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JP7712867B2 - アセチル化ライター阻害剤の開発およびその使用 - Google Patents
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JP7712867B2 - アセチル化ライター阻害剤の開発およびその使用 - Google Patents

アセチル化ライター阻害剤の開発およびその使用

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Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年１１月２日に出願された米国仮特許出願第６２／７５４，９３４号明細書に対して、３５ Ｕ．Ｓ．Ｃ．§ １１９（ｅ）の下に優先権の利益を主張し、参照によりその全体を本明細書に組み込む。
高リスク神経芽腫（ＮＢ）は、原始神経堤細胞に由来する、末梢交感神経系の小児腫瘍であり、生存率が低い。これらの神経内分泌腫瘍は、発癌性のＭＹＣファミリーメンバーの高い発現を特徴とする。（Ｍａｔｔｈａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｉｓ．Ｐｒｉｍｅｒｓ ２：１６０７８（２０１６）；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．８（３）：３２０－３５（２０１８））。ＭＹＣＮは、ＭＹＣＮ増幅ＮＢでは、細胞運命を確立する転写因子（ＴＦ）の正のフィードフォワード自己調節ループの不可欠なメンバーである。このＴＦ群はコア調節回路（ＣＲＣ）と呼ばれ、各メンバーは、ＮＢ生存に決定的に必要なスーパーエンハンサー（ＳＥ）遺伝子によって調節される。ＭＹＣファミリー発癌遺伝子が腫瘍増殖を促進する１つの機序は、遺伝子エンハンサーに侵入し、転写機構およびエピジェネティック機構を動員することによる（Ｚｅｉｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．５０（４）：５１５－２３（２０１８））。ＳＥを介した転写の開始および伸長の薬理学的阻害の組合せは、インビトロおよびインビボでＮＢ ＣＲＣを急速に破壊し、転写の崩壊とアポトーシスとをもたらすことが示されている（Ｄｕｒｂｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．５０（９）：１２４０－６０（２０１８））。転写阻害はインビボで腫瘍の退縮を促進するには不十分であるため（Ｍｏｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．７（２）：２４８－５８（２０１３））、別のアプローチが必要である。
ＥＰ３００またはヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）ｐ３００は、ＮＢ細胞の生存に必要な成分として最近同定された（Ｄｕｒｂｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．５０（９）：１２４０－６０（２０１８））。そのパラログ、ｃＡＭＰ応答エレメント（ＣＲＥＢ）結合タンパク質（ＣＢＰ、ＣＲＥＢＢＰ）と同様に、ＥＰ３００は、ＳＥエレメントに典型的なＨ３Ｋ２７ａｃマークを触媒する（Ｄａｎｃｙ ｅｔ ａｌ．．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１１５（６）：２４１９－５２（２０１５））。多くの腫瘍型がＣＢＰではなくＥＰ３００に対する依存性を示しており、この知見が、異なるヒト癌サブセットの一般化可能な特性であり得ることが示唆される。他のＥＰ３００依存性およびＭＹＣファミリー依存性の癌には、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、黒色腫、横紋筋肉腫およびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫が含まれる。最近報告されたＥＰ３００阻害剤は、インビトロおよびインビボでＥＰ３００／ＣＢＰの高度に選択的な阻害を示した（Ｌａｓｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５５０：１２８－１３２（２０１７）；Ｍｉｃｈａｅｌｉｄｅｓ，ｅｔ ａｌ．，ＡＣＳ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２８－３３（２０１８））。しかし、その分子は、ＥＰ３００とＣＢＰとの間のような選択性を示さなかった。
Ｍａｔｔｈａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｄｉｓ．Ｐｒｉｍｅｒｓ ２：１６０７８（２０１６） Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｄｉｓｃｏｖ．８（３）：３２０－３５（２０１８） Ｚｅｉｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．５０（４）：５１５－２３（２０１８） Ｄｕｒｂｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．５０（９）：１２４０－６０（２０１８） Ｍｏｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｏｎｃｏｌ．７（２）：２４８－５８（２０１３） Ｄａｎｃｙ ｅｔ ａｌ．．，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１１５（６）：２４１９－５２（２０１５） Ｌａｓｋｏ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ５５０：１２８－１３２（２０１７） Ｍｉｃｈａｅｌｉｄｅｓ，ｅｔ ａｌ．，ＡＣＳ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２８－３３（２０１８）
本発明の第１の態様は、式Ｉによって表される構造を有する二官能性化合物：
（式中、ターゲティングリガンドは、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）ｐ３００（本明細書ではＥＰ３００とも呼ばれる）に結合する部分を表し、デグロンは、Ｅ３ユビキチンリガーゼに結合する部分を表し、リンカーは、デグロンおよびターゲティングリガンドを共有結合させる部分を表す）、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体に関する。
いくつかの実施形態では、ＥＰ３００ターゲティングリガンドは、本明細書で定義されるＡ－４８５またはその類似体である。
本発明の別の態様は、式ＩＩによって表される構造を有する二官能性化合物に関し：
式中、ターゲティングリガンドは、ヒストンアセチルトランスフェラーゼｐ３００（本明細書ではＥＰ３００とも呼ばれる）に結合する部分を表し、リンカーは、ビオチンおよびターゲティングリガンドを共有結合させる部分を表す。
本発明の別の態様は、式（Ｉ）の二重特異性化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体の治療有効量と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物に関する。
本発明のさらなる態様は、式（Ｉ）もしくは（ＩＩ）の二重特異性化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を作製するための方法に関する。
本発明のさらなる態様は、それを必要とする対象に、式（Ｉ）の二重特異性化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体の治療有効量を投与することを伴う、機能不全または調節不全のＥＰ３００活性を伴う疾患または障害を治療する方法に関する。
いくつかの実施形態では、疾患または障害は、高リスク神経芽腫（ＮＢ）である。
いくつかの実施形態では、疾患または障害は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。他の実施形態では、疾患または障害は固形腫瘍である。他の実施形態では、疾患または障害は、黒色腫、横紋筋肉腫、結腸癌、直腸癌、胃癌、乳癌または膵癌である。
いかなる特定の操作理論にも拘束されることを意図するものではないが、本発明の式（Ｉ）の二官能性化合物は、細胞のユビキチン／プロテアソーム系の動員によってＥＰ３００の分解を引き起こすと考えられ、細胞のユビキチン／プロテアソーム系の機能は、ｐ３００とターゲティングリガンドとの結合の結果としてｐ３００に近接した損傷タンパク質を定常的に同定および除去することである。分解誘導薬は、ＥＰ３００分子が破壊された後に放出され、活性であり続ける。したがって、身体自体の天然タンパク質廃棄系を関与させ利用することによって、本発明の二官能性化合物は、ＥＰ３００の現在の小分子阻害剤に対する潜在的な改善を表す可能性がある。したがって、分解誘導薬の有効な細胞内濃度が、小分子ＥＰ３００阻害剤の場合よりも大幅に低い可能性がある。まとめると、本発明の二官能性化合物は、公知のＥＰ３００阻害剤を上回る進歩を表す可能性があり、それらの使用に関する１つ以上の制限を克服する可能性があり、また、ＣＢＰではなくＥＰ３００を標的とする点で選択的であり得る。
本発明のさらなる態様は、ＥＰ３００タンパク質のためのプローブとして式（ＩＩ）の二官能性化合物を使用する方法であって、ＥＰ３００を含有することが疑われる溶解細胞と、式（ＩＩ）の化合物、および担体（例えば、ビーズ）に固定化されたストレプトアビジンとを接触させること、ビオチン－ストレプトアビジン結合を介した分子およびタンパク質結合によって形成された複合体を単離すること、ならびに単離した複合体中のＥＰ３００の存在を確認することを含む方法に関する。確認は、免疫ブロッティングなど、当技術分野で標準的な技術によって達成することができる。
集中治療を行った場合であっても低い、高リスク神経芽腫（ＮＢ）患者の生存率を示すグラフである。
ＭＹＣＮ増幅ＮＢと高い死亡率との間の相関を示すグラフである。
マルチドメインタンパク質としてのＥＰ３００およびｃＡＭＰ応答エレメント結合タンパク質（ＣＲＥＢ）結合タンパク質（ＣＢＰ）を示す画像である。
７日間のコロニー形成アッセイにおけるＫｅｌｌｙ ＮＢ細胞に対するＥＰ３００／ＣＢＰ阻害剤Ｃ６４６、ＣＢＰ３０およびＡ４８５の効果を示すグラフである。阻害剤の構造、およびＩＣ５０値も示されている。
コロニー形成アッセイにおける５つのＮＢ細胞株に対する阻害剤Ａ４８５の効果を示すグラフである。ＩＣ５０値も示されている。
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）増殖アッセイにおいて漸増用量のＡ４８５を用いて処理されたＫｅｌｌｙ ＮＢ細胞における増殖阻害を示すグラフである。
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）増殖アッセイにおいて漸増用量のＡ４８５を用いて処理されたＫｅｌｌｙ ＮＢ細胞におけるアポトーシスの誘導を示すグラフである。
ＥＰ３００またはＣＢＰを欠くように遺伝的に編集されたＫｅｌｌｙ ＮＢ細胞のコロニー形成アッセイを示すグラフである。結果から、ＮＢ細胞はＣＢＰを必要としないが、細胞増殖にはＥＰ３００を必要とすることが確認される。Ｃｈ２．２は、遺伝子砂漠を標的とする対照ｓｇＲＮＡである。
ＥＰ３００およびＣＢＰの成功した特異的ＣＲＩＳＰＲ編集を示す免疫ブロットである。
ＣＲＢＮに基づくＰ３００分解誘導薬の設計原理の概略図である。
分解誘導薬からの触媒機能阻害を評価するための、ＥＰ３００のＨＡＴドメインに対するＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）アッセイを示す画像である。
ＥＰ３００ブロモドメインおよびＣＲＢＮの両方に対するＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイを示す画像である。
様々なリンカーを用いて様々な修飾部位にＩＭｉＤを連結することによる、ＥＰ３００／ＣＢＰブロモドメイン阻害剤およびＥＰ３００阻害剤に基づくＥＰ３００分解誘導薬の構造誘導設計を示す画像である。
ＣＲＢＮ ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイにおける本発明の分解誘導薬化合物（ＣＰＤ）１およびＣＰＤ２（陰性対照化合物）の評価を示すグラフである。
様々な用量のＣＰＤ１、ＣＰＤ２およびＡ４８５を用いてＫｅｌｌｙ ＮＢ細胞を処理した後、２４時間の時点でのＥＰ３００分解およびＨ３Ｋ２７Ａｃレベルを示す免疫ブロットである。
１μＭのＣＰＤ１を用いてＫｅｌｌｙ ＮＢ細胞を処理した後、０、８、１２、１４および１６時間以内のＰＡＲＰ１、ｃＰＡＲＰ１、カスパーゼ－４およびｃカスパーゼ－３のレベルとともにＥＰ３００およびＣＢＰ分解を示す免疫ブロットである。結果から、ＣＰＤ１によるＥＰ３００の選択的分解が確認された。
ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）による、ＣＰＤ１を用いてＫｅｌｌｙ細胞株を処理した後の相対的な細胞増殖を示すグラフである。
集中的なＥＰ３００分解誘導薬化合物ライブラリーを開発するための医薬品化学計画を示す画像である。
ＥＰ３００およびＣＲＢＮと本発明の化合物ＣＰＤ１の計算ドッキングモデルの画像である。
分解誘導薬によって誘導されるＥＰ３００およびＣＲＢＮ二量体化を評価するための二量体化アッセイの概略図を示すグラフである。
雄のＣＤ１マウスに１０ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝３）の腹腔内（ＩＰ）注射を投与した後のＣＰＤ１の時間プロファイルを示すグラフである。様々な時点での一連の採血を通じて、ＬＣＭＳ／ＭＳによって、動物の血液中の化合物濃度を測定した。データは、血中の化合物Ｃｍａｘ ５μＭと半減期（１３時間）とを示している。マウスでは、Ａ－４８５の半減期は０．７時間である。
０．２５μＭおよび０．５μＭのＣＰＤ１でのＮＢゼブラフィッシュモデルにおける腫瘍増殖阻害を示すグラフである。ＰＫおよびゼブラフィッシュの両試験で毒性は観察されなかった。
４日間の細胞計数キット（ＣＣＫ）アッセイによる、０～１０μＭのＣＰＤ１、ＣＰＤ２およびＡ－４８５を用いた処理後のＭＭ．１Ｓ細胞における増殖阻害を示すグラフである。
４日間の細胞計数キット（ＣＣＫ）アッセイによる、０～１０μＭのＣＰＤ１、ＣＰＤ２およびＡ－４８５を用いた処理後のＵ２６６細胞における増殖阻害を示すグラフである。
４日間の細胞計数キット（ＣＣＫ）アッセイによる、０～１０μＭのＣＰＤ１、ＣＰＤ２およびＡ－４８５を用いた処理後のＲＰＭＩ８２２６細胞における増殖阻害を示すグラフである。
６日間の３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）アッセイによる、０～１０μＭのＣＰＤ１、ＣＰＤ２およびＡ－４８５を用いた処理後のＭＭ．１Ｓ細胞における増殖阻害を示すグラフである。
６日間のＭＴＴアッセイによる、０～１０μＭのＣＰＤ１、ＣＰＤ２およびＡ－４８５を用いた処理後のＵ２６６細胞における増殖阻害を示すグラフである。
６日間のＭＴＴアッセイによる、０～１０μＭのＣＰＤ１、ＣＰＤ２およびＡ－４８５を用いた処理後のＲＰＭＩ８２２６細胞における増殖阻害を示すグラフである。
様々な用量のＣＰＤ１、ＣＰＤ２およびＡ４８５を用いてＫｅｌｌｙ ＮＢ細胞を処理した後、２４時間の時点でのＥＰ３００分解およびＨ３Ｋ２７Ａｃレベルを示す免疫ブロットである。
経時的実験においてＣＰＤ１（５００ｎＭ）を用いてＫｅｌｌｙ ＮＢ細胞を処理した後のＥＰ３００分解ならびにＣＢＰおよびＰＡＰ１レベルを示す免疫ブロットである。
ＣＰＤ１（５００ｎＭ）を用いてＫｅｌｌｙ ＮＢ細胞を処理した後、６時間および３６時間の時点でのプロテオミクス分析結果のプロットである。
コロニー形成アッセイを使用した、ＣＰＤ１による１０日間での用量依存的なＫｅｌｌｙ細胞増殖を示すグラフである。
ＣＰＤ１におけるターゲティングリガンドのキラル中心（Ｒ，Ｓ）を示す画像である。
ＣＰＤ１およびそのＳ，Ｓ異性体を用いてＫｅｌｌｙ ＮＢ細胞を処理した後のＥＰ３００分解ならびにＣＢＰ、Ｈ３Ｋ２７Ａｃおよび総Ｈ３レベルを示す免疫ブロットである。
ＡＴＰｌｉｔｅ（商標）アッセイによる、様々な濃度（μＭ）のＣＰＤ１、ＣＰＤ２（細胞不透過性陰性対照）、レナリドマイド、サリドマイドおよびポマリドマイドを用いた処理後のＫｅｌｌｙ細胞における増殖阻害を示すグラフである。
ＡＴＰｌｉｔｅ（商標）アッセイによる、様々な濃度（μＭ）のＣＰＤ１、その（Ｓ，Ｓ）異性体およびＡ４８５を用いた処理後のＫｅｌｌｙ細胞における増殖阻害を示すグラフである。
本発明の化合物に関する基質特異性を決定するために使用されたＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイの機構を説明する図である。
ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイによって、ＣＰＤ１、ＣＰＤ２およびＡ４８５（ＨＡＴ阻害剤）がＨＡＴ（ＥＰ３００）ドメインに結合することを示すグラフである。
ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイによって、ＣＰＤ１、ＣＰＤ２、レナリドマイド、サリドマイドおよびポマリドマイドがセレブロン（ＣＲＢＮ）に結合することを示すグラフである。予測通り、Ａ４８５では結合は観察されなかった。
Ｃｈ２．２、ＬＡＣＺおよびＣＲＢＮノックアウト細胞株におけるＣＲＢＮレベルを示す免疫ブロットである。
ＣＰＤ１（５００ｎＭ）を用いてＣｈ２．２、ＬＡＣＺおよびＣＲＢＮノックアウト細胞株を処理した後のＥＰ３００分解ならびにＣＢＰ、Ｈ３Ｋ２７Ａｃおよび総Ｈ３レベルを示す免疫ブロットである。
様々な濃度（μＭ）のＣＰＤ１を用いて処理した後のＣｈ２．２、ＬＡＣＺおよびＣＲＢＮノックアウト細胞株における細胞生存率を示すグラフである。
１４日間にわたり１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇおよび４０ｍｇ／ｋｇを用いて処置されたマウスの総体重の変化を示すグラフである。
２１日間にわたり４０ｍｇ／ｋｇを用いて処置されたマウスのパーセント初期体重の変化を示すグラフである。
ＣＰＤ１を用いた最大耐用量（ＭＴＤ）試験から得られた、マウス肝臓の免疫組織化学（ＩＨＣ）染色結果を示す画像である。
経時的（日）に４０ｍｇ／ｋｇを用いて処置されたマウスの腫瘍体積（ｍｍ３）の変化を示すグラフである。
経時的（日）に４０ｍｇ／ｋｇを用いて処置されたマウスの生存率を示すグラフである。
図１５Ａ～図１５ＧはＡＴＰｌｉｔｅ（商標）アッセイによる、様々な濃度（μＭ）の本発明の分解誘導薬ＣＰＤ１～ＣＰＤ２２およびＡ４８５を用いた処理後のＫｅｌｌｙ細胞における増殖阻害を示す一連のグラフである。
別途定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語および科学用語は、本明細書の主題が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、それとは反対のことが指定されない限り、以下の用語は、本発明の理解を容易にするために示された意味を有する。
説明および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈上別途明確に指示されない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「組成物（ａ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）」への言及は、２つ以上のそのような組成物の混合物を含み、「阻害剤（ａｎ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）」への言及は、２つ以上のそのような阻害剤の混合物などを含む。
別途記載されていない限り、用語「約」は、用語「約」によって修飾された特定の値の１０％以内（例えば、５％、２％または１％以内）を意味する。
「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」または「によって特徴付けられる（ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｂｙ）」と同義である移行用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、包括的またはオープンエンドであり、追加の列挙されていない要素または方法工程を除外するものではない。対照的に、移行句「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」は、特許請求の範囲で指定されていないあらゆる要素、工程または成分を除外する。移行句「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」は、明記される材料または工程と、特許請求された発明の「基本的および新規の特性に実質的に影響を及ぼさないもの」とに特許請求の範囲を限定する。
本発明の化合物に関して、およびそれらをさらに説明するために以下の用語が本明細書で使用される範囲まで、以下の定義が適用される。
本明細書で使用される場合、用語「脂肪族」は、非環式炭化水素基を指し、分岐および非分岐、アルキル基、アルケニル基またはアルキニル基を含む。
本明細書で使用される場合、用語「アルキル」は、飽和した直鎖または分岐鎖の一価炭化水素ラジカルを指す。一実施形態では、アルキルラジカルはＣ１～Ｃ１８基である。他の実施形態では、アルキルラジカルは、Ｃ０～Ｃ６基、Ｃ０～Ｃ５基、Ｃ０～Ｃ３基、Ｃ１～Ｃ１２基、Ｃ１～Ｃ８基、Ｃ１～Ｃ６基、Ｃ１～Ｃ５基、Ｃ１～Ｃ４基またはＣ１～Ｃ３基である（ここで、Ｃ０アルキルは結合を指す）。アルキル基の例には、メチル、エチル、１－プロピル、２－プロピル、ｉ－プロピル、１－ブチル、２－メチル－１－プロピル、２－ブチル、２－メチル－２－プロピル、１－ペンチル、ｎ－ペンチル、２－ペンチル、３－ペンチル、２－メチル－２－ブチル、３－メチル－２－ブチル、３－メチル－１－ブチル、２－メチル－１－ブチル、１－ヘキシル、２－ヘキシル、３－ヘキシル、２－メチル－２－ペンチル、３－メチル－２－ペンチル、４－メチル－２－ペンチル、３－メチル－３－ペンチル、２－メチル－３－ペンチル、２，３－ジメチル－２－ブチル、３，３－ジメチル－２－ブチル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシルおよびドデシルが挙げられる。いくつかの実施形態では、アルキル基は、Ｃ１～Ｃ３アルキル基である。いくつかの実施形態では、アルキル基は、Ｃ１～Ｃ２アルキル基である。
本明細書で使用される場合、用語「アルキレン」は、炭素および水素のみからなり、不飽和を含まず、１～１２個の炭素原子を有するラジカル基、例えば、メチレン、エチレン、プロピレン、ｎ－ブチレンなどに分子の残部を連結する直鎖状または分岐状の二価炭化水素鎖を指す。アルキレン鎖は、単結合を介して分子の残部に結合し、単結合を介してラジカル基に結合し得る。いくつかの実施形態では、アルキレン基は、１～８個の炭素原子を含む（Ｃ１～Ｃ８アルキレン）。他の実施形態では、アルキレン基は、１～５個の炭素原子を含む（Ｃ１～Ｃ５アルキレン）。他の実施形態では、アルキレン基は、１～４個の炭素原子を含む（Ｃ１～Ｃ４アルキレン）。他の実施形態では、アルキレンは、１～３個の炭素原子を含む（Ｃ１～Ｃ３アルキレン）。他の実施形態では、アルキレン基は、１～２個の炭素原子を含む（Ｃ１～Ｃ２アルキレン）。他の実施形態では、アルキレン基は、１つの炭素原子を含む（Ｃ１アルキレン）。
本明細書で使用される場合、用語「ハロアルキル」は、１つ以上（例えば、１、２、３または４）のハロ基により置換されている、本明細書で定義されるアルキル基を指す。
本明細書で使用される場合、用語「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素－炭素二重結合を有する直鎖または分岐鎖の一価炭化水素ラジカルを指す。アルケニルには、「シス」および「トランス」配向、あるいは「Ｅ」および「Ｚ」配向を有するラジカルが含まれる。一例では、アルケニルラジカルはＣ２～Ｃ１８基である。他の実施形態では、アルケニルラジカルは、Ｃ２～Ｃ１２基、Ｃ２～Ｃ１０基、Ｃ２～Ｃ８基、Ｃ２～Ｃ６基またはＣ２～Ｃ３基である。例には、エテニルまたはビニル、プロパ－１－エニル、プロパ－２－エニル、２－メチルプロパ－１－エニル、ブタ－１－エニル、ブタ－２－エニル、ブタ－３－エニル、ブタ－１，３－ジエニル、２－メチルブタ－１，３－ジエン、へクス－１－エニル、へクス－２－エニル、へクス－３－エニル、へクス－４－エニルおよびヘキサ－１，３－ジエニルが挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素－炭素三重結合を有する直鎖状または分岐状の一価炭化水素ラジカルを指す。一例では、アルキニルラジカルはＣ２～Ｃ１８基である。他の例では、アルキニルラジカルは、Ｃ２～Ｃ１２、Ｃ２～Ｃ１０、Ｃ２～Ｃ８、Ｃ２～Ｃ６またはＣ２～Ｃ３である。例には、エチニルプロパ－１－イニル、プロパ－２－イニル、ブタ－１－イニル、ブタ－２－イニルおよびブタ－３－イニルが挙げられる。
本明細書で使用される場合、用語「アルデヒド」は、式－Ｃ（Ｏ）Ｈによって表される。用語「Ｃ（Ｏ）」およびＣ＝Ｏは、本明細書では区別なく使用される。
本明細書で使用される用語「アルコキシル」または「アルコキシ」は、それに結合した酸素ラジカルを有する、上で定義されたアルキル基を指す。代表的なアルコキシル基には、メトキシ、エトキシ、プロピルオキシ、ｔｅｒｔ－ブトキシなどが含まれる。「エーテル」は、酸素によって共有結合した２つの炭化水素である。したがって、そのアルキルをエーテルにするアルキルの置換基は、－Ｏ－アルキル、－Ｏ－アルケニルおよび－Ｏ－アルキニルのうちの１つによって表され得るようなアルコキシルであるか、それに類似している。
本明細書で使用される場合、用語「ハロゲン」（または「ハロ」または「ハロゲン化物」）は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を指す。
本明細書で使用される場合、用語「カルボン酸」は、式－Ｃ（Ｏ）ＯＨによって表され、「カルボキシレート」は、式－Ｃ（Ｏ）Ｏ－によって表される。
本明細書で使用される場合、用語「エステル」は、式－ＯＣ（Ｏ）Ｚ１または－Ｃ（Ｏ）ＯＺ１によって表され、式中、Ｚ１は、いずれも本明細書に記載のアルキル基、ハロゲン化アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクロアルキル基またはヘテロシクロアルケニル基であり得る。
本明細書で使用される場合、用語「エーテル」は、式Ｚ１ＯＺ２によって表され、式中、Ｚ１およびＺ２は、独立して、いずれも本明細書に記載のアルキル基、ハロゲン化アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクロアルキル基またはヘテロシクロアルケニル基であり得る。
本明細書で使用される場合、用語「ケトン」は、式Ｚ１Ｃ（Ｏ）Ｚ２によって表され、式中、Ａ１およびＡ２は、独立して、いずれも本明細書に記載のアルキル基、ハロゲン化アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクロアルキル基またはヘテロシクロアルケニル基であり得る。
本明細書で使用される場合、用語「スルホニル」は、式－－Ｓ（Ｏ）２Ｚ１によって表されるスルホ－オキソ基を指し、式中、Ｚ１は、水素、いずれも本明細書に記載のアルキル基、ハロゲン化アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、ヘテロアリール基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基、ヘテロシクロアルキル基またはヘテロシクロアルケニル基であり得る。
本明細書で使用される場合、用語「スルホニルアミノ」（または「スルホンアミド」）は、式－－Ｓ（Ｏ）２ＮＨ２によって表される。
本明細書で使用される場合、用語「チオール」は、式－－ＳＨによって表される。
本明細書で使用される場合、用語「環式基」は、単独で、またはさらに大きな部分の一部として使用される任意の基を広く指し、飽和環系、部分飽和環系または芳香環系、例えば、炭素環基（シクロアルキル、シクロアルケニル）、複素環基（ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルケニル）、アリール基およびヘテロアリール基を含む。環式基は、１つ以上の（例えば、融合した）環系を有し得る。したがって、例えば、環式基は、１つ以上の炭素環基、複素環基、アリール基またはヘテロアリール基を含むことができる。
本明細書で使用される場合、用語「炭素環式」（同じく「カルボシクリル」）は、単独で、またはさらに大きな部分の一部として使用される基を指し、単独であるか、さらに大きな部分の一部である、３～２０個の炭素原子を有する飽和環系、部分不飽和環系または芳香環系を含む（例えば、アルク炭素環基（ａｌｋｃａｒｂｏｃｙｃｌｉｃ ｇｒｏｕｐ））。カルボシクリルという用語には、モノ－環系、ビ－環系、トリ－環系、縮合環系、架橋環系およびスピロ－環系ならびにそれらの組合せが含まれる。一実施形態では、カルボシクリルは、３～１５個の炭素原子（Ｃ３～Ｃ１５）を含む。一実施形態では、カルボシクリルは、３～１２個の炭素原子（Ｃ３～Ｃ１２）を含む。別の実施形態では、カルボシクリルは、Ｃ３～Ｃ８、Ｃ３～Ｃ１０またはＣ５～Ｃ１０を含む。別の実施形態では、単環としてのカルボシクリルは、Ｃ３～Ｃ８、Ｃ３～Ｃ６またはＣ５～Ｃ６を含む。いくつかの実施形態では、二環としてのカルボシクリルは、Ｃ７～Ｃ１２を含む。別の実施形態では、スピロ系としてのカルボシクリルは、Ｃ５～Ｃ１２を含む。単環式カルボシクリルの代表的な例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１－シクロペント－１－エニル、１－シクロペント－２－エニル、１－シクロペント－３－エニル、シクロヘキシル、ペルジューテリオシクロヘキシル（ｐｅｒｄｅｕｔｅｒｉｏｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ）、１－シクロへクス－１－エニル、１－シクロへクス－２－エニル、１－シクロへクス－３－エニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプチル、シクロオクチル、シクロノニル、シクロデシル、シクロウンデシル、フェニルおよびシクロドデシルが含まれる。７～１２個の環原子を有する二環式カルボシクリルには、［４，３］、［４，４］、［４，５］、［５，５］、［５，６］または［６，６］環系、例えば、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、ビシクロ［２．２．２］オクタン、ナフタレンおよびビシクロ［３．２．２］ノナンなどが含まれる。スピロカルボシクリルの代表的な例には、スピロ［２．２］ペンタン、スピロ［２．３］ヘキサン、スピロ［２．４］ヘプタン、スピロ［２．５］オクタンおよびスピロ［４．５］デカンが挙げられる。カルボシクリルという用語には、本明細書で定義されるアリール環系が含まれる。カルボシクリルという用語には、シクロアルキル環（例えば、飽和または部分不飽和のモノ－炭素環、ビ－炭素環またはスピロ－炭素環）も含まれる。炭素環基という用語にはまた、１つ以上（例えば、１、２または３）の異なる環式基（例えば、アリール環または複素環）に融合した炭素環が含まれ、ここで、ラジカルまたは結合点は炭素環上にある。
したがって、炭素環式という用語は、本明細書で使用される場合、Ｒｃがアルキレン鎖である式－－Ｒｃ－カルボシクリルの基を指すカルボシクリルアルキル基も包含する。炭素環式という用語はまた、本明細書で使用される場合、Ｒｃがアルキレン鎖である式－－Ｏ－－Ｒｃ－カルボシクリルの酸素原子を介して結合した基を指すカルボシクリルアルコキシ基を包含する。
本明細書で使用される場合、用語「ヘテロシクリル」は、単独で、またはさらに大きな部分の一部として使用される「カルボシクリル」を指し、１つ以上（例えば、１、２、３または４）の炭素原子がヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｎ、Ｎ（Ｏ）、Ｓ、Ｓ（Ｏ）またはＳ（Ｏ）２）に置換されている飽和環系、部分不飽和環系または芳香環系を含む。ヘテロシクリルという用語には、モノ－環系、ビ－環系、トリ－環系、縮合環系、架橋環系およびスピロ－環系ならびにそれらの組合せが含まれる。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリルとは、３～１５員のヘテロシクリル環系を指す。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリルとは、３～１２員のヘテロシクリル環系を指す。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリルとは、３～１２員の飽和ヘテロシクリル環系などの飽和環系を指す。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリルとは、５～１４員のヘテロアリール環系などのヘテロアリール環系を指す。ヘテロシクリルという用語には、３～８個の炭素と１つ以上（１、２、３または４）のヘテロ原子とを含む飽和または部分不飽和のモノ－環系、ビ－環系またはスピロ－環系であるＣ３～Ｃ８ヘテロシクロアルキルも含まれる。
いくつかの実施形態では、ヘテロシクリル基は、３～１２個の環原子を含み、単環、二環、三環およびスピロ環系を含み、ここで、環原子は炭素であり、１～５個の環原子は、窒素、硫黄または酸素などのヘテロ原子である。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリルは、窒素、硫黄または酸素から選択される１つ以上のヘテロ原子を有する３～７員の単環を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリルは、窒素、硫黄または酸素から選択される１つ以上のヘテロ原子を有する４～６員の単環を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリルは３員の単環を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリルは４員の単環を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリルは５～６員の単環を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロシクリル基は、０～３個の二重結合を含む。前述の実施形態のいずれでも、ヘテロシクリルは、１、２、３または４個のヘテロ原子を含む。任意の窒素ヘテロ原子または硫黄ヘテロ原子が場合により酸化されていてもよく（例えば、ＮＯ、ＳＯ、ＳＯ２）、任意の窒素ヘテロ原子が場合により四級化されていてもよい（例えば、［ＮＲ４］＋Ｃｌ－、［ＮＲ４］＋ＯＨ－）。ヘテロシクリルの代表的な例には、オキシラニル、アジリジニル、チイラニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、１，２－ジチエタニル、１，３－ジチエタニル、ピロリジニル、ジヒドロ－１Ｈ－ピロリル、ジヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ジヒドロチエニル、テトラヒドロチエニル、イミダゾリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、１，１－ジオキソ－チオモルホリニル、ジヒドロピラニル、テトラヒドロピラニル、ヘキサヒドロチオピラニル、ヘキサヒドロピリミジニル、オキサジナニル、チアジナニル、チオキサニル、ホモピペラジニル、ホモピペリジニル、アゼパニル、オキセパニル、チエパニル、オキサゼピニル、オキサゼパニル、ジアゼパニル、１，４－ジアゼパニル、ジアゼピニル、チアゼピニル、チアゼパニル、テトラヒドロチオピラニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、１，１－ジオキソイソチアゾリジノニル、オキサゾリジノニル、イミダゾリジノニル、４，５，６，７－テトラヒドロ［２Ｈ］インダゾリル、テトラヒドロベンゾイミダゾリル、４，５，６，７－テトラヒドロベンゾ［ｄ］イミダゾリル、１，６－ジヒドロイミダゾール［４，５－ｄ］ピロロ［２，３－ｂ］ピリジニル、チアジニル、チオフェニル、オキサジニル、チアジアジニル、オキサジアジニル、ジチアジニル、ジオキサジニル、オキサチアジニル、チアトリアジニル、オキサトリアジニル、ジチアジアジニル、イミダゾリニル、ジヒドロピリミジル、テトラヒドロピリミジル、１－ピロリニル、２－ピロリニル、３－ピロリニル、インドリニル、チアピラニル、２Ｈ－ピラニル、４Ｈ－ピラニル、ジオキサニル、１，３－ジオキソラニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ジチアニル、ジチオラニル、ピリミジノニル、ピリミジンジオニル、ピリミジン－２，４－ジオニル、ピペラジノニル、ピペラジンジオニル、ピラゾリジニルイミダゾリニル、３－アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、３，６－ジアザビシクロ［３．１．１］ヘプタニル、６－アザビシクロ［３．１．１］ヘプタニル、３－アザビシクロ［３．１．１］ヘプタニル、３－アザビシクロ［４．１．０］ヘプタニル、アザビシクロ［２．２．２］ヘキサニル、２－アザビシクロ［３．２．１］オクタニル、８－アザビシクロ［３．２．１］オクタニル、２－アザビシクロ［２．２．２］オクタニル、８－アザビシクロ［２．２．２］オクタニル、７－オキサビシクロ［２．２．１］ヘプタン、アザスピロ［３．５］ノナニル、アザスピロ［２．５］オクタニル、アザスピロ［４．５］デカニル、１－アザスピロ［４．５］デカン－２－オニル、アザスピロ［５．５］ウンデカニル、テトラヒドロインドリル、オクタヒドロインドリル、テトラヒドロイソインドリル、テトラヒドロインダゾリル、１，１－ジオキソヘキサヒドロチオピラニルが挙げられる。硫黄原子または酸素原子と、１～３個の窒素原子とを含む５員ヘテロシクリルの例には、チアゾール－２－イルおよびチアゾール－２－イルＮ－オキシドを含むチアゾリル、１，３，４－チアジアゾール－５－イルおよび１，２，４－チアジアゾール－５－イルを含むチアジアゾリル、オキサゾリル、例えばオキサゾール－２－イル、ならびにオキサジアゾリル、例えば１，３，４－オキサジアゾール－５－イルおよび１，２，４－オキサジアゾール－５－イルがある。２～４個の窒素原子を含む例示的な５員環ヘテロシクリルには、イミダゾリル、例えば、イミダゾール－２－イル；トリアゾリル、例えば、１，３，４－トリアゾール－５－イル；１，２，３－トリアゾール－５－イル、１，２，４－トリアゾール－５－イル、およびテトラゾリル、例えば、１Ｈ－テトラゾール－５－イルが含まれる。ベンゾ縮合５員ヘテロシクリルの代表的な例には、ベンゾオキサゾール－２－イル、ベンゾチアゾール－２－イルおよびベンゾイミダゾール－２－イルがある。例示的な６員ヘテロシクリルは、１～３個の窒素原子と、場合により硫黄原子または酸素原子、例えば、ピリジル、例えば、ピリド－２－イル、ピリド－３－イルおよびピリド－４－イル；ピリミジル、例えば、ピリミド－２－イルおよびピリミド－４－イル；トリアジニル、例えば、１，３，４－トリアジン－２－イルおよび１，３，５－トリアジン－４－イル；ピリダジニル、特にピリダジン－３－イル、ならびにピラジニルとを含む。ピリジンＮ－オキシドおよびピリダジンＮ－オキシドならびにピリジル基、ピリミド－２－イル基、ピリミド－４－イル基、ピリダジニル基および１，３，４－トリアジン－２－イル基は、ヘテロシクリル基のさらに他の例である。いくつかの実施形態では、複素環基は、１つ以上（例えば、１、２または３）の異なる環式基（例えば、炭素環または複素環）に融合した複素環を含み、ここで、ラジカルまたは結合点は、複素環上にあり、いくつかの実施形態では、結合点は、複素環に含まれるヘテロ原子である。
したがって、複素環式という用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも１つの窒素を含むヘテロシクリル基を指すＮ－ヘテロシクリル基を包含し、ここで、分子の残部へのヘテロシクリル基の結合点は、ヘテロシクリル基の窒素原子を介する。Ｎ－ヘテロシクリル基の代表的な例には、１－モルホリニル、１－ピペリジニル、１－ピペラジニル、１－ピロリジニル、ピラゾリジニル、イミダゾリニルおよびイミダゾリジニルが挙げられる。複素環式という用語はまた、本明細書で使用される場合、少なくとも１つのヘテロ原子を含むヘテロシクリル基を指すＣ－ヘテロシクリル基を包含し、ここで、分子の残部へのヘテロシクリル基の結合点は、ヘテロシクリル基の炭素原子を介する。Ｃ－ヘテロシクリルラジカルの代表的な例には、２－モルホリニル、２－または３－または４－ピペリジニル、２－ピペラジニル、および２－または３－ピロリジニルが挙げられる。複素環式という用語はまた、上に開示されるように、Ｒｃがアルキレン鎖である式－－Ｒｃ－ヘテロシクリルの基を指すヘテロシクリルアルキル基を包含する。複素環式という用語はまた、本明細書で使用される場合、Ｒｃがアルキレン鎖である式－－Ｏ－－Ｒｃ－ヘテロシクリルの酸素原子を介して結合したラジカルを指すヘテロシクリルアルコキシ基を包含する。
本明細書で使用される場合、単独で、またはさらに大きな部分（例えば、アルキル基上の末端炭素原子が、結合点、例えば、ベンジル基である「アラルキル」）、酸素原子が結合点である「アラルコキシ」、または結合点がアリール基上にある「アロキシアルキル」）の一部として使用される用語「アリール」は、縮合環を含む単環式、二環式または三環式の炭素環系を含む基を指し、ここで、系内の少なくとも１つの環は芳香族である。いくつかの実施形態では、アラルコキシ基はベンゾキシ基である。用語「アリール」は、用語「アリール環」と区別なく使用され得る。一実施形態では、アリールは、６～１８個の炭素原子を有する基を含む。別の実施形態では、アリールは、６～１０個の炭素原子を有する基を含む。アリール基の例には、本明細書に記載の１つ以上の置換基によって置換されていてもよいか、独立して置換されていてもよいフェニル、ナフチル、アントラシル、ビフェニル、フェナントレニル、ナフタセニル、１，２，３，４－テトラヒドロナフタレニル、１Ｈ－インデニル、２，３－ジヒドロ－１Ｈ－インデニル、ナフチリジニルなどが挙げられる。特定のアリールはフェニルである。いくつかの実施形態では、アリール基は、１つ以上（例えば、１、２または３）の異なる環式基（例えば、炭素環または複素環）に融合したアリール環を含み、ここで、ラジカルまたは結合点はアリール環上にある。
したがって、アリールという用語は、上に開示されるように、Ｒｃがメチレンまたはエチレンなどのアルキレン鎖である式－－Ｒｃ－アリールの基を指すアラルキル基（例えば、ベンジル）を包含する。いくつかの実施形態では、アラルキル基は、置換されていてもよいベンジル基である。アリールという用語はまた、本明細書で使用される場合、Ｒｃがメチレンまたはエチレンなどのアルキレン鎖である式－－Ｏ－Ｒｃ－－アリールの酸素原子を介して結合した基を指すアラルコキシ基を包含する。
本明細書で使用される場合、単独で、またはさらに大きな部分（例えば、「ヘテロアリールアルキル」（同じく「ヘテロアラルキル」）、または「ヘテロアリールアルコキシ」（同じく「ヘテロアラルコキシ」）の一部として使用される用語「ヘテロアリール」は、５～１４個の環原子を有する単環式、二環式または三環式の環系を指し、ここで、少なくとも１つの環は、芳香族であり、少なくとも１つのヘテロ原子を含む。一実施形態では、ヘテロアリールは、１つ以上の環原子が、独立して置換されていてもよい窒素、硫黄または酸素である５～６員の単環式芳香族基を含む。別の実施形態では、ヘテロアリールは、１つ以上の環原子が窒素、硫黄または酸素である５～６員の単環式芳香族基を含む。ヘテロアリール基の代表的な例には、チエニル、フリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、テトラゾリル、チアトリアゾリル、オキサトリアゾリル、ピリジル、ピリミジル、イミダゾピリジル、ピラジニル、ピリダジニル、トリアジニル、テトラジニル、テトラゾロ［１，５－ｂ］ピリダジニル、プリニル、デアザプリニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイミダゾリル、インドリル、１，３－チアゾール－２－イル、１，３，４－トリアゾール－５－イル、１，３－オキサゾール－２－イル、１，３，４－オキサジアゾール－５－イル、１，２，４－オキサジアゾール－５－イル、１，３，４－チアジアゾール－５－イル、１Ｈ－テトラゾール－５－イル、１，２，３－トリアゾール－５－イルおよびピリド－２－イルＮ－オキシドが挙げられる。用語「ヘテロアリール」はまた、ヘテロアリールが１つ以上の環式（例えば、カルボシクリルまたはヘテロシクリル）環に融合している基を含み、ここで、ラジカルまたは結合点はヘテロアリール環上にある。非限定的な例には、インドリル、インドリジニル、イソインドリル、ベンゾチエニル、ベンゾチオフェニル、メチレンジオキシフェニル、ベンゾフラニル、ジベンゾフラニル、インダゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾジオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、キノリル、イソキノリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、４Ｈ－キノリジニル、カルバゾリル、アクリジニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニルおよびピリド［２，３－ｂ］－１，４－オキサジン－３（４Ｈ）－オンが挙げられる。ヘテロアリール基は、単環式、二環式または三環式であり得る。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、１つ以上（例えば、１、２または３）の異なる環式基（例えば、炭素環または複素環）に融合したヘテロアリール環を含み、ここで、ラジカルまたは結合点は、ヘテロアリール環上にあり、いくつかの実施形態では、結合点は、複素環に含まれるヘテロ原子である。
したがって、ヘテロアリールという用語は、本明細書で使用される場合、少なくとも１つの窒素を含む、上で定義されたヘテロアリール基を指すＮ－ヘテロアリール基を包含し、ここで、分子の残部へのヘテロアリール基の結合点は、ヘテロアリール基の窒素原子を介する。ヘテロアリールという用語はまた、本明細書で使用される場合、上で定義されたヘテロアリール基を指すＣ－ヘテロアリール基を包含し、ここで、分子の残部へのヘテロアリール基の結合点は、ヘテロアリール基の炭素原子を介する。ヘテロアリールという用語はまた、上に開示されるように、Ｒｃが上で定義されるアルキレン鎖である式－－Ｒｃ－ヘテロアリールの基を指すヘテロアリールアルキル基を包含する。ヘテロアリールという用語はまた、本明細書で使用される場合、Ｒｃが上で定義されるアルキレン基である式－－Ｏ－－Ｒｃ－ヘテロアリールの酸素原子を介して結合した基を指すヘテロアラルコキシ（またはヘテロアリールアルコキシ）基を包含する。
本明細書に記載の基のいずれも、置換されていてもよいか、非置換であってもよい。本明細書で使用される場合、用語「置換されている」は、そのような置換が、置換されている原子、および置換基の許容される原子価に従っており、置換が、安定な化合物、すなわち、例えば、転位、環化、脱離などによって自発的に変換を受けない化合物を生じるという暗黙の条件を伴って、あらゆる許容される置換基を広く指す。代表的な置換基には、ハロゲン、ヒドロキシル基、および任意の数の炭素原子、例えば、１～１４個の炭素原子を含み、１つ以上（例えば、１ ２ ３、または４）のヘテロ原子、例えば、直鎖状、分岐状または環式構造形式でグループ化された酸素、硫黄および窒素を含み得る任意の他の有機基（ｏｒｇａｎｉｃ ｇｒｏｕｐｉｎｇ）が挙げられる。
したがって、置換基の代表的な例には、アルキル基、置換アルキル基（例えば、Ｃ１～Ｃ６、Ｃ１～５、Ｃ１～４、Ｃ１～３、Ｃ１～２、Ｃ１）、アルコキシ基（例えば、Ｃ１～Ｃ６、Ｃ１～５、Ｃ１～４、Ｃ１～３、Ｃ１～２、Ｃ１）、置換アルコキシ基（例えば、Ｃ１～Ｃ６、Ｃ１～５、Ｃ１～４、Ｃ１～３、Ｃ１～２、Ｃ１）、ハロアルキル基（例えば、ＣＦ３）、アルケニル基（例えば、Ｃ２～Ｃ６、Ｃ２～５、Ｃ２～４、Ｃ２～３、Ｃ２）、置換アルケニル基（例えば、Ｃ２～Ｃ６、Ｃ２～５、Ｃ２～４、Ｃ２～３、Ｃ２）、アルキニル基（例えば、Ｃ２～Ｃ６、Ｃ２～５、Ｃ２～４、Ｃ２～３、Ｃ２）、置換アルキニル基（例えば、Ｃ２～Ｃ６、Ｃ２～５、Ｃ２～４、Ｃ２～３、Ｃ２）、環式基（例えば、Ｃ３～Ｃ１２、Ｃ５～Ｃ６）、置換環式基（例えば、Ｃ３～Ｃ１２、Ｃ５～Ｃ６）、炭素環基（例えば、Ｃ３～Ｃ１２、Ｃ５～Ｃ６）、置換炭素環基（例えば、Ｃ３～Ｃ１２、Ｃ５～Ｃ６）、複素環基（例えば、Ｃ３～Ｃ１２、Ｃ５～Ｃ６）、置換複素環基（例えば、Ｃ３～Ｃ１２、Ｃ５～Ｃ６）、アリール基（例えば、ベンジルおよびフェニル）、置換アリール基（例えば、置換ベンジルまたは置換フェニル）、ヘテロアリール基（例えば、ピリジルまたはピリミジル）、置換ヘテロアリール基（例えば、置換ピリジルまたは置換ピリミジル）、アラルキル基（例えば、ベンジル）、置換アラルキル基（例えば、置換ベンジル）、ハロ基、ヒドロキシル基、アリールオキシ基（例えば、Ｃ６～Ｃ１２、Ｃ６）、置換アリールオキシ基（例えば、Ｃ６～Ｃ１２、Ｃ６）、アルキルチオ基（例えば、Ｃ１～Ｃ６）、置換アルキルチオ基（例えば、Ｃ１～Ｃ６）、アリールチオ基（例えば、Ｃ６～Ｃ１２、Ｃ６）、置換アリールチオ基（例えば、Ｃ６～Ｃ１２、Ｃ６）、シアノ基、カルボニル基、置換カルボニル基、カルボキシル基、置換カルボキシル基、アミノ基、置換アミノ基、アミド基、置換アミド基、チオ基、置換チオ基、スルフィニル基、置換スルフィニル基、スルホニル基、置換スルホニル基、スルフィンアミド基、置換スルフィンアミド基、スルホンアミド基、置換スルホンアミド基、尿素基、置換尿素基、カルバメート基、置換カルバメート基、アミノ酸基およびペプチド基が挙げられ得る。
ターゲティングリガンドと、本発明ではＥＰ３００およびその変異型（総称して「ＥＰ３００」）である標的タンパク質との間の相互作用に関連する用語「結合」は、典型的には、細胞に存在する他のタンパク質性実体、例えばＣＢＰとのターゲティングリガンドの結合が機能的に重要でないという点で優先的または実質的に特異的（本明細書では「選択的」とも呼ばれる）であり得る分子間相互作用を指す。本発明の二官能性化合物は、標的分解のために、その変異型を含むＥＰ３００に優先的に結合し、それらを動員し得る。
デグロンとＥ３ユビキチンリガーゼとの間の相互作用に関連する用語「結合」は、典型的には、ターゲティングリガンドと標的タンパク質との間の親和性に等しいかそれを超える親和性レベルを示す場合も示さない場合もある分子間相互作用を指すが、それでもなお、親和性は、標的分解、および標的タンパク質の選択的分解へのリガーゼの動員を達成するのに十分である。
概して、本発明の一態様の二官能性化合物は、式Ｉによって表される構造：
（式中、ターゲティングリガンドは、ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）ｐ３００（ＥＰ３００）に結合する部分を表し、デグロンは、Ｅ３ユビキチンリガーゼに結合する部分を表し、リンカーは、デグロンおよびターゲティングリガンドを共有結合させる部分を表す）、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を有する。
ターゲティングリガンド
いくつかの実施形態では、ＥＰ３００ターゲティングリガンドは、Ａ－４８５またはその類似体である。Ａ－４８５は、構造ＴＬ－１によって表される：
Ａ－４８５は、Ｎ－［（４－フルオロフェニル）メチル］－２－｛（１Ｒ）－５－［（メチルカルバモイル）アミノ］－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロ－３’Ｈ－スピロ［インデン－１，５’－［１，３］オキサゾリジン］－３’－イル｝－Ｎ－［（２Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル］アセトアミドとしても知られており、そのスピロ環類似体は、米国特許出願公開第２０１６／０２３５７１６号明細書およびＭｉｃｈａｅｌｉｄｅｓ，ｅｔ ａｌ．，ＡＣＳ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２８－３３（２０１８）に記載されている。
したがって、いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の二官能性化合物は、構造Ｉ－１：
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体によって表される。
いくつかの実施形態では、ＥＰ３００ターゲティングリガンドは、Ａ－４８５類似体であり、構造ＴＬ－１ａによって表され：
式中、Ａは、ＣＨ２、ＮＨまたはＯであり；
Ｂは、ＣＨ２またはＣＯであり；
Ｒは、Ｈ、ハロ（例えば、ＣｌまたはＦ）、ＣＮ、ＣＦ３、アルキルまたはアルコキシである。
したがって、いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の二官能性化合物は、構造Ｉ－１ａ：
（式中、Ａは、ＣＨ２、ＮＨまたはＯであり；
Ｂは、ＣＨ２またはＣＯであり；
Ｒは、ハロ（例えば、ＣｌまたはＦ）、ＣＮ、ＣＦ３、アルキルまたはアルコキシである）、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体によって表される。
いくつかの実施形態では、ＥＰ３００ターゲティングリガンドは、Ａ－４８５類似体であり、構造ＴＬ－１ｂによって表され：
式中、Ａは、ＣＨ２、ＮＨまたはＯであり；
Ｂは、ＣＨ２またはＣＯであり；
Ｒは、Ｈ、ハロ（例えば、ＣｌまたはＦ）、ＣＮ、ＣＦ３、アルキルまたはアルコキシであり；
Ｒ１は、Ｃ３～Ｃ５炭素環基もしくはアルク炭素環基、または３～５員のＮ－複素環基もしくはアルクＮ－複素環基（ａｌｋＮ－ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ ｇｒｏｕｐ）（Ｎはアルキル基に結合している）であり、アルキル基は、Ｃ１～Ｃ１０アルキル（例えば、Ｃ１～Ｃ３）アルキル基である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１は、
である。
したがって、いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の二官能性化合物は、構造Ｉ－１ｂ：
（式中、Ａは、ＣＨ２、ＮＨまたはＯであり；
Ｂは、ＣＨ２またはＣＯであり；
Ｒは、ハロ（例えば、ＣｌまたはＦ）、ＣＮ、ＣＦ３、アルキルまたはアルコキシであり；
Ｒ１は、Ｃ３～Ｃ５炭素環基もしくはアルク炭素環基、または３～５員のＮ－複素環基もしくはアルクＮ－複素環基であり、アルキル基は、Ｃ１～Ｃ１０アルキル（例えば、Ｃ１～Ｃ３）アルキル基である）、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体によって表される。
いくつかの実施形態では、ＥＰ３００ターゲティングリガンドは、構造ＴＬ－１ｃ：
によって表され、式中、Ｑは、ＣＨ２、Ｏ、Ｎ、ＣＯ、Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｎ、ＣＨ２Ｎ、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮまたはＣＨ２ＣＨ２Ｎであり；
Ｒ２は、
Ｃ３～Ｃ５炭素環基もしくはアルク炭素環基、または３～５員のＮ－複素環基もしくはアルクＮ－複素環基であり、アルキル基は、Ｃ１～Ｃ１０アルキル（例えば、Ｃ１～Ｃ３）アルキル基である。
したがって、いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の二官能性化合物は、構造Ｉ～ｃ：
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体によって表される。
いくつかの実施形態では、ターゲティングリガンドは、構造ＴＬ－１ｄによって表される：
したがって、いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の二官能性化合物は、構造Ｉ－１ｄ：
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体によって表される。
いくつかの実施形態では、ＥＰ３００ターゲティングリガンドは、構造ＴＬ－１ｅによって表される：
したがって、いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の二官能性化合物は、構造Ｉ－１ｅ：
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体によって表される。
いくつかの実施形態では、ＥＰ３００ターゲティングリガンドは、構造ＴＬ－１ｆによって表される：
したがって、いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の二官能性化合物は、構造Ｉ－１ｆ：
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体によって表される。
リンカー
リンカー（「Ｌ」）は、ターゲティングリガンドおよびデグロンの共有結合を提供する。リンカーの構造は、ターゲティングリガンドまたはデグロンの活性を実質的に妨げない限り、重要ではない場合がある。いくつかの実施形態では、リンカーは、アルキレン鎖（例えば、２～２０のアルキレン単位を有する）である。他の実施形態では、リンカーは、アルキレン鎖または二価アルキレン鎖であり得、これらのいずれかは、－Ｏ－、－Ｓ－、－Ｎ（Ｒ’）－、－Ｃ≡Ｃ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（ＮＯＲ’）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｃ（ＮＲ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（ＮＲ’）－、－Ｃ（ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）－、－ＯＢ（Ｍｅ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、Ｃ３～Ｃ１２カルボシクレン（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｅｎｅ）、３～１２員のヘテロシクレン（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅｎｅ）、５～１２員のヘテロアリーレンまたはそれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つによって中断され、および／またはそれらのうちの少なくとも１つを（一方または両方の末端で）終端させ得、式中、Ｒ’は、ＨまたはＣ１～Ｃ６アルキルであり、中断基（ｉｎｔｅｒｒｕｐｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）、および一方または両方の終了基（ｔｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐ）は、同じであっても異なっていてもよい。
他の実施形態では、リンカーは、ポリエチレングリコール鎖であり得る。他の実施形態では、リンカーは、ポリエチレングリコール鎖または二価アルキレン鎖であり得、これらのいずれかは、－Ｓ－、－Ｎ（Ｒ’）－、－Ｃ≡Ｃ－、－Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）－、－ＯＣ（Ｏ）Ｏ－、－Ｃ（ＮＯＲ’）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｏ－、－ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｃ（ＮＲ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（ＮＲ’）－、－Ｃ（ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｃ（ＮＲ’）Ｎ（Ｒ’）－、－ＯＢ（Ｍｅ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）２－、－ＯＳ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｏ－、－Ｓ（Ｏ）－、－ＯＳ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｏ－、－Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ’）－、－Ｎ（Ｒ’）Ｓ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）－、Ｃ３～１２カルボシクレン、３～１２員のヘテロシクレン、５～１２員のヘテロアリーレンまたはそれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つによって中断され、および／またはそれらのうちの少なくとも１つを（一方または両方の末端で）終端させ得、式中、Ｒ’は、ＨまたはＣ１～Ｃ６アルキルであり、一方または両方の終了基は同じであっても異なっていてもよい。
いくつかの実施形態では、リンカーは、窒素もデグロンに結合している、ＮＨ基で終端するＣ１～Ｃ１０アルキレン鎖であり得る。
特定の実施形態では、リンカーは、１～１０個のアルキレン単位を有し、
によって中断されるか
で終端するアルキレン鎖である。
他の実施形態では、リンカーは、１～８個のＰＥＧ単位を有し、
で終端するポリエチレングリコール鎖である。
「カルボシクレン」は、置換されていてもよい二価の炭素環ラジカルを指す。
「ヘテロシクレン」は、場合により置換されていてもよい二価のヘテロシクリルラジカルを指す。
「ヘテロアリーレン」は、場合により置換されていてもよい二価のヘテロアリールラジカルを指す。
本発明で使用するのに好適であり得るリンカーの代表的な例には、アルキレン鎖、例えば、以下が挙げられる：
（式中、ｎは、１から１０まで（「から（ｆｒｏｍ）」は包括的を意味する）の整数、例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、２～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、２～３、３～１０、３～９、３～８、３～７、３～６、３～５、３～４、４～１０、４～９、４～８、４～７、４～６、４～５、５～１０、５～９、５～８、５～７、５～６、６～１０、６～９、６～８、６～７、７～１０、７～９、７～８、８～１０、８～９、９～１０ならびに１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０であり、その例には以下が挙げられる）：
（上記のように）様々な官能基で終端するアルキレン鎖であって、その例は以下の通りであるアルキレン鎖：
（上記のように）様々な官能基によって中断されるアルキレン鎖であって、その例は以下の通りであるアルキレン鎖：
ヘテロシクレン基によって中断されるか終端するアルキレン鎖、例えば、
（式中、ｍおよびｎは、独立して０から１０までの整数である）であって、その例には以下が挙げられるアルキレン鎖：
アミド基、ヘテロシクレン基および／またはアリール基によって中断されるアルキレン鎖であって、その例には以下が挙げられるアルキレン鎖：
ヘテロシクレン基およびアリール基、およびヘテロ原子によって中断されるアルキレン鎖であって、その例には以下が挙げられるアルキレン鎖：
ならびに
Ｎ、ＯまたはＢなどのヘテロ原子によって中断されるか、それらで終端するアルキレン鎖、例えば、
（式中、各ｎは、独立して１から１０までの整数、例えば、１～９、１～８、１～７、１～６、１～５、１～４、１～３、１～２、２～１０、２～９、２～８、２～７、２～６、２～５、２～４、２～３、３～１０、３～９、３～８、３～７、３～６、３～５、３～４、４～１０、４～９、４～８、４～７、４～６、４～５、５～１０、５～９、５～８、５～７、５～６、６～１０、６～９、６～８、６～７、７～１０、７～９、７～８、８～１０、８～９、９～１０ならびに１、２、３、４、５、６、７、８、９および１０であり、Ｒは、ＨまたはＣ１～Ｃ４アルキルである）であって、その例は以下の通りであるアルキレン鎖
いくつかの実施形態では、リンカーはポリエチレングリコール鎖であり、その例には以下が挙げられ：
式中、ｎは１から１０までの整数であり、その例には以下が挙げられる：
いくつかの実施形態では、ポリエチレングリコール鎖は、官能基で終端し得、その例は以下の通りである：
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の二官能性化合物は、構造Ｌ１０によって表されるリンカーを含み：
式中、Ｘは、ＣＨ２、ＮＨ、ＮＭｅ、ＮＥｔまたはＯであり、ｎは０から１１までの整数である。
いくつかの実施形態では、リンカーは、構造Ｌ１１～Ｌ２６のいずれか１つによって表される：
したがって、いくつかの実施形態では、本発明の二官能性化合物は、構造Ｉ－２～Ｉ－１２のいずれか１つ：
ターゲティングリガンド
デグロン
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体によって表される。
いくつかの実施形態では、本発明の二官能性化合物は、以下からなる群から選択される構造：
またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体によって表される。
デグロン
デグロン（「Ｄ」）は、Ｅ３ユビキチンリガーゼに結合する官能性部分である。いくつかの実施形態では、デグロンは、セレブロン（ＣＲＢＲＮ）に結合する。いくつかの実施形態では、デグロンは、フォンヒッペルリンダウ（ＶＨＬ）腫瘍抑制因子に結合する。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の二官能性化合物は、セレブロンに結合するデグロンを含む。セレブロンに結合するデグロンの代表的な例は、米国特許出願公開第２０１８／００１５０８５号明細書に記載されている（例えば、その中の式ＩＡおよびＩＡ’に包含されるイソインドリノンおよびイソインドリン－１，３－ジオンなどのインドリノン、ならびにその中の式ＩＢおよびＩＢ’に包含される架橋シクロアルキル化合物）。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、セレブロンに結合し、構造Ｄ１によって表されるデグロンを含み：
式中、Ｙは、ＣＨ２またはＣＯであり；
Ｚは、ＮＨ、ＯまたはＯＣＨ２ＣＯであり、波線（
）は、リンカーおよびＥＰ３００ターゲティング部分に対する結合点を表す。
いくつかの実施形態では、デグロンは、構造Ｄ１－ａによって表される：
いくつかの実施形態では、デグロンはＶＨＬに結合する。ＶＨＬに結合するデグロンの代表的な例は、以下の通りである：
（式中、Ｙ’は、結合、Ｎ、ＯまたはＣである）；
（式中、Ｚは、環式基、例えば、Ｃ５～Ｃ６炭素環基またはＣ５～Ｃ６複素環基である）；および
ＶＨＬに結合し、本発明で使用するのに好適であり得るさらに他のデグロンは、米国特許出願公開第２０１７／０１２１３２１ Ａ１号明細書に開示されている。
したがって、いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の二官能性化合物は、構造ＴＬ－１、ＴＬ－１ａ、ＴＬ－１ｂ、ＴＬ－１ｃおよびＬ１－Ｌ１１と、Ｄ１、Ｄ１ａおよびＤ２－ａ～Ｄ２－ｅを含む、本明細書に記載のデグロンの構造との組合せによって生成される任意の構造、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体によって表される。
いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、以下からなる群から選択される構造：
ならびにその薬学的に許容される塩および立体異性体によって表される。
ビオチン化化合物
本発明の別の態様は、式ＩＩによって表される構造を有する二官能性化合物に関し：
式中、ターゲティングリガンドは、ヒストンアセチルトランスフェラーゼｐ３００（本明細書ではＥＰ３００とも呼ばれる）に結合する部分を表し、リンカー（上に開示される）は、ビオチンおよびターゲティングリガンドを共有結合させる部分を表す。
したがって、いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の二官能性化合物は、以下からなる群から選択される構造：
またはその塩もしくは立体異性体によって表される。
式（Ｉ）および式（ＩＩ）の二官能性化合物は、遊離酸もしくは遊離塩基または薬学的に許容される塩の形態であり得る。本明細書で使用される場合、塩の文脈では、用語「薬学的に許容される」は、化合物の生物学的活性または特性を無効にせず、比較的毒性がない化合物を指し、すなわち、塩形態の化合物は、望ましくない生物学的効果（めまいまたは胃の不調など）を引き起こしたり、それが含有される組成物の他の成分のいずれかと有害な方法で相互作用したりすることなく、対象に投与され得る。用語「薬学的に許容される塩」は、本発明の化合物と好適な酸または塩基との反応によって得られる生成物を指す。本発明の化合物の薬学的に許容される塩の例には、好適な無機塩基に由来するもの、例えば、Ｌｉ塩、Ｎａ塩、Ｋ塩、Ｃａ塩、Ｍｇ塩、Ｆｅ塩、Ｃｕ塩、Ａｌ塩、Ｚｎ塩およびＭｎ塩が挙げられる。薬学的に許容される非毒性の酸付加塩の例には、無機酸により形成されるアミノ基の塩、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩（ｇｌｕｃａｒｏｎａｔｅ）、糖酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、４－メチルベンゼンスルホン酸塩またはｐ－トルエンスルホン酸塩などがある。本発明の特定の化合物は、リシン、アルギニン、グアニジン、ジエタノールアミンまたはメトホルミンなどの様々な有機塩基と薬学的に許容される塩を形成することができる。
本発明の二官能性化合物は、少なくとも１つのキラル中心を有し得、したがって、本明細書で使用される場合、空間内のそれらの原子の配向のみが異なる、個々の化合物のあらゆる異性体を包含する立体異性体の形態であり得る。立体異性体という用語には、鏡像異性体（化合物の（Ｒ－）または（Ｓ－）配置を含むエナンチオマー）、化合物の鏡像異性体の混合物（エナンチオマーの物理的混合物、およびラセミ体またはラセミ混合物）、化合物の幾何（シス／トランスまたはＥ／Ｚ、Ｒ／Ｓ）異性体、および互いに鏡像でない複数のキラル中心を有する化合物の異性体（ジアステレオ異性体）が含まれる。化合物のキラル中心は、インビボでエピマー化を受け得る。したがって、これらの化合物について、その（Ｒ－）形態での化合物の投与は、その（Ｓ－）形態での化合物の投与と同等であると考えられる。したがって、本発明の化合物は、個々の異性体の形態で、かつ他の異性体を実質的に含まず、または様々な異性体の混合物、例えば、立体異性体のラセミ混合物の形態で、作製および使用され得る。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）または式（ＩＩ）の二官能性化合物は、同位体の天然存在量を超える量、すなわち濃縮された量で、原子の少なくとも１つの所望の同位体置換を有するという点で同位体誘導体である。一実施形態では、化合物は、重水素または複数の重水素原子を含む。重水素、すなわち、２Ｈなどの比較的重い同位体による置換は、比較的大きな代謝安定性、例えば、インビボ半減期の増加または必要な投与量の減少から生じる特定の治療上の利点をもたらし得るため、状況によっては有利である可能性がある。
さらに、式（Ｉ）の化合物は、Ｎ－オキシド、結晶形態（多形としても知られる）、同じタイプの活性を有する化合物の活性代謝物、互変異性体、ならびに化合物の、水、エタノールなどの薬学的に許容される溶媒を用いた非溶媒和形態および溶媒和形態の使用を包含する。本明細書に提示されるコンジュゲートの溶媒和形態もまた、本明細書に開示されると考えられる。
合成方法
別の態様では、本発明は、本発明の二官能性化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を作製するための方法に関する。概して、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体は、化学的に関連する化合物の調製に適用可能であることが知られている任意のプロセスによって調製され得る。本発明の化合物は、様々な実施例に記載され、かつ本発明の化合物を調製することができる非限定的な方法を示す合成スキームに関連して、さらによく理解されるであろう。
医薬組成物
本発明の別の態様は、式（Ｉ）の二官能性化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体の治療有効量と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物に関する。当技術分野で公知の用語「薬学的に許容される担体」は、本発明の化合物を哺乳動物に投与するのに好適な薬学的に許容される材料、組成物またはビヒクルを指す。好適な担体には、例えば、液体（水性および非水性の両方の類似物、ならびにそれらの組合せ）、固体、封入材料、ガス、およびそれらの組合せ（例えば、半固体）、ならびに１つの器官、または身体の一部から、別の器官、または身体の一部に化合物を運搬または輸送するように機能するガスが含まれ得る。担体は、製剤の他の成分に対して生理学的に不活性であり、それと適合性があり、対象または患者に有害でないという意味で「許容される」。組成物はまた、製剤のタイプに応じて、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含み得る。
概して、式（Ｉ）の二官能性化合物ならびにそれらの薬学的に許容される塩および立体異性体は、従来の薬学的実践、例えば、従来の混合、溶解、造粒、糖衣錠製造、水簸、乳化、カプセル化、捕捉および圧縮プロセスに従って、所与のタイプの組成物に製剤化され得る（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ（２０ｔｈ ｅｄ．），ｅｄ．Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００およびＥｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｅｄｓ．Ｊ．Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ ａｎｄ Ｊ．Ｃ．Ｂｏｙｌａｎ，１９８８－１９９９，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照）。製剤のタイプは、経腸（例えば、経口、頬側、舌下および直腸）、非経口（例えば、皮下（ｓ．ｃ．）、静脈内（ｉ．ｖ．）、筋肉内（ｉ．ｍ．）および胸骨内注射または注入技術、眼内、動脈内、髄内、髄腔内、脳室内、経皮、皮内、膣内、腹腔内、粘膜、経鼻、気管内注入、気管支注入、ならびに吸入）および局所（例えば、経皮）を含み得る投与様式に依存する。一般に、最も適切な投与経路は、例えば、薬剤の性質（例えば、消化管の環境でのその安定性）および／または対象の状態（例えば、対象が経口投与に耐えられるかどうか）を含む様々な因子に依存する。例えば、非経口（例えば、静脈内）投与はまた、化合物が、単回投与治療および／または急性状態の場合のように、比較的迅速に投与され得るという点で有利であり得る。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の二官能性化合物は、経口投与または静脈内投与（例えば、全身静脈内注射）のために製剤化される。
したがって、式（Ｉ）の二官能性化合物は、固体組成物（例えば、粉末、錠剤、分散性顆粒、カプセル、カシェおよび坐剤）、液体組成物（例えば、化合物が溶解される溶液、化合物の固体粒子が分散される懸濁液、エマルジョン、ならびにリポソーム、ミセルまたはナノ粒子、シロップおよびエリキシルを含有する溶液）；半固体組成物（例えば、ゲル、懸濁液およびクリーム）；およびガス（例えば、エアロゾル組成物用の推進剤）に製剤化され得る。化合物はまた、迅速放出、中間放出または持続放出のために製剤化され得る。
経口投与用の固形剤形には、カプセル、錠剤、丸薬、粉末および顆粒が含まれる。そのような固形剤形では、活性化合物は、担体、例えば、クエン酸ナトリウムまたはリン酸二カルシウム、ならびに追加の担体または賦形剤、例えば、ａ）充填剤または増量剤、例えば、デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸、ｂ）結合剤、例えば、メチルセルロース、微結晶セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、アルジネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロースおよびアカシアなど、ｃ）保湿剤、例えば、グリセロール、ｄ）崩壊剤、例えば、架橋ポリマー（例えば、架橋ポリビニルピロリドン（クロスポビドン）、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（クロスカルメロースナトリウム）、デンプングリコレートナトリウム、寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、特定のシリケート、および炭酸ナトリウム、ｅ）溶解遅延剤（ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｒｅｔａｒｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、例えば、パラフィン、ｆ）吸収促進剤、例えば、第四級アンモニウム化合物、ｇ）湿潤剤、例えば、セチルアルコールおよびグリセロールモノステアレートなど、ｈ）吸収剤、例えば、カオリンおよびベントナイト粘土、およびｉ）潤滑剤、例えば、タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびそれらの混合物と混合される。カプセル、錠剤および丸薬の場合、剤形はまた、緩衝剤を含み得る。同様のタイプの固体組成物が、ラクトースまたは乳糖および高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を使用して、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル剤中の充填剤として使用されてもよい。錠剤、糖衣錠、カプセル、丸薬および顆粒の固形剤形は、腸溶コーティングおよび他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて調製され得る。それらは、乳白剤をさらに含有し得る。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の二官能性化合物は、軟質および硬質ゼラチンカプセルに製剤化され得る。使用され得る代表的な賦形剤には、アルファ化デンプン、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、フマル酸ステアリルナトリウム、無水ラクトース、微結晶セルロースおよびクロスカルメロースナトリウムが含まれる。ゼラチンシェルは、ゼラチン、二酸化チタン、酸化鉄および着色剤を含み得る。
経口投与用の液体剤形には、溶液、懸濁液、エマルジョン、マイクロエマルジョン、シロップおよびエリキシルが含まれる。液体剤形は、化合物に加えて、当技術分野で一般的に使用される水性または非水性担体（化合物の溶解度に応じて）、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤および乳化剤など、例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカーボネート、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に綿実油、落花生油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル、ならびにそれらの混合物を含有し得る。経口組成物はまた、賦形剤、例えば、湿潤剤、懸濁剤、着色料、甘味料、香味剤および芳香剤を含み得る。
注射用調製物は、滅菌水溶液または油性懸濁液を含み得る。それらは、好適な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を使用する標準的な技術に従って製剤化され得る。無菌注射用調製物はまた、例えば、１，３－ブタンジオールの溶液として、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の無菌の注射可能な溶液、懸濁液またはエマルジョンであり得る。使用され得る許容可能なビヒクルおよび溶媒の中には、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および等張食塩液がある。さらに、溶媒または懸濁媒体として、無菌の固定油が従来使用されている。この目的のために、合成モノグリセリドまたは合成ジグリセリドを含む任意の刺激の少ない固定油が使用され得る。さらに、オレイン酸などの脂肪酸が注射剤の調製に使用される。注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通して濾過することによって、または使用前に滅菌水もしくは他の滅菌注射用媒体に溶解もしくは分散することができる滅菌固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって、滅菌され得る。化合物の効果は、その吸収を遅くすることによって延長させてもよく、これは、水溶性の低い液体懸濁液または結晶性材料もしくはアモルファス材料を使用することによって達成され得る。非経口的に投与された製剤からの化合物の長期吸収はまた、油性ビヒクルに化合物を懸濁することによって達成され得る。
特定の実施形態では、本発明の式（Ｉ）の化合物は、例えば、多くの場合デポー調製物または徐放性製剤では、器官へのコンジュゲートの直接注射を介して、全身的ではなく局所的に投与され得る。特定の実施形態では、長時間作用型製剤は、移植（例えば、皮下または筋肉内）または筋肉内注射によって投与される。注射用デポー形態は、生分解性ポリマー、例えば、ポリラクチド－ポリグリコリド、ポリ（オルトエステル）およびポリ（無水物）中で化合物のマイクロカプセルマトリックスを形成することによって作製される。化合物の放出速度は、化合物とポリマーとの比、および使用される特定のポリマーの性質を変化させることによって制御され得る。デポー注射用製剤はまた、体組織と適合性のあるリポソームまたはマイクロエマルジョンに化合物を捕捉することによって調製される。さらに、他の実施形態では、化合物は、標的化された薬物送達システム、例えば、器官特異的抗体によってコーティングされたリポソームで送達される。そのような実施形態では、リポソームは、器官を標的とし、器官によって選択的に取り込まれる。
式（Ｉ）の二官能性化合物は、頬側または舌下投与のために製剤化され得、その例には、錠剤、トローチ剤およびゲルが挙げられる。
二官能性化合物は、吸入による投与のために製剤化され得る。吸入による投与に適した様々な形態には、エアロゾル、ミストまたは粉末が含まれる。医薬組成物は、好適な推進剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の好適なガス）を使用して、加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレー提示の形態で送達され得る。いくつかの実施形態では、加圧エアロゾルの投薬単位は、計量された量を送達するための弁を設けることによって決定され得る。いくつかの実施形態では、例えば、吸入器または注入器に使用するために、化合物とラクトースまたはデンプンなどの好適な粉末基剤との粉末混合物を含有する、ゼラチンを含むカプセルおよびカートリッジが製剤化され得る。
式（Ｉ）の二官能性化合物は、本明細書で使用される場合、表皮に製剤を適用することによる皮内投与を指す局所投与のために製剤化され得る。これらのタイプの組成物は、典型的には、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液およびスプレーの形態である。
局所適用のための組成物を製剤化するのに有用な担体の代表的な例には、溶媒（例えば、アルコール、多価アルコール、水）、クリーム、ローション、軟膏、油、プラスター、リポソーム、粉末、エマルジョン、マイクロエマルジョンおよび緩衝液（例えば、低張食塩水または緩衝食塩水）が挙げられる。例えば、クリームは、飽和または不飽和脂肪酸、例えば、ステアリン酸、パルミチン酸、オレイン酸、パルミトオレイン酸（ｐａｌｍｉｔｏ－ｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ）、セチルアルコールまたはオレイルアルコールを使用して製剤化され得る。クリームはまた、非イオン性界面活性剤、例えば、ポリオキシ－４０－ステアレートを含有し得る。
いくつかの実施形態では、局所製剤はまた、賦形剤を含み得、その例は、浸透増強剤である。これらの薬剤は、好ましくは全身吸収をほとんどまたは全く伴わずに、角質層を通して表皮または真皮に、薬理学的に活性な化合物を輸送することができる。皮膚を通る薬物の浸透速度を高める点でのそれらの効果に関して、多種多様な化合物が評価されてきた。例えば、様々な皮膚浸透促進剤の使用および試験を調査するＰｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｒｓ，Ｍａｉｂａｃｈ Ｈ．Ｉ．ａｎｄ Ｓｍｉｔｈ Ｈ．Ｅ．（ｅｄｓ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９９５）、およびＢｕｙｕｋｔｉｍｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅａｎｓ ｏｆ Ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ Ｄｒｕｇ Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｉｎ Ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ ａｎｄ Ｔｏｐｉｃａｌ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｇｏｓｈ Ｔ．Ｋ．，Ｐｆｉｓｔｅｒ Ｗ．Ｒ．，Ｙｕｍ Ｓ．Ｉ．（Ｅｄｓ．），Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．，Ｂｕｆｆａｌｏ Ｇｒｏｖｅ，Ｉｌｌ．（１９９７）を参照されたい。浸透増強剤の代表的な例には、トリグリセリド（例えば、大豆油）、アロエ組成物（例えば、アロエベラゲル）、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、オクトリフェニルポリエチレン（ｏｃｔｏｌｙｐｈｅｎｙｌｐｏｌｙｅｔｈｙｌｅｎｅ）グリコール、オレイン酸、ポリエチレングリコール４００、プロピレングリコール、Ｎ－デシルメチルスルホキシド、脂肪酸エステル（例えば、ミリスチン酸イソプロピル、ラウリン酸メチル、モノオレイン酸グリセロールおよびモノオレイン酸プロピレングリコール）およびＮ－メチルピロリドンが挙げられる。
局所および他のタイプの製剤に含まれ得る（それらが適合性のある範囲で）さらに他の賦形剤の代表的な例には、防腐剤、抗酸化剤、保湿剤、皮膚軟化剤、緩衝剤、可溶化剤、皮膚保護剤および界面活性剤が挙げられる。好適な防腐剤には、アルコール、第四級アミン、有機酸、パラベンおよびフェノールが含まれる。好適な抗酸化剤には、アスコルビン酸およびそのエステル、亜硫酸水素ナトリウム、ブチル化ヒドロキシトルエン、ブチル化ヒドロキシアニソール、トコフェロール、ならびにＥＤＴＡおよびクエン酸などのキレート剤が含まれる。好適な保湿剤には、グリセリン、ソルビトール、ポリエチレングリコール、尿素およびプロピレングリコールが含まれる。好適な緩衝剤には、クエン酸緩衝液、塩酸緩衝液および乳酸緩衝液が含まれる。好適な可溶化剤には、第四級アンモニウムクロリド、シクロデキストリン、安息香酸ベンジル、レシチンおよびポリソルベートが含まれる。好適な皮膚保護剤には、ビタミンＥ油、アラトイン、ジメチコン、グリセリン、ワセリンおよび酸化亜鉛が含まれる。
経皮製剤は、典型的には、化合物が親油性エマルジョンまたは緩衝水溶液に製剤化され、ポリマーまたは接着剤に溶解および／または分散される経皮送達デバイスおよび経皮送達パッチを使用する。パッチは、医薬品の連続的な送達、脈動的な送達、またはオンデマンドの送達のために構築され得る。化合物の経皮送達は、イオントフォレーシスパッチによって達成され得る。経皮パッチは、速度制御膜を使用することによって、またはポリマーマトリックスもしくはゲル内に化合物を捕捉することによって吸収速度を遅らせる、化合物の制御された送達を提供し得る。吸収促進剤を使用して吸収を増加させてもよく、その例には、皮膚の通過を助ける吸収性の薬学的に許容される溶媒が含まれる。
眼科製剤には点眼薬が含まれる。
直腸投与用の製剤には、浣腸、直腸ゲル、直腸発泡剤、直腸エアロゾルおよび保持浣腸が含まれ、これらは、従来の坐剤基剤、例えば、カカオバターまたは他のグリセリド、および合成ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン、ＰＥＧなどを含有し得る。また、直腸投与または膣内投与用の組成物は、化合物と、いずれも周囲温度では固体であるが、体温では液体であるため、直腸または膣腔で融解し、化合物を放出する好適な非刺激性担体および賦形剤、例えば、カカオバター、脂肪酸グリセリドの混合物、ポリエチレングリコール、坐剤ワックスおよびそれらの組合せとを混合することによって調製され得る坐剤として製剤化され得る。
投薬量
本明細書で使用される場合、用語「治療有効量」は、異常なＥＰ３００活性による疾患または障害に罹患している特定の患者に対して所望の治療反応をもたらすのに有効な、式（Ｉ）の二官能性化合物もしくはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体；または式（Ｉ）の二官能性化合物もしくはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体を含む組成物の量を指す。したがって、用語「治療有効量」には、投与された際に、（例えば、ＥＰ３００を選択的に阻害／分解するために）治療される疾患または障害に正の改変を誘導するか、疾患または障害の発症または進行を予防するのに十分であるか、対象の治療される疾患または障害の症状のうちの１つ以上をある程度まで緩和するか、疾患（例えば、神経芽腫）細胞を単に死滅させるか阻害するか、疾患細胞内のＥＰ３００の量を減少させる、本発明の化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体の量が含まれる。
式（Ｉ）の二官能性化合物の１日総投薬量、およびその使用法は、標準的な医療行為に従って、例えば、主治医が穏当な医学的判断を使用することによって決定され得る。任意の特定の対象に対する特定の治療上有効な用量は、治療される疾患または障害およびその重症度（例えば、その現在の状態）；対象の年齢、体重、一般的な健康状態、性別および食餌；使用される特定の化合物の投与時間、投与経路および排泄速度；治療期間；使用される特定の化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物；ならびに医学分野で周知の同様の因子を含む様々な因子に依存し得る（例えば、Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｇｉｌｍａｎ，Ｊ．Ｈａｒｄｍａｎ ａｎｄ Ｌ．Ｌｉｍｂｉｒｄ，ｅｄｓ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｐｒｅｓｓ，１５５－１７３，２００１を参照）。
式（Ｉ）の二官能性化合物ならびにそれらの薬学的に許容される塩および立体異性体は、広い投薬量範囲にわたって有効であり得る。いくつかの実施形態では、１日総投薬量（例えば、成人の場合）は、約０．００１～約１６００ｍｇ、０．０１～約１６００ｍｇ、０．０１～約５００ｍｇ、約０．０１～約１００ｍｇ、約０．５～約１００ｍｇ、１～約１００～４００ｍｇ／日、約１～約５０ｍｇ／日、および約５～約４０ｍｇ／日の範囲であり得、さらに他の実施形態では、約１０～約３０ｍｇ／日の範囲であり得る。個々の投薬量は、化合物が１日当たりに投与される回数に応じて、所望の投薬量を含むように製剤化され得る。例として、カプセルは、約１～約２００ｍｇの化合物（例えば、１、２、２．５、３、４、５、１０、１５、２０、２５、５０、１００、１５０および２００ｍｇ）を含むように製剤化され得る。
いくつかの実施形態では、投与される式（Ｉ）の二官能性化合物の量は、治療される患者、障害の重症度、投与速度、化合物の性質、および処方する医師の裁量に依存する。投薬量は、単回用量または分割用量では、約０．００１～約１００ｍｇ／ｋｇ体重／日、好ましくは約１～約３５ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。７０ｋｇのヒトの場合、これは、約０．０５～約７ｇ／日、好ましくは約０．１～約２．５ｇ／日に相当する。場合によっては、前述の範囲の下限を下回る投薬量レベルが十分すぎる可能性があり、他の場合には、有害な副作用を引き起こすことなく、さらに多い投薬量が使用され得る。
使用方法
いくつかの態様では、本発明は、それを必要とする対象に、式（Ｉ）の二重特異性化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体の治療有効量を投与することを伴う、異常な（例えば、機能不全または調節不全の）ＥＰ３００活性を伴う疾患または障害を治療する方法に関する。
疾患または障害は、異常なＥＰ３００活性またはＭＹＣ活性（例えば、非病的状態と比較して、ＥＰ３００のレベルの上昇、またはそうでなければ機能的に異常なＥＰ３００）によって特徴付けられるか、媒介されると言われ得る。「疾患」は、一般に、対象が恒常性を維持することができず、かつ疾患が改善されない場合、対象の健康が悪化し続ける、対象の健康状態と考えられる。対照的に、対象の「障害」は、対象が恒常性を維持することができるが、対象の健康状態が、障害がない場合よりも不利である健康状態である。治療せずに放置しても、障害が動物の健康状態をさらに低下させるとは限らない。
いくつかの実施形態では、本出願の化合物は、細胞増殖性疾患および障害（例えば、癌または良性新生物）の治療に有用であり得る。本明細書で使用される場合、用語「細胞増殖性疾患または障害」は、非癌性状態、例えば、新生物、前癌状態、良性腫瘍および癌を含め、脱調節性もしくは異常な細胞増殖またはその両方を特徴とする状態を指す。
本明細書で使用される用語「対象」（または「患者」）は、示された疾患または障害を起こしやすいか、示された疾患または障害に罹患している、動物界のあらゆる成員を含む。いくつかの実施形態では、対象は、哺乳動物、例えば、ヒトまたは非ヒト哺乳動物である。該方法は、伴侶動物、例えば、イヌおよびネコ、ならびに家畜、例えば、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、および他の飼育動物および野生動物にも適用可能である。本発明による治療「を必要とする」対象は、確実に診断されてい得る特定の疾患または障害に「罹患しているか、罹患している疑いがある」可能性があるか、そうでなければ、医学専門家がその対象がその疾患または障害に罹患したことを診断するか疑うことができるように、十分な数の危険因子、または十分な数もしくは組合せの徴候もしくは症状を呈し得る。したがって、特定の疾患または障害に罹患している、および罹患している疑いがある対象は、必ずしも２つの別個の群であるとは限らない。
本発明の化合物による治療に適している可能性のある非癌性（例えば、細胞増殖性）疾患または障害の例示的なタイプには、炎症性疾患および炎症性状態、自己免疫疾患、神経変性疾患、心疾患、ウイルス性疾患、慢性および急性の腎疾患または腎傷害、代謝性疾患、ならびにアレルギー性疾患および遺伝性疾患が含まれる。
特定の非癌性疾患および障害の代表的な例には、関節リウマチ、円形脱毛症、リンパ増殖性状態、自己免疫血液障害（例えば、溶血性貧血、再生不良性貧血、無汗性外胚葉形成異常症、真正赤血球性貧血および特発性血小板減少症）、胆嚢炎、リウマチ性脊椎炎、骨関節炎、痛風、強皮症、敗血症、敗血症性ショック、涙腺炎、クリオピリン関連周期性症候群（ＣＡＰＳ）、内毒素ショック、子宮内膜炎、グラム陰性敗血症、乾性角結膜炎、毒素性ショック症候群、喘息、成人呼吸促迫症候群、慢性閉塞性肺疾患、慢性肺炎症、慢性移植拒否反応、化膿性汗腺炎、炎症性腸疾患、クローン病、ベーチェット症候群、全身性エリテマトーデス、糸球体腎炎、多発性硬化症、若年型糖尿病、自己免疫性網膜ぶどう膜炎、自己免疫性血管炎、甲状腺炎、アディソン病、扁平苔癬、虫垂炎、水疱性天疱瘡、尋常性天疱瘡、落葉状天疱瘡、腫瘍随伴性天疱瘡、重症筋無力症、免疫グロブリンＡ腎症、橋本病、シェーグレン症候群、白斑、ウェゲナー肉芽腫症、精巣肉様腫、自己免疫性卵巣炎、サルコイドーシス、リウマチ性心炎、強直性脊椎炎、グレーヴス病、自己免疫性血小板減少性紫斑病、乾癬、乾癬性関節炎、湿疹、ヘルペス状皮膚炎、潰瘍性大腸炎、膵線維症、肝炎、肝線維症、ＣＤ１４媒介性敗血症（ＣＤ１４ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｅｐｓｉｓ）、非ＣＤ１４媒介性敗血症、急性腎疾患および慢性腎疾患、過敏性腸症候群、発熱（ｐｙｒｅｓｉｓ）、再狭窄、子宮頸管炎、脳卒中および虚血性損傷、神経外傷、急性疼痛および慢性疼痛、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、慢性心不全、うっ血性心不全、急性冠動脈症候群、悪液質、マラリア、らい病、リーシュマニア症、ライム病、ライター症候群、急性滑膜炎、筋変性、滑液包炎、腱炎、腱鞘炎、脱出した、破裂したまたは脱した椎間円板症候群（ｈｅｒｎｉａｔｅｄ，ｒｕｐｔｕｒｅｄ，ｏｒ ｐｒｏｌａｐｓｅｄ ｉｎｔｅｒｖｅｒｔｅｂｒａｌ ｄｉｓｋ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、骨粗鬆症、副鼻腔炎、血栓症、ケイ肺症、肺サルコーシス（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｓａｒｃｏｓｉｓ）、骨吸収疾患、例えば、骨粗鬆症、線維筋痛、ＡＩＤＳおよび他のウイルス性疾患、例えば、帯状疱疹、Ｉ型単純疱疹またはＩＩ型単純疱疹、インフルエンザウイルスおよびサイトメガロウイルス、Ｉ型糖尿病およびＩＩ型糖尿病、肥満、インスリン抵抗性網膜症および糖尿病性網膜症、２２ｑ１１．２欠失症候群、アンジェルマン症候群、カナバン病、セリアック病、シャルコー・マリー・トゥース病、色盲、ネコ鳴き症候群、ダウン症候群、嚢胞性線維症、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、血友病、クラインフェルター症候群、神経線維腫症、フェニルケトン尿症、プラダー・ウィリー症候群、鎌状赤血球症、テイ・サックス病、ターナー症候群、尿素サイクル異常症、サラセミア、耳炎、膵炎、耳下腺炎、心膜炎、胸膜炎、咽頭炎、胸膜炎、静脈炎、肺炎、ブドウ膜炎、多発性筋炎、直腸炎、間質性肺線維症、皮膚筋炎、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、筋萎縮性側索硬化症、反社会性（ａｓｏｃｉａｌｉｔｙ）、静脈瘤、膣炎、うつ病ならびに乳児突然死症候群が挙げられる。
他の実施形態では、該方法は、癌を有する対象を治療することに関する。概して、本発明の化合物は、癌腫（原発性および転移性腫瘍の両方を含む固形腫瘍）、肉腫、黒色腫、ならびに血液癌（リンパ球、骨髄および／またはリンパ節を含む血液に影響を与える癌）、例えば、白血病、リンパ腫および多発性骨髄腫を治療するのに有効であり得る。成人の腫瘍／癌および小児の腫瘍／癌が含まれる。癌は、血管新生化されているか、未だ実質的に血管新生化されていないか、血管新生化されていない腫瘍であり得る。
癌の代表的な例には、副腎皮質癌、ＡＩＤＳ関連癌（例えば、カポジのリンパ腫、およびＡＩＤＳ関連リンパ腫）、虫垂癌、小児癌（例えば、小児小脳星細胞腫、小児大脳星細胞腫）、基底細胞癌、皮膚癌（非黒色腫）、胆道癌、肝外胆管癌、肝内胆管癌、膀胱癌（ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ）、膀胱癌（ｕｒｉｎａｒｙ ｂｌａｄｄｅｒ ｃａｎｃｅｒ）、脳癌（例えば、神経膠腫および神経膠芽腫、例えば、脳幹神経膠腫、妊娠性絨毛腫瘍神経膠腫（ｇｅｓｔａｔｉｏｎａｌ ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｔｕｍｏｒ ｇｌｉｏｍａ）、小脳星細胞腫、大脳星細胞腫／悪性神経膠腫、上衣腫、髄芽腫、テント上原始神経外胚葉性腫瘍（ｓｕｐｒａｔｅｎｔｏｒｉａｌ ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｎｅｕｒｏｅｃｔｏｄｅｉｍａｌ ｔｕｍｏｒ）、視覚路および視床下部神経膠腫（ｖｉｓｕａｌ ｐａｔｈｗａｙ ａｎｄ ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ ｇｌｉｏｍａ））、乳癌、気管支腺腫／カルチノイド、カルチノイド腫瘍、神経系癌（例えば、中枢神経系癌、中枢神経系リンパ腫）、子宮頸癌、慢性骨髄増殖性疾患、結腸直腸癌（例えば、結腸癌、直腸癌）、リンパ系新生物、菌状息肉腫、セザリー症候群、子宮内膜癌、食道癌、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼の癌、眼内黒色腫、網膜芽細胞腫、胆嚢癌、胃腸癌（例えば、胃癌、小腸癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ））、胆管細胞癌、胚細胞腫瘍、卵巣胚細胞腫瘍、頭頸部癌、神経内分泌腫瘍、ホジキンリンパ腫、Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ ｓｔａｇｅ ＩＩＩおよびｓｔａｇｅ ＩＶ小児非ホジキンリンパ腫、ＲＯＳ１陽性難治性非ホジキンリンパ腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、下咽頭癌、眼内黒色腫、眼球癌（ｏｃｕｌａｒ ｃａｎｃｅｒ）、膵島細胞腫瘍（膵内分泌部）、腎癌（例えば、ウィルムス腫瘍、腎細胞癌）、肝癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌および小細胞肺癌）、ＡＬＫ陽性未分化大細胞リンパ腫、ＡＬＫ陽性進行性悪性固形新生物、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、黒色腫、眼内（眼）黒色腫、メルケル細胞癌、中皮腫、潜在性原発性を有する転移性扁平頸部癌、多発性内分泌腫瘍症（ＭＥＮ）、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性疾患、鼻咽頭癌、神経芽腫、口腔癌（ｏｒａｌ ｃａｎｃｅｒ）（例えば、口腔癌（ｍｏｕｔｈ ｃａｎｃｅｒ）、口唇癌、口腔癌（ｏｒａｌ ｃａｖｉｔｙ ｃａｎｃｅｒ）、舌癌、中咽頭癌、咽頭癌（ｔｈｒｏａｔ ｃａｎｃｅｒ）、喉頭癌）、卵巣癌（例えば、卵巣上皮癌、卵巣胚細胞腫瘍、卵巣低悪性度腫瘍）、膵癌、膵島細胞癌（ｉｓｌｅｔ ｃｅｌｌ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、副鼻腔癌および鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌（ｐｈａｒｙｎｇｅａｌ ｃａｎｃｅｒ）、褐色細胞腫、松果体芽細胞腫、転移性甲状腺未分化癌、未分化甲状腺癌、乳頭様甲状腺癌、下垂体腫瘍、形質細胞新生物／多発性骨髄腫、胸膜肺芽腫、前立腺癌、網膜芽腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、子宮癌（例えば、子宮内膜子宮癌（ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｕｔｅｒｉｎｅ ｃａｎｃｅｒ）、子宮肉腫、子宮体癌）、扁平上皮癌、精巣癌、胸腺腫、胸腺癌、甲状腺癌、若年性黄色肉芽腫、腎盂および尿管および他の泌尿器の移行細胞癌、尿道癌、妊娠性絨毛腫瘍、膣癌、外陰癌、肝芽腫、ラブドイド腫瘍、ならびにウィルムス腫瘍が挙げられる。
本発明の二官能性化合物を用いて治療可能であり得る肉腫には、同様に軟部組織癌および骨癌の両方が含まれ、その代表的な例には、骨肉腫または骨原性肉腫（骨）（例えば、ユーイング肉腫）、軟骨肉腫（軟骨）、平滑筋肉腫（平滑筋）、横紋筋肉腫（骨格筋）、中皮肉腫または中皮腫（体腔の膜内）、線維肉腫（線維性組織）、血管肉腫または血管内皮腫（血管）、脂肪肉腫（脂肪組織）、神経膠腫または星細胞腫（脳内に見られる神経結合組織）、粘液肉腫（原発性胚性結合組織（ｐｒｉｍｉｔｉｖｅ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ））、間葉系または中胚葉混合性腫瘍（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍｏｕｓ ｏｒ ｍｉｘｅｄ ｍｅｓｏｄｅｒｍａｌ ｔｕｍｏｒ）（混合結合組織タイプ）、および組織球性肉腫（免疫癌）が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本発明の方法は、血液系、肝臓、脳、肺、結腸、膵臓、前立腺、卵巣、乳房、皮膚および子宮内膜の細胞増殖性疾患または障害を有する対象の治療を伴う。
本明細書で使用される場合、「血液系の細胞増殖性疾患または障害」には、リンパ腫、白血病、骨髄性新生物、マスト細胞新生物、脊髄形成異常症、良性単クローン免疫グロブリン症、リンパ腫様丘疹症、真性多血症、慢性骨髄性白血病、原発性骨髄線維症および本態性血小板血症が含まれる。したがって、血液癌の代表的な例には、多発性骨髄腫、リンパ腫（Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）およびＡＬＫ＋未分化大細胞リンパ腫（例えば、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（例えば、胚中心Ｂ細胞様びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫または活性化Ｂ細胞様びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫から選択されるＢ細胞非ホジキンリンパ腫を含む）、バーキットリンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、縦隔（胸腺）大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫／ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、転移性膵臓腺癌、難治性Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、および再発したＢ細胞非ホジキンリンパ腫、小児リンパ腫、およびリンパ球性および皮膚起源のリンパ腫、例えば、小リンパ球性リンパ腫、小児白血病を含む白血病、有毛細胞白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病（ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、急性骨髄性白血病（ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ）（例えば、急性単球性白血病）、慢性リンパ性白血病、小リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、慢性骨髄性白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ）、ならびにマスト細胞白血病、骨髄性新生物およびマスト細胞新生物が挙げられ得る。
本明細書で使用される場合、「肝臓の細胞増殖性疾患または障害」には、肝臓に影響を与えるあらゆる形態の細胞増殖性障害が含まれる。肝臓の細胞増殖性障害には、肝癌（例えば、肝細胞癌、肝内胆管癌および肝芽腫）、肝臓の前癌または前癌状態、肝臓の良性の増殖または病変、および肝臓の悪性の増殖または病変、ならびに肝臓以外の体内の組織および器官内の転移巣が含まれ得る。肝臓の細胞増殖性障害には、肝臓の過形成、異形成および形成異常が含まれ得る。
本明細書で使用される場合、「脳の細胞増殖性疾患または障害」には、脳に影響を与えるあらゆる形態の細胞増殖性障害が含まれる。脳の細胞増殖性障害には、脳腫瘍（例えば、神経膠腫、神経膠芽腫、髄膜腫、下垂体腺腫、前庭神経鞘腫および原始神経外胚葉性腫瘍（髄芽腫））、脳の前癌または前癌状態、脳の良性の増殖または病変、および脳の悪性の増殖または病変、ならびに脳以外の体内の組織および器官内の転移巣が含まれ得る。脳の細胞増殖性障害には、脳の過形成、異形成および形成異常が含まれ得る。
本明細書で使用される場合、「肺の細胞増殖性疾患または障害」には、肺細胞に影響を与えるあらゆる形態の細胞増殖性障害が含まれる。肺の細胞増殖性障害には、肺癌、肺の前癌および前癌状態、肺の良性の増殖または病変、肺の過形成、異形成および形成異常、ならびに肺以外の体内の組織および器官内の転移巣が含まれる。肺癌には、肺のあらゆる形態の癌、例えば、悪性肺新生物、上皮内癌、典型的なカルチノイド腫瘍および非典型的なカルチノイド腫瘍が含まれる。肺癌には、小細胞肺癌（「ＳＬＣＬ」）、非小細胞肺癌（「ＮＳＣＬＣ」）、腺癌、小細胞癌、大細胞癌、扁平上皮癌および中皮腫が含まれる。肺癌には、「瘢痕癌」、気管支肺胞上皮癌、巨細胞癌、紡錘細胞癌および大細胞神経内分泌癌が含まれ得る。肺癌には、組織学的および超微細構造的な不均質性を有する肺新生物（例えば、混合細胞型）も含まれる。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、非転移性または転移性の肺癌（例えば、ＮＳＣＬＣ、ＡＬＫ陽性ＮＳＣＬＣ、ＲＯＳ１再配列を有するＮＳＣＬＣ、肺腺癌、および肺扁平上皮癌）を治療するために使用され得る。
本明細書で使用される場合、「結腸の細胞増殖性疾患または障害」には、結腸癌、結腸の前癌または前癌状態、結腸の腺腫性ポリープおよび結腸の異時性病変を含め、結腸細胞に影響を与えるあらゆる形態の細胞増殖性障害が含まれる。結腸癌には、孤発性および遺伝性の結腸癌、悪性結腸新生物、上皮内癌、典型的なカルチノイド腫瘍および非典型的なカルチノイド腫瘍、腺癌、扁平上皮癌ならびに扁平上皮癌が含まれる。結腸癌は、遺伝性の症候群、例えば、遺伝性の非ポリープ性結腸直腸癌、家族性大腸ポリポーシス、ＭＹＨ関連ポリポーシス、ガードナー症候群、ポイツ・ジェガーズ症候群、ターコット症候群および若年性ポリポーシスと関連し得る。結腸の細胞増殖性障害はまた、結腸の過形成、異形成または形成異常を特徴とし得る。
本明細書で使用される場合、「膵臓の細胞増殖性疾患または障害」には、膵臓細胞に影響を与えるあらゆる形態の細胞増殖性障害が含まれる。膵臓の細胞増殖性障害には、膵癌、膵臓の前癌または前癌状態、膵臓の過形成、膵臓の形成異常、膵臓の良性の増殖または病変、および膵臓の悪性の増殖または病変、ならびに膵臓以外の体内の組織および器官内の転移巣が含まれ得る。膵癌には、管状腺癌、腺扁平上皮癌、多形性巨細胞癌、粘液性腺癌、破骨細胞様巨細胞癌、粘液性嚢胞腺癌、腺房癌、分類不能大細胞癌、小細胞癌、膵芽腫、乳頭状新生物、粘液性嚢胞腺腫、乳頭状嚢胞性新生物および漿液性嚢胞腺腫、ならびに組織学的および超微細構造的な不均質性を有する膵臓新生物（例えば、混合細胞）を含め、膵臓のあらゆる形態の癌が含まれる。
本明細書で使用される場合、「前立腺の細胞増殖性疾患または障害」には、前立腺に影響を与えるあらゆる形態の細胞増殖性障害が含まれる。前立腺の細胞増殖性障害には、前立腺癌、前立腺の前癌または前癌状態、前立腺の良性の増殖または病変、および前立腺の悪性の増殖または病変、ならびに前立腺以外の体内の組織および器官内の転移巣が含まれ得る。前立腺の細胞増殖性障害には、前立腺の過形成、異形成および形成異常が含まれ得る。
本明細書で使用される場合、「卵巣の細胞増殖性疾患または障害」には、卵巣の細胞に影響を与えるあらゆる形態の細胞増殖性障害が含まれる。卵巣の細胞増殖性障害には、卵巣の前癌または前癌状態、卵巣の良性の増殖または病変、卵巣癌、ならびに卵巣以外の体内の組織および器官内の転移巣が含まれ得る。卵巣の細胞増殖性障害には、卵巣の過形成、異形成および形成異常が含まれ得る。
本明細書で使用される場合、「乳房の細胞増殖性疾患または障害」には、乳房細胞に影響を与えるあらゆる形態の細胞増殖性障害が含まれる。乳房の細胞増殖性障害には、乳癌、乳房の前癌または前癌状態、乳房の良性の増殖または病変、ならびに乳房以外の体内の組織および器官内の転移巣が含まれ得る。乳房の細胞増殖性障害には、乳房の過形成、異形成および形成異常が含まれ得る。
本明細書で使用される場合、「皮膚の細胞増殖性疾患または障害」には、皮膚細胞に影響を与えるあらゆる形態の細胞増殖性障害が含まれる。皮膚の細胞増殖性障害には、皮膚の前癌もしくは前癌状態、皮膚の良性の増殖もしくは病変、黒色腫、悪性黒色腫、または皮膚の他の悪性の増殖もしくは病変、ならびに皮膚以外の体内の組織および器官内の転移巣が含まれ得る。皮膚の細胞増殖性障害には、皮膚の過形成、異形成および形成異常が含まれ得る。
本明細書で使用される場合、「子宮内膜の細胞増殖性疾患または障害」には、子宮内膜の細胞に影響を与えるあらゆる形態の細胞増殖性障害が含まれる。子宮内膜の細胞増殖性障害には、子宮内膜の前癌または前癌状態、子宮内膜の良性の増殖または病変、子宮内膜癌、ならびに子宮内膜以外の体内の組織および器官内の転移巣が含まれ得る。子宮内膜の細胞増殖性障害には、子宮内膜の過形成、異形成および形成異常が含まれ得る。
いくつかの実施形態では、本発明の化合物または薬学的に許容される塩もしくは立体異性体は疾患であるか、障害は高リスク神経芽腫（ＮＢ）である。
いくつかの実施形態では、疾患または障害は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、黒色腫、横紋筋肉腫またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である。他の実施形態では、疾患または障害は小さな固形腫瘍である。他の実施形態では、疾患または障害は、結腸癌、直腸癌、胃癌、乳癌または膵癌である。
式（Ｉ）の二官能性化合物は、単剤療法として、または併用療法によって、患者、例えば、癌患者に投与され得る。治療は、すなわち、単独で、または他の治療と組み合わせて、以前に抗癌治療レジメンを受けていない患者に対する初期治療としての「フロントライン／第一選択」であるか、単独で、または他の治療と組み合わせて、以前に抗癌治療レジメンを受けている患者に対する治療としての「第二選択」であるか、単独で、または他の治療と組み合わせて、「第三選択」、「第四選択」などの治療としてのものであり得る。部分的に成功した以前の治療を受けたが、特定の治療に不耐性になった患者にも治療が行われ得る。治療はまた、アジュバント治療として、すなわち、現在検出可能な疾患を有しない患者に対して、または腫瘍の外科的切除後に、癌の再発を防ぐために行われ得る。したがって、いくつかの実施形態では、二官能性化合物は、別の療法、例えば、化学療法、放射免疫療法、外科療法、免疫療法、放射線療法、標的療法またはそれらの任意の組合せを受けた患者に投与され得る。
本発明の方法は、単回投与または複数回投与（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、１０、１５、２０回またはそれ以上の投与）で、式（Ｉ）の二官能性化合物またはその医薬組成物を患者に投与することを伴い得る。例えば、投与の頻度は、１日１回から８週間に約１回までの範囲であり得る。いくつかの実施形態では、投与の頻度は、１、２、３、４、５または６週間にわたり約１日１回の範囲であり、他の実施形態では、３週間（２１日間）の連日投与と７日間の「オフ」期間とを含む２８日サイクルを伴う。他の実施形態では、二官能性化合物は、２日半にわたり１日２回（ＢＩＤ）（合計５回の投与）、または２日にわたり１日１回（ＱＤ）（合計２回の投与）投与され得る。他の実施形態では、二官能性化合物は、５日間にわたり１日１回（ＱＤ）投与され得る。
いくつかの態様では、本発明は、ＥＰ３００またはＣＰＢのためのプローブとして式（ＩＩ）の二官能性化合物を使用する方法に関する。例えば、式ＩＩの二官能性化合物は、標的タンパク質の同定、単離、取扱いおよびプルダウンのためにストレプトアビジンとともに、ならびに標的同定のための関連タンパク質（ＩＰ）とともに、またはＣｈｅｍ－ｓｅｑとともに使用され得る（Ａｎｄｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３２（１）：９２－６（２０１４））。例えば、任意のビオチン化分子を直接単離するためのアビジン－ビオチン相互作用を利用するために、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）Ｍ－２７０ストレプトアビジン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；カタログ番号６５３０５）を使用してもよい。このプローブ分子は、アッセイ開発に使用することができる（実施例２６に記載されているＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイを参照）。
併用療法
式（Ｉ）の二官能性化合物は、疾患および障害を治療する際に、少なくとも１つの他の活性剤、例えば、抗癌剤または抗癌レジメンと組み合わせて、またはそれらと同時に使用され得る。この文脈では、用語「組み合わせて」および「同時には、薬剤が同時投与されることを意味し、これは、同じもしくは別個の剤形によって、および同じもしくは異なる投与様式によって、または連続して、例えば、同じ治療レジメンの一部として、もしくは連続した治療レジメンとして、実質的に同時の投与を含む。したがって、連続して投与された場合、第２の化合物の投与の開始時に、２つの化合物のうちの第１のものは、場合によっては、治療部位で有効濃度で依然として検出可能である。順序および時間間隔は、それらが一緒に作用することができるように決定され得る（例えば、それらが他の方法で投与された場合よりも増加した利益を提供するように相乗的に）。例えば、治療薬は、異なる時点で同時に、または任意の順序で連続して投与され得る。ただし、同時に投与されない場合、それらは、所望の治療効果を提供するために時間的に十分に接近して投与され得、これは、相乗的な様式であり得る。したがって、これらの用語は、正確に同時に活性剤を投与することに限定されない。
いくつかの実施形態では、治療レジメンは、疾患または状態（例えば、癌）の治療に使用することが知られている１つ以上の追加の治療薬と組み合わせて、本発明の式（Ｉ）の化合物を投与することを含み得る。追加の抗癌治療薬の投薬量は、公知の用量または推奨される用量と同じであるか、それよりも低くてもよい。Ｈａｒｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ Ｏｆ Ｂａｓｉｓ Ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，１０ｔｈ ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００１；Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，６０ｔｈ ｅｄ．，２００６を参照されたい。例えば、本発明の化合物と組み合わせて使用され得る抗癌剤は、当技術分野で公知である。例えば、米国特許第９，１０１，６２２号明細書（そのセクション５．２）および米国特許第９，３４５，７０５ Ｂ２号明細書（その１２～１８段）を参照されたい。追加の活性剤および治療レジメンの代表的な例には、放射線療法、化学療法剤（例えば、有糸分裂阻害剤、血管新生阻害剤、抗ホルモン剤、オートファジー阻害剤、アルキル化剤、挿入性抗生物質、成長因子阻害剤、抗アンドロゲン、シグナル伝達経路阻害剤、微小管阻害剤、白金配位複合体、ＨＤＡＣ阻害剤、プロテアソーム阻害剤およびトポイソメラーゼ阻害剤）、免疫調節剤、治療用抗体（例えば、単一特異性抗体および二重特異性抗体）およびＣＡＲ－Ｔ療法が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本発明の式（Ｉ）の化合物、および追加の抗癌治療薬は、５分未満間隔、３０分未満間隔、１時間未満間隔、約１時間間隔、約１～約２時間間隔、約２時間～約３時間間隔、約３時間～約４時間間隔、約４時間～約５時間間隔、約５時間～約６時間間隔、約６時間～約７時間間隔、約７時間～約８時間間隔、約８時間～約９時間間隔、約９時間～約１０時間間隔、約１０時間～約１１時間間隔、約１１時間～約１２時間間隔、約１２時間～１８時間間隔、１８時間～２４時間間隔、２４時間～３６時間間隔、３６時間～４８時間間隔、４８時間～５２時間間隔、５２時間～６０時間間隔、６０時間～７２時間間隔、７２時間～８４時間間隔、８４時間～９６時間間隔または９６時間～１２０時間間隔で投与され得る。２つ以上の抗癌治療薬は、同じ患者の診察の中で投与され得る。
癌治療を含むいくつかの実施形態では、式（Ｉ）の二官能性化合物、および追加の抗癌剤または治療薬が周期的に投与される。サイクリング療法は、ある期間にわたって１つの抗癌治療薬を投与し、続いて、ある期間にわたって第２の抗癌治療薬を投与し、この連続投与、すなわちサイクルを繰り返して、抗癌治療薬の一方または両方に対する耐性の発生を低減し、抗癌治療薬の一方または両方の副作用を回避または軽減し、および／または療法の効果を向上させることを含む。一例では、サイクリング療法は、ある期間にわたって第１の抗癌治療薬を投与し、続いて、ある期間にわたって第２の抗癌治療薬を投与し、場合により、続いて、ある期間にわたって第３の抗癌治療薬を投与するなどし、この連続投与、すなわちサイクルを繰り返して、抗癌治療薬の一方または両方に対する耐性の発生を低減し、抗癌治療薬の一方の副作用を回避または軽減し、および／または抗癌治療薬の効果を向上させることを含む。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の二官能性化合物は、他の抗ＮＢ剤または抗癌剤と組み合わせて使用され得、その例には、ジヌツキシマブ（例えば、ＮＢの場合）、シクロホスファミド（例えば、神経芽腫）、ブスルファン＋メルファラン塩酸塩、カルボプラチン＋リン酸エトポシドおよびメルファラン塩酸塩（塩酸ドキソルビシン、ユニツキシン（ジヌツキシマブ）、硫酸ビンクリスチン、（エヌトレクチニブ（例えば、脳癌、中枢神経系（ＣＮＳ）癌の場合）、Ｈｕ３Ｆ８＋提供されたナチュラルキラー細胞（例えば、持続性または再発性神経芽腫の場合）、Ｈｕ３Ｆ８＋顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）（例えば、再発／難治性神経芽腫の場合）、Ｈｕ３Ｆ８／ＧＭ－ＣＳＦ免疫療法＋イソトレチノイン（例えば、ＮＢ患者の最初の寛解の強化の場合）、ベネトクラクス（例えば、白血病および非ホジキンリンパ腫を含む持続性または再発性の癌の場合）、経口β－グルカンと組み合わせた免疫学的アジュバントＯＰＴ－８２１を伴う二価ワクチン（例えば、ＮＢの場合）、トラメチニブ（例えば、胚細胞腫瘍、肝癌、腎癌、神経芽腫、小児脳腫瘍、骨肉腫、ユーイング肉腫、横紋筋肉腫、軟部肉腫、ウィルムス腫瘍の場合）、コビメチニブ（例えば、黒色腫、小児脳腫瘍および軟部肉腫の場合）、ならびに１３１Ｉ－８Ｈ９を使用した髄腔内放射免疫療法（例えば、脳腫瘍、原発性、脳癌、およびＣＮＳ癌の場合）が挙げられる。
医薬品キット
本組成物は、キットまたは医薬品システムに組み立てられ得る。本発明のこの態様によるキットまたは医薬品システムは、本発明の式（Ｉ）の二官能性化合物または医薬組成物を収容する１つ以上の容器、例えば、バイアル、チューブ、アンプルまたはボトルをその中に密に閉じ込めている箱、カートン、チューブなどのような担体またはパッケージを含む。本発明のキットまたは医薬品システムはまた、化合物および組成物を使用するための印刷された説明書を含み得る。
いくつかの実施形態では、ＥＰ３００のためのプローブとして式（ＩＩ）の二官能性化合物を使用する方法は、ＥＰ３００を含有することが疑われる溶解細胞と、式（ＩＩ）の化合物、および担体（例えば、磁性ビーズなどのビーズ）に固定化されたストレプトアビジンとを接触させること、ビオチン－ストレプトアビジン結合を介した分子およびタンパク質結合によって形成された複合体を単離すること、ならびに当技術分野で標準的な技術（例えば、免疫ブロッティング）を介して、複合体中のＥＰ３００の存在を確認することを含む。
本発明のこれらおよび他の態様は、本発明の特定の実施形態を説明することを意図しているが、特許請求の範囲によって定義されるその範囲を限定することを意図していない以下の実施例を考慮してさらに理解されるであろう。
実施例１：１２－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－５－イル）アミノ）－Ｎ－（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）ドデカンアミド（化合物（ＣＰＤ）１）の合成。
化合物Ａ（１８．５ｇ、１６３．５ｍｍｏｌ）および１－（ブロモメチル）－４－フルオロベンゼン（３７．２ｇ、１９６．５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２００ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（６７．５ｇ、４９０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温（ｒｔ）で一晩撹拌し、次いで水を用いてクエンチした。混合物をＥｔＯＡｃを用いて抽出し、水およびブラインを用いて洗浄した。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（メタノール：ＣＨ２Ｃｌ２、１：２０）により粗生成物を精製して、化合物Ａ－１（１５ｇ、４１．５％）を得た。
乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ）中の化合物Ａ－１（１５ｇ、６７．８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、２－ブロモアセチルブロミド（２７．４ｇ、１３５．６ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物を室温で２時間撹拌し、次いでＮａＨＣＯ３を用いてクエンチした。ＣＨ２Ｃｌ２を用いて反応物を抽出した。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル：酢酸エチル、１：１）により粗生成物を精製して、中間体ＳＭ－２（１５．３ｇ、６６％）を油として得た。
１：１のトルエンとＭｅＣＮとの混合物（８００ｍＬ）中のＳＭ－１（３１ｇ、１６４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＺｎＩ２（５．２ｇ、１６．４ｍｍｏｌ）およびトリメチルシリルシアニド（ＴＭＳＣＮ）（３３ｇ、３２８ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１時間にわたり還流状態で加熱した。反応物を冷却し、溶媒を減圧下で除去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、勾配）により残渣を精製して、中間体ｉｎｔ－１（２８ｇ、６０％）を得た。
Ｉｎｔ－１（２８ｇ、９７．２ｍｍｏｌ）をエタノール（４００ｍｌ）に取り、４℃に冷却した。温度を２０℃未満に保つような速度で、添加漏斗を介して、塩化アセチル（２８０ｍｌ、３．９ｍｏｌ）を滴下した。反応物を４８時間撹拌し、その時点で反応物を減圧下で濃縮して、淡黄色の固体を得た。淡黄色の固体を酢酸エチルとＮａＨＣＯ３水溶液との間で分配した。有機抽出物を乾燥させ、濃縮し、石油エーテルと酢酸エチルの１：１混合物とともに摩砕した。後続の工程で粗生成物ｉｎｔ－２（１５ｇ）を直接使用した。
粗生成物ｉｎｔ－２（１５ｇ）のＴＨＦ（３００ｍＬ）およびトリエチルアミン（１２ｇ、１１６ｍｍｏｌ）溶液を５℃に冷却し、温度を１０℃未満に維持するように、トリホスゲン（８．６ ｇ、２９ ｍｍｏｌ）の４０ｍｌ ＴＨＦ溶液を用いて注意深く処理した。混合物を１時間撹拌し、ｐＨ２になるまで６Ｎ ＨＣｌを用いて処理し、得られた混合物を５℃でさらに３０分間撹拌した。反応混合物からの溶媒の約半分の体積を減圧下で除去し、残りの混合物を水と酢酸エチルとの間で分配した。有機抽出物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル、勾配）により残渣を精製して、中間体ｉｎｔ－４（８ｇ）を黄色の固体として得た。
２－（（Ｒ）－５－アミノ－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－３’－イル）－Ｎ－（４－フルオロベンジル）－Ｎ－（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アセトアミド（ｉｎｔ－６）
メタノール（８０ｍＬ）中のｉｎｔ－４（８ｇ、３０．６ｍｍｏｌ）の撹拌懸濁液に、濃ＨＣｌ水溶液（２０ｍＬ、１２Ｍ）を加えた。混合物を３時間加熱還流した。得られた沈殿物を濾過し、乾燥させて、中間体ｉｎｔ－５（４ｇ、６０％）を黄色の固体として得た。
ｉｎｔ－５（４ｇ、１８ｍｍｏｌ）およびＳＭ－２（６．２ｇ、１８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４０ｍＬ）溶液に、Ｋ２ＣＯ３（７．４ｇ、５４ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応混合物を室温で２時間撹拌し、水を用いてクエンチし、ＥｔＯＡｃを用いて抽出し、水およびブラインを用いて洗浄し、乾燥させ、減圧下で濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（メタノール：ＣＨ２Ｃｌ２、１：２０）により精製して、白色の固体として中間体ｉｎｔ－６（６ｇ、６９．５％）を得た。
２－（（Ｒ）－５－アセトアミド－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－３’－イル）－Ｎ－（（Ｓ）－１－アミノプロパン－２－イル）－Ｎ－（４－フルオロベンジル）アセトアミド（Ｉｎｔ－７）
Ｍｉｃｈａｅｌｉｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，ＡＣＳ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２０１８，９：２８－３３（２０１８）に従って、Ｉｎｔ－７を合成した。
４－（（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）アミノ）－４－オキソブタン酸（ｉｎｔ－８）
Ｍｉｃｈａｅｌｉｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，ＡＣＳ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２０１８，９：２８－３３（２０１８）に従って、Ｉｎｔ－８を合成した。
ＤＭＦ（１ｍＬ）中のｉｎｔ－６（６ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）および化合物ＳＭ－３（６ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（３５μＬ、０．１ｍｍｏｌ）、続いて１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（１２ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）を室温で一度に加えた。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）によってモニターされた出発物質の消費後、反応混合物を水およびＥｔＯＡｃにより希釈した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗生成物を得、これを１：１ ＥｔＯＡｃ／石油エーテルを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、ＣＰＤ１（６．２ｍｇ、４５％）を黄色の固体として得た。
実施例２：１－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）アミノ）－Ｎ－（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）－３，６，９，１２，１５，１８－ヘキサオキサヘニコサン－２１－アミド（ＣＰＤ２）の合成。
ＤＭＦ（１ｍＬ）中のｉｎｔ－６（６ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）および化合物ＳＭ－４（６ｍｇ、０．０１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＤＩＰＥＡ（１７μＬ、０．０５ｍｍｏｌ）、続いてＨＡＴＵ（１１．４ｍｇ、０．０２５）を室温で一度に加えた（発熱反応）。反応混合物を室温で３０分間撹拌した。（ＴＬＣによる）出発物質の消費後、反応混合物を水およびＥｔＯＡｃにより希釈した。合わせた有機抽出物を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、減圧下で濃縮して粗生成物を得、これを１：１ ＥｔＯＡｃ／石油エーテルを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、ＣＰＤ２（６ｍｇ、４０％）を黄色の固体として得た。
実施例３：８－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）アミノ）－Ｎ－（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）オクタンアミド（ＣＰＤ３）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－６および適切なＩＭｉＤ中間体からＣＰＤ３を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１０％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ３を黄色の粉末として得た（５３％収率）。
実施例４：１０－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－５－イル）アミノ）－Ｎ－（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）デカンアミド（ＣＰＤ４）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－６および適切なＩＭｉＤ中間体からＣＰＤ４を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１０％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ４を黄色の粉末として得た（１５ｍｇ、４０％収率）。
Ｃ４６Ｈ４８Ｆ４Ｎ６Ｏ９のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：９０４．３４；実測値：［Ｍ＋１］９０５．５４、９０６．５３。
実施例５：２－（（１Ｒ）－５－（３－（８－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－５－イル）アミノ）オクチル）ウレイド）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－３’－イル）－Ｎ－（４－フルオロベンジル）－Ｎ－（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アセトアミド（ＣＰＤ５）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－６および適切なＩＭｉＤ中間体からＣＰＤ５を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１０％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ５を黄色の粉末として得た（２ｍｇ、１２％収率）。
Ｃ４５Ｈ４７Ｆ４Ｎ７Ｏ９のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：９０５．３４；実測値：［Ｍ＋１］９０６．６０、９０７．２９。
実施例６：１２－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）アミノ）－Ｎ－（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）ドデカンアミド（ＣＰＤ６）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－６および適切なＩＭｉＤ中間体からＣＰＤ６を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１０％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ６を黄色の粉末として得た（７ｍｇ、７２％収率）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ、アセトン－ｄ６）δ ９．９０（ｄ，Ｊ＝４．０ Ｈｚ，１Ｈ），９．２６（ｄ，Ｊ＝５．１ Ｈｚ，１Ｈ），７．９０（ｄ，Ｊ＝７．７ Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｔｄ，Ｊ＝７．８，２．７ Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝９．７ Ｈｚ，３Ｈ），７．３６－７．３１（ｍ，１Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝８．６ Ｈｚ，２Ｈ），７．１３－７．００（ｍ，３Ｈ），６．４２（ｄ，Ｊ＝５．９ Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｐ，Ｊ＝７．８ Ｈｚ，１Ｈ），５．０７（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．１，７．６，４．２ Ｈｚ，２Ｈ），４．９７－４．８１（ｍ，１Ｈ），４．６７（ｄｄ，Ｊ＝７１．１，１６．７ Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄｄ，Ｊ＝９０．６，１６．６ Ｈｚ，１Ｈ），３．３８（ｑ，Ｊ＝６．３ Ｈｚ，２Ｈ），３．２８－３．０４（ｍ，２Ｈ），３．０３－２．８５（ｍ，３Ｈ），２．８５－２．７０（ｍ，４Ｈ），２．５６（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１４．５，１２．１，８．６，４．２ Ｈｚ，１Ｈ），２．３９（ｔ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，２Ｈ），２．２７－２．１７（ｍ，１Ｈ），２．０７（ｐ，Ｊ＝２．２ Ｈｚ，２Ｈ），１．７３－１．６７（ｍ，４Ｈ），１．３９（ｄｄ，Ｊ＝３８．４，５．３ Ｈｚ，１２Ｈ）．
Ｃ４８Ｈ５２Ｆ４Ｎ６Ｏ９のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：９３２．３７；実測値：［Ｍ＋１］９３３．３６、９３４．３８。
実施例７：１２－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）アミノ）－Ｎ－（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）ドデカンアミド（ＣＰＤ７）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－６および適切なＩＭｉＤ中間体からＣＰＤ７を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１０％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ７を黄色の粉末として得た（１４ｍｇ、７２％収率）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ、アセトン－ｄ６）δ ９．９１（ｓ，１Ｈ），９．３１（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｓ，１Ｈ），７．６０－７．５６（ｍ，１Ｈ），７．５２－７．４７（ｍ，３Ｈ），７．３４（ｄｄ，Ｊ＝８．３，５．３ Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ，２Ｈ），７．１２－７．００（ｍ，３Ｈ），６．６０（ｔ，Ｊ＝５．９ Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｐ，Ｊ＝７．７ Ｈｚ，１Ｈ），５．１２－５．０４（ｍ，２Ｈ），４．９６－４．８４（ｍ，１Ｈ），４．６７（ｄｄ，Ｊ＝６９．９，１６．７ Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄｄ，Ｊ＝９１．２，１６．６ Ｈｚ，１Ｈ），３．８０（ｔ，Ｊ＝５．９ Ｈｚ，２Ｈ），３．７１（ｔ，Ｊ＝５．１ Ｈｚ，２Ｈ），３．５１－３．４７（ｍ，２Ｈ），３．２２（ｄｔ，Ｊ＝１５．３，７．３ Ｈｚ，１Ｈ），３．０９（ｄｄｄ，Ｊ＝１５．２，８．８，４．０ Ｈｚ，１Ｈ），３．００－２．９５（ｍ，２Ｈ），２．８４（ｄ，Ｊ＝１６．７ Ｈｚ，４Ｈ），２．７８－２．７５（ｍ，２Ｈ），２．６３－２．５０（ｍ，４Ｈ），２．２２（ｄｄｔ，Ｊ＝１２．８，５．４，２．５ Ｈｚ，１Ｈ），２．０７（ｔ，Ｊ＝２．２ Ｈｚ，２Ｈ），１．５０（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，１Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，２Ｈ）．
Ｃ４５Ｈ４６Ｆ４Ｎ６Ｏ１２のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：９３８．３１；実測値：［Ｍ＋１］９３９．４０、９４０．５０。
実施例８：３－（２－（２－（２－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－Ｎ－（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）プロパンアミド（ＣＰＤ８）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－６および適切なＩＭｉＤ中間体からＣＰＤ８を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１０％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ８を黄色の粉末として得た（１０．８ｍｇ、６６％収率）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ、アセトン－ｄ６）δ ９．８８（ｓ，１Ｈ），９．６５（ｄ，Ｊ＝７．３ Ｈｚ，１Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ），７．５９－７．４９（ｍ，４Ｈ），７．３２（ｄｔ，Ｊ＝２２．６，５．７ Ｈｚ，２Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝２．１ Ｈｚ，１Ｈ），６．９３（ｄｄ，Ｊ＝８．３，２．２ Ｈｚ，１Ｈ），６．３２（ｔ，Ｊ＝５．５ Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｐ，Ｊ＝７．７ Ｈｚ，１Ｈ），５．０６（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，５．４ Ｈｚ，２Ｈ），４．９６－４．８４（ｍ，１Ｈ），４．６７（ｄｄ，Ｊ＝７０．８，１６．７ Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄｄ，Ｊ＝８８．２，１６．６ Ｈｚ，１Ｈ），３．９９（ｈ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，２Ｈ），３．４８（ｑ，Ｊ＝７．４ Ｈｚ，２Ｈ），３．２５（ｄｑ，Ｊ＝３６．５，７．５，６．９ Ｈｚ，６Ｈ），３．０９（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．３，８．８，３．９ Ｈｚ，２Ｈ），３．０１－２．９１（ｍ，２Ｈ），２．８２－２．７３（ｍ，４Ｈ），２．５５（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．４，８．２，３．９ Ｈｚ，１Ｈ），２．４０（ｔ，Ｊ＝７．０ Ｈｚ，２Ｈ），２．２２－２．１４（ｍ，４Ｈ），２．０７（ｐ，Ｊ＝２．２ Ｈｚ，２Ｈ），１．８９－１．８３（ｍ，２Ｈ），１．６８（ｐ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，２Ｈ），１．６２－１．５７（ｍ，２Ｈ），１．４８－１．４１（ｍ，７Ｈ）．
Ｃ５２Ｈ５９Ｆ４Ｎ７Ｏ１０のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１０１７．４３；実測値：［Ｍ＋１］１０１８．６７、１０１９．６２。
実施例９：１２－（２－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）オキシ）アセトアミド）－Ｎ－（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）ドデカンアミド（ＣＰＤ９）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－６および適切なＩＭｉＤ中間体からＣＰＤ９を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１０％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ９を白色の粉末として得た（２ｍｇ、２０％収率）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ、アセトン－ｄ６）δ ９．９６（ｓ，１Ｈ），９．２８（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｓ，１Ｈ），７．９０－７．８５（ｍ，３Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝２．０ Ｈｚ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝３．０ Ｈｚ，２Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝８．７ Ｈｚ，２Ｈ），５．５１（ｐ，Ｊ＝７．８ Ｈｚ，１Ｈ），５．２０－５．１３（ｍ，２Ｈ），５．１０－５．００（ｍ，２Ｈ），４．９６－４．８３（ｍ，２Ｈ），４．５６（ｄｄ，Ｊ＝４２．２，１６．６ Ｈｚ，２Ｈ），４．３３（ｄ，Ｊ＝１６．８ Ｈｚ，１Ｈ），３．３７－３．１９（ｍ，６Ｈ），３．１４－２．９７（ｍ，４Ｈ），２．７８－２．７１（ｍ，２Ｈ），２．５４（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．５，８．３，３．８ Ｈｚ，２Ｈ），２．３８（ｔ，Ｊ＝７．４ Ｈｚ，２Ｈ），２．２９－２．２４（ｍ，２Ｈ），１．６９（ｔ，Ｊ＝７．３ Ｈｚ，３Ｈ），１．５９－１．４７（ｍ，７Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝７．３ Ｈｚ，４Ｈ）．
Ｃ５０Ｈ５４Ｆ４Ｎ６Ｏ１１のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：９９０．３８；実測値：［Ｍ＋１］９９１．５７、９９２．３７。
実施例１０：６－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－５－イル）アミノ）－Ｎ－（４－（（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）アミノ）－４－オキソブチル）ヘキサンアミド（ＣＰＤ１０）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－６および適切なＩＭｉＤ中間体からＣＰＤ１０を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１０％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ１０を黄色の粉末として得た（１２ｍｇ、７１％収率）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ、アセトン－ｄ６）δ ９．８７（ｓ，１Ｈ），９．６２（ｄ，Ｊ＝５．５ Ｈｚ，１Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝５．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．５８－７．４３（ｍ，６Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝８．７ Ｈｚ，２Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝２．２ Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．２ Ｈｚ，１Ｈ），６．３５（ｔ，Ｊ＝５．５ Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｐ，Ｊ＝７．８ Ｈｚ，１Ｈ），５．０６（ｄｔ，Ｊ＝１０．７，３．３ Ｈｚ，２Ｈ），４．９６－４．８４（ｍ，１Ｈ），４．６７（ｄｄ，Ｊ＝７０．１，１６．７ Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄｄ，Ｊ＝９０．３，１６．６ Ｈｚ，１Ｈ），３．２５（ｄｑ，Ｊ＝３９．８，７．６，７．０ Ｈｚ，６Ｈ），３．１０（ｄｄｔ，Ｊ＝１６．１，８．７，３．９ Ｈｚ，２Ｈ），３．０１－２．９２（ｍ，２Ｈ），２．８０－２．７１（ｍ，４Ｈ），２．５４（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．４，８．３，３．９ Ｈｚ，１Ｈ），２．４０（ｔ，Ｊ＝７．０ Ｈｚ，２Ｈ），２．２５－２．１３（ｍ，４Ｈ），１．８４（ｑ，Ｊ＝６．９ Ｈｚ，２Ｈ），１．７０－１．６４（ｍ，４Ｈ）．
実施例１１：４－（３－（２－（２－（２－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパンアミド）－Ｎ－（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）ブタンアミド（ＣＰＤ１１）の合成。

実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－６および適切なＩＭｉＤ中間体からＣＰＤ１１を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１０％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ１１を黄色の粉末として得た（１０ｍｇ、５６％収率）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ、アセトン－ｄ６）δ ９．９８（ｓ，１Ｈ），９．５７（ｓ，１Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ），７．６２－７．５７（ｍ，１Ｈ），７．５１－７．４５（ｍ，３Ｈ），７．２５（ｄｔ，Ｊ＝３１．７，７．３ Ｈｚ，３Ｈ），７．１３－７．０１（ｍ，３Ｈ），６．６２（ｑ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｐ，Ｊ＝７．８ Ｈｚ，１Ｈ），５．１３－４．８６（ｍ，４Ｈ），４．６７（ｄｄ，Ｊ＝６９．４，１６．７ Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄｄ，Ｊ＝９２．２，１６．６ Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｔｔ，Ｊ＝１３．１，６．０ Ｈｚ，６Ｈ），３．６０－３．４８（ｍ，６Ｈ），３．３３－３．１８（ｍ，４Ｈ），３．１０（ｄｄｄ，Ｊ＝２０．１，９．９，５．５ Ｈｚ，２Ｈ），３．０５－２．９２（ｍ，２Ｈ），２．７５（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．４，７．２，４．７ Ｈｚ，４Ｈ），２．５９－２．５１（ｍ，１Ｈ），２．４０（ｑ，Ｊ＝７．４，６．８ Ｈｚ，４Ｈ），２．２３（ｄｔｄ，Ｊ＝１０．４，５．５，２．８ Ｈｚ，１Ｈ），１．８４（ｔ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，２Ｈ）．
Ｃ４９Ｈ５３Ｆ４Ｎ７Ｏ１３のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１０２３．３６；実測値：［Ｍ＋１］１０２４．６７、１０２５．６２。
実施例１２：６－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－５－イル）アミノ）－Ｎ－（４－（３－（（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）アミノ）－３－オキソプロピル）フェニル）ヘキサンアミド（ＣＰＤ１２）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－６および適切なＩＭｉＤ中間体からＣＰＤ１２を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１０％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ１２を黄色の粉末として得た（１２．５ｍｇ、７９％収率）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ、アセトン－ｄ６）δ ９．８６（ｓ，１Ｈ），９．３０（ｄ，Ｊ＝４．８ Ｈｚ，１Ｈ），９．０３（ｓ，１Ｈ），７．９８（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝８．１ Ｈｚ，４Ｈ），７．４７（ｓ，２Ｈ），７．２１（ｄ，Ｊ＝１０．９ Ｈｚ，３Ｈ），７．０６－６．９１（ｍ，３Ｈ），６．３５（ｔ，Ｊ＝５．６ Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｐ，Ｊ＝７．９ Ｈｚ，１Ｈ），５．１１－５．０１（ｍ，３Ｈ），４．８８（ｔ，Ｊ＝１３．７ Ｈｚ，１Ｈ），４．６７（ｄｄ，Ｊ＝７０．４，１６．８ Ｈｚ，１Ｈ），４．５３－４．３１（ｍ，１Ｈ），３．３２－３．１８（ｍ，４Ｈ），３．１４－３．０４（ｍ，２Ｈ），２．５４（ｄｄｄ，Ｊ＝１３．３，８．１，３．７ Ｈｚ，２Ｈ），２．３８（ｔ，Ｊ＝７．４ Ｈｚ，２Ｈ），２．１８（ｄｔ，Ｊ＝１１．２，５．４ Ｈｚ，２Ｈ），１．７３（ｑ，Ｊ＝８．０ Ｈｚ，６Ｈ），１．５１（ｄ，Ｊ＝６．８ Ｈｚ，６Ｈ）．
Ｃ５１Ｈ４９Ｆ４Ｎ７Ｏ１０のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：９９５．３５；実測値：［Ｍ＋１］９９６．７０、９９７．７３。
実施例１３：１２－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－５－イル）アミノ）－Ｎ－（４－（３－（（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）アミノ）－３－オキソプロピル）フェニル）ドデカンアミド（ＣＰＤ１３）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－６および適切なＩＭｉＤ中間体からＣＰＤ１３を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１０％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ１３を黄色の粉末として得た（１５ｍｇ、８８％収率）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ、アセトン－ｄ６）δ ９．８６（ｓ，１Ｈ），９．３０（ｄ，Ｊ＝４．８ Ｈｚ，１Ｈ），９．０１（ｓ，１Ｈ），８．７３（ｄ，Ｊ＝４．４ Ｈｚ，１Ｈ），８．４２（ｄ，Ｊ＝８．３ Ｈｚ，１Ｈ），７．９８（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８．２ Ｈｚ，２Ｈ），７．５２－７．４８（ｍ，２Ｈ），７．２２－７．１７（ｍ，３Ｈ），７．０９－６．９０（ｍ，３Ｈ），６．３２（ｔ，Ｊ＝５．６ Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｐ，Ｊ＝７．７ Ｈｚ，１Ｈ），５．１１－５．０１（ｍ，３Ｈ），４．８８（ｔ，Ｊ＝１３．９ Ｈｚ，１Ｈ），４．６７（ｄｄ，Ｊ＝７０．０，１６．７ Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｄｄ，Ｊ＝９１．７，１６．６ Ｈｚ，１Ｈ），３．２５（ｄｑ，Ｊ＝４３．４，７．４，６．９ Ｈｚ，４Ｈ），３．０９（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．３，８．６，３．８ Ｈｚ，２Ｈ），２．９６（ｓ，４Ｈ），２．７９（ｓ，４Ｈ），２．６８（ｔ，Ｊ＝７．４ Ｈｚ，３Ｈ），２．５４（ｄｄｄ，Ｊ＝１４．１，８．１，３．７ Ｈｚ，２Ｈ），２．３４（ｔ，Ｊ＝７．４ Ｈｚ，３Ｈ），２．１８（ｔ，Ｊ＝３．７ Ｈｚ，１Ｈ），１．６８（ｑ，Ｊ＝７．５ Ｈｚ，５Ｈ），１．５０－１．４１（ｍ，９Ｈ）．
Ｃ５７Ｈ６１Ｆ４Ｎ７Ｏ１０のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１０７９．４４、実測値：［Ｍ＋１］１０８０．６５、１０８１．４８。
実施例１４：３－（２－（２－（２－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－４－イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）－Ｎ－（４－（３－（（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）アミノ）－３－オキソプロピル）フェニル）プロペンアミド（ＣＰＤ１４）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－６および適切なＩＭｉＤ中間体からＣＰＤ１４を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１０％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ１４を黄色の粉末として得た（１２ｍｇ、７０％収率）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ、アセトン－ｄ６）δ ９．９３（ｓ，１Ｈ），９．２８（ｄ，Ｊ＝４．７ Ｈｚ，１Ｈ），９．０６（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝７．７，３．７ Ｈｚ，３Ｈ），７．４９（ｄｄｄ，Ｊ＝８．６，４．６，１．７ Ｈｚ，３Ｈ），７．２４－７．１５（ｍ，４Ｈ），７．０７（ｄｄ，Ｊ＝２９．３，７．８ Ｈｚ，３Ｈ），６．６０（ｔ，Ｊ＝５．７ Ｈｚ，１Ｈ），５．５１（ｐ，Ｊ＝７．８ Ｈｚ，１Ｈ），５．１３－５．０１（ｍ，３Ｈ），４．９６－４．８６（ｍ，１Ｈ），４．６７（ｄｄ，Ｊ＝７０．３，１６．７ Ｈｚ，１Ｈ），４．４２（ｄｄ，Ｊ＝９１．８，１６．６ Ｈｚ，１Ｈ），３．７８（ｔ，Ｊ＝６．０ Ｈｚ，２Ｈ），３．７０（ｔ，Ｊ＝５．３ Ｈｚ，２Ｈ），３．６１－３．５３（ｍ，２Ｈ），３．４９（ｑ，Ｊ＝５．０ Ｈｚ，３Ｈ），３．２４－３．１９（ｍ，１Ｈ），３．１２－３．０６（ｍ，１Ｈ），２．９７－２．９２（ｍ，４Ｈ），２．７９（ｐ，Ｊ＝１．９ Ｈｚ，２Ｈ），２．７６（ｄｄ，Ｊ＝６．５，４．１ Ｈｚ，２Ｈ），２．６７（ｔ，Ｊ＝７．５ Ｈｚ，２Ｈ），２．５６（ｔ，Ｊ＝６．０ Ｈｚ，３Ｈ），２．２２（ｄｄｔ，Ｊ＝９．５，５．２，２．６ Ｈｚ，１Ｈ），１．５０（ｄ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，４Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝７．３ Ｈｚ，２Ｈ）．
実施例１５：Ｎ－（（Ｒ）－２－（２－（（Ｒ）－５－アセトアミド－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－３’－イル）－Ｎ－（４－フルオロベンジル）アセトアミド）プロピル）－１２－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－５－イル）アミノ）ドデカンアミド（ＣＰＤ１５）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－７の（Ｒ，Ｒ）－異性体および適切なＩＭｉＤ中間体からＣＰＤ１５を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１０％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ１５を黄色の粉末として得た（１０ｍｇ、６９％収率）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ、アセトン－ｄ６）δ ９．８６（ｓ，１Ｈ），９．３２（ｓ，１Ｈ），７．８６（ｓ，１Ｈ），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１．４ Ｈｚ，１Ｈ），７．５２－７．４０（ｍ，４Ｈ），７．３６－７．３１（ｍ，２Ｈ），７．２５－７．１６（ｍ，２Ｈ），７．０８－７．０１（ｍ，３Ｈ），６．９３（ｄｄｄ，Ｊ＝８．３，３．３，２．１ Ｈｚ，２Ｈ），６．３２（ｑ，Ｊ＝６．１ Ｈｚ，１Ｈ），５．０６（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，５．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．８４（ｄ，Ｊ＝１６．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．７７（ｄ，Ｊ＝１６．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．７２（ｄ，Ｊ＝７．３ Ｈｚ，１Ｈ），４．６５（ｄ，Ｊ＝１６．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｄ，Ｊ＝１６．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．４４（ｄ，Ｊ＝１６．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．３７（ｄｔ，Ｊ＝８．４，６．３ Ｈｚ，１Ｈ），４．２７（ｄ，Ｊ＝１６．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．００（ｐ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，１Ｈ），３．５２－３．３９（ｍ，３Ｈ），３．２８（ｄｔ，Ｊ＝１０．２，４．１ Ｈｚ，５Ｈ），３．２５－３．１８（ｍ，２Ｈ），３．１０（ｄｄｄ，Ｊ＝１６．４，８．７，４．１ Ｈｚ，２Ｈ），３．０１－２．９２（ｍ，２Ｈ），２．８２－２．７４（ｍ，６Ｈ），２．５７（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１７．６，１４．２，８．２，３．７ Ｈｚ，２Ｈ），２．２８－２．１４（ｍ，４Ｈ），１．６８（ｔｄ，Ｊ＝７．４，４．２ Ｈｚ，３Ｈ），１．６１－１．５３（ｍ，３Ｈ）．
Ｃ５０Ｈ５８ＦＮ７Ｏ１０のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：９３５．４２；実測値：［Ｍ＋１］９３６．７４、９３７．６５。
実施例１６：Ｎ－（（Ｓ）－２－（２－（（Ｒ）－５－アセトアミド－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－３’－イル）－Ｎ－（４－フルオロベンジル）アセトアミド）プロピル）－１２－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－５－イル）アミノ）ドデカンアミド（ＣＰＤ１６）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－７および適切なＩＭｉＤ中間体からＣＰＤ１６を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１０％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ１６を黄色の粉末として得た（９．６ｍｇ、６８％収率）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ、アセトン－ｄ６）δ ９．８６（ｓ，１Ｈ），９．３３（ｄ，Ｊ＝４．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．８７（ｓ，１Ｈ），７．５５（ｄｄ，Ｊ＝１８．０，８．４ Ｈｚ，３Ｈ），７．５１－７．４５（ｍ，２Ｈ），７．４２（ｄｄ，Ｊ＝８．４，２．０ Ｈｚ，１Ｈ），７．３８－７．３２（ｍ，２Ｈ），７．２８（ｓ，１Ｈ），７．１９（ｔ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．１１－７．０３（ｍ，２Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝２．２ Ｈｚ，２Ｈ），６．９３（ｄｔ，Ｊ＝８．４，１．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．３３（ｄ，Ｊ＝５．７ Ｈｚ，１Ｈ），５．０６（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，５．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．８８（ｄ，Ｊ＝１６．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．７９（ｄ，Ｊ＝１６．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．７２（ｄ，Ｊ＝６．３ Ｈｚ，１Ｈ），４．６１（ｄ，Ｊ＝１６．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．４８（ｄ，Ｊ＝１６．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．４０（ｄ，Ｊ＝１６．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．３０（ｄ，Ｊ＝１６．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．０１（ｐ，Ｊ＝６．６ Ｈｚ，１Ｈ），３．５３－３．３９（ｍ，２Ｈ），３．３２－３．１９（ｍ，６Ｈ），３．１０（ｄｄｔ，Ｊ＝１７．０，８．７，４．３ Ｈｚ，２Ｈ），３．０１－２．９３（ｍ，２Ｈ），２．８３－２．７２（ｍ，６Ｈ），２．５７（ｄｄｄｄ，Ｊ＝１８．５，１４．４，８．２，３．７ Ｈｚ，２Ｈ），２．２９－２．１３（ｍ，４Ｈ），１．６８（ｐ，Ｊ＝７．２ Ｈｚ，３Ｈ），１．５８（ｐ，Ｊ＝７．３ Ｈｚ，３Ｈ）．
Ｃ５０Ｈ５８ＦＮ７Ｏ１０のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：９３５．４２；実測値：［Ｍ＋１］９３６．７４、９３７．６５。
実施例１７：Ｎ－（（Ｓ）－２－（２－（（Ｒ）－５－アセトアミド－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－３’－イル）－Ｎ－（４－フルオロベンジル）アセトアミド）プロピル）－３－（２－（２－（２－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン）－５－イル）アミノ）エトキシ）エトキシ）エトキシ）プロパンアミド（ＣＰＤ１７）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－７および適切なＩＭｉＤ中間体からＣＰＤ１７を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１０％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ１７を黄色の粉末として得た（８．４ｍｇ、８６％収率）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ、アセトン－ｄ６）δ ９．９６（ｓ，１Ｈ），９．３１（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｄ，Ｊ＝１５．６ Ｈｚ，１Ｈ），７．６１－７．５７（ｍ，１Ｈ），７．５３（ｄ，Ｊ＝８．３ Ｈｚ，１Ｈ），７．４７（ｄｔ，Ｊ＝８．５，４．２ Ｈｚ，１Ｈ），７．４３－７．３８（ｍ，１Ｈ），７．３６－７．３０（ｍ，１Ｈ），７．２１－６．９９（ｍ，５Ｈ），６．６２（ｔ，Ｊ＝５．８ Ｈｚ，１Ｈ），５．０９（ｄｄｄ，Ｊ＝１２．８，５．５，１．７ Ｈｚ，１Ｈ），４．８９（ｄ，Ｊ＝１６．０ Ｈｚ，１Ｈ），４．８０（ｄ，Ｊ＝１６．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．７０（ｄ，Ｊ＝９．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．６１（ｄ，Ｊ＝１６．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．４２－４．３５（ｍ，１Ｈ），３．７６－３．７３（ｍ，２Ｈ），３．７０（ｔｄ，Ｊ＝６．２，１．４ Ｈｚ，３Ｈ），３．６５－３．６２（ｍ，４Ｈ），３．５９－３．５７（ｍ，２Ｈ），３．５６－３．５１（ｍ，４Ｈ），３．４８－３．３７（ｍ，２Ｈ），３．２５（ｄｔｔ，Ｊ＝１８．２，９．８，４．１ Ｈｚ，２Ｈ），３．１０（ｄｄｔ，Ｊ＝１２．６，８．８，３．９ Ｈｚ，１Ｈ），３．０２－２．９１（ｍ，２Ｈ），２．８０－２．７５（ｍ，４Ｈ），２．６１－２．３７（ｍ，４Ｈ），２．２２（ｄｄｔ，Ｊ＝１３．０，５．７，２．１ Ｈｚ，２Ｈ）．
Ｃ４７Ｈ５２ＦＮ７Ｏ１３のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：９４１．３６；実測値：［Ｍ＋１］９４２．６７、９４３．６５。
実施例１８：Ｎ－（（Ｓ）－２－（２－（（Ｒ）－５－アセトアミド－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－３’－イル）－Ｎ－（４－フルオロベンジル）アセトアミド）プロピル）－８－（（２－（２，６－ジオキソピペリジン－３－イル）－１，３－ジオキソイソインドリン－５－イル）アミノ）オクタンアミド（ＣＰＤ１８）の合成。
実施例１のＣＰＤ１と同様の方法で、ｉｎｔ－７および適切なＩＭｉＤ中間体からＣＰＤ１８を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１０％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ１８を黄色の粉末として得た（７．２ｍｇ、８２％収率）。
１Ｈ ＮＭＲ（５００ ＭＨｚ、アセトン－ｄ６）δ ９．８７（ｓ，１Ｈ），９．２８（ｄ，Ｊ＝４．３ Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝２．９ Ｈｚ，１Ｈ），７．５３－７．４８（ｍ，３Ｈ），７．３５－７．３２（ｍ，２Ｈ），７．１８（ｔ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｔ，Ｊ＝８．８ Ｈｚ，２Ｈ），６．９５（ｔ，Ｊ＝２．６ Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄｔ，Ｊ＝８．３，１．８ Ｈｚ，１Ｈ），６．３１－６．１７（ｍ，１Ｈ），５．０６（ｄｄ，Ｊ＝１２．６，５．４ Ｈｚ，１Ｈ），４．９２（ｄ，Ｊ＝１６．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．８０（ｄ，Ｊ＝１６．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．７２（ｄ，Ｊ＝４．１ Ｈｚ，１Ｈ），４．６２（ｄ，Ｊ＝１６．６ Ｈｚ，１Ｈ），４．４９（ｄ，Ｊ＝１６．５ Ｈｚ，１Ｈ），４．４３－４．３４（ｍ，２Ｈ），４．２８（ｄｄ，Ｊ＝１６．５，１．４ Ｈｚ，１Ｈ），３．５１（ｄｄｑ，Ｊ＝９．３，４．６，２．２ Ｈｚ，１Ｈ），３．２８－３．２１（ｍ，４Ｈ），３．１０（ｄｔ，Ｊ＝８．３，４．０ Ｈｚ，１Ｈ），２．９８－２．９２（ｍ，１Ｈ），２．８０－２．７１（ｍ，４Ｈ），２．５６（ｄｄｔ，Ｊ＝９．９，７．６，４．２ Ｈｚ，１Ｈ），２．２８－２．１６（ｍ，４Ｈ），１．６７－１．６２（ｍ，４Ｈ），１．４８－１．３７（ｍ，４Ｈ）．
Ｃ４４Ｈ４６ＦＮ７Ｏ１０のＭＳ（ＥＳＩ）計算値：８５１．３３；実測値：［Ｍ＋１］８５２．５３、８５３．４４。
実施例１９：Ｎ１－（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）－Ｎ４－（６－（（（Ｓ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）ベンジル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３，３－ジメチル－１－オキソブタン－２－イル）アミノ）－６－オキソヘキシル）スクシンイミド（ＣＰＤ１９）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－８および適切なＶＨＬ－Ｎ２中間体からＣＰＤ１９を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１５％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ１９を白色の粉末として得た（１１ｍｇ、５８収率）。
Ｃ５５Ｈ６４Ｆ４Ｎ８Ｏ１０ＳのＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１１０４．４４；実測値：［Ｍ＋１］１１０５．７３、１１０６．７２。
実施例２０：Ｎ１－（（Ｓ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）－Ｎ４－（（Ｓ）－１３－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）ベンジル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボニル）－１４，１４－ジメチル－１１－オキソ－３，６，９－トリオキサ－１２－アザペンタデシル）スクシナム（ｓｕｃｃｉｎａｍ）（ＣＰＤ２０）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－８および適切なＶＨＬ－Ｎ２中間体からＣＰＤ２０を調製した。ＩＳＣＯクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ、０～１５％）により粗生成物を精製して、ＣＰＤ２０を黄色の粉末として得た（１２ｍｇ、５９収率）。
Ｃ５７Ｈ６８Ｆ４Ｎ８Ｏ１３ＳのＭＳ（ＥＳＩ）計算値：１１８０．４６；実測値：［Ｍ＋１］１１８１．７７、１１８２．６８。
実施例２１：Ｎ１－（（Ｓ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｒ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）－Ｎ４－（（Ｓ）－１３－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）ベンジル）カルバモイル）ピロリジン－１－カルボニル）－１４，１４－ジメチル－１１－オキソ－３，６，９－トリオキサ－１２－アザペンタデシル）スクシンアミド（ＣＰＤ２１）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－８および適切なＶＨＬ－Ｎ２中間体からＣＰＤ２１を調製した。
実施例２２：Ｎ１－（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）－Ｎ４－（４－（（（Ｓ）－１－（（２Ｓ，４Ｒ）－４－ヒドロキシ－２－（（４－（４－メチルチアゾール－５－イル）ベンジル）カルバモイル）ピロリジン－１－イル）－３，３－ジメチル－１－オキソブタン－２－イル）カルバモイル）ベンジル）スクシンアミド（ＣＰＤ２２）の合成。
実施例２のＣＰＤ２と同様の方法で、ｉｎｔ－８および適切なＶＨＬ－Ｎ２中間体からＣＰＤ２２を調製した。
実施例２３：Ｎ１－（（Ｒ）－３’－（２－（（４－フルオロベンジル）（（Ｓ）－１，１，１－トリフルオロプロパン－２－イル）アミノ）－２－オキソエチル）－２’，４’－ジオキソ－２，３－ジヒドロスピロ［インデン－１，５’－オキサゾリジン］－５－イル）－Ｎ５－（１５－オキソ－１９－（（３ａＳ，４Ｓ，６ａＲ）－２－オキソヘキサヒドロ－１Ｈ－チエノ［３，４－ｄ］イミダゾール－４－イル）－４，７，１０－トリオキサ－１４－アザノナデシル）グルタルアミド（ＣＰＤ２３）の合成。
化合物１および２と同様の方法で、ｉｎｔ－６（３０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）およびビオチン－ＰＥＧ３－２０原子－酸（４７．５ｍｇ、０．０８ｍｍｏｌ）から化合物３（３０ｍｇ、ＬＣＭＳにより＞９５％収率）を得た。
実施例２４：Ｋｅｌｌｙ高リスク神経芽腫（ＮＢ）細胞におけるｐ３００／ＣＢＰの細胞分解。
ＥＰ３００およびＣＢＰは、キナーゼ誘導性ドメイン（ＫＩＤ）相互作用ドメイン（ＫＩＸ）、ブロモ－、ジンクフィンガー、およびアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）ドメインを含むマルチドメインタンパク質である。コードされたエピジェネティック修飾ドメインにより、ＥＰ３００およびＣＢＰの両方が、転写因子認識をクロマチンリモデリングに結合し、遺伝子発現を決定的に媒介することが可能になる。ＥＰ３００／ＣＢＰを標的とする小分子の開発に関する試験は、ブロモドメイン、ＫＩＸドメインおよびＨＡＴドメインに焦点を合わせている（図２Ａ）。
Ｋｅｌｌｙ ＮＢ細胞に対して、いくつかのＥＰ３００／ＣＢＰ阻害剤、Ｃ６４６、ＣＢＰ３０およびＡ４８５の効果を試験した。（図２Ｂ）。結果は、汎ＨＡＴ阻害剤Ａ４８５が、μＭ以下のレベルでＮＢの細胞モデルに対して増殖変化を促進する点で、他の公知のＥＰ３００／ＣＢＰ阻害剤よりも優れていたことを示している（図２Ｃ、図２Ｄ）。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）増殖アッセイにおいて漸増用量のＡ４８５を用いて処理されたＫｅｌｌｙ ＮＢ細胞は、増殖阻害（図２Ｅ）と、アポトーシスの誘導（図２Ｆ）とを示した。
細胞分解アッセイ
１，０００，０００細胞／ウェルで６ウェルプレートにＫｅｌｌｙ神経芽腫細胞を播種し、２４～７２時間にわたり用量依存的に処理した。氷冷溶解緩衝液［３００ｍＭ ＮａＣｌ、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．５、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００、１％ＳＤＳ、１ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）、Ｒｏｃｈｅ（登録商標）プロテアーゼ阻害剤カクテル（１：０００）、２５単位／ｍＬのベンゾナーゼ］を使用して全細胞溶解物を回収し、２０μｇのタンパク質濃度でブロットした。ＥｐｉＱｕｉｋ（商標）Ｔｏｔａｌ Ｈｉｓｔｏｎｅ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＯＰ－０００６－１００、Ｅｐｉｇｅｎｔｅｋ）を使用してヒストン抽出を行い、４μｇのタンパク質濃度でブロットした。
標準プロトコルを使用して、ＡＴＰｌｉｔｅ（商標）アッセイ（ＡＴＰｌｉｔｅ（商標）１０００アッセイキット、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（登録商標）、ＵＳＡ）を介して、化合物ＣＰＤ１～ＣＰＤ２２を試験した。化合物を用いてＫｅｌｌｙ細胞株を７２時間にわたり処理し、ＡＴＰｌｉｔｅ（商標）アッセイキットを使用して細胞増殖阻害を測定した。シグナルはＤＭＳＯ処理細胞に対して正規化されている。
図１５Ａ～図１５Ｇに示す結果は、本発明の化合物がＫｅｌｌｙ ＮＢ細胞阻害を引き起こしたことを示している。ＣＰＤ１（図１５Ａ）、ＣＰＤ８（図１５Ｃ）およびＣＰＤ１６（図１５Ｅ）は、陽性対照Ａ４８５を上回った。細胞透過性でないＣＰＤ２（陰性対照）は、細胞増殖を阻害しなかった（図１５Ａ）。
ブロッティング
ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）３～８％Ｔｒｉｓ－アセテートポリアクリルアミドゲル（ＥＡ０３７８５ＢＯＸ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標））中で全細胞溶解物を分離し、Ｂｏｌｔ ４～１２％Ｂｉｓ－Ｔｒｉｓポリアクリルアミドゲル（ＮＷ０４１２５ＢＯＸ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標））中でヒストン抽出溶解物を分離した。その後、ニトロセルロースメンブレン（ＬＣ２００１、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標））にゲルを転写した。使用した一次抗体および二次抗体には、１：５００希釈の抗ｐ３００（ａｂ１０４８５、Ａｂｃａｍ（登録商標））、１：１０００希釈の抗ＣＢＰ（ａｂ２８３２、Ａｂｃａｍ（登録商標））、１：５０００希釈の抗アクチン（３７００Ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、１：１０００希釈の抗Ｈ３（４４９９Ｓ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（登録商標））、１：１０００希釈の抗Ｈ３Ｋ２７ａｃ（ａｂ４７２９、Ａｂｃａｍ（登録商標））、１：５０００希釈のＩＲＤｙｅ（登録商標）８００ヤギ抗ウサギ（９２６－３２２１１、ＬｉＣｏｒ（登録商標）Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および１：５０００希釈のＩＲＤｙｅ（登録商標）６８０ヤギ抗マウス（９２６－６８０７０、ＬｉＣｏｒ（登録商標））を含めた。Ｏｄｙｓｓｅｙ赤外線イメージングシステム（ＬｉＣｏｒ（登録商標）Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて視覚化を行った（図３Ｂ、図４Ｆおよび図４Ｇ）。
実施例２５：ＮＢ細胞内のＥＰ３００依存。
スクリーニングおよび低スループットデータは、ＣＢＰではなくＥＰ３００がＮＢ細胞増殖に選択的に必要であることを示唆している。コロニー形成アッセイの実験方法は、Ｄｕｒｂｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｇｅｎｅｔ．５０（９）：１２４０－６０（２０１８）に記載されている通りである。結果を図３Ａに示す。
実施例２６：ＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）およびＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイ。
ＥＰ３００ブロモドメインおよびＣＲＢＮのためのプローブとしてビオチン化タグ付き小分子をそれぞれ使用する、ＥＰ３００触媒機能のためのＡｌｐｈａＬＩＳＡ（登録商標）アッセイ（図３Ｂ）ならびにＥＰ３００ブロモドメインおよびセレブロン（ＣＲＢＮ）のためのＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイを開発した（図３Ｃ）。
白色ＡｌｐｈａＰｌａｔｅ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（登録商標）、ＵＳＡ）を使用して３８４ウェルプレート形式でＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイを行い、Ｊａｎｕｓ Ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（登録商標）、ＵＳＡ）を使用して、事前に希釈した化合物（１００ｎＬ）の転写を行った。後続の工程はいずれも、アッセイ緩衝液（５０ｍＭ ４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）、ｐＨ７．５、０．１％（ｗｔ／ｖｏｌ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および０．０１％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）Ｔｗｅｅｎ－２０）中で行った。要約すると、酵素を含有する１０μＬのアッセイ緩衝液（２ｎＭ最終）を、化合物の希釈液とともに１５分間プレインキュベートした。アセチルＣｏ－Ａ ２－ＯＧ（５μＭ最終）からなる基質（５μＬ）を加えることによって、酵素反応を開始させた。
ＦＡＳの最終濃度は１０μＭであった。ヒストン尾部－ＧＧＫビオチンの最終濃度は１００ｎＭ最終であった。酵素反応を３０分間進行させ、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）（４０ｍＭ）およびＮａＣｌ（１２００ｍＭ）を含有する５μＬのアッセイ緩衝液を加えることによって停止させた。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の最終濃度は１％であった。メチルマーク（３００ｎｇ／ｍＬ最終）に対する抗体とともに、ストレプトアビジンドナービーズ（０．０８ｍｇ／ｍＬ）およびプロテインＡコンジュゲートアクセプタービーズ（０．０８ｍｇ／ｍＬ）を１時間プレインキュベートし、プレインキュベートしたＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）ビーズ（５μＬ）を使用して、ヒストンＨ３産物アセチル化マークの存在を検出した。検出を室温で２時間進行させ、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（商標）２１０４プレートリーダーを用いてアッセイプレートを読み取った。（酵素なし）対照に対してデータを正規化し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用した非線形回帰曲線適合によってＩＣ５０値を決定した（図４Ｅ～図４Ｈ）。
アッセイから生成された、ＣＤＰ１～ＣＰＤ２２のＩＣ５０値を表１に示す。
表１．Ｋｅｌｌｙ細胞におけるＩＣ５０値。
本発明の分解誘導薬ＣＰＤ１、ＣＰＤ８、ＣＰＤ１０、ＣＰＤ１３、ＣＰＤ１５およびＣＰＤ１６では細胞増殖阻害が観察された。残りの化合物では、細胞増殖阻害は検出または決定されなかった。
ＥＰ３００は、ＮＢ癌細胞の生存に重要である（図３Ａ）。本発明の化合物ＣＰＤ１は、ＣＢＰに影響を与えることなく、標的タンパク質（ＥＰ３００）をＥ３リガーゼ（ＣＲＢＮ）に選択的に二量体化した。ＣＰＤ１は、ＮＢ癌細胞内でＥＰ３００の選択的分解を誘導し、阻害剤単独と比較してはるかに高い効力でＮＢ細胞を死滅させる。
実施例２７：推定上のＥＰ３００分解誘導薬のアダプター機能の評価。
推定上のＥＰ３００分解誘導薬のアダプター機能を実験的に評価するために、ＢＲＤ４／ＣＲＢＮ－ＤＤＢ１について以前に報告されたように、ヒト組換えＥＰ３００およびＣＲＢＮ－ＤＤＢ１タンパク質のための蛍光近接アッセイ（ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ ａｓｓａｙ）（ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（登録商標））を使用する（図５Ｅ）（Ｗｉｎｔｅｒ，ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４８（６２４１）：１３７６－８１（２０１５））。
実施例２８：４日間のＡＴＰｌｉｔｅ（商標）アッセイを使用した、ＣＰＤ１、ＣＰＤ２およびＡ－４８５による細胞増殖阻害。
水を用いて希釈系列を調製するために、ＡＴＰ標準溶液（ＡＴＰｌｉｔｅ（商標）１０００アッセイキット、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ（登録商標）、ＵＳＡ）のアリコートを使用した。プレートのウェルに、一連の１００μＬの完全培地を細胞を含めずピペットで移した。各ウェルに５０μＬの哺乳動物細胞溶解溶液を加え、オービタルシェーカーでプレートを７００ｒｐｍで５分間振盪した。ウェルに１０μＬのＡＴＰ希釈系列を加え、オービタルシェーカーでプレートを７００ｒｐｍで５分間振盪した。５０μＬの基質溶液を加え、オービタルシェーカーでプレートを７００ｒｐｍで５分間振盪した。発光を測定して標準曲線を作成する前に、プレートを１０分間暗順応させた。結果は図７Ａ～図７Ｃに要約されている。ＭＭ．１ＳおよびＵ２６６細胞では、本発明の化合物ＣＰＤ１は阻害剤Ａ４８５を上回った。
実施例２９：６日間の３－（４，５－ジメチルチアゾール－２－イル）－２，５－ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）アッセイを使用した、ＣＰＤ１、ＣＰＤ２およびＡ－４８５による細胞増殖阻害。
細胞培養からの培地を廃棄した。付着細胞については、培地を注意深く吸引した。浮遊細胞については、マイクロプレート対応の遠心分離機で１，０００ ｘ ｇ、４°Ｃで９６ウェルプレートを５分間遠心させ、培地を注意深く吸引した。既存の培地の量は、各試料について同じである必要がある。５０μＬの無血清培地と５０μＬのＭＴＴ溶液とを各ウェルに加えた。プレートを３７℃で３時間インキュベートした。
インキュベーション後、１５０μＬのＭＴＴ溶媒を各ウェルに加えた。プレートをホイルで包み、オービタルシェーカー上で１５分間振盪した。ＯＤ＝５９０ｎｍで吸光度を読み取った。読み取りは１時間以内に行った。結果は図８Ａ～図８Ｃに要約されている。ＭＭ．１ＳおよびＵ２６６細胞では、本発明の化合物ＣＰＤ１は阻害剤Ａ４８５を上回った。
実施例３０：ＣＰＤ１によるＥＰ３００の選択的分解。
実験プロトコルは実施例２４と同じである。ＥＰ３００抗体、ＣＢＰ抗体またはＨ３Ｋ２７ａｃ抗体を使用した免疫ブロットによってタンパク質レベルを決定した。ローディング対照として総Ｈ３を使用した。用量依存的方法または時間依存的方法のいずれかでタンパク質レベルを測定した。
図９Ａ～図９Ｄに示す結果は、最初の３６時間に、ＣＢＰレベルへの影響を伴わず、ＥＰ３００の明らかな分解を示し、これにより、ＣＢＰを上回るＥＰ３００に対するＣＰＤ１の選択性が確認された。４８時間後にＣＢＰの分解が観察された（図９Ｂ）。
プロテオミクス試験では、ＥＰ３００が本発明の分解誘導薬ＣＰＤ１によって選択的かつ有意に分解されることが示された（図９Ｃ）。ＣＢＰレベルの変化は観察されなかった。図９Ｄの結果は、コロニー形成アッセイを使用して、ＣＰＤ１が１０日間で用量依存的にＫｅｌｌｙ細胞増殖を阻害したことを示した。
実施例３１：ＣＰＤ１および異性体（Ｓ，Ｓ）－ＣＰＤ１の生物学的活性評価。
図１０Ａ～図１０Ｄに示す結果は、ＣＰＤ１（Ｒ，Ｓ）のターゲティングリガンドのキラル中心が化合物の効力に重要な役割を果たすことを示している。（Ｓ，Ｓ）異性体ではＥＰ３００の細胞分解は観察されなかった。
実施例３２：本発明の化合物について基質特異性を定義する。
ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（商標）アッセイを使用して、ＣＲＢＮドメインおよびＨＡＴドメインの両方に対する本発明の分解誘導薬化合物の結合を決定した。実験プロトコルは実施例２６と同じである。
図１１Ａ～図１１Ｃに示す結果は、本発明の分解誘導薬ＣＰＤ１が、ＣＲＢＮ（図１１Ｃ）およびＨＡＴドメイン（図１１Ｂ）の両方に結合したことを示している。
実施例３３：ＣＰＤ１は、ＣＲＢＮ依存性分解誘導薬分子である。
ＣＲＢＮノックアウト（ｋ／ｏ）Ｋｅｌｌｙ細胞株に対してＣＰＤ１を試験した。実験プロトコルは実施例２４と同じである。
図１２Ａ～図１２Ｄに示す結果は、ＣＲＢＮ ｋ／ｏ株（ＣＲＢＮ－１およびＣＲＢＮ－３）ではＣＰＤ１がＥＰ３００またはＣＢＰを分解しなかったことを示し、これにより、本発明の化合物によるＥＰ３００分解がＣＲＢＮ依存性であることが確認された。図１２Ｃおよび図１２Ｄの細胞増殖阻害曲線は、ＣＰＤ１がＣＲＢＮ ｋ／ｏ細胞株に影響を与えなかったことを示した。
実施例３４：ＣＰＤ１を用いた、ＣＤ１マウスに対するインビボ試験。
最大耐用量（ＭＴＤ）について、マウスを対象にＣＰＤ１を試験した（図６Ａ）。１０ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ）、２０ｍｐｋおよび４０ｍｐｋを用いて、各群４匹のマウスを処置した。ヒトＣＲＢＮノックインマウスに対してもこの化合物を試験し、２１日間の処置後に血液試料を採取した。試験した血液試料はいずれも正常であった。
図１３Ａ～図１３Ｃに示す結果は、マウスに体重減少が観察されなかったことを示し、これにより、ＣＰＤ１がインビボ試験で良好な耐容性を示したことが示された。また、ヒト化ＣＲＢＮＩ３９１Ｖマウスでは毒性は観察されなかった（図１３Ｃ）。
４０ｍｐｋの腹腔内注射（ＩＰ）により連日処置されたマウスから、１４日後に血液試料を採取した。結果は表２に要約されている。血液試料測定は、ＣＰＤ１がマウスに対して毒性でないことを示した。
表２：インビボ試験の血液分析
ＭＴＤ試験から肝臓を検査するために、免疫組織化学（ＩＨＣ）染色を使用した。染色は、４０ｍｐｋを用いた正常なマウスでは、１４日間の処置によって肝臓組織がＥＰ３００ノックアウトを有したことを示した（図１３Ｃ）。Ｐ３００レベルの低下がインビボで観察された。ＣＢＰレベルおよびＨ３Ｋ２７Ａｃレベルの変化は観察されなかった。
実施例３５：ＣＰＤ１はインビボで抗腫瘍活性を有する。
Ｋｅｌｌｙ細胞株の異種移植モデルを使用して、インビボでの効果を評価した。Ｋｅｌｌｙ細胞を２Ｍで動物に移植した。１０日目に４０ｍｐｋ ＩＰで処置を開始した。
図１４Ａ～図１４Ｂに示す結果は、ＣＰＤ１が腫瘍の進行を減少させ、動物の生存期間を延ばしたことを示している。
実施例３６：ＥＰ３００分解誘導薬の細胞効力およびオンターゲット効果の評価。
オンターゲットタンパク質分解を報告するために、ハイスループットフローサイトメトリーに基づく分解アッセイを使用して、細胞内のＥＰ３００分解を評価する。ＥＧＦＰレポーター系にＥＰ３００をクローニングする。ＦＲＴ／Ｆｌｐ組換えを使用して、ＥＧＦＰ融合体としてＥＰ３００を発現させ、続いて、Ｐ２Ａ部位、ならびにＥＰ３００－ＥＧＦＰ融合タンパク質およびＲＦＰレポーターを同等かつ安定なレベルで発現させるための正規化マーカーとしてｍＣｈｅｒｒｙまたはｍＣａｒｄｉｎａｌを発現させる。
９６ウェルフローサイトメトリー設定を使用して、ＥＧＦＰからＲＦＰへのシグナルの喪失として単一細胞解像度で標的タンパク質分解を測定する（Ｌｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２２（６）：７５５－６３（２０１５）；Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４８（６２４１）：１３７６－８１（２０１５）；Ｚｅｎｇｅｒｌｅ ｅｔ ａｌ．，ＡＣＳ Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１０（８）：１７７０－７（２０１５）；Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．６７（１）：５－１８（２０１７））。このアッセイは、他の方法と比較して増加した感度および堅牢性を示し、９６ウェルフローサイトメトリー設定は、多数の分子について完全なＩＣ５０プロファイリングを可能にする。並行して、同様のＩＫＺＦ１レポーティング細胞株を開発して、ＩＫＺＦ１分解をモニタリングして、推定上のＥＰ３００分解誘導薬の特異性を評価する（Ｋｒｏｎｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４３（６１６８）：３０１－５（２０１４）；Ｌｕ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４３（６１６８）：３０５－９（２０１４）。
細胞内でのＥＰ３００分解に対するＣＲＢＮの要件を実証するために、同質遺伝子ＮＢ株である、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９技術によるＣＲＢＮの遺伝子改変ノックアウトを有するＫｅｌｌｙ細胞を作製する（Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４８（６２４１）：１３７６－８１（２０１５）；Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．６７（１）：５－１８（２０１７））。漸増濃度のＥＰ３００分解誘導薬とともにＷＴ Ｋｅｌｌｙ細胞およびＫｅｌｌｙ ＣＲＢＮ－／－細胞をインキュベートし、免疫ブロッティングによってＥＰ３００タンパク質分解を視覚化する。この細胞株では、増殖および生存率もスコアリングして、細胞増殖を妨げる可能性のあるオフターゲット毒性があるかどうかを決定する。処理された細胞株におけるＥＰ３００、ＣＢＰおよびＩＫＺＦの免疫ブロッティングとともに、この細胞系を使用して、追加の強力かつ選択的なＥＰ３００分解誘導薬を特定する。
実施例３７：ＮＢの細胞モデルにおけるＥＰ３００分解誘導薬機能の評価。
ＮＢ細胞株の一団に対して、最も有望な生化学的活性およびオンターゲット細胞活性を有する追加のＥＰ３００分解誘導薬（「強力かつ選択的な化合物／分子」）をプロファイリングする。適切な不活性対照（Ａ－４８５、ＣＢＰ３０およびレナリドマイド）と対比した免疫ブロット分析によって、用量範囲試験および時間範囲試験でＮＢ株（Ｋｅｌｌｙ）におけるＥＰ３００の分解を試験する。この場合もＡ－４８５と比較して、ＭＬＬ－ｒ白血病細胞株（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標）；Ｐｒｏｍｅｇａ（商標））の一団に対して、生存率に対する効果を評価する。免疫ブロットによって、Ｈ３Ｋ２７の全体的なアセチル化に対する影響を評価する。以下に説明する細胞特性評価法では、リード分子を使用する。
分解誘導薬によって誘導されたＥＰ３００分解の機構を厳密に評価するために、陰性対照としてＡ－４８５およびフタルイミドのみを用いて、ＮＢ細胞におけるＣＰ３００分解を最初に試験する。ＮＢのＣＲＢＮレベルも評価する。次に、説明されているように、競合化合物および遺伝子編集戦略を使用して、プロテアソーム機能の分解、ＥＰ３００結合、およびＣＲＢＮ結合の要件を行う（Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４８（６２４１）：１３７６－８１（２０１５））。効果的なＥＰ３００分解のためのＣＲＢＮ結合、Ｅ３複合体活性化およびプロテアソーム機能の細胞要件を裏付けるために、推定上のＥＰ３００分解誘導薬を用いた処理前に、カルフィルゾミブ（プロテアソーム阻害剤）、ＭＬＮ４９２４（Ｎｅｄｄ８活性化酵素阻害剤）またはレナリドマイド（ＣＲＢＮ結合剤）を用いて、Ｋｅｌｌｙ細胞およびＢＥＣ２細胞を別個に前処理する。
ＮＢ細胞株におけるタンパク質安定性に対するリードＥＰ３００分解誘導薬処理の細胞結果を評価するために、偏りのない、プロテオーム全体のアプローチを使用する。多重化定量質量分析に基づくプロテオミクスを使用して、ＮＢ細胞におけるＥＰ３００分解誘導薬処理の特異性および結果を評価する（ＭｃＡｌｉｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．８４（１７）：７４６９－７８（２０１２）；ＭｃＡｌｉｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｃｈｅｍ．８６（１４）７１５０－８（２０１４））。推定上のＥＰ３００分解誘導薬、またはＤＭＳＯを用いて、Ｋｅｌｌｙ細胞およびＢＥＣ２細胞を２４時間にわたり処理する。小分子作用の主要な即時の結果を捉え、ＥＰ３００標的遺伝子の抑制されたトランス活性化に対する予測される交絡効果を軽減するために、２４時間のインキュベーションを選択した。ＥＰ３００分解の特異性は、オフターゲット効果と相まって効力よりも優先される（例えば、ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＲＢＮ ｎｅｏ－ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ＩＫＺＦ１ Ｋｒｏｎｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４３（６１６８）：３０１－５（２０１４）；Ｌｕ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４３（６１６８）：３０５－９（２０１４））。インビボ試験の候補を確定するために、これらの評価をいずれも使用する。
実施例３８：インビボ試験のためのＥＰ３００分解誘導薬のＰＫ特性の最適化。
インビボでのＥＰ３００分解誘導薬の翻訳の可能性を正確に評価するために、リードＥＰ３００分解誘導薬のＰＫ特性を最適化する。例えば、半減期および最大耐用量（ＭＴＤ）などのそのＰＫ特性について、ＣＰＤ１を評価した（図６Ａ、実施例３４を参照）。Ａ－４８５足場を利用して、優れた効力および選択性を有する新規ＥＰ３００分解誘導薬を生成する。インビボＰＫおよび有効性試験のために、リード化合物を大量に生成する。
実施例３９：ＥＰ３００阻害剤と比較した、遺伝子発現、クロマチン占有率、ヒストン修飾に対するＥＰ３００分解の影響の特性評価。
ＲＮＡ－ｓｅｑによる転写プロファイリングと、ＣｈＩＰ－ｓｅｑおよびＡＴＡＣ－ｓｅｑによるクロマチン評価とを使用して、ＮＢ細胞に対するＥＰ３００分解の影響の包括的分子評価を達成する。ＲＮＡ－ｓｅｑによる転写プロファイリングと、ＣｈＩＰ－ｓｅｑによるエピゲノムプロファイリングとを使用して、クロマチンに対するこれらの化合物の影響の包括的分子評価を行う。具体的には、抵抗性株に対して、Ａ４８５またはリードＥＰ３００分解誘導薬を用いて処理した細胞の０、６および２４時間の時点での転写応答の速度論的試験を行う。ＣｈＩＰ－ｓｅｑおよびＣｈｅｍ－ｓｅｑによって、処理後０時間、６時間および２４時間の時点で、ＥＰ３００／ＣＢＰタンパク質の局在、エンハンサー活性（Ｈ３Ｋ２７ａｃ）、およびプロモーターの完全性（Ｈ３Ｋ４ｍｅ３）に対する影響を試験する。ＡＴＡＣ－ｓｅｑによる薬物反応の前後に、アクセス可能なクロマチン、および潜在的なシス調節因子エレメント（ｃｉｓ－ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｅｌｅｍｅｎｔ）を決定する。これらのデータセットの統合により、ＥＰ３００の分解がその酵素活性を阻害するだけでなく、先にＥＰ３００阻害剤に曝露されていないＥＰ３００駆動遺伝子発現プログラムの崩壊につながるその非酵素的機能をも無効にするという仮説を試験する。
実施例４０：インビトロでのＥＰ３００阻害剤と比較したＥＰ３００分解誘導薬の抗腫瘍効果の評価。
新たに開発されたＥＰ３００分解誘導薬を使用して、ＮＢにおいて酵素阻害と対比してＥＰ３００分解をインビトロで詳細に検討する。直接比較におけるＡ－４８５およびＥＰ３００分解誘導薬を用いた用量反応形式での一団のヒトＮＢ細胞（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標））。さらに、免疫ブロッティング、およびフローサイトメトリー分析による細胞周期／細胞死によって、経時的な細胞増殖、ＥＰ３００タンパク質分解、およびＨ３Ｋ７９メチル化レベルを評価する。
実施例４１：ＮＢにおける併用アプローチとして、標準治療剤または他の阻害剤と組み合わせたＥＰ３００分解の評価。
標準的なアプローチ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標））による細胞増殖の評価を通じて、ＮＢ細胞に対するインビトロでの相乗効果を決定する。培養細胞のプレートに対してそれぞれの複数の濃度で２つの異なる化合物を滴定することを可能にするロボットピンニングシステム（ｒｏｂｏｔｉｃ ｐｉｎｎｉｎｇ ｓｙｓｔｅｍ）を使用する。４８～７２時間のインキュベーション後、マルチラベルプレートリーダーを用いて、ＡＴＰ含有量（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ－Ｇｌｏ（登録商標））によって細胞生存率を決定する。Ｃｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｇｕｌ．２２：２７－５５（１９８）に記載されている方法に従って、ＣｏｍｐｕＳｙｎパッケージに結果をプロットして、薬剤の相加効果または相乗効果があるかどうかを決定する。相乗効果があると思われる併用用量で、Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ染色と、ＤＮＡ含有量の評価とを介して、アポトーシスと対比して細胞周期停止を決定する。いずれの実験でも、免疫ブロッティングによってＥＰ３００タンパク質レベルを評価して、タンパク質分解を確実にする。
実施例４２：ゼブラフィッシュおよびマウスを対象としたＥＰ３００分解誘導薬および阻害剤の毒性の評価。
ゼブラフィッシュ胚を用いて、各候補の最大耐量（ＭＴＤ）を決定した。３日齢のゼブラフィッシュ胚を様々な薬物濃度に曝露し、健康への有害影響をモニタリングした。次いで、形態学的有害影響および行動への有害影響をもたらさなかった最高濃度を決定することにより、治療用量を選択した。リードＥＰ３００分解誘導薬のＭＴＤ評価の追加のデザインの指針として化合物ＣＰＤ１を用いて、実験を最初に行った（図６Ｂ）。同様の方法で、マウスに対する分解誘導薬のＭＴＤも決定する。要約すると、マウスに試験化合物を投与し、投与後特定の間隔（０．０８３、０．２５、０．５、１、２、４、８、１２および２４時間）で血液と血漿とを分離し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって試験物質の存在を定量した（ｎ＝マウス５匹／化合物）。インビボマウスＰＫ実験を使用して、これらのパラメーターを決定し、ＥＰ３００分解誘導薬の最適化のための医薬品化学の反復ラウンドを通知した（図６Ａ）。分解誘導薬は比較的大きな分子量を有するため、インビボ試験のために分解誘導薬の溶解性と安定性とを高めるために適切な処方を検討する。併せて、確立されたＭＴＤを含むこれらのパラメーターを使用して、以下の実験のための投与方法、投与量およびスケジュールなどのインビボ試験デザインを導く。また、得られた情報を使用して、実施例３６で実施された分解誘導薬の最適化を導いた。
実施例４３：ゼブラフィッシュモデルおよびマウスＰＤＸモデルを対象とした化合物の評価。
ＮＢのゼブラフィッシュ異種移植モデルでは、Ａ－４８５および分解誘導薬ＣＰＤ１のインビボでの効果を比較する。まず、可視化のために、ヒトＮＢ細胞にＥＧＦＰを安定にトランスフェクトする。次いで、先に説明されているように卵黄および静脈内注射を用いて、２日齢のゼブラフィッシュ胚にこれらの細胞を移植する。（Ｈａｌｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ９（３）：１３９－５１（２０１６）；Ｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ２２７（４）：４３１－４５（２０１２）；Ｔｕｌｏｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４５１：１５５－６９（２０１６））。１日後、蛍光ヒトＮＢ細胞を移植したゼブラフィッシュ胚を２４ウェルプレートに並べ、試験薬を用いて処理する。ＭＴＤで魚の水に加えた個々の分解誘導薬および阻害剤、ならびにＤＭＳＯ対照に、１２匹のレシピエント魚を曝露する。処理の５日後、蛍光を使用してインビボ細胞増殖、細胞増殖および浸潤を分析し（Ｔｕｌｏｔｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１４５１：１５５－６９（２０１６））、群間で比較する。ウェルチのｔ検定を使用して、分散の不均一性に対処する。顕著な腫瘍抑制を示す薬物を様々な濃度でさらに分析する。活性薬物または薬物併用による腫瘍抑制の根底にある細胞機序を解明するために、細胞増殖（ＰＣＮＡおよびリン酸化ヒストンＨ３に対する免疫組織化学による）、細胞生存率およびアポトーシス（ＴＵＮＥＬおよび抗カスパーゼ３染色による）、老化（β－ガラクトシダーゼ染色による）、ならびにオートファジー（リソソーム染色による）について、処理されたＮＢ細胞を分析する。０、１、２、３、４および５日間の処理後に、分離したゼブラフィッシュ胚から単離されたＮＢ細胞に対して、ｑＲＴ－ＰＣＲによって、ＥＰ３００タンパク質レベル、Ｈ３Ｋ２７アセチル化、ＭＹＣＮレベルおよび遺伝子発現に対するＰＤ効果を行う。
次に、ＮＢ（Ｋｅｌｌｙ）異種移植モデルでは、それぞれ１ｘ１０６個の細胞を６～８週齢のＮＯＤ－ＳＣＩＤ－ＩＬ２Ｒｎｕｌｌ（ＮＳＧ）マウス３０匹に注射することによって、Ａ－４８５およびリードＥＰ３００分解誘導薬のインビボでの効果を比較する。これらのマウスは、移植後２～３週間で臨床症状を呈し始める。生着を確認した後、動物を有効性コホートまたは薬力学（ＰＤ）コホートのいずれかに分ける（ＰＤ試験では３匹／群、有効性試験では５匹／群）。両コホートに、ＭＴＤ／日でＡ４８５または分解誘導薬を連日腹腔内（ＩＰ）注射により投与する。対照群には、実施例１０の製剤化試験で決定されたビヒクルを腹腔内注射する。毒性を評価するために全動物の体重を測定し、腫瘍サイズを３日ごとに測定する。２１日間の薬物処置とそれに続く７日間の休薬日の後に、有効性（生存率）を決定する。ＰＤについて評価された動物については１４日間投与し、注入の完了後に安楽死させる。試験の完了時に、動物を安楽死させ、組織を採取する。組織学的検査のために、大腿骨、脾臓の一部、肝臓の一部、およびいずれかの拡大したリンパ節を１０％ホルマリンに固定する。ｑＲＴ－ＰＣＲによって、ＥＰ３００タンパク質レベル、Ｈ３Ｋ２７アセチル化および遺伝子発現に対するＰＤ効果を行う。異種移植試験で良好に機能したＥＰ３００分解誘導薬を使用して、ＮＢ ＰＤＸモデルで同様の実験を行う。６～８週齢のＮＳＧマウス３０匹に、１ｘ１０６個のヒトＰＤＸ細胞を注射する（二次移植）。上記のように、腫瘍の生着についてマウスをモニタリングする。また、ビヒクル、ＥＰ３００分解誘導薬またはＡ－４８５（上記のように投与される）を用いて処置される治療コホート（ＰＤ試験では３匹／群、有効性試験では５匹／群）に、移植されたマウスを分ける。分析はいずれも上記のように行う。合計３～５つの異なるＰＤＸに対してこれらの試験を行う。
実施例４４：ＰＤＸモデルに対する、ＮＢ治療のためのＥＰ３００分解誘導薬の組合せの評価。
ＰＤＸモデルを使用して、特定されたＥＰ３００分解誘導薬とのＥＰ３００阻害剤の組合せ効果を評価する。動物がそれぞれマウス８匹の４つの治療コホート（ＰＤ試験では３／群、有効性試験では５／群）：ビヒクル、ＥＰ３００分解誘導薬、第２の阻害剤、または分解誘導薬／阻害剤に無作為化されることを除いて、実施例４２に記載されたものと同様に、これらの実験を行う。
すべての特許刊行物および非特許刊行物は、本発明が関係する当業者の技能のレベルを示すものである。これらのすべての刊行物は、各個々の刊行物が参照により組み込まれるものとして具体的かつ個別に示されている場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書の本発明は、特定の実施形態を参照して説明されてきたが、これらの実施形態は、本発明の原理および用途の単なる例示であることを理解されたい。したがって、例示的な実施形態に多数の修正が加えられてもよく、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、他の構成が考案され得ることを理解されたい。

Claims (17)

  1. 式Ｉによって表される構造を有する二官能性化合物、またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。：
    （式Ｉ中、前記ヒストンアセチルトランスフェラーゼ（ＨＡＴ）ターゲティングリガンドは構造ＴＬ－１及びＴＬ－１ａからＴＬ－１ｆのいずれかによって表される構造を有し：
    式ＴＬ－１ａ中、Ａが、ＣＨ２、ＮＨまたはＯであり；
    Ｂが、ＣＨ２またはＣＯであり；
    Ｒが、Ｈ、ハロ、ＣＮ、ＣＦ３、アルキルまたはアルコキシであり、
    式ＴＬ－１ｂ中、Ａ、Ｂ、Ｒは前記したものと同じであり、
    Ｒ１が、Ｃ３～Ｃ５炭素環基もしくはアルク炭素環基、または３～５員のＮ－複素環基もしくはアルクＮ－複素環基であり、前記アルキル基が、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基であり、
    式ＴＬ－１ｃ中、
    Ｑが、ＣＨ２、Ｏ、Ｎ、ＣＯ、Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｎ、ＣＨ２Ｎ、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）ＮまたはＣＨ２ＣＨ２Ｎであり；
    Ｒ２が、
    、Ｃ３～Ｃ５炭素環基もしくはアルク炭素環基、または３～５員のＮ－複素環基もしくはアルクＮ－複素環基であり、前記アルキル基が、Ｃ１～Ｃ１０アルキル基であり、
    及び、
    前記リンカーが、構造Ｌ１０～Ｌ２６のいずれかの構造によって表され：
    式Ｌ１０中、Ｘが、ＣＨ２、ＮＨ、ＮＭｅまたはＯであり、ｎが、０から１１までの整数であり、
    前記デグロンが、セレブロン（ＣＲＢＲＮ）に結合し、構造Ｄ１によって表され：
    式Ｄ１中、Ｙが、ＣＨ２またはＣＯであり；
    Ｚが、ＮＨ、ＯまたはＯＣＨ２ＣＯであり、波線（
    ）が、前記リンカーおよびＥＰ３００ターゲティング部分に対する結合点を表す、または、
    前記デグロンが、フォンヒッペルランダウ腫瘍抑制因子（ＶＨＬ）に結合し、以下からなる群から選択される構造によって表される：
    （式Ｄ２－ｃ中、Ｙ’は、結合、Ｎ、ＯまたはＣである）；
    （式Ｄ２－ｄ中、Ｚは、Ｃ５～Ｃ６炭素環基またはＣ５～Ｃ６複素環基である）；および
    ）。
  2. Ｒ１が、
    である、請求項１に記載の二官能性化合物。
  3. 前記リンカーが、構造Ｌ１１、Ｌ１２、Ｌ１４、Ｌ１５及びＬ１７のいずれか１つによって表される、請求項１に記載の二官能性化合物：
    。
  4. 構造Ｉ－２～Ｉ－１２のいずれか１つによって表される、請求項１に記載の二官能性化合物：
    （それぞれの式中、Ｘ、ｎは前記したものと同じである）
    またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。
  5. 以下からなる群から選択される構造によって表される、請求項１に記載の二官能性化合物：
    （それぞれの式中、Ａ、Ｂ、Ｘ、ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｒ１、Ｒ２は前記したものと同じである） またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体。
  6. 前記デグロンが、構造Ｄ１によって表され：
    式中、Ｙが、ＣＨ２またはＣＯであり；
    Ｚが、ＮＨ、ＯまたはＯＣＨ２ＣＯであり、波線（
    ）が、前記リンカーおよびＥＰ３００ターゲティング部分に対する結合点を表す、請求項１から５のいずれか一項に記載の二官能性化合物。
  7. 前記デグロンが、構造Ｄ１－ａによって表される、請求項６に記載の二官能性化合物：
    。
  8. 前記デグロンが、以下からなる群から選択される構造によって表される、請求項１から５のいずれか一項に記載の二官能性化合物：
    （式中、Ｙ’は、結合、Ｎ、ＯまたはＣである）；
    （式中、Ｚは、Ｃ５～Ｃ６炭素環基またはＣ５～Ｃ６複素環基である）；および
    。
  9. である、請求項１に記載の二官能性化合物、
    ならびにその薬学的に許容される塩および立体異性体。
  10. 構造２４によって表される構造を有する二官能性化合物：
    またはその立体異性体。
  11. 請求項１から９のいずれか一項に記載の二官能性化合物または薬学的に許容される塩もしくは立体異性体の治療有効量と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
  12. 前記医薬組成物が、錠剤またはカプセルの形態である、請求項１１に記載の医薬組成物。
  13. 請求項１から９のいずれか一項に記載の二官能性化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体の治療有効量を含む、調節不全のＥＰ３００活性を伴う疾患または障害を治療するための医薬組成物。
  14. 前記疾患または障害が、ＥＰ３００依存性およびＭＹＣファミリー依存性の癌である、または、
    前記疾患または障害が、高リスク神経芽腫（ＮＢ）であって、任意選択的に前記医薬組成物が、追加の治療有効量の抗ＮＢ剤と組み合わせて投与されるためのものである、または、
    前記疾患または障害が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）またはびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫である、または、
    前記疾患または障害が固形腫瘍であり、任意選択的に前記固形腫瘍が、黒色腫、横紋筋肉腫、結腸癌、直腸癌、胃癌、乳癌または膵癌である、請求項１３に記載の医薬組成物。
  15. 前記二官能性化合物またはその薬学的に許容される塩もしくは立体異性体の前記治療有効量が、錠剤、カプセル、または液体の形態で前記対象に経口投与される、請求項１３または１４に記載の医薬組成物。
  16. 前記二官能性化合物が、塩の形態で前記対象に投与され、任意選択的に前記対象がヒトである、請求項１３から１５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  17. 請求項１０に記載の二官能性化合物を用いてＥＰ３００ブロモドメインを単離または検出する方法であって、
    前記方法が、ＥＰ３００を含有することが疑われる溶解細胞と、前記二官能性化合物、および担体に固定化されたストレプトアビジンとを接触させること、ビオチン－ストレプトアビジン結合を介した分子およびタンパク質結合によって形成された複合体を単離すること、ならびに複合体中のＥＰ３００の存在を確認することを含む、ＥＰ３００ブロモドメインを単離または検出する方法であって、
    任意選択的に前記担体がビーズを含む、方法。
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