JP7724866B2 - 抗体薬物複合体およびその用途 - Google Patents

Description

本発明は、医薬品化学分野、特に抗体薬物複合体およびその用途に関する。

胃がんは、世界で最も一般的ながんの１つであり、東アジア、東欧、および南米では発病率が比較的高く、北米およびアフリカでは発病率が比較的低い。進行胃がんまたは再発胃がんのための標準的な初期治療は、化学療法である。胃がん患者の予後は外科技術および周術期処置の発展によって大幅に改善されてはいるが、５年全生存率は１０～１５％という低値である。標的療法が、再発／進行性胃がんの処置にとって新たな希望をもたらした。トラスツズマブと化学療法との組み合わせがＨＥＲ２陽性患者にいくらかの利益をもたらしたが、ＨＥＲ２陽性発現であるのは患者の１５％であり、利益を受ける人は限られている。近年、免疫療法が再発／進行胃がんの処置に新たな希望をもたらしたが、しかしながら、ＫＥＹＮＯＴＥ－１２研究の結果によると、この処置に適しているＰＤ－Ｌ１陽性集団の割合は、再発／進行胃がんまたは食道胃接合部腺癌の患者の４０％でしかない。よって、新しい胃がん処置薬の開発が今も必要とされている。

本出願の発明者は、多くの実験と独創的研究とによって、抗クローディン１８．２抗体薬物複合体を調製し、良好な生物学的活性を有することを確認して、本発明に至った。

この目的のために、本発明の第１の態様において、本発明は、抗体薬物複合体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、または当該塩の溶媒和物を提供し、抗体薬物複合体は、式Ｉ中に示される構造を有する：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ）_ｐ 式Ｉ
式中、
Ａｂは、重鎖および軽鎖を備える抗クローディン１８．２抗体であり、重鎖の可変領域ＣＤＲ１は、配列番号２、１０、１８、２６、３４、４２、６８、７６、８４、９２、１００、１０８、もしくは１１６に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、重鎖の可変領域ＣＤＲ２は、配列番号３、１１、１９、２７、３５、４３、６９、７７、８５、９３、１０１、１０９、もしくは１１７に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、重鎖の可変領域ＣＤＲ３は、配列番号４、１２、２０、２８、３６、４４、７０、７８、８６、９４、１０２、１１０、もしくは１１８に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＣＤＲ１は、配列番号５０、５８、１２４、もしくは１３２に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＣＤＲ２は、配列番号５１、５９、１２５、もしくは１３３に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＣＤＲ３は、配列番号５２、６０、１２６、もしくは１３４に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、
Ｄは、細胞傷害剤であり、
Ｌは、抗クローディン１８．２抗体と細胞傷害剤とを結合するためのリンカーであり、
ｐは２．０～８．０である（たとえば、２．０～７．０、２．０～６．０、２．０～５．０、２．０～４．０、３．０～７．０、３．０～６．０、３．０～５．０、もしくは３．０～４．０、または、たとえば、３．０、４．０、５．０、６．０、もしくは７．０）。

本発明に係る抗体薬物複合体は、ｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて腫瘍細胞増殖阻害活性が良好であり、適用の見込みが良好である。本発明に係る抗体薬物複合体は、抗クローディン１８．２抗体とドラスタチン誘導体ＭＭＡＥとをＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢリンカーを介して結合することによって形成され、その抗腫瘍作用機序は以下のとおりである。抗体薬物複合体は、腫瘍細胞の表面においてクローディン１８．２に結合した後、エンドサイトーシスによって腫瘍細胞中に入ってリソソームへと輸送され、次いでリソソーム中でプロテアーゼにより分解されて、ＭＭＡＥを放出する。ＭＭＡＥは、細胞質中に入った後、チューブリンに結合してその重合を阻害し、これによって、チューブリンが関与する有糸分裂を含む細胞の様々な生理学的機能を遮断して、その結果、腫瘍細胞の増殖を阻害し、腫瘍細胞の死を導く。

注目すべきことに、「抗体薬物複合体」は、同じまたは異なるＤＡＲ値を有するＡＤＣ分子を含有する組成物である。具体的には、本発明は、複数のＡＤＣ分子を備える組成物を提供する。特定の場合において、これら複数のＡＤＣは、組成物中において、各々、同じ数の薬物分子を備える。その他の場合において、これら複数のＡＤＣは、組成物中において、各々、異なる数の薬物分子を備える。

上述される薬物抗体比（ＤＡＲ）は、抗体に結合している薬物分子の数（たとえば、式Ｉ中のｐ）を指す。本発明に係る抗体薬物複合体中に含有される薬物分子の数（たとえば、式Ｉ中のｐ）は、通常、整数である。本発明に係る抗体薬物複合体中に含有される薬物分子の数（たとえば、式Ｉ中のｐ）が小数である場合には、これは、複数のＡＤＣ分子を備える組成物中において抗体１つあたりに結合している薬物分子の平均数を指す。

上述される薬物抗体比（ＤＡＲ）は、質量分析、ＥＬＩＳＡアッセイ、ＨＩＣ、およびＨＰＬＣなどの従来の手段によって検証できる。また、ｐに関して、ＡＤＣの量的分布を求めることもできる。いくつかの場合において、他の薬物を積載しているＡＤＣからの特定の値がｐであるような均質なＡＤＣは、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動などの手段によって分離、精製、および実証することができる。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の可変領域ＣＤＲ１は、配列番号２、１０、１８、２６、３４、もしくは４２に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、重鎖の可変領域ＣＤＲ２は、配列番号３、１１、１９、２７、３５、もしくは４３に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、重鎖の可変領域ＣＤＲ３は、配列番号４、１２、２０、２８、３６、もしくは４４に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＣＤＲ１は、配列番号５０もしくは５８に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＣＤＲ２は、配列番号５１もしくは５９に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＣＤＲ３は、配列番号５２もしくは６０に示される配列から選択される配列またはその変異体を備える。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の可変領域ＣＤＲ１は、配列番号６８、７６、８４、９２、１００、１０８、もしくは１１６に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、重鎖の可変領域ＣＤＲ２は、配列番号６９、７７、８５、９３、１０１、１０９、もしくは１１７に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、重鎖の可変領域ＣＤＲ３は、配列番号７０、７８、８６、９４、１０２、１１０、もしくは１１８に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＣＤＲ１は、配列番号１２４もしくは１３２に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＣＤＲ２は、配列番号１２５もしくは１３３に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＣＤＲ３は、配列番号１２６もしくは１３４に示される配列から選択される配列またはその変異体を備える。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号２、配列番号３、配列番号４、
（２）配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、
（３）配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、
（４）配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、
（５）配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、
（６）配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、
（７）配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、
（８）配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、
（９）配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、
（１０）配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、
（１１）配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、
（１２）配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、
（１３）配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８から選択され、
抗クローディン１８．２抗体の軽鎖の可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、
（２）配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、
（３）配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、
（４）配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４から選択される。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号２、配列番号３、配列番号４、
（２）配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、
（３）配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、
（４）配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、
（５）配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、
（６）配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４から選択され、
抗クローディン１８．２抗体の軽鎖の可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、
（２）配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０から選択される。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、
（２）配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、
（９）配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、
（４）配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、
（５）配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、
（６）配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、
（７）配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８から選択され、
抗クローディン１８．２抗体の軽鎖の可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、
（２）配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４から選択される。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の可変領域ＦＲ１は、配列番号５、１３、２１、２９、３７、４５、７１、７９、８７、９５、１０３、１１１、もしくは１１９に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、重鎖の可変領域ＦＲ２は、配列番号６、１４、２２、３０、３８、４６、７２、８０、８８、９６、１０４、１１２、もしくは１２０に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、重鎖の可変領域ＦＲ３は、配列番号７、１５、２３、３１、３９、４７、７３、８１、８９、９７、１０５、１１３、もしくは１２１に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、重鎖の可変領域ＦＲ４は、配列番号８、１６、２４、３２、４０、４８、７４、８２、９０、９８、１０６、１１４、もしくは１２２に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＦＲ１は、配列番号５３、６１、１２７、もしくは１３５に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＦＲ２は、配列番号５４、６２、１２８、もしくは１３６に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＦＲ３は、配列番号５５、６３、１２９、もしくは１３７に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＦＲ４は、配列番号５６、６４、１３０、もしくは１３８に示される配列から選択される配列またはその変異体を備える。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の可変領域ＦＲ１は、配列番号５、１３、２１、２９、３７、もしくは４５に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、重鎖の可変領域ＦＲ２は、配列番号６、１４、２２、３０、３８、もしくは４６に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、重鎖の可変領域ＦＲ３は、配列番号７、１５、２３、３１、３９、もしくは４７に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、重鎖の可変領域ＦＲ４は、配列番号８、１６、２４、３２、４０、もしくは４８に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＦＲ１は、配列番号５３もしくは６１に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＦＲ２は、配列番号５４もしくは６２に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＦＲ３は、配列番号５５もしくは６３に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＦＲ４は、配列番号５６もしくは６４に示される配列から選択される配列またはその変異体を備える。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の可変領域ＦＲ１は、配列番号７１、７９、８７、９５、１０３、１１１、もしくは１１９に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、重鎖の可変領域ＦＲ２は、配列番号７２、８０、８８、９６、１０４、１１２、もしくは１２０に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、重鎖の可変領域ＦＲ３は、配列番号７３、８１、８９、９７、１０５、１１３、もしくは１２１に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、重鎖の可変領域ＦＲ４は、配列番号７４、８２、９０、９８、１０６、１１４、もしくは１２２に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＦＲ１は、配列番号１２７もしくは１３５から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＦＲ２は、配列番号１２８もしくは１３６から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＦＲ３は、配列番号１２９もしくは１３７から選択される配列またはその変異体を備え、軽鎖の可変領域ＦＲ４は、配列番号１３０もしくは１３８から選択される配列またはその変異体を備える。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の可変領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、
（２）配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、
（３）配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、
（４）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、
（５）配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、
（６）配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、
（７）配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、
（８）配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、
（９）配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、
（１０）配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、
（１１）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、
（１２）配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、
（１３）配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２から選択され、
抗クローディン１８．２抗体の軽鎖の可変領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、
（２）配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、
（３）配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、
（４）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８から選択される。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の可変領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、
（２）配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、
（３）配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、
（４）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、
（５）配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、
（６）配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８から選択され、
抗クローディン１８．２抗体の軽鎖の可変領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、
（２）配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４から選択される。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の可変領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、
（２）配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、
（３）配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、
（４）配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、
（５）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、
（６）配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、
（７）配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２から選択され、
抗クローディン１８．２抗体の軽鎖の可変領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、
（２）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８から選択される。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の可変領域は、配列番号１、９、１７、２５、３３、４１、６７、７５、８３、９１、９９、１０７、または１１５に示される配列から選択され、
抗クローディン１８．２抗体の軽鎖の可変領域は、配列番号４９、５７、１２３、または１３１に示される配列から選択される。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の可変領域は、配列番号１、９、１７、２５、３３、または４１に示される配列から選択され、
抗クローディン１８．２抗体の軽鎖の可変領域は、配列番号４９または５７に示される配列から選択される。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の可変領域は、配列番号６７、７５、８３、９１、９９、１０７、または１１５に示される配列から選択され、
抗クローディン１８．２抗体の軽鎖の可変領域は、配列番号１２３または１３１に示される配列から選択される。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の可変領域および軽鎖の可変領域は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号１７および配列番号５７、
（２）配列番号４１および配列番号４９、
（３）配列番号４１および配列番号５７、
（４）配列番号１１５および配列番号１３１から選択される。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の可変領域および軽鎖の可変領域の配列は、それぞれ配列番号４１および配列番号４９である。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖の定常領域は、ヒトのＩｇＧ（たとえば、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＡの定常領域、または当該定常領域の変異体から選択され、好ましくはヒトＩｇＧ１であり、
抗クローディン１８．２抗体の軽鎖の定常領域は、ヒトのラムダ定常領域、カッパ定常領域、または当該定常領域の変異体から選択され、好ましくはヒトのカッパ定常領域である。

いくつかの実施形態において、抗クローディン１８．２抗体の重鎖のアミノ酸配列は、配列番号６５に記載される配列、または配列番号６５との同一性が７０％よりも大きい、たとえば７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％よりも大きい配列を備え、
抗クローディン１８．２抗体の軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号６６に示される配列、または配列番号６６との同一性が７０％よりも大きい、たとえば７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％よりも大きい配列を備える。

いくつかの実施形態において、ｐは３．０～４．０である。
いくつかの実施形態において、ｐは３．０～３．８である。

いくつかの実施形態において、ｐは３．０、３．４、３．５、または３．８である。
いくつかの実施形態において、ｐは３．８である。

いくつかの実施形態において、細胞傷害剤は、ＳＮ－３８、ゲムシタビン、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、メイタンシノイド（たとえば、メイタンシンＤＭ１、メイタンシンＤＭ４）、カリケアマイシン、ＭＧＢＡ（たとえば、デュオカルマイシン）、ドキソルビシン、リシン、ジフテリア毒素およびその他の毒素、Ｉ１３１、インターロイキン、腫瘍壊死因子、ケモカイン、およびナノ粒子からなる群より選択される。

いくつかの実施形態において、細胞傷害剤はＭＭＡＥである。
ＭＭＡＥの構造は以下である。

いくつかの実施形態において、リンカーは、６－マレイミドヘキサノイル（ＭＣ）、マレイミドプロピオニル（ＭＰ）、Ｎ－スクシンイミジル ４－（２－ピリジルチオ）バレレート（ＳＰＰ）、４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－ホルミル（ＭＣＣ）、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨード－アセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、および６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）からなる群より選択される。

いくつかの実施形態において、リンカーは、６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）である。

いくつかの実施形態において、式Ｉ中に記載されるＬ－ＤはＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥであり、その構造は下記式中に示される。

いくつかの実施形態において、
Ａｂは、
（ａ）重鎖の可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３および軽鎖の可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３であって、ここで、重鎖の可変領域ＣＤＲ１の配列は配列番号４２に示され、重鎖の可変領域ＣＤＲ２の配列は配列番号４３に示され、重鎖の可変領域ＣＤＲ３の配列は配列番号４４に示され、軽鎖の可変領域ＣＤＲ１の配列は配列番号５０に示され、軽鎖の可変領域ＣＤＲ２の配列は配列番号５１に示され、軽鎖の可変領域ＣＤＲ３の配列は配列番号５２に示される、もの、
（ｂ）重鎖可変領域および軽鎖可変領域であって、ここで、重鎖可変領域の配列は配列番号４１に示され、軽鎖可変領域の配列は配列番号４９に示される、もの、ならびに／または
（ｃ）重鎖および軽鎖であって、ここで、重鎖の配列は配列番号６５に示され、軽鎖の配列は配列番号６６に示される、ものを含み、
ＬはＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢであり、
ＤはＭＭＡＥである。

本発明の第２の態様において、本発明は、上述される抗体薬物複合体、医薬的に許容される塩、溶媒和物、または当該塩の溶媒和物を備える組成物を提供する。

いくつかの実施形態において、組成物は、さらに、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、シクロホスファミド、タキサン［パクリタキセル（タキソール）、ドセタキセル（タキソテール）など］、カペシタビン（ゼローダ）、ゲムシタビン（ジェムザール）、ビノレルビン（ナベルビン）、タモキシフェン、アロマターゼ阻害薬（アリミデックス、ファーロング（Ｆｕｒｌｏｎｇ）、アーノルドニュー（Ａｒｎｏｌｄ Ｎｅｗ））、５－ＦＵ＋ロイコボリン、イリノテカン（カンプトサー（ｃａｍｐｔｏｓａｒ））、オキサリプラチン、シスプラチン、カルボプラチン、エストラムスチン、ミトキサントロン（ノバントロン）、プレドニゾン、ビンクリスチン（オンコビン）、ドキソルビシン、プレドニゾンなど、またはこれらの組み合わせなどの、腫瘍の処置で知られる化学療法薬物を備える。

いくつかの実施形態において、組成物は、さらに、たとえば、ＰＤ－１モノクローナル抗体（ペムブロリズマブ、ニボルマブなど）、ＰＤ－Ｌ１モノクローナル抗体（アテゾリズマブなど）、ＴＩＧＩＴモノクローナル抗体、４－１ＢＢモノクローナル抗体、ＶＥＧＦＲ２モノクローナル抗体（ラムシルマブ、アパチニブなど）、ＨＥＲ２モノクローナル抗体（トラスツズマブ、トラスツズマブバイオシミラー、トラスツズマブ－ｄｋｓｔなど）など、またはこれらの組み合わせなどの、腫瘍の処置で知られる免疫療法薬物を備える。

いくつかの実施形態において、組成物は、さらに、以下から選択される免疫抑制剤を備える：（１）コルチゾンおよびプレドニゾンなどのグルココルチコイド、（２）シクロスポリンおよびタクロリムスなどの微生物代謝産物、（３）アザチオプリンおよび６－メルカプトプリンなどの代謝拮抗剤、（４）抗リンパ球グロブリンおよびＯＫＴ３などのポリクローナルおよびモノクローナル抗リンパ球抗体、（５）シクロホスファミドなどのアルキル化剤。具体的には、免疫抑制剤は、たとえば、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、アザチオプリン、プログラフ、ゼニプラ（ｘｅｎｉｐｒａ）、スーレ（ｓｕｌｅ）、シクロスポリン、タクロリムス、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、ミゾリビン、シクロホスファミド、フィンゴリモドなどである。

いくつかの実施形態において、組成物は、さらに、医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤を備える。

本発明の第３の態様において、本発明は、上述される抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または当該塩の溶媒和物、または上述される組成物の、医薬品の調製における使用を提供し、当該医薬品は、クローディン１８．２に関連する疾患の予防および／または処置に使用される。

いくつかの実施形態において、クローディン１８．２に関連する疾患は、胃がん、食道胃接合部の腺癌、膵臓がんである。

いくつかの実施形態において、クローディン１８．２に関連する疾患は、胃がんである。

本発明の第４の態様において、本発明は、クローディン１８．２に関連する疾患を予防および／または処置するための方法であって、上述される抗体薬物複合体化合物、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または当該塩の溶媒和物、または上述される組成物の、予防的および／または治療的有効量を、それを必要とする対象に投与する工程を備える、方法を提供する。

いくつかの実施形態において、クローディン１８．２に関連する疾患は、胃がん、食道胃接合部の腺癌、膵臓がんである。

いくつかの実施形態において、クローディン１８．２に関連する疾患は、胃がんである。

本発明の第５の態様において、本発明は、クローディン１８．２に関連する疾患を予防および／または処置するために使用される、上述される抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または当該塩の溶媒和物、または上述される組成物を提供する。

いくつかの実施形態において、クローディン１８．２に関連する疾患は、胃がん、食道胃接合部の腺癌、膵臓がんである。

いくつかの実施形態において、クローディン１８．２に関連する疾患は、胃がんである。

本発明の実施例のＲＴ－ＰＣＲを示すものであり、安定的にトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞株がクローディン１８．１およびクローディン１８．２をそれぞれ発現し、クローディン１８．２を発現する安定的にトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞株とコントロールＫＡＴＯ ＩＩＩ細胞との両方が、クローディン１８．２に特有の７８０ｂｐの特徴的なバンドを増幅でき、クローディン１８．１を発現するＨＥＫ２９３は５０４ｂｐの共通のフラグメントのみを増幅できることを示している。 本発明の実施例において、クローディン１８．２を高レベルで発現する安定的にトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞株をＦＡＣＳによりスクリーニングした結果であり、黒色の点はネガティブコントロール、灰色の点はクローディン１８．２を高レベルで発現する安定的にトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞株である。 本発明の実施例において、クローディン１８．２を高レベルで発現する安定的にトランスフェクションしたＮＩＨ３Ｔ３細胞株をＦＡＣＳによってスクリーニングした結果であり、黒色の線はネガティブコントロール、灰色の陰影はクローディン１８．２を発現する安定的にトランスフェクションした３Ｔ３細胞株、ＮＯ．３２－Ｈはクローディン１８．２を高レベルで発現する安定的にトランスフェクションした３Ｔ３細胞株、ＮＯ．１８－Ｍはクローディン１８．２を中レベルで発現する安定的にトランスフェクションした３Ｔ３細胞株、ＮＯ．６－Ｌはクローディン１８．２を低レベルで発現する安定的にトランスフェクションした３Ｔ３細胞株である。 本発明の実施例に係る抗クローディン１８．２抗体のＡＤＣＣ作用についての結果を示すグラフである。 本発明の実施例に係る抗クローディン１８．２抗体のＣＤＣ作用についての結果を示すグラフである。 本発明の実施例に係る抗体薬物複合体の疎水性相互作用クロマトグラム（ＨＩＣ）である。 本発明の実施例に係る異なるＣＭ３１１ ＡＤＣによるＬＴ－Ｍ１１細胞株に対する細胞死滅作用についての結果を示すグラフである。 本発明の実施例に係るＣＭ３１１－ＡＤＣ－１およびコントロールＣＭ３１１－ＡＤＣ－２による、ヒト胃がんヌードマウスＰＤＸモデルＳＴＯ＃０２５の腫瘍増殖に対する阻害活性についての結果を示すグラフである 本発明の実施例に係るＣＭ３１１－ＡＤＣ－１およびコントロールＣＭ３１１－ＡＤＣ－２による、ヒト胃がんヌードマウスＳＴＯ＃０２５のＰＤＸモデルの動物の体重に及ぼす作用を示すグラフである。 本発明の実施例に係るＣＭ３１１－ＡＤＣ－１およびコントロールＣＭ３１１－ＡＤＣ－２による、ヒト胃がんヌードマウスＰＤＸモデルＳＴＯ＃５２３の腫瘍増殖に対する阻害活性についての結果を示すグラフである。 本発明の実施例に係るＣＭ３１１－ＡＤＣ－１およびコントロールＣＭ３１１－ＡＤＣ－２による、ヒト胃がんヌードマウスＳＴＯ＃５２３のＰＤＸモデルの動物の体重に及ぼす作用を示すグラフである。 本発明の実施例に係る抗体薬物複合体と抗体とのｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞活性を比較した結果を示すグラフである（ＱＣ対数変換独立フィッティンググラフ）。

具体的な実施形態
本発明の実施形態が、下記の実施例を参照して、詳細に記載され、当業者には、下記の実施例が本発明を例証することを意図したものであり、本発明の範囲を限定するものではないことが理解される。実施例中に具体的な条件が示されていない場合には、従来の条件、または製造元によって示唆される条件に従って行なわれる。使用される試薬または機器は、製造元が明示されていない場合、市場から入手できる従来の製品である。

本発明において、特記しない限り、本明細書中において使用される科学技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有する。また、本明細書中において使用されるタンパク質および核酸化学、分子生物学、細胞および組織培養、微生物学、免疫学に関する用語、ならびに実験手順は、対応する分野において広く使用される用語および慣例的手順である。一方、本発明をよりよく理解するために、関連用語の定義および説明が以下に提供される。

クローディンタンパク質は、タイトジャンクション構造を構成する骨格タンパク質である。隣接し合う細胞間の間隙の上側に位置する。その分布は、組織および臓器に特異的である。その主要な機能は、細胞間接着、細胞極性の維持、傍細胞透過性の調節、ならびに細胞増殖および分化の調節への参加である。腫瘍においては、細胞間のタイトジャンクションが破壊され、クローディンはその正常な機能を発揮することができない。

クローディン１８はクローディンファミリーのメンバーであり、２つの異なる第１エクソンを有し、よって、選択的スプライシングにより、クローディン１８．１およびクローディン１８．２という２つのアイソフォームが生じ得る。これら２つのアイソフォームは、それぞれ異なる組織中において転写および増幅され、そのうちクローディン１８．１は主として肺組織において発現し、クローディン１８．２は胃組織において特異的に発現する。クローディン１８．２（ＧｅｎＢａｎｋ受入番号：ＮＭ＿００１００２０２６．３）は、胃粘膜を除く他の正常組織においては発現しないが、胃腸腺腫の８０％、膵臓腫瘍の６０％、ならびに胆管、卵巣、および肺の何らかの腫瘍を含めた様々な腫瘍において、大幅に上方制御される。

「クローディン１８．２に関連する疾患（またはクローディン１８．２関連疾患）」という用語は、組織細胞中におけるクローディン１８．２の発現が正常レベルとは異なっている（たとえば、これを上回っている）疾患を指す。たとえば、ある特定の組織細胞中におけるクローディン１８．２の発現レベルが参照またはコントロール（すなわち、正常組織細胞）中のクローディン１８．２の発現レベルよりも高い場合、これは、当該組織細胞の採取元である対象（特にヒト）においてクローディン１８．２関連疾患が存在していることを示す。

本発明において、特記しない限り、任意の数値範囲は、当該範囲内に含まれる任意の値または任意の副次的範囲を含むと理解されるべきである。

本発明において、「抗体」という用語は、一般的に同一の２対のポリペプチド鎖から構成される免疫グロブリン分子を指し、各対は、１本の「軽」（Ｌ）鎖と１本の「重」（Ｈ）鎖とを有する。抗体の軽鎖は、カッパおよびラムダという２つのカテゴリに分けることができる。重鎖はμ、δ、γ、α、またはεという５つの型に分けることができ、抗体は重鎖の違いによってＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、およびＩｇＥという５つの型に分けることができる。軽鎖および重鎖の中においては、可変領域と定常領域とが、約１２個またはそれ以上のアミノ酸からなる「Ｊ」領域によって結合しており、重鎖は、約３個またはそれ以上のアミノ酸からなる「Ｄ」領域をも含有する。各重鎖は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）と重鎖定常領域（Ｃ_Ｈ）とから構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン（Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、およびＣ_Ｈ３）からなる。各軽鎖は、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）と軽鎖定常領域（Ｃ_Ｌ）とから構成される。軽鎖定常領域は１つのドメインＣ_Ｌからなる。抗体の定常領域は、免疫グロブリンと、免疫系の様々な細胞（たとえばエフェクター細胞）および補体系の成分Ｃ１ｑを含む宿主組織または因子との結合に介在し得る。Ｖ_Ｈ領域およびＶ_Ｌ領域は、可変性がより高い複数の相補性決定領域（ＣＤＲ）とよばれる領域に分割され得て、これらの間には、フレームワーク領域（ＦＲ）とよばれるより高度に保存された領域が挿入されている。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌはそれぞれ、３つのＣＤＲと４つのＦＲとからなり、これらは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かってＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４という順序で並んでいる。重鎖－軽鎖の各対それぞれの可変領域（Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ）は、抗体結合部位を形成する。それぞれの領域または構造ドメインへのアミノ酸の割り当ては、ＫａｂａｔのＳｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７ ａｎｄ １９９１）），またはＣｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３に従う。

本発明において、配列同一性（相同性）および配列類似率を判定するためのアルゴリズムは、たとえば、ＢＬＡＳＴアルゴリズムおよびＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムであり、これらはそれぞれ以下に記載される：Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９７７）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２、およびＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０。ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０を使用して、たとえば文献中に記載されるものまたはデフォルトパラメータを使用することにより、本発明に係るアミノ酸配列の同一性の割合を求めることができる。ＢＬＡＳＴ分析を行なうためのソフトウェアが、国立生物工学情報センター（ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）から公開されている。

本発明において、あるアミノ酸配列との配列同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列は、同アミノ酸配列と実質的に同一のポリペプチド配列を含み、たとえば、本明細書中において記載される方法（たとえば、標準的なパラメータを使用するＢＬＡＳＴ分析）を使用した場合に、本発明に係るポリペプチド配列との配列同一性が少なくとも７０％、好ましくはこの配列同一性が少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上であるものを含む。

本発明において、アミノ酸配列の変異体とは、そのアミノ酸配列との同一性が７０％を超える、たとえば７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％を超えるもの、たとえばアミノ酸３つ、２つ、または１つが置換、欠失、または付加された配列を指す。好ましくは、３つを超えないアミノ酸が置換、付加、または欠失されている。より好ましくは、２つを超えないアミノ酸が置換、付加、または欠失されている。最も好ましくは、１つを超えないアミノ酸が置換、付加、または欠失されている。

「置換」バリアントは、天然配列中の少なくとも１つのアミノ酸残基が欠失していて、その同じ位置に異なるアミノ酸が挿入されているものである。この置換は、１つであってもよく、この場合には分子内においてアミノ酸が１つだけ置換されており、または、複数であってもよく、この場合には同じ分子内において２つ以上のアミノ酸が置換されている。複数の置換は、連続する部位においてなされていてもよい。同様に、１つのアミノ酸が複数の残基によって置換されていてもよく、この場合には、このバリアントは置換と挿入の両方を含む。「挿入」（または「付加」）バリアントは、天然配列のすぐ隣の特定の位置に１つまたはそれ以上のアミノ酸が挿入されているものである。アミノ酸のすぐ隣とは、そのアミノ酸のアルファ－カルボキシル官能基またはアルファ－アミノ官能基への付加を意味する。「欠失」バリアントは、天然アミノ酸配列中の１つまたはそれ以上のアミノ酸が失われているものである。典型的には、欠失バリアントは、その分子の特定の領域において１つまたは２つのアミノ酸が欠失している。

特定の実施形態において、複合体形成反応においては、理論上の最大限よりも少ない薬物部位が抗体に結合している。一般的に、抗体は、薬物部位と結合できる遊離性かつ反応性のシステインチオール基を多くは含有せず、実際には、抗体中のほとんどのシステインチオール基はジスルフィド架橋として存在する。特定の実施形態において、抗体は、部分的または完全還元条件下において、ジチオトレイトール（ＤＴＴ）またはトリス（２－カルボキシエチル）ホスフィン（ＴＣＥＰ）などの還元剤で還元されて、反応性のシステインチオール基を発生し得る。

いくつかの実施形態において、医薬的に許容される塩は無機酸塩または有機酸塩であり、無機酸塩は、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、重炭酸塩、炭酸塩、硫酸塩、またはリン酸塩であり、有機酸塩は、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、α－ケトグルタル酸塩、α－グリセロリン酸塩、アルキルスルホン酸塩、またはアリールスルホン酸塩であり、好ましくは、アルキルスルホン酸塩はメタンスルホン酸塩またはエタンスルホン酸塩であり、アリールスルホン酸塩はベンゼンスルホン酸塩またはｐ－トルエンスルホン酸塩である。

医薬的に許容される塩は、当該分野において周知される標準的な手順を使用して、たとえば、十分量の塩基性化合物と、医薬的に許容されるアニオンを提供する適切な酸とを反応させることによって、得ることができる。

本明細書中において使用される場合、特記しない限り、「プロドラッグ」という用語は、生物学的条件下において加水分解、酸化、またはそうでない場合には反応し得て（ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおいて）、本発明に係る化合物を提供することのできる、誘導体を指す。プロドラッグは、生物学的条件下においてこの反応を経た場合にのみ活性化合物となり、その未反応形態では非活性である。プロドラッグは、一般的に、Ｂｕｒｇｅｒ’ｓ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（１９９５）１７２－１７８，９４９－９８２（Ｍａｎｆｒｅｄ Ｅ．Ｗｏｌｆｆ，ｅｄ．，５ｔｈ ｅｄ．）中に記載されるものなどの周知の方法を使用して調製することができる。

本発明において、溶媒和物とは、本発明に係る抗体薬物複合体の以下の形態を指す：当該抗体薬物複合体と溶媒分子との配位によって形成される固体状または液状の複合体。水和物は、配位した水分子を有する、溶媒和物の特定の形態である。本発明において、好ましい溶媒和物は水和物である。

ある量の活性成分を含有する様々な医薬組成物を調製する方法が、当業者に知られている、または本開示に照らして明らかとなり得る。ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’Ｓ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬ ＳＣＩＥＮＣＥＳ（Ｍａｒｔｉｎ，Ｅ．Ｗ．，ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，１９ｔｈ ｅｄ．（１９９５））中に記載されるとおり、このような医薬組成物を調製する方法は、使用用量および濃度で曝露した場合に細胞または哺乳動物に対して毒性とならない好適な医薬賦形剤、担体、希釈剤などを配合する工程を含む。

本発明に係る医薬組成物はｐＨ緩衝水溶液を備えてよく、代替的には、以下のものを備えてよい：リン酸塩、クエン酸塩、およびその他の有機酸などのバッファー；アスコルビン酸を含む酸化防止剤；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、もしくはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、スクロース、トレハロース、もしくはデキストリンを含む、単糖、二糖、およびその他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの、塩を形成する対イオン；ならびに／またはＴＷＥＮ（商標）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、およびＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）などのノニオン性界面活性剤。

本発明に係る医薬製剤は、従来の混合法、溶解法、または凍結乾燥法を含む周知の方法によって製造される。本発明に係る化合物は、医薬組成物の形態で調製して、選択された投与様式にとって好適な様々な経路で、たとえば経口的にまたは非経口的に（静脈内、筋肉内、局所、または皮下経路で）、患者に投与することができる。

よって、本発明に係る化合物と医薬的に許容される担体（たとえば、不活性希釈剤または同化型可食担体）との組み合わせを、全身に、たとえば経口的に、投与することができる。これらは、ハードシェルまたはソフトシェルのゼラチンカプセル剤中に封入することができ、これを圧縮して錠剤にすることができる。経口治療投与のために、活性化合物を、１種またはそれ以上の賦形剤と共に配合して、飲み込み可能な錠剤、バッカル錠、ロゼンジ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁液剤、シロップ剤、およびオブラートなどの形態とすることができる。このような組成物および調製物は、活性化合物を少なくとも０．１％含有するべきである。このような組成物および製剤の割合が変わり得ることは言うまでもなく、所与の単位剤形の約１％～約９９重量％の範囲であってよい。このような治療的に有用な組成物において、活性化合物は、有効な投薬レベルを得ることができるような量である。

錠剤、トローチ剤、丸剤、カプセル剤などは、以下のものも含有してよい：トラガカントガム、アラビアゴム、コーンスターチ、もしくはゼラチンなどのバインダ；リン酸水素二カルシウムなどの賦形剤；コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの滑剤；およびスクロース、フルクトース、ラクトース、もしくはアスパルテームなどの甘味料；またはペパーミント、ウィンターグリーン油、もしくはチェリーフレーバーなどの着香料。単位剤形がカプセル剤である場合には、上述される種類の材料に加えて、植物油またはポリエチレングリコールなどの液体担体を含有し得る。様々なその他の材料が存在してもよく、これはコーティングとしてでもよいし、そうでない場合には固体の単位剤形の物理的形態を変化させてもよい。たとえば、錠剤、丸剤、またはカプセル剤がゼラチン、ワックス、セラック、および／または糖などで被覆されていてもよい。シロップ剤またはエリキシル剤は、活性化合物、甘味料としてのスクロースまたはフルクトース、防腐剤としてのメチルパラベンまたはプロピルパラベン、色素、および着香料（チェリーフレーバーまたはオレンジフレーバーなど）を含有していてもよい。言うまでもなく、任意の単位剤形の調製において使用される任意の材料は、医薬的に許容されるものであるべきであり、使用される量において実質的に非毒性であるべきである。さらに、活性化合物を、徐放製剤および徐放デバイス中に配合してもよい。

また、活性化合物は、輸液または注射によって静脈内または腹腔内に投与されてもよい。任意に非毒性の界面活性剤と混合することによって、活性化合物またはその塩の水溶液を調製してもよい。また、グリセリン、液体ポリエチレングリコール、トリアセチン、およびこれらの混合物中、および油中に分散させた分散液を調製してもよい。通常の保存および使用条件下においては、これらの調製物は、微生物の増殖を防止するために防腐剤を含有する。

注射または輸液を行なうのに好適な医薬剤形は、無菌でありかつ注射可能または輸液可能である溶液または分散液中にて即時調製するのに好適な活性成分（任意に、リポソーム中に封入されたもの）を含有する、無菌の水溶液もしくは分散液または無菌の粉末を含んでよい。すべての場合において、最終的な剤形は、製造および保存条件下において無菌、液状、かつ安定でなければならない。液体担体は、たとえば水、エタノール、多価アルコール（たとえば、グリセリン、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、植物油、非毒性グリセリド、およびこれらの好適な混合物を含有する、溶媒または液状分散媒であってよい。たとえば、リポソームを形成させることによって、分散液の場合には望ましい粒子径を維持することによって、または界面活性剤を使用することによって、妥当な流動性を維持することができる。微生物の防止は、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、およびチメロサールなどの様々な抗菌剤および抗真菌剤によって可能である。多くの場合には、糖、バッファー、または塩化ナトリウムなどの等張剤を含むことが好ましい。たとえばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの、吸収を遅延させる剤を使用することによって、注射可能な組成物を長期間にわたって吸収させることができる。

無菌注射液は、必要量の活性化合物を、必要であれば上述される様々なその他の成分と共に、適切な溶媒中に配合し、続いてろ過して無菌化することによって調製される。無菌注射液を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製方法は真空乾燥技術および凍結乾燥技術であり、これらによって、元々は無菌ろ過溶液中に存在していた活性成分と、任意のさらなる必要成分との粉末が得られる。

有用な固体担体は、粉砕固体（たとえば、タルク、クレイ、微結晶セルロース、シリカ、およびアルミナなど）を含む。有用な液体担体は、本発明に係る化合物を、任意に非毒性界面活性剤を使って、有効なレベルで溶解または分散させることができる、水、エタノールまたはエチレングリコール、または水－エタノール／エチレングリコール混合物を含む。佐剤（たとえば、香料）およびさらなる抗菌剤を添加することによって、所与の用途のための特性を最適化することができる。

また、増粘剤（合成ポリマー、脂肪酸、脂肪酸の塩およびエステル、脂肪族アルコール、変性セルロース、または変性無機物など）を液体担体と共に使用することによって、使用者の皮膚上に直接使用可能な伸ばして使用できるペースト、ゲル剤、軟こう剤、石鹸などを形成することもできる。

上述される製剤は、単位剤形（ヒトおよびその他の哺乳動物の身体への投与に好適な単一剤形を含有する、物理的に分離されている単位）とされてもよい。単位剤形は、１つのカプセル剤もしくは錠剤、または複数のカプセル剤もしくは錠剤であってよい。関与する特定の処置に依存して、単位用量中における活性成分の量は変えてよい、または約０．１～約１０００ｍｇもしくはそれ以上に調整してもよい。

さらに、ラクトリポソーム（ｌａｃｔｏ－ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）、微小球、およびナノ球体などの様々な新しい薬物剤形の適用も含まれており、これらはたとえば、ポリマーミセル、ナノエマルション、サブマイクロエマルション（ｓｕｂｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓ）、マイクロカプセル、微小球、リポソーム、およびニオソーム（ノニオン性界面活性剤ベシクルとしても知られる）を含む微粒子分散系の使用などである。

本明細書中において使用される場合、「処置する」という用語は、一般的に、所望される薬理学的および／または生理学的作用を得ることを指す。作用は、疾患もしくはその症状の完全もしくは部分的な予防の観点において、予防的なものであってもよいし、および／または、疾患および／もしくは疾患による副作用の部分的もしくは全面的な安定化もしくは治癒の観点において、治療的なものであってもよい。本明細書中において使用される場合、「処置」は、（ａ）疾患もしくは状態に罹患し易いがまだ診断されてはいない患者における疾患もしくは症状の予防、（ｂ）疾患の症状の抑制、すなわちその発生の予防、または（ｃ）疾患の症状の緩和、すなわち疾患もしくは症状の退縮を含む、患者における疾患に対する任意の処置を包含する。

本発明において、「対象」は脊椎動物を指す。特定の実施形態において、脊椎動物は哺乳動物を指す。哺乳動物は、家畜（ウシなど）、ペット（ネコ、イヌ、およびウマなど）、霊長類、マウス、およびラットを含むが、これらに限定されない。特定の実施形態において、哺乳動物はヒトを指す。

本発明において、「有効量」は、所望される治療的または予防的作用を必要用量および回数にて達成するのに有効な量を指す。本発明に係る物質／分子の「治療的有効量」は、その個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、ならびにその個体において所望される反応を誘発できる物質／分子の能力などといった要因に依存して変動し得る。また、治療的有効量は、物質／分子の任意の毒性または有害な結果よりも治療上有益な作用の方が重要であるような量をも包含する。「予防的有効量」は、所望される予防的作用を必要用量および回数にて達成するのに有効な量を指す。必ずしも常にというわけではないが、通常は、予防的有効量は治療的有効量よりも少ない、というのは、予防的用量は疾患が発症するよりも前に、または疾患の初期段階において対象に投与されるためである。がんの場合、治療的有効量の薬物は、がん細胞の数を減らす、腫瘍の大きさを小さくする、がん細胞の周囲臓器への浸潤を阻害する（すなわち、いくらか遅らせる、好ましくは停止させる）、腫瘍の転移を阻害する（すなわち、いくらか遅らせる、好ましくは停止させる）、腫瘍の増殖をいくらか阻害する、および／またはがんに関連する１つもしくは複数の症状をいくらか緩和する。

本発明において、２０種類の従来のアミノ酸およびそれらの省略形は、従来の用法に従う。Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ－Ａ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｓ．Ｇｏｌｕｂ ａｎｄ Ｄ．Ｒ．Ｇｒｅｎ，Ｅｄｓ．，Ｓｉｎａｕｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．（１９９１））（引用により本明細書に援用）を参照。

「キメラ抗体」という用語は、可変領域の配列が１つの種に由来し定常領域の配列が別の種に由来する抗体を指し、たとえば、可変領域の配列がマウス抗体に由来し定常領域の配列がヒト抗体に由来する抗体などが挙げられる。

「ヒト化」抗体は、抗体の非ヒト（たとえばマウス）形態を指すものであり、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有するキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、もしくはそのフラグメント（たとえば、抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、またはその他の抗原結合サブ配列）である。好ましくは、ヒト化抗体は、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）であって、レシピエント抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基が、所望される特異性、親和性、および能力を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ残基での置換に由来するものである。

さらに、ヒト化においては、ＶＨおよび／またはＶＬのＣＤＲ１、ＣＤＲ２、および／またはＣＤＲ３領域内におけるアミノ酸残基が変異していてもよく、これによって、抗体の１つまたはそれ以上の結合特性（たとえば親和性）が改善され得る。たとえば、ＰＣＲ介在性の変異誘発を行なうことによって変異を導入し、抗体結合またはその他の機能特性に及ぼすその作用を、本明細書中において記載されるｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏアッセイを使用して評価することができる。典型的には、保存的変異が導入される。このような変異は、アミノ酸の置換、付加、または欠失であり得る。さらに、通常は、１つのＣＤＲ内における変異は、１つまたは２つを超えない。よって、本発明に係るヒト化抗体は、１つのＣＤＲ内にアミノ酸変異を１つまたは２つ備える抗体をも包含する。

以下に、具体的な実施例を用いて、本発明がさらに説明されるが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。
本願発明は、さらに以下の実施態様も包含する。
１. 抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物であって、前記抗体薬物複合体は、式Ｉ中に示される構造を有する：
Ａｂ－（Ｌ－Ｄ） _ｐ 式Ｉ
式中、
Ａｂは抗クローディン１８．２抗体であり、前記抗クローディン１８．２抗体は重鎖および軽鎖を備え、前記重鎖の可変領域ＣＤＲ１は、配列番号２、１０、１８、２６、３４、４２、６８、７６、８４、９２、１００、１０８、もしくは１１６に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記重鎖の可変領域ＣＤＲ２は、配列番号３、１１、１９、２７、３５、４３、６９、７７、８５、９３、１０１、１０９、もしくは１１７に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記重鎖の可変領域ＣＤＲ３は、配列番号４、１２、２０、２８、３６、４４、７０、７８、８６、９４、１０２、１１０、もしくは１１８に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＣＤＲ１は、配列番号５０、５８、１２４、もしくは１３２に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＣＤＲ２は、配列番号５１、５９、１２５、もしくは１３３に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＣＤＲ３は、配列番号５２、６０、１２６、もしくは１３４に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、
Ｄは、細胞傷害剤であり、
Ｌは、前記抗クローディン１８．２抗体と前記細胞傷害剤とを結合するためのリンカーであり、
ｐは２．０～８．０である。
２. 前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の可変領域ＣＤＲ１は、配列番号２、１０、１８、２６、３４、もしくは４２に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記重鎖の可変領域ＣＤＲ２は、配列番号３、１１、１９、２７、３５、もしくは４３に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記重鎖の可変領域ＣＤＲ３は、配列番号４、１２、２０、２８、３６、もしくは４４に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＣＤＲ１は、配列番号５０もしくは５８に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＣＤＲ２は、配列番号５１もしくは５９に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＣＤＲ３は、配列番号５２もしくは６０に示される配列から選択される配列またはその変異体を備える；または
前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の可変領域ＣＤＲ１は、配列番号６８、７６、８４、９２、１００、１０８、もしくは１１６に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記重鎖の可変領域ＣＤＲ２は、配列番号６９、７７、８５、９３、１０１、１０９、もしくは１１７に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記重鎖の可変領域ＣＤＲ３は、配列番号７０、７８、８６、９４、１０２、１１０、もしくは１１８に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＣＤＲ１は、配列番号１２４もしくは１３２に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＣＤＲ２は、配列番号１２５もしくは１３３に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＣＤＲ３は、配列番号１２６もしくは１３４に示される配列から選択される配列またはその変異体を備える；または
前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号２、配列番号３、配列番号４、
（２）配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、
（３）配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、
（４）配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、
（５）配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、
（６）配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、
（７）配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、
（８）配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、
（９）配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、
（１０）配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、
（１１）配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、
（１２）配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、
（１３）配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８から選択され、
前記抗クローディン１８．２抗体の前記軽鎖の可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、
（２）配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０、
（３）配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、
（４）配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４から選択される；
好ましくは、前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号２、配列番号３、配列番号４、
（２）配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、
（３）配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、
（４）配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、
（５）配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、
（６）配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４から選択され、
前記抗クローディン１８．２抗体の前記軽鎖の可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号５０、配列番号５１、配列番号５２、
（２）配列番号５８、配列番号５９、配列番号６０から選択される；または
好ましくは、前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、
（２）配列番号７６、配列番号７７、配列番号７８、
（３）配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、
（４）配列番号９２、配列番号９３、配列番号９４、
（５）配列番号１００、配列番号１０１、配列番号１０２、
（６）配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、
（７）配列番号１１６、配列番号１１７、配列番号１１８から選択され、
前記抗クローディン１８．２抗体の前記軽鎖の可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、
（２）配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４から選択される、項１に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
３. 前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の可変領域ＦＲ１は、配列番号５、１３、２１、２９、３７、４５、７１、７９、８７、９５、１０３、１１１、もしくは１１９に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記重鎖の可変領域ＦＲ２は、配列番号６、１４、２２、３０、３８、４６、７２、８０、８８、９６、１０４、１１２、もしくは１２０に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記重鎖の可変領域ＦＲ３は、配列番号７、１５、２３、３１、３９、４７、７３、８１、８９
、９７、１０５、１１３、もしくは１２１に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記重鎖の可変領域ＦＲ４は、配列番号８、１６、２４、３２、４０、４８、７４、８２、９０、９８、１０６、１１４、もしくは１２２に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＦＲ１は、配列番号５３、６１、１２７、もしくは１３５に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＦＲ２は、配列番号５４、６２、１２８、もしくは１３６に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＦＲ３は、配列番号５５、６３、１２９、もしくは１３７に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＦＲ４は、配列番号５６、６４、１３０、もしくは１３８に示される配列から選択される配列またはその変異体を備える；
好ましくは、前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の可変領域ＦＲ１は、配列番号５、１３、２１、２９、３７、もしくは４５に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記重鎖の可変領域ＦＲ２は、配列番号６、１４、２２、３０、３８、もしくは４６に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記重鎖の可変領域ＦＲ３は、配列番号７、１５、２３、３１、３９、もしくは４７に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記重鎖の可変領域ＦＲ４は、配列番号８、１６、２４、３２、４０、もしくは４８に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＦＲ１は、配列番号５３もしくは６１に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＦＲ２は、配列番号５４もしくは６２に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＦＲ３は、配列番号５５もしくは６３に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＦＲ４は、配列番号５６もしくは６４に示される配列から選択される配列またはその変異体を備える；または
好ましくは、前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の可変領域ＦＲ１は、配列番号７１、７９、８７、９５、１０３、１１１、もしくは１１９に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記重鎖の可変領域ＦＲ２は、配列番号７２、８０、８８、９６、１０４、１１２、もしくは１２０に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記重鎖の可変領域ＦＲ３は、配列番号７３、８１、８９、９７、１０５、１１３、もしくは１２１に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記重鎖の可変領域ＦＲ４は、配列番号７４、８２、９０、９８、１０６、１１４、もしくは１２２に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＦＲ１は、配列番号１２７もしくは１３５に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＦＲ２は、配列番号１２８もしくは１３６から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＦＲ３は、配列番号１２９もしくは１３７に示される配列から選択される配列またはその変異体を備え、前記軽鎖の可変領域ＦＲ４は、配列番号１３０もしくは１３８に示される配列から選択される配列またはその変異体を備える；または
好ましくは、前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の可変領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、
（２）配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、
（３）配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、
（４）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、
（５）配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、
（６）配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８、
（７）配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、
（８）配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、
（９）配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、
（１０）配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、
（１１）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、
（１２）配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、
（１３）配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２から選択され、
前記抗クローディン１８．２抗体の前記軽鎖の可変領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、
（２）配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４、
（３）配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、
（４）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８から選択される；
より好ましくは、前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の可変領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、
（２）配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、
（３）配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、
（４）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、
（５）配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、
（６）配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号４８から選択され、
前記抗クローディン１８．２抗体の前記軽鎖の可変領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号５３、配列番号５４、配列番号５５、配列番号５６、
（２）配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４から選択される；または
より好ましくは、前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の可変領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４、
（２）配列番号７９、配列番号８０、配列番号８１、配列番号８２、
（３）配列番号８７、配列番号８８、配列番号８９、配列番号９０、
（４）配列番号９５、配列番号９６、配列番号９７、配列番号９８、
（５）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、
（６）配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３、配列番号１１４、
（７）配列番号１１９、配列番号１２０、配列番号１２１、配列番号１２２から選択され、
前記抗クローディン１８．２抗体の前記軽鎖の可変領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号１２７、配列番号１２８、配列番号１２９、配列番号１３０、
（２）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８から選択される、項１に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
４. 前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の可変領域は、配列番号１、９、１７、２５、３３、４１、６７、７５、８３、９１、９９、１０７、もしくは１１５に示される配列から選択され、
前記抗クローディン１８．２抗体の前記軽鎖の可変領域は、配列番号４９、５７、１２３、もしくは１３１に示される配列から選択される；
好ましくは、前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の可変領域は、配列番号１、９、１７、２５、３３、もしくは４１に示される配列から選択され、
前記抗クローディン１８．２抗体の前記軽鎖の可変領域は、配列番号４９もしくは５７に示される配列から選択される；または
好ましくは、前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の可変領域は、配列番号６７
、７５、８３、９１、９９、１０７、もしくは１１５に示される配列から選択され、
前記抗クローディン１８．２抗体の前記軽鎖の可変領域は、配列番号１２３もしくは１３１に示される配列から選択される、項１に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
５. 前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の可変領域および前記軽鎖の可変領域は、以下の配列の組み合わせ：
（１）配列番号１７および配列番号５７、
（２）配列番号４１および配列番号４９、
（３）配列番号４１および配列番号５７、
（４）配列番号１１５および配列番号１３１から選択され、
好ましくは、前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の可変領域および前記軽鎖の可変領域の配列は、それぞれ配列番号４１および配列番号４９である、項１に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
６. 前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖の定常領域は、ヒトのＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４など）、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＡの定常領域、または前記定常領域の変異体から選択され、好ましくはヒトＩｇＧ１であり、
前記抗クローディン１８．２抗体の前記軽鎖の定常領域は、ヒトのラムダ定常領域、カッパ定常領域、または前記定常領域の変異体から選択され、好ましくはヒトのカッパ定常領域である、項１に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
７. 前記抗クローディン１８．２抗体の前記重鎖のアミノ酸配列は、配列番号６５に示される配列、または配列番号６５との同一性が７０％よりも大きい、たとえば７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％よりも大きい配列を備え、
前記抗クローディン１８．２抗体の前記軽鎖のアミノ酸配列は、配列番号６６に示される配列、または配列番号６６との同一性が７０％よりも大きい、たとえば７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％よりも大きい配列を備える、項１に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
８. ｐは２．０～７．０、２．０～６．０、２．０～５．０、２．０～４．０、３．０～７．０、３．０～６．０、３．０～５．０、または３．０～４．０、好ましくはｐは３．０～４．０、たとえばｐは３．０～３．８、好ましくは３．０、３．４、３．５、または３．８、より好ましくは３．８である、項１に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
９. 前記細胞傷害剤は、ＳＮ－３８、ゲムシタビン、モノメチルアウリスタチンＥ（ＭＭＡＥ）、モノメチルアウリスタチンＦ（ＭＭＡＦ）、メイタンシノイド（たとえば、メイタンシンＤＭ１、メイタンシンＤＭ４）、カリケアマイシン、ＭＧＢＡ（たとえば、デュオカルマイシン）、ドキソルビシン、リシン、ジフテリア毒素およびその他の毒素、Ｉ１３１、インターロイキン、腫瘍壊死因子、ケモカイン、およびナノ粒子から選択され、
好ましくは、前記細胞傷害剤はＭＭＡＥである、項１に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
１０. 前記リンカーは、６－マレイミドカプロイル（ＭＣ）、マレイミドプロピオニル（ＭＰ）、Ｎ－スクシンイミジル ４－（２－ピリジルチオ）バレレート（ＳＰＰ）、４－（Ｎ－マレイミドメチル）－シクロヘキサン－１－ホルミル（ＭＣＣ）、Ｎ－スクシンイミジル（４－ヨード－アセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、および６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－Ｐ
ＡＢ）から選択され、
好ましくは、前記リンカーは、６－マレイミドカプロイル－バリン－シトルリン－ｐ－アミノベンジルオキシカルボニル（ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ）である、項１に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
１１. Ａｂは、
（ａ）前記重鎖の可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３および前記軽鎖の可変領域ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３であって、ここで、前記重鎖の可変領域ＣＤＲ１の配列は配列番号４２に示され、前記重鎖の可変領域ＣＤＲ２の配列は配列番号４３に示され、前記重鎖の可変領域ＣＤＲ３の配列は配列番号４４に示され、前記軽鎖の可変領域ＣＤＲ１の配列は配列番号５０に示され、前記軽鎖の可変領域ＣＤＲ２の配列は配列番号５１に示され、前記軽鎖の可変領域ＣＤＲ３の配列は配列番号５２に示される、もの、
（ｂ）重鎖可変領域および軽鎖可変領域であって、ここで、前記重鎖可変領域の配列は配列番号４１に示され、前記軽鎖可変領域の配列は配列番号４９に示される、もの、ならびに／または
（ｃ）重鎖および軽鎖であって、ここで、前記重鎖の配列は配列番号６５に示され、前記軽鎖の配列は配列番号６６に示される、ものを含み、
ＬはＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢであり、
ＤはＭＭＡＥである、項１に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
１２. 項１～１１のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物を備え、任意に、腫瘍の処置で知られる化学療法薬物、免疫療法薬物、および免疫抑制剤のうちの少なくとも１種、または、任意に、少なくとも１種の医薬的に許容される担体、希釈剤、もしくは賦形剤をさらに備える、組成物。
１３. クローディン１８．２に関連する疾患を予防および／または処置するための医薬品の調製における、項１～１１のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物、または項１２に記載の組成物の使用であって、
好ましくは、前記クローディン１８．２に関連する疾患は、胃がん、食道胃接合部の腺癌、および膵臓がんであり、
より好ましくは、前記クローディン１８．２に関連する疾患は、胃がんである、使用。
１４. クローディン１８．２に関連する疾患を予防および／または処置するための方法であって、項１～１１のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物、または項１２に記載の組成物の、予防的および／または治療的有効量を、それを必要とする対象に投与する工程を備え、
好ましくは、前記クローディン１８．２に関連する疾患は、胃がん、食道胃接合部の腺癌、および膵臓がんであり、
より好ましくは、前記クローディン１８．２に関連する疾患は、胃がんである、方法。
１５. クローディン１８．２に関連する疾患の予防および／または処置において使用するためのものであって、
好ましくは、前記クローディン１８．２に関連する疾患は、胃がん、食道胃接合部の腺癌、および膵臓がんであり、
より好ましくは、前記クローディン１８．２に関連する疾患は、胃がんである、項１～１１のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物、または項１２に記載の組成物。

実施例１ ヒト化抗体の調製
１．抗クローディン１８．２モノクローナル抗体の調製
以下に示されるように、複数の計画を同時に適用して、Ｂａｌｂ／ｃマウスを免疫化し、スクリーニングにより、クローディン１８．２のみに特異的に結合するがクローディン１８．１（クローディン１８の別のスプライスバリアント）には結合しないモノクローナル抗体を得た。

１） クローディン１８．２を発現する安定的にトランスフェクションした細胞株の構築
ヒトクローディン１８．１（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ５６８５６）の全長遺伝子配列を含有するプラスミドであるクローディン１８．１－ｐｕｃ５７－Ａｍｐ（ＳｙｎｂｉｏＴｅｃｈ）を合成した。このプラスミドを鋳型として使用し、上流プライマー５’－ｔｔｇｇｃａａａｇａａｔｔｇｃｔａｇａｔｇｔｃｃａｃｃａｃｃａｃａｔｇｃｃ－３’（配列番号１７１）および下流プライマー５’－ｔｇｔｔｃｇｇｇｃｃｃｔｃｃｔｃｇａｔｔａｃａｃａｔａｇｔｃｇｔｇｃｔｔｇｇ－３’（配列番号１７２）を使用して、ヒトクローディン１８．１フラグメント（Ｍｅｔ１－Ｖａｌ２６１）の全長をＰＣＲによって増幅した。増幅産物を酵素により、ＮＥＢｕｉｌｄｅｒ ＨｉＦｉ ＤＮＡ Ａｓｓｅｍｂｌｙ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＮＥＢ、Ｃａｔ：Ｍ０５３０Ｌ）によってライゲーションさせ、次いで、真核生物の発現プラスミド系中にクローニングした。同様に、ヒトクローディン１８．２（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ５６８５６－２）の全長遺伝子配列を含有するプラスミドであるクローディン１８．２－ｐｕｃ５７－Ａｍｐ（ＳｙｎｂｉｏＴｅｃｈ）を合成した。このプラスミドを鋳型として使用し、上流プライマー５’－ｔｔｇｇｃａａａｇａａｔｔｇｃｔａｇａｔｇｇｃｃｇｔｇａｃｔｇｃｃｔｇｔｃ－３’（配列番号１７３）および下流プライマー５’－ｔｇｔｔｃｇｇｇｃｃｃｔｃｃｔｃｇａｔｔａｃａｃａｔａｇｔｃｇｔｇｃｔｔｇｇ－３’（配列番号１７４）を使用して、ヒトクローディン１８．２フラグメント（Ｍｅｔ１－Ｖａｌ２６１）の全長をＰＣＲによって増幅した。増幅産物を酵素により、ＮＥＢｕｉｌｄｅｒ ＨｉＦｉ ＤＮＡ Ａｓｓｅｍｂｌｙ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（ＮＥＢ、Ｃａｔ．Ｎｏ．：Ｍ０５３０Ｌ）によってライゲーションさせ、次いで、真核生物の発現プラスミド系中にクローニングした。ＮＩＨ３Ｔ３細胞およびＨＥＫ２９３細胞のそれぞれに、このプラスミドをエレクトロポレーションによって挿入し、１～１０μｇ／ｍＬのピューロマイシン（Ｇｉｂｃｏ、Ｃａｔ．Ｎｏ．：Ａ１１１３８０３）を使用して段階的に加圧スクリーニングを行なって、安定な発現細胞株を得た。

こうして得られた、クローディン１８．１を発現する安定的にトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞株と、クローディン１８．２を発現する安定的にトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞株とを、まず、ＲＴ－ＰＣＲ法によって検証した。陽性細胞クローンから全ＲＮＡをＴｒｉｚｏｌ ＲＮＡ抽出キットを用いて抽出し、逆転写キット（ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（商標） Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｃａｔ．Ｎｏ．：１８０８００５１）を使用して、オリゴ（ｄＴ）プライマーでの逆転写により、ｃＤＮＡライブラリを得た。クローディン１８．１およびクローディン１８．２というクローディンの２つのスプライスフラグメントはＮ末端から最初の細胞外ドメイン（ループ１）までの領域が異なるため、クローディン１８．１およびクローディン１８．２のループ１からＣ末端までの領域（５０４ｂｐ）（ループ１を含まない）を増幅できるプライマーＫＮＢ１４（５’－ｔｇｔｇｃｇｃｃａｃｃａｔｇｇｃｃｇｔｇ－３’（配列番号１７５））およびＫＮＢ１５（５’－ｔｇｇａａｇｇａｔａａｇａｔｔｇｔａｃｃ－３’（配列番号１７６））を設計し、クローディン１８．２のＮ末端に特異的かつ相補的に結合できるがクローディン１８．１のＮ末端には結合しないプライマーＫＮＢ１６（５’－ｔｇｇｇｔｇｃｃａｔｔｇｇｃｃｔｃｃｔｇ－３’（配列番号１７７））を設計して、クローディン１８．２のＮ末端からＣ末端までの全長フラグメント（７８０ｂｐ）のみを増幅し、クローディン１８．２を発現するＫＡＴＯ ＩＩＩ細胞（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－１０３）をポジティブコントロールとして使用した。図１中に示されるように、ＲＴ－ＰＣＲから、安定的にトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞株がクローディン１８．１およびクローディン１８．２をそれぞれを発現していることが示された。クローディン１８．２を発現する安定的にトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞株とコントロールＫＡＴＯ ＩＩＩ細胞との両方が、クローディン１８．２に特有の７８０ｂｐにおける特徴的なバンドを増幅でき、クローディン１８．１を発現するＨＥＫ２９３は５０４ｂｐの共通のフラグメントのみを増幅できる。

安定的にトランスフェクションした細胞株である、クローディン１８．２を発現するＨＥＫ２９３細胞とクローディン１８．２を発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞とを消化し、集めて、ＰＢＳで２回洗浄して、１：２００希釈したウサギ抗クローディン１８．２一次抗体（Ａｂｃａｍ、ＥＰＲ１９２０２、Ｃａｔ：ａｂ２２２５１２）１００μＬと共に、４℃において６０分間インキュベートした。過剰な一次抗体溶液を０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳで洗浄することによって除去し、ヤギ抗ウサギＩｇＧＦｃ－ＡＦ６４７二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｔ：１１１－６０６－０４６）５０μＬを添加して、４℃において４５分間インキュベートした。過剰な二次抗体を０．５％ＢＳＡ／ＰＢＳで洗浄することによって除去して、最終的に細胞をＰＢＳ溶液１００μＬ中に再懸濁して、フローサイトメトリーによって速やかに検出した。結果を図２および図３中に示した。

図２は、全長クローディン１８．２遺伝子をトランスフェクションした、安定的にトランスフェクションした細胞株ＨＥＫ２９３－クローディン１８．２についての、ＦＡＣＳによって検出した結果を示す。黒色の点はトランスフェクションしていないＨＥＫ２９３細胞であり、灰色の点はクローディン１８．２を発現する安定的にトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞である。ＨＥＫ２９３細胞はクローディン１８．２を発現しておらず、安定的にトランスフェクションした細胞ＨＥＫ２９３－クローディン１８．２は細胞表面にクローディン１８．２を高発現している。

図３は、クローディン１８．２を高レベルで発現する安定的にトランスフェクションしたＮＩＨ３Ｔ３細胞株におけるクローディン１８．２をＦＡＣＳによって検出した結果を示す。黒色の線はネガティブコントロール、灰色の網掛けはクローディン１８．２を発現する安定的にトランスフェクションした３Ｔ３細胞株である。ＮＯ．３２－Ｈはクローディン１８．２を高レベルで発現する安定的にトランスフェクションした３Ｔ３細胞株、ＮＯ．１８－Ｍはクローディン１８．２を中レベルで発現する安定的にトランスフェクションした３Ｔ３細胞株、ＮＯ．６－Ｌはクローディン１８．２を低レベルで発現する安定的にトランスフェクションした３Ｔ３細胞株である。

陽性で安定的にトランスフェクションした細胞株が増殖したものを集めて凍結させ、クローディン１８．２を発現する安定的にトランスフェクションしたＮＩＨ３Ｔ３細胞株を使用して、動物を免疫化した。

２） ハイブリドーマからの抗クローディン１８．２モノクローナル抗体の調製
６～８週齢の雌Ｂａｌｂ／ｃマウスを、クローディン１８．２を発現する安定的にトランスフェクションした３Ｔ３細胞またはクローディン１８．２をコードするプラスミドのそれぞれで、または交互に（ａｌｔｅｒｎａｔｅｌｙ）、免疫化した。細胞で免疫化した場合には、クローディン１８．２を発現する安定的にトランスフェクションした３Ｔ３細胞１×１０^６個をその都度フロイントアジュバントまたは非フロイントアジュバントと混合し、次いで大腿部の付け根および足蹠中に注入し、２週間後に再度、異なる部位に免疫化を行なった。免疫化にＤＮＡを使用した場合には、プラスミド２０μｇを１μｇのＣｐＧと混合し、次いで、遺伝子銃（Ｂｉｏｒａｄ）を４０ｐｓｉで使用してマウスの腹部に直接注入し、免疫化は１週間に１回行なった。融合の３日前に、クローディン１８．２を高レベルで発現する安定的にトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞株を使用して、マウス１匹あたり細胞１×１０^６個／５０μＬを尾静脈に注射することで、パルス免疫化（ｐｕｌｓｅ ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ）を行なった。３日後、マウスを犠牲死させ、膝窩、鼠蹊部、および腸骨のリンパ節を採取してＤＭＥＭ中で粉砕することによって、Ｂ細胞を豊富に含む懸濁液を得て、また、マウスの脾臓を切除し、ＤＭＥＭ中で粉砕して遠心分離することによって、脾臓細胞懸濁液を得た。リンパ節と脾臓細胞懸濁液との混合物の適切な量を、ＳＰ２／０と混合し、電気融合装置を使用して細胞を融合させた。

３） 抗クローディン１８．２ファージ抗体ライブラリの構築
マウスの脾臓および末梢リンパ節の細胞懸濁液を集めたものの一部を使用して、Ｔｒｉｚｏｌ ＲＮＡ抽出キットを用いて全ＲＮＡを抽出し、逆転写キット（ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ Ｆｉｒｓｔ－Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ、Ｃａｔ．ＮＯ．１８０８００５１）を使用し、軽鎖および重鎖に特異的なプライマーを用いて逆転写を行なって、抗体の軽鎖および重鎖それぞれのｃＤＮＡライブラリを作製した。このｃＤＮＡライブラリを鋳型として使用し、軽鎖および重鎖可変領域のプライマーを使用して、抗体の軽鎖および重鎖可変領域フラグメントをＰＣＲにより増幅し、酵素消化した後で、このＰＣＲ産物を、ヒト抗体軽鎖定常領域ＣカッパまたはヒトＩｇＧ１重鎖定常領域ＣＨ１を含有するファージプラスミドベクター中にクローニングして、キメラ軽鎖ライブラリおよび重鎖ライブラリをそれぞれ形成する。軽鎖ライブラリ中の抗体フラグメントをＢｓｐＱＩおよびＳｆｉＩで二重に消化し、次いで重鎖ライブラリ中にライゲーションして、糸状性ファージＭ１３に基づく、ライブラリ収容量１．２×１０^１０の、マウスキメラＦａｂファージディスプレイライブラリを形成した。ファージ（力価は約１×１０^１３／ｍＬ）を０．８ｍＬとって、２００μＬの５％ＢＳＡ／ＰＢＳと混合し、クローディン１８．１を発現するＨＥＫ２９３細胞１×１０^７個を添加して、氷浴中に１時間置き、１０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、集めた上清をクローディン１８．２を発現するＨＥＫ２９３細胞１×１０^６個と混合して、１時間氷浴し、１０００ｒｐｍで３分間遠心分離し、上清を捨てて、１ｍＬの１％ＢＳＡ／ＰＢＳを添加して５～１０回繰り返し洗浄し、１ｍＬの１００ｍＭ ＴＥＡを添加して細胞を溶解し、室温で１０分間インキュベーションした後で０．５ｍＬの１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）を添加して中和し、対数増殖期のＴＧ１大腸菌１０ｍＬを使用して、３７℃において３０分間かけてファージを感染させた。分子生物学における慣例的な手順に従ってファージを回収し、力価を検出して、次の回のパニングを行なった。

２．抗クローディン１８．２特異的抗体のスクリーニングおよび配列取得
クローディン１８．１を発現するＨＥＫ２９３細胞、クローディン１８．２を発現するＨＥＫ２９３細胞、およびＨＥＫ２９３細胞を、生細胞染色のための指導書に従って、Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｋｅｒ Ｇｒｅｅｎ ＣＭＦＤＡ Ｄｙｅ（Ｔｈｅｒｍｏ、Ｃａｔ．Ｎｏ．：Ｃ２９２５）それぞれ５μＭ、０．５μＭ、および０μＭで予め染色した。洗浄によって色素を除去した後、細胞を１：１：１の比率で混合して、９６ウェルプレートに添加し（細胞２×１０^５個／ウェル）、ハイブリドーマの上清または菌誘導によって得た上清と合わせて、氷浴中で１時間インキュベートした。ＡｌｅｘａＦｌｕｒｏ６４７標識抗マウスＩｇＧ Ｆｃまたは抗ヒトＩｇＧ Ｆ（ａｂ）’２二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を添加して、氷上で４５分間インキュベートした。洗浄後、１００μＬのＰＢＳを各ウェルに添加して細胞を再懸濁し、フローサイトメーター（ｉＱｕｅ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ）によって細胞を分析し、ＦＬ２チャネルの蛍光強度の差異に従って３つの異なる細胞集団を丸で囲み、次いで、ＦＬ４チャネルにおいて、試験対象とした抗体と各細胞集団との結合を検出した。選別した抗体は、クローディン１８．２を発現する安定的にトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞に、高い親和性および特異性で結合し、クローディン１８．１を発現する安定的にトランスフェクションしたＨＥＫ２９３細胞またはＨＥＫ２９３細胞には結合しない。ハイブリドーマ細胞から、ＦＡＣＳによって合計３２０個のクローンを選別し、これら３２０個のクローンは、クローディン１８．２に結合できたが、クローディン１８．１には結合せず、パニングを３回行なった後、６２個のクローンをファージＦａｂライブラリから選択し、これら６２個のクローンは、クローディン１８．２に高い親和性で結合するが、クローディン１８．１には結合しない。

ファージライブラリから選別した陽性クローンからプラスミドを抽出してシーケンシングし、可変領域の配列を重鎖および軽鎖定常領域ベクター中にそれぞれクローニングして、全長ＩｇＧを発現させた。ハイブリドーマから得た陽性細胞を、１ｍＬのＴＲＮｚｏｌを添加することによって溶解し、チオシアン酸グアニジン法によって全ＲＮＡを抽出した。これを鋳型として使用して、第一鎖ｃＤＮＡを合成した後、この第一鎖ｃＤＮＡを次の鋳型として使用して、ハイブリドーマ細胞に対応する可変領域のＤＮＡ配列を増幅した。増幅産物をシーケンシングした後、以下に示される、候補となるハイブリドーマの重鎖および軽鎖の可変領域の配列を得た。

クローン１８Ｄ１０：
重鎖

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号１４０）、ＣＤＲ２（配列番号１４１）、ＣＤＲ３（配列番号１４２）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号１４３）、ＦＲ２（配列番号１４４）、ＦＲ３（配列番号１４５）、およびＦＲ４（配列番号１４６）である。

核酸配列

軽鎖

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号１４８）、ＣＤＲ２（配列番号１４９）、ＣＤＲ３（配列番号１５０）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号１５１）、ＦＲ２（配列番号１５２）、ＦＲ３（配列番号１５３）、およびＦＲ４（配列番号１５４）である。

核酸配列

クローン１８Ａ９：
重鎖

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号１５６）、ＣＤＲ２（配列番号１５７）、ＣＤＲ３（配列番号１５８）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号１５９）、ＦＲ２（配列番号１６０）、ＦＲ３（配列番号１６１）、ＦＲ４（配列番号１６２）である。

核酸配列

軽鎖

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号１６４）、ＣＤＲ２（配列番号１６５）、ＣＤＲ３（配列番号１６６）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号１６７）、ＦＲ２（配列番号１６８）、ＦＲ３（配列番号１６９）、およびＦＲ４（配列番号１７０）である。

核酸配列

上述される重鎖および軽鎖可変領域配列フラグメントをＰＣＲによって増幅し、ヒト重鎖定常領域を含有するベクター中に重鎖可変領域をクローニングして、哺乳動物細胞中において完全なＩｇＧ１重鎖を発現させた。同様に、ヒト軽鎖定常領域を含有するベクター中に軽鎖可変領域をクローニングして、哺乳動物細胞中において完全なカッパ軽鎖を発現させた。配列を検証した後、これらをＨＥＫ２９３－６Ｅ哺乳動物細胞中にトランスフェクションして、ＩｇＧ１を発現させて培地中に分泌させ、上清を集めてろ過し、次いで精製した。タンパク質ＡクロマトグラフィーによってＩｇＧを精製し、培養上清を適切なサイズのタンパク質Ａカラム上に載せ、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．０）、２５０ｍＭ ＮａＣｌで洗浄して、結合したＩｇＧを、０．１Ｍグリシン－ＨＣｌ（ｐＨ３．０）で溶出した。濃縮チューブ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して限外ろ過によりタンパク質を濃縮し、ＩｇＧの濃度を、分光光度法でＯＤ２８０を検出することによって求めた。ＩｇＧの純度をＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析した。

クローディン１８．１を発現するＨＥＫ２９３細胞、クローディン１８．２を発現するＨＥＫ２９３細胞、およびＨＥＫ２９３細胞を対数増殖期に集めて、消化した後、細胞５×１０^４個／１００μＬをＵ字型９６ウェルプレートに添加して、１１００ｒｐｍで３分間遠心分離し、次いで上清を捨てた。細胞を穏やかに軽くタップし、段階希釈した抗体５０μＬを各ウェルに添加して（抗体濃度は１００ｎＭから開始、５倍希釈、勾配８通り）、４℃において１時間インキュベートした。インキュベート後、１４０μＬの０．５％ＢＳＡを各ウェルに添加して３回洗浄し、ＡｌｅｘａＦｌｕｒｏ６４７抗ヒトＩｇＧ二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｃａｔ：１０９－６０６－１７０）を３０μＬ／ウェルで添加して、４℃において４０分間インキュベートした。インキュベート後、１４０μＬの０．５％ＢＳＡを各ウェルに添加して３回洗浄し、最後に各ウェルを５０μＬのＰＢＳ中に再懸濁して、フローサイトメトリー（ｉＱｕｅ Ｓｃｒｅｅｎｅｒ）によって検出した。表１中に示される通り、結果から、得られたキメラクローディン１８．２ ＩｇＧ１抗体が、クローディン１８．２遺伝子でトランスフェクションしたクローディン１８．２を発現するＨＥＫ２９３細胞のみを認識し、ＨＥＫ２９３またはクローディン１８．１を発現するＨＥＫ２９３には結合しないことが示される。

３．抗クローディン１８．２抗体のヒト化
選択したモノクローナル抗体の可変領域の配列をヒト生殖系抗体配列とアラインさせて、ＣＤＲグラフトに対して高い相同性を有する配列を見つけ、続いて、ｉｎ ｓｉｌｉｃｏにおいて相同性モデリングを行なって、ＣＤＲ領域およびその周囲のフレームワークのアミノ酸配列を分析することによって、その空間的三次元結合様式を調べた。静電力、ファンデルワールス力、疎水性、およびエントロピー値を計算することによって、各陽性モノクローナル抗体遺伝子配列において標的と相互に作用し得て空間的フレームワークを維持し得る重要なアミノ酸残基を分析し、これに従って逆突然変異部位を設計した。ＨＬＡ－ＤＲ親和性を分析して、免疫原性が比較的低いヒト生殖系フレームワーク配列を選択した。発酵中に変性を受け得るアミノ酸残基を分析して、変性の尤度を低減するための変異を設計した。

異なる重鎖および軽鎖誘導体を設計した。軽鎖および重鎖誘導体の全配列を合成した後、これらを、抗体カッパ鎖の定常領域ＣカッパまたはヒトＩｇＧ１の定常領域ＣＨ１－ＣＨ３を含有するベクター中にクローニングした。同じ親に由来する軽鎖および重鎖誘導体をそれぞれ有するプラスミドを対にした後、ＨＥＫ２９３．６Ｅ細胞をトランスフェクションして、５～６日間かけて抗体を発現させ、上清を集めてタンパク質Ａカラム上で精製した。

ヒト化抗体の配列は以下の通りである。
１８Ｄ１０：
重鎖可変領域：
１８Ｄ１０ＶＨｖ１：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号２）、ＣＤＲ２（配列番号３）、ＣＤＲ３（配列番号４）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号５）、ＦＲ２（配列番号６）、ＦＲ３（配列番号７）、およびＦＲ４（配列番号８）である。

核酸配列

１８Ｄ１０ＶＨｖ２：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号１０）、ＣＤＲ２（配列番号１１）、ＣＤＲ３（配列番号１２）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号１３）、ＦＲ２（配列番号１４）、ＦＲ３（配列番号１５）、およびＦＲ４（配列番号１６）である。

核酸配列

１８Ｄ１０ＶＨｖ３：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号１８）、ＣＤＲ２（配列番号１９）、ＣＤＲ３（配列番号２０）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号２１）、ＦＲ２（配列番号２２）、ＦＲ３（配列番号２３）、およびＦＲ４（配列番号２４）である。

核酸配列

１８Ｄ１０ＶＨｖ４：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号２６）、ＣＤＲ２（配列番号２７）、ＣＤＲ３（配列番号２８）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号２９）、ＦＲ２（配列番号３０）、ＦＲ３（配列番号３１）、およびＦＲ４（配列番号３２）である。

核酸配列

１８Ｄ１０ＶＨｖ５：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号３４）、ＣＤＲ２（配列番号３５）、ＣＤＲ３（配列番号３６）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号３７）、ＦＲ２（配列番号３８）、ＦＲ３（配列番号３９）、およびＦＲ４（配列番号４０）である。

核酸配列

１８Ｄ１０ＶＨｖ６：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号４２）、ＣＤＲ２（配列番号４３）、ＣＤＲ３（配列番号４４）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号４５）、ＦＲ２（配列番号４６）、ＦＲ３（配列番号４７）、ＦＲ４（配列番号４８）である。

核酸配列

軽鎖可変領域：
１８Ｄ１０ＶＬｖ１：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号５０）、ＣＤＲ２（配列番号５１）、ＣＤＲ３（配列番号５２）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号５３）、ＦＲ２（配列番号５４）、ＦＲ３（配列番号５５）、およびＦＲ４（配列番号５６）である。

核酸配列

１８Ｄ１０ＶＬｖ２：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号５８）、ＣＤＲ２（配列番号５９）、ＣＤＲ３（配列番号６０）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号６１）、ＦＲ２（配列番号６２）、ＦＲ３（配列番号６３）、およびＦＲ４（配列番号６４）である。

核酸配列

好ましいヒト化抗体の配列は以下の通りである。
重鎖アミノ酸配列：

重鎖核酸配列

軽鎖アミノ酸配列：

軽鎖核酸配列

１８Ａ９：
重鎖可変領域：
１８Ａ９ＶＨｖ１：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号６８）、ＣＤＲ２（配列番号６９）、ＣＤＲ３（配列番号７０）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号７１）、ＦＲ２（配列番号７２）、ＦＲ３（配列番号７３）、ＦＲ４（配列番号７４）である。

核酸配列

１８Ａ９ＶＨｖ２：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号７６）、ＣＤＲ２（配列番号７７）、ＣＤＲ３（配列番号７８）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号７９）、ＦＲ２（配列番号８０）、ＦＲ３（配列番号８１）、およびＦＲ４（配列番号８２）である。

核酸配列

１８Ａ９ＶＨｖ３：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号８４）、ＣＤＲ２（配列番号８５）、ＣＤＲ３（配列番号８６）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号８７）、ＦＲ２（配列番号８８）、ＦＲ３（配列番号８９）、およびＦＲ４（配列番号９０）である。

核酸配列

１８Ａ９ＶＨｖ４：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号９２）、ＣＤＲ２（配列番号９３）、ＣＤＲ３（配列番号９４）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号９５）、ＦＲ２（配列番号９６）、ＦＲ３（配列番号９７）、およびＦＲ４（配列番号９８）である。

核酸配列

１８Ａ９ＶＨｖ５：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号１００）、ＣＤＲ２（配列番号１０１）、ＣＤＲ３（配列番号１０２）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、ＦＲ１（配列番号１０３）、ＦＲ２（配列番号１０４）、ＦＲ３（配列番号１０５）、およびＦＲ４（配列番号１０６）である。

核酸配列

１８Ａ９ＶＨｖ６：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号１０８）、ＣＤＲ２（配列番号１０９）、ＣＤＲ３（配列番号１１０）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号１１１）、ＦＲ２（配列番号１１２）、ＦＲ３（配列番号１１３）、およびＦＲ４（配列番号１１４）である。

核酸配列

１８Ａ９ＶＨｖ７：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号１１６）、ＣＤＲ２（配列番号１１７）、ＣＤＲ３（配列番号１１８）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号１１９）、ＦＲ２（配列番号１２０）、ＦＲ３（配列番号１２１）、およびＦＲ４（配列番号１２２）である。

核酸配列

軽鎖可変領域：
１８Ａ９ＶＬｖ１：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号１２４）、ＣＤＲ２（配列番号１２５）、ＣＤＲ３（配列番号１２６）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号１２７）、ＦＲ２（配列番号１２８）、ＦＲ３（配列番号１２９）、およびＦＲ４（配列番号１３０）である。

核酸配列

１８Ａ９ＶＬｖ２：

この中で、下線を付した部分は、左から右に、それぞれ、ＣＤＲ１（配列番号１３２）、ＣＤＲ２（配列番号１３３）、ＣＤＲ３（配列番号１３４）であり、
下線を付していない部分は、左から右に、それぞれ、ＦＲ１（配列番号１３５）、ＦＲ２（配列番号１３６）、ＦＲ３（配列番号１３７）、およびＦＲ４（配列番号１３８）である。

核酸配列

実施例２ ヒト化抗体についての薬理学的研究
１．ヒト化抗体の親和性（ＥＣ_５０）の判定
対数増殖期の細胞を集め、３％ＢＳＡで３０分間かけてブロッキングして、Ｕ字型９６ウェルプレート中に、細胞５×１０^４個／１００μＬとなるように播種した。プレートを１１００ｒｐｍで３分間遠心分離して、上清を捨てた。プレートを穏やかに軽くタップして細胞をばらばらにし、段階希釈した抗体５０μＬ（抗体濃度は１００ｎＭから開始、５倍希釈で勾配８通り）を各ウェルに添加して、４℃において１時間インキュベートした。インキュベート後、１４０μＬの０．５％ＢＳＡを各ウェルに添加して３回洗浄し、ＡＦ ６４７／ＡＰＣ抗ヒト二次抗体を３０μＬ／ウェルで添加して、４℃において４０分間インキュベートした。インキュベート後、１４０μＬの０．５％ＢＳＡを各ウェルに添加して３回洗浄し、最後に各ウェル中の細胞を５０μＬのＰＢＳ中に再懸濁して、ｉＱｕｅ（Ｉｎｔｅｌｌｉｃｙｔ、ＵＳＡ）によるＦＡＣＳ分析に供した（表２参照）。

２．腫瘍細胞に対するＣＭ３１１抗体のＡＤＣＣ死滅活性
新鮮な血液３０ｍＬを５０ｍＬの遠心分離管にとり、１５ｍＬの１×ＰＢＳを添加し、よく混合して、この混合物を、２０ｍＬのＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓを添加しておいた遠心分離管中にゆっくりと添加したところ、血液がＦｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓの表面に広がった。遠心分離管を２０００ｒｐｍで３０分間、２０℃において遠心分離して、最上部の血清を捨て、バフィーコート（すなわちＰＢＭＣ）を吸収させて、５０ｍＬの遠心分離管中に１本当たり１０ｍＬずつとなるように分けた。各遠心分離管に少なくとも３０ｍＬの１×ＰＢＳを添加して、よく混合した。遠心分離管を１３００ｒｐｍで１０分間、４℃において遠心分離して、上清を捨て、遠心分離管に１０ｍＬの１×ＰＢＳを添加してすすぎ、細胞数をカウントした。

細胞をＦＢＳ／ＲＰＭＩ １６４０培地中に再懸濁して、３７℃、５％ＣＯ_２において２時間培養した。培地を１３００ｒｐｍで１０分間遠心分離して、上清を捨て、細胞をＦＢＳ／ＲＰＭＩ １６４０培地中に再度懸濁して、Ｕ字型９６ウェルプレート中に、細胞４×１０^５個／ウェル、５０μＬ／ウェルにて植菌した。上述される１８Ｄ１０キメラ、１８Ａ９キメラ、抗クローディン１８．２ヒト化抗体１８Ｄ１０、１８Ａ９（すなわちＣＭ３１１；ＣＭ３１１はヒト化抗体１８Ｄ１０または１８Ａ９の総称）、およびコントロールである抗ＫＬＨ抗体を希釈したもの（４０、２０、１０、５、２．５、１．２５μｇ／ｍＬ）を２５μＬ／ウェルにて添加した。プレートを３７℃、５％ＣＯ_２において３０分間インキュベートした。プレートを取り出して、ＫＡＴＯ ＩＩＩ細胞を、細胞８×１０^３個／ウェル、２５μＬ／ウェルとなるように添加した。プレートを３７℃において５％ＣＯ_２と共に３．５時間インキュベートし、標的細胞の最大放出ウェルに２μＬの１０×溶解バッファーを添加して、インキュベーションを３７℃において５％ＣＯ_２と共に３０分間継続した。プレートを取り出し、１０００ｒｐｍで３分間遠心分離して、上清を黒色ＥＬＩＳＡプレートに５０μＬ／ウェルにて移した。ＬＤＨ検出基質を５０μＬ／ウェルにて添加し、室温で１０分間インキュベートして、停止溶液を２５μＬ／ウェルにて添加して反応を停止させた。ＯＤ（光学濃度）をマイクロプレートリーダー（Ｂｉｏｔｅｋ）によって調べた。

結果を以下のように計算する。
％細胞死滅＝（ＯＤ_実験－ＯＤ_{コントロール放出}）／（ＯＤ_最大放出-ＯＤ_{コントロール放出}）×１００％
図４中に示されるように、抗クローディン１８．２ヒト化抗体１８Ｄ１０および１８Ａ９は強いＡＤＣＣ活性を有する。

３．腫瘍細胞に対するＣＭ３１１抗体のＣＤＣ細胞死滅活性
対数増殖期のＫＡＴＯ ＩＩＩ細胞を、細胞１×１０^７個／ｍＬにて再懸濁した。ＣＦＳＥ（Ｓｉｇｍａ、８７４４４－５ＭＧ－Ｆ）を最終濃度１μＭで添加した。室温で１０分間インキュベートし、３倍体積の培地を添加して反応を停止させた。１０００ｒｐｍで４℃において５分間遠心分離して、上清を捨て、培地中に再懸濁して、細胞を９６ウェルプレート中に細胞１×１０^５個／ウェル、５０μＬ／ウェルにて播種した。上述される１８Ｄ１０キメラ、１８Ａ９キメラ、抗クローディン１８．２ヒト化抗体１８Ｄ１０、１８Ａ９（ＣＭ３１１）、およびコントロールである抗ＫＬＨ抗体を希釈したもの（希釈濃度は３０、１０、３．３３、１．１１、０．３７μｇ／ｍＬ）を、５０μＬ／ウェルにて添加した。補体を培地で３０％に希釈して、プレートに５０μＬ／ウェルで添加した。３７℃、５％ＣＯ_２において２時間インキュベートし、１０００ｒｐｍで３分間遠心分離して、上清を捨てた。ＰＩ染色溶液（１：２００希釈）をＳｕｌｆａｔｅ ｌａｔｅｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓ３７２２７）と混合し、次いで９６ウェルプレートに１００μＬ／ウェルにて添加した。氷上で１０分間インキュベートし、次いでＦＡＣＳによって細胞を分析した。図５中に示されるように、抗クローディン１８．２ヒト化抗体１８Ｄ１０および１８Ａ９は強いＣＤＣ作用を有する。

実施例３ 抗体薬物複合体の調製および分析
１．抗体薬物複合体の調製
１０ｍｇのＣＭ３１１抗体について、そのバッファーを、合計３回、１５ｍＬの３０ＫＤ限外ろ過デバイスを使用して、還元バッファー（２５ｍＭホウ酸ナトリウム、ｐＨ８．０、２５ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ）に交換して、最終的な体積を約１ｍＬとし、新しいエッペンドルフ遠心分離管（秤量済み）に移して秤量し、タンパク質濃度を測定して、タンパク質総量を計算した。２．５倍モル量のＤＴＴを抗体に添加して、絶えず混合しながら室温で２時間インキュベートした。１５ｍｌの３０ＫＤ限外ろ過デバイスを使用して、合計３回、混合物のバッファーを結合バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ、ｐＨ７．２、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＥＤＴＡ）に交換した。溶液をとり、Ａ２８０にて測定してタンパク質濃度を求め、秤量して、タンパク質総量を計算した。試料を１０μＬとり、エルマン法によって測定して、遊離チオール基の数を求めた。

さらに、その遊離チオール基のモル濃度を下記式によって計算した。

ｂ：キュベットの光路長（通常は１ｃｍ）。
遊離チオール基のモル濃度と全タンパク質溶液の体積とから、遊離チオール基のモル数を計算した。

還元した抗体に、遊離チオール基のモル数の１．１倍にあたるｖｃ－ＭＭＡＥ（すなわち、ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）（ＤＭＳＯ中に溶解）を添加して、室温で混合し、時々混合しながら２時間反応させた。この反応系に、反応溶液中のｖｃ－ＭＭＡＥ（すなわち、ＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）のモル数の２０倍にあたる量のＮ－アセチルシステインを添加して、混合し、混合物を５分間静置した。１５ｍｌの３０ＫＤ限外ろ過デバイスを使用して、合計３回、混合物のバッファーを複合体保存液（２０ｍＭヒスチジン、３％スクロース、０．０３％ Ｔｗｅｅｎ－８０、ｐＨ５．５）に交換した。得られた抗体薬物複合体生成物である抗クローディン－１８．２－ＡＤＣ（ヒト化抗体１８Ｄ１０または１８Ａ９から調製した抗体薬物複合体の総称として使用される用語）を４℃において保存した。

２．抗体薬物複合体のＤＡＲの判定
この抗体薬物複合体の薬物含量（薬物抗体比、ＤＡＲ）を、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ－ＨＰＬＣ）によって求めた。

典型的な抗体薬物複合体であるＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ６／ＶＬ１－ＡＤＣのＨＩＣプロファイルは、図６中に示される通りであった。このプロファイルのピーク領域によると、平均ＤＡＲは３．８であった。

同様に、抗体薬物複合体ＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ３／ＶＬ２－ＡＤＣの平均ＤＡＲは３．５であった。

抗体薬物複合体ＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ６／ＶＬ２－ＡＤＣの平均ＤＡＲは３．４であった。

抗体薬物複合体ＣＭ３１１－１８Ａ９－ＶＨ７／ＶＬ２－ＡＤＣの平均ＤＡＲは３．０であった。

注目すべきことに、上述されるＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ６／ＶＬ１－ＡＤＣという抗体薬物複合体の名称は、抗体薬物複合体の調製において使用した抗体がＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ６／ＶＬ１であることを示す。さらに、ＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ６／ＶＬ１という抗体名称は、上述される抗体薬物複合体の調製において使用した抗体が１８Ｄ１０抗体のクラスであって、重鎖可変領域がＶＨｖ６、軽鎖可変領域がＶＬｖ１であることを示しており、上記表２から分かるように、上述される抗体薬物複合体の調製において使用した特異的抗体はｈ１８Ｄ１０．ｖ１６である。残り３つの抗体薬物複合体ＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ３／ＶＬ２－ＡＤＣ、ＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ６／ＶＬ２－ＡＤＣ、およびＣＭ３１１－１８Ａ９－ＶＨ７／ＶＬ２－ＡＤＣの名称も、上述される内容に従って理解できる。具体的には、抗体薬物複合体ＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ３／ＶＬ２－ＡＤＣの調製において使用した特異的抗体は表２中のｈ１８Ｄ１０．ｖ２３であり、抗体薬物複合体ＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ６／ＶＬ２－ＡＤＣの調製において使用した特異的抗体は表２中のｈ１８Ｄ１０．ｖ２６であり、抗体薬物複合体ＣＭ３１１－１８Ａ９－ＶＨ７／ＶＬ２－ＡＤＣの調製において使用した特異的抗体は表２中のｈ１８Ａ９．ｖ２７である。

実施例４ ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける抗体薬物複合体についての薬力学的研究
回収した細胞株を１～２回継代した後、最初に上清をピペッティングによって１５ｍＬの遠心分離管中に入れ、遠心分離して、得られた上清を捨て、細胞培養フラスコを５ｍＬのＰＢＳですすぎ、次いで２ｍＬのトリプシン－ＥＤＴＡで細胞を消化した。先に使用した１５ｍＬの遠心分離管中において細胞を培地で再懸濁し、遠心分離して、上清を捨て、細胞を培地で再度懸濁して、０．５ｍＬをとってセルカウンターでカウントした。９６ウェル細胞培養プレート上に細胞を播種し（ＬＴ－１Ｃ８細胞は細胞５０００個または１００００個／ウェル、ＬＴ－Ｍ１１細胞は細胞５０００個／ウェル、ＢｘＰＣ－３は細胞３０００個／ウェル）、２４時間培養した後、抗体薬物複合体ＣＭ３１１ ＡＤＣ（異なるＣＭ３１１モノクローナル抗体が結合）を段階的に濃度希釈したものを添加して、９６時間インキュベートし、次いでＣＣＫ－８またはＰｒｅｓｔｏ－Ｂｌｕｅ検出試薬を各ウェルに添加して、マイクロプレートリーダーを使用して検出し、４パラメータフィッティングを行なった。

実験の試薬および供給元：
物品

細胞株

実験結果：
各ＣＭ３１１ ＡＤＣのＩＣ_５０の平均値が表３中に示される。図７は、異なるＣＭ３１１ ＡＤＣによるＬＴ－Ｍ１１細胞に対する細胞死滅作用についての代表的なグラフである。

記：図７中において、
試料（Ｓａｍｐｌｅ）１：ＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ３／ＶＬ２－ＡＤＣ
試料（Ｓａｍｐｌｅ）２：ＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ６／ＶＬ１－ＡＤＣ
試料（Ｓａｍｐｌｅ）３：ＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ６／ＶＬ２－ＡＤＣ
試料（Ｓａｍｐｌｅ）４：ＣＭ３１１－１８Ａ９－ＶＨ７／ＶＬ２－ＡＤＣ
表３および図７中の結果から示され得るように、異なるＣＭ３１１ ＡＤＣが、クローディン１８．２を中程度に発現および高発現する細胞株において有意な細胞死滅活性を示したが、クローディン１８．２陰性ＢｘＰＣ－３細胞株においては有意な細胞死滅活性を示さなかった。

実施例５ ｉｎ ｖｉｖｏにおける抗体薬物複合体についての薬力学的研究
ＣＭ３１１ＡＤＣの抗腫瘍活性を、２通りの胃がんＰＤＸモデル（ＳＴＯ＃０２５およびＳＴＯ＃５２３）において試験した。いずれの胃がんモデルも、クローディン１８のｍＲＮＡレベルが比較的高かった。

ヌードマウスにおいてヒト胃がんのＰＤＸモデルを確立するプロセスは、以下の通りであった：体積約１５～３０ｍｍ^３の腫瘍組織を、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウスの背中に皮下移植した。腫瘍の体積が１５０～２６０ｍｍ^３に達したら、マウスを複数の群に無作為に分け、各群マウス５匹として、異なる群の間で腫瘍体積が確実に均一となるようにし、体重についても考慮した。群は合計４つであり、これらは、ビヒクル群、１ｍｇ／ｋｇ ＣＭ３１１－ＡＤＣ－１投与群、３ｍｇ／ｋｇ ＣＭ３１１－ＡＤＣ－１投与群、および３ｍｇ／ｋｇ ＣＭ３１１－ＡＤＣ－２（非結合、コントロールＡＤＣ）投与群であった。これらのうち、ＣＭ３１１－ＡＤＣ－１は抗体薬物複合体ＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ６／ＶＬ１－ＡＤＣを指し、ＣＭ３１１－ＡＤＣ－１と比較して、ＣＭ３１１－ＡＤＣ－２の抗体はヒトＩｇＧ１アイソタイプコントロールであり、これは腫瘍細胞表面の標的に結合しない。

データ分析：実験の間、腫瘍体積を１週間に２回測定した。腫瘍体積（ＴＶ）を計算するための式はＴＶ＝ｌ×ｗ^２／２であり、式中、ｌおよびｗは、測定した腫瘍の長さおよび幅をそれぞれ表す。測定結果に従って相対的な腫瘍体積（ＲＴＶ）をＲＴＶ＝Ｖ_ｆ／Ｖ０によって計算し、式中、Ｖ０は、群への投与中（すなわち０日目）に測定した腫瘍体積であり、Ｖ_ｆは最終日に測定した腫瘍体積である。相対的腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）＝（投与群におけるＲＴＶ／ビヒクル群におけるＲＴＶ）×１００％。腫瘍増殖阻害率ＴＧＩ％＝（ビヒクル群の平均腫瘍体積－投与群の平均腫瘍体積）／ビヒクル群の平均腫瘍体積×１００％。Ｔ／Ｃ（％）≦４０％およびＰ＜０．０５である場合に、試験したＡＤＣが腫瘍増殖に対して有意な阻害効果を有するとみなす。

実験結果：
１）クローディン１８のｍＲＮＡを高発現しているヒト胃がんＰＤＸモデルＳＴＯ＃０２５におけるＣＭ３１１ＡＤＣの有効性についての研究
実験結果が図８および図９中に示される。ＣＭ３１１－ＡＤＣ－１を１および３ｍｇ／ｋｇにて投与した後、２８日目の相対的腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）はそれぞれ２９．８６％および０％、腫瘍増殖阻害率ＴＧＩ％はそれぞれ７０．１３％および１００％であり、それぞれ、０／５および５／５において腫瘍が完全に退縮し、２／５および０／５において腫瘍が一部退縮しており、ＣＭ３１１－ＡＤＣ－２（３ｍｇ／ｋｇ）群のＴ／Ｃ（％）は６７．２４％、ＴＧＩ％は３２．７６％であった。実験結果から、ＣＭ３１１－ＡＤＣ－１（３ｍｇ／ｋｇ）およびＣＭ３１１－ＡＤＣ－１（１ｍｇ／ｋｇ）はいずれも腫瘍増殖に対して有意な阻害活性を有するが、ＣＭ３１１－ＡＤＣ－２（３ｍｇ／ｋｇ）は有意な抗腫瘍活性を有さないことが示された。この担腫瘍マウスは、ＣＭ３１１－ＡＤＣ－１およびＣＭ３１１－ＡＤＣ－２を非常に良好に許容できる。

２）クローディン１８のｍＲＮＡを高発現するヒト胃がんＰＤＸモデルＳＴＯ＃５２３におけるＣＭ３１１ＡＤＣの有効性についての研究
実験結果が図１０および図１１中に示される。ＣＭ３１１－ＡＤＣ－１を１および３ｍｇ／ｋｇにて投与した後、２８日目の相対的腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）はそれぞれ３５．６０％および６．７９％、腫瘍増殖阻害率ＴＧＩ％はそれぞれ６４．４０％および９３．２１％であり、ＣＭ３１１－ＡＤＣ－２（３ｍｇ／ｋｇ）群のＴ／Ｃ（％）は１１４．８１％、ＴＧＩ％は－１４．８１％であった。実験結果から、ＣＭ３１１－ＡＤＣ－１（３ｍｇ／ｋｇ）およびＣＭ３１１－ＡＤＣ－１（１ｍｇ／ｋｇ）はいずれも腫瘍増殖に対して有意な阻害活性を有するが、ＣＭ３１１－ＡＤＣ－２（３ｍｇ／ｋｇ）は有意な抗腫瘍活性を有さないことが示された。この担腫瘍マウスは、ＣＭ３１１－ＡＤＣ－１およびＣＭ３１１－ＡＤＣ－２を非常に良好に許容できる。

実施例６ ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける抗体および抗体薬物複合体についての細胞活性の比較
試験方法：
ＫＡＴＯ ＩＩＩ細胞株を細胞５０００個／ウェルにて播種して、２４時間後に、試験対象の試料を添加した。すべての試験対象試料を、最終濃度１０００ｎｇ／ｍＬから開始して９回にわたって２．４倍希釈し、９６時間インキュベートし、６０分間かけてＰｒｅｓｔｏＢｌｕｅで発色させた後で、マイクロプレートリーダーで蛍光強度を読み取った。

試験対象の試料は以下の通りであった：
試料（Ｓａｍｐｌｅ）１：ＣＭ３１１、具体的にはＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ６／ＶＬ１；
試料（Ｓａｍｐｌｅ）２：抗クローディン－１８．２－ＡＤＣ（Ａｎｔｉ－Ｃｌａｕｄｉｎ－１８．２－ＡＤＣ）、具体的にはＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ６／ＶＬ１－ＡＤＣ；
試料（Ｓａｍｐｌｅ）３：非結合コントロールＡＤＣ、具体的にはＩｇＧ－Ｌ１Ｄ１（ＩｇＧ－Ｌ１Ｄ１は、ＩｇＧ抗体とＬ１Ｄ１小分子（すなわちｖｃＭＭＡＥ、つまりＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢ－ＭＭＡＥ）とが結合したＡＤＣである）。

試験結果を図１２および表４中に示した。図１２から示され得るとおり、抗クローディン－１８．２－ＡＤＣ（たとえば、ＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ６／ＶＬ１－ＡＤＣ）は、ＥＣ_５０値が１６．３７ｎｇ／ｍＬであり、強い細胞死滅を示したが、ＣＭ３１１（たとえば、ＣＭ３１１－１８Ｄ１０－ＶＨ６／ＶＬ１）およびＩｇＧ－Ｌ１Ｄ１は有意な細胞死滅作用を示さなかった。

Claims (13)

1. 抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物であって、前記抗体薬物複合体は、式Ｉ中に示される構造を有する：
   Ａｂ－(Ｌ－Ｄ)ｐ 式Ｉ
   式中、
   Ａｂは抗クローディン１８．２抗体であり、前記抗クローディン１８．２抗体は重鎖および軽鎖を備え、
   前記重鎖の可変領域ＣＤＲ１の配列は配列番号４２に示すとおりであり、
   前記重鎖の可変領域ＣＤＲ２の配列は配列番号４３に示すとおりであり、
   前記重鎖の可変領域ＣＤＲ３の配列は配列番号４４に示すとおりであり、
   前記軽鎖可変領域ＣＤＲ１の配列は配列番号５０に示すとおりであり、
   前記軽鎖可変領域ＣＤＲ２の配列は配列番号５１に示すとおりであり、そして
   前記軽鎖可変領域ＣＤＲ３の配列は配列番号５２に示すとおりであり；
   ＬはＭＣ－ｖｃ－ＰＡＢであり；
   ＤはＭＭＡＥであり；
   ｐは２.０～８.０である、
   抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
2. 重鎖可変領域の配列が配列番号４１に示すとおりであり、そして軽鎖可変領域の配列が配列番号４９に示すとおりである、請求項１に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
3. 重鎖の配列が配列番号６５に示すとおりであり、そして軽鎖の配列が配列番号６６に示すとおりである、請求項２に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
4. ｐが２.０～７.０、２.０～６.０、２.０～５.０、２.０～４.０、３.０～７.０、３.０～６.０、３.０～５.０または３.０～４.０である、請求項１～３の何れかに記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
5. ｐが３.０～４.０である、請求項４に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
6. ｐが３.０～３.８である、請求項５に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
7. ｐが３.０、３.４、３.５または３.８である、請求項６に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
8. ｐが３.８である、請求項７に記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物。
9. 請求項１～８の何れかに記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物を含む、組成物。
10. 腫瘍の処置で知られる化学療法薬物、免疫療法薬物、および免疫抑制剤のうちの少なくとも１種および／または少なくとも１種の医薬的に許容される担体、希釈剤、もしくは賦形剤を含む、請求項９に記載の組成物。
11. クローディン１８．２に関連する疾患を予防および／または処置するための請求項１～８の何れかに記載の抗体薬物複合体、その医薬的に許容される塩、溶媒和物、または前記塩の溶媒和物または請求項９または１０の組成物を含む、医薬組成物。
12. 前記クローディン１８．２に関連する疾患が胃がん、食道胃接合部の腺癌または膵臓がんである、請求項１１に記載の医薬組成物。
13. 前記クローディン１８．２に関連する疾患が胃がんである、請求項１２に記載の医薬組成物。