JP7678802B2

JP7678802B2 - Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子及びその使用方法

Info

Publication number: JP7678802B2
Application number: JP2022524955A
Authority: JP
Inventors: スペンサーリャン，; サミュエルナレ，; ジョンフンサン，; ホアロン，; ラシュミバンコティ，
Original assignee: アレクトルエルエルシー
Priority date: 2019-11-04
Filing date: 2020-11-03
Publication date: 2025-05-16
Anticipated expiration: 2040-11-03
Also published as: US20240279305A1; BR112022008321A2; CL2022001130A1; WO2021091885A3; JP2022553571A; US20210284710A1; WO2021091885A2; TW202132329A; AU2020378251A1; CN114667298A; ECSP22044316A; EP4055031A2; CA3155345A1; KR20220092918A; CR20220244A; PE20221271A1; PH12022551035A1; MX2022005376A; CO2022005587A2; IL292499A

Description

関連出願の相互参照
本出願は、すべてあらゆる目的のために参照により本明細書に援用される２０１９年１１月４日出願の米国仮出願第６２／９３０，２２７号、２０２０年４月２４日出願の同第６３／０１４，９４０号、及び２０２０年１０月１６日出願の同第６３／０９２，７５３号の優先権の利益を主張する。

分野
本開示は、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子及びそのような融合タンパク質の治療用途に関する。

背景
シアル酸結合Ｉｇ様レクチン－９（Ｓｉｇｌｅｃ－９）は、単球、マクロファージ、樹状細胞、好中球、及び小グリア細胞などの未熟及び成熟骨髄細胞、さらにはナチュラルキラー細胞及びＴ細胞のサブセットなどのリンパ細胞を含む、免疫細胞及び造血細胞上に発現される１型免疫グロブリン様膜貫通タンパク質である（Ｃｒｏｃｋｅｒｅｔａｌ．（２００７）ＮａｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ．７：２５５－２６６；Ｏ’ＲｅｉｌｌｙａｎｄＰａｕｌｓｏｎ（２００９）ＴｒｅｎｄｓｉｎＰｈａｒｍ．Ｓｃｉ．３０：５：２４０－２４８；及びＭａｃａｕｌｅｙｅｔａｌ．（２０１４）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍ．１４：６５３－６６６）。Ｓｉｇｌｅｃ－９は、糖タンパク質及び糖脂質のシアル酸残基に結合するレクチンのＳｉｇｌｅｃファミリーのメンバーである。Ｓｉｇｌｅｃタンパク質のための潜在的なリガンドは、シアル化グリカンに連結しているセラミドを含む糖脂質であるガングリオシドである。Ｓｉｇｌｅｃリガンドにおける多様性は、分枝または末端のいずれかでの種々の連結での他の天然糖及びシアル酸の付加、ならびにシアル酸自体の改変により生じている。

１４種のＳｉｇｌｅｃタンパク質がヒトにおいて、９種がマウスにおいて同定されており、それらは、シアル酸結合部位を含有するアミノ末端ＶセットＩｇ様（ＩｇＶ）ドメインを含む２～１７の細胞外Ｉｇドメインから構成される。ＩｇＶドメインは、すべてのＳｉｇｌｅｃにおいて高度に保存されているモチーフ中に２個の芳香族残基及び１個のアルギニンを含有する（Ｃｒｏｃｋｅｒｅｔａｌ．（２００７）ＮａｔＲｅｖｌｍｍｕｎｏｌ．７：２５５－２６６；ＭｃＭｉｌｌａｎａｎｄＣｒｏｃｋｅｒ（２００８）ＣａｒｂｏｈｙｄｒＲｅｓ．３４３：２０５０－２０５６；ＶｏｎＧｕｎｔｅｎａｎｄＢｏｃｈｎｅｒ（２００８）ＡｎｎＮＹＡｃａｄＳｃｉ．１１４３：６１－８２；Ｍａｙｅｔａｌ．（１９９８）ＭｏｌＣｅｌｌ．１：７１９－７２８；Ｃｒｏｃｋｅｒｅｔａｌ．（１９９９）ＢｉｏｃｈｅｍＪ．３４１：３５５－３６１；及びＣｒｏｃｋｅｒａｎｄＶａｒｋｉ（２００１）ＴｒｅｎｄｓＩｍｍｕｎｏｌ．２：３３７－３４２）。リガンド結合部位は、リガンドが結合されている、及び結合されていない結晶構造によりマッピングされている（Ａｔｔｒｉｌｌｅｔａｌ．，（２００６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１３２７７４－３２７８３；Ａｌｐｈｅｙｅｔａｌ．（２００３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：５３３７２－３３７７；Ｖａｒｋｉｅｔａｌ．，Ｇｌｙｃｏｂｉｏｌｏｇｙ，１６ｐｐ．１Ｒ－２７Ｒ；及びＭａｙｅｔａｌ．（１９９８）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ１：５：７１９－７２８）。細胞膜にはシアル酸が豊富であるので、Ｓｉｇｌｅｃによるリガンド結合は、シス及びトランスで起こり得て、それらの機能特性に影響を及ぼす。各Ｓｉｇｌｅｃは、哺乳類細胞の表面で見い出される多様な種類のシアル化グリカンとの結合について別個の優先度を有する（Ｃｒｏｃｋｅｒｅｔａｌ．（２００７）ＮａｔＲｅｖｌｍｍｕｎｏｌ．７：２５５－２６６；及びＣｒｏｃｋｅｒｅｔａｌ．（２００７）ＮａｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ．７：２５５－２６６）。

Ｓｉｇｌｅｃ－９を含む多くのＳｉｇｌｅｃタンパク質は、１つまたは複数の免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）配列をそれらの細胞質ドメインに含有する阻害受容体である。阻害Ｓｉｇｌｅｃは、免疫機能の負の調節因子として作用する（Ｃｒｏｃｋｅｒｅｔａｌ．（２００７）ＮａｔＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ．７：２５５－２６６；ＭｃＭｉｌｌａｎａｎｄＣｒｏｃｋｅｒ（２００８）ＣａｒｂｏｈｙｄｒＲｅｓ．３４３：２０５０－２０５６；及びＶｏｎＧｕｎｔｅｎａｎｄＢｏｃｈｎｅｒ（２００８）ＡｎｎＮＹＡｃａｄＳｃｉ．１１４３：６１－８２）。他のＳｉｇｌｅｃは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）配列をそれらの細胞質ドメインに含有する活性化受容体である。それらのＳｉｇｌｅｃは、免疫機能の正の調節因子として作用する（ＭａｃａｕｌｅｙＳＭ．ｅｔａｌ．，（２０１４）ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１４，６５３－６６６）。

Ｓｉｇｌｅｃタンパク質ファミリーは、腫瘍の病因において役割を果たしている。多くのヒト腫瘍は、Ｓｉｇｌｅｃ－９に結合するシアル酸リガンドを強力に上方制御して、免疫回避及びがん進行を可能にし得る（Ｊａｎｄｕｓｅｔａｌ．（２０１４）Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２４：１８１０－１８２０）。対照的に、シアル酸生合成が欠如している腫瘍は、マウスにおいて増殖を縮小させている（Ｓｔａｎｃｚａｋｅｔａｌ．（２０１８）ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ．１２８：４９１２－４９２３）。Ｓｉｇｌｅｃ－３、７、９におけるある特定のＳＮＰは、結腸直腸癌及び肺癌のリスクの低下と関連している（同書）。

特許出願及び刊行物を含む本明細書に引用の参照文献はすべて、それらの全体が参照により本明細書に援用される。

本開示は概して、Ｓｉｇｌｅｃ－９細胞外ドメイン（ＥＣＤ）融合タンパク質及びＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合タンパク質を使用してがん及び神経変性疾患を処置する方法を対象とする。

一部の実施形態では、単離ポリペプチドは、配列番号１０９～１３７及び２１４～２２６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むＳｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメイン、Ｃ２タイプ１（Ｃ２Ｔ１）ドメイン、及びＣ２タイプ２（Ｃ２Ｔ２）ドメインを含むＳｉｇｌｅｃ－９細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７９～１０７及び１９４～２０６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインポリペプチドは、配列番号１４７（ＭＰＲ）に示されているとおり、Ｓｉｇｌｅｃ－９の膜近位領域は含まない。

一部の実施形態では、ポリペプチドはさらに、Ｆｃドメインを含む。一部のそのような実施形態では、Ｆｃドメインは、ポリペプチドのＣ末端に配置される。一部の実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２～１４４及び２３４～２３９から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは配列番号１４２または１４３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは配列番号１４２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単離ポリペプチドは、配列番号１４２のＩｇＧ１ポリペプチドと比べて、（ａ）ＦｃγＲＩＩＩへの結合の減少；（ｂ）抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の低下及び／または補体結合活性の低下；（ｃ）ＦｃγＲＩＩａへの結合の増大；またはａ）、ｂ）、及び／またはｃ）の任意の組み合わせを有するヒトＩｇＧ１アイソタイプを有するＦｃドメインを含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは配列番号１４３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４５～１４６から選択されるアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１１～３９、１４８～１６０、及び１６８～１７０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４９～７７、１７１～１８３、及び１９１～１９３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４９～７７及び１７１～１９３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、そのシグナルペプチドは含まない。

一部の実施形態では、配列番号１３８のアミノ酸配列を含む、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む単離ポリペプチドを提供する。一部の実施形態では、任意選択でポリペプチドのＣ末端に位置するＦｃドメインをさらに含む配列番号１３８のアミノ酸配列を含む、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む単離ポリペプチドを提供する。任意選択で、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する。場合によっては、ポリペプチドはさらに、リンカー配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２～１４４から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは配列番号１４２または１４３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは配列番号１３９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４５～１４６から選択されるアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、そのＣ末端でＦｃドメインに結合している配列番号７８のアミノ酸配列を含む、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む単離ポリペプチドを提供する。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２～１４４及び２３４～２３９から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２または１４３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単離ポリペプチドは、配列番号１４２のＩｇＧ１ポリペプチドと比べて、（ａ）ＦｃγＲＩＩＩへの結合の減少；（ｂ）抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の低下及び／または補体結合活性の低下；（ｃ）ＦｃγＲＩＩａへの結合の増大；またはａ）、ｂ）、及び／またはｃ）の任意の組み合わせを有する、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有するＦｃドメインを含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは配列番号１４３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４５～１４６から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、配列番号４５～４８及び２２８～２３３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、その関連シグナルペプチドを含まない、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む単離ポリペプチドを提供する。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４５～４８及び２２８～２３３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４５のアミノ酸配列を含み、その関連シグナルペプチドを含まない。一部の実施形態では、ポリペプチドは配列番号４５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号４８のアミノ酸配列を含み、その関連シグナルペプチドを含まない。

一部の実施形態では、配列番号２０７～２１３のいずれか１つのアミノ酸配列及びポリペプチドのＣ末端に配置されたＦｃドメインを含む、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む単離ポリペプチドを提供する。一部の実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２～１４４及び２３４～２３９から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２または１４３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、単離ポリペプチドは、配列番号１４２のＩｇＧ１ポリペプチドと比べて、（ａ）ＦｃγＲＩＩＩへの結合の減少；（ｂ）抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の低下及び／または補体結合活性の低下；（ｃ）ＦｃγＲＩＩａへの結合の増大；またはａ）、ｂ）、及び／またはｃ）の任意の組み合わせを有する、ヒトＩｇＧ１アイソタイプを有するＦｃドメインを含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは配列番号１４３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４５～１４６から選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１６１～１６７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１８４～１９０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、シグナルペプチドを含まない。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１８４～１９０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。

本明細書において提供されるＳｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む単離ポリペプチドの実施形態のいずれでも、ポリペプチドは、細胞の表面上のシアル酸に結合し得る。一部のそのような実施形態では、細胞は腫瘍細胞である。一部の実施形態では、細胞はＦｃＲ、例えば、ＦｃＲγＩＩＡを発現する。一部の実施形態では、細胞は骨髄細胞である。一部の実施形態では、骨髄細胞は、単球、マクロファージ、樹状細胞、小グリア細胞、及び骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）から選択される。

本明細書において提供されるＳｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む単離ポリペプチドの実施形態のいずれでも、ポリペプチドは：
ａ）Ｓｉｇｌｅｃ－３、Ｓｉｇｌｅｃ－５、Ｓｉｇｌｅｃ－７、Ｓｉｇｌｅｃ－９、Ｓｉｇｌｅｃ－１０、及びＳｉｇｌｅｃ－１５から選択されるいずれか１つまたは複数のＳｉｇｌｅｃファミリーメンバーの細胞結合をブロックする；
ｂ）任意選択でＩＦＮγ発現の増大またはＴ細胞増殖の増大を測定することにより決定されるとおり、Ｔ細胞のＭＤＳＣ媒介抑制を解除する；
ｃ）ＭＤＳＣを炎症誘発性表現型に再分極する；
ｄ）ＭＤＳＣ上でのＣＤ８６の発現を増大させる、ＭＤＳＣ上でのＣＤ１１ｂの発現を増大させる、及び／またはＭＤＳＣ上でのＣＤ１６３の発現を減少させる；
ｅ）腫瘍マクロファージをＭ２表現型から再分極する；
ｆ）ＣＤ１６３＋及び／またはＣＤ２０６＋マクロファージを減少させる；
ｇ）ＭＤＳＣにおいてＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１７、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ９、及びＩＬ－８から選択される１つまたは複数のケモカインの発現を誘導する；
ｈ）腫瘍微小環境への骨髄細胞の動員を減少させる；
ｉ）１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、２５ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１～５０ｎＭ、１～２５ｎＭ、１～２０ｎＭ、１～１０ｎＭ、１～５ｎＭ、もしくは１～２ｎＭの親和性で、ＭＤＳＣに結合する；または
ｊ）（ａ）から（ｉ）のいずれか１つまたは複数を行う。
一部のそのような実施形態では、ＭＤＳＣは、ヒトＭＤＳＣであり、及び／またはマクロファージはヒトマクロファージである。

一部の実施形態では、本明細書において提供されるＳｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む単離ポリペプチドをコードする核酸配列を含む単離核酸を提供する。一部の実施形態では、単離核酸は、配列番号４８～７７、１７１～１９３、及び２２８～２３３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列をコードする。一部の実施形態では、単離核酸は、配列番号１０～３９、１４８～１７０、及び２２７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。一部の実施形態では、単離核酸を含む発現ベクターを提供する。

一部の実施形態では、本明細書において提供される単離核酸または発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。一部の実施形態では、本明細書において提供されるＳｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む単離ポリペプチドを発現する宿主細胞を提供する。一部の実施形態では、宿主細胞を培養することを含む、ポリペプチドを生成する方法を提供する。一部のそのような実施形態では、ポリペプチドを単離する。

様々な実施形態では、本明細書において提供されるＳｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む単離ポリペプチドと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。一部の実施形態では、医薬組成物は、（ｉ）そのシグナルペプチドを含む本明細書に記載のとおりのポリペプチド、または（ｉｉ）そのシグナルペプチドを含まないポリペプチドと；薬学的に許容される担体とを含んでよい。

一部の実施形態では、がんを有する対象に、本明細書において提供されるＳｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む単離ポリペプチドまたはそのポリペプチドを含む医薬組成物を投与することを含む、がんを処置する方法を提供する。一部の実施形態では、がんは、骨髄細胞を含む腫瘍微小環境と関連する固形腫瘍である。一部の実施形態では、がんは、腎細胞癌、肉腫、膵臓癌、神経膠芽腫、卵巣癌、結腸直腸癌、肺癌、黒色腫、膀胱癌、頭頚部癌、乳癌及び子宮癌から選択される。一部の実施形態では、方法はさらに、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストを投与することを含み、任意選択でその際、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストはそれぞれ、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体である。一部の実施形態では、方法はさらに、化学療法薬を投与することを含む。

一部の実施形態では、神経性または神経変性疾患を有する対象に、本明細書において提供されるＳｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む単離ポリペプチドまたはそのポリペプチドを含む医薬組成物を投与することを含む、神経性または神経変性疾患を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、神経性または神経変性疾患は、機能障害または不全の小グリア細胞により特徴づけられる。一部の実施形態では、神経性または神経変性疾患は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、及び軽度認知障害、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、タウパチー病（Ｔａｕｐａｔｈｙｄｉｓｅａｓｅ）、多発性硬化症、免疫媒介ニューロパチー（神経障害性疼痛など）、那須ハコラ病、小児発症型白質脳症ならびに軸索スフェロイド及び色素性グリアを伴う成人発症型白質脳症（ＡＬＳＰ）から選択される。

一部の実施形態では、神経性または神経変性疾患を有する対象に、本明細書において提供されるＳｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む単離ポリペプチドまたはそのポリペプチドを含む医薬組成物を投与することを含む、対象において骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）を炎症誘発性表現型に再分極する方法を提供する。一部のそのような実施形態では、対象はがんを有する。一部の実施形態では、がんは、骨髄細胞を含む腫瘍微小環境と関連する固形腫瘍である。一部の実施形態では、がんは、腎細胞癌、肉腫、膵臓癌、神経膠芽腫、卵巣癌、結腸直腸癌、肺癌、黒色腫、膀胱癌、頭頚部癌、乳癌及び子宮癌から選択される。場合によっては、がんは転移性である。一部の実施形態では、対象は神経性または神経変性疾患を有する。一部の実施形態では、神経性または神経変性疾患は、機能障害または不全の小グリア細胞により特徴づけられる。一部の実施形態では、神経変性疾患は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、及び軽度認知障害、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、タウパチー病、多発性硬化症、免疫媒介ニューロパチー（神経障害性疼痛など）、那須ハコラ病、小児発症型白質脳症ならびに軸索スフェロイド及び色素性グリアを伴う成人発症型白質脳症（ＡＬＳＰ）から選択される。

一部の実施形態では、がんを有する対象において腫瘍マクロファージをＭ２表現型から再分極する方法であって、対象に、本明細書において提供されるＳｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む単離ポリペプチドまたはそのポリペプチドを含む医薬組成物を投与する方法を提供する。一部の実施形態では、がんは、骨髄細胞を含む腫瘍微小環境と関連する固形腫瘍である。一部の実施形態では、がんは、腎細胞癌、肉腫、膵臓癌、神経膠芽腫、卵巣癌、結腸直腸癌、肺癌、黒色腫、膀胱癌、頭頚部癌、乳癌及び子宮癌から選択される。場合によっては、がんは転移性である。

一部の実施形態では、対象において骨髄細胞を活性化する方法であって、対象に、本明細書において提供されるＳｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む単離ポリペプチドまたはそのポリペプチドを含む医薬組成物を投与する方法を提供する。場合によっては、骨髄細胞は小グリア細胞である。一部の実施形態では、対象はがんを有する。一部の実施形態では、がんは、骨髄細胞を含む腫瘍微小環境と関連する固形腫瘍である。一部の実施形態では、がんは、腎細胞癌、肉腫、膵臓癌、神経膠芽腫、卵巣癌、結腸直腸癌、肺癌、黒色腫、膀胱癌、頭頚部癌、乳癌及び子宮癌から選択される。場合によっては、がんは転移性である。一部の実施形態では、対象は神経性または神経変性疾患を有する。一部の実施形態では、神経性または神経変性疾患は、機能障害または不全の小グリア細胞により特徴づけられる。一部の実施形態では、神経変性疾患は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、及び軽度認知障害、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、タウパチー病、多発性硬化症、免疫媒介ニューロパチー（神経障害性疼痛など）、那須ハコラ病、小児発症型白質脳症ならびに軸索スフェロイド及び色素性グリアを伴う成人発症型白質脳症（ＡＬＳＰ）から選択される。

代表的な肺腺癌試料からの腫瘍浸潤Ｔ細胞、マクロファージ、及び顆粒球のＳｉｇｌｅｃ－９の表面発現を示している。ヒトＳｉｇｌｅｃ－９のアミノ酸配列（配列番号１）を示している。Ｎ末端からＣ末端へと、シグナルペプチド配列は太字であり；ＩｇＶリガンド結合ドメインは、網掛けの太字で示されている保存Ａｒｇと共に下線が引かれており；介在配列は太字の斜体であり（ＡＬＴＨＲ；配列番号３）；Ｃ２タイプ１ドメインは斜体であり；介在配列は太字の斜体であり（ＬＮＶＳＹＰ；配列番号４）；かつＣ２タイプ２ドメインは下線が引かれていて斜体である。ＩＴＩＭモチーフ（ＬＱＹＡＳＬ；配列番号５）及びＳＬＡＭ様（ＴＥＹＳＥＩ；配列番号６）モチーフは下線が引かれていて網掛けされている。膜貫通ドメインは、配列番号１のアミノ酸３４９～３６９で起こると予測される。実施例５に記載されているとおり、ｐＨ７．４、１００ｍＭ濃度のＮａＣｌ、及び２９８Ｋでの特定の操作Ｓｉｇｌｅｃ９－ＩｇＶバリアントのインシリコで計算された特性を示している。実施例９において記載されているとおり、Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１（Ｓ９－ｈＩｇＧ１）と接触させて、単独で、または骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）と共に同時培養されたＴ細胞によるＩＦＮγ発現を示している。実施例１０に記載されているとおり、Ｓｉｇｌｅｃ－３（ａＳ３）、Ｓｉｇｌｅｃ－７（ａＳ７）、Ｓｉｇｌｅｃ－９（ａＳ９－１及びａＳ９－２）、ａＳ３、ａＳ７、及びａＳ９－２の組み合わせ、もしくはＳ９．１－ｈＩｇＧ１（Ｓ９－ｈＩｇＧ１）に対する抗体と接触させて、単独で、またはＭＤＳＣと共に同時培養されたＴ細胞によるＩＦＮγ発現を示している。実施例１１に記載されているとおり、漸増濃度のＳ９．１－ｈＩｇＧ１（Ｓ９－ｈＩｇＧ１）またはＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＬＡＬＡＰＳ（Ｓ９－ｈＩｇＧ１ＬＡＬＡＰＳ）の存在下で、ＭＤＳＣと共に同時培養されたＴ細胞によるＩＦＮγ発現を示している。実施例１２に示されているとおり、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１（Ｓ９－ｈＩｇＧ１）またはＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（Ｓ９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ）と接触させたＭＤＳＣからのＣＣＬ５（上）及びＣＣＬ１７（下）発現を示している。実施例１３に示されているとおり、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１（Ｓ９－ｈＩｇＧ１）またはＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（Ｓ９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ）と接触させたＭＤＳＣからのＣＤ８６（上）及びＣＤ１６３（下）発現を示している。実施例１４に示されているとおり、Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１（Ｓ９－ＩｇＧ１）、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（Ｓ９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ）、またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照で処置されたマウスにおける、全ＣＤ４５＋細胞に対するＣＤ１４＋ＣＤ１６３＋マクロファージのパーセンテージを示している。実施例１４に示されているとおり、Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１（Ｓ９－ＩｇＧ１）、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（Ｓ９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ）、またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照で処置されたマウスにおける、全ＣＤ４５＋細胞に対するＣＤ１４＋ＣＤ２０６＋マクロファージのパーセンテージを示している。実施例１４に示されているとおり、Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１（Ｓ９－ＩｇＧ１）、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（Ｓ９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ）、またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照で処置されたマウスにおける、ＣＤ１４＋マクロファージ上でのＣＤ２０６の表面発現を示している。実施例１５に示されているとおり、Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１（Ｓ９－ｈＩｇＧ１）、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（Ｓ９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ）、またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照で処置されたマウスにおける、血液１マイクロリットルあたりの血小板、好中球、リンパ球、及び単球の個数を示している。実施例１６に示されているとおり、ＭＣ３８細胞を移植され、かつ抗ＰＤ－Ｌ１抗体で処置された、ヒトＳｉｇｌｅｃ－３、Ｓｉｇｌｅｃ－７、及びＳｉｇｌｅｃ－９（Ｓ３／７／９ＢＡＣ）を発現するトランスジェニックＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍増殖を示している。実施例１７に示されているとおり、ＭＣ３８細胞を移植され、かつＳ９．Ｂ－ｍＩｇＧ２ａ（Ｓ９－ｍＩｇＧ２ａ）で処置された、ヒトＳｉｇｌｅｃ－３、Ｓｉｇｌｅｃ－７、及びＳｉｇｌｅｃ－９を発現するトランスジェニックＣ５７ＢＬ／６マウスの腫瘍増殖を示している。実施例１８に示されているとおり、ＭＣ３８細胞を移植され、かつ抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはＳ９．Ｂ－ｍＩｇＧ２ａ（Ｓ９－ｍＩｇＧ２ａ）及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体の組み合わせで処置された、ヒトＳｉｇｌｅｃ－３、Ｓｉｇｌｅｃ－７、及びＳｉｇｌｅｃ－９を発現するトランスジェニックＣ５７ＢＬ／６マウスにおける腫瘍増殖を示している。実施例１９に示されているとおり、漸増濃度のＳ９．１－ｈＩｇＧ１の存在下でのＳｉｇｌｅｃ－３（Ｓ３－ｍＩｇＧ１）、Ｓｉｇｌｅｃ－５（Ｓ５－ｍＩｇＧ１）、Ｓｉｇｌｅｃ－７（Ｓ７－ｍＩｇＧ１）、Ｓｉｇｌｅｃ－９（Ｓ９－ｍＩｇＧ１）、及びＳｉｇｌｅｃ－１０（Ｓ１０－ｍＩｇＧ１）の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含むＦｃ融合体の、ＭＤＳＣの表面への結合を示す。Ｓｉｇｌｅｃ－９－ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子（Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ）の作用機構の例示的なモデルを示す。Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは、そのＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ部分を介してがん細胞上のリガンド（シアル酸）に結合する（左側のパネル）。本明細書における研究に基づき、かつ理論に束縛されることはないが、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは、骨髄細胞上に発現されるＦｃＲ（例えば、ＦｃγＲＩＩＡ）及びリガンド（シアル酸）の両方に結合すると考えられる（右側のパネル）。結合は、協合的結合（またはシス）相互作用により、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ分子のＦｃ部分及びＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ部分を介してそれぞれ起こる。その結果、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは、ＦｃＲを発現しない細胞と比較して、高い親和性で骨髄細胞と結合するので、インビボでの骨髄細胞への優先的標的化、及び骨髄細胞の活性化が生じる。実施例１９に示されているとおり、Ｓ９．Ａ－ｍＩｇＧ１（Ｓ９－ｍＩｇＧ１）は、他のＳｉｇｌｅｃ－Ｆｃ融合体と比較して、ＭＤＳＣを独自に再分極することを示している。バーの各セットは、左から右へ、Ｓ３－ｍＩｇＧ１、Ｓ５－ｍＩｇＧ１、Ｓ７－ｍＩｇＧ１、Ｓ９－ｍＩｇＧ１、Ｓ１０－ｍＩｇＧ１、及びｍＩｇＧ１である。実施例１９に示されているとおり、Ｓ９．Ａ－ｍＩｇＧ１（Ｓ９－ｍＩｇＧ１）は、他のＳｉｇｌｅｃ－Ｆｃ融合体と比較して、ＭＤＳＣを独自に再分極することを示している。バーの各セットは、左から右へ、Ｓ３－ｍＩｇＧ１、Ｓ５－ｍＩｇＧ１、Ｓ７－ｍＩｇＧ１、Ｓ９－ｍＩｇＧ１、Ｓ１０－ｍＩｇＧ１、及びｍＩｇＧ１である。免疫組織化学（ＩＨＣ）による腫瘍試料上でのシアル酸発現の検出を示している。ＣＤ８６上方制御及びＣＤ１６３下方制御により測定されたとおりの、様々なＳｉｇｌｅｃ－９－ＦｃバリアントのＡ３７５腫瘍細胞への結合及び骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）の再分極を示している。各バリアントについて融解温度及びモノマーパーセントにより測定されたとおりの産生収量及び安定性も示している。様々なＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃバリアントについての、ＭＤＳＣアッセイにおけるＣＤ８６誘導とＡ３７５腫瘍細胞結合との間の相関（１９Ａ）、産生収量とＡ３７５腫瘍細胞結合との間の相関（１９Ｂ）、及び安定性とＡ３７５腫瘍細胞結合との間の相関（１９Ｃ）を示している。Ｂ１６Ｆ１０マウス黒色腫細胞を静脈内注射され、かつアイソタイプ対照で処置されたＳ３／７／９ＢＡＣマウスと比較して、Ｂ１６Ｆ１０マウス黒色腫細胞を静脈内注射され、かつＳ９．Ｂ－ｍＩｇＧ２ａ（Ｓ９－Ｆｃ）で処置されたＳ３／７／９ＢＡＣマウスにおける肺結節の減少を示している。アイソタイプ対照と比較して、Ｓ９．Ｂ－ｍＩｇＧ２ａ単剤治療がＥ０７７１同系乳癌モデルにおいて腫瘍増殖を阻害することを示している。骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）へのＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの結合に対するＦｃγ受容体エンゲージメントの作用を決定するために、フローサイトメトリー実験の結果を示している。ＭＤＳＣへのＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１（Ｓ９－ｈＩｇＧ１）ＮＳＬＦ（ひし形）の結合は低ｎＭ範囲にあることを示している。アイソタイプ対照（三角形）での結合曲線も、各図のパネルにおいて示されている。骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）へのＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの結合に対するＦｃγ受容体エンゲージメントの作用を決定するために、フローサイトメトリー実験の結果を示している。ＦｃサイレントであるＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＬＡＬＡＰＳの結合は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦの結合よりも約７５倍弱いことを示している。アイソタイプ対照（三角形）での結合曲線も、各図のパネルにおいて示されている。骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）へのＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの結合に対するＦｃγ受容体エンゲージメントの作用を決定するために、フローサイトメトリー実験の結果を示している。いずれのＦｃγ受容体も発現しない参照がん細胞系Ａ５４９へのＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１（配列番号４０）の結合を示している。アイソタイプ対照（三角形）での結合曲線も、各図のパネルにおいて示されている。Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１を含む様々なＳｉｇｌｅｃＦｃ融合分子への、シアル酸含有グリカンのパネルの露出の結果を示している。濃い陰影ほど、結合程度が高いことを示している。図が示しているとおり、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１分子は、他のＳｉｇｌｅｃ融合分子とは対照的に、様々なシアル酸部分に結合する。血液細胞へのＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１及びＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦの結合を比較している。平均蛍光強度（ＭＦＩ）に基づき、血液単球へのそれら２つの分子の結合を比較している。血液細胞へのＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１及びＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦの結合を比較している。ＭＦＩが、いくつかの血液細胞型への結合と関連することを示している。Ｔ細胞増殖に対するＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦの作用を示している。ＭＤＳＣの存在が２つのドナー試料においてＴ細胞増殖を阻害し、それがＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦにより各試料において回復したことを示している。Ｔ細胞増殖に対するＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦの作用を示している。約１～２ｎＭである、Ｔ細胞増殖の回復におけるＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦのＥＣ５０を決定するための用量反応曲線を提示している。Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧＮＳＬＦをＭＤＳＣ及びＴ細胞と共にインキュベートした場合に、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ－ｇ）の誘導において、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦが、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１と比較して約１０倍の効力の増強を実証したことを示している。ＭＤＳＣと共にインキュベートした場合に、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦが強固な遺伝子発現プロファイルを誘導し、かつこのプロファイルがマクロファージ再分極と一致することを示している。Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦが、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５、抗ＰＤ－Ｌ１、及び抗ＬＩＬＲＢ２抗体と比較して、Ｍｌ分極の増大（ＣＤ８６の上方制御）を引き起こすことを示している。Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦが、抗Ｓｉｇｌｅｃ１５、抗ＰＤ－Ｌ１、及び抗ＬＩＬＲＢ２抗体と比較して、Ｍ２分極の減少（ＣＤ２０６の下方制御）を引き起こすことを示している。Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｍＩｇＧ２ａは、抗ＰＤ－Ｌ１抗体との組み合わせで、マウスにおいて、移植されたＥ０７７１乳房腫瘍細胞の増殖を、アイソタイプ対照または単独のＳｉｇｌｅｃ－９－ｍＩｇＧ２ａもしくは抗ＰＤ－Ｌ１抗体いずれかよりも高度に減少させることを示している。脾性骨髄細胞からのＣＤ８６（Ａ）またはＣＤｌｌｂ（Ｂ）発現に対する、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｍＩｇＧ２ａ（上向きの三角形）またはアイソタイプ対照（ｍＩｇＧ２ａ）（四角形）の影響力を示している。いくつかの追加のＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃバリアントの特性を示している。バリアントＳ９．３６、Ｓ９．３７及びＳ９．３８は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ－ｈＩｇＧ１（黒色のバー、左から２番目）と同等の挙動を示すことを示し、アイソタイプ対照（一番左の斜線を引かれたバー）と比較して、ＣＤ１６３発現の減少を示している。バリアントＳ９．３６、Ｓ９．３７及びＳ９．３８は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ－ｈＩｇＧ１（黒色のバー、左から２番目）と同等の挙動を示すことを示し、アイソタイプ対照（一番左の斜線を引かれたバー）と比較して、ＣＤ２０６発現の減少を示している。バリアントＳ９．３６、Ｓ９．３７及びＳ９．３８は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ－ｈＩｇＧ１（黒色のバー、左から２番目）と同等の挙動を示すことを示し、アイソタイプ対照（一番左の斜線を引かれたバー）と比較して、ＣＤ８６発現の増大を示している。カニクイザルの血清におけるＳｉｇｌｅｄ－９－ｈＩｇＧ１（中黒の円形）及びＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（中空の四角形）の平均濃度－時間プロファイルを示している。Ｓｉｇｌｅｃ３／７／９ＢＡＣ遺伝子導入マウスへの静脈内大量注射後の複数のＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃバリアントの反応速度プロファイルを示している。

本明細書に記載の様々な実施形態の特性の１つ、いくつか、またはすべてを組み合わせて、本発明の他の実施形態を形成することができることは理解されるべきである。本発明のこれら及び他の態様は、当業者には明らかであろう。本発明のこれら及び他の実施形態を、次の詳細な説明によりさらに記載する。

詳細な説明
Ｓｉｇｌｅｃ－９の細胞外ドメイン及び融合パートナー、例えば、Ｆｃドメインを含むポリペプチドを、本明細書において提供する。Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子は予想外に、骨髄細胞への協合的結合を示し、Ｓｉｇｌｅｃ－９または他のＳｉｇｌｅｃタンパク質に対する抗体と比較して、これらの先天免疫細胞の強力な活性化をもたらす。そのような活性化は、例えば、免疫系がさもなければ不適切に抑制され得るがん、神経変性障害、ならびに他の疾患及び障害の処置において有用である。さらに、安定性、溶解性、リガンド結合及び／または他の特性を改善するために操作されているＳｉｇｌｅｃ－９細胞外ドメインのバリアントを特にＩｇＶドメインに含むポリペプチドを本明細書において提供する。そのようなバリアントは、前記のとおり免疫応答を活性化するための融合分子において有用である。他の発明及び実施形態をさらに、本明細書において記載する。

定義
「Ｓｉｇｌｅｃ－９細胞外ドメイン」及び「Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ」という用語は、細胞の表面上のシアル酸に結合するＳｉｇｌｅｃ－９の細胞外ドメインポリペプチドまたはその断片を指す。この用語は、天然及びその操作バリアントを含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、Ｓｉｇｌｅｃ－９のＩｇＶドメインを含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、Ｓｉｇｌｅｃ－９のＩｇＶドメインならびにＣ２タイプ１（Ｃ２Ｔ１）ドメイン及びＣ２タイプ２（Ｃ２Ｔ２）ドメインを含む。非限定的な例示的Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号７８～１３８で示されている。

「Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子」という用語は、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤと、共有結合した融合パートナー、例えば、Ｆｃドメイン、アルブミン、またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）とを含む分子を指す。一部の実施形態では、融合パートナーは、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤのＣ末端に結合している。融合パートナーがＦｃドメインであるＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、本明細書において「Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子」、「Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ」、または「Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ」と称されることもある。非限定的な例示的Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子は、それらの関連シグナルペプチドを伴うか、または伴わない配列を含む、配列番号１０～７７及び１３９のアミノ酸配列で示されている。

「特異的結合」または標的部分に「特異的に結合する」または「それについて特異的である」という用語は、非特異的相互作用とは測定可能に異なる結合を意味する。特異的結合は、例えば、対照部分についての試験分子の結合と比較して、標的部分についての試験分子の結合を決定することにより測定することができる。標的部分についての結合親和性が、対照部分についての結合親和性よりも少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも１０倍高ければ、試験分子は標的部分に特異的に結合する。疑義を回避するために、特異的結合は、試験分子が任意の他の部分に結合しないことを要求するものではない。

例えば、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤの、指定の位置での「アミノ酸改変」は、指定の残基の置換もしくは欠失、または少なくとも１つのアミノ酸残基を、指定の残基に隣接するように挿入することを指す。指定の残基に「隣接する」挿入は、そこから１個～２個の残基までに挿入することを意味する。その挿入は、指定の残基のＮ末端側またはＣ末端側であってよい。本明細書における好ましいアミノ酸改変は置換である。

本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を意味するために使用される。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変動し得るであろうが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は一般に、Ｃｙｓ２２６またはＰｒｏ２３０位のアミノ酸残基からそのカルボキシル末端までのポリペプチドを含むと定義される。Ｆｃ領域のＣ末端リシン（ＥＵナンバリングシステムによれば残基４４７）は、例えば、Ｆｃ領域含有ポリペプチドの生成もしくは精製中に、またはＦｃ領域含有ポリペプチドをコードする核酸を組み換え操作することにより除去されてもよい。本開示で使用するための適切な天然配列Ｆｃ領域には、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４が含まれる。

「天然配列Ｆｃ領域」は、天然において見い出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、天然配列ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）；天然配列ヒトＩｇＧ２Ｆｃ領域；天然配列ヒトＩｇＧ３Ｆｃ領域；及び天然配列ヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域、さらにはその天然に存在するバリアントが含まれる。

「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸改変、好ましくは１つまたは複数のアミノ酸置換（複数可）により、天然配列Ｆｃ領域のものとは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域と比較して、天然配列Ｆｃ領域において少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、約１から約１０のアミノ酸置換、好ましくは約１から約５つのアミノ酸置換を有する。本明細書におけるバリアントＦｃ領域は好ましくは、天然配列Ｆｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、最も好ましくはそれと少なくとも約９０％の相同性、より好ましくはそれと少なくとも約９５％の相同性を有する。

「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、Ｆｃ領域に結合する受容体を説明している。好ましいＦｃＲは天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧＦｃ領域（ガンマ受容体）に結合するものであり、これらの受容体の対立遺伝子変異型及びオルタナティブスプライシング型を含むＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体を含み、ＦｃγＲＩＩ受容体には、同様のアミノ酸配列を有するが、その細胞質ドメインが主に異なるＦｃγＲＩＩＡ（「活性受容体」）及びＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が含まれる。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（「ＩＴＡＭ」）をその細胞質ドメインに含有する。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、免疫受容体チロシンベースの阻害モチーフ（「ＩＴＩＭ」）をその細胞質ドメインに含有する。他のＦｃＲは、本明細書において「ＦｃＲ」という用語により包含される。ＦｃＲは、Ｆｃ領域を含む分子の血清半減期を増加させることもできる。

ヒトＦｃＲ高親和性結合ポリペプチドのインビボでのＦｃＲへの結合及び血清半減期は、例えば、ヒトＦｃＲを発現するトランスジェニックマウスもしくはトランスフェクトされたヒト細胞系において、またはバリアントＦｃ領域を有するポリペプチドを投与される霊長類においてアッセイすることができる。ＷＯ２００４／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ）は、ＦｃＲへの結合が改善されているか、または減少しているＦｃ領域バリアントを記載している。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）も参照されたい。

本明細書で使用される場合、参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」及び「相同性」は、配列をアラインさせ、必要な場合には、最大配列同一性パーセントを達成するためにギャップを導入した後に、配列同一性の一部としてあらゆる保存的置換を考慮せずに、参照ポリペプチド配列でのアミノ酸残基と同一である、問い合わせ配列でのアミノ酸残基のパーセンテージを指す。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当技術分野の技能範囲内である様々な方法、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピューターソフトウェアを使用して達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアライメントを達成するために必要とされる当技術分野で公知のあらゆるアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。

本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含むポリペプチドなどのポリペプチドをコードする「単離」核酸分子は、それが生じる環境において普通に随伴される少なくとも１つの混入分子から同定及び分離される核酸分子である。好ましくは、単離核酸は、生成環境に随伴するほとんど、または実質的にすべての構成要素を随伴しない。本明細書におけるポリペプチドをコードする単離核酸分子は、細胞に天然に存在する核酸とは区別される。

「ベクター」という用語は、本明細書で使用される場合、それに結合している別の核酸を輸送することができる核酸分子を指すことが意図されている。「プラスミド」は、ベクターの１種であり、追加のＤＮＡセグメントをライゲーションすることができる環状二本鎖ＤＮＡを指す。別の種類のベクターは、ファージベクターである。別の種類のベクターは、ウイルスベクターであり、その際、追加のＤＮＡセグメントを、ウイルスゲノムにライゲーションすることができる。ある特定のベクター（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクター及びエピソーム哺乳類ベクター）は、導入をした宿主細胞中で自己複製が可能である。他のベクター（例えば、非エピソーム哺乳類ベクター）は、宿主細胞に導入すると、宿主細胞のゲノムに組み込まれ得て、それにより、宿主ゲノムと一緒に複製される。さらに、ある特定のベクターは、作動可能に連結した遺伝子の発現を指示することができる。そのようなベクターは、本明細書では、「組み換え発現ベクター」、または簡単に「発現ベクター」と称される。一般的に、組み換えＤＮＡ技術に有用な発現ベクターは多くの場合に、プラスミドの形態である。本明細書では、「プラスミド」及び「ベクター」は、プラスミドが、ベクターのなかで最も一般的に使用される形態であるため、互換的に使用され得る。

本明細書で互換的に使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、あらゆる長さのヌクレオチドのポリマーを指し、それには、ＤＮＡ及びＲＮＡが含まれる。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、改変ヌクレオチドまたは塩基、及び／またはそれらの類似体、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼにより、または合成反応により重合体に組み込まれ得るあらゆる基質であり得る。

「宿主細胞」は、例えば、ポリヌクレオチド挿入物（複数可）を組み込むベクター（複数可）または他の外来性核酸を含有することができる個々の細胞または細胞培養物を含む。一部の実施形態では、ベクターまたは他の外来性核酸を、宿主細胞のゲノムに組み込む。宿主細胞は単一宿主細胞の後代を含み、その後代は、天然、偶発的、または意図的な変異により、元の親細胞と必ずしも完全に（形態学的に、またはゲノムＤＮＡ補体において）同一でなくてもよい。宿主細胞には、本発明のポリヌクレオチド（複数可）を含む（例えば、それでトランスフェクトされた）細胞が含まれる。

「担体」には、本明細書で使用される場合、使用される投薬量及び濃度で、それに曝露される細胞または哺乳類に対して非毒性である薬学的に許容される担体、添加剤、または安定剤が含まれる。多くの場合に、生理学的に許容される担体はｐＨ緩衝水溶液である。生理学的に許容される担体の例には、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸を含む抗酸化剤；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、またはデキストリンを含む単糖、二糖、及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート化剤；マンニトールまたはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；及び／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、及びＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などの非イオン性界面活性剤が含まれる。

本明細書で使用される場合、「予防する」という用語は、個体における特定の疾患、障害、または状態の発生または再発に関して予防を提供することを含む。個体は、特定の疾患、障害、もしくは状態にかかりやすい、それに影響を受けやすい、またはそのような疾患、障害、もしくは状態を発症するリスクがあるが、その疾患、障害、もしくは状態を有するとはまだ診断されていない。

本明細書で使用される場合、特定の疾患、障害、または状態を発症する「リスクがある」個体は、検出可能な疾患または疾患の症状を有してもよいし、または有さなくてもよく、かつ本明細書に記載の処置方法の前に、検出可能な疾患または疾患の症状を示していてもよいし、または示していなくてもよい。「リスクがある」とは、個体が、当技術分野で公知のとおり、特定の疾患、障害、または状態の発症と相関する測定可能なパラメーターである１つまたは複数のリスク因子を有することを示す。これらのリスク因子の１つまたは複数を有する個体は、これらのリスク因子の１つまたは複数を持たない個体よりも、特定の疾患、障害、または状態を発症する可能性が高くなる。

本明細書で使用される場合、「処置する」、「処置」、「処置すること」などの用語は、処置されている個体における臨床病理の天然の経過を変更するように設計された臨床的介入を指す。処置の望ましい効果には、進行速度の減速、病的状態の改善または寛解、予後の寛解または改善、及び／または特定の疾患、障害、もしく状態の症状の緩和または軽減が含まれる。例えば、特定の疾患、障害、または状態と関連する１つまたは複数の症状が緩和または除去されれば、個体は成功裏に「処置される」。ある特定の実施形態では、患者は、患者が次のうちの１つまたは複数を示すならば、本発明の方法によりがんについて成功裏に「処置される」：がん細胞の個数の減少もしくは完全な非存在；腫瘍サイズの縮小；例えば、軟部組織及び骨へのがんの伝播を含む、末梢臓器へのがん細胞浸潤の阻害もしくは非存在；腫瘍転位の阻害もしくは非存在；腫瘍増殖の阻害もしくは非存在；特異的ながんと関連する１つもしくは複数の症状の軽減；罹患率及び死亡率の低下；生活の質の改善；腫瘍の腫瘍原性、腫瘍発生頻度、もしくは腫瘍発生能の低下；腫瘍におけるがん幹細胞の数もしくは頻度の減少；非腫瘍発生性状態への腫瘍発生性細胞の分化；無増悪生存期間（ＰＦＳ）、無病生存期間率（ＤＦＳ）、全生存期間（ＯＳ）、完全奏功（ＣＲ）、部分奏功（ＰＲ）、もしくは安定な疾患（ＳＤ）の増加；進行性疾患（ＰＤ）の減少；進行までの時間の短縮（ＴＴＰ）；またはこれらの任意の組み合わせ。

「投与する」、「投与すること」、「投与」などの用語は、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子（例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子）などの治療薬の送達を可能にするために使用され得る方法を指す。本明細書に記載の薬剤及び方法と共に使用され得る投与技術は、例えば、ＧｏｏｄｍａｎａｎｄＧｉｌｍａｎ，ＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢａｓｉｓｏｆＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ｃｕｒｒｅｎｔｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ；及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ，ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ｃｕｒｒｅｎｔｅｄｉｔｉｏｎ，ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａにおいて見い出される。

「有効量」は少なくとも、所望の治療または予防結果を達成するために必要な投薬量で、かつ期間にわたって有効な量を指す。有効量は、１回または複数回の投与において提供することができる。本明細書における有効量は、個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重、ならびに個体において所望の応答を誘発する、その処置の能力などの因子によって変動し得る。有効量はまた、処置の何らかの毒性または有害な作用よりも、治療上の有益効果が上回る量である。予防上の使用では、有利な、または所望の結果には、疾患の生化学的、組織学的、及び／または行動症状、その合併症及び疾患発症中の中間病的表現型などを含む、リスクの除去もしくは低下、重症度の軽減、または疾患の発症の遅延などの結果が含まれる。治療用途では、有利な、または所望の結果には、疾患に起因する１つまたは複数の症状の低減、疾患に罹患している者の生活の質の向上、疾患を処置するために必要とされる他の薬物の用量の減少、標的化などを介した別の薬物の効果の増強、疾患の進行の遅延及び／または生存期間の延長などの臨床結果が含まれる。薬物、化合物、または医薬組成物の有効量は、直接的または間接的のいずれかで予防的または治療的処置を達成するのに十分な量である。臨床の状況で理解されるとおり、薬物、化合物、または医薬組成物の有効量は、別の薬物、化合物、または医薬組成物と組み合わせて達成されてもよいし、または達成されなくてもよい。したがって、「有効量」は、１つまたは複数の治療薬を投与する状況で考慮し得るものであり、単一の薬剤が、１つまたは複数の他の薬剤と組み合わせて、所望の結果を達成し得る、または達成するのであれば、有効量で与えられていると考えることができる。

リスクの処置、予防、または低減を目的とする「個体」または「対象」または「患者」は、ヒト、飼育動物及び家畜、ならびに、動物園用、競技用、または愛玩動物、例えば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、アレチネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコなどを含む、哺乳類に分類される任意の動物を指す。一部の実施形態では、個体はヒトである。

「がん」及び「癌性」という用語は、細胞の集団が未制御の細胞増殖により特徴づけられる、哺乳類における生理学的状態を指し、それを記載している。がんは、原発性腫瘍であってもよいし、または進行性もしくは転移性がんであってもよい。「難治性」がんは、抗腫瘍処置ががん患者に投与されているにも関わらず、進行しているものである。「再発性」がん、または「再発している」がんは、当初の治療に対する応答後に、当初の部位で、または遠位の部位で、再増殖しているものである。「再発」患者は、寛解後にがんの徴候または症状を有するものである。任意選択で、患者は、アジュバントまたはネオアジュバント治療後に再発している。

本明細書で使用される場合、別の薬剤または組成物と「併せての」または「組み合わせての」薬剤または組成物の投与には、同時投与及び／または異なる時間での投与が含まれる。併せての投与には、同時製剤としての投与、または異なる投薬頻度もしくは間隔で、かつ同じ投与経路もしくは異なる投与経路を使用することを含む別々の組成物としての投与も包含される。一部の実施形態では、併せての投与は、同じ処置レジメンの一部としての投与を意味する。一部の実施形態では、別の薬剤との組み合わせての薬剤の投与は、「相乗作用」または「相乗効果」をもたらし、すなわち、薬剤を一緒に使用する場合に達成される効果は、別々に薬剤を使用することから生じる効果の合計よりも大きい。一部の実施形態では、別の薬剤と組み合わせての薬剤の投与は、「相加」効果をもたらし、すなわち、薬剤を一緒に使用する場合に達成される効果は、別々に薬剤を使用することから生じる効果の合計に等しい。

用語「約」という用語は、本明細書で使用される場合、当技術分野の当業者であれば容易に分かる、それぞれの数値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」を付した値またはパラメーターへの言及は、その数値、またはパラメーターそれ自体を対象にした実施形態を含む（及び、説明する）。

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、及び、「その（ｔｈｅ）」は、文脈により別段に明らかに示されていない限り、複数形を含む。

本明細書に記載の本開示の態様及び実施形態は、態様及び実施形態を「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」及び「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙｏｆ）」を含むことは理解される。

Ｓｉｇｌｅｃ－９細胞外ドメインを含むポリペプチド
一部の実施形態では、本明細書における実施形態のいずれかによるＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤまたはＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、本明細書に記載のとおりの特徴のいずれかを単一で、または組み合わせで組み込んでいてよい。

Ｓｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含むポリペプチドを、本明細書において提供する。ある特定の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインは、配列番号１のヒトＳｉｇｌｅｃ－９のアミノ酸２０～１４０を含む。図２を参照されたい。本明細書の実施例２に示されているとおり、Ｓｉｇｌｅｃ－９のＩｇＶドメインは、細胞の表面上のシアル酸に結合するために十分である。一部の実施形態では、ＩｇＶドメイン、Ｃ２タイプ１（Ｃ２Ｔ１）ドメイン、及びＣ２タイプ２（Ｃ２Ｔ２）ドメインを含むＳｉｇｌｅｃ－９細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を含むポリペプチドを提供する。Ｓｉｇｌｅｃ－９Ｃ２Ｔ１ドメインは、配列番号１のヒトＳｉｇｌｅｃ－９のアミノ酸１４６～２２９を含み、かつＳｉｇｌｅｃ－９Ｃ２Ｔ２ドメインは、配列番号１のヒトＳｉｇｌｅｃ－９のアミノ酸２３６～３３６を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号１のアミノ酸２０～３３６を含み、任意選択で１つまたは複数のアミノ酸改変を伴う。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号１のアミノ酸２０～３３６を含み、任意選択で１つまたは複数のアミノ酸改変を伴い、かつ任意選択でＮ末端及び／またはＣ末端での１～５つのアミノ酸欠失または付加を伴う。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、ＩｇＶ、Ｃ２Ｔ１及びＣ２Ｔ２ドメインを含んでよいが、例えば、ＥＣＤの最後の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２のＣ末端（膜近位）アミノ酸を含まなくてよい。ＥＣＤのそれらの１２のＣ末端（膜近位）アミノ酸は配列番号１４７に示されている。一例は配列番号７８であり、例えば、これは、ＩｇＶ、Ｃ２Ｔ１及びＣ２Ｔ２ドメインを含み、かつＣ末端膜近位領域を含まない。

一部の実施形態では、ポリペプチドは、ポリペプチドの安定性を改善する、シアル酸についての結合親和性を改善する、ポリペプチドの機能を改善する、ポリペプチドの薬物動態特性（例えば、半減期、Ｃｍａｘ、またはＡＵＣ）を改善する、または前述の任意の組み合わせをもたらす１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＳｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０８～１３７及び２１４～２２６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有するＳｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０９～１３７及び２１４～２２６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有するＳｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０８～１３７及び２１４～２２６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有するＳｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含み、任意選択でＮ末端及び／またはＣ末端に１～５つのアミノ酸欠失または付加を伴う。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号１０９～１３７及び２１４～２２６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有するＳｉｇｌｅｃ－９ＩｇＶドメインを含み、任意選択でＮ末端及び／またはＣ末端に１～５つのアミノ酸欠失または付加を伴う。一部の実施形態では、ポリペプチドは、ＩｇＶドメインに対してＣ末端側に１つまたは複数の置換を伴うＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含む。例えば、一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号２０７～２１３のいずれか１つのＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含む。下の配列表は、本明細書に挙げられている配列番号に対応する配列を示している。多くの場合に、アミノ酸置換の位置は、変異残基に下線を引くことにより、または太字にして下線を引くことにより、表に示されている。

一部の実施形態では、ポリペプチドは、ポリペプチドの安定性を改善する、シアル酸についての結合親和性を改善する、ポリペプチドの機能を改善する、ポリペプチドの薬物動態特性を改善する、または前述の任意の組み合わせをもたらす１つまたは複数のアミノ酸置換を含むＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７８～１０７、１３８、及び１９４～２０６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有するＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含む。一部の実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７８～１０７、１３８、１９４～２０６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を有するＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含み、任意選択でＮ末端及び／またはＣ末端に１～５つのアミノ酸欠失または付加を伴う。

本明細書において提供される実施形態のいずれでも、ポリペプチドはさらに、融合パートナーを含んでよい。非限定的な例示的融合パートナーには、Ｆｃドメイン、アルブミン、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。一部の実施形態では、融合パートナーは、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤのＣ末端に共有結合している。一部の態様では、融合パートナーは、Ｆｃドメインを含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ及びＦｃドメインを含むポリペプチドを本明細書において提供し、その際、Ｆｃドメインは任意選択で、介在リンカー配列を伴って、または伴わずにＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤのＣ末端に融合している。「リンカー配列」は、本明細書で使用される場合、天然Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤまたはその融合パートナー（例えば、Ｆｃドメイン）において見い出されないポリペプチド配列を指し、その際、そのようなポリペプチド配列は、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤとその融合パートナーとの間に配置される。一部の実施形態では、リンカー配列は、約４から２５の間のアミノ酸であってよい。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、リンカー配列を伴わずにＣ末端に融合している。様々な実施形態で、ポリペプチドは、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ及びＩｇＧ１Ｆｃドメイン、例えば、配列番号１４２のＩｇＧ１Ｆｃドメインを含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含むポリペプチドは、ＮＳＬＦ置換を含むＩｇＧ１Ｆｃドメイン、例えば、配列番号１４３を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含むポリペプチドは、Ｋ３２２Ａ置換を含むＩｇＧ１Ｆｃドメイン、例えば、配列番号１４４を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含むポリペプチドは、例えば、それぞれ配列番号１４５または１４６に示されているとおりのＩｇＧ４ＦｃドメインまたはＳ２２８Ｐ置換を含むＩｇＧ４Ｆｃドメインを含む。

一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１０～３９、１４８～１６０、及び１６８～１７０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号４０～７７、１７１～１８３、及び１９１～１９３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、任意選択でシグナル配列を含まない。

一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤまたはＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤＩｇＶドメインは、配列番号１０９～１３７及び２１４～２２６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。場合によっては、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、ＩｇＶ、Ｃ２Ｔ１、及びＣ２Ｔ２ドメインを含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号１４７の膜近位領域（ＭＰＲ）を含まない。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、ＩｇＶ、Ｃ２Ｔ１、及びＣ２Ｔ２ドメインを含み、かつＭＰＲを含まない。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号７９～１０７及び１９４～２０６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号７９～１０７及び１９４～２０６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、配列番号１４７のＭＰＲを含まない。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号７９～１０７及び１９４～２０６のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列からなる。一部の態様では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、ＥＣＤ及び融合パートナーを含むＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子の一部である。一部の実施形態では、融合パートナーは、Ｆｃ、アルブミン、またはＰＥＧである。一部の実施形態では、融合パートナーはＦｃである。一部の実施形態では、融合パートナーはＦｃであり、かつ分子のＣ末端に配置されている（すなわち、Ｆｃは、直接に、またはリンカーを介してＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤのＣ末端に結合している）。一部の実施形態では、ＦｃはヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）である。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４２～１４４及び２３４～２３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２のＩｇＧ１ポリペプチドと比べて、（ａ）ＦｃγＲＩＩＩへの結合の減少；（ｂ）抗体依存性細胞傷害性（ＡＴＣＣ）の低下及び／または補体結合活性の低下；（ｃ）ＦｃγＲＩＩａへの結合の増大；またはａ）、ｂ）、及び／またはｃ）の任意の組み合わせを有するｈＩｇＧ１アイソタイプを有する。場合によっては、Ｆｃドメインは、Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ（ＮＳＬＦ）置換を伴うヒトＩｇＧ１アイソタイプを含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、Ｓ２２８Ｐ置換を伴うか、または伴わないヒトＩｇＧ４である。したがって、一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４５または１４６のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号４９～７７及び１７１～１９３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、シグナル配列を含まない。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号４９～７７及び１７１～１９３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、シグナル配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号４９～７７及び１７１～１９３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列からなり、シグナル配列を含まない。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号４９～７７及び１７１～１９３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列からなり、シグナル配列を含む。

一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤまたはＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号１４７の膜近位領域（ＭＰＲ）配列を含まない。場合によっては、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号１３８のアミノ酸配列からなる。場合によっては、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号１３８のアミノ酸配列を含むか、またはそれからなり、シグナル配列を含まないが、その際、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、シグナル配列を含む配列番号１３８をコードする核酸から発現されている。場合によっては、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、ＥＣＤ及び融合パートナーを含むＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子である。一部のそのような実施形態では、融合パートナーは、Ｆｃ、アルブミン、またはＰＥＧであってよい。一部の実施形態では、融合パートナーはＦｃである。一部の実施形態では、融合パートナーはＦｃであり、かつ分子のＣ末端に配置されている（すなわち、Ｆｃは、直接に、またはリンカーを介してＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤのＣ末端に結合している）。一部の実施形態では、Ｆｃは、ヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）である。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４２～１４４及び２３４～２３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２のＩｇＧ１ポリペプチドと比べて、（ａ）ＦｃγＲＩＩＩへの結合の減少；（ｂ）抗体依存性細胞傷害性（ＡＴＣＣ）の低下及び／または補体結合活性の低下；（ｃ）ＦｃγＲＩＩａへの結合の増大；またはａ）、ｂ）、及び／またはｃ）の任意の組み合わせを有するｈＩｇＧ１アイソタイプを有する。場合によっては、Ｆｃドメインは、Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ（ＮＳＬＦ）置換を伴うヒトＩｇＧ１アイソタイプを含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、Ｓ２２８Ｐ置換を伴う、または伴わないヒトＩｇＧ４である。したがって、一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４５または１４６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤまたはＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号７８の配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号１４７（ＭＰＲ）の膜近位領域配列を含まない。場合によっては、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号７８のアミノ酸配列からなる。場合によっては、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、ＥＣＤ及び融合パートナーを含むＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子である。一部のそのような実施形態では、融合パートナーは、Ｆｃ、アルブミン、またはＰＥＧであってよい。一部の実施形態では、融合パートナーはＦｃである。一部の実施形態では、融合パートナーはＦであり、かつ分子のＣ末端に配置されている（すなわち、Ｆｃは、直接に、またはリンカーを介してＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤのＣ末端に結合している）。一部の実施形態では、ＦｃはヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）である。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４２～１４４及び２３４～２３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２のＩｇＧ１ポリペプチドと比べて、（ａ）ＦｃγＲＩＩＩへの結合の減少；（ｂ）抗体依存性細胞傷害性（ＡＴＣＣ）の低下及び／または補体結合活性の低下；（ｃ）ＦｃγＲＩＩａへの結合の増大；またはａ）、ｂ）、及び／またはｃ）の任意の組み合わせを有するｈＩｇＧ１アイソタイプを有する。場合によっては、Ｆｃドメインは、Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ（ＮＳＬＦ）置換を伴うヒトＩｇＧ１アイソタイプを含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、Ｓ２２８Ｐ置換を伴う、または伴わないヒトＩｇＧ４である。したがって、一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４５または１４６のアミノ酸配列を含む。

場合によっては、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、そのＣ末端で、任意選択でリンカーを介してか、もしくは直接にＦｃドメインまたはアルブミンもしくはＰＥＧなどの別の融合パートナーに結合している配列番号７８のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含む。一部の実施形態では、配列番号７８は、そのＣ末端でＦｃドメインに直接に結合している。一部の実施形態では、配列番号７８は、そのＣ末端で、リンカーを介してＦｃドメインに結合している。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、そのＣ末端で、配列番号１４２～１４４及び２３４～２３９のいずれか１つを含むＦｃなどのヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４アイソタイプＦｃドメインに結合している配列番号７８の配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２のＩｇＧ１ポリペプチドと比べて、（ａ）ＦｃγＲＩＩＩへの結合の減少；（ｂ）抗体依存性細胞傷害性（ＡＴＣＣ）の低下及び／または補体結合活性の低下；（ｃ）ＦｃγＲＩＩａへの結合の増大；またはａ）、ｂ）、及び／またはｃ）の任意の組み合わせを有するｈＩｇＧ１アイソタイプを有するｈＩｇＧ１アイソタイプを有する。場合によっては、Ｆｃドメインは、Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ（ＮＳＬＦ）置換を伴うヒトＩｇＧ１アイソタイプを含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは配列番号１４３を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、Ｓ２２８Ｐ置換を伴うか、または伴わないヒトＩｇＧ４である。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４５を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは配列番号１４６を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は配列番号１０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１０のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号２２７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号２２７のアミノ酸配列からなる。

一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、そのＣ末端でＦｃドメインに結合している配列番号７８のアミノ酸配列を含み、その際、その分子は、配列番号４５～４８及び２２８～２３３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、その関連シグナルペプチドを含まない。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、そのＣ末端でＦｃドメインに結合している配列番号７８のアミノ酸配列を含み、その際、その分子は、配列番号４５～４８及び２２８～２３３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、その関連シグナルペプチドを含む。一部の実施形態では、分子は、配列番号４５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、分子は、配列番号４５のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、分子は、配列番号４８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、分子は、配列番号４８のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、分子は、配列番号２２８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、分子は、配列番号２２８のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、分子は、配列番号２２９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、分子は、配列番号２２９のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、分子は、配列番号２３０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、分子は、配列番号２３０のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、分子は、配列番号２３１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、分子は、配列番号２３１のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、分子は、配列番号２３２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、分子は、配列番号２３２のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、分子は、配列番号２３３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、分子は、配列番号２３３のアミノ酸配列からなる。

一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号２１８の配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号１９８の配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号２１８または１９８の配列を含み、かつ配列番号１４７の膜近位領域（ＭＰＲ）配列を含まない。場合によっては、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号１９８のアミノ酸配列からなる。場合によっては、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、ＥＣＤ及び融合パートナーを含むＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子である。一部のそのような実施形態では、融合パートナーは、Ｆｃ、アルブミン、またはＰＥＧであってよい。一部の実施形態では、融合パートナーはＦｃである。一部の実施形態では、融合パートナーはＦｃであり、これは、分子のＣ末端に配置されている（すなわち、Ｆｃは、直接に、またはリンカーを介してＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤのＣ末端に結合している）。一部の実施形態では、ＦｃはヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）である。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４２～１４４及び２３４～２３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２のＩｇＧ１ポリペプチドと比べて、（ａ）ＦｃγＲＩＩＩへの結合の減少；（ｂ）抗体依存性細胞傷害性（ＡＴＣＣ）の低下及び／または補体結合活性の低下；（ｃ）ＦｃγＲＩＩａへの結合の増大；またはａ）、ｂ）、及び／またはｃ）の任意の組み合わせを有するｈＩｇＧ１アイソタイプを有する。場合によっては、Ｆｃドメインは、Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ（ＮＳＬＦ）置換を伴うヒトＩｇＧ１アイソタイプを含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、Ｓ２２８Ｐ置換を伴うか、または伴わないヒトＩｇＧ４である。したがって、一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４５または１４６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤまたはＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、シグナル配列を含む。他の実施形態では、含まない。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１５２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１５２のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１６８のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１６８のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１７５のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１７５のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１９１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１９１のアミノ酸配列からなる。

一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号２１９の配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号１９９の配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号２１９または１９９の配列を含み、かつ配列番号１４７の膜近位領域（ＭＰＲ）配列を含まない。場合によっては、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号１９９のアミノ酸配列からなる。場合によっては、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、ＥＣＤ及び融合パートナーを含むＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子である。一部のそのような実施形態では、融合パートナーは、Ｆｃ、アルブミン、またはＰＥＧであってよい。一部の実施形態では、融合パートナーはＦｃである。一部の実施形態では、融合パートナーはＦｃであり、かつこれは分子のＣ末端に配置されている（すなわち、Ｆｃは、直接に、またはリンカーを介してＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤのＣ末端に結合している）。一部の実施形態では、ＦｃはヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）である。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４２～１４４及び２３４～２３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２のＩｇＧ１ポリペプチドと比べて、（ａ）ＦｃγＲＩＩＩへの結合の減少；（ｂ）抗体依存性細胞傷害性（ＡＴＣＣ）の低下及び／または補体結合活性の低下；（ｃ）ＦｃγＲＩＩａへの結合の増大；またはａ）、ｂ）、及び／またはｃ）の任意の組み合わせを有するｈＩｇＧ１アイソタイプを有する。場合によっては、Ｆｃドメインは、Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ（ＮＳＬＦ）置換を伴うヒトＩｇＧ１アイソタイプを含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、Ｓ２２８Ｐ置換を伴うか、または伴わないヒトＩｇＧ４である。したがって、一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４５または１４６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤまたはＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子はシグナル配列を含む。他の実施形態では、含まない。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１５３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１５３のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１６９のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１６９のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１７６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１７６のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１９２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１９２のアミノ酸配列からなる。

一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号２２０の配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号２００の配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号２２０または２００の配列を含み、かつ配列番号１４７の膜近位領域（ＭＰＲ）配列を含まない。場合によっては、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、配列番号２００のアミノ酸配列からなる。場合によっては、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤは、ＥＣＤ及び融合パートナーを含むＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子である。一部のそのような実施形態では、融合パートナーは、Ｆｃ、アルブミン、またはＰＥＧであってよい。一部の実施形態では、融合パートナーはＦｃである。一部の実施形態では、融合パートナーはＦｃであり、かつこれは分子のＣ末端に配置されている（すなわち、Ｆｃは、直接に、またはリンカーを介してＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤのＣ末端に結合している）。一部の実施形態では、ＦｃはヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）である。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４２～１４４及び２３４～２３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２のＩｇＧ１ポリペプチドと比べて、（ａ）ＦｃγＲＩＩＩへの結合の減少；（ｂ）抗体依存性細胞傷害性（ＡＴＣＣ）の低下及び／または補体結合活性の低下；（ｃ）ＦｃγＲＩＩａへの結合の増大；またはａ）、ｂ）、及び／またはｃ）の任意の組み合わせを有するｈＩｇＧ１アイソタイプを有する。場合によっては、Ｆｃドメインは、Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ（ＮＳＬＦ）置換を伴うヒトＩｇＧ１アイソタイプを含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、Ｓ２２８Ｐ置換を伴うか、または伴わないヒトＩｇＧ４である。したがって、一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４５または１４６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤまたはＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子はシグナル配列を含む。他の実施形態では、含まない。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１５４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１５４のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１７０のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１７０のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１７７のアミノ酸配列からなる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１９３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１９３のアミノ酸配列からなる。

一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、そのＣ末端でＦｃドメインに結合している配列番号２０７～２１３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、結合は直接である。他の場合では、これは、リンカーを介する。一部の実施形態では、ＦｃはヒトＩｇＧ１（ｈＩｇＧ１）である。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４２～１４４及び２３４～２３９のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４２のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２のＩｇＧ１ポリペプチドと比べて、（ａ）ＦｃγＲＩＩＩへの結合の減少；（ｂ）抗体依存性細胞傷害性（ＡＴＣＣ）の低下及び／または補体結合活性の低下；（ｃ）ＦｃγＲＩＩａへの結合の増大；またはａ）、ｂ）、及び／またはｃ）の任意の組み合わせを有するｈＩｇＧ１アイソタイプを有する。場合によっては、Ｆｃドメインは、Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ（ＮＳＬＦ）置換を伴うヒトＩｇＧ１アイソタイプを含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４３のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｆｃは、Ｓ２２８Ｐ置換を伴うか、または伴わないヒトＩｇＧ４である。したがって、一部の実施形態では、Ｆｃは、配列番号１４５または１４６のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１６１～１６７のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１８４～１９０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、その関連シグナルペプチドを含まない。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、配列番号１８４～１９０のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含み、その関連シグナルペプチドを含む。

例示的なＦｃドメイン
本明細書において提供されるＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子のいずれかの一部の実施形態では、融合分子は、Ｆｃドメインを含んでよい。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及び／またはＩｇＧ４アイソタイプである。

本明細書において提供されるＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子のいずれかのある特定の実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ１アイソタイプを有する。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子はマウスＩｇＧ１Ｆｃドメインを含有する。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、例えば、配列番号１４２に提示されているとおりのヒトＩｇＧ１Ｆｃドメイン（ｈＩｇＧ１）を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子のヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインは、活性化Ｆｃ受容体に結合する。ある特定の実施形態では、活性化Ｆｃ受容体は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ及びＩＩｃ、及びＦｃγＲＩＩＩａ及びＩＩＩｂの任意の１つまたは複数から選択される。

一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子のヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインは、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）及び／またはＣｌｑに結合しないか、またはそれへの結合が減少している。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子のヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインは、それぞれ抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び／または補体結合活性の低下を有し、これはそれぞれの場合に、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子が結合する細胞、例えば、骨髄細胞の不所望な死滅を減少させ得る。この効果は、ある特定のアミノ酸改変、例えば、ＩｇＧ１Ｆｃドメインが例えば、配列番号１４３に示されているとおり、変異Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ（ＩｇＧ１ＦｃドメインのＥＵナンバリングによる）を含有する「ＮＳＬＦ」変異により達成され得る。別の実施形態では、ヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインは、例えば、配列番号１４４に提示されているとおり、Ｋ３２２Ａ（ＥＵナンバリング）に対応する変異を含む。

ＩｇＧ１Ｆｃドメインに対する例示的な改変を下の表Ａに挙げる。

例えば、一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２のＩｇＧ１ポリペプチドと比べて、（ａ）ＦｃγＲＩＩＩへの結合の減少；（ｂ）抗体依存性細胞傷害性（ＡＴＣＣ）の低下及び／または補体結合活性の低下；（ｃ）ＦｃγＲＩＩａへの結合の増大；またはａ）、ｂ）、及び／またはｃ）の任意の組み合わせを有するｈＩｇＧ１アイソタイプを有する。場合によっては、Ｆｃドメインは、配列番号１４３を含む。場合によっては、Ｆｃドメインは、Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ（ＮＳＬＦ）置換を伴うヒトＩｇＧ１アイソタイプを含む。

一部の実施形態では、例えば、インビトロでのＦｃＲｎへのその結合を改善し、したがって、インビボでリサイクルされるその能力を潜在的に改善するために、置換及び変化は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦのＦｃ領域でも行われ得る（例えば、配列番号４５を参照されたい）。それぞれそれらの全体が参照により本明細書に援用されるＤａｌｌ’ Ａｃｑｕａｅｔａｌ．（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：５１７１－５１８０；Ｚａｌｅｖｓｋｙｅｔａｌ．（２０１０）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２８：１５７－１５９；及び米国特許第９，６８８，７５６号に記載されているとおり、例示的な置換及び変化には、「ＹＴＥ」及び「ＬＳ」置換、ならびにシステイン含有ループ挿入が含まれる。一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号２２８～２３０に示されているとおりの配列を含み得る（置換及び変化は、本明細書の配列表において二重下線により示されている）。改変コンストラクトを例えば、表面プラスモン共鳴により、インビトロでＦｃＲｎへの結合の改善について試験し、次いで、インビボで薬物動態（ＰＫ）及び薬力学（ＰＤ）について検討することができる。改変Ｆｃコンストラクトは、ＮＳＬＦ置換ではなく、「ＹＴＥ」もしくは「ＬＳ」置換またはシステイン含有ループ挿入をＦｃ内に含有してもよい。そのようなコンストラクトは、配列番号２３１～２３３に示されている。

本明細書において提供されるＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子のいずれかのある特定の実施形態では、ＦｃドメインはＩｇＧ２アイソタイプを有する。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、マウスＩｇＧ２Ｆｃドメイン、例えば、マウスＩｇＧ２ａ（ｍＩｇＧ２ａ）を含有する。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、ヒトＩｇＧ２Ｆｃドメイン（ｈＩｇＧ２）を含有する。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子のヒトＩｇＧ２Ｆｃドメインは、活性化Ｆｃ受容体に結合する。ある特定の実施形態では、活性化Ｆｃ受容体は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ及びＩｌｅ、ならびにＦｃγＲＩＩＩａ及びＩＩＩｂのいずれか１つまたは複数から選択される。

本明細書において提供されるＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子のいずれかのある特定の実施形態では、Ｆｃドメインは、ＩｇＧ４アイソタイプを有する。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、例えば、配列番号１４５に提示されているとおりのヒトＩｇＧ４Ｆｃドメイン（ｈＩｇＧ４）を含む。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子のヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域は、活性化Ｆｃ受容体に結合する。ある特定の実施形態では、活性化Ｆｃ受容体は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ及びＩＩｅ、及びＦｃγＲＩＩＩａ及びＩＩＩｂのいずれか１つまたは複数から選択される。ある特定の実施形態では、ヒトＩｇＧ４Ｆｃ領域は、例えば、配列番号１４６に提示されているとおり、Ｓ２２８Ｐ（ＥＵナンバリングによる）に対応する変異を含む。

ポリペプチドバリアント
本明細書において提供されるポリペプチドのいずれかの一部の実施形態では、アミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、ポリペプチドの結合親和性及び／または他の生物学的特性を改善することが望ましいことがある。

置換、挿入、及び欠失バリアント
本明細書において提供されるポリペプチドのいずれかの一部の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換を有するポリペプチドバリアントを提供する。ポリペプチドのアミノ酸配列バリアントは、適切な改変を、ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に導入することにより、またはペプチド合成により調製することができる。そのような改変には、例えば、ポリペプチドのアミノ酸配列からの残基の欠失及び／またはそれへの挿入及び／またはその中での置換が含まれる。

ポリペプチドの生物学的特性の改変は、（ａ）置換領域におけるポリペプチド主鎖の、例えばシートもしくはヘリカルコンフォメーションとしての構造、（ｂ）標的部位での分子の電荷もしくは疎水性、または（ｃ）側鎖のかさを、維持することに対するそれらの効果が異なる置換を選択することにより達成され得る。天然に存在する残基は、共通の側鎖の特性に基づき：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
の群に分類することができる。

例えば、非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスからのメンバーと交換することを伴い得る。そのような置換残基を、例えば、非ヒトポリペプチドと相同であるヒトポリペプチドの領域に、または分子の非相同領域に導入することができる。

本明細書に記載のポリペプチドを変化させる際には、ある特定の実施形態では、アミノ酸の疎水性指標を考慮することができる。各アミノ酸には、その疎水性及び電荷特性に基づいて、疎水性指標が割り当てられている。それらは、イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（－０．４）；トレオニン（－０．７）；セリン（－０．８）；トリプトファン（－０．９）；チロシン（－１．３）；プロリン（－１．６）；ヒスチジン（－３．２）；グルタマート（－３．５）；グルタミン（－３．５）；アスパルタート（－３．５）；アスパラギン（－３．５）；リシン（－３．９）；及びアルギニン（－４．５）である。

タンパク質に対して相互作用的な生物学的機能を付与する際の疎水性アミノ酸指標の重要性は、当技術分野で理解されている。Ｋｙｔｅｅｔａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５－１３１（１９８２）。ある特定のアミノ酸を、同様の疎水性指標またはスコアを有するその他のアミノ酸の代わりに使用することができ、かつなおも同様の生物学的活性を保持することができることは、公知である。疎水性指標に基づいて変化させる際に、ある特定の実施形態では、疎水性指標が±２以内であるアミノ酸の置換が含まれる。ある特定の実施形態では、±１以内のものが含まれ、かつある特定の実施形態では、±０．５以内のものが含まれる。

類似のアミノ酸の置換を、親水性に基づいて効果的に行うことができ、特に、そうして生成された生物学的機能性タンパク質またはペプチドは、本事例のとおりに免疫学的実施形態での使用に意図されていることも、当技術分野で理解される。ある特定の実施形態では、隣接するアミノ酸の親水性に左右されるタンパク質の最大の局所平均親水性は、その免疫原性及び抗原性、すなわち、タンパク質の生物学的特性と相関する。

これらのアミノ酸残基には、次の親水性値が割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リシン（＋３．０±１）；アスパルタート（＋３．０±１）；グルタマート（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；トレオニン（－０．４）；プロリン（－０．５±１）；アラニン（－０．５）；ヒスチジン（－０．５）；システイン（－１．０）；メチオニン（－１．３）；バリン（－１．５）；ロイシン（－１．８）；イソロイシン（－１．８）；チロシン（－２．３）；フェニルアラニン（－２．５）及びトリプトファン（－３．４）。同様の親水性値に基づいて変化させる際には、ある特定の実施形態では、親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換が含まれ、ある特定の実施形態では、±１以内のものが含まれ、ある特定の実施形態では、±０．５以内のものが含まれる。

アミノ酸配列挿入には、１残基から１００残基以上を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ－及び／またはカルボキシル末端融合、さらには単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。

分子の酸化安定性を改善し、かつ異常な架橋を阻止するために、ポリペプチドの適切な立体構造の維持に関与しない任意のシステイン残基を一般的にセリンで置換することもできる。逆に、システイン結合（複数可）をポリペプチドに付加して、その安定性を改善することができる。

他のポリペプチド改変
ポリペプチドのいずれかの一部の実施形態では、ポリペプチドは誘導体である。「誘導体」という用語は、アミノ酸（または核酸）の挿入、欠失、または置換以外の化学的改変を含む分子を指す。ある特定の実施形態では、誘導体は、これに限定されないが、ポリマー、脂質、または他の有機もしくは無機部分との化学結合を含む共有結合的改変を含む。ある特定の実施形態では、化学的改変されたポリペプチドは、化学的に改変されていないポリペプチドよりも長い循環半減期を有し得る。ある特定の実施形態では、化学的改変された抗原結合タンパク質は、所望の細胞、組織、及び／または臓器について改善された標的化能力を有し得る。一部の実施形態では、誘導体ポリペプチドは、これに限定されないが、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール、またはポリプロピレングリコールを含む、１つまたは複数の水溶性ポリマー付着を含むように共有結合的に改変されている。例えば、米国特許第４６４０８３５号、同第４４９６６８９号、同第４３０１１４４号、同第４６７０４１７号、同第４７９１１９２号及び同第４１７９３３７号を参照されたい。ある特定の実施形態では、誘導体ポリペプチドは、これに限定されないが、モノメトキシ－ポリエチレングリコール、デキストラン、セルロース、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／マレイン酸無水物コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、ポリ－（Ｎ－ビニルピロリドン）－ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）及びポリビニルアルコール、さらには、そのようなポリマーの混合物を含む、１つまたは複数のポリマーを含む。

ある特定の実施形態では、誘導体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットで共有結合的に改変されている。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の水溶性ポリマーを、誘導体の１つまたは複数の特定の位置、例えば、アミノ末端で結合する。ある特定の実施形態では、１つまたは複数の水溶性ポリマーを、誘導体の１つまたは複数の側鎖に対してランダムに結合する。ある特定の実施形態では、ＰＥＧを、ポリペプチドの治療能力を改善するために使用する。ある特定のそのような方法は例えば、任意の目的のために参照により本明細書に援用される米国特許第６１３３４２６号において論述されている。

核酸、ベクター、及び宿主細胞
本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、組み換え方法及び組成物を使用して生成することができる。一部の実施形態では、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子のいずれかをコードするヌクレオチド配列を有する単離核酸を提供する。例えば、本明細書の核酸は、配列番号１０～３９、７８、１３８、１４８～１７０、及び２２７のいずれか１つのポリペプチドをコードし得る。本明細書の核酸は、配列番号４５～７７、１７１～１９３、及び２２８～２３３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列をコードし得る。

一部の実施形態では、核酸は、シグナル配列を含むＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子をコードする。一部の実施形態では、シグナル配列は、天然シグナル配列である。天然ヒトＳｉｇｌｅｃ－９シグナル配列は配列番号１４０に示されている。一部の実施形態では、シグナル配列は非天然シグナル配列である。当業者は、コードされたポリペプチドの細胞内輸送、シグナル配列の切断、及びコードされたポリペプチドの細胞からの分泌を適切に行ういずれのシグナル配列も使用することができることを理解するであろう。一部のそのような実施形態では、核酸は、天然ヒトＳｉｇｌｅｃ－９シグナル配列と比べて、コードされたポリペプチドの細胞内輸送、シグナル配列の切断、及び／またはコードされたポリペプチドの分泌（効率及び／または収率）を改善するシグナル配列を含むＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子をコードする。一部のそのような実施形態では、核酸は、シグナル配列を含むＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子をコードし、その際、シグナル配列は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、配列番号１４１のシグナル配列は、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子の生成を改善する。

一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１０のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号４５のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１３８のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１３９のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号２２７のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号２２８のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号２２９のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号２３０のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号２３１のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号２３２のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号２３３のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号４８のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１９８のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１９９のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号２００のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号２１８のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号２１９のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号２２０のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１５２のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１５３のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１５４のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１６８のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１６９のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１７０のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１７５のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１７６のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１７７のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１９１のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１９２のアミノ酸配列をコードし得る。一部の実施形態では、本明細書における１つまたは複数の核酸は、配列番号１９３のアミノ酸配列をコードし得る。

一部の実施形態では、前述の核酸のいずれかを含む１つまたは複数のベクター（例えば、発現ベクター）を提供する。一部の実施形態では、そのような核酸を含む宿主細胞も提供する。一部の実施形態では、宿主細胞は、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子をコードする核酸を含むベクターを含む（例えば、それで形質導入されている）。一部の実施形態では、宿主細胞は、真核、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。本開示の宿主細胞には、限定ではないが、単離細胞、インビトロでの培養細胞、及びエクスビボでの培養細胞も含まれる。

本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を作製する方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子の発現に適した条件下で、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子をコードする核酸を含む本開示の宿主細胞を培養することを含む。一部の実施形態では、続いて、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収する。

本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子の組み換え生成では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子をコードする核酸を単離し、宿主細胞におけるさらなるクローニング及び／または発現のために１つまたは複数のベクターに挿入する。そのような核酸は、従来の手順を用いて容易に単離及び配列決定することができる。

本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子のいずれかをコードする核酸配列を含む適切なベクターには、限定ではないが、クローニングベクター及び発現ベクターが含まれる。適切なクローニングベクターは標準的な技術によりコンストラクトすることもできるし、または当技術分野で利用可能な多数のクローニングベクターから選択することもできる。選択されるクローニングベクターは、使用されることが意図されている宿主細胞に応じて変化し得るが、有用なクローニングベクターは一般に、自己複製する能力を有し、特定の制限エンドヌクレアーゼのための単一の標的を持ってよく、及び／またはベクターを含むクローンを選択する際に使用することができるマーカーのための遺伝子を担持してよい。適切な例には、プラスミド及び細菌ウイルス、例えば、ｐＵＣ１８、ｐＵＣ１９、Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（例えば、ｐＢＳＳＫ＋）及びその誘導体、ｍｐｌ８、ｍｐｌ９、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９、ＣｏｌＥ１、ｐＣＲ１、ＲＰ４、ファージＤＮＡ、ならびにシャトルベクター、例えば、ｐＳＡ３及びｐＡＴ２８が含まれる。これら及び多くの他のクローニングベクターが、ＢｉｏＲａｄ、Ｓｔｒａｔｅｇｅｎｅ、及びＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎなどの市場の供給業者から入手可能である。

Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子をコードするベクターのクローニングまたは発現に適した適切な宿主細胞には、原核または真核細胞が含まれる。例えば、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能がその分子の活性に寄与する場合には、真核生物において生成することができる。

原核生物に加えて、そのグリコシル化経路が「ヒト化」されていて、部分的または完全ヒト型グリコシル化パターンを有するＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子の生成をもたらす真菌及び酵母株を含む、糸状真菌または酵母などの真核微生物も、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子をコードするベクターのために適したクローニングまたは発現ホストである（例えば、ＧｅｒｎｇｒｏｓｓＮａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）；及びＬｉｅｔａｌ．Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６））。

脊椎動物細胞も、宿主として使用することができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適応させている哺乳類細胞系が有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞系の他の例は、ＳＶ４０により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１系（ＣＯＳ－７）；本明細書において実施例のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を組み換え生成するために使用されたヒト胎児由来腎臓系（２９３細胞、または例えば、Ｇｒａｈａｍｅｔａｌ．Ｊ．ＧｅｎＶｉｒａｌ．３６：５９（１９７７）に記載のとおりの２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載のとおりのＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸癌細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝臓細胞（ＨｅｐＧ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒｅｔａｌ．ＡｎｎａｌｓＮ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載のとおりのＴＲＩ細胞；ＭＲＣ５細胞；及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞系には、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂｅｔａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７７：４２１６（１９８０））；ならびにＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞系が含まれる。

Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子の例示的な活性
Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含むポリペプチドを本明細書において提供し、その際、そのポリペプチドは、細胞の表面上のシアル酸に結合する。Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含むポリペプチドは、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子などのＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子であり得る。Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含むポリペプチドは、１００ｎＭ未満、または９０ｎＭ未満、または８０ｎＭ未満、または７０ｎＭ未満、または６０ｎＭ未満、または５０ｎＭ未満、または４０ｎＭ未満、または３０ｎＭ未満の親和性（Ｋｄ）で、シアル酸を表面上に含む細胞に結合し得る。一部の実施形態では、ポリペプチドは、０．１～１００ｎＭ、または０．１～９０ｎＭ、または０．１～８０ｎＭ、または０．１～７０ｎＭ、または０．１～６０ｎＭ、または０．１～５０ｎＭ、または０．１～４０ｎＭ、または０．１～３０ｎＭの親和性（Ｋｄ）で、シアル酸を表面上に含む細胞に結合する。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤまたはＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、例えば、１００ｎＭ未満、または９０ｎＭ未満、または８０ｎＭ未満、または７０ｎＭ未満、または６０ｎＭ未満、または５０ｎＭ未満、または４０ｎＭ未満、または３０ｎＭ未満、または２５ｎＭ未満、または２０ｎＭ未満、または１０ｎＭ未満、または５ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または０．１～５０ｎＭ、または１～５０ｎＭ、または１～２５ｎＭ、または１～２０ｎＭ、または１～１０ｎＭ、または１～５ｎＭ、または１～２ｎＭのＫｄで、ＭＤＳＣに結合し得る。様々な実施形態で、細胞は骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）である。場合によっては、ＭＤＳＣはヒトＭＤＳＣである。

親和性を決定するための非限定的な例示的アッセイは次のとおりである。ヒトＭＤＳＣなどのＭＤＳＣを単離し、用量決定量のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子を含むポリペプチドと共にインキュベートする。蛍光タグ付き抗Ｆｃドメイン抗体（例えば、ＩｇＧ１Ｆｃドメインに結合する抗体）を検出のために使用し、かつ結合をフローサイトメトリーにより評価する。一部の実施形態では、蛍光タグ付き抗Ｆｃドメイン抗体のＭＤＳＣへのバックグラウンド結合を減少させるために、非ヒトＦｃドメイン（例えば、マウスＩｇＧ１Ｆｃドメイン）を融合分子において使用する。例示的なアッセイを実施例７において提供する。

一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含むポリペプチドは、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）を再分極する。Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含むポリペプチドは、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子などのＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子であり得る。ＭＤＳＣの再分極は、例えば、ポリペプチドと共にインキュベートされたＭＤＳＣからのケモカイン発現の増大を測定することにより決定することができる。その発現が増大して、ＭＤＳＣの再分極を示し得る非限定的な例示的なケモカインには、ＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬ１７、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ９、及びＩＬ－８が含まれる。再分極を決定するためのアッセイは、１、２、３、４、５またはそれ以上のケモカインの発現を測定することができる。ＭＤＳＣの再分極はまた、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含むポリペプチドの存在下で培養されたＭＤＳＣ上でのＣＤ８６及び／またはＣＤ１６３発現の発現を測定することにより決定することができる。ＣＤ８６は、炎症誘発性マーカーであり、ＣＤ８６発現の増大は、ＭＤＳＣの再分極と一致する。ＣＤ１６３は、Ｍ２マクロファージマーカーであり、ＣＤ１６３発現の減少は、炎症誘発性表現型へのＭＤＳＣの再分極と一致する。例示的なアッセイを実施例８において提供する。

一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含むポリペプチドは、Ｔ細胞のＭＤＳＣ媒介抑制を解除する。Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含むポリペプチドは、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子などのＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子であり得る。Ｔ細胞のＭＤＳＣ媒介抑制の解除を決定するための非限定的な例示的アッセイは次のとおりである。ＭＤＳＣを単離し、例えば、４８時間にわたってポリペプチドと共に培養する。次いで、ＭＤＳＣを単離Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞）及びＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）ＨｕｍａｎＴ－ＡｃｔｉｖａｔｏｒＣＤ３／ＣＤ２８などのＴ細胞活性化因子と共に同時培養する。Ｔ細胞活性化は、ＩＦＮγ発現を測定することにより決定することができる。一部の実施形態では、ＭＤＳＣを、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含むポリペプチドと共にインキュベートした場合に、対照ポリペプチドと比較してＩＦＮγ発現が増加して、Ｔ細胞活性化を示す。例示的なアッセイを実施例９において提供する。

一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含むポリペプチドは、ＭＤＳＣへの他のＳｉｇｌｅｃの結合をブロックする。一部のそのような実施形態では、ポリペプチドは、ＭＤＳＣへのＳｉｇｌｅｃ－３、Ｓｉｇｌｅｃ－５、Ｓｉｇｌｅｃ－７、Ｓｉｇｌｅｃ－９、及び／またはＳｉｇｌｅｃ－１０の結合をブロックする。結合は、例えば、Ｋｄを測定するための本明細書に記載のフローサイトメトリーアッセイを使用して測定することができる。例示的なアッセイを実施例１９において提供する。

一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、シグナル配列を伴って、または伴わずに、配列番号１０もしくは配列番号２２７、または配列番号４５～４８及び２２８～２３３のいずれか１つのアミノ酸配列など、直接に、もしくはリンカー分子を介してＦｃドメインに、そのＣ末端で結合している配列番号７８のアミノ酸配列を含んでよい。一部のそのような場合では、分子は、ヒトＭＤＳＣなどのＭＤＳＣに、例えば、１００ｎＭ未満未満、または９０ｎＭ未満、または８０ｎＭ未満、または７０ｎＭ未満、または６０ｎＭ未満、または５０ｎＭ未満、または４０ｎＭ未満、または３０ｎＭ未満、または２５ｎＭ未満、または２０ｎＭ未満、または１０ｎＭ未満、または５ｎＭ未満、または２ｎＭ未満、または０．１～５０ｎＭ、または１～５０ｎＭ、または１～２５ｎＭ、または１～２０ｎＭ、または１～１０ｎＭ、または１～５ｎＭ、または１～２ｎＭのＫｄで結合し得る。

例えば、一部の実施形態では、Ｆｃドメインは、配列番号１４２のＩｇＧ１ポリペプチドと比べて、（ａ）ＦｃγＲＩＩＩへの結合の減少；（ｂ）抗体依存性細胞傷害性（ＡＴＣＣ）の低下及び／または補体結合活性の低下；（ｃ）ＦｃγＲＩＩａへの結合の増大；またはａ）、ｂ）、及び／またはｃ）の任意の組み合わせを有するヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する。場合によっては、Ｆｃドメインは配列番号１４３を含む。場合によっては、Ｆｃドメインは、Ｎ３２５Ｓ及びＬ３２８Ｆ（ＮＳＬＦ）置換を伴うヒトＩｇＧ１アイソタイプを含む。一部のそのような場合では、そのような分子は、同じアミノ酸配列を有するが、そのＣ末端でｈＩｇＧ１野生型Ｆｃ分子に結合しているＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤと比較して、ＭＤＳＣの存在下でのＩＦＮγ産生の誘導において効力の増大も有し得る。一部の実施形態では、分子は、例えば、ＩＦＮγ発現の増大またはＴ細胞増殖の増大を測定することにより決定された場合に、Ｔ細胞のＭＤＳＣ媒介抑制を解除し得る。場合によっては、そのような分子は、ＭＤＳＣ上のＣＤ８６の発現を増大させ得る、及び／またはＭＤＳＣ上のＣＤ２０６の発現を減少させ得る。場合によっては、そのような分子は、同じアミノ酸配列のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含むが、そのＣ末端でｈＩｇＧ１野生型Ｆｃに結合している分子のＫｄよりも低いＫｄで、ヒトＭＤＳＣなどのＭＤＳＣにも結合し得る。

医薬組成物／製剤
本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子などのＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を、本明細書において提供する。一部の実施形態では、所望の純度を有する本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を生理学的に許容される担体、添加剤または安定剤中に含む医薬組成物を、本明細書において提供する（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．）。許容される担体、添加剤、または安定剤は、用いられる投薬量及び濃度で受容者に対して非毒性である。

様々な実施形態で、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を含む医薬組成物を、薬学的に許容される担体との製剤で提供する（例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙｗｉｔｈＦａｃｔｓａｎｄＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ：ＤｒｕｇｆａｃｔｓＰｌｕｓ，２０ｔｈｅｄ．（２００３）；Ａｎｓｅｌｅｔａｌ．，ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＤｏｓａｇｅＦｏｒｍｓａｎｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈｅｄ．，ＬｉｐｐｅｎｃｏｔｔＷｉｌｌｉａｍｓａｎｄＷｉｌｋｉｎｓ（２００４）；Ｋｉｂｂｅｅｔａｌ．，ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＥｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，３ｒｄｅｄ．，ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰｒｅｓｓ（２０００）を参照されたい）。非経口投与に適した製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌薬、及び意図されている受容者の血液と製剤を等張性にする溶質を含んでよい水性及び非水性等張性滅菌注射液、ならびに懸濁化剤、溶解補助剤、増粘剤、安定剤、及び防腐剤を含んでよい水性及び非水性滅菌懸濁液が含まれる。

治療用途
本明細書に開示のとおり、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子、例えば、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子を、疾患及び障害を予防する、そのリスクを低下させる、または処置するために使用することができる。加えて、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子、例えば、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子を、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）を炎症誘発性表現型に再分極する方法において使用することができ、例えば、その際、対象は、後記のとおり、がんまたは神経性もしくは神経変性疾患を有する。Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子、例えば、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子を、骨髄細胞を活性化する方法において使用することもでき、例えば、その際、対象は、後記のとおり、がんまたは神経性もしくは神経変性疾患を有する。Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子、例えば、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子をさらに、本明細書に記載のとおりのがんを有する対象において腫瘍マクロファージをＭ２表現型から再分極する方法において使用することができる。

本発明の一態様では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子は治療薬として使用される。治療レジメンを、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子での処置から利益を受けるであろう疾患または障害に罹患している（またはそれを発症するリスクがある）対象、例えば、ヒト患者を同定することにより実施する。

後でさらに詳述されるとおり、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子を、本明細書において提示される疾患または病状を処置するために用いられる追加の治療薬と組み合わせて使用することができる。「組み合わせて」及び「併せて」という用語は、本開示において互換的に使用される。Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子と組み合わせて投与される追加の治療薬を、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子の前に、その後に、またはそれと同時に投与することができる。

一部の実施形態では、処置されるべき疾患または障害はがんである。ある特定の実施形態では、がんは固形腫瘍である。固形腫瘍は、骨髄細胞、例えば、マクロファージ、単球、小グリア細胞（ＣＮＳにおいて）、樹状細胞、好中球、及び／または顆粒球を含む腫瘍微小環境と関連し得る。ある特定の実施形態では、腫瘍微小環境は、マクロファージ及び単球を含む。ある特定の実施形態では、骨髄細胞は、腫瘍が免疫系を回避し得る免疫抑制腫瘍微小環境を作る。本明細書におけるＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子での処置は、この抑制を、骨髄細胞を活性化すること、及び抗腫瘍免疫応答を促進することにより緩和することができる。

ある特定の実施形態では、本開示の方法により予防または処置されるがんには、限定ではないが、扁平上皮細胞癌（例えば、上皮性扁平上皮細胞癌）、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、扁平上皮非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌及び及び胃腸間質がんを含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、腎臓癌（例えば、明細胞癌）、卵巣癌、肝臓癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ））、前立腺癌（例えば、ホルモン抵抗性前立腺腺癌）、甲状腺癌、神経芽細胞腫、肉腫、膵臓癌、脳癌（例えば、神経膠芽腫（多形性神経膠芽腫）などの神経膠星状細胞腫）、子宮頸癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌（例えば、三重陰性乳癌）、及び頭頚部癌（頭頚部の扁平上皮細胞癌）、黒色腫（例えば、皮膚または眼内悪性黒色腫などの転移性悪性黒色腫）、甲状腺癌、骨癌、皮膚癌、子宮癌、肛門癌、睾丸癌、ファロピウス管癌、外陰癌、胆管癌、及び食道癌が含まれる。ある特定の実施形態では、がんは、腎細胞癌、肉腫、膵臓癌、神経膠芽腫、卵巣癌、結腸直腸癌、肺癌、黒色腫、膀胱癌、頭頚部癌、乳癌及び子宮癌から選択される。

ある特定の実施形態では、本開示の方法により予防または処置されるがんには、限定ではないが、白血病、リンパ腫、または骨髄腫などの造血性がんが含まれる。

一部の実施形態では、がんは、初期がんまた末期がんであってよい。一部の実施形態では、がんは、原発性腫瘍であってよい。一部の実施形態では、がんは、前述の種類のがんのいずれかに由来する続発性部位での転移性腫瘍であってよい。

一部の実施形態では、本開示は、がんを有する個体を処置する方法であって、個体が、チェックポイント阻害薬治療に対して難治性であり、個体に有効量の本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子を投与することによる、がんを有する方法を提供する。ある特定の実施形態では、個体は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト、例えば、後で提示されるものなどのＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１抗体での治療に対して難治性であるがんを有する。

一部の実施形態では、本開示は、がんを有する個体を処置する方法であって、個体が
チェックポイント阻害薬治療後に再発しているがんを有し、個体に治療有効量の本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子を投与することによる、方法を提供する。ある特定の実施形態では、個体は、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１アンタゴニスト、例えば、後で提示されるものなどのＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１抗体での治療後に再発しているがんを有する。

一部の実施形態では、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子を、阻害免疫チェックポイント分子のアンタゴニストと併せて投与することができる。一部の実施形態では、阻害チェックポイント分子は、ＰＤ－１（プログラム細胞死タンパク質－１）またはそのリガンドＰＤ－Ｌ１（プログラム死リガンド－１）である。一部の実施形態では、ＰＤ－１のアンタゴニストは、ＰＤ－１に対する抗体である。ＰＤ－１抗体には、例えば、ＯＰＤＩＶＯ（ニボルマブ）、ＫＥＹＴＲＵＤＡ（ペムブロリズマブ）、ＭＥＤＩ－０６８０（ＡＭＰ－５Ｉ４；ＷＯ２０１２／１４５４９３）、カムレリズマブ（ＳＨＲ－１２１０）、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、またはスパルタリズマブ（ＮＰＶＰＤＲ００１、ＮＶＳ２４０１１８、ＰＤＲ００１）が含まれる。ＡＭＰ－２２４と呼ばれる、ＩｇＧ１のＦｃ部分に融合しているＰＤ－Ｌ２（Ｂ７－ＤＣ）の細胞外ドメインから構成される組み換えタンパク質も、ＰＤ－１受容体に拮抗するために使用することができる。一部の実施形態では、ＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストは、ＰＤ－Ｌ１に対する抗体である。ＰＤ－Ｌ１抗体には、例えば、ＴＥＣＥＮＴＲＩＱ（アテゾリズマブ）、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４７３６）、ＢＭＳ－９３６５５９（Ｗ０２００７／００５８７４）、ＭＳＢ００１０７１８Ｃ（ＷＯ２０１３／７９１７４）またはｒＨｉｇＭ１２Ｂ７が含まれる。一部の実施形態では、本発明のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を、放射線治療及び／または化学療法薬と組み合わせて投与する。

一部の実施形態では、それを必要とする患者に、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子などのＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することによる、神経性または神経変性障害を処置するための方法を提供する。一部の実施形態では、神経性または神経変性障害は、機能障害（例えば、機能低下）または不全の小グリア細胞により特徴づけられる。小グリア細胞は、特異的に脳に存在し、かつマクロファージとして機能して、食作用のプロセスを介してデブリ及び死滅ニューロンを除去し、かつ脳の健康を維持するための他のサポート機能を与える先天免疫細胞である。理論に束縛されることはないが、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子による小グリア細胞の活性化は、神経性または神経変性障害を処置するであろう。一部の実施形態では、患者は、神経性または神経変性障害の症状を有し、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子が、神経性または神経変性障害を処置するために投与される。一部の実施形態では、患者は、神経性または神経変性障害のリスクがあり、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子が、神経性または神経変性障害のリスクを低下させる、その発症を遅くする、またはそれを予防するために投与される。一部の実施形態では、神経性または神経変性障害は、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、及び軽度認知障害を含む認知症、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、タウパチー病、多発性硬化症、免疫媒介ニューロパチー（神経障害性疼痛など）、那須ハコラ病、小児発症型白質脳症ならびに軸索スフェロイド及び色素性グリアを伴う成人発症型白質脳症（ＡＬＳＰ）から選択される。

認知症
認知症は、これまでに障害のなかった人において、正常な老化から予想され得るものを超える全体的認知能力の重大な損失として現れる非特異的症候群（すなわち、一連の徴候及び症状）である。認知症は、固有の全体的な脳損傷の結果として、変化しないこともある。別法では、認知症は、進行性である場合もあり、身体の損傷または疾患により長期的な減退がもたらされる。認知症は、高齢者集団においてより多く一般的にみられるが、６５歳以前に発症することもある。認知症により影響を受ける認知領域には、限定ではないが、記憶、注意持続時間、言語及び問題解決が含まれる。一般に、個体が認知症と診断されるまでには、少なくとも６ヶ月間、症状が存在する必要がある。

認知症の例示的な形態には、限定ではないが、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、語義認知症、及びレビー小体型認知症が含まれる。

一部の実施形態では、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することは、認知症を予防する、そのリスクを低下させる、及び／または処置することができる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することは、認知症を有する個体において、１つまたは複数のＳｉｇｌｅｃ－９活性を調節し得る。

前頭側頭型認知症
前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）は、脳の前頭葉の進行性変性から生じる状態である。この変性は、時間の経過とともに側頭葉に進むことがある。罹患率では、ＦＴＤは、アルツハイマー病（ＡＤ）に次いで、初老年性認知症症例の２０％を占める。ＦＴＤの臨床的特徴には、記憶欠損、行動異常、人格変化、及び言語障害が含まれる（Ｃｒｕｔｓ，Ｍ．＆ＶａｎＢｒｏｅｃｋｈｏｖｅｎ，Ｃ．，ＴｒｅｎｄｓＧｅｎｅｔ．２４：１８６－１９４（２００８）；Ｎｅａｒｙ，Ｄ．，ｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ５１：１５４６－１５５４（１９９８）；Ｒａｔｎａｖａｌｌｉ，Ｅ．，Ｂｒａｙｎｅ，Ｃ．，Ｄａｗｓｏｎ，Ｋ．＆Ｈｏｄｇｅｓ，Ｊ．Ｒ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ５８：１６１５－１６２１（２００２））。

ＦＴＤ症例のかなりの部分が常染色体優性の様式で遺伝するが、症状は、たとえ１つの家族であっても、行動障害を伴うＦＴＤから、原発性進行性失語まで、大脳皮質基底核神経節変性症までの範囲にわたり得る。ＦＴＤは、ほとんどの神経変性疾患と同様に、罹患脳における特定のタンパク質凝集の病理学的存在により特徴付けられ得る。歴史的に、ＦＴＤに関する最初の記載は、神経原線維変化またはピック球における過剰リン酸化されたタウタンパク質の神経細胞内蓄積の存在を認めたものである。微小管関連タンパク質タウの因果的役割は、いくつかの家族において、タウタンパク質をコードする遺伝子の変異を同定することにより裏付けられた（Ｈｕｔｔｏｎ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ３９３：７０２－７０５（１９９８）。しかしながら、ＦＴＤ脳の大部分は、過剰リン酸化されたタウの蓄積を示さず、ユビキチン（Ｕｂ）及びＴＡＲＤＮＡ結合タンパク質（ＴＤＰ４３）に対して免疫反応性を示す（Ｎｅｕｍａｎｎ，Ｍ．，ｅｔａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｎｅｕｒｏｌ．６４：１３８８－１３９４（２００７））。Ｕｂ封入体（ＦＴＤ－Ｕ）を有するこれらのＦＴＤ症例の大部分は、プログラニュリン遺伝子に変異を持つことが示された。

一部の実施形態では、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することは、ＦＴＤを予防する、そのリスクを低下させる、及び／または処置することができる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することは、ＦＴＤを有する個体において、１つまたは複数のＳｉｇｌｅｃ－９活性を調節し得る。

アルツハイマー病
アルツハイマー病（ＡＤ）は、認知症の最も一般的な形態である。この疾患に治療法はなく、進行するにつれて悪化し、最終的には死に至る。ほとんどの場合、ＡＤは、６５歳を超えた人において診断される。しかしながら、あまり一般的ではない早期発症型アルツハイマー病は、より早期に発症することがある。アルツハイマー病の一般的症状には、近時事象の想起困難などの行動症状；認知症状、混乱、易刺激性及び攻撃性、気分変動、言語障害ならびに長期の記憶喪失が含まれる。疾患が進行するにつれて、身体機能が失われ、最終的に死に至る。アルツハイマー病は、完全に明らかになるまでに未知の可変時間量で発症し、何年も診断未確定で進行する場合がある。

染色体１９上のＳｉｇｌｅｃ－９遺伝子座でのｒｓ２０７５８０３のマイナー対立遺伝子、ＳＮＰが血漿中Ｓｉｇｌｅｃ－９レベル及びアルツハイマー病のリスクの両方の増大と関連するという観察も、本明細書において報告する。加えて、染色体１９上のＳｉｇｌｅｃ－７遺伝子座でのｒｓ１２９８３０５８のマイナー対立遺伝子、ＳＮＰが血漿中Ｓｉｇｌｅｃ－７レベル及びアルツハイマー病のリスクの両方の増大と関連するという観察を、本明細書において報告する。

したがって、一部の実施形態では、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することは、アルツハイマー病を予防する、そのリスクを低下させる、及び／または処置することができる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することは、アルツハイマー病を有する個体において、１つまたは複数のＳｉｇｌｅｃ－９活性を調節し得る。

パーキンソン病
パーキンソン病は、特発性もしくは原発性パーキンソニズム低運動性硬直症候群（ＨＲＳ）、または振戦麻痺と称されることもあり、運動系制御に影響を及ぼす神経変性脳障害である。脳内におけるドーパミン産生細胞の進行性死がパーキンソン病の主要な症状を引き起こす。ほとんどの場合、パーキンソン病は、５０歳を超えた人において診断される。パーキンソン病は、ほとんどの人で特発性（原因不明）である。しかしながら、遺伝的要因がこの疾患にも関与している。

パーキンソン病の症状には、限定ではないが、手、腕、足、顎及び顔の振戦、四肢及び胴の筋硬直、運動の遅さ（運動緩慢）、姿勢動揺、歩行困難、神経精神障害、発語または行動の変化、うつ病、不安、疼痛、精神病、認知症、幻覚、ならびに睡眠問題が含まれる。

一部の実施形態では、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することは、パーキンソン病を予防する、そのリスクを低下させる、及び／または処置することができる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することは、パーキンソン病を有する個体において、１つまたは複数のＳｉｇｌｅｃ－９活性を調節し得る。

筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）
本明細書で使用される場合、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）または運動ニューロン疾患またはルーゲーリッグ病は、互換的に使用され、急速に進行する筋力低下、筋萎縮及び線維束性収縮、筋痙縮、発話困難（構音障害）、嚥下困難（嚥下障害）、ならびに呼吸困難（呼吸障害）により特徴づけられる様々な病因を有する消耗性疾患を指す。

プログラニュリンがＡＬＳにおいて役割を果たし（Ｓｃｈｙｍｉｃｋ，ＪＣｅｔａｌ．，（２００７）Ｊ［０３４３］ＮｅｕｒｏｌＮｅｕｒｏｓｕｒｇＰｓｙｃｈｉａｔｒｙ．；７８：７５４－６）、ＴＤＰ－４３などのタンパク質に起因するＡＬＳにより生じる損傷を再保護する（Ｌａｉｒｄ，ＡＳｅｔａｌ．，（２０１０）．ＰＬｏＳＯＮＥ５：ｅ１３３６８）ことが示されている。ｐｒｏ－ＮＧＦが脊髄損傷後に乏突起神経膠芽細胞及び皮質脊髄ニューロンのｐ７５媒介死を誘導することも実証された（Ｂｅａｔｔｙｅｔａｌ．，Ｎｅｕｒｏｎ（２００２），３６，ｐｐ．３７５－３８６；Ｇｉｅｈｌｅｔａｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃｉＵＳＡ（２００４），１０１，ｐｐ６２２６－３０）。

一部の実施形態では、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することは、ＡＬＳ病を予防する、そのリスクを低下させる、及び／または処置することができる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することは、筋萎縮性側索硬化症を有する個体において、１つまたは複数のＳｉｇｌｅｃ－９活性を調節し得る。

ハンチントン病
ハンチントン病（ＨＤ）は、ハンチンチン遺伝子（ＨＴＴ）の常染色体優性変異により引き起こされる遺伝性神経変性疾患である。ハンチンチン遺伝子内のサイトカイン－アデニン－グアニン（ＣＡＧ）トリプレットリピートが増加すると、その遺伝子によりコードされるハンチンチンタンパク質（Ｈｔｔ）の変異体が産生される。この変異ハンチンチンタンパク質（ｍＨｔｔ）は、毒性であり、ニューロン死に関与する。ハンチントン病の症状は最も一般的には、３５～４４歳の間に現れるが、あらゆる年齢で現れ得る。

ハンチントン病の症状には、限定ではないが、運動機能障害、発作様不規則運動（舞踏運動）、異常な眼球運動、バランス障害、発作、咀嚼困難、嚥下困難、認知障害、発語変化、記憶障害、思考困難、不眠、疲労、認知症、人格変化、うつ病、不安及び強迫的行動が含まれる。

一部の実施形態では、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することは、ハンチントン病（ＨＤ）を予防する、そのリスクを低下させる、及び／または処置することができる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することは、ハンチントン病を有する個体において、１つまたは複数のＳｉｇｌｅｃ－９活性を調節し得る。

タウオパチー病（Ｔａｕｏｐａｔｈｙｄｉｓｅａｓｅ）
タウパチー病またはタウオパチーは、脳内における微小管関連タンパク質タウの凝集によって引き起こされる神経変性疾患の１群である。アルツハイマー病（ＡＤ）が最もよく知られたタウオパチー病であり、タウタンパク質がニューロン内で不溶性神経原線維変化（ＮＦＴ）の形態で蓄積することを伴う。他のタウパチー病及び障害には、進行性核上性麻痺、ボクサー認知症（慢性外傷性脳症）、染色体１７に連鎖する前頭側頭型認知症パーキンソニズム、Ｌｙｔｉｃｏ－Ｂｏｄｉｇ病（グアムのパーキンソン－認知症複合症候群）、神経原線維変化優性認知症、神経節膠腫及び神経節細胞腫、髄膜血管腫症、亜急性硬化性全脳炎、鉛脳症、結節性硬化症、ハレルフォルデン－スパッツ病、リポフスチン症、ピック病、皮質基底核変性症、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、ハンチントン病、ならびに前頭側頭葉変性症が含まれる。

一部の実施形態では、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することは、タウパチー病を予防する、そのリスクを低下させる、及び／または処置することができる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することは、タウパチー病を有する個体において、１つまたは複数のＳｉｇｌｅｃ－９活性を調節し得る。

多発性硬化症
多発性硬化症（ＭＳ）は、散在性硬化症または散在性脳脊髄炎と称されることもある。ＭＳは、脳及び脊髄の軸索を覆う脂質性ミエリン鞘が損傷を受けて、脱髄及び瘢痕化、さらには広範な徴候及び症状が生じる炎症性疾患である。ＭＳは、脳及び脊髄の神経細胞が互いに有効的に情報伝達を行う能力に影響を及ぼす。神経細胞は、ミエリンと呼ばれる絶縁性物質内にある軸索と呼ばれる長い線維に沿って活動電位と呼ばれる電気信号を送ることにより情報伝達を行っている。ＭＳでは、身体自体の免疫系がミエリンを攻撃し、損傷を与える。ミエリンが失われると、軸索は、シグナル伝達を有効的に行うことができなくなる。ＭＳ発症は通常、若年成人で起こり、女性でより一般的である。

ＭＳの症状には、限定ではないが、感覚欠如または打診痛などの感覚変化；感覚減退及び感覚異常などの刺痛またはしびれ感；筋力低下；クローヌス；筋発作；移動困難；運動失調などの協調及びバランス困難；構音障害などの発語障害または嚥下障害などの嚥下困難；眼振、眼閃を含む視神経炎、及び複視などの視覚問題；疲労；急性もしくは慢性疼痛；ならびに膀胱及び腸管障害；様々な程度の認知障害；うつ病または気分不安定の感情症状；通常の周辺温度よりも高い温度に曝されることにより現存する症状が憎悪するウートホフ現象；ならびに頸部を曲げると背中から下方に電気が走るような感覚があるレルミット徴候が含まれる。

一部の実施形態では、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することは、ＭＳを予防する、そのリスクを低下させる、及び／または処置することができる。一部の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を投与することは、ＭＳを有する個体において、１つまたは複数のＳｉｇｌｅｃ－９活性を調節し得る。

投与
本明細書において提供されるＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子などのＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子（及び任意の追加の治療薬）を、非経口、肺内、鼻腔内、腫瘍内、病変内投与、脳脊髄内、頭蓋内、髄腔内、滑液包内、髄腔内、経口、局所、または吸入経路を含む、任意の適切な手段により投与することができる。非経口注入には、筋肉内、ボーラス剤としての静脈内投与、または一定期間にわたる連続注入、動脈内、関節内、血管周囲、または皮下投与が含まれる。一部の実施形態では、投与は静脈内投与である。一部の実施形態では、投与は皮下である。投薬は、任意の適切な経路により、例えば、部分的に、投与が短期間であるか長期間であるかに応じて静脈内または皮下注射剤などの注射剤によるものであってよい。これに限定されないが、様々な時点での単回または複数回の投与、ボーラス投与、及びパルス注入を含む様々な投薬スケジュールが本明細書では企図される。

疾患の予防または処置では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子などの本発明のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子の適切な投薬量は、単独で、または１つもしくは複数の他の追加の治療薬と組み合わせて使用される場合、処置される疾患の種類、融合分子の種類、疾患の重症度及び経過、融合分子を予防的または治療的目的のために投与するか否か、先行治療、患者の臨床履歴及び融合分子に対する応答、ならびに主治医の裁量に依存することとなる。融合分子を患者に、１回で、または一連の処置にわたって適切に投与する。

診断用途
一部の実施形態では、本明細書において提供されるＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子は、試料または個体におけるＳｉｇｌｅｃリガンド、例えば、シアル酸の存在を検出するために有用である。本明細書で使用される場合の「検出する」という用語は、定量的または定性的検出を含む。個体、または個体に由来する組織試料でのシアル酸の検出など、診断目的で本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を使用する方法を本明細書において提供する。一部の実施形態では、個体はヒトである。

検出方法は、シアル酸結合Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子の定量を伴ってよい。生体試料におけるそのような検出は、免疫蛍光顕微鏡、免疫細胞化学、免疫組織化学、ＥＬＩＳＡ、ＦＡＣＳ分析、免疫沈降、またはマイクロ陽電子放射断層撮影を含む、当技術分野で公知の任意の方法で行うことができる。ある特定の実施形態では、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を、例えば、１８Ｆで放射性標識し、続いて、マイクロ陽電子放出断層撮影分析を用いて検出する。また、シアル酸結合を、陽電子放出断層撮影（ＰＥＴ）、Ｘ線コンピューター断層撮影、単光子放射型コンピューター断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、及びコンピューター断層撮影（ＣＡＴ）などの非侵襲的技術により、患者において定量することもできる。

製品
本明細書に記載のとおりのＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子、例えば、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子を含む製品（例えば、キット）を本明細書において提供する。製品は、本明細書に記載のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子を含む１つまたは複数の容器を含み得る。容器は、これに限定されないが、バイアル、ボトル、ジャー、可撓性包装（例えば、密封したＭｙｌａｒまたはプラスチックバッグ）などを含む、任意の適切な包装であってよい。これらの容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数用量パッケージ）、またはサブユニット用量であってよい。

一部の実施形態では、キットは、第２の作用物質をさらに含んでよい。一部の実施形態では、第２の作用物質は、これに限定されないが、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース溶液などの薬学的に許容される緩衝剤または希釈剤である。一部の実施形態では、第２の作用物質は、前記のとおりの薬学的に活性な作用物質である。

製品のいずれかの一部の実施形態では、製品はさらに、本開示の方法による取扱説明書を含む。説明書は一般に、意図されている処置のための投薬量、投薬スケジュール、及び投与経路に関する情報を含む。一部の実施形態では、これらの説明書は、本開示のいずれかの方法に従って、扁平上皮細胞癌（例えば、上皮性扁平上皮細胞癌）、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、扁平上皮非小細胞肺癌、肺腺癌、肺扁平上皮癌、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、腹膜癌、肝細胞癌、胃腸癌及び胃腸間質がんを含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈｃａｎｃｅｒ）、腎臓癌（例えば、明細胞癌）、卵巣癌、肝臓癌、結腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、肝癌、腎臓癌（例えば、腎細胞癌（ＲＣＣ））、前立腺癌（例えば、ホルモン抵抗性前立腺腺癌）、甲状腺癌、神経芽細胞腫、膵臓癌、脳癌（例えば、神経膠芽腫（多形性神経膠芽腫）などの神経膠星状細胞腫）、子宮頸癌、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌（例えば、三重陰性乳癌）、及び頭頚部癌（頭頚部の扁平上皮細胞癌）、黒色腫（例えば、皮膚または眼内悪性黒色腫などの転移性悪性黒色腫）、甲状腺癌、骨癌、皮膚癌、子宮癌、肛門癌、睾丸癌、ファロピウス管癌、外陰癌、胆管癌、食道癌、認知症、前頭側頭型認知症、アルツハイマー病、血管性認知症、及び軽度認知障害を含む認知症、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、タウパチー病、多発性硬化症、免疫媒介ニューロパチー（神経障害性疼痛など）、那須ハコラ病、小児発症型白質脳症ならびに軸索スフェロイド及び色素性グリアを伴う成人発症型白質脳症（ＡＬＳＰ）から選択される疾患、障害、または損傷を予防する、そのリスクを低下させる、またはそれを有する個体を処置するための、本開示のＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子の投与の説明を含む。一部の実施形態では、説明書は、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ融合分子及び第２の作用物質（例えば、第２の薬学的活性薬剤）の取扱説明書を含む。

以下の実施例を参照することにより、本開示はさらに十分に理解されるであろう。しかしながら、それらは、本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。本開示全体での引用はすべて、参照により明らかに、本明細書に援用される。

次の実施例は、単に実例として提示されるものであって、限定ではない。当業者は、本質的に同様の結果を得るために変化させる、または改変することができるであろう様々なパラメーターが容易に分かるはずである。

実施例１：Ｓｉｇｌｅｃ－９は、ヒト腫瘍において骨髄細胞の表面上に発現される
ヒト腫瘍において免疫細胞上のＳｉｇｌｅｃ－９の発現を検査するために、新たに切除された原発性ヒト腫瘍を酵素的消化により処理し、フローサイトメトリー分析を続けた。図１に示されているとおり、代表的な肺腺癌試料では、Ｓｉｇｌｅｃ－９が腫瘍浸潤マクロファージ及び顆粒球の表面では検出されたが、Ｔ細胞では検出されなかった。同様のＳｉｇｌｅｃ－９発現プロファイルが、結腸直腸、肝臓、卵巣、及び頭頚部癌からの試料において観察された。Ｓｉｇｌｅｃ－９骨髄細胞発現のさらなる特徴付けは、Ｓｉｇｌｅｃ－９発現がＨＬＡ－ＤＲｌｏ細胞で最高であり、これは骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）として特徴づけられ得ることを明らかにした。

実施例２：Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤドメインは、結合及び効率的な組み換え発現を示す
Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１短縮化バリアントを、発現及びＡ３７５黒色腫細胞への結合の効率について評価した。Ｓｉｇｌｅｃ－９のＥＣＤは３つのドメインからなり：リガンド結合ＩｇＶドメインがＮ末端に配置されていて、Ｃ２Ｔ１及びＣ２Ｔ２ドメインが続く。３つのドメインのうち、Ｃ２Ｔ２ドメインが、形質膜に最も近く配置されている。表１に示されているとおり、３つのドメインすべてを含有するＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃバリアントのみが、Ｅｘｐｉ２９３細胞で効率的に発現された。Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１結合を検出するために、Ａ３７５細胞を２５０μｇ／ｍｌのＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ－Ｆｃバリアントと共に２時間にわたって、氷上で、暗所でインキュベートし、続いて、蛍光コンジュゲートした抗ヒトＩｇＧ（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）と共に３０分間にわたってインキュベートした。結合を、ＢＤＦＡＣＳＣａｎｔｏを用いてフローサイトメトリーにより評価し、かつＦｌｏｗＪｏソフトウェアを用いて分析した。表１のデータは、Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤにおいて主なリガンド認識ドメインとして機能するＩｇＶドメインと一致して、Ａ３７５細胞への結合にはＩｇＶドメインが必要とされることを示している。

実施例３：Ｓｉｇｌｅｃ９－Ｆｃ融合タンパク質操作：ホモロジーモデリング
Ｓｉｇｌｅｃ９－Ｆｃ融合タンパク質を、Ｓｉｇｌｅｃ９－ＩｇＶホモロジーモデルを作製することにより操作して、溶解性を改善し、かつ電荷分布を再調整するための変異の設計を可能にした。構造ベースのタンパク質ホモロジーモデリング及び安定性の計算を用いて、溶解性の改善及び表面電荷の再分布を伴うＳｉｇｌｅｃ－９バリアントを設計したが、その際、ＭＯＥ（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＯｐｅｒａｔｉｎｇＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐｕｔｉｎｇＧｒｏｕｐ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｃａｎａｄａ）のタンパク質モデリング及びタンパク質設計モジュールを利用した。

簡単に述べると、ＭＯＥ２０１９．０１においてＰｒｏｔｅｉｎＭｏｄｅｌｅｒアプリケーション（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＯｐｅｒａｔｉｎｇＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ（ＭＯＥ）．Ｍｏｎｔｒｅａｌ（ＱＣ，Ｃａｎａｄａ）：ＣｈｅｍｉｃａｌＣｏｍｐｕｔｉｎｇＧｒｏｕｐＵＬＣ．；２０１９Ｊａｎｕａｒｙ）を用いて、Ｓｉｇｌｅｃ９ＩｇＶドメイン（「ＨＭ＿Ｓ９」）のホモロジーモデルを作製した。Ｓｉｇｌｅｃ９－ＩｇＶ（配列番号７）の一次アミノ酸配列をクエリー配列として使用したが、それは、図２に示されている。ホモロジー探索を行い、ＰｒｏｔｅｉｎＤａｔａＢａｎｋ（ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｒｃｓｂ（ｄｏｔ）ｏｒｇ／）からのＰＤＢ＿ＩＤ１Ｏ７Ｖ（Ｓｉｇｌｅｃ－７の高分解能構造）を、テンプレートとおよそ７３％同一であるクエリーのためのテンプレートとして使用した。タンパク質ホモロジーモデリング全体にわたるエネルギー最小化を、ＭＯＥ２０１９．０１においてＡｍｂｅｒ１０：ＥＨＴ力場を用いて行って、精密化モデルを生成した。

次に、精密化ＨＭ＿Ｓ９モデルを使用して静電及び疎水性表面パッチを計算して、潜在的に問題を含むタンパク質間相互作用と関連する残基を同定した。このインシリコ分析を使用して、可逆的凝集を予測することができ、これは典型的には、相対的に弱い非共有結合相互作用から生じる。疎水性相互作用は、高分子間の高親和性非特異的相互作用に寄与し得る（Ｗｉｌｄｍａｎ，Ｓ．Ａ．，Ｃｒｉｐｐｅｎ，Ｇ．Ｍ．；ＰｒｅｄｉｃｔｉｏｎｏｆＰｈｙｓｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＰａｒａｍｅｔｅｒｓｂｙＡｔｏｍｉｃＣｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ；Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｆ．Ｃｏｍｐｕｔ．Ｓｃｉ．３９（１９９９）８６８－８７３）。加えて、抗体を含む多くのタンパク質で、静電相互作用は、自己会合凝集物の形成に関係している（ＳｈａｒｐＫ．，ＨｏｎｉｇＢ．；ＥｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓｉｎＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：ＴｈｅｏｒｙａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．１９（１９９０）３０１－３３２）。

いくつかの正電荷の疎水性表面パッチが同定された。ＭＯＥにおける残基スキャニング機能を用いて、ＩＧＶドメインにおいて同時に疎水性パッチ、正電荷パッチ、または疎水性の正電荷パッチを標的化して、インシリコで部位特異的変異導入を行った。単一、二重、三重、または四重変異を各バリアントに導入した。変異をアラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、リシン、セリン、トレオニン、チロシン、及びバリンのうちで選択した。

およそ５０，０００の変異をサンプリングし、安定性変化について計算した。安定性の改善、正電荷パッチの減少、及び疎水性パッチの減少に基づき、コンストラクトされ、かつ機能、発現、溶解性、及び安定性についてさらに試験されるべき変異体を選択した。親Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃが配列番号１０において示されている。アミノ酸５０～５３での配列「ＷＩＹＰ」が、Ｓ９．２～Ｓ９．７では、表示の４つのアミノ酸で置き換えられている（それぞれ配列番号１１～１６；ＤＩＥＧ、配列番号１１；ＳＩＥＴ、配列番号１２；ＳＩＥＰ、配列番号１３；ＤＩＥＰ、配列番号１４；ＹＱＥＳ、配列番号１５；ＴＨＥＴ、配列番号１６）。Ｓ９．８～Ｓ９．２２（配列番号１７～３１）では、表示の置換が行われている。特定の配列の表を参照されたい（変異残基でのナンバリングは、ＭＯＥによる分子モデリングの結果として調節されている。成熟ポリペプチド配列の第１のアミノ酸（ＳＫＬＬ．．．のＳ）は残基ナンバー８である）。

実施例４：Ｓｉｇｌｅｃ９－Ｆｃ融合タンパク質操作：ループ残基の置き換え
Ｓｉｇｌｅｃ－７の高分解能結晶構造をＳｉｇｌｅｃ－９モデルと比較した（Ａｌｐｈｅｎｙ，Ｍ．Ｓ．，ｅｔａｌ；ＨｉｇｈＲｅｓｏｌｕｔｉｏｎＣｒｙｓｔａｌＳｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｆＳｉｇｌｅｃ－７，ＩｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｏＬｉｇａｎｄＳｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｉｎｔｈｅＳｉｇｌｅｃＦａｍｉｌｙ；Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８（２００３）３３７２－３３７７）。ＶＤＳＱＴＤＳＤ（配列番号８）から構成される負電荷Ｓｉｇｌｅｃ－７ループと比較した場合、ＳＨＧＷＩＹＰＧ（配列番号９）から構成される等配電子のＳｉｇｌｅｃ－９ループは、より大きな疎水性表面をもたらす。したがって、系統的なインシリコでのループスワッピングタンパク質操作を適用した；Ｓｉｇｌｅｃ－７ループの各アミノ酸をＳｉｇｌｅｃ－９残基により置き換えるか、またはＳｉｇｌｅｃ－７残基と共に最高８つの残基を保持すると、２５５の変異体及び１つの野生型バリアントを含めて全部で２５６バリアントが生じた。安定性変化を２５６のバリアントすべてについて計算した。安定性の改善、正電荷パッチの減少、及び疎水性パッチの減少に基づき、変異体をさらなる特徴付けのために選択した。これらの変異体Ｓ９．２３～Ｓ９．３９のアミノ酸配列は配列番号３２～３９に示されている。

実施例５：操作されたＳｉｇｌｅｃ９－ＩｇＶバリアントのインシリコ特性の改善
安定性の変化（負の値が大きいほど安定）、疎水性タンパク質パッチの面積、正電荷タンパク質パッチの面積、負電荷タンパク質パッチの面積、等電点、及び実効電荷を含むインシリコ生物物理学的特性をｐＨ７．４、１００ｍＭ濃度のＮａＣｌ、及び２９８Ｋで計算し、親コンストラクトと比較した。結果は図３に示されている。「安定性変化」カラムにおける負の値は、安定性の上昇を示している。安定性変化の改善は大部分、電荷の再分配及び露出疎水性表面積の減少による。そのような変化は通常、タンパク質発現及び産生の増加をもたらす。

実施例６：Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは、中程度の親和性でＦｃＲ陰性細胞系に結合する
がん細胞系のパネルへのＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ結合を評価するために、Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１バリアント（配列番号１０）を使用した。Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１は、天然配列Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤを含むが、Ｃ２Ｔ２ドメインの後、そして膜貫通ドメインの前に生じているアミノ酸残基ＬＱＳＫＡＴＳＧＶＴＱＧ（配列番号１４７）の欠失を伴い、シグナル配列は産生中に切断される。用量決定量のＳ９．１－ｈＩｇＧ１を、実質的に実施例２に示されているとおりの表２に列挙されているがん細胞系と共にインキュベートした。ＦＡＣＳＫｄを、実質的にＤｒａｋｅａｎｄＫｌａｋａｍｐ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌＭｅｔｈｏｄｓ，２００７に記載されているとおりに計算した。

表２に示されているとおり、Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１は、他のがん細胞系と比較して、高い親和性でＫ５６２白血病細胞に結合した。Ｋ５６２細胞は骨髄細胞系列からの細胞に由来するので、表面上でＦｃＲを発現する一方で、他のがん細胞系は発現しない。したがって、理論に束縛されることはないが、白血病細胞上のＦｃＲ及びシアル酸の両方へのＳ９．１－ｈＩｇＧ１の結合は、ＦｃＲを発現しないがん細胞上でのシアル酸のみへのＳ９．１－ｈＩｇＧ１の結合と比較して、協合的結合作用（実施例７を参照されたい）をもたらすと考えられる。このことが、試験された他のがん細胞と比較して、Ｋ５６２細胞についてのＳ９．１－ｈＩｇＧ１の親和性の増強を部分的に説明し得る。

実施例７：Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは、高い親和性で骨髄由来抑制細胞に結合する
一次ヒト細胞上でのＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ結合を検査するために、Ｓ９．Ａ－ｍＩｇＧ１を使用して、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）へのＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの親和性を評価した。Ｓ９．Ａ－ｍＩｇＧ１（配列番号４３）は、７アミノ酸リンカーを介してマウスＩｇＧ１Ｆｃドメインに融合している全長Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ（配列番号１のアミノ酸残基１～３４８）を含み、その際、シグナル配列は産生中に切断される。ＭＤＳＣは、実質的に次のとおりに生成した：ＣＤ１４＋単球を、ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐＨｕｍａｎＭｏｎｏｃｙｔｅＥｎｒｉｃｈｍｅｎｔＣｏｃｋｔａｉｌキット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ）を使用して健康人ドナーから単離し、３７℃及び５％ＣＯ_２で７日間にわたって、１０ｎｇ／ｍｌｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ）及び１０ｎｇ／ｍｌｈＩＬ－６（Ｒ＆Ｄ）を含有するＲＰＭＩ培地中で分化させた。ＭＤＳＣを用量決定量のＳ９．Ａ－ｍＩｇＧ１と共に２時間にわたって氷上で、暗所でインキュベートし、続いて、蛍光コンジュゲートした抗マウスＩｇＧ（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）と共に３０分間にわたってインキュベートすることにより、細胞結合を評価した。結合を、フローサイトメトリーによりＢＤＦＡＣＳＣａｎｔｏで評価し、ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して分析した。ＭＤＳＣでの抗ヒト検出は法外に高いバックグラウンド結合をもたらすので、マウスＦｃを有するバリアントＳ９．Ａ－ｍＩｇＧ１を使用した。表３に示されているとおり、Ｓ９．Ａ－ｍＩｇＧ１についてＭＤＳＣで計算されたＦＡＣＳＫｄは、３人の独立したドナーで低いｎＭ範囲にあり、肺癌上皮細胞系である参照がん細胞系Ａ５４９では約１０～１００倍弱かった。これらの研究は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃが、がん細胞に対してよりも高い親和性で、ＭＤＳＣなどの骨髄細胞に結合することを示している。したがって、これらの研究は、ＦｃＲを発現しないがん細胞上でのシアル酸のみへのＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの結合と比較して、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃが骨髄細胞上ではＦｃＲ及びシアル酸の両方に結合する協合的結合機構についてのさらなる証拠を提示している。これは、ＦｃＲを発現しないＡ５４９肺癌細胞系と比較して、ＭＤＳＣについてのＳ９．Ａ－ｍＩｇＧ１の親和性の増強を説明するであろう。

図１５は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ＥＣＤ－Ｆｃ融合分子（Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ）の作用機構の例示的なモデルを示す。Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは、そのＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ部分を介して、がん細胞上のリガンド（シアル酸）に結合する（左側のパネル）。本明細書における研究に基づき、理論に束縛されることはないが、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは骨髄細胞上に発現されるＦｃＲ及びリガンド（シアル酸）の両方に結合すると考えられる（右側のパネル）。結合は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ分子のそれぞれＦｃ部分及びＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ部分を介して、協合的結合（またはｃｉｓ）相互作用により起こる。その結果、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは、ＦｃＲを発現しない細胞と比較して、高い親和性で骨髄細胞に結合するので、インビボで骨髄細胞に対する優先的標的化が生じる。

実施例８：Ｓｉｇｌｅｃ－９－ＦｃはＭＤＳＣを強力に再分極する。
Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１（配列番号４０）及びＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＬＡＬＡＰＳ（配列番号４２）を、ＭＤＳＣを再分極する能力について評価した。Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１（配列番号４０）及びＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＬＡＬＡＰＳ（配列番号４２）は、７アミノ酸リンカーを介してヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインに融合している全長Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ（配列番号１のアミノ酸残基１～３４８）を含み、その際、シグナル配列は産生中に切断される。Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１では、ヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインは天然配列ｈＩｇＧ１であり、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＬＡＬＡＰＳでは、ヒトＩｇＧ１Ｆｃドメインは「ＬＡＬＡＰＳ」置換を含む。既に記載したとおり、ＬＡＬＡＰＳは、Ｆｃ－ＦｃＲ相互作用を実質的に排除する。

ヒトＭＤＳＣを、実施例７に示されているとおり、ＣＤ１４＋単球から生成し、次いで、１０μｇ／ｍｌのＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１またはＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＬＡＬＡＰＳと共に４８時間にわたって３７℃及び５％ＣＯ_２でインキュベートした。上清を採取し、分泌されたケモカインを、ＬＥＧＥＮＤｐｌｅｘＨｕｍａｎＰｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＣｈｅｍｏｋｉｎｅＰａｎｅｌキット（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用して分析した。表４に示されているとおり、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１が、ＭＤＳＣを炎症誘発性表現型へと強力に再分極した一方で、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＬＡＬＡＰＳの有効性はかなり低かった。このことは、リガンド（シアル酸）結合に加えて、ＦｃＲ結合が、ＭＤＳＣを再分極するＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの能力を有意に増強することを示している。

表４における単位はｐｇ／ｍｌである。結果は、４人のドナーから貯留された平均±ＳＥＭとして表されている。斜体の数値は、両側ｔ検定でＳｉｇｌｅｃ－９－ＦｃバリアントとｈＩｇＧ１アイソタイプ対照とを比較した場合のｐ＜０．０５を示している。

実施例９：Ｓｉｇｌｅｃ－９はＴ細胞のＭＤＳＣ媒介抑制を解除する
Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１（配列番号１０）処置の効果をヒトＭＤＳＣ－Ｔ細胞同時培養システムで評価した。簡単に述べると、ヒトＭＤＳＣを、実施例７に示されているとおりに生成した。ＲｏｓｅｔｔｅＳｅｐ（商標）ＨｕｍａｎＣＤ８＋ＴＣｅｌｌＥｎｒｉｃｈｍｅｎｔＣｏｃｋｔａｉｌキット（ＳｔｅｍＣｅｌｌ）を使用して、自己ＣＤ８＋Ｔ細胞を血液から単離した。ＭＤＳＣを４８時間にわたって、３７℃及び５％ＣＯ_２で、１０μｇ／ｍｌのＳ９．１－ｈＩｇＧ１またはＩｇＧ対照で処理し、続いて、自己ＣＤ８＋Ｔ細胞と共に、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）ＨｕｍａｎＴ－ＡｃｔｉｖａｔｏｒＣＤ３／ＣＤ２８の存在下で、１：２：２のＭＤＳＣ：Ｔ細胞：Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）の比で同時培養した。一部の条件では、ＣＤ３／ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）のみと共にインキュベートされたＣＤ８＋Ｔ細胞を、Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１で処理した。すべての細胞条件を４日間にわたって３７℃及び５％ＣＯ_２で培養し、続いて、ＥＬＩＳＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）により培養上清中のＩＦＮγを定量化した。

図４において示されているとおり、Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１（図４では「Ｓ９－ｈＩｇＧ１」と称される）は、Ｔ細胞のＭＤＳＣ媒介抑制を強力に解除した。Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１は、ＭＤＳＣではなくＣＤ３／ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）の存在下で培養されたＣＤ８＋Ｔ細胞に対しても効果を有した。単独で培養されたＳ９．１－ｈＩｇＧ１で処理されたＭＤＳＣは、＜２０ｐｇ／ｍｌのＩＦＮγを産生した（データは図示せず）。平均±ＳＥＭが示されている。これらの研究は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃが、ＭＤＳＣの非存在下でＴ細胞活性化を増強し得る一方で、ＭＤＳＣの存在下では骨髄細胞免疫抑制シグナルを解除することにより、例えば、骨髄細胞上でのＳｉｇｌｅｃリガンドのエンゲージメントをブロックすることにより、Ｔ細胞活性化をより強力に増強し得ることを示している。

実施例１０：Ｓｉｇｌｅｃ抗体ではなく、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃが、Ｔ細胞のＭＤＳＣ媒介抑制を解除する
Ｔ細胞のＭＤＳＣ媒介抑制を解除するＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１（配列番号４０）の能力を、機能性抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体のパネルと直接的に比較した。実施例９に示されているとおり、ＭＤＳＣ及び自己ＣＤ８＋Ｔ細胞を同時培養のために調製した。ＭＤＳＣを、１５μｇ／ｍｌのＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１または標的受容体の下方制御を誘導するか、もしくは同族リガンド結合をブロックするＳｉｇｌｅｃ－３、Ｓｉｇｌｅｃ－７、もしくはＳｉｇｌｅｃ－９を指向する抗体で４８時間にわたって処理し、続いて、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ３／ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）と共に４日間にわたって同時培養した。ＩＦＮγを、ＥＬＩＳＡにより培養上清中で評価した。

図５に示されているとおり、抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体は単独で、または組み合わせで、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１と同様に効果的には、Ｔ細胞のＭＤＳＣ媒介抑制を解除することができなかった。平均±ＳＥＭが示されている。ａＳ９－１及びａＳ９－２は、２つの異なるＳｉｇｌｅｃ－９抗体である。ｐ値を、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１を三重抗体組み合わせ条件と比較することにより決定した。この研究は、図１５に示されている協合的結合機構のさらなる証拠を提供している。Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは、この機構を達成することができる一方で、抗Ｓｉｇｌｅｃ－９抗体を含む抗Ｓｉｇｌｅｃ抗体はできない。加えて、市販のヒトＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ融合タンパク質を入手し（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓＣａｔａｌｏｇ＃１１３９－ＳＬ－０５０、「ＲｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＨｕｍａｎＳｉｇｌｅｃ－９ＦｃＣｈｉｍｅｒａＰｒｏｔｅｉｎ，ＣＦ」、ｗｗｗ（ｄｏｔ）ｒｎｄｓｙｓｔｅｍｓ（ｄｏｔ）ｃｏｍ）、前述のアッセイで試験した。これは、いかなる有意な活性も示さなかった（データは図示せず）。

実施例１１：インタクトなＦｃＲ結合を伴うＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは、Ｔ細胞のＭＤＳＣ媒介抑制を強力に解除する
ヒトＭＤＳＣ－Ｔ細胞同時培養システムにおいて、Ｓ９．ｌ－ｈＩｇＧ１（配列番号１０）の効力をＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＬＡＬＡＰＳ（配列番号４２）と比較した。実施例９に示されているとおりに、同時培養のためにＭＤＳＣ及び自己ＣＤ８＋Ｔ細胞を調製した。ＭＤＳＣを、表示の量のＳ９．ｌ－ｈＩｇＧ１、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＬＡＬＡＰＳ、またはアイソタイプ対照で４８時間にわたって処理し、続いて、ＣＤ８＋Ｔ細胞及びＣＤ３／ＣＤ２８Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）と共に４日間にわたって同時培養した。ＥＬＩＳＡにより、培養上清において、ＩＦＮγを評価した。

図６に示されているとおり、インタクトなＦｃＲエンゲージメントを有するＳ９．ｌ－ｈＩｇＧ１は、Ｔ細胞のＭＤＳＣ媒介抑制の解除において、ＬＡＬＡＰＳバリアントと比較して、かなり強力である。このアッセイにおけるＳ９．ｌ－ｈＩｇＧ１でのＥＣ５０は１７．５ｎＭであると計算されたが、これは、表３に記載のＭＤＳＣでのＦＡＣＳＫｄの範囲にある。加えて、これらの結果は、表４のデータと一致し、このことは、インタクトなＦｃＲエンゲージメントを伴うＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃが、ケモカイン産生により測定されるとおりのＭＤＳＣの再分極において、ＬＡＬＡＰＳ変異を有するＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃバリアントと比較して強力であることを示している。

実施例１２：Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１及びＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦは、同等にＭＤＳＣを用量依存的に再分極する
融合タンパク質のＦｃ部分においてＮＳＬＦ変異を含むＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃのバリアントを、ヒトＭＤＳＣを再分極する能力について評価した。ＮＳＬＦ変異は、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）を誘導するヒトＩｇＧ１ＦｃとヒトＣｌｑ（補体成分１ｑ）とヒトＣＤ１６／ＦｃＲＩＩＩとの間の相互作用を破壊する。既に記載したとおり、ＭＤＳＣをＣＤ１４＋単球から生成した。７日目に、ＭＤＳＣを４８時間にわたって３７℃及び５％ＣＯ_２で、表示の量のＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１（配列番号４０）またはＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（配列番号４１）で処理した。ＬＥＧＥＮＤｐｌｅｘ（商標）ＨｕｍａｎＰｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＣｈｅｍｏｋｉｎｅＰａｎｅｌキット（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用して、上清を採取し、分泌されたケモカインを分析した。

図７は、代表的なケモカインＣＣＬ５及びＣＣＬ１７の同様の増加により実証されるとおり、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１及びＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦがＭＤＳＣを同等に再分極したことを示している。これらの研究は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ活性では補体結合反応及びＡＤＣＣが必要とされないことを示している。さらに、骨髄細胞において所望の作用を達成するために、ＮＳＬＦを含むｈＩｇＧ１を使用する可能性は、さもなければ補体及びＡＤＣＣの活性化から生じ得るであろう有害な作用の機会を減少させる

実施例１３：Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１及びＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦは、ＭＤＳＣにおいてＣＤ８６発現を増大させ、かつＣＤ１６３発現を減少させる。
既に記載されたとおり、ヒトＭＤＳＣをＣＤ１４＋単球から生成した。７日目に、ＭＤＳＣを４８時間にわたって３７℃及び５％ＣＯ_２で、表示の量のＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１（配列番号４０）またはＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ配列番号４１）で処理し、その後、抗ＣＤ８６抗体（クローンＩＴ２．２、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及び抗ＣＤ１６３抗体（クローンＧＨＩ／６１、ＢＤ）を使用して、ＣＤ８６、炎症誘発性マーカー、及びＣＤ１６３、Ｍ２マクロファージマーカーの発現を定量化した。

図８に示されているとおり、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１またはＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦのいずれかでの処理は、ＣＤ８６の用量依存的増加及びＣＤ１６３の減少をもたらし、炎症誘発性表現型へのＭＤＳＣの再分極（例えば、Ｍ２免疫抑制表現型からＭｌ活性化表現型へ）と一致した。平均±ＳＥＭが示されている。

実施例１４：Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１及びＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦは、ヒト化マウスにおいてインビボで腫瘍マクロファージを再分極する。
ヒト化マウスモデルを使用して、インビボでのＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ処置の効果を評価した。ヒトＩＬ－３及びＧＭ－ＣＳＦ導入遺伝子を発現する免疫不全ＨｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスに、ヒトＣＤ３４＋造血前駆細胞細胞（Ｔａｃｏｎｉｃ）を移植して、ヒト免疫応答を有効に再構成した。マウスに、３×１０^６のＡ３７５ヒト黒色腫細胞を皮下移植した。１６日後に、腫瘍がおよそ３００ｍｍ^３になったときに、マウスを、１０ｍｇ／ｋｇのＳ９．１－ｈＩｇＧ１（配列番号１０）、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（配列番号４１）、またはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照の血管周囲（ｉ．ｐ．）注射で３日空けて２回処置した。組織を２回目の投与から２４時間後に分析した。

図９Ａ～９Ｃに示されているとおり、Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１またはＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦのいずれかでのインビボ処置により、ヒトＭＤＳＣで観察されたインビトロ結果が確認された。ヒトＣＤ４５＋細胞に対するＭ２様ＣＤ１４＋ＣＤ１６３＋マクロファージのパーセンテージが、アイソタイプ対照と比較して、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ処置マウスの腫瘍において低下した。図９Ａを参照されたい（図９Ａに示されている実験において、Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１は、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦよりも強固なインビボ効果を生じたが；しかしながら、繰り返し実験（データは図示せず）において、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦは、Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１よりも強固なインビボ効果を生じた）。表面マーカーＣＤ２０６により同定されたＭ２マクロファージも、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃで処置されたマウスの腫瘍では減少した。図９Ｂを参照されたい。さらに、腫瘍におけるＣＤ１４＋マクロファージ上のＣＤ２０６の表面発現が低下した。図９Ｃを参照されたい。図９Ｂ及び図９Ｃに関して、Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１は、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦよりも強固なインビボ効果を生成した。図９の各パネルにおいて、平均が示されている。

実施例１５：Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは、ヒト化マウスにおいてインビボで血液細胞不足をもたらさない
Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１またはＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦで処置された腫瘍担持ＨｕＮＯＧ－ＥＸＬマウスを、標準的な全血球数を用いて血液細胞不足についても評価した。血液を組織収集の日に（２回目の１０ｍｇ／ｋｇ投与から２４時間後）、心臓穿刺により収集し、ヘパリン含有血液捕集管に入れた。

図１０は、アイソタイプ対照と比較して、Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１もＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦも、血液細胞組成において有意な変化をもたらさなかったことを示している（平均が示されている）。Ｓ９－ｈＩｇＧ１はＣＤ１６／ＦｃＲＩＩＩにエンゲージし、したがって、ＡＤＣＣを誘導し得るが、驚くべきことに、主要な血液細胞型の不足は観察されなかった。

実施例１６：Ｓｉｇｌｅｃ－３／７／９ＢＡＣ遺伝子導入マウスは、ＭＣ３８腫瘍増殖の状況において、抗ＰＤ－Ｌ１処置に対する応答が低い。
ヒトＳｉｇｌｅｃ－３、Ｓｉｇｌｅｃ－７、及びＳｉｇｌｅｃ－９を発現する細菌人工染色体（ＢＡＣ）トランスジェニックＣ５７ＢＬ／６マウスを作製し、これらのマウスにおいて、ＭＣ３８同系腫瘍増殖を評価した。Ｓ３／７／９ＢＡＣマウスに、ＭＣ３８細胞（マウス結腸腺癌細胞系）を皮下移植し、腫瘍が平均で１００ｍｍ^３に達したら、マウスを、３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－Ｌ１抗体（ＢＭＩ）で１週あたり２回、３週間にわたって腹腔内で処置した。

図１１に示されているとおり、Ｓ３／７／９ＢＡＣマウスは、ＷＴ対照と比較して、抗ＰＤ－Ｌ１処置に対する応答が低かった。平均±ＳＥＭが示されている。これらの研究は、Ｓｉｇｌｅｃタンパク質機能のブロッキングが抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体治療などの、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を阻害する処置に対する応答を改善し得ることを示している。

実施例１７：Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ単剤治療はＭＣ３８腫瘍増殖を遅延させる。
Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｍＩｇＧ２ａ（Ｓ９．Ｂ－ｍＩｇＧ２ａ；配列番号４４）を生成して、Ｆｃ－ＦｃＲ相互作用を最大化するであろうＦｃを有するマウス同系腫瘍モデルにおけるＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの効果を分析した。Ｓ３／７／９ＢＡＣマウスに、ＭＣ３８細胞を皮下移植した。腫瘍が平均で１００ｍｍ^３に達したら、マウスを、１０ｍｇ／ｋｇのＳ９．Ｂ－ｍＩｇＧ２ａで１週あたり２回、３週間にわたって腹腔内で処置した。

図１２に示されているとおり、Ｓ９．Ｂ－ｍＩｇＧ２ａは、アイソタイプ対照と比較して、移植後２２日目に腫瘍増殖阻害２０％で、ＭＣ３８腫瘍増殖を遅延させた。平均±ＳＥＭが示されている。

実施例１８：Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは、抗ＰＤ－Ｌ１との組み合わせで、ＭＣ３８腫瘍増殖を減少させる。
Ｓ３／７／９ＢＡＣマウスに、ＭＣ３８細胞を皮下移植した。腫瘍が平均で１００ｍｍ^３に達したら、マウスを、１０ｍｇ／ｋｇのＳ９．Ｂ－ｍＩｇＧ２ａ及び３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－Ｌ１抗体で１週あたり２回、３週間にわたって腹腔内で処置した。

図１３に示されているとおり、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃと抗ＰＤ－Ｌ１抗体との組み合わせは、単独での抗ＰＤ－Ｌ１抗体処置よりも高度に、ＭＣ３８腫瘍増殖を減少させた。移植後２０日目に、抗ＰＤ－Ｌ１抗体単剤治療と比較して、腫瘍増殖阻害４１％が達成された。平均±ＳＥＭが示されている。これらの研究は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃと、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体などのＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害薬との組み合わせが、抗腫瘍応答を改善し得ることを示している。

実施例１９：Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは、複数のＳｉｇｌｅｃファミリーメンバーの細胞結合をブロックし得る
既に記載したとおり、ヒトＭＤＳＣをＣＤ１４＋単球から生成した。７日目に、ＭＤＳＣを初めに、用量決定量のＳ９．１－ｈＩｇＧ１と共に２０分間にわたって、氷上で、暗所でインキュベートし、続いて、マウスＩｇＧ１融合タンパク質としての表示のＳｉｇｌｅｃファミリーメンバーと共に、さらに２時間にわたって、氷上、暗所でインキュベートした。結合を、蛍光コンジュゲートした抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎｌｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）を用いて検出し、フローサイトメトリーにより分析した。各Ｓｉｇｌｅｃファミリーメンバーの細胞結合を非ブロッキング対照（Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１を添加せず）に対して正規化した。

図１４に示されているとおり、Ｓ９．１－ｈＩｇＧ１は、ＭＤＳＣの表面へのＳｉｇｌｅｃ－３、Ｓｉｇｌｅｃ－５、Ｓｉｇｌｅｃ－７、Ｓｉｇｌｅｃ－９、及びＳｉｇｌｅｃ－１０の結合をブロックした。これらの研究は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃが、複数のＳｉｇｌｅｃタンパク質の活性の強力な阻害薬であることにおいて有利であることを示している。

実施例１３及び１４に記載のものと同様の再分極実験を、Ｓ．９Ａ－ｍＩｇＧ１及び他のＳｉｇｌｅｃタンパク質－ｍＩｇＧ１Ｆｃドメイン融合体を用いて行った。図１６Ａ及び図１６Ｂにおいて示されているとおり、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは、他のＳｉｇｌｅｃ－Ｆｃ融合体と比較して唯一、ＭＤＳＣを再分極する。ＣＤ４０及びＣＤ８６マーカーが増大し、ＣＤ１６３及びＣＤ２０６が減少し、ＭＤＳＣの、より炎症誘発性の表現型への再分極を示している。

実施例２０：安定性、結合親和性、融合、及び薬物動態特性についてのＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃバリアントの分析。
タンパク質サーマルシフトアッセイ及び４０℃での長期インキュベーションを用いて、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃバリアントを安定性について評価する。サーマルシフトアッセイでは、リアルタイムＰＣＲ機器を使用して、融解温度を決定する。実施例２に示されているとおり、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃバリアントの結合親和性をＡ３７５ヒト黒色腫細胞でのフローサイトメトリーにより測定する。実施例９に示されているとおり、生物学的機能を、ＭＤＳＣ－Ｔ細胞同時培養アッセイにおいてＭＤＳＣ媒介抑制を解除する能力として評価する。薬物動態（ＰＫ）特性をインビトロで、マトリゲルプレートを用いる細胞外マトリックス結合アッセイを用いて、またはインビボで、マウスにおいて標準的なＰＫ評価を用いて評価する。

実施例２１：Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃでの処置後のヒト化マウスにおける薬力学的マーカーの評価。
実施例１４に示されているとおり、ヒト化マウスを生成する。これらのマウスに、３×１０^６のＡ３７５ヒト黒色腫細胞を皮下移植する。２～３週間後に、腫瘍がおよそ３００ｍｍ^３になったときに、マウスを、１０ｍｇ／ｋｇのＳｉｇｌｅｃ－９－ＦｃまたはｈＩｇＧ１アイソタイプ対照の腹腔内注射で３日空けて２回処置する。組織を２回目の投与から２４時間後に分析する。ＬＥＧＥＮＤｐｌｅｘ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）サイトカイン及びケモカインパネルキットまたは標準的なサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて、血清中で薬力学的（ＰＤ）効果を評価する。別に、ヒトＣＤ４５ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を用いて、脾臓及び腫瘍中のヒトＣＤ４５＋細胞を単離し、ＮａｎｏｓｔｒｉｎｇＭｙｅｌｏｉｄＩｎｎａｔｅＩｍｍｕｎｉｔｙＰａｎｅｌを用いて、転写発現プロファイルを生成する。

実施例２２：同系腫瘍モデル研究におけるＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃと抗ＰＤ－Ｌ１または抗ＴＲＰｌとの組み合わせ効果の分析。
同系腫瘍細胞系を、Ｓ３／７／９ＢＡＣマウスにおいて静脈内注射するか、または皮下移植する。皮下設定では、腫瘍が平均で１００ｍｍ^３に達したら、マウスを、単独の、または３ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－Ｌ１抗体と組み合わせた１０ｍｇ／ｋｇのＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃで１週あたり２回、３週間にわたって腹腔内処置する。腫瘍増殖を１週あたり２～３回、キャリパーを用いて測定する。実験終点は５０日間か、または腫瘍が２０００ｍｍ^３に達したときである。腫瘍増殖の減少、生存の延長、腫瘍におけるより多量のＴ細胞流入、及び腫瘍マクロファージ上のＣＤ１６３またはＣＤ２０６の減少は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの抗がん作用の指標の一部である。

静脈内設定では、Ｂ１６Ｆ１０マウス黒色腫細胞を、尾静脈を介して注射する。移植から２４時間後に、マウスを、Ｂ１６Ｆ１０細胞上に高度に発現される腫瘍抗原を認識して、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び抗体依存的細胞食作用（ＡＤＣＰ）により腫瘍細胞死をもたらす抗ＴＲＰＩ抗体で腹腔内処置する。研究の終了時まで１週あたり２回、マウスを、単独の、または抗ＴＲＰＩ抗体と組み合わせたＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃで腹腔内処置することとする。典型的な研究期間はおよそ２週間である。研究の終了時に、マウスからの肺を採取し、腫瘍結節をカウントする。腫瘍結節の減少は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ処置での抗がん効果を表示するであろう。

実施例２３：マクロファージ細胞表面マーカーに対するＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの効果
ＣＮＳ及び末梢臓器の両方において骨髄細胞は、それらの表現型及び機能において本質的に可塑的である。これは、Ｍ１及びＭ２タイプマクロファージに分化し得て、異なる食細胞及び炎症潜在性、表現型、ならびに活性を示すマクロファージによりインビトロでモデリングすることができる。末梢臓器では、Ｍ１表現型と関連するマクロファージは、より炎症誘発性及び抗微生物であると考えられる一方で、Ｍ２様マクロファージは、より恒常性及び抗炎症性である。ＣＮＳ内では、恒常性条件下の小グリア細胞も、ＣＤ２００Ｒ、ＣＤ１６３などのＭ２マーカーを発現し、この細胞型における調節機能を示唆している。

様々なＭｌ及びＭ２マクロファージ細胞表面マーカーに対するＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの効果を、次のとおりに検査する。ヒト一次マクロファージを完全ＲＰＭＩ１６４０中で４８時間にわたって、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ（例えば、１０μｇ／ｍｌ）で処理する。次いで、細胞を採取し、Ｍ１マーカー（ＣＤ１６、ＭＨＣＣｌａｓｓＩＩ、ＣＤ８６など）、Ｍ２マーカー（ＣＤ２００Ｒ、Ｄｅｃｔｉｎ－１、ＣＤ１６３など）、及びＣＤ１４を含むパン－マクロファージマーカーなどに特異的な抗体を用いて、フローサイトメトリーに掛ける。

実施例２４：腫瘍細胞上でのシアル酸発現
様々な腫瘍型Ｆｃでのシアル酸の発現を免疫組織化学により評価した。副腎、膀胱、乳房、骨、脳、食道、胃、小腸、結腸、直腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ腫、卵巣、膵臓、前立腺、皮膚、精巣、甲状腺、及び子宮の癌のヒト試料を含有する腫瘍マルチアレイ（Ｐａｎｔｏｍｉｃｓ）を０．１μｇ／ｍｌのＳ９．Ａ－ｍＩｇＧ１で染色し、比色検出により可視化した。図１７に示されているとおり、腫瘍試料を染色の強度及び出現率（１＋は低い強度及び／または出現率、２＋は中程度の強度または出現率、及び３＋は高い強度または出現率）に基づき質的にスコアリングした。複数の腫瘍型でのスコアを表５にまとめる。

Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの結合がすべての腫瘍型にわたって観察され、腫瘍試料におけるシアル酸を発現する細胞の存在を示している。したがって、これらの腫瘍型をＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃにより標的化することができる。２＋またはそれ以上の染色強度を達成する腫瘍型は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃのより有効な標的化を示し得る。

実施例２５：腫瘍細胞へのＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃバリアントの結合
実施例６（結合）及び実施例１３（ＭＤＳＣ活性／マーカー発現）において記載の方法と同様の方法を用いて、Ｓ９．１Ｆｃのバリアントを発現させ、腫瘍細胞への結合及びＭＤＳＣでの機能活性について試験した。バリアントを、サイズ排除クロマトグラフィーを用いてモノマー含分について、かつタンパク質サーマルシフトアッセイ及び４０℃での長期インキュベーションでの安定性についても試験した。サーマルシフトアッセイでは、リアルタイムＰＣＲを用いて、融解温度を決定した。

データは図１８にまとめられている。ＣＤ８６の誘導またはＣＤ１６３の下方制御により測定されたとおり、Ｓ９．１Ｆｃのバリアントは、Ａ３７５腫瘍細胞への結合の減少及びＭＤＳＣでの機能活性の低下を示した。相関分析は、腫瘍細胞への結合がＣＤ８６の誘導と正相関することを示した（図１９Ａ）。ＣＤ１６３について、同様の傾向が観察された（データは図示せず）。Ｓ９．１Ｆｃのバリアントは一般に、タンパク質の産生収量及び安定性に対して中性または正の影響を有した。しかしながら、収量または熱安定性の増大は、腫瘍細胞への結合とは逆相関した（図１９Ｂ、図１９Ｃ）。これらのデータは、Ｓ９．１Ｆｃのある特定のバリアントが発現またはタンパク質安定性を改善するが、薬理学的効力を低下させることを実証している。

実施例２６：Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは、転移の静脈内腫瘍モデルにおいて肺結節を減少させる
静脈内腫瘍設定におけるＳｉｇｌｅｃ－９－ｍＩｇＧ２ａの効果を分析するために、Ｂ１６Ｆ１０マウス黒色腫細胞を、尾静脈を介してＳ３／７／９ＢＡＣまたはＷＴマウスに注射した。移植から２４時間後に、すべてのマウスを、Ｂ１６Ｆ１０細胞上に高度に発現される腫瘍抗原を認識して、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）及び抗体依存的細胞食作用（ＡＤＣＰ）により腫瘍細胞死をもたらす抗ＴＲＰＩ２７μｇで腹腔内処置した。加えて、移植から２４時間後に開始して、マウスを３日ごとに１回、研究の終了まで、１０ｍｇ／ｋｇのＳ９．Ｂ－ｍＩｇＧ２ａまたはｍＩｇＧ２ａアイソタイプ対照で腹腔内処置した。移植から１５日後に、マウスから肺を採取し、腫瘍結節をカウントした。

図２０に示されているとおり、Ｓ９．Ｂ－ｍＩｇＧ２ａ（Ｓ９－Ｆｃ）で処置されたＳ３／７／９ＢＡＣマウスは、アイソタイプ対照で処置されたＳ３／７／９ＢＡＣマウスと比較して、肺結節の有意な減少を有した。平均が示されている。^＊＊ｐ＜０．０１、両側ｔ検定。これらの結果は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃが転移性がんの処置において有効であり得ることを示唆している。さらに、この結果は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃが抗ＴＲＰ１のＡＤＣＣ及び／またはＡＤＣＰ活性を増強させることも示唆している。

実施例２７：Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ単剤治療はＥ０７７１腫瘍増殖を有意に阻害する
固体腫瘍増殖を縮小させるＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの能力をＥ０７７１同系乳癌モデルにおいて試験した。この腫瘍モデルは、骨髄細胞含分が相対的に豊富である。Ｓ３／７／９ＢＡＣマウスに、Ｅ０７７１細胞を皮下移植した。腫瘍が平均で１００ｍｍ^３に達したら、マウスを２０ｍｇ／ｋｇのＳ９．Ｂ－ｍＩｇＧ２ａまたはアイソタイプ対照で、１週あたり２回、３週間にわたって腹腔内処置した。

図２１に示されているとおり、Ｓ９．Ｂ－ｍＩｇＧ２ａ単剤治療は、アイソタイプ対照と比較して、腫瘍増殖を阻害する。平均±ＳＥＭが示されている。^＊ｐ＜０．０５、示されているすべての時点で両側ｔ検定。これらのデータは、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃが、骨髄細胞が存在する腫瘍の処置において有効性を有することを示している。

実施例２８：Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦは、シアル酸とＦｃγ受容体との間の協合的結合を示す
Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの結合に対するＦｃγ受容体エンゲージメントの作用を決定するために、Ｓ９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（配列番号４８、シグナル配列は産生中に切断される）及びＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＬＡＬＡＰＳ（配列番号４２、シグナル配列は産生中に切断される）をＭＤＳＣへの結合について試験した。ＭＤＳＣを以前に記載されたとおり生成し、用量決定量のＳ９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦと共に２時間にわたって、氷上で、暗所でインキュベートし、続いて、蛍光コンジュゲートした抗マウスＩｇＧ（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）と共に３０分間にわたってインキュベートした。結合をフローサイトメトリーにより、ＢＤＦＡＣＳＣａｎｔｏを用いて評価し、ＦｌｏｗＪｏ（商標）ソフトウェアを用いて分析した。図２２に示されているとおり、Ｓ９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦについてＭＤＳＣで計算されたＦＡＣＳＫｄは低いｎＭ範囲にあり（図２２Ａ）、Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＬＡＬＡＰＳでは約７５倍低かった（図２２Ｂ）。Ｓ９．Ａ－ｈＩｇＧ１ＬＡＬＡＰＳで計算されたＦＡＣＳＫｄは、Ｆｃγ受容体を発現しない参照がん細胞系、Ａ５４９でのＳ９．Ａ－ｈＩｇＧ１（配列番号４０）について以前に計算されたＦＡＣＳＫｄと、より類似した（図２２Ｃ）。これらの研究は、Ｆｃ－Ｆｃγ受容体結合がインタクトである場合に、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃが、より高い親和性でヒト一次骨髄細胞に結合することを示しており、かつ協合的結合機構のための追加の証拠を提示している。

実施例２９：Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは、シアル酸部分の幅広い結合を示す
別個のシアル酸グリカンへの複数のＳｉｇｌｅｃの結合を評価するために、シアル酸含有グリカン及びシアル酸非含有グリカンを含む３００の異なるグリカン部分から構成されるグリカンアレイを、Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ製のＳｉｇｌｅｃ－３－Ｆｃ、Ｓｉｇｌｅｃ－５－Ｆｃ、Ｓｉｇｌｅｃ－７－Ｆｃ、Ｓｉｇｌｅｃ－１０－Ｆｃ及びＳｉｇｌｅｃ－１５－Ｆｃ；Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１（配列番号４０、シグナル配列は産生中に切断される）；またはアイソタイプ対照で染色した。蛍光標識抗ヒト抗体を用いて、結合を評価した。データを正規化し、正規化された蛍光値を計算した。シアル酸含有グリカンのサブセットに対する染色は図２３に示されている。Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１は、すべてではないが多くのタイプのシアル酸部分への強固な結合を示した。Ｓｉｇｌｅｃ－３－Ｆｃ、Ｓｉｇｌｅｃ－５－Ｆｃ、Ｓｉｇｌｅｃ－７－Ｆｃ、Ｓｉｇｌｅｃ－１０－Ｆｃ及びＳｉｇｌｅｃ－１５－Ｆｃの結合は一般に、より限定された。Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１は、すべてのＳｉｇｌｅｃ１０及び１５リガンド、Ｓｉｇｌｅｃ３及び７リガンドの大部分、ならびにＳｉｇｌｅｃ５リガンドのほぼ半分に結合した。これらの結果は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１が、他のＳｉｇｌｅｃ－Ｆｃコンストラクトと比較して、複数の異なるＳｉｇｌｅｃリガンドの効率的なブロッカーであり、したがって、治療設定において有意性を有し得ることを示している。

実施例３０：Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦはヒト血液において、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１と比較して、先天免疫細胞に対して結合の増強を示す
Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの協合的結合が全血において起こり得ることをさらに実証するために、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの結合を健康人ドナーの血液において評価した。全血１００μｌを系列希釈のＡｌｅｘａ６４７－コンジュゲートしたＳ９－ｈＩｇＧ１（配列番号４８、シグナル配列は産生中に切断される）またはＳ９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（配列番号４５、シグナル配列は産生中に切断される）と共にインキュベートした。赤血球（ＲＢＣ）を溶解させ、すべての試料をＢＤＦｏｒｔｅｓｓａ（商標）で得た。平均蛍光強度（ＭＦＩ）及びＩｇＧと比べての結合％を計算した。Ｓ９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦは、Ｓ９－ｈＩｇＧ１と比較して、血液単球への結合の増強を示した（図２４Ａ）。これは、野生型ｈＩｇＧ１と比較しての、ＦｃγＲＩＩａに対するＳ９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦの親和性の所望の上昇と一致する。Ｓ９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦの最高の結合は単球で観察され、より低い程度の結合が顆粒球、ＮＫ細胞及びＢ細胞で、かつＴ細胞及び血小板へのわずかな結合が観察された（図２４Ｂ）。これらのデータは、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃが血清免疫グロブリンの存在下で免疫細胞に、特に、単球、顆粒球、及びＮＫ細胞に結合することを実証している。

実施例３１：Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦはＴ細胞増殖を回復させる
実施例１０及び図５に記載の方法と同様の方法を使用して、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（配列番号４５、シグナル配列は産生中に切断される）の作用を決定した。ＭＤＳＣをヒト単球から、ＧＭ－ＣＳＦ及びＩＬ－６と共に５～６日間にわたって培養することにより生成した。ＭＤＳＣを採取し、自己ＣＤ８^＋Ｔ細胞と共に、抗ＣＤ３及び抗ＣＤ２８抗体ならびにＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦまたは対照ＩｇＧのいずれかの存在下で同時培養した。３～５日後に、Ｔ細胞増殖を評価した。図２５Ａに示されているとおり、ＭＤＳＣの存在は、Ｔ細胞増殖を阻害したが、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦにより回復した。図２５Ｂに示されているとおり、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦの効力を用量応答で評価した。Ｔ細胞増殖の回復において一桁のｎＭのＥＣ５０（約１～２ｎＭ）が観察された。

実施例３２：Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦは、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１と比較して、効力の上昇を示す
実施例１０に記載のＭＤＳＣＴ細胞アッセイにおいて、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（配列番号４５、シグナル配列は産生中に切断される）をＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１（配列番号４８、シグナル配列は産生中に切断される）と直接比較した。図２６に示されているとおり、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦは、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１と比較して、約１０倍の効力の上昇を実証した。まとめると、これらのデータは、Ｔ細胞の骨髄抑制の解除におけるＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦでの強力な作用を実証している。

実施例３３：Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦは、再分極と一致してサイトカイン発現を誘導する
Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（配列番号４５、シグナル配列は産生中に切断される）による種々のサイトカイン、ケモカイン、及び共刺激分子の誘導をＭＤＳＣで、ＲＮＡｓｅｑにより分析した。図２７に示されているとおり、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦは、ＭＤＳＣと共にインキュベートした場合に、強固な遺伝子発現プロファイルを誘導し、このプロファイルは、再分極と一致した。同様のプロファイルがマクロファージ及び樹状細胞でも観察された（データは図示せず）。

実施例３４：Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦは、他のチェックポイント経路よりも良好に抑制骨髄細胞を再分極させる
Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（配列番号４５、シグナル配列は産生中に切断される）を、抑制骨髄細胞を再分極する能力について、他の免疫チェックポイント経路を標的化する抗体と直接比較した。図２８に示されているとおり、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦは、それらの抗体と比較して、ＭＤＳＣの再分極において高度に有効である。抗Ｓｉｇｌｅｃ－１５、抗ＬＩＬＲＢ２、及び抗ＰＤ－Ｌ１は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦほどには、ＭＤＳＣの表面においてＣＤ８６上方制御またはＣＤ２０６下方制御を誘導することはできない。これらの結果は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦがチェックポイント阻害薬よりも潜在的に有効な、高度に有効な治療である可能性を実証している。

実施例３５：Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃは、抗ＰＤ－Ｌ１と組み合わさって、Ｅ０７７１腫瘍増殖を減少させる
実施例２７に示されているとおりの方法を使用して、抗ＰＤ－Ｌ１と組み合わせたＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの効果を決定した。Ｓ３／７／９ＢＡＣマウスに、Ｅ０７７１細胞を皮下移植した。腫瘍が平均で１００ｍｍ^３に達したら、マウスを、２０ｍｇ／ｋｇのＳ９．Ｂ－ｍＩｇＧ２ａ及び１０ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤ－Ｌ１抗体で１週あたり２回、３週間にわたって腹腔内処置した。図２９に示されているとおり、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃと抗ＰＤ－Ｌ１抗体との組み合わせは、単独でのＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃまたは抗ＰＤ－Ｌ１抗体処置のいずれかよりも高度に、Ｅ０７７１腫瘍増殖を減少させた。移植後２５日目に、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ単剤治療と比較して、腫瘍増殖阻害５８％が達成された。平均±ＳＥＭが示されている。これらの研究は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃと、抗ＰＤ－１または抗ＰＤ－Ｌ１抗体などのＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害薬との組み合わせが抗腫瘍応答を改善し得ることを示している。

実施例３６：Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの潜在的な薬力学的マーカー
作用機構を明瞭にし、かつ応答の潜在的な薬力学的（ＰＤ）マーカーを同定するために、免疫モニタリング研究を行った。マウスに、Ｅ０７７１腫瘍細胞を接種し、１００ｍｍ^３の平均体積で２群に無作為化し、Ｓ９．Ｂ－ｍＩｇＧ２ａ（配列番号４４、シグナル配列は産生中に切断される）またはアイソタイプ対照を３～４日ごとに３回投与した。最終投与から２４時間後に、マウスを安楽死させ、脾臓及び腫瘍をフローサイトメトリー分析のために採取した。ＣＤ１１ｂは、接着、遊走、食作用、及び細胞活性化の調節を含む骨髄細胞機能の多面レギュレーターである。Ｓ９．Ｂ－ｍＩｇＧ２は、脾臓骨髄細胞上でのＣＤ１１ｂ及びＣＤ８６発現の有意な増加を誘導した（図３０）。脾臓骨髄細胞におけるこれらの変化は、ヒトＭＤＳＣにおいて観察されたものと一致し、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃの潜在的な薬力学的マーカーを示す。

実施例３７：ＩｇＶドメイン内外のさらなるＳｉｇｌｅｃ－９バリアント
安定性及び／またはＰＫなどの特性を改善し得るであろうさらなるＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃバリアントを作製した。作製された特定のバリアントが図３１に示されており、企図されたバリアントのすべてが、下の配列表に含まれる。Ｓ９．３２～Ｓ９．３８と名付けられたバリアントでは、ＩｇＶドメイン内の不所望の疎水性パッチ内の単一のトリプトファン（Ｗ３８）が、疎水性の低い残基で置換された。Ｓ９．３９及びＳ９．４１～Ｓ９．４５と名付けられたバリアントは、不所望の疎水性パッチの作用をさらに減少させ得るように、ＩｇＶドメインにおいて追加の置換を含む。Ｓ９．４７～Ｓ９．５３と名付けられたバリアントは、安定性を付与し得るように、ＩｇＶドメインの外側に置換を含む。図３１に示されているとおり、特定のバリアントを特定の特性について試験した。加えて、ＭＤＳＣにおける再分極のマーカーに対する作用を検査するために、特定のバリアントを実施例１３に記載のものと同様のアッセイで試験した。図３２に示されているとおり、バリアントＳ９．３６、Ｓ９．３７及びＳ９．３８は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃ－ｈＩｇＧ１に匹敵する挙動を示し、ＣＤ１６３の減少（図３２Ａ）及びＣＤ２０６の減少（図３２Ｂ）及びＣＤ８６の増加（図３２Ｃ）を示した。

実施例３８：ＦｃＲｎ結合及び半減期を改善するためのＦｃバリアント
その半減期を改善することができるように、さらなる置換及び変更をＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（配列番号４５）のＦｃ領域において行った。Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦのＦｃ領域は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦがインビボで細胞に取り込まれるときに、エンドソームの酸性環境において新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）により結合されることが予測される。この結合の結果として、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦは、細胞表面に逆に向けられて、生理的ｐＨ条件下で、酸性エンドソーム内で分解される代わりに、細胞外環境に放出されるであろう。内在化の後に、逆に細胞外環境へとＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦを「リサイクルする」ことにより、このプロセスは、循環中のＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦの量を増加させ、それにより、半減期の改善をもたらし得る。次いで、これは、より少量の投薬量またはより低い頻度の投薬を可能にし得る。

したがって、インビトロでのＦｃＲｎへのその結合を改善して、インビボでリサイクルされるその能力を改善し得るように、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（配列番号４５）のＦｃ領域において置換及び変更を行った。それらの置換及び変更には、それぞれそれらの全体が参照により本明細書に援用されるＤａｌｌ’ Ａｃｑｕａｅｔａｌ．（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：５１７１－５１８０；Ｚａｌｅｖｓｋｙｅｔａｌ．（２０１０）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２８：１５７－１５９；及び米国特許第９，６８８，７５６号に記載されているとおり、「ＹＴＥ」及び「ＬＳ」置換、ならびにシステイン含有ループ挿入が含まれる。生じた改変コンストラクトの配列は、配列番号２２８～２３０に示されている（置換及び変更は、下の配列表において二重下線を引かれた残基により示されている）。改変されたコンストラクトを、例えば、表面プラスモン共鳴により、インビトロでのＦｃＲｎへの結合の改善について試験し、次いで、インビボでのＰＫ及びＰＤの改善について検査する。Ｆｃにおいて「ＹＴＥ」もしくは「ＬＳ」置換またはシステイン含有ループ挿入は含むが、ＮＳＬＦ置換は含まない改変されたコンストラクトも企図されている。それらのコンストラクトは、配列番号２３１～２３３に示されている。

実施例３９：Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦは、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１と比較して、血清中ＰＫを改善している
Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（配列番号４５、シグナル配列は産生中に切断される）及びＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１（配列番号４８、シグナル配列は産生中に切断される）の薬物動態特性を比較した。カニクイザルを、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１またはＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦの８０ｍｇ／ｋｇの静脈内注射の単回投与で処置した。カニクイザルの血清中におけるＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１及びＳｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦでの平均濃度－時間プロファイルを決定した。図３３は、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１ＮＳＬＦ（四角形）が、Ｓｉｇｌｅｃ－９－ｈＩｇＧ１（円形）を上回ってＰＫを改善していることを示している。

実施例４０：Ｓｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃバリアントの薬物動態
実施例３７に示されているとおり、特定のＳｉｇｌｅｃ－９－Ｆｃバリアントの薬物動態特性を決定した。Ｓ９．１、Ｓ９．３６、Ｓ９．３７、Ｓ９．３８、及びＳ９．４５を、静脈内大量注射により単回投与として、Ｓｉｇｌｅｃ３／７／９ＢＡＣ遺伝子導入マウスに与えた。図３４に示されているとおり、Ｓ９．３７は、Ｃ_ｍａｘ及びＡＵＣ_{０－ｉｎｆ}の上昇を示した。平均Ｔ_１／２は他のバリアントと同様であるが、ＡＵＣの上昇は特に、他のバリアントと比較して、Ｓ９．３７の曝露（生物学的利用能）の改善を示し得る。

特定の配列の表
下の表では、特定の配列番号における太字で下線が引かれた残基は、バリアントＳｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ配列が天然Ｓｉｇｌｅｃ－９ＥＣＤ配列とは異なる残基を表すことを示している。配列番号２２８～２３３における二重下線が引かれた残基は、バリアントＦｃドメイン残基を示す。場合によっては、太字で下線が引かれた変異残基を、下の配列番号内のその位置と比較した場合に見い出され得るとおり、「説明」欄の特定のＳｉｇｌｅｃ－９バリアントについての名前（例えば、Ｓ３５Ｘ）で使用されている残基番号が、「配列」欄の配列番号における残基のナンバリングと一致しないことがある（例えば、シグナル配列の有無により）。

Claims

そのＣ末端でＦｃドメインに結合している配列番号７８のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチドであって、前記ＦｃドメインがヒトＩｇＧ１アイソタイプを有する、単離されたポリペプチド。
前記Ｆｃドメインが、配列番号１４２のＩｇＧ１ポリペプチドと比べて、
ａ）ＦｃγＲＩＩＩへの結合の減少；
ｂ）抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の低下及び／もしくは補体結合活性の低下；
ｃ）ＦｃγＲＩＩａへの結合の増大；または
ｄ）ａ）、ｂ）、及び／もしくはｃ）の任意の組み合わせ
を有する、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
前記Ｆｃドメインが、配列番号１４２～１４４及び２３４～２３９のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の単離されたポリペプチド。
前記Ｆｃドメインが配列番号１４２のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
配列番号１０のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
前記Ｆｃドメインが配列番号１４３のアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の単離されたポリペプチド。
前記ポリペプチドが配列番号２２７のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
アミノ酸残基１～１９を欠く配列番号４５～４８及び２２８～２３３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
配列番号４５～４８及び２２８～２３３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の単離されたポリペプチド。
アミノ酸残基１～１９を欠く配列番号４５のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の単離されたポリペプチド。
配列番号４５のアミノ酸配列を含む、請求項９に記載の単離されたポリペプチド。
アミノ酸残基１～１９を欠く配列番号４８のアミノ酸配列を含む、請求項８に記載の単離されたポリペプチド。
そのＣ末端で配列番号１４３に結合している配列番号７８のアミノ酸配列を含む、単離されたポリペプチド。
前記ポリペプチドが細胞の表面上のシアル酸に結合する、請求項１～１３のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチド。
前記細胞が腫瘍細胞である、請求項１４に記載の単離されたポリペプチド。
前記細胞がＦｃＲを発現する、請求項１４に記載の単離されたポリペプチド。
前記細胞が骨髄細胞である、請求項１４に記載の単離されたポリペプチド。
前記骨髄細胞が、単球、マクロファージ、樹状細胞、小グリア細胞、及び骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）から選択される、請求項１７に記載の単離されたポリペプチド。
ａ）Ｓｉｇｌｅｃ－３、Ｓｉｇｌｅｃ－５、Ｓｉｇｌｅｃ－７、Ｓｉｇｌｅｃ－９、Ｓｉｇｌｅｃ－１０、及びＳｉｇｌｅｃ－１５から選択されるいずれか１つもしくは複数のＳｉｇｌｅｃファミリーメンバーの細胞結合をブロックする；
ｂ）Ｔ細胞のＭＤＳＣ媒介抑制を解除する；
ｃ）ＭＤＳＣを炎症誘発性表現型に再分極する；
ｄ）ＭＤＳＣ上でのＣＤ８６の発現を増大させる、ＭＤＳＣ上でのＣＤ１１ｂの発現を増大させる、かつ／もしくはＭＤＳＣ上でのＣＤ１６３の発現を減少させる；
ｅ）腫瘍マクロファージをＭ２表現型から再分極する；
ｆ）ＣＤ１６３＋及び／もしくはＣＤ２０６＋マクロファージを減少させる；
ｇ）ＭＤＳＣにおいてＣＣＬ３、ＣＣＬ４、ＣＣＬ５、ＣＣＬＩ７、ＣＸＣＬ１、ＣＸＣＬ９、及びＩＬ－８から選択される１つもしくは複数のケモカインの発現を誘導する；
ｈ）腫瘍微小環境への骨髄細胞の動員を減少させる；
ｉ）１００ｎＭ未満、５０ｎＭ未満、２５ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、２ｎＭ未満、１～５０ｎＭ、１～２５ｎＭ、１～２０ｎＭ、１～１０ｎＭ、１～５ｎＭもしくは１～２ｎＭの親和性で、ＭＤＳＣに結合する；または
ｊ）（ａ）から（ｉ）のいずれか１つもしくは複数を行う、請求項１～１８のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチド。
ｂ）において、Ｔ細胞のＭＤＳＣ媒介抑制を解除することが、ＩＦＮγ発現の増大もしくはＴ細胞増殖の増大を測定することにより決定される、請求項１９に記載の単離されたポリペプチド。
前記ＭＤＳＣがヒトＭＤＳＣであり、かつ／または前記マクロファージがヒトマクロファージである、請求項１９に記載の単離されたポリペプチド。
請求項１～２１のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチドをコードする核酸配列を含む単離された核酸。
配列番号４５～４８及び２２８～２３３のいずれか１つから選択されるアミノ酸配列をコードする、請求項２２に記載の単離された核酸。
配列番号７８または２２７のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする、請求項２２に記載の単離された核酸。
請求項２２～２４のいずれか１項に記載の単離された核酸を含む発現ベクター。
請求項２２または２３に記載の単離された核酸または請求項２５に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
請求項１～２１のいずれか１項に記載の単離されたポリペプチドを発現する宿主細胞。
請求項２６または請求項２７に記載の宿主細胞を培養することを含み、ポリペプチドを単離することを含んでもよい、ポリペプチドを生成する方法。
請求項１～２１のいずれか１項に記載のポリペプチドと、薬学的に許容される担体とを含む薬学的組成物。
請求項１～２１のいずれか１項に記載のポリペプチドまたは請求項２９に記載の薬学的組成物を含む、がんを処置するための医薬。
前記がんが、骨髄細胞を含む腫瘍微小環境と関連する固形腫瘍である、請求項３０に記載の医薬。
前記がんが、腎細胞癌、肉腫、膵臓がん、神経膠芽腫、卵巣がん、結腸直腸がん、肺がん、黒色腫、膀胱がん、頭頚部がん、乳がん及び子宮がんから選択される、請求項３０または３１に記載の医薬。
前記がんが転移性である、請求項３０～３２のいずれか１項に記載の医薬。
ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１のアンタゴニストがさらに投与され、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１の前記アンタゴニストがそれぞれ、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１に結合する抗体であってもよい、請求項３０～３３のいずれか１項に記載の医薬。
化学療法薬がさらに投与される、請求項３０～３４のいずれか１項に記載の医薬。
請求項１～２１のいずれか１項に記載のポリペプチドまたは請求項２９に記載の薬学的組成物を含む、対象における骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）を炎症誘発性表現型に再分極するための医薬。
請求項１～２１のいずれか１項に記載のポリペプチドまたは請求項２９に記載の薬学的組成物を含む、がんを有する対象において腫瘍マクロファージをＭ２表現型から再分極するための医薬。
請求項１～２１のいずれか１項に記載のポリペプチドまたは請求項２９に記載の薬学的組成物を含む、対象において骨髄細胞を活性化するための医薬。
前記骨髄細胞が小グリア細胞である、請求項３８に記載の医薬。
前記対象ががんを有する、請求項３６、３８または３９のいずれか一項に記載の医薬。
前記がんが、骨髄細胞を含む腫瘍微小環境と関連する固形腫瘍である、請求項３７または４０に記載の医薬。
前記がんが、腎細胞癌、肉腫、膵臓がん、神経膠芽腫、卵巣がん、結腸直腸がん、肺がん、黒色腫、膀胱がん、頭頚部がん、乳がん及び子宮がんから選択される、請求項４０または４１に記載の医薬。
前記がんが転移性である、請求項４０～４２のいずれか１項に記載の医薬。