JP7697889B2 - アルファ－１アンチトリプシン欠乏症（ａａｔｄ）の治療法 - Google Patents

Description

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で提出された配列表を含むとともに、該配列表は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。該ＡＳＣＩＩ原稿は、３０６７４＿ＷＯ１＿ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔという名称であり、６ｋｂのサイズである。

本明細書に開示するのは、ヒト対象におけるアルファ－１アンチトリプシン欠乏症（ＡＡＴＤ）の治療法であり、アルファ－１アンチトリプシン遺伝子の発現を阻害するＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤を含む医薬組成物を使用した、ＡＡＴＤによって引き起こされる症状及び疾患の治療を含む。

アルファ－１アンチトリプシン（ＡＡＴ、α１－アンチトリプシン、またはＡ１ＡＴ）は、ヒトにおいて、ＳＥＲＰＩＮＡ１遺伝子によってコードされるセルピンスーパーファミリーに属するプロテアーゼ阻害物質である。通常のＡＡＴタンパク質は、主に肝臓において肝細胞によって合成され、血中に分泌される循環糖タンパク質プロテアーゼ阻害物質である。ＡＡＴの既知の生理機能は、好中球プロテアーゼを阻害することであり、これは、炎症の段階で非特異的損傷から宿主組織を保護するのに役立つ。

アルファ－１アンチトリプシン欠乏症（ＡＡＴＤ）は、常染色体性相互優性遺伝性疾患であり、ＡＡＴの血中レベルが低くなり、成人で若年性肺疾患を引き起こし、小児及び成人で肝疾患を引き起こす。ＡＡＴ欠乏症（ＡＡＴＤ）の有病率の範囲は、１，５００～５，０００人に約１人であり、ヨーロッパ系の人が最も多く罹患する。

臨床的に最も重大なＡＡＴＤの形態は、Ｚ型変異によって引き起こされる。Ｚ型変異対立遺伝子は、単一点突然変異により、変異Ｚ型ＡＡＴタンパク質（「Ｚ－ＡＡＴタンパク質」）を、フォールディング異常を起こしやすい状態にし、肝細胞の小胞体（ＥＲ）での細胞内保持を引き起こす。よりまれな他の突然変異もまた、ミスフォールドして蓄積したタンパク質を肝細胞にもたらす。変異Ｚ－ＡＡＴタンパク質単量体は、蓄積して「小球」と呼ばれることもあるポリマー凝集体になることが可能である。該ポリマー小球塊は、ＥＲに圧力を加え、連続的な肝細胞の損傷と回復のサイクルを引き起こし、線維化、肝硬変、及び肝細胞癌のリスクの増加につながる。さらに、血中抗プロテアーゼ活性がないことが、特に肺炎症において、肺を好中球エラスターゼによる損傷に対して無防備な状態にし、呼吸器合併症、例えば、肺気腫または他の肺疾患の発症を引き起こす。

ホモ接合性ＰｉＺＺ遺伝子型を有する人は、機能性ＡＡＴが極端に欠乏している。精製ヒトＡＡＴを使用したＡＡＴ増強療法を毎週使用することが、罹患者の肺障害防止に役立つ。かかる現在市販されている製剤としては、例えば、Ｐｒｏｌａｓｔｉｎ（登録商標）－Ｃ、Ｐｒｏｌａｓｔｉｎ（登録商標）、Ｇｌａｓｓｉａ（商標）、Ａｒａｌａｓｔ（登録商標）ＮＰ、及びＺｅｍａｉｒａ（登録商標）が挙げられる。しかしながら、精製ＡＡＴの投与は、内因的に分泌されるＡＡＴの欠如または低レベルによって引き起こされる肺障害を改善することができる場合もあれば、その防止に役立つ場合もあるが、ＡＡＴＤ患者（ポリマー生成をもたらすＡＡＴ変異を有する）は、過剰なフォールディング異常のＡＡＴタンパク質の堆積及び蓄積によって引き起こされる小胞体肝臓蓄積症に対しては無防備なままである。肝細胞の「小球」コンフォメーションに蓄積されたＺ－ＡＡＴタンパク質は、ＡＡＴＤ肝疾患の周知の組織学的特徴であり、ＡＡＴＤ患者において肝細胞障害及び肝細胞死ならびに慢性肝障害を含めた肝損傷の誘発に関与するタンパク質毒性作用につながると考えられている（例えば、Ｄ．Ｌｉｎｄｂｌａｄ ｅｔ ａｌ．，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ２００７，４６：１２２８－１２３５参照）。ＡＡＴを産生しないヌル／ヌル患者は、重症肺疾患を発症するが、正常な肝臓の形態を有することが報告されており、血中ＡＡＴの欠如ではなく、変異ＡＡＴの蓄積が、肝疾患につながるという証拠を提供している（Ｆｅｌｄｍａｎ，Ｇ． ｅｔ ａｌ，Ｔｈｅ Ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ａｌｐｈａ－１ ａｎｔｉｔｒｙｐｓｉｎ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗｉｔｈ ｇｅｎｏｔｙｐｅ Ｐｉ＿，Ｇｕｔ．１９７５；１６：７９６－７９９）。

ＡＡＴＤは、小児及び成人では肝疾患に罹患しやすく、成人では若年発症性肺気腫に罹患しやすくする。ＡＡＴＤ患者は、多くの場合肝疾患を発症し、幼年期であっても重篤または致命的になり得る。一部のＡＡＴＤ患者は、最初は検出を逃れるが、いずれは線維化が蓄積し、臨床的に明らかな肝疾患を引き起こす。肝臓の損傷の臨床症状としては、慢性肝炎、肝硬変、肝細胞癌のリスクの増加、高トランスアミナーゼ血症、胆汁うっ滞、線維化、さらには劇症肝不全が挙げられる。

肝細胞におけるＺ－ＡＡＴタンパク質小球の蓄積は、ＡＡＴＤ患者における進行性肝疾患の原因としてはっきりと認められている。肝細胞における変異タンパク質の蓄積を排除すると、肝疾患の進行が停止する可能性がある。変異タンパク質損傷の除去はまた、既存の線維化の退行を可能にする場合もある。現在、ＡＡＴＤによって引き起こされる肝疾患の発症の予防、進行の遅延、またはそれ以外の治療に対して臨床的に承認された治療法は存在しない。

ＲＮＡｉ剤は、ＡＡＴＤ患者を治療するための有望な手段として浮上している。投薬方法は、ＲＮＡｉ剤によるＡＡＴＤの治療で考慮すべき重要な事柄である。投与頻度の減少は、患者にとって大事であり、服薬順守の向上につながり、少ない投与量は、薬物の全体的な安全性プロファイルに有利であり得る。従って、ＡＡＴＤの治療のための低用量で低頻度の方法が必要である。

本明細書に記載するのは、アルファ－１アンチトリプシン欠乏症（ＡＡＴＤ）の治療を必要とするヒト対象におけるその治療法である。１つの態様では、該方法は、該ヒト対象に対して、表２に記載の組成物（すなわち、ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬、本明細書ではＡＤＳ－００１とも呼ばれる）を含む医薬組成物を、ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬約５ｍｇ～約３００ｍｇの用量で投与することを含むとともに、該医薬組成物は、皮下に投与され、投与間には、少なくとも約１か月が存在する（すなわち、少なくとも月１回の投与）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法で使用される医薬組成物は、表３に記載の製剤化ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（本明細書ではＡＤＳ－００１－１とも呼ばれる）を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる。

さらに、本明細書に記載するのは、ＡＡＴＤの治療を必要とするヒト対象におけるその治療法であり、該方法は、該ヒト対象に対して、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（すなわち、ＡＤＳ－００１）を含む医薬組成物を、約５ｍｇ～約２００ｍｇの用量で投与することを含むとともに、該医薬組成物は、皮下に投与され、用量投与間には、少なくとも約１か月が存在する（すなわち、月１回の投与）。

さらに本明細書に記載するのは、ＡＡＴＤの治療を必要とするヒト対象におけるその治療法であり、該方法は、該ヒト対象に対して、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（すなわち、ＡＤＳ－００１）を含む医薬組成物を、約５ｍｇ～約３００ｍｇの用量で投与することを含むとともに、該医薬組成物は、皮下に投与され、用量投与間には、約３か月が存在する（すなわち、３か月ごとの投与）。

同様に本明細書に記載するのは、ＡＡＴＤの治療を必要とするヒト対象におけるその治療法であり、該方法は、該ヒト対象に対して、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（すなわち、ＡＤＳ－００１）を含む医薬組成物を、約５ｍｇ～約２００ｍｇの用量で投与することを含むとともに、該医薬組成物は、皮下に投与され、用量投与間には、約３か月が存在する（すなわち、３か月ごとの投与）。

本明細書に記載するのは、ＡＡＴＤの治療を必要とするヒト対象におけるその治療法であり、該方法は、該ヒト対象に対して、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（すなわち、ＡＤＳ－００１）を含む医薬組成物を、約５ｍｇ～約３００ｍｇの用量で投与することを含むとともに、該医薬組成物は、皮下に投与され、最初の投与に続いて、約１か月後に２回目が投与され、その後、次の投与に関しては、用量投与間に約３か月が存在する。

本明細書に記載するのは、ＡＡＴＤの治療を必要とするヒト対象におけるその治療法であり、該方法は、該ヒト対象に対して、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（すなわち、ＡＤＳ－００１）を含む医薬組成物を、約５ｍｇ～約２００ｍｇの用量で投与することを含むとともに、該医薬組成物は、皮下に投与され、最初の投与に続いて、約１か月後に２回目が投与され、その後、次の投与に関しては、用量投与間に約３か月が存在する。

いくつかの実施形態では、各投与で施用されるＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の用量は、約２５ｍｇ～約２００ｍｇである。いくつかの実施形態では、各投与で施用されるＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の用量は、約１００ｍｇ～約２００ｍｇである。いくつかの実施形態では、各投与で施用されるＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の用量は、約１００ｍｇである。いくつかの実施形態では、各投与で施用されるＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の用量は、約２００ｍｇである。いくつかの実施形態では、各投与で施用されるＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の用量は、２００ｍｇ以下である。

本明細書に開示する治療法は、ＡＡＴＤを有するヒト対象において、肝疾患の進行を減速または停止することができ、それにより、線維性組織の修復をさせることができる。本明細書に開示する方法により、いくつかの実施形態では、線維化、肝硬変、肝細胞癌のリスクの増加、慢性肝炎、高トランスアミナーゼ血症、胆汁うっ滞、劇症肝不全、ならびにＡＡＴＤによって引き起こされる他の肝臓関連の状態及び疾患を含めたＡＡＴＤ肝疾患を治療することができる。

本明細書に開示するＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物をヒト対象に投与し、該対象におけるアルファ－１アンチトリプシン遺伝子の発現を阻害することができる。いくつかの実施形態では、該対象は、以前にＡＡＴＤを有すると診断されたことがあるヒトである。

本発明の別の態様は、アルファ－１アンチトリプシン欠乏症（ＡＡＴＤ）の治療を必要とするヒト対象におけるその治療のための、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の使用を提供し、該使用は、該患者に対して、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬を含む医薬組成物を、該ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬約５ｍｇ～約３００ｍｇの用量で投与することを含むとともに、該医薬組成物は、毎月１回、皮下注射によって投与される。

本発明の別の態様は、アルファ－１アンチトリプシン欠乏症（ＡＡＴＤ）の治療を必要とするヒト対象におけるその治療のための、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の使用を提供し、該使用は、該患者に対して、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬を含む医薬組成物を、該ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬約５ｍｇ～約３００ｍｇの用量で投与することを含むとともに、該医薬組成物は、３か月に１回、皮下注射によって投与される。

本発明の他の目的、特徴、態様、及び利点は、以下の発明を実施するための形態、添付の図面、及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。

ナトリウム塩型で示される、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の化学構造表現（本明細書では、ＡＤＳ－００１と呼ばれる。すなわち、センス鎖の５’末端で標的指向性三座Ｎ－アセチル－ガラクトサミン基にコンジュゲートしたＡＡＴ ＲＮＡｉ剤）。 ナトリウム塩型で示される、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の化学構造表現（本明細書では、ＡＤＳ－００１と呼ばれる。すなわち、センス鎖の５’末端で標的指向性三座Ｎ－アセチル－ガラクトサミン基にコンジュゲートしたＡＡＴ ＲＮＡｉ剤）。 ナトリウム塩型で示される、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の化学構造表現（本明細書では、ＡＤＳ－００１と呼ばれる。すなわち、センス鎖の５’末端で標的指向性三座Ｎ－アセチル－ガラクトサミン基にコンジュゲートしたＡＡＴ ＲＮＡｉ剤）。 ナトリウム塩型で示される、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の化学構造表現（本明細書では、ＡＤＳ－００１と呼ばれる。すなわち、センス鎖の５’末端で標的指向性三座Ｎ－アセチル－ガラクトサミン基にコンジュゲートしたＡＡＴ ＲＮＡｉ剤）。 ナトリウム塩型で示される、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の化学構造表現（本明細書では、ＡＤＳ－００１と呼ばれる。すなわち、センス鎖の５’末端で標的指向性三座Ｎ－アセチル－ガラクトサミン基にコンジュゲートしたＡＡＴ ＲＮＡｉ剤）。 遊離酸型で示される、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の化学構造表現。 遊離酸型で示される、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の化学構造表現。 遊離酸型で示される、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の化学構造表現。 遊離酸型で示される、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の化学構造表現。 遊離酸型で示される、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の化学構造表現。 表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（本明細書では、ＡＤＳ－００１と呼ばれる。すなわち、センス鎖の５’末端で標的指向性三座Ｎ－アセチル－ガラクトサミン基にコンジュゲートしたＡＡＴ ＲＮＡｉ剤）の修飾センス鎖及びアンチセンス鎖の概略図。図３では、次の略語が使用されている：ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドであり、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、２’－フルオロ（当技術分野では２’－デオキシ－２’－フルオロとも呼ばれる）修飾ヌクレオチドであり、ｏは、ホスホジエステル結合であり、ｓは、ホスホロチオエート結合であり、ｉｎｖＡｂは、反転脱塩基残基またはサブユニットであり、（ＮＡＧ３７）ｓは、次の化学構造を有する標的指向性三座Ｎ－アセチル－ガラクトサミンリガンドである。

（ナトリウム塩型で示される）、

（遊離酸型で示される）。
実施例２に記載の第Ｉ相臨床試験の最終第Ｉ相試験デザイン及び用量漸増スケジュール。 実施例２に記載の第Ｉ相臨床試験から、プラセボ（すべてのコホート）または３５ｍｇのＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（コホート１）を投与した健常ヒト志願者（ＮＨＶ）の血清ＡＡＴレベルを示すグラフ。図５～１１に示される、「活性物質」とは、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬を指す（表３に記載の製剤化ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬として投与）。 実施例２に記載の第Ｉ相臨床試験から、プラセボ（すべてのコホート）または単回１００ｍｇ用量のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（コホート２ｂ）を投与したＮＨＶの血清ＡＡＴレベルを示すグラフ。 実施例２に記載の第Ｉ相臨床試験から、プラセボ（すべてのコホート）または単回２００ｍｇ用量のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（コホート３ｂ）を投与したＮＨＶの血清ＡＡＴレベルを示すグラフ。 実施例２に記載の第Ｉ相臨床試験から、プラセボ（すべてのコホート）または単回３００ｍｇ用量のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（コホート４ｂ）を投与したＮＨＶの血清ＡＡＴレベルを示すグラフ。 実施例２に記載の第Ｉ相臨床試験から、プラセボ（すべてのコホート）または３回毎月投与１００ｍｇ用量のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（コホート２）を投与したＮＨＶの血清ＡＡＴレベルを示すグラフ。 実施例２に記載の第Ｉ相臨床試験から、プラセボ（すべてのコホート）または３回毎月投与２００ｍｇ用量のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（コホート３）を投与したＮＨＶの血清ＡＡＴレベルを示すグラフ。 実施例２に記載の第Ｉ相臨床試験から、プラセボ（すべてのコホート）または３回毎月投与３００ｍｇ用量のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（コホート４）を投与したＮＨＶの血清ＡＡＴレベルを示すグラフ。

ＲＮＡｉ剤
本明細書に記載の方法は、ヒト対象への医薬組成物の投与を含むとともに、該医薬組成物は、ＡＡＴ遺伝子の発現を阻害することが可能なＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤（本明細書及び当技術分野では、ＲＮＡｉ剤またはＲＮＡｉトリガーと呼ばれる）を含む組成物を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、ヒト対象への医薬組成物の投与を含むとともに、該医薬組成物は、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（ＡＤＳ－００１とも呼ばれる）を含む。本明細書に開示する方法での使用に適した組成物は、ヒト対象においてＡＡＴ遺伝子の発現を阻害するＲＮＡｉ剤、及び標的指向性部分または標的指向性基から構成される。いくつかの実施形態では、該ＲＮＡｉ剤は、表１Ａ及び１Ｂに示すヌクレオチド配列を含むとともに、該ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、さらに、３つの標的指向性Ｎ－アセチル－ガラクトサミン部分を含む標的指向性基に連結またはコンジュゲートされる（例えば、表Ｂ参照）。ヒト対象においてＡＡＴ遺伝子の発現を阻害するＲＮＡｉ剤は、「ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤」と呼ばれる。

一般に、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、センス鎖（パッセンジャー鎖とも呼ばれる）及びアンチセンス鎖（ガイド鎖とも呼ばれる）を含み、これらはアニールされて二重鎖を形成する。本明細書に開示するＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、配列特異的に、ＡＡＴのメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）のｍＲＮＡ転写物を分解することまたはその翻訳を阻害することが可能なＲＮＡまたはＲＮＡ様（例えば、化学修飾ＲＮＡ）オリゴヌクレオチド分子を含む。本明細書に開示するＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡ干渉メカニズム（すなわち、哺乳類細胞のＲＮＡ干渉経路機構（ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体もしくはＲＩＳＣ）との相互作用を介してＲＮＡ干渉を誘導する）、または任意の代替的なメカニズム（複数可）もしくは経路（複数可）を介して動作し得る。本明細書で使用される用語、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、主にＲＮＡ干渉メカニズムを介して動作すると考えられているが、本開示のＲＮＡｉ剤は、いかなる特定の経路にも作用機序にも拘束されることも限定されることもない。ＲＮＡｉ剤は一般に、各々１６～４９ヌクレオチド長のセンス鎖及びアンチセンス鎖から構成され、低分子（ｓｈｏｒｔ）または低分子（ｓｍａｌｌ）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及びダイサー基質を含むが、これらに限定されない。

ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の長さは、通常、１６～４９ヌクレオチド長であり、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖の長さは、通常、１８～４９ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、該センス鎖及びアンチセンス鎖は、独立して、１７～２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、該センス鎖及びアンチセンス鎖は、独立して、２１～２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、該センス鎖及びアンチセンス鎖は、独立して、２１～２４ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、該センス鎖及び／またはアンチセンス鎖は、独立して、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、該センス鎖及びアンチセンス鎖は、ともに２１ヌクレオチド長である。該センス鎖及びアンチセンス鎖は、同じ長さでも異なる長さでもよい。該センス鎖及びアンチセンス鎖はまた、当該ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の一端または両端にオーバーハングヌクレオチドを形成することもできる。

ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＡＴ遺伝子の発現を阻害、サイレンシング、またはノックダウンする。本明細書で使用される、ＡＡＴの発現に言及する場合の「サイレンシングする」、「低減する」、「阻害する」、「下方制御する」、または「ノックダウンする」という用語は、該遺伝子から転写されたＲＮＡのレベル、または該遺伝子が転写される細胞、細胞群、組織、器官、もしくは対象のｍＲＮＡから翻訳されるポリペプチド、タンパク質、もしくはタンパク質のサブユニットのレベルによって測定される該遺伝子の発現が、該細胞、細胞群、組織、器官、または対象が、該ＲＮＡｉ剤で処理された場合に、かかる処理をされなかった第二の細胞、細胞群、組織、器官、または対象と比較して低下することを意味する。場合によっては、該遺伝子発現の低下は、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む組成物を投与する前のヒト対象におけるＡＡＴ ｍＲＮＡまたはＡＡＴタンパク質のベースラインレベルを、該治療を施した後のＡＡＴ ｍＲＮＡまたはＡＡＴタンパク質のレベルと比較することによって測定される。

ＡＡＴ遺伝子の阻害、サイレンシング、またはノックダウンは、当技術分野で既知の任意の適切なアッセイまたは方法によって測定してもよい。本明細書に記載の非限定的な実施例、及び参照することにより全体として本明細書に組み込まれる国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／１３２４３２号（特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０１３１０２号）に記載の実施例は、ＡＡＴ遺伝子の発現阻害を測定するために適切なアッセイのある特定の例を示している。健康なヒトの参照ＡＡＴ ｍＲＮＡ遺伝子転写物（ＳＥＲＰＩＮＡ１）（転写物バリアント１と呼ばれる。ＧｅｎＢａｎｋ ＮＭ＿０００２９５．４）は、配列番号１に見出すことができる。

本明細書に開示する方法での使用に適したＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、１つ以上のＮ－アセチル－ガラクトサミン部分を含む標的指向性基に共有結合的に連結またはコンジュゲートされ得る。実施形態では、本明細書に開示する方法での使用に適したＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、１つ以上のＮ－アセチル－ガラクトサミン部分を含む標的指向性基に共有結合的に連結またはコンジュゲートされ、それにより、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬を形成する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬を投与することを含む。表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬は、表１Ａ（アンチセンス鎖）及び表１Ｂ（センス鎖）に示すＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む。該Ｎ－アセチル－ガラクトサミン部分は、肝細胞の表面に容易に存在するアシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰｒ）への該ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の標的化を促進し、これが、エンドサイトーシスまたは他の手段による該ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の内在化につながる。

本明細書に開示する方法での使用に適し得るＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ＡＡＴ ｍＲＮＡの少なくとも一部に対して相補性の領域を有するアンチセンス鎖を含む。本開示の方法での使用に適したＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及びＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬は、前述の通り、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／１３２４３２号（特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０１３１０２号）に記載されている。

本明細書で使用される、「配列」及び「ヌクレオチド配列」という用語は、核酸塩基またはヌクレオチドの並びまたは順序を意味し、標準的な命名法を使用した一連の文字で示される。本明細書で使用される、「核酸塩基」及び「ヌクレオチド」という用語は、当技術分野で一般に理解されているものと同じ意味を有する。

本明細書で使用される、第一のヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖）を第二のヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖または標的ｍＲＮＡ配列）との関連で示すために使用される場合の「相補的」という用語は、該第一のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドが、該第二のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドと、哺乳類の生理的条件（または他の適切な条件）下でハイブリダイズし（塩基対の水素結合を形成し）、ある特定の標準条件下で二重鎖または二重らせん構造を形成する能力を意味する。当業者には、ハイブリダイゼーション試験に最適な一連の条件を選択することが可能であろう。相補的配列には、ワトソン・クリック塩基対または非ワトソン・クリック塩基対が含まれ、少なくとも上記のハイブリダイゼーション要件が満たされる範囲で、天然もしくは修飾ヌクレオチドまたはヌクレオチド模倣物が含まれる。配列の同一性または相補性は、修飾とは無関係である。例えば、本明細書で定義される、ａ及びＡｆは、Ｕ（またはＴ）と相補的であり、同一性または相補性の決定においてはＡと同一である。

本明細書で使用される、「完全に相補的」または「十分に相補的」とは、第一のオリゴヌクレオチドの連続した配列における塩基のすべて（１００％）が、第二のオリゴヌクレオチドの連続した配列における同数のヌクレオチドとハイブリダイズすることを意味する。該連続した配列は、第一または第二のヌクレオチド配列のすべてを含む場合もあれば、一部を含む場合もある。

本明細書で使用される、「部分的に相補的」とは、ヌクレオチド配列のハイブリダイズした対において、第一のオリゴヌクレオチドの連続した配列における塩基のすべてではないが、少なくとも７０％が、第二のポリヌクレオチドの連続した配列における同数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。

本明細書で使用される、「実質的に相補的」とは、ヌクレオチド配列のハイブリダイズした対において、第一のオリゴヌクレオチドの連続した配列における塩基のすべてではないが、少なくとも８５％が、第二のポリヌクレオチドの連続した配列における同数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。本明細書において、「相補的」、「十分に相補的」、「部分的に相補的」、及び「実質的に相補的」という用語は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖とアンチセンス鎖との間、またはＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖とＡＡＴ ｍＲＮＡの配列の間のヌクレオチドの一致に関して使用される。

本明細書で使用される、核酸配列に適用される「実質的に同一」または「実質的に同一性」という用語は、ある核酸配列が、参照配列に対して、少なくとも約８５％以上の配列同一性、例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の同一性を有する配列を含むことを意味する。配列同一性のパーセンテージは、比較ウィンドウにわたって最適に整列された２つの配列を比較することによって決定される。該パーセンテージは、一致した位置の数を得るために両配列に同一の核酸塩基が生じる位置の数を測定し、一致した位置の数を比較ウィンドウ内の全位置数で除し、配列同一性のパーセンテージを得るためにその結果に１００をかけることによって計算される。本明細書に開示する本発明は、本明細書に開示するものと実質的に同一のヌクレオチド配列を包含する。

修飾ヌクレオチド及び修飾ヌクレオシド間結合
本明細書に開示するＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、修飾ヌクレオチドから構成される場合があり、該修飾ヌクレオチドは、ヒトにおいて、該ＲＮＡｉ剤の活性を維持することができると同時にその血清安定性を高め、インターフェロン活性を活性化する可能性を最小限に抑えることができる。本明細書で使用される、「修飾ヌクレオチド」は、リボヌクレオチド（２’－ヒドロキシルヌクレオチド）以外のヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、該ヌクレオチドの少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％）が修飾ヌクレオチドである。本明細書で使用される、修飾ヌクレオチドとしては、当技術分野で既知の任意の既知の修飾ヌクレオチドが挙げられ、デオキシリボヌクレオチド、ヌクレオチド模倣物、２’－修飾ヌクレオチド、反転ヌクレオチド、修飾核酸塩基含有ヌクレオチド、架橋ヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、２’，３’－ｓｅｃｏヌクレオチド模倣物（アンロックド核酸塩基アナログ）、ロックドヌクレオチド、３’－Ｏ－メトキシ（２’ヌクレオシド間結合）ヌクレオチド、２’－Ｆ－アラビノヌクレオチド、５’－Ｍｅ，２’－フルオロヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ビニルホスホネート含有ヌクレオチド、及びシクロプロピルホスホネート含有ヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の該修飾ヌクレオチドは、２’－修飾ヌクレオチド（すなわち、５員糖環の２’位にヒドロキシル基以外の基を有するヌクレオチド）である。２’－修飾ヌクレオチドとしては、２’－Ｏ－メチルヌクレオチド、２’－デオキシ－２’－フルオロヌクレオチド（一般には、単に２’－フルオロヌクレオチドと呼ばれる）、２’－デオキシヌクレオチド、２’－メトキシエチル（２’－Ｏ－２－メトキシエチル）ヌクレオチド、２’－アミノヌクレオチド、及び２’－アルキルヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない。さらなる２’－修飾ヌクレオチドが当技術分野で既知である。所与のＲＮＡｉ剤のすべてのヌクレオチドが均一に修飾される必要はない。さらに、複数の修飾を単一のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤に組み込むこともできれば、その単一のヌクレオチドにさえ組み込むこともできる。ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、当技術分野で既知の方法によって合成及び／または修飾され得る。一方のヌクレオチドの修飾は、他方のヌクレオチドの修飾とは無関係である。

いくつかの実施形態では、核酸塩基（多くの場合、単に「塩基」と呼ばれる）が修飾され得る。当技術分野で一般に使用される、天然の核酸塩基としては、主要なプリン塩基であるアデニン及びグアニン、ならびに主要なピリミジン塩基であるシトシン、チミン、及びウラシルが挙げられる。核酸塩基を修飾して、これらに限定されないが、ユニバーサル塩基、疎水性塩基、無差別塩基、サイズ拡張塩基、及びフッ素化塩基を含めてもよい。（例えば、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ，Ｐ．ｅｄ．Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２００８参照）。かかる修飾核酸塩基（修飾核酸塩基を含むホスホロアミダイト化合物等）の合成は、当技術分野で既知である。

修飾核酸塩基としては、例えば、５－置換ピリミジン、６－アザピリミジンならびにＮ－２、Ｎ－６及びＯ－６置換プリン（例えば、２－アミノプロピルアデニン、５－プロピニルウラシル、または５－プロピニルシトシン）、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６－アルキル（例えば、６－メチル、６－エチル、６－イソプロピル、または６－ｎ－ブチル）誘導体、アデニン及びグアニンの２－アルキル（例えば、２－メチル、２－エチル、２－イソプロピル、または２－ｎ－ブチル）及び他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン、２－チオシトシン、５－ハロウラシル、シトシン、５－プロピニルウラシル、５－プロピニルシトシン、６－アゾウラシル、６－アゾシトシン、６－アゾチミン、５－ウラシル（プソイドウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－スルフヒドリル、８－チオアルキル、８－ヒドロキシならびに他の８－置換アデニン及びグアニン、５－ハロ（例えば、５－ブロモ）、５－トリフルオロメチル、ならびに他の５－置換ウラシル及びシトシン、７－メチルグアニン及び７－メチルアデニン、８－アザグアニン及び８－アザアデニン、７－デアザグアニン、７－デアザアデニン、３－デアザグアニン、ならびに３－デアザアデニンが挙げられる。

いくつかの実施形態では、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のすべてまたは実質的にすべてのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである。本明細書で使用される、存在するヌクレオチドの実質的にすべてが修飾ヌクレオチドであるＲＮＡｉ剤とは、センス鎖及びアンチセンス鎖の両方において４つ以下（すなわち、０、１、２、３、または４つ）のヌクレオチドがリボヌクレオチドである（すなわち、未修飾の）ＲＮＡｉ剤である。本明細書で使用される、存在するヌクレオチドの実質的にすべてが修飾ヌクレオチドであるセンス鎖とは、該センス鎖において２つ以下（すなわち、０、１、または２つ）のヌクレオチドがリボヌクレオチドであるセンス鎖である。本明細書で使用される、存在するヌクレオチドの実質的にすべてが修飾ヌクレオチドであるアンチセンス鎖とは、該センス鎖において２つ以下（すなわち、０、１、または２つ）のヌクレオチドがリボヌクレオチドであるアンチセンス鎖である。

いくつかの実施形態では、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の１つ以上のヌクレオチドは、非標準的な結合または骨格（すなわち、修飾ヌクレオシド間結合または修飾骨格）によって連結される。修飾ヌクレオシド間結合または骨格としては、ホスホロチオエート基、キラルホスホロチオエート、チオホスフェート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキル－ホスホトリエステル、アルキルホスホネート（例えば、メチルホスホネートまたは３’－アルキレンホスホネート）、キラルホスホネート、ホスフィネート、ホスホロアミデート（例えば、３’－アミノホスホロアミデート、アミノアルキルホスホロアミデート、またはチオノホスホロアミデート）、チオノアルキル－ホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、モルホリノ結合、通常の３’－５’結合を有するボラノホスフェート、ボラノホスフェートの２’－５’連結アナログ、またはヌクレオシド単位の隣接対が、３’－５’から５’－３’もしくは２’－５’から５’－２’に連結される反転極性を有するボラノホスフェートが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシド間結合または骨格は、リン原子を欠いている。リン原子を欠いている修飾ヌクレオシド間結合としては、短鎖アルキルまたはシクロアルキルの糖間結合、ヘテロ原子とアルキルもしくはシクロアルキルの混合糖間結合、または１つ以上の短鎖ヘテロ原子もしくはヘテロ環の糖間結合が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシド間骨格としては、シロキサン骨格、スルフィド骨格、スルホキシド骨格、スルホン骨格、ホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格、メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格、アルケン含有骨格、スルファメート塩骨格、メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ骨格、スルホネート及びスルホンアミド骨格、アミド骨格、ならびにＮ、Ｏ、Ｓ及びＣＨ_２の混合成分を有する他の骨格が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、１、２、３、４、５、または６個のホスホロチオエート結合を含むことができるか、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、または６個のホスホロチオエート結合を含むことができるか、または該センス鎖及びアンチセンス鎖の両方が、独立して、１、２、３、４、５、または６個のホスホロチオエート結合を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、１、２、３、または４個のホスホロチオエート結合を含むことができるか、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、１、２、３、または４個のホスホロチオエート結合を含むことができるか、または該センス鎖及びアンチセンス鎖の両方が、独立して、１、２、３、または４個のホスホロチオエート結合を含むことができる。

いくつかの実施形態では、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、少なくとも２つのホスホロチオエートのヌクレオシド間結合を含む。いくつかの実施形態では、該少なくとも２つのホスホロチオエートのヌクレオシド間結合は、センス鎖の３’末端からの位置１～３のヌクレオチド間にある。いくつかの実施形態では、該少なくとも２つのホスホロチオエートのヌクレオシド間結合は、センス鎖の５’末端からの位置１～３、２～４、３～５、４～６、４～５、または６～８のヌクレオチド間にある。いくつかの実施形態では、ホスホロチオエートのヌクレオシド間結合は、センス鎖の末端ヌクレオチドを、該ヌクレオチド配列の５’末端、３’末端、または５’及び３’の両末端に存在するキャッピング残基に連結するために使用される。いくつかの実施形態では、ホスホロチオエートのヌクレオシド間結合は、標的指向性基をセンス鎖に連結するために使用される。

いくつかの実施形態では、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、３つまたは４つのホスホロチオエートのヌクレオシド間結合を含む。いくつかの実施形態では、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、３つのホスホロチオエートのヌクレオシド間結合を含む。いくつかの実施形態では、該３つのホスホロチオエートのヌクレオシド間結合は、アンチセンス鎖の５’末端からの位置１～３のヌクレオチド間、及び該５’末端からの位置１９～２１、２０～２２、２１～２３、２２～２４、２３～２５、または２４～２６のヌクレオチド間にある。いくつかの実施形態では、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、少なくとも２つのホスホロチオエートのヌクレオシド間結合をセンス鎖に含み、３つまたは４つのホスホロチオエートのヌクレオシド間結合をアンチセンス鎖に含む。

いくつかの実施形態では、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の修飾ヌクレオチド及び１つ以上のヌクレオシド間結合を含む。いくつかの実施形態では、２’－修飾ヌクレオシドは、修飾ヌクレオシド間結合と組み合わされる。

キャッピング残基または部分
いくつかの実施形態では、該センス鎖は、当技術分野で「キャップ」、「末端キャップ」、または「キャッピング残基」と呼ばれることもある１つ以上のキャッピング残基または部分を含み得る。本明細書で使用される、「キャッピング残基」とは、本明細書に開示するＲＮＡｉ剤のヌクレオチド配列の１つ以上の末端に組み込むことができる非ヌクレオチド化合物または他の部分である。キャッピング残基は、場合によっては、ある特定の有益な特性、例えば、エキソヌクレアーゼ分解からの防御等をＲＮＡｉ剤に提供し得る。いくつかの実施形態では、反転脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）（当技術分野では「反転脱塩基部位」とも呼ばれる）が、キャッピング残基として付加される（表Ａ参照）。（例えば、Ｆ．Ｃｚａｕｄｅｒｎａ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２００３，３１（１１），２７０５－１６参照）。キャッピング残基は、当技術分野では一般に知られており、例えば、反転脱塩基残基及び末端Ｃ_３Ｈ_７（プロピル）、Ｃ_６Ｈ_１３（ヘキシル）、またはＣ_１２Ｈ_２５（ドデシル）基等の炭素鎖を含む。いくつかの実施形態では、キャッピング残基は、該センス鎖の５’末端、３’末端、または５’及び３’の両末端に存在する。いくつかの実施形態では、該センス鎖の５’末端及び／または３’末端は、キャッピング残基として２つ以上の反転脱塩基デオキシリボース部分を含み得る。

いくつかの実施形態では、１つ以上の反転脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）が、該センス鎖の３’末端に付加される。いくつかの実施形態では、１つ以上の反転脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）が、該センス鎖の５’末端に付加される。いくつかの実施形態では、１つ以上の反転脱塩基残基または反転脱塩基部位が、標的指向性リガンドとＲＮＡｉ剤のセンス鎖のヌクレオチド配列との間に挿入される。いくつかの実施形態では、１つ以上の反転脱塩基残基または反転脱塩基部位を、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の末端（複数可）にまたはその近くに含むことにより、ＲＮＡｉ剤の活性の向上または他の所望の特性の向上が可能になる。

いくつかの実施形態では、１つ以上の反転脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）が、該センス鎖の５’末端に付加される。いくつかの実施形態では、１つ以上の反転脱塩基残基が、標的指向性リガンドとＲＮＡｉ剤のセンス鎖のヌクレオチド配列との間に挿入され得る。該反転脱塩基残基は、ホスフェート、ホスホロチオエート（例えば、本明細書では（ｉｎｖＡｂ）ｓ）として示される）、または他のヌクレオシド間結合を介して結合され得る。反転脱塩基デオキシリボース残基の化学構造は、以下の表Ａ、ならびに図１Ａ～１Ｅ及び図２Ａ～２Ｅに示す化学構造に示されている。

標的指向性部分及び標的指向性基
ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、標的指向性部分または標的指向性基が挙げられるがこれらに限定されない１つ以上の非ヌクレオチド基にコンジュゲートされ得る。標的指向性部分または標的指向性基は、ＲＮＡｉ剤の標的化または送達を増強することができる。標的指向性部分及び標的指向性基の例は当技術分野で既知である。３つの標的指向性Ｎ－アセチル－ガラクトサミン部分を含む本明細書の表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬で使用される標的指向性（ＮＡＧ３７）ｓ基の特定の例を表Ｂに示す。該標的指向性部分または標的指向性基は、該センス鎖及び／またはアンチセンス鎖のいずれかの３’及び／または５’末端に共有結合させることができる。いくつかの実施形態では、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、該センス鎖の３’及び／または５’末端に連結された標的指向性基を含む。いくつかの実施形態では、標的指向性基は、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端に連結される。いくつかの実施形態では、該標的指向性基は、構造（ＮＡＧ３７）ｓを含むか、それから本質的になるか、またはそれからなり、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端に連結される。標的指向性基は、該ＲＮＡｉ剤に、直接またはリンカー／連結基を介して間接的に連結され得る。いくつかの実施形態では、標的指向性基は、該ＲＮＡｉ剤に、不安定な、切断可能な、または可逆的な結合またはリンカーを介して連結される。いくつかの実施形態では、標的指向性基は、該センス鎖の５’末端で、反転脱塩基残基に連結される。

標的指向性基または標的指向性部分は、それらが結合しているコンジュゲートまたはＲＮＡｉ剤の薬物動態学的または生体内分布特性を増強して、該コンジュゲートまたはＲＮＡｉ剤の細胞特異的分布及び細胞特異的取り込みを改善することができる。いくつかの実施形態では、標的指向性基は、該ＲＮＡｉ剤のエンドサイトーシスを増強する。標的指向性基は、それが向けられる標的に対して、一価、二価、三価、四価であるか、またはより高い価数を有し得る。代表的な標的指向性基としては、細胞表面分子に親和性のある化合物、細胞受容体リガンド、ハプテン、抗体、モノクローナル抗体、抗体断片、及び細胞表面分子に親和性のある抗体模倣物が挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、標的指向性基は、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドを含む。いくつかの実施形態では、アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、１つ以上のガラクトース誘導体を含むか、またはそれからなる。本明細書で使用される、ガラクトース誘導体という用語は、ガラクトース及び、該アシアロ糖タンパク質受容体に対する親和性が、ガラクトースのものと等しいか、それより高いガラクトース誘導体の両方を含む。ガラクトース誘導体としては、ガラクトース、ガラクトサミン、Ｎ－ホルミルガラクトサミン、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン、Ｎ－プロピオニル－ガラクトサミン、Ｎ－ｎ－ブタノイル－ガラクトサミン、及びＮ－イソ－ブタノイル－ガラクトサミンが挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ｓ．Ｔ．Ｉｏｂｓｔ ａｎｄ Ｋ．Ｄｒｉｃｋａｍｅｒ，Ｊ．Ｂ．Ｃ．，１９９６，２７１，６６８６参照）。オリゴヌクレオチド及び他の分子をインビボで肝臓に標的化するのに有用なガラクトース誘導体、及びガラクトース誘導体のクラスターは、当技術分野で既知である（例えば、Ｂａｅｎｚｉｇｅｒ ａｎｄ Ｆｉｅｔｅ，１９８０，Ｃｅｌｌ，２２，６１１－６２０、Ｃｏｎｎｏｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５７，９３９－９４５参照）。

ガラクトース誘導体は、分子を、肝細胞の表面で発現するアシアロ糖タンパク質受容体への結合を介して、インビボで肝細胞に標的化するために使用されてきた。アシアロ糖タンパク質受容体リガンドのアシアロ糖タンパク質受容体（複数可）への結合は、肝細胞に対する細胞特異的標的化及び該分子の肝細胞へのエンドサイトーシスを促進する。アシアロ糖タンパク質受容体リガンドは、単量体（例えば、単一のガラクトース誘導体を有する）でも多量体（例えば、複数のガラクトース誘導体を有する）でもよい。該ガラクトース誘導体またはガラクトース誘導体の「クラスター」は、該ＲＮＡｉ剤のセンス鎖またはアンチセンス鎖の３’または５’末端に、当技術分野で既知の方法を使用して結合され得る。

いくつかの実施形態では、標的指向性基は、ガラクトース誘導体のクラスターを含む。本明細書で使用される、ガラクトース誘導体のクラスターは、２～４つの末端ガラクトース誘導体を有する分子を含む。末端ガラクトース誘導体は、そのＣ－１炭素を介して分子に結合する。いくつかの実施形態では、該ガラクトース誘導体のクラスターは、ガラクトース誘導体の三量体（三分岐ガラクトース誘導体または三価ガラクトース誘導体とも呼ばれる）である。いくつかの実施形態では、該ガラクトース誘導体のクラスターは、Ｎ－アセチル－ガラクトサミンを含む。いくつかの実施形態では、該ガラクトース誘導体のクラスターは、３つのＮ－アセチル－ガラクトサミンを含む。いくつかの実施形態では、該ガラクトース誘導体のクラスターは、ガラクトース誘導体の四量体（四分岐ガラクトース誘導体または四価ガラクトース誘導体とも呼ばれる）である。いくつかの実施形態では、該ガラクトース誘導体のクラスターは、４つのＮ－アセチル－ガラクトサミンを含む。

本明細書で使用される、ガラクトース誘導体の三量体は、３つのガラクトース誘導体を含み、その各々が中央の分岐点に連結されている。本明細書で使用される、ガラクトース誘導体の四量体は、４つのガラクトース誘導体を含み、その各々が中央の分岐点に連結されている。該ガラクトース誘導体は、該糖のＣ－１炭素を介して中央の分岐点に結合され得る。いくつかの実施形態では、該ガラクトース誘導体は、リンカーまたはスペーサーを介して該分岐点に連結される。いくつかの実施形態では、該リンカーまたはスペーサーは、柔軟な親水性スペーサー、例えば、ＰＥＧ基である（例えば、米国特許第５，８８５，９６８号、Ｂｉｅｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１９９５ Ｖｏｌ．３９ ｐ．１５３８－１５４６参照）。該分岐点は、３つのガラクトース誘導体の結合を可能にし、さらに該分岐点の該ＲＮＡｉ剤への結合を可能にする任意の小分子であり得る。分岐点群の例は、ジリジンまたはジグルタミン酸である。該分岐点の該ＲＮＡｉ剤への結合は、リンカーまたはスペーサーを介して行うことができる。いくつかの実施形態では、該リンカーまたはスペーサーは、柔軟な親水性スペーサー、例えば、限定されないが、ＰＥＧスペーサーを含む。いくつかの実施形態では、該リンカーは、剛直なリンカー、例えば、環状基を含む。いくつかの実施形態では、ガラクトース誘導体は、Ｎ－アセチル－ガラクトサミンを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、該ガラクトース誘導体のクラスターは、ガラクトース誘導体の四量体から構成され、これは、例えば、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン四量体であり得る。

標的指向性基、例えば、Ｎ－アセチル－ガラクトサミンを含むガラクトース誘導体のクラスターの調製は、例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／０４４３５０号（特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２１１４７号）及び国際特許出願公開第ＷＯ２００７／１５６０１２号（特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２１１７５号）に記載されている。これら両公開の内容は、参照することにより全体として本明細書に組み込まれる。

例えば、表１Ａ及び１Ｂに記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤にコンジュゲートした標的指向性リガンドは、次の表Ｂに示すように、化学構造（ＮＡＧ３７）ｓを有する。

ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及びＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（ＡＤＳ－００１）
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法で使用されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、表２に示すＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（ＡＤＳ－００１）のヌクレオチド配列を有する。ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬に見出されるＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のヌクレオチド配列は、次の表１Ａに記載のアンチセンス鎖のヌクレオチド配列、及び次の表１Ｂに記載のセンス鎖のヌクレオチド配列を含む。

本明細書において表１Ａ、１Ｂ、及び２で使用される、以下の表記法は、修飾ヌクレオチド、標的指向性基、及び連結基を示すために使用される：Ａ、Ｇ、Ｃ、及びＵは、アデノシン、シチジン、グアノシン、またはウリジンを表し、ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、それぞれ、２’－Ｏ－メチルアデノシン、２’－Ｏ－メチルシチジン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、または２’－Ｏ－メチルウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、それぞれ、２’－フルオロアデノシン、２’－フルオロシチジン、２’－フルオログアノシン、または２’－フルオロウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート結合を表し、（ｉｎｖＡｂ）は、反転脱塩基デオキシリボース残基を表し（表Ａ参照）、（ＮＡＧ３７）ｓは、上記表Ｂに示す構造を表す。

当業者には容易に理解されるように、配列によって（例えば、ホスホロチオエート結合「ｓ」等によって）別段の指示がない限り、鎖中に存在する場合、該単量体は、５’－３’のホスホジエステル結合によって相互に連結される。当業者には明確に理解されるように、本明細書に開示する修飾ヌクレオチド配列に示されるホスホロチオエート結合を含むことにより、オリゴヌクレオチドに通常存在するホスホジエステル結合を置き換える。さらに、当業者には、所与のオリゴヌクレオチド配列の３’末端における末端ヌクレオチドが、エキソビボでのリン酸部分の代わりに、通常はヒドロキシル（－ＯＨ）基を、所与の単量体のそれぞれの３’位に有することが容易に理解されよう。さらに、本明細書に開示する実施形態では、それぞれの鎖を５’→３’に見た場合、該反転脱塩基残基は、デオキシリボースの３’位が、それぞれの鎖の先行する単量体の３’末端で連結されるように挿入される。さらに、当業者には容易に理解及び認識されるように、本明細書に示すホスホロチオエートの化学構造は通常その硫黄原子上にアニオンを示すが、本明細書に開示する本発明は、すべてのホスホロチオエート互変異性体（例えば、硫黄原子が二重結合を有し、アニオンが酸素原子上にある場合）を包含する。本明細書において別段の明確な指示がない限り、当業者のかかる理解は、本明細書に開示するＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及びＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む組成物を記載する際に使用される。

各センス鎖及び／またはアンチセンス鎖は、該配列の５’及び／または３’末端にコンジュゲートされた上記の任意の標的指向性基または連結基、及び他の標的指向性基または連結基を有し得る。

該ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖の配列は、正常及び変異の両ＡＡＴ遺伝子由来のｍＲＮＡ転写物を標的とするように設計され、それにより、ＡＡＴＤのヒト対象のＲＮＡ干渉メカニズムを使用して変異Ｚ－ＡＡＴタンパク質の翻訳をサイレンシングする。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法は、以下の表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬を使用する。

ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（ＡＤＳ－００１）の概略図を図３に示し、完全な化学構造の表現を図１Ａ～１Ｅ（ナトリウム塩型）及び図２Ａ～２Ｅ（遊離酸型）に示す。いくつかの実施形態では、該ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬は、塩、混合塩、または遊離酸として調製または提供される。好ましい実施形態では、その型はナトリウム塩である。

医薬組成物及び製剤
本明細書に開示する方法での使用に適したＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、ヒト対象に投与するための医薬組成物または製剤として調製され得る。該医薬組成物は、ＡＡＴ ｍＲＮＡの発現の阻害またはＡＡＴタンパク質のレベルの低下が有効であろう疾患または障害を有する対象、例えば、ＡＡＴＤを有するヒト対象を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、該方法は、治療を必要とする対象に対して、本明細書に記載の標的指向性基または標的指向性リガンドに連結されたＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の医薬的に許容される賦形剤（媒体、担体、希釈剤、及び／または送達ポリマー等）が、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物に添加され、それにより、ヒト対象へのインビボ送達に適した製剤が形成される。

ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物は、本明細書に開示する方法を使用してヒト対象に投与された場合、該対象におけるＡＡＴ ｍＲＮＡのレベルを低下させる。

いくつかの実施形態では、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む本記載の医薬組成物は、ＡＡＴＤ、例えば、慢性肝炎、肝硬変、肝細胞癌のリスクの増加、高トランスアミナーゼ血症、胆汁うっ滞、線維化、さらには劇症肝不全の対象における臨床症状を治療するためまたは管理するために使用される。いくつかの実施形態では、治療有効量または予防有効量の１つ以上の医薬組成物が、かかる治療を必要とする対象に投与される。いくつかの実施形態では、本開示のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤のいずれかの投与は、対象における疾患の症状の数、重症度、及び／または頻度を減少させるために使用され得る。

ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む本記載の医薬組成物は、ＡＡＴ ｍＲＮＡの発現の低下または阻害が有効であろう疾患または障害を有する対象における少なくとも１つの症状を治療するために使用され得る。いくつかの実施形態では、該対象は、該症状を治療するＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む１つ以上の医薬組成物の治療有効量の投与を受ける。他の実施形態では、該対象は、該少なくとも１つの症状を予防する１つ以上のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の予防有効量の投与を受ける。

本明細書に開示するＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、特定の経路に対して適切に調整された調製物で、任意の適切な経路を介して投与され得る。従って、本明細書に記載の医薬組成物は、注射によって、例えば、静脈内または皮下に投与され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、皮下注射を介して投与される。

本明細書で使用される、医薬組成物または薬剤は、薬理学的に有効な量の少なくとも１つのＡＡＴ ＲＮＡｉ剤及び１つ以上の医薬的に許容される賦形剤を含む。医薬的に許容される賦形剤（賦形剤）とは、医薬品有効成分（ＡＰＩ、治療薬、例えば、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤）以外の物質であり、薬物送達システムに意図的に含まれる。賦形剤は、意図した投与量で治療効果を発揮せず、発揮することを意図もしない。賦形剤は、ａ）製造中の薬物送達システムの処理を支援するように、ｂ）ＡＰＩの安定性、バイオアベイラビリティ、または患者の受容性を保護、支持、または増強するように、ｃ）製剤の識別を支援するように、及び／またはｄ）保存中または使用中のＡＰＩの全体的な安全性、有効性、または送達の任意の他の属性を増強するように作用し得る。医薬的に許容される賦形剤は、不活性物質であってもなくてもよい。

賦形剤としては、吸収促進剤、付着防止剤、消泡剤、酸化防止剤、結合剤、緩衝剤、担体、コーティング剤、着色剤、送達促進剤、送達ポリマー、デキストラン、デキストロース、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、増量剤、充填剤、香料、流動促進剤、吸湿剤、滑沢剤、油、ポリマー、防腐剤、生理食塩水、塩、溶媒、糖、懸濁剤、徐放性マトリックス、甘味料、増粘剤、等張化剤、媒体、撥水剤、及び湿潤剤が挙げられ得るが、これらに限定されない。

注射用途に適した医薬組成物としては、滅菌水溶液（水溶性の場合）が挙げられる。皮下投与または静脈内投与の場合、適切な担体としては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が挙げられ得る。これは、製造及び保存の条件下で安定であるべきであり、微生物、例えば、細菌及び真菌の汚染作用に対して保護されるべきである。該担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）を含む溶媒または分散媒、ならびにそれらの適切な混合物であり得る。

滅菌注射剤は、必要量の活性化合物を、適切な溶媒に、必要に応じて上記で列挙した成分の１つまたは組み合わせとともに入れ、その後濾過滅菌することによって調製され得る。一般に、分散液は、活性化合物を、基本的な分散媒及び上記で列挙したものから必要とされる他の成分を含む滅菌媒体に入れることによって調製される。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示する方法での使用に適した医薬組成物は、以下の表３に示す製剤化ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬で特定された成分を含む。

投与の簡便性及び用量の均一性のため、該ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤は、組成物に投薬単位形態で製剤化され得る。投薬単位形態とは、治療を受ける対象用の単一の用量として適した物理的に別々の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と共同して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含む。いくつかの実施形態では、該投薬単位は、ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬約５ｍｇ～約３００ｍｇである。いくつかの実施形態では、該投薬単位は、ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬約２５ｍｇ～約２００ｍｇである。いくつかの実施形態では、該投薬単位は、ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬約１００ｍｇ～約２００ｍｇである。いくつかの実施形態では、該投薬単位は、ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬約１００ｍｇである。いくつかの実施形態では、該投薬単位は、ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬約２００ｍｇである。

医薬組成物は、医薬組成物に一般に見られる他のさらなる成分を含むことができる。かかるさらなる成分としては、鎮痒薬、収斂薬、局所麻酔薬、または抗炎症剤（例えば、抗ヒスタミン剤、ジフェンヒドラミン等）が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される、「薬理学的に有効な量」、「治療有効量」、または単に「有効量」とは、ＲＮＡｉ剤が薬理学的、治療的または予防的な効果を生じる量を指す。

本記載の医薬的に許容される製剤は、キット、容器、パック、またはディスペンサーに包装され得る。本明細書に記載の医薬組成物は、プレフィルドシリンジまたはバイアルに包装され得る。

製剤化ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬
いくつかの実施形態では、表２に示すＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（ＡＤＳ－００１）は、１つ以上の医薬的に許容される賦形剤とともに製剤化され、ヒト対象に対する投与に適した医薬組成物を形成する。いくつかの実施形態では、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬は、水性リン酸ナトリウム緩衝液（０．５ｍＭリン酸二水素ナトリウム、０．５ｍＭリン酸水素二ナトリウム）中、２３０ｍｇ／ｍＬで製剤化され、表３に示す製剤化ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（ＡＤＳ－００１－１）を形成する。

表３の製剤化ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬は、滅菌製剤として調製される。いくつかの実施形態では、該製剤化ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬は、容器、例えば、ガラスバイアルに包装される。いくつかの実施形態では、該製剤化ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬は、容量約１．１ｍＬのガラスバイアルに包装され、投与に望ましい体積は、投与に望ましい用量レベルに基づいて計算され得る。

いくつかの実施形態では、表３に記載の製剤化ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬は、本明細書に開示する方法を使用してヒト対象に投与される。

ＡＡＴＤのヒト対象及びＡＡＴＤの診断
本明細書に開示する方法は、アルファ－１アンチトリプシン欠乏症（ＡＡＴＤ）の治療を必要とするヒト対象におけるその治療を含み、表２に記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬を含む医薬組成物を使用した、該ヒト対象においてＡＡＴＤによって引き起こされる症状及び疾患の治療を含む。いくつかの実施形態では、該ヒト対象は、ＡＡＴＤと診断された後に投与を受ける。本明細書で述べた通り、ＡＡＴＤは、フォールディング異常を起こしやすいいくつかの変異型が、肝細胞における細胞内保持につながるＡＡＴタンパク質の変異型の翻訳をもたらす遺伝子転写物の突然変異によって引き起こされる遺伝性障害である。ＳＥＲＰＩＮＡ１遺伝子の様々な変異が特定されているが、ＡＡＴＤの最も一般的で重篤な形態であるＰｉＺＺ遺伝子型は、単一の塩基対置換によって引き起こされる。ＰｉＺＺ遺伝子型の対象では、血中ＡＡＴレベルは、多くの場合、健康なヒトのレベルの１５％未満であると報告される。多くの場合、患者は最初、基礎疾患が特定されることなくＣＯＰＤ、喘息、または他の肺疾患と診断される。時間の経過とともに、ミスフォールドした（「Ｚ－ＡＡＴ」）タンパク質の細胞間保持及び肝細胞から該タンパク質を適切に分泌することができないことに起因して、肝疾患、例えば、線維化及び肝硬変が発症し得る。小児患者は通常、無症候性の慢性肝炎、成長障害、食欲不振、または肝腫大及び脾腫を含み得る肝疾患の臨床症状を示す。ＡＡＴＤは、対象の血液サンプルの標準的な遺伝子型決定によって診断及び確認され得る。

投与及びＡＡＴ遺伝子の発現阻害
一般に、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の有効量は、約０．１～約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲、例えば、約０．２５～約５ｍｇ／ｋｇ体重／日の範囲である。いくつかの実施形態では、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の有効量は、１用量あたり約０．５～約４ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。いくつかの実施形態では、該有効量は、固定用量である。いくつかの実施形態では、ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬５ｍｇ～３００ｍｇの固定用量が有効用量である。いくつかの実施形態では、ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬２５ｍｇ～２００ｍｇの固定用量が有効用量である。投与量は、総合的な患者の年齢及び健康状態、送達される化合物の相対的な生物学的効率、薬物の製剤、当該製剤における賦形剤の存在及びタイプ、ならびに投与経路等の可変要素に依存する可能性がある。いくつかの実施形態では、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、２６０、または２８０ｍｇ～約１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２０、２４０、２６０、２８０または３００ｍｇの固定用量が有効用量である。いくつかの実施形態では、約２５ｍｇ、約１００ｍｇ、または約２００ｍｇの固定用量が有効用量である。

また、最初に施用される投与量を、場合によっては、上記の上限レベルを超えて増加させ、所望の血中レベルまたは組織レベルを迅速に達成してもよいし、該最初の投与量を、場合によっては、最適量より少なくしてもよいことが理解される。例えば、いくつかの実施形態では、約２５ｍｇ～約２００ｍｇのＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の最初の用量が投与され、続いて約１か月後に、約２５～２００ｍｇのＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の２回目の用量が投与され、その後、さらなる用量（「維持用量」と同様の概念）が３か月に１回（すなわち、四半期に１回）投与される。

疾患の治療または疾患の治療のための薬剤もしくは組成物の生成に関して、ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を含む本明細書に記載の医薬組成物は、賦形剤または、第二のもしくは他のＲＮＡｉ剤、低分子薬物、抗体、抗体断片、ペプチド及び／またはアプタマーが挙げられるがこれらに限定されない第二の治療薬もしくは治療と組み合わせることができる。

いくつかの実施形態では、記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤が投与される対象におけるＡＡＴ遺伝子の遺伝子発現レベル及び／またはｍＲＮＡレベルは、該ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤が投与される前の該対象または該ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を受けない対象に対して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％超低下する。該対象における遺伝子発現レベル及び／またはｍＲＮＡレベルは、該対象の細胞、細胞群、及び／または組織において低下する。

いくつかの実施形態では、記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤が投与された対象におけるＡＡＴのタンパク質のレベルは、該ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤が投与される前の該対象または該ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を受けない対象に対して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％超低下する。該対象における該タンパク質のレベルは、該対象の細胞、細胞群、組織、血液、及び／または他の体液において低下する。

いくつかの実施形態では、記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤が投与されたＡＡＴＤを有する対象におけるＺ－ＡＡＴポリマータンパク質のレベルは、該ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤が投与される前の該対象または該ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を受けない対象に対して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％超低下する。いくつかの実施形態では、記載のＡＡＴ ＲＮＡｉ剤が投与された対象におけるＺ－ＡＡＴポリマータンパク質のレベルは、該ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤が投与される前の該対象または該ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤を受けない対象に対して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または９９％超低下する。

ＡＡＴ遺伝子の発現、ＡＡＴ ｍＲＮＡ、またはＡＡＴタンパク質のレベルの低下は、当技術分野で既知の一般的な方法によって評価及び定量化することができる。本明細書に開示する実施例は、ＡＡＴ遺伝子の発現の阻害及びＡＡＴタンパク質のレベルの低下を評価するための一般的に知られている方法である。該ＡＡＴ ｍＲＮＡのレベル及び／またはタンパク質のレベル（Ｚ－ＡＡＴポリマー及び／または単量体等）の低下または減少は、本明細書では、ＡＡＴの低下もしくは減少、またはＡＡＴの発現の阻害もしくは低下と総称される。

本明細書で使用される、「治療する」、「治療」等の用語は、対象における疾患の１つ以上の症状の数、重症度、及び／または頻度の軽減または緩和を提供するために行われる方法またはステップを意味する。本明細書で使用される、「治療する」及び「治療」は、対象における疾患の１つ以上の症状の数、重症度、及び／または頻度の防止、管理、予防的治療、及び／または阻害を含み得る。

本明細書で使用される、「月１回の投与」または「月１回」の投与とは、２８日ごとを意味する。本明細書で使用される、「３か月ごとの投与」または「３か月ごと」の投与とは、８４日ごとを意味する。月１回の投与に関連して使用される場合の「約」という用語は、月１回の投与＋／－３日間を意味する。３か月ごとの投与に関連して使用される場合の「約」という用語は、３か月ごとの投与＋／－９日間を意味する。

本明細書で使用される、ＲＮＡｉ剤に言及する場合の「細胞に導入する」という句は、該ＲＮＡｉ剤を細胞に機能的に送達することを意味する。「機能的送達」という句は、該ＲＮＡｉ剤が期待される生物活性、例えば、遺伝子発現の配列特異的阻害を有するようにする方法で、該ＲＮＡｉ剤を細胞に送達することを意味する。

特に明記しない限り、本明細書で使用される、記号

の使用は、本明細書に記載の本発明の範囲に従って、任意の基（複数可）がそれに連結され得ることを意味する。

本明細書で使用される場合、不斉中心が存在し、ひいてはエナンチオマー、ジアステレオマー、または他の立体異性コンフィギュレーションを生じさせる構造ごとに、構造中に特定のコンフォメーションを有するとして具体的に特定されない限り、本明細書に開示する各構造は、それらの光学的に純粋な型及びラセミ体を含め、すべてのかかる可能な異性体を表すことを意図している。例えば、本明細書に開示する構造は、単一の立体異性体だけでなく、ジアステレオマーの混合物もまた含むことを意図している。

本明細書における特許請求の範囲で使用される、「～からなる」という句は、当該特許請求の範囲で指定されていない任意の要素、ステップ、または成分を除外する。本明細書における特許請求の範囲で使用される、「～から本質的になる」という句は、特許請求の範囲を、特定の材料またはステップならびに請求項にかかる基本的及び新規な特徴（複数可）に実質的に影響を与えないものに限定する。

当業者には、本明細書に開示する化合物及び組成物が、ある特定の原子（例えば、Ｎ、Ｏ、またはＳ原子）を、該化合物または組成物が置かれる環境に応じて、プロトン化または脱プロトン化状態で有し得ることが容易に理解及び認識されよう。従って、本明細書で使用される、本明細書に開示する構造は、ある特定の官能基、例えば、ＯＨ、ＳＨ、またはＮＨ等がプロトン化される場合も脱プロトン化される場合もあることを想定している。本明細書の開示は、当業者には容易に理解されるように、環境（ｐＨ等）に基づくプロトン化の状態に関係なく、本開示の化合物及び組成物を含むことを意図している。

特に定義しない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または同等の方法及び材料が、本発明の実施または試験において使用され得るが、適切な方法及び材料を以下に記載する。本明細書で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、参照することにより全体として組み込まれる。矛盾する場合には、定義を含め、本明細書が統制する。さらに、該材料、方法、及び実施例は例示にすぎず、限定することを意図していない。

上記に示した実施形態及び項目を、以下の非限定的な実施例によりここで説明する。

実施例１．ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（ＡＤＳ－００１）の合成及び製剤化
本明細書に開示する方法での使用に適したＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬は、当技術分野で既知の、固相オリゴヌクレオチド合成における標準的なホスホロアミダイト技術を使用して合成することができる。市販のオリゴヌクレオチド合成装置（例えば、ＭｅｒＭａｄｅ９６Ｅ（登録商標）（Ｂｉｏａｕｔｏｍａｔｉｏｎ）またはＭｅｒＭａｄｅ１２（登録商標）（Ｂｉｏａｕｔｏｍａｔｉｏｎ））を使用してもよい。合成は、コントロールド・ポア・ガラス（ＣＰＧ、５００Åまたは６００Å、Ｐｒｉｍｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ａｓｔｏｎ，ＰＡ，ＵＳＡから入手）製の固体支持体上で行うことができる。それぞれの鎖の３’末端に配置された単量体が、合成の開始点としてこの固体支持体に結合され得る。すべてのＲＮＡ、２’－修飾ＲＮＡホスホロアミダイト、及び反転脱塩基ホスホロアミダイトは、商業的に入手することができる。センス鎖の５’末端への付加に適した標的指向性基含有ホスホロアミダイトを合成することができる。当技術分野で既知の標準的な切断、脱保護、精製、及びアニーリングステップを使用することができる。ＡＡＴ ＲＮＡｉ剤の合成に関するさらなる記載は、例えば、各々が参照することにより全体として本明細書に組み込まれる国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／１３２４３２号（出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１８／０１３１０２号）及び第ＷＯ２０１８／０４４３５０号（第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２１１４７号）に見出され得る。ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬は、次に、当技術分野で一般に知られている標準的な医薬的に許容される賦形剤に溶解することによって製剤化され得る。例えば、表３は、本明細書に開示する方法での使用に適した製剤化ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬を示す。

実施例２．健常ヒト志願者（ＮＨＶ）におけるＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（ＡＤＳ－００１）の第Ｉ相臨床試験
健常志願者（ＮＨＶ）におけるＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬（ＡＤＳ－００１）の安全性、忍容性、薬物動態、及び血清ＡＡＴレベルへの影響を評価するための第１相、単回及び複数回の用量漸増投与試験を行った。この試験の被験者集団には、１８～５２歳のＢＭＩが１９．０～３５．０ｋｇ／ｍ^２の健常成人男女を含めた。

ＮＨＶ被験者を、合計７つのコホートに分けた。コホート１～４を、皮下注射として３５ｍｇ（コホート１）の単回漸増及び１００ｍｇ（コホート２）、２００ｍｇ（コホート３）及び３００ｍｇ（コホート４）の複数回漸増にて投与されるＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬またはプラセボ（活性物質４：プラセボ４）を受けるようにランダム化した。コホート１～４は二重盲検であった。コホート２ｂ、３ｂ及び４ｂは、１００、２００、及び３００ｍｇのＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の単回投与を受ける４人の被験者からなる非盲検であった。合計４４人の被験者が試験を完了した。図４は、第Ｉ相臨床試験の最終試験デザインを示す。試験パラメータを以下の表４に要約する。

表４．第Ｉ相臨床試験パラメータ

本試験の血清ＡＡＴの低下の結果は、３５～３００ｍｇの用量でＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬を投与することで、プラセボと比較した場合に血清ＡＡＴが大幅に低下することを示した。当初、１用量あたり４００ｍｇのＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬でのコホートが、本臨床試験プロトコルの一部として提案された。しかしながら、３５、１００、２００、及び３００ｍｇの用量での予想外の効力を考慮して、４００ｍｇのコホートを本試験のプロトコルから外した。本第Ｉ相試験において、３５ｍｇ、１００ｍｇ、及び２００ｍｇの用量で血清ＡＡＴが大幅に低下し、１００ｍｇ及び２００ｍｇの両方で複数回投与後、平均血清ＡＡＴ低下が約９０％に達した。図５～１１は、本第Ｉ相試験における様々なコホートの血清ＡＡＴ低下について報告する。

驚くべきことにかつ予想外に、１００ｍｇ及び２００ｍｇの用量レベルでは、かなりの（約９０％に達する）及びより高用量の３００ｍｇと同様のノックダウンが生じたことから、全用量レベルにわたって明確な用量依存反応はなかった。最低用量の３５ｍｇでもかなり活性であったが、単回投与として施用された１００ｍｇほど活性ではなく、ある程度の用量反応を示した。

３５ｍｇの単回投与からの血清ＡＡＴ低下（＞５８％）の持続期間は、当初の予想よりも長く、用量投与後１６週間まで続き、その後ベースラインに戻った。例えば、３５ｍｇの単回投与から３４週間後、１人の被験者の血清ＡＡＴレベルは、９０ｍｇ／ｄＬ以上に戻ったが、２人目の被験者の血清ＡＡＴレベルは、４０ｍｇ／ｄＬのままであった（ベースラインから６０．４％低下）。１００ｍｇ～３００ｍｇのＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の単回投与による反応持続期間に有意差はなく、単回投与後８週間～１６週間でベースラインに戻った。

ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の複数回投与は、概して、単回投与よりも長期間にわたって血清ＡＡＴの大幅な低下を維持する。これらのデータは、２９日目（すなわち、最初の投与から１か月後）に受けた２回目の投与が、血清ＡＡＴレベルをさらに低下させるか、または低下を維持する可能性があり、その後の投与は、血清ＡＡＴの最大の低下を維持するために１２週間ごと（すなわち、３か月ごと）に施用してもよいことを示唆する。

本第Ｉ相試験では、死亡、重篤な有害事象（ＳＡＥ）、及び強度が重度と評価された有害事象（ＡＥ）はなかった。ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬を受けた被験者全体で２人の被験者が、３つのＡＥの強度が中程度であることを報告した（上気道感染症、鼻漏、胸痛全般）。プラセボを受けた被験者全体で３人の被験者が、３つのＡＥの強度が中程度であることを報告した（胃腸炎２、筋骨格系胸痛－左側）。他のすべてのＡＥは、軽度と報告されている。被験者の大多数は、試験治療に関連しないＡＥを報告した。ＡＡＴ投与中の被験者で生じた１つのＡＥは、治療の早期中止に至ったが、この被験者を引き続き試験で追跡した。少なくとも単回投与の製剤化ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬を受けた２８人の被験者で、９４のＡＥが報告された。プラセボを受けた１７人の被験者では４６のＡＥが報告された。用量漸増に伴うＡＥの頻度または強度の増加に明確なパターンはない。

全製剤化ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬のコホート全体で、６人の被験者で注射部位での６つのＡＥが生じ、そのすべてが薬物を受けた被験者で生じた。プラセボ被験者では、注射部位のＡＥはなかった。報告された注射部位反応には、注射部位の内出血、紅斑、及び疼痛が含まれた。注射部位でのこれらの複合ＡＥは、製剤化ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬を受けた被験者の２１．４％で報告された。製剤化ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の５０回の注射のうち６回、すなわち、１２％が、注射部位のＡＥをもたらした。単一の被験者で２回以上報告された注射部位のＡＥはなかった。すべての注射部位のＡＥは、強度が軽度であると見なされた。

他の実施形態
本発明は、本発明の発明を実施するための形態と併せて記載してきたが、前述の記載は、本発明の範囲を説明することを意図し、限定することを意図せず、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義されると理解されるべきである。他の態様、利点、及び修正は、以下の特許請求の範囲内である。

Claims (24)

1. ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬を含む、アルファ－１アンチトリプシン欠乏症（ＡＡＴＤ）の治療を必要とするヒト対象におけるアルファ－１アンチトリプシン欠乏症（ＡＡＴＤ）を治療するための医薬組成物であって、前記医薬組成物が、前記対象に対して、前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の約１００ｍｇ～約３００ｍｇの用量で投与され、
   ここで、前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬は、（ＮＡＧ３７）ｓ（ｉｎｖＡｂ）ｓａｇｃｇｕｕｕａＧｆＧｆＣｆａｕｇｕｕｕａａｃａｓ（ｉｎｖＡｂ）（配列番号６）の構造を含むセンス鎖、及びｕｓＧｆｓｕＵｆａＡｆａｃａｕｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇＣｆｓｕ（配列番号２）の構造を含むアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖とはアニールされて二重鎖を形成し、
   ここで、ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、それぞれ、２′－Ｏ－メチルアデノシン、２′－Ｏ－メチルシチジン、２′－Ｏ－メチルグアノシン、２′－Ｏ－メチルウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、それぞれ、２′－フルオロアデノシン、２′－フルオロシチジン、２′－フルオログアノシン、２′－フルオロウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表し；（ｉｎｖＡｂ）は、反転脱塩基デオキシリボース残基を表し；（ＮＡＧ３７）ｓは、以下の構造：
   を表し、
   前記医薬組成物が８４日間に１回、皮下注射によって投与される、医薬組成物。
2. ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬を含む、アルファ－１アンチトリプシン欠乏症（ＡＡＴＤ）の治療を必要とするヒト対象におけるアルファ－１アンチトリプシン欠乏症（ＡＡＴＤ）を治療するための医薬組成物であって、
   ここで、前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬は、（ＮＡＧ３７）ｓ（ｉｎｖＡｂ）ｓａｇｃｇｕｕｕａＧｆＧｆＣｆａｕｇｕｕｕａａｃａｓ（ｉｎｖＡｂ）（配列番号６）の構造を含むセンス鎖、及びｕｓＧｆｓｕＵｆａＡｆａｃａｕｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇＣｆｓｕ（配列番号２）の構造を含むアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖とはアニールされて二重鎖を形成し、
   ここで、ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、それぞれ、２′－Ｏ－メチルアデノシン、２′－Ｏ－メチルシチジン、２′－Ｏ－メチルグアノシン、２′－Ｏ－メチルウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、それぞれ、２′－フルオロアデノシン、２′－フルオロシチジン、２′－フルオログアノシン、２′－フルオロウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表し；（ｉｎｖＡｂ）は、反転脱塩基デオキシリボース残基を表し；（ＮＡＧ３７）ｓは、以下の構造：
   を表し、
   前記対象に対して、前記医薬組成物の最初の用量が、前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬約１００ｍｇ～約３００ｍｇの用量で皮下注射によって投与され、
   前記対象に対して、前記医薬組成物の２回目の用量が、前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬約１００ｍｇ～約３００ｍｇの用量で、前記最初の投与の約２８日後に皮下注射によって投与され、及び
   前記対象に対して、前記医薬組成物の３回目の用量が、前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬約１００ｇ～約３００ｍｇの用量で、前記２回目の投与の約８４日後に皮下注射によって投与される、医薬組成物。
3. 前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の前記用量が、約１００ｍｇ～約２００ｍｇである、請求項１に記載の医薬組成物。
4. 前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の前記用量が、約１８０ｍｇ～約２４０ｍｇである、請求項１に記載の医薬組成物。
5. 前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の前記用量が、約１００ｍｇである、請求項１に記載の医薬組成物。
6. 前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の前記用量が、約２００ｍｇである、請求項１に記載の医薬組成物。
7. 前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の前記用量が、約２００ｍｇ以下である、請求項１に記載の医薬組成物。
8. 前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の各用量が、約１００ｍｇ～約２００ｍｇである、請求項２に記載の医薬組成物。
9. 前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の各用量が、約１８０ｍｇ～約２４０ｍｇである、請求項２に記載の医薬組成物。
10. 前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の各用量が、約１００ｍｇである、請求項２に記載の医薬組成物。
11. 前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の各用量が、約２００ｍｇである、請求項２に記載の医薬組成物。
12. 前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の各用量が、約２００ｍｇ以下である、請求項２に記載の医薬組成物。
13. ＡＡＴＤによって引き起こされる状態または疾患が、肝疾患である、請求項１～１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
14. 前記肝疾患が、慢性肝炎、肝硬変、肝細胞癌のリスクの増加、高トランスアミナーゼ血症、胆汁うっ滞、線維化、または劇症肝不全である、請求項１３に記載の医薬組成物。
15. 前記対象が、さらに、ＡＡＴＤの治療のためのさらなる治療薬を投与される、請求項１～１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
16. 肺障害、肺気腫、または内因的に分泌されるＡＡＴタンパク質の欠乏によって引き起こされる他の肺疾患もしくは障害の治療のための治療薬を更に含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
17. 前記治療薬が、ヒトＡＡＴタンパク質、精製ヒトアルファ－１プロテアーゼ阻害物質、または組み換えＡＡＴタンパク質を含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
18. 前記医薬組成物が、キット、容器、パック、ディスペンサー、プレフィルドシリンジ、またはバイアルに包装される、請求項１～１７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
19. 前記医薬組成物が、表３に記載の製剤化ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬を含むか、それからなるか、またはそれから本質的になる、請求項１～１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
20. さらに、前記３回目の用量の投与後にさらなる投与が施用されることを含み、前記さらなる投与が、約８４日間隔で施用される、請求項２に記載の医薬組成物。
21. 前記医薬組成物の１回以上の用量の投与が、前記対象によって行われる、請求項１～２０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
22. 前記医薬組成物の１回以上の用量の投与が、医療専門家によって行われる、請求項１～２０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
23. アルファ－１アンチトリプシン欠乏症（ＡＡＴＤ）の治療を必要とするヒト対象におけるアルファ－１アンチトリプシン欠乏症（ＡＡＴＤ）を治療するための医薬の製造のための、ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の使用であって、
    ここで、前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬は、（ＮＡＧ３７）ｓ（ｉｎｖＡｂ）ｓａｇｃｇｕｕｕａＧｆＧｆＣｆａｕｇｕｕｕａａｃａｓ（ｉｎｖＡｂ）（配列番号６）の構造を含むセンス鎖、及びｕｓＧｆｓｕＵｆａＡｆａｃａｕｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇＣｆｓｕ（配列番号２）の構造を含むアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖とはアニールされて二重鎖を形成し、
    ここで、ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、それぞれ、２′－Ｏ－メチルアデノシン、２′－Ｏ－メチルシチジン、２′－Ｏ－メチルグアノシン、２′－Ｏ－メチルウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、それぞれ、２′－フルオロアデノシン、２′－フルオロシチジン、２′－フルオログアノシン、２′－フルオロウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表し；（ｉｎｖＡｂ）は、反転脱塩基デオキシリボース残基を表し；（ＮＡＧ３７）ｓは、以下の構造：
    を表し、
    前記治療は、前記医薬が、前記対象に対して、前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬の約１００ｍｇ～約３００ｍｇの用量で、８４日に１回、皮下注射によって投与されることを含む、使用。
24. ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬を含む、アルファ－１アンチトリプシン欠乏症（ＡＡＴＤ）の治療を必要とするヒト対象におけるアルファ－１アンチトリプシン欠乏症（ＡＡＴＤ）を治療するための医薬組成物であって、
    ここで、前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬は、（ＮＡＧ３７）ｓ（ｉｎｖＡｂ）ｓａｇｃｇｕｕｕａＧｆＧｆＣｆａｕｇｕｕｕａａｃａｓ（ｉｎｖＡｂ）（配列番号６）の構造を含むセンス鎖、及びｕｓＧｆｓｕＵｆａＡｆａｃａｕｇＣｆｃＵｆａＡｆａＣｆｇＣｆｓｕ（配列番号２）の構造を含むアンチセンス鎖を含み、前記センス鎖と前記アンチセンス鎖とはアニールされて二重鎖を形成し、
    ここで、ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、それぞれ、２′－Ｏ－メチルアデノシン、２′－Ｏ－メチルシチジン、２′－Ｏ－メチルグアノシン、２′－Ｏ－メチルウリジンを表し；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、それぞれ、２′－フルオロアデノシン、２′－フルオロシチジン、２′－フルオログアノシン、２′－フルオロウリジンを表し；ｓは、ホスホロチオエート結合を表し；（ｉｎｖＡｂ）は、反転脱塩基デオキシリボース残基を表し；（ＮＡＧ３７）ｓは、以下の構造：
    を表し、
    前記対象に対して、前記医薬組成物の最初の用量が、前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬約２００ｍｇの用量で皮下注射によって投与され、
    前記対象に対して、前記医薬組成物の２回目の用量が、前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬約２００ｍｇの用量で、前記最初の投与の約２８日後に皮下注射によって投与され、及び
    前記対象に対して、前記医薬組成物の３回目の用量が、前記ＡＡＴ ＲＮＡｉ原薬約２００ｍｇの用量で、前記２回目の投与の約８４日後に皮下注射によって投与される、医薬組成物。

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