含む、請求項１１に記載の方法。
13. 前記スコアが比率である、請求項１～１２のいずれか一項に記載の方法。
14. ａ）前記比率が、前記非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量に対する前記総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の比率であり、または
    ｂ）前記比率が、前記総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量に対する前記非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量の比率である、請求項１３に記載の方法。
15. 心房細動が、発作性または持続性の心房細動である、請求項１～１３のいずれか一項に記載の方法。
16. 対象の心房細動を診断するためのコンピュータ実装方法であって、
    （ａ）処理ユニットにおいて、
    （ａ１）前記対象由来のサンプル中の総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量についての値、および
    （ａ２）前記対象由来のサンプル中の非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの量についての値
    を受信する工程、
    （ｂ）工程（ａ）で受信された前記値を前記処理ユニットにより処理する工程であって、
    （ｂ１）工程ａ）で受信した値（ａ１）および値（ａ２）のスコアを算出すること、
    （ｂ２）前記算出したスコアを基準スコアと比較すること
    を含む、工程（ａ）で受信された前記値を処理する工程
    を含む、コンピュータ実装方法。
17. （ｃ）出力装置を介して診断を提供する工程であって、前記診断が工程ｂ）の結果に基づく、診断を提供する工程
    を含む、請求項１６に記載のコンピュータ実装方法。
18. 心房細動を診断するための、ｉ）バイオマーカーとしての、総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰおよび非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰの使用、またはｉｉ）非グリコシル化ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに特異的に結合する少なくとも１種の薬剤、および総ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰに特異的に結合する少なくとも１種の薬剤の使用。