JP7681682B2 - 固相合成担体、その製造方法及び使用 - Google Patents

Description

本発明は固相合成担体、その製造方法及び使用に関し、該担体はオリゴヌクレオチドの固相合成に適用でき、機能性高分子材料の製造分野に属する。

精密医療の有効な手段の１つとして、ますます多くのオリゴヌクレオチド薬物が承認・発売されている。オリゴヌクレオチド薬物は化学的方法で合成されることが多く、最も一般的なのは固相ホスホロアミダイトトリエステル法で合成され、具体的な方法は固相合成担体を反応カラムに充填し、反応物を溶解した溶液を一定の圧力で反応カラムに急速に流して反応を完了させることである。

オリゴヌクレオチド固相合成技術の発展の初期では、一般的に使用される固相合成担体は、細孔径制御可能なガラスマイクロスフェア（ＣＰＧ）、変性シリコーンなどの無機粒子であるが、その欠点も明らかであり、すなわち、低置換度（Ｌｏａｄｉｎｇ）（一般的に１００μｍｍｏｌ／ｇ未満）のため、オリゴヌクレオチドの１ロットの生産量が限られ、装置の利用率が低く、生産コストが高い。担体の置換度を高めるために、Ｎｉｔｔｏ Ｄｅｎｋｏ社とＩｏｎｉｓ社が共同で出願した発明特許ＷＯ２００６０２９０２３は、スチレン、４－アセトキシスチレン、ジビニルベンゼンを重合単量体とし、イソオクタン、２－エチルヘキサノールを用いて孔形成剤として有機高分子重合体を製造して固相合成担体とし、この担体の置換度は１００～３５０μｍｍｏｌ／ｇに達することができる。オリゴヌクレオチドの収率と純度をさらに高めるために、Ｎｉｔｔｏ Ｄｅｎｋｏ社が出願した発明特許ＵＳ８６５３１５２は、スチレン、（メタ）アクリロニトリル、４－アセトキシスチレン、ジビニルベンゼンを重合単量体とし、イソオクタン、２－エチルヘキサノールを用いて孔形成剤として固相合成担体を製造する。（メタ）アクリロニトリルを添加することにより、異なる溶媒中での固相合成担体の膨潤変動を抑制し、合成効率を向上させる。

上記の２種類の高分子重合体担体は、いずれも架橋剤としてジビニルベンゼンを用いている。使用中、ジビニルベンゼンには、純度が高くないことと、性質の異なる３つの異性体があることの２つの主な問題がある。このため、メーカー、品質の異なるジビニルベンゼンによって製造される樹脂の性能に大きな差が生じている。現在、一般的な工業用ジビニルベンゼンの純度は４０～６０％であり、ジビニルベンゼンのほかにエチルスチレンも一定量含まれており、少量のジエチルベンゼンも含まれているものもある。

他の単量体との共重合反応では、ジビニルベンゼンの３つの異性体が異なる反応活性を示し、これは共重合体の構造や特性に大きな影響を与える。He Binglinら（Reactive Polymer，12(1990)，269-275）は、パラスチレン－ジビニルベンゼン共重合の動力学の研究において、パラジビニルベンゼンとメタジエチレンは、共重合の過程でスチレンよりも基本的に転化速度が速いことを発見した。これにより、重合反応初期に形成される共重合体は架橋度が高く、重合後期に形成される共重合体は架橋度が低く、さらに樹脂内部の化学構造が不均一になる。スチレン－ジビニルベンゼンを骨格とするマクロポーラス吸着樹脂は、このような化学構造の不均一のため、使用中に様々な程度の破砕が発生する、吸着平衡に達するまでの時間が長い、吸着後の脱着が尾引きしやすい、再生が不完全であるなどの問題がある。

１,２－ビス（４－ビニルフェニル）エタンのように２つのビニル基が同一ベンゼン環にないジエン架橋剤はスチレンと反応活性が近く、Sundellら（Journal of Polymer Science Part A:Polymer Chemistry，31(1993)，2305-2311）はこのような単量体を架橋剤として強酸性樹脂を製造し、実験の結果、これらの樹脂はスチレン－ジビニルベンゼン共重合体に基づく強酸性樹脂よりも高い機械的強度を有することが明らかになっている。『１,２－ビス（ｐ－ビニルフェニル）エタン重合体の合成とその吸着性能に関する研究』では、それぞれ２－ビス（ｐ－ビニルフェニル）エタンとジビニルベンゼンを架橋剤として超高架橋ポリスチレン吸着樹脂を製造し、実験の結果、１,２－ビス（ｐ－ビニルフェニル）エタンを架橋剤とした吸着樹脂は使用中に尾引き現象がなく、再生しやすいことが明らかになっている。

オリゴヌクレオチド薬物は治療効率が高く、薬物毒性が低く、特異性が強く、適用領域が広いなどの利点があるため、抗ウイルス、高コレステロール、遺伝子発現の編集、視覚失明と肝静脈閉塞などの疾患の治療において有効である。オリゴヌクレオチド薬物の需要量は年々増加している。また、従来のオリゴヌクレオチド固相合成担体には内部構造が不均一で、物質移動抵抗が大きいなどの問題があり、これにより、オリゴヌクレオチドの合成効率が低くなり、生産コストが高くなる。したがって、オリゴヌクレオチド薬物市場の需要を満たすために、オリゴヌクレオチド薬物を大規模、低コスト、高効率で合成できる固相合成担体を開発する必要がある。

オリゴヌクレオチドを大規模かつ低コストで生産し、従来のオリゴヌクレオチド固相合成担体に存在する、内部構造が不均一で、物質移動抵抗が大きいなどの欠点を解決するために、本発明は固相合成担体、その製造方法及び使用を提供する。

本発明では、２つのビニルが同一ベンゼン環にないジエン化合物を用いて架橋単量体とすることには主として以下の３つの作用がある。第一には、このような単量体はスチレンと反応性比が近いので、樹脂内部の化学構造の均一性を向上させ、均一に分布している活性部位を形成するのに有利である。第二には、樹脂内部の化学構造の均一性が向上し、樹脂の内部に均一なチャネルを形成するのに有利であり、物質移動抵抗を下げる。第三には、ジビニルベンゼンと比べて、このような架橋剤に可撓性分子鎖が存在し、異なる有機溶媒での樹脂の膨潤性を改善することができる。

本発明は、重合体骨格及び官能基の構造が下記式で示される固相合成担体を開示する。

（ここで、Ｒ_１＝－（ＣＨ_２）_ｎ－（ｎは０～３の整数である。）、又は－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｍ－Ｏ－（ｍは１～４の整数である。）であり、Ｒ_２＝－ＯＨ又は－ＮＨ_２である。）

いくつかの実施例では、前記固相合成担体は、骨格が式（Ｉ）、式（II）、式（III）、式（ＩＶ）で示される繰り返し構造単位を有する共重合体である。

（ここで、Ｒ_３は－Ｈ、－ＣＮ、又は－ＣＨ_２－ＣＮであり、Ｒ_４は－Ｈ又は－ＣＨ_３であり、Ｒ_５は－ＣＮ、－ＣＨ_２－ＣＮ、－ＣＯＯＣＨ_３又は－ＣＯＮＨ_２である。）

（ここで、Ｒ_６は－（ＣＨ_２）ｘ－（ｘは０～３の整数である。）又は－Ｏ－（ＣＨ_２）_ｙ－Ｏ－（ｙは１～４の整数である。）である。）

（Ｒ_７は－Ｈ、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_ｚ－、ＣＨ_３（ＣＨ_２）_ｚＯ－（ｚは０～４の整数である。）、（ＣＨ_３）_２ＣＨ－、（ＣＨ_３）_２ＣＨ（ＣＨ_２）－、（ＣＨ_３）_２ＣＨ（ＣＨ_２）_２－、（ＣＨ_３）_３Ｃ－、ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）－、ＣＨ_３ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_３）_２－、又はＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）－である。）

（Ｒ_８は－ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＯＯＣ－Ｃ_６Ｈ_４－ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＯＣＣＨ_２－Ｃ_６Ｈ_４－ＯＨ、－（ＣＨ_２）_４ＯＯＣ－Ｃ_６Ｈ_４－ＯＨ、－（ＣＨ_２）_４ＯＯＣＣＨ_２－Ｃ_６Ｈ_４－ＯＨ、－ＣＯＯ－Ｃ_６Ｈ_４－ＯＨ又は－ＣＨ_２ＣＯＯ－Ｃ_６Ｈ_４－ＯＨである。

いくつかの実施例では、前記担体のヒドロキシ又はアミノの含有量の範囲が１００～１０００μｍｏｌ／ｇ、好ましくは４００～７００μｍｏｌ／ｇである。

いくつかの実施例では、前記担体の粒径の範囲が３５～２００μｍ、好ましくは５０～１００μｍである。

いくつかの実施例では、前記担体の平均細孔径が１０～２００ｎｍ、好ましくは４０～１００ｎｍである。

本発明は、
製造過程は、水、分散剤、無機塩からなる水相と、架橋単量体、モノビニル化合物、機能性単量体、変性単量体、孔形成剤及び開始剤からなる油相とをそれぞれ調製するステップであって、架橋単量体、モノビニル化合物、機能性単量体及び変性単量体は重合反応に関与し、単量体と総称するステップと、水相に油相を加えて、撹拌して昇温し、反応を起こし、反応終了後、孔形成剤を除去し、多孔質重合体樹脂を得て、多孔質重合体樹脂をさらに反応させ、官能基としてヒドロキシ又はアミノを含有する固相合成担体を得るステップと、を含む上記固相合成担体の製造方法をさらに開示する。

いくつかの実施例では、より具体的には、前記架橋単量体は２つのビニルが同一ベンゼン環にないジエン架橋剤であり、４,４'－ジビニルビフェニル、ビス（４－ビニルフェニル）メタン、１,２－ビス（４－ビニルフェニル）エタン、１,３－ビス（４－ビニルフェニル）プロパン、ジ（４’－ビニルフェノキシ）メタン、１,２－ビス（４’－ビニルフェノキシ）エタン、１,３－ビス（４’－ビニルフェノキシ）プロパン、１,４－ビス（４’－ビニルフェノキシ）ブタンを含む。好ましい架橋単量体は１,２－ビス（４－ビニルフェニル）エタンのうちの１種又は複数種である。

いくつかの実施例では、前記モノビニル化合物は芳香族モノビニル化合物であり、スチレン及びそのベンゼン環置換誘導体、置換基が炭素数１～５のアルキルのスチレン、例えばメチルスチレン、エチルスチレン、ノルマルプロピルスチレン、イソプロピルスチレン、ノルマルブチルスチレン、イソブチルスチレン、ｓ－ブチルスチレン、ｔ－ブチルスチレン、ｎ－ペンチルスチレン、イソペンチルスチレン、ｓ－ペンチルスチレン又はｔ－ペンチルスチレン；又は置換基が炭素数１～５のアルコキシのスチレン、例えばメトキシスチレン、エトキシスチレン、プロポキシスチレン、ブトキシスチレン又はペンチルオキシスチレンを含む。好ましいモノビニル化合物はスチレンである。

いくつかの実施例では、前記機能性単量体とは、ラジカル重合可能な二重結合を有するとともに、ヒドロキシ、アミノ、ハロゲン化基又は反応によりヒドロキシ、アミノに変換可能な他の基を有するものである。オリゴヌクレオチドの合成過程では、反応性ヒドロキシ又はアミノはオリゴヌクレオチドを連結する活性部位となり、アミノ、アミノアルキル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル等であってもよい。好ましくは、第１級アミノ、アミノメチル、ヒドロキシ、ヒドロキシメチル等であってもよい。ヒドロキシスチレン及びその誘導体、例えば４－ヒドロキシスチレン等、ヒドロキシアルキルスチレン及びその誘導体、例えば４－ヒドロキシメチルスチレン等；アシルオキシスチレン及びその誘導体、例えば４－アセトキシスチレン、ベンゾイルオキシスチレン等；アミノスチレン及びその誘導体、例えば４－アミノスチレン等、アミノアルキルスチレン及びその誘導体、例えば４－アミノメチルスチレン等；ハロアルキルスチレン単量体、例えば４－（４－ブロモブチル）スチレン、ｐ－クロロメチルスチレン等；４－ビニルフェニルエステル単量体、例えば４－ビニル安息香酸メチル、４－ビニル安息香酸エチル等を含んでもよいが、これらに限定されるものではない。

いくつかの実施例では、前記機能性単量体では、ヒドロキシ保護基又はアミノ保護基を含有するものがあり、これらの単量体は保護基を直接切断してアミノ又はヒドロキシを形成することができ、例えば、アシルオキシスチレンはアルカリ又は酸加水分解によってヒドロキシに転化して、オリゴヌクレオチドを連結する活性部位となってもよく、官能化反応により活性部位として機能し得るアミノ又はヒドロキシに転化する必要があるものもあり、例えば、ハロアルキルスチレンは加水分解によりヒドロキシに転化し、又はＧａｂｒｉｅｌ反応により第１級アミノに転化して、オリゴヌクレオチドを連結する活性部位となる必要があり、アミノ又はヒドロキシを備える連結アームを活性部位として連結する必要があるものもあり、例えば、ハロアルキルスチレンは４－ヒドロキシ安息香酸、４－ヒドロキシフェニル酢酸と反応してヒドロキシを生成し、オリゴヌクレオチドを連結する活性部位とすることができ、また、上記の複数の反応の組み合わせにより活性部位となるアミノ又はヒドロキシを得る必要があるものもあり、例えば、４－ビニルフェニルエステル単量体類は加水分解してヒドロキシを露出してから、ハイドロキノン又はｐ－フェニレンジアミンと反応して活性部位となるアミノ又はヒドロキシを得る必要がある。

いくつかの実施例では、前記変性単量体とは、単量体においてラジカル重合に関与可能な二重結合を有するとともに、シアノ、エステル基、アミド基などの官能基を含有するものであり、アクリロニトリル、メタクリロニトリル、フマロニトリル、１,４－ジシアノ－２－ブテン、メタクリル酸メチル、アクリルアミドを含むが、これらに限定されるものではない。

いくつかの実施例では、前記開始剤は、有機過酸化物又はアゾ化合物であり、過酸化ベンゾイル、過酸化ラウロイル、ｔ－ブチルパーオキシオクトエート、２,２'－アゾビス（２－メチルプロピオニトリル）、２,２'－アゾビス（２－メチルブチロニトリル）、２,２'－アゾビス(２,４－ジメチルバレロニトリル)等を含むが、これらに限定されるものではない。開始剤の使用量は単量体全重量の０．５～５％である。

いくつかの実施例では、前記孔形成剤は重合反応に関与せず、水に不溶又は微溶である有機溶媒又は界面活性剤である。前記孔形成剤は、芳香族炭化水素、例えばベンゼン、トルエン、エチルベンゼン；脂肪族炭化水素、例えば炭素数６～１２の直鎖、分岐鎖又は環状アルカン、例えばヘキサン、ヘプタン、オクタン、ドデカン、イソオクタン、イソドデカン、シクロヘキサン等；ハロ炭化水素、例えばクロロホルム、クロロベンゼン；炭素数４以上のエステル、例えば酢酸エチル、酢酸ブチル、フタル酸ジブチル等；アルコール、例えば炭素数４～１２の直鎖、分岐鎖又は環状アルカンアルコール、例えばヘキサノール、シクロヘキサノール、オクタノール、イソオクタノール、デカノール、ドデカノール；油溶性界面活性剤、例えばトリオレイン酸ソルビタン、ポリオキシエチレンソルビトール蜜ロウ誘導体、トリステアリン酸ソルビタン、ヘキサステアリン酸ポリオキシエチレンソルビトール、エチレングリコール脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、プロピレングリコールモノステアリン酸エステル、ソルビタンセスキオレイン酸エステル、ポリオキシエチレンソルビトールオレイン酸エステル、モノステアリン酸グリセリル、ヒドロキシラノリン、ソルビタンモノオレイン酸エステル、プロピレングリコールモノラウリン酸エステルのうちの１種又は複数種の組み合わせである。

いくつかの実施例では、前記水相は水、分散剤及び無機塩を含み、前記分散剤は水溶性高分子であり、ポリビニルアルコール、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリビニルピロリドンのうちの１種又は複数種を含むが、これらに限定されるものではない。分散剤の使用量は水相重量の０．１～５％である。前記無機塩は、水相の密度を調整し、また油相中の各成分の水相での溶解度を低減させて、油滴をより安定的に水相中に分散させる役割を果たす。前記無機塩は、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸カルシウム等のうちの１種又は複数種を含むが、これらに限定されるものではない。無機塩の使用量は水相の使用量の２０％以下である。

いくつかの実施例では、樹脂同士の粘着を低減させ、重合熱の伝導を促進し、また、装置利用率を高め、生産効率を向上させるために、油相と水相との重量比は１：３～１：２０とする。

本発明のいくつかの実施形態では、各成分は以下のような量で存在する。初期で油相中に存在するモノビニル化合物は単量体全量の４５～９５重量％を占め、初期で油相中に存在する架橋単量体は単量体全量の２．９～２０重量％を占め、初期で油相中に存在する機能性単量体は単量体全量の２～２０重量％を占め、初期で油相中に存在する変性単量体は単量体全量の０．１～１５重量％を占め、初期で油相中に存在する孔形成剤の重量は単量体全重量の１５～１３０％である。

本発明のいくつかのより好ましい実施形態では、各成分は以下のような量で存在する。初期で油相中に存在するモノビニル化合物は単量体全量の６２～８６重量％を占め、初期で油相中に存在する架橋単量体は単量体全量の７～１３重量％を占め、初期で油相中に存在する機能性単量体は単量体全量の５～１５重量％を占め、初期で油相中に存在する変性単量体は単量体全量の２～１０重量％を占め、初期で油相中に存在する孔形成剤の重量は単量体全重量の３０～１１０％である。

本発明のいくつかの実施形態では、重合温度は５０～９０℃、好ましくは７０～８５℃である。

本発明のいくつかの実施例では、前記固相合成担体の製造方法は、
反応器に一定量の精製水を加え、水相重量に対して分散剤０．１～５重量％と無機塩２０重量％以下と、を加え、溶解して、水相を得るステップと、油相と水相との重量比が１：３～１：２０となるように、単量体全量に対して、モノビニル化合物４５～９５重量％と、架橋単量体２．９～２０重量％と、機能性単量体２～２０重量％と、変性単量体０．１～１５重量％と、孔形成剤１５～１３０重量％と、開始剤と、を秤取し、均一に混合して、油相を得るステップと、油相を反応器に加えて、撹拌し、５０～９０℃に昇温し、反応を起こし、反応終了後、孔形成剤を除去し、篩分けして適切な粒径の樹脂を収集し、真空乾燥させ、多孔質重合体樹脂を得て、樹脂をさらに反応させ、官能基がアミノ又はヒドロキシの固相合成担体を得るステップと、を含む。

本発明のいくつかの実施例では、前記固相合成担体の製造方法は、
反応器に一定量の精製水を加え、水相重量に対して、分散剤０．１～５重量％と無機塩２０重量％以下とを加え、溶解して、水相を得るステップと、油相と水相との重量比が１：３～１：２０となるように、モノビニル化合物６２～８６重量％と、架橋単量体７～１３重量％と、機能性単量体５～１５重量％と、変性単量体２～１０重量％と、孔形成剤３０～１１０重量％と、開始剤と、を秤取し、均一に混合して、油相を得るステップと、油相を反応器に加えて、撹拌し、７０～８５℃に昇温し、反応を起こし、反応終了後、孔形成剤を除去し、篩分けして適切な粒径の樹脂を収集し、真空乾燥させ、多孔質重合体樹脂を得て、樹脂をさらに反応させ、官能基がアミノ又はヒドロキシの固相合成担体を得るステップと、を含む。

上記方法によって、本発明における固相合成担体、すなわちヒドロキシ又はアミノを含有する多孔質樹脂を得ることができる。本発明では、置換度、すなわちヒドロキシ又はアミノの含有量としてはＦｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨと反応した後、Ｆｍｏｃ保護基を除去し、比色法によって除去したＦｍｏｃの量を決定することにより、担体中のアミノ又はヒドロキシの含有量を算出する。

いくつかの実施例では、具体的な操作は以下のとおりである。担体１．０ｇを正確に秤取して、アセトニトリル溶液７ｍｌに懸濁させ、その後、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨ ０．５ｇ、ＨＢＴＵ ０．５ｇ及びＤＩＥＡ ０．５ｍｌを加えて、室温で２ｈ撹拌反応させる。反応終了後、アセトニトリル（１回あたりの使用量１０ｍｌ、２回洗浄）、メタノール（１回あたりの使用量１０ｍｌ、３回洗浄）を用いて樹脂を順次洗浄し、その後、樹脂をベークする。樹脂０．１０００ｇを正確に秤取して、２０％ピペリジン／ＤＭＦ（ｖ／ｖ）溶液に懸濁させ、室温で３０ｍｉｎ振とうし、濾過して、濾液を収集し、ＤＭＦを用いて樹脂を洗浄して濾液を収集する。濾液を併合して定容し、適切な倍数だけ希釈して、３００ｎｍでの吸光度を測定する。濃度が既知の一連のＦｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨを用いて、同様のＦｍｏｃ除去反応を行って吸光度を測定し、検量線を作成する。検量線から担体中のアミノ又はヒドロキシの含有量を算出する。

担体の官能基含有量は機能性単量体の単量体重量中の割合により決まり、機能性単量体の使用量を調整することによりヒドロキシ又はアミノの含有量が異なる一連の担体が得られ得る。担体の官能基含有量はオリゴヌクレオチドの合成量を決定し、官能基含有量が低すぎると、１ロッドのオリゴヌクレオチドの収量が低下し、官能基含有量が高すぎると、オリゴヌクレオチドの純度に影響を与える。本発明では、担体の官能基含有量の範囲は１００～１０００μｍｍｏｌ／ｇ、好ましくは４００～７００μｍｍｏｌ／ｇである。

本発明では、担体の粒径は粒子画像処理装置によって検出される。すなわち、担体をスライドガラスに均一に分布させて、顕微鏡で担体粒子を拡大させながら、カメラで顕微鏡により拡大された担体粒子画像を撮影し、コンピュータで担体の形態特徴及び粒度を分析して計算する。

担体粒径の大きさは主として水相中の分散剤の種類と使用量、孔形成剤の種類と使用量、懸濁重合過程における撹拌の回転数に依存するものである。これらの条件を調整することによって、担体の粒径を調整することができる。担体粒径が大きすぎると、担体の比表面積が低下し、単位表面積あたりの活性部位の数が増加し、オリゴヌクレオチドの純度に影響を与え、一方、オリゴヌクレオチドの合成過程で物質移動速度が遅くなり、不純物が増加する。担体粒径が小さすぎると、合成過程での圧力が高すぎ、設備のコストが高まる。本発明では、担体の粒径の範囲は３５～２００μｍ、好ましくは５０～１００μｍである。

担体の平均細孔径は水銀圧入法によって測定される。すなわち、サンプル０．１５００～０．３０００ｇを正確に秤取して全自動水銀圧入装置ＡｕｔｏＰｏｒｅIV９５００（Ｍｉｃｒｏｍｅｒｉｔｉｃｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏ．）に入れ、水銀接触角を１３０°、表面張力を４８５ｄｙｎ／ｃｍとするような条件で、水銀圧入法により測定する。担体の平均細孔径の大きさは主として孔形成剤の種類と使用量、架橋剤の使用量、反応温度や時間などに依存するものである。これらの条件を調整することにより、担体の平均細孔径を調整することができる。担体の平均細孔径が小さすぎると、物質移動が困難になり、合成効率に影響を与え、担体の平均細孔径が大きすぎると、担体の比表面積が低下し、単位面積あたりの活性部位が増加し、オリゴヌクレオチド合成過程では、ヌクレオシドが増加すると互いに影響を与え、オリゴヌクレオチドの純度に影響を与える。本発明では、担体の平均細孔径は１０～２００ｎｍ、好ましくは４０～１００ｎｍである。

従来技術に比べて、本発明は主に以下の３つの優位性がある。第一には、本発明では、スチレンと反応性比が近い単量体を用いて架橋剤とし、これは樹脂内部の化学構造の均一性を向上させ、均一に分布している活性部位を形成するのに有利である。第二には、樹脂内部の化学構造の均一性の向上は、樹脂の内部に均一なチャネルを形成し、物質移動抵抗を下げるのに有利である。第三には、ジビニルベンゼンと比べて、このような架橋剤の構造に可撓性分子鎖が存在し、異なる有機溶媒での樹脂の膨潤性を改善することができる。

実施例１における担体の走査電子顕微鏡像である。 実施例２における担体の走査電子顕微鏡像である。 実施例３における担体の走査電子顕微鏡像である。 実施例４における担体の走査電子顕微鏡像である。 実施例５における担体の走査電子顕微鏡像である。 実施例６における担体の走査電子顕微鏡像である。 実施例７における担体の走査電子顕微鏡像である。 実施例８における担体の走査電子顕微鏡像である。 実施例９における担体の走査電子顕微鏡像である。 実施例１において水銀圧入法により得られる担体の細孔径分布である。 実施例２において水銀圧入法により得られる担体の細孔径分布である。 実施例３において水銀圧入法により得られる担体の細孔径分布である。 実施例４において水銀圧入法により得られる担体の細孔径分布である。 実施例５において水銀圧入法により得られる担体の細孔径分布である。 実施例６において水銀圧入法により得られる担体の細孔径分布である。 実施例７において水銀圧入法により得られる担体の細孔径分布である。 実施例８において水銀圧入法により得られる担体の細孔径分布である。 実施例９において水銀圧入法により得られる担体の細孔径分布である。

以下、特定の実施例を参照して本発明の技術的解決手段をさらに説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた３Ｌ反応器に精製水２Ｌ、ポリビニルアルコール２０ｇ、塩化ナトリウム３０ｇを加え、溶解して、水相を得た。スチレン１０８．８ｇ、１,２－ジ（ｐ－ビニルフェニル）エタン１４ｇ、ｐ－クロロメチルスチレン１２．２ｇ、フマロニトリル５ｇ、トリオレイン酸ソルビタン６ｇ、イソオクタノール４０ｇ、イソドデカン２０ｇ及び過酸化ベンゾイル２．５ｇを秤取し、均一に混合して、油相を得た。油相を反応器に加えて、撹拌し、８０℃に昇温して、６ｈ重合した。反応終了後、熱水を用いて洗浄して、エタノールで還流して孔形成剤を抽出して除去し、篩分けして粒径５０～１００μｍの樹脂を収集し、真空乾燥させ、塩素含有量が５６５μｍｍｏｌ／ｇの重合体多孔質樹脂を得た。
凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた１Ｌ反応器に重合体多孔質樹脂５０ｇ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド５００ｍｌを加え、撹拌した。その後、フタルイミドカリウム塩３０ｇを加え、９５℃に昇温して１６時間反応させた。反応終了後、室温に冷却し、その後、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを用いて２回洗浄し、精製水で中性まで洗浄し、次に、無水エタノールを用いて３回洗浄し、樹脂をろ別して乾燥させた。反応器に無水エタノール２００ｇとヒドラジン水和物５０ｇを加えて、７５℃に昇温して１６時間反応させた。反応終了後、体積比５０：５０のエタノール／精製水溶液を用いて３回洗浄し、精製水で中性まで洗浄し、次に、無水エタノールを用いて３回洗浄し、洗浄液をろ別した。反応器に無水エタノール２００ｇと濃塩酸５０ｇを加えて、６０℃に昇温して６ｈ反応させた。反応終了後、室温に冷却し、中性まで水洗し、その後、真空乾燥させ、アミノを含有する固相合成担体を得た。得られたアミノ固相合成担体は、アミノ含有量が５５４μｍｍｏｌ／ｇであり、水銀圧入法によって測定された平均細孔径が５４ｎｍである。

凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた３Ｌ反応器に精製水２Ｌ、ポリビニルアルコール２０ｇ、塩化ナトリウム３０ｇを加え、溶解して、水相を得た。メチルスチレン７７ｇ、ジ（ｐ－ビニルフェニル）メタン２８ｇ、ｐ－クロロメチルスチレン１４ｇ、１,４－ジシアノ－２－ブテン２１ｇ、ソルビタンモノオレイン酸エステル１５ｇ、イソオクタノール６０ｇ、フタル酸ジブチル３０ｇ及び過酸化ベンゾイル１ｇを秤取し、均一に混合して、油相を得た。油相を反応器に加えて、撹拌し、７０℃に昇温して８ｈ重合した。反応終了後、熱水を用いて洗浄して、エタノールで還流して孔形成剤を抽出して除去し、篩分けして粒径５０～１００μｍの樹脂を収集し、真空乾燥させ、塩素含有量が６４６μｍｍｏｌ／ｇの重合体多孔質樹脂を得た。
凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた１Ｌ反応器に重合体多孔質樹脂５０ｇ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド５００ｍｌを加え、撹拌した。その後、フタルイミドカリウム塩３５ｇを加え、９５℃に昇温して１６時間反応させた。反応終了後、室温に冷却し、その後、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを用いて２回洗浄し、精製水で中性まで洗浄し、次に、無水エタノールを用いて３回洗浄し、樹脂をろ別して乾燥させた。反応器に無水エタノール２００ｇとヒドラジン水和物５０ｇを加えて、７５℃に昇温して１６時間反応させた。反応終了後、体積比５０：５０のエタノール／精製水溶液を用いて３回洗浄し、精製水で中性まで洗浄し、次に、無水エタノールを用いて３回洗浄し、洗浄液をろ別した。反応器に無水エタノール２００ｇと濃塩酸５０ｇを加えて、６０℃に昇温して６ｈ反応させた。反応終了後、室温に冷却し、中性まで水洗し、その後、真空乾燥させ、アミノを含有する固相合成担体を得た。得られたアミノ固相合成担体はアミノ含有量が６３５μｍｍｏｌ／ｇであり、水銀圧入法によって測定された平均細孔径が１４５ｎｍである。

凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた３Ｌ反応器に精製水２Ｌ、ポリビニルアルコール２０ｇ、塩化ナトリウム３０ｇを加え、溶解して、水相を得た。エチルスチレン１２３ｇ、１,３－ジ（ｐ－ビニルフェニル）プロパン８ｇ、４－（４－ブロモブチル）スチレン８．８ｇ、アクリロニトリル０．２ｇ、ヘキサステアリン酸ポリオキシエチレンソルビトール３ｇ、イソドデカン１８ｇ、フタル酸ジブチル５ｇ及び過酸化ベンゾイル２ｇを秤取し、均一に混合して、油相を得た。油相を反応器に加えて、撹拌し、６５℃に昇温して１０ｈ重合した。反応終了後、熱水を用いて洗浄して、エタノールで還流して孔形成剤を抽出して除去し、篩分けして粒径５０～１００μｍの樹脂を収集し、真空乾燥させ、臭素含有量が２５７μｍｍｏｌ／ｇの重合体多孔質樹脂を得た。
凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた１Ｌ反応器に重合体多孔質樹脂５０ｇ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド６００ｍｌを加え、撹拌した。その後、４－ヒドロキシ安息香酸５．４ｇ、無水炭酸カリウム５．４ｇ、ヨウ化カリウム０．３ｇを加えた。７５℃に昇温して、６ｈ反応させた。反応終了後、室温に冷却し、中性まで水洗し、その後、真空乾燥させ、ヒドロキシを含有する固相合成担体を得た。得られたヒドロキシ固相合成担体はヒドロキシ含有量が２５０μｍｍｏｌ／ｇであり、水銀圧入法によって測定された平均細孔径が２３ｎｍである。

凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた３Ｌ反応器に精製水２Ｌ、ポリビニルアルコール２０ｇ、塩化ナトリウム３０ｇを加え、溶解して、水相を得た。スチレン１１２ｇ、１,４－ビス（４’－ビニルフェノキシ）ブタン９ｇ、ｐ－クロロメチルスチレン９ｇ、アクリルアミド１０ｇ、エチレングリコール脂肪酸エステル１ｇ、トルエン３０ｇ、フタル酸ジブチル６０ｇ及び過酸化ベンゾイル４．５ｇを秤取し、均一に混合して、油相を得た。油相を反応器に加えて、撹拌し、６０℃に昇温して７ｈ重合した。反応終了後、熱水を用いて洗浄して、エタノールで還流して孔形成剤を抽出して除去し、篩分けして粒径５０～１００μｍの樹脂を収集し、真空乾燥させ、塩素含有量が４１８μｍｏｌ／ｇの重合体多孔質樹脂を得た。
凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた１Ｌ反応器に重合体多孔質樹脂５０ｇ、無水エタノール３００ｍｌを加え、撹拌した。ビーカーに水酸化ナトリウム３０ｇを秤取し、脱イオン水３００ｍｌで溶解して、反応器にゆっくりと加えた。６５℃に昇温して、６ｈ反応させた。反応終了後、室温に冷却し、中性まで水洗し、その後、真空乾燥させ、ヒドロキシを含有する固相合成担体を得た。得られたヒドロキシ固相合成担体はヒドロキシ含有量が４１０μｍｍｏｌ／ｇであり、水銀圧入法によって測定された平均細孔径が３８ｎｍである。

凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた３Ｌ反応器に精製水２Ｌ、ポリビニルアルコール２０ｇ、塩化ナトリウム３０ｇを加え、溶解して、水相を得た。スチレン８３ｇ、１,２－ジ（ｐ－ビニルフェニル）エタン２３ｇ、Ｎ－（４－ビニルフェニル）－アセトアミド１８ｇ、フマロニトリル１４ｇ、ソルビタンセスキオレイン酸エステル２ｇ、ドデカノール１０ｇ、シクロヘキサン１０ｇ及び過酸化ベンゾイル２ｇを秤取し、均一に混合して、油相を得た。油相を反応器に加えて、撹拌し、５５℃に昇温して１０ｈ重合した。反応終了後、熱水を用いて洗浄して、エタノールで還流して孔形成剤を抽出して除去し、篩分けして粒径５０～１００μｍの樹脂を収集し、真空乾燥させ、重合体多孔質樹脂を得た。
凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた１Ｌ反応器に重合体多孔質樹脂５０ｇ、無水エタノール３００ｍｌを加え、撹拌した。ビーカーに水酸化ナトリウム３０ｇを秤取し、脱イオン水３００ｍｌで溶解して、反応器にゆっくりと加えた。６５℃に昇温して、６ｈ反応させた。反応終了後、室温に冷却し、中性まで水洗し、その後、真空乾燥させ、アミノを含有する固相合成担体を得た。得られたアミノ固相合成担体はアミノ含有量が８２２μｍｍｏｌ／ｇであり、水銀圧入法によって測定された平均細孔径が３４ｎｍである。

凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた３Ｌ反応器に精製水２Ｌ、ポリビニルアルコール２０ｇ、塩化ナトリウム３０ｇを加え、溶解して、水相を得た。スチレン１０７．７ｇ、１,２－ジ（ｐ－ビニルフェニル）エタン１２．８ｇ、４－アセトキシスチレン１２．５ｇ、フマロニトリル７ｇ、トリオレイン酸ソルビタン１０ｇ、イソオクタノール４２ｇ、イソドデカン２１ｇ及び過酸化ベンゾイル２．５ｇを秤取し、均一に混合して、油相を得た。油相を反応器に加えて、撹拌し、７８℃に昇温して６ｈ重合した。反応終了後、熱水を用いて樹脂を洗浄して、エタノールで還流して孔形成剤を抽出して除去し、篩分けして粒径５０～１００μｍの樹脂を収集し、真空乾燥させ、重合体多孔質樹脂を得た。
凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた１Ｌ反応器に重合体多孔質樹脂５０ｇ、アセトニトリル３００ｍｌを加え、撹拌した。ヒドラジン水和物７．５ｍｌをゆっくりと加え、室温で３ｈ反応させた。反応終了後、中性まで水洗し、その後、真空乾燥させ、ヒドロキシを含有する固相合成担体を得た。得られたヒドロキシ固相合成担体はヒドロキシ含有量が５３８μｍｍｏｌ／ｇであり、水銀圧入法によって測定された平均細孔径が５８ｎｍである。

凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた３Ｌ反応器に精製水２Ｌ、ポリビニルアルコール２０ｇ、塩化ナトリウム３０ｇを加え、溶解して、水相を得た。スチレン１２８ｇ、１,３－ジ（ｐ－ビニルフェニル）プロパン８ｇ、４－アセトキシスチレン３ｇ、フマロニトリル１ｇ、ヘキサステアリン酸ポリオキシエチレンソルビトール０．４ｇ、フタル酸ジブチル３５ｇ、トルエン１２ｇ及び過酸化ベンゾイル３．５ｇを秤取し、均一に混合して、油相を得た。油相を反応器に加えて、撹拌し、７０℃に昇温して６ｈ重合した。反応終了後、熱水を用いて樹脂を洗浄して、エタノールで還流して孔形成剤を抽出して除去し、篩分けして粒径５０～１００μｍの樹脂を収集し、真空乾燥させ、重合体多孔質樹脂を得た。
凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた１Ｌ反応器に重合体多孔質樹脂５０ｇ、アセトニトリル３００ｍｌを加え、撹拌した。ヒドラジン水和物７．５ｍｌをゆっくりと加え、室温で３ｈ反応させた。反応終了後、中性まで水洗し、その後、真空乾燥させ、ヒドロキシを含有する固相合成担体を得た。得られたヒドロキシ固相合成担体はヒドロキシ含有量が１２５μｍｍｏｌ／ｇであり、水銀圧入法によって測定された平均細孔径が４６ｎｍである。

凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた３Ｌ反応器に精製水２Ｌ、ポリビニルアルコール２０ｇ、塩化ナトリウム３０ｇを加え、溶解して、水相を得た。スチレン８３ｇ、１,４－ビス（４’－ビニルフェノキシ）ブタン１７ｇ、ベンゾイルオキシスチレン２７ｇ、フマロニトリル１３ｇ、イソオクタノール１０３ｇ、イソドデカン５１ｇ及び過酸化ベンゾイル３ｇを秤取し、均一に混合して、油相を得た。油相を反応器に加えて、撹拌し、８０℃に昇温して６ｈ重合した。反応終了後、熱水を用いて樹脂を洗浄して、エタノールで還流して孔形成剤を抽出して除去し、篩分けして粒径５０～１００μｍの樹脂を収集し、真空乾燥させ、重合体多孔質樹脂を得た。
凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた１Ｌ反応器に重合体多孔質樹脂５０ｇ、アセトニトリル３００ｍｌを加え、撹拌した。ヒドラジン水和物７．５ｍｌをゆっくりと加え、室温で３ｈ反応させた。反応終了後、中性まで水洗し、その後、真空乾燥させ、ヒドロキシを含有する固相合成担体を得た。得られたヒドロキシ固相合成担体はヒドロキシ含有量が８４３μｍｍｏｌ／ｇであり、水銀圧入法によって測定された平均細孔径が４２ｎｍである。

凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた３Ｌ反応器に精製水２Ｌ、ポリビニルアルコール２０ｇ、塩化ナトリウム３０ｇを加え、溶解して、水相を得た。スチレン８５ｇ、１,２－ジ（ｐ－ビニルフェニル）エタン２４ｇ、４－ビニル安息香酸メチル１８ｇ、フマロニトリル１３ｇ、プロピレングリコールモノラウリン酸エステル４ｇ、フタル酸ジブチル４０ｇ、イソドデカン４０ｇ及び過酸化ベンゾイル２．５ｇを秤取し、均一に混合して、油相を得た。油相を反応器に加えて、撹拌し、７０℃に昇温して６ｈ重合した。反応終了後、熱水を用いて樹脂を洗浄して、エタノールで還流して抽出し、篩分けして粒径５０～１００μｍの樹脂を収集し、真空乾燥させ、重合体多孔質樹脂を得た。
凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた１Ｌ反応器に重合体多孔質樹脂５０ｇ、アセトニトリル３００ｍｌを加え、撹拌した。その後、ハイドロキノン８．８ｇ、ＨＢＴＵ ２３ｇ及びＤＩＥＡ １３ｍｌを加え、室温で２ｈ反応させた。反応終了後、中性まで水洗し、その後、真空乾燥させ、ヒドロキシを含有する固相合成担体を得た。得られたヒドロキシ固相合成担体はヒドロキシ含有量が７２４μｍｍｏｌ／ｇであり、水銀圧入法によって測定された平均細孔径が１２４ｎｍである。

［比較例１］
凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた３Ｌ反応器に精製水２Ｌ、ポリビニルアルコール２０ｇ、塩化ナトリウム６０ｇを加え、溶解して、水相を得た。スチレン１１１ｇ、ジビニルベンゼン（含有量８０重量％）１１ｇ、４－アセトキシスチレン１３ｇ、フマロニトリル５ｇ、ソルビタンモノオレイン酸エステル８ｇ、イソオクタノール４０ｇ、イソドデカン２０ｇ及び過酸化ベンゾイル２．５ｇを秤取し、均一に混合して、油相を得た。油相を反応器に加えて、撹拌し、７８℃に昇温して６ｈ重合した。反応終了後、熱水を用いて樹脂を洗浄して、エタノールで還流して孔形成剤を抽出して除去し、篩分けして粒径５０～１００μｍの樹脂を収集し、真空乾燥させ、重合体多孔質樹脂を得た。
凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた１Ｌ反応器に重合体多孔質樹脂５０ｇ、アセトニトリル３００ｍｌを加え、撹拌した。ヒドラジン水和物７．５ｍｌをゆっくりと加え、室温で３ｈ反応させた。反応終了後、中性まで水洗し、その後、真空乾燥させ、ヒドロキシを含有する固相合成担体を得た。得られたヒドロキシ固相合成担体はヒドロキシ含有量が５５０μｍｍｏｌ／ｇであり、水銀圧入法によって測定された平均細孔径が６４ｎｍである。

実施例１～９で製造した固相合成担体のそれぞれのアセトニトリル及びトルエンでの膨潤度をテストした。以下のようにテストした。１．５ｇ程度のサンプルを秤取し、栓付きメスシリンダに入れて、それぞれトルエン又はアセトニトリルを所望の目刻まで加えて、その後、ガラス棒を用いて樹脂と溶媒を撹拌して、十分に膨潤させ、栓を締め付け、２～３時間後、ガラス棒を用いて樹脂を緩やかに撹拌して気泡を除去し、樹脂を均一に分散させてケーキングを防止し、撹拌棒を取り出して、ゴムマットを備えたテーブルにメスシリンダを叩いて樹脂を緊密に積み、２４ｈ放置した後、その体積を取り出して、その膨潤度を算出する。結果を表１に示す。

実施例１、２、６、９及び比較例１で製造した固相合成担体、及びＮｉｔｔｏＰｈａｓｅ ＨＬ固相合成担体を用いてオリゴヌクレオチド断片を合成し、樹脂の性能を評価した。本発明の優位性をより明らかにするために、担体充填量（ｇ）＝合成カラム体積（ｍｌ）／担体のトルエンでの膨潤度（ｍｌ／ｇ）とし、オリゴヌクレオチドの合成過程では、洗浄体積を１つの合成カラム体積に限定した。
固相合成担体１０ｇとアセトニトリル５０ｍｌを反応器に秤取して１０ｍｉｎ膨潤させた後、ＤＭＴ－ｄＴ－３’－コハク酸３．０ｇ、ＨＢＴＵ １．５ｇ、ＤＩＥＡ １．３ｍｌを加え、室温で１２ｈ反応させた。反応終了後、アセトニトリルを用いて５回洗浄し、その後、Ｃａｐ Ａ（アセトニトリル２０ｍｌ、ピリジン７．５ｍｌ、Ｎ－メチルイミダゾール５．０ｍｌからなる）とＣａｐ Ｂ（アセトニトリル１０ｍｌ、無水酢酸４ｍｌ）とを加え、室温で３０ｍｉｎ反応させた。反応終了後、アセトニトリルを用いて５回洗浄し、真空乾燥させ、ＤＭＴ－ｄＴを担持した担体を得た。パラトルエンスルホン酸／アセトニトリル溶液を用いて、担持したＤＭＴ基を除去し、分光光度法によって４１２ｎｍ波長で担体に担持されたＤＭＴ基の担持量を測定し、結果を表２に示す。
ＤＭＴ－ｄＴを担持した担体を秤取して合成カラム（３２ｍｌ）に充填し、合成カラムをＡＫＴＡ ＯｌｉｇｏＰｉｌｏｔ １００に取り付け、配列がｄ［ＡＣＧＴＡＣＧＴＡＣＧＴＡＣＧＴＡＣＧＴ］の２０塩基長のオリゴヌクレオチドを合成した。以下のように合成した。１．ジクロロメタンを用いて樹脂を膨潤させた。２．１０％ＤＣＡ／ＤＣＭを用いてＤＭＴ基を除去した。３．無水アセトニトリルを用いて洗浄した。４．ホスホロアミダイト単量体と活性化試薬を加えて縮合させた。５．無水アセトニトリルを用いて洗浄した。６．酸化剤を加えて酸化した。７．無水アセトニトリルを用いて洗浄した。８．キャッピング試薬を加えてキャッピングを行った。９．無水アセトニトリルを用いて洗浄した。１０．ステップ２を繰り返して次のサイクルを開始させた。
合成完了後、担体を取り出して乾燥させた。その後、ガラス瓶に入れて、適量の濃アンモニア水を加え、５５℃で１６ｈ反応させ、オリゴヌクレオチドを担体から分解して取り出し、また、塩基上の保護基を除去した。担体とオリゴヌクレオチドとを濾過により分離し、濾液を乾燥させ、オリゴヌクレオチド粗粉を得て、ＨＰＬＣによってその純度を検出し、そのオリゴヌクレオチド収率を計算し、結果を表２に示す。

表２から分かるように、本発明のオリゴヌクレオチド固相合成担体を用いると、オリゴヌクレオチドの収率及び純度を高めることができ、オリゴヌクレオチドの生産コストの削減に有利である。

なお、以上は本発明の好適な実施形態に過ぎず、当業者であれば、本発明の構想を逸脱することなく、複数の変形及び改良を行うことができ、これらは全て本発明の特許範囲に含まれるものとする。

Claims (19)

1. 固相合成担体であって、
   前記固相合成担体は、骨格が式（Ｉ）、式（ＩＩ）、式（ＩＩＩ）及び式（ＩＶ）で示される繰り返し構造単位を有する共重合体であり、
   ここで、Ｒ_３は－Ｈ、－ＣＮ、及び－ＣＨ_２－ＣＮからなる群より選択され、Ｒ_４は－Ｈ又は－ＣＨ_３であり、Ｒ_５は－ＣＮ、－ＣＨ_２－ＣＮ、－ＣＯＯＣＨ_３及び－ＣＯＮＨ_２からなる群より選択され、
   Ｒ_６は－（ＣＨ_２）ｘ－、ｘは２であり、
   Ｒ_７は－Ｈ、ＣＨ_３（ＣＨ_２）ｚ－又はＣＨ_３（ＣＨ_２）ｚＯ－（ｚは０～４の整数である）、（ＣＨ_３）_２ＣＨ－、（ＣＨ_３）_２ＣＨ（ＣＨ_２）－、（ＣＨ_３）_２ＣＨ（ＣＨ_２）_２－、（ＣＨ_３）_３Ｃ－、ＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）－、ＣＨ_３ＣＨ_２Ｃ（ＣＨ_３）_２－、及びＣＨ_３ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ（ＣＨ_３）－からなる群より選択され、
   Ｒ_８は－ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＨ、－ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＮＨ_２、－ＣＨ_２ＯＯＣ－Ｃ_６Ｈ_４－ＯＨ、－ＣＨ_２ＯＯＣＣＨ_２－Ｃ_６Ｈ_４－ＯＨ、－（ＣＨ_２）_４ＯＯＣ－Ｃ_６Ｈ_４－ＯＨ、－（ＣＨ_２）_４ＯＯＣＣＨ_２－Ｃ_６Ｈ_４－ＯＨ、－ＣＯＯ－Ｃ_６Ｈ_４－ＯＨ及び－Ｃ
   Ｈ_２ＣＯＯ－Ｃ_６Ｈ_４－ＯＨからなる群より選択され、
   ここで、前記固相合成担体は１００～１０００μｍｏｌ／ｇのヒドロキシ又はアミノの含有量を有し、アミノ又はヒドロキシの前記含有量は、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨと反応させ、続いてＦｍｏｃ保護基を除去し、除去されるＦｍｏｃ基の量を比色法で決定し、続いて前記担体中のアミノ又はヒドロキシの前記含有量を計算して得られ、
   前記固相合成担体は、粒子画像処理装置による検出で、つまり、前記担体をスライドガラスに均一に分布させ、顕微鏡で拡大して観測しながら、その一方で、拡大した前記担体の粒子の画像をカメラで撮影し、前記担体の形態的特徴及び粒径をコンピュータで分析して計算すると、３５～２００μｍの粒径を有し、
   前記固相合成担体は、以下の条件：０．１５００～０．３０００ｇのサンプルを正確に計り取り、全自動水銀圧入装置ＡｕｔｏＰｏｒｅＩＶ９５００（マイクロメリティクス社製）に設置し、水銀の接触角を１３０°及び表面張力を４８５ｄｙｎ／ｃｍとする水銀圧入法の測定で、１０～２００ｎｍの平均細孔径を有する、
   ことを特徴とする固相合成担体。
2. ヒドロキシ又はアミノの含有量の範囲が、４００～７００μｍｏｌ／ｇであり、アミノ又はヒドロキシの前記含有量は、Ｆｍｏｃ－Ｌｅｕ－ＯＨと反応させ、続いてＦｍｏｃ保護基を除去し、除去されるＦｍｏｃ基の量を比色法で決定し、続いて前記担体中のアミノ又はヒドロキシの前記含有量を計算して得られることを特徴とする請求項１に記載の固相合成担体。
3. 前記固相合成担体は、粒子画像処理装置による検出で、つまり、前記担体をスライドガラスに均一に分布させ、顕微鏡で拡大して観測しながら、その一方で、拡大した前記担体の粒子の画像をカメラで撮影し、前記担体の形態的特徴及び粒径をコンピュータで分析して計算すると、前記粒径の範囲が、５０～１００μｍであることを特徴とする請求項１に記載の固相合成担体。
4. 前記固相合成担体は以下の条件：０．１５００～０．３０００ｇのサンプルを正確に計り取り、全自動水銀圧入装置ＡｕｔｏＰｏｒｅＩＶ９５００（マイクロメリティクス社製）に設置し、水銀の接触角を１３０°及び表面張力を４８５ｄｙｎ／ｃｍとする水銀圧入法の測定で、平均細孔径が４０～１００ｎｍであることを特徴とする請求項１に記載の固相合成担体。
5. ステップＡ及びステップＢを有する固相合成担体の製造方法であって、
   ステップＡ：
   水、分散剤、無機塩からなる水相と、架橋単量体、モノビニル化合物、機能性単量体、変性単量体、孔形成剤及び開始剤からなる油相とをそれぞれ調製するステップであって、前記架橋単量体、前記モノビニル化合物、前記機能性単量体及び前記変性単量体は重合反応可能な単量体であり、
   ここで、前記架橋単量体は１，２－ジ（４－ビニルフェニル）エタンであり、
   前記モノビニル化合物はスチレンであり、そのベンゼン環では、置換が行われていないか、炭素数１～５のアルキル又はアルコキシ置換が行われ、
   前記機能性単量体は４－ヒドロキシスチレン、４－ヒドロキシメチルスチレン、４－アセトキシスチレン、ベンゾイルオキシスチレン、４－アミノスチレン、４－アミノメチルスチレン、４－（４－ブロモブチル）スチレン、ｐ－クロロメチルスチレン、４－ビニル安息香酸メチル、及び４－ビニル安息香酸エチルからなる群より選択され、
   前記変性単量体はアクリルニトリル、メタクリロニトリル、フマロニトリル、１，４－ジシアノ－２－ブテン、メタクリル酸メチル、及びアクリルアミドからなる群より選択され、
   前記孔形成剤は、ベンゼン、トルエン、エチルベンゼン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ドデカン、イソオクタン、イソドデカン、シクロヘキサン、クロロホルム、クロロベンゼン、酢酸エチル、酢酸ブチル、フタル酸ジブチル、ヘキサノール、シクロヘキサノール、オクタノール、イソオクタノール、デカノール、ドデカノール、トリオレイン酸ソルビタン、ポリオキシエチレンソルビトール蜜ロウ、トリステアリン酸ソルビタン、ヘキサステアリン酸ポリオキシエチレンソルビトール、エチレングリコール脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、プロピレングリコールモノステアリン酸エステル、ソルビタンセスキオレイン酸エステル、ポリオキシエチレンソルビトールオレイン酸エステル、モノステアリン酸グリセリル、ヒドロキシラノリン、ソルビタンモノオレイン酸エステル、プロピレングリコールモノラウリン酸エステルからなる群より選択される１種又は複数種の組み合わせであり、
   前記分散剤はポリビニルアルコール、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ポリアクリル酸ナトリウム、及びポリビニルピロリドンからなる群より選択される水溶性高分子であり、
   ステップＢ：
   前記水相に前記油相を加えて、撹拌して昇温し、重合反応を起こし、重合反応終了後、孔形成剤を除去し、多孔質重合体樹脂を得るステップであり、
   ここで、前記多孔質重合体樹脂は、さらに反応して官能基としてヒドロキシ又はアミノを含有する固相合成担体を得て、
   前記固相合成担体は、１００～１０００μｍｏｌ／ｇのヒドロキシ又はアミノ含有量を有し、
   前記固相合成担体は、粒子画像処理装置による検出で、つまり、前記固相合成担体をスライドガラスに均一に分布させ、顕微鏡で拡大して観測しながら、その一方で、拡大した前記固相合成担体の粒子の画像をカメラで撮影し、前記固相合成担体の形態的特徴及び粒径をコンピュータで分析して計算すると、３５～２００μｍの粒径の範囲を有し、
   前記固相合成担体は、１０～２００ｎｍの平均細孔径を有する、
   ことを特徴とする固相合成担体の製造方法。
6. 前記開始剤は有機過酸化物又はアゾ化合物であることを特徴とする請求項５に記載の固相合成担体の製造方法。
7. 前記開始剤は、過酸化ベンゾイル、過酸化ラウロイル、ｔ－ブチルパーオキシオクトエート、２，２’－アゾビス（２－メチルプロピオニトリル）、２，２’―アゾビス（２－メチルブチロニトリル）、２，２’―アゾビス（２，４－ジメチル）バレロニトリルからなる群より選択されることを特徴とする請求項６に記載の固相合成担体の製造方法。
8. 前記水相において、分散剤は０．１～５重量％、無機塩は２０重量％以下であり、
   前記油相と水相との重量比は１：３～１：２０であり、
   前記油相において、モノビニル化合物は単量体全量の４５～９５重量％を占め、
   前記油相において、架橋単量体は単量体全量の２．９～２０重量％を占め、
   前記油相において、機能性単量体は単量体全量の２～２０重量％を占め、
   前記油相において、変性単量体は単量体全量の０．１～１５重量％を占め、
   前記油相において、孔形成剤の重量は単量体全重量の１５～１３０％である、
   ことを特徴とする請求項５に記載の固相合成担体の製造方法。
9. 前記重合反応は５０～９０℃で行われることを特徴とする請求項５に記載の固相合成担体の製造方法。
10. 前記製造方法は、
    （ｉ）反応器に一定量の精製水を加え、水相重量に対して分散剤０．１～５重量％と無機塩２０重量％以下とを加え、溶解して、水相を得るステップと、
    油相と前記水相との重量比が１：３～１：２０となるように、単量体全量に対して、モノビニル化合物４５～９５重量％と、架橋単量体２．９～２０重量％と、機能性単量体２～２０重量％と、変性単量体０．１～１５重量％と、孔形成剤１５～１３０重量％と、開始剤と、を秤取し、均一に混合して、油相を得るステップと、
    前記油相を反応器に加えて、撹拌し、５０～９０℃に昇温し、反応を起こし、反応終了後、前記孔形成剤を除去し、篩分けして適切な粒径の樹脂を収集し、真空乾燥させ、多孔質重合体樹脂を得て、樹脂をさらに反応させ、官能基がアミノ又はヒドロキシの固相合成担体を得るステップと、を含むか、或いは、
    （ｉｉ） 反応器に一定量の精製水を加え、水相重量に対して分散剤０．１～５重量％と無機塩２０重量％以下とを加え、溶解して、水相を得るステップと、
    油相と前記水相との重量比が１：３～１：２０となるように、単量体全量に対して、モノビニル化合物６２～８６重量％と、架橋単量体７～１３重量％と、機能性単量体５～１５重量％と、変性単量体２～１０重量％と、孔形成剤３０～１１０重量％と、開始剤と、を秤取し、均一に混合して、油相を得るステップと、
    油相を反応器に加えて、撹拌し、７０～８５℃に昇温し、反応を起こし、反応終了後、孔形成剤を除去し、篩分けして適切な粒径の樹脂を収集し、真空乾燥させ、多孔質重合体樹脂を得て、樹脂をさらに反応させ、官能基がアミノ又はヒドロキシの固相合成担体を得るステップと、
    を含むことを特徴とする請求項５から請求項９のいずれか１項に記載の固相合成担体の製造方法。
11. 凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた３Ｌ反応器に精製水２Ｌ、ポリビニルアルコール２０ｇ、塩化ナトリウム３０ｇを加え、溶解して、水相を得て、 スチレン１０８．８ｇ、１,２－ジ（４－ビニルフェニル）エタン１４ｇ、ｐ－クロロメチルスチレン１２．２ｇ
    、フマロニトリル５ｇ、トリオレイン酸ソルビタン６ｇ、イソオクタノール４０ｇ、イソドデカン２０ｇ及び過酸化ベンゾイル２．５ｇを秤取し、均一に混合して、油相を得て、
    前記油相を反応器に加えて、撹拌し、８０℃に昇温して６ｈ重合し、反応終了後、熱水を用いて洗浄して、エタノールで還流して孔形成剤を抽出して除去し、篩分けして粒径５０～１００μｍの樹脂を収集し、真空乾燥させ、塩素含有量が５６５μｍｏｌ／ｇの重合体多孔質樹脂を得るステップと、
    凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた１Ｌ反応器に重合体多孔質樹脂５０ｇ、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド５００ｍｌを加え、撹拌し、その後、フタルイミドカリウム塩３０ｇを加えて、９５℃に昇温して１６時間反応させ、反応終了後、室温に冷却し、その後、Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミドを用いて２回洗浄し、精製水で中性まで洗浄し、次に、無水エタノールを用いて３回洗浄し、樹脂をろ別して乾燥させ、反応器に無水エタノール２００ｇとヒドラジン水和物５０ｇを加えて、７５℃に昇温して１６時間反応させ、反応終了後、体積比５０：５０のエタノール／精製水溶液を用いて３回洗浄し、精製水で中性まで洗浄し、無水エタノールを用いて３回洗浄し、洗浄液をろ別し、反応器に無水エタノール２００ｇと濃塩酸５０ｇを加えて、６０℃に昇温して６ｈ反応させ、反応終了後、室温に冷却し、中性まで水洗し、その後、真空乾燥させ、アミノ含有量が５５４μｍｏｌ／ｇ、水銀圧入法によって測定された平均細孔径が５４ｎｍの固相合成担体を得るステップと、を含むことを特徴とする請求項５から請求項１０のいずれか１項に記載の固相合成担体の製造方法。
12. 凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた３Ｌ反応器に精製水２Ｌ、ポリビニルアルコール２０ｇ、塩化ナトリウム３０ｇを加え、溶解して、水相を得て、
    スチレン１０７．７ｇ、１,２－ジ（４－ビニルフェニル）エタン１２．８ｇ、４－ア
    セトキシスチレン１２．５ｇ、フマロニトリル７ｇ、トリオレイン酸ソルビタン１０ｇ、イソオクタノール４２ｇ、イソドデカン２１ｇ及び過酸化ベンゾイル２．５ｇを秤取し、均一に混合して、油相を得て、
    油相を反応器に加えて、撹拌し、７８℃に昇温して６ｈ重合し、反応終了後、熱水を用いて樹脂を洗浄して、エタノールで還流して孔形成剤を抽出して除去し、篩分けして粒径５０～１００μｍの樹脂を収集し、真空乾燥させ、重合体多孔質樹脂を得るステップと、
    凝縮器、撹拌器及び温度計を備えた１Ｌ反応器に重合体多孔質樹脂５０ｇを加え、アセトニトリル３００ｍｌを加え、撹拌し、ヒドラジン水和物７．５ｍｌをゆっくりと加え、室温で３ｈ反応させ、反応終了後、中性まで水洗し、その後、真空乾燥させ、ヒドロキシの含有量が５３８μｍｏｌ／ｇ、水銀圧入法によって測定された平均細孔径が５８ｎｍの、ヒドロキシを含有する固相合成担体を得るステップと、
    を含むことを特徴とする請求項５から請求項１０のいずれか１項に記載の固相合成担体の製造方法。
13. 請求項５から請求項１２のいずれか１項に記載の方法で製造した請求項１に記載の固相合成担体の、オリゴヌクレオチドの固相合成への使用。
14. 前記油相において、前記モノビニル化合物は単量体全量の６２～８６重量％を占めることを特徴とする請求項５に記載の固相合成担体の製造方法。
15. 前記油相において、前記架橋単量体は単量体全量の７～１３重量％を占めることを特徴とする請求項５に記載の固相合成担体の製造方法。
16. 前記油相において、前記機能性単量体は単量体全量の５～１５重量％を占めることを特徴とする請求項５に記載の固相合成担体の製造方法。
17. 前記油相において、前記変性単量体は単量体全量の２～１０重量％を占めることを特徴とする請求項５に記載の固相合成担体の製造方法。
18. 前記油相において、前記孔形成剤は単量体全量の３０～１１０重量％を占めることを特徴とする請求項５に記載の固相合成担体の製造方法。
19. 前記重合反応は７０～８５℃で行うことを特徴とする請求項５に記載の固相合成担体の製造方法。