JP7664221B2 - ヘモグロビン依存性細菌を培養するための方法及び組成物 - Google Patents
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Description
本出願は、2019年8月2日に出願された米国仮特許出願第62/882,021号明細書;2019年9月10日に出願された米国仮特許出願第62/898,372号明細書;及び2020年2月7日に出願された米国仮特許出願第62/971,391号明細書の利益を主張し、前記出願のそれぞれの全内容は、その全体がこの参照により本明細書に組み込まれる。
本発明はまた、以下に関する。
[項目1]
ヘモグロビン依存性細菌を培養する方法であって、ヘモグロビン代替物質を含む増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌をインキュベートするステップを含み、前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア、シアノバクテリア成分、シアノバクテリアバイオマス、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、方法。
[項目2]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア、シアノバクテリアバイオマス又はシアノバクテリア成分である、項目1に記載の方法。
[項目3]
前記シアノバクテリアは、ユレモ(Oscillatoriales)目のものである、項目2に記載の方法。
[項目4]
前記シアノバクテリアは、アルスロネマ(Arthronema)、アルスロスピラ(Arthrospira)、ブレンノトリクス(Blennothrix)、クリナリウム(Crinalium)、ゲイトレリネマ(Geitlerinema)、ハロミクロネマ(Halomicronema)、ハロスピルリナ(Halospirulina)、ヒドロコレウム(Hydrocoleum)、ジャージネマ(Jaaginema)、カタグニメネ(Katagnymene)、コムボフォロン(Komvophoron)、レプトリングビヤ(Leptolyngbya)、リムノスリックス(Limnothrix)、リングビヤ(Lyngbya)、ミクロコレウス(Microcoleus)、ユレモ(Oscillatoria)、フォルミディウム(Phormidium)、プランクトリングビヤ(Planktolyngbya)、プランクトトリコイデス(Planktothricoides)、プランクトスリックス(Planktothrix)、プレクトネマ(Plectonema)、シュードアナベナ(Pseudoanabaena)、シュードフォルミジウム(Pseudophormidium)、スキゾスリックス(Schizothrix)、スピルリナ(Spirulina)、スタリア(Starria)、シンプロカ(Symploca)、トリココレウス(Trichocoleus)、トリコデスミウム(Trichodesmium)又はチコネマ(Tychonema)属のものである、項目2に記載の方法。
[項目5]
前記シアノバクテリアは、アルスロスピラ(Arthrospira)属のものである、項目4に記載の方法。
[項目6]
前記シアノバクテリアは、アルスロスピラ・プラテンシス(Arthrospira platensis)及び/又はアルスロスピラ・マキシマ(Arthrospira maxima)である、項目5に記載の方法。
[項目7]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリアである、項目2~6のいずれか一項に記載の方法。
[項目8]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリアバイオマスである、項目2~6のいずれか一項に記載の方法。
[項目9]
前記シアノバクテリアバイオマスは、スピルリナである、項目8に記載の方法。
[項目10]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア成分である、項目2~6のいずれか一項に記載の方法。
[項目11]
前記シアノバクテリア成分は、スピルリナ成分である、項目10に記載の方法。
[項目12]
前記スピルリナ成分は、可溶性スピルリナ成分である、項目11に記載の方法。
[項目13]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、項目1に記載の方法。
[項目14]
前記緑藻は、クロレラ(Chlorellales)目のものである、項目13に記載の方法。
[項目15]
前記緑藻は、アカンソスフェラ(Acanthosphaera)、アクチナストルム(Actinastrum)、アパトコッカス(Apatococcus)、アポドコッカス(Apodococcus)、アウキセノクロレラ(Auxenochlorella)、ブランドティア(Brandtia)、カロリブランドティア(Carolibrandtia)、カテナ(Catena)、クロレラ(Chlorella)、クロロパルバ(Chloroparva)、クロステリオプシス(Closteriopsis)、コンパクトクロレラ(Compactochlorella)、コロナコッカス(Coronacoccus)、コロナストルム(Coronastrum)、キリンドロケリス(Cylindrocelis)、ジアカントス(Diacanthos)、ジセルラ(Dicellula)、ジクロスター(Dicloster)、ディクチオスフェリウム(Dictyosphaerium)、ジディモゲネス(Didymogenes)、エオミケス(Eomyces)、フィスリセラ(Fissuricella)、フォリクラリア(Follicularia)、ゲミネラ(Geminella)、グロエオティラ(Gloeotila)、ゴレンキニオプシス(Golenkiniopsis)、ヘゲワルディア(Hegewaldia)、ヘリコスポリジウム(Helicosporidium)、ヘイニギア(Heynigia)、ヒンダキア(Hindakia)、ホルモスポラ(Hormospora)、カレンジンラ(Kalenjinla)、ケラトコッカス(Keratococcus)、ケルマティア(Kermatia)、レプトクロレラ(Leptochlorella)、マラスフェリウム(Marasphaerium)、マリンクロレラ(Marinchlorella)、マルバニア(Marvania)、マサイア(Masaia)、マイヤレラ(Meyerella)、ミクラクチニウム(Micractinium)、ムチドスフェリウム(Mucidosphaerium)、ムリエラ(Muriella)、ナンノクロリス(Nannochloris)、ナノクロルム(Nanochlorum)、パルメロカエテ(Palmellochaete)、パラクロレラ(Parachlorella)、プランクトクロレラ(Planktochlorella)、ポドヘドラ(Podohedra)、プロトテカ(Prototheca)、シュードクロリス(Pseudochloris)、シュードシデロセロプシス(Pseudosiderocelopsis)、プミリオスフェラ(Pumiliosphaera)、シデロセリス(Siderocelis)、シデロセロプシス(Siderocelopsis)又はゾウクロレラ(Zoochlorella)属のものである、項目14に記載の方法。
[項目16]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻である、項目13~15のいずれか一項に記載の方法。
[項目17]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻バイオマスである、項目13~15のいずれか一項に記載の方法。
[項目18]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻成分である、項目13~15のいずれか一項に記載の方法。
[項目19]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、アクチノマイセス(Actinomyces)、アリスティペス(Alistipes)、アナエロブチリクム(Anaerobutyricum)、バチルス(Bacillus)、バクテロイデス(Bacteroides)、クロアシバチルス(Cloacibacillus)、クロストリジウム(Clostridium)、コリンセラ(Collinsella)、クチバクテリウム(Cutibacterium)、エイセンベルギエラ(Eisenbergiella)、エリシペロトリクス(Erysipelotrichaceae)、ユーバクテリウム(Eubacterium)/モギバクテリウム(Mogibacterium)、フェーカリバクテリウム(Faecalibacterium)、フルニエレラ(Fournierella)、フソバクテリウム(Fusobacterium)、メガスフェラ(Megasphaera)、パラバクテロイデス(Parabacteroides)、ペプトニフィルス(Peptoniphilus)、ペプトストレプトコッカス(Peptostreptococcus)、ポルフィロモナス(Porphyromonas)、プレボテラ(Prevotella)、プロピオニバクテリウム(Propionibacterium)、ラリミクロビウム(Rarimicrobium)、シュトレウォーシア(Shuttleworthia)又はベイロネラ(Veillonella)属の細菌である、項目1~18のいずれか一項に記載の方法。
[項目20]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ(Prevotella)属のものである、項目1~18のいずれか一項に記載の方法。
[項目21]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ・アルベンシス(Prevotella albensis)、プレボテラ・アムニイ(Prevotella amnii)、プレボテラ・バーゲンシス(Prevotella bergensis)、プレボテラ・ビビア(Prevotella bivia)、プレボテラ・ブレビス(Prevotella brevis)、プレボテラ・ブリアンティイ(Prevotella bryantii)、プレボテラ・ブッカエ(Prevotella buccae)、プレボテラ・ブッカリス(Prevotella buccalis)、プレボテラ・コプリ(Prevotella copri)、プレボテラ・デンタリス(Prevotella dentalis)、プレボテラ・デンティコーラ(Prevotella denticola)、プレボテラ・ディシエンス(Prevotella disiens)、プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)、プレボテラ・インターメディア(Prevotella intermedia)、プレボテラ・マクロサ(Prevotella maculosa)、プレボテラ・マルシイ(Prevotella marshii)、プレボテラ・メラニノジェニカ(Prevotella melaninogenica)、プレボテラ・マイカンス(Prevotella micans)、プレボテラ・マルチフォルミス(Prevotella multiformis)、プレボテラ・ニグレッセンス(Prevotella nigrescens)、プレボテラ・オラリス(Prevotella oralis)、プレボテラ・オリス(Prevotella oris)、プレボテラ・オウロラム(Prevotella oulorum)、プレボテラ・パレンス(Prevotella pallens)、プレボテラ・サリバーエ(Prevotella salivae)、プレボテラ・ステルコレア(Prevotella stercorea)、プレボテラ・タンネラエ(Prevotella tannerae)、プレボテラ・チモネンシス(Prevotella timonensis)、プレボテラ・ジェジュニ(Prevotella jejuni)、プレボテラ・アウランティアカ(Prevotella aurantiaca)、プレボテラ・バーロニアエ(Prevotella baroniae)、プレボテラ・コロランス(Prevotella colorans)、プレボテラ・コーポリス(Prevotella corporis)、プレボテラ・デンタシニ(Prevotella dentasini)、プレボテラ・エノエカ(Prevotella enoeca)、プレボテラ・ファルセニイ(Prevotella falsenii)、プレボテラ・フスカ(Prevotella fusca)、プレボテラ・ヘパリノリティカ(Prevotella heparinolytica)、プレボテラ・ロエッシェイイ(Prevotella loescheii)、プレボテラ・マルチサッカリボラックス(Prevotella multisaccharivorax)、プレボテラ・ナンセイエンシス(Prevotella nanceiensis)、プレボテラ・オリザエ(Prevotella oryzae)、プレボテラ・パルディビベンス(Prevotella paludivivens)、プレボテラ・プレウリチディス(Prevotella pleuritidis)、プレボテラ・ルミニコーラ(Prevotella ruminicola)、プレボテラ・サッカロリティカ(Prevotella saccharolytica)、プレボテラ・スコポス(Prevotella scopos)、プレボテラ・シャーヒイ(Prevotella shahii)、プレボテラ・ズーグレオフォルマンス(Prevotella zoogleoformans)又はプレボテラ・ベロラリス(Prevotella veroralis)である、項目20に記載の方法。
[項目22]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)種のものである、項目20に記載の方法。
[項目23]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%のゲノム、16S及び/又はCRISPR配列同一性を含む、項目20に記載の方法。
[項目24]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)のヌクレオチド配列に対して少なくとも99.5%のゲノム、16S及び/又はCRISPR配列同一性を含む、項目20に記載の方法。
[項目25]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)である、項目20に記載の方法。
[項目26]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、表1に列記される1つ又は複数のタンパク質を含むプレボテラ(Prevotella)菌株である、項目20~25のいずれか一項に記載の方法。
[項目27]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、表2に列記されるタンパク質を実質的に含まないプレボテラ(Prevotella)株に由来する、項目20~26のいずれか一項に記載の方法。
[項目28]
前記ヘモグロビン代替物質は、増殖培地中でヘモグロビンの代わりに用いられて、ヘモグロビン依存性細菌の増殖を促進することができる、項目1~27のいずれか一項に記載の方法。
[項目29]
前記増殖培地は、ヘモグロビン又はその誘導体を含まない、項目1~28のいずれか一項に記載の方法。
[項目30]
前記増殖培地は、動物性製品を含まない、項目1~29のいずれか一項に記載の方法。
[項目31]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度と比較して増加した速度で増殖する、項目1~30のいずれか一項に記載の方法。
[項目32]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より少なくとも50%高い、項目31に記載の方法。
[項目33]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より少なくとも100%高い、項目31に記載の方法。
[項目34]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より200%~400%高い、項目31に記載の方法。
[項目35]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より少なくとも300%高い、項目31に記載の方法。
[項目36]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度と比較してより高い細胞密度まで増殖する、項目1~35のいずれか一項に記載の方法。
[項目37]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より少なくとも50%高い細胞密度まで増殖する、項目36に記載の方法。
[項目38]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より少なくとも100%高い細胞密度まで増殖する、項目36に記載の方法。
[項目39]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より200%~400%高い細胞密度まで増殖する、項目36に記載の方法。
[項目40]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より少なくとも300%高い細胞密度まで増殖する、項目36に記載の方法。
[項目41]
1%超のCO 2 を含む嫌気性雰囲気下で前記ヘモグロビン依存性細菌をインキュベートするステップを含む、項目1~40のいずれか一項に記載の方法。
[項目42]
前記嫌気性雰囲気は、少なくとも10%のCO 2 を含む、項目41に記載の方法。
[項目43]
前記嫌気性雰囲気は、少なくとも20%のCO 2 を含む、項目41に記載の方法。
[項目44]
前記嫌気性雰囲気は、10%~40%のCO 2 を含む、項目41に記載の方法。
[項目45]
前記嫌気性雰囲気は、20%~30%のCO 2 を含む、項目41に記載の方法。
[項目46]
前記嫌気性雰囲気は、約25%のCO 2 を含む、項目41に記載の方法。
[項目47]
前記嫌気性雰囲気は、ほぼCO 2 とN 2 とから構成される、項目41~46のいずれか一項に記載の方法。
[項目48]
前記嫌気性雰囲気は、約25%のCO 2 と約75%のN 2 とを含む、項目41に記載の方法。
[項目49]
a)1%超のCO 2 を含む嫌気性ガス混合物でバイオリアクターをパージするステップと;
b)ステップa)でパージされた前記バイオリアクター内で前記ヘモグロビン依存性細菌をインキュベートするステップと
を含む、項目41に記載の方法。
[項目50]
前記嫌気性ガス混合物は、少なくとも10%のCO 2 を含む、項目49に記載の方法。
[項目51]
前記嫌気性ガス混合物は、少なくとも20%のCO 2 を含む、項目49に記載の方法。
[項目52]
前記嫌気性ガス混合物は、10%~40%のCO 2 を含む、項目49に記載の方法。
[項目53]
前記嫌気性ガス混合物は、20%~30%のCO 2 を含む、項目49に記載の方法。
[項目54]
前記嫌気性ガス混合物は、約25%のCO 2 を含む、項目49に記載の方法。
[項目55]
前記嫌気性ガス混合物は、ほぼCO 2 とN 2 とから構成される、項目49~54のいずれか一項に記載の方法。
[項目56]
前記嫌気性ガス混合物は、約25%のCO 2 と約75%のN 2 とを含む、項目49に記載の方法。
[項目57]
前記バイオリアクターは、約1L、約20L、約3,500L又は約20,000Lのバイオリアクターである、項目49~56のいずれか一項に記載の方法。
[項目58]
増殖培地にヘモグロビン依存性細菌を接種するステップをさらに含み、前記接種ステップは、ステップb)に先行する、項目49~57のいずれか一項に記載の方法。
[項目59]
ヘモグロビン依存性細菌の体積は、前記増殖培地の約0.1%v/vである、項目58に記載の方法。
[項目60]
前記増殖培地は、約1Lの体積である、項目58に記載の方法。
[項目61]
ヘモグロビン依存性細菌の体積は、約1mLである、項目58に記載の方法。
[項目62]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、10~24時間にわたってインキュベートされる、項目49~61のいずれか一項に記載の方法。
[項目63]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、14~16時間にわたってインキュベートされる、項目62に記載の方法。
[項目64]
増殖培地に約5%v/vの前記培養細菌を接種するステップをさらに含む、項目62又は63に記載の方法。
[項目65]
前記増殖培地は、約20Lの体積である、項目64に記載の方法。
[項目66]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、10~24時間にわたってインキュベートされる、項目64又は65に記載の方法。
[項目67]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、12~14時間にわたってインキュベートされる、項目66に記載の方法。
[項目68]
増殖培地に約0.5%v/vの前記培養細菌を接種するステップをさらに含む、項目66又は67に記載の方法。
[項目69]
前記増殖培地は、約3500Lの体積である、項目68に記載の方法。
[項目70]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、10~24時間にわたってインキュベートされる、項目68又は69に記載の方法。
[項目71]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、12~14時間にわたってインキュベートされる、項目70に記載の方法。
[項目72]
前記増殖培地は、酵母エキス、ダイズペプトンA2SC 19649、ダイズペプトンE110 19885、リン酸二カリウム、リン酸一カリウム、L-システイン-HCl、塩化アンモニウム、グルシデックス21D及びグルコースを含む、項目1~71のいずれか一項に記載の方法。
[項目73]
前記増殖培地は、5g/L~15g/Lの酵母エキス19512を含む、項目72に記載の方法。
[項目74]
前記増殖培地は、約10g/Lの酵母エキス19512を含む、項目72に記載の方法。
[項目75]
前記増殖培地は、10g/L~15g/LのダイズペプトンA2SC 19649を含む、項目72~74のいずれか一項に記載の方法。
[項目76]
前記増殖培地は、約12.5g/LのダイズペプトンA2SC 19649を含む、項目75に記載の方法。
[項目77]
前記増殖培地は、約10g/LのダイズペプトンA2SC 19649を含む、項目75に記載の方法。
[項目78]
前記増殖培地は、10g/L~15g/LのダイズペプトンE110 19885を含む、項目72~77のいずれか一項に記載の方法。
[項目79]
前記増殖培地は、約12.5g/LのダイズペプトンE110 19885を含む、項目78に記載の方法。
[項目80]
前記増殖培地は、約10g/LのダイズペプトンE110 19885を含む、項目78に記載の方法。
[項目81]
前記増殖培地は、1g/L~3g/Lのリン酸二カリウムを含む、項目72~80のいずれか一項に記載の方法。
[項目82]
前記増殖培地は、約1.59g/Lのリン酸二カリウムを含む、項目81に記載の方法。
[項目83]
前記増殖培地は、約2.5g/Lのリン酸二カリウムを含む、項目81に記載の方法。
[項目84]
前記増殖培地は、0.5g/L~1.5g/Lのリン酸一カリウムを含む、項目72~83のいずれか一項に記載の方法。
[項目85]
前記増殖培地は、約0.91g/Lのリン酸一カリウムを含む、項目84に記載の方法。
[項目86]
前記増殖培地は、0.1g/L~1.0g/LのL-システイン-HClを含む、項目72~85のいずれか一項に記載の方法。
[項目87]
前記増殖培地は、約0.5g/LのL-システイン-HClを含む、項目86に記載の方法。
[項目88]
前記増殖培地は、0.1g/L~1.0g/Lの塩化アンモニウムを含む、項目72~87のいずれか一項に記載の方法。
[項目89]
前記増殖培地は、約0.5g/Lの塩化アンモニウムを含む、項目88に記載の方法。
[項目90]
前記増殖培地は、20g/L~30g/Lのグルシデックス21Dを含む、項目72~89のいずれか一項に記載の方法。
[項目91]
前記増殖培地は、約25g/Lのグルシデックス21Dを含む、項目90に記載の方法。
[項目92]
前記増殖培地は、5g/L~15g/Lのグルコースを含む、項目72~91のいずれか一項に記載の方法。
[項目93]
前記増殖培地は、約5g/Lのグルコース又は約10g/Lのグルコースを含む、項目92に記載の方法。
[項目94]
前記増殖培地は、少なくとも0.5g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目1~93のいずれか一項に記載の方法。
[項目95]
前記増殖培地は、少なくとも0.75g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目94に記載の方法。
[項目96]
前記増殖培地は、少なくとも1g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目94に記載の方法。
[項目97]
前記増殖培地は、約1g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目94に記載の方法。
[項目98]
前記増殖培地は、約2g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目94に記載の方法。
[項目99]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、35℃~39℃の温度でインキュベートされる、項目1~98のいずれか一項に記載の方法。
[項目100]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、約37℃の温度でインキュベートされる、項目99に記載の方法。
[項目101]
前記増殖培地は、5.5~7.5のpHである、項目1~100のいずれか一項に記載の方法。
[項目102]
前記増殖培地は、約6.5のpHである、項目101に記載の方法。
[項目103]
前記ヘモグロビン依存性細菌をインキュベートするステップは、50~300のRPMで前記増殖培地を攪拌することを含む、項目1~102のいずれか一項に記載の方法。
[項目104]
前記増殖培地は、約150のRPMで攪拌される、項目103に記載の方法。
[項目105]
前記嫌気性ガス混合物は、インキュベーション中に連続的に添加される、項目49~104のいずれか一項に記載の方法。
[項目106]
前記嫌気性ガス混合物は、約0.02vvmの速度で添加される、項目105に記載の方法。
[項目107]
定常期に到達すると、前記ヘモグロビン依存性細菌を採取するステップをさらに含む、項目1~106のいずれか一項に記載の方法。
[項目108]
採取後、前記ヘモグロビン依存性細菌を遠心分離して、細胞ペーストを生成するステップをさらに含む、項目107に記載の方法。
[項目109]
前記細胞ペーストを安定剤溶液で希釈して、細胞スラリーを生成するステップをさらに含む、項目108に記載の方法。
[項目110]
前記細胞スラリーを凍結乾燥して、粉末を生成するステップをさらに含む、項目109に記載の方法。
[項目111]
前記粉末をガンマ線で照射するステップをさらに含む、項目110に記載の方法。
[項目112]
ヘモグロビン依存性細菌を培養する方法であって、(a)ヘモグロビン代替物質とヘモグロビン依存性細菌とを増殖培地に添加するステップと;(b)前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌をインキュベートするステップとを含み、前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア、シアノバクテリア成分、シアノバクテリアバイオマス、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、方法。
[項目113]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア、シアノバクテリアバイオマス又はシアノバクテリア成分である、項目112に記載の方法。
[項目114]
前記シアノバクテリアは、ユレモ(Oscillatoriales)目のものである、項目113に記載の方法。
[項目115]
前記シアノバクテリアは、アルスロネマ(Arthronema)、アルスロスピラ(Arthrospira)、ブレンノトリクス(Blennothrix)、クリナリウム(Crinalium)、ゲイトレリネマ(Geitlerinema)、ハロミクロネマ(Halomicronema)、ハロスピルリナ(Halospirulina)、ヒドロコレウム(Hydrocoleum)、ジャージネマ(Jaaginema)、カタグニメネ(Katagnymene)、コムボフォロン(Komvophoron)、レプトリングビヤ(Leptolyngbya)、リムノスリックス(Limnothrix)、リングビヤ(Lyngbya)、ミクロコレウス(Microcoleus)、ユレモ(Oscillatoria)、フォルミディウム(Phormidium)、プランクトリングビヤ(Planktolyngbya)、プランクトトリコイデス(Planktothricoides)、プランクトスリックス(Planktothrix)、プレクトネマ(Plectonema)、シュードアナベナ(Pseudoanabaena)、シュードフォルミジウム(Pseudophormidium)、スキゾスリックス(Schizothrix)、スピルリナ(Spirulina)、スタリア(Starria)、シンプロカ(Symploca)、トリココレウス(Trichocoleus)、トリコデスミウム(Trichodesmium)又はチコネマ(Tychonema)属のものである、項目113に記載の方法。
[項目116]
前記シアノバクテリアは、アルスロスピラ(Arthrospira)属のものである、項目115に記載の方法。
[項目117]
前記シアノバクテリアは、アルスロスピラ・プラテンシス(Arthrospira platensis)及び/又はアルスロスピラ・マキシマ(Arthrospira maxima)である、項目116に記載の方法。
[項目118]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリアである、項目113~117のいずれか一項に記載の方法。
[項目119]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリアバイオマスである、項目113~117のいずれか一項に記載の方法。
[項目120]
前記シアノバクテリアバイオマスは、スピルリナである、項目119に記載の方法。
[項目121]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア成分である、項目113~117のいずれか一項に記載の方法。
[項目122]
前記シアノバクテリア成分は、スピルリナ成分である、項目121に記載の方法。
[項目123]
前記スピルリナ成分は、可溶性スピルリナ成分である、項目122に記載の方法。
[項目124]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、項目112に記載の方法。
[項目125]
前記緑藻は、クロレラ(Chlorellales)目のものである、項目124に記載の方法。
[項目126]
前記緑藻は、アカンソスフェラ(Acanthosphaera)、アクチナストルム(Actinastrum)、アパトコッカス(Apatococcus)、アポドコッカス(Apodococcus)、アウキセノクロレラ(Auxenochlorella)、ブランドティア(Brandtia)、カロリブランドティア(Carolibrandtia)、カテナ(Catena)、クロレラ(Chlorella)、クロロパルバ(Chloroparva)、クロステリオプシス(Closteriopsis)、コンパクトクロレラ(Compactochlorella)、コロナコッカス(Coronacoccus)、コロナストルム(Coronastrum)、キリンドロケリス(Cylindrocelis)、ジアカントス(Diacanthos)、ジセルラ(Dicellula)、ジクロスター(Dicloster)、ディクチオスフェリウム(Dictyosphaerium)、ジディモゲネス(Didymogenes)、エオミケス(Eomyces)、フィスリセラ(Fissuricella)、フォリクラリア(Follicularia)、ゲミネラ(Geminella)、グロエオティラ(Gloeotila)、ゴレンキニオプシス(Golenkiniopsis)、ヘゲワルディア(Hegewaldia)、ヘリコスポリジウム(Helicosporidium)、ヘイニギア(Heynigia)、ヒンダキア(Hindakia)、ホルモスポラ(Hormospora)、カレンジンラ(Kalenjinla)、ケラトコッカス(Keratococcus)、ケルマティア(Kermatia)、レプトクロレラ(Leptochlorella)、マラスフェリウム(Marasphaerium)、マリンクロレラ(Marinchlorella)、マルバニア(Marvania)、マサイア(Masaia)、マイヤレラ(Meyerella)、ミクラクチニウム(Micractinium)、ムチドスフェリウム(Mucidosphaerium)、ムリエラ(Muriella)、ナンノクロリス(Nannochloris)、ナノクロルム(Nanochlorum)、パルメロカエテ(Palmellochaete)、パラクロレラ(Parachlorella)、プランクトクロレラ(Planktochlorella)、ポドヘドラ(Podohedra)、プロトテカ(Prototheca)、シュードクロリス(Pseudochloris)、シュードシデロセロプシス(Pseudosiderocelopsis)、プミリオスフェラ(Pumiliosphaera)、シデロセリス(Siderocelis)、シデロセロプシス(Siderocelopsis)又はゾウクロレラ(Zoochlorella)属のものである、項目125に記載の方法。
[項目127]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻である、項目124~126のいずれか一項に記載の方法。
[項目128]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻バイオマスである、項目124~126のいずれか一項に記載の方法。
[項目129]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻成分である、項目124~126のいずれか一項に記載の方法。
[項目130]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、アクチノマイセス(Actinomyces)、アリスティペス(Alistipes)、アナエロブチリクム(Anaerobutyricum)、バチルス(Bacillus)、バクテロイデス(Bacteroides)、クロアシバチルス(Cloacibacillus)、クロストリジウム(Clostridium)、コリンセラ(Collinsella)、クチバクテリウム(Cutibacterium)、エイセンベルギエラ(Eisenbergiella)、エリシペロトリクス(Erysipelotrichaceae)、ユーバクテリウム(Eubacterium)/モギバクテリウム(Mogibacterium)、フェーカリバクテリウム(Faecalibacterium)、フルニエレラ(Fournierella)、フソバクテリウム(Fusobacterium)、メガスフェラ(Megasphaera)、パラバクテロイデス(Parabacteroides)、ペプトニフィルス(Peptoniphilus)、ペプトストレプトコッカス(Peptostreptococcus)、ポルフィロモナス(Porphyromonas)、プレボテラ(Prevotella)、プロピオニバクテリウム(Propionibacterium)、ラリミクロビウム(Rarimicrobium)、シュトレウォーシア(Shuttleworthia)又はベイロネラ(Veillonella)属の細菌である、項目112~129のいずれか一項に記載の方法。
[項目131]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ(Prevotella)属のものである、項目112~129のいずれか一項に記載の方法。
[項目132]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ・アルベンシス(Prevotella albensis)、プレボテラ・アムニイ(Prevotella amnii)、プレボテラ・バーゲンシス(Prevotella bergensis)、プレボテラ・ビビア(Prevotella bivia)、プレボテラ・ブレビス(Prevotella brevis)、プレボテラ・ブリアンティイ(Prevotella bryantii)、プレボテラ・ブッカエ(Prevotella buccae)、プレボテラ・ブッカリス(Prevotella buccalis)、プレボテラ・コプリ(Prevotella copri)、プレボテラ・デンタリス(Prevotella dentalis)、プレボテラ・デンティコーラ(Prevotella denticola)、プレボテラ・ディシエンス(Prevotella disiens)、プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)、プレボテラ・インターメディア(Prevotella intermedia)、プレボテラ・マクロサ(Prevotella maculosa)、プレボテラ・マルシイ(Prevotella marshii)、プレボテラ・メラニノジェニカ(Prevotella melaninogenica)、プレボテラ・マイカンス(Prevotella micans)、プレボテラ・マルチフォルミス(Prevotella multiformis)、プレボテラ・ニグレッセンス(Prevotella nigrescens)、プレボテラ・オラリス(Prevotella oralis)、プレボテラ・オリス(Prevotella oris)、プレボテラ・オウロラム(Prevotella oulorum)、プレボテラ・パレンス(Prevotella pallens)、プレボテラ・サリバーエ(Prevotella salivae)、プレボテラ・ステルコレア(Prevotella stercorea)、プレボテラ・タンネラエ(Prevotella tannerae)、プレボテラ・チモネンシス(Prevotella timonensis)、プレボテラ・ジェジュニ(Prevotella jejuni)、プレボテラ・アウランティアカ(Prevotella aurantiaca)、プレボテラ・バーロニアエ(Prevotella baroniae)、プレボテラ・コロランス(Prevotella colorans)、プレボテラ・コーポリス(Prevotella corporis)、プレボテラ・デンタシニ(Prevotella dentasini)、プレボテラ・エノエカ(Prevotella enoeca)、プレボテラ・ファルセニイ(Prevotella falsenii)、プレボテラ・フスカ(Prevotella fusca)、プレボテラ・ヘパリノリティカ(Prevotella heparinolytica)、プレボテラ・ロエッシェイイ(Prevotella loescheii)、プレボテラ・マルチサッカリボラックス(Prevotella multisaccharivorax)、プレボテラ・ナンセイエンシス(Prevotella nanceiensis)、プレボテラ・オリザエ(Prevotella oryzae)、プレボテラ・パルディビベンス(Prevotella paludivivens)、プレボテラ・プレウリチディス(Prevotella pleuritidis)、プレボテラ・ルミニコーラ(Prevotella ruminicola)、プレボテラ・サッカロリティカ(Prevotella saccharolytica)、プレボテラ・スコポス(Prevotella scopos)、プレボテラ・シャーヒイ(Prevotella shahii)、プレボテラ・ズーグレオフォルマンス(Prevotella zoogleoformans)又はプレボテラ・ベロラリス(Prevotella veroralis)である、項目131に記載の方法。
[項目133]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)種のものである、項目131に記載の方法。
[項目134]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)のヌクレオチド配列に対して少なくとも90%のゲノム、16S及び/又はCRISPR配列同一性を含む、項目131に記載の方法。
[項目135]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%のゲノム、16S及び/又はCRISPR配列同一性を含む、項目131に記載の方法。
[項目136]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)である、項目131に記載の方法。
[項目137]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、表1に列記される1つ又は複数のタンパク質を含むプレボテラ(Prevotella)菌株である、項目131~136のいずれか一項に記載の方法。
[項目138]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、表2に列記されるタンパク質を実質的に含まないプレボテラ(Prevotella)株である、項目131~137のいずれか一項に記載の方法。
[項目139]
前記ヘモグロビン代替物質は、増殖培地中でヘモグロビンの代わりに用いられて、ヘモグロビン依存性細菌の増殖を促進することができる、項目112~138のいずれか一項に記載の方法。
[項目140]
前記増殖培地は、ヘモグロビン又はその誘導体を含まない、項目112~139のいずれか一項に記載の方法。
[項目141]
前記増殖培地は、動物性製品を含まない、項目112~140のいずれか一項に記載の方法。
[項目142]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度と比較して増加した速度で増殖する、項目112~141のいずれか一項に記載の方法。
[項目143]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より少なくとも50%高い、項目142に記載の方法。
[項目144]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より少なくとも100%高い、項目142に記載の方法。
[項目145]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より200%~400%高い、項目142に記載の方法。
[項目146]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より少なくとも300%高い、項目142に記載の方法。
[項目147]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度と比較してより高い細胞密度まで増殖する、項目112~146のいずれか一項に記載の方法。
[項目148]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より少なくとも50%高い細胞密度まで増殖する、項目147に記載の方法。
[項目149]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より少なくとも100%高い細胞密度まで増殖する、項目147に記載の方法。
[項目150]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より200%~400%高い細胞密度まで増殖する、項目147に記載の方法。
[項目151]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より少なくとも300%高い細胞密度まで増殖する、項目147に記載の方法。
[項目152]
1%超のCO 2 を含む嫌気性雰囲気下で前記ヘモグロビン依存性細菌をインキュベートするステップを含む、項目112~151のいずれか一項に記載の方法。
[項目153]
前記嫌気性雰囲気は、少なくとも10%のCO 2 を含む、項目152に記載の方法。
[項目154]
前記嫌気性雰囲気は、少なくとも20%のCO 2 を含む、項目152に記載の方法。
[項目155]
前記嫌気性雰囲気は、10%~40%のCO 2 を含む、項目152に記載の方法。
[項目156]
前記嫌気性雰囲気は、20%~30%のCO 2 を含む、項目152に記載の方法。
[項目157]
前記嫌気性雰囲気は、約25%のCO 2 を含む、項目152に記載の方法。
[項目158]
前記嫌気性雰囲気は、ほぼCO 2 とN 2 とから構成される、項目152~157のいずれか一項に記載の方法。
[項目159]
前記嫌気性雰囲気は、約25%のCO 2 と約75%のN 2 とを含む、項目152に記載の方法。
[項目160]
a)1%超のCO 2 を含む嫌気性ガス混合物でバイオリアクターをパージするステップと;
b)ステップa)でパージされた前記バイオリアクター内で前記ヘモグロビン依存性細菌をインキュベートするステップと
を含む、項目152に記載の方法。
[項目161]
前記嫌気性ガス混合物は、少なくとも10%のCO 2 を含む、項目160に記載の方法。
[項目162]
前記嫌気性ガス混合物は、少なくとも20%のCO 2 を含む、項目160に記載の方法。
[項目163]
前記嫌気性ガス混合物は、10%~40%のCO 2 を含む、項目160に記載の方法。
[項目164]
前記嫌気性ガス混合物は、20%~30%のCO 2 を含む、項目160に記載の方法。
[項目165]
前記嫌気性ガス混合物は、約25%のCO 2 を含む、項目160に記載の方法。
[項目166]
前記嫌気性ガス混合物は、ほぼCO 2 とN 2 とから構成される、項目160~165のいずれか一項に記載の方法。
[項目167]
前記嫌気性ガス混合物は、約25%のCO 2 と約75%のN 2 とを含む、項目160に記載の方法。
[項目168]
前記バイオリアクターは、約1L、約20L、約3,500L又は約20,000Lのバイオリアクターである、項目160~167のいずれか一項に記載の方法。
[項目169]
増殖培地にヘモグロビン依存性細菌を接種するステップをさらに含み、前記接種ステップは、ステップb)に先行する、項目160~168のいずれか一項に記載の方法。
[項目170]
ヘモグロビン依存性細菌の体積は、前記増殖培地の約0.1%v/vである、項目169に記載の方法。
[項目171]
前記増殖培地は、約1Lの体積である、項目169に記載の方法。
[項目172]
ヘモグロビン依存性細菌の体積は、約1mLである、項目169に記載の方法。
[項目173]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、10~24時間にわたってインキュベートされる、項目160~172のいずれか一項に記載の方法。
[項目174]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、14~16時間にわたってインキュベートされる、項目173に記載の方法。
[項目175]
増殖培地に約5%v/vの前記培養細菌を接種するステップをさらに含む、項目173又は174に記載の方法。
[項目176]
前記増殖培地は、約20Lの体積である、項目175に記載の方法。
[項目177]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、10~24時間にわたってインキュベートされる、項目175又は176に記載の方法。
[項目178]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、12~14時間にわたってインキュベートされる、項目177に記載の方法。
[項目179]
増殖培地に約0.5%v/vの前記培養細菌を接種するステップをさらに含む、項目177又は178に記載の方法。
[項目180]
前記増殖培地は、約3500Lの体積である、項目179に記載の方法。
[項目181]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、10~24時間にわたってインキュベートされる、項目179又は180に記載の方法。
[項目182]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、12~14時間にわたってインキュベートされる、項目181に記載の方法。
[項目183]
前記増殖培地は、酵母エキス、ダイズペプトンA2SC 19649、ダイズペプトンE110 19885、リン酸二カリウム、リン酸一カリウム、L-システイン-HCl、塩化アンモニウム、グルシデックス21D及びグルコースを含む、項目112~182のいずれか一項に記載の方法。
[項目184]
前記増殖培地は、5g/L~15g/Lの酵母エキス19512を含む、項目183に記載の方法。
[項目185]
前記増殖培地は、約10g/Lの酵母エキス19512を含む、項目183に記載の方法。
[項目186]
前記増殖培地は、10g/L~15g/LのダイズペプトンA2SC 19649を含む、項目183~185のいずれか一項に記載の方法。
[項目187]
前記増殖培地は、約12.5g/LのダイズペプトンA2SC 19649を含む、項目186に記載の方法。
[項目188]
前記増殖培地は、約10g/LのダイズペプトンA2SC 19649を含む、項目186に記載の方法。
[項目189]
前記増殖培地は、10g/L~15g/LのダイズペプトンE110 19885を含む、項目183~188のいずれか一項に記載の方法。
[項目190]
前記増殖培地は、約12.5g/LのダイズペプトンE110 19885を含む、項目189に記載の方法。
[項目191]
前記増殖培地は、約10g/LのダイズペプトンE110 19885を含む、項目189に記載の方法。
[項目192]
前記増殖培地は、1g/L~3g/Lのリン酸二カリウムを含む、項目183~191のいずれか一項に記載の方法。
[項目193]
前記増殖培地は、約1.59g/Lのリン酸二カリウムを含む、項目192に記載の方法。
[項目194]
前記増殖培地は、約2.5g/Lのリン酸二カリウムを含む、項目192に記載の方法。
[項目195]
前記増殖培地は、0.5g/L~1.5g/Lのリン酸一カリウムを含む、項目183~194のいずれか一項に記載の方法。
[項目196]
前記増殖培地は、約0.91g/Lのリン酸一カリウムを含む、項目195に記載の方法。
[項目197]
前記増殖培地は、0.1g/L~1.0g/LのL-システイン-HClを含む、項目183~196のいずれか一項に記載の方法。
[項目198]
前記増殖培地は、約0.5g/LのL-システイン-HClを含む、項目197に記載の方法。
[項目199]
前記増殖培地は、0.1g/L~1.0g/Lの塩化アンモニウムを含む、項目183~198のいずれか一項に記載の方法。
[項目200]
前記増殖培地は、約0.5g/Lの塩化アンモニウムを含む、項目199に記載の方法。
[項目201]
前記増殖培地は、20g/L~30g/Lのグルシデックス21Dを含む、項目183~200のいずれか一項に記載の方法。
[項目202]
前記増殖培地は、約25g/Lのグルシデックス21Dを含む、項目201に記載の方法。
[項目203]
前記増殖培地は、5g/L~15g/Lのグルコースを含む、項目183~202のいずれか一項に記載の方法。
[項目204]
前記増殖培地は、約5g/Lのグルコース又は約10g/Lのグルコースを含む、項目203に記載の方法。
[項目205]
前記増殖培地は、少なくとも0.5g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目112~204のいずれか一項に記載の方法。
[項目206]
前記増殖培地は、少なくとも0.75g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目205に記載の方法。
[項目207]
前記増殖培地は、少なくとも1g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目205に記載の方法。
[項目208]
前記増殖培地は、約1g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目205に記載の方法。
[項目209]
前記増殖培地は、約2g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目205に記載の方法。
[項目210]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、35℃~39℃の温度でインキュベートされる、項目112~209のいずれか一項に記載の方法。
[項目211]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、約37℃の温度でインキュベートされる、項目210に記載の方法。
[項目212]
前記増殖培地は、5.5~7.5のpHである、項目112~211のいずれか一項に記載の方法。
[項目213]
前記増殖培地は、約6.5のpHである、項目212に記載の方法。
[項目214]
前記ヘモグロビン依存性細菌をインキュベートするステップは、50~300のRPMで前記増殖培地を攪拌することを含む、項目112~213のいずれか一項に記載の方法。
[項目215]
前記増殖培地は、約150のRPMで攪拌される、項目214に記載の方法。
[項目216]
前記嫌気性ガス混合物は、インキュベーション中に連続的に添加される、項目160~215のいずれか一項に記載の方法。
[項目217]
前記嫌気性ガス混合物は、約0.02vvmの速度で添加される、項目216に記載の方法。
[項目218]
定常期に到達すると、前記ヘモグロビン依存性細菌を採取するステップをさらに含む、項目112~217のいずれか一項に記載の方法。
[項目219]
採取後、前記ヘモグロビン依存性細菌を遠心分離して、細胞ペーストを生成するステップをさらに含む、項目218に記載の方法。
[項目220]
前記細胞ペーストを安定剤溶液で希釈して、細胞スラリーを生成するステップをさらに含む、項目219に記載の方法。
[項目221]
前記細胞スラリーを凍結乾燥して、粉末を生成するステップをさらに含む、項目220に記載の方法。
[項目222]
前記粉末をガンマ線で照射するステップをさらに含む、項目221に記載の方法。
[項目223]
ヘモグロビン代替物質を含む増殖培地中のヘモグロビン依存性細菌を含むバイオリアクターであって、前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア、シアノバクテリア成分、シアノバクテリアバイオマス、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、バイオリアクター。
[項目224]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア、シアノバクテリアバイオマス又はシアノバクテリア成分である、項目223に記載のバイオリアクター。
[項目225]
前記シアノバクテリアは、ユレモ(Oscillatoriales)目のものである、項目224に記載のバイオリアクター。
[項目226]
前記シアノバクテリアは、アルスロネマ(Arthronema)、アルスロスピラ(Arthrospira)、ブレンノトリクス(Blennothrix)、クリナリウム(Crinalium)、ゲイトレリネマ(Geitlerinema)、ハロミクロネマ(Halomicronema)、ハロスピルリナ(Halospirulina)、ヒドロコレウム(Hydrocoleum)、ジャージネマ(Jaaginema)、カタグニメネ(Katagnymene)、コムボフォロン(Komvophoron)、レプトリングビヤ(Leptolyngbya)、リムノスリックス(Limnothrix)、リングビヤ(Lyngbya)、ミクロコレウス(Microcoleus)、ユレモ(Oscillatoria)、フォルミディウム(Phormidium)、プランクトリングビヤ(Planktolyngbya)、プランクトトリコイデス(Planktothricoides)、プランクトスリックス(Planktothrix)、プレクトネマ(Plectonema)、シュードアナベナ(Pseudoanabaena)、シュードフォルミジウム(Pseudophormidium)、スキゾスリックス(Schizothrix)、スピルリナ(Spirulina)、スタリア(Starria)、シンプロカ(Symploca)、トリココレウス(Trichocoleus)、トリコデスミウム(Trichodesmium)又はチコネマ(Tychonema)属のものである、項目224に記載のバイオリアクター。
[項目227]
前記シアノバクテリアは、アルスロスピラ(Arthrospira)属のものである、項目226に記載のバイオリアクター。
[項目228]
前記シアノバクテリアは、アルスロスピラ・プラテンシス(Arthrospira platensis)及び/又はアルスロスピラ・マキシマ(Arthrospira maxima)である、項目227に記載のバイオリアクター。
[項目229]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリアである、項目224~228のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目230]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリアバイオマスである、項目224~228のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目231]
前記シアノバクテリアバイオマスは、スピルリナである、項目230に記載のバイオリアクター。
[項目232]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア成分である、項目224~228のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目233]
前記シアノバクテリア成分は、スピルリナ成分である、項目232に記載のバイオリアクター。
[項目234]
前記スピルリナ成分は、可溶性スピルリナ成分である、項目233に記載のバイオリアクター。
[項目235]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、項目223に記載のバイオリアクター。
[項目236]
前記緑藻は、クロレラ(Chlorellales)目のものである、項目235に記載のバイオリアクター。
[項目237]
前記緑藻は、アカンソスフェラ(Acanthosphaera)、アクチナストルム(Actinastrum)、アパトコッカス(Apatococcus)、アポドコッカス(Apodococcus)、アウキセノクロレラ(Auxenochlorella)、ブランドティア(Brandtia)、カロリブランドティア(Carolibrandtia)、カテナ(Catena)、クロレラ(Chlorella)、クロロパルバ(Chloroparva)、クロステリオプシス(Closteriopsis)、コンパクトクロレラ(Compactochlorella)、コロナコッカス(Coronacoccus)、コロナストルム(Coronastrum)、キリンドロケリス(Cylindrocelis)、ジアカントス(Diacanthos)、ジセルラ(Dicellula)、ジクロスター(Dicloster)、ディクチオスフェリウム(Dictyosphaerium)、ジディモゲネス(Didymogenes)、エオミケス(Eomyces)、フィスリセラ(Fissuricella)、フォリクラリア(Follicularia)、ゲミネラ(Geminella)、グロエオティラ(Gloeotila)、ゴレンキニオプシス(Golenkiniopsis)、ヘゲワルディア(Hegewaldia)、ヘリコスポリジウム(Helicosporidium)、ヘイニギア(Heynigia)、ヒンダキア(Hindakia)、ホルモスポラ(Hormospora)、カレンジンラ(Kalenjinla)、ケラトコッカス(Keratococcus)、ケルマティア(Kermatia)、レプトクロレラ(Leptochlorella)、マラスフェリウム(Marasphaerium)、マリンクロレラ(Marinchlorella)、マルバニア(Marvania)、マサイア(Masaia)、マイヤレラ(Meyerella)、ミクラクチニウム(Micractinium)、ムチドスフェリウム(Mucidosphaerium)、ムリエラ(Muriella)、ナンノクロリス(Nannochloris)、ナノクロルム(Nanochlorum)、パルメロカエテ(Palmellochaete)、パラクロレラ(Parachlorella)、プランクトクロレラ(Planktochlorella)、ポドヘドラ(Podohedra)、プロトテカ(Prototheca)、シュードクロリス(Pseudochloris)、シュードシデロセロプシス(Pseudosiderocelopsis)、プミリオスフェラ(Pumiliosphaera)、シデロセリス(Siderocelis)、シデロセロプシス(Siderocelopsis)又はゾウクロレラ(Zoochlorella)属のものである、項目236に記載のバイオリアクター。
[項目238]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻である、項目235~237のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目239]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻バイオマスである、項目235~237のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目240]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻成分である、項目235~237のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目241]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、アクチノマイセス(Actinomyces)、アリスティペス(Alistipes)、アナエロブチリクム(Anaerobutyricum)、バチルス(Bacillus)、バクテロイデス(Bacteroides)、クロアシバチルス(Cloacibacillus)、クロストリジウム(Clostridium)、コリンセラ(Collinsella)、クチバクテリウム(Cutibacterium)、エイセンベルギエラ(Eisenbergiella)、エリシペロトリクス(Erysipelotrichaceae)、ユーバクテリウム(Eubacterium)/モギバクテリウム(Mogibacterium)、フェーカリバクテリウム(Faecalibacterium)、フルニエレラ(Fournierella)、フソバクテリウム(Fusobacterium)、メガスフェラ(Megasphaera)、パラバクテロイデス(Parabacteroides)、ペプトニフィルス(Peptoniphilus)、ペプトストレプトコッカス(Peptostreptococcus)、ポルフィロモナス(Porphyromonas)、プレボテラ(Prevotella)、プロピオニバクテリウム(Propionibacterium)、ラリミクロビウム(Rarimicrobium)、シュトレウォーシア(Shuttleworthia)又はベイロネラ(Veillonella)属の細菌である、項目223~240のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目242]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ(Prevotella)属のものである、項目223~240のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目243]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ・アルベンシス(Prevotella albensis)、プレボテラ・アムニイ(Prevotella amnii)、プレボテラ・バーゲンシス(Prevotella bergensis)、プレボテラ・ビビア(Prevotella bivia)、プレボテラ・ブレビス(Prevotella brevis)、プレボテラ・ブリアンティイ(Prevotella bryantii)、プレボテラ・ブッカエ(Prevotella buccae)、プレボテラ・ブッカリス(Prevotella buccalis)、プレボテラ・コプリ(Prevotella copri)、プレボテラ・デンタリス(Prevotella dentalis)、プレボテラ・デンティコーラ(Prevotella denticola)、プレボテラ・ディシエンス(Prevotella disiens)、プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)、プレボテラ・インターメディア(Prevotella intermedia)、プレボテラ・マクロサ(Prevotella maculosa)、プレボテラ・マルシイ(Prevotella marshii)、プレボテラ・メラニノジェニカ(Prevotella melaninogenica)、プレボテラ・マイカンス(Prevotella micans)、プレボテラ・マルチフォルミス(Prevotella multiformis)、プレボテラ・ニグレッセンス(Prevotella nigrescens)、プレボテラ・オラリス(Prevotella oralis)、プレボテラ・オリス(Prevotella oris)、プレボテラ・オウロラム(Prevotella oulorum)、プレボテラ・パレンス(Prevotella pallens)、プレボテラ・サリバーエ(Prevotella salivae)、プレボテラ・ステルコレア(Prevotella stercorea)、プレボテラ・タンネラエ(Prevotella tannerae)、プレボテラ・チモネンシス(Prevotella timonensis)、プレボテラ・ジェジュニ(Prevotella jejuni)、プレボテラ・アウランティアカ(Prevotella aurantiaca)、プレボテラ・バーロニアエ(Prevotella baroniae)、プレボテラ・コロランス(Prevotella colorans)、プレボテラ・コーポリス(Prevotella corporis)、プレボテラ・デンタシニ(Prevotella dentasini)、プレボテラ・エノエカ(Prevotella enoeca)、プレボテラ・ファルセニイ(Prevotella falsenii)、プレボテラ・フスカ(Prevotella fusca)、プレボテラ・ヘパリノリティカ(Prevotella heparinolytica)、プレボテラ・ロエッシェイイ(Prevotella loescheii)、プレボテラ・マルチサッカリボラックス(Prevotella multisaccharivorax)、プレボテラ・ナンセイエンシス(Prevotella nanceiensis)、プレボテラ・オリザエ(Prevotella oryzae)、プレボテラ・パルディビベンス(Prevotella paludivivens)、プレボテラ・プレウリチディス(Prevotella pleuritidis)、プレボテラ・ルミニコーラ(Prevotella ruminicola)、プレボテラ・サッカロリティカ(Prevotella saccharolytica)、プレボテラ・スコポス(Prevotella scopos)、プレボテラ・シャーヒイ(Prevotella shahii)、プレボテラ・ズーグレオフォルマンス(Prevotella zoogleoformans)又はプレボテラ・ベロラリス(Prevotella veroralis)である、項目242に記載のバイオリアクター。
[項目244]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)種のものである、項目242に記載のバイオリアクター。
[項目245]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%のゲノム、16S及び/又はCRISPR配列同一性を含む、項目242に記載のバイオリアクター。
[項目246]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)のヌクレオチド配列に対して少なくとも99.5%のゲノム、16S及び/又はCRISPR配列同一性を含む、項目242に記載のバイオリアクター。
[項目247]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)である、項目242に記載のバイオリアクター。
[項目248]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、表1に列記される1つ又は複数のタンパク質を含むプレボテラ(Prevotella)菌株である、項目242~247のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目249]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、表2に列記されるタンパク質を実質的に含まないプレボテラ(Prevotella)株に由来する、項目242~248のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目250]
前記ヘモグロビン代替物質は、増殖培地中でヘモグロビンの代わりに用いられて、ヘモグロビン依存性細菌の増殖を促進することができる、項目223~249のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目251]
前記増殖培地は、ヘモグロビン又はその誘導体を含まない、項目223~250のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目252]
前記増殖培地は、動物性製品を含まない、項目223~251のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目253]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度と比較して増加した速度で増殖する、項目223~252のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目254]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より少なくとも50%高い、項目253に記載のバイオリアクター。
[項目255]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より少なくとも100%高い、項目253に記載のバイオリアクター。
[項目256]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より200%~400%高い、項目253に記載のバイオリアクター。
[項目257]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より少なくとも300%高い、項目253に記載のバイオリアクター。
[項目258]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度と比較してより高い細胞密度まで増殖する、項目223~257のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目259]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より少なくとも50%高い細胞密度まで増殖する、項目258に記載のバイオリアクター。
[項目260]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より少なくとも100%高い細胞密度まで増殖する、項目258に記載のバイオリアクター。
[項目261]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より200%~400%高い細胞密度まで増殖する、項目258に記載のバイオリアクター。
[項目262]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より少なくとも300%高い細胞密度まで増殖する、項目258に記載のバイオリアクター。
[項目263]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、1%超のCO 2 を含む嫌気性雰囲気下にある、項目223~262のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目264]
前記嫌気性雰囲気は、少なくとも10%のCO 2 を含む、項目263に記載のバイオリアクター。
[項目265]
前記嫌気性雰囲気は、少なくとも20%のCO 2 を含む、項目263に記載のバイオリアクター。
[項目266]
前記嫌気性雰囲気は、10%~40%のCO 2 を含む、項目263に記載のバイオリアクター。
[項目267]
前記嫌気性雰囲気は、20%~30%のCO 2 を含む、項目263に記載のバイオリアクター。
[項目268]
前記嫌気性雰囲気は、約25%のCO 2 を含む、項目263に記載のバイオリアクター。
[項目269]
前記嫌気性雰囲気は、ほぼCO 2 とN 2 とから構成される、項目263~268のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目270]
前記嫌気性雰囲気は、約25%のCO 2 と約75%のN 2 とを含む、項目263に記載のバイオリアクター。
[項目271]
1L、20L、3500L又は20,000Lのバイオリアクターである、項目263~270のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目272]
前記増殖培地は、酵母エキス、ダイズペプトンA2SC 19649、ダイズペプトンE110 19885、リン酸二カリウム、リン酸一カリウム、L-システイン-HCl、塩化アンモニウム、グルシデックス21D及びグルコースを含む、項目223~271のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目273]
前記増殖培地は、5g/L~15g/Lの酵母エキス19512を含む、項目272に記載のバイオリアクター。
[項目274]
前記増殖培地は、約10g/Lの酵母エキス19512を含む、項目272に記載のバイオリアクター。
[項目275]
前記増殖培地は、10g/L~15g/LのダイズペプトンA2SC 19649を含む、項目272~274のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目276]
前記増殖培地は、約12.5g/LのダイズペプトンA2SC 19649を含む、項目275に記載のバイオリアクター。
[項目277]
前記増殖培地は、約10g/LのダイズペプトンA2SC 19649を含む、項目275に記載のバイオリアクター。
[項目278]
前記増殖培地は、10g/L~15g/LのダイズペプトンE110 19885を含む、項目272~277のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目279]
前記増殖培地は、約12.5g/LのダイズペプトンE110 19885を含む、項目278に記載のバイオリアクター。
[項目280]
前記増殖培地は、約10g/LのダイズペプトンE110 19885を含む、項目278に記載のバイオリアクター。
[項目281]
前記増殖培地は、1g/L~3g/Lのリン酸二カリウムを含む、項目272~280のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目282]
前記増殖培地は、約1.59g/Lのリン酸二カリウムを含む、項目281に記載のバイオリアクター。
[項目283]
前記増殖培地は、約2.5g/Lのリン酸二カリウムを含む、項目281に記載のバイオリアクター。
[項目284]
前記増殖培地は、0.5g/L~1.5g/Lのリン酸一カリウムを含む、項目272~283のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目285]
前記増殖培地は、約0.91g/Lのリン酸一カリウムを含む、項目284に記載のバイオリアクター。
[項目286]
前記増殖培地は、0.1g/L~1.0g/LのL-システイン-HClを含む、項目272~285のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目287]
前記増殖培地は、約0.5g/LのL-システイン-HClを含む、項目286に記載のバイオリアクター。
[項目288]
前記増殖培地は、0.1g/L~1.0g/Lの塩化アンモニウムを含む、項目272~287のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目289]
前記増殖培地は、約0.5g/Lの塩化アンモニウムを含む、項目288に記載のバイオリアクター。
[項目290]
前記増殖培地は、20g/L~30g/Lのグルシデックス21Dを含む、項目272~289のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目291]
前記増殖培地は、約25g/Lのグルシデックス21Dを含む、項目290に記載のバイオリアクター。
[項目292]
前記増殖培地は、5g/L~15g/Lのグルコースを含む、項目272~291のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目293]
前記増殖培地は、約5g/Lのグルコース又は約10g/Lのグルコースを含む、項目292に記載のバイオリアクター。
[項目294]
前記増殖培地は、少なくとも0.5g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目223~293のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目295]
前記増殖培地は、少なくとも0.75g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目294に記載のバイオリアクター。
[項目296]
前記増殖培地は、少なくとも1g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目294に記載のバイオリアクター。
[項目297]
前記増殖培地は、約1g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目294に記載のバイオリアクター。
[項目298]
前記増殖培地は、約2g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目294に記載のバイオリアクター。
[項目299]
35℃~39℃の温度である、項目223~298のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目300]
37℃の温度である、項目299に記載のバイオリアクター。
[項目301]
前記増殖培地は、5.5~7.5のpHである、項目223~300のいずれか一項に記載のバイオリアクター。
[項目302]
前記増殖培地は、約6.5のpHである、項目301に記載のバイオリアクター。
[項目303]
項目223~302のいずれか一項に記載のバイオリアクター内でヘモグロビン依存性細菌を培養する方法であって、前記バイオリアクター内で前記ヘモグロビン依存性細菌をインキュベートするステップを含む方法。
[項目304]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、1%超のCO 2 を含む嫌気性ガス混合物中でインキュベートされる、項目303に記載の方法。
[項目305]
嫌気性ガス混合物は、少なくとも10%のCO 2 を含む、項目303に記載の方法。
[項目306]
嫌気性ガス混合物は、少なくとも20%のCO 2 を含む、項目303に記載の方法。
[項目307]
嫌気性ガス混合物は、10%~40%のCO 2 を含む、項目303に記載の方法。
[項目308]
嫌気性ガス混合物は、20%~30%のCO 2 を含む、項目303に記載の方法。
[項目309]
嫌気性ガス混合物は、約25%のCO 2 を含む、項目303に記載の方法。
[項目310]
前記嫌気性ガス混合物は、ほぼCO 2 とN 2 とから構成される、項目303~309のいずれか一項に記載の方法。
[項目311]
前記嫌気性ガス混合物は、約25%のCO 2 と約75%のN 2 とを含む、項目310に記載の方法。
[項目312]
インキュベーション前に前記増殖培地に前記ヘモグロビン依存性細菌を接種するステップをさらに含む、項目303~311のいずれか一項に記載の方法。
[項目313]
ヘモグロビン依存性細菌の体積は、前記増殖培地の約0.1%v/vである、項目312に記載の方法。
[項目314]
前記増殖培地は、約1Lの体積である、項目312に記載の方法。
[項目315]
ヘモグロビン依存性細菌の体積は、約1mLである、項目312に記載の方法。
[項目316]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、10~24時間にわたって培養される、項目303~315のいずれか一項に記載の方法。
[項目317]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、14~16時間にわたってインキュベートされる、項目316に記載の方法。
[項目318]
増殖培地に約5%v/vの前記培養細菌を接種するステップをさらに含む、項目316又は317に記載の方法。
[項目319]
前記増殖培地は、約20Lの体積である、項目318に記載の方法。
[項目320]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、10~24時間にわたってインキュベートされる、項目318又は319に記載の方法。
[項目321]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、12~14時間にわたってインキュベートされる、項目320に記載の方法。
[項目322]
増殖培地に約0.5%v/vの前記培養細菌を接種するステップをさらに含む、項目320又は321に記載の方法。
[項目323]
前記増殖培地は、約3500Lの体積である、項目322に記載の方法。
[項目324]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、10~24時間にわたってインキュベートされる、項目322又は323に記載の方法。
[項目325]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、12~14時間にわたってインキュベートされる、項目324に記載の方法。
[項目326]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、35℃~39℃の温度でインキュベートされる、項目303~325のいずれか一項に記載の方法。
[項目327]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、37℃の温度でインキュベートされる、項目326に記載の方法。
[項目328]
前記ヘモグロビン依存性細菌をインキュベートするステップは、50~300のRPMで前記増殖培地を攪拌することを含む、項目303~327のいずれか一項に記載の方法。
[項目329]
前記増殖培地は、150のRPMで攪拌される、項目328に記載の方法。
[項目330]
前記嫌気性ガス混合物は、インキュベーション中に連続的に添加される、項目303~329のいずれか一項に記載の方法。
[項目331]
前記嫌気性ガス混合物は、0.02vvmの速度で添加される、項目330に記載の方法。
[項目332]
定常期に到達すると、前記ヘモグロビン依存性細菌を採取するステップをさらに含む、項目303~331のいずれか一項に記載の方法。
[項目333]
採取後、前記ヘモグロビン依存性細菌を遠心分離して、細胞ペーストを生成するステップをさらに含む、項目332に記載の方法。
[項目334]
前記細胞ペーストを安定剤溶液で希釈して、細胞スラリーを生成するステップをさらに含む、項目333に記載の方法。
[項目335]
前記細胞スラリーを凍結乾燥して、粉末を生成するステップをさらに含む、項目334に記載の方法。
[項目336]
前記粉末をガンマ線で照射するステップをさらに含む、項目335に記載の方法。
[項目337]
a)ヘモグロビン依存性細菌と、
b)ヘモグロビン代替物質を含む増殖培地と
を含む組成物であって、前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア、シアノバクテリア成分、シアノバクテリアバイオマス、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、組成物。
[項目338]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア、シアノバクテリアバイオマス又はシアノバクテリア成分である、項目337に記載の組成物。
[項目339]
前記シアノバクテリアは、ユレモ(Oscillatoriales)目のものである、項目338に記載の組成物。
[項目340]
前記シアノバクテリアは、アルスロネマ(Arthronema)、アルスロスピラ(Arthrospira)、ブレンノトリクス(Blennothrix)、クリナリウム(Crinalium)、ゲイトレリネマ(Geitlerinema)、ハロミクロネマ(Halomicronema)、ハロスピルリナ(Halospirulina)、ヒドロコレウム(Hydrocoleum)、ジャージネマ(Jaaginema)、カタグニメネ(Katagnymene)、コムボフォロン(Komvophoron)、レプトリングビヤ(Leptolyngbya)、リムノスリックス(Limnothrix)、リングビヤ(Lyngbya)、ミクロコレウス(Microcoleus)、ユレモ(Oscillatoria)、フォルミディウム(Phormidium)、プランクトリングビヤ(Planktolyngbya)、プランクトトリコイデス(Planktothricoides)、プランクトスリックス(Planktothrix)、プレクトネマ(Plectonema)、シュードアナベナ(Pseudoanabaena)、シュードフォルミジウム(Pseudophormidium)、スキゾスリックス(Schizothrix)、スピルリナ(Spirulina)、スタリア(Starria)、シンプロカ(Symploca)、トリココレウス(Trichocoleus)、トリコデスミウム(Trichodesmium)又はチコネマ(Tychonema)属のものである、項目338に記載の組成物。
[項目341]
前記シアノバクテリアは、アルスロスピラ(Arthrospira)属のものである、項目340に記載の組成物。
[項目342]
前記シアノバクテリアは、アルスロスピラ・プラテンシス(Arthrospira platensis)及び/又はアルスロスピラ・マキシマ(Arthrospira maxima)である、項目341に記載の組成物。
[項目343]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリアである、項目338~342のいずれか一項に記載の組成物。
[項目344]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリアバイオマスである、項目338~342のいずれか一項に記載の組成物。
[項目345]
前記シアノバクテリアバイオマスは、スピルリナである、項目344に記載の組成物。
[項目346]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア成分である、項目338~342のいずれか一項に記載の組成物。
[項目347]
前記シアノバクテリア成分は、スピルリナ成分である、項目346に記載の組成物。
[項目348]
前記スピルリナ成分は、可溶性スピルリナ成分である、項目347に記載の組成物。
[項目349]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、項目337に記載の組成物。
[項目350]
前記緑藻は、クロレラ(Chlorellales)目のものである、項目349に記載の組成物。
[項目351]
前記緑藻は、アカンソスフェラ(Acanthosphaera)、アクチナストルム(Actinastrum)、アパトコッカス(Apatococcus)、アポドコッカス(Apodococcus)、アウキセノクロレラ(Auxenochlorella)、ブランドティア(Brandtia)、カロリブランドティア(Carolibrandtia)、カテナ(Catena)、クロレラ(Chlorella)、クロロパルバ(Chloroparva)、クロステリオプシス(Closteriopsis)、コンパクトクロレラ(Compactochlorella)、コロナコッカス(Coronacoccus)、コロナストルム(Coronastrum)、キリンドロケリス(Cylindrocelis)、ジアカントス(Diacanthos)、ジセルラ(Dicellula)、ジクロスター(Dicloster)、ディクチオスフェリウム(Dictyosphaerium)、ジディモゲネス(Didymogenes)、エオミケス(Eomyces)、フィスリセラ(Fissuricella)、フォリクラリア(Follicularia)、ゲミネラ(Geminella)、グロエオティラ(Gloeotila)、ゴレンキニオプシス(Golenkiniopsis)、ヘゲワルディア(Hegewaldia)、ヘリコスポリジウム(Helicosporidium)、ヘイニギア(Heynigia)、ヒンダキア(Hindakia)、ホルモスポラ(Hormospora)、カレンジンラ(Kalenjinla)、ケラトコッカス(Keratococcus)、ケルマティア(Kermatia)、レプトクロレラ(Leptochlorella)、マラスフェリウム(Marasphaerium)、マリンクロレラ(Marinchlorella)、マルバニア(Marvania)、マサイア(Masaia)、マイヤレラ(Meyerella)、ミクラクチニウム(Micractinium)、ムチドスフェリウム(Mucidosphaerium)、ムリエラ(Muriella)、ナンノクロリス(Nannochloris)、ナノクロルム(Nanochlorum)、パルメロカエテ(Palmellochaete)、パラクロレラ(Parachlorella)、プランクトクロレラ(Planktochlorella)、ポドヘドラ(Podohedra)、プロトテカ(Prototheca)、シュードクロリス(Pseudochloris)、シュードシデロセロプシス(Pseudosiderocelopsis)、プミリオスフェラ(Pumiliosphaera)、シデロセリス(Siderocelis)、シデロセロプシス(Siderocelopsis)又はゾウクロレラ(Zoochlorella)属のものである、項目350に記載の組成物。
[項目352]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻である、項目349~351のいずれか一項に記載の組成物。
[項目353]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻バイオマスである、項目349~351のいずれか一項に記載の組成物。
[項目354]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻成分である、項目349~351のいずれか一項に記載の組成物。
[項目355]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、アクチノマイセス(Actinomyces)、アリスティペス(Alistipes)、アナエロブチリクム(Anaerobutyricum)、バチルス(Bacillus)、バクテロイデス(Bacteroides)、クロアシバチルス(Cloacibacillus)、クロストリジウム(Clostridium)、コリンセラ(Collinsella)、クチバクテリウム(Cutibacterium)、エイセンベルギエラ(Eisenbergiella)、エリシペロトリクス(Erysipelotrichaceae)、ユーバクテリウム(Eubacterium)/モギバクテリウム(Mogibacterium)、フェーカリバクテリウム(Faecalibacterium)、フルニエレラ(Fournierella)、フソバクテリウム(Fusobacterium)、メガスフェラ(Megasphaera)、パラバクテロイデス(Parabacteroides)、ペプトニフィルス(Peptoniphilus)、ペプトストレプトコッカス(Peptostreptococcus)、ポルフィロモナス(Porphyromonas)、プレボテラ(Prevotella)、プロピオニバクテリウム(Propionibacterium)、ラリミクロビウム(Rarimicrobium)、シュトレウォーシア(Shuttleworthia)又はベイロネラ(Veillonella)属の細菌である、項目337~354のいずれか一項に記載の組成物。
[項目356]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ(Prevotella)属のものである、項目337~354のいずれか一項に記載の組成物。
[項目357]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ・アルベンシス(Prevotella albensis)、プレボテラ・アムニイ(Prevotella amnii)、プレボテラ・バーゲンシス(Prevotella bergensis)、プレボテラ・ビビア(Prevotella bivia)、プレボテラ・ブレビス(Prevotella brevis)、プレボテラ・ブリアンティイ(Prevotella bryantii)、プレボテラ・ブッカエ(Prevotella buccae)、プレボテラ・ブッカリス(Prevotella buccalis)、プレボテラ・コプリ(Prevotella copri)、プレボテラ・デンタリス(Prevotella dentalis)、プレボテラ・デンティコーラ(Prevotella denticola)、プレボテラ・ディシエンス(Prevotella disiens)、プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)、プレボテラ・インターメディア(Prevotella intermedia)、プレボテラ・マクロサ(Prevotella maculosa)、プレボテラ・マルシイ(Prevotella marshii)、プレボテラ・メラニノジェニカ(Prevotella melaninogenica)、プレボテラ・マイカンス(Prevotella micans)、プレボテラ・マルチフォルミス(Prevotella multiformis)、プレボテラ・ニグレッセンス(Prevotella nigrescens)、プレボテラ・オラリス(Prevotella oralis)、プレボテラ・オリス(Prevotella oris)、プレボテラ・オウロラム(Prevotella oulorum)、プレボテラ・パレンス(Prevotella pallens)、プレボテラ・サリバーエ(Prevotella salivae)、プレボテラ・ステルコレア(Prevotella stercorea)、プレボテラ・タンネラエ(Prevotella tannerae)、プレボテラ・チモネンシス(Prevotella timonensis)、プレボテラ・ジェジュニ(Prevotella jejuni)、プレボテラ・アウランティアカ(Prevotella aurantiaca)、プレボテラ・バーロニアエ(Prevotella baroniae)、プレボテラ・コロランス(Prevotella colorans)、プレボテラ・コーポリス(Prevotella corporis)、プレボテラ・デンタシニ(Prevotella dentasini)、プレボテラ・エノエカ(Prevotella enoeca)、プレボテラ・ファルセニイ(Prevotella falsenii)、プレボテラ・フスカ(Prevotella fusca)、プレボテラ・ヘパリノリティカ(Prevotella heparinolytica)、プレボテラ・ロエッシェイイ(Prevotella loescheii)、プレボテラ・マルチサッカリボラックス(Prevotella multisaccharivorax)、プレボテラ・ナンセイエンシス(Prevotella nanceiensis)、プレボテラ・オリザエ(Prevotella oryzae)、プレボテラ・パルディビベンス(Prevotella paludivivens)、プレボテラ・プレウリチディス(Prevotella pleuritidis)、プレボテラ・ルミニコーラ(Prevotella ruminicola)、プレボテラ・サッカロリティカ(Prevotella saccharolytica)、プレボテラ・スコポス(Prevotella scopos)、プレボテラ・シャーヒイ(Prevotella shahii)、プレボテラ・ズーグレオフォルマンス(Prevotella zoogleoformans)又はプレボテラ・ベロラリス(Prevotella veroralis)である、項目356に記載の組成物。
[項目358]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)種のものである、項目356に記載の組成物。
[項目359]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)のヌクレオチド配列に対して少なくとも90%のゲノム、16S及び/又はCRISPR配列同一性を含む、項目356に記載の組成物。
[項目360]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%のゲノム、16S及び/又はCRISPR配列同一性を含む、項目356に記載の組成物。
[項目361]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)である、項目356に記載の組成物。
[項目362]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、表1に列記される1つ又は複数のタンパク質を含むプレボテラ(Prevotella)菌株である、項目356~361のいずれか一項に記載の組成物。
[項目363]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、表2に列記されるタンパク質を実質的に含まないプレボテラ(Prevotella)株である、項目356~362のいずれか一項に記載の組成物。
[項目364]
前記ヘモグロビン代替物質は、増殖培地中でヘモグロビンの代わりに用いられて、ヘモグロビン依存性細菌の増殖を促進することができる、項目337~363のいずれか一項に記載の組成物。
[項目365]
前記増殖培地は、ヘモグロビン又はその誘導体を含まない、項目337~364のいずれか一項に記載の組成物。
[項目366]
前記増殖培地は、動物性製品を含まない、項目337~365のいずれか一項に記載の組成物。
[項目367]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度と比較して増加した速度で増殖する、項目337~366のいずれか一項に記載の組成物。
[項目368]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より少なくとも50%高い、項目367に記載の組成物。
[項目369]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より少なくとも100%高い、項目367に記載の組成物。
[項目370]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より200%~400%高い、項目367に記載の組成物。
[項目371]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より少なくとも300%高い、項目367に記載の組成物。
[項目372]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度と比較してより高い細胞密度まで増殖する、項目337~371のいずれか一項に記載の組成物。
[項目373]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より少なくとも50%高い細胞密度まで増殖する、項目372に記載の組成物。
[項目374]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より少なくとも100%高い細胞密度まで増殖する、項目372に記載の組成物。
[項目375]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より200%~400%高い細胞密度まで増殖する、項目372に記載の組成物。
[項目376]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より少なくとも300%高い細胞密度まで増殖する、項目372に記載の組成物。
[項目377]
前記増殖培地は、酵母エキス、ダイズペプトンA2SC 19649、ダイズペプトンE110 19885、リン酸二カリウム、リン酸一カリウム、L-システイン-HCl、塩化アンモニウム、グルシデックス21D及びグルコースを含む、項目337~376のいずれか一項に記載の組成物。
[項目378]
前記増殖培地は、5g/L~15g/Lの酵母エキス19512を含む、項目377に記載の組成物。
[項目379]
前記増殖培地は、約10g/Lの酵母エキス19512を含む、項目377に記載の組成物。
[項目380]
前記増殖培地は、10g/L~15g/LのダイズペプトンA2SC 19649を含む、項目377~379のいずれか一項に記載の組成物。
[項目381]
前記増殖培地は、約12.5g/LのダイズペプトンA2SC 19649を含む、項目380に記載の組成物。
[項目382]
前記増殖培地は、約10g/LのダイズペプトンA2SC 19649を含む、項目380に記載の組成物。
[項目383]
前記増殖培地は、10g/L~15g/LのダイズペプトンE110 19885を含む、項目377~382のいずれか一項に記載の組成物。
[項目384]
前記増殖培地は、約12.5g/LのダイズペプトンE110 19885を含む、項目383に記載の組成物。
[項目385]
前記増殖培地は、約10g/LのダイズペプトンE110 19885を含む、項目383に記載の組成物。
[項目386]
前記増殖培地は、1g/L~3g/Lのリン酸二カリウムを含む、項目377~385のいずれか一項に記載の組成物。
[項目387]
前記増殖培地は、約1.59g/Lのリン酸二カリウムを含む、項目386に記載の組成物。
[項目388]
前記増殖培地は、約2.5g/Lのリン酸二カリウムを含む、項目386に記載の組成物。
[項目389]
前記増殖培地は、0.5g/L~1.5g/Lのリン酸一カリウムを含む、項目377~388のいずれか一項に記載の組成物。
[項目390]
前記増殖培地は、約0.91g/Lのリン酸一カリウムを含む、項目389に記載の組成物。
[項目391]
前記増殖培地は、0.1g/L~1.0g/LのL-システイン-HClを含む、項目377~390のいずれか一項に記載の組成物。
[項目392]
前記増殖培地は、約0.5g/LのL-システイン-HClを含む、項目391に記載の組成物。
[項目393]
前記増殖培地は、0.1g/L~1.0g/Lの塩化アンモニウムを含む、項目377~392のいずれか一項に記載の組成物。
[項目394]
前記増殖培地は、約0.5g/Lの塩化アンモニウムを含む、項目393に記載の組成物。
[項目395]
前記増殖培地は、20g/L~30g/Lのグルシデックス21Dを含む、項目377~394のいずれか一項に記載の組成物。
[項目396]
前記増殖培地は、約25g/Lのグルシデックス21Dを含む、項目395に記載の組成物。
[項目397]
前記増殖培地は、5g/L~15g/Lのグルコースを含む、項目377~396のいずれか一項に記載の組成物。
[項目398]
前記増殖培地は、約5g/Lのグルコース又は約10g/Lのグルコースを含む、項目397に記載の組成物。
[項目399]
前記増殖培地は、少なくとも0.5g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目337~398のいずれか一項に記載の組成物。
[項目400]
前記増殖培地は、少なくとも0.75g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目399に記載の組成物。
[項目401]
前記増殖培地は、少なくとも1g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目399に記載の組成物。
[項目402]
前記増殖培地は、約1g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目399に記載の組成物。
[項目403]
前記増殖培地は、約2g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目399に記載の組成物。
[項目404]
前記増殖培地は、5.5~7.5のpHである、項目337~403のいずれか一項に記載の組成物。
[項目405]
前記増殖培地は、約6.5のpHである、項目404に記載の組成物。
[項目406]
ヘモグロビン依存性細菌の培養に使用するための増殖培地であって、ヘモグロビン代替物質を含み、前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア、シアノバクテリア成分、シアノバクテリアバイオマス、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、増殖培地。
[項目407]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア、シアノバクテリアバイオマス又はシアノバクテリア成分である、項目406に記載の増殖培地。
[項目408]
前記シアノバクテリアは、ユレモ(Oscillatoriales)目のものである、項目407に記載の増殖培地。
[項目409]
前記シアノバクテリアは、アルスロネマ(Arthronema)、アルスロスピラ(Arthrospira)、ブレンノトリクス(Blennothrix)、クリナリウム(Crinalium)、ゲイトレリネマ(Geitlerinema)、ハロミクロネマ(Halomicronema)、ハロスピルリナ(Halospirulina)、ヒドロコレウム(Hydrocoleum)、ジャージネマ(Jaaginema)、カタグニメネ(Katagnymene)、コムボフォロン(Komvophoron)、レプトリングビヤ(Leptolyngbya)、リムノスリックス(Limnothrix)、リングビヤ(Lyngbya)、ミクロコレウス(Microcoleus)、ユレモ(Oscillatoria)、フォルミディウム(Phormidium)、プランクトリングビヤ(Planktolyngbya)、プランクトトリコイデス(Planktothricoides)、プランクトスリックス(Planktothrix)、プレクトネマ(Plectonema)、シュードアナベナ(Pseudoanabaena)、シュードフォルミジウム(Pseudophormidium)、スキゾスリックス(Schizothrix)、スピルリナ(Spirulina)、スタリア(Starria)、シンプロカ(Symploca)、トリココレウス(Trichocoleus)、トリコデスミウム(Trichodesmium)又はチコネマ(Tychonema)属のものである、項目407に記載の増殖培地。
[項目410]
前記シアノバクテリアは、アルスロスピラ(Arthrospira)属のものである、項目409に記載の増殖培地。
[項目411]
前記シアノバクテリアは、アルスロスピラ・プラテンシス(Arthrospira platensis)及び/又はアルスロスピラ・マキシマ(Arthrospira maxima)である、項目410に記載の増殖培地。
[項目412]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリアである、項目407~411のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目413]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリアバイオマスである、項目407~411のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目414]
前記シアノバクテリアバイオマスは、スピルリナである、項目413に記載の増殖培地。
[項目415]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア成分である、項目407~411のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目416]
前記シアノバクテリア成分は、スピルリナ成分である、項目415に記載の増殖培地。
[項目417]
前記スピルリナ成分は、可溶性スピルリナ成分である、項目416に記載の増殖培地。
[項目418]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、項目406に記載の増殖培地。
[項目419]
前記緑藻は、クロレラ(Chlorellales)目のものである、項目418に記載の増殖培地。
[項目420]
前記緑藻は、アカンソスフェラ(Acanthosphaera)、アクチナストルム(Actinastrum)、アパトコッカス(Apatococcus)、アポドコッカス(Apodococcus)、アウキセノクロレラ(Auxenochlorella)、ブランドティア(Brandtia)、カロリブランドティア(Carolibrandtia)、カテナ(Catena)、クロレラ(Chlorella)、クロロパルバ(Chloroparva)、クロステリオプシス(Closteriopsis)、コンパクトクロレラ(Compactochlorella)、コロナコッカス(Coronacoccus)、コロナストルム(Coronastrum)、キリンドロケリス(Cylindrocelis)、ジアカントス(Diacanthos)、ジセルラ(Dicellula)、ジクロスター(Dicloster)、ディクチオスフェリウム(Dictyosphaerium)、ジディモゲネス(Didymogenes)、エオミケス(Eomyces)、フィスリセラ(Fissuricella)、フォリクラリア(Follicularia)、ゲミネラ(Geminella)、グロエオティラ(Gloeotila)、ゴレンキニオプシス(Golenkiniopsis)、ヘゲワルディア(Hegewaldia)、ヘリコスポリジウム(Helicosporidium)、ヘイニギア(Heynigia)、ヒンダキア(Hindakia)、ホルモスポラ(Hormospora)、カレンジンラ(Kalenjinla)、ケラトコッカス(Keratococcus)、ケルマティア(Kermatia)、レプトクロレラ(Leptochlorella)、マラスフェリウム(Marasphaerium)、マリンクロレラ(Marinchlorella)、マルバニア(Marvania)、マサイア(Masaia)、マイヤレラ(Meyerella)、ミクラクチニウム(Micractinium)、ムチドスフェリウム(Mucidosphaerium)、ムリエラ(Muriella)、ナンノクロリス(Nannochloris)、ナノクロルム(Nanochlorum)、パルメロカエテ(Palmellochaete)、パラクロレラ(Parachlorella)、プランクトクロレラ(Planktochlorella)、ポドヘドラ(Podohedra)、プロトテカ(Prototheca)、シュードクロリス(Pseudochloris)、シュードシデロセロプシス(Pseudosiderocelopsis)、プミリオスフェラ(Pumiliosphaera)、シデロセリス(Siderocelis)、シデロセロプシス(Siderocelopsis)又はゾウクロレラ(Zoochlorella)属のものである、項目419に記載の増殖培地。
[項目421]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻である、項目418~420のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目422]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻バイオマスである、項目418~420のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目423]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻成分である、項目418~420のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目424]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、アクチノマイセス(Actinomyces)、アリスティペス(Alistipes)、アナエロブチリクム(Anaerobutyricum)、バチルス(Bacillus)、バクテロイデス(Bacteroides)、クロアシバチルス(Cloacibacillus)、クロストリジウム(Clostridium)、コリンセラ(Collinsella)、クチバクテリウム(Cutibacterium)、エイセンベルギエラ(Eisenbergiella)、エリシペロトリクス(Erysipelotrichaceae)、ユーバクテリウム(Eubacterium)/モギバクテリウム(Mogibacterium)、フェーカリバクテリウム(Faecalibacterium)、フルニエレラ(Fournierella)、フソバクテリウム(Fusobacterium)、メガスフェラ(Megasphaera)、パラバクテロイデス(Parabacteroides)、ペプトニフィルス(Peptoniphilus)、ペプトストレプトコッカス(Peptostreptococcus)、ポルフィロモナス(Porphyromonas)、プレボテラ(Prevotella)、プロピオニバクテリウム(Propionibacterium)、ラリミクロビウム(Rarimicrobium)、シュトレウォーシア(Shuttleworthia)又はベイロネラ(Veillonella)属の細菌である、項目406~423のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目425]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ(Prevotella)属のものである、項目406~423のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目426]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ・アルベンシス(Prevotella albensis)、プレボテラ・アムニイ(Prevotella amnii)、プレボテラ・バーゲンシス(Prevotella bergensis)、プレボテラ・ビビア(Prevotella bivia)、プレボテラ・ブレビス(Prevotella brevis)、プレボテラ・ブリアンティイ(Prevotella bryantii)、プレボテラ・ブッカエ(Prevotella buccae)、プレボテラ・ブッカリス(Prevotella buccalis)、プレボテラ・コプリ(Prevotella copri)、プレボテラ・デンタリス(Prevotella dentalis)、プレボテラ・デンティコーラ(Prevotella denticola)、プレボテラ・ディシエンス(Prevotella disiens)、プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)、プレボテラ・インターメディア(Prevotella intermedia)、プレボテラ・マクロサ(Prevotella maculosa)、プレボテラ・マルシイ(Prevotella marshii)、プレボテラ・メラニノジェニカ(Prevotella melaninogenica)、プレボテラ・マイカンス(Prevotella micans)、プレボテラ・マルチフォルミス(Prevotella multiformis)、プレボテラ・ニグレッセンス(Prevotella nigrescens)、プレボテラ・オラリス(Prevotella oralis)、プレボテラ・オリス(Prevotella oris)、プレボテラ・オウロラム(Prevotella oulorum)、プレボテラ・パレンス(Prevotella pallens)、プレボテラ・サリバーエ(Prevotella salivae)、プレボテラ・ステルコレア(Prevotella stercorea)、プレボテラ・タンネラエ(Prevotella tannerae)、プレボテラ・チモネンシス(Prevotella timonensis)、プレボテラ・ジェジュニ(Prevotella jejuni)、プレボテラ・アウランティアカ(Prevotella aurantiaca)、プレボテラ・バーロニアエ(Prevotella baroniae)、プレボテラ・コロランス(Prevotella colorans)、プレボテラ・コーポリス(Prevotella corporis)、プレボテラ・デンタシニ(Prevotella dentasini)、プレボテラ・エノエカ(Prevotella enoeca)、プレボテラ・ファルセニイ(Prevotella falsenii)、プレボテラ・フスカ(Prevotella fusca)、プレボテラ・ヘパリノリティカ(Prevotella heparinolytica)、プレボテラ・ロエッシェイイ(Prevotella loescheii)、プレボテラ・マルチサッカリボラックス(Prevotella multisaccharivorax)、プレボテラ・ナンセイエンシス(Prevotella nanceiensis)、プレボテラ・オリザエ(Prevotella oryzae)、プレボテラ・パルディビベンス(Prevotella paludivivens)、プレボテラ・プレウリチディス(Prevotella pleuritidis)、プレボテラ・ルミニコーラ(Prevotella ruminicola)、プレボテラ・サッカロリティカ(Prevotella saccharolytica)、プレボテラ・スコポス(Prevotella scopos)、プレボテラ・シャーヒイ(Prevotella shahii)、プレボテラ・ズーグレオフォルマンス(Prevotella zoogleoformans)又はプレボテラ・ベロラリス(Prevotella veroralis)である、項目425に記載の増殖培地。
[項目427]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)種のものである、項目425に記載の増殖培地。
[項目428]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)のヌクレオチド配列に対して少なくとも90%のゲノム、16S及び/又はCRISPR配列同一性を含む、項目425に記載の増殖培地。
[項目429]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%のゲノム、16S及び/又はCRISPR配列同一性を含む、項目425に記載の増殖培地。
[項目430]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)である、項目425に記載の増殖培地。
[項目431]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、表1に列記される1つ又は複数のタンパク質を含むプレボテラ(Prevotella)菌株である、項目425~430のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目432]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、表2に列記されるタンパク質を実質的に含まないプレボテラ(Prevotella)株である、項目425~431のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目433]
前記ヘモグロビン代替物質は、増殖培地中でヘモグロビンの代わりに用いられて、ヘモグロビン依存性細菌の増殖を促進することができる、項目406~432のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目434]
ヘモグロビン又はその誘導体を含まない、項目406~433のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目435]
動物性製品を含まない、項目406~434のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目436]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度と比較して増加した速度で増殖する、項目406~435のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目437]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より少なくとも50%高い、項目436に記載の増殖培地。
[項目438]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より少なくとも100%高い、項目436に記載の増殖培地。
[項目439]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より200%~400%高い、項目436に記載の増殖培地。
[項目440]
前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する前記速度は、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖する速度より少なくとも300%高い、項目436に記載の増殖培地。
[項目441]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度と比較してより高い細胞密度まで増殖する、項目406~440のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目442]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より少なくとも50%高い細胞密度まで増殖する、項目441に記載の増殖培地。
[項目443]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より少なくとも100%高い細胞密度まで増殖する、項目441に記載の増殖培地。
[項目444]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より200%~400%高い細胞密度まで増殖する、項目441に記載の増殖培地。
[項目445]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、前記ヘモグロビン代替物質を含む前記増殖培地中において、前記ヘモグロビン代替物質がないこと以外には同じ増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌が増殖して到達する細胞密度より少なくとも300%高い細胞密度まで増殖する、項目441に記載の増殖培地。
[項目446]
酵母エキス、ダイズペプトンA2SC 19649、ダイズペプトンE110 19885、リン酸二カリウム、リン酸一カリウム、L-システイン-HCl、塩化アンモニウム、グルシデックス21D及びグルコースを含む、項目406~445のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目447]
5g/L~15g/Lの酵母エキス19512を含む、項目446に記載の増殖培地。
[項目448]
約10g/Lの酵母エキス19512を含む、項目446に記載の増殖培地。
[項目449]
10g/L~15g/LのダイズペプトンA2SC 19649を含む、項目446~448のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目450]
約12.5g/LのダイズペプトンA2SC 19649を含む、項目449に記載の増殖培地。
[項目451]
約10g/LのダイズペプトンA2SC 19649を含む、項目449に記載の増殖培地。
[項目452]
10g/L~15g/LのダイズペプトンE110 19885を含む、項目446~451のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目453]
約12.5g/LのダイズペプトンE110 19885を含む、項目452に記載の増殖培地。
[項目454]
約10g/LのダイズペプトンE110 19885を含む、項目452に記載の増殖培地。
[項目455]
1g/L~3g/Lのリン酸二カリウムを含む、項目446~454のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目456]
約1.59g/Lのリン酸二カリウムを含む、項目455に記載の増殖培地。
[項目457]
約2.5g/Lのリン酸二カリウムを含む、項目455に記載の増殖培地。
[項目458]
0.5g/L~1.5g/Lのリン酸一カリウムを含む、項目446~457のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目459]
約0.91g/Lのリン酸一カリウムを含む、項目458に記載の増殖培地。
[項目460]
0.1g/L~1.0g/LのL-システイン-HClを含む、項目446~459のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目461]
約0.5g/LのL-システイン-HClを含む、項目460に記載の増殖培地。
[項目462]
0.1g/L~1.0g/Lの塩化アンモニウムを含む、項目446~461のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目463]
約0.5g/Lの塩化アンモニウムを含む、項目462に記載の増殖培地。
[項目464]
20g/L~30g/Lのグルシデックス21Dを含む、項目446~463のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目465]
約25g/Lのグルシデックス21Dを含む、項目464に記載の増殖培地。
[項目466]
5g/L~15g/Lのグルコースを含む、項目446~465のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目467]
約5g/Lのグルコース又は約10g/Lのグルコースを含む、項目466に記載の増殖培地。
[項目468]
少なくとも0.5g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目406~467のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目469]
少なくとも0.75g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目468に記載の増殖培地。
[項目470]
少なくとも1g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目468に記載の増殖培地。
[項目471]
約1g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目468に記載の増殖培地。
[項目472]
約2g/Lの前記ヘモグロビン代替物質を含む、項目468に記載の増殖培地。
[項目473]
5.5~7.5のpHである、項目406~472のいずれか一項に記載の増殖培地。
[項目474]
約6.5のpHである、項目473に記載の増殖培地。
[項目475]
ヘモグロビン依存性細菌のための増殖培地中でヘモグロビン又はその誘導体の代替物質として使用するためのヘモグロビン代替物質であって、シアノバクテリア、シアノバクテリア成分、シアノバクテリアバイオマス、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスであるヘモグロビン代替物質。
[項目476]
シアノバクテリア、シアノバクテリアバイオマス又はシアノバクテリア成分である、項目475に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目477]
前記シアノバクテリアは、ユレモ(Oscillatoriales)目のものである、項目476に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目478]
前記シアノバクテリアは、アルスロネマ(Arthronema)、アルスロスピラ(Arthrospira)、ブレンノトリクス(Blennothrix)、クリナリウム(Crinalium)、ゲイトレリネマ(Geitlerinema)、ハロミクロネマ(Halomicronema)、ハロスピルリナ(Halospirulina)、ヒドロコレウム(Hydrocoleum)、ジャージネマ(Jaaginema)、カタグニメネ(Katagnymene)、コムボフォロン(Komvophoron)、レプトリングビヤ(Leptolyngbya)、リムノスリックス(Limnothrix)、リングビヤ(Lyngbya)、ミクロコレウス(Microcoleus)、ユレモ(Oscillatoria)、フォルミディウム(Phormidium)、プランクトリングビヤ(Planktolyngbya)、プランクトトリコイデス(Planktothricoides)、プランクトスリックス(Planktothrix)、プレクトネマ(Plectonema)、シュードアナベナ(Pseudoanabaena)、シュードフォルミジウム(Pseudophormidium)、スキゾスリックス(Schizothrix)、スピルリナ(Spirulina)、スタリア(Starria)、シンプロカ(Symploca)、トリココレウス(Trichocoleus)、トリコデスミウム(Trichodesmium)又はチコネマ(Tychonema)属のものである、項目476に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目479]
前記シアノバクテリアは、アルスロスピラ(Arthrospira)属のものである、項目478に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目480]
前記シアノバクテリアは、アルスロスピラ・プラテンシス(Arthrospira platensis)及び/又はアルスロスピラ・マキシマ(Arthrospira maxima)である、項目479に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目481]
シアノバクテリアである、項目476~480のいずれか一項に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目482]
シアノバクテリアバイオマスである、476~480のいずれか一項に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目483]
前記シアノバクテリアバイオマスは、スピルリナである、項目482に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目484]
シアノバクテリア成分である、項目476~480のいずれか一項に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目485]
前記シアノバクテリア成分は、スピルリナ成分である、項目484に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目486]
前記スピルリナ成分は、可溶性スピルリナ成分である、項目485に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目487]
緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、項目475に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目488]
前記緑藻は、クロレラ(Chlorellales)目のものである、項目487に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目489]
前記緑藻は、アカンソスフェラ(Acanthosphaera)、アクチナストルム(Actinastrum)、アパトコッカス(Apatococcus)、アポドコッカス(Apodococcus)、アウキセノクロレラ(Auxenochlorella)、ブランドティア(Brandtia)、カロリブランドティア(Carolibrandtia)、カテナ(Catena)、クロレラ(Chlorella)、クロロパルバ(Chloroparva)、クロステリオプシス(Closteriopsis)、コンパクトクロレラ(Compactochlorella)、コロナコッカス(Coronacoccus)、コロナストルム(Coronastrum)、キリンドロケリス(Cylindrocelis)、ジアカントス(Diacanthos)、ジセルラ(Dicellula)、ジクロスター(Dicloster)、ディクチオスフェリウム(Dictyosphaerium)、ジディモゲネス(Didymogenes)、エオミケス(Eomyces)、フィスリセラ(Fissuricella)、フォリクラリア(Follicularia)、ゲミネラ(Geminella)、グロエオティラ(Gloeotila)、ゴレンキニオプシス(Golenkiniopsis)、ヘゲワルディア(Hegewaldia)、ヘリコスポリジウム(Helicosporidium)、ヘイニギア(Heynigia)、ヒンダキア(Hindakia)、ホルモスポラ(Hormospora)、カレンジンラ(Kalenjinla)、ケラトコッカス(Keratococcus)、ケルマティア(Kermatia)、レプトクロレラ(Leptochlorella)、マラスフェリウム(Marasphaerium)、マリンクロレラ(Marinchlorella)、マルバニア(Marvania)、マサイア(Masaia)、マイヤレラ(Meyerella)、ミクラクチニウム(Micractinium)、ムチドスフェリウム(Mucidosphaerium)、ムリエラ(Muriella)、ナンノクロリス(Nannochloris)、ナノクロルム(Nanochlorum)、パルメロカエテ(Palmellochaete)、パラクロレラ(Parachlorella)、プランクトクロレラ(Planktochlorella)、ポドヘドラ(Podohedra)、プロトテカ(Prototheca)、シュードクロリス(Pseudochloris)、シュードシデロセロプシス(Pseudosiderocelopsis)、プミリオスフェラ(Pumiliosphaera)、シデロセリス(Siderocelis)、シデロセロプシス(Siderocelopsis)又はゾウクロレラ(Zoochlorella)属のものである、項目488に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目490]
緑藻である、項目487~489のいずれか一項に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目491]
緑藻バイオマスである、項目487~489のいずれか一項に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目492]
緑藻成分である、項目487~489のいずれか一項に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目493]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、アクチノマイセス(Actinomyces)、アリスティペス(Alistipes)、アナエロブチリクム(Anaerobutyricum)、バチルス(Bacillus)、バクテロイデス(Bacteroides)、クロアシバチルス(Cloacibacillus)、クロストリジウム(Clostridium)、コリンセラ(Collinsella)、クチバクテリウム(Cutibacterium)、エイセンベルギエラ(Eisenbergiella)、エリシペロトリクス(Erysipelotrichaceae)、ユーバクテリウム(Eubacterium)/モギバクテリウム(Mogibacterium)、フェーカリバクテリウム(Faecalibacterium)、フルニエレラ(Fournierella)、フソバクテリウム(Fusobacterium)、メガスフェラ(Megasphaera)、パラバクテロイデス(Parabacteroides)、ペプトニフィルス(Peptoniphilus)、ペプトストレプトコッカス(Peptostreptococcus)、ポルフィロモナス(Porphyromonas)、プレボテラ(Prevotella)、プロピオニバクテリウム(Propionibacterium)、ラリミクロビウム(Rarimicrobium)、シュトレウォーシア(Shuttleworthia)又はベイロネラ(Veillonella)属の細菌である、項目475~492のいずれか一項に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目494]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ(Prevotella)属のものである、項目475~492のいずれか一項に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目495]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ・アルベンシス(Prevotella albensis)、プレボテラ・アムニイ(Prevotella amnii)、プレボテラ・バーゲンシス(Prevotella bergensis)、プレボテラ・ビビア(Prevotella bivia)、プレボテラ・ブレビス(Prevotella brevis)、プレボテラ・ブリアンティイ(Prevotella bryantii)、プレボテラ・ブッカエ(Prevotella buccae)、プレボテラ・ブッカリス(Prevotella buccalis)、プレボテラ・コプリ(Prevotella copri)、プレボテラ・デンタリス(Prevotella dentalis)、プレボテラ・デンティコーラ(Prevotella denticola)、プレボテラ・ディシエンス(Prevotella disiens)、プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)、プレボテラ・インターメディア(Prevotella intermedia)、プレボテラ・マクロサ(Prevotella maculosa)、プレボテラ・マルシイ(Prevotella marshii)、プレボテラ・メラニノジェニカ(Prevotella melaninogenica)、プレボテラ・マイカンス(Prevotella micans)、プレボテラ・マルチフォルミス(Prevotella multiformis)、プレボテラ・ニグレッセンス(Prevotella nigrescens)、プレボテラ・オラリス(Prevotella oralis)、プレボテラ・オリス(Prevotella oris)、プレボテラ・オウロラム(Prevotella oulorum)、プレボテラ・パレンス(Prevotella pallens)、プレボテラ・サリバーエ(Prevotella salivae)、プレボテラ・ステルコレア(Prevotella stercorea)、プレボテラ・タンネラエ(Prevotella tannerae)、プレボテラ・チモネンシス(Prevotella timonensis)、プレボテラ・ジェジュニ(Prevotella jejuni)、プレボテラ・アウランティアカ(Prevotella aurantiaca)、プレボテラ・バーロニアエ(Prevotella baroniae)、プレボテラ・コロランス(Prevotella colorans)、プレボテラ・コーポリス(Prevotella corporis)、プレボテラ・デンタシニ(Prevotella dentasini)、プレボテラ・エノエカ(Prevotella enoeca)、プレボテラ・ファルセニイ(Prevotella falsenii)、プレボテラ・フスカ(Prevotella fusca)、プレボテラ・ヘパリノリティカ(Prevotella heparinolytica)、プレボテラ・ロエッシェイイ(Prevotella loescheii)、プレボテラ・マルチサッカリボラックス(Prevotella multisaccharivorax)、プレボテラ・ナンセイエンシス(Prevotella nanceiensis)、プレボテラ・オリザエ(Prevotella oryzae)、プレボテラ・パルディビベンス(Prevotella paludivivens)、プレボテラ・プレウリチディス(Prevotella pleuritidis)、プレボテラ・ルミニコーラ(Prevotella ruminicola)、プレボテラ・サッカロリティカ(Prevotella saccharolytica)、プレボテラ・スコポス(Prevotella scopos)、プレボテラ・シャーヒイ(Prevotella shahii)、プレボテラ・ズーグレオフォルマンス(Prevotella zoogleoformans)又はプレボテラ・ベロラリス(Prevotella veroralis)である、項目494に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目496]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)種のものである、項目494に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目497]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)のヌクレオチド配列に対して少なくとも90%のゲノム、16S及び/又はCRISPR配列同一性を含む、項目494に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目498]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%のゲノム、16S及び/又はCRISPR配列同一性を含む、項目494に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目499]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)である、項目494に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目500]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、表1に列記される1つ又は複数のタンパク質を含むプレボテラ(Prevotella)菌株である、項目494~499のいずれか一項に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目501]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、表2に列記されるタンパク質を実質的に含まないプレボテラ(Prevotella)株である、項目494~500のいずれか一項に記載のヘモグロビン代替物質。
[項目502]
(a)ヘモグロビン依存性細菌と、
(b)ヘモグロビン代替物質と
を含む細菌組成物であって、前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア、シアノバクテリア成分、シアノバクテリアバイオマス、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、細菌組成物。
[項目503]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア、シアノバクテリアバイオマス又はシアノバクテリア成分である、項目502に記載の細菌組成物。
[項目504]
前記シアノバクテリアは、ユレモ(Oscillatoriales)目のものである、項目503に記載の細菌組成物。
[項目505]
前記シアノバクテリアは、アルスロネマ(Arthronema)、アルスロスピラ(Arthrospira)、ブレンノトリクス(Blennothrix)、クリナリウム(Crinalium)、ゲイトレリネマ(Geitlerinema)、ハロミクロネマ(Halomicronema)、ハロスピルリナ(Halospirulina)、ヒドロコレウム(Hydrocoleum)、ジャージネマ(Jaaginema)、カタグニメネ(Katagnymene)、コムボフォロン(Komvophoron)、レプトリングビヤ(Leptolyngbya)、リムノスリックス(Limnothrix)、リングビヤ(Lyngbya)、ミクロコレウス(Microcoleus)、ユレモ(Oscillatoria)、フォルミディウム(Phormidium)、プランクトリングビヤ(Planktolyngbya)、プランクトトリコイデス(Planktothricoides)、プランクトスリックス(Planktothrix)、プレクトネマ(Plectonema)、シュードアナベナ(Pseudoanabaena)、シュードフォルミジウム(Pseudophormidium)、スキゾスリックス(Schizothrix)、スピルリナ(Spirulina)、スタリア(Starria)、シンプロカ(Symploca)、トリココレウス(Trichocoleus)、トリコデスミウム(Trichodesmium)又はチコネマ(Tychonema)属のものである、項目503に記載の細菌組成物。
[項目506]
前記シアノバクテリアは、アルスロスピラ(Arthrospira)属のものである、項目504に記載の細菌組成物。
[項目507]
前記シアノバクテリアは、アルスロスピラ・プラテンシス(Arthrospira platensis)及び/又はアルスロスピラ・マキシマ(Arthrospira maxima)である、項目505に記載の細菌組成物。
[項目508]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリアである、項目503~507のいずれか一項に記載の細菌組成物。
[項目509]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリアバイオマスである、項目503~507のいずれか一項に記載の細菌組成物。
[項目510]
前記シアノバクテリアバイオマスは、スピルリナである、項目509に記載の細菌組成物。
[項目511]
前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア成分である、項目503~507のいずれか一項に記載の細菌組成物。
[項目512]
前記シアノバクテリア成分は、スピルリナ成分である、項目511に記載の細菌組成物。
[項目513]
前記スピルリナ成分は、可溶性スピルリナ成分である、項目512に記載の細菌組成物。
[項目514]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、項目502に記載の細菌組成物。
[項目515]
前記緑藻は、クロレラ(Chlorellales)目のものである、項目514に記載の細菌組成物。
[項目516]
前記緑藻は、アカンソスフェラ(Acanthosphaera)、アクチナストルム(Actinastrum)、アパトコッカス(Apatococcus)、アポドコッカス(Apodococcus)、アウキセノクロレラ(Auxenochlorella)、ブランドティア(Brandtia)、カロリブランドティア(Carolibrandtia)、カテナ(Catena)、クロレラ(Chlorella)、クロロパルバ(Chloroparva)、クロステリオプシス(Closteriopsis)、コンパクトクロレラ(Compactochlorella)、コロナコッカス(Coronacoccus)、コロナストルム(Coronastrum)、キリンドロケリス(Cylindrocelis)、ジアカントス(Diacanthos)、ジセルラ(Dicellula)、ジクロスター(Dicloster)、ディクチオスフェリウム(Dictyosphaerium)、ジディモゲネス(Didymogenes)、エオミケス(Eomyces)、フィスリセラ(Fissuricella)、フォリクラリア(Follicularia)、ゲミネラ(Geminella)、グロエオティラ(Gloeotila)、ゴレンキニオプシス(Golenkiniopsis)、ヘゲワルディア(Hegewaldia)、ヘリコスポリジウム(Helicosporidium)、ヘイニギア(Heynigia)、ヒンダキア(Hindakia)、ホルモスポラ(Hormospora)、カレンジンラ(Kalenjinla)、ケラトコッカス(Keratococcus)、ケルマティア(Kermatia)、レプトクロレラ(Leptochlorella)、マラスフェリウム(Marasphaerium)、マリンクロレラ(Marinchlorella)、マルバニア(Marvania)、マサイア(Masaia)、マイヤレラ(Meyerella)、ミクラクチニウム(Micractinium)、ムチドスフェリウム(Mucidosphaerium)、ムリエラ(Muriella)、ナンノクロリス(Nannochloris)、ナノクロルム(Nanochlorum)、パルメロカエテ(Palmellochaete)、パラクロレラ(Parachlorella)、プランクトクロレラ(Planktochlorella)、ポドヘドラ(Podohedra)、プロトテカ(Prototheca)、シュードクロリス(Pseudochloris)、シュードシデロセロプシス(Pseudosiderocelopsis)、プミリオスフェラ(Pumiliosphaera)、シデロセリス(Siderocelis)、シデロセロプシス(Siderocelopsis)又はゾウクロレラ(Zoochlorella)属のものである、項目515に記載の細菌組成物。
[項目517]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻である、項目514~516のいずれか一項に記載の細菌組成物。
[項目518]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻バイオマスである、項目514~516のいずれか一項に記載の細菌組成物。
[項目519]
前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻成分である、項目514~516のいずれか一項に記載の細菌組成物。
[項目520]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、アクチノマイセス(Actinomyces)、アリスティペス(Alistipes)、アナエロブチリクム(Anaerobutyricum)、バチルス(Bacillus)、バクテロイデス(Bacteroides)、クロアシバチルス(Cloacibacillus)、クロストリジウム(Clostridium)、コリンセラ(Collinsella)、クチバクテリウム(Cutibacterium)、エイセンベルギエラ(Eisenbergiella)、エリシペロトリクス(Erysipelotrichaceae)、ユーバクテリウム(Eubacterium)/モギバクテリウム(Mogibacterium)、フェーカリバクテリウム(Faecalibacterium)、フルニエレラ(Fournierella)、フソバクテリウム(Fusobacterium)、メガスフェラ(Megasphaera)、パラバクテロイデス(Parabacteroides)、ペプトニフィルス(Peptoniphilus)、ペプトストレプトコッカス(Peptostreptococcus)、ポルフィロモナス(Porphyromonas)、プレボテラ(Prevotella)、プロピオニバクテリウム(Propionibacterium)、ラリミクロビウム(Rarimicrobium)、シュトレウォーシア(Shuttleworthia)又はベイロネラ(Veillonella)属の細菌である、項目502~519のいずれか一項に記載の細菌組成物。
[項目521]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ(Prevotella)属のものである、項目502~519のいずれか一項に記載の細菌組成物。
[項目522]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ・アルベンシス(Prevotella albensis)、プレボテラ・アムニイ(Prevotella amnii)、プレボテラ・バーゲンシス(Prevotella bergensis)、プレボテラ・ビビア(Prevotella bivia)、プレボテラ・ブレビス(Prevotella brevis)、プレボテラ・ブリアンティイ(Prevotella bryantii)、プレボテラ・ブッカエ(Prevotella buccae)、プレボテラ・ブッカリス(Prevotella buccalis)、プレボテラ・コプリ(Prevotella copri)、プレボテラ・デンタリス(Prevotella dentalis)、プレボテラ・デンティコーラ(Prevotella denticola)、プレボテラ・ディシエンス(Prevotella disiens)、プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)、プレボテラ・インターメディア(Prevotella intermedia)、プレボテラ・マクロサ(Prevotella maculosa)、プレボテラ・マルシイ(Prevotella marshii)、プレボテラ・メラニノジェニカ(Prevotella melaninogenica)、プレボテラ・マイカンス(Prevotella micans)、プレボテラ・マルチフォルミス(Prevotella multiformis)、プレボテラ・ニグレッセンス(Prevotella nigrescens)、プレボテラ・オラリス(Prevotella oralis)、プレボテラ・オリス(Prevotella oris)、プレボテラ・オウロラム(Prevotella oulorum)、プレボテラ・パレンス(Prevotella pallens)、プレボテラ・サリバーエ(Prevotella salivae)、プレボテラ・ステルコレア(Prevotella stercorea)、プレボテラ・タンネラエ(Prevotella tannerae)、プレボテラ・チモネンシス(Prevotella timonensis)、プレボテラ・ジェジュニ(Prevotella jejuni)、プレボテラ・アウランティアカ(Prevotella aurantiaca)、プレボテラ・バーロニアエ(Prevotella baroniae)、プレボテラ・コロランス(Prevotella colorans)、プレボテラ・コーポリス(Prevotella corporis)、プレボテラ・デンタシニ(Prevotella dentasini)、プレボテラ・エノエカ(Prevotella enoeca)、プレボテラ・ファルセニイ(Prevotella falsenii)、プレボテラ・フスカ(Prevotella fusca)、プレボテラ・ヘパリノリティカ(Prevotella heparinolytica)、プレボテラ・ロエッシェイイ(Prevotella loescheii)、プレボテラ・マルチサッカリボラックス(Prevotella multisaccharivorax)、プレボテラ・ナンセイエンシス(Prevotella nanceiensis)、プレボテラ・オリザエ(Prevotella oryzae)、プレボテラ・パルディビベンス(Prevotella paludivivens)、プレボテラ・プレウリチディス(Prevotella pleuritidis)、プレボテラ・ルミニコーラ(Prevotella ruminicola)、プレボテラ・サッカロリティカ(Prevotella saccharolytica)、プレボテラ・スコポス(Prevotella scopos)、プレボテラ・シャーヒイ(Prevotella shahii)、プレボテラ・ズーグレオフォルマンス(Prevotella zoogleoformans)又はプレボテラ・ベロラリス(Prevotella veroralis)である、項目521に記載の細菌組成物。
[項目523]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)種のものである、項目521に記載の細菌組成物。
[項目524]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)のヌクレオチド配列に対して少なくとも90%のゲノム、16S及び/又はCRISPR配列同一性を含む、項目521に記載の細菌組成物。
[項目525]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)のヌクレオチド配列に対して少なくとも99%のゲノム、16S及び/又はCRISPR配列同一性を含む、項目521に記載の細菌組成物。
[項目526]
前記プレボテラ(Prevotella)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)である、項目521に記載の細菌組成物。
[項目527]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、表1に列記される1つ又は複数のタンパク質を含むプレボテラ(Prevotella)菌株である、項目521~526のいずれか一項に記載の細菌組成物。
[項目528]
前記ヘモグロビン依存性細菌は、表2に列記されるタンパク質を実質的に含まないプレボテラ(Prevotella)株である、項目521~527のいずれか一項に記載の細菌組成物。
本明細書で使用される場合、「嫌気性条件」は、通常の大気条件と比較して低いレベルの酸素を含む条件である。例えば、一部の実施形態では、嫌気性条件は、酸素レベルが8%以下の酸素の分圧(pO2)である条件である。いくつかの事例では、嫌気性条件は、pO2が2%以下である条件である。いくつかの事例では、嫌気性条件は、pO2が0.5%以下である条件である。特定の実施形態では、嫌気性条件は、酸素以外のガス、例えば窒素及び/又は二酸化炭素(CO2)でバイオリアクター及び/又は培養フラスコをパージすることによって達成され得る。
いくつかの態様では、ヘモグロビン依存性細菌を培養するための方法及び組成物が本明細書に提供される。本明細書で使用される場合、「ヘモグロビン依存性細菌」とは、ヘモグロビン、ヘモグロビン誘導体又はスピルリナを含有する同じ増殖培地と比較して、ヘモグロビン、ヘモグロビン誘導体又はスピルリナを含まない増殖培地中で培養される場合、増殖速度が遅くなり、且つ/又は最大細胞密度が低減する細菌を指す。一部の実施形態では、ヘモグロビン依存性細菌は、アクチノマイセス(Actinomyces)、アリスティペス(Alistipes)、アナエロブチリクム(Anaerobutyricum)、バチルス(Bacillus)、バクテロイデス(Bacteroides)、クロアシバチルス(Cloacibacillus)、クロストリジウム(Clostridium)、コリンセラ(Collinsella)、クチバクテリウム(Cutibacterium)、エイセンベルギエラ(Eisenbergiella)、エリシペロトリクス(Erysipelotrichaceae)、ユーバクテリウム(Eubacterium)/モギバクテリウム(Mogibacterium)、フェーカリバクテリウム(Faecalibacterium)、フルニエレラ(Fournierella)、フソバクテリウム(Fusobacterium)、メガスフェラ(Megasphaera)、パラバクテロイデス(Parabacteroides)、ペプトニフィルス(Peptoniphilus)、ペプトストレプトコッカス(Peptostreptococcus)、ポルフィロモナス(Porphyromonas)、プレボテラ(Prevotella)、プロピオニバクテリウム(Propionibacterium)、ラリミクロビウム(Rarimicrobium)、シュトレウォーシア(Shuttleworthia)又はベイロネラ(Veillonella)属の細菌から選択される。
本明細書に開示されるように、特定の藻類、藻類バイオマス及び藻類由来成分は、ヘモグロビンの代わりに培地中で使用されて、そうでなければヘモグロビン依存性の細菌の増殖を促進することができる。
一部の実施形態では、本明細書に開示のヘモグロビン代替物質を含む増殖培地が本明細書に提供される。特定の実施形態では、増殖培地は、ヘモグロビン依存性細菌の増殖を支持するのに十分な量の本明細書に開示のヘモグロビン代替物質(例えば、スピルリナ又はその成分(例えば、可溶性成分))を含む。特定の実施形態では、増殖培地は、少なくとも0.5g/L、少なくとも0.75g/L、少なくとも1g/L、少なくとも1.25g/L、少なくとも1.5g/L、少なくとも1.75g/L、少なくとも2g/L、少なくとも2.25g/L、少なくとも2.5g/L、少なくとも2.75g/L、少なくとも3g/L、少なくとも3.25g/L、少なくとも3.5g/L、少なくとも3.75g/L、少なくとも4g/L又は少なくとも4.25g/Lの、本明細書に開示のヘモグロビン代替物質(例えば、スピルリナ又はその成分)を含む。一部の実施形態では、増殖培地は、約1g/Lの、本明細書に開示のヘモグロビン代替物質を含有する。一部の実施形態では、増殖培地は、約2g/Lの、本明細書に開示のヘモグロビン代替物質を含有する。一部の実施形態では、本明細書に提供される増殖培地は、少なくとも1g/L且つ3g/L以下の、本明細書に開示のヘモグロビン代替物質(例えば、スピルリナ又はその成分)を含有する。一部の実施形態では、増殖培地は、少なくとも1g/L且つ2g/L以下の、本明細書に開示のヘモグロビン代替物質(例えば、スピルリナ又はその成分)を含有する。一部の実施形態では、増殖培地は、ヘモグロビン又はその誘導体を含有しない。本明細書に提供される方法及び組成物の一部の実施形態では、増殖培地は、動物性製品を含有しない。
特定の態様では、ヘモグロビン依存性細菌の増殖を促進する方法及び/又は組成物が本明細書に提供される。こうした方法は、本明細書に提供される増殖培地中でヘモグロビン依存性細菌をインキュベートするステップを含み得る。これらの方法は、本明細書に開示される増殖培地の温度及びpHを維持するステップを含み得る。培養は、比較的小さい体積の増殖培地(例えば、1L)中で開始し得、そこで細菌を対数増殖期に到達させる。こうした培養物をより大きい体積の増殖培地(例えば、20L)に移し、さらに増殖させて、より大きいバイオマスを達成する。バイオマスの最終量の必要に応じて、そのような移し替えを2回以上繰り返し得る。本方法は、バイオリアクター内でのヘモグロビン依存性細菌のインキュベーションを含み得る。
特定の態様では、本明細書に記載の増殖培地(即ち本明細書に開示のヘモグロビン代替物質(例えば、スピルリナ若しくはその成分)及び/又は本明細書に記載のヘモグロビン依存性細菌を含有する増殖培地)を含むバイオリアクターが本明細書に提供される。一部の実施形態では、ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ(Prevotella)菌(例えば、本明細書に記載のプレボテラ(Prevotella)株)である。一部の実施形態では、こうしたバイオリアクター内で細菌を培養する方法が提供される。
増殖培地の調製
ブタヘモグロビンを0.01M NaOHに溶解させることにより、ヘモグロビン溶液を調製した。オートクレーブ処理により、溶液を滅菌した。20mg/L又は200mg/Lの標準濃度を使用した。
各々の増殖分析について4回の反復試験を実施した。凍結細胞バンクからの0.1%接種材料を各培養に使用した。以下に説明するように、SPYG1培地中で細菌を培養した。37℃の嫌気性環境において培養しながら、プレートリーダで48時間にわたって30分毎に光学密度(OD600)を測定することにより、細菌の増殖動態を測定した。
ヘモグロビン依存性細菌、例えばプレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)の例示的な製造プロセスを本明細書に提示する。この例示的な方法では、ヘモグロビン依存性細菌を、表4に列記する成分を含む増殖培地中で増殖させる。培地は、使用前に濾過滅菌する。
ヘモグロビン依存性細菌増殖のためのGMPグレード補足物質の別の供給源を見出すために、ビタミンB12及び/又はFeCl2などの非動物性製品を増殖補足物質として試験した。代表的なヘモグロビン依存性細菌であるプレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)を、ビタミンB12及び/又はFeCl2を補充したSPYG1培地中で実施例1に記載の通りに増殖させた。増殖培地中の様々な量のビタミンB12、FeCl2(ヘモグロビン関連鉄)又はそれらの組合せは、補足物質を一切含まない増殖培地と比較してヘモグロビン依存性細菌の増殖を改善しなかった。図1からわかるように、ビタミンB12及びFeCl2は、ヘモグロビン依存性細菌の増殖を促進するためにヘモグロビンの代わりに用いることができない。
B12又はFeCl2とは対照的に、スピルリナを増殖培地に添加すると、ヘモグロビンの非存在下でヘモグロビン依存性細菌(プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329))の増殖が改善された。0.2g/Lのスピルリナを添加すると、細菌の増殖が増強され、増殖速度と細胞密度の両方の増加をもたらした(図2)。従って、0.2g/Lのスピルリナは、0.02g/Lのスピルリナと比較して増殖を増強したことから、スピルリナは、ヘモグロビンの非存在下で用量依存的にヘモグロビン依存性細菌の増殖を促進する。
スピルリナは、ヘモグロビンの存在下で培養されるヘモグロビン依存性細菌と機能的に均等なヘモグロビン依存性細菌の産生を(ヘモグロビンの非存在下で)促進する。スピルリナが、ヘモグロビンの存在下で培養されたヘモグロビン依存性細菌と機能的に均等なヘモグロビン依存性細菌の産生を促進するか否かを試験するために、スピルリナ又はヘモグロビンの存在下で培養したヘモグロビン依存性細菌を遅延型過敏症(DTH)のマウスモデルにおけるそれらの有効性について比較した。
(i)嫌気性PBSの経口投与(ビヒクル対照);
(ii)1mg/kgのデキサメタゾンの腹腔内投与(陽性対照);
(iii)1g/Lのスピルリナを含むBM1培地(B12なし)中で培養した1×109CFUのプレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)バイオマスの経口投与(V3);
(iv)1g/Lのスピルリナを含むBM1培地中で培養した1×109CFUのプレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)バイオマスの経口投与(V4);
(v)1g/Lのスピルリナを含むSPYG1培地中で培養した1×109CFUのプレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)バイオマスの経口投与(V1);又は
(vi)ヘモグロビンを含む増殖培地中で培養したプレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)の10mgの粉末の経口投与。
以下のヘモグロビン依存性細菌を、スピルリナを含む又は含まない増殖培地中で培養した:フルニエレラ(Fournierella)株A、フルニエレラ(Fournierella)株B及びパラバクテロイデス(Parabacteroides)株A。ヘモグロビン依存性細菌を、表6に列記する成分を含む増殖培地中で増殖した。
これらの実験で試験される微生物は、パラバクテロイデス(Parabacteroides)株B、フェーカリバクテリウム(Faecalibacterium)株A、バクテロイデス(Bacteroides)株A及びアリスティペス(Alistipes)株Aであった。
別のヘモグロビン依存性細菌、プレボテラ(Prevotella)株C(PTA-126140)を、スピルリナの存在下において、表9Aに示す培地中で実施例2に記載の通りに培養した。スピルリナは、ヘモグロビン依存性プレボテラ(Prevotella)株Cの増殖を支持した(データは示していない)。
本明細書に記載される全ての公開特許出願は、個別の刊行物又は特許出願がそれぞれ明示的且つ個別に参照により組み込まれることが示されているのと同様に、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。矛盾が生じた場合、本明細書に記載の全ての定義を含め、本出願が優先される。
当業者であれば、本明細書に記載の本発明の具体的な実施形態の多くの均等物を認識するか、又は常用的な実験のみを用いて確認することができるであろう。こうした均等物は、以下の特許請求の範囲に包含されることが意図される。
Claims (27)
- ヘモグロビン依存性細菌を培養する方法であって、ヘモグロビン代替物質を含む増殖培地中で前記ヘモグロビン依存性細菌をインキュベートするステップを含み、前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア、シアノバクテリア成分、シアノバクテリアバイオマス、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、方法。
- 前記増殖培地は、ヘモグロビン又はその誘導体を含まない、請求項1に記載の方法。
- 前記増殖培地は、動物性製品を含まない、請求項1に記載の方法。
- 前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア、シアノバクテリアバイオマス、又はシアノバクテリア成分である、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記シアノバクテリアは、アルスロネマ(Arthronema)、アルスロスピラ(Arthrospira)、ブレンノトリクス(Blennothrix)、クリナリウム(Crinalium)、ゲイトレリネマ(Geitlerinema)、ハロミクロネマ(Halomicronema)、ハロスピルリナ(Halospirulina)、ヒドロコレウム(Hydrocoleum)、ジャージネマ(Jaaginema)、カタグニメネ(Katagnymene)、コムボフォロン(Komvophoron)、レプトリングビヤ(Leptolyngbya)、リムノスリックス(Limnothrix)、リングビヤ(Lyngbya)、ミクロコレウス(Microcoleus)、ユレモ(Oscillatoria)、フォルミディウム(Phormidium)、プランクトリングビヤ(Planktolyngbya)、プランクトトリコイデス(Planktothricoides)、プランクトスリックス(Planktothrix)、プレクトネマ(Plectonema)、シュードアナベナ(Pseudoanabaena)、シュードフォルミジウム(Pseudophormidium)、スキゾスリックス(Schizothrix)、スピルリナ(Spirulina)、スタリア(Starria)、シンプロカ(Symploca)、トリココレウス(Trichocoleus)、トリコデスミウム(Trichodesmium)又はチコネマ(Tychonema)属のものである、請求項4に記載の方法。
- 前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリアバイオマスである、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記シアノバクテリアバイオマスは、スピルリナである、請求項6に記載の方法。
- 前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記緑藻は、アカンソスフェラ(Acanthosphaera)、アクチナストルム(Actinastrum)、アパトコッカス(Apatococcus)、アポドコッカス(Apodococcus)、アウキセノクロレラ(Auxenochlorella)、ブランドティア(Brandtia)、カロリブランドティア(Carolibrandtia)、カテナ(Catena)、クロレラ(Chlorella)、クロロパルバ(Chloroparva)、クロステリオプシス(Closteriopsis)、コンパクトクロレラ(Compactochlorella)、コロナコッカス(Coronacoccus)、コロナストルム(Coronastrum)、キリンドロケリス(Cylindrocelis)、ジアカントス(Diacanthos)、ジセルラ(Dicellula)、ジクロスター(Dicloster)、ディクチオスフェリウム(Dictyosphaerium)、ジディモゲネス(Didymogenes)、エオミケス(Eomyces)、フィスリセラ(Fissuricella)、フォリクラリア(Follicularia)、ゲミネラ(Geminella)、グロエオティラ(Gloeotila)、ゴレンキニオプシス(Golenkiniopsis)、ヘゲワルディア(Hegewaldia)、ヘリコスポリジウム(Helicosporidium)、ヘイニギア(Heynigia)、ヒンダキア(Hindakia)、ホルモスポラ(Hormospora)、カレンジンラ(Kalenjinla)、ケラトコッカス(Keratococcus)、ケルマティア(Kermatia)、レプトクロレラ(Leptochlorella)、マラスフェリウム(Marasphaerium)、マリンクロレラ(Marinchlorella)、マルバニア(Marvania)、マサイア(Masaia)、マイヤレラ(Meyerella)、ミクラクチニウム(Micractinium)、ムチドスフェリウム(Mucidosphaerium)、ムリエラ(Muriella)、ナンノクロリス(Nannochloris)、ナノクロルム(Nanochlorum)、パルメロカエテ(Palmellochaete)、パラクロレラ(Parachlorella)、プランクトクロレラ(Planktochlorella)、ポドヘドラ(Podohedra)、プロトテカ(Prototheca)、シュードクロリス(Pseudochloris)、シュードシデロセロプシス(Pseudosiderocelopsis)、プミリオスフェラ(Pumiliosphaera)、シデロセリス(Siderocelis)、シデロセロプシス(Siderocelopsis)又はゾウクロレラ(Zoochlorella)属のものである、請求項8に記載の方法。
- 前記ヘモグロビン依存性細菌は、アクチノマイセス(Actinomyces)、アリスティペス(Alistipes)、アナエロブチリクム(Anaerobutyricum)、バチルス(Bacillus)、バクテロイデス(Bacteroides)、クロアシバチルス(Cloacibacillus)、クロストリジウム(Clostridium)、コリンセラ(Collinsella)、クチバクテリウム(Cutibacterium)、エイセンベルギエラ(Eisenbergiella)、エリシペロトリクス(Erysipelotrichaceae)、ユーバクテリウム(Eubacterium)/モギバクテリウム(Mogibacterium)、フェーカリバクテリウム(Faecalibacterium)、フルニエレラ(Fournierella)、フソバクテリウム(Fusobacterium)、メガスフェラ(Megasphaera)、パラバクテロイデス(Parabacteroides)、ペプトニフィルス(Peptoniphilus)、ペプトストレプトコッカス(Peptostreptococcus)、ポルフィロモナス(Porphyromonas)、プレボテラ(Prevotella)、プロピオニバクテリウム(Propionibacterium)、ラリミクロビウム(Rarimicrobium)、シュトレウォーシア(Shuttleworthia)又はベイロネラ(Veillonella)属の細菌である、請求項1~9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)種のものである、請求項10に記載の方法。
- 前記プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)である、請求項11に記載の方法。
- 10%超のCO2を含む嫌気性雰囲気下で前記ヘモグロビン依存性細菌をインキュベートするステップを含む、請求項1~12のいずれか一項に記載の方法。
- a)10%超のCO2を含む嫌気性ガス混合物でバイオリアクターをパージするステップ;及び
b)ステップa)でパージされた前記バイオリアクター内で前記ヘモグロビン依存性細菌をインキュベートするステップ
を含む、請求項13に記載の方法。 - a)ヘモグロビン依存性細菌、並びに
b)ヘモグロビン代替物質を含む増殖培地
を含む組成物であって、前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア、シアノバクテリア成分、シアノバクテリアバイオマス、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、組成物。 - 前記増殖培地は、ヘモグロビン又はその誘導体を含まない、請求項15に記載の組成物。
- 前記増殖培地は、動物性製品を含まない、請求項15に記載の組成物。
- 前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリア、シアノバクテリアバイオマス、又はシアノバクテリア成分である、請求項15~17のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記シアノバクテリアは、アルスロネマ(Arthronema)、アルスロスピラ(Arthrospira)、ブレンノトリクス(Blennothrix)、クリナリウム(Crinalium)、ゲイトレリネマ(Geitlerinema)、ハロミクロネマ(Halomicronema)、ハロスピルリナ(Halospirulina)、ヒドロコレウム(Hydrocoleum)、ジャージネマ(Jaaginema)、カタグニメネ(Katagnymene)、コムボフォロン(Komvophoron)、レプトリングビヤ(Leptolyngbya)、リムノスリックス(Limnothrix)、リングビヤ(Lyngbya)、ミクロコレウス(Microcoleus)、ユレモ(Oscillatoria)、フォルミディウム(Phormidium)、プランクトリングビヤ(Planktolyngbya)、プランクトトリコイデス(Planktothricoides)、プランクトスリックス(Planktothrix)、プレクトネマ(Plectonema)、シュードアナベナ(Pseudoanabaena)、シュードフォルミジウム(Pseudophormidium)、スキゾスリックス(Schizothrix)、スピルリナ(Spirulina)、スタリア(Starria)、シンプロカ(Symploca)、トリココレウス(Trichocoleus)、トリコデスミウム(Trichodesmium)又はチコネマ(Tychonema)属のものである、請求項18に記載の組成物。
- 前記ヘモグロビン代替物質は、シアノバクテリアバイオマスである、請求項15~17のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記シアノバクテリアバイオマスは、スピルリナである、請求項20に記載の組成物。
- 前記ヘモグロビン代替物質は、緑藻、緑藻成分又は緑藻バイオマスである、請求項15~17のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記緑藻は、アカンソスフェラ(Acanthosphaera)、アクチナストルム(Actinastrum)、アパトコッカス(Apatococcus)、アポドコッカス(Apodococcus)、アウキセノクロレラ(Auxenochlorella)、ブランドティア(Brandtia)、カロリブランドティア(Carolibrandtia)、カテナ(Catena)、クロレラ(Chlorella)、クロロパルバ(Chloroparva)、クロステリオプシス(Closteriopsis)、コンパクトクロレラ(Compactochlorella)、コロナコッカス(Coronacoccus)、コロナストルム(Coronastrum)、キリンドロケリス(Cylindrocelis)、ジアカントス(Diacanthos)、ジセルラ(Dicellula)、ジクロスター(Dicloster)、ディクチオスフェリウム(Dictyosphaerium)、ジディモゲネス(Didymogenes)、エオミケス(Eomyces)、フィスリセラ(Fissuricella)、フォリクラリア(Follicularia)、ゲミネラ(Geminella)、グロエオティラ(Gloeotila)、ゴレンキニオプシス(Golenkiniopsis)、ヘゲワルディア(Hegewaldia)、ヘリコスポリジウム(Helicosporidium)、ヘイニギア(Heynigia)、ヒンダキア(Hindakia)、ホルモスポラ(Hormospora)、カレンジンラ(Kalenjinla)、ケラトコッカス(Keratococcus)、ケルマティア(Kermatia)、レプトクロレラ(Leptochlorella)、マラスフェリウム(Marasphaerium)、マリンクロレラ(Marinchlorella)、マルバニア(Marvania)、マサイア(Masaia)、マイヤレラ(Meyerella)、ミクラクチニウム(Micractinium)、ムチドスフェリウム(Mucidosphaerium)、ムリエラ(Muriella)、ナンノクロリス(Nannochloris)、ナノクロルム(Nanochlorum)、パルメロカエテ(Palmellochaete)、パラクロレラ(Parachlorella)、プランクトクロレラ(Planktochlorella)、ポドヘドラ(Podohedra)、プロトテカ(Prototheca)、シュードクロリス(Pseudochloris)、シュードシデロセロプシス(Pseudosiderocelopsis)、プミリオスフェラ(Pumiliosphaera)、シデロセリス(Siderocelis)、シデロセロプシス(Siderocelopsis)又はゾウクロレラ(Zoochlorella)属のものである、請求項22に記載の組成物。
- 前記ヘモグロビン依存性細菌は、アクチノマイセス(Actinomyces)、アリスティペス(Alistipes)、アナエロブチリクム(Anaerobutyricum)、バチルス(Bacillus)、バクテロイデス(Bacteroides)、クロアシバチルス(Cloacibacillus)、クロストリジウム(Clostridium)、コリンセラ(Collinsella)、クチバクテリウム(Cutibacterium)、エイセンベルギエラ(Eisenbergiella)、エリシペロトリクス(Erysipelotrichaceae)、ユーバクテリウム(Eubacterium)/モギバクテリウム(Mogibacterium)、フェーカリバクテリウム(Faecalibacterium)、フルニエレラ(Fournierella)、フソバクテリウム(Fusobacterium)、メガスフェラ(Megasphaera)、パラバクテロイデス(Parabacteroides)、ペプトニフィルス(Peptoniphilus)、ペプトストレプトコッカス(Peptostreptococcus)、ポルフィロモナス(Porphyromonas)、プレボテラ(Prevotella)、プロピオニバクテリウム(Propionibacterium)、ラリミクロビウム(Rarimicrobium)、シュトレウォーシア(Shuttleworthia)又はベイロネラ(Veillonella)属の細菌である、請求項15~23のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ヘモグロビン依存性細菌は、プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)種のものである、請求項24に記載の組成物。
- 前記プレボテラ・ヒスチコラ(Prevotella histicola)は、プレボテラ(Prevotella)株B50329(NRRLアクセッション番号B50329)又はプレボテラ(Prevotella)株C(ATTC寄託番号PTA-126140)である、請求項25に記載の組成物。
- 請求項15~26のいずれか一項に記載の組成物を含むバイオリアクター。
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