JP7652918B2 - 抗ｃｄ３０モノクローナル抗体及びキメラ抗原受容体 - Google Patents

Description

本出願は、２０２１年３月１日に出願された本発明者らの同時係属中の米国仮特許出願第６３／１５５，０７３号明細書に対する優先権を主張するものであり、本同時係属中の特許出願は、その全体が参照により組み込まれる。

配列表
１０２７１９．００３４ＰＲＯ＿ＲＥＶ００２＿ＳＴ２５．ｔｘｔと名付けられ、１１ＫＢのサイズである配列表のＡＳＣＩＩテキストファイルの内容は、２０２１年１月２０日に作成され、本出願と共にＥＦＳ－Ｗｅｂを介して電子的に提出され、このファイルはその全体が参照により組み込まれる。

本発明の分野は標的特異的結合分子であり、特にそれはＣＤ３０に対して結合特異性を有する抗体及びキメラ抗原受容体、並びにその誘導体に関する。

背景の説明は、本発明を理解する上で有用であり得る情報を含む。本明細書に提供される情報のいずれかが先行技術であるか、若しくは主張される本発明に関連していること、又は具体的若しくは暗黙的に参照される任意の刊行物が先行技術であることが認められるものではない。

本明細書の全ての刊行物及び特許出願は、各々の個々の刊行物又は特許出願が、参照により組み込まれていることを具体的且つ個別に示される場合と同じ程度に参照により組み込まれる。組み込まれた参考文献における用語の定義又は使用が一貫していない場合、又は本明細書に記載されているその用語の定義に反する場合、本明細書に提供されるその用語の定義が適用され、参考文献におけるその用語の定義は適用されない。

ＣＤ３０（分化抗原群３０、Ｋｉ－１、ＴＮＦＲＳＦ８）は腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーに属し、リンパ組織内の濾胞内及び濾胞周囲のＴ細胞芽球並びにＢ細胞芽球上で比較的低レベルで、ヒトにおいて一過性に発現される。とりわけＣＤ３０の発現は、未分化大細胞リンパ腫及びホジキンリンパ腫を含む特定の造血器悪性腫瘍で著しく増加される。したがって、ＣＤ３０は、ホジキン病（ＨＤ）及び未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）などの非ホジキン（ＮＨＬ）リンパ腫のサブセットにおける悪性細胞のための共通の診断マーカーである。ごく最近になって、ＣＤ３０は様々な血液学的疾患の治療における治療標的として浮上しており、多数の特異的ＣＤ３０結合分子が開発されている。

例えば、特定のＣＤ３０結合部分及びキメラ抗体は、国際公開第２０２０／１３５５５９号パンフレットに示されており、ＣＤ３０を発現する癌又は腫瘍の治療における養子免疫Ｔ細胞療法に提案されている。同様に、ＣＤ３０に対して結合活性を有する特異的キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及びこれらＣＡＲについての様々な使用が、米国特許第１０，８１５，３０１号明細書に教示されており、更に別の例のＣＤ３０に結合する二重特異性抗体が、国際公開第２０２０／０６８７７４号パンフレットに示されるように構築された。

更なる例では、特定の抗ＣＤ３０抗体－薬物コンジュゲートを第２の薬物と組み合わせて使用するＴ細胞リンパ腫の治療の方法が、国際公開第２０２０／０７２５１９号パンフレットに教示されており、更に別の併用治療では、米国特許出願公開第２０１９／０２１８２９３号パンフレットに開示されるように、ホジキンリンパ腫又は非ホジキンリンパ腫を治療するために、特異的抗ＣＤ３０抗体がチェックポイント阻害剤と共に投与された。抗ＣＤ３０抗体及びプロテアソーム阻害剤を使用するなお更なる併用治療が、国際公開第２０１８／０２７０２２号パンフレット及び米国特許第７，７９０，１６０号明細書に開示されており、癌以外の免疫学的障害の抗ＣＤ３０抗体による治療が、国際公開第０３／０４３５８３号パンフレットに記載されている。既知の抗ＣＤ３０結合剤の多くが、少なくともいくらかの診断的又は治療的可能性を発揮するが、それでも様々な不利な点が残っている。最も重要なことには、少なくともいくつかの抗ＣＤ３０抗体又は抗ＣＤ３０ ＣＡＲの結合親和性及び／又は結合特異性は、望ましいものよりも低く、又は望ましい治療有効性よりも低かった。

したがって、抗ＣＤ３０抗体及びＣＡＲの様々なシステム及び方法が当該技術分野において知られているが、それらの全て又はほぼ全ては、いくつかの欠点に悩まされている。したがって、改善された抗ＣＤ３０抗体及びＣＡＲのための組成物及び方法、並びにそれらのための使用が未だに必要とされている。

本発明の主題は、ＣＤ３０特異的治療用分子及び診断用分子の様々な組成物及び方法、並びに個体の診断及び治療、特に癌細胞がＣＤ３０を発現又は過剰発現する癌の診断及び治療におけるそれらの使用を目的とする。

本発明の主題の一態様では、本発明者らは、単離された抗体又はその断片を企図し、抗体又はその断片はＣＤ３０に結合し、可変重鎖（ＶＨ）ドメイン及び可変軽鎖（ＶＬ）ドメインを含み、ＶＨドメインは配列番号１、配列番号３、及び配列番号５からなる群から選択され、ＶＬドメインは、配列番号２、配列番号４、及び配列番号６からなる群から選択される。

一実施形態では、抗体又は断片は、任意選択でリンカーによって互いに結合され、ｓｃＦｖを形成するＶＨ５２－２（配列番号１）及びＶＬ５２－２（配列番号２）を含む。別の実施形態では、抗体又は断片は、任意選択でリンカーによって互いに結合され、ｓｃＦｖを形成するＶＨ５２－５（配列番号３）及びＶＬ５２－５（配列番号４）を含む。更なる実施形態では、任意選択でリンカーによって互いに結合され、ｓｃＦｖを形成するＶＨ５２－３８（配列番号５）及びＶＬ５２－３８（配列番号６）を含む。

最も典型的には、しかし必ずしもそうではないが、抗体はＩｇＧ１抗体又はｓｃＦｖであり、及び／又は治療剤（例えば、化学療法薬、放射性核種、又はサイトカイン類似体、ケモカイン、又はチェックポイント阻害剤などの免疫刺激剤）を更に含んでもよい。代替的に又は追加的に、抗体又は断片はまた、検出可能な標識を含んでもよい。

他の実施形態では、本発明者らは、本明細書に提示される抗体又は断片を含むキメラタンパク質も企図する。例えば、キメラタンパク質は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を形成してもよく、これはＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）又はＦｃ受容体イプシロン（ＦｃεＲＩγ）シグナル伝達ドメインを有してもよく、又はＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）シグナル伝達ドメインのうちの１つ以上を有してもよい。最も典型的には、ＣＡＲは、ＣＤ８ヒンジドメイン及びＣＤ２８膜貫通ドメインを有し得る。容易に理解されるように、ＣＡＲは、ＮＫ細胞又は細胞傷害性Ｔ細胞の表面上で発現され、その表面上に提示される組換えＣＡＲであろう。他の例では、キメラタンパク質は、二重特異性融合タンパク質（例えば、ＩｇＧ Ｆｃ部分を含み、任意選択でＩＬ１５α受容体部分、ＩＬ１５部分、及びＩＬ１５スーパーアゴニスト部分のうちの少なくとも１つを更に含む）を形成してもよく、又は二重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＢｉＫＥ）又は三重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＴｒｉＫｅ）を形成してもよい。

したがって、本発明者らは、本明細書に提示される単離された抗体又は断片、若しくはキメラタンパク質をコードする組換え核酸も企図する。例えば、核酸は、発現ベクターの一部若しくは組換えウイルスゲノムの一部であってもよく、又は線状ＤＮＡの形態であってもよい。他方では、組換え核酸は、ＲＮＡであってもよい。

異なる観点から見ると、本発明者らは、本明細書に提供される単離された抗体又は断片、若しくはキメラタンパク質と組み合わせて、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物も企図する。同様に、本発明者らは、本明細書に提示される組換え核酸と組み合わせて、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物も企図する。

本発明の主題の別の態様では、本発明者らは、個体を治療する方法も企図し、この中で本明細書に提示される医薬組成物が個体に投与され、典型的には、それによって個体における免疫抑制を低下させる。最も典型的には、個体は、癌ワクチン及び／又はチェックポイント阻害剤で治療されている。したがって、本発明者らは、本明細書に提示されるような医薬組成物の個体における血液学的癌の治療における使用も企図する。

本発明の主題の様々な目的、特徴、態様、及び利点は、同様な数字は同様な構成要素を表す添付の図面と共に、以下の好ましい実施形態の詳細な説明から明らかになるであろう。

市販の抗ＣＤ３０抗体及び本発明の主題によるＩｇＧ１抗体を使用する、ＣＤ３０を発現する細胞及び対照細胞（ＨＬ－６０）に対する抗ＣＤ３０抗体の結合についての例示的なＦＡＣＳ結果を表示するグラフである。 市販の抗ＣＤ３０抗体及び本発明の主題によるＩｇＧ１抗体を使用する、ＣＤ３０を発現する細胞及び対照細胞（ＨＬ－６０）に対する抗ＣＤ３０抗体の結合についての例示的な滴定結果を表示するグラフである。 本発明の主題による例示的な抗ＣＤ３０ ＣＡＲ構築物及びモックＣＡＲを発現するｈａＮＫ細胞を使用する、ＣＤ３０発現標的細胞のＣＡＲ特異的標的細胞溶解についての例示的な結果を表示するグラフである。 本発明の主題による例示的な抗ＣＤ３０ ＣＡＲ構築物及びモックＣＡＲを発現するｈａＮＫ細胞を使用する、ＣＤ３０を発現しない対照標的細胞のＣＡＲ特異的標的細胞溶解についての例示的な結果を表示するグラフである。 図３及び４の標的細胞におけるＣＤ３０発現についての例示的な結果を表示するグラフである。 図３及び４のｈａＮＫ細胞における抗ＣＤ３０ ＣＡＲ及びモックＣＡＲの発現についての例示的な結果を表示するグラフである。 本発明の主題による別の例示的な抗ＣＤ３０ ＣＡＲ構築物及びモックＣＡＲを発現するｈａＮＫ細胞を使用する、ＣＤ３０を発現する標的細胞のＣＡＲ特異的標的細胞溶解（低、高、プール）についての例示的な結果を表示するグラフである。 図７の標的細胞におけるＣＤ３０の発現についての例示的な結果を表示するグラフである。 図８－１の続き。

本発明者らは、ＣＤ３０への結合に関して高い親和性及び特異性を有する様々な抗ＣＤ３０抗体を発見した。特に好ましい態様では、企図される抗体は、以下に示されるようなＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを有するヒトＩｇＧ_１抗体である。しかしながら、本明細書に提示される配列は、少なくともある程度まで変化することができ、したがって、以下により詳細に論議するように、１つ以上のアミノ酸置換、挿入、及び／又は欠失を有してもよい。最も典型的には、しかし必ずしもそうではないが、同じ前の数字（例えば、５２－２）を有するＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメイン、又は重鎖及び軽鎖は、ＣＤ３０結合構築物中に存在するであろう。しかしながら、他のＣＤ３０結合構築物は、Ｖ_Ｈ又はＶ_Ｌドメインのみ、又は同一ではない前の数字を有するＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを有してもよい。更に、ＣＤ３０結合構築物は、以下に列挙されるように、ＣＤＲの少なくともいくつかを有するもの（例えば、少なくともＶ_Ｈドメインからのもの）を含んでもよい。
５２－２Ｖ_Ｈドメインアミノ酸配列：
５２－２Ｖ_Ｌドメインアミノ酸配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＶＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＤＡＤＶＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２）
５２－５Ｖ_Ｈドメインアミノ酸配列：
５２－５Ｖ_Ｌドメインアミノ酸配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＤＡＤＶＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号４）
５２－３８Ｖ_Ｈドメインアミノ酸配列：
５２－３８Ｖ_Ｌドメインアミノ酸配列：
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＳＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＬＱＰＥＤＩＡＴＹＹＣＱＱＶＡＮＶＰＬＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号６）

容易に理解されるように、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインの結合特異性は、それらのそれぞれのＣＤＲ領域によって決定付けられ、以下の表１は、Ｖ_Ｈ及びＶ_ＬドメインにおけるＣＤＲについてのアミノ酸配列を示す。したがって、既知のＣＤＲ配列に基づいて、ＣＤ３０に結合し、配列番号７～２４のＣＤＲの少なくともいくつかを含む抗体及びその断片が調製され得ることが企図される。

例えば、上記のＣＤＲ並びにＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインの情報を使用して、ＩｇＧ_１抗体を調製することができる。最も典型的には、しかし必ずしもそうではないが、同じ前の数字（例えば、６４－６）を有するＨＣ及びＬＣは、ＣＤ３０結合抗体中に存在するであろう。しかしながら、他のＣＤ３０結合抗体は、同一ではない前の数字を有する重鎖及び軽鎖を有してもよい。

当然ながら、本発明の主題は、上記のちょうどそのままの配列に限定されるものではなく、配列のうちの１つ以上は、１つ以上のアミノ酸変化を含んでもよい。最も好ましくは、これらの変化は、特異性及び／又は親和性の実質的な低減をもたらすであろう。したがって、企図されるアミノ酸変化は、典型的には、Ｖ_Ｈ及び／若しくはＶ_Ｌドメインのフレームワーク領域中に、並びに／又はＨＣ及び／若しくはＬＣの定常領域中に存在するであろう。異なる観点から見ると、アミノ酸変化は、好ましくはＣＤＲ領域には存在しない。例えば、企図される配列は、９８～９９％の同一性若しくは相同性、又は９６～９８％の同一性若しくは相同性、又は９２～９６％の同一性若しくは相同性、又は８５～９２％の同一性若しくは相同性、又は７５～８５％の同一性若しくは相同性を有し、最も典型的には（しかし必ずしもそうではないが）、ＣＤＲの外側の変化したアミノ酸を有する。アミノ酸変化についての他の選択肢の中で、１つ以上のアミノ酸は、非ヒト抗体に「ヒト化する」ように変化することができ、及び／又は１つ以上のグリコシル化部位を移動又は排除するように変化することができる。

更に、企図される抗体は、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、合成抗体、キメラ抗体、シングルドメイン抗体、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、以下により詳細に記載されるようなＢｉＫｅ、及びＴｒｉＫｅなどの様々な形態を明示的に含むことに留意するべきである。当然ながら、抗体という用語は、全てのクラスの免疫グロブリン分子（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、並びに対応するサブクラス（例えば、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４、ＩｇＡ_１、ＩｇＡ_２）を明示的に含むことにも留意するべきである。

企図される抗体断片に関して、断片は、ＣＤＲ（典型的には、Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌのうちの少なくとも１つの全てのＣＤＲ）、及び任意選択でフレームワーク残基を含有する抗体の１つ以上の部分を含むことに留意するべきである。したがって、抗体断片は、ほとんどの場合、抗原（ここでは、ＣＤ３０のエピトープ）に特異的に結合する能力を示すであろう。他の断片の中では、特に企図される断片としては、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、及びその突然変異体、天然に存在する変異体、並びに様々な非抗体ポリペプチド（例えば、毒素、異なる抗原に対する抗原認識部位、酵素、受容体、受容体リガンドなど）との融合タンパク質が挙げられる。異なる観点から見ると、企図される抗体断片は、少なくとも２０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも４０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも５０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも６０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも７０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも８０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも９０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１００個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１２５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１５０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１７５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２００個の連続したアミノ酸残基、又は少なくとも２５０個の連続したアミノ酸残基のアミノ酸配列を有するであろう。

更に企図される態様では、抗体又はその断片は、インビトロ又はインビボ診断に使用されてもよく、そのままの状態で検出可能な標識に連結されてもよい。例えば、好適な検出可能な標識としては、様々な酵素、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性物質、ポジトロン放出金属、及び非放射性常磁性金属イオンが挙げられる。検出可能な標識は、抗体に直接的に、又は当該技術分野において既知の技術を使用して中間体（例えば、化学的又は生物学的リンカー）を通して間接的のいずれかで、連結又は結合され得る。追加的に、又は代替的に、企図される抗体及びその断片は、個体支持体に連結されてもよく、これは免疫アッセイ又はＣＤ３０、若しくはＣＤ３０を発現する細胞の精製に特に有用である。例えば、好適な支持体としては、磁性ビーズ、ガラス、セルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、ポリ塩化ビニル、及びポリプロピレンが挙げられる。

企図される抗体及びその断片は、ＣＤ３０を発現する細胞に薬剤を標的化するために治療剤に連結されてもよく、又は治療剤を含んでもよい。例えば、特に企図される治療剤としては、化学療法薬、放射性核種、及び免疫刺激剤（例えば、サイトカイン、サイトカイン類似体、ケモカイン、又はチェックポイント阻害剤）が挙げられる。抗体－薬物コンジュゲートを調製するための多数の方法があり、これらの全ては本明細書で使用するために好適であると考えられる。

特に好ましい態様では、企図される抗体又はその断片は、抗体の少なくとも一部分が第２のポリペプチドと連続している（任意選択で、好ましく柔軟なリンカーを介して）キメラタンパク質として調製されてもよい。例えば、好適なキメラタンパク質は、細胞内シグナル伝達部分、膜貫通部分、及び細胞外認識ドメインを有し得るキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）として構成されてもよい。そのような場合、認識ドメインが抗体断片（例えば、ｓｃＦｖ若しくはシングルドメイン）を含むこと、及び／又は細胞内シグナル伝達ドメインが活性化／ＩＴＡＭモチーフを含むことが一般的に企図される。他の選択肢の中では、当該技術分野において既知の様々なドメインを有する第１、第２、又は第３世代ＣＡＲが企図され得る。例えば、好適なＣＡＲは、ＣＤ８ヒンジ部分、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、及びＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）又はＦｃ受容体イプシロン（ＦｃεＲＩγ）シグナル伝達ドメインを含むであろう。或いは、シグナル伝達ドメインはまた、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）シグナル伝達ドメインのうちの１つ以上を含んでもよい。他の選択肢の中で、そのようなキメラ抗原受容体は、好ましくは細胞傷害性免疫担当細胞中で、特にＮＫ細胞及び／又はＴ細胞中で発現される。

他方では、特に抗ＣＤ３０抗体又はその断片が、細胞若しくは受容体／リガンドとの接触を更に媒介するために使用される場合、企図されるキメラタンパク質は、二重特異性融合タンパク質として、二重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＢｉＫＥ）として、又は三重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＴｒｉＫｅ）として構築されてもよい。例えば、二重特異性融合タンパク質は、抗ＣＤ抗体又はその部分と、所望の標的に選択的に結合する第２の親和性リガンドとを含んでもよい。そのような標的は、可溶性タンパク質又は細胞結合性タンパク質であってもよく、特に企図される標的はＰＤ－Ｌ１を含む。他方では、企図されるキメラ分子は、１つの部分が抗ＣＤ３０抗体又はその部分を含み、他の部分が免疫担当細胞に特異的なマーカーに対する結合剤（例えば、抗ＣＤ３）を有する二重特異性ポリペプチド（例えば、第１のｓｃＦｖがリンカーを介して第２のｓｃＦｖに結合している）として構築されてもよい。

更に企図される態様では、抗ＣＤ３０抗体又はその部分は、ＩｇＧ－Ｆｃ／ＩＬ１５Ｒα／ＩＬ１５ハイブリッド（例えば、ＡＬＴ８０３）に結合してもよい。例えば、抗ＣＤ３０抗体断片は、そのようにＴｘＭを形成するために、ハイブリッドの一方又は両方のアームに結合しているｓｃＦｖ部分であり得る（ＵＲＬ：Ａｌｔｏｒｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ．ｃｏｍにおいてＴｘＭテクノロジーを参照されたい）。又は抗ＣＤ３０抗体断片は、ハイブリッドの一方のアームに結合しているｓｃＦｖ部分であってもよく、一方、ハイブリッドのもう１つのアームは、ＰＤ－Ｌ１（又は他の免疫関連リガンド）に結合するｓｃＦｖ部分であってもよい。

理解されるべきであるように、企図される抗ＣＤ３０抗体をコードする核酸も本明細書で明示的に考慮され、当業者であれば、そのような核酸（例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ）及びそのような核酸を含む組換え実体を容易に調製できるであろう。他の選択肢の中で、好適な組換え実体としては、当然ながら、酵母、細菌、及びウイルス発現ベクター、ゲノム編集又は他の組込みのための線状ＤＮＡ、ＲＮＡなどが含まれ、組換え核酸が組換え構築物の発現を可能にするために、好適な調節エレメントを含むことを認識するべきである。更に、核酸は、典型的には、組換え核酸を含み、それを発現する宿主細胞に対するコドン最適化を使用することに留意するべきである。

容易に理解されるように、抗ＣＤ３０抗体、その断片、又は抗ＣＤ３０抗体若しくはその断片を含有するキメラタンパク質の使用は、ＣＤ３０陽性腫瘍細胞が細胞傷害性免疫細胞上の抗ＣＤ３０抗体、及び／又は抗ＣＤ３０ ＣＡＲを用いて標的化される場合、特に有利である。更に、癌細胞がＣＤ３０を発現して表示する場合、細胞は更なる治療標的を提示する場合がある（例えば、ＣＤ３０結合部分及び免疫刺激部分を有するキメラ分子（例えば、ＡＬＴ－８０３）による標的化を介して）。

これらの所見を考慮して、本発明者らは、抗体及びその断片などの様々な組換えＣＤ３０結合分子、並びに抗ＣＤ３０ ＣＡＲ分子を発現する細胞及びそれらを含む医薬組成物の使用も企図する。最も典型的には、そのような組換えタンパク質は、抗体及びその断片を可溶性形態、ＣＤ３０結合部分を含む可溶性キメラ分子、又はＣＤ３０結合部分を含むＣＡＲなどの膜結合性分子であり得る。例えば、組換えＣＤ３０結合ＣＡＲは、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、又はＮＫＴ細胞などの細胞傷害性細胞中で発現され得る。

そのような調製又は生成された医薬組成物を、腫瘍を有する患者に投与して免疫療法の有効性を高め、腫瘍を治療する（例えば、腫瘍による免疫抑制を調整し（例えば、低減、排除するなど）、腫瘍サイズを低下させるなど）ことができることが企図される。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び／又は腫瘍ワクチンは、皮下（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、真皮下（ｓｕｂｄｅｒｍａｌ）注射、又は静脈内注射を含む全身注射を介して投与され得る。他の実施形態では、全身注射が効果的ではない場合（例えば、脳腫瘍などの場合）、又はより局所的な治療が望ましい場合、組換え免疫グロブリンタンパク質複合体及び／又は医薬組成物が腫瘍内注射を介して投与され得ることが企図される。本明細書で使用される場合、「投与すること」という用語は、本明細書で企図される化合物及び組成物の直接投与及び間接投与の両方を指し、直接投与は、典型的には医療従事者（例えば、医師、看護師など）によって実施され、一方、間接投与は、典型的には化合物及び組成物を直接投与のために医療従事者に提供するか、又は化合物及び組成物を医療従事者が直接投与に利用可能な状態にする工程を含む。

投与の用量及びスケジュールに関して、用量及び／又はスケジュールは、タンパク質、タンパク質複合体のタイプ、又は医薬組成物のタイプ（例えば、組換えタンパク質複合体と組み合わされるウイルス、細菌、酵母など）、疾患の種類及び予後（例えば、腫瘍型、サイズ、場所）、患者の健康状態（例えば、年齢、性別などを含む）に依存して変化し得る。用量及びスケジュールは変化し得るが、腫瘍微小環境中のＴ細胞分化及び／又は活性化の低減によって、免疫抑制を低下させるのになお十分でありながら、製剤が宿主の正常細胞にいかなる著しい有害作用ももたらさないように、用量及びスケジュールは選択し、調節することができる。したがって、好ましい実施形態では、製剤を投与する最適又は望ましい条件は、所定の閾値に基づいて決定することができる。例えば、所定の閾値は、腫瘍微小環境における活性化するＴ細胞、又はＴ細胞放出サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＦＮ－γ、ＩＬ－１２、ＩＬ－２３、ＩＬ－１ｂ、ＩＬ－６、又はＴＧＦ－β）の所定の場所又は全身の濃度であってもよい。したがって、投与条件は、典型的には、腫瘍微小環境においてこれらのサイトカインのうちの１つ以上を少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも２４時間、４８時間、７２時間、７日間など増加させるように調整される。更に、本明細書に提示される化合物及び組成物は、ＮＫ細胞と併用投与（同時又は逐次的に）されてもよい。例えば、好適なＮＫ細胞には、自家ＮＫ細胞、並びにＮＫ９２細胞及びそれらの誘導体（例えば、ａＮＫ細胞、ｈａＮＫ細胞、ｔａＮＫ細胞、全てＮａｎｔＫｗｅｓｔ，９９２０ Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ Ｂｌｖｄ．Ｃｕｌｖｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ ９０２３２から市販されている）が挙げられる。

上述したようなＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを使用して、本発明者らは、様々なＣＤ３０結合構築物を調製し、ｓｃＦｖ及びＩｇＧ１構築物についての例示的な結果を以下に示す。例えば、以下の表２は、表に記載されたようなＶ_Ｈ及びＶ_Ｌドメインを使用するｓｃＦｖ及びＩｇＧ１構築物についての解離定数の決定に関する例示的な結果を示す。より具体的には、Ｋ_Ｄの決定はＳＰＲによって行われ、平均値を×１０^－９Ｍで示される。測定は、ｓｃＦｖ又はＩｇＧ１がチップ表面に捕捉された状態で、２５℃、ｐＨ７．４で行われ、ＣＤ３０はその分析物であった。

抗ＣＤ３０構築物のＣＤ３０を発現する細胞へのインビトロ結合を実証するために、本発明者らは、抗ＣＤ３０ ＩｇＧ１（５２－５）を構築し、それを使用し、ＣＤ３０を発現する細胞（ここでは、ジャーカットリンパ腫細胞）を抗ＣＤ３０－ＩｇＧ１抗体と共に市販の抗ＣＤ３０抗体に曝露した。ＣＤ３０を発現しないＨＬ－６０細胞を、陰性対照として機能した。図１のフローサイトメトリーの結果から容易に分かるように、抗ＣＤ３０ ＩｇＧ１（５２－５）は、ジャーカット細胞に強力且つ特異的に結合し、ＨＬ－６０細胞への結合は実質的に示さなかった。更に、抗ＣＤ３０－ＩｇＧ１（５２－５）の結合は、市販の抗ＣＤ３０抗体よりも強かった。抗ＣＤ３０－ＩｇＧ１（５２－３８）を使用して、ジャーカット細胞に対する結合を定量した場合、図２から分かるように、用量反応曲線が得られ、一方、ＩｇＧ対照は著しい結合は与えなかった。

一連の更なる実験において、本発明者らは、上記のようなＶ_Ｌ及びＶ_Ｈドメイン（可動性リンカー部分によって結合された）を有するｓｃＦｖ部分を含み、ＣＤ８ヒンジ部分、ＣＤ２８膜貫通部分、及びＦｃ受容体イプシロン（ＦｃεＲＩγ）シグナル伝達ドメインを更に含む抗ＣＤ３０ ＣＡＲを構築した。図３は、上述した抗ＣＤ３０ ＣＡＲ及びモックＣＡＲを発現するｈａＮＫ細胞を使用した、ＣＤ３０発現標的細胞のＣＡＲ特異的標的細胞溶解についての例示的な結果を表示するグラフである。図４は、ＣＤ３０を発現しない対照標的細胞のＣＡＲ特異的標的細胞溶解についての対応する例示的な結果を表示するグラフである。図５は、図３及び４の標的細胞中のＣＤ３０発現についての例示的な結果を表示するグラフであり、並びに図６は、図３及び４のｈａＮＫ細胞における抗ＣＤ３０ ＣＡＲ及びモックＣＡＲの発現についての例示的な結果を表示するグラフである。

とりわけ、ＣＡＲ媒介細胞傷害性は、図７から分かるように、標的細胞上に存在するＣＤ３０の量と厳密に相関した。ここでは、ＣＤ３０を発現する標的細胞のＣＡＲ特異的標的細胞溶解が、ＣＤ３０の低発現レベル及び高発現レベルを有する細胞に対して、並びにこれらの細胞のプールに対して示されている。図８は、図７の標的細胞におけるＣＤ３０の発現についての結果を例示的に表示する。

いくつかの実施形態では、本発明の特定の実施形態を説明し、主張するために使用される、成分の量、濃度などの特性、反応条件などを表す数字は、「約」という用語で場合によって修飾されていると理解されるべきである。したがって、いくつかの実施形態では、明細書及び添付の特許請求の範囲に記載される数値パラメータは、特定の実施形態によって得ようとする望ましい特性に応じて変化し得る近似値である。本明細書の範囲及び値の列挙は、範囲内に入る各個別の値を個々に言及する省略形として機能することのみを意図している。本明細書に明記されない限り、個々の値は、それが本明細書に個別に列挙されているかのように本明細書に組み込まれる。

本明細書で使用される場合、医薬組成物又は薬物を「投与する」という用語は、医薬組成物又は薬物の直接投与及び間接投与の両方を指し、医薬組成物又は薬物の直接投与は、典型的には医療従事者（例えば、医師、看護師など）によって実施され、間接投与は、医薬組成物又は薬物を直接投与（例えば、注射、注入、経口送達、局所送達などを介して）のために医療従事者に提供するか、又は医薬組成物又は薬物を医療従事者が直接投与に利用可能な状態にする工程を含む。状態、疾患を発症しやすい状態、又は意図された治療への応答を「予後する」又は「予測する」という用語は、対象における状態の進行率、改善及び／又は持続期間を含む状態、発症しやすさ、及び／又は反応を予測する行為又は予測をカバーする（しかし、治療又は診断をカバーしない）ことを意味することに更に留意するべきである。

本明細書に記載される全ての方法は、本明細書に明記されていない限り、又は文脈によって明確に矛盾しない限り、任意の好適な順序で実行することができる。本明細書のある特定の実施形態に対して提供されるありとあらゆる例、又は例示的な言語（例えば、「など」）の使用は、本発明をよりよく理解するために単に意図されるものであり、別途主張される本発明の範囲に限定をもたらすものではない。明細書におけるいかなる言語も、本発明の実践に不可欠な任意の特許請求されていない要素を示すものとして解釈されるべきではない。

本明細書の説明及び以下に続く特許請求の範囲を通して使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」の意味には、内容が別段に明示しない限り、複数の指示対象を含む。また、本明細書の説明で使用される場合、「中に（ｉｎ）」の意味は、内容が別段に明示しない限り、「中に（ｉｎ）」及び「上に（ｏｎ）」を含む。また、本明細書で使用される場合、且つ内容が別段に明示しない限り、「に結合する（ｃｏｕｐｌｅｄ ｔｏ）」という用語は、直接結合（互いに結合している２つの要素が互いに接触する）及び間接結合（少なくとも１つの追加の要素が２つの要素の間に位置している）の両方を含むことが意図される。したがって、「に結合する」及び「と結合する」は、同義語として使用される。

当業者であれば、既に記載されたもの以外にも多くの変更が、本明細書の本発明の概念から逸脱することなく可能であることは明らかであろう。したがって、本発明の主題は、添付の特許請求の範囲以外には制限されるべきではない。更に、明細書及び特許請求の範囲の両方の解釈において、全ての用語は文脈と一致して、可能な限り広義に解釈する必要がある。特に、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」及び「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、要素、構成成分、又は工程を非排他的な方法で言及していると解釈するべきであり、言及される要素、構成成分、又は工程が存在してもよいか、又は利用されてもよいか、又は明示的に言及されていない他の要素、構成成分、又は工程と組み合わされてもよいことを示している。明細書の主張が、Ａ、Ｂ、Ｃ…及びＮからなる群から選択されるいくつかのうちの少なくとも１つを指す場合、文書は群からの１つの要素のみを必要とすると解釈するべきであり、Ａに加えてＮ、又はＢに加えてＮなどを必要とすると解釈するべきではない。
本発明は、例えば以下の実施形態を包含する：
［実施形態１］単離された抗体又はその断片であって、前記抗体又はその断片がＣＤ３０に結合し、
可変重鎖（Ｖ _Ｈ ）ドメインと可変軽鎖（Ｖ _Ｌ ）ドメインとを含み、
前記Ｖ _Ｈ ドメインが、配列番号１、配列番号３、及び配列番号５からなる群から選択され、
前記Ｖ _Ｌ ドメインが、配列番号２、配列番号４、及び配列番号６からなる群から選択される、抗体又はその断片。
［実施形態２］任意選択で、リンカーにより互いに結合され、ｓｃＦｖを形成する、ＶＨ _５２－２ （配列番号１）及びＶＬ _５２－２ （配列番号２）を含む、実施形態１に記載の抗体又は断片。
［実施形態３］任意選択で、リンカーにより互いに結合され、ｓｃＦｖを形成する、ＶＨ _５２－５ （配列番号３）及びＶＬ _５２－５ （配列番号４）を含む、実施形態１に記載の抗体又は断片。
［実施形態４］任意選択で、リンカーにより互いに結合され、ｓｃＦｖを形成する、ＶＨ _{５２－３８} （配列番号５）及びＶＬ _{５２－３８} （配列番号６）を含む、実施形態１に記載の抗体又は断片。
［実施形態５］前記抗体が、ＩｇＧ _１ 抗体又はｓｃＦｖである、実施形態１に記載の抗体又は断片。
［実施形態６］治療剤を更に含む、実施形態１～５のいずれかに記載の抗体又は断片。
［実施形態７］前記治療剤が、化学療法薬、放射性核種、又は免疫刺激剤である、実施形態６に記載の抗体又は断片。
［実施形態８］前記免疫刺激剤が、サイトカイン、サイトカイン類似体、ケモカイン、又はチェックポイント阻害剤である、実施形態７に記載の抗体又は断片。
［実施形態９］検出可能な標識を更に含む、実施形態１～８のいずれかに記載の抗体又は断片。
［実施形態１０］実施形態１に記載の抗体又は断片を含む、キメラタンパク質。
［実施形態１１］前記キメラタンパク質が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態１０に記載のキメラタンパク質。
［実施形態１２］前記ＣＡＲが、ＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）又はＦｃ受容体イプシロン（ＦｃεＲＩγ）シグナル伝達ドメインを有する、実施形態１１に記載のキメラタンパク質。
［実施形態１３］前記ＣＡＲが、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つを有する、実施形態１１に記載のキメラタンパク質。
［実施形態１４］前記ＣＡＲが、ＣＤ８ヒンジドメイン及びＣＤ２８膜貫通ドメインを有する、実施形態１１に記載のキメラタンパク質。
［実施形態１５］前記ＣＡＲが、ＮＫ細胞又は細胞傷害性Ｔ細胞の表面で発現され、それに結合する組換えＣＡＲである、実施形態１１に記載のキメラタンパク質。
［実施形態１６］二重特異性融合タンパク質として構成される、実施形態１０に記載のキメラタンパク質。
［実施形態１７］前記二重特異性融合タンパク質がＩｇＧ Ｆｃ部分を含み、任意選択でＩＬ１５α受容体部分、ＩＬ１５部分、及びＩＬ１５スーパーアゴニスト部分のうちの少なくとも１つを更に含む、実施形態１６に記載のキメラタンパク質。
［実施形態１８］二重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＢｉＫＥ）又は三重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＴｒｉＫｅ）として構成される、実施形態１６に記載のキメラタンパク質。
［実施形態１９］実施形態１～９のいずれかに記載の単離された抗体若しくは断片、又は実施形態１０～１８のいずれかに記載のキメラタンパク質をコードする、組換え核酸。
［実施形態２０］前記核酸が、発現ベクター中若しくは組換えウイルスゲノム中にあるか、又は線状ＤＮＡの形態である、実施形態１９に記載の組換え核酸。
［実施形態２１］前記核酸が、ＲＮＡである、実施形態１９に記載の組換え核酸。
［実施形態２２］実施形態１～９のいずれかに記載の単離された抗体若しくは断片、又は実施形態１０～１８のいずれかに記載のキメラタンパク質と組み合わされた薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
［実施形態２３］実施形態１９～２１のいずれかに記載の組換え核酸と組み合わされた薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
［実施形態２４］個体を治療する方法であって、実施形態２２～２３のいずれかに記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
［実施形態２５］前記医薬組成物が前記個体に投与され、それによって前記個体における免疫抑制を低下させる、実施形態２４に記載の方法。
［実施形態２６］前記個体が、癌ワクチン及び／又はチェックポイント阻害剤で治療されている、実施形態２４に記載の方法。
［実施形態２７］個体での血液学的癌の治療における、実施形態２２～２３のいずれかに記載の医薬組成物の、使用。

Claims (28)

1. 単離された抗体又はその断片であって、前記抗体又はその断片がＣＤ３０に結合し、
   それぞれ配列番号１と配列番号２、配列番号３と配列番号４、配列番号３と配列番号２、又は配列番号１と配列番号４からなる可変重鎖（Ｖ_Ｈ）ドメインと可変軽鎖（Ｖ_Ｌ）ドメインとを含む、抗体又はその断片。
2. 任意選択で、リンカーにより互いに結合され、ｓｃＦｖを形成する、ＶＨ_５２－２（配列番号１）及びＶＬ_５２－２（配列番号２）を含む、請求項１に記載の抗体又は断片。
3. 任意選択で、リンカーにより互いに結合され、ｓｃＦｖを形成する、ＶＨ_５２－５（配列番号３）及びＶＬ_５２－５（配列番号４）を含む、請求項１に記載の抗体又は断片。
4. 任意選択で、リンカーにより互いに結合され、ｓｃＦｖを形成する、ＶＨ_５２－２（配列番号１）及びＶＬ_５２－５（配列番号４）を含む、請求項１に記載の抗体又は断片。
5. 任意選択で、リンカーにより互いに結合され、ｓｃＦｖを形成する、ＶＨ_５２－５（配列番号３）及びＶＬ_５２－２（配列番号２）を含む、請求項１に記載の抗体又は断片。
6. 前記抗体又は断片が、ＩｇＧ_１抗体又はｓｃＦｖである、請求項１に記載の抗体又は断片。
7. 前記抗体又は断片が、検出可能な標識に結合されている、請求項１～６のいずれか一項に記載の抗体又は断片。
8. 請求項１に記載の抗体又は断片を含む、キメラタンパク質。
9. 前記キメラタンパク質が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項８に記載のキメラタンパク質。
10. 前記ＣＡＲが、ＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）又はＦｃ受容体イプシロン（ＦｃεＲＩγ）シグナル伝達ドメインを有する、請求項９に記載のキメラタンパク質。
11. 前記ＣＡＲが、ＣＤ２８シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢシグナル伝達ドメイン、及びＣＤ３ゼータ（ＣＤ３ζ）シグナル伝達ドメインのうちの少なくとも１つを有する、請求項９に記載のキメラタンパク質。
12. 前記ＣＡＲが、ＣＤ８ヒンジドメイン及びＣＤ２８膜貫通ドメインを有する、請求項９に記載のキメラタンパク質。
13. 前記ＣＡＲが、ＮＫ細胞又は細胞傷害性Ｔ細胞の表面で発現される組換えＣＡＲである、請求項９に記載のキメラタンパク質。
14. 二重特異性融合タンパク質として構成される、請求項８に記載のキメラタンパク質。
15. 前記二重特異性融合タンパク質がＩｇＧ Ｆｃ部分を含み、任意選択でＩＬ１５α受容体部分、ＩＬ１５部分、及びＩＬ１５スーパーアゴニスト部分のうちの少なくとも１つを更に含む、請求項１４に記載のキメラタンパク質。
16. 二重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＢｉＫＥ）又は三重特異性キラー細胞エンゲージャー（ＴｒｉＫｅ）として構成される、請求項１４に記載のキメラタンパク質。
17. 請求項１～７のいずれか一項に記載の単離された抗体若しくは断片、又は請求項８～１６のいずれか一項に記載のキメラタンパク質をコードする、組換え核酸。
18. 前記核酸が、発現ベクター中若しくは組換えウイルスゲノム中にあるか、又は線状ＤＮＡの形態である、請求項１７に記載の組換え核酸。
19. 前記核酸が、ＲＮＡである、請求項１７に記載の組換え核酸。
20. 請求項１～７のいずれか一項に記載の単離された抗体若しくは断片、又は請求項８～１６のいずれか一項に記載のキメラタンパク質、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
21. 請求項１７～１９のいずれか一項に記載の組換え核酸、及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
22. 個体の治療に使用するための医薬組成物であって、請求項２０～２１のいずれか一項に記載の医薬組成物を含む、医薬組成物。
23. 前記個体に投与され、それによって前記個体における免疫抑制を低下させるために製剤化されている、請求項２２に記載の医薬組成物。
24. 前記個体が、癌ワクチン及び／又はチェックポイント阻害剤で治療されている、請求項２２に記載の医薬組成物。
25. 治療剤を更に含む、請求項２０に記載の医薬組成物。
26. 前記治療剤が、化学療法薬、放射性核種、又は免疫刺激剤である、請求項２５に記載の医薬組成物。
27. 前記免疫刺激剤が、サイトカイン、サイトカイン類似体、ケモカイン、又はチェックポイント阻害剤である、請求項２６に記載の医薬組成物。
28. 個体での血液学的癌の治療のための医薬の製造における、請求項２０に記載の医薬組成物の、使用。

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